本発明は、β-グルコシダーゼ活性を有する単離されたポリペプチドおよび前記ポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドに関する。また、本発明は、前記ポリヌクレオチドを含んでなる核酸構築物、ベクターおよび宿主細胞ならびに前記ポリペプチドを製造しかつ使用する方法に関する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記から成る群から選択される、β-グルコシダーゼ活性を有する単離されたポリペプチド:
(a) 配列番号2の成熟ポリペプチドと少なくとも70%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド;
(b) 少なくとも中程度のストリンジェンシイ条件下に (i) 配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列、 (ii) 配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列中に含有されるcDNA配列または (iii) 上記(i) または (ii) の相補的鎖とハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチド;
(c) A-E-[ST]-[IV]-[KR]-G-[IM]-Q-[DS]-[ST]-G-V-[IV]-Aを含んでなるポリペプチド; および
(d) 配列番号2の成熟ポリペプチドの1または2以上のアミノ酸の保存的置換、欠失および/または挿入を含んでなる変異型。
【請求項２】
配列番号2の成熟ポリペプチドと少なくとも70%、好ましくは少なくとも75%、より好ましくは少なくとも80%、さらにより好ましくは少なくとも85%、さらにより好ましくは少なくとも90%、最も好ましくは少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含んでなる、請求項1に記載のポリペプチド。
【請求項３】
配列番号2のアミノ酸配列またはβ-グルコシダーゼ活性を有するそのフラグメントを含んでなるか、あるいはから成る、請求項1に記載のポリペプチド。
【請求項４】
配列番号2の成熟ポリペプチドを含んでなるか、あるいはから成る、請求項3に記載のポリペプチド。
【請求項５】
好ましくは少なくとも中程度のストリンジェンシイ条件下に、より好ましくは少なくとも中程度〜高いストリンジェンシイ条件下に、最も好ましくは少なくとも高いストリンジェンシイ条件下に (i) 配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列、 (ii) 配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列中に含有されるcDNA配列または (iii) (i) または (ii) の相補的鎖とハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドによりコードされる、請求項1に記載のポリペプチド。
【請求項６】
成熟ポリペプチドが配列番号2のアミノ酸37〜878である、請求項1〜5のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項７】
成熟ポリペプチドコード配列が配列番号1のヌクレオチド171〜2753である、請求項1〜5のいずれかに記載のポリペプチド。
【請求項８】
ポリペプチドが配列番号2のアミノ酸37〜878の1または2以上のアミノ酸の保存的置換、欠失および/または挿入を含んでなる変異型である、請求項1に記載のポリペプチド。
【請求項９】
大腸菌 (E. coli) NRRL B-30860中に含有されるプラスミドpKKAB中に含有されるポリヌクレオチドによりコードされる、請求項1に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
A-E-[ST]-[IV]-[KR]-G-[IM]-Q-[DS]-[ST]-G-V-[IV]-Aを含んでなる、請求項1に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
請求項1〜10のいずれかに記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１２】
発現宿主におけるポリペプチドの産生を指令する1または2以上の制御配列に作用可能に連鎖された請求項11に記載のポリヌクレオチドを含んでなる核酸構築物。
【請求項１３】
請求項12に記載の核酸構築物を含んでなる組換え発現ベクター。
【請求項１４】
請求項12に記載の核酸構築物を含んでなる組換え宿主。
【請求項１５】
下記の工程を含んでなる、請求項1〜10のいずれかに記載のポリペプチドを製造する方法: (a) その野生型の形態においてポリペプチドを産生することができる細胞を、ポリペプチドの産生を促す条件下に、培養し、そして (b) ポリペプチドを回収する。
【請求項１６】
下記の工程を含んでなる、請求項1〜10のいずれかに記載のポリペプチドを製造する方法: (a) ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含んでなる核酸構築物を含んでなる宿主細胞をポリペプチドの産生を促す条件下に培養し、そして (b) ポリペプチドを回収する。
【請求項１７】
請求項1〜10のいずれかに記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を崩壊または欠失させて、親細胞より少ないポリペプチドを産生する突然変異体を生じさせることを含んでなる、親細胞の突然変異体を産生する方法。
【請求項１８】
請求項17に記載の方法により産生された突然変異体細胞。
【請求項１９】
天然または異種タンパク質をコードする遺伝子をさらに含んでなる、請求項18に記載の突然変異体細胞。
【請求項２０】
下記の工程を含んでなる、タンパク質を産生する方法、 (a) タンパク質の産生を促す条件下に請求項19に記載の突然変異体細胞を培養し、そして (b) タンパク質を回収する。
【請求項２１】
(a) 好ましくは少なくとも中程度のストリンジェンシイ条件下に、より好ましくは少なくとも中程度〜高いストリンジェンシイ条件下に、最も好ましくは少なくとも高いストリンジェンシイ条件下に (i) 配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列、 (ii) 配列番号1の成熟ポリペプチドコード配列中に含有されるcDNA配列または (iii) 上記(i) または (ii) の相補的鎖とDNAの集団をハイブリダイゼーションさせ、そして (b) β-グルコシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードする、ハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドを単離することによって得られた単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２２】
成熟ポリペプチドコード配列が配列番号1のヌクレオチド171〜2753である、請求項21に記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２３】
配列番号1のヌクレオチド171〜2753から成るシグナルペプチドをコードする第1 ヌクレオチド配列および配列番号1のヌクレオチド171〜2753から成るプロペプチドをコードする第2 ヌクレオチド配列の一方または両方に作用可能に連鎖されたタンパク質をコードする遺伝子を含んでなり、ここで前記遺伝子が第1 および第2 のヌクレオチド配列に対して外来である、核酸構築物。
【請求項２４】
請求項23に記載の核酸構築物を含んでなる組換え発現ベクター。
【請求項２５】
請求項23に記載の核酸構築物を含んでなる組換え宿主細胞。
【請求項２６】
下記の工程を含んでなる、タンパク質を産生する方法: (a) タンパク質の産生を促す条件下に請求項25に記載の組換え宿主細胞を培養し、そして (b) タンパク質を回収する。
【請求項２７】
下記の工程を含んでなる、請求項1〜10のいずれかに記載のβ-グルコシダーゼ活性を有するポリペプチドを製造する方法: (a) ポリペプチドの産生を促す条件下にβ-グルコシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んでなるトランスジェニック植物または植物細胞を培養し、そして (b) ポリペプチドを回収する。
【請求項２８】
請求項1〜10のいずれかに記載のβ-グルコシダーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドで形質転換されたトランスジェニック植物、植物部分または植物細胞。
【請求項２９】
請求項1〜10のいずれかに記載のβ-グルコシダーゼ活性を有するポリペプチドと界面活性剤とを含んでなる洗剤組成物。
【請求項３０】
有効量の請求項1〜10のいずれかに記載のβ-グルコシダーゼ活性を有するポリペプチドの存在下に有効量の1種または2種以上のセルロース分解タンパク質でセルロース材料を処理することを含んでなる、セルロース材料を分解または変換する方法。
【請求項３１】
1種または2種以上のセルロース分解酵素がセルラーゼ、エンドグルカナーゼおよびセロビオヒドロラーゼから成る群から選択される、請求項30に記載の方法。
【請求項３２】
ヘミセルラーゼ、エステラーゼ、プロテアーゼ、ラッカーゼ、ペルオキシダーゼまたはそれらの混合物から成る群から選択される有効量の1種または2種以上の酵素でセルロース材料を処理することをさらに含んでなる、請求項30または31に記載の方法。
【請求項３３】
方法が前処置プロセス、同時の糖化および発酵プロセス (SSF) における工程またはハイブリッド加水分解および発酵プロセス (HHF) における工程である、請求項30〜32のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
セルロース材料分解物を回収することをさらに含んでなる、請求項30〜34のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
セルロース材料分解物が糖である、請求項34に記載の方法。
【請求項３６】
セルロース分解タンパク質および/またはβ-グルコシダーゼ活性を有するポリペプチドが細胞を含むか、あるいは含まない発酵ブロスの形態である、請求項30〜35のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
下記の工程を含んでなる、物質を製造する方法:
(a) 有効量の請求項1〜10のいずれかに記載のβ-グルコシダーゼ活性を有するポリペプチドの存在下に有効量の1種または2種以上のセルロース分解タンパク質でセルロース材料を糖化し;
(b) 工程 (a) のセルロース材料糖化物を1種または2種以上の発酵微生物で発酵させ; そして
(c) 発酵から物質を回収する。
【請求項３８】
1種または2種以上のセルロース分解酵素がセルラーゼ、エンドグルカナーゼおよびセロビオヒドロラーゼから成る群から選択される、請求項37に記載の方法。
【請求項３９】
セルロース材料をヘミセルラーゼ、エステラーゼ、プロテアーゼ、ラッカーゼ、ペルオキシダーゼまたはそれらの混合物から成る群から選択される有効量の1種または2種以上の酵素で処理することをさらに含んでなる、請求項37または38に記載の方法。
【請求項４０】
工程 (a) または (b) を同時の糖化および発酵において同時に実施する、請求項37〜39のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
物質がアルコール、有機酸、ケトン、アミノ酸または気体である、請求項37〜40のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
セルロース分解タンパク質および/またはβ-グルコシダーゼ活性を有するポリペプチドが細胞を含むか、あるいは含まない発酵ブロスの形態である、請求項37〜41のいずれかに記載の方法。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【公表番号】特表２００９−５０２２０９（Ｐ２００９−５０２２０９Ａ）
【公表日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５２５２７５（Ｐ２００８−５２５２７５）
【出願日】平成１８年８月４日（２００６．８．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３０７１９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０１９４４２
【国際公開日】平成１９年２月１５日（２００７．２．１５）
【出願人】（５００１７５６０２）ノボザイムス，インコーポレイティド (26)
【Ｆターム（参考）】