複数の特異的な且つ／又はランダムな配列のオリゴヌクレオチドプライマーを使用して、特にコロニー及びプラーク抽出物中に存在するような、一本鎖又は二本鎖ＤＮＡ分子の形をとる標的ＤＮＡ配列の改良増幅法が、そのような増幅標的配列を検出するための方法と共に開示されており、ここではデオキシリボヌクレオチドの一部又は全てが、増幅産物のＴｍを低下させるデオキシリボヌクレオチドアナログに代わっている。この増幅産物は、ＤＮＡ配列決定、及びハイブリダイゼーションを行うその他の分析に使用する。本発明で使用される構成要素を含んだキットについても記載する。また、配列決定、一塩基置換の検出、制限酵素断片パターンの修飾、及びその他の分子生物学的用途での、この増幅ＤＮＡのさらなる使用についても記載する。 （もっと読む）

酵素類に対する末端リン酸標識ヌクレオチド類の基質性を高める方法、核酸検出方法類及び末端リン酸標識ヌクレオチド類のマンガン錯体類の提供。
【課題】 本発明はマンガン塩存在下において末端リン酸標識ヌクレオチド類を用いてさまざまな酵素類に対するそれらの基質性を高める方法類が記載される。特に、マンガン塩存在下において末端リン酸標識ヌクレオチド類を核酸ポリメラーゼ類の基質類として用いることに基づくサンプル中の核酸検出方法類が記載される。さらに、末端リン酸標識ヌクレオチド類ならびに基質性を高め新規リンカー類を有する末端リン酸標識ヌクレオチド類のマンガン錯体類が提供される。
【解決手段】 マンガン塩を存在させることにより末端リン酸標識ヌクレオチド類の酵素基質性を高め、それを利用したサンプル中の核酸検出方法類及びそのための新規リンカー類を有する末端リン酸標識ヌクレオチド類のマンガン錯体類を提供する。
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複素環系を結合させるポリメチン鎖中にメソ置換基を有するシアニン色素が開示されている。その色素は、式（Ｉ）の色素である。式中、基Ｒ^３及びＲ^４はＺ^１環構造に結合しており、基Ｒ^５及びＲ^６はＺ^２環構造に結合しており、ｎは１、２又は３であり、Ｚ^１及びＺ^２は独立に、１つの環又は２つの縮合環芳香族又は複素芳香族系を完成するのに必要な原子を表し、各環は、炭素原子並びに適宜酸素、窒素及び硫黄から選択される２個以下の原子から選択される５又は６個の原子を有し、Ｘ及びＹは同一又は異なるもので、酸素、硫黄、−ＣＨ＝ＣＨ−及び基（ＩＩ）から選択され、基Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６（及び存在するときはＲ^８及びＲ^９）の少なくとも１つは基−Ｅ−Ｆ（式中、Ｅはスペーサー基であり、Ｆは標的結合基である）であり、基Ｒ^７の１つは−ＣＮ、−Ｃｌ、−Ｆ、−ＣＦ_３及び−Ｃ（Ｏ）Ｒ^１０（式中、Ｒ^１０はＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル及びアリールから選択される）から選択される。好ましいＲ^７はメソ置換ＣＮである。これにより、対応する置換されていない類似体と比較した場合、発光スペクトルにおいて約４０ｎｍの予期しない浅色シフトが生じる。この色素は様々な標的分子を標識化し検出するために有用である。
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【課題】 高いプロセッシビティと鎖置換活性とを併せもつ精製組換えＤＮＡポリメラーゼを提供する。バクテリオファージＤＮＡポリメラーゼをコードする単離核酸、並びにＤＮＡを増幅するためのキット及び方法も提供する。
【解決手段】 （ａ）配列番号１のアミノ酸配列２〜５５７、（ｂ）配列番号１の８アミノ酸残基以上の断片、（ｃ）上記（ａ）又は（ｂ）に基づく単離ポリペプチドであって、（ａ）又は（ｂ）の配列からの逸脱の９５％以上が保存的置換である単離ポリペプチド、及び（ｄ）上記（ａ）又は（ｂ）の単離ポリペプチドとのアミノ酸配列相同性が６５％以上の単離ポリペプチドからなる群から選択されるアミノ酸配列を有する単離ポリペプチドであって、ＤＮＡポリメラーゼ活性を有する単離プリペプチド。 （もっと読む）

本発明は新規なｃＤＮＡ増幅方法に関する。ＲＮＡをまずｃＤＮＡに変換する。このｃＤＮＡの合成はプロモーター付加されたオリゴヌクレオチドを含み、次いでこのｃＤＮＡを連結して環状構造（又は場合によりコンカテマー構造を）形成する。次いでこれを、ローリングサークル増幅及び鎖置換増幅に基づくＰｈｉ２９ ＤＮＡポリメラーゼを用いて増幅する。本発明は、ＲＮＡプロモーター配列をｃＤＮＡに連結させ、この増幅されたｃＤＮＡからのＲＮＡの生成を介した付加的な増幅を手助けする。得られる生成物は次いで遺伝子発現の研究用、又はその他のＲＮＡ分析手法用の材料作製に使用できる。
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【課題】 核酸、特にＲＮＡの配列の増幅、精製及び検出方法の提供。
【解決手段】 該方法の一態様は操作しようとする核酸配列に対して核酸構造をハイブリダイゼーションさせ、それに続きライゲーションさせることを含む。該方法は核酸構造が二本鎖領域と一本鎖領域とを含むことが必要である。一本鎖領域は標的ＲＮＡ配列と相補的である。二本鎖領域には該方法中の次の工程で用いる追加的な機能性を含めてもよい。 （もっと読む）

本発明は一般的に核酸ポリメラーゼの基質としてのリン酸３つ以上を有する末端リン酸標識ヌクレオチドの使用、及び、ＤＮＡ増幅におけるその使用に関する。使用される標識はケミルミネセント、蛍光、電子化学及び発色原の部分、並びに、質量タグであり、そして、直接検出可能であるか、酵素活性化の後に検出可能であるか、又は他の工程に供されて異なるシグナルを発生させるものを包含する。結合した染料から発生する信号は増幅の量を測定するためにも使用してよい。更にまた、水溶液中の末端リン酸標識ヌクレオシドポリリン酸の安定性を増強させるための安定化剤、及び、これ等のヌクレオシドの非酵素的加水分解を低減することによりバックグラウンドを低下させるために有用なアークも提供する。 （もっと読む）

蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）カセット及びそれらの対応ジデオキシヌクレオチドターミネーターをＤＮＡ配列決定用の効率的な試薬とするための設計及び合成における適当な官能化複素環分子の開発。様々な複素環系から誘導される本発明のＦＲＥＴカセット／ターミネーターは生体分子の汎用標識に使用することができ、高感度シグナルを発生する。これらの製造法、エネルギー移動効率、さらに特にＤＮＡシークエンシング反応における標識としての使用。 （もっと読む）

本発明は蛍光標識ダイターミネーター４つの新規なセットに関する。これらのうち２つは単一ダイ標識ターミネーターであり、他の２つのダイターミネーターはフォスター共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）に基づくものである。ＦＲＥＴダイターミネーターは４′，５′−ビス−アミノメチルフルオロセインから生成される。ドナー色素である４′，５′−ビス−アミノメチルフルオロセインのアミノ基２個のうち、アミノ基１個を用いてアクセプター色素に結合し、アミノ基の別の１個はジデオキシヌクレオシド−５′−三リン酸に結合するために使用する。その調製、エネルギー移動効率及び標識としての使用、特にＤＮＡシークエンシング反応における標識としての使用を開示する。
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容易に調製し得る色素構築ブロックに基づき、またそれから合成した新規分類の蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）標識試薬を提供する。この標識試薬は「カセット」の形状をとり、広範囲の多様な生体物質その他に結合し得る。標識試薬は少なくとも２つの蛍光色素部分を含んでなり、その色素部分はリンカー基を介して共有結合しており、また、試薬を標的に結合させる標的結合基をもつ。エネルギー移動標識試薬は共有結合又は非共有結合により標的物質に結合し得る。色素は、第一（又はドナー）色素の発光スペクトルが第二色素の吸収スペクトルと重なり合い、それによって両色素間にエネルギー移動が起こるようにする。色素構築ブロックは、構造（Ｉ）の４′，５′−ビス−アミノメチル−フルオレセイン及び／又はその５（６）−カルボン酸である。単一ドナーと単一アクセプター蛍光色素からなる本発明の態様に加えて、本発明による蛍光エネルギー移動標識試薬は、さらに１個以上の第三の蛍光色素を含んでもよく、各々第一又は第二蛍光色素に共有結合して第三の吸収及び発光を示す。 （もっと読む）