ＥＰ２受容体アゴニスト
式（ｉｖ）または式（ｉｉｉ）から選択される化合物：（ｉｖ）（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＲＳＳ］または（ｉｉｉ）（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＲＳＲ］；またはその塩、溶媒和物、化学的に保護された形態もしくはプロドラッグ、およびＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和される疾患におけるその使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＡＨ１３２０５の特定の立体異性体である（±）−トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸およびＥＰ２受容体アゴニストとしてのその使用に関する。本発明はまた、これらの立体異性体を含んでなる医薬組成物、ならびに種々の疾患を治療するためのこれらの立体異性体および組成物の使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
プロスタノイドはプロスタグランジン（ＰＧ）およびトロンボキサン（Ｔｘ）を含み、それらの受容体は、天然に存在する５つのプロスタノイドである、ＰＧＤ２、ＰＧＥ２、ＰＧＦ２α、ＰＧＩ２およびＴｘＡ２のそれぞれに対する感受性に基づき、異なる５つのクラス（ＤＰ、ＥＰ、ＦＰ、ＩＰおよびＴＰ）に分類される(Coleman, R.A., Prostanoid Receptors. IUPHAR compendium of receptor characterisation and classification, 第2版, 338-353, ISBN 0-9533510-3-3, 2000)。ＥＰ受容体（その内因性リガンドはＰＧＥ２である）は、ＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３、およびＥＰ４と呼ばれる４つのサブタイプに分類されている。これらの４つのタイプのＥＰ受容体はクローニングされ、分子・薬理レベルの両方で明らかにされている(Coleman, R.A., 2000)。
【０００３】
ＥＰ２アゴニストは、限定するものではないが、月経困難症（ＷＯ０３／０３７４３３）、早期産（ＧＢ２２９３１０１）、緑内障（ＷＯ０３／０４０１２６）、高眼圧症（ＷＯ０３／０４０１２６）、免疫疾患（ＷＯ０３／０３７４３３）、骨粗鬆症（ＷＯ９８／２７９７６，ＷＯ０１／４６１４０）、喘息（ＷＯ０３／０３７４３３）、アレルギー（ＷＯ０３／０３７４３３）、骨疾患（ＷＯ０２／２４６４７）、骨折治療（ＷＯ９８／２７９７６、ＷＯ０２／２４６４７）、受精能(Breyer, R.M., et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 905, 221-231 (2000))、男性の性機能不全（ＷＯ００／４０２４８）、女性の性機能不全（ＵＳ６，５６２，８６８）、歯周疾患（ＷＯ００／３１０８４）、胃潰瘍（ＵＳ５，５７６，３４７）および腎疾患（ＷＯ９８／３４９１６）を含む多くの疾患の治療に有用であることが示されている。
【０００４】
優れた選択性を有する公知のＥＰ２アゴニストの１つはブタプロスト：
【化１】
【０００５】
である。ＡＨ１３２０５である（±）−トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸はＥＰ２アゴニストとして知られる(例えば、 Hillock, C.J. and Crankshaw, D.J., European Journal of Pharmacology, 378, 99-108 (1999)を参照)。
【０００６】
これはまた、７−｛２−［４−（１−ヒドロキシ−ヘキシル）−フェニル］−５−オキソ−シクロペンチル｝−ヘプタン酸（帰属のためのフォントを加えてある）と呼ぶこともでき、下記の構造：
【化２】
【０００７】
を有する。この構造は３つの不斉炭素原子を有し、従って８つの可能な立体異性体を有する。シクロペンタノン上の基がトランス配置である場合、主要な立体異性体である４つの立体異性体を生じさせ、基がシス配置である場合、少ないほうの４つの立体異性体を生じさせる。
【０００８】
主要な４つの立体異性体は下記の構造：
【化３】
【０００９】
を有する。本出願人は、主要な４つの立体異性体をそれぞれ分離し、それらの活性を測定することができた。しかしながら、これらの立体異性体の分離の最初の試みは成功しなかった。
【００１０】
種々の市販の固定相を用いるキラルＨＰＬＣにより、酸形の全ての立体異性体の混合物について試みたが、成功しなかった。
【００１１】
種々の市販の固定相および移動層を用いるキラルＨＰＬＣにより、以下の実施例で製造されるエステルの２つの混合物について、多数の分離の試みを実施したが、この方法は、よくても分析レベルで成功したに過ぎず、分取スケールでの分離は成功しなかった。
【００１２】
しかしながら、最終的に、以下の実施例２に記載されているように、エステルでの立体異性体を分離する試みが成功した。
【００１３】
本発明者らはまた、関心のある立体異性体の立体選択的合成経路の発明を行った。
【発明の開示】
【００１４】
発明の概要
第１の側面において、本発明は以下の１つから選択される化合物：
【化４】
【００１５】
を提供する。
【００１６】
第２の側面において、本発明は、少なくとも９０重量％が以下の形の１つから選択される、トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸：
【化５】
【００１７】
を提供する。
【００１８】
トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸の少なくとも９５、９７、９９、９９．５または９９．９重量％が、示された４つの形の１つであることが好ましい。
【００１９】
第３の側面において、本発明は、少なくとも８０重量％が以下の形の１つ：
【化６】
【００２０】
である、２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸を提供する。
【００２１】
２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸の少なくとも９０、９５、９７、９９、９９．５または９９．９重量％が、示された４つの形の１つであることが好ましい。
【００２２】
第４の側面において、本発明は以下の形の１つから選択される化合物：
【化７】
【００２３】
を提供する。
【００２４】
第５の側面において、本発明は、少なくとも９０重量％が以下の形の１つ：
【化８】
【００２５】
から選択される、トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸を提供する。
【００２６】
第６の側面において、本発明は、少なくとも８０重量％が以下の形の１つ：
【化９】
【００２７】
である、２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸を提供する。
【００２８】
上記の６つの側面はまた、記載されている化合物の塩、溶媒和物、化学的に保護された形態およびプロドラッグにも関する。
【００２９】
本発明の第７の側面は、以下のステップ：
（ａ）１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オンを塩化（−）−ＤＩＰで不斉還元して、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｓ−ＢＰＨ）を製造すること；
（ｂ）Ｓ−ＢＰＨを変換して（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンにすること；
（ｃ）（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンをｔｅｒｔ−ブチルリチウムで処理し、ついでペンチニル銅：ヘキサメチルリン酸トリアミド（１：２）で処理し、ついで２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オンと縮合して、トランスおよびシス−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルのジアステレオマー混合物を製造すること；
（ｄ）ｔ−ブチルジメチルシリル基を脱保護して、トランスおよびシス−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルのジアステレオマー混合物を得ること；
（ｅ）移動層に１００％エタノールを用い、キラル固定相に、３−アミノプロピルトリエトキシシランのベンゼン溶液で処理した、大孔径シリカゲル担体上に吸着させたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニル−カルバメートを用いるＨＰＬＣにジアステレオマー混合物をかけること；
（ｆ）溶離液中の分画として、単一の立体異性体をほぼ単離すること；
を含んでなる、化合物の製造方法を提供する。
【００３０】
本発明の第８の側面は、以下のステップ：
（ａ）塩化（＋）−ＤＩＰで１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オンを不斉還元して、（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｒ−ＢＰＨ）を製造すること；
（ｂ）Ｒ−ＢＰＨを（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンに変換すること：
（ｃ）（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンをｔｅｒｔ−ブチルリチウムで処理し、ついでペンチニル銅：ヘキサメチルリン酸トリアミド（１：２）で処理し、ついで２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オンと縮合して、トランスおよびシス−２−｛４−［１−（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルのジアステレオマー混合物を製造すること；
（ｄ）ｔ−ブチルジメチルシリル基を脱保護して、トランスおよびシス−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルのジアステレオマー混合物を得ること；
（ｅ）移動層に１００％エタノールを用い、キラル固定相に３−アミノプロピルトリエトキシシランのベンゼン溶液で処理した、大孔径シリカゲル担体上に吸着させたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニル−カルバメートを用いるＨＰＬＣにジアステレオマー混合物をかけること
（ｆ）溶離液中の分画として、単一の立体異性体をほぼ単離すること；
を含んでなる、化合物の製造方法を提供する。
【００３１】
第７および第８の側面において、”ほぼ”という用語は、製造された化合物の少なくとも９０重量％が、化合物の単一立体異性体であることを意味する。好ましくは、製造された化合物の９５、９７、９９、９９．５または９９．９重量％が、化合物の単一立体異性体である。
【００３２】
本発明の第９の側面は、以下のステップ：
（ａ）有機銅試薬および有機リチウム試薬の存在下で１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンを５−オキソ−シクロペンテンカルボン酸｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステルに不斉付加させて１，２−トランス生成物を得ること；
（ｂ）３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）−アミノ］−２−ボルニル基をメタノールと反応させることによりメチル基に変換して、２−｛４−［１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸メチルエステルを得ること；
（ｃ）塩基の存在下、２−｛４−［１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸メチルエステルを７−ブロモヘプタン酸エチルで処理して、１−メトキシカルボニル−２−｛４−［１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸エチルエステルを得ること；
（ｄ）Ｃ１位のメチルエステル基を除去し、ＬｉＩの２，４，６−コリジン溶液でカルボエトキシ基を加水分解すること；
（ｅ）ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルヒドロキシル−保護基を除去すること；
を含んでなる化合物の製造方法を提供する。
【００３３】
本発明の第１０の側面は、以下のステップ：
（ａ）有機銅試薬および有機リチウム試薬の存在下、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンを５−オキソ−シクロペンテンカルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステルに不斉付加させて、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステルを得ること；
（ｂ）３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）−アミノ］−２−ボルニル基をメタノールと反応させてメチル基に変換させて、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸、メチルエステルを得ること；
（ｃ）塩基の存在下、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸チルエステルを７−ブロモヘプタン酸エチルで処理して、（２Ｓ）−１−メトキシカルボニル−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸エチルエステルを得ること；
（ｄ）Ｃ１位のメチルエステル基を除去し、ＬｉＩの２，４，６−コリジン溶液で（６−カルボエトキシ）ヘキシルエステル基を加水分解して（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸を得ること；
（ｅ）ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシヒドロキシル−保護基を除去すること；
を含んでなる化合物の製造方法を提供する。
【００３４】
本発明の第１１の側面は、第７から第１０までの側面のいずれか１つの方法により得られるか、または得ることが可能な化合物を提供する。本発明の第１２の側面は、以下の一般合成セクションに記載の１以上のステップを含んでなる、本発明の第１から第６までの側面のいずれか１つに記載の化合物の製造方法を提供する。
【００３５】
本発明のさらなる側面は、治療方法における使用のための、第１から第６までの側面のいずれか１つの化合物、もしくは第７から第１０までもしくは第１２の側面のいずれか１つの方法により製造される（あるいは製造可能な）化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００３６】
本発明の他の側面は、薬学的に許容される担体または希釈剤とともに、第１から第６までの側面のいずれか１つの化合物、もしくは第７から第１０までもしくは第１２の側面のいずれか１つの方法により製造される化合物、またはその薬学的に許容される塩を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００３７】
本発明のさらなる側面は、ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和される疾患の治療のための医薬の製造における、第１から第６までの側面のいずれか１つの化合物、もしくは第７から第１０までもしくは第１２の側面のいずれか１つの方法により製造される（あるいは製造可能な）化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００３８】
本発明の他の側面は、以下に述べる方法による、本発明の化合物または関連中間体の合成方法を提供する。
【００３９】
本発明の他の側面は、第１から第６までの側面のいずれか１つの化合物、もしくは第７から第１０までもしくは第１２の側面のいずれか１つの方法により製造される（あるいは製造可能な）化合物、またはその薬学的に許容される塩の有効量を治療を必要とする患者の投与することを含んでなる、ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和されることができる疾患の治療方法を提供する。
【００４０】
ＥＰ２受容体のアゴニズムにより治療されることができる疾患は上記で説明したが、とりわけ、月経困難症、早期産、緑内障、骨粗鬆症、喘息、アレルギー、骨疾患、骨折治療、不妊症、男性の性機能不全、女性の性機能不全、歯周疾患、胃潰瘍および腎疾患を含む。
【００４１】
ＥＰ受容体アゴニストは、Ｔ細胞活性化および炎症性サイトカインの放出を抑制できることが知られているが、ヒトＴ細胞におけるこれらの効果に関与するＥＰ受容体はいまだに明らかにされていない。本発明者らは、ＥＰ２アゴニストがヒトＴ細胞活性化（増殖）を抑制し、インターロイキン２（ＩＬ−２）腫瘍壊死因子（ＴＮＦα）およびインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）を含む複数の炎症性サイトカインの放出を抑制することを見いだした。この活性プロフィールにより、乾癬、乾癬性関節炎、皮膚炎、リウマチ様関節炎、移植片拒絶、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、強皮症、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、および移植片拒絶（とりわけ乾癬）を含む、免疫および炎症性疾患の治療にＥＰ２受容体アゴニストが有用であることが強く示唆される(Griffiths, C., Current Drugs Targets - Inflammation & Allergy, 3, 157-161, (2004); Lebwohl, M., Lancet, 361, 1197-1204 (2003); Salim, A. & Emerson, R., Curr. Opin. Investig. Drugs, 2(11), 1546-8 (2001))。従って、ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和されることができるさらなる疾患は乾癬である。
【００４２】
さらに、本発明者らはまた、ＥＰ２受容体アゴニストが、炎症性サイトカインであるＴＮＦαのヒト単球および肺胞マクロファージからの放出を抑制することも示した。この活性のプロフィールは、ＥＰ２受容体アゴニストが免疫および炎症性疾患、特に炎症性肺疾患（喘息、慢性閉塞性肺疾患、急性呼吸窮迫症候群、肺線維症および嚢胞性線維症を含むがこれらに限定されない）の治療に有用であるという考えにさらなる証拠を提供するものである。
【００４３】
さらに、本発明の側面は、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよび／またはＩＦＮγ産生抑制により緩和される疾患を治療するためのＥＰ２アゴニストの使用およびＩＬ−２産生抑制により緩和される疾患の治療のための医薬の製造におけるＥＰ２アゴニストの使用に関する。
【００４４】
本発明はまた、第１から第３の側面の化合物、または第４、第５、第６、第７もしくは第９の側面の方法により製造される（あるいは製造可能な）化合物の有効量を細胞に接触させることを含んでなる、in vitroまたはin vivoでのＥＰ２受容体の刺激方法および／またはＩＬ−２、ＴＮＦαおよび／またはＩＦＮγ産生抑制方法を提供する。
【００４５】
一部の実施形態において、前述の化合物は、他の３つのＥＰ受容体（すなわちＥＰ１、ＥＰ３およびＥＰ４）と比較して、ＥＰ２受容体に対して選択性を示すことができる。この選択性により、特定の疾患の治療における可能な利点を有する本発明の化合物の効果のターゲッティングが可能となる。
【００４６】
定義
他の形態を含む
特記しない限り、これらの置換基の公知のイオン、塩、溶媒和物および保護体を上記に含む。例えば、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）への言及は、そのアニオン（カルボキシレート）（−ＣＯＯ−）、塩または溶媒和物ばかりでなく、通常の保護体もまた含む。同様に、ヒドロキシル基への言及はまた、そのアニオン（−Ｏ−）、塩または溶媒和物ばかりでなく、ヒドロキシル基の通常の保護体もまた含む。
【００４７】
塩、溶媒和物および保護体
対応する活性化合物の塩（例えば、薬学的に許容される塩）を製造、精製、および／または取り扱いすることが好都合であるか、または所望される場合がある。薬学的に許容される塩の例は、Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977) に詳細に説明されている。
【００４８】
例えば、化合物が陰イオン性であるか、または陰イオンになることができる官能基（例えば−ＣＯＯＨは−ＣＯＯ−になることができる）を有している場合、適切なカチオンと塩を形成することができる。適切な無機カチオンの例は、限定するものではないが、Ｎａ＋およびＫ＋などのアルカリ金属イオン、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋などのアルカリ土塁カチオン、ならびにＡｌ３＋などの他のカチオンを含む。適切な有機カチオンの例は、限定するものではないが、アンモニウムイオン（すなわちＮＨ４＋）および置換アンモニウムイオン（例えばＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２＋、ＮＨＲ３＋、ＮＲ４＋）を含む。一部の適切な置換アンモニウムイオンの例には、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、およびトロメタミンに加えて、リジンおよびアルギニンなどのアミノ酸から誘導されるものがある。通常の四級アンモニウムイオンの例には、Ｎ（ＣＨ３）４＋がある。
【００４９】
対応する活性化合物の溶媒和物を製造、精製、および／または取り扱いすることが好都合であるか、または所望される場合がある。本明細書においては、”溶媒和物”という用語は、通常の意味において、溶質（例えば、活性化合物、活性化合物の塩）および溶媒の錯体を指すために用いられる。溶媒が水である場合、溶媒和物は、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などの水和物として好都合に呼ぶことができる。
【００５０】
活性化合物を化学的に保護された形態で製造、精製、および／または取り扱いすることが好都合であるか、または所望される場合がある。”化学的に保護された形態（chemically protected form）”という用語は、本明細書においては通常の化学的な意味で用いられ、１以上の反応性官能基が、特定の条件下（例えばｐＨ、温度、放射線、溶媒など）で望ましくない化学反応から保護されている化合物に関する。実際、保護しなければ特定の条件下で反応性である官能基を可逆的に非反応性にするために、公知の化学的方法が用いられている。化学的に保護された形態において、１以上の反応性官能基が保護基または保護化基（遮蔽基もしくはマスキング基または遮断基もしくはブロッキング基としても知られる）の形である。反応性官能基を保護することにより、保護基に影響を与えることなく、他の保護されていない反応性官能基に関する反応を行うことができる。通常は次のステップにおいて、分子の残りの部分に実質的に影響を与えることなく、保護基を除去することができる。例えば、Protective Groups in Organic Synthesis(T. Green and P. Wuts; 3rd Edition; John Wiley and Sons、1999) を参照のこと。
【００５１】
かかるさまざまな”保護化”、”ブロッキング”、または”マスキング”法は、有機合成において公知であり、広く使用されている。例えば、特定の条件下で共に反応性であると思われる２つの非等価な反応性官能基を有する化合物を誘導体化して官能基の１つを”保護化”し、それにより非反応性にすることができ、このように保護化された場合、該化合物は実質的に１つの反応性官能基のみを有する反応剤として使用できる。所望される反応（他の官能基が関わる）が完了した後、保護基を”脱保護”して元の官能基に戻すことができる。
【００５２】
例えば、ヒドロキシ基はエーテル（−ＯＲ）またはエステル（−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ）（例えば：ｔ−ブチルエーテル；ベンジル、ベンズヒドリル（ジフェニルメチル）、またはトリチル（トリフェニルメチル）エーテル；トリメチルシリルまたはｔ−ブチルジメチルシリルエーテル；またはアセチルエステル（−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ３，−ＯＡｃ））として保護できる。
【００５３】
例えば、カルボン酸基はエステル（例えば：Ｃ１−７アルキルエステル（例えば、メチルエステル；ｔ−ブチルエステル）；Ｃ１−７ハロアルキルエステル（例えば、Ｃ１−７トリハロアルキルエステル）；トリＣ１−７アルキルシリル−Ｃ１−７アルキルエステル；もしくはＣ５−２０アリール−Ｃ１−７アルキルエステル（例えばベンジルエステル；ニトロベンジルエステル）；またはアミド（例えばメチルアミド）として保護できる。
【００５４】
プロドラッグ
活性化合物をプロドラッグの形で製造、精製、および／または取り扱いすることが好都合であるか、または所望される場合がある。本明細書においては、”プロドラッグ”という用語は、代謝（例えば、in vivoで)された場合、所望の活性化合物を生成する化合物に関する。一般的に、プロドラッグは不活性であるか、または該活性化合物より活性が低いが、好都合な取り扱い、投与または代謝特性を提供できる。
【００５５】
特記しない限り、特定の化合物に言及する場合、そのプロドラッグもまた含む。
【００５６】
例えば、プロドラッグの一部は活性化合物のエステル（例えば、生理学的に許容される代謝的に不安定なエステル）である。代謝中に、エステル基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ）は切断されて活性薬物を生成する。かかるエステルは、適切な場合には、親化合物中に存在する他のいずれかの反応性基を前もって保護し、親化合物中のいずれかのカルボン酸基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）などをエステル化し、ついで必要に応じて脱保護して合成することができる。
【００５７】
かかる代謝的に不安定なエステルの例は、Ｒが：Ｃ１−７アルキル（例えば、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｉＰｒ、−ｎＢｕ、−ｓＢｕ、−ｉＢｕ、−ｔＢｕ）；Ｃ１−７アミノアルキル（例えば、アミノエチル；２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル；２−（４−モルホリノ）エチル）；Ｃ１−７ヒドロキシもしくはポリヒドロキシアルキル（例えば２−ヒドロキシエチル、２．３−ジヒドロキシプロピル（グリセリル））およびアシルオキシ−Ｃ１−７アルキル（例えば、アシルオキシメチル；アシルオキシエチル；ピバロイルオキシメチル；アセトキシメチル；１−アセトキシエチル；１−（１−メトキシ−１−メチル）エチル−カルボニルオキシエチル；１−（ベンゾイルオキシ）エチル；イソプロポキシ−カルボニルオキシメチル；１−イソプロポキシ−カルボニルオキシエチル；シクロヘキシル−カルボニルオキシメチル；１−シクロヘキシル−カルボニルオキシエチル；シクロヘキシルオキシ−カルボニルオキシメチル；１−シクロヘキシルオキシ−カルボニルオキシエチル；（４−テトラヒドロピラニルオキシ）カルボニルオキシメチル；１−（４−テトラヒドロピラニルオキシ）カルボニルオキシエチル；（４−テトラヒドロピラニル）カルボニルオキシメチル；ならびに１−（４−テトラヒドロピラニル）カルボニルオキシエチル）；である式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲのものを含む。
【００５８】
あるいはまた、プロドラッグの一部は酵素的に活性化されて活性化合物を生成するか、またはさらなる化学反応により活性化合物を生成する化合物を生成する（例えば、ＡＤＥＰＴ、ＧＤＥＰＴ、ＬＩＤＥＰＴなど）。例えば、プロドラッグは糖誘導体もしくは他のグリコシド抱合体であることができ、あるいはまたアミノ酸エステル誘導体であることができる。
【００５９】
治療
本明細書においては、疾患の治療という文脈における”治療”という用語は、一般に、所望される治療効果が達成される、例えば疾患の抑制などの、ヒトまたは動物（例えば獣医治療）のいずれかの治療に関し、進行の抑制、進行の停止、疾患の改善、および疾患の治癒を含む。予防的処置（すなわち予防）としての治療もまた含む。
【００６０】
本明細書においては、”治療的に有効な量”という用語は、所望される治療処方計画に基づき投与された場合、妥当な便益／リスク比につりあった所望される治療効果を発揮するのに有効な、活性化合物、または活性化合物を含んでなる物質、組成物もしくは製剤の量に関する。適切な投与量範囲は、一般的に０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ／日であり、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日であるが、眼局所投与の場合、約０．００００１〜１ｍｇ／日まで投与量を下げることもできる。
【００６１】
組成物およびその投与
いずれの適切な投与経路および投与手段のためにも組成物を製剤化することができる。薬学的に許容される担体または希釈剤は、経口、経直腸、経鼻、局所（頬、眼内および舌下を含む）、経膣または非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、鞘内および硬膜外を含む）投与に適した製剤中に使用されるものを含む。製剤は単位製剤で好都合に提供することができ、製薬学業界に公知のいずれの方法によっても製造できる。かかる方法は、活性成分と１以上の補助成分を構成する担体とを混合するステップを含む。一般に、活性成分と液体担体もしくは微細固体担体または両方とを均一かつ緊密に混合し、ついで必要に応じて製品を成形することにより製剤を製造する。
【００６２】
固体組成物に関しては、通常の無毒の固体担体は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、セルロース、セルロース誘導体、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石粉、グルコース、ショ糖、炭酸マグネシウムなどを含むことができる。上記で定義した活性化合物は、担体として例えばポリアルキレングリコール、アセチル化トリグリセリドなどを用いて、座剤として製剤化できる。投与用液体医薬組成物は、例えば、上記で定義した活性化合物と所望による医薬アジュバントとを例えば、水、生理食塩水、デキストロース水溶液、グリセロール、エタノール、ポリオキソールエステルなどの担体中に溶解、分散などし、それによって溶液または懸濁液を調製することにより製造できる。必要に応じて、投与用医薬組成物はまた、湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝化剤など（例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、トリエタノールアミン酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなど）の、少量の無毒の補助物質を含むこともできる。かかる製剤の実際の製造方法は公知であり、当業者には明白であろう。例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th edition, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000 を参照のこと。投与される組成物または製剤は、いずれにしても、治療対象者の症状を緩和するのに有効な量で活性化合物（単数または複数）を含有する。
【００６３】
０．２５〜９５％の活性成分と無毒の担体からなる残りの部分とを合わせて含有する製剤または組成物を製造できる。
【００６４】
経口投与に関しては、薬学的に許容される無毒の組成物は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、セルロース、セルロース誘導体、クロスカルメロースナトリウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石粉、グルコース、ショ糖、炭酸マグネシウムなどの、通常使用される賦形剤のいずれかを混合して製造される。かかる組成物は、溶液、サスペンジョン、錠剤、ピル、カプセル、粉末剤、持続放出製剤などの形をとる。かかる組成物は、１％〜９５％、さらに好ましくは２〜５０％、最も好ましくは５〜８％の活性成分を含有できる。
【００６５】
非経口投与は、一般に、皮下、筋肉内または静脈内のいずれかの注射により特徴付けられる。注射剤は、溶液もしくはサスペンジョンのいずれかの通常の製剤、注射の前に溶液もしくはサスペンジョンにするのに適した固体製剤、またはエマルジョン製剤で製造できる。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどである。加えて、必要に応じて、投与用医薬組成物はまた、例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、トリエタノールアミン酢酸ナトリウムなどの、湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝化剤などの少量の無毒の補助物質を含有することができる。
【００６６】
かかる非経口組成物に含有される活性化合物のパーセンテージは、化合物の活性および対象における必要性ばかりでなく、その特定の性質によって主に決まる。しかしながら、溶液中に０．１％〜１０％のパーセンテージの活性成分が使用可能であり、組成物が固体で、前記パーセンテージに後で希釈される場合は、さらに高濃度が可能である。好ましくは、組成物は、溶液中に０．２〜２％の活性成分を含有する。
【００６７】
経皮投与に適した製剤は、ゲル、ペースト、軟膏、クリーム剤、ローション、およびオイルばかりでなく、パッチ、ばんそうこう、包帯、ドレッシング、デポー剤、およびリザーバーを含む。
【００６８】
軟膏は、一般的に、活性化合物およびパラフィン系または水混和性軟膏基剤から製造される。
【００６９】
クリーム剤は、一般的に、活性化合物および水中油型クリーム基剤から製造される。必要に応じて、クリーム基剤の水層は、例えば、プロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールならびにそれらの混合物などの、少なくとも約３０重量％の多価アルコール（すなわち、２以上のヒドロキシル基を有するアルコール）を含むことができる。局所製剤は、望ましくは、皮膚または他の患部を介する活性化合物の吸収または透過を促進する化合物を含むことができる。かかる皮膚透過促進剤の例は、ジメチルスルホキシドおよび関連類似体を含む。経膣投与に適した製剤は、活性化合物に加えて当該技術分野で適切として知られる担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー製剤として提供されることができる。
【００７０】
眼局所投与用点眼剤は、好ましくは、０．００１〜２０％の活性成分と、水もしくは生理食塩水などの公知の担体および下記のような他の添加剤とからなる残りの部分を含有する。
【００７１】
典型的な眼用組成物は：
（ａ）抗菌性保存剤（適切な防腐剤は塩化ベンザルコニウム、チメロサール、クロロブタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェニルエチルアルコール、エデト酸二ナトリウム、ソルビン酸、オナマー（onamer）、もしくは当業者に公知の他の薬剤を含む。かかる防腐剤は一般的に約０．００１％〜約１．０重量％の濃度で用いられる）；
（ｂ）可溶化剤（ポリソルベート２０、６０および８０；プルロニックＦ−６８、Ｆ−８４およびＰ−１０３；チロキサポール；クレモフォア；ドデシル硫酸ナトリウム；グリセロール；ＰＥＧ４００；プロピレングリコール；シクロデキストリン；または当業者に公知の他の薬剤など。かかる補助溶剤は一般的に約０．０１％〜約２重量％の濃度で用いられる）；ならびに
（ｃ）増粘剤（ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースまたは他の当業者に公知の薬剤など。かかる薬剤は、一般的に、約０．０１％〜約２重量％の濃度で用いられる）；
を含むことができる。
【００７２】
’不活性成分’と呼ばれることもある他の随意の成分は、塩化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム（一水和物および／または無水）、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、トロメタミン、ホウ酸、マンニトール、エデト酸二ナトリウム、ｐＨ調節用水酸化ナトリウムおよび／または塩酸ならびに精製水を含む。
【００７３】
プロスタグランジンを含有する眼用製剤は、特に、米国特許第５，８８９，０５２号；米国特許第４，５９９，３５３号；米国特許第６，０１１，０６２号；米国特許第６，２３５，７８１号；米国特許第５，８４９，７９２号；米国特許第５，６３１，２８７号に記載されている（本願に参照として取り入れる）。
【００７４】
一般的合成方法
式１の化合物：
【化１０】
【００７５】
（式中、
【化１１】
【００７６】
は、各キラル中心で確定した立体化学構造を示し、ペンタノン上の基は互いにトランス位にある）は、各キラル中心で同じ立体化学構造を有する式２の化合物：
【化１２】
【００７７】
（式中、Ｒ’はＣ１−７アルキル基（例えばメチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、プロピル（Ｃ３）、ブチル（Ｃ４）、ペンチル（Ｃ５）、ヘキシル（Ｃ６）、ヘプチル（Ｃ７）などの１〜７炭素原子を有する炭化水素化合物の炭素原子の１つから水素原子１つを除去して得られる一価の部分を表す）から、標準法を用いて二重結合を還元し、酸およびアルコールを脱保護する（例えば、還元は、常温・常圧で酢酸エチルなどの溶媒中、水素、パラジウム／カーボンで実施できる）ことにより合成できる。特に好ましいアルコール保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）などのシリル基であり、これは例えば酸水溶液および補助溶剤で除去でき、またこの条件により、酸基も脱保護できる。これらの反応はいずれの順序によっても実施できる。二重結合は、シスもしくはトランス配置、またはこれらの混合物のいずれであることもできる。
【００７８】
式２の化合物は、２つの不斉中心のいずれにおいても同一の立体化学構造を有する式３のエノラート：
【化１３】
【００７９】
を、式４の化合物：
【化１４】
【００８０】
（式中、Ｘはハロゲン化物またはメシレートなどの脱離基であり、Ｒ’は式２に記載のものである）により、ＬｉＯｉ−Ｐｒなどの強塩基の存在下、室温でトラップすることにより合成できる。
【００８１】
式３の４つのエノラートは、シクロペント−２−エノン（式５）：
【化１５】
【００８２】
と、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式６の化合物：
【化１６】
【００８３】
とを、遷移金属触媒（好ましくはＲｈ（Ｉ））の存在下、ＢＩＮＡＰ（２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル）などのキラルリガンドの存在下で反応させることにより製造できる。Ｓ−ＢＩＮＡＰを用いれば、式３ａのエノラート：
【化１７】
【００８４】
が得られ、Ｒ−ＢＩＮＡＰを用いれば、式３ｂのエノラート：
【化１８】
【００８５】
が得られる。
【００８６】
式５および式６の化合物の反応の前に、式６の化合物は、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式７の化合物：
【化１９】
【００８７】
とＣｌＴｉ（Ｏｉ−Ｐｒ）３とを反応させることによりその場で製造できる。この反応は、一般に、Hayashi, T., et al., JACS, 124, 12102-12103 (2002) に記載の方法に従って実施できる（例えば、テトラヒドロフラン中、３％の触媒の存在下、不活性雰囲気下で、２０℃、１時間、１．６当量の式６の化合物を式５の化合物と反応させる）。
【００８８】
式７の化合物は、キラル中心で同じ立体化学構造を有する、対応する式８のブロモ化合物：
【化２０】
【００８９】
を、溶媒（例えばＴＨＦ）中、アルキルリチウムで処理することにより製造できる。
【００９０】
式８の化合物は、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式９の化合物：
【化２１】
【００９１】
を、例えばＴＢＤＭＳＣｌと反応させるなど、キラル中心の立体化学構造を保持する標準的な条件を用いて保護することにより製造される。
【００９２】
化合物９の単一の立体異性体は、式１０の化合物：
【化２２】
【００９３】
から、エナンチオ選択的還元(例えば Brown, H.C., et al. J. Am. Chem. Soc., 110, 1539-1546 (1988)を参照のこと)か、または化合物９のラセミ体に還元し、ついで光学分割することのいずれかにより製造できる。
【００９４】
式４の化合物は、例えばSuzuki, M., et al., J.Am.Chem.Soc., 107, 3348-3349 (1985) などの、天然プロスタグランジンの合成中に見られ、種々の経路により合成できる。
【００９５】
Taber, D.F., et al., J. Org. Chem., 62, 194-198 (1997) により開示された経路に基づく１つの経路を以下に示す。
【化２３】
【００９６】
他の可能な方法は、プロパルギルアルコールに対して異なるアルキル化剤を用いる（下記に示す）が、アルキル化剤の製造にはさらなるステップを必要とする。この例には、ブロモ酪酸のオルトエステルのアルキル化がある(Patterson, J.W., et al., Synthesis, 1985, 337-338)。５−ヘキシン酸のオルトエステルをＢｕＬｉ／ホルムアルデヒドと反応させて同じ中間体を得ている(Syn. Comms. 1989, p.1509)。さらなる可能な経路には、５−ヘキシン酸（Aldrichより市販）と塩基およびホルムアルデヒドとを直接反応させることを含む。
【化２４】
【００９７】
式１の４つの化合物への代替経路の１つは、不斉中心が同じ立体化学構造を有する式１１の化合物：
【化２５】
【００９８】
から、最初に水素化ナトリウムと反応させ、ついでカリウムアミドまたはブチルリチウムなどの強塩基と反応させてジアニオン(Weiler, L., J.Am.Chem.Soc., 92, 6702-6704 (1970) および Modern Synthetic Reactions, 第2版 1972, H.O. House, p. 553などを参照のこと）を合成し、ついでこれをハロペンタン酸エステルと反応させて置換エステルを得ることができ(Huckin, S.N. and Weiler, L., Can.J.Chem., 52, 2157 (1974))、ついでこれを加水分解し、例えばコリジン中、ヨウ化リチウムで処理するか、またはＤＭＳＯ中シアン化ナトリウムで処理するなどの標準的な条件で脱炭酸(Modern Synthetic Reactions, 第2版 1972, H.O. House, p. 511-517 を参照のこと)して得ることができる経路である。ハロペンタン酸エステルをさらに反応性の高い式４のハロゲン化アリルなどのアルキル化剤と置き換え、ついで二重結合を還元することが必要な場合もある。
【００９９】
式１１の化合物は、２つの不斉中心のそれぞれで同じ立体化学構造を有する式１２の化合物：
【化２６】
【０１００】
と、トルエンまたはＴＨＦなどの溶媒中、穏やかに加熱しながら、炭酸ジメチルおよび、水素化ナトリウムなどの塩基とを反応させることにより合成できる。
【０１０１】
式１２の化合物は、シクロペント−２−エノン（式５）：
【化２７】
【０１０２】
と、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式１３の化合物：
【化２８】
【０１０３】
とを、遷移金属触媒（好ましくはＲｈ（Ｉ））の存在下、キラルリガンド（好ましくはＢＩＮＡＰ）の存在下で、ボロン酸付加(Takaya, Y., et al., J.Am.Chem.Soc., 120, 5579-5580 (1998) and Hayashi, T., Synlett, SI, 879-887 (2001)を参照のこと)させることにより合成できる。適切な条件は、ジオキサン水溶液中、６０℃、２０時間での、触媒（３％）およびキラルリガンドの使用を含む。
【０１０４】
既知の化学反応例と同様に、Ｓ−ＢＩＮＡＰの使用により式１２ａの化合物：
【化２９】
【０１０５】
が得られる一方、Ｒ−ＢＩＮＡＰの使用により、式１２ｂの化合物：
【化３０】
【０１０６】
が得られる。
【０１０７】
式１３の化合物は、標準法により、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式８の化合物から製造できる。この方法は、最初、溶媒（例えばＴＨＦ）中、リチウム交換反応試薬（例えばｔ−ブチルリチウム）により、適切な温度（ブチルリチウム／ＴＨＦの場合は−７８℃）で処理し、ついで適切なホウ素試薬（例えばＢ（Ｏｉ−Ｐｒ）３）で処理し、ついで加水分解（例えば水酸化カリウムによる）することを含む(Thompson, W.J. and Gaudino, J., J. Org. Chem., 49, 5237-5243 (1984))。
【０１０８】
式１３の化合物から、不斉中心が同じ立体化学構造を有する式１１の化合物への代替経路の１つは、式１３の化合物と、式１４のメチルカルボキシ置換シクロペント−２−エノン：
【化３１】
【０１０９】
との、遷移金属触媒（好ましくはＲｈ（Ｉ））の存在下、キラルリガンド（好ましくはＢＩＮＡＰ）の存在下でのボロン酸付加による反応である。適切な条件は、ジオキサン水溶液中、６０℃、２０時間での、触媒（３％）およびキラルリガンドの使用（すなわち、化合物５と式１３の化合物とのカップリングに用いる反応条件と同様）を含む。
【０１１０】
式１の４つの化合物へのさらなる１つの代替経路は、不斉中心が同じ立体化学構造を有する式１５の化合物：
【化３２】
【０１１１】
から、例えばＤＭＦ中、水素化ナトリウムなどの強塩基を反応させてモノアニオンを得、ついでこれをハロヘプタン酸エステルと反応させて置換ケトエステルを得ることができ、ついでこれを加水分解し、例えばコリジン中、ヨウ化リチウムで処理するか、またはＤＭＳＯ中、シアン化ナトリウムで処理するなどの標準的な条件を使用して脱炭酸することができる経路である(Modern Synthetic Reactions, 第2版 1972, H.O. House, p. 511-517 を参照のこと)。シクロペンタノン上のトランス配置は、立体障害によって起こる。
【０１１２】
式１５の化合物は、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式１３の化合物と、式１６のメチルカルボキシ置換シクロペント−２−エノン：
【化３３】
【０１１３】
(Funk, R.L., et al., J.Am.Chem.Soc, 115, 8849-8850 (1993)) とを、遷移金属触媒（好ましくはＲｈ（Ｉ））の存在下、キラルリガンド（好ましくはＢＩＮＡＰ）の存在下でカップリングさせることにより合成できる。適切な条件は、ジオキサン水溶液中、６０℃、２０時間での、触媒（３％）およびキラルリガンドの使用（すなわち、化合物５と式１３の化合物とのカップリングに使用する反応条件と同様）を含む。
【０１１４】
あるいはまた、（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（式１７）の立体選択的合成は、以下の一般合成経路により達成されることができる。
【化３４】
【０１１５】
式１７の化合物は、４−ヘキシル−フェニル側鎖上の−ＯＨ基がアルコール保護基で保護されている化合物１８から製造できる。
【化３５】
【０１１６】
前述のように、特に好ましいアルコール保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）などのシリル基であり、これは、例えば酸水溶液および補助溶剤（例えばＴＨＦ）により除去できる。
【０１１７】
式１８の化合物は、カルボキシメチル基を除去し、ヘプタン酸エステルを加水分解することにより、式１９の化合物から製造できる。これは、例えば、ヨウ化リチウムおよび２，４，６−トリメチルピリジン（コリジン）を用いて反応させることにより達成できる。
【化３６】
【０１１８】
化合物１９は、式２０の化合物にヘプチル−エチルエステル側鎖を付加させることにより合成できる。
【化３７】
【０１１９】
これは、−ＣＯ２Ｍｅ基に隣接した水素原子を除去するために適切な塩基を用いて式２０の化合物を処理することにより達成できる。この反応のための好ましい塩基は、ＮａＨの無水溶媒（ＤＭＥなど）溶液である。
【０１２０】
続いて、得られた化合物に７位が活性化されたヘプタン酸エチルを付加させることにより式１９の化合物を得る。ヘプタン酸エチルは、７位でハロゲン原子により活性化されていることが好ましい。このハロゲン原子は、臭素原子であることがさらに好ましい。活性化ヘプタン酸エチルの付加中に触媒を含有することが必要とされる場合もある。かかる触媒は、好ましくはヨウ化ナトリウムである。
【０１２１】
式２０の化合物は、エステル交換反応により式２１の化合物から製造できる。
【化３８】
【０１２２】
化合物２０のメチルエステルの合成は、密閉容器中で、化合物２１をメタノールと共に加熱することにより達成できる。
【０１２３】
式２１の化合物は、式２２の不飽和カルボニル化合物への１，４−付加により製造できる。
【化３９】
【０１２４】
これは、式２３の有機金属試薬を銅（Ｉ）化合物と反応させ、ついで式２２の化合物を付加させることにより達成できる。
【化４０】
【０１２５】
ここで式２３中のＭは、銅よりも電気陰性度が低い元素を表す。好ましくはＭはＬｉ、ＭｇＸ、ＢＲ２およびＺｎＸであり、ここでＸはハロゲン原子を表す。
【０１２６】
式２２と式２３の化合物のカップリング反応に用いる銅（Ｉ）試薬は、好ましくは陰イオン性クプラートであり、さらに好ましくはＬｉＣｕ−（２−Ｔｈ）ＣＮ（リチウム２−チエニルシアノクプラートとして知られる）である。
【０１２７】
式２３の化合物は、式２４のハロゲン化物の標準的な有機金属生成反応により製造できる。
【化４１】
【０１２８】
式２４において、Ｘはハロゲン原子であり、好ましくはＩまたはＢｒである。
【０１２９】
式２２の化合物は、Tetrahedron 1996, 52, 971-986 に記載の方法により、容易に入手できる出発物質から製造できる。
【０１３０】
頭字語
便宜上、多くの化学基は、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル（ｎＰｒ）、ｉｓｏ−プロピル（ｉＰｒ）、ｎ−ブチル（ｎＢｕ）、ｓｅｃ−ブチル（ｓＢｕ）、ｉｓｏ−ブチル（ｉＢｕ）、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）、ｎ−ヘキシル（ｎＨｅｘ）、シクロヘキシル（ｃＨｅｘ）、フェニル（Ｐｈ）、ビフェニル（ｂｉＰｈ）、ベンジル（Ｂｎ）、ナフチル（ｎａｐｈ）、メトキシ（ＭｅＯ）、エトキシ（ＥｔＯ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）およびアセチル（Ａｃ）を含む（これに限定するものではない）公知の略語を用いて表される。
【０１３１】
便宜上、多くの化学化合物は、メタノール（ＭｅＯＨ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、イソプロパノール（ｉ−ＰｒＯＨ）、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、エーテルもしくはジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、酢酸（酢酸）、ジクロロメタン（塩化メチレン、ＤＣＭ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、酢酸エチル（ＥＡ）、１．２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ）およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む（これに限定するものではない）公知の略語を用いて表される。
【０１３２】
選択性
他のＥＰ受容体（すなわちＥＰ１、ＥＰ３、ＥＰ４）に対する、ＥＰ２受容体アゴニストの選択性は、ＥＰ２のＫｉ（以下を参照）を他のＥＰ受容体のＫｉ（以下を参照）により割ることにより数量化できる。得られる逆比は、好ましくは１０以上であり、さらに好ましくは１００以上である。
【実施例】
【０１３３】
（実施例）
ＮＭＲスペクトルは、Bruker AV300またはBruker DPX400のいずれかで測定した。マススペクトルはWaters ZMDシングル四重極質量分析計で測定した。旋光度はPerkin Elmer旋光計341で測定した。
【０１３４】
実施例１：ＡＨ１３２０５のメチルエステルの４立体異性体をそれぞれが含む２つの混合物の合成
（ａ）（ｉ）１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オン（１）の合成
【化４２】
【０１３５】
ＡｌＣｌ３（８３ｇ）およびブロモベンゼン（２００ｍＬ）の混合物に、氷冷下、撹拌しながら、窒素雰囲気下で、３０分にわたって塩化ヘキサノイル（７５ｍＬ）を滴下した。ついで混合物を８０℃（外部）で１．５時間加熱したところ、溶液は深紅色に変化していた。ついで混合物を冷却し、６００ｍＬの氷水中に注ぎ、次にＤＣＭ（８００ｍＬ）で抽出した。ついで有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下で濃縮した。ついで濃縮物をイソヘキサン（１Ｌ）で処理し、終夜フリーザー中に放置したところ、結晶化が起こった。わずかにオフホワイトの固体を濾過し、さらに冷ヘキサンで洗浄して表題化合物（８４ｇ）を得た。ｎｍｒおよびｔｌｃにより、十分に純粋であることが確認された。1H NMR (CDCl3, δ): 0.95 (3H, t); 1.4 (4H, m); 1.75 (2H, m); 2.95 (2H, t); 7.6 (2h, d); 7.85 (2H, d)
（ａ）（ｉｉ）（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｓ−ＢＰＨ）（２ａ）の合成
【化４３】
【０１３６】
−２５℃に冷却した塩化（−）−ＤＩＰ［Ｂ−クロロジイソピノカンフェニルボラン］（１３．５ｇ）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に、温度を−２０℃以下に保ちながら５〜１０分かけて１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オン（１０ｇ）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液を加えた。混合物をさらに６時間、−２５℃に維持し、ついで激しく撹拌しているジエタノールアミン（１２ｍｌ）およびトリエチルアミン（１０ｍｌ）の混合物のエーテル（２５０ｍｌ）溶液中に加えた。混合物を終夜撹拌し、希塩酸、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣をジクロロメタンを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、ついでヘプタンから再結晶して化合物２ａ（４．５ｇ；ｍ．ｐ．７０〜７１℃）を得た。
【０１３７】
［α］Ｄ２４＝−２６．５（ｃ＝４．００；ＣＨＣｌ３）
1H NMR (CDCl3, δ): 0.85 (3H, t); 1.2-1.9 (9H, m); 4.6 (1H, t); 7.15 (2H, d); 7.45 (2H, d).
HPLC(Chiracel OD 250 x 4.6mm，溶離液ヘキサン:IPA(99:1)，流速0.5ml/min，λ=254nm): ４４分（１００％ｅ．ｅ．）．
（ａ）（ｉｉｉ）（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｒ−ＢＰＨ）（２ｂ）の合成
【化４４】
【０１３８】
実施例１（ａ）（ｉｉ）に記載の方法と同様な方法により、塩化（＋）−ＤＩＰ［Ｂ−クロロジイソピノカンフェニルボラン］（１３．５ｇ）および１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オン（１０ｇ）から化合物２ｂ（４ｇ；ｍ．ｐ．７０〜７１℃）を製造した。
【０１３９】
［α］Ｄ２４＝＋２７．３（ｃ＝４．０６；ＣＨＣｌ３）
m/z(EIMS):256,258
1H NMR (CDCl3, δ): 0.85 (3H, t); 1.2-1.9 (9H, m); 4.6 (1H, t); 7.15 (2H, d); 7.45 (2H, d).
HPLC(Chiracel OD 250 x 4.6mm，溶離液 ヘキサン: IPA（99:1），流速0.5ml/min，λ=254nm): ４７分（１００％ｅ．ｅ．）.
化合物２ａおよび２ｂの絶対立体化学構造を、Brown, H.C., et al. J. Am. Chem. Soc., 110, 1539-1546 (1998) に記載されている、長鎖芳香族ケトンを還元する文献方法から類推して帰属した。これらのアルコールは、キラルＨＰＬＣにより本質的にホモキラルであることが示された。
【０１４０】
（ａ）（ｉｖ）（Ｓ）−（−）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｓ−ＢＰＨ）（２ａ）の代替合成
【化４５】
【０１４１】
ＢＨ３・ＴＨＦ（１Ｍ ＴＨＦ溶液，２３４ｍＬ，２３４ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で撹拌し、−１０℃に冷却し、ついで（Ｒ）−２−メチル−ＣＢＳ−オキサザボロリジン（２４ｍＬ，２４ｍｍｏｌ）で処理した。２０分撹拌後、１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オン（１）（４８．３ｇ）のＴＨＦ（３７９ｍＬ）溶液を１時間にわたって加え、ついでさらに２０分間撹拌した後、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で注意深くクエンチした（Ｈ２が発生する）。ＭｅＯＨは、−１０℃ではゆっくり反応するので、ＲＴでクエンチすることが望ましい。ついで混合物を減圧下で濃縮し、次にＭｅＯＨ（３００ｍＬ）に再度溶解してＨＣｌ（２Ｍ Ｅｔ２Ｏ溶液，４０ｍＬ）で処理した。溶液を５分間撹拌し、ついで減圧下で濃縮し、Ｅｔ２Ｏで粉末化して、濾過により固体を除いた。母液を再度減圧下で濃縮し、ついで−１０℃でヘキサン（４８０ｍＬ，１０倍量）で再結晶して、表題化合物をふわふわした白色固体（２０．７ｇ）で得た。
【０１４２】
（ｂ）（ｉ）（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（３ａ）の合成
【化４６】
【０１４３】
Ｓ−ＢＰＨ（２ａ）（１０ｇ）、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（７ｇ）およびイミダゾール（３．７ｇ）の混合物を無水ジメチルホルムアミド（１００ｍｌ）中で、１６時間撹拌した。混合物を石油エーテルと水の間で分配し、２層を分離した。有機層を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテルによりカラムクロマトグラフィーにかけ、化合物３ａ（１４．５ｇ）をオイルで得た。
【０１４４】
m/z (EIMS): 370, 372
1H NMR (CDCl3, δ): -0.2 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.85 (3H, t); 1.25 (6H, m) 1.55 (2H, m); 4.6 (1H, m); 7.1 (2H, d); 7.4 (2H, d).
（ｂ）（ｉｉ）（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（３ｂ）の合成
【化４７】
【０１４５】
実施例１（ｂ）（ｉ）に記載の方法と同様な方法で、Ｒ−ＢＰＨ（２ｂ）（１２．５ｇ）から化合物３ｂ（１８．５ｇ）を製造した。
【０１４６】
m/z (EIMS): 370, 372
1H NMR (CDCl3, δ): -0.2 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.85 (3H, t); 1.25 (6H, m) 1.55 (2H, m); 4.6 (1H, m); 7.1 (2H, d); 7.4 (2H, d).
（ｃ）２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オン（５）の合成
【化４８】
【０１４７】
市販されているこの既知化合物は、Bagli, J. et al., J. Org. Chem., 1972, 37, 2132-2138 および Bernady, K.F., J.Org. Chem., 1980 45, 4702-4715 の方法により、エチル２−オキソシクロペンタンカルボン酸エチルから３ステップで製造した。
【０１４８】
（ｄ）（ｉ）２−｛４−［１−（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（約３：１のトランス：シス混合物））（６ｂ）の合成
【化４９】
【０１４９】
（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（３ｂ）（７．２ｇ）の無水ジエチルエーテル（１００ｍｌ）溶液に、温度を−６０℃以上にならないようにして、−７８℃でｔｅｒｔ−ブチルリチウム（１．５Ｍヘキサン溶液；２８ｍｌ）を滴下した。混合物を−７８℃でさらに３時間放置した。銅（１）ペンチン（２．５ｇ）の無水ジエチルエーテル（５６ｍｌ）スラリーをヘキサメチルリン酸トリアミド（８ｍｌ）で処理し、混合物を室温で数分間撹拌し、溶液を生成させた。ついでこの用事調製した溶液を−７８℃でアリールリチウム溶液に滴下し、さらに１時間放置し、これに２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オン（５）（４ｇ）の無水ジエチルエーテル（４０ｍｌ）溶液を加えた。反応混合物を−７８℃に１５分間維持し、ついで−２５℃〜−１０℃にさらに１時間維持した。冷混合物を希塩酸とエーテル間ですばやく分配し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣をジクロロメタン：石油エーテル（２：１）、ついで酢酸エチル：石油エーテル（３：１７）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、トランス：シス異性体混合物（約３：１）で化合物６ｂ（７．２ｇ）を得た。
【０１５０】
1H NMR (CDCl3, δ) トランス-ジアステレオマー: -0.25 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 2.95 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.15 (2H, d); 7.25 (2H, d).
1H NMR (CDCl3, δ) シス-ジアステレオマー: -0.27 (3H, s); -0.02 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 3.55 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.0 (2H, d); 7.15 (2H, d).
（ｄ）（ｉｉ）２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（トランス：シス混合物（約３：１））（６ａ）
【化５０】
【０１５１】
表題化合物およびそのジアステレオ異性体ならびに約３０％のそれらのシス−異性体（６ａ）（７．３ｇ）を、実施例１（ｄ）（ｉ）に記載の方法と同様な方法で、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（３ａ）（７．２ｇ）および２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オン（５）（４ｇ）から製造した。
【０１５２】
1H NMR (CDCl3, δ) トランスジアステレオマー: -0.25 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 2.95 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.15 (2H, d); 7.25 (2H, d).
1H NMR (CDCl3, δ) シスジアステレオマー: -0.27 (3H, s); -0.02 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 3.55 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.0 (2H, d); 7.15 (2H, d).
（ｄ）（ｉｉｉ）２−｛４−［１−（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（トランス：シス混合物（約３：１））（６ｂ）の代替合成
【化５１】
【０１５３】
（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（３ｂ）（０．８ｇ）、マグネシウム屑（０．１１ｇ）、ヨウ素の結晶１つおよび１，２−ジブロモエタン（５μｌ）と無水ＴＨＦ（４ｍｌ）の混合物を加熱還流して反応を開始し、ついで２時間３５℃に維持してグリニャール溶液を調整した。塩化リチウム（０．１２５ｇ）および臭化銅（１）・ジメチルスルフィド錯体（０．６１ｇ）を無水ＴＨＦ（４．５ｍｌ）中、数分間撹拌し、ついで−７８℃に冷却し、その後グリニャール溶液を滴下した。得られた混合物を−７８℃で５分間維持し、ついで塩化トリメチルシリル（０．３８ｍｌ）を加え、さらに２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オン（０．１８ｇ）の無水ＴＨＦ（１．５ｍｌ）溶液を加えた。混合物を−７８℃で１５分間維持し、０℃で３０分間維持し、ついで１時間室温まで加温した。混合物を−２０℃まで再度冷却し、その後希塩酸（４ｍｌ）を加え、２分間激しく撹拌した。冷混合物を石油エーテルおよび飽和塩化アンモニウム溶液間で分配し、２層を分離した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテル：酢酸エチル（４：１）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、化合物６ｂ（０．２０ｇ）をシスおよびトランス異性体の混合物として分離した。
【０１５４】
1H NMR (CDCl3, δ) トランスジアステレオマー: -0.25 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 2.95 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.15 (2H, d); 7.25 (2H, d).
1H NMR (CDCl3, δ) シスジアステレオマー: -0.27 (3H, s); -0.02 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 3.55 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.0 (2H, d); 7.15 (2H, d).
（ｅ）（ｉ）トランスおよびシス−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（７ａ）（混合物１）の合成
【化５２】
【０１５５】
Ａ：（１Ｓ，２Ｒ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＳＲＳ］
Ｂ：（１Ｒ，２Ｒ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＲＲＳ］
Ｃ：（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＲＳＳ］
Ｄ：（１Ｓ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＳＳＳ］
２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（６ａ）（０．２ｇ；トランス：シス（約３：１）混合物）をＴＨＦ（３．５ｍｌ）および希塩酸（２Ｍ；１ｍｌ）の混合物中、２５℃で２０時間撹拌した。反応混合物をブラインに加え、ジクロロメタンで２度抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテル：酢酸エチル（３：１）、ついでジクロロメタン：メタノール（２００：３）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、７ａ（混合物１）（０．０９５ｇ）をオイル（トランス：シス（約９５：５）混合物）で得た。
【０１５６】
m/z (EIMS): 402
IH NMR (CDCl3, δ) トランスジアステレオマーのみ: 0.8-2.0 (23H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 2.95 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.65 (1H, t); 7.25 (2H, d); 7.35 (2H, d).
（ｅ）（ｉｉ）トランスおよびシス−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（７ｂ）（混合物２）
【化５３】
【０１５７】
Ｅ：（１Ｓ，２Ｒ）−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＳＲＲ］
Ｆ：（１Ｒ，２Ｒ）−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＲＲＲ］
Ｇ：（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＲＳＲ］
Ｈ：（１Ｓ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＳＳＲ］
実施例１（ｅ）（ｉ）に記載の方法と類似の方法により、２−｛４−［１−（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（０．３ｇ；トランス：シス（約３：１）混合物）（６ｂ）から化合物７ｂ（０．１５ｇ；トランス：シス（約９５：５）混合物））を製造した。
【０１５８】
ｍ／ｚ（ＥＩＭＳ）：４０２
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ）トランス異性体のみ: 0.8-2.0 (23H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 2.95 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.65 (1H, t); 7.25 (2H, d); 7.35 (2H, d).
実施例２：トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマーの分離
移動層に１００％エタノールを用いるキラル固定相(ChiralPak AD, Daicel Chemical Industries, Japan)により、エステル混合物１または２のいずれかの９０ｍｇのサンプルをＨＰＬＣにかけて、長さ２５ｃｍ、内径２ｃｍのカラムを用い、約１時間で完全に分離することができた。いずれかの混合物の１ｇのサンプルを、９０ｍｇ量で連続１１回分離した（流速：４ｍｌ／ｍｉｎ；検出：２３０ｎｍ）。ついで回収したエステルを以下のように加水分解して酸にした。メチルエステル（０．４５ｇ）のテトラヒドロフラン／水（４：１ｖ／ｖ）（４０ｍｌ）溶液に、１Ｍ水酸化リチウム水（１．３７ｍｌ，１．２当量）を滴下し、溶液を周囲温度で終夜撹拌した。溶液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、ｐＨ〜１に酸性化し、酢酸エチルで抽出した。抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、３０℃、減圧下で濃縮して、酸をオイルで得た。メチルエステルの各混合物（１ｇ）から出発した酸の回収量は、混合物１ピーク１から０．３９２ｇ、混合物１ピーク２から０．４２７ｇ、混合物２ピーク１から０．４３３ｇ、そして混合物２ピーク２から０．３８１ｇであった。
【０１５９】
表示されたメチルエステルピークのそれぞれから誘導される酸について旋光度を記録した。本明細書においては、明確にするために、分離ピークから得られた酸を、以後、混合物ｍ酸ピークｍと呼ぶ。
【０１６０】
混合物１酸、ピーク１
［α］２５−４２２．４（３６５ｎｍ）、−１４２．９（４３６ｎｍ）、−５７．３（５４６ｎｍ）、−４７．９（５７８ｎｍ）、−４５．１（５８９ｎｍ）
（ｃ＝０．６２７５，ＣＨＣｌ３；光路長１００ｍｍ）
混合物１酸、ピーク２
［α］２５＋３１４．９（３６５ｎｍ）、＋８０．６（４３６ｎｍ）、＋２２．７（５４６ｎｍ）、＋１７．３（５７８ｎｍ）、＋１６．０（５８９ｎｍ）（ｃ＝１．３６５，ＣＨＣｌ３；光路長１００ｍｍ）
混合物２酸、ピーク１
［α］２５−２９９．４（３６５ｎｍ）、−７７．８（４３６ｎｍ）、−２２．２（５４６ｎｍ）、−１６．９（５７８ｎｍ）、−１５．５（５８９ｎｍ）
（ｃ＝０．８１，ＣＨＣｌ３；光路長１００ｍｍ）
混合物２酸、ピーク２
［α］２５＋４２２．６（３６５ｎｍ）、＋１４０．６（４３６ｎｍ）、＋５５．５（５４６ｎｍ）、＋４５．９（５７８ｎｍ）、＋４２．９（５８９ｎｍ）
（ｃ＝０．８８５，ＣＨＣｌ３；光路長１００ｍｍ）
化学的純度は、ＮＭＲおよびＬＣ−ＭＳにより測定した。キラル純度は、下記のように、キラルＨＰＬＣにより測定した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）により酸の構造を確認したが、微量のメチルエステルの存在が示された。残留酢酸エチルと共に、シス異性体と推定される低レベルの不純物がいつも存在した。
【０１６１】
１３Ｃ ＮＭＲは、エステルのジアステレオマー間の微小な差を示した。混合物１酸ピーク１および混合物２酸ピーク２は、混合物１酸ピーク２および混合物２酸ピーク１と同様に、エナンチオマーであることが示された。これは、上記の各化合物の旋光度データに対応する。
【０１６２】
実施例３：分離メチルエステルの加水分解
０．４５ｇのメチルエステル（実施例２において分離）を４０ｍｌのＴＨＦ水溶液（４：１ｖ／ｖ）に溶解し、１．３７ｍｌの１Ｍ水酸化リチウム溶液（１．２当量）を滴下し、ついで溶液を周囲温度で終夜撹拌した。ついで、反応をＬＣ−ＭＳで検査したところ、一般的に、混じりけのない遊離酸の生成が認められ、残存するエステルは微量であった。反応物を減圧下で濃縮してＴＨＦを除去し、水をさらに加えた。撹拌溶液に１Ｍ塩酸を滴下してｐＨ〜１にし、ついで溶液を酢酸エチルで分配した。水層を除去し、酢酸エチル層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で留去した。残留したオイルを目方を量ったバイアルに少量の酢酸エチルで移し、窒素気流で溶媒を除去した。ついでサンプルを乾燥ピストルにいれ、３０℃／１ｍｂａｒで終夜ポンプを使った。
【０１６３】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）により、生成物の構造が遊離酸であることを確認したが、一般的に微量のメチルエステルの存在が示された。シス異性体と推定される低レベルの不純物が、残留酢酸エチルと同様に常に存在した。
【０１６４】
４つの分離酸異性体のそれぞれの少量サンプルを再エステル化し、ついで分析用キラルＨＰＬＣによりエステルを分析することにより生成物のキラル純度を評価した。約５ｍｇの酸をエーテルに溶解し、用事調製したジアゾメタンのエーテル溶液で黄色が消えなくなるまで処理した。周囲温度で３０分間放置後、溶液に窒素を吹き付けて溶媒を除去し、キラルＨＰＬＣのために、エタノールに再度溶解した。分析用ChiralPak ADカラム（２５ｃｍｘ０．４６ｃｍ）、固定相として１００％エタノール、流速０．２５ｍｌ／ｍｉｎ、周囲温度でＵＶ検出（２３０ｎｍ）という条件で分析を行った。各異性体についての典型的な保持時間は：混合物１酸、ピーク１：２３．５ｍｉｎ；混合物１酸、ピーク２：５６ｍｉｎ；混合物２酸、ピーク１：２３．７ｍｉｎ；混合物２酸、ピーク２：３５ｍｉｎであった。各サンプルのキラル純度は、本質的に１００％であった。
【０１６５】
実施例４：トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸の４つの立体異性体の絶対立体化学構造の帰属
円二色性を用い、酸側鎖−シクロペンタノン結合の絶対配置を帰属することにより、ＡＨ１３２０５立体異性体の絶対立体化学構造を決定した。ＡＨ−１３２０５の４つの立体異性体（全て、シクロペンタノン上で２つの側鎖がトランス−配置を有する）を分離した（混合物１酸、ピーク１；混合物１酸、ピーク２；混合物２酸、ピーク１および混合物２酸、ピーク２）。これらは室温でオイルである。
【０１６６】
絶対配置の帰属に役立てるために、標準物質もまた分析した。標準物質はプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｓ−ＢＰＨ）および（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｒ−ＢＰＨ）である（以下に示す）。
【化５４】
【０１６７】
サンプルを室温で保存し、１００％エタノールに溶解し、分析の前に表１に示す濃度に希釈した。
【表１】
【０１６８】
ＰＧＥ２、Ｒ−ＢＰＨおよびＳ−ＢＰＨの分析には光路長１．０ｃｍの石英キュベットを用いた。４つのＡＨ１３２０５立体異性体の分析には光路長０．１ｃｍの石英キュベットを用いた。エタノールの容量は、Gilsonマイクロピペットを用いて測定したが、これらは用事にすばやくキャリブレーションする。
【０１６９】
機器のキャリブレーションおよび判定基準
波長精度キャリブレーション基準は満たされていた。０．０６％（ｗ／ｖ）ｄ−１０−カンファースルホン酸アンモニウム（ＡＣＳ）水溶液の分析により、シグナル強度が仕様書の範囲内であることが確認されたので、スケールファクターを必要としなかった。各サンプルのスペクトルから対応する水の基準値を差し引き、吸収バンドの外側の、３６０〜４００ｎｍ領域におけるスペクトルをゼロにした。
【０１７０】
結果
全てのサンプルについて、ＵＶおよびＣＤの単一分析を行った。標準品であるＰＧＥ２およびＲ−／Ｓ−ＢＰＨの、ＵＶおよびＣＤの基準値を差し引いてゼロにしたデータを図１ａ、１ｂ、２ａおよび２ｂに示す。ＡＨ１３２０５の４つの立体異性体についてのデータを図３ａおよび３ｂに示す。結果を表２にまとめる。
【表２】
【０１７１】
立体異性体サンプル（混合物１酸、ピーク１；混合物１酸、ピーク２；混合物２酸、ピーク１および混合物２酸、ピーク２）は、２〜３の重要な遷移を示す。１つは〜２９０ｎｍのｎ→→π＊遷移によるものであり、もう１つは約２６０ｎｍの芳香環π→π＊遷移によるものであり、もう１つはこの領域よりも低波長側の遷移によるものである。分子のｎ→π＊部分に関するモデルとしてＰＧＥ２を用い、π→π＊部分のモデルとしてＲ−／Ｓ−ＢＰＨを用いた。π→π＊吸光度は弱く、ｎ→π＊バンドの分析に影響しないことが見いだされた。
【０１７２】
ＰＧＥ２の誘起ＣＤは、カルボニルに対してα位の酸基鎖により支配されていると予想される。標準的なオクタント則を用いる分析により、この鎖は-ｚ、＋ｙおよび-ｘオクタント中に存在し、従って-ｘｙｚは（すなわち予想されるＣＤ曲線は）負である。これは実験的に認めれらた（表２）。混合物１酸、ピーク１および混合物２酸、ピーク１サンプルは負のＣＤ曲線を示し、従って側鎖結合部位でＰＧＥ２と同じ絶対立体化学構造を有する。混合物１酸、ピーク２および混合物２酸、ピーク２サンプルは正のＣＤ曲線を示し、従って、この結合部位でＰＧＥ２と反対の絶対立体化学構造を有する。
【０１７３】
ＰＧＥ２とのパターンマッチングおよびオクタント則相関関係の両方により、混合物１酸、ピーク１および混合物２酸、ピーク１サンプルは、シクロペンタノンへの酸側鎖の結合部位である、カルボニルに対するα位の炭素で、ＰＧＥ２と同じ絶対配置を有することが示された。混合物１酸、ピーク２および混合物２酸、ピーク２サンプルは、この部位でＰＧＥ２と反対の配置を有する。これらの結果を表３に示す。
【表３】
【０１７４】
これらのＣＤ研究による絶対立体化学構造の決定は、化合物（２２）を用いる関連立体選択的合成の文献からの結果と比較して予測される、化合物１７［ＲＳＳ］について記載された立体選択的合成により予測される結果と一致する。４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル側鎖のヘキシル鎖の１位における立体化学構造は、出発物質から既知なので、表３における帰属によりそれぞれの異性体の立体化学構造を決定することができる。これらの結果を以下に示す。
【化５５】
【０１７５】
実施例５：（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（混合物１酸ピーク１）の製造
（ａ）（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステル（２５）の製造
【化５６】
【０１７６】
（Ｓ）−ｌ−（４−ブロモフェニル）−ｌ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（１．８ｇ）の無水ＴＨＦ（２４ｍｌ）溶液に、−７８℃で、温度を−６５℃以下に保ちながらｔｅｒｔ−ブチルリチウム（１．７Ｍペンタン溶液；５．６ｍｌ）を加えた。−７８℃で２時間撹拌後、リチウム−２−チエニルシアノクプラート（０．２５Ｍ ＴＨＦ溶液；１９．２ｍｌ）を加え、混合物を−７８℃で１時間放置した。ついで５−オキソ−シクロペンテンカルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステル（１．７ｇ）の無水ＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液を得られた混合物に加え、−７８℃で７５分間放置した。
【０１７７】
ついで飽和塩化アンモニウム溶液（１５ｍｌ）を加え、さらに１時間かけて混合物を１０〜１５℃まで暖めた。飽和塩化アンモニウム溶液をさらに加え、混合物を酢酸エチルで２度抽出した。合わせた有機抽出物を塩化アンモニウム溶液で洗浄し、次にブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテル：ジエチルエーテル（３：１）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステル（１．８ｇ）をフォームで得た。
【０１７８】
1H NMR (CDC13, δ): (ケトおよびエノール形の混合物) -0.3, -0.15, -0.1, 0.0, 0.1, 0.35, 0.45, 0.55 (8s); 0.75-2.8 (c); 3.7 (m), 4.1 (m); 4.55 (m); 5.25 (dd); 5.5-5.8 (2 br s); 6.8(d); 6.95-7.5 (c); 11.0 (enol proton, s).
マススペクトル (m/z) ES+: 836.6 (M+Na)+
（ｂ）（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸メチルエステル（２６）の製造
【化５７】
【０１７９】
（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステル（ｌ．ｌｇ）の無水メタノール（６０ｍｌ）溶液を、密閉管中、１５０℃で３時間加熱した。減圧下で溶媒を留去した後、残渣をジクロロメタン：石油エーテル（２：ｌ）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸メチルエステル（３９０ｍｇ）をオイルで得た。
【０１８０】
1H NMR (CDC13, δ):ケト形 -0.2 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.85 (3H, t); 1.1-1.7 (8H, c); 1.95 (1H, c); 2.5 (3H, c); 3.35 (1H, d); 3.7 (3H, s); 3.8 (1H, m); 4.6 (1H, t); 7.15 (2H,d); 7.25 (2H,d).
マススペクトル (m/z) ES+: 611.6 (M+Na)+
（ｃ）（２Ｓ）−１−メトキシカルボニル−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸エチルエステル（２７）の製造
【化５８】
【０１８１】
（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸メチルエステル（３９０ｍｇ）の無水ＤＭＥ（３．５ｍｌ）溶液に水素化ナトリウム（６０％油分散液；３９ｍｇ）を加えた。１時間放置後、７−ブロモヘプタン酸エチル（０．３ｍｌ）および触媒量のヨウ化ナトリウムを加え、混合物を２０時間加熱還流した。
【０１８２】
冷却後、混合物を塩化アンモニウム溶液に加え、ジクロロメタンで２度抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を無水クロロホルム（１０ｍｌ）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物の結晶を数個加えた。１時間撹拌後、炭酸水素ナトリウム溶液を加え、有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を０〜５％ジエチルエーテル／ジクロロメタンでシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、（２Ｓ）−１−メトキシカルボニル−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸エチルエステル（２９０ｍｇ）をオイルで得た。
【０１８３】
1H NMR (CDCl3, δ): -0.2 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.85 (3H, t); 1.1-1.8 (20H, c); 2.0 (1H, c); 2.3 (4H, c); 2.6 (2H, c); 3.4 (3H, s); 3.45 (1H, m); 4.15 (2H, q); 4.6 (1H, t); 7.15 (2H,d); 7.25 (2H,d).
マススペクトル (m/z) ES+: 455.4 (M+Na)+
（ｄ）（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（２８）の製造
【化５９】
【０１８４】
（２Ｓ）−１−メトキシカルボニル−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸エチルエステル（２９０ｍｇ）およびヨウ化リチウム水和物（６５０ｍｇ）と２，４，６−コリジン（４ｍｌ）の混合物を３時間加熱還流した。冷却後、混合物を酢酸エチルに加え、希塩酸、ブラインで２度洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテル：酢酸エチル（４：１）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（１９０ｍｇ）をオイルで得た。
【０１８５】
1H NMR (CDC13, δ): -0.2 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.85 (3H, t); 1.0-2.3 (24H, c); 2.45 (1H, c); 2.9 (1H, m); 4.6 (1H, t); 7.15 (2H, d); 7.25 (2H, d).
マススペクトル (m/z) ES+: 525.4 (M+Na)+
（ｅ）（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（混合物１酸ピーク１）の製造
【化６０】
【０１８６】
（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（１９０ｍｇ）のＴＨＦ（４ｍｌ）溶液および２Ｍ塩酸（１．１ｍｌ）を３０℃で２０時間撹拌した。混合物を水に加え、ジクロロメタンで２度抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテル：酢酸エチル（５：２）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（１１５ｍｇ）をオイルで得た。
【０１８７】
1H NMR (CDCl3, δ): 0.85 (3H, t); 1.0-2.3 (24H, c); 2.45 (1H, c); 2.9 (1H, m); 4.6 (1H, t); 7.25 (2H, d); 7.35 (2H, d).
マススペクトル (m/z)ES-: 387.3 (M-H)-
[α]25 -416.0 (365nm), -139.5 (436nm), -54.9 (546nm), -45.6 (578nm), -42.4 (589nm) (c=0.51, CHCl3; 光路長 100mm)
実施例６：ＥＰ結合とアゴニズム
化合物がヒトＥＰ２受容体に結合する能力と全ての他のＥＰ受容体に対する化合物の選択性は、ヒトＥＰ受容体で安定的にトランスフェクトした細胞株を用い、放射性リガンド競合置換結合実験により明らかにすることができる。ＥＰ２受容体を刺激する化合物の能力は、ヒトリンパ球、単球またはヒト子宮筋層における第二メッセンジャーであるｃＡＭＰの機能アッセイにより明らかにできる。
【０１８８】
試験の詳細
ヒトＥＰ受容体に対する結合能
ヒトＥＰ受容体ｃＤＮＡで安定的にトランスフェクトした細胞から膜を調製した。要約すれば、細胞を集密状態まで培養し、培養フラスコからこすり落とし、遠心分離（８００ｇ，８分，４℃）した。細胞を１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ、２５０ｍＭショ糖、１ｍＭ ＰＭＳＦ、０．３ｍＭインドメタシンを含有する氷冷したホモジナイズ用緩衝液（ｐＨ７．４）で２度洗浄し、前述同様に再度遠心分離した。上澄みを氷上で保存し、ペレットを再度ホモジナイズし、再度遠心分離した。上澄みをプールし、４００００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。得られた膜ペレットを、使用するまで−８０℃で保存した。
【０１８９】
アッセイのために、ヒトＥＰ４、ＥＰ３、ＥＰ２またはＥＰ１受容体を発現している膜を、アッセイ緩衝液、放射性標識［３Ｈ］ＰＧＥ２および０．１〜１００００ｎＭ濃度の化合物を含有するを含有するミリポア（ＭＨＶＢＮ４５）プレート中でインキュベートした。平衡に達するまで、適切な温度と適切な時間でインキュベーションを行った。１０ｕＭＰＧＥ２の存在下で、非特異的結合を測定した。適切な洗浄用緩衝液を用い、真空マニホールド濾過により、結合放射性標識と遊離放射性標識とを分離し、シンチレーション計数により結合放射性標識を測定した。それぞれの緩衝液の成分を以下の表４に示す。
【０１９０】
各受容体に対する各化合物の親和性すなわちｐＫｉは、Cheng-Prusoff式：
【数１】
【０１９１】
を用いて、５０％放射性リガンド置換をもたらす濃度（ＩＣ５０）から算出した。この方法は、Kenakin, T.P., Pharmacologic analysis of drug receptor interaction. (Raven Press, New York 第2版)に記載の方法に従って行った。
【表４】
【０１９２】
シクラーゼ産生に対する化合物の効果
シクラーゼ産生に対する化合物の効果の測定、すなわち、ＥＰ２受容体に対する化合物の有効機能の測定のためのin vitroアッセイを以下に説明する。
【０１９３】
細胞刺激
ヒトＥＰ２受容体を安定的に発現するＨＥＫ細胞をこれらのアッセイに用いた。９６ウェル・ポリ−Ｌ−リジンコートプレート上、５０，０００細胞／ウェルの密度でＨＥＫ−ＥＰ２細胞を培養し、加湿９５％Ｏ２／５％ＣＯ２中、３７℃でコンフルエンスに達するまで増殖させた。培地には、１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００ｎｇ／ｍｌストレプトマイシン、２．５μｇ／ｍｌファンギゾン、２ｍＭグルタミン、２５０μｇ／ｍｌジェネティシンおよび２００μｇ／ｍｌゼオシンを添加したＤＭＥＭを用いた。
【０１９４】
コンフルエンスに達したとき、無添加のＤＭＥＭを用いて培地を洗い流し、ついで１７５μｌのアッセイ緩衝液（１ｍＭ３−イソブチル−１−メチルキサンチンおよび３μＭインドメタシンを含有するＤＭＥＭ）を各ウェルに加えた。これを１時間インキュベートし、細胞を最終濃度１０-９Ｍ〜１０-５Ｍの試験化合物（３連で）で１５分間刺激した。２５μｌの１Ｍ塩酸を添加して、このアッセイを停止した。ついでプレートを最低１２時間、あるいは放射性リガンド置換アッセイに用いるときまで凍結した。
【０１９５】
放射性リガンド置換アッセイ
３７℃でプレートをすばやく解凍し、２５μｌの１Ｍ水酸化ナトリウムで中和した。３０μｌの上澄みを、０．１％ポリエチレンイミンでコートした９６ウェルミリポア（ＭＡＦＮＯＢ）プレートに移した。これらの上澄みを９０μｌのｃＡＭＰアッセイ緩衝液（５０ｍＭトリス，５ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．０）の添加により希釈した。ｃＡＭＰ標準曲線（１０−１１Ｍ〜１０−５Ｍ）を作成した。１５μｌの３’：５’−ｃＡＭＰ−依存性プロテインキナーゼ（最終濃度８μｇ／ウェル）、１５μｌの［３Ｈ］−ｃＡＭＰ（最終濃度２ｎＭ／ウェル）を各ウェルに加えた。
【０１９６】
氷上でプレートを２時間インキュベートし、ついで停止緩衝液として氷冷水を用い、減圧濾過により結合放射性標識と遊離放射性標識とを分離し、ミリポアマニホールドで回収した。フィルタープレートを終夜乾燥し、ついで５０μｌのMicroscintを加えた。Microbeta Triluxシンチレーションカウンターを用いて放射能を測定した。標準曲線からｃＡＭＰの集積を算出し、その数値をｐモルｃＡＭＰ／ウェルとしてプロットした。
【０１９７】
ヒト子宮筋層活性に対する化合物の効果
ヒト組織中のＥＰ２受容体に対する試験化合物の親和性を測定するための、ヒト子宮筋層の平滑筋を用いるin vitro機能アッセイを以下に説明する。
【０１９８】
外科的に切除した子宮のサンプルからヒト子宮筋層の切片を調製した。ついで子宮筋層の縦走筋細片（２ｍｍ（幅）ｘ１０ｍｍ（奥行き））を切り出し、酸素化（９５％Ｏ２／５％ＣＯ２）クレブス液を含有する器官チャンバー中、３７℃で、ステンレススチールフック間につるした。クレブス液の組成には以下を用いた：ＮａＣｌ（１１８．２ｍＭ）、ＫＣｌ（４．６９ｍＭ）、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（１．１８ｍＭ）、ＫＨ２ＰＯ４（１．１９ｍＭ）、グルコース（１１．１ｍＭ）、ＮａＨＣＯ３（２５．０ｍＭ）、ＣａＣｌ２・６Ｈ２Ｏ（２．５ｍＭ）、インドメタシン３ｘ１０−６Ｍ。
【０１９９】
２５ｍＮに相当する張力下に組織をおいて室温で終夜放置した。次の日、組織を３７℃に維持し、洗浄し、１５ｍＮの張力下におき、ついで少なくとも３０分間平衡化した。MacLabインターフェースを介してアップルマッキントッシュコンピューターに連結したアイソメトリックトランスデューサーを用いて反応を記録した。６０分後、ヒト子宮筋層の筋肉切片を、並列白金線電極およびMultistim D330パルス刺激装置を用いて、電機的に刺激した（パルス幅１５ｍｓ，１５Ｖ、０．５〜４０Ｈｚで１００秒毎に１０秒間）。電気刺激を受けると、ヒト子宮筋層の平滑筋の細片は反応して急速に収縮した。電気刺激に対する反応が安定化（刺激応答の差が１０％以下）したら、細片を増加する濃度の試験化合物（１ｘ１０−７〜１ｘ１０−４Ｍ，各濃度で少なくとも１５分間インキュベート）にさらした。実験の終了時にニトロプルシド・ナトリウム（ＳＮＰ，平滑筋弛緩を引き起こす一酸化窒素供与体）（１ｘ１０−４Ｍ）を加えて、標準緩和反応を起こさせた。化合物の親和性を測定するために、最大反応（ＳＮＰにより引き起こされる標準反応のパーセンテージとして算出）の最大の２分の１の効果を引き起こすために必要な試験化合物の濃度（ＥＣ５０）を算出した。
【０２００】
結果
ヒトＥＰ受容体に対する結合能
これらの試験において、ＡＨ−１３２０５の４つの分離立体異性体の親和性を測定した。結果を図４に示す（データは、４つの実験に関して、平均値±標準誤差で示してある）。混合物１のピークで単離された立体異性体が最も強力であり、ｐＫｉ７．１を示した。結合試験の完全な結果を表５にｐＫｉ値で示す。
【表５】
【０２０１】
この表から、混合物２酸ピーク１が立体異性体の中で最も選択性が優れていることがわかる。
【０２０２】
ｃＡＭＰ産生に対する化合物の効果
これらの試験において、ヒトＥＰ受容体刺激により介在されるｃＡＭＰ産生に対する、分離立体異性体およびＡＨ−１３２０５の効果を評価した。全ての化合物は、同じ最大反応を示したが、それらの有効性は、図５および表６に示すように異なる（データは、４つの実験に関して、平均値±標準誤差で示してある）。
【表６】
【０２０３】
ヒト子宮筋層活性に対する化合物の効果
ＡＨ−１３２０５の適用により、ヒト子宮筋層における、電気的に誘発された収縮が抑制されることが示された。ポイントＡ、ＢおよびＣはＡＨ−１３２０５の量を増加させて添加したポイントに該当する（１０−６、１０−５および１０−４Ｍ）（図６）。ＡＨ−１３２０５を含有するビヒクルはなんら効果を示さないので、効果の有効性はプロスタグランジンＥＰ２受容体との相互作用に基づいている（図７）。
【０２０４】
２つの最も強力な立体異性体（混合物１酸ピーク１および混合物２酸ピーク１）の効果を調べ、ＡＨ−１３２０５の効果と比較した。混合物１酸ピーク１、混合物２酸ピーク１およびＡＨ１３２０５は全て、濃度依存的にＥＦＳ誘発反応を抑制した。ｐＥＣ５０は、５．９±０．２（ｎ＝７）、５．３±０．１（ｎ＝６）および５．３±０．２（ｎ＝７）（図８）であった。観察された最大阻害作用間に有意差は無く、ＥＦＳ誘発収縮抑制は、５６±５％（混合物１酸ピーク１）、５７±２％（混合物２酸ピーク１）および４９±５％（ＡＨ−１３２０５）であった。ＳＮＰは、化合物に加えてさらに抑制を引き起こし、対照ＥＦＳ反応の６０〜７０％と同等であった。ＳＮＰ阻害作用は、６０〜８０分の洗浄期間の後に相殺されたが、試験化合物の阻害作用は相殺されなかった。
【０２０５】
さらに、βアドレナリン受容体アゴニストであるテルブタリンの、子宮筋層のＥＦＳ誘発収縮に対する効果を研究し、ＥＦＳ誘発収縮に対して有意な阻害作用を示さないことが明らかとなった（１０−４Ｍ（ｎ＝７ドナー）で対照ＥＦＳ誘発収縮の９８±５％）
実施例７：ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＩＦＮ−γ産生の阻害
リンパ球は、異種抗原に対する特定の免疫反応および自己免疫疾患の症状発現に関与する単核白血球である。Ｔリンパ球は、ＣＤ３−Ｔ細胞受容体複合体による抗原刺激に反応して、リンパ球の活性化および増殖の重要な因子であるＩＬ−２を産生し、この反応に関与する経路はＮＦ−ＡＴである。この反応は、Ｔ細胞上のＣＤ３分子に選択性を有する選択的モノクローナル抗体を用いてin vitroで明らかにできる。この反応をモデルとし、末梢血から単離された抗ＣＤ３刺激Ｔ細胞により産生されるＩＬ−２に対する試験化合物の効果を測定するために、リンパ球アッセイをデザインした。このアッセイは、Ｔ細胞の反応を刺激するために、９６−ウェルプレートに固定化された抗ＣＤ３モノクローナル抗体（ＯＫＴ３，２５ｎｇ／ｍｌ）の準最適量を用いた。細胞培養上澄み中に放出されるＩＬ−２レベルは、標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて定量化した。同様に、ＴＮＦαおよびＩＦＮ−γなどの他のサイトカインもまた同じアッセイで測定できる。このアッセイは、抗ＣＤ３抗体に反応して起こるリンパ球増殖が見られ、その故に免疫モジュレーター化合物の効果が試験できる、７２時間時点まで延ばすことができる。
【０２０６】
単球は、炎症反応に関与する末梢単核食細胞である。単球によるＴＮＦα産生は、炎症反応において重要な役割を果たし、そのレベルが抑制されないでいると、かなりな組織損傷の原因となりうる。活性化単球によるＴＮＦα分泌の阻害により、炎症性疾患の治療のための魅力的な治療法を提供できる。
【０２０７】
単球によるＴＮＦα放出の、微生物による最も強力な引き金の１つはリポ多糖（ＬＰＳ）であり、この反応はＮＦ−ＫＢ経路によって起こる。ヒト末梢血単球によるＬＰＳ誘発ＴＮＦα分泌に対する試験化合物の効果を測定するために、９６ウェルin vitroアッセイを確立した。アッセイ上澄み中のＴＮＦαレベルを通常のサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて定量した。
【０２０８】
試験の詳細
健常志願者からのヒト末梢血単核細胞を、Ficoll-Hypaque密度遠心分離およびプラスチックへの接着により全血から分離した。非接着性リンパ球分画を、リンパ球アッセイをセットアップするために用い、ついで接着性単球を剥離し、次に単球アッセイに用いた。
【０２０９】
リンパ球アッセイ
ついでリンパ球を、２５ｎｇ／ｍｌで抗ＣＤ３モノクローナル抗体（ＯＫＴ３）によりプレコートした９６−ウェルプレートに塗布し、直ちに、実験計画に記載の対応するウェルに試験化合物（混合物１酸ピーク１；混合物２酸ピーク１；ＡＨ−１３２０５ラセミ体；ＰＧＥ２）の適切な希釈液を加えた。３７℃、５％ＣＯ２／空気で２４時間、プレートをインキュベートし、インキュベーション期間の終了時に上澄みをＥＬＩＳＡ分析のために回収した。製造業者による使用説明書に従って、ProteoPlex１６ウェルヒトサイトカインアレイアッセイキットを用いてＩＦＮ−γレベルを評価した。
【０２１０】
固定化抗ＣＤ３モノクローナル抗体により促進されるリンパ球増殖の促進のために、試験化合物の存在下または非存在下で、細胞を７２時間培養するという条件下で、ＩＬ−２放出の測定と同様な方法でアッセイをセットアップした。増殖アッセイの終了の４時間前に、細胞増殖アッセイキットのフォーマット中の、Promega製の新規テトラゾリウム化合物溶液を、製造者の使用説明書に従って各ウェルに加えた。ついで残りの４時間、インキュベーター中にプレートを戻しいれ、製造者の使用説明書に従って、４９０ｎｍの吸収波長で分光光度計(SpectraMax, Molecular Devices)を用いて、比色反応を測定した。
【０２１１】
単球アッセイ
単球アッセイのために、細胞を９６−ウェルプレート上にプレーティングし、３７℃／５％ＣＯ２で１時間試験化合物（混合物１酸ピーク１；混合物２酸ピーク１；ＡＨ−１３２０５ラセミ体）を用いて前処理し、ついでＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）を加えて反応を開始した。プレートを２４時間インキュベートし、ＥＬＩＳＡによるＴＮＦα産生の産生のために上澄みを回収した。
【０２１２】
マクロファージアッセイ
ヒト肺実質を小片に切断し、氷冷したリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）でかん流して汚染血液および粘液を除去した。ついで組織を、培地ペニシリン、ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミンおよびＤＮａｓｅ（０．２５ｍｇ／ｍｌ）を加えた最小必須培地の存在下で、はさみで切り刻んだ。切り刻んだ組織をゆっくり振盪してマクロファージを追い出した。ついで滅菌フィルター（孔径１５０μｍ）を用いて組織を除去し、粗製細胞浮遊液を得た。得られた細胞浮遊液を遠心分離して細胞ペレットを回収した。汚染している赤血球を赤血球溶解緩衝液で減らし、残りの細胞を遠心分離によりＰＢＳで２度洗浄した。ついで、製造者の使用説明書に従って、VarioMacTM SeparatorおよびMiltenyi Biotec Ltd製のそれぞれの正の選択試薬およびカラムを用い、ＣＤ１４−分子を有する細胞のための正の選択法を用いて、この細胞標品から肺胞マクロファージを精製した。
【０２１３】
アッセイのために、１０％ウシ胎児血清、Ｌ−グルタミンおよび抗生物質を添加したＲＰＭＩ１６４０からなる完全培地中に肺胞マクロファージを再懸濁した。次いで細胞を２４ウェルプレート（４ｘ１０５細胞／ウェル）にプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ２／空気で終夜インキュベートし、細胞接着させた。ついで使い終わった培地をプレートから除き、プレートを短時間新しい培地で洗浄し、試験化合物溶液を加えた。細胞を３０分間試験化合物でインキュベートし、ついで大腸菌ＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）を加えた。加湿インキュベータ中、３７℃、５％ＣＯ２／空気で２４時間、アッセイプレートをインキュベートした。培養上澄み中への細胞によるＴＮＦαの放出を、製造者の使用説明書に従って、R + D Systems（欧州）製のＥＬＩＳＡキット(DuoSet（登録商標）ヒトTNFα ELISA Development System)を用いて定量化した。内因性プロスタグランジンＥ２の見込まれる放出を抑制するための全ての処理に、３μＭインドメタシンを含有させた。
【０２１４】
結果
リンパ球アッセイ
図９に、４つのドナー（１つのドナーのみで試験した混合物２酸ピーク１の場合を除く）の平均として得た３つの試験化合物によるＩＬ−２産生結果を示す。これらの結果を表７にまとめる。
【表７】
【０２１５】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがＯＫＴ３活性化Ｔ細胞により濃度依存的にＩＬ−２産生を抑制することを示している。このアッセイにおける有効性の順序は、試験化合物のそれぞれのＥＣ５０値によればＰＧＥ２＞混合物１酸ピーク１＞ＡＨ１３２０５（ラセミ体）である。図１０に、３つのＥＰ２受容体アゴニストによる、３〜５ドナーの平均として得たＩＬ−２産生結果を示す。これらの結果を表８にまとめる。
【表８】
【０２１６】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストが、ＯＫＴ３活性化Ｔ細胞により濃度依存的にＩＬ−２産生を抑制することを示している。このアッセイにおける有効性の順序は、試験化合物のそれぞれのＥＣ５０値によれば、ＰＧＥ２＞ブタプロスト＞混合物１酸ピーク１である。
【０２１７】
図１１に、混合物１酸ピーク１による２つのドナーのインターフェロンガンマ放出結果を示す。これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがインターフェロンガンマ放出を濃度依存的に抑制することを示している。
【０２１８】
図１２に、３つのＥＰ２受容体アゴニストによる３つのドナーの平均として得たＴＮＦα産生結果を示す。これらの結果を表９にまとめる。
【表９】
【０２１９】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがリンパ球によるＴＮＦα産生を濃度依存的に抑制することを示す。このアッセイにおける有効性の順序は、試験化合物のそれぞれのＥＣ５０値によれば、ＰＧＥ２＞ブタプロスト＞混合物１酸ピーク１である。
【０２２０】
図１３に、３つのＥＰ２受容体アゴニストによる、３つのドナーの平均として得たリンパ球増殖結果を示す。これらの結果を表１０にまとめる。
【表１０】
【０２２１】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがリンパ球増殖を濃度依存的に抑制することを示している。このアッセイにおける有効性の順序は、試験化合物のそれぞれのＥＣ５０値によれば、ＰＧＥ２＞ブタプロスト＞混合物１酸ピーク１である。
【０２２２】
単球アッセイ
図１４に、３つのドナーの平均として得た結果を示す。これらの結果を表１１にまとめる。
【表１１】
【０２２３】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがＬＰＳ刺激単球によりＴＮＦα産生を濃度依存的に抑制することを示している。それぞれのＥＣ５０値に基づく有効性の順序は、混合物１酸ピーク１＞混合物２酸ピーク１＞ＡＨ１３２０５（ラセミ体）である。
【０２２４】
マクロファージアッセイ
図１５に、３つのドナーの平均として得た結果を示す。これらの結果を表１２に示す。
【表１２】
【０２２５】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがマクロファージによりＴＮＦα産生を濃度依存的に抑制することを示す。それぞれのＥＣ５０値に基づく有効性の順序は、ＰＧＥ２＞混合物１酸ピーク１である。
【０２２６】
図の凡例
【表１３】
【０２２７】
【図面の簡単な説明】
【０２２８】
【図１】図１ａは、１．０ｃｍ光路長キュベットを用いた、エタノール中のプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）（０．７ｍｇ／ｍＬ）のＣＤスペクトルである。図１ｂは、１．０ｃｍ光路長キュベットを用いた、エタノール中のＰＧＥ２（０．７ｍｇ／ｍＬ）のＵＶスペクトルである。
【図２】図２ａは、１．０ｃｍ光路長キュベットを用いた、エタノール中の（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｒ−ＢＰＨ）（図の実線）（０．７ｍｇ／ｍＬ）および（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｓ−ＢＰＨ）（図の点線）（０．７ｍｇ／ｍＬ）のＣＤスペクトルである。図２ｂは、１．０ｃｍ光路長キュベットを用いた、エタノール中のＲ−ＢＰＨ（図の実線）（０．７ｍｇ／ｍＬ）およびＳ−ＢＰＨ（図の点線）（０．７ｍｇ／ｍＬ）のＵＶスペクトルである（この図においては、実線と点線がほぼお互いに重なりあっていることに注意）。
【図３】図３ａは、０．１ｃｍ光路長キュベットを用いた、エタノール中の実施例４（化合物Ａ，Ｃ，ＥおよびＧ）の４つのトランス−立体異性体（全て１９ｍｇ／ｍＬ）のそれぞれのＣＤスペクトルである。
【図４】図４は、ヒトＥＰ２受容体に対する結合能アッセイにおける、複数の濃度の５つの試験化合物で置換されたときの［３Ｈ］ＰＧＥ２パーセンテージ変化である。
【図５】図５は、ヒトＥＰ２受容体刺激アッセイにおける、５つの試験化合物で刺激されたときのｃＡＭＰ濃度変化である。
【図６】図６は、ヒト子宮筋層活性に対する、ＡＨ１３２０５の効果である。
【図７】図７は、ヒト子宮筋層活性アッセイにおける、ＡＨ１３２０５の複数の濃度および送達ビヒクルまたは送達ビヒクル単独による、電場刺激（ＥＦＳ）誘発収縮の阻害％変化である。
【図８】図８は、ヒト子宮筋層活性アッセイにおける、３つの試験化合物の複数の濃度による対照電場刺激（ＥＦＳ）誘発収縮の％変化である。
【図９】図９は、リンパ球アッセイにおける、４つの試験化合物の複数の濃度による、ＩＬ−２産生変化である。
【図１０】図１０は、リンパ球アッセイにおける、３つのＥＰ２受容体アゴニストの複数の濃度によるＩＬ−２産生変化である。
【図１１】図１１は、リンパ球アッセイにおける、３つのＥＰ２受容体アゴニストの複数の濃度による、インターフェロンガンマ放出変化である。
【図１２】図１２は、リンパ球アッセイにおける、３つのＥＰ２受容体アゴニストによるＴＮＦα産生変化である。
【図１３】図１３は、リンパ球アッセイにおける、３つのＥＰ２受容体アゴニストによる細胞増殖変化である。
【図１４】図１４は、単球アッセイにおける、３つの試験化合物によるＴＮＦα産生変化である。
【図１５】図１５は、肺胞マクロファージアッセイにおける、２つの試験化合物によるＴＮＦα産生変化である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＡＨ１３２０５の特定の立体異性体である（±）−トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸およびＥＰ２受容体アゴニストとしてのその使用に関する。本発明はまた、これらの立体異性体を含んでなる医薬組成物、ならびに種々の疾患を治療するためのこれらの立体異性体および組成物の使用にも関する。
【背景技術】
【０００２】
プロスタノイドはプロスタグランジン（ＰＧ）およびトロンボキサン（Ｔｘ）を含み、それらの受容体は、天然に存在する５つのプロスタノイドである、ＰＧＤ２、ＰＧＥ２、ＰＧＦ２α、ＰＧＩ２およびＴｘＡ２のそれぞれに対する感受性に基づき、異なる５つのクラス（ＤＰ、ＥＰ、ＦＰ、ＩＰおよびＴＰ）に分類される(Coleman, R.A., Prostanoid Receptors. IUPHAR compendium of receptor characterisation and classification, 第2版, 338-353, ISBN 0-9533510-3-3, 2000)。ＥＰ受容体（その内因性リガンドはＰＧＥ２である）は、ＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ３、およびＥＰ４と呼ばれる４つのサブタイプに分類されている。これらの４つのタイプのＥＰ受容体はクローニングされ、分子・薬理レベルの両方で明らかにされている(Coleman, R.A., 2000)。
【０００３】
ＥＰ２アゴニストは、限定するものではないが、月経困難症（ＷＯ０３／０３７４３３）、早期産（ＧＢ２２９３１０１）、緑内障（ＷＯ０３／０４０１２６）、高眼圧症（ＷＯ０３／０４０１２６）、免疫疾患（ＷＯ０３／０３７４３３）、骨粗鬆症（ＷＯ９８／２７９７６，ＷＯ０１／４６１４０）、喘息（ＷＯ０３／０３７４３３）、アレルギー（ＷＯ０３／０３７４３３）、骨疾患（ＷＯ０２／２４６４７）、骨折治療（ＷＯ９８／２７９７６、ＷＯ０２／２４６４７）、受精能(Breyer, R.M., et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 905, 221-231 (2000))、男性の性機能不全（ＷＯ００／４０２４８）、女性の性機能不全（ＵＳ６，５６２，８６８）、歯周疾患（ＷＯ００／３１０８４）、胃潰瘍（ＵＳ５，５７６，３４７）および腎疾患（ＷＯ９８／３４９１６）を含む多くの疾患の治療に有用であることが示されている。
【０００４】
優れた選択性を有する公知のＥＰ２アゴニストの１つはブタプロスト：
【化１】
【０００５】
である。ＡＨ１３２０５である（±）−トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸はＥＰ２アゴニストとして知られる(例えば、 Hillock, C.J. and Crankshaw, D.J., European Journal of Pharmacology, 378, 99-108 (1999)を参照)。
【０００６】
これはまた、７−｛２−［４−（１−ヒドロキシ−ヘキシル）−フェニル］−５−オキソ−シクロペンチル｝−ヘプタン酸（帰属のためのフォントを加えてある）と呼ぶこともでき、下記の構造：
【化２】
【０００７】
を有する。この構造は３つの不斉炭素原子を有し、従って８つの可能な立体異性体を有する。シクロペンタノン上の基がトランス配置である場合、主要な立体異性体である４つの立体異性体を生じさせ、基がシス配置である場合、少ないほうの４つの立体異性体を生じさせる。
【０００８】
主要な４つの立体異性体は下記の構造：
【化３】
【０００９】
を有する。本出願人は、主要な４つの立体異性体をそれぞれ分離し、それらの活性を測定することができた。しかしながら、これらの立体異性体の分離の最初の試みは成功しなかった。
【００１０】
種々の市販の固定相を用いるキラルＨＰＬＣにより、酸形の全ての立体異性体の混合物について試みたが、成功しなかった。
【００１１】
種々の市販の固定相および移動層を用いるキラルＨＰＬＣにより、以下の実施例で製造されるエステルの２つの混合物について、多数の分離の試みを実施したが、この方法は、よくても分析レベルで成功したに過ぎず、分取スケールでの分離は成功しなかった。
【００１２】
しかしながら、最終的に、以下の実施例２に記載されているように、エステルでの立体異性体を分離する試みが成功した。
【００１３】
本発明者らはまた、関心のある立体異性体の立体選択的合成経路の発明を行った。
【発明の開示】
【００１４】
発明の概要
第１の側面において、本発明は以下の１つから選択される化合物：
【化４】
【００１５】
を提供する。
【００１６】
第２の側面において、本発明は、少なくとも９０重量％が以下の形の１つから選択される、トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸：
【化５】
【００１７】
を提供する。
【００１８】
トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸の少なくとも９５、９７、９９、９９．５または９９．９重量％が、示された４つの形の１つであることが好ましい。
【００１９】
第３の側面において、本発明は、少なくとも８０重量％が以下の形の１つ：
【化６】
【００２０】
である、２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸を提供する。
【００２１】
２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸の少なくとも９０、９５、９７、９９、９９．５または９９．９重量％が、示された４つの形の１つであることが好ましい。
【００２２】
第４の側面において、本発明は以下の形の１つから選択される化合物：
【化７】
【００２３】
を提供する。
【００２４】
第５の側面において、本発明は、少なくとも９０重量％が以下の形の１つ：
【化８】
【００２５】
から選択される、トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸を提供する。
【００２６】
第６の側面において、本発明は、少なくとも８０重量％が以下の形の１つ：
【化９】
【００２７】
である、２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸を提供する。
【００２８】
上記の６つの側面はまた、記載されている化合物の塩、溶媒和物、化学的に保護された形態およびプロドラッグにも関する。
【００２９】
本発明の第７の側面は、以下のステップ：
（ａ）１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オンを塩化（−）−ＤＩＰで不斉還元して、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｓ−ＢＰＨ）を製造すること；
（ｂ）Ｓ−ＢＰＨを変換して（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンにすること；
（ｃ）（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンをｔｅｒｔ−ブチルリチウムで処理し、ついでペンチニル銅：ヘキサメチルリン酸トリアミド（１：２）で処理し、ついで２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オンと縮合して、トランスおよびシス−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルのジアステレオマー混合物を製造すること；
（ｄ）ｔ−ブチルジメチルシリル基を脱保護して、トランスおよびシス−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルのジアステレオマー混合物を得ること；
（ｅ）移動層に１００％エタノールを用い、キラル固定相に、３−アミノプロピルトリエトキシシランのベンゼン溶液で処理した、大孔径シリカゲル担体上に吸着させたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニル−カルバメートを用いるＨＰＬＣにジアステレオマー混合物をかけること；
（ｆ）溶離液中の分画として、単一の立体異性体をほぼ単離すること；
を含んでなる、化合物の製造方法を提供する。
【００３０】
本発明の第８の側面は、以下のステップ：
（ａ）塩化（＋）−ＤＩＰで１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オンを不斉還元して、（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｒ−ＢＰＨ）を製造すること；
（ｂ）Ｒ−ＢＰＨを（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンに変換すること：
（ｃ）（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンをｔｅｒｔ−ブチルリチウムで処理し、ついでペンチニル銅：ヘキサメチルリン酸トリアミド（１：２）で処理し、ついで２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オンと縮合して、トランスおよびシス−２−｛４−［１−（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルのジアステレオマー混合物を製造すること；
（ｄ）ｔ−ブチルジメチルシリル基を脱保護して、トランスおよびシス−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルのジアステレオマー混合物を得ること；
（ｅ）移動層に１００％エタノールを用い、キラル固定相に３−アミノプロピルトリエトキシシランのベンゼン溶液で処理した、大孔径シリカゲル担体上に吸着させたアミローストリス（３，５−ジメチルフェニル−カルバメートを用いるＨＰＬＣにジアステレオマー混合物をかけること
（ｆ）溶離液中の分画として、単一の立体異性体をほぼ単離すること；
を含んでなる、化合物の製造方法を提供する。
【００３１】
第７および第８の側面において、”ほぼ”という用語は、製造された化合物の少なくとも９０重量％が、化合物の単一立体異性体であることを意味する。好ましくは、製造された化合物の９５、９７、９９、９９．５または９９．９重量％が、化合物の単一立体異性体である。
【００３２】
本発明の第９の側面は、以下のステップ：
（ａ）有機銅試薬および有機リチウム試薬の存在下で１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンを５−オキソ−シクロペンテンカルボン酸｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステルに不斉付加させて１，２−トランス生成物を得ること；
（ｂ）３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）−アミノ］−２−ボルニル基をメタノールと反応させることによりメチル基に変換して、２−｛４−［１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸メチルエステルを得ること；
（ｃ）塩基の存在下、２−｛４−［１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸メチルエステルを７−ブロモヘプタン酸エチルで処理して、１−メトキシカルボニル−２−｛４−［１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸エチルエステルを得ること；
（ｄ）Ｃ１位のメチルエステル基を除去し、ＬｉＩの２，４，６−コリジン溶液でカルボエトキシ基を加水分解すること；
（ｅ）ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルヒドロキシル−保護基を除去すること；
を含んでなる化合物の製造方法を提供する。
【００３３】
本発明の第１０の側面は、以下のステップ：
（ａ）有機銅試薬および有機リチウム試薬の存在下、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサンを５−オキソ−シクロペンテンカルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステルに不斉付加させて、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステルを得ること；
（ｂ）３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）−アミノ］−２−ボルニル基をメタノールと反応させてメチル基に変換させて、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸、メチルエステルを得ること；
（ｃ）塩基の存在下、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸チルエステルを７−ブロモヘプタン酸エチルで処理して、（２Ｓ）−１−メトキシカルボニル−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸エチルエステルを得ること；
（ｄ）Ｃ１位のメチルエステル基を除去し、ＬｉＩの２，４，６−コリジン溶液で（６−カルボエトキシ）ヘキシルエステル基を加水分解して（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸を得ること；
（ｅ）ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシヒドロキシル−保護基を除去すること；
を含んでなる化合物の製造方法を提供する。
【００３４】
本発明の第１１の側面は、第７から第１０までの側面のいずれか１つの方法により得られるか、または得ることが可能な化合物を提供する。本発明の第１２の側面は、以下の一般合成セクションに記載の１以上のステップを含んでなる、本発明の第１から第６までの側面のいずれか１つに記載の化合物の製造方法を提供する。
【００３５】
本発明のさらなる側面は、治療方法における使用のための、第１から第６までの側面のいずれか１つの化合物、もしくは第７から第１０までもしくは第１２の側面のいずれか１つの方法により製造される（あるいは製造可能な）化合物、またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００３６】
本発明の他の側面は、薬学的に許容される担体または希釈剤とともに、第１から第６までの側面のいずれか１つの化合物、もしくは第７から第１０までもしくは第１２の側面のいずれか１つの方法により製造される化合物、またはその薬学的に許容される塩を含んでなる医薬組成物を提供する。
【００３７】
本発明のさらなる側面は、ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和される疾患の治療のための医薬の製造における、第１から第６までの側面のいずれか１つの化合物、もしくは第７から第１０までもしくは第１２の側面のいずれか１つの方法により製造される（あるいは製造可能な）化合物、またはその薬学的に許容される塩の使用を提供する。
【００３８】
本発明の他の側面は、以下に述べる方法による、本発明の化合物または関連中間体の合成方法を提供する。
【００３９】
本発明の他の側面は、第１から第６までの側面のいずれか１つの化合物、もしくは第７から第１０までもしくは第１２の側面のいずれか１つの方法により製造される（あるいは製造可能な）化合物、またはその薬学的に許容される塩の有効量を治療を必要とする患者の投与することを含んでなる、ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和されることができる疾患の治療方法を提供する。
【００４０】
ＥＰ２受容体のアゴニズムにより治療されることができる疾患は上記で説明したが、とりわけ、月経困難症、早期産、緑内障、骨粗鬆症、喘息、アレルギー、骨疾患、骨折治療、不妊症、男性の性機能不全、女性の性機能不全、歯周疾患、胃潰瘍および腎疾患を含む。
【００４１】
ＥＰ受容体アゴニストは、Ｔ細胞活性化および炎症性サイトカインの放出を抑制できることが知られているが、ヒトＴ細胞におけるこれらの効果に関与するＥＰ受容体はいまだに明らかにされていない。本発明者らは、ＥＰ２アゴニストがヒトＴ細胞活性化（増殖）を抑制し、インターロイキン２（ＩＬ−２）腫瘍壊死因子（ＴＮＦα）およびインターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）を含む複数の炎症性サイトカインの放出を抑制することを見いだした。この活性プロフィールにより、乾癬、乾癬性関節炎、皮膚炎、リウマチ様関節炎、移植片拒絶、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、グレーブス病、強皮症、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、および移植片拒絶（とりわけ乾癬）を含む、免疫および炎症性疾患の治療にＥＰ２受容体アゴニストが有用であることが強く示唆される(Griffiths, C., Current Drugs Targets - Inflammation & Allergy, 3, 157-161, (2004); Lebwohl, M., Lancet, 361, 1197-1204 (2003); Salim, A. & Emerson, R., Curr. Opin. Investig. Drugs, 2(11), 1546-8 (2001))。従って、ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和されることができるさらなる疾患は乾癬である。
【００４２】
さらに、本発明者らはまた、ＥＰ２受容体アゴニストが、炎症性サイトカインであるＴＮＦαのヒト単球および肺胞マクロファージからの放出を抑制することも示した。この活性のプロフィールは、ＥＰ２受容体アゴニストが免疫および炎症性疾患、特に炎症性肺疾患（喘息、慢性閉塞性肺疾患、急性呼吸窮迫症候群、肺線維症および嚢胞性線維症を含むがこれらに限定されない）の治療に有用であるという考えにさらなる証拠を提供するものである。
【００４３】
さらに、本発明の側面は、ＩＬ−２、ＴＮＦαおよび／またはＩＦＮγ産生抑制により緩和される疾患を治療するためのＥＰ２アゴニストの使用およびＩＬ−２産生抑制により緩和される疾患の治療のための医薬の製造におけるＥＰ２アゴニストの使用に関する。
【００４４】
本発明はまた、第１から第３の側面の化合物、または第４、第５、第６、第７もしくは第９の側面の方法により製造される（あるいは製造可能な）化合物の有効量を細胞に接触させることを含んでなる、in vitroまたはin vivoでのＥＰ２受容体の刺激方法および／またはＩＬ−２、ＴＮＦαおよび／またはＩＦＮγ産生抑制方法を提供する。
【００４５】
一部の実施形態において、前述の化合物は、他の３つのＥＰ受容体（すなわちＥＰ１、ＥＰ３およびＥＰ４）と比較して、ＥＰ２受容体に対して選択性を示すことができる。この選択性により、特定の疾患の治療における可能な利点を有する本発明の化合物の効果のターゲッティングが可能となる。
【００４６】
定義
他の形態を含む
特記しない限り、これらの置換基の公知のイオン、塩、溶媒和物および保護体を上記に含む。例えば、カルボン酸（−ＣＯＯＨ）への言及は、そのアニオン（カルボキシレート）（−ＣＯＯ−）、塩または溶媒和物ばかりでなく、通常の保護体もまた含む。同様に、ヒドロキシル基への言及はまた、そのアニオン（−Ｏ−）、塩または溶媒和物ばかりでなく、ヒドロキシル基の通常の保護体もまた含む。
【００４７】
塩、溶媒和物および保護体
対応する活性化合物の塩（例えば、薬学的に許容される塩）を製造、精製、および／または取り扱いすることが好都合であるか、または所望される場合がある。薬学的に許容される塩の例は、Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977) に詳細に説明されている。
【００４８】
例えば、化合物が陰イオン性であるか、または陰イオンになることができる官能基（例えば−ＣＯＯＨは−ＣＯＯ−になることができる）を有している場合、適切なカチオンと塩を形成することができる。適切な無機カチオンの例は、限定するものではないが、Ｎａ＋およびＫ＋などのアルカリ金属イオン、Ｃａ２＋およびＭｇ２＋などのアルカリ土塁カチオン、ならびにＡｌ３＋などの他のカチオンを含む。適切な有機カチオンの例は、限定するものではないが、アンモニウムイオン（すなわちＮＨ４＋）および置換アンモニウムイオン（例えばＮＨ３Ｒ＋、ＮＨ２Ｒ２＋、ＮＨＲ３＋、ＮＲ４＋）を含む。一部の適切な置換アンモニウムイオンの例には、エチルアミン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリエチルアミン、ブチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ベンジルアミン、フェニルベンジルアミン、コリン、メグルミン、およびトロメタミンに加えて、リジンおよびアルギニンなどのアミノ酸から誘導されるものがある。通常の四級アンモニウムイオンの例には、Ｎ（ＣＨ３）４＋がある。
【００４９】
対応する活性化合物の溶媒和物を製造、精製、および／または取り扱いすることが好都合であるか、または所望される場合がある。本明細書においては、”溶媒和物”という用語は、通常の意味において、溶質（例えば、活性化合物、活性化合物の塩）および溶媒の錯体を指すために用いられる。溶媒が水である場合、溶媒和物は、例えば、一水和物、二水和物、三水和物などの水和物として好都合に呼ぶことができる。
【００５０】
活性化合物を化学的に保護された形態で製造、精製、および／または取り扱いすることが好都合であるか、または所望される場合がある。”化学的に保護された形態（chemically protected form）”という用語は、本明細書においては通常の化学的な意味で用いられ、１以上の反応性官能基が、特定の条件下（例えばｐＨ、温度、放射線、溶媒など）で望ましくない化学反応から保護されている化合物に関する。実際、保護しなければ特定の条件下で反応性である官能基を可逆的に非反応性にするために、公知の化学的方法が用いられている。化学的に保護された形態において、１以上の反応性官能基が保護基または保護化基（遮蔽基もしくはマスキング基または遮断基もしくはブロッキング基としても知られる）の形である。反応性官能基を保護することにより、保護基に影響を与えることなく、他の保護されていない反応性官能基に関する反応を行うことができる。通常は次のステップにおいて、分子の残りの部分に実質的に影響を与えることなく、保護基を除去することができる。例えば、Protective Groups in Organic Synthesis(T. Green and P. Wuts; 3rd Edition; John Wiley and Sons、1999) を参照のこと。
【００５１】
かかるさまざまな”保護化”、”ブロッキング”、または”マスキング”法は、有機合成において公知であり、広く使用されている。例えば、特定の条件下で共に反応性であると思われる２つの非等価な反応性官能基を有する化合物を誘導体化して官能基の１つを”保護化”し、それにより非反応性にすることができ、このように保護化された場合、該化合物は実質的に１つの反応性官能基のみを有する反応剤として使用できる。所望される反応（他の官能基が関わる）が完了した後、保護基を”脱保護”して元の官能基に戻すことができる。
【００５２】
例えば、ヒドロキシ基はエーテル（−ＯＲ）またはエステル（−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ）（例えば：ｔ−ブチルエーテル；ベンジル、ベンズヒドリル（ジフェニルメチル）、またはトリチル（トリフェニルメチル）エーテル；トリメチルシリルまたはｔ−ブチルジメチルシリルエーテル；またはアセチルエステル（−ＯＣ（＝Ｏ）ＣＨ３，−ＯＡｃ））として保護できる。
【００５３】
例えば、カルボン酸基はエステル（例えば：Ｃ１−７アルキルエステル（例えば、メチルエステル；ｔ−ブチルエステル）；Ｃ１−７ハロアルキルエステル（例えば、Ｃ１−７トリハロアルキルエステル）；トリＣ１−７アルキルシリル−Ｃ１−７アルキルエステル；もしくはＣ５−２０アリール−Ｃ１−７アルキルエステル（例えばベンジルエステル；ニトロベンジルエステル）；またはアミド（例えばメチルアミド）として保護できる。
【００５４】
プロドラッグ
活性化合物をプロドラッグの形で製造、精製、および／または取り扱いすることが好都合であるか、または所望される場合がある。本明細書においては、”プロドラッグ”という用語は、代謝（例えば、in vivoで)された場合、所望の活性化合物を生成する化合物に関する。一般的に、プロドラッグは不活性であるか、または該活性化合物より活性が低いが、好都合な取り扱い、投与または代謝特性を提供できる。
【００５５】
特記しない限り、特定の化合物に言及する場合、そのプロドラッグもまた含む。
【００５６】
例えば、プロドラッグの一部は活性化合物のエステル（例えば、生理学的に許容される代謝的に不安定なエステル）である。代謝中に、エステル基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ）は切断されて活性薬物を生成する。かかるエステルは、適切な場合には、親化合物中に存在する他のいずれかの反応性基を前もって保護し、親化合物中のいずれかのカルボン酸基（−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）などをエステル化し、ついで必要に応じて脱保護して合成することができる。
【００５７】
かかる代謝的に不安定なエステルの例は、Ｒが：Ｃ１−７アルキル（例えば、−Ｍｅ、−Ｅｔ、−ｎＰｒ、−ｉＰｒ、−ｎＢｕ、−ｓＢｕ、−ｉＢｕ、−ｔＢｕ）；Ｃ１−７アミノアルキル（例えば、アミノエチル；２−（Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノ）エチル；２−（４−モルホリノ）エチル）；Ｃ１−７ヒドロキシもしくはポリヒドロキシアルキル（例えば２−ヒドロキシエチル、２．３−ジヒドロキシプロピル（グリセリル））およびアシルオキシ−Ｃ１−７アルキル（例えば、アシルオキシメチル；アシルオキシエチル；ピバロイルオキシメチル；アセトキシメチル；１−アセトキシエチル；１−（１−メトキシ−１−メチル）エチル−カルボニルオキシエチル；１−（ベンゾイルオキシ）エチル；イソプロポキシ−カルボニルオキシメチル；１−イソプロポキシ−カルボニルオキシエチル；シクロヘキシル−カルボニルオキシメチル；１−シクロヘキシル−カルボニルオキシエチル；シクロヘキシルオキシ−カルボニルオキシメチル；１−シクロヘキシルオキシ−カルボニルオキシエチル；（４−テトラヒドロピラニルオキシ）カルボニルオキシメチル；１−（４−テトラヒドロピラニルオキシ）カルボニルオキシエチル；（４−テトラヒドロピラニル）カルボニルオキシメチル；ならびに１−（４−テトラヒドロピラニル）カルボニルオキシエチル）；である式−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲのものを含む。
【００５８】
あるいはまた、プロドラッグの一部は酵素的に活性化されて活性化合物を生成するか、またはさらなる化学反応により活性化合物を生成する化合物を生成する（例えば、ＡＤＥＰＴ、ＧＤＥＰＴ、ＬＩＤＥＰＴなど）。例えば、プロドラッグは糖誘導体もしくは他のグリコシド抱合体であることができ、あるいはまたアミノ酸エステル誘導体であることができる。
【００５９】
治療
本明細書においては、疾患の治療という文脈における”治療”という用語は、一般に、所望される治療効果が達成される、例えば疾患の抑制などの、ヒトまたは動物（例えば獣医治療）のいずれかの治療に関し、進行の抑制、進行の停止、疾患の改善、および疾患の治癒を含む。予防的処置（すなわち予防）としての治療もまた含む。
【００６０】
本明細書においては、”治療的に有効な量”という用語は、所望される治療処方計画に基づき投与された場合、妥当な便益／リスク比につりあった所望される治療効果を発揮するのに有効な、活性化合物、または活性化合物を含んでなる物質、組成物もしくは製剤の量に関する。適切な投与量範囲は、一般的に０．０１〜２０ｍｇ／ｋｇ／日であり、好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日であるが、眼局所投与の場合、約０．００００１〜１ｍｇ／日まで投与量を下げることもできる。
【００６１】
組成物およびその投与
いずれの適切な投与経路および投与手段のためにも組成物を製剤化することができる。薬学的に許容される担体または希釈剤は、経口、経直腸、経鼻、局所（頬、眼内および舌下を含む）、経膣または非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、鞘内および硬膜外を含む）投与に適した製剤中に使用されるものを含む。製剤は単位製剤で好都合に提供することができ、製薬学業界に公知のいずれの方法によっても製造できる。かかる方法は、活性成分と１以上の補助成分を構成する担体とを混合するステップを含む。一般に、活性成分と液体担体もしくは微細固体担体または両方とを均一かつ緊密に混合し、ついで必要に応じて製品を成形することにより製剤を製造する。
【００６２】
固体組成物に関しては、通常の無毒の固体担体は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、セルロース、セルロース誘導体、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石粉、グルコース、ショ糖、炭酸マグネシウムなどを含むことができる。上記で定義した活性化合物は、担体として例えばポリアルキレングリコール、アセチル化トリグリセリドなどを用いて、座剤として製剤化できる。投与用液体医薬組成物は、例えば、上記で定義した活性化合物と所望による医薬アジュバントとを例えば、水、生理食塩水、デキストロース水溶液、グリセロール、エタノール、ポリオキソールエステルなどの担体中に溶解、分散などし、それによって溶液または懸濁液を調製することにより製造できる。必要に応じて、投与用医薬組成物はまた、湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝化剤など（例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、トリエタノールアミン酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなど）の、少量の無毒の補助物質を含むこともできる。かかる製剤の実際の製造方法は公知であり、当業者には明白であろう。例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 20th edition, pub. Lippincott, Williams & Wilkins, 2000 を参照のこと。投与される組成物または製剤は、いずれにしても、治療対象者の症状を緩和するのに有効な量で活性化合物（単数または複数）を含有する。
【００６３】
０．２５〜９５％の活性成分と無毒の担体からなる残りの部分とを合わせて含有する製剤または組成物を製造できる。
【００６４】
経口投与に関しては、薬学的に許容される無毒の組成物は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、セルロース、セルロース誘導体、クロスカルメロースナトリウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、滑石粉、グルコース、ショ糖、炭酸マグネシウムなどの、通常使用される賦形剤のいずれかを混合して製造される。かかる組成物は、溶液、サスペンジョン、錠剤、ピル、カプセル、粉末剤、持続放出製剤などの形をとる。かかる組成物は、１％〜９５％、さらに好ましくは２〜５０％、最も好ましくは５〜８％の活性成分を含有できる。
【００６５】
非経口投与は、一般に、皮下、筋肉内または静脈内のいずれかの注射により特徴付けられる。注射剤は、溶液もしくはサスペンジョンのいずれかの通常の製剤、注射の前に溶液もしくはサスペンジョンにするのに適した固体製剤、またはエマルジョン製剤で製造できる。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、デキストロース、グリセロール、エタノールなどである。加えて、必要に応じて、投与用医薬組成物はまた、例えば、酢酸ナトリウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミン、トリエタノールアミン酢酸ナトリウムなどの、湿潤剤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝化剤などの少量の無毒の補助物質を含有することができる。
【００６６】
かかる非経口組成物に含有される活性化合物のパーセンテージは、化合物の活性および対象における必要性ばかりでなく、その特定の性質によって主に決まる。しかしながら、溶液中に０．１％〜１０％のパーセンテージの活性成分が使用可能であり、組成物が固体で、前記パーセンテージに後で希釈される場合は、さらに高濃度が可能である。好ましくは、組成物は、溶液中に０．２〜２％の活性成分を含有する。
【００６７】
経皮投与に適した製剤は、ゲル、ペースト、軟膏、クリーム剤、ローション、およびオイルばかりでなく、パッチ、ばんそうこう、包帯、ドレッシング、デポー剤、およびリザーバーを含む。
【００６８】
軟膏は、一般的に、活性化合物およびパラフィン系または水混和性軟膏基剤から製造される。
【００６９】
クリーム剤は、一般的に、活性化合物および水中油型クリーム基剤から製造される。必要に応じて、クリーム基剤の水層は、例えば、プロピレングリコール、ブタン−１，３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコールならびにそれらの混合物などの、少なくとも約３０重量％の多価アルコール（すなわち、２以上のヒドロキシル基を有するアルコール）を含むことができる。局所製剤は、望ましくは、皮膚または他の患部を介する活性化合物の吸収または透過を促進する化合物を含むことができる。かかる皮膚透過促進剤の例は、ジメチルスルホキシドおよび関連類似体を含む。経膣投与に適した製剤は、活性化合物に加えて当該技術分野で適切として知られる担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー製剤として提供されることができる。
【００７０】
眼局所投与用点眼剤は、好ましくは、０．００１〜２０％の活性成分と、水もしくは生理食塩水などの公知の担体および下記のような他の添加剤とからなる残りの部分を含有する。
【００７１】
典型的な眼用組成物は：
（ａ）抗菌性保存剤（適切な防腐剤は塩化ベンザルコニウム、チメロサール、クロロブタノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、フェニルエチルアルコール、エデト酸二ナトリウム、ソルビン酸、オナマー（onamer）、もしくは当業者に公知の他の薬剤を含む。かかる防腐剤は一般的に約０．００１％〜約１．０重量％の濃度で用いられる）；
（ｂ）可溶化剤（ポリソルベート２０、６０および８０；プルロニックＦ−６８、Ｆ−８４およびＰ−１０３；チロキサポール；クレモフォア；ドデシル硫酸ナトリウム；グリセロール；ＰＥＧ４００；プロピレングリコール；シクロデキストリン；または当業者に公知の他の薬剤など。かかる補助溶剤は一般的に約０．０１％〜約２重量％の濃度で用いられる）；ならびに
（ｃ）増粘剤（ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースまたは他の当業者に公知の薬剤など。かかる薬剤は、一般的に、約０．０１％〜約２重量％の濃度で用いられる）；
を含むことができる。
【００７２】
’不活性成分’と呼ばれることもある他の随意の成分は、塩化ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム（一水和物および／または無水）、ポリオキシル４０硬化ヒマシ油、トロメタミン、ホウ酸、マンニトール、エデト酸二ナトリウム、ｐＨ調節用水酸化ナトリウムおよび／または塩酸ならびに精製水を含む。
【００７３】
プロスタグランジンを含有する眼用製剤は、特に、米国特許第５，８８９，０５２号；米国特許第４，５９９，３５３号；米国特許第６，０１１，０６２号；米国特許第６，２３５，７８１号；米国特許第５，８４９，７９２号；米国特許第５，６３１，２８７号に記載されている（本願に参照として取り入れる）。
【００７４】
一般的合成方法
式１の化合物：
【化１０】
【００７５】
（式中、
【化１１】
【００７６】
は、各キラル中心で確定した立体化学構造を示し、ペンタノン上の基は互いにトランス位にある）は、各キラル中心で同じ立体化学構造を有する式２の化合物：
【化１２】
【００７７】
（式中、Ｒ’はＣ１−７アルキル基（例えばメチル（Ｃ１）、エチル（Ｃ２）、プロピル（Ｃ３）、ブチル（Ｃ４）、ペンチル（Ｃ５）、ヘキシル（Ｃ６）、ヘプチル（Ｃ７）などの１〜７炭素原子を有する炭化水素化合物の炭素原子の１つから水素原子１つを除去して得られる一価の部分を表す）から、標準法を用いて二重結合を還元し、酸およびアルコールを脱保護する（例えば、還元は、常温・常圧で酢酸エチルなどの溶媒中、水素、パラジウム／カーボンで実施できる）ことにより合成できる。特に好ましいアルコール保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）などのシリル基であり、これは例えば酸水溶液および補助溶剤で除去でき、またこの条件により、酸基も脱保護できる。これらの反応はいずれの順序によっても実施できる。二重結合は、シスもしくはトランス配置、またはこれらの混合物のいずれであることもできる。
【００７８】
式２の化合物は、２つの不斉中心のいずれにおいても同一の立体化学構造を有する式３のエノラート：
【化１３】
【００７９】
を、式４の化合物：
【化１４】
【００８０】
（式中、Ｘはハロゲン化物またはメシレートなどの脱離基であり、Ｒ’は式２に記載のものである）により、ＬｉＯｉ−Ｐｒなどの強塩基の存在下、室温でトラップすることにより合成できる。
【００８１】
式３の４つのエノラートは、シクロペント−２−エノン（式５）：
【化１５】
【００８２】
と、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式６の化合物：
【化１６】
【００８３】
とを、遷移金属触媒（好ましくはＲｈ（Ｉ））の存在下、ＢＩＮＡＰ（２，２’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル）などのキラルリガンドの存在下で反応させることにより製造できる。Ｓ−ＢＩＮＡＰを用いれば、式３ａのエノラート：
【化１７】
【００８４】
が得られ、Ｒ−ＢＩＮＡＰを用いれば、式３ｂのエノラート：
【化１８】
【００８５】
が得られる。
【００８６】
式５および式６の化合物の反応の前に、式６の化合物は、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式７の化合物：
【化１９】
【００８７】
とＣｌＴｉ（Ｏｉ−Ｐｒ）３とを反応させることによりその場で製造できる。この反応は、一般に、Hayashi, T., et al., JACS, 124, 12102-12103 (2002) に記載の方法に従って実施できる（例えば、テトラヒドロフラン中、３％の触媒の存在下、不活性雰囲気下で、２０℃、１時間、１．６当量の式６の化合物を式５の化合物と反応させる）。
【００８８】
式７の化合物は、キラル中心で同じ立体化学構造を有する、対応する式８のブロモ化合物：
【化２０】
【００８９】
を、溶媒（例えばＴＨＦ）中、アルキルリチウムで処理することにより製造できる。
【００９０】
式８の化合物は、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式９の化合物：
【化２１】
【００９１】
を、例えばＴＢＤＭＳＣｌと反応させるなど、キラル中心の立体化学構造を保持する標準的な条件を用いて保護することにより製造される。
【００９２】
化合物９の単一の立体異性体は、式１０の化合物：
【化２２】
【００９３】
から、エナンチオ選択的還元(例えば Brown, H.C., et al. J. Am. Chem. Soc., 110, 1539-1546 (1988)を参照のこと)か、または化合物９のラセミ体に還元し、ついで光学分割することのいずれかにより製造できる。
【００９４】
式４の化合物は、例えばSuzuki, M., et al., J.Am.Chem.Soc., 107, 3348-3349 (1985) などの、天然プロスタグランジンの合成中に見られ、種々の経路により合成できる。
【００９５】
Taber, D.F., et al., J. Org. Chem., 62, 194-198 (1997) により開示された経路に基づく１つの経路を以下に示す。
【化２３】
【００９６】
他の可能な方法は、プロパルギルアルコールに対して異なるアルキル化剤を用いる（下記に示す）が、アルキル化剤の製造にはさらなるステップを必要とする。この例には、ブロモ酪酸のオルトエステルのアルキル化がある(Patterson, J.W., et al., Synthesis, 1985, 337-338)。５−ヘキシン酸のオルトエステルをＢｕＬｉ／ホルムアルデヒドと反応させて同じ中間体を得ている(Syn. Comms. 1989, p.1509)。さらなる可能な経路には、５−ヘキシン酸（Aldrichより市販）と塩基およびホルムアルデヒドとを直接反応させることを含む。
【化２４】
【００９７】
式１の４つの化合物への代替経路の１つは、不斉中心が同じ立体化学構造を有する式１１の化合物：
【化２５】
【００９８】
から、最初に水素化ナトリウムと反応させ、ついでカリウムアミドまたはブチルリチウムなどの強塩基と反応させてジアニオン(Weiler, L., J.Am.Chem.Soc., 92, 6702-6704 (1970) および Modern Synthetic Reactions, 第2版 1972, H.O. House, p. 553などを参照のこと）を合成し、ついでこれをハロペンタン酸エステルと反応させて置換エステルを得ることができ(Huckin, S.N. and Weiler, L., Can.J.Chem., 52, 2157 (1974))、ついでこれを加水分解し、例えばコリジン中、ヨウ化リチウムで処理するか、またはＤＭＳＯ中シアン化ナトリウムで処理するなどの標準的な条件で脱炭酸(Modern Synthetic Reactions, 第2版 1972, H.O. House, p. 511-517 を参照のこと)して得ることができる経路である。ハロペンタン酸エステルをさらに反応性の高い式４のハロゲン化アリルなどのアルキル化剤と置き換え、ついで二重結合を還元することが必要な場合もある。
【００９９】
式１１の化合物は、２つの不斉中心のそれぞれで同じ立体化学構造を有する式１２の化合物：
【化２６】
【０１００】
と、トルエンまたはＴＨＦなどの溶媒中、穏やかに加熱しながら、炭酸ジメチルおよび、水素化ナトリウムなどの塩基とを反応させることにより合成できる。
【０１０１】
式１２の化合物は、シクロペント−２−エノン（式５）：
【化２７】
【０１０２】
と、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式１３の化合物：
【化２８】
【０１０３】
とを、遷移金属触媒（好ましくはＲｈ（Ｉ））の存在下、キラルリガンド（好ましくはＢＩＮＡＰ）の存在下で、ボロン酸付加(Takaya, Y., et al., J.Am.Chem.Soc., 120, 5579-5580 (1998) and Hayashi, T., Synlett, SI, 879-887 (2001)を参照のこと)させることにより合成できる。適切な条件は、ジオキサン水溶液中、６０℃、２０時間での、触媒（３％）およびキラルリガンドの使用を含む。
【０１０４】
既知の化学反応例と同様に、Ｓ−ＢＩＮＡＰの使用により式１２ａの化合物：
【化２９】
【０１０５】
が得られる一方、Ｒ−ＢＩＮＡＰの使用により、式１２ｂの化合物：
【化３０】
【０１０６】
が得られる。
【０１０７】
式１３の化合物は、標準法により、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式８の化合物から製造できる。この方法は、最初、溶媒（例えばＴＨＦ）中、リチウム交換反応試薬（例えばｔ−ブチルリチウム）により、適切な温度（ブチルリチウム／ＴＨＦの場合は−７８℃）で処理し、ついで適切なホウ素試薬（例えばＢ（Ｏｉ−Ｐｒ）３）で処理し、ついで加水分解（例えば水酸化カリウムによる）することを含む(Thompson, W.J. and Gaudino, J., J. Org. Chem., 49, 5237-5243 (1984))。
【０１０８】
式１３の化合物から、不斉中心が同じ立体化学構造を有する式１１の化合物への代替経路の１つは、式１３の化合物と、式１４のメチルカルボキシ置換シクロペント−２−エノン：
【化３１】
【０１０９】
との、遷移金属触媒（好ましくはＲｈ（Ｉ））の存在下、キラルリガンド（好ましくはＢＩＮＡＰ）の存在下でのボロン酸付加による反応である。適切な条件は、ジオキサン水溶液中、６０℃、２０時間での、触媒（３％）およびキラルリガンドの使用（すなわち、化合物５と式１３の化合物とのカップリングに用いる反応条件と同様）を含む。
【０１１０】
式１の４つの化合物へのさらなる１つの代替経路は、不斉中心が同じ立体化学構造を有する式１５の化合物：
【化３２】
【０１１１】
から、例えばＤＭＦ中、水素化ナトリウムなどの強塩基を反応させてモノアニオンを得、ついでこれをハロヘプタン酸エステルと反応させて置換ケトエステルを得ることができ、ついでこれを加水分解し、例えばコリジン中、ヨウ化リチウムで処理するか、またはＤＭＳＯ中、シアン化ナトリウムで処理するなどの標準的な条件を使用して脱炭酸することができる経路である(Modern Synthetic Reactions, 第2版 1972, H.O. House, p. 511-517 を参照のこと)。シクロペンタノン上のトランス配置は、立体障害によって起こる。
【０１１２】
式１５の化合物は、キラル中心で同じ立体化学構造を有する式１３の化合物と、式１６のメチルカルボキシ置換シクロペント−２−エノン：
【化３３】
【０１１３】
(Funk, R.L., et al., J.Am.Chem.Soc, 115, 8849-8850 (1993)) とを、遷移金属触媒（好ましくはＲｈ（Ｉ））の存在下、キラルリガンド（好ましくはＢＩＮＡＰ）の存在下でカップリングさせることにより合成できる。適切な条件は、ジオキサン水溶液中、６０℃、２０時間での、触媒（３％）およびキラルリガンドの使用（すなわち、化合物５と式１３の化合物とのカップリングに使用する反応条件と同様）を含む。
【０１１４】
あるいはまた、（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（式１７）の立体選択的合成は、以下の一般合成経路により達成されることができる。
【化３４】
【０１１５】
式１７の化合物は、４−ヘキシル−フェニル側鎖上の−ＯＨ基がアルコール保護基で保護されている化合物１８から製造できる。
【化３５】
【０１１６】
前述のように、特に好ましいアルコール保護基は、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）などのシリル基であり、これは、例えば酸水溶液および補助溶剤（例えばＴＨＦ）により除去できる。
【０１１７】
式１８の化合物は、カルボキシメチル基を除去し、ヘプタン酸エステルを加水分解することにより、式１９の化合物から製造できる。これは、例えば、ヨウ化リチウムおよび２，４，６−トリメチルピリジン（コリジン）を用いて反応させることにより達成できる。
【化３６】
【０１１８】
化合物１９は、式２０の化合物にヘプチル−エチルエステル側鎖を付加させることにより合成できる。
【化３７】
【０１１９】
これは、−ＣＯ２Ｍｅ基に隣接した水素原子を除去するために適切な塩基を用いて式２０の化合物を処理することにより達成できる。この反応のための好ましい塩基は、ＮａＨの無水溶媒（ＤＭＥなど）溶液である。
【０１２０】
続いて、得られた化合物に７位が活性化されたヘプタン酸エチルを付加させることにより式１９の化合物を得る。ヘプタン酸エチルは、７位でハロゲン原子により活性化されていることが好ましい。このハロゲン原子は、臭素原子であることがさらに好ましい。活性化ヘプタン酸エチルの付加中に触媒を含有することが必要とされる場合もある。かかる触媒は、好ましくはヨウ化ナトリウムである。
【０１２１】
式２０の化合物は、エステル交換反応により式２１の化合物から製造できる。
【化３８】
【０１２２】
化合物２０のメチルエステルの合成は、密閉容器中で、化合物２１をメタノールと共に加熱することにより達成できる。
【０１２３】
式２１の化合物は、式２２の不飽和カルボニル化合物への１，４−付加により製造できる。
【化３９】
【０１２４】
これは、式２３の有機金属試薬を銅（Ｉ）化合物と反応させ、ついで式２２の化合物を付加させることにより達成できる。
【化４０】
【０１２５】
ここで式２３中のＭは、銅よりも電気陰性度が低い元素を表す。好ましくはＭはＬｉ、ＭｇＸ、ＢＲ２およびＺｎＸであり、ここでＸはハロゲン原子を表す。
【０１２６】
式２２と式２３の化合物のカップリング反応に用いる銅（Ｉ）試薬は、好ましくは陰イオン性クプラートであり、さらに好ましくはＬｉＣｕ−（２−Ｔｈ）ＣＮ（リチウム２−チエニルシアノクプラートとして知られる）である。
【０１２７】
式２３の化合物は、式２４のハロゲン化物の標準的な有機金属生成反応により製造できる。
【化４１】
【０１２８】
式２４において、Ｘはハロゲン原子であり、好ましくはＩまたはＢｒである。
【０１２９】
式２２の化合物は、Tetrahedron 1996, 52, 971-986 に記載の方法により、容易に入手できる出発物質から製造できる。
【０１３０】
頭字語
便宜上、多くの化学基は、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ−プロピル（ｎＰｒ）、ｉｓｏ−プロピル（ｉＰｒ）、ｎ−ブチル（ｎＢｕ）、ｓｅｃ−ブチル（ｓＢｕ）、ｉｓｏ−ブチル（ｉＢｕ）、ｔｅｒｔ−ブチル（ｔＢｕ）、ｎ−ヘキシル（ｎＨｅｘ）、シクロヘキシル（ｃＨｅｘ）、フェニル（Ｐｈ）、ビフェニル（ｂｉＰｈ）、ベンジル（Ｂｎ）、ナフチル（ｎａｐｈ）、メトキシ（ＭｅＯ）、エトキシ（ＥｔＯ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）およびアセチル（Ａｃ）を含む（これに限定するものではない）公知の略語を用いて表される。
【０１３１】
便宜上、多くの化学化合物は、メタノール（ＭｅＯＨ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、イソプロパノール（ｉ−ＰｒＯＨ）、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、エーテルもしくはジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、酢酸（酢酸）、ジクロロメタン（塩化メチレン、ＤＣＭ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、酢酸エチル（ＥＡ）、１．２−ジメトキシエタン（ＤＭＥ）およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む（これに限定するものではない）公知の略語を用いて表される。
【０１３２】
選択性
他のＥＰ受容体（すなわちＥＰ１、ＥＰ３、ＥＰ４）に対する、ＥＰ２受容体アゴニストの選択性は、ＥＰ２のＫｉ（以下を参照）を他のＥＰ受容体のＫｉ（以下を参照）により割ることにより数量化できる。得られる逆比は、好ましくは１０以上であり、さらに好ましくは１００以上である。
【実施例】
【０１３３】
（実施例）
ＮＭＲスペクトルは、Bruker AV300またはBruker DPX400のいずれかで測定した。マススペクトルはWaters ZMDシングル四重極質量分析計で測定した。旋光度はPerkin Elmer旋光計341で測定した。
【０１３４】
実施例１：ＡＨ１３２０５のメチルエステルの４立体異性体をそれぞれが含む２つの混合物の合成
（ａ）（ｉ）１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オン（１）の合成
【化４２】
【０１３５】
ＡｌＣｌ３（８３ｇ）およびブロモベンゼン（２００ｍＬ）の混合物に、氷冷下、撹拌しながら、窒素雰囲気下で、３０分にわたって塩化ヘキサノイル（７５ｍＬ）を滴下した。ついで混合物を８０℃（外部）で１．５時間加熱したところ、溶液は深紅色に変化していた。ついで混合物を冷却し、６００ｍＬの氷水中に注ぎ、次にＤＣＭ（８００ｍＬ）で抽出した。ついで有機抽出物をブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、減圧下で濃縮した。ついで濃縮物をイソヘキサン（１Ｌ）で処理し、終夜フリーザー中に放置したところ、結晶化が起こった。わずかにオフホワイトの固体を濾過し、さらに冷ヘキサンで洗浄して表題化合物（８４ｇ）を得た。ｎｍｒおよびｔｌｃにより、十分に純粋であることが確認された。1H NMR (CDCl3, δ): 0.95 (3H, t); 1.4 (4H, m); 1.75 (2H, m); 2.95 (2H, t); 7.6 (2h, d); 7.85 (2H, d)
（ａ）（ｉｉ）（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｓ−ＢＰＨ）（２ａ）の合成
【化４３】
【０１３６】
−２５℃に冷却した塩化（−）−ＤＩＰ［Ｂ−クロロジイソピノカンフェニルボラン］（１３．５ｇ）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液に、温度を−２０℃以下に保ちながら５〜１０分かけて１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オン（１０ｇ）の無水ＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液を加えた。混合物をさらに６時間、−２５℃に維持し、ついで激しく撹拌しているジエタノールアミン（１２ｍｌ）およびトリエチルアミン（１０ｍｌ）の混合物のエーテル（２５０ｍｌ）溶液中に加えた。混合物を終夜撹拌し、希塩酸、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣をジクロロメタンを用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、ついでヘプタンから再結晶して化合物２ａ（４．５ｇ；ｍ．ｐ．７０〜７１℃）を得た。
【０１３７】
［α］Ｄ２４＝−２６．５（ｃ＝４．００；ＣＨＣｌ３）
1H NMR (CDCl3, δ): 0.85 (3H, t); 1.2-1.9 (9H, m); 4.6 (1H, t); 7.15 (2H, d); 7.45 (2H, d).
HPLC(Chiracel OD 250 x 4.6mm，溶離液ヘキサン:IPA(99:1)，流速0.5ml/min，λ=254nm): ４４分（１００％ｅ．ｅ．）．
（ａ）（ｉｉｉ）（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｒ−ＢＰＨ）（２ｂ）の合成
【化４４】
【０１３８】
実施例１（ａ）（ｉｉ）に記載の方法と同様な方法により、塩化（＋）−ＤＩＰ［Ｂ−クロロジイソピノカンフェニルボラン］（１３．５ｇ）および１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オン（１０ｇ）から化合物２ｂ（４ｇ；ｍ．ｐ．７０〜７１℃）を製造した。
【０１３９】
［α］Ｄ２４＝＋２７．３（ｃ＝４．０６；ＣＨＣｌ３）
m/z(EIMS):256,258
1H NMR (CDCl3, δ): 0.85 (3H, t); 1.2-1.9 (9H, m); 4.6 (1H, t); 7.15 (2H, d); 7.45 (2H, d).
HPLC(Chiracel OD 250 x 4.6mm，溶離液 ヘキサン: IPA（99:1），流速0.5ml/min，λ=254nm): ４７分（１００％ｅ．ｅ．）.
化合物２ａおよび２ｂの絶対立体化学構造を、Brown, H.C., et al. J. Am. Chem. Soc., 110, 1539-1546 (1998) に記載されている、長鎖芳香族ケトンを還元する文献方法から類推して帰属した。これらのアルコールは、キラルＨＰＬＣにより本質的にホモキラルであることが示された。
【０１４０】
（ａ）（ｉｖ）（Ｓ）−（−）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｓ−ＢＰＨ）（２ａ）の代替合成
【化４５】
【０１４１】
ＢＨ３・ＴＨＦ（１Ｍ ＴＨＦ溶液，２３４ｍＬ，２３４ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で撹拌し、−１０℃に冷却し、ついで（Ｒ）−２−メチル−ＣＢＳ−オキサザボロリジン（２４ｍＬ，２４ｍｍｏｌ）で処理した。２０分撹拌後、１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オン（１）（４８．３ｇ）のＴＨＦ（３７９ｍＬ）溶液を１時間にわたって加え、ついでさらに２０分間撹拌した後、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）で注意深くクエンチした（Ｈ２が発生する）。ＭｅＯＨは、−１０℃ではゆっくり反応するので、ＲＴでクエンチすることが望ましい。ついで混合物を減圧下で濃縮し、次にＭｅＯＨ（３００ｍＬ）に再度溶解してＨＣｌ（２Ｍ Ｅｔ２Ｏ溶液，４０ｍＬ）で処理した。溶液を５分間撹拌し、ついで減圧下で濃縮し、Ｅｔ２Ｏで粉末化して、濾過により固体を除いた。母液を再度減圧下で濃縮し、ついで−１０℃でヘキサン（４８０ｍＬ，１０倍量）で再結晶して、表題化合物をふわふわした白色固体（２０．７ｇ）で得た。
【０１４２】
（ｂ）（ｉ）（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（３ａ）の合成
【化４６】
【０１４３】
Ｓ−ＢＰＨ（２ａ）（１０ｇ）、塩化ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（７ｇ）およびイミダゾール（３．７ｇ）の混合物を無水ジメチルホルムアミド（１００ｍｌ）中で、１６時間撹拌した。混合物を石油エーテルと水の間で分配し、２層を分離した。有機層を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテルによりカラムクロマトグラフィーにかけ、化合物３ａ（１４．５ｇ）をオイルで得た。
【０１４４】
m/z (EIMS): 370, 372
1H NMR (CDCl3, δ): -0.2 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.85 (3H, t); 1.25 (6H, m) 1.55 (2H, m); 4.6 (1H, m); 7.1 (2H, d); 7.4 (2H, d).
（ｂ）（ｉｉ）（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（３ｂ）の合成
【化４７】
【０１４５】
実施例１（ｂ）（ｉ）に記載の方法と同様な方法で、Ｒ−ＢＰＨ（２ｂ）（１２．５ｇ）から化合物３ｂ（１８．５ｇ）を製造した。
【０１４６】
m/z (EIMS): 370, 372
1H NMR (CDCl3, δ): -0.2 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.85 (3H, t); 1.25 (6H, m) 1.55 (2H, m); 4.6 (1H, m); 7.1 (2H, d); 7.4 (2H, d).
（ｃ）２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オン（５）の合成
【化４８】
【０１４７】
市販されているこの既知化合物は、Bagli, J. et al., J. Org. Chem., 1972, 37, 2132-2138 および Bernady, K.F., J.Org. Chem., 1980 45, 4702-4715 の方法により、エチル２−オキソシクロペンタンカルボン酸エチルから３ステップで製造した。
【０１４８】
（ｄ）（ｉ）２−｛４−［１−（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（約３：１のトランス：シス混合物））（６ｂ）の合成
【化４９】
【０１４９】
（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（３ｂ）（７．２ｇ）の無水ジエチルエーテル（１００ｍｌ）溶液に、温度を−６０℃以上にならないようにして、−７８℃でｔｅｒｔ−ブチルリチウム（１．５Ｍヘキサン溶液；２８ｍｌ）を滴下した。混合物を−７８℃でさらに３時間放置した。銅（１）ペンチン（２．５ｇ）の無水ジエチルエーテル（５６ｍｌ）スラリーをヘキサメチルリン酸トリアミド（８ｍｌ）で処理し、混合物を室温で数分間撹拌し、溶液を生成させた。ついでこの用事調製した溶液を−７８℃でアリールリチウム溶液に滴下し、さらに１時間放置し、これに２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オン（５）（４ｇ）の無水ジエチルエーテル（４０ｍｌ）溶液を加えた。反応混合物を−７８℃に１５分間維持し、ついで−２５℃〜−１０℃にさらに１時間維持した。冷混合物を希塩酸とエーテル間ですばやく分配し、有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣をジクロロメタン：石油エーテル（２：１）、ついで酢酸エチル：石油エーテル（３：１７）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、トランス：シス異性体混合物（約３：１）で化合物６ｂ（７．２ｇ）を得た。
【０１５０】
1H NMR (CDCl3, δ) トランス-ジアステレオマー: -0.25 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 2.95 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.15 (2H, d); 7.25 (2H, d).
1H NMR (CDCl3, δ) シス-ジアステレオマー: -0.27 (3H, s); -0.02 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 3.55 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.0 (2H, d); 7.15 (2H, d).
（ｄ）（ｉｉ）２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（トランス：シス混合物（約３：１））（６ａ）
【化５０】
【０１５１】
表題化合物およびそのジアステレオ異性体ならびに約３０％のそれらのシス−異性体（６ａ）（７．３ｇ）を、実施例１（ｄ）（ｉ）に記載の方法と同様な方法で、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（３ａ）（７．２ｇ）および２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オン（５）（４ｇ）から製造した。
【０１５２】
1H NMR (CDCl3, δ) トランスジアステレオマー: -0.25 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 2.95 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.15 (2H, d); 7.25 (2H, d).
1H NMR (CDCl3, δ) シスジアステレオマー: -0.27 (3H, s); -0.02 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 3.55 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.0 (2H, d); 7.15 (2H, d).
（ｄ）（ｉｉｉ）２−｛４−［１−（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（トランス：シス混合物（約３：１））（６ｂ）の代替合成
【化５１】
【０１５３】
（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）−１−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（３ｂ）（０．８ｇ）、マグネシウム屑（０．１１ｇ）、ヨウ素の結晶１つおよび１，２−ジブロモエタン（５μｌ）と無水ＴＨＦ（４ｍｌ）の混合物を加熱還流して反応を開始し、ついで２時間３５℃に維持してグリニャール溶液を調整した。塩化リチウム（０．１２５ｇ）および臭化銅（１）・ジメチルスルフィド錯体（０．６１ｇ）を無水ＴＨＦ（４．５ｍｌ）中、数分間撹拌し、ついで−７８℃に冷却し、その後グリニャール溶液を滴下した。得られた混合物を−７８℃で５分間維持し、ついで塩化トリメチルシリル（０．３８ｍｌ）を加え、さらに２−（６−カルボメトキシへキシル）シクロペント−２−エン−１−オン（０．１８ｇ）の無水ＴＨＦ（１．５ｍｌ）溶液を加えた。混合物を−７８℃で１５分間維持し、０℃で３０分間維持し、ついで１時間室温まで加温した。混合物を−２０℃まで再度冷却し、その後希塩酸（４ｍｌ）を加え、２分間激しく撹拌した。冷混合物を石油エーテルおよび飽和塩化アンモニウム溶液間で分配し、２層を分離した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテル：酢酸エチル（４：１）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、化合物６ｂ（０．２０ｇ）をシスおよびトランス異性体の混合物として分離した。
【０１５４】
1H NMR (CDCl3, δ) トランスジアステレオマー: -0.25 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 2.95 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.15 (2H, d); 7.25 (2H, d).
1H NMR (CDCl3, δ) シスジアステレオマー: -0.27 (3H, s); -0.02 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.8-2.0 (22H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 3.55 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.6 (1H, m); 7.0 (2H, d); 7.15 (2H, d).
（ｅ）（ｉ）トランスおよびシス−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（７ａ）（混合物１）の合成
【化５２】
【０１５５】
Ａ：（１Ｓ，２Ｒ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＳＲＳ］
Ｂ：（１Ｒ，２Ｒ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＲＲＳ］
Ｃ：（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＲＳＳ］
Ｄ：（１Ｓ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＳＳＳ］
２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（６ａ）（０．２ｇ；トランス：シス（約３：１）混合物）をＴＨＦ（３．５ｍｌ）および希塩酸（２Ｍ；１ｍｌ）の混合物中、２５℃で２０時間撹拌した。反応混合物をブラインに加え、ジクロロメタンで２度抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテル：酢酸エチル（３：１）、ついでジクロロメタン：メタノール（２００：３）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、７ａ（混合物１）（０．０９５ｇ）をオイル（トランス：シス（約９５：５）混合物）で得た。
【０１５６】
m/z (EIMS): 402
IH NMR (CDCl3, δ) トランスジアステレオマーのみ: 0.8-2.0 (23H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 2.95 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.65 (1H, t); 7.25 (2H, d); 7.35 (2H, d).
（ｅ）（ｉｉ）トランスおよびシス−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（７ｂ）（混合物２）
【化５３】
【０１５７】
Ｅ：（１Ｓ，２Ｒ）−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＳＲＲ］
Ｆ：（１Ｒ，２Ｒ）−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＲＲＲ］
Ｇ：（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＲＳＲ］
Ｈ：（１Ｓ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｒ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステル［ＳＳＲ］
実施例１（ｅ）（ｉ）に記載の方法と類似の方法により、２−｛４−［１−（Ｒ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマー（０．３ｇ；トランス：シス（約３：１）混合物）（６ｂ）から化合物７ｂ（０．１５ｇ；トランス：シス（約９５：５）混合物））を製造した。
【０１５８】
ｍ／ｚ（ＥＩＭＳ）：４０２
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，δ）トランス異性体のみ: 0.8-2.0 (23H, m); 2.2-2.6 (6H, m); 2.95 (1H, m); 3.65 (3H, s); 4.65 (1H, t); 7.25 (2H, d); 7.35 (2H, d).
実施例２：トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸メチルエステルジアステレオマーの分離
移動層に１００％エタノールを用いるキラル固定相(ChiralPak AD, Daicel Chemical Industries, Japan)により、エステル混合物１または２のいずれかの９０ｍｇのサンプルをＨＰＬＣにかけて、長さ２５ｃｍ、内径２ｃｍのカラムを用い、約１時間で完全に分離することができた。いずれかの混合物の１ｇのサンプルを、９０ｍｇ量で連続１１回分離した（流速：４ｍｌ／ｍｉｎ；検出：２３０ｎｍ）。ついで回収したエステルを以下のように加水分解して酸にした。メチルエステル（０．４５ｇ）のテトラヒドロフラン／水（４：１ｖ／ｖ）（４０ｍｌ）溶液に、１Ｍ水酸化リチウム水（１．３７ｍｌ，１．２当量）を滴下し、溶液を周囲温度で終夜撹拌した。溶液を減圧下で濃縮し、水で希釈し、ｐＨ〜１に酸性化し、酢酸エチルで抽出した。抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、３０℃、減圧下で濃縮して、酸をオイルで得た。メチルエステルの各混合物（１ｇ）から出発した酸の回収量は、混合物１ピーク１から０．３９２ｇ、混合物１ピーク２から０．４２７ｇ、混合物２ピーク１から０．４３３ｇ、そして混合物２ピーク２から０．３８１ｇであった。
【０１５９】
表示されたメチルエステルピークのそれぞれから誘導される酸について旋光度を記録した。本明細書においては、明確にするために、分離ピークから得られた酸を、以後、混合物ｍ酸ピークｍと呼ぶ。
【０１６０】
混合物１酸、ピーク１
［α］２５−４２２．４（３６５ｎｍ）、−１４２．９（４３６ｎｍ）、−５７．３（５４６ｎｍ）、−４７．９（５７８ｎｍ）、−４５．１（５８９ｎｍ）
（ｃ＝０．６２７５，ＣＨＣｌ３；光路長１００ｍｍ）
混合物１酸、ピーク２
［α］２５＋３１４．９（３６５ｎｍ）、＋８０．６（４３６ｎｍ）、＋２２．７（５４６ｎｍ）、＋１７．３（５７８ｎｍ）、＋１６．０（５８９ｎｍ）（ｃ＝１．３６５，ＣＨＣｌ３；光路長１００ｍｍ）
混合物２酸、ピーク１
［α］２５−２９９．４（３６５ｎｍ）、−７７．８（４３６ｎｍ）、−２２．２（５４６ｎｍ）、−１６．９（５７８ｎｍ）、−１５．５（５８９ｎｍ）
（ｃ＝０．８１，ＣＨＣｌ３；光路長１００ｍｍ）
混合物２酸、ピーク２
［α］２５＋４２２．６（３６５ｎｍ）、＋１４０．６（４３６ｎｍ）、＋５５．５（５４６ｎｍ）、＋４５．９（５７８ｎｍ）、＋４２．９（５８９ｎｍ）
（ｃ＝０．８８５，ＣＨＣｌ３；光路長１００ｍｍ）
化学的純度は、ＮＭＲおよびＬＣ−ＭＳにより測定した。キラル純度は、下記のように、キラルＨＰＬＣにより測定した。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）により酸の構造を確認したが、微量のメチルエステルの存在が示された。残留酢酸エチルと共に、シス異性体と推定される低レベルの不純物がいつも存在した。
【０１６１】
１３Ｃ ＮＭＲは、エステルのジアステレオマー間の微小な差を示した。混合物１酸ピーク１および混合物２酸ピーク２は、混合物１酸ピーク２および混合物２酸ピーク１と同様に、エナンチオマーであることが示された。これは、上記の各化合物の旋光度データに対応する。
【０１６２】
実施例３：分離メチルエステルの加水分解
０．４５ｇのメチルエステル（実施例２において分離）を４０ｍｌのＴＨＦ水溶液（４：１ｖ／ｖ）に溶解し、１．３７ｍｌの１Ｍ水酸化リチウム溶液（１．２当量）を滴下し、ついで溶液を周囲温度で終夜撹拌した。ついで、反応をＬＣ−ＭＳで検査したところ、一般的に、混じりけのない遊離酸の生成が認められ、残存するエステルは微量であった。反応物を減圧下で濃縮してＴＨＦを除去し、水をさらに加えた。撹拌溶液に１Ｍ塩酸を滴下してｐＨ〜１にし、ついで溶液を酢酸エチルで分配した。水層を除去し、酢酸エチル層をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧下で留去した。残留したオイルを目方を量ったバイアルに少量の酢酸エチルで移し、窒素気流で溶媒を除去した。ついでサンプルを乾燥ピストルにいれ、３０℃／１ｍｂａｒで終夜ポンプを使った。
【０１６３】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）により、生成物の構造が遊離酸であることを確認したが、一般的に微量のメチルエステルの存在が示された。シス異性体と推定される低レベルの不純物が、残留酢酸エチルと同様に常に存在した。
【０１６４】
４つの分離酸異性体のそれぞれの少量サンプルを再エステル化し、ついで分析用キラルＨＰＬＣによりエステルを分析することにより生成物のキラル純度を評価した。約５ｍｇの酸をエーテルに溶解し、用事調製したジアゾメタンのエーテル溶液で黄色が消えなくなるまで処理した。周囲温度で３０分間放置後、溶液に窒素を吹き付けて溶媒を除去し、キラルＨＰＬＣのために、エタノールに再度溶解した。分析用ChiralPak ADカラム（２５ｃｍｘ０．４６ｃｍ）、固定相として１００％エタノール、流速０．２５ｍｌ／ｍｉｎ、周囲温度でＵＶ検出（２３０ｎｍ）という条件で分析を行った。各異性体についての典型的な保持時間は：混合物１酸、ピーク１：２３．５ｍｉｎ；混合物１酸、ピーク２：５６ｍｉｎ；混合物２酸、ピーク１：２３．７ｍｉｎ；混合物２酸、ピーク２：３５ｍｉｎであった。各サンプルのキラル純度は、本質的に１００％であった。
【０１６５】
実施例４：トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸の４つの立体異性体の絶対立体化学構造の帰属
円二色性を用い、酸側鎖−シクロペンタノン結合の絶対配置を帰属することにより、ＡＨ１３２０５立体異性体の絶対立体化学構造を決定した。ＡＨ−１３２０５の４つの立体異性体（全て、シクロペンタノン上で２つの側鎖がトランス−配置を有する）を分離した（混合物１酸、ピーク１；混合物１酸、ピーク２；混合物２酸、ピーク１および混合物２酸、ピーク２）。これらは室温でオイルである。
【０１６６】
絶対配置の帰属に役立てるために、標準物質もまた分析した。標準物質はプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）、（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｓ−ＢＰＨ）および（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｒ−ＢＰＨ）である（以下に示す）。
【化５４】
【０１６７】
サンプルを室温で保存し、１００％エタノールに溶解し、分析の前に表１に示す濃度に希釈した。
【表１】
【０１６８】
ＰＧＥ２、Ｒ−ＢＰＨおよびＳ−ＢＰＨの分析には光路長１．０ｃｍの石英キュベットを用いた。４つのＡＨ１３２０５立体異性体の分析には光路長０．１ｃｍの石英キュベットを用いた。エタノールの容量は、Gilsonマイクロピペットを用いて測定したが、これらは用事にすばやくキャリブレーションする。
【０１６９】
機器のキャリブレーションおよび判定基準
波長精度キャリブレーション基準は満たされていた。０．０６％（ｗ／ｖ）ｄ−１０−カンファースルホン酸アンモニウム（ＡＣＳ）水溶液の分析により、シグナル強度が仕様書の範囲内であることが確認されたので、スケールファクターを必要としなかった。各サンプルのスペクトルから対応する水の基準値を差し引き、吸収バンドの外側の、３６０〜４００ｎｍ領域におけるスペクトルをゼロにした。
【０１７０】
結果
全てのサンプルについて、ＵＶおよびＣＤの単一分析を行った。標準品であるＰＧＥ２およびＲ−／Ｓ−ＢＰＨの、ＵＶおよびＣＤの基準値を差し引いてゼロにしたデータを図１ａ、１ｂ、２ａおよび２ｂに示す。ＡＨ１３２０５の４つの立体異性体についてのデータを図３ａおよび３ｂに示す。結果を表２にまとめる。
【表２】
【０１７１】
立体異性体サンプル（混合物１酸、ピーク１；混合物１酸、ピーク２；混合物２酸、ピーク１および混合物２酸、ピーク２）は、２〜３の重要な遷移を示す。１つは〜２９０ｎｍのｎ→→π＊遷移によるものであり、もう１つは約２６０ｎｍの芳香環π→π＊遷移によるものであり、もう１つはこの領域よりも低波長側の遷移によるものである。分子のｎ→π＊部分に関するモデルとしてＰＧＥ２を用い、π→π＊部分のモデルとしてＲ−／Ｓ−ＢＰＨを用いた。π→π＊吸光度は弱く、ｎ→π＊バンドの分析に影響しないことが見いだされた。
【０１７２】
ＰＧＥ２の誘起ＣＤは、カルボニルに対してα位の酸基鎖により支配されていると予想される。標準的なオクタント則を用いる分析により、この鎖は-ｚ、＋ｙおよび-ｘオクタント中に存在し、従って-ｘｙｚは（すなわち予想されるＣＤ曲線は）負である。これは実験的に認めれらた（表２）。混合物１酸、ピーク１および混合物２酸、ピーク１サンプルは負のＣＤ曲線を示し、従って側鎖結合部位でＰＧＥ２と同じ絶対立体化学構造を有する。混合物１酸、ピーク２および混合物２酸、ピーク２サンプルは正のＣＤ曲線を示し、従って、この結合部位でＰＧＥ２と反対の絶対立体化学構造を有する。
【０１７３】
ＰＧＥ２とのパターンマッチングおよびオクタント則相関関係の両方により、混合物１酸、ピーク１および混合物２酸、ピーク１サンプルは、シクロペンタノンへの酸側鎖の結合部位である、カルボニルに対するα位の炭素で、ＰＧＥ２と同じ絶対配置を有することが示された。混合物１酸、ピーク２および混合物２酸、ピーク２サンプルは、この部位でＰＧＥ２と反対の配置を有する。これらの結果を表３に示す。
【表３】
【０１７４】
これらのＣＤ研究による絶対立体化学構造の決定は、化合物（２２）を用いる関連立体選択的合成の文献からの結果と比較して予測される、化合物１７［ＲＳＳ］について記載された立体選択的合成により予測される結果と一致する。４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル側鎖のヘキシル鎖の１位における立体化学構造は、出発物質から既知なので、表３における帰属によりそれぞれの異性体の立体化学構造を決定することができる。これらの結果を以下に示す。
【化５５】
【０１７５】
実施例５：（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（混合物１酸ピーク１）の製造
（ａ）（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステル（２５）の製造
【化５６】
【０１７６】
（Ｓ）−ｌ−（４−ブロモフェニル）−ｌ−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキサン（１．８ｇ）の無水ＴＨＦ（２４ｍｌ）溶液に、−７８℃で、温度を−６５℃以下に保ちながらｔｅｒｔ−ブチルリチウム（１．７Ｍペンタン溶液；５．６ｍｌ）を加えた。−７８℃で２時間撹拌後、リチウム−２−チエニルシアノクプラート（０．２５Ｍ ＴＨＦ溶液；１９．２ｍｌ）を加え、混合物を−７８℃で１時間放置した。ついで５−オキソ−シクロペンテンカルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステル（１．７ｇ）の無水ＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液を得られた混合物に加え、−７８℃で７５分間放置した。
【０１７７】
ついで飽和塩化アンモニウム溶液（１５ｍｌ）を加え、さらに１時間かけて混合物を１０〜１５℃まで暖めた。飽和塩化アンモニウム溶液をさらに加え、混合物を酢酸エチルで２度抽出した。合わせた有機抽出物を塩化アンモニウム溶液で洗浄し、次にブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテル：ジエチルエーテル（３：１）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステル（１．８ｇ）をフォームで得た。
【０１７８】
1H NMR (CDC13, δ): (ケトおよびエノール形の混合物) -0.3, -0.15, -0.1, 0.0, 0.1, 0.35, 0.45, 0.55 (8s); 0.75-2.8 (c); 3.7 (m), 4.1 (m); 4.55 (m); 5.25 (dd); 5.5-5.8 (2 br s); 6.8(d); 6.95-7.5 (c); 11.0 (enol proton, s).
マススペクトル (m/z) ES+: 836.6 (M+Na)+
（ｂ）（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸メチルエステル（２６）の製造
【化５７】
【０１７９】
（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ）−｛３−［Ｎ−ベンゼンスルホニル−Ｎ−（３，５−ジメチルフェニル）アミノ］−２−ボルニル｝エステル（ｌ．ｌｇ）の無水メタノール（６０ｍｌ）溶液を、密閉管中、１５０℃で３時間加熱した。減圧下で溶媒を留去した後、残渣をジクロロメタン：石油エーテル（２：ｌ）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸メチルエステル（３９０ｍｇ）をオイルで得た。
【０１８０】
1H NMR (CDC13, δ):ケト形 -0.2 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.85 (3H, t); 1.1-1.7 (8H, c); 1.95 (1H, c); 2.5 (3H, c); 3.35 (1H, d); 3.7 (3H, s); 3.8 (1H, m); 4.6 (1H, t); 7.15 (2H,d); 7.25 (2H,d).
マススペクトル (m/z) ES+: 611.6 (M+Na)+
（ｃ）（２Ｓ）−１−メトキシカルボニル−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸エチルエステル（２７）の製造
【化５８】
【０１８１】
（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンカルボン酸メチルエステル（３９０ｍｇ）の無水ＤＭＥ（３．５ｍｌ）溶液に水素化ナトリウム（６０％油分散液；３９ｍｇ）を加えた。１時間放置後、７−ブロモヘプタン酸エチル（０．３ｍｌ）および触媒量のヨウ化ナトリウムを加え、混合物を２０時間加熱還流した。
【０１８２】
冷却後、混合物を塩化アンモニウム溶液に加え、ジクロロメタンで２度抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を無水クロロホルム（１０ｍｌ）に溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物の結晶を数個加えた。１時間撹拌後、炭酸水素ナトリウム溶液を加え、有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を０〜５％ジエチルエーテル／ジクロロメタンでシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、（２Ｓ）−１−メトキシカルボニル−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸エチルエステル（２９０ｍｇ）をオイルで得た。
【０１８３】
1H NMR (CDCl3, δ): -0.2 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.85 (3H, t); 1.1-1.8 (20H, c); 2.0 (1H, c); 2.3 (4H, c); 2.6 (2H, c); 3.4 (3H, s); 3.45 (1H, m); 4.15 (2H, q); 4.6 (1H, t); 7.15 (2H,d); 7.25 (2H,d).
マススペクトル (m/z) ES+: 455.4 (M+Na)+
（ｄ）（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（２８）の製造
【化５９】
【０１８４】
（２Ｓ）−１−メトキシカルボニル−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸エチルエステル（２９０ｍｇ）およびヨウ化リチウム水和物（６５０ｍｇ）と２，４，６−コリジン（４ｍｌ）の混合物を３時間加熱還流した。冷却後、混合物を酢酸エチルに加え、希塩酸、ブラインで２度洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテル：酢酸エチル（４：１）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（１９０ｍｇ）をオイルで得た。
【０１８５】
1H NMR (CDC13, δ): -0.2 (3H, s); 0.0 (3H, s); 0.85 (9H, s); 0.85 (3H, t); 1.0-2.3 (24H, c); 2.45 (1H, c); 2.9 (1H, m); 4.6 (1H, t); 7.15 (2H, d); 7.25 (2H, d).
マススペクトル (m/z) ES+: 525.4 (M+Na)+
（ｅ）（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（混合物１酸ピーク１）の製造
【化６０】
【０１８６】
（１Ｒ，２Ｓ）−２−｛４−［１−（Ｓ）−（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ）ヘキシル］フェニル｝−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（１９０ｍｇ）のＴＨＦ（４ｍｌ）溶液および２Ｍ塩酸（１．１ｍｌ）を３０℃で２０時間撹拌した。混合物を水に加え、ジクロロメタンで２度抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧下で留去した。残渣を石油エーテル：酢酸エチル（５：２）でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、（１Ｒ，２Ｓ）−２−［４−（１−（Ｓ）−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸（１１５ｍｇ）をオイルで得た。
【０１８７】
1H NMR (CDCl3, δ): 0.85 (3H, t); 1.0-2.3 (24H, c); 2.45 (1H, c); 2.9 (1H, m); 4.6 (1H, t); 7.25 (2H, d); 7.35 (2H, d).
マススペクトル (m/z)ES-: 387.3 (M-H)-
[α]25 -416.0 (365nm), -139.5 (436nm), -54.9 (546nm), -45.6 (578nm), -42.4 (589nm) (c=0.51, CHCl3; 光路長 100mm)
実施例６：ＥＰ結合とアゴニズム
化合物がヒトＥＰ２受容体に結合する能力と全ての他のＥＰ受容体に対する化合物の選択性は、ヒトＥＰ受容体で安定的にトランスフェクトした細胞株を用い、放射性リガンド競合置換結合実験により明らかにすることができる。ＥＰ２受容体を刺激する化合物の能力は、ヒトリンパ球、単球またはヒト子宮筋層における第二メッセンジャーであるｃＡＭＰの機能アッセイにより明らかにできる。
【０１８８】
試験の詳細
ヒトＥＰ受容体に対する結合能
ヒトＥＰ受容体ｃＤＮＡで安定的にトランスフェクトした細胞から膜を調製した。要約すれば、細胞を集密状態まで培養し、培養フラスコからこすり落とし、遠心分離（８００ｇ，８分，４℃）した。細胞を１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ、２５０ｍＭショ糖、１ｍＭ ＰＭＳＦ、０．３ｍＭインドメタシンを含有する氷冷したホモジナイズ用緩衝液（ｐＨ７．４）で２度洗浄し、前述同様に再度遠心分離した。上澄みを氷上で保存し、ペレットを再度ホモジナイズし、再度遠心分離した。上澄みをプールし、４００００ｇ、４℃で１０分間遠心分離した。得られた膜ペレットを、使用するまで−８０℃で保存した。
【０１８９】
アッセイのために、ヒトＥＰ４、ＥＰ３、ＥＰ２またはＥＰ１受容体を発現している膜を、アッセイ緩衝液、放射性標識［３Ｈ］ＰＧＥ２および０．１〜１００００ｎＭ濃度の化合物を含有するを含有するミリポア（ＭＨＶＢＮ４５）プレート中でインキュベートした。平衡に達するまで、適切な温度と適切な時間でインキュベーションを行った。１０ｕＭＰＧＥ２の存在下で、非特異的結合を測定した。適切な洗浄用緩衝液を用い、真空マニホールド濾過により、結合放射性標識と遊離放射性標識とを分離し、シンチレーション計数により結合放射性標識を測定した。それぞれの緩衝液の成分を以下の表４に示す。
【０１９０】
各受容体に対する各化合物の親和性すなわちｐＫｉは、Cheng-Prusoff式：
【数１】
【０１９１】
を用いて、５０％放射性リガンド置換をもたらす濃度（ＩＣ５０）から算出した。この方法は、Kenakin, T.P., Pharmacologic analysis of drug receptor interaction. (Raven Press, New York 第2版)に記載の方法に従って行った。
【表４】
【０１９２】
シクラーゼ産生に対する化合物の効果
シクラーゼ産生に対する化合物の効果の測定、すなわち、ＥＰ２受容体に対する化合物の有効機能の測定のためのin vitroアッセイを以下に説明する。
【０１９３】
細胞刺激
ヒトＥＰ２受容体を安定的に発現するＨＥＫ細胞をこれらのアッセイに用いた。９６ウェル・ポリ−Ｌ−リジンコートプレート上、５０，０００細胞／ウェルの密度でＨＥＫ−ＥＰ２細胞を培養し、加湿９５％Ｏ２／５％ＣＯ２中、３７℃でコンフルエンスに達するまで増殖させた。培地には、１０％ウシ胎児血清、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００ｎｇ／ｍｌストレプトマイシン、２．５μｇ／ｍｌファンギゾン、２ｍＭグルタミン、２５０μｇ／ｍｌジェネティシンおよび２００μｇ／ｍｌゼオシンを添加したＤＭＥＭを用いた。
【０１９４】
コンフルエンスに達したとき、無添加のＤＭＥＭを用いて培地を洗い流し、ついで１７５μｌのアッセイ緩衝液（１ｍＭ３−イソブチル−１−メチルキサンチンおよび３μＭインドメタシンを含有するＤＭＥＭ）を各ウェルに加えた。これを１時間インキュベートし、細胞を最終濃度１０-９Ｍ〜１０-５Ｍの試験化合物（３連で）で１５分間刺激した。２５μｌの１Ｍ塩酸を添加して、このアッセイを停止した。ついでプレートを最低１２時間、あるいは放射性リガンド置換アッセイに用いるときまで凍結した。
【０１９５】
放射性リガンド置換アッセイ
３７℃でプレートをすばやく解凍し、２５μｌの１Ｍ水酸化ナトリウムで中和した。３０μｌの上澄みを、０．１％ポリエチレンイミンでコートした９６ウェルミリポア（ＭＡＦＮＯＢ）プレートに移した。これらの上澄みを９０μｌのｃＡＭＰアッセイ緩衝液（５０ｍＭトリス，５ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．０）の添加により希釈した。ｃＡＭＰ標準曲線（１０−１１Ｍ〜１０−５Ｍ）を作成した。１５μｌの３’：５’−ｃＡＭＰ−依存性プロテインキナーゼ（最終濃度８μｇ／ウェル）、１５μｌの［３Ｈ］−ｃＡＭＰ（最終濃度２ｎＭ／ウェル）を各ウェルに加えた。
【０１９６】
氷上でプレートを２時間インキュベートし、ついで停止緩衝液として氷冷水を用い、減圧濾過により結合放射性標識と遊離放射性標識とを分離し、ミリポアマニホールドで回収した。フィルタープレートを終夜乾燥し、ついで５０μｌのMicroscintを加えた。Microbeta Triluxシンチレーションカウンターを用いて放射能を測定した。標準曲線からｃＡＭＰの集積を算出し、その数値をｐモルｃＡＭＰ／ウェルとしてプロットした。
【０１９７】
ヒト子宮筋層活性に対する化合物の効果
ヒト組織中のＥＰ２受容体に対する試験化合物の親和性を測定するための、ヒト子宮筋層の平滑筋を用いるin vitro機能アッセイを以下に説明する。
【０１９８】
外科的に切除した子宮のサンプルからヒト子宮筋層の切片を調製した。ついで子宮筋層の縦走筋細片（２ｍｍ（幅）ｘ１０ｍｍ（奥行き））を切り出し、酸素化（９５％Ｏ２／５％ＣＯ２）クレブス液を含有する器官チャンバー中、３７℃で、ステンレススチールフック間につるした。クレブス液の組成には以下を用いた：ＮａＣｌ（１１８．２ｍＭ）、ＫＣｌ（４．６９ｍＭ）、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ（１．１８ｍＭ）、ＫＨ２ＰＯ４（１．１９ｍＭ）、グルコース（１１．１ｍＭ）、ＮａＨＣＯ３（２５．０ｍＭ）、ＣａＣｌ２・６Ｈ２Ｏ（２．５ｍＭ）、インドメタシン３ｘ１０−６Ｍ。
【０１９９】
２５ｍＮに相当する張力下に組織をおいて室温で終夜放置した。次の日、組織を３７℃に維持し、洗浄し、１５ｍＮの張力下におき、ついで少なくとも３０分間平衡化した。MacLabインターフェースを介してアップルマッキントッシュコンピューターに連結したアイソメトリックトランスデューサーを用いて反応を記録した。６０分後、ヒト子宮筋層の筋肉切片を、並列白金線電極およびMultistim D330パルス刺激装置を用いて、電機的に刺激した（パルス幅１５ｍｓ，１５Ｖ、０．５〜４０Ｈｚで１００秒毎に１０秒間）。電気刺激を受けると、ヒト子宮筋層の平滑筋の細片は反応して急速に収縮した。電気刺激に対する反応が安定化（刺激応答の差が１０％以下）したら、細片を増加する濃度の試験化合物（１ｘ１０−７〜１ｘ１０−４Ｍ，各濃度で少なくとも１５分間インキュベート）にさらした。実験の終了時にニトロプルシド・ナトリウム（ＳＮＰ，平滑筋弛緩を引き起こす一酸化窒素供与体）（１ｘ１０−４Ｍ）を加えて、標準緩和反応を起こさせた。化合物の親和性を測定するために、最大反応（ＳＮＰにより引き起こされる標準反応のパーセンテージとして算出）の最大の２分の１の効果を引き起こすために必要な試験化合物の濃度（ＥＣ５０）を算出した。
【０２００】
結果
ヒトＥＰ受容体に対する結合能
これらの試験において、ＡＨ−１３２０５の４つの分離立体異性体の親和性を測定した。結果を図４に示す（データは、４つの実験に関して、平均値±標準誤差で示してある）。混合物１のピークで単離された立体異性体が最も強力であり、ｐＫｉ７．１を示した。結合試験の完全な結果を表５にｐＫｉ値で示す。
【表５】
【０２０１】
この表から、混合物２酸ピーク１が立体異性体の中で最も選択性が優れていることがわかる。
【０２０２】
ｃＡＭＰ産生に対する化合物の効果
これらの試験において、ヒトＥＰ受容体刺激により介在されるｃＡＭＰ産生に対する、分離立体異性体およびＡＨ−１３２０５の効果を評価した。全ての化合物は、同じ最大反応を示したが、それらの有効性は、図５および表６に示すように異なる（データは、４つの実験に関して、平均値±標準誤差で示してある）。
【表６】
【０２０３】
ヒト子宮筋層活性に対する化合物の効果
ＡＨ−１３２０５の適用により、ヒト子宮筋層における、電気的に誘発された収縮が抑制されることが示された。ポイントＡ、ＢおよびＣはＡＨ−１３２０５の量を増加させて添加したポイントに該当する（１０−６、１０−５および１０−４Ｍ）（図６）。ＡＨ−１３２０５を含有するビヒクルはなんら効果を示さないので、効果の有効性はプロスタグランジンＥＰ２受容体との相互作用に基づいている（図７）。
【０２０４】
２つの最も強力な立体異性体（混合物１酸ピーク１および混合物２酸ピーク１）の効果を調べ、ＡＨ−１３２０５の効果と比較した。混合物１酸ピーク１、混合物２酸ピーク１およびＡＨ１３２０５は全て、濃度依存的にＥＦＳ誘発反応を抑制した。ｐＥＣ５０は、５．９±０．２（ｎ＝７）、５．３±０．１（ｎ＝６）および５．３±０．２（ｎ＝７）（図８）であった。観察された最大阻害作用間に有意差は無く、ＥＦＳ誘発収縮抑制は、５６±５％（混合物１酸ピーク１）、５７±２％（混合物２酸ピーク１）および４９±５％（ＡＨ−１３２０５）であった。ＳＮＰは、化合物に加えてさらに抑制を引き起こし、対照ＥＦＳ反応の６０〜７０％と同等であった。ＳＮＰ阻害作用は、６０〜８０分の洗浄期間の後に相殺されたが、試験化合物の阻害作用は相殺されなかった。
【０２０５】
さらに、βアドレナリン受容体アゴニストであるテルブタリンの、子宮筋層のＥＦＳ誘発収縮に対する効果を研究し、ＥＦＳ誘発収縮に対して有意な阻害作用を示さないことが明らかとなった（１０−４Ｍ（ｎ＝７ドナー）で対照ＥＦＳ誘発収縮の９８±５％）
実施例７：ＩＬ−２、ＴＮＦαおよびＩＦＮ−γ産生の阻害
リンパ球は、異種抗原に対する特定の免疫反応および自己免疫疾患の症状発現に関与する単核白血球である。Ｔリンパ球は、ＣＤ３−Ｔ細胞受容体複合体による抗原刺激に反応して、リンパ球の活性化および増殖の重要な因子であるＩＬ−２を産生し、この反応に関与する経路はＮＦ−ＡＴである。この反応は、Ｔ細胞上のＣＤ３分子に選択性を有する選択的モノクローナル抗体を用いてin vitroで明らかにできる。この反応をモデルとし、末梢血から単離された抗ＣＤ３刺激Ｔ細胞により産生されるＩＬ−２に対する試験化合物の効果を測定するために、リンパ球アッセイをデザインした。このアッセイは、Ｔ細胞の反応を刺激するために、９６−ウェルプレートに固定化された抗ＣＤ３モノクローナル抗体（ＯＫＴ３，２５ｎｇ／ｍｌ）の準最適量を用いた。細胞培養上澄み中に放出されるＩＬ−２レベルは、標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて定量化した。同様に、ＴＮＦαおよびＩＦＮ−γなどの他のサイトカインもまた同じアッセイで測定できる。このアッセイは、抗ＣＤ３抗体に反応して起こるリンパ球増殖が見られ、その故に免疫モジュレーター化合物の効果が試験できる、７２時間時点まで延ばすことができる。
【０２０６】
単球は、炎症反応に関与する末梢単核食細胞である。単球によるＴＮＦα産生は、炎症反応において重要な役割を果たし、そのレベルが抑制されないでいると、かなりな組織損傷の原因となりうる。活性化単球によるＴＮＦα分泌の阻害により、炎症性疾患の治療のための魅力的な治療法を提供できる。
【０２０７】
単球によるＴＮＦα放出の、微生物による最も強力な引き金の１つはリポ多糖（ＬＰＳ）であり、この反応はＮＦ−ＫＢ経路によって起こる。ヒト末梢血単球によるＬＰＳ誘発ＴＮＦα分泌に対する試験化合物の効果を測定するために、９６ウェルin vitroアッセイを確立した。アッセイ上澄み中のＴＮＦαレベルを通常のサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて定量した。
【０２０８】
試験の詳細
健常志願者からのヒト末梢血単核細胞を、Ficoll-Hypaque密度遠心分離およびプラスチックへの接着により全血から分離した。非接着性リンパ球分画を、リンパ球アッセイをセットアップするために用い、ついで接着性単球を剥離し、次に単球アッセイに用いた。
【０２０９】
リンパ球アッセイ
ついでリンパ球を、２５ｎｇ／ｍｌで抗ＣＤ３モノクローナル抗体（ＯＫＴ３）によりプレコートした９６−ウェルプレートに塗布し、直ちに、実験計画に記載の対応するウェルに試験化合物（混合物１酸ピーク１；混合物２酸ピーク１；ＡＨ−１３２０５ラセミ体；ＰＧＥ２）の適切な希釈液を加えた。３７℃、５％ＣＯ２／空気で２４時間、プレートをインキュベートし、インキュベーション期間の終了時に上澄みをＥＬＩＳＡ分析のために回収した。製造業者による使用説明書に従って、ProteoPlex１６ウェルヒトサイトカインアレイアッセイキットを用いてＩＦＮ−γレベルを評価した。
【０２１０】
固定化抗ＣＤ３モノクローナル抗体により促進されるリンパ球増殖の促進のために、試験化合物の存在下または非存在下で、細胞を７２時間培養するという条件下で、ＩＬ−２放出の測定と同様な方法でアッセイをセットアップした。増殖アッセイの終了の４時間前に、細胞増殖アッセイキットのフォーマット中の、Promega製の新規テトラゾリウム化合物溶液を、製造者の使用説明書に従って各ウェルに加えた。ついで残りの４時間、インキュベーター中にプレートを戻しいれ、製造者の使用説明書に従って、４９０ｎｍの吸収波長で分光光度計(SpectraMax, Molecular Devices)を用いて、比色反応を測定した。
【０２１１】
単球アッセイ
単球アッセイのために、細胞を９６−ウェルプレート上にプレーティングし、３７℃／５％ＣＯ２で１時間試験化合物（混合物１酸ピーク１；混合物２酸ピーク１；ＡＨ−１３２０５ラセミ体）を用いて前処理し、ついでＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）を加えて反応を開始した。プレートを２４時間インキュベートし、ＥＬＩＳＡによるＴＮＦα産生の産生のために上澄みを回収した。
【０２１２】
マクロファージアッセイ
ヒト肺実質を小片に切断し、氷冷したリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）でかん流して汚染血液および粘液を除去した。ついで組織を、培地ペニシリン、ストレプトマイシン、Ｌ−グルタミンおよびＤＮａｓｅ（０．２５ｍｇ／ｍｌ）を加えた最小必須培地の存在下で、はさみで切り刻んだ。切り刻んだ組織をゆっくり振盪してマクロファージを追い出した。ついで滅菌フィルター（孔径１５０μｍ）を用いて組織を除去し、粗製細胞浮遊液を得た。得られた細胞浮遊液を遠心分離して細胞ペレットを回収した。汚染している赤血球を赤血球溶解緩衝液で減らし、残りの細胞を遠心分離によりＰＢＳで２度洗浄した。ついで、製造者の使用説明書に従って、VarioMacTM SeparatorおよびMiltenyi Biotec Ltd製のそれぞれの正の選択試薬およびカラムを用い、ＣＤ１４−分子を有する細胞のための正の選択法を用いて、この細胞標品から肺胞マクロファージを精製した。
【０２１３】
アッセイのために、１０％ウシ胎児血清、Ｌ−グルタミンおよび抗生物質を添加したＲＰＭＩ１６４０からなる完全培地中に肺胞マクロファージを再懸濁した。次いで細胞を２４ウェルプレート（４ｘ１０５細胞／ウェル）にプレーティングし、３７℃、５％ＣＯ２／空気で終夜インキュベートし、細胞接着させた。ついで使い終わった培地をプレートから除き、プレートを短時間新しい培地で洗浄し、試験化合物溶液を加えた。細胞を３０分間試験化合物でインキュベートし、ついで大腸菌ＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）を加えた。加湿インキュベータ中、３７℃、５％ＣＯ２／空気で２４時間、アッセイプレートをインキュベートした。培養上澄み中への細胞によるＴＮＦαの放出を、製造者の使用説明書に従って、R + D Systems（欧州）製のＥＬＩＳＡキット(DuoSet（登録商標）ヒトTNFα ELISA Development System)を用いて定量化した。内因性プロスタグランジンＥ２の見込まれる放出を抑制するための全ての処理に、３μＭインドメタシンを含有させた。
【０２１４】
結果
リンパ球アッセイ
図９に、４つのドナー（１つのドナーのみで試験した混合物２酸ピーク１の場合を除く）の平均として得た３つの試験化合物によるＩＬ−２産生結果を示す。これらの結果を表７にまとめる。
【表７】
【０２１５】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがＯＫＴ３活性化Ｔ細胞により濃度依存的にＩＬ−２産生を抑制することを示している。このアッセイにおける有効性の順序は、試験化合物のそれぞれのＥＣ５０値によればＰＧＥ２＞混合物１酸ピーク１＞ＡＨ１３２０５（ラセミ体）である。図１０に、３つのＥＰ２受容体アゴニストによる、３〜５ドナーの平均として得たＩＬ−２産生結果を示す。これらの結果を表８にまとめる。
【表８】
【０２１６】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストが、ＯＫＴ３活性化Ｔ細胞により濃度依存的にＩＬ−２産生を抑制することを示している。このアッセイにおける有効性の順序は、試験化合物のそれぞれのＥＣ５０値によれば、ＰＧＥ２＞ブタプロスト＞混合物１酸ピーク１である。
【０２１７】
図１１に、混合物１酸ピーク１による２つのドナーのインターフェロンガンマ放出結果を示す。これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがインターフェロンガンマ放出を濃度依存的に抑制することを示している。
【０２１８】
図１２に、３つのＥＰ２受容体アゴニストによる３つのドナーの平均として得たＴＮＦα産生結果を示す。これらの結果を表９にまとめる。
【表９】
【０２１９】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがリンパ球によるＴＮＦα産生を濃度依存的に抑制することを示す。このアッセイにおける有効性の順序は、試験化合物のそれぞれのＥＣ５０値によれば、ＰＧＥ２＞ブタプロスト＞混合物１酸ピーク１である。
【０２２０】
図１３に、３つのＥＰ２受容体アゴニストによる、３つのドナーの平均として得たリンパ球増殖結果を示す。これらの結果を表１０にまとめる。
【表１０】
【０２２１】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがリンパ球増殖を濃度依存的に抑制することを示している。このアッセイにおける有効性の順序は、試験化合物のそれぞれのＥＣ５０値によれば、ＰＧＥ２＞ブタプロスト＞混合物１酸ピーク１である。
【０２２２】
単球アッセイ
図１４に、３つのドナーの平均として得た結果を示す。これらの結果を表１１にまとめる。
【表１１】
【０２２３】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがＬＰＳ刺激単球によりＴＮＦα産生を濃度依存的に抑制することを示している。それぞれのＥＣ５０値に基づく有効性の順序は、混合物１酸ピーク１＞混合物２酸ピーク１＞ＡＨ１３２０５（ラセミ体）である。
【０２２４】
マクロファージアッセイ
図１５に、３つのドナーの平均として得た結果を示す。これらの結果を表１２に示す。
【表１２】
【０２２５】
これらの結果は、ＥＰ２アゴニストがマクロファージによりＴＮＦα産生を濃度依存的に抑制することを示す。それぞれのＥＣ５０値に基づく有効性の順序は、ＰＧＥ２＞混合物１酸ピーク１である。
【０２２６】
図の凡例
【表１３】
【０２２７】
【図面の簡単な説明】
【０２２８】
【図１】図１ａは、１．０ｃｍ光路長キュベットを用いた、エタノール中のプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）（０．７ｍｇ／ｍＬ）のＣＤスペクトルである。図１ｂは、１．０ｃｍ光路長キュベットを用いた、エタノール中のＰＧＥ２（０．７ｍｇ／ｍＬ）のＵＶスペクトルである。
【図２】図２ａは、１．０ｃｍ光路長キュベットを用いた、エタノール中の（Ｒ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｒ−ＢＰＨ）（図の実線）（０．７ｍｇ／ｍＬ）および（Ｓ）−１−（４−ブロモフェニル）ヘキセン−１−オール（Ｓ−ＢＰＨ）（図の点線）（０．７ｍｇ／ｍＬ）のＣＤスペクトルである。図２ｂは、１．０ｃｍ光路長キュベットを用いた、エタノール中のＲ−ＢＰＨ（図の実線）（０．７ｍｇ／ｍＬ）およびＳ−ＢＰＨ（図の点線）（０．７ｍｇ／ｍＬ）のＵＶスペクトルである（この図においては、実線と点線がほぼお互いに重なりあっていることに注意）。
【図３】図３ａは、０．１ｃｍ光路長キュベットを用いた、エタノール中の実施例４（化合物Ａ，Ｃ，ＥおよびＧ）の４つのトランス−立体異性体（全て１９ｍｇ／ｍＬ）のそれぞれのＣＤスペクトルである。
【図４】図４は、ヒトＥＰ２受容体に対する結合能アッセイにおける、複数の濃度の５つの試験化合物で置換されたときの［３Ｈ］ＰＧＥ２パーセンテージ変化である。
【図５】図５は、ヒトＥＰ２受容体刺激アッセイにおける、５つの試験化合物で刺激されたときのｃＡＭＰ濃度変化である。
【図６】図６は、ヒト子宮筋層活性に対する、ＡＨ１３２０５の効果である。
【図７】図７は、ヒト子宮筋層活性アッセイにおける、ＡＨ１３２０５の複数の濃度および送達ビヒクルまたは送達ビヒクル単独による、電場刺激（ＥＦＳ）誘発収縮の阻害％変化である。
【図８】図８は、ヒト子宮筋層活性アッセイにおける、３つの試験化合物の複数の濃度による対照電場刺激（ＥＦＳ）誘発収縮の％変化である。
【図９】図９は、リンパ球アッセイにおける、４つの試験化合物の複数の濃度による、ＩＬ−２産生変化である。
【図１０】図１０は、リンパ球アッセイにおける、３つのＥＰ２受容体アゴニストの複数の濃度によるＩＬ−２産生変化である。
【図１１】図１１は、リンパ球アッセイにおける、３つのＥＰ２受容体アゴニストの複数の濃度による、インターフェロンガンマ放出変化である。
【図１２】図１２は、リンパ球アッセイにおける、３つのＥＰ２受容体アゴニストによるＴＮＦα産生変化である。
【図１３】図１３は、リンパ球アッセイにおける、３つのＥＰ２受容体アゴニストによる細胞増殖変化である。
【図１４】図１４は、単球アッセイにおける、３つの試験化合物によるＴＮＦα産生変化である。
【図１５】図１５は、肺胞マクロファージアッセイにおける、２つの試験化合物によるＴＮＦα産生変化である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の１つから選択される化合物：
【化１】
またはその塩、溶媒和物、化学的に保護された形態もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
少なくとも９０重量％が以下の形の１つ：
【化２】
またはその塩、溶媒和物、化学的に保護された形態もしくはプロドラッグから選択される、（トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸。
【請求項３】
少なくとも８０重量％が以下の形の１つ：
【化３】
またはその塩、溶媒和物、化学的に保護された形態もしくはプロドラッグである、２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物の製造方法。
【請求項５】
治療方法における使用のための、請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
薬学的に許容される担体または希釈剤とともに、請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含んでなる医薬組成物。
【請求項７】
ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和される疾患の治療のための医薬の製造における、請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項８】
ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和される疾患が、緑内障、月経困難症および早期産からなるグループから選択される、請求項７記載の使用。
【請求項９】
ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和されることができる疾患の治療方法であって、請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含んでなる該方法。
【請求項１０】
ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和される疾患が、緑内障、月経困難症および早期産からなるグループから選択される、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
（ｉ）ヒトＴ細胞活性化（増殖）；
（ｉｉ）ＩＬ−２の放出；
（ｉｉｉ）ＴＮＦαの放出；または
（ｉｖ）ＩＦＮγの放出；
の阻害により緩和される疾患の治療のための医薬の製造における、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１２】
乾癬の治療のための医薬の製造における、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１３】
炎症性肺疾患の治療のための医薬の製造における、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１４】
ＥＰ２受容体アゴニストが請求項１〜３のいずれか１つの化合物である、請求項１１〜１３のいずれか１つに記載の使用。
【請求項１５】
（ｉ）ヒトＴ細胞活性化（増殖）；
（ｉｉ）ＩＬ−２の放出；
（ｉｉｉ）ＴＮＦαの放出；または
（ｉｖ）ＩＦＮγの放出；
の阻害により緩和されることができる疾患の治療方法であって、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含んでなる該方法。
【請求項１６】
乾癬の治療方法であって、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含んでなる該方法。
【請求項１７】
炎症性肺疾患の治療方法であって、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の有効量を、治療を必要とする患者の投与することを含んでなる該方法。
【請求項１８】
ＥＰ２受容体アゴニストが請求項１〜３のいずれか１つの化合物である、請求項１５〜１７のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１】
以下の１つから選択される化合物：
【化１】
またはその塩、溶媒和物、化学的に保護された形態もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
少なくとも９０重量％が以下の形の１つ：
【化２】
またはその塩、溶媒和物、化学的に保護された形態もしくはプロドラッグから選択される、（トランス−２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸。
【請求項３】
少なくとも８０重量％が以下の形の１つ：
【化３】
またはその塩、溶媒和物、化学的に保護された形態もしくはプロドラッグである、２−［４−（１−ヒドロキシヘキシル）フェニル］−５−オキソ−シクロペンタンヘプタン酸。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物の製造方法。
【請求項５】
治療方法における使用のための、請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６】
薬学的に許容される担体または希釈剤とともに、請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含んでなる医薬組成物。
【請求項７】
ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和される疾患の治療のための医薬の製造における、請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項８】
ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和される疾患が、緑内障、月経困難症および早期産からなるグループから選択される、請求項７記載の使用。
【請求項９】
ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和されることができる疾患の治療方法であって、請求項１〜３のいずれか１つに記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含んでなる該方法。
【請求項１０】
ＥＰ２受容体のアゴニズムにより緩和される疾患が、緑内障、月経困難症および早期産からなるグループから選択される、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
（ｉ）ヒトＴ細胞活性化（増殖）；
（ｉｉ）ＩＬ−２の放出；
（ｉｉｉ）ＴＮＦαの放出；または
（ｉｖ）ＩＦＮγの放出；
の阻害により緩和される疾患の治療のための医薬の製造における、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１２】
乾癬の治療のための医薬の製造における、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１３】
炎症性肺疾患の治療のための医薬の製造における、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の使用。
【請求項１４】
ＥＰ２受容体アゴニストが請求項１〜３のいずれか１つの化合物である、請求項１１〜１３のいずれか１つに記載の使用。
【請求項１５】
（ｉ）ヒトＴ細胞活性化（増殖）；
（ｉｉ）ＩＬ−２の放出；
（ｉｉｉ）ＴＮＦαの放出；または
（ｉｖ）ＩＦＮγの放出；
の阻害により緩和されることができる疾患の治療方法であって、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含んでなる該方法。
【請求項１６】
乾癬の治療方法であって、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含んでなる該方法。
【請求項１７】
炎症性肺疾患の治療方法であって、ＥＰ２受容体アゴニストまたはその薬学的に許容される塩の有効量を、治療を必要とする患者の投与することを含んでなる該方法。
【請求項１８】
ＥＰ２受容体アゴニストが請求項１〜３のいずれか１つの化合物である、請求項１５〜１７のいずれか１つに記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【公表番号】特表２００７−５１５４６７（Ｐ２００７−５１５４６７Ａ）
【公表日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４６３２３（Ｐ２００６−５４６３２３）
【出願日】平成１６年１２月２２日（２００４．１２．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００５４２１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６１４４９
【国際公開日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．マッキントッシュ
【出願人】（５０１０２５１４８）アステランド ユーケイ リミテッド (5)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１２月２２日（２００４．１２．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００５４２１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６１４４９
【国際公開日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．マッキントッシュ
【出願人】（５０１０２５１４８）アステランド ユーケイ リミテッド (5)
【Ｆターム（参考）】
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