エリスロシンに基づく抗菌性光力学治療化合物およびその使用方法
【課題】ヒトまたは動物の病者において有害な微生物特に細菌を電磁気的な照射により有効かつ選択的に殺す方法の提供。グラム陽性の細菌を複雑な媒体例えば唾液の存在下有効に殺菌する。
【解決手段】ゲル中の光増感剤としてエリスロシンＢを含む組成物を生物学的表面上の治療域に導入する段階、該治療域の細菌に該エリスロシンＢを結合させるために予定された時間経過させる段階、該治療域に予め選択された波長の照射を当てて、該エリスロシンＢを活性化しそしてそれにより光力学反応を誘導して該細菌を殺す段階からなり、そして複雑な媒体が該治療域に存在する病者の治療域の殺菌方法。
【解決手段】ゲル中の光増感剤としてエリスロシンＢを含む組成物を生物学的表面上の治療域に導入する段階、該治療域の細菌に該エリスロシンＢを結合させるために予定された時間経過させる段階、該治療域に予め選択された波長の照射を当てて、該エリスロシンＢを活性化しそしてそれにより光力学反応を誘導して該細菌を殺す段階からなり、そして複雑な媒体が該治療域に存在する病者の治療域の殺菌方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光力学治療の領域、特にヒトおよび動物の選択的殺菌における光力学治療の用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
光力学治療（ＰＤＴ）は周知であり、そしてガンおよび種々の皮膚の病気のような過剰増殖の組織に一般に伴う多数の疾患を治療するのに利用されてきた。ＰＤＴは、また抗菌の治療として利用されてきた。しかし、抗菌のＰＤＴに伴う多数の大きな問題が存在する。第一の問題は、グラム陽性およびグラム陰性の細菌の両者に対して有効に使用できる光活性物質を見つけだす困難さから生ずる。グラム陰性の細菌は、それらの二重層の外側の膜物質に主として起因する遙かに困難な障害をもたらす。
【０００３】
グラム陽性およびグラム陰性の細菌の間の主な相違は、図１および２に画かれたように細胞壁にある。図１に示されているように、グラム陽性の細胞は、細胞膜１０５を囲む多くの個々のペプチドグリカン層１０３（例えば２０〜４０の層）からなる厚いペプチドグリカン細胞壁１０１を有する。逆に、図２に示されるように、グラム陰性の細胞は、細胞膜２０３を囲むペプチドグリカン２０１の薄い層のみを有し、その層は追加の外側の膜２０５によりさらに囲まれている。この追加の層は、グラムの方法を使用してグラム陽性およびグラム陰性の細胞を区別することを可能にする。グラム陰性の細菌の外側の膜のために、クリスタルバイオレット−ヨウ素の染料は、細胞壁のペプチドグリカン層に到達できず、そしてグラム陽性の細菌におけるようにグラムの方法後グラム陰性の細菌に保持される。外側の膜は、グラム陰性の細菌中への多くの物質の浸透を阻害するのに主として関係し、そして両方のタイプの細菌に対して有効な光増感剤を見つけることが困難な理由である。
【０００４】
他の問題は、複雑な媒体例えば血液の血清、血液または唾液の存在下で少なくともいくらかの活性を保持する好適な光増感化合物を見つけることが困難であることから生ずる。単純な媒体例えばリン酸塩緩衝塩水中の細胞懸濁物に対して良好な活性を示すほとんどの光増感化合物（光増感剤）は、血液の血清、血液または唾液の存在下ではほとんど効果を示さない。これは、これらの複雑な媒体（例えば蛋白、血液の細胞）中の成分がＰＤＴ化合物の親和性について細菌と競合するためである。また、他の問題は、天然に生じそして或る身体の機能に利益があるかまたは必要な微生物を殺す危険を含む。抗菌ＰＤＴの適用は、排除することが求められている有害な細菌とともに有益な微小植物類（ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ）を殺す危険を生ずる。
【０００５】
エリスロシンＢは、４５０〜６００ｎｍの青〜緑の範囲で吸収する赤色の染料である。それは、顕微鏡写真法のような方法において生物学的な染料として使用される。例えば、エリスロシンＢは、植物および動物の両者の組織において異なる核の染色に対する対比染色剤として、または細菌細胞のコントラスト染色剤として広く使用されている。
【０００６】
エリスロシンおよびエリスロシンＢは、歯上のプラークの存在および位置を肉眼で見えるように示す歯科の処理に関連して染料として使用されている。エリスロシンは、生物学的表面から細菌を除くのに利用されており、そして抗菌性の治療に使用されている。
【０００７】
特許文献１は、また、ブタ、家畜および家禽の胃および腸、歯および創傷の表面のような生物学的表面に付着した微生物を除くためのエリスロシンまたは他の物質の使用を開示している。この方法は、殺菌に働くものではなく、むしろ生物学的表面からの細菌の除去または細菌の付着を防ぐことに関している。
【０００８】
エリスロシンおよび関連する染料は、歯および歯肉上またはその周辺の微生物および虫歯の穴を検出し治療する歯周病の治療に使用されている。特許文献２は、水、水混和性溶媒またはその組み合わせ、虫歯になった部分を染めることのできる染料および抗菌性剤を含む抗菌性の齲歯検出組成物を開示している。これは、虫歯の穴の検出と滅菌系との両者である。１つ以上の溶媒に可溶でありそして虫歯の穴の存在および位置を肉眼で見えるように示すことのできる好適な染料に含まれるエリスロシンのような染料が、使用できる。この発明では、エリスロシンは、染色剤としてのみ利用され、そして抗菌剤として考慮されていない。
【０００９】
エリスロシンＢは、医学的および非医学的の両者の処理に利用される周知の光増感剤である。非医学的処理は、殺虫の処理および工業的な表面処理を含み、そして医学的処理は、歯および他の生物学的表面の抗菌ＰＤＴ治療並びにガン性および他の疾患の組織のＰＤＴを含む。
【００１０】
特許文献３は、年齢に関連する黄斑変性の結果としての眼の血管新生のためのＰＤＴ治療を記述している。エリスロシンおよびエリスロシンＢは、この方法において使用される多くの可能と思われる光増感剤の中にリストされている。
【００１１】
特許文献４は、内膜過形成により生ずる血管の再狭窄を阻害するためのＰＤＴの使用を開示している。この治療に有用であることを目指す多くの光増感剤の中に、エリスロシンおよびエリスロシンＢがある。
【００１２】
特許文献５は、転移性腫瘍細胞を殺すために免疫アジュバントとともに光増感剤を使用する方法を開示している。この方法に使用することを目的とする光増感剤は、キサンテン染料例えばエリスロシンおよびエリスロシンＢを含む。
【００１３】
特許文献６は、昆虫の成虫および幼虫を退治するためにエリスロシンＢのような或るキサンテン染料遊離酸の水溶性の殺虫組成物を開示している。昆虫または幼虫は、化合物を含むこれらの組成物を消化し、それは可視光に曝されると昆虫または幼虫を死に至らしめる。
【００１４】
特許文献７は、光毒性の殺虫組成物中の光活性染料例えばエリスロシンＢの使用を記述している。組成物は、選択された光活性染料、餌およびアジュバントを含む。化合物は、望ましい昆虫により消化され、それによりアジュバントは光活性染料および昆虫の膜と反応して組成物の毒性を変え、それは或る時間日光に曝された後に昆虫を殺すように作用する。特許文献８は、魚における原生動物の感染を治療する方法を開示している。エリスロシンＢを含む光活性染料は、感染された魚を含む水性の環境に導入され、光活性染料の濃度は、細菌のいくらかまたはすべてを殺すに十分なものである。
【００１５】
特許文献９は、エリスロシンＢを含む或る光増感剤を表面に適用しそして細菌を光力学的に不活性化することにより、バイオフィルム上の細菌を殺す方法を開示している。この方法は、家庭および工業で用いられる固い表面例えばガラス、プラスチックおよびセラミック上で使用するようにされている。それは、生物学的表面への使用を開示していない。
【００１６】
口腔の細菌の光熱殺菌の方法は、特許文献１０に開示されている。染料好ましくはエリスロシンＢを含む処方は、歯に適用されて口腔の細菌を選択的に染める。ヘモグロビンにより良く吸収される波長を排除するようにフィルターされた照射が適用されて、染められた細菌の温度を選択的に上昇させそして凝固により殺菌する。この方法は、天然の微小植物類を傷つけずに有害な細菌のみを選択的に殺す方法を開示していない。
【００１７】
ハロゲン化キサンテンまたはそれらの誘導体を利用する光増感剤およびＰＤＴは、特許文献１１に記載され、皮膚および循環系を含む種々の身体の組織の症状を治療する。疾患例えばガンおよび微生物の感染は、開示された組成物および方法により治療されるとされる。化合物例えばローズベンガルおよびエリスロシンＢは、可能性のある光増感剤として開示される。方法は、身体内投与例えば静脈内注入および皮下伝達を含む。光増感剤は、ゲルで注入する（パラグラフ４６）。この発明は、口腔の疾患に適用でき、適用は、歯肉炎を含む歯肉および他の歯周の疾患のような疾患の治療のために、口および歯肉を含む組織に直接または間接、または実質的にそれらの付近になされる（パラグラフ６９）。薬剤は、ヒトおよび動物の微生物感染に適用され、そして感染した組織にまたはほぼその付近に伝達される（パラグラフ９７）。細菌の例はＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉを含む（パラグラフ９８）。
【００１８】
この発明は、ＰＤＴ治療におけるエリスロシンＢのような光増感剤の使用を一般的に記述し、口腔および抗菌の治療におけるそれらの使用を記述しておらず、歯、歯肉および／または舌への直接的な適用のためのゲルの処方のような、所定の域またはバイオフィルムの付近に光増感剤を制限する方法または組成物を記述していない。その上、この発明は、天然の微小植物類を傷つけないまま、有害な細菌を選択的に殺菌する方法または組成物を開示していない。最後に、この発明は、複雑な媒体例えば血液、血液の血清および唾液の有害な作用を緩和する方法または組成物を開示していない。
【００１９】
上記のＰＤＴの方法および／または組成物は、それらが口中のような身体の域に存在する正常の微小植物類を無差別に殺す点で有利ではない。これらの微小植物類は、必須の機能を行い、そのためどんな抗菌の方法／組成物も、これらの天然の微小植物類を殺すことを避けるべきである。当該技術は、この問題を扱っていないしまたは解決もしていない。
【００２０】
複雑な媒体例えば唾液の存在下で有効な抗菌のＰＤＴの方法および化合物を必要としている。この方法は、グラム陽性およびグラム陰性の両方の細菌に対して有効に使用されるが、特別な適用領域では、グラム陽性の細菌を有効に殺すことで十分である。また、方法および組成物は、必要な細菌を傷つけないまま、有害な細菌に対して有効でなければならない。本発明は、この要求を満たしている。
【特許文献１】米国特許４５８１２２７
【特許文献２】米国特許６３３７３５７
【特許文献３】米国特許出願２００２／０１７３８３２Ａ１
【特許文献４】米国特許６６０９０１４
【特許文献５】米国特許出願２００２／００２２０３２Ａ１
【特許文献６】米国特許４６４７５７８
【特許文献７】米国特許５７９８１１２
【特許文献８】米国特許６５０６７９１
【特許文献９】ヨーロッパ特許６５２７０９Ｂ１
【特許文献１０】米国特許６２９０４９６
【特許文献１１】米国特許出願２００１／００２２９７０Ａ１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
ヒトまたは動物の病者において有害な微生物特に細菌を有効かつ選択的に殺す方法を提供するのが本発明の目的である。
【００２２】
電磁気的な照射によりコントロール可能でしかも選択的に活性化できる抗菌方法を提供するのが本発明の他の目的である。
【００２３】
グラム陽性の細菌を殺すのに有効な方法を提供するのが本発明の他の目的である。
【００２４】
複雑な媒体例えば唾液の存在下有効な抗菌の方法および組成物を提供するのが本発明の他の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
簡単にいえば、本発明は、電磁気的な照射に関連してエリスロシンＢを含む組成物を利用して身体における微生物特に細菌を殺すための方法および組成物を提供する。好ましい方法では、エリスロシンＢを含む組成物は、治療域に導入される。十分な時間が経過した後、好適な波長の照射がその域に適用されてエリスロシンＢを活性化しそして光力学反応によって殺菌する。好ましい照射は、約５３０ｎｍの波長を有する。エリスロシンＢは、ゲル内に配合され、それは光力学作用をバイオフィルムの近くに限定し、そのため望ましくない細菌のみが影響されそして天然の微小植物類は傷つかない。この方法は、少なくともグラム陽性細菌を殺すのに有効であり、そして複雑な媒体例えば唾液も存在している域で特に有効である。
【００２６】
本発明の上記そして他の目的、特徴および利点は、図面を参照して以下の記述から明らかになるだろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
従来の技術の方法および化合物に見いだされる困難さ、特に複雑な媒体例えば血液の血清、血液または唾液の有害な作用を避けそして天然に存在する微小植物類を殺すことを避けるのに見いだされる困難さのために、これらの不利益を克服する化合物を見いだすことが望ましい。エリスロシンＢは、唾液中のグラム陽性の細菌に対して有効な光増感物質であることが分かった。この結果は、特別な適用領域例えば齲歯を防ぐ口腔中のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．細胞を有効に殺すために非常に興味がある。注目される他の利点は、媒体の複雑な成分（例えば唾液）の存在は、他の光増感剤との場合にしばしば生ずる目標細菌におけるエリスロシンＢの有効性を損なうものではないことであった。従って、エリスロシンＢは、本発明による有効な抗菌治療の一部である。エリスロシンＢを含む抗菌ＰＤＴ組成物は、また本発明の一部である。好ましい態様では、抗菌治療は、３つの一般的な段階を含む。第一の段階は、細菌を含む環境にエリスロシンＢ組成物を導入することである。第二の段階は、治療域における細菌細胞中にエリスロシンＢを浸透させるかまたはそれらの細胞エンベロープの成分に少なくとも結合させるのに十分な時間経過させることである。最後の段階は、好適な波長の照射を適用してエリスロシンＢの活性化により光力学メカニズムを開始させ、そして殺菌に導く反応性の酸素種およびフリーラジカルを生成させる。
【００２８】
好ましい「暴露時間」すなわち光増感剤をバイオフィルム中または表面に拡散させるのに十分な照射とエリスロシンＢ組成物の適用との間の時間は、変化することができ、そしてそれぞれ処理される細菌のタイプ、処理される身体の面積、そしてエリスロシンＢ組成物を導入する方法のようなファクターに応じて変化できるだろう。通常、局所の適用では、この時間は、少なくとも５分間であろう。内部の細菌感染を治療するには、組成物は、全身的な適用のために血流中に注入されるか、またはもし感染が特定の域に限定されるならば、狭い域に注入される。皮膚の上またはそれに近い感染では、組成物は、局所適用のための溶液、クリーム、ゲルまたはローションの形である。
【００２９】
好ましい態様では、本発明の組成物は、ゲル内に含まれたエリスロシンＢを含む。エリスロシンＢゲルの適用は、プラークが存在する表面に組成物が選択的に適用されそして付着し、バイオフィルムまたは齲歯に位置する細菌のみが次の照射によって影響をうける点で有利である。これは、生物学的なプロセスに重要な身体中そして身体の表面に存在する多くの微生物がある点で重要である。抗菌治療がこれらの天然かつ有益な微小植物類を殺すのを避けることが重要である。本発明の組成物では、エリスロシンＢは、ゲルの近くの域に制限されそして集中する。ゲルがバイフィルムに適用された後、エリスロシンＢはゲルマトリックスからプラークに拡散し、目標細菌を直接染める。プラーク中の細菌のみが、顕著な光力学効果を刺激する照明の適用に十分なように染められる（エリスロシンＢの濃度は十分に高い）。従って、エリスロシンＢの顕著な量は、バイオフィルム上の適用の域から離れた域に移動できない。活性の域は、そのため、バイオフィルムに近い従って有害な細菌に近い域のみに制限される。
【００３０】
本発明による治療の例は、齲歯が発生しないように、有害な細菌を殺菌するために歯および／または舌の背部へのエリスロシンＢゲルの予防的適用である。別に、ゲルは、その上の細菌を殺菌するために現存する齲歯または疾患の組織へ適用できる。ゲルは、歯または歯肉のような他の表面に適用され、そして好適な照射により活性化されてバイオフィルム中の付近の細菌を殺す。好ましい態様では、本発明により目標とされるバイオフィルムは、主として、齲歯を導く有害な細菌が存在する歯および／または舌の背部に位置するバイオフィルムである。顕著な濃度のエリスロシンＢはゲル組成物から離れて存在しないため、口中の他の微小植物類は影響されない。
【００３１】
ゲル処方物を生成するために本発明で使用できる多数の物質が存在する。すべての物質は、非毒性でなければならず、そして内科的または口腔内の使用に承認されていなければならない。ゲルの成分は、エリスロシンＢを可溶化すべきである。多数のセルロースに基づくゲルが考えられ、例えばヒドロキシエチルセルロースがある。本発明のゲルの態様の例は、エリスロシンＢ、ヒドロキシエチルセルロース、プロピレングリコール、水、および所望の香料または芳香性化合物を含む。
【００３２】
予め選択された時間後、照射は、治療部位に適用されてエリスロシンＢを活性化しそして細菌を殺す。活性化照射の好ましい波長は、５００〜５８０ｎｍであり、そしてさらに好ましくは約５３０ｎｍである。照射は、非干渉照射例えばランプからのもの、または干渉レーザー照射である。表面または表面下の治療では、ランプは特定の感染された領域を照射するのに有効であり、一方身体内の深い感染された領域では、或る内部の領域を照射するのに必要に応じてディヒューザーまたは他の装置をさらに含む１つ以上の光ファイバーを含む光ファイバー装置が、レーザー照射をこれらの内部の領域に伝達するのに好ましい。好ましいレーザー源は、５３２ｎｍレーザーを備えたダイオードである。
【００３３】
本発明は、以下の実施例によりさらに説明されるが、それにより本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００３４】
エリスロシンＢによるＳｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓの細菌細胞懸濁物の光力学不活性化
この研究に使用される生物は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ＤＳＭ６１７８（ＡＴＣＣ３５６６８）であった。グラム陽性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．は、齲歯の発生にともに関係している。
【００３５】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ細胞は、Ｔｒｙｐｔｉｃ Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）中で３７℃で一晩好気的に培養された。細胞を遠心分離によって採取し、そして１０％の滅菌濾過した天然唾液を補給した滅菌リン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ）に再懸濁した。すべての場合で１ｃｍの路長で６００ｎｍでの最終のＯＤ（光学密度）は０．０５であった。ヒドロキシエチルセルロースのエリスロシンＢゲル（１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭおよび８ｍＭのエリスロシンＢ）約０．５ｍＬを管の底に置いた。ゲルに０．５ｍＬの細菌懸濁物を重ね、そして室温で穏やかに振盪しつつそれぞれ１、３または５分間曝した。露出後、２５０μＬの懸濁物を新しい管に入れ、管を遠心分離し、上清を取り出し、そして細胞のペレットを２５０μＬのＰＢＳ＋１０％の天然唾液（滅菌濾過）に再懸濁した。細菌懸濁物の一部２００μＬを、透明な底を有する滅菌ブラック９６穴プレート（Ｃｏｓｔａｒ（商標）３６０３、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．米国）に入れ、そしてプレートの底から光ファイバーを経て３０秒の照射時間で、０．０Ｗに設定された電力で、レーザーＣｅｒａｌａｓ Ｇ２（Ｂｉｏｌｉｔｅｃ ＡＧ、ドイツ）５３２ｎｍからの光に曝した。これらの設定に関するフルエンス率は、約０．１Ｗ／ｃｍ２（Ｏｐｔｏｍｅｔｅｒ Ｐ・９７１０、Ｇｉｇａｈｅｒｚ・Ｏｐｔｉｋ ＧｍｂＨ、Ｐｕｃｈｈｅｉｍ、ドイツで測定した）であった。使用した照明時間では、得られる全エネルギーフルエンスは、約３Ｊ／ｃｍ２であった。
【００３６】
暗（ｄａｒｋ）毒性に関するコントロール試料は、レーザー光に曝されなかった。
【００３７】
照明後、試料をプレートの穴から取り出し、Ｔｒｙｐｔｉｃ Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈにより希釈し、そしてらせんプレーターＥｄｄｙ Ｊｅｔ（ｉｕｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａｓ、スペイン）を使用してＴｒｙｐｔｉｃ Ｓｏｙアガープレート上に置いた。コロニー形成単位の数（ＣＦＵ／ｍＬ）を、コロニー計数計Ｃｏｕｎｔｅｒ Ｆｌａｓｈ（ｉｕｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａｓ、スペイン）を使用して適切なインキュベーション後、数えた。
【００３８】
実験の結果を図３に示す。
【００３９】
エリスロシンＢを含むゲルによるＰＤＴ治療による非常に良好な殺菌が観察された。抗菌効果は、暴露時間およびエリスロシンＢの濃度に依存した。暗毒性は観察されなかった。
【実施例２】
【００４０】
ボランティアの口腔におけるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．の光力学による低下
２５人のボランティアを５つのグループに分けた。すべてのボランティアに、穏やかなマッサージにより歯上に約２ｍＬのエリスロシンＢ含有ゲルを適用した。２分間の暴露時間後、口腔を水で濯ぎ、そして歯を、光ファイバーを経る光アプリケーターによって、５３２ｎｍレーザーＣｅｒａｌａｓ Ｇ２（ｂｉｏｌｉｔｅｃ ＡＧ、ドイツ）からの光により照明した。照射時間は約３分間であった。４つの処理されたボランティアグループに関する照明のフルエンス率は、それぞれ約０．０５、０．１、０．３および０．５Ｗ／ｃｍ２であった。ボランティアのコントロールグループは照明されなかった。すべての処理は、口腔からの細菌の除去を避けるために、朝の通常の歯磨き前になされた。第一の処理前そしてすべての処理後、唾液の試料をＳａｌｉｖｅｔｔｅ（商標）管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ａｇ ａｎｄ Ｃｏ．Ｎｕｅｍｂｒｅｃｈｔ、ドイツ）により採取し、唾液をＳａｌｉｖｅｔｔｅ管から取り出し、そしてＴＹＣＳＢアガー（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．に関する選択的培地）プレート上にらせんプレーターＥｄｄｙ Ｊｅｔ（ｉｕｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、スペイン）を使用して接種した。コロニー形成単位の数（ＣＦＵ／ｍＬ）を、コロニー計数計Ｃｏｕｎｔｅｒｍａｔ Ｆｌａｓｈ（ｉｕｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、スペイン）を使用することにより、好気的ワークステーション（Ｄｏｎ Ｗｈｉｔｈｌｅｙ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｉｍ．Ｓｈｉｐｌｅｙ、英国）で適切なインキュベーション後数えた。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．について、唾液中の細菌の数は、歯のプラーク中の細菌の数と一致した。
【００４１】
実験の結果を図４に示す。
【００４２】
処理中の最良の殺菌効果は、０．３および０．５Ｗ／ｃｍ２のフルエンス率による照明によって得られた。コントロールグループに比較したときの低下は、０．１および０．０５Ｗ／ｃｍ２による照明のグループで見られた。
【００４３】
図面を参照して本発明の好ましい態様を記述したが、本発明がそれらの態様に限定されずそして種々の変化および改変が請求の範囲の範囲または趣旨から離れることなく、当業者により実施できることを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】グラム陽性の細菌細胞の細胞エンベロープの断面図である。
【図２】グラム陰性の細菌細胞の細胞エンベロープの断面図である。
【図３】エリスロシンＢ含有ゲルによるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ＤＳＭ６１７８の光力学不活性化を示すグラフである。
【図４】エリスロシンＢ含有ゲルによる光力学不活性化後のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．の生存を示すグラフである。
【符号の説明】
【００４５】
１０１ ペプチドグリカン細胞壁
１０３ ペプチドグリカン層
１０５ 細胞膜
２０１ ペプチドグリカンの層
２０３ 細胞膜
２０５ 外側の膜
【技術分野】
【０００１】
本発明は、光力学治療の領域、特にヒトおよび動物の選択的殺菌における光力学治療の用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
光力学治療（ＰＤＴ）は周知であり、そしてガンおよび種々の皮膚の病気のような過剰増殖の組織に一般に伴う多数の疾患を治療するのに利用されてきた。ＰＤＴは、また抗菌の治療として利用されてきた。しかし、抗菌のＰＤＴに伴う多数の大きな問題が存在する。第一の問題は、グラム陽性およびグラム陰性の細菌の両者に対して有効に使用できる光活性物質を見つけだす困難さから生ずる。グラム陰性の細菌は、それらの二重層の外側の膜物質に主として起因する遙かに困難な障害をもたらす。
【０００３】
グラム陽性およびグラム陰性の細菌の間の主な相違は、図１および２に画かれたように細胞壁にある。図１に示されているように、グラム陽性の細胞は、細胞膜１０５を囲む多くの個々のペプチドグリカン層１０３（例えば２０〜４０の層）からなる厚いペプチドグリカン細胞壁１０１を有する。逆に、図２に示されるように、グラム陰性の細胞は、細胞膜２０３を囲むペプチドグリカン２０１の薄い層のみを有し、その層は追加の外側の膜２０５によりさらに囲まれている。この追加の層は、グラムの方法を使用してグラム陽性およびグラム陰性の細胞を区別することを可能にする。グラム陰性の細菌の外側の膜のために、クリスタルバイオレット−ヨウ素の染料は、細胞壁のペプチドグリカン層に到達できず、そしてグラム陽性の細菌におけるようにグラムの方法後グラム陰性の細菌に保持される。外側の膜は、グラム陰性の細菌中への多くの物質の浸透を阻害するのに主として関係し、そして両方のタイプの細菌に対して有効な光増感剤を見つけることが困難な理由である。
【０００４】
他の問題は、複雑な媒体例えば血液の血清、血液または唾液の存在下で少なくともいくらかの活性を保持する好適な光増感化合物を見つけることが困難であることから生ずる。単純な媒体例えばリン酸塩緩衝塩水中の細胞懸濁物に対して良好な活性を示すほとんどの光増感化合物（光増感剤）は、血液の血清、血液または唾液の存在下ではほとんど効果を示さない。これは、これらの複雑な媒体（例えば蛋白、血液の細胞）中の成分がＰＤＴ化合物の親和性について細菌と競合するためである。また、他の問題は、天然に生じそして或る身体の機能に利益があるかまたは必要な微生物を殺す危険を含む。抗菌ＰＤＴの適用は、排除することが求められている有害な細菌とともに有益な微小植物類（ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ）を殺す危険を生ずる。
【０００５】
エリスロシンＢは、４５０〜６００ｎｍの青〜緑の範囲で吸収する赤色の染料である。それは、顕微鏡写真法のような方法において生物学的な染料として使用される。例えば、エリスロシンＢは、植物および動物の両者の組織において異なる核の染色に対する対比染色剤として、または細菌細胞のコントラスト染色剤として広く使用されている。
【０００６】
エリスロシンおよびエリスロシンＢは、歯上のプラークの存在および位置を肉眼で見えるように示す歯科の処理に関連して染料として使用されている。エリスロシンは、生物学的表面から細菌を除くのに利用されており、そして抗菌性の治療に使用されている。
【０００７】
特許文献１は、また、ブタ、家畜および家禽の胃および腸、歯および創傷の表面のような生物学的表面に付着した微生物を除くためのエリスロシンまたは他の物質の使用を開示している。この方法は、殺菌に働くものではなく、むしろ生物学的表面からの細菌の除去または細菌の付着を防ぐことに関している。
【０００８】
エリスロシンおよび関連する染料は、歯および歯肉上またはその周辺の微生物および虫歯の穴を検出し治療する歯周病の治療に使用されている。特許文献２は、水、水混和性溶媒またはその組み合わせ、虫歯になった部分を染めることのできる染料および抗菌性剤を含む抗菌性の齲歯検出組成物を開示している。これは、虫歯の穴の検出と滅菌系との両者である。１つ以上の溶媒に可溶でありそして虫歯の穴の存在および位置を肉眼で見えるように示すことのできる好適な染料に含まれるエリスロシンのような染料が、使用できる。この発明では、エリスロシンは、染色剤としてのみ利用され、そして抗菌剤として考慮されていない。
【０００９】
エリスロシンＢは、医学的および非医学的の両者の処理に利用される周知の光増感剤である。非医学的処理は、殺虫の処理および工業的な表面処理を含み、そして医学的処理は、歯および他の生物学的表面の抗菌ＰＤＴ治療並びにガン性および他の疾患の組織のＰＤＴを含む。
【００１０】
特許文献３は、年齢に関連する黄斑変性の結果としての眼の血管新生のためのＰＤＴ治療を記述している。エリスロシンおよびエリスロシンＢは、この方法において使用される多くの可能と思われる光増感剤の中にリストされている。
【００１１】
特許文献４は、内膜過形成により生ずる血管の再狭窄を阻害するためのＰＤＴの使用を開示している。この治療に有用であることを目指す多くの光増感剤の中に、エリスロシンおよびエリスロシンＢがある。
【００１２】
特許文献５は、転移性腫瘍細胞を殺すために免疫アジュバントとともに光増感剤を使用する方法を開示している。この方法に使用することを目的とする光増感剤は、キサンテン染料例えばエリスロシンおよびエリスロシンＢを含む。
【００１３】
特許文献６は、昆虫の成虫および幼虫を退治するためにエリスロシンＢのような或るキサンテン染料遊離酸の水溶性の殺虫組成物を開示している。昆虫または幼虫は、化合物を含むこれらの組成物を消化し、それは可視光に曝されると昆虫または幼虫を死に至らしめる。
【００１４】
特許文献７は、光毒性の殺虫組成物中の光活性染料例えばエリスロシンＢの使用を記述している。組成物は、選択された光活性染料、餌およびアジュバントを含む。化合物は、望ましい昆虫により消化され、それによりアジュバントは光活性染料および昆虫の膜と反応して組成物の毒性を変え、それは或る時間日光に曝された後に昆虫を殺すように作用する。特許文献８は、魚における原生動物の感染を治療する方法を開示している。エリスロシンＢを含む光活性染料は、感染された魚を含む水性の環境に導入され、光活性染料の濃度は、細菌のいくらかまたはすべてを殺すに十分なものである。
【００１５】
特許文献９は、エリスロシンＢを含む或る光増感剤を表面に適用しそして細菌を光力学的に不活性化することにより、バイオフィルム上の細菌を殺す方法を開示している。この方法は、家庭および工業で用いられる固い表面例えばガラス、プラスチックおよびセラミック上で使用するようにされている。それは、生物学的表面への使用を開示していない。
【００１６】
口腔の細菌の光熱殺菌の方法は、特許文献１０に開示されている。染料好ましくはエリスロシンＢを含む処方は、歯に適用されて口腔の細菌を選択的に染める。ヘモグロビンにより良く吸収される波長を排除するようにフィルターされた照射が適用されて、染められた細菌の温度を選択的に上昇させそして凝固により殺菌する。この方法は、天然の微小植物類を傷つけずに有害な細菌のみを選択的に殺す方法を開示していない。
【００１７】
ハロゲン化キサンテンまたはそれらの誘導体を利用する光増感剤およびＰＤＴは、特許文献１１に記載され、皮膚および循環系を含む種々の身体の組織の症状を治療する。疾患例えばガンおよび微生物の感染は、開示された組成物および方法により治療されるとされる。化合物例えばローズベンガルおよびエリスロシンＢは、可能性のある光増感剤として開示される。方法は、身体内投与例えば静脈内注入および皮下伝達を含む。光増感剤は、ゲルで注入する（パラグラフ４６）。この発明は、口腔の疾患に適用でき、適用は、歯肉炎を含む歯肉および他の歯周の疾患のような疾患の治療のために、口および歯肉を含む組織に直接または間接、または実質的にそれらの付近になされる（パラグラフ６９）。薬剤は、ヒトおよび動物の微生物感染に適用され、そして感染した組織にまたはほぼその付近に伝達される（パラグラフ９７）。細菌の例はＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉを含む（パラグラフ９８）。
【００１８】
この発明は、ＰＤＴ治療におけるエリスロシンＢのような光増感剤の使用を一般的に記述し、口腔および抗菌の治療におけるそれらの使用を記述しておらず、歯、歯肉および／または舌への直接的な適用のためのゲルの処方のような、所定の域またはバイオフィルムの付近に光増感剤を制限する方法または組成物を記述していない。その上、この発明は、天然の微小植物類を傷つけないまま、有害な細菌を選択的に殺菌する方法または組成物を開示していない。最後に、この発明は、複雑な媒体例えば血液、血液の血清および唾液の有害な作用を緩和する方法または組成物を開示していない。
【００１９】
上記のＰＤＴの方法および／または組成物は、それらが口中のような身体の域に存在する正常の微小植物類を無差別に殺す点で有利ではない。これらの微小植物類は、必須の機能を行い、そのためどんな抗菌の方法／組成物も、これらの天然の微小植物類を殺すことを避けるべきである。当該技術は、この問題を扱っていないしまたは解決もしていない。
【００２０】
複雑な媒体例えば唾液の存在下で有効な抗菌のＰＤＴの方法および化合物を必要としている。この方法は、グラム陽性およびグラム陰性の両方の細菌に対して有効に使用されるが、特別な適用領域では、グラム陽性の細菌を有効に殺すことで十分である。また、方法および組成物は、必要な細菌を傷つけないまま、有害な細菌に対して有効でなければならない。本発明は、この要求を満たしている。
【特許文献１】米国特許４５８１２２７
【特許文献２】米国特許６３３７３５７
【特許文献３】米国特許出願２００２／０１７３８３２Ａ１
【特許文献４】米国特許６６０９０１４
【特許文献５】米国特許出願２００２／００２２０３２Ａ１
【特許文献６】米国特許４６４７５７８
【特許文献７】米国特許５７９８１１２
【特許文献８】米国特許６５０６７９１
【特許文献９】ヨーロッパ特許６５２７０９Ｂ１
【特許文献１０】米国特許６２９０４９６
【特許文献１１】米国特許出願２００１／００２２９７０Ａ１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
ヒトまたは動物の病者において有害な微生物特に細菌を有効かつ選択的に殺す方法を提供するのが本発明の目的である。
【００２２】
電磁気的な照射によりコントロール可能でしかも選択的に活性化できる抗菌方法を提供するのが本発明の他の目的である。
【００２３】
グラム陽性の細菌を殺すのに有効な方法を提供するのが本発明の他の目的である。
【００２４】
複雑な媒体例えば唾液の存在下有効な抗菌の方法および組成物を提供するのが本発明の他の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
簡単にいえば、本発明は、電磁気的な照射に関連してエリスロシンＢを含む組成物を利用して身体における微生物特に細菌を殺すための方法および組成物を提供する。好ましい方法では、エリスロシンＢを含む組成物は、治療域に導入される。十分な時間が経過した後、好適な波長の照射がその域に適用されてエリスロシンＢを活性化しそして光力学反応によって殺菌する。好ましい照射は、約５３０ｎｍの波長を有する。エリスロシンＢは、ゲル内に配合され、それは光力学作用をバイオフィルムの近くに限定し、そのため望ましくない細菌のみが影響されそして天然の微小植物類は傷つかない。この方法は、少なくともグラム陽性細菌を殺すのに有効であり、そして複雑な媒体例えば唾液も存在している域で特に有効である。
【００２６】
本発明の上記そして他の目的、特徴および利点は、図面を参照して以下の記述から明らかになるだろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
従来の技術の方法および化合物に見いだされる困難さ、特に複雑な媒体例えば血液の血清、血液または唾液の有害な作用を避けそして天然に存在する微小植物類を殺すことを避けるのに見いだされる困難さのために、これらの不利益を克服する化合物を見いだすことが望ましい。エリスロシンＢは、唾液中のグラム陽性の細菌に対して有効な光増感物質であることが分かった。この結果は、特別な適用領域例えば齲歯を防ぐ口腔中のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．細胞を有効に殺すために非常に興味がある。注目される他の利点は、媒体の複雑な成分（例えば唾液）の存在は、他の光増感剤との場合にしばしば生ずる目標細菌におけるエリスロシンＢの有効性を損なうものではないことであった。従って、エリスロシンＢは、本発明による有効な抗菌治療の一部である。エリスロシンＢを含む抗菌ＰＤＴ組成物は、また本発明の一部である。好ましい態様では、抗菌治療は、３つの一般的な段階を含む。第一の段階は、細菌を含む環境にエリスロシンＢ組成物を導入することである。第二の段階は、治療域における細菌細胞中にエリスロシンＢを浸透させるかまたはそれらの細胞エンベロープの成分に少なくとも結合させるのに十分な時間経過させることである。最後の段階は、好適な波長の照射を適用してエリスロシンＢの活性化により光力学メカニズムを開始させ、そして殺菌に導く反応性の酸素種およびフリーラジカルを生成させる。
【００２８】
好ましい「暴露時間」すなわち光増感剤をバイオフィルム中または表面に拡散させるのに十分な照射とエリスロシンＢ組成物の適用との間の時間は、変化することができ、そしてそれぞれ処理される細菌のタイプ、処理される身体の面積、そしてエリスロシンＢ組成物を導入する方法のようなファクターに応じて変化できるだろう。通常、局所の適用では、この時間は、少なくとも５分間であろう。内部の細菌感染を治療するには、組成物は、全身的な適用のために血流中に注入されるか、またはもし感染が特定の域に限定されるならば、狭い域に注入される。皮膚の上またはそれに近い感染では、組成物は、局所適用のための溶液、クリーム、ゲルまたはローションの形である。
【００２９】
好ましい態様では、本発明の組成物は、ゲル内に含まれたエリスロシンＢを含む。エリスロシンＢゲルの適用は、プラークが存在する表面に組成物が選択的に適用されそして付着し、バイオフィルムまたは齲歯に位置する細菌のみが次の照射によって影響をうける点で有利である。これは、生物学的なプロセスに重要な身体中そして身体の表面に存在する多くの微生物がある点で重要である。抗菌治療がこれらの天然かつ有益な微小植物類を殺すのを避けることが重要である。本発明の組成物では、エリスロシンＢは、ゲルの近くの域に制限されそして集中する。ゲルがバイフィルムに適用された後、エリスロシンＢはゲルマトリックスからプラークに拡散し、目標細菌を直接染める。プラーク中の細菌のみが、顕著な光力学効果を刺激する照明の適用に十分なように染められる（エリスロシンＢの濃度は十分に高い）。従って、エリスロシンＢの顕著な量は、バイオフィルム上の適用の域から離れた域に移動できない。活性の域は、そのため、バイオフィルムに近い従って有害な細菌に近い域のみに制限される。
【００３０】
本発明による治療の例は、齲歯が発生しないように、有害な細菌を殺菌するために歯および／または舌の背部へのエリスロシンＢゲルの予防的適用である。別に、ゲルは、その上の細菌を殺菌するために現存する齲歯または疾患の組織へ適用できる。ゲルは、歯または歯肉のような他の表面に適用され、そして好適な照射により活性化されてバイオフィルム中の付近の細菌を殺す。好ましい態様では、本発明により目標とされるバイオフィルムは、主として、齲歯を導く有害な細菌が存在する歯および／または舌の背部に位置するバイオフィルムである。顕著な濃度のエリスロシンＢはゲル組成物から離れて存在しないため、口中の他の微小植物類は影響されない。
【００３１】
ゲル処方物を生成するために本発明で使用できる多数の物質が存在する。すべての物質は、非毒性でなければならず、そして内科的または口腔内の使用に承認されていなければならない。ゲルの成分は、エリスロシンＢを可溶化すべきである。多数のセルロースに基づくゲルが考えられ、例えばヒドロキシエチルセルロースがある。本発明のゲルの態様の例は、エリスロシンＢ、ヒドロキシエチルセルロース、プロピレングリコール、水、および所望の香料または芳香性化合物を含む。
【００３２】
予め選択された時間後、照射は、治療部位に適用されてエリスロシンＢを活性化しそして細菌を殺す。活性化照射の好ましい波長は、５００〜５８０ｎｍであり、そしてさらに好ましくは約５３０ｎｍである。照射は、非干渉照射例えばランプからのもの、または干渉レーザー照射である。表面または表面下の治療では、ランプは特定の感染された領域を照射するのに有効であり、一方身体内の深い感染された領域では、或る内部の領域を照射するのに必要に応じてディヒューザーまたは他の装置をさらに含む１つ以上の光ファイバーを含む光ファイバー装置が、レーザー照射をこれらの内部の領域に伝達するのに好ましい。好ましいレーザー源は、５３２ｎｍレーザーを備えたダイオードである。
【００３３】
本発明は、以下の実施例によりさらに説明されるが、それにより本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００３４】
エリスロシンＢによるＳｔｒｅｐｔｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓの細菌細胞懸濁物の光力学不活性化
この研究に使用される生物は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ＤＳＭ６１７８（ＡＴＣＣ３５６６８）であった。グラム陽性Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．は、齲歯の発生にともに関係している。
【００３５】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ細胞は、Ｔｒｙｐｔｉｃ Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈ（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ドイツ）中で３７℃で一晩好気的に培養された。細胞を遠心分離によって採取し、そして１０％の滅菌濾過した天然唾液を補給した滅菌リン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ）に再懸濁した。すべての場合で１ｃｍの路長で６００ｎｍでの最終のＯＤ（光学密度）は０．０５であった。ヒドロキシエチルセルロースのエリスロシンＢゲル（１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭおよび８ｍＭのエリスロシンＢ）約０．５ｍＬを管の底に置いた。ゲルに０．５ｍＬの細菌懸濁物を重ね、そして室温で穏やかに振盪しつつそれぞれ１、３または５分間曝した。露出後、２５０μＬの懸濁物を新しい管に入れ、管を遠心分離し、上清を取り出し、そして細胞のペレットを２５０μＬのＰＢＳ＋１０％の天然唾液（滅菌濾過）に再懸濁した。細菌懸濁物の一部２００μＬを、透明な底を有する滅菌ブラック９６穴プレート（Ｃｏｓｔａｒ（商標）３６０３、Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．米国）に入れ、そしてプレートの底から光ファイバーを経て３０秒の照射時間で、０．０Ｗに設定された電力で、レーザーＣｅｒａｌａｓ Ｇ２（Ｂｉｏｌｉｔｅｃ ＡＧ、ドイツ）５３２ｎｍからの光に曝した。これらの設定に関するフルエンス率は、約０．１Ｗ／ｃｍ２（Ｏｐｔｏｍｅｔｅｒ Ｐ・９７１０、Ｇｉｇａｈｅｒｚ・Ｏｐｔｉｋ ＧｍｂＨ、Ｐｕｃｈｈｅｉｍ、ドイツで測定した）であった。使用した照明時間では、得られる全エネルギーフルエンスは、約３Ｊ／ｃｍ２であった。
【００３６】
暗（ｄａｒｋ）毒性に関するコントロール試料は、レーザー光に曝されなかった。
【００３７】
照明後、試料をプレートの穴から取り出し、Ｔｒｙｐｔｉｃ Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈにより希釈し、そしてらせんプレーターＥｄｄｙ Ｊｅｔ（ｉｕｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａｓ、スペイン）を使用してＴｒｙｐｔｉｃ Ｓｏｙアガープレート上に置いた。コロニー形成単位の数（ＣＦＵ／ｍＬ）を、コロニー計数計Ｃｏｕｎｔｅｒ Ｆｌａｓｈ（ｉｕｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａｓ、スペイン）を使用して適切なインキュベーション後、数えた。
【００３８】
実験の結果を図３に示す。
【００３９】
エリスロシンＢを含むゲルによるＰＤＴ治療による非常に良好な殺菌が観察された。抗菌効果は、暴露時間およびエリスロシンＢの濃度に依存した。暗毒性は観察されなかった。
【実施例２】
【００４０】
ボランティアの口腔におけるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．の光力学による低下
２５人のボランティアを５つのグループに分けた。すべてのボランティアに、穏やかなマッサージにより歯上に約２ｍＬのエリスロシンＢ含有ゲルを適用した。２分間の暴露時間後、口腔を水で濯ぎ、そして歯を、光ファイバーを経る光アプリケーターによって、５３２ｎｍレーザーＣｅｒａｌａｓ Ｇ２（ｂｉｏｌｉｔｅｃ ＡＧ、ドイツ）からの光により照明した。照射時間は約３分間であった。４つの処理されたボランティアグループに関する照明のフルエンス率は、それぞれ約０．０５、０．１、０．３および０．５Ｗ／ｃｍ２であった。ボランティアのコントロールグループは照明されなかった。すべての処理は、口腔からの細菌の除去を避けるために、朝の通常の歯磨き前になされた。第一の処理前そしてすべての処理後、唾液の試料をＳａｌｉｖｅｔｔｅ（商標）管（Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ａｇ ａｎｄ Ｃｏ．Ｎｕｅｍｂｒｅｃｈｔ、ドイツ）により採取し、唾液をＳａｌｉｖｅｔｔｅ管から取り出し、そしてＴＹＣＳＢアガー（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．に関する選択的培地）プレート上にらせんプレーターＥｄｄｙ Ｊｅｔ（ｉｕｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、スペイン）を使用して接種した。コロニー形成単位の数（ＣＦＵ／ｍＬ）を、コロニー計数計Ｃｏｕｎｔｅｒｍａｔ Ｆｌａｓｈ（ｉｕｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ、スペイン）を使用することにより、好気的ワークステーション（Ｄｏｎ Ｗｈｉｔｈｌｅｙ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｉｍ．Ｓｈｉｐｌｅｙ、英国）で適切なインキュベーション後数えた。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．について、唾液中の細菌の数は、歯のプラーク中の細菌の数と一致した。
【００４１】
実験の結果を図４に示す。
【００４２】
処理中の最良の殺菌効果は、０．３および０．５Ｗ／ｃｍ２のフルエンス率による照明によって得られた。コントロールグループに比較したときの低下は、０．１および０．０５Ｗ／ｃｍ２による照明のグループで見られた。
【００４３】
図面を参照して本発明の好ましい態様を記述したが、本発明がそれらの態様に限定されずそして種々の変化および改変が請求の範囲の範囲または趣旨から離れることなく、当業者により実施できることを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】グラム陽性の細菌細胞の細胞エンベロープの断面図である。
【図２】グラム陰性の細菌細胞の細胞エンベロープの断面図である。
【図３】エリスロシンＢ含有ゲルによるＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ ＤＳＭ６１７８の光力学不活性化を示すグラフである。
【図４】エリスロシンＢ含有ゲルによる光力学不活性化後のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｅｃ．の生存を示すグラフである。
【符号の説明】
【００４５】
１０１ ペプチドグリカン細胞壁
１０３ ペプチドグリカン層
１０５ 細胞膜
２０１ ペプチドグリカンの層
２０３ 細胞膜
２０５ 外側の膜
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ．ゲル中の光増感剤としてエリスロシンＢを含む組成物を生物学的表面上の治療域に導入する段階、
ｂ．該治療域の細菌に該エリスロシンＢを結合させるために予定された時間経過させる段階、
ｃ．該治療域に予め選択された波長の照射を当てて、該エリスロシンＢを活性化しそしてそれにより光力学反応を誘導して該細菌を殺す段階
からなり、そして複雑な媒体が該治療域に存在することを特徴とする病者の治療域の殺菌方法。
【請求項２】
該複雑な媒体が唾液である請求項１の殺菌方法。
【請求項３】
該治療域が、歯および舌背からなる群から選ばれた域上の細菌プラークである請求項１の殺菌方法。
【請求項４】
該治療域が齲歯である請求項１の殺菌方法。
【請求項５】
該予め選択された波長が約５００ｎｍと約５８０ｎｍとの間である請求項１の殺菌方法。
【請求項６】
該予め選択された波長が約５３０ｎｍである請求項１の殺菌方法。
【請求項７】
該組成物中の該エリスロシンＢの濃度が、該組成物０．５ｍＬあたり１ｍＭより多い請求項１の殺菌方法。
【請求項８】
該組成物中の該エリスロシンＢの濃度が、該組成物０．５ｍＬあたり８ｍＭである請求項１の殺菌方法。
【請求項９】
該予定された時間が少なくとも１分である請求項１の殺菌方法。
【請求項１０】
該予定された時間が３分と５分との間である請求項９の殺菌方法。
【請求項１１】
該予定された時間が少なくとも５分である請求項９の殺菌方法。
【請求項１２】
該照射を適用する段階が非干渉ランプにより達成される請求項１の殺菌方法。
【請求項１３】
該照射を適用する段階が、照射源に結合される光学伝達系により達成される請求項１の殺菌方法。
【請求項１４】
該光学伝達系が少なくとも１つの光ファイバーである請求項１３の殺菌方法。
【請求項１５】
該照射が、非干渉照射および干渉レーザー照射からなる群から選ばれる請求項１の殺菌方法。
【請求項１６】
該照射が、少なくとも約０．０５Ｗ／ｃｍ２のフルエンス率で適用される請求項１の殺菌方法。
【請求項１７】
該フルエンス率が、約０．３Ｗ／ｃｍ２と約０．５Ｗ／ｃｍ２との間である請求項１６の殺菌方法。
【請求項１８】
該照射の該適用時間が約３分である請求項１６の殺菌方法。
【請求項１９】
該治療域が歯および歯肉からなる群から選ばれる請求項１の殺菌方法。
【請求項２０】
該組成物が、ヒドロキシエチルセルロースおよびプロピレングリコールからなる群から選ばれる物質をさらに含む請求項１の殺菌方法。
【請求項２１】
エリスロシンＢおよび該エリスロシンＢを可溶化する成分を含むゲルを含むことを特徴とする生物学的表面の治療のための抗菌性光力学治療組成物。
【請求項２２】
ヒドロキシエチルセルロースおよびプロピレングリコールからなる群から選ばれる物質をさらに含む請求項２１の抗菌性光力学治療組成物。
【請求項１】
ａ．ゲル中の光増感剤としてエリスロシンＢを含む組成物を生物学的表面上の治療域に導入する段階、
ｂ．該治療域の細菌に該エリスロシンＢを結合させるために予定された時間経過させる段階、
ｃ．該治療域に予め選択された波長の照射を当てて、該エリスロシンＢを活性化しそしてそれにより光力学反応を誘導して該細菌を殺す段階
からなり、そして複雑な媒体が該治療域に存在することを特徴とする病者の治療域の殺菌方法。
【請求項２】
該複雑な媒体が唾液である請求項１の殺菌方法。
【請求項３】
該治療域が、歯および舌背からなる群から選ばれた域上の細菌プラークである請求項１の殺菌方法。
【請求項４】
該治療域が齲歯である請求項１の殺菌方法。
【請求項５】
該予め選択された波長が約５００ｎｍと約５８０ｎｍとの間である請求項１の殺菌方法。
【請求項６】
該予め選択された波長が約５３０ｎｍである請求項１の殺菌方法。
【請求項７】
該組成物中の該エリスロシンＢの濃度が、該組成物０．５ｍＬあたり１ｍＭより多い請求項１の殺菌方法。
【請求項８】
該組成物中の該エリスロシンＢの濃度が、該組成物０．５ｍＬあたり８ｍＭである請求項１の殺菌方法。
【請求項９】
該予定された時間が少なくとも１分である請求項１の殺菌方法。
【請求項１０】
該予定された時間が３分と５分との間である請求項９の殺菌方法。
【請求項１１】
該予定された時間が少なくとも５分である請求項９の殺菌方法。
【請求項１２】
該照射を適用する段階が非干渉ランプにより達成される請求項１の殺菌方法。
【請求項１３】
該照射を適用する段階が、照射源に結合される光学伝達系により達成される請求項１の殺菌方法。
【請求項１４】
該光学伝達系が少なくとも１つの光ファイバーである請求項１３の殺菌方法。
【請求項１５】
該照射が、非干渉照射および干渉レーザー照射からなる群から選ばれる請求項１の殺菌方法。
【請求項１６】
該照射が、少なくとも約０．０５Ｗ／ｃｍ２のフルエンス率で適用される請求項１の殺菌方法。
【請求項１７】
該フルエンス率が、約０．３Ｗ／ｃｍ２と約０．５Ｗ／ｃｍ２との間である請求項１６の殺菌方法。
【請求項１８】
該照射の該適用時間が約３分である請求項１６の殺菌方法。
【請求項１９】
該治療域が歯および歯肉からなる群から選ばれる請求項１の殺菌方法。
【請求項２０】
該組成物が、ヒドロキシエチルセルロースおよびプロピレングリコールからなる群から選ばれる物質をさらに含む請求項１の殺菌方法。
【請求項２１】
エリスロシンＢおよび該エリスロシンＢを可溶化する成分を含むゲルを含むことを特徴とする生物学的表面の治療のための抗菌性光力学治療組成物。
【請求項２２】
ヒドロキシエチルセルロースおよびプロピレングリコールからなる群から選ばれる物質をさらに含む請求項２１の抗菌性光力学治療組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２００７−５０９０３４（Ｐ２００７−５０９０３４Ａ）
【公表日】平成１９年４月１２日（２００７．４．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５２６１９１（Ｐ２００６−５２６１９１）
【出願日】平成１６年９月３日（２００４．９．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２８７２６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３２４５９
【国際公開日】平成１７年４月１４日（２００５．４．１４）
【出願人】（５０２３５９６６６）セラムオプテック インダストリーズ インコーポレーテッド (20)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年４月１２日（２００７．４．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年９月３日（２００４．９．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２８７２６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３２４５９
【国際公開日】平成１７年４月１４日（２００５．４．１４）
【出願人】（５０２３５９６６６）セラムオプテック インダストリーズ インコーポレーテッド (20)
【Ｆターム（参考）】
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