複合材料の製造方法
本発明は、（ａ）疎水性の有機バルク材料を提供する工程と；
（ｂ）まず、疎水性の有機バルク材料の表面に、疎水性の部分を含む水溶性のペプチドを非共有的に結合させ；次に前記水溶性のペプチドを化学的又は酵素的に架橋させることにより、親水性の表面コーティングをバルク材料上に適用する工程とを含む複合材料の製造方法に関する。本発明の方法による複合材料は、基材への接着性、耐久性、親水性、湿潤性、生体適合性及び透過性に関する所望の特性を有し、そのため特に眼用装置として有用である。
（ｂ）まず、疎水性の有機バルク材料の表面に、疎水性の部分を含む水溶性のペプチドを非共有的に結合させ；次に前記水溶性のペプチドを化学的又は酵素的に架橋させることにより、親水性の表面コーティングをバルク材料上に適用する工程とを含む複合材料の製造方法に関する。本発明の方法による複合材料は、基材への接着性、耐久性、親水性、湿潤性、生体適合性及び透過性に関する所望の特性を有し、そのため特に眼用装置として有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、物品を、架橋性の親水性ペプチドで少なくとも部分的にコーティングし、次に前記親水性ペプチドを化学的又は酵素的に架橋することを含む、生物医学的物品、特にコンタクトレンズのような、コーティングされた物品の製造方法に関するものである。
【０００２】
「不活性な」疎水性の基材上のコーティングを調製するための多種多様な方法が、先行技術において開示されている。例えば、ＷＯ−Ａ−２００４／０５０１３２は、まず、疎水性の非荷電の物品表面にポリアクリル酸及びポリアリルアミン塩酸塩からなる幾つかの二重層を提供し、次に抗菌性のペプチドを二重層の酸性成分に共有結合させることを開示している。しかし、二重層の形成には時間がかかり、それらの安定性、特にそれらの長期的安定性は、時に十分満足のいくものではない。このことが、今度は、生物医学的物品が人体内又は人体上、例えば眼上に装着された際の装着者の快適さに影響する場合がある。
【０００３】
ＵＳ−Ａ−２００６／０１３４１６６は、コポリマーが誘導体化されて疎水性の側鎖を有するポリアミノ酸である、非架橋性の生分解性コポリマーコーティングを、医療装置の表面上に作成する方法を開示している。
【０００４】
ＵＳ−Ａ−２００４／０２２４０８０は、概ね、医療装置上に酵素的に架橋した表面コーティングであり、リシン及びグルタミンが、トランスグルタミナーゼを用いることにより、酵素的に架橋されている表面コーティングを開示している。
【０００５】
ＵＳ−Ａ−２００３／０１７５７４５は、生物医学的装置の固体表面をコーティングするのにポリペプチドが使用できることを開示している。また、ペプチドが、グルタルアルデヒドで化学的に架橋できることを開示している。
【０００６】
さらに、公知のコーティングプロセスは、一般にバッチプロセスであるが、実施費用が高く、また、大規模な処理工程を要する。このため、既存のプロセスのいずれも、例えば、コンタクトレンズの完全自動化大量製造プロセス（例えば、ＥＰ−Ａ−９６９９５６又はＥＰ−Ａ−１０４７５４２に記載）に組み込むのには十分適していない。
【０００７】
したがって、一方では改善された耐久性を有し、生物医学的物品の装着者の快適さを改善し、他方では、大量製造プロセスに組み込むことができるよう容易な方法で製造できる、疎水性の生物医学的物品の表面上の新規な親水性のコーティングを提供することが必要である。
【０００８】
驚くべきことに、まず、疎水性の物品表面にペプチドを非共有的に結合させ、次に前記ペプチドを架橋反応に付すことにより、その物品の表面を有効に親水性にすることができることが今や見出された。
【０００９】
したがって、本発明は、１つの態様において、
（ａ）疎水性の有機バルク材料を提供する工程と；
（ｂ）まず、前記バルク材料の表面に、疎水性の部分を含む水溶性のペプチドを非共有的に結合させ；次に前記水溶性のペプチドを化学的又は酵素的に架橋させることにより、バルク材料上に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む、複合材料の製造方法に関する。
【００１０】
複合材料の基礎をなす疎水性の有機バルク材料は、好ましくは、カチオン基又はアニオン基のようなイオン基を有さないか、あるいは、少なくとも比較的低いイオン基の濃度を有する材料である。したがって、好適なバルク材料の表面も、低いイオン基の濃度を有するか、又は、カルボキシ、スルホ、アミノ等の基のようなイオン基を有さないことにすらなり、したがって、実質的にイオン電荷を有さないことになるであろう。
【００１１】
適切なバルク材料の例は、その数多くが公知である、天然又は合成有機ポリマー又は改質バイオポリマーである。ポリマーの幾つかの例は、重付加及び重縮合ポリマー（ポリウレタン、エポキシ樹脂、ポリエーテル、ポリエステル、ポリアミド及びポリイミド）；ビニルポリマー（ポリアクリラート、ポリメタクリラート、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリスチレン、ポリエチレン及びそれらのハロゲン化誘導体、ポリビニルアセタート及びポリアクリロニトリル）；又はエラストマー（シリコーン、ポリブタジエン及びポリイソプレン）である。
【００１２】
好適なコーティングされる材料の群は、生物医学的装置、例えば、コンタクトレンズ、特に連続装用コンタクトレンズの製造に従来から使用されているそれらであり、それら自体は親水性でない。そのような材料は、当業者にとって公知であり、例えばポリシロキサン、ペルフルオロアルキルポリエーテル、フッ素化ポリ（メタ）アクリラート、ポリアルキル（メタ）アクリラート、又はフッ素化ポリオレフィン、例えば、フッ素化エチレンもしくはプロピレン、例えば、テトラフルオロエチレンを含んでよく、好ましくは、特定のジオキソール、例えば、ペルフルオロ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソールとの組み合わせである。上記材料の２つ以上の混合物も可能である。
【００１３】
本発明のポリシロキサンヒドロゲルのうち、ペルフルオロアルキルポリエーテルヒドロゲル又はそれらの混合物、特にポリシロキサンヒドロゲルが、好適な疎水性の有機バルク材料である。
【００１４】
適切なポリシロキサンヒドロゲルの例は、例えば、連続装用コンタクトレンズの製造に現在使用されているそれら、例えば、（ｉ）例えば、ヒドロキシエチルアクリラート、ヒドロキシエチルメタクリラート、アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドン、アクリル酸又はメタクリル酸からなる群より選択される１つ以上の親水性のモノマーと、（ii）シロキサンモノマー及び／又はマクロモノマー、例えばトリス−トリメチルシリルオキシ−シリル−プロピルメタクリラート（ＴＲＩＳ）、又はポリシロキサン架橋剤、例えば、下記式（２）に記載のもの、とのコポリマーである。適切な市販のシリコンヒドロゲルは、Balafilcon A、Galyfilcon A、Lotrafilcon A、Lotrafilcon B又はSenofilcon Aである。
【００１５】
好適なポリシロキサンヒドロゲルの別の群は、結合又は架橋員で連結された、少なくとも１つの疎水性のシロキサン又はペルフルオロアルキルポリエーテルセグメントと、少なくとも１つの親水性のセグメントとを含む両親媒性セグメントコポリマーである。前記ポリシロキサンヒドロゲルの例は、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ−Ａ−９６／３１７９２及びＷＯ−Ａ−９７／４９７４０に開示されている。特に好適な両親媒性セグメントコポリマーは、ポリシロキサン、ペルフルオロアルキルポリエーテル及び混合ポリシロキサン／ペルフルオロアルキルポリエーテルセグメントからなる群より選択される少なくとも１つの疎水性のセグメントと、ポリオキサゾリン、ポリ（２−ヒドロキシエチルアクリラート）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリラート）、ポリアクリルアミド、ポリ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド）、ポリビニルピロリドン及びポリエチレンオキシドセグメントからなる群より選択される少なくとも１つの親水性のセグメントを含む。
【００１６】
好適なポリシロキサンヒドロゲルのさらに別の群は、（ａ）エチレン性不飽和二重結合１つを有する少なくとも１つの親水性のモノマーと、エチレン性不飽和二重結合２つ以上を含む少なくとも１つのシロキサン架橋剤とを、官能基を有する連鎖移動剤の存在下で共重合させる工程と；
（ｂ）得られたコポリマーの１つ以上の官能基をエチレン性不飽和基を有する有機化合物と反応させる工程とによって得られる、架橋性もしくは重合性のプレポリマーを架橋することによって得られるそれらである。この種のポリシロキサンヒドロゲルは、例えば、ＷＯ−Ａ−０１／７１３９２に開示されている。
【００１７】
特に好適なポリシロキサンヒドロゲルは、
（ａ）式：
【化１】
（式中、Ｒ１は、水素又はメチルであり、Ｒ２は、−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（ＣＨ３）２、又は
【化２】
である）の親水性のモノマー（場合により、１つ以上のさらなる親水性のモノマーと混合したもの）と；
式：
【化３】
（式中、ｄ１は、１０〜５００、好ましくは１０〜３００、より好ましくは２０〜２００及び特に２５〜１５０の整数であり、（alk）は、直鎖又は分岐鎖のＣ２−Ｃ４アルキレン又はラジカル−（ＣＨ２）１−３−Ｏ−（ＣＨ２）１−３−であり、Ｘは、−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、Ｑは、式：
【化４】
のラジカルである）に相当するポリシロキサン架橋剤とを、官能基、特に２−メルカプトエタノール又は特に２−アミノエタンチオール（システアミン）を有する連鎖移動剤の存在下で共重合させる工程；及び
（ｂ）得られたコポリマーを、エチレン性不飽和基を有する有機化合物、例えば２−イソシアナートエチルメタクリラート（ＩＥＭ）、２−ビニル−アズラクトン、２−ビニル−４，４−ジメチル−アズラクトン、塩化アクリロイルもしくは塩化メタクリロイル、２−ヒドロキシエチルアクリラート（ＨＥＡ）、２-ヒドロキシメタクリラート（ＨＥＭＡ）、グリシジルアクリラート又はグリシジルメタクリラート、特にＩＥＭ又は塩化アクリロイルと反応させる工程によって得られたプレポリマーを架橋することによって得られる。
【００１８】
バルク材料表面に結合した水溶性ペプチドは、例えば、式：
Ａ−Ｃ（Ｏ）−［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］−Ｘ１−Ｒ３ （３）
｛式中、Ａ−Ｃ（Ｏ）は、疎水性のラジカル、例えば、脂肪酸のラジカル、芳香族カルボン酸のラジカル及び芳香脂肪族カルボン酸のラジカルからなる群より選択されるラジカルであり、
［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、３つ以上のアミノ酸を含み、そのうちの少なくとも１つがリシン（Ｌｙｓ）又はグルタミン（Ｇｌｎ）であるアミノ酸配列を有するポリペプチドのラジカルであり、
Ｘ１−Ｒ３は、ＯＨであり末端ペプチドカルボキシ基の一部であるか、あるいは、Ｘ１がＯ又はＮＲ４（ここでＲ４は、水素又はＣ１−Ｃ２−アルキルである）であり、Ｒ３が、親水性の基である｝のペプチドである。
【００１９】
脂肪酸のラジカルとしてのＡ−Ｃ（Ｏ）は、例えば、長鎖の脂肪族モノカルボン酸のラジカルであり、例えば、６〜２５個の炭素原子及び場合により１つ以上の炭素−炭素の二重結合を含む。好ましくは、Ａ−Ｃ（Ｏ）は、式ＣｎＨ２ｎ＋１ＣＯＯＨ（ここでｎは、７〜２０、特に８〜１８の数である）のモノカルボン酸のラジカルである。好適な脂肪酸ラジカルＡ−Ｃ（Ｏ）の例は、カプリン酸のアシルラジカル、ラウリン酸、パルミチン酸又はステアリン酸である。
【００２０】
適切な芳香族酸ラジカルＡ−Ｃ（Ｏ）の例は、場合により置換された安息香酸又はナフトエ酸のアシルラジカルである。
【００２１】
芳香脂肪族酸Ａ−Ｃ（Ｏ）の適切なラジカルの例は、場合により置換されたフェニル酢酸又はフェニルプロピオン酸のラジカル、又は、１−もしくは２−ナフチル酢酸又はプロピオン酸のラジカルである。
【００２２】
安息香酸、フェニル酢酸又はフェニルプロピオン酸の、場合による置換基は、例えば、Ｃ１−Ｃ２−アルキル又はＣ１−Ｃ２−アルコキシである。
【００２３】
アミノ酸配列（ペプチド）は、通常、化学的又は酵素的に架橋性である任意の水溶性ペプチドのラジカルであってよい。
【００２４】
ポリペプチドラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなすアミノ酸配列は、好ましくは、酵素トランスグルタミナーゼの基質として機能することができる配列であり、すなわち、それは、酵素的に架橋されることができるトランスグルタミナーゼリーダー配列の形態でリシン及び／又はグルタミンを含有する。
【００２５】
ポリペプチドラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなす適切なペプチドの例は、タンパク質加水分解物、例えば、カゼイン加水分解物；グルテンペプチド；ポリリシン；又はリシンと、例えば、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択される１つ以上の他のアミノ酸とのコポリマーである。
【００２６】
ラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなすポリペプチドの分子量は、通常重要ではないが、好ましくはＭｒ値が、≦１２０００である。Ｍｒの好適な分子量の範囲は、４００〜１００００、より好ましくは４００〜５０００、特に５００〜１５００である。
【００２７】
ラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなす好適なポリペプチドの１つの群は、ポリリシン類である；前記ポリリシン類の分子量は、好ましくは、優先順位も含めて上記の範囲である。
【００２８】
好適なポリペプチドのさらなる群は、リシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択される１つ以上のアミノ酸との統計的ポリマーであり、ここでも、上記の分子量の範囲と優先順位が当てはまる。
【００２９】
さらに適切なリシンコポリマーは、統計的組成物：
Ｔｙｒｘ−（Ａｌａ）ｙ−（Ｌｙｓ）ｚ （４ａ）
（式中、ｘは、０又は１、好ましくは１の数であり；ｙは、０〜８、好ましくは１〜５、及び特に２〜４の数であり；ｚは、１〜２０、好ましくは２〜１０、及び特に２〜５の数であり；（ｘ＋ｙ＋ｚ）の合計が、３〜２０、好ましくは４〜１２及び特に５〜８であり、IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commissionの推奨する呼称に従い、Ｔｙｒは、チロシンを、Ａｌａは、アラニンを、及びＬｙｓは、リシンを表す）を有する。
【００３０】
このリシンコポリマーの群のうち、［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、好ましくは統計的組成物：
Ｔｙｒ１−（Ａｌａ）３−（Ｌｙｓ）３ （４ｂ）
を有するポリペプチドのラジカルであり、さらにより好適であるのは、SEQ ID NO 1：
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ （４ｃ）
（ここでＴｙｒは、Ａに結合し、Ａｌａは、Ｒ３に結合している）の合成ポリペプチドのラジカルである。
【００３１】
ラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなす好適なポリペプチドのさらなる群は、グルタミン単位を含むグルテンペプチドを包含する。
【００３２】
ラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなす好適なポリペプチドのさらなる群は、グルタミン及びリシン単位を含むカゼイン加水分解物を包含する。
【００３３】
式（３）のＸ１は、好ましくはＯ又はＮＨ、特にＮＨである。
【００３４】
親水性の基としてのＲ３は、例えば、水素又は、スルホ、スルファト、ホスファト及び／又はカルボキシにより１回又は数回置換されているＣ１−Ｃ６−アルキルラジカルを表す。用語スルホ、スルファト、ホスファト及びカルボキシは、一般に、遊離酸及び生物医学的に許容される、特に眼科的に許容されるそれらの塩、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム又はアンモニウム塩を含む。好ましくは、親水性の基としてのＲ３は、スルホ、スルファト及び／又はカルボキシにより一置換又は二置換されているＣ１−Ｃ４−アルキルラジカルを表す。より好ましくは、親水性の基としてのＲ３は、スルホ又はカルボキシで一置換されているＣ２−Ｃ３−アルキルラジカルである。最も好ましくは、親水性の基としてのＲ３は、２−スルホエチルである。
【００３５】
Ｘ１−Ｒ３がＯＨである場合、式（３）は、末端カルボキシ基の適切な塩、例えばナトリウム、カリウム又はアンモニウム塩も包含することを意図する。
【００３６】
本発明の好適な実施態様によれば、工程（ｂ）における疎水性の有機バルク材料に、上記式（３）｛式中Ａ−Ｃ（Ｏ）は、式ＣｎＨ２ｎ＋１ＣＯＯＨ（ここでｎは、７〜２０である）のモノカルボン酸のラジカルであり；
［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、タンパク質加水分解物、グルテンペプチド、ポリリシン、又はリシンと１つ以上の他のアミノ酸とのコポリマーからなる群より選択される、分子量４００〜１００００を有するポリペプチド由来のアミノ酸配列であり、
Ｘ１は、Ｏ又はＮＨであり、Ｒ３は、水素又は、スルホ、スルファト及び／もしくはカルボキシにより一置換又は二置換されているＣ１−Ｃ４−アルキルである｝の水溶性ペプチドが結合する。
【００３７】
本発明のより好適な実施態様によれば、工程（ｂ）における疎水性の有機バルク材料に、上記式（３）｛式中Ａ−Ｃ（Ｏ）は、式ＣｎＨ２ｎ＋１ＣＯＯＨ（ここでｎは、８〜１８である）のモノカルボン酸のラジカルであり；
［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、カゼイン加水分解物；グルテンペプチド；ポリリシン；リシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択される１つ以上のアミノ酸との統計的コポリマー；及び式：
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ （４ｃ）
（ここでＴｙｒは、Ａに結合し、Ａｌａは、Ｒ３に結合している）のポリペプチドからなる群より選択される、分子量５００〜１５００を有するポリペプチド由来のアミノ酸配列であり；
Ｘ１は、Ｏ又はＮＨであり、Ｒ３は、水素又は、スルホもしくはカルボキシにより一置換されているＣ２−Ｃ３−アルキルである｝の水溶性ペプチドが結合する。
【００３８】
式（３）の化合物は、それ自体公知の方法により合成されてよい。例えば、式：
Ｈ２Ｎ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）ＯＨ （３ａ）
（式中、（ペプチド）は、上記の定義のとおりである）のペプチドを、式：
Ａ−ＣＯＯＨ （５）
（式中、Ａは、前記の定義のとおりである）の化合物と、及び、該当する場合、式：
Ｒ３−Ｘ１Ｈ （６）
（式中、Ｒ３及びＸ１は、上記の定義のとおりである）の化合物と、任意の順序で反応させる。
【００３９】
式（５）及び（６）の化合物は、公知であり、通常、市販されている。式（３ａ）のペプチドは、商業的サプライヤーから一部入手することができるか、又は任意の公知の適切な方法に従って合成することができる。例えば、ポリリシン並びにリシンと他のアミノ酸との統計的コポリマーは、標準的な共重合反応によって得られうる。具体的なポリリシンコポリマーは、例えば、W.C. Chan and P.D. White, Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Practical Approach Series, Oxford University Pressに記載されているような固相ペプチド合成によって得られうる。例えば、式（４ａ）、（４ｂ）及び（４ｃ）の配列の基礎をなすペプチド、即ち、SEQ ID NO 1は、ポリマー担体、例えば、クロロトリチルアンカーを含むポリスチレン樹脂で固定された、基礎をなす保護アミノ酸（例えば、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）ラジカルで保護されている）を１つずつ反応させることにより合成することができる。したがって、第１の保護アミノ酸、例えばＦｍｏｃ及びＢｏｃ（ｔ−ブチルカルボニル）保護リシン又はＦｍｏｃ保護アラニンを、ポリマー担体にカップリングする。カップリング完了（カイザー試験でチェックしうる）後、前記アミノ酸を脱保護（通常、希釈トリフルオロ酢酸又はピペリジンで行う）し、その後第２の保護アミノ酸のカップリングを開始する。最後のアミノ酸のカップリング及び脱保護の後、得られたペプチドを、それ自体公知の方法、例えば、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸の溶液で、ポリマー担体から分離する。
【００４０】
式（３ａ）の化合物と式（５）及び（６）の化合物との反応は、有機化学の教科書から、それ自体公知である。式（３ａ）のペプチドを上記のような固相ペプチド合成で調製した場合、そのペプチドと式（５）の化合物とのカップリングは、好ましくは、ペプチド合成に加えることができる。したがって、ポリマー担体から分離する前のペプチドに、式（５）の化合物を、アミノ酸と同様の方法でカップリングする。
【００４１】
疎水性の部分を有する水溶性ペプチドは、疎水性のバルク材料表面に非共有的に結合する。したがって、結合は、例えば、物理的な吸収、バルク材料のポリマーマトリックスへの物理的な組み込み、錯体形成、異極性結合及び／又はイオン相互作用によって生じる。
【００４２】
ペプチドのバルク材料表面への結合は、それ自体公知の方法にしたがって達成しうる。例えば、バルク材料をペプチド溶液に浸漬するか、又は例えば、浸漬、スプレー、印刷、スプレッド、注入、圧延又はスピンコーティング（スプレー、又は特に浸漬が好適である）によって、１つ以上のペプチドの層をバルク材料表面上に堆積させる。
【００４３】
ペプチドの適切な浸漬溶液は、通常、１つ以上の異なる溶媒に希釈した各々のペプチドを含む。適切な溶媒は、例えば、水あるいは、水混和性有機溶媒、例えばＴＨＦ又はＣ１−Ｃ４−アルカノール、例えば、メタノール、エタノールもしくはイソプロパノールを含む水溶液であり；好適な溶媒は水である。ペプチド水溶液のｐＨは、使用する特定のポリペプチドに依存する。一定のｐＨ値を維持するために、適切な緩衝液、例えば、リン酸緩衝液を加えてよい。浸漬溶液は、追加的な成分、例えば塩を含有してよい。浸漬溶液の濃度は、例えば、関与する個別のペプチドに依存して、広い範囲で変化してよい。しかし、一般に比較的希薄なペプチドの溶液の配合が好適である。
【００４４】
バルク材料をペプチドの溶液に浸漬する時間は、数多くの要因に依存して変化する場合がある。通常、３０秒〜約３０分間、好ましくは３０秒〜１５分間、及び特に４５秒〜５分間の浸漬時間が有効であると証明されている。バルク材料のペプチド溶液への浸漬は、室温又は高温で行ってよい；したがって、例えば、１５〜３０℃の温度、及び高温、例えば３５〜８５℃が可能である。
【００４５】
本発明の好適な実施態様は、ペプチド溶液での処理に先立ち、疎水性の有機バルク材料を、水混和性の有機溶媒、例えば、Ｃ１−Ｃ４−アルコール、例えばエタノールもしくはイソプロパノール又はＴＨＦ中で膨潤させることを含む。膨潤は、周囲温度又は好ましくは高温、例えば、３５〜９０℃で行ってよい。膨潤時間は、重要ではない；通常、３０秒〜５分間、好ましくは４５秒〜２分間で十分である。
【００４６】
ペプチドの堆積後、バルク材料は、通常の方法、例えば単なるすすぎにより仕上げてもよい。
【００４７】
本発明の方法による複合材料の親水性の表面コーティング工程（ｂ）は、例えば、化学的に、有機バルク材料上に非共有的に結合したペプチドの架橋を開始させることにより、終了させることもできる。この目的のために、ペプチドをその表面に含む有機バルク材料を、適切な架橋剤、例えばホルムアルデヒド、好ましくはホルムアルデヒドの水溶液又はグルタルアルデヒドで処理する。
【００４８】
好ましくは、本発明の方法による複合材料の親水性の表面コーティング工程（ｂ）は、酵素的に架橋することにより終了させる。例えば、疎水性の有機バルク材料が、その表面に、リシン及びグルタミン単位の両方を含むペプチドを結合させている場合、前記ペプチドは、トランスグルタミナーゼを加えることによって架橋させてもよい。酵素トランスグルタミナーゼは、リシンアミノ基及びグルタミンアミド基の間で、ペプチド内及びペプチド間イソペプチド結合の形成を開始する。バルク材料と、それに結合しているペプチドとの、例えば、細菌トランスグルタミナーゼを含む水溶液中の処理は、例えば、周囲温度又は好ましくは僅かに高温、例えば３０〜５０℃で行ってよい。処理時間は、重要ではない；通常、３０秒〜１０分間、好ましくは４５秒〜５分間で十分である。
【００４９】
疎水性の有機バルク材料が、その表面に、リシン単位のみ又はグルタミン単位のみを含むペプチドを結合させている場合、トランスグルタミナーゼを用いて酵素的に架橋することは、さらに別の、相補的アミノ酸単位を含むタンパク質もしくはタンパク質加水分解物の存在下でのみ実施可能である。
【００５０】
本発明のさらに好適な実施態様は、したがって、
（ａ）疎水性の有機バルク材料を提供する工程と、
（ｂ）まず、
（b1）酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能し、好ましくは上記式（３）（式に含まれる変数には、上記の意味及び優先順位が適用される）の化合物である、疎水性の部分を含むペプチドを前記バルク材料表面に結合させ；次に
（b2）タンパク質又はタンパク質加水分解物を、同様に酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能するバルク材料表面に加え；その後
（b3）酵素、特にトランスグルタミナーゼで処理することにより、
バルク材料上に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む複合材料の製造方法を含む。
【００５１】
例えば、工程（b1）におけるペプチドは、１つ以上のグルタミン単位を含み、工程（b2）におけるタンパク質又はタンパク質加水分解物は、１つ以上のリシン単位を含む；あるいは、本発明の別の実施態様では、工程（b1）におけるペプチドは、１つ以上のリシン単位を含み、工程（b2）におけるタンパク質又はタンパク質加水分解物は、１つ以上のグルタミン単位を含む。
【００５２】
上記方法におけるトランスグルタミナーゼ処理が、疎水性バルク材料のペプチド改質表面上に、タンパク質又はタンパク質加水分解物を、固定及び／又は架橋すると考えられる。上記工程（b2）の適切なタンパク質又はタンパク質加水分解物は、例えば、カゼイン又はカゼイン加水分解物、ゼラチン加水分解物、グルテン加水分解物又は大豆タンパク質加水分解物、特にカゼイン加水分解物である。工程（b1）による、ペプチド改質バルク材料のタンパク質又はタンパク質加水分解物での処理は、好ましくは周囲温度での水溶液中で行う。その後、周囲温度又は好ましくは僅かに高温、例えば３０〜５０℃で、酵素による処理を行う。処理時間は、重要ではない；通常、３０秒〜１０分間、好ましくは４５秒〜５分間が十分である。
【００５３】
本発明の方法によって得た複合材料は、好ましくは、上記の定義及び優先順位のすべてを包含する上記の複合材料を含む、生物医学的装置、例えば、眼用装置、好ましくはハード及び特にソフトコンタクトレンズの両方を含むコンタクトレンズ、眼内レンズ又は人工角膜である。複合材料は、さらに、例えば、創傷治療用包帯、眼帯、活性化合物の徐放用材料、例えば、ドラッグデリバリーパッチ、手術において使用できる成形物、例えば、心臓弁、代用血管、カテーテル、人工臓器、被覆生体インプラント、例えば、膵臓島、人工装具の材料、例えば、代用骨、又は診断用成形物、膜又は生物医学的機器又は器具としても有用である。
【００５４】
本発明の方法によれば、生物医学的物品、特に眼科用品が得られ、先行技術のそれらと比べて様々な予想外の利点を有し、このためこれらの物品が、例えば、連続装用コンタクトレンズのような実用に極めて適切なものとなる。例えば、これらは、高い表面湿潤性及び潤滑性を有する。このことは、例えば、極めて滑性な物品表面を示す指先試験；又は目視検査；又は適切な接触角の測定によって実証されている。例えば、コーティングしたレンズ及びコーティングしていないレンズの液滴による静的接触角は、Kruss (Kruss GmbH, Hamburg, Germany)のDSA 10 液滴形状分析系で測定される。コーティングしていないシリコンヒドロゲルコンタクトレンズは、通常、９０〜１００°以上の水接触角を有するが、本発明の方法による処理は、この値を大幅に削減する。本発明の方法によって得られる表面コーティングの優れた品質を評価するさらなるツールは、ＡＴＲ−ＦＴＩＲ測定又は下記実施例部分に記載のスーダンブラック染料吸収試験である。
【００５５】
さらに、本発明の方法によって得られた複合材料を含む生物医学的装置、例えば、コンタクトレンズのような眼用装置は、優れた機械的性質を合わせもつ際立った生体適合性を有する。さらに、一般に有害な眼作用は観察されず、一方タンパク質又は脂質の吸着は低く、また塩沈着物形成も従来のコンタクトレンズよりも低い。一般に、汚損が少なく、微生物付着が少なく、また、生物的侵食も低い一方で、例えば低い摩擦係数及び低い摩耗性に、良好な機械的性質を見い出すことができる。さらに、本発明の複合材料の寸法安定性は、非常に優れている。加えて、本発明による所定のバルク材料での親水性の表面コーティングの結合は、その視界的透明度に影響を及ぼさない。
【００５６】
要約すると、本発明の方法によって得られる眼用装置、例えば、眼内レンズ及び人工角膜又は特にコンタクトレンズは、細胞残屑、化粧品、涙成分、脂質、タンパク質、塩、塵芥若しくは汚損、溶媒蒸気又は化学物質に関しての損傷の低さと、例えば、眼用装置の非常に良好な眼上運動を与える柔軟なヒドロゲル表面による、このような眼用装置を装用する患者にとっての高い快適さとの組合せを提供する。
【００５７】
実施例において、他に記載のない限り、量は重量であり、温度は、摂氏度で与えられる。固体への湿潤力は、固体を公知の表面張力を有する液体に浸漬するか、又はそこから引き上げたときに測定した。アミノ酸出発物質及びペプチド中のアミノ酸単位は、他に記載のない限り、常に天然のＬ型である。
【実施例】
【００５８】
実施例１：ＨＯ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨの調製
上記ペプチドを、Ｆｍｏｃ−固相ペプチド合成の標準的な方法を用いて、２−クロロトリチルアンカーを含むポリスチレン担体上で合成した。カップリングは、通常、ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロフォスファート（ＴＢＴＵ）／１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）中で行い、及びカップリングの完了は、カイザー（Kaiser）試験により判明した。洗浄工程は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で行った。
【００５９】
詳細な手順：
（ａ）市販のＡｌａ−ＯＨ−２−クロロトリチル−ポリスチレン担体６．２５ｇを、ペプチド合成反応器中のジクロロメタン５０ml中に懸濁し、３０分間保持した。ポリマー担体をＤＭＦで洗浄し、その後いくらかのＤＭＦ中で再び懸濁した。
（ｂ）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨのカップリング：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ ４．６９ｇ、ＴＢＴＵ ３．１４ｇ及びＨＯＢｔ １．３５ｇをＤＭＦ２０ml中に溶解した。Ｎ−エチル−ジイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）３．４mlをこの溶液に加えた。得られた混合物を短時間撹拌し、次に工程（ａ）に従って得た懸濁液に加えた。得られた混合物を窒素下に約１時間保持した。その後、サンプルを採り、カイザー試験でチェックした。カイザー試験が陰性である場合、反応器から反応溶液を取り出し、ポリスチレン担体を、ＤＭＦで１０回洗浄した。
（ｃ）Ｆｍｏｃ保護基の切断：洗浄後、得られたポリマー担体に、ＤＭＦ／ピペリジン混合物（８０／２０）３０mlを加え、窒素をフラッシュしながら全体を１時間保持した。担体を次に再度、ＤＭＦで１０回洗浄し、その後いくらかのＤＭＦ中に懸濁した。
（ｄ）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨのカップリング：第２のＬｙｓ（Ｂｏｃ）を、工程（ｃ）に従って調製したＬｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−２−クロロトリチル−ポリスチレンに加えるために、工程（ｂ）及び（ｃ）を同じ方法で繰り返した。
（ｅ）Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨのカップリング：Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ ３．１１ｇ、ＴＢＴＵ ３．１４ｇ及びＨＯＢｔ １．３５ｇを、ＤＭＦ２０ml中に溶解した。ＤＩＰＥＡ ３．４mlを得られた溶液に加えた。得られた混合物を短時間撹拌し、次に工程（ｄ）に従って得た懸濁液に加えた。得られた混合物を窒素下に約１時間保持した。その後、サンプルを採り、カイザー試験でチェックした。カイザー試験が陰性の場合、反応溶液を反応器から取り出し、ポリスチレン担体をＤＭＦで１０回洗浄した。その後、Ｆｍｏｃ保護基の切断を工程（ｃ）に記載のとおり行った。
（ｆ）別のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨのカップリング：両アミノ酸を、工程（ｅ）に従って得たペプチドに上記工程（ｄ）及び（ｅ）に記載のものと同じ方法で、カップリングした。
（ｇ）Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（ｔＢｕ＝ｔ−ブチル）のカップリング：Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ ４．６ｇ、ＴＢＴＵ ３．１４ｇ及びＨＯＢｔ １．３５ｇをＤＭＦ２０mlに溶解し、その後、Ｎ−エチル−ジイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）３．４mlをこの溶液に加えた。得られた混合物を短時間撹拌し、次に工程（ａ）に従って得た懸濁液に加えた。得られた混合物を窒素下に約１時間保持した。その後、サンプルを採り、カイザー試験でチェックした。カイザー試験が陰性の場合、反応溶液を反応器から取り出し、ポリスチレン担体を、ＤＭＦで洗浄した。
（ｈ）Ｆｍｏｃ保護基の切断：洗浄後、得られたポリマー担体に、ＤＭＦ／ピペリジン混合物（８０／２０）３０mlを加え、窒素をフラッシュしながら混合物を１時間保持した。樹脂を次にイソプロパノール及びｎ−ヘキサンで３回洗浄し、その後高真空において乾燥させた。収量：Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａを負荷したポリスチレン樹脂１２ｇ。
【００６０】
実施例２ａ：固相化学を用いた、疎水性の部分のペプチドへのカップリング
実施例１に従って得たＴｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａを負荷したポリスチレン担体２．４ｇを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、３０分間保持した。ポリスチレン担体を次にＤＭＦで洗浄し、その後、いくらかのＤＭＦ中に再び懸濁した。別の広口ビンにおいて、パルミチン酸６４１mg、ＴＢＴＵ ７８６mg及びＨＯＢｔ ３３８mgをＤＭＦに溶解した。ＤＩＰＥＡ８５０μｌを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を約１時間窒素フラッシュ下に保持した。転換の完了をカイザー試験で確認した後、ポリマー担体をＤＭＦで洗浄した。
【００６１】
実施例２ｂ：固相化学を用いた、疎水性の部分のペプチドへのカップリング
実施例１に従って得たＴｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａを負荷したポリスチレン担体１ｇを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、３０分間保持した。ポリスチレン担体を次にＤＭＦで洗浄し、その後、いくらかのＤＭＦ中に再び懸濁した。別の広口壜において、カプリン酸１４８mg、ＴＢＴＵ ２７１mg及びＨＯＢｔ １１６mgをＤＭＦに溶解した。ＤＩＰＥＡ ２９３μｌを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を窒素で約２時間フラッシュした。転換の完了をカイザー試験で確認した後、反応混合物をろ過し、ポリマー担体をＤＭＦで洗浄した。
【００６２】
実施例２ｃ：固相化学を用いた、疎水性の部分のペプチドへのカップリング
実施例１に従って得たＴｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａを負荷したポリスチレン担体９１０mgを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、３０分間保持した。ポリスチレン担体を次にＤＭＦで洗浄し、その後、いくらかのＤＭＦ中に再び懸濁した。別の広口壜において、フェニル酢酸１０５mg、ＴＢＴＵ ２３９mg及びＨＯＢｔ １０３mgをＤＭＦ中に溶解した。ＤＩＰＥＡ ２６１μｌを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を窒素で約１時間フラッシュした。転換の完了をカイザー試験で確認した後、ポリマー担体を洗浄した。
【００６３】
実施例２ｄ：固相化学を用いた、疎水性の部分のペプチドへのカップリング
実施例１に従って得たＴｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａを負荷したポリスチレン担体９１０mgを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、３０分間保持した。ポリスチレン担体を次にＤＭＦで洗浄し、その後、いくらかのＤＭＦ中に再び懸濁した。別の広口ビンにおいて、ナフチル酢酸１４１mg、ＴＢＴＵ ２３９mg及びＨＯＢｔ １０３mgをＤＭＦ中に溶解した。ＤＩＰＥＡ ２６１μｌを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を約１時間窒素でフラッシュした。転換の完了をカイザー試験で確認した後、ポリマー担体を洗浄した。
【００６４】
実施例３ａ：ポリマー担体からの完全に保護されたペプチドの切断
実施例２ａに従って得たポリマー担体から、完全に保護されたペプチドを分離した。この目的のために、ジクロロメタン中にトリフルオロ酢酸１重量％を含む溶液２０mlを、ポリマー担体材料に加え、全体を約２分間振とうさせた。トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン溶液を用いた振とうプロセスを７回繰り返した。その後、ポリマー担体をジクロロメタン及びメタノールで３回洗浄した。合わせた切断及び洗浄用溶液をメタノール中のピリジン１０重量％の溶液に加え、全体を次に真空中で原体積の約５％に相当する容量まで濃縮した。得られた溶液に、純水約８０mlを加え、得られた白色の沈殿物をろ過した。冷水、冷ＮａＨＣＯ３溶液、再び冷水、冷ＫＨＳＯ４溶液０．０５Ｍ、最後に再度水での洗浄を繰り返した後、得られた沈殿物を真空中Ｐ２Ｏ５で一晩乾燥させた。粗保護ペプチド収量１．５６ｇ。
【００６５】
実施例３ｂ：脱保護ペプチドのポリマー担体からの切断
実施例２ｂ、２ｃ及び２ｄに従って調製したペプチドをポリマー担体から分離し、一方で同時に側鎖の保護基を除去した。この目的のために、水２．５重量％、トリ−イソプロピルシラン２．５重量％及びトリフルオロ酢酸９５重量％を含む溶液各２０mlを、それぞれの保護ペプチドを含むポリマー担体に加え、全混合物を次に約１時間保持した。ポリマー担体を次にろ別し、その後、トリフルオロ酢酸で２回洗浄した。ろ液と洗浄溶液を組み合わせた後、溶媒を真空中で除去した。得られた油状残留物の結晶化をジエチルエーテル中での処理により開始した。収量（粗未保護ペプチド、それぞれベージュ色の結晶）：
カプリノイル−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：４３２mg；
フェナク（phenac）−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：３７０mg；
ナフタク（naphtac）−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：３９５mg。
【００６６】
実施例４：パルミトイル−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａのタウリン（２−スルホエチル−アミン）へのカップリング
実施例３ａに従って得たペプチド７８０mgを、ＤＭＦ ４０mlに溶解した。ＴＢＴＵ １６０mg、ＨＯＢｔ ６８mg、Ｎ−エチル−ジイソプロピルアミン３４０μｌ及びタウリン１２５mgをこの溶液に加え、反応混合物を窒素雰囲気で一晩撹拌した；それにより、最初の懸濁液は、透明な溶液に変化した。最後に、溶媒を真空中で除去し、固体残留物を結晶化し、さらにジエチルエーテルで洗浄した（収量：明褐色の固体１．４ｇ）。
【００６７】
粗パルミトイル−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−タウリン生成物を、トリフルオロ酢酸２５重量％及びジクロロメタン７５重量％を含む溶液８０ml中に溶解し、全混合物を室温で約９０分間撹拌した。溶媒を次に真空中で除去し、残存する油状生成物を結晶化させ、ジエチルエーテルで洗浄した。
【００６８】
実施例５：実施例３ｂ及び４で得た粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（Varian製ＨＰＬＣ、トリフルオロ酢酸を改質剤とする、水／アセトニトリル勾配の逆相カラム）で精製した。
収量及び特性解析：
（ｉ）カプリノイル−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：３２１mg、ESI-MS: 955.6 [M+Na]+
【化５】
（ii）フェナク−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：２７６mg、ESI-MS: 919.5 [M+Na]+
【化６】
（iii）ナフタク−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：２６０mg、ESI-MS: 969.5 [M+Na]+
【化７】
（iv）パルミトイル−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−タウリン：４０６mg、ESI-MS: 1146.7 [M+Na]+
【化８】
実施例６：酵素的に架橋されたペプチドをその表面に結合させたソフトシリコンヒドロゲルコンタクトレンズの調製
疎水性のシリコンヒドロゲルコンタクトレンズ（lotrafilcon A、混合ポリシロキサン／ペルフルオロアルキルポリエーテル架橋剤、ＴＲＩＳ及びＤＭＡの共重合生成物）を、まず、実施例４（パルミトイル−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−タウリン）の精製ペプチド１０mmolを含む水溶液中でインキュベートし、次にカゼイン加水分解物（Vitalarmor）１重量％を含む水溶液に移した。細菌トランスグルタミナーゼ２U/mlを４０℃で加えて酵素的架橋を開始した。コーティングしたレンズを次にＰＢＳ緩衝液で洗浄し、１２１℃で２０分間オートクレーブした。
実施例４のペプチドの結合は、ペプチド鎖のチロシン部分のテトラニトロメタンでのニトロ化反応により、黄色の着色が生じることにより観察することができた。カゼイン加水分解物の結合及び架橋は、レンズ表面の親水性及び湿潤性試験によって調べた。
【００６９】
実施例７：酵素的に架橋されたペプチドをその表面に結合させたソフトシリコンヒドロゲルコンタクトレンズの調製
（ｉ）シリコンヒドロゲルコンタクトレンズの調製
（ia）ＰＤＭＳ架橋剤Ｉの調製
４Ｌビーカーにおいて、Ｎａ２ＣＯ３ ２４．１３ｇ、ＮａＣｌ ８０ｇ及び脱イオン水１．５２ｋｇを混合して溶解した。別の４Ｌビーカーにおいて、ビス−３−アミノプロピル−ポリジメチルシロキサン（Shin-Etsu, MW 約11500）７００ｇを、ヘキサン１０００ｇ中に溶解した。４Ｌ反応器に、タービン攪拌器付オーバーヘッド撹拌器及びマイクロフローコントローラー付２５０ml添加漏斗を装備した。２つの溶液を次に反応器に仕込み、激しく攪拌しながら１５分間混合し、エマルションを作成した。塩化アクリロイル１４．５ｇをヘキサン１００ml中に溶解し、添加漏斗に仕込んだ。塩化アクリロイル溶液を、激しい攪拌下で１時間かけてエマルションに滴下した。添加完了後、エマルションを３０分間撹拌し、次に攪拌を停止し、一晩、相を分離させた。水相をデカントし、有機相を、水に溶解した２．５％ＮａＣｌの混合物２．０ｋｇで２回洗浄した。有機相を次に硫酸マグネシウムで乾燥させ、１．０μｍの除外でろ過し、ロータリエバポレーターで濃縮した。得られた油状物を、高真空乾燥で一定重量になるまでさらに精製した。得られた生成物を滴定により分析すると、Ｃ＝Ｃ二重結合が０．１７５mEq/gであった。
【００７０】
（ib）ＰＤＭＳ架橋剤ＩＩの調製
４Ｌビーカーにおいて、Ｎａ２ＣＯ３ ６１．７３ｇ、ＮａＣｌ ８０ｇ及び脱イオン水１．５２ｋｇを混合して溶解した。別の４Ｌビーカーにおいて、ビス−３−アミノプロピル−ポリジメチルシロキサン（Shin-Etsu, MW 約4500）７００ｇを、ヘキサン１０００ｇ中に溶解した。４Ｌ反応器に、タービン攪拌器付オーバーヘッド撹拌器及びマイクロフローコントローラー付２５０ml添加漏斗を装備した。２つの溶液を次に反応器に仕込み、激しく攪拌しながら１５分間混合し、エマルションを作成した。塩化アクリロイル３６．６ｇをヘキサン１００ml中に溶解し、添加漏斗に仕込んだ。塩化アクリロイル溶液を激しい攪拌下で１時間かけてエマルションに滴下した。添加完了後、エマルションを３０分間撹拌し、次に攪拌を停止し、一晩、相を分離させた。水相をデカントし、有機相を、水に溶解した２．５％ＮａＣｌの混合物２．０ｋｇで２回洗浄した。有機相を次に硫酸マグネシウムで乾燥させ、１．０μｍの除外でろ過し、ロータリエバポレーターで濃縮した。得られた油状物を、高真空乾燥で一定重量になるまでさらに精製した。得られた生成物を滴定により分析すると、Ｃ＝Ｃ二重結合が０．４３５mEq/gであった。
【００７１】
（ic）架橋性コポリマーの調製
２Ｌジャケット反応器に、加熱／冷却ループ、還流冷却器、Ｎ２インレット／真空アダプター、フィードチューブアダプター及びオーバーヘッド機械式撹拌器を装備した。（ia）によるＰＤＭＳ架橋剤Ｉ ９０．００ｇ及び（ｉｂ）によるＰＤＭＳ架橋剤ＩＩ ３０．００ｇを１−プロパノール４８０ｇ中に溶解することにより溶液を生成した。この溶液を反応器に仕込み、８℃に冷却した。溶液を排気により１５mBar未満に脱気し、真空を１５分間保持し、次に乾燥窒素で再加圧した。この脱気手順を全部で３回繰り返した。反応器を乾燥窒素のブランケット下に保持した。
別のフラスコにおいて、モノマー溶液を、システアミン塩酸塩１．５０ｇ、ＡＩＢＮ ０．３ｇ、ＤＭＡ ５５．２７５ｇ、ＨＥＡ １８．４３ｇ及び１−プロパノール３６４．５ｇを混合することにより調製した。この溶液をWhatman 540ろ紙でろ過し、次に、流速３．０ml／分で脱気装置及びＨＰＬＣポンプを通して反応器に加えた。反応温度を次に、加熱ランプで約１時間で６８℃に上げた。
第２のフラスコにおいて、システアミン塩酸塩４．５ｇ及び１−プロパノール３９５．５ｇを混合し、次にWhatman 540ろ紙でろ過することにより供給溶液を調製した。反応器の温度が６８℃に達した時、この溶液を、脱気装置／ＨＰＬＣポンプを通し３時間かけて徐々に反応器に投入した。次に、反応を６８℃でさらに３時間継続させ、その時点で、加熱を停止し、反応器を室温まで冷ました。
反応混合物をフラスコに移し、ロータリエバポレーター上で、真空下４０℃で、サンプル１０００ｇが残るまで溶媒を除去した。次に、溶液を高速で攪拌しながら、徐々に脱イオン水２０００ｇと混合した。さらに溶媒をサンプル２０００ｇが残るまで除去した。この除去プロセスの間に、溶液は、徐々にエマルションになった。得られた材料を、浸透電気伝導度が２．５μS/cm未満になるまで、１０ｋＤ分子量除去膜を用いた限外ろ過により精製した。このエマルションを、次にオーバーヘッド撹拌器、冷凍ループ、温度計、及びMetrohm Model 718 STAT TitrinoのｐＨメーター及び分配チップを装備した２−Ｌ反応器に仕込んだ。反応混合物を、次に１℃に冷却した。ＮａＨＣＯ３ ７．９９ｇをエマルションに仕込み、撹拌して溶解した。断続的に１５％水酸化ナトリウム溶液を加えることにより、ｐＨ９．５を維持するようにTitrinoを設定した。塩化アクリロイル１１．５９mlを次にシリンジポンプを用いて１時間かけて加えた。エマルションをさらに１時間撹拌し、次に塩酸の１５％溶液を加えることにより、反応混合物を中和するようにTitrinoを設定した。生成物を再び、浸透電気伝導度が２．５μS/cm未満になるまで、１０ｋＤ分子量除去膜を用いた限外ろ過により精製した。最終的なマクロモノマーを凍結乾燥により単離した。
【００７２】
（id）コンタクトレンズの調製
工程（ic）に従って得たポリマー１８．８３ｇを、１−プロパノール約２００mlに溶解し、溶液総重量約７０ｇまで濃縮し、０．４５μｍの除外でろ過した。固形分２６．５３％の溶液６７．９４ｇを回収した。２−ヒドロキシ−４’−ヒドロキシエチル−２−メチルプロピオフェノン（IRGACURE（登録商標）-2959, Ciba Specialty Chemicals）の１％溶液４．５０３ｇを加え、次に溶液を最終重量２５．７４ｇ（固形分６５．０％）まで濃縮した。
配合物２００mgを、ポリ（プロピレン）コンタクトレンズ金型に分配し、金型を閉じた。次に金型に２．１８mW/cm2の強度を有する紫外線源を１５秒間照射した。金型を次に開き、レンズが接着した型半を、イソプロパノール８０％、水２０％（ｖ／ｖ）の混合物に一晩浸漬した。レンズをこの溶媒混合物で金型からすすいではずし、次に２時間ずつ２回新しいイソプロパノール／水の混合物のアリコートですすいだ。レンズの水を切り、次に脱イオン水に浸漬することにより水和した。それらを次に純水（３．０ml／レンズ）中で２時間３回すすいだ。
【００７３】
（ie）表面コーティングの調製
上記（id）に従って得た疎水性のシリコンヒドロゲルコンタクトレンズを、イソプロパノール中７５℃で１分間インキュベートし、次に、実施例４の精製ペプチド（パルミトイル−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−タウリン）１０mmolを含むリン酸緩衝生理食塩溶液に移し、８０℃で約１分間処理した。コンタクトレンズを次に緩衝生理食塩溶液に移し、２重量％ホルムアルデヒド溶液１００μlを加えた。コンタクトレンズをその後１２１℃で３０分間オートクレーブした。実施例４のペプチドの結合が、ペプチド鎖のチロシン部分のテトラニトロメタンでのニトロ化反応により、黄色の着色が生じることにより観察できた。目視による湿潤性及び親水性試験、並びに接触角の測定、及びスーダンブラック染色試験により、親水性の表面コーティングを調べた。
【００７４】
（if）水接触角の測定
測定は、純水（Fluka製、２０℃での表面張力７２．５mN/M）を用いたKruss (Kruss GmbH, Hamburg, Germany)のDSA 10 液滴形状分析系での液滴法よって行った。測定目的のため、コンタクトレンズを保存溶液からピンセットで取り出し、過剰の保存溶液を穏やかに振とうして除去した。コンタクトレンズを、コンタクトレンズ型の雄部に置き、乾いた清浄な布で拭き取った。水滴（約１μl）を、次にレンズの頂点に添加し、この水滴（ＷＣＡ(t)、サークルフィッティングモード）の経時的な接触角の変化を観察した；ＷＣＡは、グラフWCA(t)をt=0で外挿することによって計算した。
【００７５】
（ig）スーダンブラックの染料吸収試験
スーダンブラックＢ（Aldrich）０．５ｇを、ビタミンＥ油状物１００ｇ中に、撹拌下で一晩溶解することにより、０．５％（w/w）スーダンブラックの染料溶液を調製した。測定目的のため、表面処理したレンズを、まず、ガラスバイアル中のリン酸緩衝生理食塩溶液（ｐＨ７．２）２ml中でオートクレーブ（１２１℃で３０分）した。コンタクトレンズを、次に溶液からピンセットで取り出し、表面の水の大部分が除去されるように、穏やかに振とうした。レンズを次に上記で調製したスーダンブラックの染料溶液に５分間入れた。その後、レンズを染料浴から取り出し、過剰の染料溶液を温水ですすぎ落とした。レンズを風乾させ、着色の度合いに従って評価した。
２ ＝ 着色がないか、ほとんどない
１ ＝ わずかな着色
０ ＝ かなりの着色
【００７６】
（ih）（ie）に従ってコーティングしたコンタクトレンズ及び対応するコーティングしていないコンタクトレンズ（対照）で得た値を表１にまとめた。
【表１】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、物品を、架橋性の親水性ペプチドで少なくとも部分的にコーティングし、次に前記親水性ペプチドを化学的又は酵素的に架橋することを含む、生物医学的物品、特にコンタクトレンズのような、コーティングされた物品の製造方法に関するものである。
【０００２】
「不活性な」疎水性の基材上のコーティングを調製するための多種多様な方法が、先行技術において開示されている。例えば、ＷＯ−Ａ−２００４／０５０１３２は、まず、疎水性の非荷電の物品表面にポリアクリル酸及びポリアリルアミン塩酸塩からなる幾つかの二重層を提供し、次に抗菌性のペプチドを二重層の酸性成分に共有結合させることを開示している。しかし、二重層の形成には時間がかかり、それらの安定性、特にそれらの長期的安定性は、時に十分満足のいくものではない。このことが、今度は、生物医学的物品が人体内又は人体上、例えば眼上に装着された際の装着者の快適さに影響する場合がある。
【０００３】
ＵＳ−Ａ−２００６／０１３４１６６は、コポリマーが誘導体化されて疎水性の側鎖を有するポリアミノ酸である、非架橋性の生分解性コポリマーコーティングを、医療装置の表面上に作成する方法を開示している。
【０００４】
ＵＳ−Ａ−２００４／０２２４０８０は、概ね、医療装置上に酵素的に架橋した表面コーティングであり、リシン及びグルタミンが、トランスグルタミナーゼを用いることにより、酵素的に架橋されている表面コーティングを開示している。
【０００５】
ＵＳ−Ａ−２００３／０１７５７４５は、生物医学的装置の固体表面をコーティングするのにポリペプチドが使用できることを開示している。また、ペプチドが、グルタルアルデヒドで化学的に架橋できることを開示している。
【０００６】
さらに、公知のコーティングプロセスは、一般にバッチプロセスであるが、実施費用が高く、また、大規模な処理工程を要する。このため、既存のプロセスのいずれも、例えば、コンタクトレンズの完全自動化大量製造プロセス（例えば、ＥＰ−Ａ−９６９９５６又はＥＰ−Ａ−１０４７５４２に記載）に組み込むのには十分適していない。
【０００７】
したがって、一方では改善された耐久性を有し、生物医学的物品の装着者の快適さを改善し、他方では、大量製造プロセスに組み込むことができるよう容易な方法で製造できる、疎水性の生物医学的物品の表面上の新規な親水性のコーティングを提供することが必要である。
【０００８】
驚くべきことに、まず、疎水性の物品表面にペプチドを非共有的に結合させ、次に前記ペプチドを架橋反応に付すことにより、その物品の表面を有効に親水性にすることができることが今や見出された。
【０００９】
したがって、本発明は、１つの態様において、
（ａ）疎水性の有機バルク材料を提供する工程と；
（ｂ）まず、前記バルク材料の表面に、疎水性の部分を含む水溶性のペプチドを非共有的に結合させ；次に前記水溶性のペプチドを化学的又は酵素的に架橋させることにより、バルク材料上に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む、複合材料の製造方法に関する。
【００１０】
複合材料の基礎をなす疎水性の有機バルク材料は、好ましくは、カチオン基又はアニオン基のようなイオン基を有さないか、あるいは、少なくとも比較的低いイオン基の濃度を有する材料である。したがって、好適なバルク材料の表面も、低いイオン基の濃度を有するか、又は、カルボキシ、スルホ、アミノ等の基のようなイオン基を有さないことにすらなり、したがって、実質的にイオン電荷を有さないことになるであろう。
【００１１】
適切なバルク材料の例は、その数多くが公知である、天然又は合成有機ポリマー又は改質バイオポリマーである。ポリマーの幾つかの例は、重付加及び重縮合ポリマー（ポリウレタン、エポキシ樹脂、ポリエーテル、ポリエステル、ポリアミド及びポリイミド）；ビニルポリマー（ポリアクリラート、ポリメタクリラート、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリスチレン、ポリエチレン及びそれらのハロゲン化誘導体、ポリビニルアセタート及びポリアクリロニトリル）；又はエラストマー（シリコーン、ポリブタジエン及びポリイソプレン）である。
【００１２】
好適なコーティングされる材料の群は、生物医学的装置、例えば、コンタクトレンズ、特に連続装用コンタクトレンズの製造に従来から使用されているそれらであり、それら自体は親水性でない。そのような材料は、当業者にとって公知であり、例えばポリシロキサン、ペルフルオロアルキルポリエーテル、フッ素化ポリ（メタ）アクリラート、ポリアルキル（メタ）アクリラート、又はフッ素化ポリオレフィン、例えば、フッ素化エチレンもしくはプロピレン、例えば、テトラフルオロエチレンを含んでよく、好ましくは、特定のジオキソール、例えば、ペルフルオロ−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソールとの組み合わせである。上記材料の２つ以上の混合物も可能である。
【００１３】
本発明のポリシロキサンヒドロゲルのうち、ペルフルオロアルキルポリエーテルヒドロゲル又はそれらの混合物、特にポリシロキサンヒドロゲルが、好適な疎水性の有機バルク材料である。
【００１４】
適切なポリシロキサンヒドロゲルの例は、例えば、連続装用コンタクトレンズの製造に現在使用されているそれら、例えば、（ｉ）例えば、ヒドロキシエチルアクリラート、ヒドロキシエチルメタクリラート、アクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドン、アクリル酸又はメタクリル酸からなる群より選択される１つ以上の親水性のモノマーと、（ii）シロキサンモノマー及び／又はマクロモノマー、例えばトリス−トリメチルシリルオキシ−シリル−プロピルメタクリラート（ＴＲＩＳ）、又はポリシロキサン架橋剤、例えば、下記式（２）に記載のもの、とのコポリマーである。適切な市販のシリコンヒドロゲルは、Balafilcon A、Galyfilcon A、Lotrafilcon A、Lotrafilcon B又はSenofilcon Aである。
【００１５】
好適なポリシロキサンヒドロゲルの別の群は、結合又は架橋員で連結された、少なくとも１つの疎水性のシロキサン又はペルフルオロアルキルポリエーテルセグメントと、少なくとも１つの親水性のセグメントとを含む両親媒性セグメントコポリマーである。前記ポリシロキサンヒドロゲルの例は、例えば、ＰＣＴ出願ＷＯ−Ａ−９６／３１７９２及びＷＯ−Ａ−９７／４９７４０に開示されている。特に好適な両親媒性セグメントコポリマーは、ポリシロキサン、ペルフルオロアルキルポリエーテル及び混合ポリシロキサン／ペルフルオロアルキルポリエーテルセグメントからなる群より選択される少なくとも１つの疎水性のセグメントと、ポリオキサゾリン、ポリ（２−ヒドロキシエチルアクリラート）、ポリ（２−ヒドロキシエチルメタクリラート）、ポリアクリルアミド、ポリ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド）、ポリビニルピロリドン及びポリエチレンオキシドセグメントからなる群より選択される少なくとも１つの親水性のセグメントを含む。
【００１６】
好適なポリシロキサンヒドロゲルのさらに別の群は、（ａ）エチレン性不飽和二重結合１つを有する少なくとも１つの親水性のモノマーと、エチレン性不飽和二重結合２つ以上を含む少なくとも１つのシロキサン架橋剤とを、官能基を有する連鎖移動剤の存在下で共重合させる工程と；
（ｂ）得られたコポリマーの１つ以上の官能基をエチレン性不飽和基を有する有機化合物と反応させる工程とによって得られる、架橋性もしくは重合性のプレポリマーを架橋することによって得られるそれらである。この種のポリシロキサンヒドロゲルは、例えば、ＷＯ−Ａ−０１／７１３９２に開示されている。
【００１７】
特に好適なポリシロキサンヒドロゲルは、
（ａ）式：
【化１】
（式中、Ｒ１は、水素又はメチルであり、Ｒ２は、−ＣＯＯ−（ＣＨ２）２−ＯＨ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮ（ＣＨ３）２、又は
【化２】
である）の親水性のモノマー（場合により、１つ以上のさらなる親水性のモノマーと混合したもの）と；
式：
【化３】
（式中、ｄ１は、１０〜５００、好ましくは１０〜３００、より好ましくは２０〜２００及び特に２５〜１５０の整数であり、（alk）は、直鎖又は分岐鎖のＣ２−Ｃ４アルキレン又はラジカル−（ＣＨ２）１−３−Ｏ−（ＣＨ２）１−３−であり、Ｘは、−Ｏ−又は−ＮＨ−であり、Ｑは、式：
【化４】
のラジカルである）に相当するポリシロキサン架橋剤とを、官能基、特に２−メルカプトエタノール又は特に２−アミノエタンチオール（システアミン）を有する連鎖移動剤の存在下で共重合させる工程；及び
（ｂ）得られたコポリマーを、エチレン性不飽和基を有する有機化合物、例えば２−イソシアナートエチルメタクリラート（ＩＥＭ）、２−ビニル−アズラクトン、２−ビニル−４，４−ジメチル−アズラクトン、塩化アクリロイルもしくは塩化メタクリロイル、２−ヒドロキシエチルアクリラート（ＨＥＡ）、２-ヒドロキシメタクリラート（ＨＥＭＡ）、グリシジルアクリラート又はグリシジルメタクリラート、特にＩＥＭ又は塩化アクリロイルと反応させる工程によって得られたプレポリマーを架橋することによって得られる。
【００１８】
バルク材料表面に結合した水溶性ペプチドは、例えば、式：
Ａ−Ｃ（Ｏ）−［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］−Ｘ１−Ｒ３ （３）
｛式中、Ａ−Ｃ（Ｏ）は、疎水性のラジカル、例えば、脂肪酸のラジカル、芳香族カルボン酸のラジカル及び芳香脂肪族カルボン酸のラジカルからなる群より選択されるラジカルであり、
［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、３つ以上のアミノ酸を含み、そのうちの少なくとも１つがリシン（Ｌｙｓ）又はグルタミン（Ｇｌｎ）であるアミノ酸配列を有するポリペプチドのラジカルであり、
Ｘ１−Ｒ３は、ＯＨであり末端ペプチドカルボキシ基の一部であるか、あるいは、Ｘ１がＯ又はＮＲ４（ここでＲ４は、水素又はＣ１−Ｃ２−アルキルである）であり、Ｒ３が、親水性の基である｝のペプチドである。
【００１９】
脂肪酸のラジカルとしてのＡ−Ｃ（Ｏ）は、例えば、長鎖の脂肪族モノカルボン酸のラジカルであり、例えば、６〜２５個の炭素原子及び場合により１つ以上の炭素−炭素の二重結合を含む。好ましくは、Ａ−Ｃ（Ｏ）は、式ＣｎＨ２ｎ＋１ＣＯＯＨ（ここでｎは、７〜２０、特に８〜１８の数である）のモノカルボン酸のラジカルである。好適な脂肪酸ラジカルＡ−Ｃ（Ｏ）の例は、カプリン酸のアシルラジカル、ラウリン酸、パルミチン酸又はステアリン酸である。
【００２０】
適切な芳香族酸ラジカルＡ−Ｃ（Ｏ）の例は、場合により置換された安息香酸又はナフトエ酸のアシルラジカルである。
【００２１】
芳香脂肪族酸Ａ−Ｃ（Ｏ）の適切なラジカルの例は、場合により置換されたフェニル酢酸又はフェニルプロピオン酸のラジカル、又は、１−もしくは２−ナフチル酢酸又はプロピオン酸のラジカルである。
【００２２】
安息香酸、フェニル酢酸又はフェニルプロピオン酸の、場合による置換基は、例えば、Ｃ１−Ｃ２−アルキル又はＣ１−Ｃ２−アルコキシである。
【００２３】
アミノ酸配列（ペプチド）は、通常、化学的又は酵素的に架橋性である任意の水溶性ペプチドのラジカルであってよい。
【００２４】
ポリペプチドラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなすアミノ酸配列は、好ましくは、酵素トランスグルタミナーゼの基質として機能することができる配列であり、すなわち、それは、酵素的に架橋されることができるトランスグルタミナーゼリーダー配列の形態でリシン及び／又はグルタミンを含有する。
【００２５】
ポリペプチドラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなす適切なペプチドの例は、タンパク質加水分解物、例えば、カゼイン加水分解物；グルテンペプチド；ポリリシン；又はリシンと、例えば、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択される１つ以上の他のアミノ酸とのコポリマーである。
【００２６】
ラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなすポリペプチドの分子量は、通常重要ではないが、好ましくはＭｒ値が、≦１２０００である。Ｍｒの好適な分子量の範囲は、４００〜１００００、より好ましくは４００〜５０００、特に５００〜１５００である。
【００２７】
ラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなす好適なポリペプチドの１つの群は、ポリリシン類である；前記ポリリシン類の分子量は、好ましくは、優先順位も含めて上記の範囲である。
【００２８】
好適なポリペプチドのさらなる群は、リシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択される１つ以上のアミノ酸との統計的ポリマーであり、ここでも、上記の分子量の範囲と優先順位が当てはまる。
【００２９】
さらに適切なリシンコポリマーは、統計的組成物：
Ｔｙｒｘ−（Ａｌａ）ｙ−（Ｌｙｓ）ｚ （４ａ）
（式中、ｘは、０又は１、好ましくは１の数であり；ｙは、０〜８、好ましくは１〜５、及び特に２〜４の数であり；ｚは、１〜２０、好ましくは２〜１０、及び特に２〜５の数であり；（ｘ＋ｙ＋ｚ）の合計が、３〜２０、好ましくは４〜１２及び特に５〜８であり、IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commissionの推奨する呼称に従い、Ｔｙｒは、チロシンを、Ａｌａは、アラニンを、及びＬｙｓは、リシンを表す）を有する。
【００３０】
このリシンコポリマーの群のうち、［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、好ましくは統計的組成物：
Ｔｙｒ１−（Ａｌａ）３−（Ｌｙｓ）３ （４ｂ）
を有するポリペプチドのラジカルであり、さらにより好適であるのは、SEQ ID NO 1：
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ （４ｃ）
（ここでＴｙｒは、Ａに結合し、Ａｌａは、Ｒ３に結合している）の合成ポリペプチドのラジカルである。
【００３１】
ラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなす好適なポリペプチドのさらなる群は、グルタミン単位を含むグルテンペプチドを包含する。
【００３２】
ラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなす好適なポリペプチドのさらなる群は、グルタミン及びリシン単位を含むカゼイン加水分解物を包含する。
【００３３】
式（３）のＸ１は、好ましくはＯ又はＮＨ、特にＮＨである。
【００３４】
親水性の基としてのＲ３は、例えば、水素又は、スルホ、スルファト、ホスファト及び／又はカルボキシにより１回又は数回置換されているＣ１−Ｃ６−アルキルラジカルを表す。用語スルホ、スルファト、ホスファト及びカルボキシは、一般に、遊離酸及び生物医学的に許容される、特に眼科的に許容されるそれらの塩、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム又はアンモニウム塩を含む。好ましくは、親水性の基としてのＲ３は、スルホ、スルファト及び／又はカルボキシにより一置換又は二置換されているＣ１−Ｃ４−アルキルラジカルを表す。より好ましくは、親水性の基としてのＲ３は、スルホ又はカルボキシで一置換されているＣ２−Ｃ３−アルキルラジカルである。最も好ましくは、親水性の基としてのＲ３は、２−スルホエチルである。
【００３５】
Ｘ１−Ｒ３がＯＨである場合、式（３）は、末端カルボキシ基の適切な塩、例えばナトリウム、カリウム又はアンモニウム塩も包含することを意図する。
【００３６】
本発明の好適な実施態様によれば、工程（ｂ）における疎水性の有機バルク材料に、上記式（３）｛式中Ａ−Ｃ（Ｏ）は、式ＣｎＨ２ｎ＋１ＣＯＯＨ（ここでｎは、７〜２０である）のモノカルボン酸のラジカルであり；
［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、タンパク質加水分解物、グルテンペプチド、ポリリシン、又はリシンと１つ以上の他のアミノ酸とのコポリマーからなる群より選択される、分子量４００〜１００００を有するポリペプチド由来のアミノ酸配列であり、
Ｘ１は、Ｏ又はＮＨであり、Ｒ３は、水素又は、スルホ、スルファト及び／もしくはカルボキシにより一置換又は二置換されているＣ１−Ｃ４−アルキルである｝の水溶性ペプチドが結合する。
【００３７】
本発明のより好適な実施態様によれば、工程（ｂ）における疎水性の有機バルク材料に、上記式（３）｛式中Ａ−Ｃ（Ｏ）は、式ＣｎＨ２ｎ＋１ＣＯＯＨ（ここでｎは、８〜１８である）のモノカルボン酸のラジカルであり；
［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、カゼイン加水分解物；グルテンペプチド；ポリリシン；リシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択される１つ以上のアミノ酸との統計的コポリマー；及び式：
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ （４ｃ）
（ここでＴｙｒは、Ａに結合し、Ａｌａは、Ｒ３に結合している）のポリペプチドからなる群より選択される、分子量５００〜１５００を有するポリペプチド由来のアミノ酸配列であり；
Ｘ１は、Ｏ又はＮＨであり、Ｒ３は、水素又は、スルホもしくはカルボキシにより一置換されているＣ２−Ｃ３−アルキルである｝の水溶性ペプチドが結合する。
【００３８】
式（３）の化合物は、それ自体公知の方法により合成されてよい。例えば、式：
Ｈ２Ｎ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）ＯＨ （３ａ）
（式中、（ペプチド）は、上記の定義のとおりである）のペプチドを、式：
Ａ−ＣＯＯＨ （５）
（式中、Ａは、前記の定義のとおりである）の化合物と、及び、該当する場合、式：
Ｒ３−Ｘ１Ｈ （６）
（式中、Ｒ３及びＸ１は、上記の定義のとおりである）の化合物と、任意の順序で反応させる。
【００３９】
式（５）及び（６）の化合物は、公知であり、通常、市販されている。式（３ａ）のペプチドは、商業的サプライヤーから一部入手することができるか、又は任意の公知の適切な方法に従って合成することができる。例えば、ポリリシン並びにリシンと他のアミノ酸との統計的コポリマーは、標準的な共重合反応によって得られうる。具体的なポリリシンコポリマーは、例えば、W.C. Chan and P.D. White, Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Practical Approach Series, Oxford University Pressに記載されているような固相ペプチド合成によって得られうる。例えば、式（４ａ）、（４ｂ）及び（４ｃ）の配列の基礎をなすペプチド、即ち、SEQ ID NO 1は、ポリマー担体、例えば、クロロトリチルアンカーを含むポリスチレン樹脂で固定された、基礎をなす保護アミノ酸（例えば、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）ラジカルで保護されている）を１つずつ反応させることにより合成することができる。したがって、第１の保護アミノ酸、例えばＦｍｏｃ及びＢｏｃ（ｔ−ブチルカルボニル）保護リシン又はＦｍｏｃ保護アラニンを、ポリマー担体にカップリングする。カップリング完了（カイザー試験でチェックしうる）後、前記アミノ酸を脱保護（通常、希釈トリフルオロ酢酸又はピペリジンで行う）し、その後第２の保護アミノ酸のカップリングを開始する。最後のアミノ酸のカップリング及び脱保護の後、得られたペプチドを、それ自体公知の方法、例えば、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸の溶液で、ポリマー担体から分離する。
【００４０】
式（３ａ）の化合物と式（５）及び（６）の化合物との反応は、有機化学の教科書から、それ自体公知である。式（３ａ）のペプチドを上記のような固相ペプチド合成で調製した場合、そのペプチドと式（５）の化合物とのカップリングは、好ましくは、ペプチド合成に加えることができる。したがって、ポリマー担体から分離する前のペプチドに、式（５）の化合物を、アミノ酸と同様の方法でカップリングする。
【００４１】
疎水性の部分を有する水溶性ペプチドは、疎水性のバルク材料表面に非共有的に結合する。したがって、結合は、例えば、物理的な吸収、バルク材料のポリマーマトリックスへの物理的な組み込み、錯体形成、異極性結合及び／又はイオン相互作用によって生じる。
【００４２】
ペプチドのバルク材料表面への結合は、それ自体公知の方法にしたがって達成しうる。例えば、バルク材料をペプチド溶液に浸漬するか、又は例えば、浸漬、スプレー、印刷、スプレッド、注入、圧延又はスピンコーティング（スプレー、又は特に浸漬が好適である）によって、１つ以上のペプチドの層をバルク材料表面上に堆積させる。
【００４３】
ペプチドの適切な浸漬溶液は、通常、１つ以上の異なる溶媒に希釈した各々のペプチドを含む。適切な溶媒は、例えば、水あるいは、水混和性有機溶媒、例えばＴＨＦ又はＣ１−Ｃ４−アルカノール、例えば、メタノール、エタノールもしくはイソプロパノールを含む水溶液であり；好適な溶媒は水である。ペプチド水溶液のｐＨは、使用する特定のポリペプチドに依存する。一定のｐＨ値を維持するために、適切な緩衝液、例えば、リン酸緩衝液を加えてよい。浸漬溶液は、追加的な成分、例えば塩を含有してよい。浸漬溶液の濃度は、例えば、関与する個別のペプチドに依存して、広い範囲で変化してよい。しかし、一般に比較的希薄なペプチドの溶液の配合が好適である。
【００４４】
バルク材料をペプチドの溶液に浸漬する時間は、数多くの要因に依存して変化する場合がある。通常、３０秒〜約３０分間、好ましくは３０秒〜１５分間、及び特に４５秒〜５分間の浸漬時間が有効であると証明されている。バルク材料のペプチド溶液への浸漬は、室温又は高温で行ってよい；したがって、例えば、１５〜３０℃の温度、及び高温、例えば３５〜８５℃が可能である。
【００４５】
本発明の好適な実施態様は、ペプチド溶液での処理に先立ち、疎水性の有機バルク材料を、水混和性の有機溶媒、例えば、Ｃ１−Ｃ４−アルコール、例えばエタノールもしくはイソプロパノール又はＴＨＦ中で膨潤させることを含む。膨潤は、周囲温度又は好ましくは高温、例えば、３５〜９０℃で行ってよい。膨潤時間は、重要ではない；通常、３０秒〜５分間、好ましくは４５秒〜２分間で十分である。
【００４６】
ペプチドの堆積後、バルク材料は、通常の方法、例えば単なるすすぎにより仕上げてもよい。
【００４７】
本発明の方法による複合材料の親水性の表面コーティング工程（ｂ）は、例えば、化学的に、有機バルク材料上に非共有的に結合したペプチドの架橋を開始させることにより、終了させることもできる。この目的のために、ペプチドをその表面に含む有機バルク材料を、適切な架橋剤、例えばホルムアルデヒド、好ましくはホルムアルデヒドの水溶液又はグルタルアルデヒドで処理する。
【００４８】
好ましくは、本発明の方法による複合材料の親水性の表面コーティング工程（ｂ）は、酵素的に架橋することにより終了させる。例えば、疎水性の有機バルク材料が、その表面に、リシン及びグルタミン単位の両方を含むペプチドを結合させている場合、前記ペプチドは、トランスグルタミナーゼを加えることによって架橋させてもよい。酵素トランスグルタミナーゼは、リシンアミノ基及びグルタミンアミド基の間で、ペプチド内及びペプチド間イソペプチド結合の形成を開始する。バルク材料と、それに結合しているペプチドとの、例えば、細菌トランスグルタミナーゼを含む水溶液中の処理は、例えば、周囲温度又は好ましくは僅かに高温、例えば３０〜５０℃で行ってよい。処理時間は、重要ではない；通常、３０秒〜１０分間、好ましくは４５秒〜５分間で十分である。
【００４９】
疎水性の有機バルク材料が、その表面に、リシン単位のみ又はグルタミン単位のみを含むペプチドを結合させている場合、トランスグルタミナーゼを用いて酵素的に架橋することは、さらに別の、相補的アミノ酸単位を含むタンパク質もしくはタンパク質加水分解物の存在下でのみ実施可能である。
【００５０】
本発明のさらに好適な実施態様は、したがって、
（ａ）疎水性の有機バルク材料を提供する工程と、
（ｂ）まず、
（b1）酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能し、好ましくは上記式（３）（式に含まれる変数には、上記の意味及び優先順位が適用される）の化合物である、疎水性の部分を含むペプチドを前記バルク材料表面に結合させ；次に
（b2）タンパク質又はタンパク質加水分解物を、同様に酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能するバルク材料表面に加え；その後
（b3）酵素、特にトランスグルタミナーゼで処理することにより、
バルク材料上に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む複合材料の製造方法を含む。
【００５１】
例えば、工程（b1）におけるペプチドは、１つ以上のグルタミン単位を含み、工程（b2）におけるタンパク質又はタンパク質加水分解物は、１つ以上のリシン単位を含む；あるいは、本発明の別の実施態様では、工程（b1）におけるペプチドは、１つ以上のリシン単位を含み、工程（b2）におけるタンパク質又はタンパク質加水分解物は、１つ以上のグルタミン単位を含む。
【００５２】
上記方法におけるトランスグルタミナーゼ処理が、疎水性バルク材料のペプチド改質表面上に、タンパク質又はタンパク質加水分解物を、固定及び／又は架橋すると考えられる。上記工程（b2）の適切なタンパク質又はタンパク質加水分解物は、例えば、カゼイン又はカゼイン加水分解物、ゼラチン加水分解物、グルテン加水分解物又は大豆タンパク質加水分解物、特にカゼイン加水分解物である。工程（b1）による、ペプチド改質バルク材料のタンパク質又はタンパク質加水分解物での処理は、好ましくは周囲温度での水溶液中で行う。その後、周囲温度又は好ましくは僅かに高温、例えば３０〜５０℃で、酵素による処理を行う。処理時間は、重要ではない；通常、３０秒〜１０分間、好ましくは４５秒〜５分間が十分である。
【００５３】
本発明の方法によって得た複合材料は、好ましくは、上記の定義及び優先順位のすべてを包含する上記の複合材料を含む、生物医学的装置、例えば、眼用装置、好ましくはハード及び特にソフトコンタクトレンズの両方を含むコンタクトレンズ、眼内レンズ又は人工角膜である。複合材料は、さらに、例えば、創傷治療用包帯、眼帯、活性化合物の徐放用材料、例えば、ドラッグデリバリーパッチ、手術において使用できる成形物、例えば、心臓弁、代用血管、カテーテル、人工臓器、被覆生体インプラント、例えば、膵臓島、人工装具の材料、例えば、代用骨、又は診断用成形物、膜又は生物医学的機器又は器具としても有用である。
【００５４】
本発明の方法によれば、生物医学的物品、特に眼科用品が得られ、先行技術のそれらと比べて様々な予想外の利点を有し、このためこれらの物品が、例えば、連続装用コンタクトレンズのような実用に極めて適切なものとなる。例えば、これらは、高い表面湿潤性及び潤滑性を有する。このことは、例えば、極めて滑性な物品表面を示す指先試験；又は目視検査；又は適切な接触角の測定によって実証されている。例えば、コーティングしたレンズ及びコーティングしていないレンズの液滴による静的接触角は、Kruss (Kruss GmbH, Hamburg, Germany)のDSA 10 液滴形状分析系で測定される。コーティングしていないシリコンヒドロゲルコンタクトレンズは、通常、９０〜１００°以上の水接触角を有するが、本発明の方法による処理は、この値を大幅に削減する。本発明の方法によって得られる表面コーティングの優れた品質を評価するさらなるツールは、ＡＴＲ−ＦＴＩＲ測定又は下記実施例部分に記載のスーダンブラック染料吸収試験である。
【００５５】
さらに、本発明の方法によって得られた複合材料を含む生物医学的装置、例えば、コンタクトレンズのような眼用装置は、優れた機械的性質を合わせもつ際立った生体適合性を有する。さらに、一般に有害な眼作用は観察されず、一方タンパク質又は脂質の吸着は低く、また塩沈着物形成も従来のコンタクトレンズよりも低い。一般に、汚損が少なく、微生物付着が少なく、また、生物的侵食も低い一方で、例えば低い摩擦係数及び低い摩耗性に、良好な機械的性質を見い出すことができる。さらに、本発明の複合材料の寸法安定性は、非常に優れている。加えて、本発明による所定のバルク材料での親水性の表面コーティングの結合は、その視界的透明度に影響を及ぼさない。
【００５６】
要約すると、本発明の方法によって得られる眼用装置、例えば、眼内レンズ及び人工角膜又は特にコンタクトレンズは、細胞残屑、化粧品、涙成分、脂質、タンパク質、塩、塵芥若しくは汚損、溶媒蒸気又は化学物質に関しての損傷の低さと、例えば、眼用装置の非常に良好な眼上運動を与える柔軟なヒドロゲル表面による、このような眼用装置を装用する患者にとっての高い快適さとの組合せを提供する。
【００５７】
実施例において、他に記載のない限り、量は重量であり、温度は、摂氏度で与えられる。固体への湿潤力は、固体を公知の表面張力を有する液体に浸漬するか、又はそこから引き上げたときに測定した。アミノ酸出発物質及びペプチド中のアミノ酸単位は、他に記載のない限り、常に天然のＬ型である。
【実施例】
【００５８】
実施例１：ＨＯ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨの調製
上記ペプチドを、Ｆｍｏｃ−固相ペプチド合成の標準的な方法を用いて、２−クロロトリチルアンカーを含むポリスチレン担体上で合成した。カップリングは、通常、ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロフォスファート（ＴＢＴＵ）／１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）中で行い、及びカップリングの完了は、カイザー（Kaiser）試験により判明した。洗浄工程は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で行った。
【００５９】
詳細な手順：
（ａ）市販のＡｌａ−ＯＨ−２−クロロトリチル−ポリスチレン担体６．２５ｇを、ペプチド合成反応器中のジクロロメタン５０ml中に懸濁し、３０分間保持した。ポリマー担体をＤＭＦで洗浄し、その後いくらかのＤＭＦ中で再び懸濁した。
（ｂ）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨのカップリング：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ ４．６９ｇ、ＴＢＴＵ ３．１４ｇ及びＨＯＢｔ １．３５ｇをＤＭＦ２０ml中に溶解した。Ｎ−エチル−ジイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）３．４mlをこの溶液に加えた。得られた混合物を短時間撹拌し、次に工程（ａ）に従って得た懸濁液に加えた。得られた混合物を窒素下に約１時間保持した。その後、サンプルを採り、カイザー試験でチェックした。カイザー試験が陰性である場合、反応器から反応溶液を取り出し、ポリスチレン担体を、ＤＭＦで１０回洗浄した。
（ｃ）Ｆｍｏｃ保護基の切断：洗浄後、得られたポリマー担体に、ＤＭＦ／ピペリジン混合物（８０／２０）３０mlを加え、窒素をフラッシュしながら全体を１時間保持した。担体を次に再度、ＤＭＦで１０回洗浄し、その後いくらかのＤＭＦ中に懸濁した。
（ｄ）Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨのカップリング：第２のＬｙｓ（Ｂｏｃ）を、工程（ｃ）に従って調製したＬｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−２−クロロトリチル−ポリスチレンに加えるために、工程（ｂ）及び（ｃ）を同じ方法で繰り返した。
（ｅ）Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨのカップリング：Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ ３．１１ｇ、ＴＢＴＵ ３．１４ｇ及びＨＯＢｔ １．３５ｇを、ＤＭＦ２０ml中に溶解した。ＤＩＰＥＡ ３．４mlを得られた溶液に加えた。得られた混合物を短時間撹拌し、次に工程（ｄ）に従って得た懸濁液に加えた。得られた混合物を窒素下に約１時間保持した。その後、サンプルを採り、カイザー試験でチェックした。カイザー試験が陰性の場合、反応溶液を反応器から取り出し、ポリスチレン担体をＤＭＦで１０回洗浄した。その後、Ｆｍｏｃ保護基の切断を工程（ｃ）に記載のとおり行った。
（ｆ）別のＦｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−ＯＨ及びＦｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨのカップリング：両アミノ酸を、工程（ｅ）に従って得たペプチドに上記工程（ｄ）及び（ｅ）に記載のものと同じ方法で、カップリングした。
（ｇ）Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ（ｔＢｕ＝ｔ−ブチル）のカップリング：Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−ＯＨ ４．６ｇ、ＴＢＴＵ ３．１４ｇ及びＨＯＢｔ １．３５ｇをＤＭＦ２０mlに溶解し、その後、Ｎ−エチル−ジイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）３．４mlをこの溶液に加えた。得られた混合物を短時間撹拌し、次に工程（ａ）に従って得た懸濁液に加えた。得られた混合物を窒素下に約１時間保持した。その後、サンプルを採り、カイザー試験でチェックした。カイザー試験が陰性の場合、反応溶液を反応器から取り出し、ポリスチレン担体を、ＤＭＦで洗浄した。
（ｈ）Ｆｍｏｃ保護基の切断：洗浄後、得られたポリマー担体に、ＤＭＦ／ピペリジン混合物（８０／２０）３０mlを加え、窒素をフラッシュしながら混合物を１時間保持した。樹脂を次にイソプロパノール及びｎ−ヘキサンで３回洗浄し、その後高真空において乾燥させた。収量：Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａを負荷したポリスチレン樹脂１２ｇ。
【００６０】
実施例２ａ：固相化学を用いた、疎水性の部分のペプチドへのカップリング
実施例１に従って得たＴｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａを負荷したポリスチレン担体２．４ｇを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、３０分間保持した。ポリスチレン担体を次にＤＭＦで洗浄し、その後、いくらかのＤＭＦ中に再び懸濁した。別の広口ビンにおいて、パルミチン酸６４１mg、ＴＢＴＵ ７８６mg及びＨＯＢｔ ３３８mgをＤＭＦに溶解した。ＤＩＰＥＡ８５０μｌを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を約１時間窒素フラッシュ下に保持した。転換の完了をカイザー試験で確認した後、ポリマー担体をＤＭＦで洗浄した。
【００６１】
実施例２ｂ：固相化学を用いた、疎水性の部分のペプチドへのカップリング
実施例１に従って得たＴｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａを負荷したポリスチレン担体１ｇを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、３０分間保持した。ポリスチレン担体を次にＤＭＦで洗浄し、その後、いくらかのＤＭＦ中に再び懸濁した。別の広口壜において、カプリン酸１４８mg、ＴＢＴＵ ２７１mg及びＨＯＢｔ １１６mgをＤＭＦに溶解した。ＤＩＰＥＡ ２９３μｌを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を窒素で約２時間フラッシュした。転換の完了をカイザー試験で確認した後、反応混合物をろ過し、ポリマー担体をＤＭＦで洗浄した。
【００６２】
実施例２ｃ：固相化学を用いた、疎水性の部分のペプチドへのカップリング
実施例１に従って得たＴｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａを負荷したポリスチレン担体９１０mgを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、３０分間保持した。ポリスチレン担体を次にＤＭＦで洗浄し、その後、いくらかのＤＭＦ中に再び懸濁した。別の広口壜において、フェニル酢酸１０５mg、ＴＢＴＵ ２３９mg及びＨＯＢｔ １０３mgをＤＭＦ中に溶解した。ＤＩＰＥＡ ２６１μｌを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を窒素で約１時間フラッシュした。転換の完了をカイザー試験で確認した後、ポリマー担体を洗浄した。
【００６３】
実施例２ｄ：固相化学を用いた、疎水性の部分のペプチドへのカップリング
実施例１に従って得たＴｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａを負荷したポリスチレン担体９１０mgを、ジクロロメタンと一緒にペプチド反応器中に懸濁し、３０分間保持した。ポリスチレン担体を次にＤＭＦで洗浄し、その後、いくらかのＤＭＦ中に再び懸濁した。別の広口ビンにおいて、ナフチル酢酸１４１mg、ＴＢＴＵ ２３９mg及びＨＯＢｔ １０３mgをＤＭＦ中に溶解した。ＤＩＰＥＡ ２６１μｌを加え完全に攪拌した後、この溶液を、懸濁したポリスチレン担体に加え、全体を約１時間窒素でフラッシュした。転換の完了をカイザー試験で確認した後、ポリマー担体を洗浄した。
【００６４】
実施例３ａ：ポリマー担体からの完全に保護されたペプチドの切断
実施例２ａに従って得たポリマー担体から、完全に保護されたペプチドを分離した。この目的のために、ジクロロメタン中にトリフルオロ酢酸１重量％を含む溶液２０mlを、ポリマー担体材料に加え、全体を約２分間振とうさせた。トリフルオロ酢酸／ジクロロメタン溶液を用いた振とうプロセスを７回繰り返した。その後、ポリマー担体をジクロロメタン及びメタノールで３回洗浄した。合わせた切断及び洗浄用溶液をメタノール中のピリジン１０重量％の溶液に加え、全体を次に真空中で原体積の約５％に相当する容量まで濃縮した。得られた溶液に、純水約８０mlを加え、得られた白色の沈殿物をろ過した。冷水、冷ＮａＨＣＯ３溶液、再び冷水、冷ＫＨＳＯ４溶液０．０５Ｍ、最後に再度水での洗浄を繰り返した後、得られた沈殿物を真空中Ｐ２Ｏ５で一晩乾燥させた。粗保護ペプチド収量１．５６ｇ。
【００６５】
実施例３ｂ：脱保護ペプチドのポリマー担体からの切断
実施例２ｂ、２ｃ及び２ｄに従って調製したペプチドをポリマー担体から分離し、一方で同時に側鎖の保護基を除去した。この目的のために、水２．５重量％、トリ−イソプロピルシラン２．５重量％及びトリフルオロ酢酸９５重量％を含む溶液各２０mlを、それぞれの保護ペプチドを含むポリマー担体に加え、全混合物を次に約１時間保持した。ポリマー担体を次にろ別し、その後、トリフルオロ酢酸で２回洗浄した。ろ液と洗浄溶液を組み合わせた後、溶媒を真空中で除去した。得られた油状残留物の結晶化をジエチルエーテル中での処理により開始した。収量（粗未保護ペプチド、それぞれベージュ色の結晶）：
カプリノイル−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：４３２mg；
フェナク（phenac）−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：３７０mg；
ナフタク（naphtac）−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：３９５mg。
【００６６】
実施例４：パルミトイル−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａのタウリン（２−スルホエチル−アミン）へのカップリング
実施例３ａに従って得たペプチド７８０mgを、ＤＭＦ ４０mlに溶解した。ＴＢＴＵ １６０mg、ＨＯＢｔ ６８mg、Ｎ−エチル−ジイソプロピルアミン３４０μｌ及びタウリン１２５mgをこの溶液に加え、反応混合物を窒素雰囲気で一晩撹拌した；それにより、最初の懸濁液は、透明な溶液に変化した。最後に、溶媒を真空中で除去し、固体残留物を結晶化し、さらにジエチルエーテルで洗浄した（収量：明褐色の固体１．４ｇ）。
【００６７】
粗パルミトイル−Ｔｙｒ（ｔＢｕ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）−Ａｌａ−タウリン生成物を、トリフルオロ酢酸２５重量％及びジクロロメタン７５重量％を含む溶液８０ml中に溶解し、全混合物を室温で約９０分間撹拌した。溶媒を次に真空中で除去し、残存する油状生成物を結晶化させ、ジエチルエーテルで洗浄した。
【００６８】
実施例５：実施例３ｂ及び４で得た粗生成物を、分取ＨＰＬＣ（Varian製ＨＰＬＣ、トリフルオロ酢酸を改質剤とする、水／アセトニトリル勾配の逆相カラム）で精製した。
収量及び特性解析：
（ｉ）カプリノイル−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：３２１mg、ESI-MS: 955.6 [M+Na]+
【化５】
（ii）フェナク−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：２７６mg、ESI-MS: 919.5 [M+Na]+
【化６】
（iii）ナフタク−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−ＯＨ：２６０mg、ESI-MS: 969.5 [M+Na]+
【化７】
（iv）パルミトイル−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−タウリン：４０６mg、ESI-MS: 1146.7 [M+Na]+
【化８】
実施例６：酵素的に架橋されたペプチドをその表面に結合させたソフトシリコンヒドロゲルコンタクトレンズの調製
疎水性のシリコンヒドロゲルコンタクトレンズ（lotrafilcon A、混合ポリシロキサン／ペルフルオロアルキルポリエーテル架橋剤、ＴＲＩＳ及びＤＭＡの共重合生成物）を、まず、実施例４（パルミトイル−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−タウリン）の精製ペプチド１０mmolを含む水溶液中でインキュベートし、次にカゼイン加水分解物（Vitalarmor）１重量％を含む水溶液に移した。細菌トランスグルタミナーゼ２U/mlを４０℃で加えて酵素的架橋を開始した。コーティングしたレンズを次にＰＢＳ緩衝液で洗浄し、１２１℃で２０分間オートクレーブした。
実施例４のペプチドの結合は、ペプチド鎖のチロシン部分のテトラニトロメタンでのニトロ化反応により、黄色の着色が生じることにより観察することができた。カゼイン加水分解物の結合及び架橋は、レンズ表面の親水性及び湿潤性試験によって調べた。
【００６９】
実施例７：酵素的に架橋されたペプチドをその表面に結合させたソフトシリコンヒドロゲルコンタクトレンズの調製
（ｉ）シリコンヒドロゲルコンタクトレンズの調製
（ia）ＰＤＭＳ架橋剤Ｉの調製
４Ｌビーカーにおいて、Ｎａ２ＣＯ３ ２４．１３ｇ、ＮａＣｌ ８０ｇ及び脱イオン水１．５２ｋｇを混合して溶解した。別の４Ｌビーカーにおいて、ビス−３−アミノプロピル−ポリジメチルシロキサン（Shin-Etsu, MW 約11500）７００ｇを、ヘキサン１０００ｇ中に溶解した。４Ｌ反応器に、タービン攪拌器付オーバーヘッド撹拌器及びマイクロフローコントローラー付２５０ml添加漏斗を装備した。２つの溶液を次に反応器に仕込み、激しく攪拌しながら１５分間混合し、エマルションを作成した。塩化アクリロイル１４．５ｇをヘキサン１００ml中に溶解し、添加漏斗に仕込んだ。塩化アクリロイル溶液を、激しい攪拌下で１時間かけてエマルションに滴下した。添加完了後、エマルションを３０分間撹拌し、次に攪拌を停止し、一晩、相を分離させた。水相をデカントし、有機相を、水に溶解した２．５％ＮａＣｌの混合物２．０ｋｇで２回洗浄した。有機相を次に硫酸マグネシウムで乾燥させ、１．０μｍの除外でろ過し、ロータリエバポレーターで濃縮した。得られた油状物を、高真空乾燥で一定重量になるまでさらに精製した。得られた生成物を滴定により分析すると、Ｃ＝Ｃ二重結合が０．１７５mEq/gであった。
【００７０】
（ib）ＰＤＭＳ架橋剤ＩＩの調製
４Ｌビーカーにおいて、Ｎａ２ＣＯ３ ６１．７３ｇ、ＮａＣｌ ８０ｇ及び脱イオン水１．５２ｋｇを混合して溶解した。別の４Ｌビーカーにおいて、ビス−３−アミノプロピル−ポリジメチルシロキサン（Shin-Etsu, MW 約4500）７００ｇを、ヘキサン１０００ｇ中に溶解した。４Ｌ反応器に、タービン攪拌器付オーバーヘッド撹拌器及びマイクロフローコントローラー付２５０ml添加漏斗を装備した。２つの溶液を次に反応器に仕込み、激しく攪拌しながら１５分間混合し、エマルションを作成した。塩化アクリロイル３６．６ｇをヘキサン１００ml中に溶解し、添加漏斗に仕込んだ。塩化アクリロイル溶液を激しい攪拌下で１時間かけてエマルションに滴下した。添加完了後、エマルションを３０分間撹拌し、次に攪拌を停止し、一晩、相を分離させた。水相をデカントし、有機相を、水に溶解した２．５％ＮａＣｌの混合物２．０ｋｇで２回洗浄した。有機相を次に硫酸マグネシウムで乾燥させ、１．０μｍの除外でろ過し、ロータリエバポレーターで濃縮した。得られた油状物を、高真空乾燥で一定重量になるまでさらに精製した。得られた生成物を滴定により分析すると、Ｃ＝Ｃ二重結合が０．４３５mEq/gであった。
【００７１】
（ic）架橋性コポリマーの調製
２Ｌジャケット反応器に、加熱／冷却ループ、還流冷却器、Ｎ２インレット／真空アダプター、フィードチューブアダプター及びオーバーヘッド機械式撹拌器を装備した。（ia）によるＰＤＭＳ架橋剤Ｉ ９０．００ｇ及び（ｉｂ）によるＰＤＭＳ架橋剤ＩＩ ３０．００ｇを１−プロパノール４８０ｇ中に溶解することにより溶液を生成した。この溶液を反応器に仕込み、８℃に冷却した。溶液を排気により１５mBar未満に脱気し、真空を１５分間保持し、次に乾燥窒素で再加圧した。この脱気手順を全部で３回繰り返した。反応器を乾燥窒素のブランケット下に保持した。
別のフラスコにおいて、モノマー溶液を、システアミン塩酸塩１．５０ｇ、ＡＩＢＮ ０．３ｇ、ＤＭＡ ５５．２７５ｇ、ＨＥＡ １８．４３ｇ及び１−プロパノール３６４．５ｇを混合することにより調製した。この溶液をWhatman 540ろ紙でろ過し、次に、流速３．０ml／分で脱気装置及びＨＰＬＣポンプを通して反応器に加えた。反応温度を次に、加熱ランプで約１時間で６８℃に上げた。
第２のフラスコにおいて、システアミン塩酸塩４．５ｇ及び１−プロパノール３９５．５ｇを混合し、次にWhatman 540ろ紙でろ過することにより供給溶液を調製した。反応器の温度が６８℃に達した時、この溶液を、脱気装置／ＨＰＬＣポンプを通し３時間かけて徐々に反応器に投入した。次に、反応を６８℃でさらに３時間継続させ、その時点で、加熱を停止し、反応器を室温まで冷ました。
反応混合物をフラスコに移し、ロータリエバポレーター上で、真空下４０℃で、サンプル１０００ｇが残るまで溶媒を除去した。次に、溶液を高速で攪拌しながら、徐々に脱イオン水２０００ｇと混合した。さらに溶媒をサンプル２０００ｇが残るまで除去した。この除去プロセスの間に、溶液は、徐々にエマルションになった。得られた材料を、浸透電気伝導度が２．５μS/cm未満になるまで、１０ｋＤ分子量除去膜を用いた限外ろ過により精製した。このエマルションを、次にオーバーヘッド撹拌器、冷凍ループ、温度計、及びMetrohm Model 718 STAT TitrinoのｐＨメーター及び分配チップを装備した２−Ｌ反応器に仕込んだ。反応混合物を、次に１℃に冷却した。ＮａＨＣＯ３ ７．９９ｇをエマルションに仕込み、撹拌して溶解した。断続的に１５％水酸化ナトリウム溶液を加えることにより、ｐＨ９．５を維持するようにTitrinoを設定した。塩化アクリロイル１１．５９mlを次にシリンジポンプを用いて１時間かけて加えた。エマルションをさらに１時間撹拌し、次に塩酸の１５％溶液を加えることにより、反応混合物を中和するようにTitrinoを設定した。生成物を再び、浸透電気伝導度が２．５μS/cm未満になるまで、１０ｋＤ分子量除去膜を用いた限外ろ過により精製した。最終的なマクロモノマーを凍結乾燥により単離した。
【００７２】
（id）コンタクトレンズの調製
工程（ic）に従って得たポリマー１８．８３ｇを、１−プロパノール約２００mlに溶解し、溶液総重量約７０ｇまで濃縮し、０．４５μｍの除外でろ過した。固形分２６．５３％の溶液６７．９４ｇを回収した。２−ヒドロキシ−４’−ヒドロキシエチル−２−メチルプロピオフェノン（IRGACURE（登録商標）-2959, Ciba Specialty Chemicals）の１％溶液４．５０３ｇを加え、次に溶液を最終重量２５．７４ｇ（固形分６５．０％）まで濃縮した。
配合物２００mgを、ポリ（プロピレン）コンタクトレンズ金型に分配し、金型を閉じた。次に金型に２．１８mW/cm2の強度を有する紫外線源を１５秒間照射した。金型を次に開き、レンズが接着した型半を、イソプロパノール８０％、水２０％（ｖ／ｖ）の混合物に一晩浸漬した。レンズをこの溶媒混合物で金型からすすいではずし、次に２時間ずつ２回新しいイソプロパノール／水の混合物のアリコートですすいだ。レンズの水を切り、次に脱イオン水に浸漬することにより水和した。それらを次に純水（３．０ml／レンズ）中で２時間３回すすいだ。
【００７３】
（ie）表面コーティングの調製
上記（id）に従って得た疎水性のシリコンヒドロゲルコンタクトレンズを、イソプロパノール中７５℃で１分間インキュベートし、次に、実施例４の精製ペプチド（パルミトイル−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−タウリン）１０mmolを含むリン酸緩衝生理食塩溶液に移し、８０℃で約１分間処理した。コンタクトレンズを次に緩衝生理食塩溶液に移し、２重量％ホルムアルデヒド溶液１００μlを加えた。コンタクトレンズをその後１２１℃で３０分間オートクレーブした。実施例４のペプチドの結合が、ペプチド鎖のチロシン部分のテトラニトロメタンでのニトロ化反応により、黄色の着色が生じることにより観察できた。目視による湿潤性及び親水性試験、並びに接触角の測定、及びスーダンブラック染色試験により、親水性の表面コーティングを調べた。
【００７４】
（if）水接触角の測定
測定は、純水（Fluka製、２０℃での表面張力７２．５mN/M）を用いたKruss (Kruss GmbH, Hamburg, Germany)のDSA 10 液滴形状分析系での液滴法よって行った。測定目的のため、コンタクトレンズを保存溶液からピンセットで取り出し、過剰の保存溶液を穏やかに振とうして除去した。コンタクトレンズを、コンタクトレンズ型の雄部に置き、乾いた清浄な布で拭き取った。水滴（約１μl）を、次にレンズの頂点に添加し、この水滴（ＷＣＡ(t)、サークルフィッティングモード）の経時的な接触角の変化を観察した；ＷＣＡは、グラフWCA(t)をt=0で外挿することによって計算した。
【００７５】
（ig）スーダンブラックの染料吸収試験
スーダンブラックＢ（Aldrich）０．５ｇを、ビタミンＥ油状物１００ｇ中に、撹拌下で一晩溶解することにより、０．５％（w/w）スーダンブラックの染料溶液を調製した。測定目的のため、表面処理したレンズを、まず、ガラスバイアル中のリン酸緩衝生理食塩溶液（ｐＨ７．２）２ml中でオートクレーブ（１２１℃で３０分）した。コンタクトレンズを、次に溶液からピンセットで取り出し、表面の水の大部分が除去されるように、穏やかに振とうした。レンズを次に上記で調製したスーダンブラックの染料溶液に５分間入れた。その後、レンズを染料浴から取り出し、過剰の染料溶液を温水ですすぎ落とした。レンズを風乾させ、着色の度合いに従って評価した。
２ ＝ 着色がないか、ほとんどない
１ ＝ わずかな着色
０ ＝ かなりの着色
【００７６】
（ih）（ie）に従ってコーティングしたコンタクトレンズ及び対応するコーティングしていないコンタクトレンズ（対照）で得た値を表１にまとめた。
【表１】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）疎水性の有機バルク材料を提供する工程と；
（ｂ）まず、疎水性の有機バルク材料の表面に、疎水性の部分を含む水溶性のペプチドを非共有的に結合させ；次に前記水溶性のペプチドを化学的又は酵素的に架橋させることにより、バルク材料上に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む、複合材料の製造方法。
【請求項２】
疎水性の有機バルク材料が、ポリシロキサン、ペルフルオロアルキルポリエーテル、フッ素化ポリ（メタ）アクリラート、ポリアルキル（メタ）アクリラート、フッ素化ポリオレフィン又はそれらの混合物である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
疎水性の有機バルク材料が、ポリシロキサンヒドロゲル、ペルフルオロアルキルポリエーテルヒドロゲル又はそれらの混合物である、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
バルク材料に非共有結合的に結合するペプチドが、式：
Ａ−Ｃ（Ｏ）−［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］−Ｘ１−Ｒ３ （３）
｛式中、Ａ−Ｃ（Ｏ）は、脂肪酸のラジカル、芳香族カルボン酸のラジカル及び芳香脂肪族カルボン酸のラジカルからなる群より選択されるラジカルであり、［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、３つ以上のアミノ酸を含み、そのうちの少なくとも１つがリシン（Ｌｙｓ）又はグルタミン（Ｇｌｎ）であるアミノ酸配列を有するポリペプチドのラジカルであり、
Ｘ１−Ｒ３は、ＯＨであり末端ペプチドカルボキシ基の一部であるか、あるいは、Ｘ１がＯ又はＮＲ４（ここでＲ４は、水素又はＣ１−Ｃ２−アルキルである）であり、Ｒ３が、親水性の基である｝のペプチドである、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
ポリペプチドラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなすポリペプチドが、カゼイン加水分解物；グルテンペプチド；ポリリシン；又はリシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択される１つ以上の他のアミノ酸とのコポリマーである、請求項４記載の方法。
【請求項６】
ポリペプチドラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなすポリペプチドが、ポリリシン又は、リシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択されるアミノ酸との統計的コポリマーである、請求項４又は５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
ポリペプチドラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなすポリペプチドが、SEQ ID NO 1：
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ （４ｃ）
（ここでＴｙｒは、Ａに結合し、Ａｌａは、Ｒ３に結合している）のコポリマーである、請求項４又は５のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
ポリペプチドの分子量範囲Ｍｒが、４００〜１００００である、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
親水性の表面コーティング工程（ｂ）が、有機バルク材料に結合しているペプチドの架橋を、ホルムアルデヒド又はグルタルアルデヒドから選択される架橋剤を用いて、化学的に開始することにより終了される、請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
親水性の表面コーティング工程（ｂ）が、有機バルク材料に結合しているペプチドを酵素的に架橋することにより終了される、請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）疎水性の有機バルク材料を提供する工程、及び
（ｂ）まず、
（b1）酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能し、疎水性の部分を含むペプチドを前記バルク材料表面に結合させ；次に
（b2）タンパク質又はタンパク質加水分解物を、同様に酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能するバルク材料表面に加え；その後
（b3）トランスグルタミナーゼで処理することにより、
バルク材料に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
工程（b2）で添加されるタンパク質又はタンパク質加水分解物が、カゼイン加水分解物又はグルテンペプチドから選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
複合材料がコンタクトレンズである、請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
式：
Ａ−Ｃ（Ｏ）−［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］−Ｘ１−Ｒ３ （３）
｛式中、Ａ−Ｃ（Ｏ）は、脂肪酸のラジカル、芳香族カルボン酸のラジカル及び芳香脂肪族カルボン酸のラジカルからなる群より選択されるラジカルであり、
［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、３つ以上のアミノ酸を含み、そのうちの少なくとも１つがリシン（Ｌｙｓ）又はグルタミン（Ｇｌｎ）であるアミノ酸配列を有するポリペプチドのラジカルであり、
Ｘ１は、Ｏ又はＮＲ４（ここでＲ４は、水素又はＣ１−Ｃ２−アルキルである）であり、Ｒ３は、水素又は親水性の基である｝の化合物。
【請求項１５】
［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］が、SEQ ID NO 1：
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ （４ｃ）
（ここでＴｙｒは、Ａに結合し、Ａｌａは、Ｒ３に結合している）のラジカルであり、
Ｘ１が、Ｏ又はＮＨであり、Ｒ３が、水素又は、スルホ又はカルボキシにより一置換されているＣ２−Ｃ３−アルキルである、請求項１４記載の式（３）の化合物。
【請求項１】
（ａ）疎水性の有機バルク材料を提供する工程と；
（ｂ）まず、疎水性の有機バルク材料の表面に、疎水性の部分を含む水溶性のペプチドを非共有的に結合させ；次に前記水溶性のペプチドを化学的又は酵素的に架橋させることにより、バルク材料上に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む、複合材料の製造方法。
【請求項２】
疎水性の有機バルク材料が、ポリシロキサン、ペルフルオロアルキルポリエーテル、フッ素化ポリ（メタ）アクリラート、ポリアルキル（メタ）アクリラート、フッ素化ポリオレフィン又はそれらの混合物である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
疎水性の有機バルク材料が、ポリシロキサンヒドロゲル、ペルフルオロアルキルポリエーテルヒドロゲル又はそれらの混合物である、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
バルク材料に非共有結合的に結合するペプチドが、式：
Ａ−Ｃ（Ｏ）−［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］−Ｘ１−Ｒ３ （３）
｛式中、Ａ−Ｃ（Ｏ）は、脂肪酸のラジカル、芳香族カルボン酸のラジカル及び芳香脂肪族カルボン酸のラジカルからなる群より選択されるラジカルであり、［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、３つ以上のアミノ酸を含み、そのうちの少なくとも１つがリシン（Ｌｙｓ）又はグルタミン（Ｇｌｎ）であるアミノ酸配列を有するポリペプチドのラジカルであり、
Ｘ１−Ｒ３は、ＯＨであり末端ペプチドカルボキシ基の一部であるか、あるいは、Ｘ１がＯ又はＮＲ４（ここでＲ４は、水素又はＣ１−Ｃ２−アルキルである）であり、Ｒ３が、親水性の基である｝のペプチドである、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
ポリペプチドラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなすポリペプチドが、カゼイン加水分解物；グルテンペプチド；ポリリシン；又はリシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択される１つ以上の他のアミノ酸とのコポリマーである、請求項４記載の方法。
【請求項６】
ポリペプチドラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなすポリペプチドが、ポリリシン又は、リシンと、アラニン、フェニルアラニン、セリン、チロシン及びトリプトファンからなる群より選択されるアミノ酸との統計的コポリマーである、請求項４又は５のいずれか１項記載の方法。
【請求項７】
ポリペプチドラジカル［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］の基礎をなすポリペプチドが、SEQ ID NO 1：
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ （４ｃ）
（ここでＴｙｒは、Ａに結合し、Ａｌａは、Ｒ３に結合している）のコポリマーである、請求項４又は５のいずれか１項記載の方法。
【請求項８】
ポリペプチドの分子量範囲Ｍｒが、４００〜１００００である、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
親水性の表面コーティング工程（ｂ）が、有機バルク材料に結合しているペプチドの架橋を、ホルムアルデヒド又はグルタルアルデヒドから選択される架橋剤を用いて、化学的に開始することにより終了される、請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
親水性の表面コーティング工程（ｂ）が、有機バルク材料に結合しているペプチドを酵素的に架橋することにより終了される、請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
（ａ）疎水性の有機バルク材料を提供する工程、及び
（ｂ）まず、
（b1）酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能し、疎水性の部分を含むペプチドを前記バルク材料表面に結合させ；次に
（b2）タンパク質又はタンパク質加水分解物を、同様に酵素トランスグルタミナーゼの基材として機能するバルク材料表面に加え；その後
（b3）トランスグルタミナーゼで処理することにより、
バルク材料に親水性の表面コーティングを適用する工程とを含む、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
工程（b2）で添加されるタンパク質又はタンパク質加水分解物が、カゼイン加水分解物又はグルテンペプチドから選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
複合材料がコンタクトレンズである、請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
式：
Ａ−Ｃ（Ｏ）−［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］−Ｘ１−Ｒ３ （３）
｛式中、Ａ−Ｃ（Ｏ）は、脂肪酸のラジカル、芳香族カルボン酸のラジカル及び芳香脂肪族カルボン酸のラジカルからなる群より選択されるラジカルであり、
［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］は、３つ以上のアミノ酸を含み、そのうちの少なくとも１つがリシン（Ｌｙｓ）又はグルタミン（Ｇｌｎ）であるアミノ酸配列を有するポリペプチドのラジカルであり、
Ｘ１は、Ｏ又はＮＲ４（ここでＲ４は、水素又はＣ１−Ｃ２−アルキルである）であり、Ｒ３は、水素又は親水性の基である｝の化合物。
【請求項１５】
［ＮＨ−（ペプチド）−Ｃ（Ｏ）］が、SEQ ID NO 1：
Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ （４ｃ）
（ここでＴｙｒは、Ａに結合し、Ａｌａは、Ｒ３に結合している）のラジカルであり、
Ｘ１が、Ｏ又はＮＨであり、Ｒ３が、水素又は、スルホ又はカルボキシにより一置換されているＣ２−Ｃ３−アルキルである、請求項１４記載の式（３）の化合物。
【公表番号】特表２０１０−５１９９１８（Ｐ２０１０−５１９９１８Ａ）
【公表日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５５２１９６（Ｐ２００９−５５２１９６）
【出願日】平成２０年３月５日（２００８．３．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５２６４５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０７４４８
【国際公開日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年６月１０日（２０１０．６．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月５日（２００８．３．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５２６４５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０７４４８
【国際公開日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（５０４３８９９９１）ノバルティス アーゲー (806)
【Ｆターム（参考）】
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