ポリカチオンを用いた抗体およびＦＣ融合分子の製剤
本発明は、一般に、該抗体およびＦｃ融合分子がポリカチオンを含む製剤中にある、抗体およびＦｃ融合分子の製剤を調製するための方法に関する。本発明はまた、抗体またはＦｃ融合分子およびポリカチオンを含む組成物を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、抗体またはＦｃ融合分子およびポリカチオンを含む、抗体およびＦｃ融合分子の製剤を作製するための方法、ならびにそれらの製剤を含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
生理的ｐＨの溶液および高濃度のタンパク質を含む溶液に入れたとき、高いｐＩまたは明確な極性を有するタンパク質は不安定である場合がある。溶液中のタンパク質は、時間とともに分解する傾向があり、分解産物は凝集してタンパク質の生物学的効力を減少させる。例えば、溶液中の成長ホルモンは、不溶性の凝集産物を形成し、タンパク質の沈殿および活性の損失をもたらす（米国特許第４，８１６，５６８号）。溶液中のタンパク質分解を防ぐために、タンパク質凝集の低下を期して、安定化剤（例えば、グリシン、ポリエチレングリコール）が濃縮タンパク質製剤にしばしば添加される。米国特許第４，８１６，５６８号は、ポリオール化合物、電荷を持つ側鎖を有する単一アミノ酸もしくは重合体アミノ酸、またはコリン誘導体を用いて溶液中の成長ホルモンを安定化する方法を記載している。このような分解および凝集の問題が、生物製剤を薬学的薬物として製剤化する複雑さに加わる。
【０００３】
今日、抗体は、製薬業界で最も急成長を遂げている種類の生物製剤である。抗体は、溶液中で時間とともに分解することも知られている。それゆえに、科学者は、液体製剤中の抗体の凝集の問題に対処する方法を提案している。
【０００４】
カルシウム（Ｃａ２＋）およびマグネシウム（Ｍｇ２２＋）などのある種の正電荷を持つ金属イオンの添加は、溶液中での抗体の異性化およびスクシンイミド中間体の形成の防止を遅らせるための方法として提案されている（ＰＣＴ特許出願公開のＷＯ２００４／０３９３３７）。しかしながら、ある種の正電荷を持つ金属イオン（例えば、ＺｎＣｌ２）は、タンパク質の沈殿を引き起こす場合がある（ＷＯ２００４／０３９３３７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００４／０３９３３７号
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、治療的抗体またはＦｃ融合体の製剤を含む、液体のまたは凍結乾燥した薬学的製剤を作製するための方法、およびそれらの製剤を含む組成物に関する。
【０００７】
１つの態様において、本発明は、抗体またはＦｃ融合分子の液体製剤または凍結乾燥製剤を作製するための方法であって、抗体またはＦｃ融合分子をポリカチオンと組み合わせ、それにより、ポリカチオンを含まない同製剤と比較して、低下したレベルの抗体またはＦｃ融合分子の分解および凝集を得る工程を含む方法を提供する。１つの実施形態において、Ｆｃ融合分子はペプチボディである。
【０００８】
１つの実施形態において、ポリカチオンは、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ポリヒスチジン、およびカチオン性多糖類、またはその混合物からなる群より選択される。
【０００９】
関連する実施形態において、ポリカチオン組成物は、リジン、アルギニン、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ポリヒスチジン、およびカチオン性多糖類からなる群より選択されるポリカチオンのうちの少なくとも２つを含む。関連する実施形態において、ポリカチオンは、リジンおよびアルギニンから構成される。
【００１０】
さらなる実施形態において、ポリカチオンは、ホモ重合体もしくは共重合体、またはその混合物である。ポリカチオンホモ重合体は、同じカチオン単量体の単一反復単位を含む。ポリカチオン共重合体は、異なるカチオン単量体または異なるカチオン性重合体を含む。１つの実施形態において、ポリカチオン共重合体は、カチオン単量体の混合物、ポリカチオンホモ重合体の混合物、またはポリカチオン共重合体の混合物を含んでもよい。
【００１１】
別の実施形態において、ポリカチオンは、カチオン性単量体および中性単量体の反復単位を含む重合体である。１つの実施形態において、ポリカチオンは、単量体式Ａ−Ｂ−Ｘ−Ｙ（式中、ＡおよびＸはカチオン性単量体であり、ＢおよびＹは中性単量体である）を有する。関連する実施形態において、ＡおよびＸは同じカチオン性単量体である。さらなる実施形態において、ＡおよびＸは異なるカチオン性単量体である。別の実施形態において、ＢおよびＹは同じ中性単量体である。またさらなる実施形態において、ＢおよびＹは異なる中性単量体である。別の実施形態において、カチオン性単量体は、本明細書に示されるポリカチオンの基礎として使用される反復単位である。関連する実施形態において、カチオン性単量体は、塩基性アミノ酸、中性単量体に連結した反復配列のカチオン性単量体、またはポリカチオン組成物を構築するために使用することができる反復構造特性を有する、その他のタンパク質分子もしくは化学構造物である。
【００１２】
中性単量体は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、およびプロリンからなる群より選択されるということがさらに企図される。またさらなる実施形態において、ポリカチオンは、リジン残基およびグリシン残基の反復単位を含む。
【００１３】
別の態様において、本発明は、本発明の抗体製剤が治療的抗体を含むことを提供する。１つの実施形態において、治療的抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、およびＩｇＧ４抗体、またはその断片からなる群より選択されるＩｇＧ抗体である。
【００１４】
ポリカチオン組成物中のポリカチオンは、０．２ｋＤａから約７０ｋＤａの分子量を有するということが企図される。該抗体製剤中の抗体は、７．５以下のｐＩを有するということがさらに企図される。１つの実施形態において、該抗体製剤中の抗体は、約６．４の計算ｐＩを有する。さらなる実施形態において、ポリカチオンは、最終製剤において約０．１％から約１０％ｗ／ｗポリカチオンの濃度である。
【００１５】
関連する実施形態において、ポリカチオン組成物のｐＨは、約４．５から約７．５、約５．０から約６．５、または約５．５から約６．０である。
【００１６】
１つの実施形態において、抗体またはＦｃ融合分子の製剤は、ポリカチオン組成物と組み合わせたときに、ポリカチオンの非存在下での抗体製剤の溶解性と比較して、より大きい溶解性を有する。追加の実施形態において、抗体またはＦｃ融合分子の製剤は、ポリカチオン組成物と組み合わせていない抗体製剤と比較して、増大した貯蔵寿命を有する。さらなる実施形態において、ポリカチオン組成物と組み合わせた抗体またはＦｃ融合分子の製剤は、ポリカチオン組成物と組み合わせていない同様の抗体製剤よりも少なくとも２５％長い貯蔵寿命を有する。
【００１７】
本発明は、該製剤におけるポリカチオンの存在が、ポリカチオン組成物と組み合わせていない治療的抗体またはＦｃ融合体の製剤と比較して、抗体またはＦｃ融合体分子の製剤における抗体多量体または凝集体の形成を低下させる抗体製剤も企図する。
【００１８】
様々な態様において、治療的抗体は、エンブレル（エタナセプト）、ヒュミラ（アダリムマブ）、シナジス（パリビズマブ）、ＡＭＧ ７１４（抗ＩＬ１５抗体）、ベクチビックス（パニツムマブ）、リツキサン（リツキシマブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、抗ＣＤ８０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（ガリキシマブ）、抗ＣＤ２３ ｍＡｂ（ルミリキシマブ）、Ｍ２００（ボロシキシマブ）、抗クリプトｍＡｂ、抗ＢＲ３ ｍＡｂ、抗ＩＧＦ１Ｒ ｍＡｂ、タイサブリ（ナタリズマブ）、ダクリズマブ、ヒト化抗ＣＤ２０ ｍＡｂ（オクレリズマブ）、可溶性ＢＡＦＦアンタゴニスト（ＢＲ３−Ｆｃ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ、抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ、抗ＩＬ５受容体ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＭ２ ｍＡｂ、抗ＦＧＦ８ ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ−１ ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＤ２ ｍＡｂ、アクチライズ（Ａｃｔｉｌｙｓｅ）（登録商標）（アルテプラーゼ）、メタライズ（Ｍｅｔａｌｙｓｅ）（登録商標）（テネクテプラーゼ）、ＣＡＴ−３８８８およびＣＡＴ−８０１５（抗ＣＤ２２ ｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＣＡＴ−３５４（抗ＩＬ１３ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−５００１（抗メソテリンｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＧＣ−１００８（抗ＴＧＦ−β ｍＡｂ）、ＣＡＭ−３００１（抗ＧＭ−ＣＳＦ受容体ｍＡｂ）、ＡＢＴ−８７４（抗ＩＬ１２ ｍＡｂ）、リンフォスタットＢ（ベリムマブ；抗ＢｌｙＳ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ１（マパツムマブ；ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−１ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ２（ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−２ ｍＡｂ）、アブスラックス（商標）（ヒト、抗（炭疽菌由来）防御抗原ｍＡｂ）、ＭＹＯ−０２９（ヒト抗ＧＤＦ−８ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−２１３（ヒト抗エオタキシン１ ｍＡｂ）、エルビタックス（セツキシマブ）、エプラツズマブ、レミケード（インフリキシマブ；抗ＴＮＦ ｍＡｂ、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ベクチビックス（パナツムマブ）、レオプロ（アブシキシマブ）、アクテムラ（抗ＩＬ６受容体ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（ザルツムマブ）、ＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、Ｒ１５０７（抗ＩＧＦ−１Ｒ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ ＨｅｐＣ、ＨｕＭａｘ ＣＤ３８、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ（抗ＩＬ２Ｒａまたは抗ＣＤ２５ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＺＰ３（抗ＺＰ３ ｍＡｂ）、ベキサール（トシツモマブ）、オルソクローンＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３）、ＭＤＸ−０１０（イピリムマブ）、抗ＣＴＬＡ４、ＣＮＴＯ １４８（ゴリムマブ；抗ＴＮＦα炎症ｍＡｂ）、ＣＮＴＯ １２７５（抗ＩＬ１２／ＩＬ２３ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ザルツムマブ）、ＭＤＸ−０６６（ＣＤＡ−１）およびＭＤＸ−１３８８（抗クロストリジウム・ディフィシル毒素Ａおよび毒素Ｂ、Ｃ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０６０（抗ＣＤ３０ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０１８、ＣＮＴＯ ９５（抗インテグリン受容体ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０７（抗マンノース受容体／ｈＣＧβ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１１００（抗ＩＰ１０潰瘍性大腸炎ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０３（バロルチム（Ｖａｌｏｒｔｉｍ）（商標））、抗炭疽菌炭疽、ＭＥＤＩ−５４５（ＭＤＸ−１１０３、抗ＩＦＮα）、ＭＤＸ−１１０６（ＯＮＯ−４５３８；抗ＰＤ１）、ＮＶＳ抗体＃１、ＮＶＳ抗体＃２、ＦＧ−３０１９（抗ＣＴＧＦ特発性肺線維症フェーズＩ、Ｆｉｂｒｏｇｅｎ）、ＬＬＹ抗体、ＢＭＳ−６６５１３、ＮＩ−０４０１（抗ＣＤ３ ｍＡｂ）、ＩＭＣ−１８Ｆ１（ＶＥＧＦＲ−１）、ＩＭＣ−３Ｇ３（抗ＰＤＧＦＲα）、ＭＤＸ−１４０１（抗ＣＤ３０）、ＭＤＸ−１３３３（抗ＩＦＮＡＲ）、シナジス（パリビズマブ；抗ＲＳＶ ｍＡｂ）、キャンパス（アレムツズマブ）、ベルケード（ボルテゾミブ）、ＭＬＮ０００２（抗α４β７ ｍＡｂ）、ＭＬＮ１２０２（抗ＣＣＲ２ケモカイン受容体ｍＡｂ）、シムレクト（バシリキシマブ）、プレクシージュ（ルミラコキシブ）、ゾレア（オマリズマブ）、ＥＴＩ２１１（抗ＭＲＳＡ ｍＡｂ）、ゼナパックス（ダクリズマブ）、アバスチン（ベバシズマブ）、マブセラＲＡ（リツキシマブ）、タルセバ（エルロチニブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、ゼチーア（エゼチミブ）、ジトリン（Ｚｙｔｔｏｒｉｎ）（エゼチミブおよびシンバスタチン）、ＮＩ−０４０１（ヒト抗ＣＤ３）、アデカツムマブ、ゴリムマブ（抗ＴＮＦα ｍＡｂ）、エプラツズマブ、ゲムツズマブ、ラプティバ（エファリズマブ）、シムジア（セルトリズマブペゴール、ＣＤＰ ８７０）、（ソリリス）エクリズマブ、ペキセリズマブ（抗Ｃ５補体）、ＭＥＤＩ−５２４（ヌマックス）、ルセンティス（ラニビズマブ）、１７−１Ａ（パノレックス）、トラビオ（Ｔｒａｂｉｏ）（レルデリムマブ）、セラシム（ＴｈｅｒａＣｉｍ）ｈＲ３（ニモツズマブ）、オムニターグ（ペルツズマブ）、オシデム（ＩＤＭ−１）、オバレックス（Ｂ４３．１３）、ヌビオン（ビジリズマブ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ（ＩＤＥＣ−１３１）、ザネリム（ヒト化抗ＣＤ１１ａ）、ならびにカンツズマブからなる群より選択される。
【００１９】
関連する態様において、治療的Ｆｃ融合分子は、ＩＬ−１ Ｔｒａｐ（ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分ならびに両方のＩＬ−１受容体構成成分（Ｉ型受容体および受容体付属タンパク質）の細胞外ドメイン）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（ＩｇＧ１ Ｆｃに融合したＶＥＧＦＲ１のＩｇドメイン）、アタシセプト（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト）、ＣＤ４−Ｉｇ融合タンパク質（Ｐｒｏ−５４２）、ＴＮＦＲ１−ＩｇＧ、アメビブ（登録商標）（アレファセプト、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ１）、ＣＤ３０−Ｌ−ＩｇＧ、ＩＬ−１０−Ｆｃ、ＴＮＲＦ−Ｆｃ、ＩＬ−２−Ｉｇ、ＯＰＧ−Ｆｃ、ならびにレプチン（ＯｂＲ）−Ｆｃからなる群より選択される。
【００２０】
本発明は、治療的抗体またはＦｃ融合分子およびポリカチオンを含む組成物も提供する。１つの実施形態において、組成物は、治療的抗体またはＦｃ融合分子、ポリカチオンおよび薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物である。１つの実施形態において、本発明は、７．５以下のｐＩを有する治療的抗体ならびにポリリジンおよびポリアルギニンからなる群より選択されるポリカチオンを含む薬学的組成物を提供する。本発明は、少なくとも２つの連続する酸性アミノ酸残基を含むＣＤＲドメインを有する治療的抗体ならびにポリリジンおよびポリアルギニンからなる群より選択されるポリカチオンを含む薬学的組成物も企図する。１つの実施形態において、酸性アミノ酸は、アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）からなる群より選択される。
【００２１】
１つの態様において、組成物中の抗体またはＦｃ融合分子は、ポリカチオンの非存在下で抗体を含む薬学的組成物と比較して増加した貯蔵寿命を有する。１つの実施形態において、抗体は、ポリカチオンの非存在下の抗体またはＦｃ融合分子を含む組成物よりも大きい水への溶解性を有する。
【００２２】
関連する態様において、薬学的組成物中の該抗体またはＦｃ融合体の二量体化（もしくはその他の多量体化）および／または凝集体形成は、ポリカチオンの非存在下で抗体およびＦｃ融合体を含む薬学的組成物と比較して低下する。
【００２３】
さらなる実施形態において、薬学的組成物は、エンブレル（エタナセプト）、ヒュミラ（アダリムマブ）、シナジス（パリビズマブ）、ＡＭＧ ７１４（抗ＩＬ１５抗体）、ベクチビックス（パニツムマブ）、リツキサン（リツキシマブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、抗ＣＤ８０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（ガリキシマブ）、抗ＣＤ２３ ｍＡｂ（ルミリキシマブ）、Ｍ２００（ボロシキシマブ）、抗クリプトｍＡｂ、抗ＢＲ３ ｍＡｂ、抗ＩＧＦ１Ｒ ｍＡｂ、タイサブリ（ナタリズマブ）、ダクリズマブ、ヒト化抗ＣＤ２０ ｍＡｂ（オクレリズマブ）、可溶性ＢＡＦＦアンタゴニスト（ＢＲ３−Ｆｃ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ、抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ、抗ＩＬ５受容体ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＭ２ ｍＡｂ、抗ＦＧＦ８ ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ−１ ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＤ２ ｍＡｂ、アクチライズ（登録商標）（アルテプラーゼ）、メタライズ（登録商標）（テネクテプラーゼ）、ＣＡＴ−３８８８およびＣＡＴ−８０１５（抗ＣＤ２２ ｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＣＡＴ−３５４（抗ＩＬ１３ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−５００１（抗メソテリンｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＧＣ−１００８（抗ＴＧＦ−β ｍＡｂ）、ＣＡＭ−３００１（抗ＧＭ−ＣＳＦ受容体ｍＡｂ）、ＡＢＴ−８７４（抗ＩＬ１２ ｍＡｂ）、リンフォスタットＢ（ベリムマブ；抗ＢｌｙＳ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ１（マパツムマブ；ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−１ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ２（ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−２ ｍＡｂ）、アブスラックス（商標）（ヒト、抗（炭疽菌由来）防御抗原ｍＡｂ）、ＭＹＯ−０２９（ヒト抗ＧＤＦ−８ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−２１３（ヒト抗エオタキシン１ ｍＡｂ）、エルビタックス（セツキシマブ）、エプラツズマブ、レミケード（インフリキシマブ；抗ＴＮＦ ｍＡｂ、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ベクチビックス（パナツムマブ）、レオプロ（アブシキシマブ）、アクテムラ（抗ＩＬ６受容体ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（ザルツムマブ）、ＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、Ｒ１５０７（抗ＩＧＦ−１Ｒ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ ＨｅｐＣ、ＨｕＭａｘ ＣＤ３８、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ（抗ＩＬ２Ｒａまたは抗ＣＤ２５ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＺＰ３（抗ＺＰ３ ｍＡｂ）、ベキサール（トシツモマブ）、オルソクローンＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３）、ＭＤＸ−０１０（イピリムマブ）、抗ＣＴＬＡ４、ＣＮＴＯ １４８（ゴリムマブ；抗ＴＮＦα炎症ｍＡｂ）、ＣＮＴＯ １２７５（抗ＩＬ１２／ＩＬ２３ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ザルツムマブ）、ＭＤＸ−０６６（ＣＤＡ−１）およびＭＤＸ−１３８８（抗クロストリジウム・ディフィシル毒素Ａおよび毒素Ｂ、Ｃ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０６０（抗ＣＤ３０ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０１８、ＣＮＴＯ ９５（抗インテグリン受容体ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０７（抗マンノース受容体／ｈＣＧβ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１１００（抗ＩＰ１０潰瘍性大腸炎ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０３（バルロチム（商標））、抗炭疽菌炭疽、ＭＥＤＩ−５４５（ＭＤＸ−１１０３、抗ＩＦＮα）、ＭＤＸ−１１０６（ＯＮＯ−４５３８；抗ＰＤ１）、ＮＶＳ抗体＃１、ＮＶＳ抗体＃２、ＦＧ−３０１９（抗ＣＴＧＦ特発性肺線維症フェーズＩ、Ｆｉｂｒｏｇｅｎ）、ＬＬＹ抗体、ＢＭＳ−６６５１３、ＮＩ−０４０１（抗ＣＤ３ ｍＡｂ）、ＩＭＣ−１８Ｆ１（ＶＥＧＦＲ−１）、ＩＭＣ−３Ｇ３（抗ＰＤＧＦＲα）、ＭＤＸ−１４０１（抗ＣＤ３０）、ＭＤＸ−１３３３（抗ＩＦＮＡＲ）、シナジス（パリビズマブ；抗ＲＳＶ ｍＡｂ）、キャンパス（アレムツズマブ）、ベルケード（ボルテゾミブ）、ＭＬＮ０００２（抗α４β７ ｍＡｂ）、ＭＬＮ１２０２（抗ＣＣＲ２ケモカイン受容体ｍＡｂ）、シムレクト（バシリキシマブ）、プレクシージュ（ルミラコキシブ）、ゾレア（オマリズマブ）、ＥＴＩ２１１（抗ＭＲＳＡ ｍＡｂ）、ゼナパックス（ダクリズマブ）、アバスチン（ベバシズマブ）、マブセラＲＡ（リツキシマブ）、タルセバ（エルロチニブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、ゼチーア（エゼチミブ）、ジトリン（エゼチミブおよびシンバスタチン）、ＮＩ−０４０１（ヒト抗ＣＤ３）、アデカツムマブ、ゴリムマブ（抗ＴＮＦα ｍＡｂ）、エプラツズマブ、ゲムツズマブ、ラプティバ（エファリズマブ）、シムジア（セルトリズマブペゴール、ＣＤＰ ８７０）、（ソリリス）エクリズマブ、ペキセリズマブ（抗Ｃ５補体）、ＭＥＤＩ−５２４（ヌマックス）、ルセンティス（ラニビズマブ）、１７−１Ａ（パノレックス）、トラビオ（レルデリムマブ）、セラシムｈＲ３（ニモツズマブ）、オムニターグ（ペルツズマブ）、オシデム（ＩＤＭ−１）、オバレックス（Ｂ４３．１３）、ヌビオン（ビジリズマブ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ（ＩＤＥＣ−１３１）、ザネリム（ヒト化抗ＣＤ１１ａ）、ならびにカンツズマブからなる群より選択される治療的抗体を含む。さらなる実施形態において、薬学的組成物は、ＩＬ−１ Ｔｒａｐ（ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分ならびに両方のＩＬ−１受容体構成成分（Ｉ型受容体および受容体付属タンパク質）の細胞外ドメイン）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（ＩｇＧ１ Ｆｃに融合したＶＥＧＦＲ１のＩｇドメイン）、アタシセプト（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト）、ＣＤ４−Ｉｇ融合タンパク質（Ｐｒｏ−５４２）、ＴＮＦＲ１−ＩｇＧ、アメビブ（登録商標）（アレファセプト、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ１）、ＣＤ３０−Ｌ−ＩｇＧ、ＩＬ−１０−Ｆｃ、ＴＮＲＦ−Ｆｃ、ＩＬ−２−Ｉｇ、ＯＰＧ−Ｆｃ、ならびにレプチン（ＯｂＲ）−Ｆｃからなる群より選択される治療的Ｆｃ融合分子を含む。
【００２４】
関連する実施形態において、本発明を、抗アンジオポエチン（例えば、抗Ａｎｇ２および／または抗Ａｎｇ１）特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などを製剤化する際に使用することができる。これらの抗アンジオポエチン特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などには、限定されるものではないが、ＷＯ０３／０５７１３４、米国出願公開ＵＳ２００３／０２２９０２３、ならびにＯｌｉｎｅｒら（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，５０７−５１６，２００４）および補足資料に記載されたものが挙げられる。前記の文献の各々は、特にＡｎｇ２特異的抗体およびペプチボディなどに関する部分、とりわけそれらの文献中に記載された配列の、およびＬ１（Ｎ）；Ｌ１（Ｎ） ＷＴ；Ｌ１（Ｎ） １Ｋ ＷＴ；２ｘＬ１（Ｎ）；２ｘＬ１（Ｎ） ＷＴ；Ｃｏｎ４ （Ｎ）、Ｃｏｎ４ （Ｎ） １Ｋ ＷＴ、２ｘＣｏｎ４ （Ｎ） １Ｋ；Ｌ１Ｃ；Ｌ１Ｃ １Ｋ；２ｘＬ１Ｃ；Ｃｏｎ４Ｃ；Ｃｏｎ４Ｃ １Ｋ；２ｘＣｏｎ４Ｃ １Ｋ；Ｃｏｎ４−Ｌ１ （Ｎ）；Ｃｏｎ４−Ｌ１Ｃ；ＴＮ−１２−９ （Ｎ）；Ｃ１７ （Ｎ）；ＴＮ８−８（Ｎ）；ＴＮ８−１４ （Ｎ）；Ｃｏｎ １ （Ｎ）を含むが、これらに限定されない、Ａｎｇ２特異的抗体およびペプチボディなどに関する部分に記載されたものに関して、全体が参照により本明細書に組み入れられる。また、これらの抗アンジオポエチン特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などは、抗Ａｎｇ２抗体および製剤、例えば、それに関してその全体が参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２００３／０３０８３３に記載されたもの、特にＡｂ５２６；Ａｂ５２８；Ａｂ５３１；Ａｂ５３３；Ａｂ５３５；Ａｂ５３６；Ａｂ５３７；Ａｂ５４０；Ａｂ５４３；Ａｂ５４４；Ａｂ５４５；Ａｂ５４６；Ａ５５１；Ａｂ５５３；Ａｂ５５５；Ａｂ５５８；Ａｂ５５９；Ａｂ５６５；ＡｂＦ１ＡｂＦＤ；ＡｂＦＥ；ＡｂＦＪ；ＡｂＦＫ；ＡｂＧ１Ｄ４；ＡｂＧＣ１Ｅ８；ＡｂＨ１Ｃ１２；ＡｂｌＡ１；ＡｂｌＦ；ＡｂｌＫ、ＡｂｌＰ；およびＡｂｌＰを、その公報に記載されたように様々な順列で含み、これらは各々、前述の刊行物に完全に開示されたようにその全体が参照により本明細書に個別的かつ具体的に組み入れられる。
【００２５】
本発明の任意の方法について、本明細書に示される任意のポリカチオンを、本発明の抗体またはＦｃ融合体の製剤またはポリカチオン組成物で使用し得るということが企図される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】５２℃で６週間保存した後のポリカチオンおよび連続するＤＤＤ残基を有する抗体を含む溶液中で形成された凝集体および二量体（またはその他の多量体）の相対存在量を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、治療的抗体またはＦｃ融合体の製剤を含む、抗体またはＦｃ融合分子およびポリカチオンを含む液体かまたは凍結乾燥した薬学的製剤を作製するための方法、ならびにそれらの製剤を含む組成物に関する。
【００２８】
本明細書で使用するとき、用語「抗体製剤」は、保存、さらなる加工、販売、および／または例えば、特定疾患を治療するための、特定経路による、特定量の特定薬剤の対象への投与などの、対象への投与のような、１つ以上の特定の用途のための１つ以上のその他の成分を有する、抗体およびポリカチオンの組み合わせを指す。
【００２９】
本明細書で使用するとき、用語「Ｆｃ融合体製剤」または「Ｆｃ融合分子製剤」は、保存、さらなる加工、販売、および／または、例えば、特定疾患を治療するための、特定経路による、特定量の特定薬剤の対象への投与などの、対象への投与のような、１つ以上の特定の用途のための１つ以上のその他の成分を有する、Ｆｃ融合分子およびポリカチオンの組み合わせを指す。
【００３０】
本明細書で使用するとき、用語「ポリカチオン」は、１つ以上のカチオン性単量体の反復単位のうちの１つ以上を含む分子を指す。様々な態様において、ポリカチオンは、１つもしくは複数の単量体の反復単位、または１つもしくは複数の中性単量体に連結した１つもしくは複数のカチオン性単量体を様々に含む反復サブユニットを含み、ここで、該単量体は、全体的に正電荷を有する反復構造特性を有する化合物を提供するよう共有結合で連結された、自然および／または合成の化合物である。「ポリカチオン組成物」とは、１つ以上のポリカチオンを含む組成物を指す。
【００３１】
本明細書で使用するとき、「カチオン」または「カチオン性単量体」とは、本明細書に示されるポリカチオンを作製するのに使用し得る単一単位または単量体単位を指す。本明細書で使用するとき、「中性」単量体とは、本発明によって企図されるポリカチオンを形成させるためにカチオンと組み合わせて使用し得る、非極性側鎖を有する単独アミノ酸残基のような、極性または電荷を有さない単量体を指す。
【００３２】
ポリカチオンは、ホモ重合体もしくは共重合体、またはその混合物であることがさらに企図される。ポリカチオンホモ重合体は、同じカチオン単量体の単一反復単位を含む。ポリカチオン共重合体は、異なるカチオン単量体または異なるカチオン性重合体を含む。１つの実施形態において、ポリカチオン共重合体は、カチオン単量体の混合物、ポリカチオンホモ重合体の混合物、またはポリカチオン共重合体の混合物を含んでもよい。
【００３３】
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、完全に組み立てられた抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、抗原に結合することができる抗体断片（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ’（ａｂ）２、Ｆｖ、単鎖抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ））、および所望の生物学的活性を示す限りにおいて前述のものを含む組み換えペプチドを指す。抗原結合部分を、組み換えＤＮＡ技術によってまたはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって産生してもよい。抗体断片または抗原結合部分としては、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、単鎖抗体（ｓｃＦＶ）、単鎖抗体断片、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、線状抗体；キレート組み換え抗体、トリボディ（ｔｒｉｂｏｄｙ）もしくはダイボディ（ｂｉｂｏｄｙ）、イントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、スモール・モジュラー・イムノファーマシューティカル（ＳＭＩＰ）、抗原結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）抗体、ＶＨＨ含有抗体、またはその変異体もしくは誘導体、および抗体が所望の生物学的活性を保持する限りにおいて、ＣＤＲ配列のような、ポリペプチドに特異的抗原結合を付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部を含むポリペプチドが挙げられる。
【００３４】
免疫グロブリンを、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという異なるクラスに割り当てることができ、クラスはさらに、サブクラスまたはアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に分けられ得る。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元立体構造が周知である。異なるアイソタイプは、異なるエフェクター機能を有する。例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプは、抗体依存性細胞性細胞障害（ＡＤＣＣ）活性を有する。本発明の抗体は、定常ドメインを含む場合、これらのサブクラスまたはアイソタイプのいずれであってもよい。
【００３５】
本明細書で使用するとき、「治療的抗体」とは、疾患または障害の治療に使用される抗体を指す。
【００３６】
本明細書で使用するとき、「少なくとも２つの連続する酸性アミノ酸残基を含むＣＤＲドメインを有する抗体」とは、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｅ）などの、少なくとも２つの連続する、一連の酸性アミノ酸残基を有する少なくとも１つのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗体を指す。
【００３７】
本明細書で使用するとき、「Ｆｃ融合体」または「Ｆｃ融合分子」とは、抗体のＦｃドメインなどのその他の分子に直接的または間接的のいずれかで融合したタンパク質またはペプチドを含む分子を指し、そこでは、このタンパク質またはペプチド部分は、所望の標的に特異的に結合する。本明細書で使用するとき、「ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）」とは、抗体のＦｃドメインなどのその他の分子に直接的または間接的のいずれかで融合したペプチドを含む分子を指す。用語「ペプチボディ」は、Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｆｃドメインに融合した全長タンパク質）を含まない。本発明は、Ｆｃドメインの（好ましくはループ領域内の）内部配列のような、ペプチドを含むように修飾されたＦｃドメインを含む分子を含む。Ｆｃ内部ペプチド分子は、特定の内部領域に前後に並んだ２つ以上のペプチド配列を含んでもよく、それらはその他の内部領域にさらなるペプチドを含んでもよい。
【００３８】
本明細書で使用するとき、用語「溶解性を向上させる」は、ポリカチオン組成物を欠く別の溶液、抗体またはＦｃ融合体の製剤と比較して、より少ない凝集体、二量体もしくは多量体を含むか、またはより少ない沈殿を結果として生じる、ポリカチオン組成物を含む溶液、抗体製剤、またはＦｃ融合体製剤を指す。
【００３９】
本明細書で使用するとき、用語「貯蔵寿命の増大」は、ポリカチオン組成物を欠く組成物と比較したとき、ポリカチオンを含む本発明の組成物が、抗体またはＦｃ融合分子を凝集体、二量体もしくはその他の多量体、または沈殿物へと分解させることなく、かつ生物学的活性を顕著に損失させることなく、適切な条件で保存することができる時間の長さの増大を指す。
【００４０】
抗体
本発明によって使用されるべきモノクローナル抗体を、Ｋｏｈｌｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−７，１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製してもよく、または組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）よって作製してもよい。また、モノクローナル抗体を、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８，１９９１）およびＭａｒｋｓら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７，１９９１）に記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。
【００４１】
本発明で有用な抗体を、当技術分野において周知の、本明細書に記載された抗体のより小さい抗原結合断片として使用し得るということがさらに企図される。
【００４２】
抗体断片は、インタクトな全長抗体の一部、好ましくは、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；二重特異性抗体、三重特異性抗体などのような多重特異性抗体断片（例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ）；ミニボディ；キレート組み換え抗体；トリボディまたはバイボディ（ｂｉｂｏｄｉｅｓ）；イントラボディ；ナノボディ；スモール・モジュラー・イムノファーマシューティカル（ＳＭＩＰ）、結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質；ラクダ化抗体；ＶＨＨ含有抗体；および抗体断片から形成されたその他のポリペプチドが挙げられる。
【００４３】
抗体のパパイン消化は、各々単一の抗原結合部位を有するＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨドメインからなる一価の断片である、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる、２つの同一の抗原結合断片、ならびにすぐに結晶化できることに因んで命名された残りの「Ｆｃ」断片を生じさせる。ペプシン処理は、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片を生じさせる。この断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む２つの「単鎖Ｆｖ」すなわち「ｓｃＦＶ」抗体断片を有し、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間のポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーは、Ｆｖが抗原結合のための所望の構造を形成するのを可能にし、結果として単鎖抗体（ｓｃＦｖ）を生じさせる。単鎖抗体中では、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対になって、それらを単一のタンパク質鎖として作るのを可能にする合成リンカーを介して一価の分子を形成する（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６，１９８８、およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３，１９８８）。ｓＦｖの総説については、のＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，第１１３巻，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２６９−３１５ページ（１９９４））を参照されたい。Ｆｄ断片は、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなる。
【００４４】
キメラ抗体とは、典型的には異なる種を起源とする２つの異なる抗体に由来する配列を含む抗体を指す（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）。最も典型的には、キメラ抗体は、ヒトおよび齧歯類の抗体断片、通常はヒト定常領域およびマウス可変領域を含む。
【００４５】
追加の抗体断片としては、ＶＨドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６，１９８９）が挙げられる。ダイアボディは二価の抗体である。この抗体では、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは単一のポリペプチド鎖上に発現されるが、同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短過ぎるリンカーを用いているので、それらのドメインが別の鎖の相補的ドメインと対形成することを強いられ、２つの抗原結合部位を創り出している（例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８，１９９３、およびＰｏｌｊａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１−１１２３，１９９４参照）。ダイアボディは、二重特異性または単特異性であることができる。
【００４６】
軽鎖を欠く機能的重鎖抗体は、テンジクザメ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３７４：１６８−７３，１９９５）、アラフラオオセ（Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：３１３−２６，２００１）、ならびにラクダ、ヒトコブラクダ、アルパカ、およびラマなどの、ラクダ科（Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６−８，１９９３；Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７５：４１３，１９９８）で天然に生じる。これらの動物では、抗原結合部位が、ＶＨＨドメインという単一ドメインと化している。ラクダ科動物の重鎖を有する抗体を作製するための方法は、例えば、米国特許公報第２００５／０１３６０４９号および第２００５／００３７４２１号に記載されている。
【００４７】
重鎖抗体の可変ドメインは、わずか１５ｋＤａの分子量を有する、完全に機能的な最小の抗原結合断片であるので、この実体はナノボディと呼ばれる（Ｃｏｒｔｅｚ−Ｒｅｔａｍｏｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６４：２８５３−５７，２００４）。ナノボディライブラリーを、Ｃｏｎｒａｔｈら（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ ４５：２８０７−１２，２００１）に記載されたようにまたはＨｏｌｌｉｇｅｒら（Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６−３６，２００５）およびＲａｈｂａｒｉｚａｄｅｈら（Ｈｙｂｒｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍｉｃｓ．２３：１５１−９，２００４）に記載されたような組み換え法を用いて、免疫化したヒトコブラクダから作製してもよい。
【００４８】
さらなる実施形態において、二重特異性抗体は、キレート組み換え抗体（ＣＲＡｂ）であってもよい。キレート組み換え抗体は、標的抗原の隣接する非重複エピトープを認識し、両方のエピトープに同時に結合するのに十分な柔軟性がある（Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２４６：３６７−７３，１９９５）。
【００４９】
二重特異性Ｆａｂ−ｓｃＦｖ（「バイボディ」）および三重特異性Ｆａｂ−（ｓｃＦｖ）（２）（「トリボディ」）の産生は、Ｓｃｈｏｏｎｊａｎｓら（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：７０５０−５７，２０００）およびＷｉｌｌｅｍｓら（Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ Ａｎａｌｙｔ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｍｅｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．７８６：１６１−７６，２００３）に記載されている。バイボディまたはトリボディについては、ｓｃＦｖ分子を、ＶＬ−ＣＬ（Ｌ）およびＶＨ−ＣＨ１（Ｆｄ）鎖の一方または両方に融合させる。例えば、トリボディを産生するために２つのｓｃＦｖをＦａｂのＣ末端に融合させ、一方、バイボディでは、１つのｓｃＦｖをＦａｂのＣ末端に融合させる。
【００５０】
（ヒンジのない）ペプチドリンカーを介してまたはＩｇＧヒンジを介してＣＨ３に融合したｓｃＦｖからなる「ミニボディ」は、Ｏｌａｆｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２００４ Ａｐｒ；１７（４）：３１５−２３に記載されている。
【００５１】
イントラボディは、細胞内発現を示す単鎖抗体であり、細胞内タンパク質機能を操作することができる（Ｂｉｏｃｃａ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．９：１０１−１０８，１９９０；Ｃｏｌｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１０１：１７６１６−２１，２００４）。抗体コンストラクトを細胞内領域に保持する細胞シグナル配列を含むイントラボディを、Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒら（ＥＭＢＯ Ｊ １４：１５４２−５１，１９９５）およびＷｈｅｅｌｅｒら（ＦＡＳＥＢ Ｊ．１７：１７３３−５．２００３）に記載されたように産生してもよい。トランスボディ（ｔｒａｎｓｂｏｄｉｅｓ）は、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）が単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）抗体と融合している細胞透過性抗体である（Ｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．６４：１１０５−８，２００５）。
【００５２】
標的タンパク質に特異的なＳＭＩＰまたは結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である抗体もさらに企図される。これらのコンストラクトは、抗体エフェクター機能を実行するするのに必要な免疫グロブリンドメインに融合された抗原結合ドメインを含む単鎖ポリペプチドである。例えば、ＷＯ０３／０４１６００、米国特許公開ＵＳ２００３／０１３３９３９、および米国特許公開ＵＳ２００３／０１１８５９２を参照されたい。
【００５３】
イムノアドヘシンにするために、１つ以上のＣＤＲを共有結合または非共有結合のいずれかで分子に組み入れてもよい。イムノアドヘシンは、より大きいポリペプチド鎖の一部としてＣＤＲを組み入れてもよく、別のポリペプチド鎖にＣＤＲを共有結合で連結してもよく、または非共有結合でＣＤＲを組み入れてもよい。ＣＤＲは、イムノアドヘシンが関心となる特定の抗原に特異的に結合するのを可能にする。
【００５４】
１つの態様において、抗体製剤中の抗体は、治療的抗体である。例示的な治療的抗体としては、エンブレル（エタナセプト）、ヒュミラ（アダリムマブ）、シナジス（パリビズマブ）、ＡＭＧ ７１４（抗ＩＬ１５抗体）、ベクチビックス（パニツムマブ）、リツキサン（リツキシマブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、抗ＣＤ８０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（ガリキシマブ）、抗ＣＤ２３ ｍＡｂ（ルミリキシマブ）、Ｍ２００（ボロシキシマブ）、抗クリプトｍＡｂ、抗ＢＲ３ ｍＡｂ、抗ＩＧＦ１Ｒ ｍＡｂ、タイサブリ（ナタリズマブ）、ダクリズマブ、ヒト化抗ＣＤ２０ ｍＡｂ（オクレリズマブ）、可溶性ＢＡＦＦアンタゴニスト（ＢＲ３−Ｆｃ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ、抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ、抗ＩＬ５受容体ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＭ２ ｍＡｂ、抗ＦＧＦ８ ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ−１ ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＤ２ ｍＡｂ、アクチライズ（登録商標）（アルテプラーゼ）、メタライズ（登録商標）（テネクテプラーゼ）、ＣＡＴ−３８８８およびＣＡＴ−８０１５（抗ＣＤ２２ ｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＣＡＴ−３５４（抗ＩＬ１３ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−５００１（抗メソテリンｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＧＣ−１００８（抗ＴＧＦ−β ｍＡｂ）、ＣＡＭ−３００１（抗ＧＭ−ＣＳＦ受容体ｍＡｂ）、ＡＢＴ−８７４（抗ＩＬ１２ ｍＡｂ）、リンフォスタットＢ（ベリムマブ；抗ＢｌｙＳ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ１（マパツムマブ；ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−１ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ２（ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−２ ｍＡｂ）、アブスラックス（商標）（ヒト、抗（炭疽菌由来）防御抗原ｍＡｂ）、ＭＹＯ−０２９（ヒト抗ＧＤＦ−８ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−２１３（ヒト抗エオタキシン１ ｍＡｂ）、エルビタックス（セツキシマブ）、エプラツズマブ、レミケード（インフリキシマブ；抗ＴＮＦ ｍＡｂ、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ベクチビックス（パナツムマブ）、レオプロ（アブシキシマブ）、アクテムラ（抗ＩＬ６受容体ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（ザルツムマブ）、ＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、Ｒ１５０７（抗ＩＧＦ−１Ｒ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ ＨｅｐＣ、ＨｕＭａｘ ＣＤ３８、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ（抗ＩＬ２Ｒａまたは抗ＣＤ２５ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＺＰ３（抗ＺＰ３ ｍＡｂ）、ベキサール（トシツモマブ）、オルソクローンＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３）、ＭＤＸ−０１０（イピリムマブ）、抗ＣＴＬＡ４、ＣＮＴＯ １４８（ゴリムマブ；抗ＴＮＦα炎症ｍＡｂ）、ＣＮＴＯ １２７５（抗ＩＬ１２／ＩＬ２３ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ザルツムマブ）、ＭＤＸ−０６６（ＣＤＡ−１）およびＭＤＸ−１３８８（抗クロストリジウム・ディフィシル毒素Ａおよび毒素Ｂ、Ｃ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０６０（抗ＣＤ３０ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０１８、ＣＮＴＯ ９５（抗インテグリン受容体ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０７（抗マンノース受容体／ｈＣＧβ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１１００（抗ＩＰ１０潰瘍性大腸炎ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０３（バルロチム（商標））、抗炭疽菌炭疽、ＭＥＤＩ−５４５（ＭＤＸ−１１０３、抗ＩＦＮα）、ＭＤＸ−１１０６（ＯＮＯ−４５３８；抗ＰＤ１）、ＮＶＳ抗体＃１、ＮＶＳ抗体＃２、ＦＧ−３０１９（抗ＣＴＧＦ特発性肺線維症フェーズＩ、Ｆｉｂｒｏｇｅｎ）、ＬＬＹ抗体、ＢＭＳ−６６５１３、ＮＩ−０４０１（抗ＣＤ３ ｍＡｂ）、ＩＭＣ−１８Ｆ１（ＶＥＧＦＲ−１）、ＩＭＣ−３Ｇ３（抗ＰＤＧＦＲα）、ＭＤＸ−１４０１（抗ＣＤ３０）、ＭＤＸ−１３３３（抗ＩＦＮＡＲ）、シナジス（パリビズマブ；抗ＲＳＶ ｍＡｂ）、キャンパス（アレムツズマブ）、ベルケード（ボルテゾミブ）、ＭＬＮ０００２（抗α４β７ ｍＡｂ）、ＭＬＮ１２０２（抗ＣＣＲ２ケモカイン受容体ｍＡｂ）、シムレクト（バシリキシマブ）、プレクシージュ（ルミラコキシブ）、ゾレア（オマリズマブ）、ＥＴＩ２１１（抗ＭＲＳＡ ｍＡｂ）、ゼナパックス（ダクリズマブ）、アバスチン（ベバシズマブ）、マブセラＲＡ（リツキシマブ）、タルセバ（エルロチニブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、ゼチーア（エゼチミブ）、ジトリン（エゼチミブおよびシンバスタチン）、ＮＩ−０４０１（ヒト抗ＣＤ３）、アデカツムマブ、ゴリムマブ（抗ＴＮＦα ｍＡｂ）、エプラツズマブ、ゲムツズマブ、ラプティバ（エファリズマブ）、シムジア（セルトリズマブペゴール、ＣＤＰ ８７０）、（ソリリス）エクリズマブ、ペキセリズマブ（抗Ｃ５補体）、ＭＥＤＩ−５２４（ヌマックス）、ルセンティス（ラニビズマブ）、１７−１Ａ（パノレックス）、トラビオ（レルデリムマブ）、セラシムｈＲ３（ニモツズマブ）、オムニターグ（ペルツズマブ）、オシデム（ＩＤＭ−１）、オバレックス（Ｂ４３．１３）、ヌビオン（ビジリズマブ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ（ＩＤＥＣ−１３１）、ザネリム（ヒト化抗ＣＤ１１ａ）、ならびにカンツズマブが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
Ｆｃ融合分子
抗体のＦｃドメインなどのその他の分子に直接的または間接的のいずれかで融合したタンパク質またはペプチドを含むＦｃ融合分子も、本発明での使用が企図される。Ｆｃ融合分子には、Ｆｃドメインに融合した全長タンパク質を含むＦｃ融合タンパク質、およびペプチボディが含まれる。ペプチボディとは、抗体のＦｃドメインなどのその他の分子に直接的または間接的のいずれかで融合したペプチドを含む分子を指し、ペプチボディでは、このペプチド部分が所望の標的に特異的に結合する。
【００５６】
用語「ペプチボディ」は、Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｆｃドメインに融合した全長タンパク質）を含まない。本明細書で使用するとき、用語「ペプチド」は、ペプチド結合で連結された２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、またはそれより多くのアミノ酸の分子を指す。例示的なペプチドを、当技術分野で公知の方法のいずれかで作製してもよく、例えば、ペプチドライブラリー（例えば、ファージディスプレイライブラリー）で実行するか、化学合成で作製するか、タンパク質の消化によって得るか、または組み換えＤＮＡ技術を用いて作製してもよい。ペプチドには、精製されているかまたは２つの形態の混合物の状態にあるかのいずれかの、ＤおよびＬアミノ酸形態が含まれる。ペプチボディの産生は、一般に、ＰＣＴ公開のＷＯ００／２４７８２、米国特許第７，１３８，３７０号、米国特許第６，６６０，８４３ Ｂ１号、および米国特許公開ＵＳ２００４／００４４１８８に記載されている。
【００５７】
タンパク質またはペプチドを、Ｆｃ領域に融合するかまたは修飾されたＦｃ分子である、Ｆｃループに挿入するかのいずれかにしてもよい。Ｆｃループは、その全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願公開ＵＳ２００６／０１４０９３４に記載されている。本発明は、Ｆｃドメインの（好ましくはループ領域内の）内部配列のような、ペプチドを含むように修飾されたＦｃドメインを含む分子を含む。Ｆｃ内部ペプチド分子は、特定の内部領域に前後に並んだ２つ以上のペプチド配列を含んでもよく、それらはその他の内部領域にさらなるペプチドを含んでもよい。
【００５８】
本発明は、タンパク質もしくはペプチドのＮもしくはＣ末端に、またはＮおよびＣ末端の両方で融合したタンパク質またはペプチドに付着した少なくとも１つのＦｃドメインの存在を企図する。
【００５９】
本発明の様々な実施形態において、Ｆｃ構成成分は、ネイティブＦｃまたはＦｃ変異体のいずれかである。「Ｆｃドメイン」は、以下に定義されるようなネイティブＦｃおよびＦｃ変異体の分子ならびに配列を包含する。
【００６０】
「ネイティブＦｃ」とは、単量体形態であれ多量体形態であれ、抗体全体の消化から結果として得られる非抗原結合断片の配列を含む分子または配列を指す。典型的には、ネイティブＦｃは、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。ネイティブＦｃの免疫グロブリン源は、１つの態様において、ヒト起源であり、代わりの実施形態において、任意のクラスの免疫グロブリンであってもよい。ネイティブＦｃドメインは、単量体ポリペプチドから構成されており、この単量体ポリペプチドは、共有結合的（すなわち、ジスルフィド結合）および／または非共有結合的な会合によって連結されることにより、二量体または多量体の形態になり得る。ネイティブＦｃ分子の単量体サブユニット間の分子間ジスルフィド結合の数の範囲は、クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、ＩｇＧＡ２）によって、１から４である。ネイティブＦｃの１つの例は、ＩｇＧのパパイン消化から結果として得られるジスルフィド結合した二量体である（Ｅｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８２），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：４０７１−９参照）。
【００６１】
「Ｆｃ変異体」とは、ネイティブＦｃから修飾されているが、依然としてサルベージ受容体ＦｃＲｎの結合部位を含む分子または配列を指す。国際出願のＷＯ９７／３４６３１（１９９７年９月２５日に公開）およびＷＯ９６／３２４７８は、例示的なＦｃ変異体、およびサルベージ受容体との相互作用を記載しており、参照により本明細書に組み入れられる。１つの態様において、用語「Ｆｃ変異体」は、非ヒトのネイティブＦｃからヒト化された分子または配列を含む。別の態様において、ネイティブＦｃは、本発明の融合分子に必要とされない構造的特色または生物学的活性を与えるという理由で除去し得る部位を含む。したがって、用語「Ｆｃ変異体」は、（１）ジスルフィド結合の形成、（２）選択された宿主細胞との不適合性、（３）選択された宿主細胞での発現時のＮ末端の不均一性、（４）グリコシル化、（５）補体との相互作用、（６）サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合、または（７）抗体依存性細胞性細胞障害（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼすかまたはそれらに関与する１つ以上のネイティブＦｃ部位を欠く分子または配列を含む。Ｆｃ変異体については、以下でさらに詳細に記載する。
【００６２】
Ｆｃ変異体およびネイティブＦｃと同様に、用語「Ｆｃドメイン」は、抗体全体から消化されたものであれ、その他の手段で産生されたものであれ、単量体形態または多量体形態の分子を含む。Ｆｃ配列は、当技術分野において公知であり、本発明での使用が企図される。例えば、Ｆｃ ＩｇＧ１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８５７）、Ｆｃ ＩｇＧ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８５９）、Ｆｃ ＩｇＧ３（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８６０）、Ｆｃ ＩｇＧ４（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８６１）、Ｆｃ ＩｇＡ１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８７６）、Ｆｃ ＩｇＡ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８７７）、Ｆｃ ＩｇＤ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８８０）、Ｆｃ ＩｇＭ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８７１）、およびＦｃ ＩｇＥ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８５４）は、本明細書での使用が企図されるいくつかの追加のＦｃ配列である。
【００６３】
ジスルフィド結合の形成による二量体化を妨げる特定の条件が存在しないならば、適当なシステイン残基が存在するとき、Ｆｃ単量体は自発的に二量体化するということに留意すべきである。Ｆｃ二量体において通常ジスルフィド結合を形成するシステイン残基が取り除かれるかまたはその他の残基に置き換えられるとしても、単量体鎖は通常、非共有結合的な相互作用を通じて二量体を形成する。本明細書中の用語「Ｆｃ」は、これらの形態、すなわち、ネイティブな単量体、ネイティブな二量体（ジスルフィド結合で連結している）、修飾された二量体（ジスルフィドおよび／または非共有結合で連結している）、ならびに修飾された単量体（すなわち、誘導体）のいずれかを意味するように用いられる。
【００６４】
前述のように、Ｆｃ変異体は、本発明の範囲内の好適なビヒクルである。サルベージ受容体への結合が維持されるという条件で、ネイティブＦｃを広範囲にわたって修飾し、Ｆｃ変異体を形成させてもよい。例えば、ＷＯ９７／３４６３１およびＷＯ９６／３２４７８を参照されたい。そのようなＦｃ変異体において、本発明の融合分子によって必要とされない構造的特色または機能的活性を与えるネイティブＦｃの１つ以上の部位を除去してもよい。これらの部位を、例えば、残基を置換するかまたは欠失させることによって、その部位に残基を挿入することによって、またはその部位を含む部分を切断することによって、除去してもよい。また、挿入または置換される残基は、ペプチドミメティックまたはＤ−アミノ酸などの改変されたアミノ酸であってもよい。Ｆｃ変異体は、いくつもの理由から望ましい場合があり、そのうちのいくつかは本明細書に記載されている。例示的なＦｃ変異体には、以下のような分子および配列が含まれる。
１．ジスルフィド結合の形成に関与する部位が除去されている。そのような除去は、本発明の分子を産生するのに使用する宿主細胞に存在するその他のシステイン含有タンパク質との反応を回避し得る。この目的のために、Ｎ末端のシステイン含有セグメントが切断されていてもよくまたはシステイン残基が欠失しているかもしくはその他のアミノ酸（例えば、アラニル、セリル）と置換されていてもよい。システイン残基が除去された場合でも、単鎖Ｆｃドメインは依然として、非共有結合で結びつく二量体Ｆｃドメインを形成することができる。
２．ネイティブＦｃが選択された宿主細胞とより適合するように修飾されている。例えば、プロリンイミノペプチダーゼなどの大腸菌の消化酵素によって認識され得る、典型的なネイティブＦｃのＮ末端付近のＰＡ配列を除去してもよい。また、特にこの分子を大腸菌などの細菌細胞で組み換え発現させる場合に、Ｎ末端のメチオニン残基を付加してもよい。
３．選択された宿主細胞で発現したときのＮ末端の不均一性を防ぐために、ネイティブＦｃのＮ末端の一部が除去されている。この目的のために、Ｎ末端の最初の２０アミノ酸残基、特に位置１、２、３、４、および５のアミノ酸残基のいずれかを欠失させてもよい。
４．１つ以上のグリコシル化部位が除去されている。典型的にグリコシル化される残基（例えば、アスパラギン）は、細胞溶解性応答を付与し得る。そのような残基は、欠失しいるかまたはグリコシル化されない残基（例えば、アラニン）と置換されていてもよい。
５．Ｃ１ｑ結合部位などの、補体との相互作用に関与する部位が除去されている。例えば、ヒトＩｇＧのＥＫＫ配列を欠失させるかまたは置換してもよい。補体の動員は、本発明の分子にとって有利ではない可能性があるので、そのようなＦｃ変異体の場合には回避されてもよい。
６．サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合に影響を及ぼす部位が除去されている。ネイティブＦｃは、本発明の融合分子に必要とされない、ある種の白血球との相互作用の部位を有している可能性があるので、除去されてもよい。
７．ＡＤＣＣ部位が除去されている。ＡＤＣＣ部位は当技術分野において公知である。例えば、ＩｇＧ１のＡＤＣＣ部位に関しては、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（５）：６３３−９（１９９２）を参照されたい。その上、これらの部位は本発明の融合分子に必要とされないので、除去されてもよい。
８．ネイティブＦｃが非ヒト抗体に由来する場合、ネイティブＦｃはヒト化されてもよい。典型的には、ネイティブＦｃをヒト化するために、非ヒトのネイティブＦｃの選択された残基を、ヒトのネイティブＦＣに通常見られる残基と置換する。抗体のヒト化のための技術は当技術分野において周知である。
【００６５】
Ｆｃ部分の変異体、類似体、または誘導体を、例えば、残基または配列の様々な置換を施すことによって構築してもよい。変異体（または類似体）ポリペプチドには、１つ以上のアミノ酸残基がＦｃアミノ酸配列を補完している、挿入変異体が含まれる。挿入は、タンパク質のどちらか一方もしくは両方の末端にあってもよく、またはＦｃアミノ酸配列の内部領域内に位置していてもよい。どちらか一方または両方の末端に付加残基を有する、挿入変異としては、例えば、融合タンパク質およびアミノ酸タグまたは標識を含むタンパク質を挙げることができる。例えば、Ｆｃ分子は、特にこの分子を大腸菌などの細菌細胞で組み換え発現させる場合に、Ｎ末端Ｍｅｔを任意で含んでもよい。
【００６６】
Ｆｃ欠失変異体では、Ｆｃポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基が除去されている。欠失は、Ｆｃポリペプチドの一方もしくは両方の末端で生じさせることができ、またはＦｃアミノ酸配列内の１つもしくは複数のアミノ酸残基の除去によって生じさせることができる。それゆえに、Ｆｃ欠失変異体には、Ｆｃポリペプチド配列の全ての断片が含まれる。
【００６７】
Ｆｃ置換変異体では、Ｆｃポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基が除去され、代わりの残基と置き換えられている。１つの態様において、置換は、保存的な性質を帯び、、この種の保存的置換は当技術分野において周知である。あるいは、本発明は、非保存的でもある置換を包括的に含む。例示的な保存的置換は、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２版；Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７５），７１−７７ページ］に記載されており、それらを以下に示す。
【００６８】
【表１】
【００６９】
代わりの、例示的な保存的置換を以下に示す。
【００７０】
【表２】
【００７１】
例えば、Ｆｃ配列のいくつかのまたは全てのジスルフィド架橋の形成を妨げるために、システイン残基を欠失させるかまたはその他のアミノ酸と置き換えることができる。各々のシステイン残基を、除去および／またはＡｌａもしくはＳｅｒなどの、その他のアミノ酸残基と置換することができる。また、別の例として、（１）Ｆｃ受容体結合部位を取り除くために、（２）補体（Ｃ１ｑ）結合部位を取り除くために、および／または（３）抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣ）部位を取り除くために修飾を施し、アミノ酸置換を導入してもよい。そのような部位は当技術分野において公知であり、任意の公知の置換が本明細書で使用されるＦｃの範囲内にある。例えば、ＩｇＧ１のＡＤＣＣ部位に関しては、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．５，６３３−６３９（１９９２）を参照されたい。
【００７２】
同様に、１つ以上のチロシン残基をフェニルアラニン残基で置き換えることができる。さらに、その他の変異体アミノ酸の挿入、欠失、および／または置換も企図されており、本発明の範囲内にある。保存的アミノ酸置換が一般的に好ましい。さらに、改変が、ペプチドミメティックまたはＤ−アミノ酸などの、改変アミノ酸の形態であってもよい。
【００７３】
また、化合物のＦｃ配列を、ペプチドについて本明細書で記載したように誘導体化してもよく、すなわち、アミノ酸残基の挿入、欠失、または置換以外の修飾を持たせてもよい。好ましくは、修飾は、共有結合の性質を帯び、例えば、重合体、脂質、その他の有機および無機部分との化学結合を含む。本発明の誘導体を、循環半減期を増大させるように調製してもよく、または所望の細胞、組織、もしくは器官へのポリペプチドの標的化能力を向上させるように設計してもよい。
【００７４】
「Ａｌｔｅｒｅｄ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｈａｌｆ−Ｌｉｆｅ」と題された、ＷＯ９６／３２４７８に記載されているように、インタクトＦｃ分子のサルベージ受容体結合ドメインを本発明の化合物のＦｃ部分として使用することも可能である。本明細書でＦｃと呼ばれる分子群の追加のメンバーは、「Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−Ｌｉｋｅ Ｄｏｍａｉｎｓ ｗｉｔｈ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｈａｌｆ−Ｌｉｖｅｓ」と題された、ＷＯ９７／３４６３１に記載されているものである。この段落で引用された公開ＰＣＴ出願は両方とも、参照により本明細書に組み入れられる。
【００７５】
１つの態様において、抗体製剤中のＦｃ融合分子は、治療的ＦＣ分子である。例示的な治療的Ｆｃ融合分子としては、ＩＬ−１ Ｔｒａｐ（ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分ならびに両方のＩＬ−１受容体構成成分（Ｉ型受容体および受容体付属タンパク質）の細胞外ドメイン）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（ＩｇＧ１ Ｆｃに融合したＶＥＧＦＲ１のＩｇドメイン）、アタシセプト（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト）、ＣＤ４−Ｉｇ融合タンパク質（Ｐｒｏ−５４２）、ＴＮＦＲ１−ＩｇＧ、アメビブ（登録商標）（アレファセプト、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ１）、ＣＤ３０−Ｌ−ＩｇＧ、ＩＬ−１０−Ｆｃ、ＴＮＲＦ−Ｆｃ、ＩＬ−２−Ｉｇ、ＯＰＧ−Ｆｃ、ならびにレプチン（ＯｂＲ）−Ｆｃが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７６】
本発明を、抗アンジオポエチン（例えば、抗Ａｎｇ２および／または抗Ａｎｇ１）特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などを製剤化する際に使用することができるということがさらに企図される。これらの抗アンジオポエチン特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などには、限定されるものではないが、ＷＯ０３／０５７１３４および米国出願公開ＵＳ２００３／０２２９０２３に記載されたものが挙げられる。前記の文献の各々は、特にＡｎｇ２特異的抗体およびペプチボディなどに関する部分、とりわけそれらの公報に記載された配列の、およびＬ１（Ｎ）；Ｌ１（Ｎ） ＷＴ；Ｌ１（Ｎ） １Ｋ ＷＴ；２ｘＬ１（Ｎ）；２ｘＬ１（Ｎ） ＷＴ；Ｃｏｎ４ （Ｎ）、Ｃｏｎ４ （Ｎ） １Ｋ ＷＴ、２ｘＣｏｎ４ （Ｎ） １Ｋ；Ｌ１Ｃ；Ｌ１Ｃ １Ｋ；２ｘＬ１Ｃ；Ｃｏｎ４Ｃ；Ｃｏｎ４Ｃ １Ｋ；２ｘＣｏｎ４Ｃ １Ｋ；Ｃｏｎ４−Ｌ１ （Ｎ）；Ｃｏｎ４−Ｌ１Ｃ；ＴＮ−１２−９ （Ｎ）；Ｃ１７ （Ｎ）；ＴＮ８−８（Ｎ）；ＴＮ８−１４ （Ｎ）；Ｃｏｎ １ （Ｎ）を含むが、これらに限定されない、Ａｎｇ２特異的抗体およびペプチボディなどに関する部分に記載されたものに関して、全体が参照により本明細書に組み入れられる。また、これらの抗アンジオポエチン特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などは、抗Ａｎｇ２抗体および製剤、例えば、それに関してその全体が参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２００３／０３０８３３に記載されたもの、特にＡｂ５２６；Ａｂ５２８；Ａｂ５３１；Ａｂ５３３；Ａｂ５３５；Ａｂ５３６；Ａｂ５３７；Ａｂ５４０；Ａｂ５４３；Ａｂ５４４；Ａｂ５４５；Ａｂ５４６；Ａ５５１；Ａｂ５５３；Ａｂ５５５；Ａｂ５５８；Ａｂ５５９；Ａｂ５６５；ＡｂＦ１ＡｂＦＤ；ＡｂＦＥ；ＡｂＦＪ；ＡｂＦＫ；ＡｂＧ１Ｄ４；ＡｂＧＣ１Ｅ８；ＡｂＨ１Ｃ１２；ＡｂｌＡ１；ＡｂｌＦ；ＡｂｌＫ、ＡｂｌＰ；およびＡｂｌＰを、その公報に記載されたように様々な順列で含み、これらは各々、前述の刊行物に完全に開示されたようにその全体が参照により本明細書に個別的かつ具体的に組み入れられる。
【００７７】
ポリカチオン
本発明で有用なポリカチオンには、天然および合成両方の、正電荷を持つペプチドおよびタンパク質、ならびにポリアミン、炭水化物、または合成のポリカチオン性重合体が含まれる。本発明で有用な例示的ポリカチオンとしては、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ポリヒスチジン、およびカチオン性多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。本発明で有用な追加のポリカチオンとしては、プロタミン、ポリブレン（登録商標）（１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロマイド、臭化ヘキサジメトリン）、ヒストン、ミエリン塩基性タンパク質、硫酸ポリミキシンＢ、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、ブラジキニン、スペルミン、プトレシン、カダベリン、オクチルアルギニン、カチオン性デンドリマー、および合成ペプチドが挙げられる。ある種の用途については、ポリカチオン性担体として、カチオン性脂質およびペプチド部分が含まれてもよい。例えば、ＷＯ９６／２２７６５を参照されたい。
【００７８】
関連する実施形態において、ポリカチオンは、リジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン、および本明細書で示されるその他のカチオン性単量体を含むが、これらに限定されない、正電荷を持つ単量体の混合物、または電荷を持つ単量体および電荷を持たない単量体の混合物を含んでもよい。例示的な単量体としては、塩基性アミノ酸、中性単量体に連結したカチオン性単量体の反復配列、または反復構造特性を有するその他のタンパク質分子もしくは化学構造物が挙げられる。本発明での使用が企図される電荷を持たない単量体としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、またはプロリンなどの、中性アミノ酸が挙げられる。
【００７９】
追加の実施形態において、ポリカチオンは、リジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン、およびカチオン性多糖類からなる群より選択される正電荷を持つ単量体のいずれか１つの単量体の混合物を含んでもよい。
【００８０】
本発明の方法および組成物で有用ないくつかのポリカチオンは、タンパク質に全体として正電荷を与える高度に塩基性の領域またはアミノ酸を含むタンパク質またはその断片である。全長塩基性タンパク質全体をポリカチオン組成物に使用し得るということ、または塩基性アミノ酸残基を有するタンパク質の一部をポリカチオン中のカチオン性単量体として使用し得るということが企図される。例えば、ヒトプロタミン（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２７５３）は、１０２アミノ酸のアルギニンに富むタンパク質である。ヒトプロタミンタンパク質の高度に塩基性の部分を、本明細書に記載されたようなカチオン性単量体として使用し得るということが企図される。ひいては、プロタミン単量体をポリカチオン組成物における反復単位として使用してもよい。
【００８１】
さらに、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）は、中枢神経系に見られる高度に塩基性のタンパク質である（Ｅｙｌａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１８：５７７０−８４，１９７１）。この全長塩基性タンパク質全体をポリカチオン組成物に使用し得るということ、またはヒトミエリン塩基性タンパク質の公知のアイソフォーム（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｐ０２６８６、ＮＰ＿００１０２０２５２、ＮＰ＿００１０２０２６３、ＮＰ＿００１０２０２６１、およびＮＰ＿００２３７６）のいずれの高度に塩基性の部分をも本明細書に記載されたようなカチオン性単量体として使用し得るということが企図される。また、ＭＢＰ単量体を、ポリカチオン重合体の組成物における反復単位として使用してもよい。
【００８２】
ポリミキシンＢ（ＰＭＢ）の環状部分（Ｔｈｒ−Ｄａｂ−シクロ［Ｄａｂ−Ｄａｂ−ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｄａｂ−Ｄａｂ−Ｔｈｒ］、ここでＤａｂは２，４−ジアミノ酪酸である）を、本発明のポリカチオン組成物における単一のカチオン性単量体として使用してもよく、または線状化して、ＰＭＢ部分の複数の単量体を有する重合体を作製するよう使用することができる。また、当技術分野で公知のポリミキシンＢ のヘプタペプチド、ノナペプチド、およびオクタペプチド（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（Ｔｏｋｙｏ）４５：７４２−７４９およびＴｓｕｂｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ ４９：３１２２−３１２８，２００５）を、単量体として使用するかまたは線状化して、本発明のポリカチオン組成物を作製するための反復単位として使用してもよい。
【００８３】
ブラジキニンは、ＲＰＰＧＦＳＰＦＲというアミノ酸配列を有する９アミノ酸のペプチド鎖である。この９アミノ酸配列を本発明のポリカチオン組成物に使用してもよく、またはその代わりとして、この９アミノ酸配列は、ブラジキニン単量体の反復単位を有する重合体を形成させるために使用されるカチオン性単量体を含む。
【００８４】
スペルミン、プトレシン、およびカダベリンは、本発明の製剤で企図される塩基性アミノ酸のカチオン性誘導体である。スペルミンおよびプトレシンは、アルギニンの誘導体である。プトレシンは、アルギニンがアルギニンデカルボキシラーゼおよびアドマチン（ａｄｍａｔｉｎｅ）イミノヒドロキシラーゼと反応することによって生成される。あるいは、アルギニンをまずオルニチンに変換し、それをプトレシンに変換することができる。スペルミンは、プトレシンが脱カルボキシルＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン由来のアミノプロピル基と反応してスペルミジンを生じることにより結果として得られる。その後、スペルミジンは、別のアミノプロピル基が付加された後、スペルミン［ＮＨ２（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２］に変換される。カダベリンは、リジンの誘導体であり、リジンがリジンデカルボキシラーゼと反応した後に生成される。本発明で有用なポリカチオン組成物は、スペルミン、プトレシン、またはカダベリンのうちの１つ以上の単量体を含み、これらの単量体の混合物をさらに含み得るということが企図される。
【００８５】
カチオン性多糖類は、本明細書に示されるカチオン性単量体などの、カチオン性部分とコンジュゲートしているかまたは他の形態で該カチオン性部分に連結されている多糖類である。キトサンを含むが、これに限定されない、ポリカチオン性多糖類は、本発明の組成物および方法での使用が企図される。カチオン性多糖類を、当技術分野において公知の技術を用いて作製してもよい。例えば、Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．１０：１３９−４９，２００３；米国特許第６，９５８，３２５号、および国際特許出願のＷＯ２００３／０９２７３９を参照されたい。
【００８６】
さらなる実施形態において、当技術分野において公知の任意のカチオン性単量体は、本発明のポリカチオン組成物での使用が企図される。
【００８７】
１つの態様において、ポリアミノ酸化合物の文脈における、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリヒスチジン、およびポリオルニチンなどの、ポリカチオンは、２から約５００残基からなり、０．２ｋＤａから７０ｋＤａの分子量値を有する。ポリアミノ酸のポリカチオンでは、ポリカチオン化合物中の個々のアミノ酸単量体の数を、ポリカチオンを構成しているアミノ酸の分子量を知った上で、ポリカチオン化合物の分子量に基づいて決定してもよい。例えば、７個のリジン残基を含む重合体の重さは約１ｋＤａであり、６０個のリジン残基を含む重合体の重さは約８ｋＤａであり、７０ｋＤａのポリリジンは５００個のリジン残基を含む。
【００８８】
１つの実施形態において、本発明の方法および組成物で使用されるポリカチオンの分子量は、約０．２ｋＤａから７０ｋＤａ、約１ｋＤａから約７０ｋＤａ、約５ｋＤａから約５０ｋＤａ、または約１０ｋＤから約３５ｋＤであってもよい。組成物中のポリカチオンの分子量は、１ｋＤ未満、約１ｋＤ、約５ｋＤ、約１０ｋＤ、約１５ｋＤ、約２０ｋＤ、約２５ｋＤ、約３０ｋＤ、約３５ｋＤ、約４０ｋＤ、約４５ｋＤ、約５０ｋＤ、約５５ｋＤ、約６０ｋＤ、約６５ｋＤ、または約７０ｋＤの分子量を有するということが企図される。
【００８９】
ポリカチオン組成物を含む抗体およびＦｃ融合分子の製剤を作製するための方法
溶解性を向上させるために、溶液のｐＨを溶液中の抗体またはＦｃ融合分子の等電点（ｐＩ）よりも少なくとも１ｐＨ単位、または２ｐＨ単位も、低くまたは高くすることが重要である。抗体またはＦｃ融合分子の等電点とは、抗体またはＦｃ融合分子の正味の電荷がゼロとなるｐＨである。高いｐＩ（例えば、８から１１）を有する抗体またはＦｃ融合分子は、通常、生理的ｐＨの７．４では溶液中で凝集体を形成しない。
【００９０】
異なるアイソタイプの抗体は、約７０％の相同性を共有しており、典型的な抗体のｐＩは、約８．０から８．５であるが、約ｐＩ６から約ｐＩ９の範囲に及び得る。抗体の溶解性を増大させ、凝集および二量体形成を低下させるために、抗体溶液をｐＨ５から６で製剤化する。このｐＨでは、抗体分子は正電荷を持ち、互いに反発し、凝集しない。また、このｐＨは、アスパラギンの脱アミド、メチオニンの酸化、ならびに酵素的および化学的切断の速度が低いので有用である。
【００９１】
より低いｐＩ（例えば、ｐＩ５から７）の抗体またはＦｃ融合分子は、より多くの負の電荷を有するが、凝集体を生成し、ｐＨ５から６の製剤溶液中でまたはｐＨ＝ｐＩ点を越える製剤ｐＨ５から６から生理的ｐＨ７．４への移行の間に注射部位で沈殿する可能性がある。より低いｐＩ値を有する抗体は、乏しい溶解性を示す。例えば、６．４の計算ｐＩを有するＩｇＧ２λ抗体（実施例１）は、ｐＨ５．５から６．０で乏しい溶解性を有する。これは、溶液のｐＨが抗体のｐＩに近づくことによって生じる可能性が高い。ｐＨが抗体のｐＩに近づくと、抗体分子は電気的に中性になり、互いに反発せず、溶液中で凝集する傾向がある。
【００９２】
さらに、抗体は、７．５よりも高いｐＩを有するが、ポリカチオンとの会合を受け入れられる抗体の負電荷を持つ領域またはドメインも示してよい。例えば、抗体は、高いｐＩを有するが、抗体を不安定にさせ、溶液中で凝集しやすくさせる連続する酸性アミノ酸残基をＣＤＲドメインに含んでもよい。一続きの連続するアミノ酸を含む抗体は、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｅ）などの、少なくとも２つの連続する、一連の酸性アミノ酸残基を有するＣＤＲアミノ酸配列を有する抗体である。
【００９３】
さらに、ポリカチオン溶液中のＦｃ融合分子の製剤は、Ｆｃ融合分子のｐＩ、およびＦｃ融合体の配列内の任意の一続きの負電荷を持つアミノ酸残基に基づいて調整される。Ｆｃ融合分子のｐＩの範囲は、ｐＩ４からｐＩ９であってもよい。抗体と同様に、低いｐＩでは、Ｆｃ融合分子は、溶液中での低い溶解性を有する可能性が高い。
【００９４】
関心となる抗体を有する製剤のための最適なポリカチオン溶液を決定するために、当技術分野において公知の標準的な技術（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９４）を用いて、抗体の全体の電荷に基づいて、抗体のｐＩをまず決定する。１つの酸性残基は、抗体のｐＩを０．１単位下げる。例えば、典型的な抗体のｐＩが約８ならば、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｅ）などの追加の酸性残基を有する抗体は、抗体中の各負電荷のアミノ酸につき、通常より約０．１ｐＩ単位低いｐＩを有する。ｐＨが抗体のｐＩを上回り、抗体がアスパラギン酸またはグルタミン酸残基を含む場合、負電荷を持つアミノ酸は脱プロトン化され、これらの酸性残基で負電荷を生じる。
【００９５】
いくつかの一般に使用されるポリカチオン溶液のｐＩは、以前に計算されている。例えば、ポリリジンのｐＩは約１１であり、ポリアルギニンのｐＩは約１０．９であり、プロタミンのｐＩは約１０であり、ＭＢＰのｐＩは約１１である。これらのおよびその他のポリカチオンの高いｐＩおよび正電荷のおかげで、これらのカチオン性重合体が、負電荷を持つ抗体またはＦｃ融合分子を溶液中で安定化させるのに有用なものとなっている。
【００９６】
１つの実施形態において、抗体またはＦｃ融合分子溶液中のポリカチオンの濃度は、約０．１％から約１０％重量／重量（ｗ／ｗ）である。１つの実施形態において、ポリカチオンは、約１％から約５％ｗ／ｗ、約２％から約４％ｗ／ｗまたは約３％ｗ／ｗである。関連する実施形態において、溶液中の抗体またはＦｃ融合分子は、約１ｍｇ／ｍｌから約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度であり得る。別の実施形態において、製剤中の抗体またはＦｃ融合分子の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ、約２．５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１２５ｍｇ／ｍｌ、約１３０ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、または約１５０ｍｇ／ｍｌであり得る。
【００９７】
別の態様において、ポリカチオン／抗体またはＦｃ融合分子の組成物を、組成物中のポリカチオン対抗体またはＦｃ融合分子の比に基づいて製剤化してもよい。例えば、製剤を、約２：１のポリカチオン対抗体もしくはＦｃ融合分子、約１：１のポリカチオン対抗体もしくはＦｃ融合分子、または１：１未満の比率のポリカチオン対抗体もしくはＦｃ融合分子というモル比で作製してもよい。この比率は、抗体もしくはＦｃ融合分子中の負電荷を持つアミノ酸残基の数、ならびに／または製剤中のポリカチオンのカチオン性電荷の大きさおよび数に依存し得る。１つの例において、抗体は、定常領域中に負電荷を持つアミノ酸残基を示し得る。抗体は二量体分子であるので、抗体の各鎖は負電荷の残基を発現しており、そのようにして、電荷を持つ残基の数は、抗体の単鎖についての数の２倍となる。それゆえに、抗体構造中の負電荷の残基を中和するのに、２：１の比率のポリカチオン：抗体が必要となり得る。しかしながら、負電荷を持つ残基または領域に結合するための複数の部位を有する、より大きいポリカチオンを使用する場合、２：１未満の比率の、または１：１よりもさらに小さい比率のポリカチオン：抗体を製剤に使用し得る。
【００９８】
薬学的組成物の製剤化
記載された方法において、本発明の化合物のみを投与することが可能であり得るが、投与される化合物は通常、従来の薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的に許容される組成物のような、所望の投薬単位製剤中の活性成分として存在する。したがって、本発明の別の態様において、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と組み合わせた、本発明の抗体組成物およびポリカチオン組成物、または本発明のＦｃ融合分子およびポリカチオン組成物を含む薬学的組成物が提供される。語句「薬学的にまたは薬理学的に許容される」は、下記のような、当技術分野において周知の経路を用いて投与した時に、アレルギー反応、またはその他の有害反応をもたらさない分子実体および組成物を指す。許容される薬学的賦形剤としては、通常、本明細書に記載されたような希釈剤、担体、アジュバントなどが挙げられる。
【００９９】
さらに、化合物は、水または一般的な有機溶媒とともに溶媒和物を形成してもよい。そのような溶媒和物も同様に企図される。
【０１００】
本発明の薬学的組成物は、有効量の本発明の抗体もしくはＦｃ融合分子の製剤または有効投薬量の本発明の抗体もしくはＦｃ融合分子の製剤を含んでもよい。有効投薬量の本発明の抗体製剤は、有効量の化合物よりも少ない量か、それと等しい量か、またはそれを上回る量を含む。例えば、有効量の抗体もしくはＦｃ融合体の製剤を投与するのに、錠剤、カプセルなどのような、２つ以上の単位投薬量が必要とされる薬学的組成物、またはその代わりに、有効量の化合物を組成物の一部を投与することによって投与し得る、粉末、液体などのような、複数用量の薬学的組成物。「単位投薬量」は、好適な担体に分散された治療的組成物の離散量と定義される。当業者は、優れた医療行為および個々の患者の臨床状態によって決定されるように、有効投薬量および投薬レジメンを容易に最適化するであろう。
【０１０１】
本発明の薬学的組成物は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、および鼻腔内を含む、任意の投与の経路用に、ならびに所望であれば、局部治療、病変内投与用に製剤化される。非経口注入としては、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、または皮下の投与が挙げられる。さらに、組成物は、特に減少用量の治療的抗体またはＦｃ融合分子を用いたパルス注入によって好適に投与される。投与が短期のものかまたは長期のものかに一部依存して、好ましくは、注射によって、最も好ましくは、静脈内または皮下の注射によって投薬される。局所、特に、経皮、経粘膜、直腸、経口の投与、または例えば、所望の部位の近くに置かれたカテーテルを通じた局部投与を含む、その他の投与法が企図される。注射、特に静脈内注射、が好ましい。
【０１０２】
本発明の抗体組成物またはＦｃ融合分子を有効性分として含む本発明の薬学的組成物は、投与の経路に応じて、薬学的に許容される賦形剤または希釈剤を含んでもよい。そのような賦形剤の例としては、水、薬学的に許容される有機溶媒、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニル重合体、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアガム、カゼイン、ゼラチン、寒天、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、薬学的に許容されるサーファクタントなどが挙げられる。使用する賦形剤および希釈剤は、上記のものまたはその組み合わせから、しかしこれらに限定されることなく、適宜、本発明の投薬形態に応じて選定される。
【０１０３】
薬学的組成物の剤形は、選択される投与の経路によって様々に変わる（例えば、溶液、乳濁液）。投与されるべき抗体を含む適当な組成物を、生理学的に許容されるビヒクルまたは担体中に調製することができる。溶液または懸濁液のための、好適な担体としては、例えば、生理食塩水および緩衝化媒体を含む、水性またはアルコール性／水性の溶液、乳濁液、または懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ ｄｅｘｔｒｏｓｅ）、デキストロースと塩化ナトリウム、乳酸化リンガーデキストロース、または不揮発性油を挙げることができる。静脈内ビヒクルは、様々な添加剤、防腐剤、または体液、栄養、もしくは電解質の補給剤を含むことができる。
【０１０４】
様々な水性担体、例えば、滅菌リン酸緩衝生理食塩水溶液、静菌水、水、緩衝水、０．４％生理食塩水、０．３％グリシンなどは、穏やかな化学的修飾などに供された、アルブミン、リポタンパク質、グロブリンなどのような、安定性を強化するためのその他のタンパク質を含んでもよい。
【０１０５】
一般に、薬学的組成物を、本発明の１つ以上の抗体／ポリカチオン組成物またはＦｃ融合分子／ポリカチオン組成物を１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、結合剤、アジュバント、希釈剤、防腐剤、溶解剤、乳化剤などと混合することによって調製し、様々な疾患を治療または改善するための所望の投与可能製剤を形成させてもよい（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ編（１９８０））。そのような組成物は、様々な緩衝剤内容物（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ、およびイオン強度の希釈剤；界面活性剤および可溶化剤などの添加剤（例えば、ポリソルベート８０とも呼ばれるＴｗｅｅｎ ８０、ポリソルベート２０とも呼ばれるＴｗｅｅｎ ２０）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えば、チメルソル（Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ）、ベンジルアルコール）、および増量物質（例えば、マンニトール、スクロース）；ポリ乳酸、ポリグリコール酸などのような重合体化合物の微粒子調製物中に、またはリポソーム中に材料を組み入れることを含む。また、ヒアルロン酸を使用してもよく、これは血液循環中の持続期間の維持を促進する効果を有する。そのような組成物は、物理的状態、安定性、インビボ放出の速度、およびインビボ排除の速度に影響を及ぼし得る。例えば、参照により本明細書に組み入れられるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版（１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １８０４２）１４３５−１７１２ページを参照されたい。組成物は、液体形態で調製されてもよく、または凍結乾燥形態などの、乾燥粉末であってもよい。経皮製剤と同様に、移植可能な持続放出製剤も企図される。
【０１０６】
企図される追加の緩衝剤としては、リン酸塩、クエン酸塩、およびその他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；グリシン、グルタミン、アスパラギン、グルタミン酸、プロリン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；アラニン−ロイシンなどの短いペプチド；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含むその他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎタンパク質錯体）；ならびに／またはＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性サーファクタントが挙げられる。
【０１０７】
また、本明細書中の製剤は、治療される特定の徴候に対する必要に応じて、２つ以上の活性化合物、好ましくは互いに有害な影響を及ぼさない補完的な活性を有する活性化合物を含んでもよい。そのような分子は、意図される目的のために効果的である量での組み合わせで好適に存在する。
【０１０８】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤と混和した活性化合物を含んでもよい。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、およびアカシアガムであり；分散剤または湿潤剤は、天然のホスファチド、例えば、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチル−エネオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分的なエステルとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分的なエステルとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。また、水性懸濁液は、１つ以上の防腐剤、例えば、エチルｐ−ヒドロキシベンゾエート、またはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートを含んでもよい。
【０１０９】
本発明は、抗体、またはＦｃ融合分子、およびポリカチオンを含む凍結乾燥製剤も企図する。凍結乾燥を、当技術分野において一般的な技術を用いて実行し、開発される組成物用に最適化すべきである［Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．２１：１９１−２００，（２００４）およびＣｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．１３：２４３−９（１９９６）］。凍結乾燥製剤は、通常、緩衝剤、増量剤、および安定化剤から構成される。タンパク質を凍結乾燥する方法は、当技術分野において記載されている。例えば、米国特許第６，０２０，４６９号および米国特許公開ＵＳ２００７００５３８７１を参照されたい。
【０１１０】
１つの態様において、凍結乾燥サイクルは、３つの工程、すなわち、凍結、一次乾燥、および二次乾燥から構成される［Ａ．Ｐ．Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ，Ｐｈｉｌ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｌｏｎｄｏｎ，Ｓｅｒ Ｂ，Ｂｉｏｌ ２７８：１６７（１９７７）］。凍結工程では、溶液を冷却して、氷の形成を開始させる。さらに、この工程は、増量剤の結晶化を誘導する。氷は、一次乾燥段階で昇華する。この段階は、真空を用いて、室圧を氷の蒸気圧よりも下に低下させ、熱を導入して昇華を促進させることによって行なわれる。最後に、吸着または結合した水を、二次乾燥段階で、低下した室圧下、上昇した棚温度で除去する。この過程は、凍結乾燥ケーキとして知られる材料を生じさせる。その後、このケーキを、滅菌水かまたは注射用の好適な希釈剤のいずれかで再構成することができる。
【０１１１】
凍結乾燥サイクルは、賦形剤の最終的な物理的状態を決定するだけでなく、再構成時間、外観、安定性、および最終的な水分含有量などのその他のパラメータにも影響を及ぼす。凍った状態での組成物構造は、特定の温度で生じるいくつかの転移（例えば、ガラス転移および結晶化）を経るので、凍結乾燥過程を理解し、最適化するために利用することができる。ガラス転移温度（Ｔｇ）は、溶質の物理的状態に関する情報を提供することができ、示差走査熱量法（ＤＳＣ）によって決定することができる。これは、凍結乾燥サイクルを設計するときに考慮に入れなければならない重要なパラメータである。さらに、乾燥状態で、ガラス転移温度は、最終産物の保存温度に関する情報を提供する。
【０１１２】
本組成物の特定の実施形態において、安定化剤を凍結乾燥製剤に添加し、凍結乾燥によって誘導されるかまたは保存によって誘導される凝集または化学的分解を防止するかまたは低下させる。再構成時に透明でないかまたは濁っている溶液は、タンパク質が沈殿していることを示す。用語「安定化剤」は、水性および固体の状態で、凝集またはその他の物理的分解、および化学的分解（例えば、自己分解、脱アミド、酸化など）を防止することができる賦形剤を意味する。安定化剤には、凍結防止剤、凍結乾燥防止剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、およびガラス形成剤として役立つことができる化合物群が含まれる。凍結防止剤は、凍結の間または低温、凍結状態でタンパク質を安定化するように作用する（Ｐ．Ｃａｍｅｒｏｎ，編，Ｇｏｏｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｆｆａｌｏ Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ，（１９９７））。凍結乾燥防止剤は、フリーズドライの脱水段階の間にタンパク質のネイティブ様の立体構造特性を保存することによって、フリーズドライされた固体投薬形態でタンパク質を安定化させる。ガラス状態特性は、温度の関数としてのそれらの緩和特性に応じて「強い」または「脆い」と分類されている。凍結防止剤、凍結乾燥防止剤、およびガラス形成剤が、安定性を与えるために、タンパク質と共に同じ相に留まるということが重要である。糖、重合体、およびポリオールは、この範疇に収まり、時として３つの役割の全てを果たすことができる。
【０１１３】
スクロース、トレハロース、またはグリシンを含むが、これらに限定されない、薬学的組成物に従来利用されている安定化剤を使用してもよい［Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ ７４：２２５，（１９９１）］。また、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ ２０）またはポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）などの、サーファクタント安定化剤を、適当な量で添加し、凍結および乾燥の間の表面関連凝集現象を防止してもよい［Ｃｈａｎｇ，Ｂ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８５：１３２５，（１９９６）］。所望であれば、凍結乾燥組成物は、凍結乾燥「ケーキ」を形成させるのに好適な適当な量の増量剤および浸透圧調製剤も含む。増量剤は、結晶（例えば、マンニトール、グリシン）または非結晶（例えば、スクロース、重合体（例えば、デキストラン）、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース）のいずれかであってもよい。１つの実施形態において、増量剤はマンニトールである。さらなる実施形態において、マンニトールは、約２％から約５％ｗ／ｖの濃度で、またさらなる実施形態において、約３％から約４．５％ｗ／ｖの濃度で組み入れられて、機械的かつ薬学的に安定でかつ上品なケーキを生じさせる。別の実施形態において、マンニトール濃度は、２％ｗ／ｖである。
【０１１４】
薬学的に許容される緩衝剤およびｐＨの選定も、本組成物の安定性に影響を及ぼすことが分かっている。組成物中に存在する緩衝剤系は、生理学的に適合するようかつ再構成された溶液中、および凍結乾燥前の溶液中で所望のｐＨを維持するよう選択される。１つの態様において、緩衝剤は、約ｐＨ６．０から約ｐＨ８．０の範囲のｐＨ緩衝能を有する。最も安定な製剤化条件を選択するために、典型的には、上述のパラメータを組み入れた一連のスクリーニング研究が実施される。
【０１１５】
また、本明細書に記載された凍結乾燥法は、以下の工程、すなわち、凍結乾燥前に安定化剤を抗体またはＦｃ融合分子／ポリカチオン混合物に添加する工程、凍結乾燥前に増量剤および浸透圧調製剤より選択される少なくとも１つの薬剤、ならびにサーファクタントを該抗体またはＦｃ融合分子／ポリカチオン混合物に添加する工程のうちの１つ以上を含んでもよい。増量剤は、上に示される任意の増量剤であってもよい。１つの実施形態において、増量剤はマンニトールである。糖は、上に示される任意の安定化糖であってもよい。１つの実施形態において、安定化剤はスクロースである。サーファクタントは、上に示される任意のサーファクタントであってもよい。１つの実施形態において、サーファクタントは、ポリソルベート２０である。
【０１１６】
凍結乾燥材料のための標準的な再構成の実施は、一定量の純水または滅菌注射用水（ＷＦＩ）（典型的には、凍結乾燥の間に除去される容量に等しい）を添加して戻すことであるが、時として、抗菌剤の希釈溶液を非経口投与用の医薬品の産生で使用する［Ｃｈｅｎ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１８：１３１１−１３５４（１９９２）］。
【０１１７】
様々な水性担体、例えば、滅菌注射用水、複数用量使用のための防腐剤を含む水、もしくは適当な量のサーファクタント（例えば、ポリソルベート２０）を含む水、０．４％生理食塩水、０．３％グリシン、または水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤と混和した活性化合物を含んでもよい。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、およびアカシアガムであり、分散剤または湿潤剤は、天然のホスファチド、例えば、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチル−エネオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分的なエステルとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分的なエステルとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。水性懸濁液は、１つ以上の防腐剤、例えば、エチルｐ−ヒドロキシベンゾエート、またはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートを含んでもよい。
【０１１８】
本発明は、抗体またはＦｃ融合分子および１つ以上のポリカチオンを含む、自己緩衝製剤である抗体またはＦｃ融合分子の製剤をさらに提供する。緩衝とは、酸または塩基の添加による組成物のｐＨの変化に対する抵抗性を指す。したがって、緩衝能はしばしば、組成物がｐＨ変化に抵抗する能力と定義される。自己緩衝製剤とは、追加の緩衝剤なしで、製剤を所望のｐＨ範囲内に維持するのに十分な緩衝能を有する、抗体またはＦｃ融合分子を含む製剤を指す。（参照により本明細書に組み入れられる）国際特許公開ＷＯ２００６／１３８１８１は、自己緩衝製剤を作製する方法を記載している。
【０１１９】
キット
追加の態様として、本発明は、キットを使用しやすくする形で包装された１つ以上の抗体またはＦｃ融合分子の製剤または組成物を含むキットを含む。１つの実施形態において、そのようなキットは、容器に貼付けられているかまたは包装に含まれている、化合物もしくは組成物の使用を説明するラベルが付された、密封された瓶または器（例えば、バイアルまたはｉ．ｖ．バッグ）などの容器に包装された、本明細書に記載された抗体またはＦｃ融合分子の製剤または組成物（例えば、抗体またはＦｃ融合分子、およびポリカチオンを含む組成物）を含む。ある実施形態において、抗体またはＦｃ融合分子の製剤または組成物を単位投薬量形態で包装する。キットは、特定の投与の経路に従って組成物を投与するのに好適な装置をさらに含む。ある実施形態において、キットは、本発明の抗体またはＦｃ融合分子の製剤または組成物の使用および投与を説明するラベルを含む。
【０１２０】
（実施例）
本発明の追加の態様および詳細は、限定的ではなく、例示的であることが意図される、以下の実施例から明白であろう。
【実施例１】
【０１２１】
保存用に製剤化された抗体溶液は、しばしば、長時間経つと分解し、凝集およびさらなるより小さい分解産物を生じる。抗体定常領域のアミノ酸配列、特にアスパラギン酸残基のストレッチを含む配列は、極性電荷を典型的に有する。この溶液をさらに安定化し、保存の間の抗体凝集を防止するために、異なる安定化溶液を抗体製剤に添加し、凝集および分解の程度を評価した。
【０１２２】
６．４の計算ｐＩを有する、ＣＤ３０分子に特異的なヒトモノクローナル組み換えＩｇＧ２ａλ抗体の様々な製剤を作製した。この実験で使用されるポリカチオンは、分子量（ＭＷ）平均値３５ｋＤａのポリアルギニン、５つのリジン残基を含むポリリジン、および７０ｋＤａを上回るＭＷのポリアルギニンであった。７０ｍｇ／ｍｌ ＩｇＧストック溶液のストック溶液を、１０ｍＭ Ｋ２ＰＯ４、１６１ｍＭアルギニン、０．００４％ Ｔｗｅｅｎ、ｐＨ７．６を含むＫ７．６ＲＴ緩衝液に希釈することによって、製剤溶液を調製した。また、このストック溶液をＡ５．２Ｓｕ緩衝液（酢酸緩衝液（ｐＨ５．２）＋スクロース）に７倍希釈し、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％スクロース、３％ポリカチオン、ｐＨ５．２を含む１０ｍｇ／ｍｌ ＩｇＧ溶液にした。このポリカチオン溶液の最終的なｐＨ値は、ｐＨ５．５から６．０でほぼ同じであった。結果を表１に示す。
【０１２３】
【表３】
【０１２４】
酢酸塩およびスクロースを含む抗体製剤（ｐＨ５．５から６．０）は曇りがあって、粘性があったが、３％ｗ／ｗの濃度のポリカチオンを添加することによって、曇りがあって、粘性がある状態の形成が妨げられ、抗体溶液が透明なままで残った。溶液中での抗体の安定性を検査する、抗体溶液の逆相クロマトグラフィーにより、抗体が、ポリカチオンの存在下で溶けた状態にあることが示されている。
【実施例２】
【０１２５】
多くの抗体定常領域は、溶液中の抗体に全体的または局部的のいずれかの負電荷を付与することができる酸性アミノ酸残基を含む。この負電荷の効果を最小限に抑えるために、負電荷を持つ抗体に対するポリカチオン溶液の効果を評価した。
【０１２６】
８．９の計算ｐＩを有し、かつ３つの隣接するアスパラギン酸残基（ＤＤＤ）を可変領域に含む、アミロイドタンパク質に特異的な組み換えヒトモノクローナルＩｇＧ１κ抗体を様々なポリカチオン溶液中に製剤化した。抗アミロイド抗体を作製する方法、およびその構造は、国際公報ＷＯ２００６／０８１１７１に記載されている（ＷＯ２００６／０８１１７１中の配列番号１１）。
【０１２７】
抗体を、対照溶液（２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．９）中に１００ｍｇ／ｍｌを含む）またはポリカチオン溶液（２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ５．０）、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ、および１０ｍｇ／ｍｌ ２２Ｋポリリジンもしくは１０ｍｇ／ｍｌ ８３Ｋポリリジン中に１００ｍｇ／ｍｌ抗体を含む）に希釈し、５２で６週間保存した。凝集体および二量体の相対存在量をサイズ排除クロマトグラフィーで測定した。
【０１２８】
抗体は、ｐＨ６．９の製剤中で長期間保存した後、二量体および凝集体を生成した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、単一リジン残基のみを含む溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）は、抗体凝集を低下させることができず、実際に、対照溶液と比べて形成される凝集体の量を増大させるということが示されている。しかしながら、これらの条件下で形成された二量体および凝集体は、２２Ｋまたは８３Ｋポリリジンを含む製剤中では顕著に低下した（図１）。
【０１２９】
上記の実験は、モノクローナル抗体の製剤にポリカチオンを添加することによって、製剤化された抗体の溶解性および／または安定性が向上するということを示している。本発明のポリカチオン製剤は、７．４未満のｐＩを有する抗体ならびに密接して配置された酸性アミノ酸残基（アスパラギン酸およびグルタミン酸）を有する抗体の溶解性および／または安定性を増大させるのに有効であることが分かった。
【実施例３】
【０１３０】
実施例１に記載された抗ＣＤ３０ ＩｇＧ２ａ抗体が、異なる濃度のポリカチオン組成物に溶けるかどうかを明らかにするために、様々なポリカチオン濃度にわたって抗体が溶解する能力を解析した。
【０１３１】
試料抗体を１０ｍＭリン酸カリウム、１６１ｍＭアルギニン、０．００４％ Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．６中に７２ｍｇ／ｍＬで製剤化し、分子量分布１５，０００から３０，０００Ｄａの増加する量のポリリジンを含む３０ｍＭ酢酸ナトリウム、５％ソルビトール、ｐＨ５．０中に１０．３ｍｇ／ｍＬまで希釈した。ポリリジンを全く添加していないｐＨ５の抗体の溶液は濁っていた。０．０８％ポリリジン程度の低いポリカチオン濃度を有する製剤は、抗体製剤の濁度の減少を示した。溶液の濁度は、ポリリジンの濃度を増大させるにつれて減少した。０．５％以上のポリリジンを含む抗体溶液は、完全に透明であった。
【０１３２】
また、ペンタリジン（５つのリジン残基を含む）ポリカチオンを用いて、製剤を作製した。結果は、ペンタリジン（０．６５ＫＤａ）を使用すると、有効であるために、より高いポリリジン濃度が必要になるということを示した。１．２８％ポリリジンを含む溶液は濁っていたが、２．５７％ポリリジン（ペンタリジン）溶液は完全に透明であった。
【０１３３】
ペプチボディの安定性に対するポリカチオンの効果も解析した。５．４のｐＩを有するペプチボディ（２ＸＣｏｎ４Ｃ、抗アンジオポエチン２／１ペプチボディ（アミノ酸配列：ＭＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＧＧＡＱＱＥＥＣＥＷＤＰＷＴＣＥＨＭＧＳＧＳＡＴＧＧＳＧＳＴＡＳＳＧＳＧＳＡＴＨＱＥＥＣＥＷＤＰＷＴＣＥＨＭＬＥ））（Ｏｌｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，５０７−５１６，２００４）を、１０ｍＭリン酸カリウム、１６１ｍＭアルギニン、０．００４％Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．６中に２７ｍｇ／ｍＬで製剤化し、分子量分布１５，０００から３０，０００Ｄａの増加する量のポリリジンを含む３０ｍＭ酢酸ナトリウム、５％ソルビトール、ｐＨ５．０中に３．８６ｍｇ／ｍＬまで希釈した。ポリリジンを全く添加していない、ｐＨ５のペプチボディの溶液は濁っていた。０．０８％以上のポリリジンを含むペプチボディ溶液は、完全に透明であった。
【０１３４】
ペプチボディをペンタリジンと共に製剤化したとき、同様の結果が得られた。０．０８％ペンタリジンを含む溶液は、完全に透明であった。
【０１３５】
単量体アミノ酸リジンは、低いｐＩを有するＩｇＧ２抗体を溶解させるのに効果を示したが、溶液から濁りを消し去るのに２％のリジンを必要とした。また、実施例２に示されるように、および以前に報告されているように、リジンまたはアルギニンという単一アミノ酸のみを含む組成物は、抗体を不安定化して凝集の加速をもたらし、一方、ポリリジンおよびポリアルギニンは、抗体凝集を減少させる。
【０１３６】
以下の提案される作用の機序に束縛されることを望まないが、これらの実験で見られたポリカチオンの効果についてのあり得る説明は、それらが抗体の負電荷を持つポケットに結合することで、抗体の正味の正電荷を増大させ、抗体の実効ｐＩを増大させ、それによって分子間相互作用を低下させるということであろう。これらの効果は、所与のｐＨでの抗体溶解性の増大、およびある条件下での凝集の速度の減少をもたらし得る。また、これらの領域へのポリカチオンの結合は、この領域の抗体構造の柔軟性を低下させ得、この誘導された剛性が、凝集、アスパラギン酸異性化、酸化、および脱アミドなどの分解に逆らってさらに安定化し得る。これらの効果は、低いｐＩの抗体および連続するアスパラギン酸（ＤＤ）またはグルタミン酸（ＥＥ）残基を含む抗体の場合により顕著であり得るものの、ポリカチオンがこれらの特徴の範囲外の抗体を安定化する可能性があり得る。
【０１３７】
上記の例示的な実施例に示される本発明において、多くの修正および変形が当業者に思いつかれると思われる。したがって、付随する特許請求の範囲に見られるような限定のみが本発明に載せられるべきである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に、抗体またはＦｃ融合分子およびポリカチオンを含む、抗体およびＦｃ融合分子の製剤を作製するための方法、ならびにそれらの製剤を含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
生理的ｐＨの溶液および高濃度のタンパク質を含む溶液に入れたとき、高いｐＩまたは明確な極性を有するタンパク質は不安定である場合がある。溶液中のタンパク質は、時間とともに分解する傾向があり、分解産物は凝集してタンパク質の生物学的効力を減少させる。例えば、溶液中の成長ホルモンは、不溶性の凝集産物を形成し、タンパク質の沈殿および活性の損失をもたらす（米国特許第４，８１６，５６８号）。溶液中のタンパク質分解を防ぐために、タンパク質凝集の低下を期して、安定化剤（例えば、グリシン、ポリエチレングリコール）が濃縮タンパク質製剤にしばしば添加される。米国特許第４，８１６，５６８号は、ポリオール化合物、電荷を持つ側鎖を有する単一アミノ酸もしくは重合体アミノ酸、またはコリン誘導体を用いて溶液中の成長ホルモンを安定化する方法を記載している。このような分解および凝集の問題が、生物製剤を薬学的薬物として製剤化する複雑さに加わる。
【０００３】
今日、抗体は、製薬業界で最も急成長を遂げている種類の生物製剤である。抗体は、溶液中で時間とともに分解することも知られている。それゆえに、科学者は、液体製剤中の抗体の凝集の問題に対処する方法を提案している。
【０００４】
カルシウム（Ｃａ２＋）およびマグネシウム（Ｍｇ２２＋）などのある種の正電荷を持つ金属イオンの添加は、溶液中での抗体の異性化およびスクシンイミド中間体の形成の防止を遅らせるための方法として提案されている（ＰＣＴ特許出願公開のＷＯ２００４／０３９３３７）。しかしながら、ある種の正電荷を持つ金属イオン（例えば、ＺｎＣｌ２）は、タンパク質の沈殿を引き起こす場合がある（ＷＯ２００４／０３９３３７）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００４／０３９３３７号
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、治療的抗体またはＦｃ融合体の製剤を含む、液体のまたは凍結乾燥した薬学的製剤を作製するための方法、およびそれらの製剤を含む組成物に関する。
【０００７】
１つの態様において、本発明は、抗体またはＦｃ融合分子の液体製剤または凍結乾燥製剤を作製するための方法であって、抗体またはＦｃ融合分子をポリカチオンと組み合わせ、それにより、ポリカチオンを含まない同製剤と比較して、低下したレベルの抗体またはＦｃ融合分子の分解および凝集を得る工程を含む方法を提供する。１つの実施形態において、Ｆｃ融合分子はペプチボディである。
【０００８】
１つの実施形態において、ポリカチオンは、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ポリヒスチジン、およびカチオン性多糖類、またはその混合物からなる群より選択される。
【０００９】
関連する実施形態において、ポリカチオン組成物は、リジン、アルギニン、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ポリヒスチジン、およびカチオン性多糖類からなる群より選択されるポリカチオンのうちの少なくとも２つを含む。関連する実施形態において、ポリカチオンは、リジンおよびアルギニンから構成される。
【００１０】
さらなる実施形態において、ポリカチオンは、ホモ重合体もしくは共重合体、またはその混合物である。ポリカチオンホモ重合体は、同じカチオン単量体の単一反復単位を含む。ポリカチオン共重合体は、異なるカチオン単量体または異なるカチオン性重合体を含む。１つの実施形態において、ポリカチオン共重合体は、カチオン単量体の混合物、ポリカチオンホモ重合体の混合物、またはポリカチオン共重合体の混合物を含んでもよい。
【００１１】
別の実施形態において、ポリカチオンは、カチオン性単量体および中性単量体の反復単位を含む重合体である。１つの実施形態において、ポリカチオンは、単量体式Ａ−Ｂ−Ｘ−Ｙ（式中、ＡおよびＸはカチオン性単量体であり、ＢおよびＹは中性単量体である）を有する。関連する実施形態において、ＡおよびＸは同じカチオン性単量体である。さらなる実施形態において、ＡおよびＸは異なるカチオン性単量体である。別の実施形態において、ＢおよびＹは同じ中性単量体である。またさらなる実施形態において、ＢおよびＹは異なる中性単量体である。別の実施形態において、カチオン性単量体は、本明細書に示されるポリカチオンの基礎として使用される反復単位である。関連する実施形態において、カチオン性単量体は、塩基性アミノ酸、中性単量体に連結した反復配列のカチオン性単量体、またはポリカチオン組成物を構築するために使用することができる反復構造特性を有する、その他のタンパク質分子もしくは化学構造物である。
【００１２】
中性単量体は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、およびプロリンからなる群より選択されるということがさらに企図される。またさらなる実施形態において、ポリカチオンは、リジン残基およびグリシン残基の反復単位を含む。
【００１３】
別の態様において、本発明は、本発明の抗体製剤が治療的抗体を含むことを提供する。１つの実施形態において、治療的抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２抗体、ＩｇＧ３抗体、およびＩｇＧ４抗体、またはその断片からなる群より選択されるＩｇＧ抗体である。
【００１４】
ポリカチオン組成物中のポリカチオンは、０．２ｋＤａから約７０ｋＤａの分子量を有するということが企図される。該抗体製剤中の抗体は、７．５以下のｐＩを有するということがさらに企図される。１つの実施形態において、該抗体製剤中の抗体は、約６．４の計算ｐＩを有する。さらなる実施形態において、ポリカチオンは、最終製剤において約０．１％から約１０％ｗ／ｗポリカチオンの濃度である。
【００１５】
関連する実施形態において、ポリカチオン組成物のｐＨは、約４．５から約７．５、約５．０から約６．５、または約５．５から約６．０である。
【００１６】
１つの実施形態において、抗体またはＦｃ融合分子の製剤は、ポリカチオン組成物と組み合わせたときに、ポリカチオンの非存在下での抗体製剤の溶解性と比較して、より大きい溶解性を有する。追加の実施形態において、抗体またはＦｃ融合分子の製剤は、ポリカチオン組成物と組み合わせていない抗体製剤と比較して、増大した貯蔵寿命を有する。さらなる実施形態において、ポリカチオン組成物と組み合わせた抗体またはＦｃ融合分子の製剤は、ポリカチオン組成物と組み合わせていない同様の抗体製剤よりも少なくとも２５％長い貯蔵寿命を有する。
【００１７】
本発明は、該製剤におけるポリカチオンの存在が、ポリカチオン組成物と組み合わせていない治療的抗体またはＦｃ融合体の製剤と比較して、抗体またはＦｃ融合体分子の製剤における抗体多量体または凝集体の形成を低下させる抗体製剤も企図する。
【００１８】
様々な態様において、治療的抗体は、エンブレル（エタナセプト）、ヒュミラ（アダリムマブ）、シナジス（パリビズマブ）、ＡＭＧ ７１４（抗ＩＬ１５抗体）、ベクチビックス（パニツムマブ）、リツキサン（リツキシマブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、抗ＣＤ８０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（ガリキシマブ）、抗ＣＤ２３ ｍＡｂ（ルミリキシマブ）、Ｍ２００（ボロシキシマブ）、抗クリプトｍＡｂ、抗ＢＲ３ ｍＡｂ、抗ＩＧＦ１Ｒ ｍＡｂ、タイサブリ（ナタリズマブ）、ダクリズマブ、ヒト化抗ＣＤ２０ ｍＡｂ（オクレリズマブ）、可溶性ＢＡＦＦアンタゴニスト（ＢＲ３−Ｆｃ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ、抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ、抗ＩＬ５受容体ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＭ２ ｍＡｂ、抗ＦＧＦ８ ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ−１ ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＤ２ ｍＡｂ、アクチライズ（Ａｃｔｉｌｙｓｅ）（登録商標）（アルテプラーゼ）、メタライズ（Ｍｅｔａｌｙｓｅ）（登録商標）（テネクテプラーゼ）、ＣＡＴ−３８８８およびＣＡＴ−８０１５（抗ＣＤ２２ ｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＣＡＴ−３５４（抗ＩＬ１３ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−５００１（抗メソテリンｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＧＣ−１００８（抗ＴＧＦ−β ｍＡｂ）、ＣＡＭ−３００１（抗ＧＭ−ＣＳＦ受容体ｍＡｂ）、ＡＢＴ−８７４（抗ＩＬ１２ ｍＡｂ）、リンフォスタットＢ（ベリムマブ；抗ＢｌｙＳ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ１（マパツムマブ；ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−１ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ２（ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−２ ｍＡｂ）、アブスラックス（商標）（ヒト、抗（炭疽菌由来）防御抗原ｍＡｂ）、ＭＹＯ−０２９（ヒト抗ＧＤＦ−８ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−２１３（ヒト抗エオタキシン１ ｍＡｂ）、エルビタックス（セツキシマブ）、エプラツズマブ、レミケード（インフリキシマブ；抗ＴＮＦ ｍＡｂ、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ベクチビックス（パナツムマブ）、レオプロ（アブシキシマブ）、アクテムラ（抗ＩＬ６受容体ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（ザルツムマブ）、ＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、Ｒ１５０７（抗ＩＧＦ−１Ｒ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ ＨｅｐＣ、ＨｕＭａｘ ＣＤ３８、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ（抗ＩＬ２Ｒａまたは抗ＣＤ２５ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＺＰ３（抗ＺＰ３ ｍＡｂ）、ベキサール（トシツモマブ）、オルソクローンＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３）、ＭＤＸ−０１０（イピリムマブ）、抗ＣＴＬＡ４、ＣＮＴＯ １４８（ゴリムマブ；抗ＴＮＦα炎症ｍＡｂ）、ＣＮＴＯ １２７５（抗ＩＬ１２／ＩＬ２３ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ザルツムマブ）、ＭＤＸ−０６６（ＣＤＡ−１）およびＭＤＸ−１３８８（抗クロストリジウム・ディフィシル毒素Ａおよび毒素Ｂ、Ｃ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０６０（抗ＣＤ３０ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０１８、ＣＮＴＯ ９５（抗インテグリン受容体ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０７（抗マンノース受容体／ｈＣＧβ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１１００（抗ＩＰ１０潰瘍性大腸炎ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０３（バロルチム（Ｖａｌｏｒｔｉｍ）（商標））、抗炭疽菌炭疽、ＭＥＤＩ−５４５（ＭＤＸ−１１０３、抗ＩＦＮα）、ＭＤＸ−１１０６（ＯＮＯ−４５３８；抗ＰＤ１）、ＮＶＳ抗体＃１、ＮＶＳ抗体＃２、ＦＧ−３０１９（抗ＣＴＧＦ特発性肺線維症フェーズＩ、Ｆｉｂｒｏｇｅｎ）、ＬＬＹ抗体、ＢＭＳ−６６５１３、ＮＩ−０４０１（抗ＣＤ３ ｍＡｂ）、ＩＭＣ−１８Ｆ１（ＶＥＧＦＲ−１）、ＩＭＣ−３Ｇ３（抗ＰＤＧＦＲα）、ＭＤＸ−１４０１（抗ＣＤ３０）、ＭＤＸ−１３３３（抗ＩＦＮＡＲ）、シナジス（パリビズマブ；抗ＲＳＶ ｍＡｂ）、キャンパス（アレムツズマブ）、ベルケード（ボルテゾミブ）、ＭＬＮ０００２（抗α４β７ ｍＡｂ）、ＭＬＮ１２０２（抗ＣＣＲ２ケモカイン受容体ｍＡｂ）、シムレクト（バシリキシマブ）、プレクシージュ（ルミラコキシブ）、ゾレア（オマリズマブ）、ＥＴＩ２１１（抗ＭＲＳＡ ｍＡｂ）、ゼナパックス（ダクリズマブ）、アバスチン（ベバシズマブ）、マブセラＲＡ（リツキシマブ）、タルセバ（エルロチニブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、ゼチーア（エゼチミブ）、ジトリン（Ｚｙｔｔｏｒｉｎ）（エゼチミブおよびシンバスタチン）、ＮＩ−０４０１（ヒト抗ＣＤ３）、アデカツムマブ、ゴリムマブ（抗ＴＮＦα ｍＡｂ）、エプラツズマブ、ゲムツズマブ、ラプティバ（エファリズマブ）、シムジア（セルトリズマブペゴール、ＣＤＰ ８７０）、（ソリリス）エクリズマブ、ペキセリズマブ（抗Ｃ５補体）、ＭＥＤＩ−５２４（ヌマックス）、ルセンティス（ラニビズマブ）、１７−１Ａ（パノレックス）、トラビオ（Ｔｒａｂｉｏ）（レルデリムマブ）、セラシム（ＴｈｅｒａＣｉｍ）ｈＲ３（ニモツズマブ）、オムニターグ（ペルツズマブ）、オシデム（ＩＤＭ−１）、オバレックス（Ｂ４３．１３）、ヌビオン（ビジリズマブ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ（ＩＤＥＣ−１３１）、ザネリム（ヒト化抗ＣＤ１１ａ）、ならびにカンツズマブからなる群より選択される。
【００１９】
関連する態様において、治療的Ｆｃ融合分子は、ＩＬ−１ Ｔｒａｐ（ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分ならびに両方のＩＬ−１受容体構成成分（Ｉ型受容体および受容体付属タンパク質）の細胞外ドメイン）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（ＩｇＧ１ Ｆｃに融合したＶＥＧＦＲ１のＩｇドメイン）、アタシセプト（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト）、ＣＤ４−Ｉｇ融合タンパク質（Ｐｒｏ−５４２）、ＴＮＦＲ１−ＩｇＧ、アメビブ（登録商標）（アレファセプト、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ１）、ＣＤ３０−Ｌ−ＩｇＧ、ＩＬ−１０−Ｆｃ、ＴＮＲＦ−Ｆｃ、ＩＬ−２−Ｉｇ、ＯＰＧ−Ｆｃ、ならびにレプチン（ＯｂＲ）−Ｆｃからなる群より選択される。
【００２０】
本発明は、治療的抗体またはＦｃ融合分子およびポリカチオンを含む組成物も提供する。１つの実施形態において、組成物は、治療的抗体またはＦｃ融合分子、ポリカチオンおよび薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物である。１つの実施形態において、本発明は、７．５以下のｐＩを有する治療的抗体ならびにポリリジンおよびポリアルギニンからなる群より選択されるポリカチオンを含む薬学的組成物を提供する。本発明は、少なくとも２つの連続する酸性アミノ酸残基を含むＣＤＲドメインを有する治療的抗体ならびにポリリジンおよびポリアルギニンからなる群より選択されるポリカチオンを含む薬学的組成物も企図する。１つの実施形態において、酸性アミノ酸は、アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）からなる群より選択される。
【００２１】
１つの態様において、組成物中の抗体またはＦｃ融合分子は、ポリカチオンの非存在下で抗体を含む薬学的組成物と比較して増加した貯蔵寿命を有する。１つの実施形態において、抗体は、ポリカチオンの非存在下の抗体またはＦｃ融合分子を含む組成物よりも大きい水への溶解性を有する。
【００２２】
関連する態様において、薬学的組成物中の該抗体またはＦｃ融合体の二量体化（もしくはその他の多量体化）および／または凝集体形成は、ポリカチオンの非存在下で抗体およびＦｃ融合体を含む薬学的組成物と比較して低下する。
【００２３】
さらなる実施形態において、薬学的組成物は、エンブレル（エタナセプト）、ヒュミラ（アダリムマブ）、シナジス（パリビズマブ）、ＡＭＧ ７１４（抗ＩＬ１５抗体）、ベクチビックス（パニツムマブ）、リツキサン（リツキシマブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、抗ＣＤ８０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（ガリキシマブ）、抗ＣＤ２３ ｍＡｂ（ルミリキシマブ）、Ｍ２００（ボロシキシマブ）、抗クリプトｍＡｂ、抗ＢＲ３ ｍＡｂ、抗ＩＧＦ１Ｒ ｍＡｂ、タイサブリ（ナタリズマブ）、ダクリズマブ、ヒト化抗ＣＤ２０ ｍＡｂ（オクレリズマブ）、可溶性ＢＡＦＦアンタゴニスト（ＢＲ３−Ｆｃ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ、抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ、抗ＩＬ５受容体ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＭ２ ｍＡｂ、抗ＦＧＦ８ ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ−１ ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＤ２ ｍＡｂ、アクチライズ（登録商標）（アルテプラーゼ）、メタライズ（登録商標）（テネクテプラーゼ）、ＣＡＴ−３８８８およびＣＡＴ−８０１５（抗ＣＤ２２ ｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＣＡＴ−３５４（抗ＩＬ１３ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−５００１（抗メソテリンｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＧＣ−１００８（抗ＴＧＦ−β ｍＡｂ）、ＣＡＭ−３００１（抗ＧＭ−ＣＳＦ受容体ｍＡｂ）、ＡＢＴ−８７４（抗ＩＬ１２ ｍＡｂ）、リンフォスタットＢ（ベリムマブ；抗ＢｌｙＳ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ１（マパツムマブ；ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−１ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ２（ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−２ ｍＡｂ）、アブスラックス（商標）（ヒト、抗（炭疽菌由来）防御抗原ｍＡｂ）、ＭＹＯ−０２９（ヒト抗ＧＤＦ−８ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−２１３（ヒト抗エオタキシン１ ｍＡｂ）、エルビタックス（セツキシマブ）、エプラツズマブ、レミケード（インフリキシマブ；抗ＴＮＦ ｍＡｂ、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ベクチビックス（パナツムマブ）、レオプロ（アブシキシマブ）、アクテムラ（抗ＩＬ６受容体ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（ザルツムマブ）、ＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、Ｒ１５０７（抗ＩＧＦ−１Ｒ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ ＨｅｐＣ、ＨｕＭａｘ ＣＤ３８、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ（抗ＩＬ２Ｒａまたは抗ＣＤ２５ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＺＰ３（抗ＺＰ３ ｍＡｂ）、ベキサール（トシツモマブ）、オルソクローンＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３）、ＭＤＸ−０１０（イピリムマブ）、抗ＣＴＬＡ４、ＣＮＴＯ １４８（ゴリムマブ；抗ＴＮＦα炎症ｍＡｂ）、ＣＮＴＯ １２７５（抗ＩＬ１２／ＩＬ２３ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ザルツムマブ）、ＭＤＸ−０６６（ＣＤＡ−１）およびＭＤＸ−１３８８（抗クロストリジウム・ディフィシル毒素Ａおよび毒素Ｂ、Ｃ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０６０（抗ＣＤ３０ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０１８、ＣＮＴＯ ９５（抗インテグリン受容体ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０７（抗マンノース受容体／ｈＣＧβ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１１００（抗ＩＰ１０潰瘍性大腸炎ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０３（バルロチム（商標））、抗炭疽菌炭疽、ＭＥＤＩ−５４５（ＭＤＸ−１１０３、抗ＩＦＮα）、ＭＤＸ−１１０６（ＯＮＯ−４５３８；抗ＰＤ１）、ＮＶＳ抗体＃１、ＮＶＳ抗体＃２、ＦＧ−３０１９（抗ＣＴＧＦ特発性肺線維症フェーズＩ、Ｆｉｂｒｏｇｅｎ）、ＬＬＹ抗体、ＢＭＳ−６６５１３、ＮＩ−０４０１（抗ＣＤ３ ｍＡｂ）、ＩＭＣ−１８Ｆ１（ＶＥＧＦＲ−１）、ＩＭＣ−３Ｇ３（抗ＰＤＧＦＲα）、ＭＤＸ−１４０１（抗ＣＤ３０）、ＭＤＸ−１３３３（抗ＩＦＮＡＲ）、シナジス（パリビズマブ；抗ＲＳＶ ｍＡｂ）、キャンパス（アレムツズマブ）、ベルケード（ボルテゾミブ）、ＭＬＮ０００２（抗α４β７ ｍＡｂ）、ＭＬＮ１２０２（抗ＣＣＲ２ケモカイン受容体ｍＡｂ）、シムレクト（バシリキシマブ）、プレクシージュ（ルミラコキシブ）、ゾレア（オマリズマブ）、ＥＴＩ２１１（抗ＭＲＳＡ ｍＡｂ）、ゼナパックス（ダクリズマブ）、アバスチン（ベバシズマブ）、マブセラＲＡ（リツキシマブ）、タルセバ（エルロチニブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、ゼチーア（エゼチミブ）、ジトリン（エゼチミブおよびシンバスタチン）、ＮＩ−０４０１（ヒト抗ＣＤ３）、アデカツムマブ、ゴリムマブ（抗ＴＮＦα ｍＡｂ）、エプラツズマブ、ゲムツズマブ、ラプティバ（エファリズマブ）、シムジア（セルトリズマブペゴール、ＣＤＰ ８７０）、（ソリリス）エクリズマブ、ペキセリズマブ（抗Ｃ５補体）、ＭＥＤＩ−５２４（ヌマックス）、ルセンティス（ラニビズマブ）、１７−１Ａ（パノレックス）、トラビオ（レルデリムマブ）、セラシムｈＲ３（ニモツズマブ）、オムニターグ（ペルツズマブ）、オシデム（ＩＤＭ−１）、オバレックス（Ｂ４３．１３）、ヌビオン（ビジリズマブ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ（ＩＤＥＣ−１３１）、ザネリム（ヒト化抗ＣＤ１１ａ）、ならびにカンツズマブからなる群より選択される治療的抗体を含む。さらなる実施形態において、薬学的組成物は、ＩＬ−１ Ｔｒａｐ（ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分ならびに両方のＩＬ−１受容体構成成分（Ｉ型受容体および受容体付属タンパク質）の細胞外ドメイン）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（ＩｇＧ１ Ｆｃに融合したＶＥＧＦＲ１のＩｇドメイン）、アタシセプト（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト）、ＣＤ４−Ｉｇ融合タンパク質（Ｐｒｏ−５４２）、ＴＮＦＲ１−ＩｇＧ、アメビブ（登録商標）（アレファセプト、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ１）、ＣＤ３０−Ｌ−ＩｇＧ、ＩＬ−１０−Ｆｃ、ＴＮＲＦ−Ｆｃ、ＩＬ−２−Ｉｇ、ＯＰＧ−Ｆｃ、ならびにレプチン（ＯｂＲ）−Ｆｃからなる群より選択される治療的Ｆｃ融合分子を含む。
【００２４】
関連する実施形態において、本発明を、抗アンジオポエチン（例えば、抗Ａｎｇ２および／または抗Ａｎｇ１）特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などを製剤化する際に使用することができる。これらの抗アンジオポエチン特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などには、限定されるものではないが、ＷＯ０３／０５７１３４、米国出願公開ＵＳ２００３／０２２９０２３、ならびにＯｌｉｎｅｒら（Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，５０７−５１６，２００４）および補足資料に記載されたものが挙げられる。前記の文献の各々は、特にＡｎｇ２特異的抗体およびペプチボディなどに関する部分、とりわけそれらの文献中に記載された配列の、およびＬ１（Ｎ）；Ｌ１（Ｎ） ＷＴ；Ｌ１（Ｎ） １Ｋ ＷＴ；２ｘＬ１（Ｎ）；２ｘＬ１（Ｎ） ＷＴ；Ｃｏｎ４ （Ｎ）、Ｃｏｎ４ （Ｎ） １Ｋ ＷＴ、２ｘＣｏｎ４ （Ｎ） １Ｋ；Ｌ１Ｃ；Ｌ１Ｃ １Ｋ；２ｘＬ１Ｃ；Ｃｏｎ４Ｃ；Ｃｏｎ４Ｃ １Ｋ；２ｘＣｏｎ４Ｃ １Ｋ；Ｃｏｎ４−Ｌ１ （Ｎ）；Ｃｏｎ４−Ｌ１Ｃ；ＴＮ−１２−９ （Ｎ）；Ｃ１７ （Ｎ）；ＴＮ８−８（Ｎ）；ＴＮ８−１４ （Ｎ）；Ｃｏｎ １ （Ｎ）を含むが、これらに限定されない、Ａｎｇ２特異的抗体およびペプチボディなどに関する部分に記載されたものに関して、全体が参照により本明細書に組み入れられる。また、これらの抗アンジオポエチン特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などは、抗Ａｎｇ２抗体および製剤、例えば、それに関してその全体が参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２００３／０３０８３３に記載されたもの、特にＡｂ５２６；Ａｂ５２８；Ａｂ５３１；Ａｂ５３３；Ａｂ５３５；Ａｂ５３６；Ａｂ５３７；Ａｂ５４０；Ａｂ５４３；Ａｂ５４４；Ａｂ５４５；Ａｂ５４６；Ａ５５１；Ａｂ５５３；Ａｂ５５５；Ａｂ５５８；Ａｂ５５９；Ａｂ５６５；ＡｂＦ１ＡｂＦＤ；ＡｂＦＥ；ＡｂＦＪ；ＡｂＦＫ；ＡｂＧ１Ｄ４；ＡｂＧＣ１Ｅ８；ＡｂＨ１Ｃ１２；ＡｂｌＡ１；ＡｂｌＦ；ＡｂｌＫ、ＡｂｌＰ；およびＡｂｌＰを、その公報に記載されたように様々な順列で含み、これらは各々、前述の刊行物に完全に開示されたようにその全体が参照により本明細書に個別的かつ具体的に組み入れられる。
【００２５】
本発明の任意の方法について、本明細書に示される任意のポリカチオンを、本発明の抗体またはＦｃ融合体の製剤またはポリカチオン組成物で使用し得るということが企図される。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】５２℃で６週間保存した後のポリカチオンおよび連続するＤＤＤ残基を有する抗体を含む溶液中で形成された凝集体および二量体（またはその他の多量体）の相対存在量を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、治療的抗体またはＦｃ融合体の製剤を含む、抗体またはＦｃ融合分子およびポリカチオンを含む液体かまたは凍結乾燥した薬学的製剤を作製するための方法、ならびにそれらの製剤を含む組成物に関する。
【００２８】
本明細書で使用するとき、用語「抗体製剤」は、保存、さらなる加工、販売、および／または例えば、特定疾患を治療するための、特定経路による、特定量の特定薬剤の対象への投与などの、対象への投与のような、１つ以上の特定の用途のための１つ以上のその他の成分を有する、抗体およびポリカチオンの組み合わせを指す。
【００２９】
本明細書で使用するとき、用語「Ｆｃ融合体製剤」または「Ｆｃ融合分子製剤」は、保存、さらなる加工、販売、および／または、例えば、特定疾患を治療するための、特定経路による、特定量の特定薬剤の対象への投与などの、対象への投与のような、１つ以上の特定の用途のための１つ以上のその他の成分を有する、Ｆｃ融合分子およびポリカチオンの組み合わせを指す。
【００３０】
本明細書で使用するとき、用語「ポリカチオン」は、１つ以上のカチオン性単量体の反復単位のうちの１つ以上を含む分子を指す。様々な態様において、ポリカチオンは、１つもしくは複数の単量体の反復単位、または１つもしくは複数の中性単量体に連結した１つもしくは複数のカチオン性単量体を様々に含む反復サブユニットを含み、ここで、該単量体は、全体的に正電荷を有する反復構造特性を有する化合物を提供するよう共有結合で連結された、自然および／または合成の化合物である。「ポリカチオン組成物」とは、１つ以上のポリカチオンを含む組成物を指す。
【００３１】
本明細書で使用するとき、「カチオン」または「カチオン性単量体」とは、本明細書に示されるポリカチオンを作製するのに使用し得る単一単位または単量体単位を指す。本明細書で使用するとき、「中性」単量体とは、本発明によって企図されるポリカチオンを形成させるためにカチオンと組み合わせて使用し得る、非極性側鎖を有する単独アミノ酸残基のような、極性または電荷を有さない単量体を指す。
【００３２】
ポリカチオンは、ホモ重合体もしくは共重合体、またはその混合物であることがさらに企図される。ポリカチオンホモ重合体は、同じカチオン単量体の単一反復単位を含む。ポリカチオン共重合体は、異なるカチオン単量体または異なるカチオン性重合体を含む。１つの実施形態において、ポリカチオン共重合体は、カチオン単量体の混合物、ポリカチオンホモ重合体の混合物、またはポリカチオン共重合体の混合物を含んでもよい。
【００３３】
本明細書で使用するとき、用語「抗体」は、完全に組み立てられた抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、抗原に結合することができる抗体断片（例えば、Ｆａｂ’、Ｆ’（ａｂ）２、Ｆｖ、単鎖抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ））、および所望の生物学的活性を示す限りにおいて前述のものを含む組み換えペプチドを指す。抗原結合部分を、組み換えＤＮＡ技術によってまたはインタクトな抗体の酵素的もしくは化学的切断によって産生してもよい。抗体断片または抗原結合部分としては、とりわけ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、単鎖抗体（ｓｃＦＶ）、単鎖抗体断片、キメラ抗体、ダイアボディ、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、線状抗体；キレート組み換え抗体、トリボディ（ｔｒｉｂｏｄｙ）もしくはダイボディ（ｂｉｂｏｄｙ）、イントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｙ）、ナノボディ（ｎａｎｏｂｏｄｙ）、スモール・モジュラー・イムノファーマシューティカル（ＳＭＩＰ）、抗原結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質、ラクダ化（ｃａｍｅｌｉｚｅｄ）抗体、ＶＨＨ含有抗体、またはその変異体もしくは誘導体、および抗体が所望の生物学的活性を保持する限りにおいて、ＣＤＲ配列のような、ポリペプチドに特異的抗原結合を付与するのに十分である免疫グロブリンの少なくとも一部を含むポリペプチドが挙げられる。
【００３４】
免疫グロブリンを、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭという異なるクラスに割り当てることができ、クラスはさらに、サブクラスまたはアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２に分けられ得る。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造および３次元立体構造が周知である。異なるアイソタイプは、異なるエフェクター機能を有する。例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプは、抗体依存性細胞性細胞障害（ＡＤＣＣ）活性を有する。本発明の抗体は、定常ドメインを含む場合、これらのサブクラスまたはアイソタイプのいずれであってもよい。
【００３５】
本明細書で使用するとき、「治療的抗体」とは、疾患または障害の治療に使用される抗体を指す。
【００３６】
本明細書で使用するとき、「少なくとも２つの連続する酸性アミノ酸残基を含むＣＤＲドメインを有する抗体」とは、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｅ）などの、少なくとも２つの連続する、一連の酸性アミノ酸残基を有する少なくとも１つのＣＤＲアミノ酸配列を有する抗体を指す。
【００３７】
本明細書で使用するとき、「Ｆｃ融合体」または「Ｆｃ融合分子」とは、抗体のＦｃドメインなどのその他の分子に直接的または間接的のいずれかで融合したタンパク質またはペプチドを含む分子を指し、そこでは、このタンパク質またはペプチド部分は、所望の標的に特異的に結合する。本明細書で使用するとき、「ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）」とは、抗体のＦｃドメインなどのその他の分子に直接的または間接的のいずれかで融合したペプチドを含む分子を指す。用語「ペプチボディ」は、Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｆｃドメインに融合した全長タンパク質）を含まない。本発明は、Ｆｃドメインの（好ましくはループ領域内の）内部配列のような、ペプチドを含むように修飾されたＦｃドメインを含む分子を含む。Ｆｃ内部ペプチド分子は、特定の内部領域に前後に並んだ２つ以上のペプチド配列を含んでもよく、それらはその他の内部領域にさらなるペプチドを含んでもよい。
【００３８】
本明細書で使用するとき、用語「溶解性を向上させる」は、ポリカチオン組成物を欠く別の溶液、抗体またはＦｃ融合体の製剤と比較して、より少ない凝集体、二量体もしくは多量体を含むか、またはより少ない沈殿を結果として生じる、ポリカチオン組成物を含む溶液、抗体製剤、またはＦｃ融合体製剤を指す。
【００３９】
本明細書で使用するとき、用語「貯蔵寿命の増大」は、ポリカチオン組成物を欠く組成物と比較したとき、ポリカチオンを含む本発明の組成物が、抗体またはＦｃ融合分子を凝集体、二量体もしくはその他の多量体、または沈殿物へと分解させることなく、かつ生物学的活性を顕著に損失させることなく、適切な条件で保存することができる時間の長さの増大を指す。
【００４０】
抗体
本発明によって使用されるべきモノクローナル抗体を、Ｋｏｈｌｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−７，１９７５）によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製してもよく、または組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）よって作製してもよい。また、モノクローナル抗体を、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８，１９９１）およびＭａｒｋｓら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７，１９９１）に記載された技術を用いてファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。
【００４１】
本発明で有用な抗体を、当技術分野において周知の、本明細書に記載された抗体のより小さい抗原結合断片として使用し得るということがさらに企図される。
【００４２】
抗体断片は、インタクトな全長抗体の一部、好ましくは、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体；単鎖抗体分子（例えば、ｓｃＦｖ）；二重特異性抗体、三重特異性抗体などのような多重特異性抗体断片（例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ）；ミニボディ；キレート組み換え抗体；トリボディまたはバイボディ（ｂｉｂｏｄｉｅｓ）；イントラボディ；ナノボディ；スモール・モジュラー・イムノファーマシューティカル（ＳＭＩＰ）、結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質；ラクダ化抗体；ＶＨＨ含有抗体；および抗体断片から形成されたその他のポリペプチドが挙げられる。
【００４３】
抗体のパパイン消化は、各々単一の抗原結合部位を有するＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨドメインからなる一価の断片である、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる、２つの同一の抗原結合断片、ならびにすぐに結晶化できることに因んで命名された残りの「Ｆｃ」断片を生じさせる。ペプシン処理は、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価の断片であるＦ（ａｂ’）２断片を生じさせる。この断片は、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む２つの「単鎖Ｆｖ」すなわち「ｓｃＦＶ」抗体断片を有し、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間のポリペプチドリンカーをさらに含み、このリンカーは、Ｆｖが抗原結合のための所望の構造を形成するのを可能にし、結果として単鎖抗体（ｓｃＦｖ）を生じさせる。単鎖抗体中では、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対になって、それらを単一のタンパク質鎖として作るのを可能にする合成リンカーを介して一価の分子を形成する（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６，１９８８、およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３，１９８８）。ｓＦｖの総説については、のＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，第１１３巻，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２６９−３１５ページ（１９９４））を参照されたい。Ｆｄ断片は、ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなる。
【００４４】
キメラ抗体とは、典型的には異なる種を起源とする２つの異なる抗体に由来する配列を含む抗体を指す（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）。最も典型的には、キメラ抗体は、ヒトおよび齧歯類の抗体断片、通常はヒト定常領域およびマウス可変領域を含む。
【００４５】
追加の抗体断片としては、ＶＨドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６，１９８９）が挙げられる。ダイアボディは二価の抗体である。この抗体では、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは単一のポリペプチド鎖上に発現されるが、同じ鎖上の２つのドメイン間での対形成を可能にするには短過ぎるリンカーを用いているので、それらのドメインが別の鎖の相補的ドメインと対形成することを強いられ、２つの抗原結合部位を創り出している（例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８，１９９３、およびＰｏｌｊａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２：１１２１−１１２３，１９９４参照）。ダイアボディは、二重特異性または単特異性であることができる。
【００４６】
軽鎖を欠く機能的重鎖抗体は、テンジクザメ（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３７４：１６８−７３，１９９５）、アラフラオオセ（Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：３１３−２６，２００１）、ならびにラクダ、ヒトコブラクダ、アルパカ、およびラマなどの、ラクダ科（Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６−８，１９９３；Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７５：４１３，１９９８）で天然に生じる。これらの動物では、抗原結合部位が、ＶＨＨドメインという単一ドメインと化している。ラクダ科動物の重鎖を有する抗体を作製するための方法は、例えば、米国特許公報第２００５／０１３６０４９号および第２００５／００３７４２１号に記載されている。
【００４７】
重鎖抗体の可変ドメインは、わずか１５ｋＤａの分子量を有する、完全に機能的な最小の抗原結合断片であるので、この実体はナノボディと呼ばれる（Ｃｏｒｔｅｚ−Ｒｅｔａｍｏｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６４：２８５３−５７，２００４）。ナノボディライブラリーを、Ｃｏｎｒａｔｈら（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ ４５：２８０７−１２，２００１）に記載されたようにまたはＨｏｌｌｉｇｅｒら（Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６−３６，２００５）およびＲａｈｂａｒｉｚａｄｅｈら（Ｈｙｂｒｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｏｍｉｃｓ．２３：１５１−９，２００４）に記載されたような組み換え法を用いて、免疫化したヒトコブラクダから作製してもよい。
【００４８】
さらなる実施形態において、二重特異性抗体は、キレート組み換え抗体（ＣＲＡｂ）であってもよい。キレート組み換え抗体は、標的抗原の隣接する非重複エピトープを認識し、両方のエピトープに同時に結合するのに十分な柔軟性がある（Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２４６：３６７−７３，１９９５）。
【００４９】
二重特異性Ｆａｂ−ｓｃＦｖ（「バイボディ」）および三重特異性Ｆａｂ−（ｓｃＦｖ）（２）（「トリボディ」）の産生は、Ｓｃｈｏｏｎｊａｎｓら（Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：７０５０−５７，２０００）およびＷｉｌｌｅｍｓら（Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ Ａｎａｌｙｔ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｍｅｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．７８６：１６１−７６，２００３）に記載されている。バイボディまたはトリボディについては、ｓｃＦｖ分子を、ＶＬ−ＣＬ（Ｌ）およびＶＨ−ＣＨ１（Ｆｄ）鎖の一方または両方に融合させる。例えば、トリボディを産生するために２つのｓｃＦｖをＦａｂのＣ末端に融合させ、一方、バイボディでは、１つのｓｃＦｖをＦａｂのＣ末端に融合させる。
【００５０】
（ヒンジのない）ペプチドリンカーを介してまたはＩｇＧヒンジを介してＣＨ３に融合したｓｃＦｖからなる「ミニボディ」は、Ｏｌａｆｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２００４ Ａｐｒ；１７（４）：３１５−２３に記載されている。
【００５１】
イントラボディは、細胞内発現を示す単鎖抗体であり、細胞内タンパク質機能を操作することができる（Ｂｉｏｃｃａ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．９：１０１−１０８，１９９０；Ｃｏｌｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１０１：１７６１６−２１，２００４）。抗体コンストラクトを細胞内領域に保持する細胞シグナル配列を含むイントラボディを、Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒら（ＥＭＢＯ Ｊ １４：１５４２−５１，１９９５）およびＷｈｅｅｌｅｒら（ＦＡＳＥＢ Ｊ．１７：１７３３−５．２００３）に記載されたように産生してもよい。トランスボディ（ｔｒａｎｓｂｏｄｉｅｓ）は、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）が単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）抗体と融合している細胞透過性抗体である（Ｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．６４：１１０５−８，２００５）。
【００５２】
標的タンパク質に特異的なＳＭＩＰまたは結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である抗体もさらに企図される。これらのコンストラクトは、抗体エフェクター機能を実行するするのに必要な免疫グロブリンドメインに融合された抗原結合ドメインを含む単鎖ポリペプチドである。例えば、ＷＯ０３／０４１６００、米国特許公開ＵＳ２００３／０１３３９３９、および米国特許公開ＵＳ２００３／０１１８５９２を参照されたい。
【００５３】
イムノアドヘシンにするために、１つ以上のＣＤＲを共有結合または非共有結合のいずれかで分子に組み入れてもよい。イムノアドヘシンは、より大きいポリペプチド鎖の一部としてＣＤＲを組み入れてもよく、別のポリペプチド鎖にＣＤＲを共有結合で連結してもよく、または非共有結合でＣＤＲを組み入れてもよい。ＣＤＲは、イムノアドヘシンが関心となる特定の抗原に特異的に結合するのを可能にする。
【００５４】
１つの態様において、抗体製剤中の抗体は、治療的抗体である。例示的な治療的抗体としては、エンブレル（エタナセプト）、ヒュミラ（アダリムマブ）、シナジス（パリビズマブ）、ＡＭＧ ７１４（抗ＩＬ１５抗体）、ベクチビックス（パニツムマブ）、リツキサン（リツキシマブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、抗ＣＤ８０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）（ガリキシマブ）、抗ＣＤ２３ ｍＡｂ（ルミリキシマブ）、Ｍ２００（ボロシキシマブ）、抗クリプトｍＡｂ、抗ＢＲ３ ｍＡｂ、抗ＩＧＦ１Ｒ ｍＡｂ、タイサブリ（ナタリズマブ）、ダクリズマブ、ヒト化抗ＣＤ２０ ｍＡｂ（オクレリズマブ）、可溶性ＢＡＦＦアンタゴニスト（ＢＲ３−Ｆｃ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ、抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ、抗ＩＬ５受容体ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＭ２ ｍＡｂ、抗ＦＧＦ８ ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦＲ／Ｆｌｔ−１ ｍＡｂ、抗ガングリオシドＧＤ２ ｍＡｂ、アクチライズ（登録商標）（アルテプラーゼ）、メタライズ（登録商標）（テネクテプラーゼ）、ＣＡＴ−３８８８およびＣＡＴ−８０１５（抗ＣＤ２２ ｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＣＡＴ−３５４（抗ＩＬ１３ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−５００１（抗メソテリンｄｓＦｖ−ＰＥ３８コンジュゲート）、ＧＣ−１００８（抗ＴＧＦ−β ｍＡｂ）、ＣＡＭ−３００１（抗ＧＭ−ＣＳＦ受容体ｍＡｂ）、ＡＢＴ−８７４（抗ＩＬ１２ ｍＡｂ）、リンフォスタットＢ（ベリムマブ；抗ＢｌｙＳ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ１（マパツムマブ；ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−１ ｍＡｂ）、ＨＧＳ−ＥＴＲ２（ヒト抗ＴＲＡＩＬ受容体−２ ｍＡｂ）、アブスラックス（商標）（ヒト、抗（炭疽菌由来）防御抗原ｍＡｂ）、ＭＹＯ−０２９（ヒト抗ＧＤＦ−８ ｍＡｂ）、ＣＡＴ−２１３（ヒト抗エオタキシン１ ｍＡｂ）、エルビタックス（セツキシマブ）、エプラツズマブ、レミケード（インフリキシマブ；抗ＴＮＦ ｍＡｂ、ハーセプチン（登録商標）（トラスツズマブ）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ベクチビックス（パナツムマブ）、レオプロ（アブシキシマブ）、アクテムラ（抗ＩＬ６受容体ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（ザルツムマブ）、ＨｕＭａｘ−Ｉｎｆｌａｍ、Ｒ１５０７（抗ＩＧＦ−１Ｒ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ ＨｅｐＣ、ＨｕＭａｘ ＣＤ３８、ＨｕＭａｘ−ＴＡＣ（抗ＩＬ２Ｒａまたは抗ＣＤ２５ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＺＰ３（抗ＺＰ３ ｍＡｂ）、ベキサール（トシツモマブ）、オルソクローンＯＫＴ３（ムロモナブ−ＣＤ３）、ＭＤＸ−０１０（イピリムマブ）、抗ＣＴＬＡ４、ＣＮＴＯ １４８（ゴリムマブ；抗ＴＮＦα炎症ｍＡｂ）、ＣＮＴＯ １２７５（抗ＩＬ１２／ＩＬ２３ ｍＡｂ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ４（ザノリムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０（オファツムマブ）、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦＲ（ザルツムマブ）、ＭＤＸ−０６６（ＣＤＡ−１）およびＭＤＸ−１３８８（抗クロストリジウム・ディフィシル毒素Ａおよび毒素Ｂ、Ｃ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０６０（抗ＣＤ３０ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−０１８、ＣＮＴＯ ９５（抗インテグリン受容体ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０７（抗マンノース受容体／ｈＣＧβ ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１１００（抗ＩＰ１０潰瘍性大腸炎ｍＡｂ）、ＭＤＸ−１３０３（バルロチム（商標））、抗炭疽菌炭疽、ＭＥＤＩ−５４５（ＭＤＸ−１１０３、抗ＩＦＮα）、ＭＤＸ−１１０６（ＯＮＯ−４５３８；抗ＰＤ１）、ＮＶＳ抗体＃１、ＮＶＳ抗体＃２、ＦＧ−３０１９（抗ＣＴＧＦ特発性肺線維症フェーズＩ、Ｆｉｂｒｏｇｅｎ）、ＬＬＹ抗体、ＢＭＳ−６６５１３、ＮＩ−０４０１（抗ＣＤ３ ｍＡｂ）、ＩＭＣ−１８Ｆ１（ＶＥＧＦＲ−１）、ＩＭＣ−３Ｇ３（抗ＰＤＧＦＲα）、ＭＤＸ−１４０１（抗ＣＤ３０）、ＭＤＸ−１３３３（抗ＩＦＮＡＲ）、シナジス（パリビズマブ；抗ＲＳＶ ｍＡｂ）、キャンパス（アレムツズマブ）、ベルケード（ボルテゾミブ）、ＭＬＮ０００２（抗α４β７ ｍＡｂ）、ＭＬＮ１２０２（抗ＣＣＲ２ケモカイン受容体ｍＡｂ）、シムレクト（バシリキシマブ）、プレクシージュ（ルミラコキシブ）、ゾレア（オマリズマブ）、ＥＴＩ２１１（抗ＭＲＳＡ ｍＡｂ）、ゼナパックス（ダクリズマブ）、アバスチン（ベバシズマブ）、マブセラＲＡ（リツキシマブ）、タルセバ（エルロチニブ）、ゼバリン（イブリツモマブチウキセタン）、ゼチーア（エゼチミブ）、ジトリン（エゼチミブおよびシンバスタチン）、ＮＩ−０４０１（ヒト抗ＣＤ３）、アデカツムマブ、ゴリムマブ（抗ＴＮＦα ｍＡｂ）、エプラツズマブ、ゲムツズマブ、ラプティバ（エファリズマブ）、シムジア（セルトリズマブペゴール、ＣＤＰ ８７０）、（ソリリス）エクリズマブ、ペキセリズマブ（抗Ｃ５補体）、ＭＥＤＩ−５２４（ヌマックス）、ルセンティス（ラニビズマブ）、１７−１Ａ（パノレックス）、トラビオ（レルデリムマブ）、セラシムｈＲ３（ニモツズマブ）、オムニターグ（ペルツズマブ）、オシデム（ＩＤＭ−１）、オバレックス（Ｂ４３．１３）、ヌビオン（ビジリズマブ）、抗ＣＤ４０Ｌ ｍＡｂ（ＩＤＥＣ−１３１）、ザネリム（ヒト化抗ＣＤ１１ａ）、ならびにカンツズマブが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
Ｆｃ融合分子
抗体のＦｃドメインなどのその他の分子に直接的または間接的のいずれかで融合したタンパク質またはペプチドを含むＦｃ融合分子も、本発明での使用が企図される。Ｆｃ融合分子には、Ｆｃドメインに融合した全長タンパク質を含むＦｃ融合タンパク質、およびペプチボディが含まれる。ペプチボディとは、抗体のＦｃドメインなどのその他の分子に直接的または間接的のいずれかで融合したペプチドを含む分子を指し、ペプチボディでは、このペプチド部分が所望の標的に特異的に結合する。
【００５６】
用語「ペプチボディ」は、Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｆｃドメインに融合した全長タンパク質）を含まない。本明細書で使用するとき、用語「ペプチド」は、ペプチド結合で連結された２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、またはそれより多くのアミノ酸の分子を指す。例示的なペプチドを、当技術分野で公知の方法のいずれかで作製してもよく、例えば、ペプチドライブラリー（例えば、ファージディスプレイライブラリー）で実行するか、化学合成で作製するか、タンパク質の消化によって得るか、または組み換えＤＮＡ技術を用いて作製してもよい。ペプチドには、精製されているかまたは２つの形態の混合物の状態にあるかのいずれかの、ＤおよびＬアミノ酸形態が含まれる。ペプチボディの産生は、一般に、ＰＣＴ公開のＷＯ００／２４７８２、米国特許第７，１３８，３７０号、米国特許第６，６６０，８４３ Ｂ１号、および米国特許公開ＵＳ２００４／００４４１８８に記載されている。
【００５７】
タンパク質またはペプチドを、Ｆｃ領域に融合するかまたは修飾されたＦｃ分子である、Ｆｃループに挿入するかのいずれかにしてもよい。Ｆｃループは、その全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許出願公開ＵＳ２００６／０１４０９３４に記載されている。本発明は、Ｆｃドメインの（好ましくはループ領域内の）内部配列のような、ペプチドを含むように修飾されたＦｃドメインを含む分子を含む。Ｆｃ内部ペプチド分子は、特定の内部領域に前後に並んだ２つ以上のペプチド配列を含んでもよく、それらはその他の内部領域にさらなるペプチドを含んでもよい。
【００５８】
本発明は、タンパク質もしくはペプチドのＮもしくはＣ末端に、またはＮおよびＣ末端の両方で融合したタンパク質またはペプチドに付着した少なくとも１つのＦｃドメインの存在を企図する。
【００５９】
本発明の様々な実施形態において、Ｆｃ構成成分は、ネイティブＦｃまたはＦｃ変異体のいずれかである。「Ｆｃドメイン」は、以下に定義されるようなネイティブＦｃおよびＦｃ変異体の分子ならびに配列を包含する。
【００６０】
「ネイティブＦｃ」とは、単量体形態であれ多量体形態であれ、抗体全体の消化から結果として得られる非抗原結合断片の配列を含む分子または配列を指す。典型的には、ネイティブＦｃは、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。ネイティブＦｃの免疫グロブリン源は、１つの態様において、ヒト起源であり、代わりの実施形態において、任意のクラスの免疫グロブリンであってもよい。ネイティブＦｃドメインは、単量体ポリペプチドから構成されており、この単量体ポリペプチドは、共有結合的（すなわち、ジスルフィド結合）および／または非共有結合的な会合によって連結されることにより、二量体または多量体の形態になり得る。ネイティブＦｃ分子の単量体サブユニット間の分子間ジスルフィド結合の数の範囲は、クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ）またはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＡ１、ＩｇＧＡ２）によって、１から４である。ネイティブＦｃの１つの例は、ＩｇＧのパパイン消化から結果として得られるジスルフィド結合した二量体である（Ｅｌｌｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８２），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１０：４０７１−９参照）。
【００６１】
「Ｆｃ変異体」とは、ネイティブＦｃから修飾されているが、依然としてサルベージ受容体ＦｃＲｎの結合部位を含む分子または配列を指す。国際出願のＷＯ９７／３４６３１（１９９７年９月２５日に公開）およびＷＯ９６／３２４７８は、例示的なＦｃ変異体、およびサルベージ受容体との相互作用を記載しており、参照により本明細書に組み入れられる。１つの態様において、用語「Ｆｃ変異体」は、非ヒトのネイティブＦｃからヒト化された分子または配列を含む。別の態様において、ネイティブＦｃは、本発明の融合分子に必要とされない構造的特色または生物学的活性を与えるという理由で除去し得る部位を含む。したがって、用語「Ｆｃ変異体」は、（１）ジスルフィド結合の形成、（２）選択された宿主細胞との不適合性、（３）選択された宿主細胞での発現時のＮ末端の不均一性、（４）グリコシル化、（５）補体との相互作用、（６）サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合、または（７）抗体依存性細胞性細胞障害（ＡＤＣＣ）に影響を及ぼすかまたはそれらに関与する１つ以上のネイティブＦｃ部位を欠く分子または配列を含む。Ｆｃ変異体については、以下でさらに詳細に記載する。
【００６２】
Ｆｃ変異体およびネイティブＦｃと同様に、用語「Ｆｃドメイン」は、抗体全体から消化されたものであれ、その他の手段で産生されたものであれ、単量体形態または多量体形態の分子を含む。Ｆｃ配列は、当技術分野において公知であり、本発明での使用が企図される。例えば、Ｆｃ ＩｇＧ１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８５７）、Ｆｃ ＩｇＧ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８５９）、Ｆｃ ＩｇＧ３（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８６０）、Ｆｃ ＩｇＧ４（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８６１）、Ｆｃ ＩｇＡ１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８７６）、Ｆｃ ＩｇＡ２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８７７）、Ｆｃ ＩｇＤ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８８０）、Ｆｃ ＩｇＭ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８７１）、およびＦｃ ＩｇＥ（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ０１８５４）は、本明細書での使用が企図されるいくつかの追加のＦｃ配列である。
【００６３】
ジスルフィド結合の形成による二量体化を妨げる特定の条件が存在しないならば、適当なシステイン残基が存在するとき、Ｆｃ単量体は自発的に二量体化するということに留意すべきである。Ｆｃ二量体において通常ジスルフィド結合を形成するシステイン残基が取り除かれるかまたはその他の残基に置き換えられるとしても、単量体鎖は通常、非共有結合的な相互作用を通じて二量体を形成する。本明細書中の用語「Ｆｃ」は、これらの形態、すなわち、ネイティブな単量体、ネイティブな二量体（ジスルフィド結合で連結している）、修飾された二量体（ジスルフィドおよび／または非共有結合で連結している）、ならびに修飾された単量体（すなわち、誘導体）のいずれかを意味するように用いられる。
【００６４】
前述のように、Ｆｃ変異体は、本発明の範囲内の好適なビヒクルである。サルベージ受容体への結合が維持されるという条件で、ネイティブＦｃを広範囲にわたって修飾し、Ｆｃ変異体を形成させてもよい。例えば、ＷＯ９７／３４６３１およびＷＯ９６／３２４７８を参照されたい。そのようなＦｃ変異体において、本発明の融合分子によって必要とされない構造的特色または機能的活性を与えるネイティブＦｃの１つ以上の部位を除去してもよい。これらの部位を、例えば、残基を置換するかまたは欠失させることによって、その部位に残基を挿入することによって、またはその部位を含む部分を切断することによって、除去してもよい。また、挿入または置換される残基は、ペプチドミメティックまたはＤ−アミノ酸などの改変されたアミノ酸であってもよい。Ｆｃ変異体は、いくつもの理由から望ましい場合があり、そのうちのいくつかは本明細書に記載されている。例示的なＦｃ変異体には、以下のような分子および配列が含まれる。
１．ジスルフィド結合の形成に関与する部位が除去されている。そのような除去は、本発明の分子を産生するのに使用する宿主細胞に存在するその他のシステイン含有タンパク質との反応を回避し得る。この目的のために、Ｎ末端のシステイン含有セグメントが切断されていてもよくまたはシステイン残基が欠失しているかもしくはその他のアミノ酸（例えば、アラニル、セリル）と置換されていてもよい。システイン残基が除去された場合でも、単鎖Ｆｃドメインは依然として、非共有結合で結びつく二量体Ｆｃドメインを形成することができる。
２．ネイティブＦｃが選択された宿主細胞とより適合するように修飾されている。例えば、プロリンイミノペプチダーゼなどの大腸菌の消化酵素によって認識され得る、典型的なネイティブＦｃのＮ末端付近のＰＡ配列を除去してもよい。また、特にこの分子を大腸菌などの細菌細胞で組み換え発現させる場合に、Ｎ末端のメチオニン残基を付加してもよい。
３．選択された宿主細胞で発現したときのＮ末端の不均一性を防ぐために、ネイティブＦｃのＮ末端の一部が除去されている。この目的のために、Ｎ末端の最初の２０アミノ酸残基、特に位置１、２、３、４、および５のアミノ酸残基のいずれかを欠失させてもよい。
４．１つ以上のグリコシル化部位が除去されている。典型的にグリコシル化される残基（例えば、アスパラギン）は、細胞溶解性応答を付与し得る。そのような残基は、欠失しいるかまたはグリコシル化されない残基（例えば、アラニン）と置換されていてもよい。
５．Ｃ１ｑ結合部位などの、補体との相互作用に関与する部位が除去されている。例えば、ヒトＩｇＧのＥＫＫ配列を欠失させるかまたは置換してもよい。補体の動員は、本発明の分子にとって有利ではない可能性があるので、そのようなＦｃ変異体の場合には回避されてもよい。
６．サルベージ受容体以外のＦｃ受容体への結合に影響を及ぼす部位が除去されている。ネイティブＦｃは、本発明の融合分子に必要とされない、ある種の白血球との相互作用の部位を有している可能性があるので、除去されてもよい。
７．ＡＤＣＣ部位が除去されている。ＡＤＣＣ部位は当技術分野において公知である。例えば、ＩｇＧ１のＡＤＣＣ部位に関しては、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（５）：６３３−９（１９９２）を参照されたい。その上、これらの部位は本発明の融合分子に必要とされないので、除去されてもよい。
８．ネイティブＦｃが非ヒト抗体に由来する場合、ネイティブＦｃはヒト化されてもよい。典型的には、ネイティブＦｃをヒト化するために、非ヒトのネイティブＦｃの選択された残基を、ヒトのネイティブＦＣに通常見られる残基と置換する。抗体のヒト化のための技術は当技術分野において周知である。
【００６５】
Ｆｃ部分の変異体、類似体、または誘導体を、例えば、残基または配列の様々な置換を施すことによって構築してもよい。変異体（または類似体）ポリペプチドには、１つ以上のアミノ酸残基がＦｃアミノ酸配列を補完している、挿入変異体が含まれる。挿入は、タンパク質のどちらか一方もしくは両方の末端にあってもよく、またはＦｃアミノ酸配列の内部領域内に位置していてもよい。どちらか一方または両方の末端に付加残基を有する、挿入変異としては、例えば、融合タンパク質およびアミノ酸タグまたは標識を含むタンパク質を挙げることができる。例えば、Ｆｃ分子は、特にこの分子を大腸菌などの細菌細胞で組み換え発現させる場合に、Ｎ末端Ｍｅｔを任意で含んでもよい。
【００６６】
Ｆｃ欠失変異体では、Ｆｃポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基が除去されている。欠失は、Ｆｃポリペプチドの一方もしくは両方の末端で生じさせることができ、またはＦｃアミノ酸配列内の１つもしくは複数のアミノ酸残基の除去によって生じさせることができる。それゆえに、Ｆｃ欠失変異体には、Ｆｃポリペプチド配列の全ての断片が含まれる。
【００６７】
Ｆｃ置換変異体では、Ｆｃポリペプチドの１つ以上のアミノ酸残基が除去され、代わりの残基と置き換えられている。１つの態様において、置換は、保存的な性質を帯び、、この種の保存的置換は当技術分野において周知である。あるいは、本発明は、非保存的でもある置換を包括的に含む。例示的な保存的置換は、Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ［Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２版；Ｗｏｒｔｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７５），７１−７７ページ］に記載されており、それらを以下に示す。
【００６８】
【表１】
【００６９】
代わりの、例示的な保存的置換を以下に示す。
【００７０】
【表２】
【００７１】
例えば、Ｆｃ配列のいくつかのまたは全てのジスルフィド架橋の形成を妨げるために、システイン残基を欠失させるかまたはその他のアミノ酸と置き換えることができる。各々のシステイン残基を、除去および／またはＡｌａもしくはＳｅｒなどの、その他のアミノ酸残基と置換することができる。また、別の例として、（１）Ｆｃ受容体結合部位を取り除くために、（２）補体（Ｃ１ｑ）結合部位を取り除くために、および／または（３）抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣ）部位を取り除くために修飾を施し、アミノ酸置換を導入してもよい。そのような部位は当技術分野において公知であり、任意の公知の置換が本明細書で使用されるＦｃの範囲内にある。例えば、ＩｇＧ１のＡＤＣＣ部位に関しては、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２９，Ｎｏ．５，６３３−６３９（１９９２）を参照されたい。
【００７２】
同様に、１つ以上のチロシン残基をフェニルアラニン残基で置き換えることができる。さらに、その他の変異体アミノ酸の挿入、欠失、および／または置換も企図されており、本発明の範囲内にある。保存的アミノ酸置換が一般的に好ましい。さらに、改変が、ペプチドミメティックまたはＤ−アミノ酸などの、改変アミノ酸の形態であってもよい。
【００７３】
また、化合物のＦｃ配列を、ペプチドについて本明細書で記載したように誘導体化してもよく、すなわち、アミノ酸残基の挿入、欠失、または置換以外の修飾を持たせてもよい。好ましくは、修飾は、共有結合の性質を帯び、例えば、重合体、脂質、その他の有機および無機部分との化学結合を含む。本発明の誘導体を、循環半減期を増大させるように調製してもよく、または所望の細胞、組織、もしくは器官へのポリペプチドの標的化能力を向上させるように設計してもよい。
【００７４】
「Ａｌｔｅｒｅｄ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ ｗｉｔｈ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｈａｌｆ−Ｌｉｆｅ」と題された、ＷＯ９６／３２４７８に記載されているように、インタクトＦｃ分子のサルベージ受容体結合ドメインを本発明の化合物のＦｃ部分として使用することも可能である。本明細書でＦｃと呼ばれる分子群の追加のメンバーは、「Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ−Ｌｉｋｅ Ｄｏｍａｉｎｓ ｗｉｔｈ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｈａｌｆ−Ｌｉｖｅｓ」と題された、ＷＯ９７／３４６３１に記載されているものである。この段落で引用された公開ＰＣＴ出願は両方とも、参照により本明細書に組み入れられる。
【００７５】
１つの態様において、抗体製剤中のＦｃ融合分子は、治療的ＦＣ分子である。例示的な治療的Ｆｃ融合分子としては、ＩＬ−１ Ｔｒａｐ（ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分ならびに両方のＩＬ−１受容体構成成分（Ｉ型受容体および受容体付属タンパク質）の細胞外ドメイン）、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ（ＩｇＧ１ Ｆｃに融合したＶＥＧＦＲ１のＩｇドメイン）、アタシセプト（ＴＡＣＩ−Ｉｇ）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト）、ＣＤ４−Ｉｇ融合タンパク質（Ｐｒｏ−５４２）、ＴＮＦＲ１−ＩｇＧ、アメビブ（登録商標）（アレファセプト、ＬＦＡ−３／ＩｇＧ１）、ＣＤ３０−Ｌ−ＩｇＧ、ＩＬ−１０−Ｆｃ、ＴＮＲＦ−Ｆｃ、ＩＬ−２−Ｉｇ、ＯＰＧ−Ｆｃ、ならびにレプチン（ＯｂＲ）−Ｆｃが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７６】
本発明を、抗アンジオポエチン（例えば、抗Ａｎｇ２および／または抗Ａｎｇ１）特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などを製剤化する際に使用することができるということがさらに企図される。これらの抗アンジオポエチン特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などには、限定されるものではないが、ＷＯ０３／０５７１３４および米国出願公開ＵＳ２００３／０２２９０２３に記載されたものが挙げられる。前記の文献の各々は、特にＡｎｇ２特異的抗体およびペプチボディなどに関する部分、とりわけそれらの公報に記載された配列の、およびＬ１（Ｎ）；Ｌ１（Ｎ） ＷＴ；Ｌ１（Ｎ） １Ｋ ＷＴ；２ｘＬ１（Ｎ）；２ｘＬ１（Ｎ） ＷＴ；Ｃｏｎ４ （Ｎ）、Ｃｏｎ４ （Ｎ） １Ｋ ＷＴ、２ｘＣｏｎ４ （Ｎ） １Ｋ；Ｌ１Ｃ；Ｌ１Ｃ １Ｋ；２ｘＬ１Ｃ；Ｃｏｎ４Ｃ；Ｃｏｎ４Ｃ １Ｋ；２ｘＣｏｎ４Ｃ １Ｋ；Ｃｏｎ４−Ｌ１ （Ｎ）；Ｃｏｎ４−Ｌ１Ｃ；ＴＮ−１２−９ （Ｎ）；Ｃ１７ （Ｎ）；ＴＮ８−８（Ｎ）；ＴＮ８−１４ （Ｎ）；Ｃｏｎ １ （Ｎ）を含むが、これらに限定されない、Ａｎｇ２特異的抗体およびペプチボディなどに関する部分に記載されたものに関して、全体が参照により本明細書に組み入れられる。また、これらの抗アンジオポエチン特異的抗体、ペプチボディ、および関連分子などは、抗Ａｎｇ２抗体および製剤、例えば、それに関してその全体が参照により本明細書に組み入れられるＷＯ２００３／０３０８３３に記載されたもの、特にＡｂ５２６；Ａｂ５２８；Ａｂ５３１；Ａｂ５３３；Ａｂ５３５；Ａｂ５３６；Ａｂ５３７；Ａｂ５４０；Ａｂ５４３；Ａｂ５４４；Ａｂ５４５；Ａｂ５４６；Ａ５５１；Ａｂ５５３；Ａｂ５５５；Ａｂ５５８；Ａｂ５５９；Ａｂ５６５；ＡｂＦ１ＡｂＦＤ；ＡｂＦＥ；ＡｂＦＪ；ＡｂＦＫ；ＡｂＧ１Ｄ４；ＡｂＧＣ１Ｅ８；ＡｂＨ１Ｃ１２；ＡｂｌＡ１；ＡｂｌＦ；ＡｂｌＫ、ＡｂｌＰ；およびＡｂｌＰを、その公報に記載されたように様々な順列で含み、これらは各々、前述の刊行物に完全に開示されたようにその全体が参照により本明細書に個別的かつ具体的に組み入れられる。
【００７７】
ポリカチオン
本発明で有用なポリカチオンには、天然および合成両方の、正電荷を持つペプチドおよびタンパク質、ならびにポリアミン、炭水化物、または合成のポリカチオン性重合体が含まれる。本発明で有用な例示的ポリカチオンとしては、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ポリヒスチジン、およびカチオン性多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。本発明で有用な追加のポリカチオンとしては、プロタミン、ポリブレン（登録商標）（１，５−ジメチル−１，５−ジアザウンデカメチレンポリメトブロマイド、臭化ヘキサジメトリン）、ヒストン、ミエリン塩基性タンパク質、硫酸ポリミキシンＢ、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、ブラジキニン、スペルミン、プトレシン、カダベリン、オクチルアルギニン、カチオン性デンドリマー、および合成ペプチドが挙げられる。ある種の用途については、ポリカチオン性担体として、カチオン性脂質およびペプチド部分が含まれてもよい。例えば、ＷＯ９６／２２７６５を参照されたい。
【００７８】
関連する実施形態において、ポリカチオンは、リジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン、および本明細書で示されるその他のカチオン性単量体を含むが、これらに限定されない、正電荷を持つ単量体の混合物、または電荷を持つ単量体および電荷を持たない単量体の混合物を含んでもよい。例示的な単量体としては、塩基性アミノ酸、中性単量体に連結したカチオン性単量体の反復配列、または反復構造特性を有するその他のタンパク質分子もしくは化学構造物が挙げられる。本発明での使用が企図される電荷を持たない単量体としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、またはプロリンなどの、中性アミノ酸が挙げられる。
【００７９】
追加の実施形態において、ポリカチオンは、リジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン、およびカチオン性多糖類からなる群より選択される正電荷を持つ単量体のいずれか１つの単量体の混合物を含んでもよい。
【００８０】
本発明の方法および組成物で有用ないくつかのポリカチオンは、タンパク質に全体として正電荷を与える高度に塩基性の領域またはアミノ酸を含むタンパク質またはその断片である。全長塩基性タンパク質全体をポリカチオン組成物に使用し得るということ、または塩基性アミノ酸残基を有するタンパク質の一部をポリカチオン中のカチオン性単量体として使用し得るということが企図される。例えば、ヒトプロタミン（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００２７５３）は、１０２アミノ酸のアルギニンに富むタンパク質である。ヒトプロタミンタンパク質の高度に塩基性の部分を、本明細書に記載されたようなカチオン性単量体として使用し得るということが企図される。ひいては、プロタミン単量体をポリカチオン組成物における反復単位として使用してもよい。
【００８１】
さらに、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）は、中枢神経系に見られる高度に塩基性のタンパク質である（Ｅｙｌａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１８：５７７０−８４，１９７１）。この全長塩基性タンパク質全体をポリカチオン組成物に使用し得るということ、またはヒトミエリン塩基性タンパク質の公知のアイソフォーム（Ｇｅｎｂａｎｋアクセッション番号Ｐ０２６８６、ＮＰ＿００１０２０２５２、ＮＰ＿００１０２０２６３、ＮＰ＿００１０２０２６１、およびＮＰ＿００２３７６）のいずれの高度に塩基性の部分をも本明細書に記載されたようなカチオン性単量体として使用し得るということが企図される。また、ＭＢＰ単量体を、ポリカチオン重合体の組成物における反復単位として使用してもよい。
【００８２】
ポリミキシンＢ（ＰＭＢ）の環状部分（Ｔｈｒ−Ｄａｂ−シクロ［Ｄａｂ−Ｄａｂ−ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｄａｂ−Ｄａｂ−Ｔｈｒ］、ここでＤａｂは２，４−ジアミノ酪酸である）を、本発明のポリカチオン組成物における単一のカチオン性単量体として使用してもよく、または線状化して、ＰＭＢ部分の複数の単量体を有する重合体を作製するよう使用することができる。また、当技術分野で公知のポリミキシンＢ のヘプタペプチド、ノナペプチド、およびオクタペプチド（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（Ｔｏｋｙｏ）４５：７４２−７４９およびＴｓｕｂｅｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ ４９：３１２２−３１２８，２００５）を、単量体として使用するかまたは線状化して、本発明のポリカチオン組成物を作製するための反復単位として使用してもよい。
【００８３】
ブラジキニンは、ＲＰＰＧＦＳＰＦＲというアミノ酸配列を有する９アミノ酸のペプチド鎖である。この９アミノ酸配列を本発明のポリカチオン組成物に使用してもよく、またはその代わりとして、この９アミノ酸配列は、ブラジキニン単量体の反復単位を有する重合体を形成させるために使用されるカチオン性単量体を含む。
【００８４】
スペルミン、プトレシン、およびカダベリンは、本発明の製剤で企図される塩基性アミノ酸のカチオン性誘導体である。スペルミンおよびプトレシンは、アルギニンの誘導体である。プトレシンは、アルギニンがアルギニンデカルボキシラーゼおよびアドマチン（ａｄｍａｔｉｎｅ）イミノヒドロキシラーゼと反応することによって生成される。あるいは、アルギニンをまずオルニチンに変換し、それをプトレシンに変換することができる。スペルミンは、プトレシンが脱カルボキシルＳ−アデノシル−Ｌ−メチオニン由来のアミノプロピル基と反応してスペルミジンを生じることにより結果として得られる。その後、スペルミジンは、別のアミノプロピル基が付加された後、スペルミン［ＮＨ２（ＣＨ２）３ＮＨ（ＣＨ２）４ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨ２］に変換される。カダベリンは、リジンの誘導体であり、リジンがリジンデカルボキシラーゼと反応した後に生成される。本発明で有用なポリカチオン組成物は、スペルミン、プトレシン、またはカダベリンのうちの１つ以上の単量体を含み、これらの単量体の混合物をさらに含み得るということが企図される。
【００８５】
カチオン性多糖類は、本明細書に示されるカチオン性単量体などの、カチオン性部分とコンジュゲートしているかまたは他の形態で該カチオン性部分に連結されている多糖類である。キトサンを含むが、これに限定されない、ポリカチオン性多糖類は、本発明の組成物および方法での使用が企図される。カチオン性多糖類を、当技術分野において公知の技術を用いて作製してもよい。例えば、Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．１０：１３９−４９，２００３；米国特許第６，９５８，３２５号、および国際特許出願のＷＯ２００３／０９２７３９を参照されたい。
【００８６】
さらなる実施形態において、当技術分野において公知の任意のカチオン性単量体は、本発明のポリカチオン組成物での使用が企図される。
【００８７】
１つの態様において、ポリアミノ酸化合物の文脈における、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリヒスチジン、およびポリオルニチンなどの、ポリカチオンは、２から約５００残基からなり、０．２ｋＤａから７０ｋＤａの分子量値を有する。ポリアミノ酸のポリカチオンでは、ポリカチオン化合物中の個々のアミノ酸単量体の数を、ポリカチオンを構成しているアミノ酸の分子量を知った上で、ポリカチオン化合物の分子量に基づいて決定してもよい。例えば、７個のリジン残基を含む重合体の重さは約１ｋＤａであり、６０個のリジン残基を含む重合体の重さは約８ｋＤａであり、７０ｋＤａのポリリジンは５００個のリジン残基を含む。
【００８８】
１つの実施形態において、本発明の方法および組成物で使用されるポリカチオンの分子量は、約０．２ｋＤａから７０ｋＤａ、約１ｋＤａから約７０ｋＤａ、約５ｋＤａから約５０ｋＤａ、または約１０ｋＤから約３５ｋＤであってもよい。組成物中のポリカチオンの分子量は、１ｋＤ未満、約１ｋＤ、約５ｋＤ、約１０ｋＤ、約１５ｋＤ、約２０ｋＤ、約２５ｋＤ、約３０ｋＤ、約３５ｋＤ、約４０ｋＤ、約４５ｋＤ、約５０ｋＤ、約５５ｋＤ、約６０ｋＤ、約６５ｋＤ、または約７０ｋＤの分子量を有するということが企図される。
【００８９】
ポリカチオン組成物を含む抗体およびＦｃ融合分子の製剤を作製するための方法
溶解性を向上させるために、溶液のｐＨを溶液中の抗体またはＦｃ融合分子の等電点（ｐＩ）よりも少なくとも１ｐＨ単位、または２ｐＨ単位も、低くまたは高くすることが重要である。抗体またはＦｃ融合分子の等電点とは、抗体またはＦｃ融合分子の正味の電荷がゼロとなるｐＨである。高いｐＩ（例えば、８から１１）を有する抗体またはＦｃ融合分子は、通常、生理的ｐＨの７．４では溶液中で凝集体を形成しない。
【００９０】
異なるアイソタイプの抗体は、約７０％の相同性を共有しており、典型的な抗体のｐＩは、約８．０から８．５であるが、約ｐＩ６から約ｐＩ９の範囲に及び得る。抗体の溶解性を増大させ、凝集および二量体形成を低下させるために、抗体溶液をｐＨ５から６で製剤化する。このｐＨでは、抗体分子は正電荷を持ち、互いに反発し、凝集しない。また、このｐＨは、アスパラギンの脱アミド、メチオニンの酸化、ならびに酵素的および化学的切断の速度が低いので有用である。
【００９１】
より低いｐＩ（例えば、ｐＩ５から７）の抗体またはＦｃ融合分子は、より多くの負の電荷を有するが、凝集体を生成し、ｐＨ５から６の製剤溶液中でまたはｐＨ＝ｐＩ点を越える製剤ｐＨ５から６から生理的ｐＨ７．４への移行の間に注射部位で沈殿する可能性がある。より低いｐＩ値を有する抗体は、乏しい溶解性を示す。例えば、６．４の計算ｐＩを有するＩｇＧ２λ抗体（実施例１）は、ｐＨ５．５から６．０で乏しい溶解性を有する。これは、溶液のｐＨが抗体のｐＩに近づくことによって生じる可能性が高い。ｐＨが抗体のｐＩに近づくと、抗体分子は電気的に中性になり、互いに反発せず、溶液中で凝集する傾向がある。
【００９２】
さらに、抗体は、７．５よりも高いｐＩを有するが、ポリカチオンとの会合を受け入れられる抗体の負電荷を持つ領域またはドメインも示してよい。例えば、抗体は、高いｐＩを有するが、抗体を不安定にさせ、溶液中で凝集しやすくさせる連続する酸性アミノ酸残基をＣＤＲドメインに含んでもよい。一続きの連続するアミノ酸を含む抗体は、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｅ）などの、少なくとも２つの連続する、一連の酸性アミノ酸残基を有するＣＤＲアミノ酸配列を有する抗体である。
【００９３】
さらに、ポリカチオン溶液中のＦｃ融合分子の製剤は、Ｆｃ融合分子のｐＩ、およびＦｃ融合体の配列内の任意の一続きの負電荷を持つアミノ酸残基に基づいて調整される。Ｆｃ融合分子のｐＩの範囲は、ｐＩ４からｐＩ９であってもよい。抗体と同様に、低いｐＩでは、Ｆｃ融合分子は、溶液中での低い溶解性を有する可能性が高い。
【００９４】
関心となる抗体を有する製剤のための最適なポリカチオン溶液を決定するために、当技術分野において公知の標準的な技術（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９４）を用いて、抗体の全体の電荷に基づいて、抗体のｐＩをまず決定する。１つの酸性残基は、抗体のｐＩを０．１単位下げる。例えば、典型的な抗体のｐＩが約８ならば、アスパラギン酸（Ｄ）またはグルタミン酸（Ｅ）などの追加の酸性残基を有する抗体は、抗体中の各負電荷のアミノ酸につき、通常より約０．１ｐＩ単位低いｐＩを有する。ｐＨが抗体のｐＩを上回り、抗体がアスパラギン酸またはグルタミン酸残基を含む場合、負電荷を持つアミノ酸は脱プロトン化され、これらの酸性残基で負電荷を生じる。
【００９５】
いくつかの一般に使用されるポリカチオン溶液のｐＩは、以前に計算されている。例えば、ポリリジンのｐＩは約１１であり、ポリアルギニンのｐＩは約１０．９であり、プロタミンのｐＩは約１０であり、ＭＢＰのｐＩは約１１である。これらのおよびその他のポリカチオンの高いｐＩおよび正電荷のおかげで、これらのカチオン性重合体が、負電荷を持つ抗体またはＦｃ融合分子を溶液中で安定化させるのに有用なものとなっている。
【００９６】
１つの実施形態において、抗体またはＦｃ融合分子溶液中のポリカチオンの濃度は、約０．１％から約１０％重量／重量（ｗ／ｗ）である。１つの実施形態において、ポリカチオンは、約１％から約５％ｗ／ｗ、約２％から約４％ｗ／ｗまたは約３％ｗ／ｗである。関連する実施形態において、溶液中の抗体またはＦｃ融合分子は、約１ｍｇ／ｍｌから約１５０ｍｇ／ｍｌの濃度であり得る。別の実施形態において、製剤中の抗体またはＦｃ融合分子の濃度は、約１ｍｇ／ｍｌ、約２．５ｍｇ／ｍｌ、約５ｍｇ／ｍｌ、約１０ｍｇ／ｍｌ、約２０ｍｇ／ｍｌ、約３０ｍｇ／ｍｌ、約４０ｍｇ／ｍｌ、約５０ｍｇ／ｍｌ、約６０ｍｇ／ｍｌ、約７０ｍｇ／ｍｌ、約８０ｍｇ／ｍｌ、約９０ｍｇ／ｍｌ、約１００ｍｇ／ｍｌ、約１１０ｍｇ／ｍｌ、約１２０ｍｇ／ｍｌ、約１２５ｍｇ／ｍｌ、約１３０ｍｇ／ｍｌ、約１４０ｍｇ／ｍｌ、または約１５０ｍｇ／ｍｌであり得る。
【００９７】
別の態様において、ポリカチオン／抗体またはＦｃ融合分子の組成物を、組成物中のポリカチオン対抗体またはＦｃ融合分子の比に基づいて製剤化してもよい。例えば、製剤を、約２：１のポリカチオン対抗体もしくはＦｃ融合分子、約１：１のポリカチオン対抗体もしくはＦｃ融合分子、または１：１未満の比率のポリカチオン対抗体もしくはＦｃ融合分子というモル比で作製してもよい。この比率は、抗体もしくはＦｃ融合分子中の負電荷を持つアミノ酸残基の数、ならびに／または製剤中のポリカチオンのカチオン性電荷の大きさおよび数に依存し得る。１つの例において、抗体は、定常領域中に負電荷を持つアミノ酸残基を示し得る。抗体は二量体分子であるので、抗体の各鎖は負電荷の残基を発現しており、そのようにして、電荷を持つ残基の数は、抗体の単鎖についての数の２倍となる。それゆえに、抗体構造中の負電荷の残基を中和するのに、２：１の比率のポリカチオン：抗体が必要となり得る。しかしながら、負電荷を持つ残基または領域に結合するための複数の部位を有する、より大きいポリカチオンを使用する場合、２：１未満の比率の、または１：１よりもさらに小さい比率のポリカチオン：抗体を製剤に使用し得る。
【００９８】
薬学的組成物の製剤化
記載された方法において、本発明の化合物のみを投与することが可能であり得るが、投与される化合物は通常、従来の薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的に許容される組成物のような、所望の投薬単位製剤中の活性成分として存在する。したがって、本発明の別の態様において、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体と組み合わせた、本発明の抗体組成物およびポリカチオン組成物、または本発明のＦｃ融合分子およびポリカチオン組成物を含む薬学的組成物が提供される。語句「薬学的にまたは薬理学的に許容される」は、下記のような、当技術分野において周知の経路を用いて投与した時に、アレルギー反応、またはその他の有害反応をもたらさない分子実体および組成物を指す。許容される薬学的賦形剤としては、通常、本明細書に記載されたような希釈剤、担体、アジュバントなどが挙げられる。
【００９９】
さらに、化合物は、水または一般的な有機溶媒とともに溶媒和物を形成してもよい。そのような溶媒和物も同様に企図される。
【０１００】
本発明の薬学的組成物は、有効量の本発明の抗体もしくはＦｃ融合分子の製剤または有効投薬量の本発明の抗体もしくはＦｃ融合分子の製剤を含んでもよい。有効投薬量の本発明の抗体製剤は、有効量の化合物よりも少ない量か、それと等しい量か、またはそれを上回る量を含む。例えば、有効量の抗体もしくはＦｃ融合体の製剤を投与するのに、錠剤、カプセルなどのような、２つ以上の単位投薬量が必要とされる薬学的組成物、またはその代わりに、有効量の化合物を組成物の一部を投与することによって投与し得る、粉末、液体などのような、複数用量の薬学的組成物。「単位投薬量」は、好適な担体に分散された治療的組成物の離散量と定義される。当業者は、優れた医療行為および個々の患者の臨床状態によって決定されるように、有効投薬量および投薬レジメンを容易に最適化するであろう。
【０１０１】
本発明の薬学的組成物は、非経口、皮下、腹腔内、肺内、および鼻腔内を含む、任意の投与の経路用に、ならびに所望であれば、局部治療、病変内投与用に製剤化される。非経口注入としては、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、または皮下の投与が挙げられる。さらに、組成物は、特に減少用量の治療的抗体またはＦｃ融合分子を用いたパルス注入によって好適に投与される。投与が短期のものかまたは長期のものかに一部依存して、好ましくは、注射によって、最も好ましくは、静脈内または皮下の注射によって投薬される。局所、特に、経皮、経粘膜、直腸、経口の投与、または例えば、所望の部位の近くに置かれたカテーテルを通じた局部投与を含む、その他の投与法が企図される。注射、特に静脈内注射、が好ましい。
【０１０２】
本発明の抗体組成物またはＦｃ融合分子を有効性分として含む本発明の薬学的組成物は、投与の経路に応じて、薬学的に許容される賦形剤または希釈剤を含んでもよい。そのような賦形剤の例としては、水、薬学的に許容される有機溶媒、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニル重合体、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアガム、カゼイン、ゼラチン、寒天、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコール、ベンジルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、薬学的に許容されるサーファクタントなどが挙げられる。使用する賦形剤および希釈剤は、上記のものまたはその組み合わせから、しかしこれらに限定されることなく、適宜、本発明の投薬形態に応じて選定される。
【０１０３】
薬学的組成物の剤形は、選択される投与の経路によって様々に変わる（例えば、溶液、乳濁液）。投与されるべき抗体を含む適当な組成物を、生理学的に許容されるビヒクルまたは担体中に調製することができる。溶液または懸濁液のための、好適な担体としては、例えば、生理食塩水および緩衝化媒体を含む、水性またはアルコール性／水性の溶液、乳濁液、または懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ ｄｅｘｔｒｏｓｅ）、デキストロースと塩化ナトリウム、乳酸化リンガーデキストロース、または不揮発性油を挙げることができる。静脈内ビヒクルは、様々な添加剤、防腐剤、または体液、栄養、もしくは電解質の補給剤を含むことができる。
【０１０４】
様々な水性担体、例えば、滅菌リン酸緩衝生理食塩水溶液、静菌水、水、緩衝水、０．４％生理食塩水、０．３％グリシンなどは、穏やかな化学的修飾などに供された、アルブミン、リポタンパク質、グロブリンなどのような、安定性を強化するためのその他のタンパク質を含んでもよい。
【０１０５】
一般に、薬学的組成物を、本発明の１つ以上の抗体／ポリカチオン組成物またはＦｃ融合分子／ポリカチオン組成物を１つ以上の薬学的に許容される賦形剤、担体、結合剤、アジュバント、希釈剤、防腐剤、溶解剤、乳化剤などと混合することによって調製し、様々な疾患を治療または改善するための所望の投与可能製剤を形成させてもよい（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ編（１９８０））。そのような組成物は、様々な緩衝剤内容物（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨ、およびイオン強度の希釈剤；界面活性剤および可溶化剤などの添加剤（例えば、ポリソルベート８０とも呼ばれるＴｗｅｅｎ ８０、ポリソルベート２０とも呼ばれるＴｗｅｅｎ ２０）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えば、チメルソル（Ｔｈｉｍｅｒｓｏｌ）、ベンジルアルコール）、および増量物質（例えば、マンニトール、スクロース）；ポリ乳酸、ポリグリコール酸などのような重合体化合物の微粒子調製物中に、またはリポソーム中に材料を組み入れることを含む。また、ヒアルロン酸を使用してもよく、これは血液循環中の持続期間の維持を促進する効果を有する。そのような組成物は、物理的状態、安定性、インビボ放出の速度、およびインビボ排除の速度に影響を及ぼし得る。例えば、参照により本明細書に組み入れられるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版（１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １８０４２）１４３５−１７１２ページを参照されたい。組成物は、液体形態で調製されてもよく、または凍結乾燥形態などの、乾燥粉末であってもよい。経皮製剤と同様に、移植可能な持続放出製剤も企図される。
【０１０６】
企図される追加の緩衝剤としては、リン酸塩、クエン酸塩、およびその他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；グリシン、グルタミン、アスパラギン、グルタミン酸、プロリン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；アラニン−ロイシンなどの短いペプチド；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含むその他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎタンパク質錯体）；ならびに／またはＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性サーファクタントが挙げられる。
【０１０７】
また、本明細書中の製剤は、治療される特定の徴候に対する必要に応じて、２つ以上の活性化合物、好ましくは互いに有害な影響を及ぼさない補完的な活性を有する活性化合物を含んでもよい。そのような分子は、意図される目的のために効果的である量での組み合わせで好適に存在する。
【０１０８】
水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤と混和した活性化合物を含んでもよい。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、およびアカシアガムであり；分散剤または湿潤剤は、天然のホスファチド、例えば、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチル−エネオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分的なエステルとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分的なエステルとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。また、水性懸濁液は、１つ以上の防腐剤、例えば、エチルｐ−ヒドロキシベンゾエート、またはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートを含んでもよい。
【０１０９】
本発明は、抗体、またはＦｃ融合分子、およびポリカチオンを含む凍結乾燥製剤も企図する。凍結乾燥を、当技術分野において一般的な技術を用いて実行し、開発される組成物用に最適化すべきである［Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．２１：１９１−２００，（２００４）およびＣｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．１３：２４３−９（１９９６）］。凍結乾燥製剤は、通常、緩衝剤、増量剤、および安定化剤から構成される。タンパク質を凍結乾燥する方法は、当技術分野において記載されている。例えば、米国特許第６，０２０，４６９号および米国特許公開ＵＳ２００７００５３８７１を参照されたい。
【０１１０】
１つの態様において、凍結乾燥サイクルは、３つの工程、すなわち、凍結、一次乾燥、および二次乾燥から構成される［Ａ．Ｐ．Ｍａｃｋｅｎｚｉｅ，Ｐｈｉｌ Ｔｒａｎｓ Ｒ Ｓｏｃ Ｌｏｎｄｏｎ，Ｓｅｒ Ｂ，Ｂｉｏｌ ２７８：１６７（１９７７）］。凍結工程では、溶液を冷却して、氷の形成を開始させる。さらに、この工程は、増量剤の結晶化を誘導する。氷は、一次乾燥段階で昇華する。この段階は、真空を用いて、室圧を氷の蒸気圧よりも下に低下させ、熱を導入して昇華を促進させることによって行なわれる。最後に、吸着または結合した水を、二次乾燥段階で、低下した室圧下、上昇した棚温度で除去する。この過程は、凍結乾燥ケーキとして知られる材料を生じさせる。その後、このケーキを、滅菌水かまたは注射用の好適な希釈剤のいずれかで再構成することができる。
【０１１１】
凍結乾燥サイクルは、賦形剤の最終的な物理的状態を決定するだけでなく、再構成時間、外観、安定性、および最終的な水分含有量などのその他のパラメータにも影響を及ぼす。凍った状態での組成物構造は、特定の温度で生じるいくつかの転移（例えば、ガラス転移および結晶化）を経るので、凍結乾燥過程を理解し、最適化するために利用することができる。ガラス転移温度（Ｔｇ）は、溶質の物理的状態に関する情報を提供することができ、示差走査熱量法（ＤＳＣ）によって決定することができる。これは、凍結乾燥サイクルを設計するときに考慮に入れなければならない重要なパラメータである。さらに、乾燥状態で、ガラス転移温度は、最終産物の保存温度に関する情報を提供する。
【０１１２】
本組成物の特定の実施形態において、安定化剤を凍結乾燥製剤に添加し、凍結乾燥によって誘導されるかまたは保存によって誘導される凝集または化学的分解を防止するかまたは低下させる。再構成時に透明でないかまたは濁っている溶液は、タンパク質が沈殿していることを示す。用語「安定化剤」は、水性および固体の状態で、凝集またはその他の物理的分解、および化学的分解（例えば、自己分解、脱アミド、酸化など）を防止することができる賦形剤を意味する。安定化剤には、凍結防止剤、凍結乾燥防止剤（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、およびガラス形成剤として役立つことができる化合物群が含まれる。凍結防止剤は、凍結の間または低温、凍結状態でタンパク質を安定化するように作用する（Ｐ．Ｃａｍｅｒｏｎ，編，Ｇｏｏｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｆｒｅｅｚｅ−Ｄｒｙｉｎｇ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｆｆａｌｏ Ｇｒｏｖｅ，ＩＬ，（１９９７））。凍結乾燥防止剤は、フリーズドライの脱水段階の間にタンパク質のネイティブ様の立体構造特性を保存することによって、フリーズドライされた固体投薬形態でタンパク質を安定化させる。ガラス状態特性は、温度の関数としてのそれらの緩和特性に応じて「強い」または「脆い」と分類されている。凍結防止剤、凍結乾燥防止剤、およびガラス形成剤が、安定性を与えるために、タンパク質と共に同じ相に留まるということが重要である。糖、重合体、およびポリオールは、この範疇に収まり、時として３つの役割の全てを果たすことができる。
【０１１３】
スクロース、トレハロース、またはグリシンを含むが、これらに限定されない、薬学的組成物に従来利用されている安定化剤を使用してもよい［Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ ７４：２２５，（１９９１）］。また、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ ２０）またはポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）などの、サーファクタント安定化剤を、適当な量で添加し、凍結および乾燥の間の表面関連凝集現象を防止してもよい［Ｃｈａｎｇ，Ｂ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８５：１３２５，（１９９６）］。所望であれば、凍結乾燥組成物は、凍結乾燥「ケーキ」を形成させるのに好適な適当な量の増量剤および浸透圧調製剤も含む。増量剤は、結晶（例えば、マンニトール、グリシン）または非結晶（例えば、スクロース、重合体（例えば、デキストラン）、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース）のいずれかであってもよい。１つの実施形態において、増量剤はマンニトールである。さらなる実施形態において、マンニトールは、約２％から約５％ｗ／ｖの濃度で、またさらなる実施形態において、約３％から約４．５％ｗ／ｖの濃度で組み入れられて、機械的かつ薬学的に安定でかつ上品なケーキを生じさせる。別の実施形態において、マンニトール濃度は、２％ｗ／ｖである。
【０１１４】
薬学的に許容される緩衝剤およびｐＨの選定も、本組成物の安定性に影響を及ぼすことが分かっている。組成物中に存在する緩衝剤系は、生理学的に適合するようかつ再構成された溶液中、および凍結乾燥前の溶液中で所望のｐＨを維持するよう選択される。１つの態様において、緩衝剤は、約ｐＨ６．０から約ｐＨ８．０の範囲のｐＨ緩衝能を有する。最も安定な製剤化条件を選択するために、典型的には、上述のパラメータを組み入れた一連のスクリーニング研究が実施される。
【０１１５】
また、本明細書に記載された凍結乾燥法は、以下の工程、すなわち、凍結乾燥前に安定化剤を抗体またはＦｃ融合分子／ポリカチオン混合物に添加する工程、凍結乾燥前に増量剤および浸透圧調製剤より選択される少なくとも１つの薬剤、ならびにサーファクタントを該抗体またはＦｃ融合分子／ポリカチオン混合物に添加する工程のうちの１つ以上を含んでもよい。増量剤は、上に示される任意の増量剤であってもよい。１つの実施形態において、増量剤はマンニトールである。糖は、上に示される任意の安定化糖であってもよい。１つの実施形態において、安定化剤はスクロースである。サーファクタントは、上に示される任意のサーファクタントであってもよい。１つの実施形態において、サーファクタントは、ポリソルベート２０である。
【０１１６】
凍結乾燥材料のための標準的な再構成の実施は、一定量の純水または滅菌注射用水（ＷＦＩ）（典型的には、凍結乾燥の間に除去される容量に等しい）を添加して戻すことであるが、時として、抗菌剤の希釈溶液を非経口投与用の医薬品の産生で使用する［Ｃｈｅｎ，Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１８：１３１１−１３５４（１９９２）］。
【０１１７】
様々な水性担体、例えば、滅菌注射用水、複数用量使用のための防腐剤を含む水、もしくは適当な量のサーファクタント（例えば、ポリソルベート２０）を含む水、０．４％生理食塩水、０．３％グリシン、または水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に好適な賦形剤と混和した活性化合物を含んでもよい。そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントガム、およびアカシアガムであり、分散剤または湿潤剤は、天然のホスファチド、例えば、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカエチル−エネオキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールに由来する部分的なエステルとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール無水物に由来する部分的なエステルとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。水性懸濁液は、１つ以上の防腐剤、例えば、エチルｐ−ヒドロキシベンゾエート、またはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエートを含んでもよい。
【０１１８】
本発明は、抗体またはＦｃ融合分子および１つ以上のポリカチオンを含む、自己緩衝製剤である抗体またはＦｃ融合分子の製剤をさらに提供する。緩衝とは、酸または塩基の添加による組成物のｐＨの変化に対する抵抗性を指す。したがって、緩衝能はしばしば、組成物がｐＨ変化に抵抗する能力と定義される。自己緩衝製剤とは、追加の緩衝剤なしで、製剤を所望のｐＨ範囲内に維持するのに十分な緩衝能を有する、抗体またはＦｃ融合分子を含む製剤を指す。（参照により本明細書に組み入れられる）国際特許公開ＷＯ２００６／１３８１８１は、自己緩衝製剤を作製する方法を記載している。
【０１１９】
キット
追加の態様として、本発明は、キットを使用しやすくする形で包装された１つ以上の抗体またはＦｃ融合分子の製剤または組成物を含むキットを含む。１つの実施形態において、そのようなキットは、容器に貼付けられているかまたは包装に含まれている、化合物もしくは組成物の使用を説明するラベルが付された、密封された瓶または器（例えば、バイアルまたはｉ．ｖ．バッグ）などの容器に包装された、本明細書に記載された抗体またはＦｃ融合分子の製剤または組成物（例えば、抗体またはＦｃ融合分子、およびポリカチオンを含む組成物）を含む。ある実施形態において、抗体またはＦｃ融合分子の製剤または組成物を単位投薬量形態で包装する。キットは、特定の投与の経路に従って組成物を投与するのに好適な装置をさらに含む。ある実施形態において、キットは、本発明の抗体またはＦｃ融合分子の製剤または組成物の使用および投与を説明するラベルを含む。
【０１２０】
（実施例）
本発明の追加の態様および詳細は、限定的ではなく、例示的であることが意図される、以下の実施例から明白であろう。
【実施例１】
【０１２１】
保存用に製剤化された抗体溶液は、しばしば、長時間経つと分解し、凝集およびさらなるより小さい分解産物を生じる。抗体定常領域のアミノ酸配列、特にアスパラギン酸残基のストレッチを含む配列は、極性電荷を典型的に有する。この溶液をさらに安定化し、保存の間の抗体凝集を防止するために、異なる安定化溶液を抗体製剤に添加し、凝集および分解の程度を評価した。
【０１２２】
６．４の計算ｐＩを有する、ＣＤ３０分子に特異的なヒトモノクローナル組み換えＩｇＧ２ａλ抗体の様々な製剤を作製した。この実験で使用されるポリカチオンは、分子量（ＭＷ）平均値３５ｋＤａのポリアルギニン、５つのリジン残基を含むポリリジン、および７０ｋＤａを上回るＭＷのポリアルギニンであった。７０ｍｇ／ｍｌ ＩｇＧストック溶液のストック溶液を、１０ｍＭ Ｋ２ＰＯ４、１６１ｍＭアルギニン、０．００４％ Ｔｗｅｅｎ、ｐＨ７．６を含むＫ７．６ＲＴ緩衝液に希釈することによって、製剤溶液を調製した。また、このストック溶液をＡ５．２Ｓｕ緩衝液（酢酸緩衝液（ｐＨ５．２）＋スクロース）に７倍希釈し、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、９％スクロース、３％ポリカチオン、ｐＨ５．２を含む１０ｍｇ／ｍｌ ＩｇＧ溶液にした。このポリカチオン溶液の最終的なｐＨ値は、ｐＨ５．５から６．０でほぼ同じであった。結果を表１に示す。
【０１２３】
【表３】
【０１２４】
酢酸塩およびスクロースを含む抗体製剤（ｐＨ５．５から６．０）は曇りがあって、粘性があったが、３％ｗ／ｗの濃度のポリカチオンを添加することによって、曇りがあって、粘性がある状態の形成が妨げられ、抗体溶液が透明なままで残った。溶液中での抗体の安定性を検査する、抗体溶液の逆相クロマトグラフィーにより、抗体が、ポリカチオンの存在下で溶けた状態にあることが示されている。
【実施例２】
【０１２５】
多くの抗体定常領域は、溶液中の抗体に全体的または局部的のいずれかの負電荷を付与することができる酸性アミノ酸残基を含む。この負電荷の効果を最小限に抑えるために、負電荷を持つ抗体に対するポリカチオン溶液の効果を評価した。
【０１２６】
８．９の計算ｐＩを有し、かつ３つの隣接するアスパラギン酸残基（ＤＤＤ）を可変領域に含む、アミロイドタンパク質に特異的な組み換えヒトモノクローナルＩｇＧ１κ抗体を様々なポリカチオン溶液中に製剤化した。抗アミロイド抗体を作製する方法、およびその構造は、国際公報ＷＯ２００６／０８１１７１に記載されている（ＷＯ２００６／０８１１７１中の配列番号１１）。
【０１２７】
抗体を、対照溶液（２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．９）中に１００ｍｇ／ｍｌを含む）またはポリカチオン溶液（２０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ５．０）、０．００５％ Ｔｗｅｅｎ、および１０ｍｇ／ｍｌ ２２Ｋポリリジンもしくは１０ｍｇ／ｍｌ ８３Ｋポリリジン中に１００ｍｇ／ｍｌ抗体を含む）に希釈し、５２で６週間保存した。凝集体および二量体の相対存在量をサイズ排除クロマトグラフィーで測定した。
【０１２８】
抗体は、ｐＨ６．９の製剤中で長期間保存した後、二量体および凝集体を生成した。サイズ排除クロマトグラフィーにより、単一リジン残基のみを含む溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）は、抗体凝集を低下させることができず、実際に、対照溶液と比べて形成される凝集体の量を増大させるということが示されている。しかしながら、これらの条件下で形成された二量体および凝集体は、２２Ｋまたは８３Ｋポリリジンを含む製剤中では顕著に低下した（図１）。
【０１２９】
上記の実験は、モノクローナル抗体の製剤にポリカチオンを添加することによって、製剤化された抗体の溶解性および／または安定性が向上するということを示している。本発明のポリカチオン製剤は、７．４未満のｐＩを有する抗体ならびに密接して配置された酸性アミノ酸残基（アスパラギン酸およびグルタミン酸）を有する抗体の溶解性および／または安定性を増大させるのに有効であることが分かった。
【実施例３】
【０１３０】
実施例１に記載された抗ＣＤ３０ ＩｇＧ２ａ抗体が、異なる濃度のポリカチオン組成物に溶けるかどうかを明らかにするために、様々なポリカチオン濃度にわたって抗体が溶解する能力を解析した。
【０１３１】
試料抗体を１０ｍＭリン酸カリウム、１６１ｍＭアルギニン、０．００４％ Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．６中に７２ｍｇ／ｍＬで製剤化し、分子量分布１５，０００から３０，０００Ｄａの増加する量のポリリジンを含む３０ｍＭ酢酸ナトリウム、５％ソルビトール、ｐＨ５．０中に１０．３ｍｇ／ｍＬまで希釈した。ポリリジンを全く添加していないｐＨ５の抗体の溶液は濁っていた。０．０８％ポリリジン程度の低いポリカチオン濃度を有する製剤は、抗体製剤の濁度の減少を示した。溶液の濁度は、ポリリジンの濃度を増大させるにつれて減少した。０．５％以上のポリリジンを含む抗体溶液は、完全に透明であった。
【０１３２】
また、ペンタリジン（５つのリジン残基を含む）ポリカチオンを用いて、製剤を作製した。結果は、ペンタリジン（０．６５ＫＤａ）を使用すると、有効であるために、より高いポリリジン濃度が必要になるということを示した。１．２８％ポリリジンを含む溶液は濁っていたが、２．５７％ポリリジン（ペンタリジン）溶液は完全に透明であった。
【０１３３】
ペプチボディの安定性に対するポリカチオンの効果も解析した。５．４のｐＩを有するペプチボディ（２ＸＣｏｎ４Ｃ、抗アンジオポエチン２／１ペプチボディ（アミノ酸配列：ＭＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫＧＧＧＧＧＡＱＱＥＥＣＥＷＤＰＷＴＣＥＨＭＧＳＧＳＡＴＧＧＳＧＳＴＡＳＳＧＳＧＳＡＴＨＱＥＥＣＥＷＤＰＷＴＣＥＨＭＬＥ））（Ｏｌｉｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，５０７−５１６，２００４）を、１０ｍＭリン酸カリウム、１６１ｍＭアルギニン、０．００４％Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．６中に２７ｍｇ／ｍＬで製剤化し、分子量分布１５，０００から３０，０００Ｄａの増加する量のポリリジンを含む３０ｍＭ酢酸ナトリウム、５％ソルビトール、ｐＨ５．０中に３．８６ｍｇ／ｍＬまで希釈した。ポリリジンを全く添加していない、ｐＨ５のペプチボディの溶液は濁っていた。０．０８％以上のポリリジンを含むペプチボディ溶液は、完全に透明であった。
【０１３４】
ペプチボディをペンタリジンと共に製剤化したとき、同様の結果が得られた。０．０８％ペンタリジンを含む溶液は、完全に透明であった。
【０１３５】
単量体アミノ酸リジンは、低いｐＩを有するＩｇＧ２抗体を溶解させるのに効果を示したが、溶液から濁りを消し去るのに２％のリジンを必要とした。また、実施例２に示されるように、および以前に報告されているように、リジンまたはアルギニンという単一アミノ酸のみを含む組成物は、抗体を不安定化して凝集の加速をもたらし、一方、ポリリジンおよびポリアルギニンは、抗体凝集を減少させる。
【０１３６】
以下の提案される作用の機序に束縛されることを望まないが、これらの実験で見られたポリカチオンの効果についてのあり得る説明は、それらが抗体の負電荷を持つポケットに結合することで、抗体の正味の正電荷を増大させ、抗体の実効ｐＩを増大させ、それによって分子間相互作用を低下させるということであろう。これらの効果は、所与のｐＨでの抗体溶解性の増大、およびある条件下での凝集の速度の減少をもたらし得る。また、これらの領域へのポリカチオンの結合は、この領域の抗体構造の柔軟性を低下させ得、この誘導された剛性が、凝集、アスパラギン酸異性化、酸化、および脱アミドなどの分解に逆らってさらに安定化し得る。これらの効果は、低いｐＩの抗体および連続するアスパラギン酸（ＤＤ）またはグルタミン酸（ＥＥ）残基を含む抗体の場合により顕著であり得るものの、ポリカチオンがこれらの特徴の範囲外の抗体を安定化する可能性があり得る。
【０１３７】
上記の例示的な実施例に示される本発明において、多くの修正および変形が当業者に思いつかれると思われる。したがって、付随する特許請求の範囲に見られるような限定のみが本発明に載せられるべきである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗体製剤を作製する方法であって、抗体をポリカチオンと組み合わせる工程を含む方法。
【請求項２】
Ｆｃ融合分子製剤を作製する方法であって、Ｆｃ融合分子をポリカチオンと組み合わせる工程を含む方法。
【請求項３】
ペプチボディ製剤を作製する方法であって、ペプチボディをポリカチオンと組み合わせる工程を含む方法。
【請求項４】
ポリカチオンが、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ポリヒスチジン、およびカチオン性多糖類、またはその混合物からなる群より選択される、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項５】
ポリカチオンが、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ポリヒスチジン、およびカチオン性多糖類からなる群より選択されるポリカチオンのうちの少なくとも２つから構成される、請求項４の方法。
【請求項６】
ポリカチオンが、ポリリジン、もしくはポリアルギニン、またはその共重合体から構成される、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項７】
ポリカチオンが、カチオン性単量体および中性単量体の反復単位を含む重合体である、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項８】
ポリカチオンが、単量体式Ａ−Ｂ−Ｘ−Ｙ（式中、ＡおよびＸはカチオン性単量体であり、ＢおよびＹは中性単量体である。）を有する、請求項７の方法。
【請求項９】
ＡおよびＸが同じカチオン性単量体である、請求項８の方法。
【請求項１０】
ＡおよびＸが異なるカチオン性単量体である、請求項８の方法。
【請求項１１】
ＢおよびＹが同じ中性単量体である、請求項８の方法。
【請求項１２】
ＢおよびＹが異なる中性単量体である、請求項８の方法。
【請求項１３】
単量体の１つ以上がアミノ酸残基である、請求項９から１２のいずれか一項の方法。
【請求項１４】
中性単量体が、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、およびプロリンからなる群より選択される、請求項８の方法。
【請求項１５】
ポリカチオンがリジン−グリシン残基の反復単位を含む、請求項７の方法。
【請求項１６】
抗体製剤が治療的抗体を含む、請求項１の方法。
【請求項１７】
Ｆｃ融合分子製剤が治療的Ｆｃ融合分子を含む、請求項２の方法。
【請求項１８】
前記治療的抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４抗体からなる群より選択されるＩｇＧ抗体である、請求項１６の方法。
【請求項１９】
前記組成物中のポリカチオンが、約０．２ｋＤａから約７０ｋＤａの分子量を有する、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項２０】
前記抗体製剤中の抗体が７．５以下のｐＩを有する、請求項１の方法。
【請求項２１】
前記抗体製剤中の抗体がＩｇＧ２抗体である、請求項２０の方法。
【請求項２２】
前記抗体製剤中の抗体が約６．４の計算ｐＩを有する、請求項２１の方法。
【請求項２３】
ポリカチオンが、最終製剤中に０．１％から１０％ｗ／ｗポリカチオンの最終濃度まで添加される、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項２４】
製剤が、前記ポリカチオン組成物と組み合わせたときに、ポリカチオンの非存在下での前記抗体製剤の溶解性と比較して、より大きい溶解性を有する、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項２５】
製剤が、ポリカチオン組成物と組み合わせていない抗体製剤と比較して、増大した貯蔵寿命を有する、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項２６】
前記製剤が、ポリカチオン組成物と組み合わせていない同様の製剤よりも少なくとも２５％長い貯蔵寿命を有する、請求項２５の方法。
【請求項２７】
前記製剤における前記ポリカチオンの存在が、ポリカチオン組成物と組み合わせていない製剤と比較して、前記製剤における二量体または凝集体の形成を低下させる、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項２８】
方法が、約０．１％から約１０％ｗ／ｗポリカチオンを含む治療的抗体製剤の組成物をもたらす、請求項１の方法。
【請求項２９】
前記ポリカチオン組成物のｐＨが約４．５から約７．５である、請求項１から２８のいずれか一項の方法。
【請求項３０】
前記ポリカチオン組成物のｐＨが約５．０から約６．５である、請求項１から２８のいずれか一項の方法。
【請求項３１】
前記ポリカチオン組成物のｐＨが約５．５から約６．０である、請求項１から２８のいずれか一項の方法。
【請求項３２】
治療的抗体、ポリカチオン、および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項３３】
７．５以下のｐＩを有する治療的抗体ならびにポリリジンおよびポリアルギニンからなる群より選択されるポリカチオンを含む薬学的組成物。
【請求項３４】
少なくとも２つの連続する酸性アミノ酸残基を含むＣＤＲドメインを有する治療的抗体ならびにポリリジンおよびポリアルギニンからなる群より選択されるポリカチオンを含む薬学的組成物。
【請求項３５】
前記酸性アミノ酸が、アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）からなる群より選択される、請求項３４の薬学的組成物。
【請求項３６】
Ｆｃ融合分子、ポリカチオン、および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項３７】
ペプチボディ、ポリカチオン、および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項３８】
Ａｎｇ２に結合するペプチボディ、ポリカチオン、および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項３９】
ポリカチオンが、ポリリジンおよびポリアルギニンからなる群より選択される、請求項３６から３８のいずれか一項の組成物。
【請求項４０】
組成物が、ポリカチオンの非存在下の薬学的組成物と比較して、増大した貯蔵寿命を有する、請求項３２から３９のいずれか一項の薬学的組成物。
【請求項４１】
組成物が、ポリカチオンの非存在下の組成物よりも大きい水への溶解性を有する、請求項３２から３９のいずれか一項の薬学的組成物。
【請求項４２】
薬学的組成物の二量体化および／または凝集体形成が、ポリカチオンの非存在下の薬学的組成物と比較して低下している、請求項３２から４０のいずれか一項の薬学的組成物。
【請求項１】
抗体製剤を作製する方法であって、抗体をポリカチオンと組み合わせる工程を含む方法。
【請求項２】
Ｆｃ融合分子製剤を作製する方法であって、Ｆｃ融合分子をポリカチオンと組み合わせる工程を含む方法。
【請求項３】
ペプチボディ製剤を作製する方法であって、ペプチボディをポリカチオンと組み合わせる工程を含む方法。
【請求項４】
ポリカチオンが、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ポリヒスチジン、およびカチオン性多糖類、またはその混合物からなる群より選択される、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項５】
ポリカチオンが、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、ポリヒスチジン、およびカチオン性多糖類からなる群より選択されるポリカチオンのうちの少なくとも２つから構成される、請求項４の方法。
【請求項６】
ポリカチオンが、ポリリジン、もしくはポリアルギニン、またはその共重合体から構成される、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項７】
ポリカチオンが、カチオン性単量体および中性単量体の反復単位を含む重合体である、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項８】
ポリカチオンが、単量体式Ａ−Ｂ−Ｘ−Ｙ（式中、ＡおよびＸはカチオン性単量体であり、ＢおよびＹは中性単量体である。）を有する、請求項７の方法。
【請求項９】
ＡおよびＸが同じカチオン性単量体である、請求項８の方法。
【請求項１０】
ＡおよびＸが異なるカチオン性単量体である、請求項８の方法。
【請求項１１】
ＢおよびＹが同じ中性単量体である、請求項８の方法。
【請求項１２】
ＢおよびＹが異なる中性単量体である、請求項８の方法。
【請求項１３】
単量体の１つ以上がアミノ酸残基である、請求項９から１２のいずれか一項の方法。
【請求項１４】
中性単量体が、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、およびプロリンからなる群より選択される、請求項８の方法。
【請求項１５】
ポリカチオンがリジン−グリシン残基の反復単位を含む、請求項７の方法。
【請求項１６】
抗体製剤が治療的抗体を含む、請求項１の方法。
【請求項１７】
Ｆｃ融合分子製剤が治療的Ｆｃ融合分子を含む、請求項２の方法。
【請求項１８】
前記治療的抗体が、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４抗体からなる群より選択されるＩｇＧ抗体である、請求項１６の方法。
【請求項１９】
前記組成物中のポリカチオンが、約０．２ｋＤａから約７０ｋＤａの分子量を有する、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項２０】
前記抗体製剤中の抗体が７．５以下のｐＩを有する、請求項１の方法。
【請求項２１】
前記抗体製剤中の抗体がＩｇＧ２抗体である、請求項２０の方法。
【請求項２２】
前記抗体製剤中の抗体が約６．４の計算ｐＩを有する、請求項２１の方法。
【請求項２３】
ポリカチオンが、最終製剤中に０．１％から１０％ｗ／ｗポリカチオンの最終濃度まで添加される、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項２４】
製剤が、前記ポリカチオン組成物と組み合わせたときに、ポリカチオンの非存在下での前記抗体製剤の溶解性と比較して、より大きい溶解性を有する、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項２５】
製剤が、ポリカチオン組成物と組み合わせていない抗体製剤と比較して、増大した貯蔵寿命を有する、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項２６】
前記製剤が、ポリカチオン組成物と組み合わせていない同様の製剤よりも少なくとも２５％長い貯蔵寿命を有する、請求項２５の方法。
【請求項２７】
前記製剤における前記ポリカチオンの存在が、ポリカチオン組成物と組み合わせていない製剤と比較して、前記製剤における二量体または凝集体の形成を低下させる、請求項１から３のいずれか一項の方法。
【請求項２８】
方法が、約０．１％から約１０％ｗ／ｗポリカチオンを含む治療的抗体製剤の組成物をもたらす、請求項１の方法。
【請求項２９】
前記ポリカチオン組成物のｐＨが約４．５から約７．５である、請求項１から２８のいずれか一項の方法。
【請求項３０】
前記ポリカチオン組成物のｐＨが約５．０から約６．５である、請求項１から２８のいずれか一項の方法。
【請求項３１】
前記ポリカチオン組成物のｐＨが約５．５から約６．０である、請求項１から２８のいずれか一項の方法。
【請求項３２】
治療的抗体、ポリカチオン、および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項３３】
７．５以下のｐＩを有する治療的抗体ならびにポリリジンおよびポリアルギニンからなる群より選択されるポリカチオンを含む薬学的組成物。
【請求項３４】
少なくとも２つの連続する酸性アミノ酸残基を含むＣＤＲドメインを有する治療的抗体ならびにポリリジンおよびポリアルギニンからなる群より選択されるポリカチオンを含む薬学的組成物。
【請求項３５】
前記酸性アミノ酸が、アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）からなる群より選択される、請求項３４の薬学的組成物。
【請求項３６】
Ｆｃ融合分子、ポリカチオン、および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項３７】
ペプチボディ、ポリカチオン、および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項３８】
Ａｎｇ２に結合するペプチボディ、ポリカチオン、および薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物。
【請求項３９】
ポリカチオンが、ポリリジンおよびポリアルギニンからなる群より選択される、請求項３６から３８のいずれか一項の組成物。
【請求項４０】
組成物が、ポリカチオンの非存在下の薬学的組成物と比較して、増大した貯蔵寿命を有する、請求項３２から３９のいずれか一項の薬学的組成物。
【請求項４１】
組成物が、ポリカチオンの非存在下の組成物よりも大きい水への溶解性を有する、請求項３２から３９のいずれか一項の薬学的組成物。
【請求項４２】
薬学的組成物の二量体化および／または凝集体形成が、ポリカチオンの非存在下の薬学的組成物と比較して低下している、請求項３２から４０のいずれか一項の薬学的組成物。
【図１】
【公表番号】特表２０１０−５３６７８６（Ｐ２０１０−５３６７８６Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２１１９０（Ｐ２０１０−５２１１９０）
【出願日】平成２０年８月１５日（２００８．８．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７３２５０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０２６１２２
【国際公開日】平成２１年２月２６日（２００９．２．２６）
【出願人】（５０００４９７１６）アムジエン・インコーポレーテツド (242)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年８月１５日（２００８．８．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７３２５０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０２６１２２
【国際公開日】平成２１年２月２６日（２００９．２．２６）
【出願人】（５０００４９７１６）アムジエン・インコーポレーテツド (242)
【Ｆターム（参考）】
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