ウリ科植物の抽出物またはウリ科植物の抽出物から単離した精製抽出物から構成される抗脂肪生成および抗肥満活性を有する組成物
本発明は、抗脂肪生成および高肥満活性を有するウリ科植物の抽出物またはウリ科植物の抽出物から単離した精製抽出物、およびそれから構成される組成物に関する。本発明のウリ科植物の抽出物は体重を減少させ、血液中のトリグリセリド及びコレステロールレベルを低下させ、ＰＰＡＲアルファ及びデルタの働きを活性化させ、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼの遺伝子発現を抑え、毒性を持たない脂肪前駆細胞からの脂肪生成を抑制する強力な効果を有する。したがって本発明の抽出物は薬品もしくはヘルスケア食品の形態で肥満及び脂肪生成関連疾病を予防するために有効に利用することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウリ科植物の抽出物またはウリ科植物の抽出物から単離した精製抽出物から構成される、抗脂肪生成および抗肥満活性を有する組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
脂肪生成とは、前脂肪細胞が成熟した脂肪細胞に分化する過程のことであり、細胞質小器官に脂質滴と言われる脂質が蓄積し、肥満、糖尿病、脂肪症、冠状動脈性心臓病等の様々な成人病を引き起こす危険性があることが知られている。線維芽細胞といった前駆脂肪細胞が分化して成熟脂肪細胞となり、脂質滴がその内部に形成される。分化のメカニズムは３Ｔ３−Ｌ１といった特定の細胞株を使用して研究されてきた。脂肪細胞の分化は形態、ホルモン感受性、遺伝子の発現における連携した変化を伴う複雑な過程である。これらの変化はＣ／ＥＢＰ（ＣＡＡＴエンハンサー結合タンパク質）、ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体）、ＡＤＤ／ＳＲＥＢＰ（脂肪細胞決定分化依存性因子１／ステロール調節エレメント結合タンパク質）等のいくつかの転写因子によって制御されている（Ｂａｒｔ Ａ Ｊｅｓｓｅｎ他。Ｇｅｎｅ， ２９９， ｐｐ９５−１００， ２００２； Ｄａｒｉｎｇｔｏｎ 他。Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７３， ｐｐ３００５７−３００６０， １９９８； Ｂｒｕｎ Ｒ．Ｐ 他。Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．， ８， ｐｐ８２６−８３２， １９９６）。脂肪細胞の分化において、これらの転写因子は異なる段階で誘導され機能的に相互作用し、遺伝子の発現を制御することで脂肪生成と脂質生成とを行う。例えば、Ｃ／ＥＢＰベータおよびデルタ因子は、ＭＤＩ（イソブチルメチルキサンチン、デキサメタゾン、インシュリン）等の外的ホルモン刺激によって一時的に過剰発現されると脂肪細胞の分化を引き起こし（Ｒｅｕｓｃｈ Ｊ． Ｅ．他。Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．， ２０， ｐｐ１００８−１０２０， ２０００）、続いてＣ／ＥＢＰアルファおよびＰＰＡＲガンマの増加を誘導する（Ｊａｍｅｓ Ｍ． Ｎ． 他。Ｊ． Ｎｕｔｒ．， １３０， ｐｐ３１２２Ｓ−３１２６Ｓ， ２０００）。特に、脂肪細胞においては主にＰＰＡＲガンマが発現し、脂肪生成を決定する鍵となる転写因子である。ＰＰＡＲガンマはＲＸＲ（レチノイン酸Ｘ受容体）とヘテロ二量体を形成し、脂肪生成に関係する様々な遺伝子のプロモーター中のＰＰＲＥ（ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体）に結合する（Ｔｏｎｔｏｎｏｚ Ｐ． Ｅ． 他。Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．， ８， ｐｐ１２２４−１２３４， １９９４）。脂肪細胞の分化においてＣ／ＥＢＰアルファとＰＰＡＲガンマとの相互作用は非常に重要であり、これらの因子が脂肪酸結合タンパク質であるａＰ２および脂質代謝酵素等の脂肪細胞に特異的な遺伝子の発現を制御する。特に、ＡＤＤ１／ＳＲＥＢＰは脂質生成およびインシュリン刺激による遺伝子発現においても重要な役割を果たしており、ＡＤＤ１／ＳＲＥＢＰ１ｃの発現はＰＰＡＲガンマの活性化につながる（Ｒｏｓｅｎ Ｅ．Ｄ．他。Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ．， １６， ｐｐ１４５−１７１， ２０００； Ｏｓｂｏｒｎ Ｔ． Ｆ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７５． ｐｐ３２３７９−３２３８２， ２０００）。分化を終えた脂肪細胞は脂質を合成し、トリグリセリドとして貯蔵する。
【０００３】
その一方で、脂質代謝の恒常性は脂肪の合成と分解との釣りあいによって保たれている。ＡＤＤ１／ＳＲＥＢＰ１は脂肪酸、トリグリセリド、コレステロール、リン脂質等の合成をコントロールしている（Ｈｏｒｔｏｎ Ｊ． Ｄ． 他。Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．， １０９， ｐｐ１１２５−１１３１， ２００２）。ＳＲＥＢＰは約１１５０個のアミノ酸前駆体として合成され、小胞体と核膜に結合している。活性であるためには、細胞核に入ることができるように膜結合型ＳＲＥＢＰをタンパク質分解により切断してＮ末端セグメントを遊離しなければならない。切断したＳＲＥＢＰは核型を指定し、制御遺伝子プロモーター内のＳＲＥ（ステロール調節型エレメント）に結合する。ＳＲＥＢＰアイソフォームの１つであるＳＲＥＢＰ１ｃによって制御される遺伝子にはＡＣＬ（ＡＴＰシトレートリアーゼ）、ＡＣＣ（アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ）、ＦＡＳ（脂肪酸合成酵素）およびＳＣＤ（ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ）等が挙げられる（Ｏｓｂｏｒｎ Ｔ． Ｆ． 他。Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７５， ｐｐ３２３７９−３２３８２， ２０００； Ｓｏａｚｉｇ Ｌ． Ｌ． 他。Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７７， ｐｐ３５６２５−３５６３４， ２００２）。ＰＰＡＲアルファが、ＬＰＬ（リポタンパク質リパーゼ）、アポタンパク質、ＡＣＯ（アシルＣｏＡオキシダーゼ）、チオラーゼ等の脂質代謝酵素を制御することで（Ｄｒｅｙｅｒ Ｃ他。Ｃｅｌｌ， ６８， ｐｐ８７９−８８７， １９９２）脂質分解の制御における重要な役割を担っていることは以前から報告されていた（Ｂｅｉｓｉｅｇｅｌ Ｕ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， ９６， ｐｐ１３６５６−１３６６１， １９９９）。
【０００４】
肥満は長年に渡る、エネルギー摂取とエネルギー消費の不均衡から脂肪蓄積量の増大が起こったものである。肥満のメカニズムは完全には理解されていないが、複雑な相互作用関係にある神経、ホルモン、遺伝的、環境的要素が西洋風の食事により肥満の蔓延を引き起こしていると考えられている。脂肪の過剰な蓄積は糖尿病、高血圧、異常脂質血症、心疾患等の様々なメタボリック症候群を高い確率で引き起こすリスク要因になり得る（Ｍａｎｓｏｎ他。Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ． Ｍｅｄ．， ３３３， ｐｐ６７７−６８５， １９９５； Ｋｏｐｌｅｍａｎ Ｐ． Ｇ．， Ｎａｔｕｒｅ， ４０４ ｐｐ６３５−６４３， ２０００； Ｍｕｓｔ他。ＪＡＭＡ ２８２， ｐｐ１５２３−１５２９． １９９９）。
【０００５】
ゼニカル（登録商標、スイス・ロシェ社）、リダクティル（登録商標、米国・アボット社）、エクソリゼ（登録商標、フランス・アトファルマ社）等が代表的な抗肥満薬として良く知られているが、心臓病、呼吸器疾患、ニューロン系疾患等の副作用があることから、より効果的な薬剤への需要がある。
【０００６】
近年の抗肥満薬開発の焦点は、食事量の減量、カロリー摂取の阻害、発熱反応の刺激、エネルギー代謝の調整、ニューロン神経系を通じてのシグナル伝達のコントロールである（Ｋｏｐｌｅｍａｎ Ｐ． Ｇ．， Ｎａｔｕｒｅ， ４０４ ｐｐ６３５−６４３， ２０００）。効果的な抗肥満薬を開発する試みは今までにも多くなされてきたが、安全性はもとより強力な効き目を示す、満足のいく薬剤はいまだ開発されていなかった。
【０００７】
従って、その安全性が証明されている天然成分を用いて効果的な抗肥満薬の開発を試みるほうが、合成物質を用いるよりもずっと効果的である。
【０００８】
双子葉植物網ウリ科に属する植物のほとんどは一年生または多年生のつる植物であり、熱帯および亜熱帯域に分布する。中でも、Ｍｅｌｏｔｈｒｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｓｃｈｚｏｐｅｐｏｎ ｂｒｙｏｎｉａｅｆｏｌｉｕｓ、Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍとその同類が分布しており、カボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）、きゅうり（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ）およびその同類が韓国で栽培されている。
【０００９】
ククルビチンと、リノール酸、オレイン酸、カロチン等の油脂を含むカボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）の駆虫作用；シトルリン、アラニン、果糖、グルコース等を含むスイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）の強力な利尿作用；洗浄用品としてのヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）；配糖体、コーヒー酸、ククルビタシン等を含むきゅうり（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ）の利尿作用が、文献により報告されている（Ｃｈｕｎｇ Ｂ． Ｓ他。ＨｙａｎｇｙａｋＤａｅｓａｊｅｏｎ， Ｙｏｕｎｇ−ｒｉｍ出版。ｐｐ９４５−９５７， １９９８）。
【００１０】
しかしながら、上記記載のいずれの文献も、強力な抗肥満効果を示すウリ科植物の抽出物の肥満予防または治療活性を報告・開示していない。また、上記文献の開示は参照することにより本発明に含まれるものとする。
【００１１】
ウリ科植物の抽出物の抗肥満効果を調査するため、本発明の発明者は脂肪細胞分化とトリグリセリド、脂肪細胞分化に関係するＰＰＡＲガンマ因子、ＡＣＯＩ、アポＣＩＩＩ等の遺伝子の発現に対する様々な試験管内実験と、脂肪細胞とトリグリセリドの蓄積に対する阻害効果および実験動物の体重の減少効果に関する動物実験を集中的に行った。これらの研究結果より、本発明のウリ科植物の抽出物が脂肪細胞とトリグリセリドの蓄積を強力に阻害し被験動物の体重を減少させることから強力な抗肥満薬として有用なことを確認することで、発明者は本発明を最終的に完成させるに至った。
【発明の開示】
【００１２】
従って、本発明は抗脂肪生成活性と抗肥満活性とを有するウリ科植物の抽出物または抽出物から単離した精製抽出物とを有効成分として、肥満と脂肪生成関連疾病を治療・予防するに効果的な量で含む医薬品組成物を提供するものである。
【００１３】
ここでいう「精製抽出物」とは本発明の発明者が命名した独創的な「ＣＭＣ−９」を含むものであり、以下の：ウリ科植物を乾燥させたものに重量で約５〜１５倍の蒸留水を添加し抽出して植物抽出物を得たあと、抽出物を減圧下で濾過および乾燥させて温水に可溶な植物抽出物を得る第１工程と；前記温水可溶性抽出物を水に懸濁させたあと、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール溶媒による分別に極性の低い順で供してそれぞれの有機溶媒に可溶な成分を得る第２工程と；前記クロロホルム可溶性成分をヘキサン：クロロホルム：メタノール（１６：１５：１）の混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して１１の副成分に分ける第３工程と；前記副成分のうち第９番目の成分をクロロホルム：メタノールの混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーとＨＰＬＣに繰り返し供し、「ｃｍｃ−９」と命名された、図１２にＴＬＣスペクトルを示す本発明の独創的な精製抽出物を得る工程から構成される方法で調製することができる。
【００１４】
ゆえに、本発明は上記記載の方法で調製した、強力な抗脂肪生成および抗肥満活性を有する新規性のあるｃｍｃ−９精製抽出物と、その調製方法を提供するものである。
【００１５】
ここでいう「ウリ科植物」とは、カボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）、ヒョウタン（Ｌａｇｅｎａｒｉａ ｓｉｃｅｒａｒｉａ ＳＴＡＮＤＬ． ｖａｒ． ｄｅｐｒｅｓｓａ ＨＥＲＡ）、およびきゅうり（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ）、好ましくはカボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）を含むものである。
【００１６】
上述の「材料」には、ウリ科植物のハーブ、果実、茎葉、好ましくは茎または葉が含まれる。
【００１７】
上述の「抽出物」には、ウリ科植物のハーブ、果実、茎葉、好ましくは茎または葉からの未精製抽出物または無極性溶媒に可溶な抽出物が含まれる。
【００１８】
従って本発明の目的は、肥満と脂肪生成関連疾病の治療と予防のための、ウリ科植物の未精製抽出物または無極性溶媒可溶性抽出物を有効成分として含む医薬品組成物を提供することである。
【００１９】
ここでいう「未精製抽出物」とは、植物材料を水、メタノールやエタノール等の低級アルコール、好ましくはメタノール等、またはその混合物で抽出することで調製された抽出物を含むものである。
【００２０】
ここでいう「無極性溶媒可溶性抽出物」とは、上記の未精製抽出物を例えばヘキサン、酢酸エチル、またはジクロロメタン、好ましくは酢酸エチル等の無極性溶媒で抽出することで調製することができる。
【００２１】
本発明の目的は、人間を含めた哺乳類の肥満および脂肪生成関連疾病の治療と予防用の治療薬を製造するための、ウリ科植物から単離した未精製抽出物、無極性溶媒可溶性抽出物、または上記記載のｃｍｃ−９抽出物の用途を提供するものである。
【００２２】
本発明の目的は、哺乳類の肥満および脂肪生成関連疾病の治療または予防方法を提供するものであり、ウリ科植物から単離した未精製抽出物、無極性溶媒可溶性抽出物、または上記記載のｃｍｃ−９抽出物を製剤的に許容範囲にある担体とともに、前記哺乳類に効果的な量を投与することを含む。
【００２３】
本発明の別の目的は、肥満および脂肪生成関連疾病を予防・緩和するための、ウリ科植物から単離した未精製抽出物、無極性溶媒可溶性抽出物、または上記記載のｃｍｃ−９抽出物と食品学的に許容範囲にある添加物から構成されるヘルスケア食品または食品添加物を提供するものである。
【００２４】
「肥満および脂肪生成関連疾病」という単語には、肥満、２型糖尿病、脂肪症、高脂血症、心疾患、アテローム性動脈硬化症等が含まれる。
【００２５】
本発明の医薬品組成物は、組成物の総重量あたり、上記抽出物を約０．０２〜９０％含み得る。
【００２６】
本発明のヘルスケア食品は上記抽出物を、組成物の総重量につき、０．０１〜８０％、好ましくは１〜５０％含む。
【００２７】
上記のヘルスケア食品はヘルスケア食品、健康飲料等に含有させてもよく、粉末、顆粒、錠剤、チュアブル錠、カプセル、飲料等として使用しても良い。
【００２８】
ウリ科植物から得られる本発明の独創的な未精製抽出物または無極性溶媒可溶性抽出物は、以下の好ましい態様に従って調製してもよい。
【００２９】
以下に、本発明を詳細に説明する。
【００３０】
ウリ科植物から得られる本発明の独創的な未精製抽出物または無極性溶媒可溶性抽出物は、以下の手順で詳細に調製することができる。
【００３１】
ウリ科植物から得られる独創的な未精製抽出物は、以下のようにして調製することが可能である；カボチャ、スイカ、ヘチマタワシ等のウリ科植物の茎または葉を乾燥、切断、圧搾したあと、体積で１〜２５倍、好ましくは約５〜１５倍の蒸留水、メタノール、エタノール、ブタノール等の低級アルコールまたはその混合物と混合する。好ましくはメタノールである；溶液を２０〜１００℃、好ましくは７０〜１００℃の温水で３０分〜２４時間、好ましくは３０分〜３時間かけて、温水抽出、冷水抽出、還流抽出、超音波抽出等の抽出法で１〜５回、好ましくは２〜３回連続して処理する；残留物をろ過して上清を得た後、ロータリーエバポレータで２０〜１００℃、好ましくは５０〜７０℃で濃縮し、その後、真空凍結乾燥、熱風乾燥、または噴霧乾燥によって乾燥させてウリ科植物の未精製抽出物の乾燥粗粉末を得る。この粉末は水、低級アルコール、またはその混合物に可溶である。
【００３２】
また、極性溶媒および無極性溶媒に可溶な本発明の抽出物を、以下の手順で調製することができる；上記記載の工程で得られた未精製抽出物を水に懸濁させ、その後、体積で１〜１００倍、好ましくは１〜５倍の量の酢酸エチル、クロロホルム、ヘキサン等の無極性溶媒と混合する；無極性溶媒可溶層を回収して、本発明の無極性溶媒に可溶な抽出物を得る。また、残りの極性溶媒可溶層を回収して、本発明の極性溶媒に可溶な抽出物を得る。極性溶媒に可溶な抽出物は水、低級アルコール、およびその混合物に可溶である。また、上記記載の工程に改良を加えたり、当技術分野で周知の従来法を用いてより強力な成分または化合物に分別または単離する工程にさらに供してもよい。方法としては、例えば、文献に開示されているものが挙げられる（Ｈａｒｂｏｒｎｅ Ｊ． Ｂ． Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ： Ａ ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｍｏｄｅｒｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ， ３ｒｄ Ｅｄ． ｐｐ６−７， １９９８）。
【００３３】
また、最も強力な抗脂肪生成活性と抗肥満活性を示すクロロホルム可溶性成分を、ヘキサン：クロロホルム：メタノール（１６：１５：１）の混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して１１の副成分を得る；このようにして得られた副成分の中でも最も強力な抗脂肪生成活性と抗肥満活性を有する９番目の成分を、クロロホルム：メタノール（３０：１）の混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーと、２０〜７０％のメタノールを移動相とし、４０％メタノールを流速２ｍｌ／ｍで使用したＨＰＬＣに繰り返しかけて独創的な「ｃｍｃ−９」抽出物を得ることで、本発明の独創的な「ＣＭＣ−９」を調製することができる。図１２に示すように、ＴＬＣ溶出溶媒システム（クロロホルム：メタノール＝２０：１）でｃｍｃ−９は２６．８分後に溶出、Ｒｆ値は０．３２であった。
【００３４】
本発明な独創的な抽出物の抗肥満効果を調査するため、本発明の発明者は脂肪細胞分化およびトリグリセリド、脂肪細胞分化に関係するＰＰＡＲガンマ因子、ＡＣＯＩ、アポＣＩＩＩ等の遺伝子の発現に対する阻害効果に関する様々な試験管内実験と、脂肪細胞とトリグリセリドの蓄積に対する抑制効果および実験動物の体重の減少効果に関する動物実験を集中的に行った。これらの研究結果より、本発明のウリ科植物の抽出物は脂肪細胞とトリグリセリドの蓄積を強力に阻害し被験動物の体重を減少させることから強力な抗肥満薬として有用なことを確認した。
本発明による抽出物は、製剤的な観点から許容範囲にある担体、アジュバントまたは希釈剤を含有する製剤組成物として提供することができる。例えば、本発明の抽出物はオイル、プロピレングリコール、または注射剤を製造する際に通常使用するその他溶媒に溶解させることができる。適当な担体の例としては、生理食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、植物性油、ミリスチン酸イソプロピルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。外用としては、本発明の抽出物を軟膏やクリームにすることが可能である。
【００３５】
本発明の抽出物は強力な抗肥満活性および抗脂肪生成活性を有しており、ゆえに本発明の製剤組成物を肥満および脂肪生成関連疾病の治療や予防に使用してもよい。
【００３６】
以下に記載の製剤方法および賦形剤は単なる例にすぎず、本発明をいかなるうえでも制限するものではない。
【００３７】
医薬品の剤形とした本発明の抽出物は、その製剤的な観点からみて許容範囲にある塩として使用してもよい。また、その他の製剤的に活性な化合物と組み合わせての使用はもちろん、単体で使用しても適当なものと組み合わせての使用であってもよい。
【００３８】
本発明の抽出物は、通常の生理食塩水、５％デキストロース等の水溶性溶媒や、植物性油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコール等の非水溶性溶媒に溶解、懸濁、または乳化させることで注射製剤としてもよい。製剤は可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤、防腐剤等の通常の添加物を含んでいてもよい。
【００３９】
本発明の独創的な抽出物の望ましい投与量は、状況や対象の体重、重症度、剤形、投与経路、投与期間によって異なり、当業者が選択してもよい。しかし、望ましい効果を得るためには、本発明の独創的な抽出物を、体重／日あたり、０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１から１００ｍｇ／ｋｇ投与することが一般的に勧められる。一日一回投与しても、何回かにわけて投与してもよい。組成物という点では、抽出物の量は組成物の総重量につき０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．０００１〜１重量％にすべきである。
【００４０】
本発明の製剤組成物は、哺乳類（ラット、マウス、家畜または人間）等の被験動物に様々な経路で投与することができる。全ての投与経路が考えられるが、例えば、経口投与、直腸投与、静脈内投与、筋肉投与、皮下投与、鞘内投与、硬膜外投与、または脳室内投与が挙げられる。
【００４１】
また、本発明の抽出物は様々な機能性健康食品およびヘルスケア食品の主成分、または添加物や補助剤としても使用することができる。
【００４２】
ここでいう「機能性健康食品」とは「人間または哺乳類の肥満や脂肪生成関連疾病を予防または改善するために本発明の化合物を通常の食品に添加して、物理的または生理的機能性等を高めた機能性食品」と定義される。
【００４３】
本発明のその他の目的は、肥満と脂肪生成関連疾病を予防・緩和するための、ウリ科植物から単離した未精製抽出物、無極性溶媒可溶性抽出物、または上述のｃｍｃ−９抽出物と食品学的に許容範囲にある添加物から構成されるヘルスケア食品を提供することである。
【００４４】
ここでいう「ヘルスケア食品」とは「特に意図された効果はないものの、全般的な効果を添加物として少量で、もしくはカプセル・丸薬・錠剤等として全量で発揮する本発明の抽出物を含有する食品」と定義される。
【００４５】
ここでいう「食品学的にみて許容範囲にある添加物」とは「その用途が直接的であれ間接的であれ一成分であること自体あるいはその反対で食品の特性に影響を与えることに帰着する、または帰着することが十分に期待しえる物質」と定義される。例としては、増粘剤、熟成剤、漂白剤、抑制剤、湿潤剤、固化防止剤、清澄剤、硬化剤、乳化剤、安定剤、シックナー、塩基および酸、発泡剤、栄養剤、着色剤、着香料、甘味料、防腐剤、酸化防止剤等が挙げられ、以下で詳細に説明する。
【００４６】
ある特定の目的をもって食品にある物質を添加する場合はそれを直接添加物と称し、梱包や貯蔵、その他の取り扱いに応じて微量添加する場合は間接食品添加物と称される。
【００４７】
上記記載の健康食品は、肥満および脂肪生成関連疾病の予防と改善を目的として、食品、健康飲料、食事療法等に取り入れることができ、粉末、顆粒、錠剤、チュアブル錠、カプセル、飲料等の形態で使用してもよい。
【００４８】
また、上記記載の抽出物を、肥満および脂肪生成関連疾病の予防と改善を目的として食品または飲料に添加することもできる。機能性健康食品またはヘルスケア食品としての食品または飲料に添加する上記記載の抽出物の量は、機能性健康食品組成物としては、概して食品総重量の約０．０１〜１００ｗ／ｗ ％である。特に、機能性健康食品、ヘルスケア食品または特殊栄養食品における本発明の抽出物の好ましい量は、各食品の使用目的によって異なっていてもよいが、一般的には、食品組成を１００％として本発明の抽出物を麺類等の食品中に添加物として約０．０１〜５％使用するのが好ましく、ヘルスケア食品においては４０〜１００％の比率で使用するのが好ましい。
【００４９】
本発明の健康飲料組成物が上記記載の抽出物を主成分として記載の比率で含有しているとした場合、その他の液状成分については特に制限はなく、その他の成分としては様々な清涼剤や通常の飲料等の天然糖類が挙げられる。上記記載の天然糖類としては、グルコース、果糖等の単糖類；麦芽糖、蔗糖等の二糖類；デキストリン、シクロデキストリン等の一般的な糖；キシリトール、エリスリトール等の糖アルコールが例として挙げられる。上記記載のもの以外の清涼剤としては、ソーマチン、レバウディオサイドＡ等のステビア抽出物、グリシルリジン等の天然清涼剤、サッカリン、アスパルテーム等の合成清涼剤が好適に有用なものとして挙げられる。上記記載の天然糖類の量は、通常、本発明の飲料組成物１００ｍｌあたり約１〜２０ｇ、好ましくは５〜１２ｇである。
【００５０】
上記記載の組成物以外の成分としては様々な栄養剤、ビタミン、ミネラルまたは電解質、合成着香料、着色料、チーズやチョコレートの場合は品質改良剤、ペクチン酸およびその塩、アルギニン酸およびその塩、有機酸、保護コロイド粘着剤、ｐＨ調整剤、安定剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料等で使用される炭酸化剤が挙げられる。上記記載のもの以外の成分ついては、天然フルーツジュースに使用する果汁、果汁飲料、野菜飲料が挙げられ、成分は独立して使用しても組み合わせて使用してもよい。各成分の比率はあまり重要ではないが、通常、組成物１００ ｗ／ｗ％に対して約０から２０ ｗ／ｗ％である。こういったものを添加する、上述の抽出物を含有する食品としては様々な食品、飲料、ガム、複合ビタミン剤、健康促進食品等が挙げられる。
【００５１】
以下の実施例を用いて、本発明をより詳細に説明する。しかしながら、いかなる方法によっても本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５２】
本発明の精神または範囲から外れることなく、本発明の組成物、その用途および製剤に様々な改良や変更を加えうることは当業者には自明である。
【００５３】
本発明を以下の実施例を用いてより詳細に説明するが、いかなる方法によっても本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。
【実施例】
【００５４】
以下の参考例、実施例、および実験例は本発明をより詳しく説明するためのものであり、その範囲を限定するものではない。
【００５５】
［実施例１ ウリ科植物の温水抽出物の調製］
韓国の市場で購入したカボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）の茎を乾燥させたものそれぞれ２キロを切断し、メタノール２０リットルと混合し、還流抽出器を用いて９０℃で１時間抽出した。この抽出工程を３回繰り返して上清を回収し、フィルターペーパーでろ過した後、上清を減圧下で濃縮して、カボチャ、スイカ、ヘチマタワシの乾燥温水抽出物を３００ｇ、３５０ｇ、２４０ｇ、それぞれ得た。各抽出物を蒸留水に溶解して濃度１００ ｍｇ／ｍｌとし、以下の実験例においてテストサンプルとして使用した。
【００５６】
［実施例２ ヘキサン可溶性抽出物の調製］
実施例１で調製した乾燥させた温水可溶性抽出物２００ｇを１リットルの蒸留水に懸濁させ、そこに１リットルのヘキサンを添加した。得られた水溶液をヘキサン層と水層との分別に３回供して、回収したヘキサン層を濾過した後、真空ロータリーエバポレータで乾燥させて１８０ｍｇのヘキサン可溶性抽出物を得た。残った水層１リットルは以下の工程で使用した。
【００５７】
［実施例３ クロロホルム可溶性抽出物の調製］
残った水層に１リットルに１リットルのクロロホルムを添加し、得られた水溶液をクロロホルム層と水層との分別に３回供した。回収したクロロホルム層を濾過し、ロータリーエバポレータで乾燥させて７７０ｍｇのクロロホルム可溶性抽出物を得た。残った水層は以下の工程で使用した。
【００５８】
［実施例４ 酢酸エチル可溶性抽出物の調製］
残った水層１リットルに１リットルの酢酸エチルを添加し、得られた水溶液を、酢酸エチル層と水層との分別に３回供した。回収した酢酸エチル層を濾過した後、真空ロータリーエバポレータで乾燥させて２．１ｇの酢酸エチル可溶性抽出物を得た。残った水層は以下の工程で使用した。
【００５９】
［実施例５ ブタノール可溶性抽出物の調製］
残った水層１リットルに１リットルのブタノールを添加し、得られた水溶液をブタノール層と水層との分別に３回供した。回収したブタノール層を濾過した後、真空ローターリーエバポレータで乾燥させて７．４ｇのブタノール可溶性抽出物を得た。残った水層は以下の工程で使用した。
【００６０】
［実施例６ ｃｍｃ−９精製抽出物の調製］
２５ｇのシリカゲル（メルク社。Ｎｏ−９３８５）を充填したカラム（３ｘ２７ｃｍ）を使用して、７７０ｍｇのクロロホルム可溶性抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。混合溶媒（ヘキサン：クロロホルム：メタノール＝１６：１５：１）を移動相として溶出させた。回収した成分を乾燥させて１１の成分に分けた。つまり第１成分（３１ｍｇ）、第２成分（１８ｍｇ）、第３成分（６５ｍｇ）、第４成分（１８ｍｇ）、第５成分（５４ｍｇ）、第６成分（７５ｍｇ）、第７成分（３９ｍｇ）、第８成分（２００ｍｇ）、第９成分（２０ｍｇ）、第１０成分（１６３ｍｇ）、および第１１成分（６４ｍｇ）である。最も強力な抗肥満活性を示す第９成分２０ｍｇを、シリカゲル２ｇ（メルク社。９３８５）を充填したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶出は、直線勾配のクロロホルム：メタノールを含有する混合溶媒を用いて（３０：１？＞１０：１）段階的に行った。さらに第９成分を精製するために、２０〜７０％のメタノールを移動相として４０％メタノールを流速２ｍｌ／ｍで使用したＨＰＬＣを行って２６．８分で溶出された本発明の独創的な「ｃｍｃ−９」抽出物を得た。図１８および図１９に示されるように、ＴＬＣ溶出溶媒（クロロホルム：メタノール＝２０：１）を用いた場合、ｃｍｃ−９抽出物は１５分で溶出され、Ｒｆ値は０．３２だった。
【００６１】
［実験例１ 脂肪細胞分化およびトリグリセリドレベルの阻害効果］
実施例１〜６で調製した抽出物の脂肪細胞分化およびトリグリセリドレベルの阻害活性を測定するために、以下の実験を行った。
（１−１．テストサンプルの未精製抽出物）
ＡＴＣＣ（米国・アメリカンティッシューカルチャーコレクション社）から購入した脂肪細胞（３Ｔ３−Ｌ１）を１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地で培養し、成熟した脂肪細胞に分化させるためにＭＤＩカクテル（イソブチルメチルキサンチン、デキサメタゾン、インシュリン）を添加した。２日後、培地を交換してインシュリンのみで処理した。その後、培地を交換し同濃度のインシュリンで処理する作業を一日おきに行った。分化が起こったら濃度２．５〜１０００ｕｇ／ｍｌのＭＤＩで処理し、培地を交換する度に同濃度のＭＤＩで処理した。トログリタゾン（シグマ社）および１０ ｕＭ ＳＢ２０３５８０（シグマ社） を対照グループとして使用し、カボチャ、スイカ、ヘチマタワシの温水抽出物を乾燥させたもの各１ ｍｇ／ｍｌで処理して、それぞれのテストサンプルグループとした。８日後、分化した細胞内に蓄積された脂肪をオイルレッドＯ染色試薬で染色して、吸光度を光学濃度から定性的に測定した。阻害率（％）は、以下の実験式１を用いて計算した。
【００６２】
［実験式１］
阻害率（％）＝［テストグループのＯ．Ｄ．］／［対照グループのＯ．Ｄ．値］ｘ１００
結果、前駆脂肪細胞３Ｔ３−Ｌ１細胞は分化して成熟細胞となり、トリグリセリドがＭＤＩ処理グループの細胞内に蓄積されていることが確認された。トログリタゾン処理グループにおいてはトリグリセリドがより多く生成され、他のグループよりも濃い赤に染色された。一方、ＳＢ２０３５８０処理グループではトリグリセリドは生成されなかった。テストサンプル処理グループ、つまりカボチャ、スイカ、ヘチマタワシの抽出物、特にカボチャ処理グループにおける生成したトリグリセリドのレベルは、その投与量に応じて著しく低下した（図１と図２を参照のこと）。
【００６３】
（１−２． テストサンプルの各溶媒可溶性成分）
実施例３〜５で調製した、カボチャの茎から単離したクロロホルム、酢酸エチル、ブタノールに可溶な成分の脂肪細胞分化とトリグリセリドレベルに対する阻害活性を測定するために、上記記載の実験例１−１と同一の工程を行った。各成分の処理濃度は１００ ｕｇ／ｍｌである。
【００６４】
結果、クロロホルムと酢酸エチル可溶性成分は脂肪細胞分化とトリグリセリドの生成に対する強力な阻害活性を示した。特に、クロロホルム可溶性成分は脂肪細胞分化に対して最も強力な阻害効果を示した（図３および図４を参照のこと）。
【００６５】
（１−３．テストサンプルの「ｃｍｃ−９」精製抽出物）
実施例６で調製した、カボチャの茎から単離したｃｍｃ−９精製抽出物の脂肪細胞分化とトリグリセリドレベルに対する阻害活性を測定するために、上記記載の実験例１−１と同一の工程を行った。
【００６６】
図５からわかるように、トログリタゾン処理グループにおいてはトリグリセリドがより多く生成され、他のグループよりも濃い赤に染色された。一方、ＳＢ２０３５８０処理グループではトリグリセリドは生成されなかった。ｃｍｃ−９処理グループは、脂肪細胞分化およびトリグリセリド蓄積に対して最も強力な阻害効果を示した。
【００６７】
［実験例２ 脂肪細胞分化工程における遺伝子の発現に対する制御効果］
実施例１〜６で調製した抽出物の、脂肪細胞分化工程における遺伝子の発現に対する制御効果を測定するために、以下の実験を行った。
【００６８】
最初に、前駆脂肪細胞３Ｔ３−Ｌ１の分化をＭＤＩ処理によって誘導した。ＰＰＡＲガンマ活性化剤であるトログリタゾン（米国・シグマ社）およびｐ３８阻害剤であるＳＢ ２０３５０８を対照グループとして処理に使用した。細胞を実施例１で調製した様々な濃度の、つまり１ｍｇ／ｍｌ、１０ ｍｇ／ｍｌ、１００ ｍｇ／ｍｌのカボチャの温水抽出物で処理した。処理した細胞は、培地を交換しつつ、３７℃で１０日間培養した。培養した細胞を冷却した生理食塩水で２回洗浄した。トリアゾール剤を用いてそのＲＮＡを抽出し、逆転写酵素を用いて逆転写し、そのｃＤＮＡを得た。また、全ての因子、つまりＰＰＡＲアルファ、ＡＣＯＩ、チオラーゼ、アポＣ−ＩＩＩ、ＳＣＤ−Ｉ、ＧＡＰＤＨ等を増幅させた。増幅させた遺伝子発現の違いはアガロースゲル電気泳動によって比較した。また、各遺伝子増幅で使用したプライマー配列を配列リスト１〜１２で説明した。
【００６９】
図６からわかるように、１ ｍｇ／ｍｌのＰＧ１０５で処理した細胞はＰＰＡＲアルファの発現が向上した。また、ＡＣＯＩとチオラーゼはＰＰＡＲアルファによって活性化された。一方、アポＣ−ＩＩＩの発現は抑制された。
【００７０】
（実験例３ ＰＰＡＲアルファ活性化に対する制御効果）
実施例１〜６で調製した抽出物の、ＰＰＡＲアルファの活性化に対する制御効果を測定するために、以下の実験を行った。
【００７１】
実施例２〜４で調製したヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル可溶性成分、および実施例６で調製したｃｍｃ−９精製抽出物を、以下の実験においてテストサンプルとして使用した。
【００７２】
ｔｋＰＰＲＥルシフェラーゼレポータープラスミドのみで形質転換した細胞グループと、レポータープラスミドとＰＰＡＲアルファ、デルタ、またはガンマを発現するベクターとの双方で同時に形質転換した細胞グループとの２種類の形質転換ＣＶ−１細胞グループを用意し、２４時間後、ＰＧ１０５とその他成分を含むテストサンプルで処理して２４時間後の細胞を回収し、そのルシフェラーゼ活性を測定した。対照薬剤としては、ＰＰＡＲアルファに関しては１００ ｕＭのフェノフィブラート（シグマ社 Ｆ６０２０−１００Ｇ）を、ＰＰＡＲデルタに関しては１０ ｕＭ のＧＷ５０１５１６ （シグマ社）を、ＰＰＡＲガンマに関しては１００ ｕＭのトログリタゾンで処理した。
【００７３】
図７からわかるように、ｔｋＰＰＲＥでのみ処理したグループにはルシフェラーゼ活性が見られず、クロロホルム、ヘキサン可溶性成分で処理したグループにおいてはＰＰＡＲアルファで同時に処理したグループは強力なルシフェラーゼ活性を示した。その活性はエタノールでのみ処理した陰性コントロールグループにおけるそれと比較して約６０倍高い。また、フェノフィブラート（シグマ社）で処理した陽性コントロールグループにおけるそれと比較して５倍以上高い。ＰＰＡＲデルタを形質転換させた場合、ヘキサン成分で処理したルシフェラーゼ活性は陰性コントロールにおけるそれと比較して約２０倍高く、ＧＷ５０１５１６で処理した陽性コントロールグループにおけるそれと同様であった。しかしながら、ＰＰＡＲガンマを形質転換させた場合、ＰＧ１０５で処理したテストサンプル、各種成分およびｃｍｃ−９抽出物に活性は見られなかった。
【００７４】
従って、ウリ科植物の抽出物が脂質代謝を制御可能なことが確認された。
［実験例４ 高脂肪食マウスにおける、トリグリセリドの蓄積に対する阻害効果］
実施例１〜６で調製した抽出物の、高脂肪食マウスにおけるトリグリセリドの蓄積に対する阻害活性を測定するために、以下の実験を行った。
【００７５】
（４−１．前処理）
１８〜２０グラムの生後８〜１０週間のＣ５７／ＢＬマウス（米国・ジャクソンラボ）を換気ケージにいれ、５つのグループに分けた。グループ１には通常の食餌を、残り４つのグループ、つまりグループ２〜５には脂肪分４５％以上の高脂肪食（米国・ジャクソンラボ）を与えた。グループ１および２には蒸留水と、グループ３には実施例１で調製したＰＧ１０５を８ｍｇ、１６週間にわたって毎日経口で与えた。４０ ｕｇのゼニカル（ロシェ社）をグループ４に、５ ｕｇのリダクティル（アボット社）をグループ５に毎日経口投与した。投与６週間後と１３週間後にそれぞれ、血液サンプルを採取し、血中トリグリセリドレベルとコレステロールレベルを測定した。１３週間後、マウスを殺して肝臓を取り出し、その血中トリグリセリドレベルを測定した。脂肪内臓および肝臓からｍＲＮＡを単離して、脂質吸収と代謝経路に関する遺伝子の発現をＲＴ−ＰＣＲ法を用いて調べた。
【００７６】
（４−２．血中トリグリセリドとコレステロールに対する効果）
投与後６週間後と１３週間後にそれぞれ、血液サンプルを採取し、血中トリグリセリドレベルとコレステロールレベルを測定した。
【００７７】
結果、蒸留水のみを与えた高脂肪食グループであるグループ２の６週間後および１３週間後の血中グリセリド濃度はそれぞれ１３４．６７ ｍｇ／ｄｌと１６９．３３ ｍｇ／ｄｌであった。これは高脂肪食を与えられていないグループの結果に比べて１．６６倍高いものであった。これに対し、ＰＧ１０５を与えられたグループ３の６週間後および１３週間後の血中濃度はそれぞれ９４ ｍｇ／ｄｌと９０ ｍｇ／ｄｌであった。これは高脂肪食を与えられていないグループの結果と同様であった（図８および図９を参照のこと）。
【００７８】
蒸留水のみを与えられたグループ２の血中コレステロール濃度は１８０ ｍｇ／ｄｌであり、ＰＧ１０５を与えられたグループ３は１４８．６ ｍｇ／ｄｌであった（図１０および図１１を参照のこと）。
【００７９】
（４−３．脂肪肝に対する効果）
裸眼で肝臓を観察した結果、蒸留水のみを与えられた高脂肪食グループの投与１３週後の肝臓は黄色がかった脂肪肝であり、一方、ＰＧ１０５抽出物を与えられた高脂肪食グループの肝臓は鮮紅色であった（図１２を参照のこと）。
【００８０】
（４−４．肝臓内でのトリグリセリド蓄積に対する効果）
投与１３週間後の肝臓内のトリグリセリド蓄積レベルを測定した。結果、蒸留水を与えられた高脂肪食マウスの蓄積トリグリセリドレベルは１１７．５３ ｍｇ／ｄｌであり、高脂肪食を与えられていないグループの結果の５倍であり、肝臓における過剰なトリグリセリドの蓄積を示した。これに対し、ＰＧ１０５を投与されたグループのトリグリセリド濃度は４６．１５ ｍｇ／ｄｌであり正常の範囲にあり、裸眼での観察結果と一致した（図１３を参照のこと）。
【００８１】
（４−５．脂肪代謝に関係する遺伝子発現に対する効果）
脂肪分解と脂質生成を含む脂肪代謝に関わる遺伝子の発現に対するウリ科植物の抽出物の効果を調査するために、脂肪細胞と肝臓からＲＮＡを取り出し、ＲＴ−ＰＣＲ法に供して脂肪代謝に関連する遺伝子の発現における変化を調査した。
【００８２】
結果、文献に開示の（Ｓｃｈｏｎｆｅｌｄ， Ｇ．他。Ｍｅｔａｂ． Ｃｉｎ． Ｅｘｐ．， ２８， ｐｐ１００１−１００９， １９７９）、臓器中の脂肪細胞に蓄積されたトリグリセリドの脂肪酸への分解に関係する酵素であるリポタンパクリパーゼ（ＬＰＬ）の発現が、ＰＧ１０５の投与により顕著に増加した。また、リポタンパクリパーゼ酵素の活性を阻害するとされるＡＰＯＣＩＩＩタンパク質（Ｗｉｎｄｌｅｒ Ｅ．他。Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２５５， ｐｐ８３０３−８３０７， １９８０； Ｗａｎｇ Ｃ． Ｓ．他。Ｊ． Ｃｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．， ７５． ｐｐ３８４−３９０， １９８５）の発現が顕著に阻害された（図１４および図１５を参照のこと）。
【００８３】
図１０ａに示されるように、ＳＣＤ（ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ）の発現が著しく阻害された。ＳＣＤは、パルミトイルＣｏＡの９位と１０位との間、基材としてのステアロイルＣｏＡにシス二重結合を導入するとされており（Ｅｎｏｃｈ， Ｈ．Ｇ．他。Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２５１， ｐｐ５０９５−５１０３， １９７６）、さらに、リン脂質、コレステロール、トリグリセリド等を構成するのに使用される（Ｎｔａｍｂｉ， Ｊ． Ｍ．， Ｊ． Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．， ４０， ｐｐ１５４９−１５５８， １９９９）。
【００８４】
これらの結果から、ＰＧ１０５の経口投与には、脂質合成の阻害と同様に脂質の分解の促進いう２つの働きがあることがわかった。
【００８５】
（実験例５ 高脂肪食マウスにおける、トリグリセリドの蓄積に対する阻害効果）
実施例１〜６で調製した抽出物の、肥満体のマウス（ｄｂ／ｄｂ）の減量および脂質レベル制御効果を測定するために、以下の実験を行った。
【００８６】
自由に水が飲める環境下において、生後５週間のメスの肥満体マウス（米国・ジャクソンラボ）を８週間飼育した。８ｍｇのＰＧ１０５を１００ｍｌの蒸留水に溶解したものを６週間にわたって各マウスに経口投与した。殺菌した蒸留水を陰性コントロールとしてのマウスに投与した。体重変化を週１回測定し、摂取した食餌の量を毎日記録した。また、血中の脂質レベルを３週間目と６週間目に測定した。
【００８７】
結果、ＰＧ１０５を投与されたグループには、６週間目で約１０〜１５％の体重の減少がみられるほどの顕著な減量効果が見られた（図１６を参照のこと）。
【００８８】
ＰＧ１０５を投与されたグループには、６週間目の血中トリグリセリドのレベルが１５０ ｍｇ／ｄｌに下がるほどの顕著な効果がみられた（図１７を参照のこと）。
【００８９】
ボランティア患者における減量効果および脂質レベルの制御効果
実施例１〜６で調製した抽出物の、人間のボランティア患者の減量および脂質レベルの制御効果を測定するために、以下の実験を行った。
【００９０】
ヘチマタワシの茎から温水抽出した抽出物を、２７〜６２才の女性４人と３０から４８才の男性２人から成る６人のボランティア患者に２〜５ｇ／日を２週間、経口投与し、患者の体重（ｋｇ）と胴周り（ｃｍ）を測定した。総脂質レベル（ｍｇ／ｄｌ）を診断キット（総脂質試薬、米国・ヴェディーズ社）を用いて熱量測定法で測定した（光度計、アジレント８４５３、米国・アジレント社）。また、ＦＦＡレベル（遊離脂肪酸、ｕＥｑ／ｌ）をヒタリを用いて（日立７１５０、日本・日立）酵素法で測定した（Ｓｉｃｄｉａ ＮＥＦＡＹＭＥ、日本・イーケン社）。コレステロールレベル（ｍｇ／ｄｌ）は、アドヴィア（アドヴィア１６５５、日本・バイエル社）を用いてコレステロールキットで（コレステロール試薬、米国・バイエル社）で測定した。ＶＬＤＬコレステロールレベル（ｍｇ／ｄｌ）を分光光度計（光度計４０２０、ドイツ・ロシェ社）を用いて診断キット（ＢＬＦＩＩ、日本・イーケン社）で測定した。ＬＤＬコレステロールレベル（ｍｇ／ｄｌ）をヒタクリ（７１５３、日本・日立）を用いてＬＤＬコレステロールキット（ＬＤＬコレステロール試薬、ドイツ・ロシェ社）で測定した。ＨＤＬコレステロールレベル（ｍｇ／ｄｌ）をアドヴィア（アドヴィア１６５０、日本・バイエル社）を用いて診断キットで（直接ＨＤＬ−コレステロール、英国・バイエル社）で測定した。トリグリセリドレベルを（ｍｇ／ｄｌ）アドヴィア（アドヴィア１６５０、日本・バイエル社）でトリグリセリドキット（トリグリセリド試薬、米国・バイエル社）で測定した。グルコースレベル（ｍｇ／ｄｌ）をアドヴィア（アドヴィア１８５０、日本・バイエル社）で診断キット（グルコースヘキソキナーゼ、米国・バイエル社）で測定した。ＳＧＯＴおよびＳＧＰＴ（Ｕ／ｌ）レベルをアドヴィア（アドヴィア１６５５、日本・バイエル社）でＡＳＴ試薬キット（米国・バイエル社）とＡＬＴ試薬キット（米国・バイエル社）で測定した。
結果、以下の表１からわかるように、ヘチマタワシの茎から抽出した温水抽出物は強力な減量および脂質代謝制御効果を示した。
［表１］
【００９１】
従って、同じ科に属するカボチャの茎の抽出物だけではなくヘチマタワシの茎からの抽出物も強力な抗肥満活性を有していることが上述の臨床例により確認された。
【００９２】
（実験例７ 毒性試験）
＜試験方法＞
生後６週間のＳＰＦ ＳＤラットに投与したテストサンプルの急性毒性試験を以下の手順で行った。
【００９３】
各２匹のラットで構成される４グループに、ＰＧ１０５抽出物を１００ ｍｇ／ｋｇ経口投与して、２週間観察した。
＜結果＞
いずれのグループまたは性別に関しても、死亡率、臨床的徴候、体重変化、および全体の所見に処置による効果の違いは見られなかった。経口投与における最低ＬＤ５０値は１００ｇ／ｋｇより高かった。これらの結果から、本発明によるテスト化合物が安全でありながらも強力であることがわかった。
以下に、製剤方法と賦形剤の種類とを説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。代表的な製剤例は以下に記載のとおりである。
＜粉剤の調製＞
ＰＧ１０５・・・・・・・・・・５０ｍｇ
乳糖・・・・・・・・・・・・・１００ｍｇ
タルク・・・・・・・・・・・・１０ｍｇ
上記成分を混合して密封容器に充填することで粉剤を調製した。
＜錠剤の調製＞
ＰＧ１０５・・・・・・・・・５０ｍｇ
コーンスターチ・・・・・・・１００ｍｇ
乳糖・・・・・・・・・・・・１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム・・２ｍｇ
上記成分を混合、錠剤状にすることで錠剤を調製した。
＜カプセルの調製＞
ＰＧ１０５・・・・・・・・・５０ｍｇ
コーンスターチ・・・・・・・１００ｍｇ
乳糖・・・・・・・・・・・・１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム・・２ｍｇ
錠剤は、上記成分を混合し、通常のゼラチン調製方法でゼラチンカプセルに充填することで調製した。
＜注射剤の調製＞
ｃｍｃ−９抽出物・・・・・・５０ｍｇ
注射用蒸留水・・・・・・・・最適量
ｐＨ調整剤・・・・・・・・・最適量
注射剤は、通常の注射剤調製法に従って有効成分を溶解し、ｐＨを約７．５に調整し、２ｍｌのアンプルに全成分を充填して殺菌することで調製した。
＜液剤の調製＞
ｃｍｃ−９抽出物・・・・・・０．１〜８０ｇ
糖・・・・・・・・・・・・・５〜１０ｇ
クエン酸・・・・・・・・・・０．０５〜０．３％
カラメル・・・・・・・・・・０．００５〜０．０２％
ビタミンＣ・・・・・・・・・０．１〜１％
蒸留水・・・・・・・・・・・７９〜９４％
ＣＯ２ガス・・・・・・・・・０．５〜０．８２％
液剤は、通常の液剤調製法に従って有効成分を溶解し、全成分を充填・殺菌することで調製した。
＜ヘルスケア食品の調製＞
ｃｍｃ−９抽出物・・・・・・１０００ｍｇ
ビタミン混合物・・・・・・・最適量
酢酸ビタミンＡ・・・・・・・７０ｍｇ
ビタミンＥ・・・・・・・・・１．０ｍｇ
ビタミンＢ１・・・・・・・・０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２・・・・・・・・０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６・・・・・・・・０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２・・・・・・・・０．２ｍｇ
ビタミンＣ・・・・・・・・・１０ｍｇ
ビオチン・・・・・・・・・・１０ｍｇ
ニコチン酸アミド・・・・・・１．７ｍｇ
葉酸・・・・・・・・・・・・５０ｍｇ
カルシウムパントテン酸・・・０．５ｍｇ
ミネラル混合物・・・・・・・最適量
硫酸鉄・・・・・・・・・・・１．７５ｍｇ
酸化亜鉛・・・・・・・・・・０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム・・・・・・２５．３ｍｇ
リン酸一カリウム・ ・・・・１５ｍｇ
第二リン酸カルシウム・・・・５５ｍｇ
クエン酸カリウム・・・・・・９０ｍｇ
炭酸カルシウム・・・・・・・１００ｍｇ
塩化マグネシウム・・・・・・２４．８ｍｇ
上記記載のビタミンおよびミネラル混合物には様々な変更を加えてもよく、そういった変更は本発明の精神と範囲から外れるものとはみなされない。
＜健康飲料の調製＞
ＰＧ１０５・・・・・・・・・１０００ｍｇ
クエン酸・・・・・・・・・・１０００ｍｇ
オリゴ糖・・・・・・・・・・１００ｇ
アプリコット濃縮物・・・・・２ｇ
タウリン・・・・・・・・・・１ｇ
蒸留水・・・・・・・・・・・９００ｍｌ
健康飲料は、通常の健康飲料調製方法に従って有効成分を溶解、混合、８５℃で１時間攪拌、濾過、全成分を１０００ｍｌのアンプルに充填・殺菌することで調製した。
【００９４】
本発明の記載より、同じものに様々なアレンジを加えうることは明白である。そういった変更は本発明の精神と範囲から外れるものとはみなされない。また、当業者に自明なそういった改良は、以下に述べる請求項の範囲に含まれるものとする。
【産業上の利用可能性】
【００９５】
本発明で記載のように、本発明のウリ科植物の抽出物は強力な体重減少活性、血中トリグリセリドおよびコレステロールレベルを低減する効果、ＰＰＡＲアルファおよびデルタ活性の活性作用、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼの遺伝子発現の抑制作用、および前駆脂肪細胞から脂肪が生成するのを毒性を伴うことなく防ぐ効果を有しており、医薬品またはヘルスケア食品として、肥満および脂肪生成関連疾病を治療または予防するのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】ウリ科植物の温水抽出物の脂肪細胞（３Ｔ３−１）分化およびトリグリセリドレベルの阻害効果を示すものであり、オイルレッドＯ染色試薬で染色した分化した細胞中に蓄積された脂肪の顕微鏡写真である。
【図２】ウリ科植物の温水抽出物の脂肪細胞（３Ｔ３−１）分化およびトリグリセリドレベルの阻害効果を示すものであり、染色した脂肪の阻害率を示す。
【図３】カボチャの茎から得た、各溶媒に可溶な成分の脂肪細胞（３Ｔ３−１）分化およびトリグリセリドレベルの抑制効果を示し、オイルレッドＯ染色試薬で染色した分化した細胞の中に蓄積された脂肪を示す。
【図４】カボチャの茎から得た、各溶媒に可溶な成分の脂肪細胞（３Ｔ３−１）分化およびトリグリセリドレベルの抑制効果を示し、脂肪の阻害率を示す。
【図５】カボチャの茎から得たｃｍｃ−９精製抽出物の脂肪細胞（３Ｔ３−１）分化およびトリグリセリドレベルの阻害効果を示すものである。
【図６】脂肪細胞の分化が起こった際の、カボチャの茎から得た温水抽出物の遺伝子発現に対する制御効果を示すものである。
【図７】カボチャの茎から得た温水抽出物、各溶媒に可溶な成分、およびｃｍｃ−９精製抽出物のＰＰＡＲ活性に対する効果を示すものである。
【図８】カボチャ（ＰＧ１０５）の温水抽出物の、高脂肪食マウスの血中トリグリセリド濃度に対する効果を示すものであり、サンプルで処理したグループの６週間後の結果を示す。
【図９】カボチャ（ＰＧ１０５）の温水抽出物の、高脂肪食マウスの血中トリグリセリド濃度に対する効果を示すものであり、サンプルで処理したグループの１３週間後の結果を示す。
【図１０】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、高脂肪食マウスの血中コレステロール濃度に対する効果を示すものであり、サンプルで処理したグループの６週間後の結果を示す。
【図１１】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、高脂肪食マウスの血中コレステロール濃度に対する効果を示すものであり、サンプルで処理したグループの１３週間後の結果を示す。
【図１２】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、１３週間にわたって高脂肪食を与えられたマウスの脂肪肝に対する効果を示す。
【図１３】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、高脂肪食マウスの肝臓のトリグリセリドに対する効果を示す。
【図１４】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の脂肪代謝に関連した遺伝子発現に対する効果を示す。
【図１５】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の脂肪代謝に関連した遺伝子発現に対する効果を示す。
【図１６】は、カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、肥満マウスの体重に対する減量効果を示す。
【図１７】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、肥満マウスに対する制御効果を示す。
【図１８】ウリ科植物のクロロホルム可溶性成分のＴＬＣの結果（展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝２０：１）を示す。
【図１９】ウリ科植物から得た精製抽出物（ｃｍｃ−９）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウリ科植物の抽出物またはウリ科植物の抽出物から単離した精製抽出物から構成される、抗脂肪生成および抗肥満活性を有する組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
脂肪生成とは、前脂肪細胞が成熟した脂肪細胞に分化する過程のことであり、細胞質小器官に脂質滴と言われる脂質が蓄積し、肥満、糖尿病、脂肪症、冠状動脈性心臓病等の様々な成人病を引き起こす危険性があることが知られている。線維芽細胞といった前駆脂肪細胞が分化して成熟脂肪細胞となり、脂質滴がその内部に形成される。分化のメカニズムは３Ｔ３−Ｌ１といった特定の細胞株を使用して研究されてきた。脂肪細胞の分化は形態、ホルモン感受性、遺伝子の発現における連携した変化を伴う複雑な過程である。これらの変化はＣ／ＥＢＰ（ＣＡＡＴエンハンサー結合タンパク質）、ＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体）、ＡＤＤ／ＳＲＥＢＰ（脂肪細胞決定分化依存性因子１／ステロール調節エレメント結合タンパク質）等のいくつかの転写因子によって制御されている（Ｂａｒｔ Ａ Ｊｅｓｓｅｎ他。Ｇｅｎｅ， ２９９， ｐｐ９５−１００， ２００２； Ｄａｒｉｎｇｔｏｎ 他。Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７３， ｐｐ３００５７−３００６０， １９９８； Ｂｒｕｎ Ｒ．Ｐ 他。Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．， ８， ｐｐ８２６−８３２， １９９６）。脂肪細胞の分化において、これらの転写因子は異なる段階で誘導され機能的に相互作用し、遺伝子の発現を制御することで脂肪生成と脂質生成とを行う。例えば、Ｃ／ＥＢＰベータおよびデルタ因子は、ＭＤＩ（イソブチルメチルキサンチン、デキサメタゾン、インシュリン）等の外的ホルモン刺激によって一時的に過剰発現されると脂肪細胞の分化を引き起こし（Ｒｅｕｓｃｈ Ｊ． Ｅ．他。Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ．， ２０， ｐｐ１００８−１０２０， ２０００）、続いてＣ／ＥＢＰアルファおよびＰＰＡＲガンマの増加を誘導する（Ｊａｍｅｓ Ｍ． Ｎ． 他。Ｊ． Ｎｕｔｒ．， １３０， ｐｐ３１２２Ｓ−３１２６Ｓ， ２０００）。特に、脂肪細胞においては主にＰＰＡＲガンマが発現し、脂肪生成を決定する鍵となる転写因子である。ＰＰＡＲガンマはＲＸＲ（レチノイン酸Ｘ受容体）とヘテロ二量体を形成し、脂肪生成に関係する様々な遺伝子のプロモーター中のＰＰＲＥ（ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体）に結合する（Ｔｏｎｔｏｎｏｚ Ｐ． Ｅ． 他。Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．， ８， ｐｐ１２２４−１２３４， １９９４）。脂肪細胞の分化においてＣ／ＥＢＰアルファとＰＰＡＲガンマとの相互作用は非常に重要であり、これらの因子が脂肪酸結合タンパク質であるａＰ２および脂質代謝酵素等の脂肪細胞に特異的な遺伝子の発現を制御する。特に、ＡＤＤ１／ＳＲＥＢＰは脂質生成およびインシュリン刺激による遺伝子発現においても重要な役割を果たしており、ＡＤＤ１／ＳＲＥＢＰ１ｃの発現はＰＰＡＲガンマの活性化につながる（Ｒｏｓｅｎ Ｅ．Ｄ．他。Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ．， １６， ｐｐ１４５−１７１， ２０００； Ｏｓｂｏｒｎ Ｔ． Ｆ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７５． ｐｐ３２３７９−３２３８２， ２０００）。分化を終えた脂肪細胞は脂質を合成し、トリグリセリドとして貯蔵する。
【０００３】
その一方で、脂質代謝の恒常性は脂肪の合成と分解との釣りあいによって保たれている。ＡＤＤ１／ＳＲＥＢＰ１は脂肪酸、トリグリセリド、コレステロール、リン脂質等の合成をコントロールしている（Ｈｏｒｔｏｎ Ｊ． Ｄ． 他。Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．， １０９， ｐｐ１１２５−１１３１， ２００２）。ＳＲＥＢＰは約１１５０個のアミノ酸前駆体として合成され、小胞体と核膜に結合している。活性であるためには、細胞核に入ることができるように膜結合型ＳＲＥＢＰをタンパク質分解により切断してＮ末端セグメントを遊離しなければならない。切断したＳＲＥＢＰは核型を指定し、制御遺伝子プロモーター内のＳＲＥ（ステロール調節型エレメント）に結合する。ＳＲＥＢＰアイソフォームの１つであるＳＲＥＢＰ１ｃによって制御される遺伝子にはＡＣＬ（ＡＴＰシトレートリアーゼ）、ＡＣＣ（アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ）、ＦＡＳ（脂肪酸合成酵素）およびＳＣＤ（ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ）等が挙げられる（Ｏｓｂｏｒｎ Ｔ． Ｆ． 他。Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７５， ｐｐ３２３７９−３２３８２， ２０００； Ｓｏａｚｉｇ Ｌ． Ｌ． 他。Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７７， ｐｐ３５６２５−３５６３４， ２００２）。ＰＰＡＲアルファが、ＬＰＬ（リポタンパク質リパーゼ）、アポタンパク質、ＡＣＯ（アシルＣｏＡオキシダーゼ）、チオラーゼ等の脂質代謝酵素を制御することで（Ｄｒｅｙｅｒ Ｃ他。Ｃｅｌｌ， ６８， ｐｐ８７９−８８７， １９９２）脂質分解の制御における重要な役割を担っていることは以前から報告されていた（Ｂｅｉｓｉｅｇｅｌ Ｕ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， ９６， ｐｐ１３６５６−１３６６１， １９９９）。
【０００４】
肥満は長年に渡る、エネルギー摂取とエネルギー消費の不均衡から脂肪蓄積量の増大が起こったものである。肥満のメカニズムは完全には理解されていないが、複雑な相互作用関係にある神経、ホルモン、遺伝的、環境的要素が西洋風の食事により肥満の蔓延を引き起こしていると考えられている。脂肪の過剰な蓄積は糖尿病、高血圧、異常脂質血症、心疾患等の様々なメタボリック症候群を高い確率で引き起こすリスク要因になり得る（Ｍａｎｓｏｎ他。Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊ． Ｍｅｄ．， ３３３， ｐｐ６７７−６８５， １９９５； Ｋｏｐｌｅｍａｎ Ｐ． Ｇ．， Ｎａｔｕｒｅ， ４０４ ｐｐ６３５−６４３， ２０００； Ｍｕｓｔ他。ＪＡＭＡ ２８２， ｐｐ１５２３−１５２９． １９９９）。
【０００５】
ゼニカル（登録商標、スイス・ロシェ社）、リダクティル（登録商標、米国・アボット社）、エクソリゼ（登録商標、フランス・アトファルマ社）等が代表的な抗肥満薬として良く知られているが、心臓病、呼吸器疾患、ニューロン系疾患等の副作用があることから、より効果的な薬剤への需要がある。
【０００６】
近年の抗肥満薬開発の焦点は、食事量の減量、カロリー摂取の阻害、発熱反応の刺激、エネルギー代謝の調整、ニューロン神経系を通じてのシグナル伝達のコントロールである（Ｋｏｐｌｅｍａｎ Ｐ． Ｇ．， Ｎａｔｕｒｅ， ４０４ ｐｐ６３５−６４３， ２０００）。効果的な抗肥満薬を開発する試みは今までにも多くなされてきたが、安全性はもとより強力な効き目を示す、満足のいく薬剤はいまだ開発されていなかった。
【０００７】
従って、その安全性が証明されている天然成分を用いて効果的な抗肥満薬の開発を試みるほうが、合成物質を用いるよりもずっと効果的である。
【０００８】
双子葉植物網ウリ科に属する植物のほとんどは一年生または多年生のつる植物であり、熱帯および亜熱帯域に分布する。中でも、Ｍｅｌｏｔｈｒｉｓ ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｓｃｈｚｏｐｅｐｏｎ ｂｒｙｏｎｉａｅｆｏｌｉｕｓ、Ｇｙｎｏｓｔｅｍｍａ ｐｅｎｔａｐｈｙｌｌｕｍとその同類が分布しており、カボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）、きゅうり（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ）およびその同類が韓国で栽培されている。
【０００９】
ククルビチンと、リノール酸、オレイン酸、カロチン等の油脂を含むカボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）の駆虫作用；シトルリン、アラニン、果糖、グルコース等を含むスイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）の強力な利尿作用；洗浄用品としてのヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）；配糖体、コーヒー酸、ククルビタシン等を含むきゅうり（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ）の利尿作用が、文献により報告されている（Ｃｈｕｎｇ Ｂ． Ｓ他。ＨｙａｎｇｙａｋＤａｅｓａｊｅｏｎ， Ｙｏｕｎｇ−ｒｉｍ出版。ｐｐ９４５−９５７， １９９８）。
【００１０】
しかしながら、上記記載のいずれの文献も、強力な抗肥満効果を示すウリ科植物の抽出物の肥満予防または治療活性を報告・開示していない。また、上記文献の開示は参照することにより本発明に含まれるものとする。
【００１１】
ウリ科植物の抽出物の抗肥満効果を調査するため、本発明の発明者は脂肪細胞分化とトリグリセリド、脂肪細胞分化に関係するＰＰＡＲガンマ因子、ＡＣＯＩ、アポＣＩＩＩ等の遺伝子の発現に対する様々な試験管内実験と、脂肪細胞とトリグリセリドの蓄積に対する阻害効果および実験動物の体重の減少効果に関する動物実験を集中的に行った。これらの研究結果より、本発明のウリ科植物の抽出物が脂肪細胞とトリグリセリドの蓄積を強力に阻害し被験動物の体重を減少させることから強力な抗肥満薬として有用なことを確認することで、発明者は本発明を最終的に完成させるに至った。
【発明の開示】
【００１２】
従って、本発明は抗脂肪生成活性と抗肥満活性とを有するウリ科植物の抽出物または抽出物から単離した精製抽出物とを有効成分として、肥満と脂肪生成関連疾病を治療・予防するに効果的な量で含む医薬品組成物を提供するものである。
【００１３】
ここでいう「精製抽出物」とは本発明の発明者が命名した独創的な「ＣＭＣ−９」を含むものであり、以下の：ウリ科植物を乾燥させたものに重量で約５〜１５倍の蒸留水を添加し抽出して植物抽出物を得たあと、抽出物を減圧下で濾過および乾燥させて温水に可溶な植物抽出物を得る第１工程と；前記温水可溶性抽出物を水に懸濁させたあと、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール溶媒による分別に極性の低い順で供してそれぞれの有機溶媒に可溶な成分を得る第２工程と；前記クロロホルム可溶性成分をヘキサン：クロロホルム：メタノール（１６：１５：１）の混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して１１の副成分に分ける第３工程と；前記副成分のうち第９番目の成分をクロロホルム：メタノールの混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーとＨＰＬＣに繰り返し供し、「ｃｍｃ−９」と命名された、図１２にＴＬＣスペクトルを示す本発明の独創的な精製抽出物を得る工程から構成される方法で調製することができる。
【００１４】
ゆえに、本発明は上記記載の方法で調製した、強力な抗脂肪生成および抗肥満活性を有する新規性のあるｃｍｃ−９精製抽出物と、その調製方法を提供するものである。
【００１５】
ここでいう「ウリ科植物」とは、カボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）、ヒョウタン（Ｌａｇｅｎａｒｉａ ｓｉｃｅｒａｒｉａ ＳＴＡＮＤＬ． ｖａｒ． ｄｅｐｒｅｓｓａ ＨＥＲＡ）、およびきゅうり（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ）、好ましくはカボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）を含むものである。
【００１６】
上述の「材料」には、ウリ科植物のハーブ、果実、茎葉、好ましくは茎または葉が含まれる。
【００１７】
上述の「抽出物」には、ウリ科植物のハーブ、果実、茎葉、好ましくは茎または葉からの未精製抽出物または無極性溶媒に可溶な抽出物が含まれる。
【００１８】
従って本発明の目的は、肥満と脂肪生成関連疾病の治療と予防のための、ウリ科植物の未精製抽出物または無極性溶媒可溶性抽出物を有効成分として含む医薬品組成物を提供することである。
【００１９】
ここでいう「未精製抽出物」とは、植物材料を水、メタノールやエタノール等の低級アルコール、好ましくはメタノール等、またはその混合物で抽出することで調製された抽出物を含むものである。
【００２０】
ここでいう「無極性溶媒可溶性抽出物」とは、上記の未精製抽出物を例えばヘキサン、酢酸エチル、またはジクロロメタン、好ましくは酢酸エチル等の無極性溶媒で抽出することで調製することができる。
【００２１】
本発明の目的は、人間を含めた哺乳類の肥満および脂肪生成関連疾病の治療と予防用の治療薬を製造するための、ウリ科植物から単離した未精製抽出物、無極性溶媒可溶性抽出物、または上記記載のｃｍｃ−９抽出物の用途を提供するものである。
【００２２】
本発明の目的は、哺乳類の肥満および脂肪生成関連疾病の治療または予防方法を提供するものであり、ウリ科植物から単離した未精製抽出物、無極性溶媒可溶性抽出物、または上記記載のｃｍｃ−９抽出物を製剤的に許容範囲にある担体とともに、前記哺乳類に効果的な量を投与することを含む。
【００２３】
本発明の別の目的は、肥満および脂肪生成関連疾病を予防・緩和するための、ウリ科植物から単離した未精製抽出物、無極性溶媒可溶性抽出物、または上記記載のｃｍｃ−９抽出物と食品学的に許容範囲にある添加物から構成されるヘルスケア食品または食品添加物を提供するものである。
【００２４】
「肥満および脂肪生成関連疾病」という単語には、肥満、２型糖尿病、脂肪症、高脂血症、心疾患、アテローム性動脈硬化症等が含まれる。
【００２５】
本発明の医薬品組成物は、組成物の総重量あたり、上記抽出物を約０．０２〜９０％含み得る。
【００２６】
本発明のヘルスケア食品は上記抽出物を、組成物の総重量につき、０．０１〜８０％、好ましくは１〜５０％含む。
【００２７】
上記のヘルスケア食品はヘルスケア食品、健康飲料等に含有させてもよく、粉末、顆粒、錠剤、チュアブル錠、カプセル、飲料等として使用しても良い。
【００２８】
ウリ科植物から得られる本発明の独創的な未精製抽出物または無極性溶媒可溶性抽出物は、以下の好ましい態様に従って調製してもよい。
【００２９】
以下に、本発明を詳細に説明する。
【００３０】
ウリ科植物から得られる本発明の独創的な未精製抽出物または無極性溶媒可溶性抽出物は、以下の手順で詳細に調製することができる。
【００３１】
ウリ科植物から得られる独創的な未精製抽出物は、以下のようにして調製することが可能である；カボチャ、スイカ、ヘチマタワシ等のウリ科植物の茎または葉を乾燥、切断、圧搾したあと、体積で１〜２５倍、好ましくは約５〜１５倍の蒸留水、メタノール、エタノール、ブタノール等の低級アルコールまたはその混合物と混合する。好ましくはメタノールである；溶液を２０〜１００℃、好ましくは７０〜１００℃の温水で３０分〜２４時間、好ましくは３０分〜３時間かけて、温水抽出、冷水抽出、還流抽出、超音波抽出等の抽出法で１〜５回、好ましくは２〜３回連続して処理する；残留物をろ過して上清を得た後、ロータリーエバポレータで２０〜１００℃、好ましくは５０〜７０℃で濃縮し、その後、真空凍結乾燥、熱風乾燥、または噴霧乾燥によって乾燥させてウリ科植物の未精製抽出物の乾燥粗粉末を得る。この粉末は水、低級アルコール、またはその混合物に可溶である。
【００３２】
また、極性溶媒および無極性溶媒に可溶な本発明の抽出物を、以下の手順で調製することができる；上記記載の工程で得られた未精製抽出物を水に懸濁させ、その後、体積で１〜１００倍、好ましくは１〜５倍の量の酢酸エチル、クロロホルム、ヘキサン等の無極性溶媒と混合する；無極性溶媒可溶層を回収して、本発明の無極性溶媒に可溶な抽出物を得る。また、残りの極性溶媒可溶層を回収して、本発明の極性溶媒に可溶な抽出物を得る。極性溶媒に可溶な抽出物は水、低級アルコール、およびその混合物に可溶である。また、上記記載の工程に改良を加えたり、当技術分野で周知の従来法を用いてより強力な成分または化合物に分別または単離する工程にさらに供してもよい。方法としては、例えば、文献に開示されているものが挙げられる（Ｈａｒｂｏｒｎｅ Ｊ． Ｂ． Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄｓ： Ａ ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｍｏｄｅｒｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｏｆ ｐｌａｎｔ ａｎａｌｙｓｉｓ， ３ｒｄ Ｅｄ． ｐｐ６−７， １９９８）。
【００３３】
また、最も強力な抗脂肪生成活性と抗肥満活性を示すクロロホルム可溶性成分を、ヘキサン：クロロホルム：メタノール（１６：１５：１）の混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して１１の副成分を得る；このようにして得られた副成分の中でも最も強力な抗脂肪生成活性と抗肥満活性を有する９番目の成分を、クロロホルム：メタノール（３０：１）の混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーと、２０〜７０％のメタノールを移動相とし、４０％メタノールを流速２ｍｌ／ｍで使用したＨＰＬＣに繰り返しかけて独創的な「ｃｍｃ−９」抽出物を得ることで、本発明の独創的な「ＣＭＣ−９」を調製することができる。図１２に示すように、ＴＬＣ溶出溶媒システム（クロロホルム：メタノール＝２０：１）でｃｍｃ−９は２６．８分後に溶出、Ｒｆ値は０．３２であった。
【００３４】
本発明な独創的な抽出物の抗肥満効果を調査するため、本発明の発明者は脂肪細胞分化およびトリグリセリド、脂肪細胞分化に関係するＰＰＡＲガンマ因子、ＡＣＯＩ、アポＣＩＩＩ等の遺伝子の発現に対する阻害効果に関する様々な試験管内実験と、脂肪細胞とトリグリセリドの蓄積に対する抑制効果および実験動物の体重の減少効果に関する動物実験を集中的に行った。これらの研究結果より、本発明のウリ科植物の抽出物は脂肪細胞とトリグリセリドの蓄積を強力に阻害し被験動物の体重を減少させることから強力な抗肥満薬として有用なことを確認した。
本発明による抽出物は、製剤的な観点から許容範囲にある担体、アジュバントまたは希釈剤を含有する製剤組成物として提供することができる。例えば、本発明の抽出物はオイル、プロピレングリコール、または注射剤を製造する際に通常使用するその他溶媒に溶解させることができる。適当な担体の例としては、生理食塩水、ポリエチレングリコール、エタノール、植物性油、ミリスチン酸イソプロピルなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。外用としては、本発明の抽出物を軟膏やクリームにすることが可能である。
【００３５】
本発明の抽出物は強力な抗肥満活性および抗脂肪生成活性を有しており、ゆえに本発明の製剤組成物を肥満および脂肪生成関連疾病の治療や予防に使用してもよい。
【００３６】
以下に記載の製剤方法および賦形剤は単なる例にすぎず、本発明をいかなるうえでも制限するものではない。
【００３７】
医薬品の剤形とした本発明の抽出物は、その製剤的な観点からみて許容範囲にある塩として使用してもよい。また、その他の製剤的に活性な化合物と組み合わせての使用はもちろん、単体で使用しても適当なものと組み合わせての使用であってもよい。
【００３８】
本発明の抽出物は、通常の生理食塩水、５％デキストロース等の水溶性溶媒や、植物性油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪酸のエステルまたはプロピレングリコール等の非水溶性溶媒に溶解、懸濁、または乳化させることで注射製剤としてもよい。製剤は可溶化剤、等張剤、懸濁化剤、乳化剤、安定剤、防腐剤等の通常の添加物を含んでいてもよい。
【００３９】
本発明の独創的な抽出物の望ましい投与量は、状況や対象の体重、重症度、剤形、投与経路、投与期間によって異なり、当業者が選択してもよい。しかし、望ましい効果を得るためには、本発明の独創的な抽出物を、体重／日あたり、０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．００１から１００ｍｇ／ｋｇ投与することが一般的に勧められる。一日一回投与しても、何回かにわけて投与してもよい。組成物という点では、抽出物の量は組成物の総重量につき０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．０００１〜１重量％にすべきである。
【００４０】
本発明の製剤組成物は、哺乳類（ラット、マウス、家畜または人間）等の被験動物に様々な経路で投与することができる。全ての投与経路が考えられるが、例えば、経口投与、直腸投与、静脈内投与、筋肉投与、皮下投与、鞘内投与、硬膜外投与、または脳室内投与が挙げられる。
【００４１】
また、本発明の抽出物は様々な機能性健康食品およびヘルスケア食品の主成分、または添加物や補助剤としても使用することができる。
【００４２】
ここでいう「機能性健康食品」とは「人間または哺乳類の肥満や脂肪生成関連疾病を予防または改善するために本発明の化合物を通常の食品に添加して、物理的または生理的機能性等を高めた機能性食品」と定義される。
【００４３】
本発明のその他の目的は、肥満と脂肪生成関連疾病を予防・緩和するための、ウリ科植物から単離した未精製抽出物、無極性溶媒可溶性抽出物、または上述のｃｍｃ−９抽出物と食品学的に許容範囲にある添加物から構成されるヘルスケア食品を提供することである。
【００４４】
ここでいう「ヘルスケア食品」とは「特に意図された効果はないものの、全般的な効果を添加物として少量で、もしくはカプセル・丸薬・錠剤等として全量で発揮する本発明の抽出物を含有する食品」と定義される。
【００４５】
ここでいう「食品学的にみて許容範囲にある添加物」とは「その用途が直接的であれ間接的であれ一成分であること自体あるいはその反対で食品の特性に影響を与えることに帰着する、または帰着することが十分に期待しえる物質」と定義される。例としては、増粘剤、熟成剤、漂白剤、抑制剤、湿潤剤、固化防止剤、清澄剤、硬化剤、乳化剤、安定剤、シックナー、塩基および酸、発泡剤、栄養剤、着色剤、着香料、甘味料、防腐剤、酸化防止剤等が挙げられ、以下で詳細に説明する。
【００４６】
ある特定の目的をもって食品にある物質を添加する場合はそれを直接添加物と称し、梱包や貯蔵、その他の取り扱いに応じて微量添加する場合は間接食品添加物と称される。
【００４７】
上記記載の健康食品は、肥満および脂肪生成関連疾病の予防と改善を目的として、食品、健康飲料、食事療法等に取り入れることができ、粉末、顆粒、錠剤、チュアブル錠、カプセル、飲料等の形態で使用してもよい。
【００４８】
また、上記記載の抽出物を、肥満および脂肪生成関連疾病の予防と改善を目的として食品または飲料に添加することもできる。機能性健康食品またはヘルスケア食品としての食品または飲料に添加する上記記載の抽出物の量は、機能性健康食品組成物としては、概して食品総重量の約０．０１〜１００ｗ／ｗ ％である。特に、機能性健康食品、ヘルスケア食品または特殊栄養食品における本発明の抽出物の好ましい量は、各食品の使用目的によって異なっていてもよいが、一般的には、食品組成を１００％として本発明の抽出物を麺類等の食品中に添加物として約０．０１〜５％使用するのが好ましく、ヘルスケア食品においては４０〜１００％の比率で使用するのが好ましい。
【００４９】
本発明の健康飲料組成物が上記記載の抽出物を主成分として記載の比率で含有しているとした場合、その他の液状成分については特に制限はなく、その他の成分としては様々な清涼剤や通常の飲料等の天然糖類が挙げられる。上記記載の天然糖類としては、グルコース、果糖等の単糖類；麦芽糖、蔗糖等の二糖類；デキストリン、シクロデキストリン等の一般的な糖；キシリトール、エリスリトール等の糖アルコールが例として挙げられる。上記記載のもの以外の清涼剤としては、ソーマチン、レバウディオサイドＡ等のステビア抽出物、グリシルリジン等の天然清涼剤、サッカリン、アスパルテーム等の合成清涼剤が好適に有用なものとして挙げられる。上記記載の天然糖類の量は、通常、本発明の飲料組成物１００ｍｌあたり約１〜２０ｇ、好ましくは５〜１２ｇである。
【００５０】
上記記載の組成物以外の成分としては様々な栄養剤、ビタミン、ミネラルまたは電解質、合成着香料、着色料、チーズやチョコレートの場合は品質改良剤、ペクチン酸およびその塩、アルギニン酸およびその塩、有機酸、保護コロイド粘着剤、ｐＨ調整剤、安定剤、防腐剤、グリセリン、アルコール、炭酸飲料等で使用される炭酸化剤が挙げられる。上記記載のもの以外の成分ついては、天然フルーツジュースに使用する果汁、果汁飲料、野菜飲料が挙げられ、成分は独立して使用しても組み合わせて使用してもよい。各成分の比率はあまり重要ではないが、通常、組成物１００ ｗ／ｗ％に対して約０から２０ ｗ／ｗ％である。こういったものを添加する、上述の抽出物を含有する食品としては様々な食品、飲料、ガム、複合ビタミン剤、健康促進食品等が挙げられる。
【００５１】
以下の実施例を用いて、本発明をより詳細に説明する。しかしながら、いかなる方法によっても本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５２】
本発明の精神または範囲から外れることなく、本発明の組成物、その用途および製剤に様々な改良や変更を加えうることは当業者には自明である。
【００５３】
本発明を以下の実施例を用いてより詳細に説明するが、いかなる方法によっても本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。
【実施例】
【００５４】
以下の参考例、実施例、および実験例は本発明をより詳しく説明するためのものであり、その範囲を限定するものではない。
【００５５】
［実施例１ ウリ科植物の温水抽出物の調製］
韓国の市場で購入したカボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）の茎を乾燥させたものそれぞれ２キロを切断し、メタノール２０リットルと混合し、還流抽出器を用いて９０℃で１時間抽出した。この抽出工程を３回繰り返して上清を回収し、フィルターペーパーでろ過した後、上清を減圧下で濃縮して、カボチャ、スイカ、ヘチマタワシの乾燥温水抽出物を３００ｇ、３５０ｇ、２４０ｇ、それぞれ得た。各抽出物を蒸留水に溶解して濃度１００ ｍｇ／ｍｌとし、以下の実験例においてテストサンプルとして使用した。
【００５６】
［実施例２ ヘキサン可溶性抽出物の調製］
実施例１で調製した乾燥させた温水可溶性抽出物２００ｇを１リットルの蒸留水に懸濁させ、そこに１リットルのヘキサンを添加した。得られた水溶液をヘキサン層と水層との分別に３回供して、回収したヘキサン層を濾過した後、真空ロータリーエバポレータで乾燥させて１８０ｍｇのヘキサン可溶性抽出物を得た。残った水層１リットルは以下の工程で使用した。
【００５７】
［実施例３ クロロホルム可溶性抽出物の調製］
残った水層に１リットルに１リットルのクロロホルムを添加し、得られた水溶液をクロロホルム層と水層との分別に３回供した。回収したクロロホルム層を濾過し、ロータリーエバポレータで乾燥させて７７０ｍｇのクロロホルム可溶性抽出物を得た。残った水層は以下の工程で使用した。
【００５８】
［実施例４ 酢酸エチル可溶性抽出物の調製］
残った水層１リットルに１リットルの酢酸エチルを添加し、得られた水溶液を、酢酸エチル層と水層との分別に３回供した。回収した酢酸エチル層を濾過した後、真空ロータリーエバポレータで乾燥させて２．１ｇの酢酸エチル可溶性抽出物を得た。残った水層は以下の工程で使用した。
【００５９】
［実施例５ ブタノール可溶性抽出物の調製］
残った水層１リットルに１リットルのブタノールを添加し、得られた水溶液をブタノール層と水層との分別に３回供した。回収したブタノール層を濾過した後、真空ローターリーエバポレータで乾燥させて７．４ｇのブタノール可溶性抽出物を得た。残った水層は以下の工程で使用した。
【００６０】
［実施例６ ｃｍｃ−９精製抽出物の調製］
２５ｇのシリカゲル（メルク社。Ｎｏ−９３８５）を充填したカラム（３ｘ２７ｃｍ）を使用して、７７０ｍｇのクロロホルム可溶性抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。混合溶媒（ヘキサン：クロロホルム：メタノール＝１６：１５：１）を移動相として溶出させた。回収した成分を乾燥させて１１の成分に分けた。つまり第１成分（３１ｍｇ）、第２成分（１８ｍｇ）、第３成分（６５ｍｇ）、第４成分（１８ｍｇ）、第５成分（５４ｍｇ）、第６成分（７５ｍｇ）、第７成分（３９ｍｇ）、第８成分（２００ｍｇ）、第９成分（２０ｍｇ）、第１０成分（１６３ｍｇ）、および第１１成分（６４ｍｇ）である。最も強力な抗肥満活性を示す第９成分２０ｍｇを、シリカゲル２ｇ（メルク社。９３８５）を充填したシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供した。溶出は、直線勾配のクロロホルム：メタノールを含有する混合溶媒を用いて（３０：１？＞１０：１）段階的に行った。さらに第９成分を精製するために、２０〜７０％のメタノールを移動相として４０％メタノールを流速２ｍｌ／ｍで使用したＨＰＬＣを行って２６．８分で溶出された本発明の独創的な「ｃｍｃ−９」抽出物を得た。図１８および図１９に示されるように、ＴＬＣ溶出溶媒（クロロホルム：メタノール＝２０：１）を用いた場合、ｃｍｃ−９抽出物は１５分で溶出され、Ｒｆ値は０．３２だった。
【００６１】
［実験例１ 脂肪細胞分化およびトリグリセリドレベルの阻害効果］
実施例１〜６で調製した抽出物の脂肪細胞分化およびトリグリセリドレベルの阻害活性を測定するために、以下の実験を行った。
（１−１．テストサンプルの未精製抽出物）
ＡＴＣＣ（米国・アメリカンティッシューカルチャーコレクション社）から購入した脂肪細胞（３Ｔ３−Ｌ１）を１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地で培養し、成熟した脂肪細胞に分化させるためにＭＤＩカクテル（イソブチルメチルキサンチン、デキサメタゾン、インシュリン）を添加した。２日後、培地を交換してインシュリンのみで処理した。その後、培地を交換し同濃度のインシュリンで処理する作業を一日おきに行った。分化が起こったら濃度２．５〜１０００ｕｇ／ｍｌのＭＤＩで処理し、培地を交換する度に同濃度のＭＤＩで処理した。トログリタゾン（シグマ社）および１０ ｕＭ ＳＢ２０３５８０（シグマ社） を対照グループとして使用し、カボチャ、スイカ、ヘチマタワシの温水抽出物を乾燥させたもの各１ ｍｇ／ｍｌで処理して、それぞれのテストサンプルグループとした。８日後、分化した細胞内に蓄積された脂肪をオイルレッドＯ染色試薬で染色して、吸光度を光学濃度から定性的に測定した。阻害率（％）は、以下の実験式１を用いて計算した。
【００６２】
［実験式１］
阻害率（％）＝［テストグループのＯ．Ｄ．］／［対照グループのＯ．Ｄ．値］ｘ１００
結果、前駆脂肪細胞３Ｔ３−Ｌ１細胞は分化して成熟細胞となり、トリグリセリドがＭＤＩ処理グループの細胞内に蓄積されていることが確認された。トログリタゾン処理グループにおいてはトリグリセリドがより多く生成され、他のグループよりも濃い赤に染色された。一方、ＳＢ２０３５８０処理グループではトリグリセリドは生成されなかった。テストサンプル処理グループ、つまりカボチャ、スイカ、ヘチマタワシの抽出物、特にカボチャ処理グループにおける生成したトリグリセリドのレベルは、その投与量に応じて著しく低下した（図１と図２を参照のこと）。
【００６３】
（１−２． テストサンプルの各溶媒可溶性成分）
実施例３〜５で調製した、カボチャの茎から単離したクロロホルム、酢酸エチル、ブタノールに可溶な成分の脂肪細胞分化とトリグリセリドレベルに対する阻害活性を測定するために、上記記載の実験例１−１と同一の工程を行った。各成分の処理濃度は１００ ｕｇ／ｍｌである。
【００６４】
結果、クロロホルムと酢酸エチル可溶性成分は脂肪細胞分化とトリグリセリドの生成に対する強力な阻害活性を示した。特に、クロロホルム可溶性成分は脂肪細胞分化に対して最も強力な阻害効果を示した（図３および図４を参照のこと）。
【００６５】
（１−３．テストサンプルの「ｃｍｃ−９」精製抽出物）
実施例６で調製した、カボチャの茎から単離したｃｍｃ−９精製抽出物の脂肪細胞分化とトリグリセリドレベルに対する阻害活性を測定するために、上記記載の実験例１−１と同一の工程を行った。
【００６６】
図５からわかるように、トログリタゾン処理グループにおいてはトリグリセリドがより多く生成され、他のグループよりも濃い赤に染色された。一方、ＳＢ２０３５８０処理グループではトリグリセリドは生成されなかった。ｃｍｃ−９処理グループは、脂肪細胞分化およびトリグリセリド蓄積に対して最も強力な阻害効果を示した。
【００６７】
［実験例２ 脂肪細胞分化工程における遺伝子の発現に対する制御効果］
実施例１〜６で調製した抽出物の、脂肪細胞分化工程における遺伝子の発現に対する制御効果を測定するために、以下の実験を行った。
【００６８】
最初に、前駆脂肪細胞３Ｔ３−Ｌ１の分化をＭＤＩ処理によって誘導した。ＰＰＡＲガンマ活性化剤であるトログリタゾン（米国・シグマ社）およびｐ３８阻害剤であるＳＢ ２０３５０８を対照グループとして処理に使用した。細胞を実施例１で調製した様々な濃度の、つまり１ｍｇ／ｍｌ、１０ ｍｇ／ｍｌ、１００ ｍｇ／ｍｌのカボチャの温水抽出物で処理した。処理した細胞は、培地を交換しつつ、３７℃で１０日間培養した。培養した細胞を冷却した生理食塩水で２回洗浄した。トリアゾール剤を用いてそのＲＮＡを抽出し、逆転写酵素を用いて逆転写し、そのｃＤＮＡを得た。また、全ての因子、つまりＰＰＡＲアルファ、ＡＣＯＩ、チオラーゼ、アポＣ−ＩＩＩ、ＳＣＤ−Ｉ、ＧＡＰＤＨ等を増幅させた。増幅させた遺伝子発現の違いはアガロースゲル電気泳動によって比較した。また、各遺伝子増幅で使用したプライマー配列を配列リスト１〜１２で説明した。
【００６９】
図６からわかるように、１ ｍｇ／ｍｌのＰＧ１０５で処理した細胞はＰＰＡＲアルファの発現が向上した。また、ＡＣＯＩとチオラーゼはＰＰＡＲアルファによって活性化された。一方、アポＣ−ＩＩＩの発現は抑制された。
【００７０】
（実験例３ ＰＰＡＲアルファ活性化に対する制御効果）
実施例１〜６で調製した抽出物の、ＰＰＡＲアルファの活性化に対する制御効果を測定するために、以下の実験を行った。
【００７１】
実施例２〜４で調製したヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル可溶性成分、および実施例６で調製したｃｍｃ−９精製抽出物を、以下の実験においてテストサンプルとして使用した。
【００７２】
ｔｋＰＰＲＥルシフェラーゼレポータープラスミドのみで形質転換した細胞グループと、レポータープラスミドとＰＰＡＲアルファ、デルタ、またはガンマを発現するベクターとの双方で同時に形質転換した細胞グループとの２種類の形質転換ＣＶ−１細胞グループを用意し、２４時間後、ＰＧ１０５とその他成分を含むテストサンプルで処理して２４時間後の細胞を回収し、そのルシフェラーゼ活性を測定した。対照薬剤としては、ＰＰＡＲアルファに関しては１００ ｕＭのフェノフィブラート（シグマ社 Ｆ６０２０−１００Ｇ）を、ＰＰＡＲデルタに関しては１０ ｕＭ のＧＷ５０１５１６ （シグマ社）を、ＰＰＡＲガンマに関しては１００ ｕＭのトログリタゾンで処理した。
【００７３】
図７からわかるように、ｔｋＰＰＲＥでのみ処理したグループにはルシフェラーゼ活性が見られず、クロロホルム、ヘキサン可溶性成分で処理したグループにおいてはＰＰＡＲアルファで同時に処理したグループは強力なルシフェラーゼ活性を示した。その活性はエタノールでのみ処理した陰性コントロールグループにおけるそれと比較して約６０倍高い。また、フェノフィブラート（シグマ社）で処理した陽性コントロールグループにおけるそれと比較して５倍以上高い。ＰＰＡＲデルタを形質転換させた場合、ヘキサン成分で処理したルシフェラーゼ活性は陰性コントロールにおけるそれと比較して約２０倍高く、ＧＷ５０１５１６で処理した陽性コントロールグループにおけるそれと同様であった。しかしながら、ＰＰＡＲガンマを形質転換させた場合、ＰＧ１０５で処理したテストサンプル、各種成分およびｃｍｃ−９抽出物に活性は見られなかった。
【００７４】
従って、ウリ科植物の抽出物が脂質代謝を制御可能なことが確認された。
［実験例４ 高脂肪食マウスにおける、トリグリセリドの蓄積に対する阻害効果］
実施例１〜６で調製した抽出物の、高脂肪食マウスにおけるトリグリセリドの蓄積に対する阻害活性を測定するために、以下の実験を行った。
【００７５】
（４−１．前処理）
１８〜２０グラムの生後８〜１０週間のＣ５７／ＢＬマウス（米国・ジャクソンラボ）を換気ケージにいれ、５つのグループに分けた。グループ１には通常の食餌を、残り４つのグループ、つまりグループ２〜５には脂肪分４５％以上の高脂肪食（米国・ジャクソンラボ）を与えた。グループ１および２には蒸留水と、グループ３には実施例１で調製したＰＧ１０５を８ｍｇ、１６週間にわたって毎日経口で与えた。４０ ｕｇのゼニカル（ロシェ社）をグループ４に、５ ｕｇのリダクティル（アボット社）をグループ５に毎日経口投与した。投与６週間後と１３週間後にそれぞれ、血液サンプルを採取し、血中トリグリセリドレベルとコレステロールレベルを測定した。１３週間後、マウスを殺して肝臓を取り出し、その血中トリグリセリドレベルを測定した。脂肪内臓および肝臓からｍＲＮＡを単離して、脂質吸収と代謝経路に関する遺伝子の発現をＲＴ−ＰＣＲ法を用いて調べた。
【００７６】
（４−２．血中トリグリセリドとコレステロールに対する効果）
投与後６週間後と１３週間後にそれぞれ、血液サンプルを採取し、血中トリグリセリドレベルとコレステロールレベルを測定した。
【００７７】
結果、蒸留水のみを与えた高脂肪食グループであるグループ２の６週間後および１３週間後の血中グリセリド濃度はそれぞれ１３４．６７ ｍｇ／ｄｌと１６９．３３ ｍｇ／ｄｌであった。これは高脂肪食を与えられていないグループの結果に比べて１．６６倍高いものであった。これに対し、ＰＧ１０５を与えられたグループ３の６週間後および１３週間後の血中濃度はそれぞれ９４ ｍｇ／ｄｌと９０ ｍｇ／ｄｌであった。これは高脂肪食を与えられていないグループの結果と同様であった（図８および図９を参照のこと）。
【００７８】
蒸留水のみを与えられたグループ２の血中コレステロール濃度は１８０ ｍｇ／ｄｌであり、ＰＧ１０５を与えられたグループ３は１４８．６ ｍｇ／ｄｌであった（図１０および図１１を参照のこと）。
【００７９】
（４−３．脂肪肝に対する効果）
裸眼で肝臓を観察した結果、蒸留水のみを与えられた高脂肪食グループの投与１３週後の肝臓は黄色がかった脂肪肝であり、一方、ＰＧ１０５抽出物を与えられた高脂肪食グループの肝臓は鮮紅色であった（図１２を参照のこと）。
【００８０】
（４−４．肝臓内でのトリグリセリド蓄積に対する効果）
投与１３週間後の肝臓内のトリグリセリド蓄積レベルを測定した。結果、蒸留水を与えられた高脂肪食マウスの蓄積トリグリセリドレベルは１１７．５３ ｍｇ／ｄｌであり、高脂肪食を与えられていないグループの結果の５倍であり、肝臓における過剰なトリグリセリドの蓄積を示した。これに対し、ＰＧ１０５を投与されたグループのトリグリセリド濃度は４６．１５ ｍｇ／ｄｌであり正常の範囲にあり、裸眼での観察結果と一致した（図１３を参照のこと）。
【００８１】
（４−５．脂肪代謝に関係する遺伝子発現に対する効果）
脂肪分解と脂質生成を含む脂肪代謝に関わる遺伝子の発現に対するウリ科植物の抽出物の効果を調査するために、脂肪細胞と肝臓からＲＮＡを取り出し、ＲＴ−ＰＣＲ法に供して脂肪代謝に関連する遺伝子の発現における変化を調査した。
【００８２】
結果、文献に開示の（Ｓｃｈｏｎｆｅｌｄ， Ｇ．他。Ｍｅｔａｂ． Ｃｉｎ． Ｅｘｐ．， ２８， ｐｐ１００１−１００９， １９７９）、臓器中の脂肪細胞に蓄積されたトリグリセリドの脂肪酸への分解に関係する酵素であるリポタンパクリパーゼ（ＬＰＬ）の発現が、ＰＧ１０５の投与により顕著に増加した。また、リポタンパクリパーゼ酵素の活性を阻害するとされるＡＰＯＣＩＩＩタンパク質（Ｗｉｎｄｌｅｒ Ｅ．他。Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２５５， ｐｐ８３０３−８３０７， １９８０； Ｗａｎｇ Ｃ． Ｓ．他。Ｊ． Ｃｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．， ７５． ｐｐ３８４−３９０， １９８５）の発現が顕著に阻害された（図１４および図１５を参照のこと）。
【００８３】
図１０ａに示されるように、ＳＣＤ（ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼ）の発現が著しく阻害された。ＳＣＤは、パルミトイルＣｏＡの９位と１０位との間、基材としてのステアロイルＣｏＡにシス二重結合を導入するとされており（Ｅｎｏｃｈ， Ｈ．Ｇ．他。Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２５１， ｐｐ５０９５−５１０３， １９７６）、さらに、リン脂質、コレステロール、トリグリセリド等を構成するのに使用される（Ｎｔａｍｂｉ， Ｊ． Ｍ．， Ｊ． Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．， ４０， ｐｐ１５４９−１５５８， １９９９）。
【００８４】
これらの結果から、ＰＧ１０５の経口投与には、脂質合成の阻害と同様に脂質の分解の促進いう２つの働きがあることがわかった。
【００８５】
（実験例５ 高脂肪食マウスにおける、トリグリセリドの蓄積に対する阻害効果）
実施例１〜６で調製した抽出物の、肥満体のマウス（ｄｂ／ｄｂ）の減量および脂質レベル制御効果を測定するために、以下の実験を行った。
【００８６】
自由に水が飲める環境下において、生後５週間のメスの肥満体マウス（米国・ジャクソンラボ）を８週間飼育した。８ｍｇのＰＧ１０５を１００ｍｌの蒸留水に溶解したものを６週間にわたって各マウスに経口投与した。殺菌した蒸留水を陰性コントロールとしてのマウスに投与した。体重変化を週１回測定し、摂取した食餌の量を毎日記録した。また、血中の脂質レベルを３週間目と６週間目に測定した。
【００８７】
結果、ＰＧ１０５を投与されたグループには、６週間目で約１０〜１５％の体重の減少がみられるほどの顕著な減量効果が見られた（図１６を参照のこと）。
【００８８】
ＰＧ１０５を投与されたグループには、６週間目の血中トリグリセリドのレベルが１５０ ｍｇ／ｄｌに下がるほどの顕著な効果がみられた（図１７を参照のこと）。
【００８９】
ボランティア患者における減量効果および脂質レベルの制御効果
実施例１〜６で調製した抽出物の、人間のボランティア患者の減量および脂質レベルの制御効果を測定するために、以下の実験を行った。
【００９０】
ヘチマタワシの茎から温水抽出した抽出物を、２７〜６２才の女性４人と３０から４８才の男性２人から成る６人のボランティア患者に２〜５ｇ／日を２週間、経口投与し、患者の体重（ｋｇ）と胴周り（ｃｍ）を測定した。総脂質レベル（ｍｇ／ｄｌ）を診断キット（総脂質試薬、米国・ヴェディーズ社）を用いて熱量測定法で測定した（光度計、アジレント８４５３、米国・アジレント社）。また、ＦＦＡレベル（遊離脂肪酸、ｕＥｑ／ｌ）をヒタリを用いて（日立７１５０、日本・日立）酵素法で測定した（Ｓｉｃｄｉａ ＮＥＦＡＹＭＥ、日本・イーケン社）。コレステロールレベル（ｍｇ／ｄｌ）は、アドヴィア（アドヴィア１６５５、日本・バイエル社）を用いてコレステロールキットで（コレステロール試薬、米国・バイエル社）で測定した。ＶＬＤＬコレステロールレベル（ｍｇ／ｄｌ）を分光光度計（光度計４０２０、ドイツ・ロシェ社）を用いて診断キット（ＢＬＦＩＩ、日本・イーケン社）で測定した。ＬＤＬコレステロールレベル（ｍｇ／ｄｌ）をヒタクリ（７１５３、日本・日立）を用いてＬＤＬコレステロールキット（ＬＤＬコレステロール試薬、ドイツ・ロシェ社）で測定した。ＨＤＬコレステロールレベル（ｍｇ／ｄｌ）をアドヴィア（アドヴィア１６５０、日本・バイエル社）を用いて診断キットで（直接ＨＤＬ−コレステロール、英国・バイエル社）で測定した。トリグリセリドレベルを（ｍｇ／ｄｌ）アドヴィア（アドヴィア１６５０、日本・バイエル社）でトリグリセリドキット（トリグリセリド試薬、米国・バイエル社）で測定した。グルコースレベル（ｍｇ／ｄｌ）をアドヴィア（アドヴィア１８５０、日本・バイエル社）で診断キット（グルコースヘキソキナーゼ、米国・バイエル社）で測定した。ＳＧＯＴおよびＳＧＰＴ（Ｕ／ｌ）レベルをアドヴィア（アドヴィア１６５５、日本・バイエル社）でＡＳＴ試薬キット（米国・バイエル社）とＡＬＴ試薬キット（米国・バイエル社）で測定した。
結果、以下の表１からわかるように、ヘチマタワシの茎から抽出した温水抽出物は強力な減量および脂質代謝制御効果を示した。
［表１］
【００９１】
従って、同じ科に属するカボチャの茎の抽出物だけではなくヘチマタワシの茎からの抽出物も強力な抗肥満活性を有していることが上述の臨床例により確認された。
【００９２】
（実験例７ 毒性試験）
＜試験方法＞
生後６週間のＳＰＦ ＳＤラットに投与したテストサンプルの急性毒性試験を以下の手順で行った。
【００９３】
各２匹のラットで構成される４グループに、ＰＧ１０５抽出物を１００ ｍｇ／ｋｇ経口投与して、２週間観察した。
＜結果＞
いずれのグループまたは性別に関しても、死亡率、臨床的徴候、体重変化、および全体の所見に処置による効果の違いは見られなかった。経口投与における最低ＬＤ５０値は１００ｇ／ｋｇより高かった。これらの結果から、本発明によるテスト化合物が安全でありながらも強力であることがわかった。
以下に、製剤方法と賦形剤の種類とを説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。代表的な製剤例は以下に記載のとおりである。
＜粉剤の調製＞
ＰＧ１０５・・・・・・・・・・５０ｍｇ
乳糖・・・・・・・・・・・・・１００ｍｇ
タルク・・・・・・・・・・・・１０ｍｇ
上記成分を混合して密封容器に充填することで粉剤を調製した。
＜錠剤の調製＞
ＰＧ１０５・・・・・・・・・５０ｍｇ
コーンスターチ・・・・・・・１００ｍｇ
乳糖・・・・・・・・・・・・１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム・・２ｍｇ
上記成分を混合、錠剤状にすることで錠剤を調製した。
＜カプセルの調製＞
ＰＧ１０５・・・・・・・・・５０ｍｇ
コーンスターチ・・・・・・・１００ｍｇ
乳糖・・・・・・・・・・・・１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム・・２ｍｇ
錠剤は、上記成分を混合し、通常のゼラチン調製方法でゼラチンカプセルに充填することで調製した。
＜注射剤の調製＞
ｃｍｃ−９抽出物・・・・・・５０ｍｇ
注射用蒸留水・・・・・・・・最適量
ｐＨ調整剤・・・・・・・・・最適量
注射剤は、通常の注射剤調製法に従って有効成分を溶解し、ｐＨを約７．５に調整し、２ｍｌのアンプルに全成分を充填して殺菌することで調製した。
＜液剤の調製＞
ｃｍｃ−９抽出物・・・・・・０．１〜８０ｇ
糖・・・・・・・・・・・・・５〜１０ｇ
クエン酸・・・・・・・・・・０．０５〜０．３％
カラメル・・・・・・・・・・０．００５〜０．０２％
ビタミンＣ・・・・・・・・・０．１〜１％
蒸留水・・・・・・・・・・・７９〜９４％
ＣＯ２ガス・・・・・・・・・０．５〜０．８２％
液剤は、通常の液剤調製法に従って有効成分を溶解し、全成分を充填・殺菌することで調製した。
＜ヘルスケア食品の調製＞
ｃｍｃ−９抽出物・・・・・・１０００ｍｇ
ビタミン混合物・・・・・・・最適量
酢酸ビタミンＡ・・・・・・・７０ｍｇ
ビタミンＥ・・・・・・・・・１．０ｍｇ
ビタミンＢ１・・・・・・・・０．１３ｍｇ
ビタミンＢ２・・・・・・・・０．１５ｍｇ
ビタミンＢ６・・・・・・・・０．５ｍｇ
ビタミンＢ１２・・・・・・・・０．２ｍｇ
ビタミンＣ・・・・・・・・・１０ｍｇ
ビオチン・・・・・・・・・・１０ｍｇ
ニコチン酸アミド・・・・・・１．７ｍｇ
葉酸・・・・・・・・・・・・５０ｍｇ
カルシウムパントテン酸・・・０．５ｍｇ
ミネラル混合物・・・・・・・最適量
硫酸鉄・・・・・・・・・・・１．７５ｍｇ
酸化亜鉛・・・・・・・・・・０．８２ｍｇ
炭酸マグネシウム・・・・・・２５．３ｍｇ
リン酸一カリウム・ ・・・・１５ｍｇ
第二リン酸カルシウム・・・・５５ｍｇ
クエン酸カリウム・・・・・・９０ｍｇ
炭酸カルシウム・・・・・・・１００ｍｇ
塩化マグネシウム・・・・・・２４．８ｍｇ
上記記載のビタミンおよびミネラル混合物には様々な変更を加えてもよく、そういった変更は本発明の精神と範囲から外れるものとはみなされない。
＜健康飲料の調製＞
ＰＧ１０５・・・・・・・・・１０００ｍｇ
クエン酸・・・・・・・・・・１０００ｍｇ
オリゴ糖・・・・・・・・・・１００ｇ
アプリコット濃縮物・・・・・２ｇ
タウリン・・・・・・・・・・１ｇ
蒸留水・・・・・・・・・・・９００ｍｌ
健康飲料は、通常の健康飲料調製方法に従って有効成分を溶解、混合、８５℃で１時間攪拌、濾過、全成分を１０００ｍｌのアンプルに充填・殺菌することで調製した。
【００９４】
本発明の記載より、同じものに様々なアレンジを加えうることは明白である。そういった変更は本発明の精神と範囲から外れるものとはみなされない。また、当業者に自明なそういった改良は、以下に述べる請求項の範囲に含まれるものとする。
【産業上の利用可能性】
【００９５】
本発明で記載のように、本発明のウリ科植物の抽出物は強力な体重減少活性、血中トリグリセリドおよびコレステロールレベルを低減する効果、ＰＰＡＲアルファおよびデルタ活性の活性作用、ステアロイルＣｏＡデサチュラーゼの遺伝子発現の抑制作用、および前駆脂肪細胞から脂肪が生成するのを毒性を伴うことなく防ぐ効果を有しており、医薬品またはヘルスケア食品として、肥満および脂肪生成関連疾病を治療または予防するのに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】ウリ科植物の温水抽出物の脂肪細胞（３Ｔ３−１）分化およびトリグリセリドレベルの阻害効果を示すものであり、オイルレッドＯ染色試薬で染色した分化した細胞中に蓄積された脂肪の顕微鏡写真である。
【図２】ウリ科植物の温水抽出物の脂肪細胞（３Ｔ３−１）分化およびトリグリセリドレベルの阻害効果を示すものであり、染色した脂肪の阻害率を示す。
【図３】カボチャの茎から得た、各溶媒に可溶な成分の脂肪細胞（３Ｔ３−１）分化およびトリグリセリドレベルの抑制効果を示し、オイルレッドＯ染色試薬で染色した分化した細胞の中に蓄積された脂肪を示す。
【図４】カボチャの茎から得た、各溶媒に可溶な成分の脂肪細胞（３Ｔ３−１）分化およびトリグリセリドレベルの抑制効果を示し、脂肪の阻害率を示す。
【図５】カボチャの茎から得たｃｍｃ−９精製抽出物の脂肪細胞（３Ｔ３−１）分化およびトリグリセリドレベルの阻害効果を示すものである。
【図６】脂肪細胞の分化が起こった際の、カボチャの茎から得た温水抽出物の遺伝子発現に対する制御効果を示すものである。
【図７】カボチャの茎から得た温水抽出物、各溶媒に可溶な成分、およびｃｍｃ−９精製抽出物のＰＰＡＲ活性に対する効果を示すものである。
【図８】カボチャ（ＰＧ１０５）の温水抽出物の、高脂肪食マウスの血中トリグリセリド濃度に対する効果を示すものであり、サンプルで処理したグループの６週間後の結果を示す。
【図９】カボチャ（ＰＧ１０５）の温水抽出物の、高脂肪食マウスの血中トリグリセリド濃度に対する効果を示すものであり、サンプルで処理したグループの１３週間後の結果を示す。
【図１０】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、高脂肪食マウスの血中コレステロール濃度に対する効果を示すものであり、サンプルで処理したグループの６週間後の結果を示す。
【図１１】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、高脂肪食マウスの血中コレステロール濃度に対する効果を示すものであり、サンプルで処理したグループの１３週間後の結果を示す。
【図１２】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、１３週間にわたって高脂肪食を与えられたマウスの脂肪肝に対する効果を示す。
【図１３】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、高脂肪食マウスの肝臓のトリグリセリドに対する効果を示す。
【図１４】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の脂肪代謝に関連した遺伝子発現に対する効果を示す。
【図１５】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の脂肪代謝に関連した遺伝子発現に対する効果を示す。
【図１６】は、カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、肥満マウスの体重に対する減量効果を示す。
【図１７】カボチャの温水抽出物（ＰＧ１０５）の、肥満マウスに対する制御効果を示す。
【図１８】ウリ科植物のクロロホルム可溶性成分のＴＬＣの結果（展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝２０：１）を示す。
【図１９】ウリ科植物から得た精製抽出物（ｃｍｃ−９）のＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウリ科植物を乾燥させたものに重量で約５〜１５倍の蒸留水を添加し抽出して植物抽出物を得たあと、抽出物を減圧下で濾過および乾燥させて温水に可溶な植物抽出物を得る第１工程と；前記温水可溶性抽出物を水に懸濁させたあと、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール溶媒による分別に極性の低い順で供してそれぞれの有機溶媒に可溶な成分を得る第２工程と；前記クロロホルム可溶性成分をヘキサン：クロロホルム：メタノール（１６：１５：１）の混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して１１の副成分に分ける第３工程と；前記副成分のうち第９番目の成分をクロロホルム：メタノールの混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーとＨＰＬＣに繰り返し供し、「ｃｍｃ−９」と命名された、強力な抗肥満および抗脂肪生成活性を有し図１２のＴＬＣスペクトルを示す独創的な精製抽出物を得る工程からなる方法によって調製される、ウリ科植物から単離した精製抽出物。
【請求項２】
抗脂肪生成活性と抗肥満活性とを有する、請求項１に記載のウリ科植物の抽出物または精製抽出物を有効成分として、肥満と脂肪生成関連疾病を治療および予防するに効果的な量で含むことを特徴とする医薬品組成物。
【請求項３】
前記ウリ科植物が、カボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）、ヒョウタン（Ｌａｇｅｎａｒｉａ ｓｉｃｅｒａｒｉａ ＳＴＡＮＤＬ． ｖａｒ． ｄｅｐｒｅｓｓａ ＨＥＲＡ）、およびきゅうり（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ）から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ウリ科植物がカボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）から選択されることを特徴とする、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
前記ウリ科植物の抽出物がその茎または葉から抽出されることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記肥満および脂肪生成関連疾病が、肥満、２型糖尿病、脂肪症、高脂血症、心疾患、アテローム性動脈硬化症等を含むことを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
前記抽出物が未精製抽出物または無極性溶媒可溶性抽出物であることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
前記未精製抽出物が温水可溶性抽出物であることを特徴とする、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記無極性溶媒がヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチルから選択されることを特徴とする、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記無極性溶媒がクロロホルムであることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
組成物が上記抽出物を組成物の総重量につき約０．０２〜９０重量％含有することを特徴とする、請求項２〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
肥満と脂肪生成関連疾病を予防および緩和するための、請求項１に記載のウリ科植物の未精製抽出物、無極性溶媒可溶性抽出物、またはｃｍｃ−９抽出物、および食品学的に許容範囲にある添加物を含むことを特徴とするヘルスケア食品。
【請求項１３】
前記食品がヘルスケア飲料であることを特徴とする、請求項１２に記載のヘルスケア食品。
【請求項１】
ウリ科植物を乾燥させたものに重量で約５〜１５倍の蒸留水を添加し抽出して植物抽出物を得たあと、抽出物を減圧下で濾過および乾燥させて温水に可溶な植物抽出物を得る第１工程と；前記温水可溶性抽出物を水に懸濁させたあと、ヘキサン、クロロホルム、酢酸エチル、ブタノール溶媒による分別に極性の低い順で供してそれぞれの有機溶媒に可溶な成分を得る第２工程と；前記クロロホルム可溶性成分をヘキサン：クロロホルム：メタノール（１６：１５：１）の混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供して１１の副成分に分ける第３工程と；前記副成分のうち第９番目の成分をクロロホルム：メタノールの混合溶媒を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーとＨＰＬＣに繰り返し供し、「ｃｍｃ−９」と命名された、強力な抗肥満および抗脂肪生成活性を有し図１２のＴＬＣスペクトルを示す独創的な精製抽出物を得る工程からなる方法によって調製される、ウリ科植物から単離した精製抽出物。
【請求項２】
抗脂肪生成活性と抗肥満活性とを有する、請求項１に記載のウリ科植物の抽出物または精製抽出物を有効成分として、肥満と脂肪生成関連疾病を治療および予防するに効果的な量で含むことを特徴とする医薬品組成物。
【請求項３】
前記ウリ科植物が、カボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）、ヒョウタン（Ｌａｇｅｎａｒｉａ ｓｉｃｅｒａｒｉａ ＳＴＡＮＤＬ． ｖａｒ． ｄｅｐｒｅｓｓａ ＨＥＲＡ）、およびきゅうり（Ｃｕｃｕｍｉｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ）から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ウリ科植物がカボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ ｍｏｓｃｈａｔａ ＤＵＣＨ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ ＳＣＨＲＡＤ）、ヘチマタワシ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ Ｌ． ＲＯＥＭ）から選択されることを特徴とする、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
前記ウリ科植物の抽出物がその茎または葉から抽出されることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
前記肥満および脂肪生成関連疾病が、肥満、２型糖尿病、脂肪症、高脂血症、心疾患、アテローム性動脈硬化症等を含むことを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項７】
前記抽出物が未精製抽出物または無極性溶媒可溶性抽出物であることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項８】
前記未精製抽出物が温水可溶性抽出物であることを特徴とする、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記無極性溶媒がヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチルから選択されることを特徴とする、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記無極性溶媒がクロロホルムであることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
組成物が上記抽出物を組成物の総重量につき約０．０２〜９０重量％含有することを特徴とする、請求項２〜１０のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
肥満と脂肪生成関連疾病を予防および緩和するための、請求項１に記載のウリ科植物の未精製抽出物、無極性溶媒可溶性抽出物、またはｃｍｃ−９抽出物、および食品学的に許容範囲にある添加物を含むことを特徴とするヘルスケア食品。
【請求項１３】
前記食品がヘルスケア飲料であることを特徴とする、請求項１２に記載のヘルスケア食品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【公表番号】特表２００７−５１３１５０（Ｐ２００７−５１３１５０Ａ）
【公表日】平成１９年５月２４日（２００７．５．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４２５０１（Ｐ２００６−５４２５０１）
【出願日】平成１６年１２月３日（２００４．１２．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００４／００３１６８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０５３７２３
【国際公開日】平成１７年６月１６日（２００５．６．１６）
【出願人】（５０６１８５８８３）ヘリクサー カンパニー リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年５月２４日（２００７．５．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１２月３日（２００４．１２．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００４／００３１６８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０５３７２３
【国際公開日】平成１７年６月１６日（２００５．６．１６）
【出願人】（５０６１８５８８３）ヘリクサー カンパニー リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
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