アルツハイマー病の予防または治療のための併用療法およびそのキット
本発明はアミノ酸配列Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６（式中、Ｘ１はＣ以外のアミノ酸、Ｘ２はＣ以外のアミノ酸、Ｘ３はＣ以外のアミノ酸、Ｘ４はＣ以外のアミノ酸、Ｘ５はＣ以外のアミノ酸、Ｘ６はＣ以外のアミノ酸であって、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６はＤＡＥＦＲＨではない）を含んでなる化合物の、アルツハイマー病ワクチンの作製における使用に関するもので、該化合物は天然のＡβ42Ｎ末端配列ＤＡＥＦＲＨに特異的な抗体と結合する能力があり、さらにその五量体は天然のＡβ42Ｎ末端配列ＤＡＥＦＲＨに特異的な抗体と結合する能力がある。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病の予防または治療方法のための併用療法および該併用療法を実施するためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
アミロイドβペプチド（Ａβ）はアルツハイマー病（ＡＤ）の神経病理学上中心的な役割を担っている〔ロアー等(Roher wt al)、1993年、「β-アミロイド(1-42)は、脳血管アミロイド沈着物の主たる成分；アルツハイマー病の病変への影響」PNAS.,90:10836〕。この病気の家族型はアミロイド前駆体タンパク（ＡＰＰ）およびプレセニリン遺伝子における突然変異と関連している。これら遺伝子における病気関連突然変異は、該ペプチド（Aβ42）の42アミノ酸型の産生を増大させるが、これはアルツハイマー病のアミロイド斑中で見られる主たる形態である。この病気の動物モデルは市販品から入手できる。ＰＤＡＰＰ遺伝子組み換えマウスでは突然変異したヒトのＡＰＰ（717位のアミノ酸がＶに代わってＦである）が過剰発現されており、アルツハイマー病における神経病理学上の顕著な特徴が年齢および脳に依存しつつ次第に発達してくる〔ゲームズ等(Games et al.) 1995:「Ｖ７１７Ｆβアミロイド前駆体タンパクを過剰発現した遺伝子組み換えマウスにおけるアルツハイマー型神経病理学」Nature,373:523〕。
【０００３】
ミモトープに依存しない通常のワクチンを用いたワクチン接種の研究がすでになされている。AD型神経病変の発現（６週）前または高齢化の時点（１１ヶ月）において遺伝子組み換え動物を凝集Ａβ42で免役した：若い動物の免疫化は斑の形成、神経突起のジストロフィー、星状神経膠症の発達を抑制した。高齢化動物の治療は明らかにAD様神経病変を減少させた。この実験的なワクチン化の研究は血液脳関門を通過してアミロイド斑を攻撃可能なＡβ42抗体の発展を導いた〔シェンク等(Schenk et al.) 1999:「βアミロイドによる免疫化はPDAPPマウスにおけるアルツハイマー様病変を減少させる。」Nature 400: 173〕。続いて、該アミロイド斑はＦｃ受容体が関与する食作用を含むいくつかのメカニズムにより除去される〔バード等(Bard et al.)、2000:「末梢的に投与されたアミロイドβペプチドに対する抗体は中枢神経系に入ってアルツハイマー病モデルマウスの病変を減少させる」Nature Med, 6: 916〕。このワクチンはまた記憶不足の進行を妨げる〔ヤヌス等(Janus et al.) 2000:「Ａβペプチド免疫化はアルツハイマー病モデルにおいて行動上の障害およびアミロイド斑を減少させる」Nature 408:979〕。
【０００４】
ＡＤに対する非常に有望な免疫療法が1999年遅くから臨床治験されている。正しいメカニズムはより詳細に特徴づけられる必要があるが、免疫化によって免疫系の引き金が引かれ、該免疫系がアミロイド斑を攻撃しこれらの沈着物を感染したヒト脳より一掃するものと推測される。
【０００５】
これら臨床治験は製薬会社エラン(Elan)とそのパートナーであるアメリカンホームプロダクツ(American Home Products)により実施された〔治療用ワクチンAN-1792、アジュバントはQS21〕。第一相試験は2000年成功裡に終了した。軽度から中程度のＡＤ患者被治験者において効果を試験するため、第二相試験が2001年末より開始された。
【０００６】
しかしこの第二相試験は幾人かの患者で神経性炎症が見られたため永久的に中止されている〔論説2002「未解決問題？」Nature Med 8: 191〕。その徴候には無菌性髄膜脳炎が含まれ、全世界での治験は直ちに中止となった。最悪の場合は、感染した患者は多くの免疫療法に内在する危険である、自己免疫応答の開始を示すであろう。自己免疫の混乱はＡＰＰの偏在性を与えると予想され、これはタンパク分解性生物と共通して抗原決定基を当然に有する。最近、凝集Ａβ42免疫化誘導抗体（ヒトおよびマウス）についての研究が集中的になされ、多くの抗体がＡβ42の４位-10位のアミノ酸（Ａβ4-10）の小さな領域を認識していることが明らかになった。マウス抗体はＡβ原線維生成を阻止し、先在するＡβ線維を分解することができた〔マクローリン等(McLaurin) 2002:「アミロイド-βペプチドに対する治療上有効な抗体は、アミロイド-β残基4-10を標的とし、細胞毒性と原線維生成を阻害する」Nature Med 8: 1263〕。注目すべきことに、ヒト抗体は細胞表面に露出したＡＰＰとは反応せず、また他のいずれの非凝集体（該前駆体の分解生成物）とも反応しない〔ホック等(Hock et al.) 2002:「アルツハイマー患者のワクチン化によるβアミロイド特異的抗体の生成」 Nature Med 8: 1270〕。ヒトおよびマウス血清の間には明らかな相違が観察される；ヒト抗体とは対照的にマウス抗体は単量体、オリゴマーおよび線維化Ａβを検出できる。これは非常に重要であって、治療効力のための必須要件と考えられ、ヒト抗Ａβでは認識できない小さなＡβオリゴマーがこの疾患における主たる毒性発現体であるとの証拠が蓄積されている〔ウォルシュ等(Walsh et al.) 2002:「自然に分泌されるアミロイドβタンパクのオリゴマーはin vivoで海馬における長期増強を強力に阻害する」Nature 416: 535〕。こうして、β-アミロイドアミノ酸4-10（Ａβ42凝集体に代わり）を含むワクチンによる免疫化が可能性のある新しい戦略となった。効力が未知にもかかわらず、患者は（リニアーＢ細胞）「自己」エピトープで直接的に免疫されるので、この戦略はまた自己免疫の問題に直面するかもしれない。
【０００７】
最近のＡＤワクチン化戦略のこれら失望的な発展にもかかわらず、Ａβワクチンは依然としてＡＤとの戦いにおいて最も有望な方法と見なされている。しかし、ＡＤワクチン化には改良と新しい戦略が急ぎ必要である。特に自己反応性Ｔ細胞／Ｂ細胞を誘導しないようなワクチンが必要である。
【０００８】
それでも、アミロイドβの産生、アミロイドβの凝集、または該凝集体により引き起こされる神経毒性事象を妨げる他の療法がまた開発中である。これまで探索されたＡＤに関する治療上の戦略はヴォルフ(Wolfe)の総説論文〔Nature Reviews Drug Discovery 1 (2002 859-866)〕にまとめられている。
【０００９】
アミロイドβ斑形成の基礎は内在性膜貫通型の、いわゆるアミロイドβ前駆体(ＡＰＰ)である（その生理的機能は解明されていないが、最近の研究ではＡＰＰはキネシンＩのいわゆる膜カーゴ受容体として作用することが示唆されている）。ＡＰＰはいわゆる分泌酵素によりタンパク質分解され、特にアミノ酸４０個の長さのＡβペプチド(Ａβ40)が生理的に形成される。他に短いまたは長い形状のＡβペプチドもまた産生され、特に４２アミノ酸のもの(Ａβ42)が高い凝集力を有している。その結果、アミロイド斑においては該Ａβ42が最も多く存在する形態となる。ひとつの可能なＡＤ治療戦略が、異なる切断（α、そして特にβおよびγ分泌酵素）の原因となる分泌酵素を攻撃することに主として焦点を当てている理由はそこにある。こうして、ＡＤ治療において当該酵素類の修飾剤および阻害剤がそれぞれ試みられている（例えば、ベンゾジアゼピン、スルフォンアミド、ベンゾカプロラクタム等）。
【００１０】
ＡＤに関わる更なる遺伝子がアポリポタンパク質Ｅであり、これには三つの対立遺伝子が存在する（ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３およびＡＰＯＥ４）。総人口と比較して、ＡＰＯＥ４のコピーをひとつまたは二つ有する人はＡＤに罹患する危険性がＡＰＯＥ２のキャリアーよりも高いことが示されている。また、スタチン類、即ちコレステロール生合成を阻害する薬物を服用している人はＡＤに罹患する危険性が有意に少ないことが示された。ＡＤの更なる治療戦略が、例えばスタチン類でもってコレステロール生合成を阻害することに焦点を当てている理由はそこにある。
【００１１】
ＡＤ治療の更なる側面は、脳の斑におけるアミロイド凝集阻害であり、これは分泌酵素阻害剤により同様に実現され得る。亜鉛が生理学的に該当する濃度で存在するとＡβの凝集を誘導し得るので、亜鉛濃度の低下もＡＤ治療の更なる側面として示唆されている。
【００１２】
先行技術において提案されているＡＤの更なる治療戦略はＡＰＰの発現阻止とＡβクリアランスの増加であり、ＡＰＰのプロモーター領域と相互作用し得る阻止物質が探索された。Ａβクリアランスに関しては、例えばインスリン分解酵素やネプロライシンのようなある種のプロテアーゼの活性増加、またはＡβ抗体の末梢適用等が示唆された(デマトス等(De Mattos et al.), PNAS 98(15)(2001), 8850-8855)。しかしながら、これらの試験はマウスモデルにおいて矛盾する結果を既に示した(ヴォルフ(Wolfe), (2002))。最後に、例えば、ＡＤ患者の血清中のアミロイドβのレベルを低下させて、既に存在するアミロイド斑を再溶解する試みがなされた。またこの関連では、アフェレーシスを用いて脳内βアミロイドタンパクの斑状沈着物を減少させる提案がなされた(米国特許6551266号；ここではアフェレーシスにより分子量が500kDより大の高分子を除去することが提案されている)が、ＡＤについては示されていない。にもかかわらず、脳細胞中に既に存在する斑状物の溶解はアフェレーシス法では直接的に可能でない(500kDを超える斑状物若しくは分子は血液脳関門を通過できない)。
【００１３】
既に述べたように、βアミロイド(Ａβ40およびＡβ42)斑の存在はＡＤのもっとも特筆すべき病理学的特徴である。Ａβの減少がＡＤの予防と治療における第一の薬学的目的とみなされる理由はそこにある。能動的な免疫化で抗Ａβ抗体を誘起してアミロイドを除去することを記述したが、そのような免疫化は処置を中止せざるを得ない重篤な副作用によりこれまでのところ成功していない。より最近の前臨床結果は抗体が末梢におけるＡβの減少を導き得ることを示し、Ａβ周辺の脳動力学を変化させる可能性はあるかも知れない。
【００１４】
更に、Ａβに高い親和性を有する薬物(例えば、ゲルソリンまたはCM1等)の末梢処置により脳内のＡβ量を減少させることが示された(マソーカ等(Masouka et al.), Journal of Neuroscience 2003: 29-33)。従って、血漿中のＡβ濃度を減少させ脳内の沈着を減少させ若しくは阻止することのできる一般法として化合物が提案されたことになる。これに基づくと、新たな治療薬の開発が可能であり、その活性は血液脳関門の通過に依存しない。
【００１５】
この血漿中Ａβの分画により誘発される脳からのＡβ流出に対し、血漿中Ａβ濃度に与える方法依存的な効果が示された：ゲルソリンは血漿中Ａβ濃度を低下させなかった：そのかわり、ゲルソリンの投与および抗Ａβモノクローナル抗体による能動的免役化は血漿中Ａβ濃度を増加させた。しかしながら、比較的若いＡＰＰ遺伝子組み換えマウスを実験で使用した場合にのみ脳内のＡβ負荷が減少した；６ヶ月より高齢のマウスを使用した場合、その方法は効果がないことが分かった。これは、高齢マウスの脳ではＡβの不溶解度が高くなるためと考えることができる。一方で、長期的な治療が成功する可能性はあるがゲルソリンまたはCM1、および能動的免役化のいずれも長期間の投与に適してはいない。
【発明の開示】
【００１６】
そこで本発明の目的は、アルツハイマー病に対して新たな治療および予防の戦略、特に成功裏な免疫化に基づく戦略を提供することである。
従って本発明ではＡβ流出誘導薬とＡβペプチド特異的アフェレーシスを含む併用療法を提供する。本発明によれば、Ａβ流出が誘導（例えば、ゲルソリン、ＧＭ１、Ａβペプチド特異的な能動的若しくは受動的ワクチン等の薬物により）され、その流出がＡβアフェレーシスにより持続される。この関連で、Ａβ、Ａβ誘導体またはＡβミモトープを含むワクチンにより一度または二度分画を誘導するのに十分である。
【００１７】
本発明において特に優先度の高い側面がアルツハイマー病(ＡＤ)の予防または治療のためのキットである理由がここにあり、該キットは
−血漿中のアミロイドβ(Ａβ)の分画を誘導する薬物、および
−血液若しくは血漿流動と接触し、アミロイドβ前駆体タンパク(ＡＰＰ)と結合する受容体を有する固体の担体を含むアフェレーシス器具、を含んでなる。
【００１８】
この発明のキットにおいて、ＡＰＰ結合受容体は好ましくは、抗ＡＰＰ抗体、（可溶性）Ａβ結合受容体、例えば抗Ａβ４０抗体または抗Ａβ４２抗体、ＡＰＰ結合タンパク、特にゲルソリン、アポＪまたはアポＥ、ＡＰＰ結合ペプチド、ＡＰＰ結合ガングリオシド、特にＧＭ１、またはＡＰＰ結合核酸、特にアプタマー、または該受容体の混合物から選択される。
該キットにおいて、アフェレーシス担体としては無菌で発熱性物質を除去したカラムが好ましくは使用される。
【００１９】
該キットにおいて、血漿中のアミロイドβ(Ａβ)分画を誘導する薬剤は好ましくはＡβに高い親和性を有する薬剤、特にゲルソリンまたはＧＭ１、Ａβ特異的ペプチドリガンドまたは核酸リガンド、Ａβ特異的な能動的若しくは受動的ワクチンまたはＡβ特異的ヒト化モノクローナル抗体から選択される。
Ａβ特異的な能動的ワクチンは好ましくはＡβ誘導体またはＡβミモトープである。
特に好ましいＡβ誘導体はその一部若しくは全体がＤ-アミノ酸より構成され、および／または天然アミノ酸を含まないペプチドより選択される。
【００２０】
Ａβミモトープは好ましくは下式ペプチド
【化１】
（式中、Ｘ１はアミノ酸であって、Ｃではなく、
Ｘ２はアミノ酸であって、Ｃではなく、
Ｘ３はアミノ酸であって、Ｃではなく、
Ｘ４はアミノ酸であって、Ｃではなく、
Ｘ５はアミノ酸であって、Ｃではなく、
Ｘ６はアミノ酸であって、Ｃではなく、
また、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６はＤＡＥＦＲＨではなく、当該ペプチドは天然のＮ端Ａβ４２配列のＤＡＥＦＲＨに特異的な抗体に対して結合能力を有し、さらにその５量体は天然のＮ端Ａβ４２配列のＤＡＥＦＲＨに特異的な当該抗体に対して結合能力を有する。）
を含み若しくは構成される。
【００２１】
特に好ましい式Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６のペプチドは；
Ｘ１はＧまたは水酸基若しくは負電荷を有するアミノ酸、好ましくはＥ、Ｙ、Ｓ若しくはＤであり；
Ｘ２は疎水性アミノ酸または正電荷を有するアミノ酸、好ましくはＩ、Ｌ、Ｖ、Ｋ、Ｗ、Ｒ、Ｙ、Ｆ、若しくはＡであり；
Ｘ３は負電荷を有するアミノ酸、好ましくはＤ若しくはＥであり；
Ｘ４は芳香族アミノ酸またはＬ、好ましくはＹ、Ｆ、若しくはＬであり；
Ｘ５はＨ、Ｋ、Ｙ、Ｆ、またはＲ、好ましくはＨ、ＦまたはＲであり、
Ｘ６はＳ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｋ、ＹまたはＧ、好ましくはＴ、Ｎ、Ｄ、Ｒ、Ｉ、またはＧである。
【００２２】
この関連で、天然に存在するタンパク質中の２０アミノ酸は化学的類似体またはＤ-アミノ酸でもって置き換えることが可能である；例えば、Ｌ、Ｉ、およびＶはＮｌｅ、Ｎｖａ、Ｃｈａまたはその他の直鎖若しくは環状脂肪族側鎖を有するアミノ酸で置き換えられ、ＷおよびＦは芳香族アミノ酸で、ＲおよびＫはアルカリ性アミノ酸、例えばオルニチンやホモアルギニンで置き換えられる。セリンやスレオニンは末端ＯＨ基がある脂肪族および／または芳香族側鎖を有するアミノ酸で置換するのに適している。このような交換の効率と効果は、例えばＰＣＴ／ＥＰ０４／００１６２に記述された実験モデルにより容易に確認することができる。付け加えると、立体的な検討もまた考慮されるべきである（該ペプチドと抗体の結合に関して、コンピュータモデルを利用して）。
【００２３】
特に好適なエピトープは次のエピトープより選択される；ＥＩＤＹＨＲ、ＥＬＤＹＨＲ、ＥＶＤＹＨＲ、ＤＩＤＹＨＲ、ＤＬＤＹＨＲ、ＤＶＤＹＨＲ、ＤＩＤＹＲＲ、ＤＬＤＹＲＲ、ＤＶＤＹＲＲ、ＤＫＥＬＲＩ、ＤＷＥＬＲＩ、ＹＲＥＦＦＩ、ＹＲＥＦＲＩ、ＹＡＥＦＲＧ、ＥＡＥＦＲＧ、ＤＹＥＦＲＧ、ＥＬＥＦＲＧ、ＤＲＥＬＲＩ、ＤＫＥＬＫＩ、ＤＲＥＬＫＩ、ＧＲＥＦＲＮ、ＥＹＥＦＲＧ、ＤＷＥＦＲＤＡ、ＳＷＥＦＲＴ、ＤＫＥＬＲ、ＳＦＥＦＲＧ、ＤＡＥＦＲＷＰ、ＤＮＥＦＲＳＰ、ＧＳＥＦＲＤＹ、ＧＡＥＦＲＦＴ、ＳＡＥＦＲＴＱ、ＳＡＥＦＲＡＴ、ＳＷＥＦＲＮＰ、ＳＷＥＦＲＬＹ、ＳＷＥＬＲＱＡ、ＳＶＥＦＲＹＨ、ＳＹＥＦＲＨＨ、ＳＱＥＦＲＴＰ、ＳＳＥＦＲＶＳ、ＤＷＥＦＲＤ、ＤＡＥＬＲＹ、ＤＷＥＬＲＱ、ＳＬＥＦＲＦ、ＧＰＥＦＲＷ、ＧＫＥＦＲＴ、ＡＹＥＦＲＨ、ＤＫＥ（Ｎｌｅ）Ｒ、ＤＫＥ（Ｎｖａ）Ｒ、およびＤＫＥ（Ｃｈａ）Ｒ。
【００２４】
本発明に従うと、Ａβ４２ミモトープはＡＤに対するワクチンとして用いられる；該ミモトープはＡβ４２に対する抗体産生を誘導するが天然のＡＰＰに対する抗体産生はしない。このミモトープは（モノクローナル）抗体と（市販の）ペプチドライブラリーにより同定することができる〔例えば、ライナク等(Reineke et al.), 2002「不作為に生成させた5520配列のペプチドアレイから、個々の抗体エピトープおよびミモトープの同定」、J. Immunol. Method., 267:37〕。ＡＰＰを認識せず、アミノ末端アスパラギン酸が異なるＡβ種のみを検出する（モノクローナル）抗体が用いられる（そのような抗体の例が、Johnson-Wood et al., 1997「遺伝子組み換えアルツハイマー病マウスモデルにおけるアミロイド前駆体タンパクのプロセシングとＡβ４２の沈着」PNAS, 94:1550に記載されている）。本発明の過程において、ワクチンに適したミモトープを同定する場合そのような抗体が理想的なツールであることが証明された。そのようなモノクローナル抗体はマウスに直接投与した場合有益な薬効を有することが示されたが(バード等(Bard et al.), 2000「末梢投与したアミロイドβペプチド抗体が中枢神経系に入り、アルツハイマー病マウスモデルにおける病状を軽減する」、Nature Med., 6:916)、ＡＤワクチン化合物を単離するためのミモトープ探索ツールとしての使用が提案されたことはなかった。
【００２５】
先行技術においては、すべての努力が天然に存在するＡβペプチドに集中していた。上述のとおり、Ａβペプチドワクチンの臨床治験は神経炎症的事象により中止された。実際、Ｔ細胞エピトープ予測プログラム（ＭＨＣクラスＩ制限エピトープについてのＢＩＭＡＳとＭＨＣクラスII制限エピトープについてのＴＥＰＩＴＯＰＥ）は配列中に高いスコアの（自己）エピトープを提案している。このことは、神経炎症的事象が自己免疫の結果であって、そのようなワクチンの一般適用が不適切なものとしてしまうことを意味する。
【００２６】
先行技術で提案されたそのようなＡβワクチンとは対照的に、本発明に従ったミモトープを含むワクチンによる治療においては自己免疫反応が生じることは予測できない。本発明に従ったミモトープ同定に用いる（モノクローナル）抗体はＡＰＰを認識せず、ミモトープ配列はこれまでの治験で使用され、またはこれからの治験で使用されるであろうＡβ４２由来の自己配列とは異なるからである。
【００２７】
本発明に従って、ミモトープ同定に用いられる抗体はアミノ末端がフリーなアスパラギン酸である、Ａβ由来のアミノ酸配列ＤＡＥＦＲＨ（もとのエピトープ）を検出し、自然のＡＰＰは認識しない。その抗体はモノクローナルまたはポリクローナルな抗体調製物、またはその一部若しくは誘導体の抗体でよく、唯一求められるのはその抗体分子がＤＡＥＦＲＨエピトープを特異的に認識すること、即ち、天然のアミロイド前駆体タンパクのＮ端延長形態に結合しないことであり、それはＤＡＥＦＲＨエピトープに対する結合能力がＡＰＰ分子に対する場合より、少なくとも１００倍、好ましくは少なくとも１０００倍、さらに好ましくは少なくとも１０５倍高いことを意味する。その抗体はＤＡＥＦＲＨ配列に対して、ジョンソン-ウッド等(Johnson-Wood et al.), 1997に記載された抗体と同程度、またはそれより高い結合能力を示す抗体であってもよい。高い結合能力がより好ましいが、より低い結合能力の抗体〔ジョンソン-ウッド等(Johnson-Wood et al.)の抗体の結合能力の＞10％、＞50％または＞80％〕もまた使用することができる。
【００２８】
本発明に従う化合物はＤＡＥＦＲＨ配列と同程度の特異性でもってこれらの抗体に結合する。
本発明に従って使用されるミモトープは５から１５アミノ酸の好ましい長さを有している。該化合物はワクチン中に単離された（ペプチド）形態で存在してもよいし、例えば、薬学的な担体物質若またはポリペプチド、脂質若しくは炭水化物構造のような他の分子と縮合または複合体化していてもよい。本発明に従うと、ミモトープの長さは好ましくは５から１５アミノ酸、６から１２アミノ酸残基、特に９から１１アミノ酸残基である。しかしながら、そのミモトープは非特異的なリンカー若しくは担体、特にペプチドリンカー若しくはタンパク質単体と縮合する（共有結合的または非共有結合的）ことが可能である。さらに、そのペプチドリンカー若しくはタンパク質単体はヘルパーＴ細胞エピトープにより構成され、またはこれを含み得る。
【００２９】
薬学的に許容される担体は好ましくは、シン等(Singh et al.), Nat. Biotech.,17(1999), 1075-1081（特に該文献の表１に記載のもの）およびオアガン等(O'Hagan et al.), Nature review, Drug Discovery 2(9) (2003), 727-735（特にこれに記載された内因性免疫増強化合物および分配系）に記載されたアジュバント物質またはその混合物のほか、ＫＬＨ、破傷風トキソイド、アルブミン結合タンパク、ウシ血清アルブミン、デンドリマー(MAP; Biol.Chem., 358; 581)である。その上、該ワクチン組成物は水酸化アルミニウムを含んでもよい。
【００３０】
本発明化合物（ミモトープ）および薬学的に許容される担体を含むワクチンは、いずれの適切な適用法、例えば、i.v.、i.p.、i.m.、鼻腔内、経口、皮下等により、そして任意の適切な分配具〔オアガン等(O'Hagan et al.), Nature review, Drug Discovery 2(9) (2003), 727-735〕により投与してもよい。該ワクチンは典型的には本発明化合物を0.1ngから10mg、好ましくは10ngから1mg、特に100ngから100μg、あるいは例えば100fＭおよび10μＭの間、好ましくは10pＭから1μＭの間、特に100pＭから100nＭの間で含む。該ワクチンはまた典型的な補助物質、例えば緩衝液、安定剤等を含んでもよい。
【００３１】
本発明に従うと、併用療法の過程で開始後のＡβ流出を維持するためアフェレーシス器具が提供される。該器具は血流若しくは血漿流動と接触させることのできる固体の担体を含み、該担体はアミロイドβ前駆体タンパク（ＡＰＰ）結合受容体を含む。本アフェレーシス器具により、ＡＤ患者およびＡＤに罹患する危険性のある人々はＡＰＰおよびＡＰＰ分解生成物、特にＡβ４０およびＡβ４２からアフェレーシスにより特異的に開放され、Ａβ隔離効果は第一過程で維持することができる。中枢神経系（ＣＮＳ）と血漿との間にはＡβ４２の動的な平衡が存在することが知られている。上記のとおり、マウスモデルにおいて〔デマトス(DeMattos), PNAS 2001、上記参照〕抗Ａβ抗体の末梢適用がＣＮＳおよび血漿のＡβ４２クリアランスに影響し、抗Ａβ抗体が血液脳関門を通過することなく脳におけるＡβ４２の負荷を軽減することを示すことができた。マツオカ等(Matsuoka et al.)(Journal of Neuroscience 2003: 29-33)は、他のＡβ４２結合分子（ゲルソリンおよびＧＭ１）を末梢適用してその結果を確認した。
【００３２】
これを手段として、脳内の便利な部位、即ち、既に血中においてプラークの発達過程を防ぐことができ、言い換えると、その後該タンパクおよび分解ペプチドはそれぞれもはや脳内に戻れずそこで凝集することもできない。脳内におけるプラーク発達の過程はまた、血中のＡβ４２を捕捉することで阻止可能である。そのようにする場合、患者血漿若しくは血中と接触するアフェレーシス器具の受容体がＡβ４２またはその他のＡＰＰ分解物に特異的であるかどうかは決定的ではなく、唯一の必須事項はＡＰＰおよびそのタンパク分解産物、特にＡβ４２が該特異的吸着により血中から除去され、その結果「悪玉」の（Ａβ４２への）タンパク分解が起こらずプラークが発達しないことである。従って、本発明は米国特許6551266号と比較し、まったく異なる適用に基づくアフェレーシスのアプローチであり、即ち、既存の構造的プラーク要素を除去するものでプラーク自身の除去ではない。それに血液のアフェレーシスは脳内のプラークが発達する領域には届かないので、アフェレーシスによるプラーク除去は、アフェレーシスによるＡＤ治療に関し効果がないものとして演繹的に除外することができる。
【００３３】
一方、体内におけるＡβ枯渇を誘導する他の方法（例えば、末梢抗Ａβ抗体を用いる〔デマトス等(DeMattos et al.),PNAS 98(15) (2001), 8850-8855〕）で長期にわたって行われるものに比して、発明の併用療法は自己免疫応答が開始されないという決定的な利点が含まれる。さらに本発明に従うと、体内でのみ（場合により特異的な部位に輸送された後においてのみ）作用する物質を患者に投与する必要はないが、病因物質は選択的に除去され、即ち、病気の原因は体外的に特異的に除去され、不要な体内での反応生成物は除かれる。
【００３４】
本発明に従うと、既に存在する既知のアフェレーシス器具はすべての態様において本発明に簡単に適用可能である。特に、固体の担体（およびアフェレーシス器具）を選択するときは、それらの医療適応性を考慮する必要がある。これらの担体、方法および器具類は、例えば、米国特許5,476,715号、6,036,614号、5,817,528号、および6,551,266号に記載されている。相当する市販のアフェレーシス器具は例えば、フレセニウス(Fresenius)、プラズマセレクト(Plasmaselect)、アサヒ(ASAHI)、カネカ(Kaneka)、ブラウン(Braun)等により頒布され、例えばLDL-Therasorb(登録商標)、Immunosorba(登録商標)、Prosorba(登録商標)、HELP(登録商標)、DALI(登録商標)、Bilirubin-Bile-Acid-Absorber BR-350、Prometheus(登録商標)解毒、MARS(登録商標)、MedicapのADAsorb、Plasma FLO等のシステムが提供されている。これらシステムの市販の形態は必ずしも単一のタンパクの特異的除去に向けられている訳ではないが、アフェレーシス分野の専門家であれば本発明に対し容易に適合化、例えば免疫アフェレーシスとして、および／または発明にかかる固体担体（例えばカラムとして）をアフェレーシス器具に組み合わせることが可能である。
【００３５】
従って、本発明に従うと、リガンドのＡＰＰおよびその生物学的副生成物、特にＡβ４２に親和性を有していて、ＡＤ患者若しくはＡＤに罹患するリスクのある人の血液または血漿から当該ポリペプチドを除去可能な物質はＡＰＰ-結合受容体として理解される。該ＡＰＰおよびＡβ４２受容体はそれぞれ、好ましくは（ポリ若しくはモノクローナル）抗体、タンパク質、ガングリオシドまたは核酸である。
抗ＡＰＰ抗体、抗Ａβ４０抗体若しくは抗Ａβ４２抗体、ＡＰＰ-結合タンパク、特にゲルソリン、アポＪ、アポＥ、ＡＰＰ-結合ペプチド、ＡＰＰ-結合ガングリオシド、特にＧＭ１、またはＡＰＰ−結合核酸、特にアプタマー、またはこれら受容体の混合物が特に好ましい。
【００３６】
このような抗体の例は３Ｄ６（Ａβ１-５）、２Ｈ３（Ａβ１-１２）、２Ｇ３（Ａβ３３-４０）、２１Ｆ２（Ａβ３３-４２）、１２Ｈ７（Ａβ３３-４２）(ジョンソン-ウッド等(Johnson-Wood et al.), PNAS 1997:1550-1555)、１０Ｄ５、１６Ｃ１１(バード等(Bard et al.), Nature Medicine 2000:916-919)、デマトス等(DeMattos et al.)(2001)に記載の抗体（ｍ２６６、ｍ２４３）のほか同様の特異性を有する抗体である。このような抗体は、例えば、ＡＰＰ、Ａβ４２またはそのフラグメント若しくは変異体を含むワクチン剤で動物を免疫化し、任意で細胞融合およびクローン選択（モノクローナル抗体で）の手順を加えることにより得られる。
ＡＰＰ-結合タンパク受容体の更なる例は、ゲルソリン(マツオカ等(Matsuoka et al.) 2003、上記参照)、アポＪおよびアポＥ(デマトス等(DeMattos et al.), 2001、上記参照)である。ＧＭ１はＡＰＰ-結合ガングリオシド受容体(マツオカ等(Matsuoka et al.) 2003、上記参照)の例である。
【００３７】
この関連では、ＡＰＰ-結合受容体として作用するペプチドはＤ-アミノ酸、Ｌ-アミノ酸、若しくはＤ-およびＬ-アミノ酸の組み合わせを含むことができ、また任意で、環形成や誘導体化等のさらなる修飾を受けていてもよい。適切なペプチド受容体、例えばＡβ４２は、市販のペプチド・ライブラリーから提供され得る。これらペプチドは好ましくは、少なくとも５アミノ酸、好ましくは６アミノ酸、特に好ましくは少なくとも８アミノ酸の長さを有し、好ましい長さは最大で１０アミノ酸、好ましくは最大で１４若しくは２０アミノ酸である。しかしながら、本発明によれば、より長いペプチドも問題なくＡＰＰ-結合受容体として用いることができる。その上、オリゴマー（例えば、ポリエチレンイミンおよびポリリシン）も適切な受容体である。
当然ながら、ファージ・ライブラリー、ペプチド・ライブラリー（上記参照）若しくは構造ライブラリー（例えば異なる構造に関するコンビナトリアル・ケミストリーやハイスループット・スクリーニングによって得られる）もまたこのようなＡＰＰ-結合受容体を得るのに適している。
【００３８】
さらに、核酸に基づくＡＰＰ-結合受容体（「アプタマー」；または「デコイ」オリゴデオキシヌクレオチド、即ち、その配列において転写因子の結合部位を構成するdsオリゴヌクレオチド）を用いることができる。ここで、当該核酸は種々の（オリゴヌクレオチド）ライブラリー（例えば、２-１６０核酸残基）により検出することができる；例えば、バーグストーラー等(Burgstaller et al.), Curr.Opin.Drug Discov. Dev., 5(5)(2002),690-700; ファムロク等(Famulok et al.), Acc.Chem.Res., 33(2000),591-599; メイヤー等(Mayer et al.), PNAS 98(2001),4961-4965; およびその他多数。核酸の骨格は、例えば天然のリン酸ジエステル化合物により、およびホスホロチオエート、組み合わせまたは化学的変異体（例えばPNAとして）によっても検出可能であり、ここで本発明に従うと、基本的にはＵ、Ｔ、Ａ、Ｃ、Ｇ、ＨおよびｍＣを塩基として使用できる。
【００３９】
本発明に従って使用することのできるヌクレオチドの２′-残基は好ましくはＨ、ＯＨまたは他の保護基であり、２′位の修飾（核酸も修飾が可能）は、オリゴヌクレオチド合成で通常使用されるので、例えば保護基でもって提供される。酸素原子のエーテル化は保護基として理解されるが、２′位の修飾においてＯＨ基は異なるもので置き換えられる。先行技術には両方の場合につき多くの異なる可能性が記述されている；メチル、アリル、プロピル等の保護基（即ち、例えば、２′-ＯＣＨ３、２′-Ｏ-ＣＨ＝ＣＨ３、等）が特に好まれ；特に好ましい修飾は２′-デオキシ、２′-アミノ、２′-フルオロ、２′-ブロモ、２′-アジドの他セレン等の金属もある。さらに、本発明によれば、アンチセンス技術（リボザイム、ＲＮＡｉ等）のために発展したオリゴヌクレオチドの安定化方法もまた核酸（例えばこの領域をリードするＩＳＩＳとリボザイム・ファーマシューチカルズを、特にその特許文献とホームページを比較せよ）を提供するために用いられる。
【００４０】
ＡＰＰ-結合アプタマー（本発明および上記の定義に従うと、Ａβ４２結合アプタマーをまた含む）がまた、本発明の範囲内における好ましいＡＰＰ-結合受容体である理由はここにある。
従って、好ましくはペプチド、抗体または核酸より構成されるＡＰＰ-結合受容体は、アルツハイマー病患者およびアルツハイマー病に罹患するリスクのある人においてＡＰＰおよびそのタンパク分解生成物を体外に除去する担体物質として用いられる。
【００４１】
本発明を医療の日常診療に使用する場合、本発明に従うすべての担体物質、すべての受容体／担体の組み合わせがその特性を満たし、それぞれ好ましいものであるためには、担体は殺菌され、発熱物質を含まないことが必要である（米国特許6030614号、または5476715号参照）。多孔性ホモポリマー、ビニルを含むモノマーコポリマー若しくはターポリマー（例えば、ＴＳＫトヨパールやフラクトゲルＴＳＫ等のアクリル酸）、オキシランを含む化合物（例えばエピクロロヒドリン）で修飾（活性化）され、および任意でＮＨ３、アミノ若しくはカルボキシルを含む化合物またはＣＮＢｒで反応させた担体、ＥＰ110,409AやＤＥ36,17,672Aに開示されたＣＮＣＬ吸着剤等が適切な例である。治療目的に特に好ましい吸着物質は血液細胞の損失を避けるのに適していて、補体系を活性化せず若しくはほとんど活性化しない；そして体外循環における会合体の形成を可能な限り遅らせる。さらに使用された担体物質は受容体結合形態においても殺菌措置、特に飽和エチレンオキシド、飽和グルタルアルデヒド、ガンマ線照射、蒸気、ＵＶ、溶媒および／または洗剤による処置に対して十分安定であることが好ましい。セファロース、アガロース、アクリル、ビニル、およびデキストラン等による生成物もまた使用される；これらはＡＰＰ-結合受容体との結合に適切な好ましい官能基を有していて既に市販されている。さらに好ましい担体にはモノリス（グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタクリレート共重合体）も含まれる。
【００４２】
受容体と適切な担体との結合には当業者によく知られた化学を用いることができる（例えば、「生物接合テクニック」(Bioconjugate Techniques)、Greg T. Hermanson編、Academic Press,Inc San Diego, CA, 1995, 785 pp）。
さらなる側面によれば、本発明は発明の併用療法の範囲内においてそれぞれの患者の治療に用具を適合させることによる、アルツハイマー病若しくはそのような病気の予防のための治療用具、またはその治療のための発明用具の使用に関する。治療を行う場合、ＡＰＰポリペプチドを効率よく除去するため、患者にアフェレーシス器具を十分長い時間結合し、患者の血液若しくは血漿の流れをＡＰＰ結合受容体を含む固体の担体に接触させてＡＰＰおよび／またはＡＰＰのタンパク質分解物、特にＡβ４２を結合させる。アフェレーシス治療の過程において、十分な抗凝血と、末梢または中枢の静脈血管のアクセスおよび動静脈瘻は確かに確保され、必要な大量および測定データは記録される。その上、アフェレーシス法の多くは適切な血漿処理前に血漿と血液細胞との一次分離を必要とする。そのような予防的措置が必要な特別な人々は、家族性因子高齢者（＞50、＞60または＞70歳）または別のＡＤ危険因子、特に遺伝子因子を有する人々である。
【００４３】
さらに中心的側面によれば、本発明はアルツハイマー病（ＡＤ）の予防または治療に関し、ここでアミロイドβ（Ａβ）の結晶中への隔離を促す薬物を患者に投与し、該患者はアフェレーシス器具で治療される；該器具は血液若しくは血漿流と接触させる固体の担体を有し、その担体にはアミロイドβ前駆体タンパク（ＡＰＰ）結合受容体が存在してアフェレーシス器具の使用により患者の血中からＡＰＰが除かれる。
該方法は好ましくは本発明のキットにより実施される。
従って本発明はまた、上述のとおりＡβミモトープの使用に関し、これはＡＤの治療若しくは予防のための発明の併用治療に用いられる。
本発明は続く実施例によりより詳細に説明されるが、これは決して制限するものではない。
【実施例】
【００４４】
１．ＡＰＰ受容体を有する担体の製造
１．１ モノリスカラム
製造者の指示書に従い、ＣＩＭ（登録商標）エポキシモノリスカラム（ＢＩＡセパレーションズ、ＳＩ）を0.5M Ｎａ-リン酸緩衝液、pH８．０で平衡化し、Ａβペプチドに対するモノクローナル抗体も製造者の指示書に従って活性化してＣＩＭカラムと結合させる。このカラムをリン酸緩衝液（＋1M ＮａＣｌ）で数回洗浄し、任意で余ったエポキシ基をブロックする。
品質保証は洗浄および平衡溶出液の制御により行う；溶出液中に活性なエポキシ基および抗体の漏れがないカラムのみを次工程に供し、アフェレーシス器具に取り付ける。
１．２ セファロースカラム
バルクのアガロース原料（セファロースＣＬ４Ｂ）を無菌のまま殺菌済みの発熱物質なしの容器に満たして無菌的に洗浄する；ここでそのゲル原料は各洗浄ごとに減圧下で完全に乾燥させる。それから、このセファロースをオートクレーブ中115℃で30分間蒸気にて殺菌する。
【００４５】
殺菌処理後、このセファロースを殺菌済み容器の中で60％アセトン-水中にとり、ＣＮＢｒとトリエチルアミンで活性化する（ＣＮＢｒ 14g／アセトン 96ml；トリエチルアミン 30ml／87％-アセトン 408ml）。それから、アセトン／ＨＣｌ溶液を加えた（殺菌済み、発熱物質フリーの水 392mL；5N ＨＣｌ 16.3ml；アセトン 408ml）。活性化セファロースを洗浄し、活性化基の加水分解を防ぐため２時間以内に結合反応に供する。
無菌ろ過した抗体液（それぞれｍ２６６およびｍ２４３）を反応容器に入れて少なくとも９０分間撹拌した。最後に溶出液中に反応生成物が検出できなくなるまで反応溶液を徹底的に洗浄し（等張リン酸緩衝液）、抗体結合セファロースを殺菌済み、発熱物質フリーの焼結ガラス付ガラス製カラムに充填して、最後の品質保証を実施する（反応生成物および重金属等について溶出液分析；粒子分析、発熱、無菌性）。
２．アルツハイマー病患者のアフェレーシス治療の動物モデル
近年、ドイツ国カールスブルグの糖尿病協会「ゲルハルトカッツェ」で、自由に動き回る小動物において実験的なアフェレーシスのための空間体外系が開発された。このアフェレーシス療法は一匹のそして同じ動物に対して繰り返し適用ができる。その上、用いられた動物は次のアフェレーシス療法の長期の評価研究でも利用される。当該実験的アフェレーシス系の使用はいくつかのラット種において成功裏に示された。繰り返しアフェレーシス療法はＩ型糖尿病およびII型コラーゲン誘発関節炎ラットにおいて体重250ｇ以上の場合耐えることができる。
【００４６】
実験的アフェレーシス療法を開始する前に、動物に動脈および静脈カテーテルを取り付ける。アフェレーシスの第一段階で、プラズマフィルターを用いて、血液細胞と血漿を分離する。血液細胞は該動物に直接再灌流する（静脈カテーテルを経由）一方、分離した結晶は動物に再供給する前に実施例１で製造した吸着剤を通過させる。
或いはＬＤＬについてＤＡＬＩアフェレーシスをするようにそれと同様の全血アフェレーシスも実施してもよい。
３．動物モデルにおける独創的な併用療法
動物モデルにおける併用療法は基本的に、アフェレーシスの前、途中または後にＡβの流出が生じるようになされる。さらに、二つの療法の適用の頻度は互いに変化させることができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルツハイマー病の予防または治療方法のための併用療法および該併用療法を実施するためのキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
アミロイドβペプチド（Ａβ）はアルツハイマー病（ＡＤ）の神経病理学上中心的な役割を担っている〔ロアー等(Roher wt al)、1993年、「β-アミロイド(1-42)は、脳血管アミロイド沈着物の主たる成分；アルツハイマー病の病変への影響」PNAS.,90:10836〕。この病気の家族型はアミロイド前駆体タンパク（ＡＰＰ）およびプレセニリン遺伝子における突然変異と関連している。これら遺伝子における病気関連突然変異は、該ペプチド（Aβ42）の42アミノ酸型の産生を増大させるが、これはアルツハイマー病のアミロイド斑中で見られる主たる形態である。この病気の動物モデルは市販品から入手できる。ＰＤＡＰＰ遺伝子組み換えマウスでは突然変異したヒトのＡＰＰ（717位のアミノ酸がＶに代わってＦである）が過剰発現されており、アルツハイマー病における神経病理学上の顕著な特徴が年齢および脳に依存しつつ次第に発達してくる〔ゲームズ等(Games et al.) 1995:「Ｖ７１７Ｆβアミロイド前駆体タンパクを過剰発現した遺伝子組み換えマウスにおけるアルツハイマー型神経病理学」Nature,373:523〕。
【０００３】
ミモトープに依存しない通常のワクチンを用いたワクチン接種の研究がすでになされている。AD型神経病変の発現（６週）前または高齢化の時点（１１ヶ月）において遺伝子組み換え動物を凝集Ａβ42で免役した：若い動物の免疫化は斑の形成、神経突起のジストロフィー、星状神経膠症の発達を抑制した。高齢化動物の治療は明らかにAD様神経病変を減少させた。この実験的なワクチン化の研究は血液脳関門を通過してアミロイド斑を攻撃可能なＡβ42抗体の発展を導いた〔シェンク等(Schenk et al.) 1999:「βアミロイドによる免疫化はPDAPPマウスにおけるアルツハイマー様病変を減少させる。」Nature 400: 173〕。続いて、該アミロイド斑はＦｃ受容体が関与する食作用を含むいくつかのメカニズムにより除去される〔バード等(Bard et al.)、2000:「末梢的に投与されたアミロイドβペプチドに対する抗体は中枢神経系に入ってアルツハイマー病モデルマウスの病変を減少させる」Nature Med, 6: 916〕。このワクチンはまた記憶不足の進行を妨げる〔ヤヌス等(Janus et al.) 2000:「Ａβペプチド免疫化はアルツハイマー病モデルにおいて行動上の障害およびアミロイド斑を減少させる」Nature 408:979〕。
【０００４】
ＡＤに対する非常に有望な免疫療法が1999年遅くから臨床治験されている。正しいメカニズムはより詳細に特徴づけられる必要があるが、免疫化によって免疫系の引き金が引かれ、該免疫系がアミロイド斑を攻撃しこれらの沈着物を感染したヒト脳より一掃するものと推測される。
【０００５】
これら臨床治験は製薬会社エラン(Elan)とそのパートナーであるアメリカンホームプロダクツ(American Home Products)により実施された〔治療用ワクチンAN-1792、アジュバントはQS21〕。第一相試験は2000年成功裡に終了した。軽度から中程度のＡＤ患者被治験者において効果を試験するため、第二相試験が2001年末より開始された。
【０００６】
しかしこの第二相試験は幾人かの患者で神経性炎症が見られたため永久的に中止されている〔論説2002「未解決問題？」Nature Med 8: 191〕。その徴候には無菌性髄膜脳炎が含まれ、全世界での治験は直ちに中止となった。最悪の場合は、感染した患者は多くの免疫療法に内在する危険である、自己免疫応答の開始を示すであろう。自己免疫の混乱はＡＰＰの偏在性を与えると予想され、これはタンパク分解性生物と共通して抗原決定基を当然に有する。最近、凝集Ａβ42免疫化誘導抗体（ヒトおよびマウス）についての研究が集中的になされ、多くの抗体がＡβ42の４位-10位のアミノ酸（Ａβ4-10）の小さな領域を認識していることが明らかになった。マウス抗体はＡβ原線維生成を阻止し、先在するＡβ線維を分解することができた〔マクローリン等(McLaurin) 2002:「アミロイド-βペプチドに対する治療上有効な抗体は、アミロイド-β残基4-10を標的とし、細胞毒性と原線維生成を阻害する」Nature Med 8: 1263〕。注目すべきことに、ヒト抗体は細胞表面に露出したＡＰＰとは反応せず、また他のいずれの非凝集体（該前駆体の分解生成物）とも反応しない〔ホック等(Hock et al.) 2002:「アルツハイマー患者のワクチン化によるβアミロイド特異的抗体の生成」 Nature Med 8: 1270〕。ヒトおよびマウス血清の間には明らかな相違が観察される；ヒト抗体とは対照的にマウス抗体は単量体、オリゴマーおよび線維化Ａβを検出できる。これは非常に重要であって、治療効力のための必須要件と考えられ、ヒト抗Ａβでは認識できない小さなＡβオリゴマーがこの疾患における主たる毒性発現体であるとの証拠が蓄積されている〔ウォルシュ等(Walsh et al.) 2002:「自然に分泌されるアミロイドβタンパクのオリゴマーはin vivoで海馬における長期増強を強力に阻害する」Nature 416: 535〕。こうして、β-アミロイドアミノ酸4-10（Ａβ42凝集体に代わり）を含むワクチンによる免疫化が可能性のある新しい戦略となった。効力が未知にもかかわらず、患者は（リニアーＢ細胞）「自己」エピトープで直接的に免疫されるので、この戦略はまた自己免疫の問題に直面するかもしれない。
【０００７】
最近のＡＤワクチン化戦略のこれら失望的な発展にもかかわらず、Ａβワクチンは依然としてＡＤとの戦いにおいて最も有望な方法と見なされている。しかし、ＡＤワクチン化には改良と新しい戦略が急ぎ必要である。特に自己反応性Ｔ細胞／Ｂ細胞を誘導しないようなワクチンが必要である。
【０００８】
それでも、アミロイドβの産生、アミロイドβの凝集、または該凝集体により引き起こされる神経毒性事象を妨げる他の療法がまた開発中である。これまで探索されたＡＤに関する治療上の戦略はヴォルフ(Wolfe)の総説論文〔Nature Reviews Drug Discovery 1 (2002 859-866)〕にまとめられている。
【０００９】
アミロイドβ斑形成の基礎は内在性膜貫通型の、いわゆるアミロイドβ前駆体(ＡＰＰ)である（その生理的機能は解明されていないが、最近の研究ではＡＰＰはキネシンＩのいわゆる膜カーゴ受容体として作用することが示唆されている）。ＡＰＰはいわゆる分泌酵素によりタンパク質分解され、特にアミノ酸４０個の長さのＡβペプチド(Ａβ40)が生理的に形成される。他に短いまたは長い形状のＡβペプチドもまた産生され、特に４２アミノ酸のもの(Ａβ42)が高い凝集力を有している。その結果、アミロイド斑においては該Ａβ42が最も多く存在する形態となる。ひとつの可能なＡＤ治療戦略が、異なる切断（α、そして特にβおよびγ分泌酵素）の原因となる分泌酵素を攻撃することに主として焦点を当てている理由はそこにある。こうして、ＡＤ治療において当該酵素類の修飾剤および阻害剤がそれぞれ試みられている（例えば、ベンゾジアゼピン、スルフォンアミド、ベンゾカプロラクタム等）。
【００１０】
ＡＤに関わる更なる遺伝子がアポリポタンパク質Ｅであり、これには三つの対立遺伝子が存在する（ＡＰＯＥ２、ＡＰＯＥ３およびＡＰＯＥ４）。総人口と比較して、ＡＰＯＥ４のコピーをひとつまたは二つ有する人はＡＤに罹患する危険性がＡＰＯＥ２のキャリアーよりも高いことが示されている。また、スタチン類、即ちコレステロール生合成を阻害する薬物を服用している人はＡＤに罹患する危険性が有意に少ないことが示された。ＡＤの更なる治療戦略が、例えばスタチン類でもってコレステロール生合成を阻害することに焦点を当てている理由はそこにある。
【００１１】
ＡＤ治療の更なる側面は、脳の斑におけるアミロイド凝集阻害であり、これは分泌酵素阻害剤により同様に実現され得る。亜鉛が生理学的に該当する濃度で存在するとＡβの凝集を誘導し得るので、亜鉛濃度の低下もＡＤ治療の更なる側面として示唆されている。
【００１２】
先行技術において提案されているＡＤの更なる治療戦略はＡＰＰの発現阻止とＡβクリアランスの増加であり、ＡＰＰのプロモーター領域と相互作用し得る阻止物質が探索された。Ａβクリアランスに関しては、例えばインスリン分解酵素やネプロライシンのようなある種のプロテアーゼの活性増加、またはＡβ抗体の末梢適用等が示唆された(デマトス等(De Mattos et al.), PNAS 98(15)(2001), 8850-8855)。しかしながら、これらの試験はマウスモデルにおいて矛盾する結果を既に示した(ヴォルフ(Wolfe), (2002))。最後に、例えば、ＡＤ患者の血清中のアミロイドβのレベルを低下させて、既に存在するアミロイド斑を再溶解する試みがなされた。またこの関連では、アフェレーシスを用いて脳内βアミロイドタンパクの斑状沈着物を減少させる提案がなされた(米国特許6551266号；ここではアフェレーシスにより分子量が500kDより大の高分子を除去することが提案されている)が、ＡＤについては示されていない。にもかかわらず、脳細胞中に既に存在する斑状物の溶解はアフェレーシス法では直接的に可能でない(500kDを超える斑状物若しくは分子は血液脳関門を通過できない)。
【００１３】
既に述べたように、βアミロイド(Ａβ40およびＡβ42)斑の存在はＡＤのもっとも特筆すべき病理学的特徴である。Ａβの減少がＡＤの予防と治療における第一の薬学的目的とみなされる理由はそこにある。能動的な免疫化で抗Ａβ抗体を誘起してアミロイドを除去することを記述したが、そのような免疫化は処置を中止せざるを得ない重篤な副作用によりこれまでのところ成功していない。より最近の前臨床結果は抗体が末梢におけるＡβの減少を導き得ることを示し、Ａβ周辺の脳動力学を変化させる可能性はあるかも知れない。
【００１４】
更に、Ａβに高い親和性を有する薬物(例えば、ゲルソリンまたはCM1等)の末梢処置により脳内のＡβ量を減少させることが示された(マソーカ等(Masouka et al.), Journal of Neuroscience 2003: 29-33)。従って、血漿中のＡβ濃度を減少させ脳内の沈着を減少させ若しくは阻止することのできる一般法として化合物が提案されたことになる。これに基づくと、新たな治療薬の開発が可能であり、その活性は血液脳関門の通過に依存しない。
【００１５】
この血漿中Ａβの分画により誘発される脳からのＡβ流出に対し、血漿中Ａβ濃度に与える方法依存的な効果が示された：ゲルソリンは血漿中Ａβ濃度を低下させなかった：そのかわり、ゲルソリンの投与および抗Ａβモノクローナル抗体による能動的免役化は血漿中Ａβ濃度を増加させた。しかしながら、比較的若いＡＰＰ遺伝子組み換えマウスを実験で使用した場合にのみ脳内のＡβ負荷が減少した；６ヶ月より高齢のマウスを使用した場合、その方法は効果がないことが分かった。これは、高齢マウスの脳ではＡβの不溶解度が高くなるためと考えることができる。一方で、長期的な治療が成功する可能性はあるがゲルソリンまたはCM1、および能動的免役化のいずれも長期間の投与に適してはいない。
【発明の開示】
【００１６】
そこで本発明の目的は、アルツハイマー病に対して新たな治療および予防の戦略、特に成功裏な免疫化に基づく戦略を提供することである。
従って本発明ではＡβ流出誘導薬とＡβペプチド特異的アフェレーシスを含む併用療法を提供する。本発明によれば、Ａβ流出が誘導（例えば、ゲルソリン、ＧＭ１、Ａβペプチド特異的な能動的若しくは受動的ワクチン等の薬物により）され、その流出がＡβアフェレーシスにより持続される。この関連で、Ａβ、Ａβ誘導体またはＡβミモトープを含むワクチンにより一度または二度分画を誘導するのに十分である。
【００１７】
本発明において特に優先度の高い側面がアルツハイマー病(ＡＤ)の予防または治療のためのキットである理由がここにあり、該キットは
−血漿中のアミロイドβ(Ａβ)の分画を誘導する薬物、および
−血液若しくは血漿流動と接触し、アミロイドβ前駆体タンパク(ＡＰＰ)と結合する受容体を有する固体の担体を含むアフェレーシス器具、を含んでなる。
【００１８】
この発明のキットにおいて、ＡＰＰ結合受容体は好ましくは、抗ＡＰＰ抗体、（可溶性）Ａβ結合受容体、例えば抗Ａβ４０抗体または抗Ａβ４２抗体、ＡＰＰ結合タンパク、特にゲルソリン、アポＪまたはアポＥ、ＡＰＰ結合ペプチド、ＡＰＰ結合ガングリオシド、特にＧＭ１、またはＡＰＰ結合核酸、特にアプタマー、または該受容体の混合物から選択される。
該キットにおいて、アフェレーシス担体としては無菌で発熱性物質を除去したカラムが好ましくは使用される。
【００１９】
該キットにおいて、血漿中のアミロイドβ(Ａβ)分画を誘導する薬剤は好ましくはＡβに高い親和性を有する薬剤、特にゲルソリンまたはＧＭ１、Ａβ特異的ペプチドリガンドまたは核酸リガンド、Ａβ特異的な能動的若しくは受動的ワクチンまたはＡβ特異的ヒト化モノクローナル抗体から選択される。
Ａβ特異的な能動的ワクチンは好ましくはＡβ誘導体またはＡβミモトープである。
特に好ましいＡβ誘導体はその一部若しくは全体がＤ-アミノ酸より構成され、および／または天然アミノ酸を含まないペプチドより選択される。
【００２０】
Ａβミモトープは好ましくは下式ペプチド
【化１】
（式中、Ｘ１はアミノ酸であって、Ｃではなく、
Ｘ２はアミノ酸であって、Ｃではなく、
Ｘ３はアミノ酸であって、Ｃではなく、
Ｘ４はアミノ酸であって、Ｃではなく、
Ｘ５はアミノ酸であって、Ｃではなく、
Ｘ６はアミノ酸であって、Ｃではなく、
また、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６はＤＡＥＦＲＨではなく、当該ペプチドは天然のＮ端Ａβ４２配列のＤＡＥＦＲＨに特異的な抗体に対して結合能力を有し、さらにその５量体は天然のＮ端Ａβ４２配列のＤＡＥＦＲＨに特異的な当該抗体に対して結合能力を有する。）
を含み若しくは構成される。
【００２１】
特に好ましい式Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６のペプチドは；
Ｘ１はＧまたは水酸基若しくは負電荷を有するアミノ酸、好ましくはＥ、Ｙ、Ｓ若しくはＤであり；
Ｘ２は疎水性アミノ酸または正電荷を有するアミノ酸、好ましくはＩ、Ｌ、Ｖ、Ｋ、Ｗ、Ｒ、Ｙ、Ｆ、若しくはＡであり；
Ｘ３は負電荷を有するアミノ酸、好ましくはＤ若しくはＥであり；
Ｘ４は芳香族アミノ酸またはＬ、好ましくはＹ、Ｆ、若しくはＬであり；
Ｘ５はＨ、Ｋ、Ｙ、Ｆ、またはＲ、好ましくはＨ、ＦまたはＲであり、
Ｘ６はＳ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｋ、ＹまたはＧ、好ましくはＴ、Ｎ、Ｄ、Ｒ、Ｉ、またはＧである。
【００２２】
この関連で、天然に存在するタンパク質中の２０アミノ酸は化学的類似体またはＤ-アミノ酸でもって置き換えることが可能である；例えば、Ｌ、Ｉ、およびＶはＮｌｅ、Ｎｖａ、Ｃｈａまたはその他の直鎖若しくは環状脂肪族側鎖を有するアミノ酸で置き換えられ、ＷおよびＦは芳香族アミノ酸で、ＲおよびＫはアルカリ性アミノ酸、例えばオルニチンやホモアルギニンで置き換えられる。セリンやスレオニンは末端ＯＨ基がある脂肪族および／または芳香族側鎖を有するアミノ酸で置換するのに適している。このような交換の効率と効果は、例えばＰＣＴ／ＥＰ０４／００１６２に記述された実験モデルにより容易に確認することができる。付け加えると、立体的な検討もまた考慮されるべきである（該ペプチドと抗体の結合に関して、コンピュータモデルを利用して）。
【００２３】
特に好適なエピトープは次のエピトープより選択される；ＥＩＤＹＨＲ、ＥＬＤＹＨＲ、ＥＶＤＹＨＲ、ＤＩＤＹＨＲ、ＤＬＤＹＨＲ、ＤＶＤＹＨＲ、ＤＩＤＹＲＲ、ＤＬＤＹＲＲ、ＤＶＤＹＲＲ、ＤＫＥＬＲＩ、ＤＷＥＬＲＩ、ＹＲＥＦＦＩ、ＹＲＥＦＲＩ、ＹＡＥＦＲＧ、ＥＡＥＦＲＧ、ＤＹＥＦＲＧ、ＥＬＥＦＲＧ、ＤＲＥＬＲＩ、ＤＫＥＬＫＩ、ＤＲＥＬＫＩ、ＧＲＥＦＲＮ、ＥＹＥＦＲＧ、ＤＷＥＦＲＤＡ、ＳＷＥＦＲＴ、ＤＫＥＬＲ、ＳＦＥＦＲＧ、ＤＡＥＦＲＷＰ、ＤＮＥＦＲＳＰ、ＧＳＥＦＲＤＹ、ＧＡＥＦＲＦＴ、ＳＡＥＦＲＴＱ、ＳＡＥＦＲＡＴ、ＳＷＥＦＲＮＰ、ＳＷＥＦＲＬＹ、ＳＷＥＬＲＱＡ、ＳＶＥＦＲＹＨ、ＳＹＥＦＲＨＨ、ＳＱＥＦＲＴＰ、ＳＳＥＦＲＶＳ、ＤＷＥＦＲＤ、ＤＡＥＬＲＹ、ＤＷＥＬＲＱ、ＳＬＥＦＲＦ、ＧＰＥＦＲＷ、ＧＫＥＦＲＴ、ＡＹＥＦＲＨ、ＤＫＥ（Ｎｌｅ）Ｒ、ＤＫＥ（Ｎｖａ）Ｒ、およびＤＫＥ（Ｃｈａ）Ｒ。
【００２４】
本発明に従うと、Ａβ４２ミモトープはＡＤに対するワクチンとして用いられる；該ミモトープはＡβ４２に対する抗体産生を誘導するが天然のＡＰＰに対する抗体産生はしない。このミモトープは（モノクローナル）抗体と（市販の）ペプチドライブラリーにより同定することができる〔例えば、ライナク等(Reineke et al.), 2002「不作為に生成させた5520配列のペプチドアレイから、個々の抗体エピトープおよびミモトープの同定」、J. Immunol. Method., 267:37〕。ＡＰＰを認識せず、アミノ末端アスパラギン酸が異なるＡβ種のみを検出する（モノクローナル）抗体が用いられる（そのような抗体の例が、Johnson-Wood et al., 1997「遺伝子組み換えアルツハイマー病マウスモデルにおけるアミロイド前駆体タンパクのプロセシングとＡβ４２の沈着」PNAS, 94:1550に記載されている）。本発明の過程において、ワクチンに適したミモトープを同定する場合そのような抗体が理想的なツールであることが証明された。そのようなモノクローナル抗体はマウスに直接投与した場合有益な薬効を有することが示されたが(バード等(Bard et al.), 2000「末梢投与したアミロイドβペプチド抗体が中枢神経系に入り、アルツハイマー病マウスモデルにおける病状を軽減する」、Nature Med., 6:916)、ＡＤワクチン化合物を単離するためのミモトープ探索ツールとしての使用が提案されたことはなかった。
【００２５】
先行技術においては、すべての努力が天然に存在するＡβペプチドに集中していた。上述のとおり、Ａβペプチドワクチンの臨床治験は神経炎症的事象により中止された。実際、Ｔ細胞エピトープ予測プログラム（ＭＨＣクラスＩ制限エピトープについてのＢＩＭＡＳとＭＨＣクラスII制限エピトープについてのＴＥＰＩＴＯＰＥ）は配列中に高いスコアの（自己）エピトープを提案している。このことは、神経炎症的事象が自己免疫の結果であって、そのようなワクチンの一般適用が不適切なものとしてしまうことを意味する。
【００２６】
先行技術で提案されたそのようなＡβワクチンとは対照的に、本発明に従ったミモトープを含むワクチンによる治療においては自己免疫反応が生じることは予測できない。本発明に従ったミモトープ同定に用いる（モノクローナル）抗体はＡＰＰを認識せず、ミモトープ配列はこれまでの治験で使用され、またはこれからの治験で使用されるであろうＡβ４２由来の自己配列とは異なるからである。
【００２７】
本発明に従って、ミモトープ同定に用いられる抗体はアミノ末端がフリーなアスパラギン酸である、Ａβ由来のアミノ酸配列ＤＡＥＦＲＨ（もとのエピトープ）を検出し、自然のＡＰＰは認識しない。その抗体はモノクローナルまたはポリクローナルな抗体調製物、またはその一部若しくは誘導体の抗体でよく、唯一求められるのはその抗体分子がＤＡＥＦＲＨエピトープを特異的に認識すること、即ち、天然のアミロイド前駆体タンパクのＮ端延長形態に結合しないことであり、それはＤＡＥＦＲＨエピトープに対する結合能力がＡＰＰ分子に対する場合より、少なくとも１００倍、好ましくは少なくとも１０００倍、さらに好ましくは少なくとも１０５倍高いことを意味する。その抗体はＤＡＥＦＲＨ配列に対して、ジョンソン-ウッド等(Johnson-Wood et al.), 1997に記載された抗体と同程度、またはそれより高い結合能力を示す抗体であってもよい。高い結合能力がより好ましいが、より低い結合能力の抗体〔ジョンソン-ウッド等(Johnson-Wood et al.)の抗体の結合能力の＞10％、＞50％または＞80％〕もまた使用することができる。
【００２８】
本発明に従う化合物はＤＡＥＦＲＨ配列と同程度の特異性でもってこれらの抗体に結合する。
本発明に従って使用されるミモトープは５から１５アミノ酸の好ましい長さを有している。該化合物はワクチン中に単離された（ペプチド）形態で存在してもよいし、例えば、薬学的な担体物質若またはポリペプチド、脂質若しくは炭水化物構造のような他の分子と縮合または複合体化していてもよい。本発明に従うと、ミモトープの長さは好ましくは５から１５アミノ酸、６から１２アミノ酸残基、特に９から１１アミノ酸残基である。しかしながら、そのミモトープは非特異的なリンカー若しくは担体、特にペプチドリンカー若しくはタンパク質単体と縮合する（共有結合的または非共有結合的）ことが可能である。さらに、そのペプチドリンカー若しくはタンパク質単体はヘルパーＴ細胞エピトープにより構成され、またはこれを含み得る。
【００２９】
薬学的に許容される担体は好ましくは、シン等(Singh et al.), Nat. Biotech.,17(1999), 1075-1081（特に該文献の表１に記載のもの）およびオアガン等(O'Hagan et al.), Nature review, Drug Discovery 2(9) (2003), 727-735（特にこれに記載された内因性免疫増強化合物および分配系）に記載されたアジュバント物質またはその混合物のほか、ＫＬＨ、破傷風トキソイド、アルブミン結合タンパク、ウシ血清アルブミン、デンドリマー(MAP; Biol.Chem., 358; 581)である。その上、該ワクチン組成物は水酸化アルミニウムを含んでもよい。
【００３０】
本発明化合物（ミモトープ）および薬学的に許容される担体を含むワクチンは、いずれの適切な適用法、例えば、i.v.、i.p.、i.m.、鼻腔内、経口、皮下等により、そして任意の適切な分配具〔オアガン等(O'Hagan et al.), Nature review, Drug Discovery 2(9) (2003), 727-735〕により投与してもよい。該ワクチンは典型的には本発明化合物を0.1ngから10mg、好ましくは10ngから1mg、特に100ngから100μg、あるいは例えば100fＭおよび10μＭの間、好ましくは10pＭから1μＭの間、特に100pＭから100nＭの間で含む。該ワクチンはまた典型的な補助物質、例えば緩衝液、安定剤等を含んでもよい。
【００３１】
本発明に従うと、併用療法の過程で開始後のＡβ流出を維持するためアフェレーシス器具が提供される。該器具は血流若しくは血漿流動と接触させることのできる固体の担体を含み、該担体はアミロイドβ前駆体タンパク（ＡＰＰ）結合受容体を含む。本アフェレーシス器具により、ＡＤ患者およびＡＤに罹患する危険性のある人々はＡＰＰおよびＡＰＰ分解生成物、特にＡβ４０およびＡβ４２からアフェレーシスにより特異的に開放され、Ａβ隔離効果は第一過程で維持することができる。中枢神経系（ＣＮＳ）と血漿との間にはＡβ４２の動的な平衡が存在することが知られている。上記のとおり、マウスモデルにおいて〔デマトス(DeMattos), PNAS 2001、上記参照〕抗Ａβ抗体の末梢適用がＣＮＳおよび血漿のＡβ４２クリアランスに影響し、抗Ａβ抗体が血液脳関門を通過することなく脳におけるＡβ４２の負荷を軽減することを示すことができた。マツオカ等(Matsuoka et al.)(Journal of Neuroscience 2003: 29-33)は、他のＡβ４２結合分子（ゲルソリンおよびＧＭ１）を末梢適用してその結果を確認した。
【００３２】
これを手段として、脳内の便利な部位、即ち、既に血中においてプラークの発達過程を防ぐことができ、言い換えると、その後該タンパクおよび分解ペプチドはそれぞれもはや脳内に戻れずそこで凝集することもできない。脳内におけるプラーク発達の過程はまた、血中のＡβ４２を捕捉することで阻止可能である。そのようにする場合、患者血漿若しくは血中と接触するアフェレーシス器具の受容体がＡβ４２またはその他のＡＰＰ分解物に特異的であるかどうかは決定的ではなく、唯一の必須事項はＡＰＰおよびそのタンパク分解産物、特にＡβ４２が該特異的吸着により血中から除去され、その結果「悪玉」の（Ａβ４２への）タンパク分解が起こらずプラークが発達しないことである。従って、本発明は米国特許6551266号と比較し、まったく異なる適用に基づくアフェレーシスのアプローチであり、即ち、既存の構造的プラーク要素を除去するものでプラーク自身の除去ではない。それに血液のアフェレーシスは脳内のプラークが発達する領域には届かないので、アフェレーシスによるプラーク除去は、アフェレーシスによるＡＤ治療に関し効果がないものとして演繹的に除外することができる。
【００３３】
一方、体内におけるＡβ枯渇を誘導する他の方法（例えば、末梢抗Ａβ抗体を用いる〔デマトス等(DeMattos et al.),PNAS 98(15) (2001), 8850-8855〕）で長期にわたって行われるものに比して、発明の併用療法は自己免疫応答が開始されないという決定的な利点が含まれる。さらに本発明に従うと、体内でのみ（場合により特異的な部位に輸送された後においてのみ）作用する物質を患者に投与する必要はないが、病因物質は選択的に除去され、即ち、病気の原因は体外的に特異的に除去され、不要な体内での反応生成物は除かれる。
【００３４】
本発明に従うと、既に存在する既知のアフェレーシス器具はすべての態様において本発明に簡単に適用可能である。特に、固体の担体（およびアフェレーシス器具）を選択するときは、それらの医療適応性を考慮する必要がある。これらの担体、方法および器具類は、例えば、米国特許5,476,715号、6,036,614号、5,817,528号、および6,551,266号に記載されている。相当する市販のアフェレーシス器具は例えば、フレセニウス(Fresenius)、プラズマセレクト(Plasmaselect)、アサヒ(ASAHI)、カネカ(Kaneka)、ブラウン(Braun)等により頒布され、例えばLDL-Therasorb(登録商標)、Immunosorba(登録商標)、Prosorba(登録商標)、HELP(登録商標)、DALI(登録商標)、Bilirubin-Bile-Acid-Absorber BR-350、Prometheus(登録商標)解毒、MARS(登録商標)、MedicapのADAsorb、Plasma FLO等のシステムが提供されている。これらシステムの市販の形態は必ずしも単一のタンパクの特異的除去に向けられている訳ではないが、アフェレーシス分野の専門家であれば本発明に対し容易に適合化、例えば免疫アフェレーシスとして、および／または発明にかかる固体担体（例えばカラムとして）をアフェレーシス器具に組み合わせることが可能である。
【００３５】
従って、本発明に従うと、リガンドのＡＰＰおよびその生物学的副生成物、特にＡβ４２に親和性を有していて、ＡＤ患者若しくはＡＤに罹患するリスクのある人の血液または血漿から当該ポリペプチドを除去可能な物質はＡＰＰ-結合受容体として理解される。該ＡＰＰおよびＡβ４２受容体はそれぞれ、好ましくは（ポリ若しくはモノクローナル）抗体、タンパク質、ガングリオシドまたは核酸である。
抗ＡＰＰ抗体、抗Ａβ４０抗体若しくは抗Ａβ４２抗体、ＡＰＰ-結合タンパク、特にゲルソリン、アポＪ、アポＥ、ＡＰＰ-結合ペプチド、ＡＰＰ-結合ガングリオシド、特にＧＭ１、またはＡＰＰ−結合核酸、特にアプタマー、またはこれら受容体の混合物が特に好ましい。
【００３６】
このような抗体の例は３Ｄ６（Ａβ１-５）、２Ｈ３（Ａβ１-１２）、２Ｇ３（Ａβ３３-４０）、２１Ｆ２（Ａβ３３-４２）、１２Ｈ７（Ａβ３３-４２）(ジョンソン-ウッド等(Johnson-Wood et al.), PNAS 1997:1550-1555)、１０Ｄ５、１６Ｃ１１(バード等(Bard et al.), Nature Medicine 2000:916-919)、デマトス等(DeMattos et al.)(2001)に記載の抗体（ｍ２６６、ｍ２４３）のほか同様の特異性を有する抗体である。このような抗体は、例えば、ＡＰＰ、Ａβ４２またはそのフラグメント若しくは変異体を含むワクチン剤で動物を免疫化し、任意で細胞融合およびクローン選択（モノクローナル抗体で）の手順を加えることにより得られる。
ＡＰＰ-結合タンパク受容体の更なる例は、ゲルソリン(マツオカ等(Matsuoka et al.) 2003、上記参照)、アポＪおよびアポＥ(デマトス等(DeMattos et al.), 2001、上記参照)である。ＧＭ１はＡＰＰ-結合ガングリオシド受容体(マツオカ等(Matsuoka et al.) 2003、上記参照)の例である。
【００３７】
この関連では、ＡＰＰ-結合受容体として作用するペプチドはＤ-アミノ酸、Ｌ-アミノ酸、若しくはＤ-およびＬ-アミノ酸の組み合わせを含むことができ、また任意で、環形成や誘導体化等のさらなる修飾を受けていてもよい。適切なペプチド受容体、例えばＡβ４２は、市販のペプチド・ライブラリーから提供され得る。これらペプチドは好ましくは、少なくとも５アミノ酸、好ましくは６アミノ酸、特に好ましくは少なくとも８アミノ酸の長さを有し、好ましい長さは最大で１０アミノ酸、好ましくは最大で１４若しくは２０アミノ酸である。しかしながら、本発明によれば、より長いペプチドも問題なくＡＰＰ-結合受容体として用いることができる。その上、オリゴマー（例えば、ポリエチレンイミンおよびポリリシン）も適切な受容体である。
当然ながら、ファージ・ライブラリー、ペプチド・ライブラリー（上記参照）若しくは構造ライブラリー（例えば異なる構造に関するコンビナトリアル・ケミストリーやハイスループット・スクリーニングによって得られる）もまたこのようなＡＰＰ-結合受容体を得るのに適している。
【００３８】
さらに、核酸に基づくＡＰＰ-結合受容体（「アプタマー」；または「デコイ」オリゴデオキシヌクレオチド、即ち、その配列において転写因子の結合部位を構成するdsオリゴヌクレオチド）を用いることができる。ここで、当該核酸は種々の（オリゴヌクレオチド）ライブラリー（例えば、２-１６０核酸残基）により検出することができる；例えば、バーグストーラー等(Burgstaller et al.), Curr.Opin.Drug Discov. Dev., 5(5)(2002),690-700; ファムロク等(Famulok et al.), Acc.Chem.Res., 33(2000),591-599; メイヤー等(Mayer et al.), PNAS 98(2001),4961-4965; およびその他多数。核酸の骨格は、例えば天然のリン酸ジエステル化合物により、およびホスホロチオエート、組み合わせまたは化学的変異体（例えばPNAとして）によっても検出可能であり、ここで本発明に従うと、基本的にはＵ、Ｔ、Ａ、Ｃ、Ｇ、ＨおよびｍＣを塩基として使用できる。
【００３９】
本発明に従って使用することのできるヌクレオチドの２′-残基は好ましくはＨ、ＯＨまたは他の保護基であり、２′位の修飾（核酸も修飾が可能）は、オリゴヌクレオチド合成で通常使用されるので、例えば保護基でもって提供される。酸素原子のエーテル化は保護基として理解されるが、２′位の修飾においてＯＨ基は異なるもので置き換えられる。先行技術には両方の場合につき多くの異なる可能性が記述されている；メチル、アリル、プロピル等の保護基（即ち、例えば、２′-ＯＣＨ３、２′-Ｏ-ＣＨ＝ＣＨ３、等）が特に好まれ；特に好ましい修飾は２′-デオキシ、２′-アミノ、２′-フルオロ、２′-ブロモ、２′-アジドの他セレン等の金属もある。さらに、本発明によれば、アンチセンス技術（リボザイム、ＲＮＡｉ等）のために発展したオリゴヌクレオチドの安定化方法もまた核酸（例えばこの領域をリードするＩＳＩＳとリボザイム・ファーマシューチカルズを、特にその特許文献とホームページを比較せよ）を提供するために用いられる。
【００４０】
ＡＰＰ-結合アプタマー（本発明および上記の定義に従うと、Ａβ４２結合アプタマーをまた含む）がまた、本発明の範囲内における好ましいＡＰＰ-結合受容体である理由はここにある。
従って、好ましくはペプチド、抗体または核酸より構成されるＡＰＰ-結合受容体は、アルツハイマー病患者およびアルツハイマー病に罹患するリスクのある人においてＡＰＰおよびそのタンパク分解生成物を体外に除去する担体物質として用いられる。
【００４１】
本発明を医療の日常診療に使用する場合、本発明に従うすべての担体物質、すべての受容体／担体の組み合わせがその特性を満たし、それぞれ好ましいものであるためには、担体は殺菌され、発熱物質を含まないことが必要である（米国特許6030614号、または5476715号参照）。多孔性ホモポリマー、ビニルを含むモノマーコポリマー若しくはターポリマー（例えば、ＴＳＫトヨパールやフラクトゲルＴＳＫ等のアクリル酸）、オキシランを含む化合物（例えばエピクロロヒドリン）で修飾（活性化）され、および任意でＮＨ３、アミノ若しくはカルボキシルを含む化合物またはＣＮＢｒで反応させた担体、ＥＰ110,409AやＤＥ36,17,672Aに開示されたＣＮＣＬ吸着剤等が適切な例である。治療目的に特に好ましい吸着物質は血液細胞の損失を避けるのに適していて、補体系を活性化せず若しくはほとんど活性化しない；そして体外循環における会合体の形成を可能な限り遅らせる。さらに使用された担体物質は受容体結合形態においても殺菌措置、特に飽和エチレンオキシド、飽和グルタルアルデヒド、ガンマ線照射、蒸気、ＵＶ、溶媒および／または洗剤による処置に対して十分安定であることが好ましい。セファロース、アガロース、アクリル、ビニル、およびデキストラン等による生成物もまた使用される；これらはＡＰＰ-結合受容体との結合に適切な好ましい官能基を有していて既に市販されている。さらに好ましい担体にはモノリス（グリシジルメタクリレートとエチレングリコールジメタクリレート共重合体）も含まれる。
【００４２】
受容体と適切な担体との結合には当業者によく知られた化学を用いることができる（例えば、「生物接合テクニック」(Bioconjugate Techniques)、Greg T. Hermanson編、Academic Press,Inc San Diego, CA, 1995, 785 pp）。
さらなる側面によれば、本発明は発明の併用療法の範囲内においてそれぞれの患者の治療に用具を適合させることによる、アルツハイマー病若しくはそのような病気の予防のための治療用具、またはその治療のための発明用具の使用に関する。治療を行う場合、ＡＰＰポリペプチドを効率よく除去するため、患者にアフェレーシス器具を十分長い時間結合し、患者の血液若しくは血漿の流れをＡＰＰ結合受容体を含む固体の担体に接触させてＡＰＰおよび／またはＡＰＰのタンパク質分解物、特にＡβ４２を結合させる。アフェレーシス治療の過程において、十分な抗凝血と、末梢または中枢の静脈血管のアクセスおよび動静脈瘻は確かに確保され、必要な大量および測定データは記録される。その上、アフェレーシス法の多くは適切な血漿処理前に血漿と血液細胞との一次分離を必要とする。そのような予防的措置が必要な特別な人々は、家族性因子高齢者（＞50、＞60または＞70歳）または別のＡＤ危険因子、特に遺伝子因子を有する人々である。
【００４３】
さらに中心的側面によれば、本発明はアルツハイマー病（ＡＤ）の予防または治療に関し、ここでアミロイドβ（Ａβ）の結晶中への隔離を促す薬物を患者に投与し、該患者はアフェレーシス器具で治療される；該器具は血液若しくは血漿流と接触させる固体の担体を有し、その担体にはアミロイドβ前駆体タンパク（ＡＰＰ）結合受容体が存在してアフェレーシス器具の使用により患者の血中からＡＰＰが除かれる。
該方法は好ましくは本発明のキットにより実施される。
従って本発明はまた、上述のとおりＡβミモトープの使用に関し、これはＡＤの治療若しくは予防のための発明の併用治療に用いられる。
本発明は続く実施例によりより詳細に説明されるが、これは決して制限するものではない。
【実施例】
【００４４】
１．ＡＰＰ受容体を有する担体の製造
１．１ モノリスカラム
製造者の指示書に従い、ＣＩＭ（登録商標）エポキシモノリスカラム（ＢＩＡセパレーションズ、ＳＩ）を0.5M Ｎａ-リン酸緩衝液、pH８．０で平衡化し、Ａβペプチドに対するモノクローナル抗体も製造者の指示書に従って活性化してＣＩＭカラムと結合させる。このカラムをリン酸緩衝液（＋1M ＮａＣｌ）で数回洗浄し、任意で余ったエポキシ基をブロックする。
品質保証は洗浄および平衡溶出液の制御により行う；溶出液中に活性なエポキシ基および抗体の漏れがないカラムのみを次工程に供し、アフェレーシス器具に取り付ける。
１．２ セファロースカラム
バルクのアガロース原料（セファロースＣＬ４Ｂ）を無菌のまま殺菌済みの発熱物質なしの容器に満たして無菌的に洗浄する；ここでそのゲル原料は各洗浄ごとに減圧下で完全に乾燥させる。それから、このセファロースをオートクレーブ中115℃で30分間蒸気にて殺菌する。
【００４５】
殺菌処理後、このセファロースを殺菌済み容器の中で60％アセトン-水中にとり、ＣＮＢｒとトリエチルアミンで活性化する（ＣＮＢｒ 14g／アセトン 96ml；トリエチルアミン 30ml／87％-アセトン 408ml）。それから、アセトン／ＨＣｌ溶液を加えた（殺菌済み、発熱物質フリーの水 392mL；5N ＨＣｌ 16.3ml；アセトン 408ml）。活性化セファロースを洗浄し、活性化基の加水分解を防ぐため２時間以内に結合反応に供する。
無菌ろ過した抗体液（それぞれｍ２６６およびｍ２４３）を反応容器に入れて少なくとも９０分間撹拌した。最後に溶出液中に反応生成物が検出できなくなるまで反応溶液を徹底的に洗浄し（等張リン酸緩衝液）、抗体結合セファロースを殺菌済み、発熱物質フリーの焼結ガラス付ガラス製カラムに充填して、最後の品質保証を実施する（反応生成物および重金属等について溶出液分析；粒子分析、発熱、無菌性）。
２．アルツハイマー病患者のアフェレーシス治療の動物モデル
近年、ドイツ国カールスブルグの糖尿病協会「ゲルハルトカッツェ」で、自由に動き回る小動物において実験的なアフェレーシスのための空間体外系が開発された。このアフェレーシス療法は一匹のそして同じ動物に対して繰り返し適用ができる。その上、用いられた動物は次のアフェレーシス療法の長期の評価研究でも利用される。当該実験的アフェレーシス系の使用はいくつかのラット種において成功裏に示された。繰り返しアフェレーシス療法はＩ型糖尿病およびII型コラーゲン誘発関節炎ラットにおいて体重250ｇ以上の場合耐えることができる。
【００４６】
実験的アフェレーシス療法を開始する前に、動物に動脈および静脈カテーテルを取り付ける。アフェレーシスの第一段階で、プラズマフィルターを用いて、血液細胞と血漿を分離する。血液細胞は該動物に直接再灌流する（静脈カテーテルを経由）一方、分離した結晶は動物に再供給する前に実施例１で製造した吸着剤を通過させる。
或いはＬＤＬについてＤＡＬＩアフェレーシスをするようにそれと同様の全血アフェレーシスも実施してもよい。
３．動物モデルにおける独創的な併用療法
動物モデルにおける併用療法は基本的に、アフェレーシスの前、途中または後にＡβの流出が生じるようになされる。さらに、二つの療法の適用の頻度は互いに変化させることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルツハイマー病を治療しまたは予防するためのキットで；
-血漿中のアミロイドβ（Ａβ）の隔離を誘導する薬物、および
-血液流または血漿流と接触させることができ、アミロイドβ-前駆体タンパク（ＡＰＰ）と結合する受容体を有する固体の担体を含むアフェレーシス器具、を含むキット。
【請求項２】
ＡＰＰ結合受容体が、抗ＡＰＰ抗体、Ａβ結合受容体、特に抗Ａβ４０抗体若しくは抗Ａβ４２抗体、ＡＰＰ結合タンパク、特にゲルソリン、アポＪ若しくはアポＥ、ＡＰＰ結合ペプチド、ＡＰＰ結合グリコリピド、好ましくはガングリオシド、特にＧＭ１、またはＡＰＰ結合核酸、特にアプタマー、およびこれら受容体の混合物から選択されることを特徴とする、請求項１のキット。
【請求項３】
該担体が発熱物質を含まず無菌のカラムであることを特徴とする、請求項１または２のキット。
【請求項４】
血漿中のアミロイドβ（Ａβ）の隔離を誘導する該薬物が、Ａβに高い親和性を有する薬物、特にゲルソリンまたはＧＭ１、Ａβ特異的抗体、ペプチド若しくは核酸、またはＡβ特異的な能動的若しくは受動的ワクチンから選択されることを特徴とする、請求項１から３のいずれかのキット。
【請求項５】
該Ａβ特異的な能動的ワクチンがＡβ誘導体またはＡβミモトープである、請求項１から４のいずれかのキット。
【請求項６】
該Ａβ誘導体が、その一部若しくは全部がＤ−アミノ酸および／または非天然アミノ酸で構成されるペプチドから選択される、請求項５のキット。
【請求項７】
該Ａβミモトープが下式ペプチド
【化１】
〔式中、Ｘ１はＣ以外のアミノ酸、
Ｘ２はＣ以外のアミノ酸、
Ｘ３はＣ以外のアミノ酸、
Ｘ４はＣ以外のアミノ酸、
Ｘ５はＣ以外のアミノ酸、
Ｘ６はＣ以外のアミノ酸であって、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６はＤＡＥＦＲＨではなく、該ペプチドは天然のＮ−末端Ａβ４２配列ＤＡＥＦＲＨに特異的な抗体に結合する能力を有し、またその５量体が天然のＮ末端Ａβ４２配列ＤＡＥＦＲＨに特異的な抗体に結合する能力を有する。〕
を含み、または、により構成されることを特徴とする、請求項５のキット。
【請求項８】
その式Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６において、
Ｘ１はＧ、ヒドロキシル基を有するアミノ酸または負に荷電したアミノ酸であって、好ましくはＥ、Ｙ、Ｓ若しくはＤであり；
Ｘ２は疎水性アミノ酸または正に荷電したアミノ酸であって、好ましくはＩ、Ｌ、Ｖ、Ｋ、Ｗ、Ｒ、Ｙ、Ｆ若しくはＡであり；
Ｘ３は負に荷電したアミノ酸であって、好ましくはＤ若しくはＥであり；
Ｘ４は芳香族アミノ酸またはＬであって、好ましくはＹ、Ｆ若しくはＬであり；
Ｘ５はＨ、Ｋ、Ｙ、ＦまたはＲであって、好ましくはＨ、Ｆ若しくはＲであり；
Ｘ６はＳ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｋ、ＹまたはＧであって、好ましくはＴ、Ｎ、Ｄ、Ｒ、Ｉ若しくはＧであり；
特に同ペプチドが、ＥＩＤＹＨＲ、ＥＬＤＹＨＲ、ＥＶＤＹＨＲ、ＤＩＤＹＨＲ、ＤＬＤＹＨＲ、ＤＶＤＹＨＲ、ＤＩＤＹＲＲ、ＤＬＤＹＲＲ、ＤＶＤＹＲＲ、ＤＫＥＬＲＩ、ＤＷＥＬＲＩ、ＹＲＥＦＦＩ、ＹＲＥＦＲＩ、ＹＡＥＦＲＧ、ＥＡＥＦＲＧ、ＤＹＥＦＲＧ、ＥＬＥＦＲＧ、ＤＲＥＬＲＩ、ＤＫＥＬＫＩ、ＤＲＥＬＫＩ、ＧＲＥＦＲＮ、ＥＹＥＦＲＧ、ＤＷＥＦＲＤＡ、ＳＷＥＦＲＴ、ＤＫＥＬＲ、ＤＡＥＦＲＷＰ、ＤＮＥＦＲＳＰ、ＳＡＥＦＲＴＱ、ＳＡＥＦＲＡＴ、ＳＷＥＦＲＮＰ、ＳＷＥＦＲＬＹ、ＳＷＥＬＲＱＡ、ＳＶＥＦＲＹＨ、ＳＹＥＦＲＨＨ、ＳＱＥＦＲＴＰ、ＳＳＥＦＲＶＳ、ＤＷＥＦＲＤ、ＤＡＥＬＲＹ、ＤＷＥＬＲＱ、ＳＬＥＦＲＦ、ＧＰＥＦＲＷ、ＧＫＥＦＲＴ、またはＳＦＥＦＲＧであることを特徴とする、請求項７のキット。
【請求項９】
アルツハイマー病を予防しまたは治療する方法であって、血漿中のアミロイドβ（Ａβ）の隔離を誘導する薬物をヒトに投与し、そのヒトをアフェレーシス器具で治療し、該器具は、血液流または血漿流と接触させることができ、アミロイドβ-前駆体タンパク（ＡＰＰ）と結合する受容体を有する固体の担体を含んでいて、そのアフェレーシス器具によりそのヒトの血中からＡＰＰが除去される方法。
【請求項１０】
請求項１から８のいずれかのキットが使用される、請求項９の方法。
【請求項１１】
ＡＤを予防し又は治療するための請求項１の併用療法で用いる薬物を製造するための、請求項７または８で定義された、Ａβミモトープの使用。
【請求項１】
アルツハイマー病を治療しまたは予防するためのキットで；
-血漿中のアミロイドβ（Ａβ）の隔離を誘導する薬物、および
-血液流または血漿流と接触させることができ、アミロイドβ-前駆体タンパク（ＡＰＰ）と結合する受容体を有する固体の担体を含むアフェレーシス器具、を含むキット。
【請求項２】
ＡＰＰ結合受容体が、抗ＡＰＰ抗体、Ａβ結合受容体、特に抗Ａβ４０抗体若しくは抗Ａβ４２抗体、ＡＰＰ結合タンパク、特にゲルソリン、アポＪ若しくはアポＥ、ＡＰＰ結合ペプチド、ＡＰＰ結合グリコリピド、好ましくはガングリオシド、特にＧＭ１、またはＡＰＰ結合核酸、特にアプタマー、およびこれら受容体の混合物から選択されることを特徴とする、請求項１のキット。
【請求項３】
該担体が発熱物質を含まず無菌のカラムであることを特徴とする、請求項１または２のキット。
【請求項４】
血漿中のアミロイドβ（Ａβ）の隔離を誘導する該薬物が、Ａβに高い親和性を有する薬物、特にゲルソリンまたはＧＭ１、Ａβ特異的抗体、ペプチド若しくは核酸、またはＡβ特異的な能動的若しくは受動的ワクチンから選択されることを特徴とする、請求項１から３のいずれかのキット。
【請求項５】
該Ａβ特異的な能動的ワクチンがＡβ誘導体またはＡβミモトープである、請求項１から４のいずれかのキット。
【請求項６】
該Ａβ誘導体が、その一部若しくは全部がＤ−アミノ酸および／または非天然アミノ酸で構成されるペプチドから選択される、請求項５のキット。
【請求項７】
該Ａβミモトープが下式ペプチド
【化１】
〔式中、Ｘ１はＣ以外のアミノ酸、
Ｘ２はＣ以外のアミノ酸、
Ｘ３はＣ以外のアミノ酸、
Ｘ４はＣ以外のアミノ酸、
Ｘ５はＣ以外のアミノ酸、
Ｘ６はＣ以外のアミノ酸であって、Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６はＤＡＥＦＲＨではなく、該ペプチドは天然のＮ−末端Ａβ４２配列ＤＡＥＦＲＨに特異的な抗体に結合する能力を有し、またその５量体が天然のＮ末端Ａβ４２配列ＤＡＥＦＲＨに特異的な抗体に結合する能力を有する。〕
を含み、または、により構成されることを特徴とする、請求項５のキット。
【請求項８】
その式Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６において、
Ｘ１はＧ、ヒドロキシル基を有するアミノ酸または負に荷電したアミノ酸であって、好ましくはＥ、Ｙ、Ｓ若しくはＤであり；
Ｘ２は疎水性アミノ酸または正に荷電したアミノ酸であって、好ましくはＩ、Ｌ、Ｖ、Ｋ、Ｗ、Ｒ、Ｙ、Ｆ若しくはＡであり；
Ｘ３は負に荷電したアミノ酸であって、好ましくはＤ若しくはＥであり；
Ｘ４は芳香族アミノ酸またはＬであって、好ましくはＹ、Ｆ若しくはＬであり；
Ｘ５はＨ、Ｋ、Ｙ、ＦまたはＲであって、好ましくはＨ、Ｆ若しくはＲであり；
Ｘ６はＳ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｉ、Ｋ、ＹまたはＧであって、好ましくはＴ、Ｎ、Ｄ、Ｒ、Ｉ若しくはＧであり；
特に同ペプチドが、ＥＩＤＹＨＲ、ＥＬＤＹＨＲ、ＥＶＤＹＨＲ、ＤＩＤＹＨＲ、ＤＬＤＹＨＲ、ＤＶＤＹＨＲ、ＤＩＤＹＲＲ、ＤＬＤＹＲＲ、ＤＶＤＹＲＲ、ＤＫＥＬＲＩ、ＤＷＥＬＲＩ、ＹＲＥＦＦＩ、ＹＲＥＦＲＩ、ＹＡＥＦＲＧ、ＥＡＥＦＲＧ、ＤＹＥＦＲＧ、ＥＬＥＦＲＧ、ＤＲＥＬＲＩ、ＤＫＥＬＫＩ、ＤＲＥＬＫＩ、ＧＲＥＦＲＮ、ＥＹＥＦＲＧ、ＤＷＥＦＲＤＡ、ＳＷＥＦＲＴ、ＤＫＥＬＲ、ＤＡＥＦＲＷＰ、ＤＮＥＦＲＳＰ、ＳＡＥＦＲＴＱ、ＳＡＥＦＲＡＴ、ＳＷＥＦＲＮＰ、ＳＷＥＦＲＬＹ、ＳＷＥＬＲＱＡ、ＳＶＥＦＲＹＨ、ＳＹＥＦＲＨＨ、ＳＱＥＦＲＴＰ、ＳＳＥＦＲＶＳ、ＤＷＥＦＲＤ、ＤＡＥＬＲＹ、ＤＷＥＬＲＱ、ＳＬＥＦＲＦ、ＧＰＥＦＲＷ、ＧＫＥＦＲＴ、またはＳＦＥＦＲＧであることを特徴とする、請求項７のキット。
【請求項９】
アルツハイマー病を予防しまたは治療する方法であって、血漿中のアミロイドβ（Ａβ）の隔離を誘導する薬物をヒトに投与し、そのヒトをアフェレーシス器具で治療し、該器具は、血液流または血漿流と接触させることができ、アミロイドβ-前駆体タンパク（ＡＰＰ）と結合する受容体を有する固体の担体を含んでいて、そのアフェレーシス器具によりそのヒトの血中からＡＰＰが除去される方法。
【請求項１０】
請求項１から８のいずれかのキットが使用される、請求項９の方法。
【請求項１１】
ＡＤを予防し又は治療するための請求項１の併用療法で用いる薬物を製造するための、請求項７または８で定義された、Ａβミモトープの使用。
【公表番号】特表２００８−５０６６６５（Ｐ２００８−５０６６６５Ａ）
【公表日】平成２０年３月６日（２００８．３．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２０８１３（Ｐ２００７−５２０８１３）
【出願日】平成１７年７月６日（２００５．７．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０５３２２４
【国際公開番号】ＷＯ２００６／００５７０６
【国際公開日】平成１８年１月１９日（２００６．１．１９）
【出願人】（５０６０８３６０４）アフィリス・フォルシュングス−ウント・エントヴィックルングス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング (12)
【氏名又は名称原語表記】ＡＦＦＩＲＩＳ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓ− ｕｎｄ Ｅｎｔｗｉｃｋｌｕｎｇｓ ＧｍｂＨ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年３月６日（２００８．３．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年７月６日（２００５．７．６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／０５３２２４
【国際公開番号】ＷＯ２００６／００５７０６
【国際公開日】平成１８年１月１９日（２００６．１．１９）
【出願人】（５０６０８３６０４）アフィリス・フォルシュングス−ウント・エントヴィックルングス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング (12)
【氏名又は名称原語表記】ＡＦＦＩＲＩＳ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇｓ− ｕｎｄ Ｅｎｔｗｉｃｋｌｕｎｇｓ ＧｍｂＨ
【Ｆターム（参考）】
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