エタノール産生のための組み換え細菌
本発明は、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌を提供する。異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現は、組み換え細菌が無機塩培地で生育する場合に混合栄養の付加無しに発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす。組み換え細菌を産生する方法及びその組み換え細菌を用いてエタノールを産生する方法も開示されている。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌。
【請求項２】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体がリボソームＲＮＡオペロンに組み込まれている、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌。
【請求項３】
組み換え細菌が抗生物質マーカーを含有していない、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌。
【請求項４】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を阻害するか或いは産生するエタノールの量を減少させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が除去又は不活性化されている、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌。
【請求項５】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体、及び異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子を包含する組み換え細菌。
【請求項６】
当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項７】
（ａ）当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、リボソームＲＮＡ遺伝子に組み込まれている異種エタノール産生遺伝子の全相補体；及び
（ｂ）異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子；
を包含しており；そして
（ｉ）１つ又はそれ以上の抗生物質マーカーが除去されていて；及び
（ｉｉ）異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を阻害するか或いは産生するエタノールの量を減少させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が不活性化されている：組み換え細菌。
【請求項８】
リボソームＲＮＡオペロンが、ｒｒｎＡ、ｒｒｌＥ、ｒｒｎＣ、ｒｒｎＤ、ｒｒｎＥ、ｒｒｎＧ及びｒｒｎＨからなる群より選択される遺伝子を包含する、請求項２又は請求項７に記載の組み換え細菌。
【請求項９】
リボソームＲＮＡオペロンがｒｒｌＥ遺伝子を包含している、請求項２又は請求項７に記載の組み換え細菌。
【請求項１０】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体が、ｐｄｃ、ａｄｈＡ及びａｄｈＢを包含している、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項１１】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体がザイモモナス・モビリス（Zymomonas mobilis）由来である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項１２】
抗生物質マーカーが、アプラマイシン、カナマイシン、テトラサイクリン、アンピシリン及びクロラムフェニコールからなる群より選択される、請求項３又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１３】
不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が、ＮＡＤＨ酸化のための発酵経路に関与しているタンパク質をコードする、請求項４又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１４】
不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が、ピルビン酸代謝のための代替経路に関与しているタンパク質をコードする、請求項４又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１５】
不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が細菌内因性のものである、請求項４又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１６】
不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が細菌と異種である、請求項４又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１７】
不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が、ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域を包含している遺伝子、ｌｄｈＡ、ａｃｋＡ、ａｄｈＥ、ｆｒｄオペロン、ｃａｓＡＢ及びｍｇｓＡからなる群より選択される、請求項４又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１８】
ａｃｋＡ、ａｄｈＥ、ｌｄｈＡ遺伝子及びｆｒｄオペロンが、ピルビン酸代謝のための代替経路に関与しているタンパク質をコードする、請求項１７に記載の組み換え細菌。
【請求項１９】
当該ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域、ｌｄｈＡ、ａｃｋＡ、ａｄｈＥ、ｆｒｄオペロンを包含している遺伝子及びｍｇｓＡが、内因性遺伝子である、請求項１７に記載の組み換え細菌。
【請求項２０】
当該ｃａｓＡＢ遺伝子が異種遺伝子である、請求項１７に記載の組み換え細菌。
【請求項２１】
ｌｄｈＡ遺伝子が欠失している、請求項１７に記載の組み換え細菌。
【請求項２２】
ｌｄｈＡ遺伝子が内因性遺伝子である、請求項２１に記載の組み換え細菌。
【請求項２３】
さらにｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域を包含している、請求項１〜５に記載の組み換え細菌。
【請求項２４】
ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域が内因性の遺伝子領域である、請求項２３に記載の組み換え細菌。
【請求項２５】
ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域が大腸菌（Escherichia coli）由来のものである、請求項１〜５に記載の組み換え細菌。
【請求項２６】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が、分泌タンパク質、ポリサッカラーゼ、グルカナーゼ、エンドグルカナーゼ、エキソグルカナーゼ、セロビオヒドラーゼ、β−グルコシダーゼ、エンド−１，４−β−キシラナーゼ、β−キシロシダーゼ、α−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、アセチルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、プルラナーゼ、β−グルカナーゼ、ヘミセルラーゼ、アラビノシダーゼ、マンナナーゼ、ペクチンヒドロラーゼ又はペクチン酸リアーゼをコードする遺伝子である、請求項６に記載の組み換え細菌。
【請求項２７】
遺伝子がｅｓｔＺ遺伝子である、請求項２６に記載の組み換え細菌。
【請求項２８】
ｅｓｔＺ遺伝子が異種遺伝子である、請求項２７に記載の組み換え細菌。
【請求項２９】
ｅｓｔＺ遺伝子がシュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）由来のものである、請求項２８に記載の組み換え細菌。
【請求項３０】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする遺伝子が、ｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子を包含している、請求項２６に記載の組み換え細菌。
【請求項３１】
ｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子が内因性遺伝子である、請求項３０に記載の組み換え細菌。
【請求項３２】
ｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子が大腸菌（Escherichia coli）由来のものである、請求項３１に記載の組み換え細菌。
【請求項３３】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする遺伝子が、ｃｅｌＹ遺伝子を包含している、請求項２６に記載の組み換え細菌。
【請求項３４】
ｃｅｌＹ遺伝子が異種遺伝子である、請求項３３に記載の組み換え細菌。
【請求項３５】
ｃｅｌＹ遺伝子が黒脚病菌（Erwinia chrysanthemi）由来のものである、請求項３４に記載の組み換え細菌。
【請求項３６】
ｍｇｓＡ遺伝子が欠失している、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項３７】
ｍｇｓＡ遺伝子が内因性遺伝子である、請求項３６に記載の組み換え細菌。
【請求項３８】
細菌が嫌気性条件下でエタノールを発酵主生成物として産生する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項３９】
組み換え細菌が無機塩培地で生育できる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項４０】
無機塩培地がキシロースを含有している、請求項３９に記載の組み換え細菌。
【請求項４１】
無機塩培地が少なくとも約７％のキシロースを含んでいる、請求項４０に記載の組み換え細菌。
【請求項４２】
無機塩培地がベタインを含有している、請求項４０に記載の組み換え細菌。
【請求項４３】
組み換え細菌がＡＭ１培地で生育ができる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項４４】
ＡＭ１培地がキシロースを含有している、請求項４３に記載の組み換え細菌。
【請求項４５】
ＡＭ１培地が少なくとも約９％のキシロースを含んでいる、請求項４４に記載の組み換え細菌。
【請求項４６】
産生されたエタノールが、嫌気性条件下の無機塩培地中での非気体状発酵生成物の全量の５０％超を構成している、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項４７】
細菌がグラム陽性細菌又はグラム陰性細菌である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項４８】
細菌が、アシネトバクター属（Acinetobacter）、グルコノバクター属（Gluconobacter）、エシェリキア属（Escherichia）、ザイモモナス属（Zymomonas）、ジオバクター属（Geobacter）、シェワネラ属（Shewanella）、サルモネラ属（Salmonella）、シゲラ属（Shigella）、エンテロバクター属（Enterobacter）、シトロバクター属（Citrobacter）、エルウィニア属（Erwinia）、セラチア属（Serratia）、プロテウス属（Proteus）、ハフニア属（Hafnia）、エルシニア属（Yersinia）、モルガネラ属（Morganella）、エドワードジエラ属（Edwardsiella）及びクレブシエラ属（Klebsiella）からなる群より選択されるグラム陰性細菌である、請求項４７に記載の組み換え細菌。
【請求項４９】
細菌が、大腸菌（Escherichia coli.）である、請求項４８に記載の組み換え細菌。
【請求項５０】
細菌が、バチルス属（Bacillus）、クロストリジウム属（Clostridium）、コリネバクテリウム属（Corynebacterium）、ジオバチラス属（Geobacillus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ラクトコッカス属（Lactococcus）、オエノコッカス属（Oenococcus）、連鎖球菌属（Streptococcus）及びユーバクテリウム属（Eubacterium）からなる群より選択されるグラム陽性細菌である、請求項４７に記載の組み換え細菌。
【請求項５１】
細菌が大腸菌ＫＯ１１株（ＡＴＣＣ５５１２４）由来である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５２】
細菌が大腸菌ＳＺ１１０株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５１）由来である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５３】
細菌が大腸菌ＬＹ１６５株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５２）である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５４】
細菌が大腸菌ＬＹ１６８株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５３）である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５５】
細菌が株ＬＹ１４９、ＬＹ１５１、ＬＹ１５８、ＬＹ１５９、ＬＹ１６０、ＬＹ１６０ｉｍ、ＬＹ１６１、ＬＹ１６３、ＬＹ１６８ｉｍ、ＬＹ１６９、ＬＹ１７０、ＬＹ１７２、ＬＹ１７２ｉｍ、ＬＹ１７３、ＬＹ１７８、ＬＹ１８０、ＬＹ１８６、ＢＷ３４−ＸＺ１０６、ＢＷ３４−ＸＺ１０７、ＢＷ３４−ＸＺ１０８、ＢＷ３４−ＸＺ１０９、ＢＷ３４−ＸＺ１１０、ＢＷ３４−ＸＺ１１１、ＢＷ３４−ＸＺ１１２、ＢＷ３４−ＸＺ１１３、ＢＷ３４−ＸＺ１１４、ＢＷ３４−ＸＺ１１５、ＢＷ３４−ＸＺ１１６、ＢＷ３４−ＸＺ１１７、ＢＷ３４−ＸＺ１１８、ＢＷ３４−ＸＺ１１９、ＢＷ３４−ＸＺ１２０、ＢＷ３４−ＸＺ１２１、ＢＷ３４−ＸＺ１２２、ＢＷ３４−ＸＺ１２３及びＢＷ３４−ＸＺ１２４のいずれか１つである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５６】
方法が異種エタノール産生遺伝子の全相補体を宿主細菌に組み込み、それによって異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌を産生する工程を包含している、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含している組み換え細菌を産生する方法。
【請求項５７】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体をリボソームＲＮＡオペロンに組み込むことをさらに包含している、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
リボソームＲＮＡオペロンが、ｒｒｎＡ、ｒｒｌＥ、ｒｒｎＣ、ｒｒｎＤ、ｒｒｎＥ、ｒｒｎＧ及びｒｒｎＨからなる群より選択される遺伝子を包含する、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
リボソームＲＮＡオペロンがｒｒｌＥ遺伝子を包含している、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
１つ又はそれ以上の抗生物質マーカーを除去することをさらに包含している、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を阻害するか或いは産生するエタノールの量を減少させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子を不活性化させることをさらに包含している、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の異種遺伝子を組み込むことをさらに包含している、請求項５６に記載の方法。
【請求項６３】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体を宿主細菌のｒｒｌＥ遺伝子内に組み込むこと；
１つ又はそれ以上の抗生物質マーカーを除去すること；及び
エタノール産生のために必要ではない、異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を阻害するか或いは産生するエタノールの量を減少させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子を不活性化すること：
の工程をさらに包含している、請求項５６に記載の方法。
【請求項６４】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体が、ｐｄｃ、ａｄｈＡ及びａｄｈＢを包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
ｐｄｃ、ａｄｈＡ及びａｄｈＢ遺伝子がザイモモナス・モビリス（Zymomonas mobilis）由来である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体がプロモーターを持たないオペロンに含まれている、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
プロモーターを持たないオペロンが、ｐｄｃとａｄｈＢの間のＳｐｅＩ部位に連結されるａｄｈＡ遺伝子を含有している、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
プロモーターを持たないオペロンが、除去可能な抗生物質マーカーを含有している、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
プロモーターを持たないオペロンが、Ｔｎ５トランスポゾンを用いて組み込まれている、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
抗生物質マーカーがリコンビナーゼで除去される、請求項５６、６３又は６８に記載の方法。
【請求項７１】
抗生物質マーカーがアプラマイシン、カナマイシン、テトラサイクリン、アンピシリン及びクロラムフェニコールからなる群より選択される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
１つ又はそれ以上の遺伝子が欠失又は突然変異により不活性化される、請求項６１又は６３に記載の方法。
【請求項７３】
１つ又はそれ以上のエタノール産生遺伝子が欠失により不活性化される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
ピルビン酸代謝の代替経路に関与しているタンパク質をコードする遺伝子が不活性化される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体を組み込む前に、請求項７３〜７４のいずれか一項に記載の遺伝子が不活性化される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７６】
宿主細菌が大腸菌ＫＯ１１株（ＡＴＣＣ５５１２４）である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７７】
ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域を包含しているエタノール産生遺伝子が欠失により不活性化される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ピルビン酸代謝の代替経路に関与しているタンパク質をコードする遺伝子が欠失している、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
当該遺伝子がａｃｋＡ、ａｄｈＥ、ｌｄｈＡ及びｍｇｓＡを含有する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
組み換え細菌がＳＺ１１０（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５１）由来である、請求項７７〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
ｌｄｈＡ遺伝子が欠失により不活性化される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８２】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体を組み込む前に、ｌｄｈＡ遺伝子が欠失される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
異種ｃａｓＡＢ遺伝子が欠失により不活性化される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８４】
ｃａｓＡＢ遺伝子がクレブシエラ・オキシトカ（Klebsiella oxytoca.）由来である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
ｃａｓＡＢ遺伝子をｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子で置換する工程をさらに包含する、請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
ｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子が大腸菌由来である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
ｅｓｔＺ遺伝子を組み込む工程をさらに包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
ｅｓｔＺ遺伝子がシュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）由来である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
エタノール産生遺伝子の全相補体を組み込んだ後に、ｅｓｔＺ遺伝子を組み込む、請求項８７に記載の方法。
【請求項９０】
内因性ｍｇｓＡ遺伝子が欠失により不活性化される、請求項７２に記載の方法。
【請求項９１】
ｌａｃオペロンを除去又は不活性化する工程をさらに包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
ｌａｃオペロンを回復させる工程をさらに包含している、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
ｌａｃオペロンが回復した遺伝子がｌａｃＡ、ｌａｃＹ及びｌａｃＺを包含している、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
ｌａｃオペロンを包含している遺伝子が大腸菌由来のものである、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
ｆｒｄＢ遺伝子を欠失させる工程をさらに包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
ｆｒｄＣ遺伝子を部分的に欠失させる工程をさらに包含している、請求項９２に記載の方法。
【請求項９７】
ｃｅｌＹ遺伝子を組み込む工程をさらに包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
ｃｅｌＹ遺伝子がｆｒｄＡ遺伝子の下流に組み込まれる、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
ｃｅｌＹ遺伝子が黒脚病菌（E.chrysanthemi）由来である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
ｃａｓＡＢ遺伝子を組み込む工程をさらに包含している、請求項５５〜６２に記載の方法。
【請求項１０１】
ｃａｓＡＢ遺伝子がｌｄｈＡ遺伝子に組み込まれる、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
ｃａｓＡＢ遺伝子がクレブシエラ・オキシトカ（Klebsiella oxytoca）由来である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域の機能を回復させることをさらに包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域の機能をｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域の相同的組み換えによって回復させる、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
エタノール産生遺伝子の全相補体の組み込みの前に、ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域の機能を回復させる、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
宿主細菌が大腸菌ＳＺ１１０株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５１）である、請求項５６〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
組み換え細菌が大腸菌ＬＹ１６５株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５２）である、請求項５６〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
組み換え細菌が大腸菌ＬＹ１６８株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５３）である、請求項５６〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
組み換え細菌が無機塩培地で生育できる、請求項５６〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
無機塩培地がキシロースを含有している、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、請求項４９〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
オリゴ糖源を請求項１〜５５のいずれか一項に記載の組み換え細菌とエタノール産生に適した条件下で接触させ、それによりオリゴ糖源からエタノールを産生することを包含する、エタノールをオリゴ糖源から産生する方法。
【請求項１１３】
オリゴ糖源が、リグノセルロース、ヘミセルロース、セルロース及びペクチン又はそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
産生されたエタノールが、非気体状発酵生成物の全量の４０％超を構成している、請求項１１２又は１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
組み換え細菌を供給することをさらに包含する、請求項１１１〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
組み換え細菌を得ることをさらに包含する、請求項１１１〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
オリゴ糖を組み換え細菌と生育培地中で接触させることをさらに包含する、請求項１１１〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
生育培地が無機塩培地又はＭ１培地から選択される、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
無機塩培地が、１リットル当たり３．５ｇのＫＨ２ＰＯ４、５．０ｇのＫ２ＨＰＯ４、３．５ｇの(ＮＨ４)２ＨＰＯ４、０．２５ｇのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、１５ｍｇのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．５ｍｇのチアミン及び１ｍＬの微量金属ストックを、２〜９（ｗ／ｖ）％のキシロースを補完して含有している、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２０】
無機塩培地にベタインを添加することをさらに包含する、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
無機塩培地にＭＯＰＳを添加することをさらに包含する、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２２】
ＡＭ１培地が、１リットル当たり２．６３ｇの(ＮＨ４)２ＨＰＯ４、０．８７ｇのＮＨ４Ｈ２ＰＯ４、０．３７５ｇ／ＬのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．１４９ｇのＫＣＬ、０．１６３ｇのベタインＨＣＬ（ｐＨ７．４）及び１．５ｍＬの微量金属ストックを、２〜１４（ｗ／ｖ）％の糖を指示するように補完して含有している、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２３】
微量金属ストックが、０．１ＭのＨＣｌ（１リットル当たり１．６ｇのＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ、０．２ｇのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１ｇのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．２ｇのＺｎＣｌ２、０．２ｇのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、０．０５ｇのＨ３ＢＯ３、０．３３ｇのＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ）中で調製される、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、請求項１１２〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
請求項１〜５５のいずれか一項に記載の組み換え細菌を用いる、請求項１１２に記載のエタノールを製造する方法。
【請求項１２６】
当該組み換え細菌が請求項５５〜１１０のいずれか一項に記載の方法の段階を包含する工程により作成される、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌。
【請求項１２７】
当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、請求項１２６に記載の組み換え細菌。
【請求項１２８】
請求項１〜５５のいずれか一項に記載の組み換え細菌及び使用のための説明書を包含しているキット。
【請求項１２９】
使用のための説明書が、請求項９５〜１２５のいずれか一項に記載の方法に従っている、請求項１２７に記載のキット。
【請求項１３０】
糖源をさらに包含している、請求項１２８に記載のキット。
【請求項１３１】
大腸菌ＳＺ１１０株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５１）。
【請求項１３２】
大腸菌ＬＹ１６５株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５２）。
【請求項１３３】
大腸菌ＬＹ１６８株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５３）。
【請求項１】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌。
【請求項２】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体がリボソームＲＮＡオペロンに組み込まれている、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌。
【請求項３】
組み換え細菌が抗生物質マーカーを含有していない、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌。
【請求項４】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を阻害するか或いは産生するエタノールの量を減少させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が除去又は不活性化されている、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌。
【請求項５】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体、及び異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子を包含する組み換え細菌。
【請求項６】
当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項７】
（ａ）当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、リボソームＲＮＡ遺伝子に組み込まれている異種エタノール産生遺伝子の全相補体；及び
（ｂ）異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子；
を包含しており；そして
（ｉ）１つ又はそれ以上の抗生物質マーカーが除去されていて；及び
（ｉｉ）異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を阻害するか或いは産生するエタノールの量を減少させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が不活性化されている：組み換え細菌。
【請求項８】
リボソームＲＮＡオペロンが、ｒｒｎＡ、ｒｒｌＥ、ｒｒｎＣ、ｒｒｎＤ、ｒｒｎＥ、ｒｒｎＧ及びｒｒｎＨからなる群より選択される遺伝子を包含する、請求項２又は請求項７に記載の組み換え細菌。
【請求項９】
リボソームＲＮＡオペロンがｒｒｌＥ遺伝子を包含している、請求項２又は請求項７に記載の組み換え細菌。
【請求項１０】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体が、ｐｄｃ、ａｄｈＡ及びａｄｈＢを包含している、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項１１】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体がザイモモナス・モビリス（Zymomonas mobilis）由来である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項１２】
抗生物質マーカーが、アプラマイシン、カナマイシン、テトラサイクリン、アンピシリン及びクロラムフェニコールからなる群より選択される、請求項３又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１３】
不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が、ＮＡＤＨ酸化のための発酵経路に関与しているタンパク質をコードする、請求項４又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１４】
不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が、ピルビン酸代謝のための代替経路に関与しているタンパク質をコードする、請求項４又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１５】
不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が細菌内因性のものである、請求項４又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１６】
不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が細菌と異種である、請求項４又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１７】
不活性化されている１つ又はそれ以上の遺伝子が、ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域を包含している遺伝子、ｌｄｈＡ、ａｃｋＡ、ａｄｈＥ、ｆｒｄオペロン、ｃａｓＡＢ及びｍｇｓＡからなる群より選択される、請求項４又は７に記載の組み換え細菌。
【請求項１８】
ａｃｋＡ、ａｄｈＥ、ｌｄｈＡ遺伝子及びｆｒｄオペロンが、ピルビン酸代謝のための代替経路に関与しているタンパク質をコードする、請求項１７に記載の組み換え細菌。
【請求項１９】
当該ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域、ｌｄｈＡ、ａｃｋＡ、ａｄｈＥ、ｆｒｄオペロンを包含している遺伝子及びｍｇｓＡが、内因性遺伝子である、請求項１７に記載の組み換え細菌。
【請求項２０】
当該ｃａｓＡＢ遺伝子が異種遺伝子である、請求項１７に記載の組み換え細菌。
【請求項２１】
ｌｄｈＡ遺伝子が欠失している、請求項１７に記載の組み換え細菌。
【請求項２２】
ｌｄｈＡ遺伝子が内因性遺伝子である、請求項２１に記載の組み換え細菌。
【請求項２３】
さらにｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域を包含している、請求項１〜５に記載の組み換え細菌。
【請求項２４】
ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域が内因性の遺伝子領域である、請求項２３に記載の組み換え細菌。
【請求項２５】
ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域が大腸菌（Escherichia coli）由来のものである、請求項１〜５に記載の組み換え細菌。
【請求項２６】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子が、分泌タンパク質、ポリサッカラーゼ、グルカナーゼ、エンドグルカナーゼ、エキソグルカナーゼ、セロビオヒドラーゼ、β−グルコシダーゼ、エンド−１，４−β−キシラナーゼ、β−キシロシダーゼ、α−グルクロニダーゼ、α−Ｌ−アラビノフラノシダーゼ、アセチルエステラーゼ、アセチルキシランエステラーゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ、グルコアミラーゼ、プルラナーゼ、β−グルカナーゼ、ヘミセルラーゼ、アラビノシダーゼ、マンナナーゼ、ペクチンヒドロラーゼ又はペクチン酸リアーゼをコードする遺伝子である、請求項６に記載の組み換え細菌。
【請求項２７】
遺伝子がｅｓｔＺ遺伝子である、請求項２６に記載の組み換え細菌。
【請求項２８】
ｅｓｔＺ遺伝子が異種遺伝子である、請求項２７に記載の組み換え細菌。
【請求項２９】
ｅｓｔＺ遺伝子がシュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）由来のものである、請求項２８に記載の組み換え細菌。
【請求項３０】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする遺伝子が、ｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子を包含している、請求項２６に記載の組み換え細菌。
【請求項３１】
ｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子が内因性遺伝子である、請求項３０に記載の組み換え細菌。
【請求項３２】
ｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子が大腸菌（Escherichia coli）由来のものである、請求項３１に記載の組み換え細菌。
【請求項３３】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする遺伝子が、ｃｅｌＹ遺伝子を包含している、請求項２６に記載の組み換え細菌。
【請求項３４】
ｃｅｌＹ遺伝子が異種遺伝子である、請求項３３に記載の組み換え細菌。
【請求項３５】
ｃｅｌＹ遺伝子が黒脚病菌（Erwinia chrysanthemi）由来のものである、請求項３４に記載の組み換え細菌。
【請求項３６】
ｍｇｓＡ遺伝子が欠失している、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項３７】
ｍｇｓＡ遺伝子が内因性遺伝子である、請求項３６に記載の組み換え細菌。
【請求項３８】
細菌が嫌気性条件下でエタノールを発酵主生成物として産生する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項３９】
組み換え細菌が無機塩培地で生育できる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項４０】
無機塩培地がキシロースを含有している、請求項３９に記載の組み換え細菌。
【請求項４１】
無機塩培地が少なくとも約７％のキシロースを含んでいる、請求項４０に記載の組み換え細菌。
【請求項４２】
無機塩培地がベタインを含有している、請求項４０に記載の組み換え細菌。
【請求項４３】
組み換え細菌がＡＭ１培地で生育ができる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項４４】
ＡＭ１培地がキシロースを含有している、請求項４３に記載の組み換え細菌。
【請求項４５】
ＡＭ１培地が少なくとも約９％のキシロースを含んでいる、請求項４４に記載の組み換え細菌。
【請求項４６】
産生されたエタノールが、嫌気性条件下の無機塩培地中での非気体状発酵生成物の全量の５０％超を構成している、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項４７】
細菌がグラム陽性細菌又はグラム陰性細菌である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項４８】
細菌が、アシネトバクター属（Acinetobacter）、グルコノバクター属（Gluconobacter）、エシェリキア属（Escherichia）、ザイモモナス属（Zymomonas）、ジオバクター属（Geobacter）、シェワネラ属（Shewanella）、サルモネラ属（Salmonella）、シゲラ属（Shigella）、エンテロバクター属（Enterobacter）、シトロバクター属（Citrobacter）、エルウィニア属（Erwinia）、セラチア属（Serratia）、プロテウス属（Proteus）、ハフニア属（Hafnia）、エルシニア属（Yersinia）、モルガネラ属（Morganella）、エドワードジエラ属（Edwardsiella）及びクレブシエラ属（Klebsiella）からなる群より選択されるグラム陰性細菌である、請求項４７に記載の組み換え細菌。
【請求項４９】
細菌が、大腸菌（Escherichia coli.）である、請求項４８に記載の組み換え細菌。
【請求項５０】
細菌が、バチルス属（Bacillus）、クロストリジウム属（Clostridium）、コリネバクテリウム属（Corynebacterium）、ジオバチラス属（Geobacillus）、ラクトバチルス属（Lactobacillus）、ラクトコッカス属（Lactococcus）、オエノコッカス属（Oenococcus）、連鎖球菌属（Streptococcus）及びユーバクテリウム属（Eubacterium）からなる群より選択されるグラム陽性細菌である、請求項４７に記載の組み換え細菌。
【請求項５１】
細菌が大腸菌ＫＯ１１株（ＡＴＣＣ５５１２４）由来である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５２】
細菌が大腸菌ＳＺ１１０株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５１）由来である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５３】
細菌が大腸菌ＬＹ１６５株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５２）である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５４】
細菌が大腸菌ＬＹ１６８株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５３）である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５５】
細菌が株ＬＹ１４９、ＬＹ１５１、ＬＹ１５８、ＬＹ１５９、ＬＹ１６０、ＬＹ１６０ｉｍ、ＬＹ１６１、ＬＹ１６３、ＬＹ１６８ｉｍ、ＬＹ１６９、ＬＹ１７０、ＬＹ１７２、ＬＹ１７２ｉｍ、ＬＹ１７３、ＬＹ１７８、ＬＹ１８０、ＬＹ１８６、ＢＷ３４−ＸＺ１０６、ＢＷ３４−ＸＺ１０７、ＢＷ３４−ＸＺ１０８、ＢＷ３４−ＸＺ１０９、ＢＷ３４−ＸＺ１１０、ＢＷ３４−ＸＺ１１１、ＢＷ３４−ＸＺ１１２、ＢＷ３４−ＸＺ１１３、ＢＷ３４−ＸＺ１１４、ＢＷ３４−ＸＺ１１５、ＢＷ３４−ＸＺ１１６、ＢＷ３４−ＸＺ１１７、ＢＷ３４−ＸＺ１１８、ＢＷ３４−ＸＺ１１９、ＢＷ３４−ＸＺ１２０、ＢＷ３４−ＸＺ１２１、ＢＷ３４−ＸＺ１２２、ＢＷ３４−ＸＺ１２３及びＢＷ３４−ＸＺ１２４のいずれか１つである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組み換え細菌。
【請求項５６】
方法が異種エタノール産生遺伝子の全相補体を宿主細菌に組み込み、それによって異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌を産生する工程を包含している、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含している組み換え細菌を産生する方法。
【請求項５７】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体をリボソームＲＮＡオペロンに組み込むことをさらに包含している、請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
リボソームＲＮＡオペロンが、ｒｒｎＡ、ｒｒｌＥ、ｒｒｎＣ、ｒｒｎＤ、ｒｒｎＥ、ｒｒｎＧ及びｒｒｎＨからなる群より選択される遺伝子を包含する、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
リボソームＲＮＡオペロンがｒｒｌＥ遺伝子を包含している、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
１つ又はそれ以上の抗生物質マーカーを除去することをさらに包含している、請求項５６に記載の方法。
【請求項６１】
エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を阻害するか或いは産生するエタノールの量を減少させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子を不活性化させることをさらに包含している、請求項５６に記載の方法。
【請求項６２】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を促進するか或いは産生するエタノールの量を増大させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の異種遺伝子を組み込むことをさらに包含している、請求項５６に記載の方法。
【請求項６３】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体を宿主細菌のｒｒｌＥ遺伝子内に組み込むこと；
１つ又はそれ以上の抗生物質マーカーを除去すること；及び
エタノール産生のために必要ではない、異種エタノール産生遺伝子の全相補体によるエタノール産生を阻害するか或いは産生するエタノールの量を減少させるポリペプチドをコードする１つ又はそれ以上の遺伝子を不活性化すること：
の工程をさらに包含している、請求項５６に記載の方法。
【請求項６４】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体が、ｐｄｃ、ａｄｈＡ及びａｄｈＢを包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
ｐｄｃ、ａｄｈＡ及びａｄｈＢ遺伝子がザイモモナス・モビリス（Zymomonas mobilis）由来である、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体がプロモーターを持たないオペロンに含まれている、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
プロモーターを持たないオペロンが、ｐｄｃとａｄｈＢの間のＳｐｅＩ部位に連結されるａｄｈＡ遺伝子を含有している、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
プロモーターを持たないオペロンが、除去可能な抗生物質マーカーを含有している、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
プロモーターを持たないオペロンが、Ｔｎ５トランスポゾンを用いて組み込まれている、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
抗生物質マーカーがリコンビナーゼで除去される、請求項５６、６３又は６８に記載の方法。
【請求項７１】
抗生物質マーカーがアプラマイシン、カナマイシン、テトラサイクリン、アンピシリン及びクロラムフェニコールからなる群より選択される、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
１つ又はそれ以上の遺伝子が欠失又は突然変異により不活性化される、請求項６１又は６３に記載の方法。
【請求項７３】
１つ又はそれ以上のエタノール産生遺伝子が欠失により不活性化される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
ピルビン酸代謝の代替経路に関与しているタンパク質をコードする遺伝子が不活性化される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７５】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体を組み込む前に、請求項７３〜７４のいずれか一項に記載の遺伝子が不活性化される、請求項７２に記載の方法。
【請求項７６】
宿主細菌が大腸菌ＫＯ１１株（ＡＴＣＣ５５１２４）である、請求項７２に記載の方法。
【請求項７７】
ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域を包含しているエタノール産生遺伝子が欠失により不活性化される、請求項７６に記載の方法。
【請求項７８】
ピルビン酸代謝の代替経路に関与しているタンパク質をコードする遺伝子が欠失している、請求項７６に記載の方法。
【請求項７９】
当該遺伝子がａｃｋＡ、ａｄｈＥ、ｌｄｈＡ及びｍｇｓＡを含有する、請求項７８に記載の方法。
【請求項８０】
組み換え細菌がＳＺ１１０（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５１）由来である、請求項７７〜７９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８１】
ｌｄｈＡ遺伝子が欠失により不活性化される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８２】
異種エタノール産生遺伝子の全相補体を組み込む前に、ｌｄｈＡ遺伝子が欠失される、請求項８１に記載の方法。
【請求項８３】
異種ｃａｓＡＢ遺伝子が欠失により不活性化される、請求項７５に記載の方法。
【請求項８４】
ｃａｓＡＢ遺伝子がクレブシエラ・オキシトカ（Klebsiella oxytoca.）由来である、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
ｃａｓＡＢ遺伝子をｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子で置換する工程をさらに包含する、請求項８３に記載の方法。
【請求項８６】
ｌａｃＡ及びｌａｃＹ遺伝子が大腸菌由来である、請求項８５に記載の方法。
【請求項８７】
ｅｓｔＺ遺伝子を組み込む工程をさらに包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８８】
ｅｓｔＺ遺伝子がシュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）由来である、請求項８７に記載の方法。
【請求項８９】
エタノール産生遺伝子の全相補体を組み込んだ後に、ｅｓｔＺ遺伝子を組み込む、請求項８７に記載の方法。
【請求項９０】
内因性ｍｇｓＡ遺伝子が欠失により不活性化される、請求項７２に記載の方法。
【請求項９１】
ｌａｃオペロンを除去又は不活性化する工程をさらに包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９２】
ｌａｃオペロンを回復させる工程をさらに包含している、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
ｌａｃオペロンが回復した遺伝子がｌａｃＡ、ｌａｃＹ及びｌａｃＺを包含している、請求項９２に記載の方法。
【請求項９４】
ｌａｃオペロンを包含している遺伝子が大腸菌由来のものである、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
ｆｒｄＢ遺伝子を欠失させる工程をさらに包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９６】
ｆｒｄＣ遺伝子を部分的に欠失させる工程をさらに包含している、請求項９２に記載の方法。
【請求項９７】
ｃｅｌＹ遺伝子を組み込む工程をさらに包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９８】
ｃｅｌＹ遺伝子がｆｒｄＡ遺伝子の下流に組み込まれる、請求項９７に記載の方法。
【請求項９９】
ｃｅｌＹ遺伝子が黒脚病菌（E.chrysanthemi）由来である、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
ｃａｓＡＢ遺伝子を組み込む工程をさらに包含している、請求項５５〜６２に記載の方法。
【請求項１０１】
ｃａｓＡＢ遺伝子がｌｄｈＡ遺伝子に組み込まれる、請求項１００に記載の方法。
【請求項１０２】
ｃａｓＡＢ遺伝子がクレブシエラ・オキシトカ（Klebsiella oxytoca）由来である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域の機能を回復させることをさらに包含している、請求項５６〜６３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０４】
ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域の機能をｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域の相同的組み換えによって回復させる、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
エタノール産生遺伝子の全相補体の組み込みの前に、ｆｏｃＡ−ｐｆｌＢ遺伝子領域の機能を回復させる、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
宿主細菌が大腸菌ＳＺ１１０株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５１）である、請求項５６〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０７】
組み換え細菌が大腸菌ＬＹ１６５株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５２）である、請求項５６〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０８】
組み換え細菌が大腸菌ＬＹ１６８株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５３）である、請求項５６〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０９】
組み換え細菌が無機塩培地で生育できる、請求項５６〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１０】
無機塩培地がキシロースを含有している、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、請求項４９〜１１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１２】
オリゴ糖源を請求項１〜５５のいずれか一項に記載の組み換え細菌とエタノール産生に適した条件下で接触させ、それによりオリゴ糖源からエタノールを産生することを包含する、エタノールをオリゴ糖源から産生する方法。
【請求項１１３】
オリゴ糖源が、リグノセルロース、ヘミセルロース、セルロース及びペクチン又はそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１１２に記載の方法。
【請求項１１４】
産生されたエタノールが、非気体状発酵生成物の全量の４０％超を構成している、請求項１１２又は１１３に記載の方法。
【請求項１１５】
組み換え細菌を供給することをさらに包含する、請求項１１１〜１１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１６】
組み換え細菌を得ることをさらに包含する、請求項１１１〜１１５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１７】
オリゴ糖を組み換え細菌と生育培地中で接触させることをさらに包含する、請求項１１１〜１１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１８】
生育培地が無機塩培地又はＭ１培地から選択される、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
無機塩培地が、１リットル当たり３．５ｇのＫＨ２ＰＯ４、５．０ｇのＫ２ＨＰＯ４、３．５ｇの(ＮＨ４)２ＨＰＯ４、０．２５ｇのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、１５ｍｇのＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．５ｍｇのチアミン及び１ｍＬの微量金属ストックを、２〜９（ｗ／ｖ）％のキシロースを補完して含有している、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１２０】
無機塩培地にベタインを添加することをさらに包含する、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
無機塩培地にＭＯＰＳを添加することをさらに包含する、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２２】
ＡＭ１培地が、１リットル当たり２．６３ｇの(ＮＨ４)２ＨＰＯ４、０．８７ｇのＮＨ４Ｈ２ＰＯ４、０．３７５ｇ／ＬのＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．１４９ｇのＫＣＬ、０．１６３ｇのベタインＨＣＬ（ｐＨ７．４）及び１．５ｍＬの微量金属ストックを、２〜１４（ｗ／ｖ）％の糖を指示するように補完して含有している、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２３】
微量金属ストックが、０．１ＭのＨＣｌ（１リットル当たり１．６ｇのＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ、０．２ｇのＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ、０．１ｇのＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ、０．２ｇのＺｎＣｌ２、０．２ｇのＮａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ、０．０５ｇのＨ３ＢＯ３、０．３３ｇのＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ）中で調製される、請求項１２２に記載の方法。
【請求項１２４】
当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、請求項１１２〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２５】
請求項１〜５５のいずれか一項に記載の組み換え細菌を用いる、請求項１１２に記載のエタノールを製造する方法。
【請求項１２６】
当該組み換え細菌が請求項５５〜１１０のいずれか一項に記載の方法の段階を包含する工程により作成される、異種エタノール産生遺伝子の全相補体を包含する組み換え細菌。
【請求項１２７】
当該異種エタノール産生遺伝子の全相補体の発現が、組み換え細菌が発酵主生成物としてエタノールを産生することをもたらす、請求項１２６に記載の組み換え細菌。
【請求項１２８】
請求項１〜５５のいずれか一項に記載の組み換え細菌及び使用のための説明書を包含しているキット。
【請求項１２９】
使用のための説明書が、請求項９５〜１２５のいずれか一項に記載の方法に従っている、請求項１２７に記載のキット。
【請求項１３０】
糖源をさらに包含している、請求項１２８に記載のキット。
【請求項１３１】
大腸菌ＳＺ１１０株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５１）。
【請求項１３２】
大腸菌ＬＹ１６５株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５２）。
【請求項１３３】
大腸菌ＬＹ１６８株（ＮＲＲＬ Ｂ−３０９５３）。
【図１−１】
【図１−２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図１−２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【公表番号】特表２０１０−５０００２６（Ｐ２０１０−５０００２６Ａ）
【公表日】平成２２年１月７日（２０１０．１．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５２３８３４（Ｐ２００９−５２３８３４）
【出願日】平成１９年８月８日（２００７．８．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０１７６４６
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０２１１４１
【国際公開日】平成２０年２月２１日（２００８．２．２１）
【出願人】（５０８００４５７９）ザ ユニバーシティー オブ フロリダ リサーチ ファンデーション インク (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１月７日（２０１０．１．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年８月８日（２００７．８．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０１７６４６
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０２１１４１
【国際公開日】平成２０年２月２１日（２００８．２．２１）
【出願人】（５０８００４５７９）ザ ユニバーシティー オブ フロリダ リサーチ ファンデーション インク (3)
【Ｆターム（参考）】
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