カロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体
【課題】皮膚外用剤などに有用な安定性、特に空気酸化と光照射への安定性に優れたカロチノイド誘導体を提供する。
【解決手段】一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体。
一般式（１）
式中、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【解決手段】一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体。
一般式（１）
式中、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は外用に適した組成物に関し、更に詳細には、カロチノイド-コラーゲンペプチド縮合体を有効成分として含有する化粧品、外用医薬品等外用に適する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、乳液、クリーム、化粧水、パック、分散液、洗浄料等の化粧品や、軟膏剤、クリーム剤、外用液剤等の外用医薬品には、これらに所定の薬効を付与することを目的として薬効成分が加えられている。カロチノイドは細胞賦活性や抗酸化性に優れ、これらに広く用いられている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、カロチノイドを配合した化粧品、外用医薬品等の外用に適する組成物（以下、「外用剤」ということがある）では、カロチノイドが製剤中で変質するなどして所期の薬効が得られない場合が多く、また、カロチノイドは親水性に欠けるため製剤の安定性に問題があり、その改善が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、外用剤に配合されるカロチノイドの効果を向上させるべく鋭意検討を行った結果、カロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体が、カロチノイドが本来有する作用を維持しつつ、かつ、高い安定性を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００５】
すなわち、本発明は、下記一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体を提供するものである。
一般式（１）
【０００６】
【化１】
【０００７】
式中、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、皮膚外用剤などに有用な安定性、特に空気酸化と光照射への安定性に優れたカロチノイド誘導体を提供できる。さらには、該カロチノイド誘導体により、皮膚への安全性に優れ、抗酸化性能に優れ、且つ、製剤注で安定な皮膚用外用剤を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明において有用なカロチノイドは、水酸基を有するカロチノイドであり、複数の水酸基を有する場合、その水酸基は置換されていなくても、置換されていてもよい。このようなカロチノイドとしては、アスタキサンチン、カプサンチン、フコキサンチン、ヘテロキサンチン、ロロキサンチン、ルテオキサンチン、リコフィル、リコキサンチン、ネオクロム、ネオキサンチン、ロドピン、ロドピナール、ロドピノール、ロドビブリン、トロリキサンチン、キサントフィル、ゼアキサンチンが挙げられる。
【００１０】
本発明においてはアスタキサンチン類が特に好ましい。本発明に用いられるアスタキサンチン類は、既に酸化防止効果、抗炎症効果（特開平２−４９０９１号）、皮膚老化防止効果（特開平５−１５５７３６号）、美白効果（日本香粧品科学会第１９回学術大会講演
要旨集、ｐ.６６,１９９４年）を有することが知られたものである。
【００１１】
このアスタキサンチン類は、化学合成品でも、オキアミ、サケ、マス、福寿草、赤色酵母等の天然物から抽出されたものでもよく、それらの天然抽出物から種々の方法で精製されたものでもよい。
【００１２】
すなわち、ヘマトコッカス藻に抽出溶媒を加え抽出し、この抽出液を濾別して得られるアスタキサンチン類抽出エキスや、この抽出エキスから更に抽出溶媒を留去し、必要に応じて水素添加や加水分解等の化学反応を行った後、分子蒸留、あるいはカラムクロマトグラフィーや高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の手段を用いて脱臭、精製を行った精製アスタキサンチン類を用いることができる。
【００１３】
上記抽出溶媒としては、アセトン、エーテル、クロロホルム及びアルコール（エタノール、メタノール等）等の有機溶媒を用いることができ、また、これらの混合溶液を用いることもできる。あるいは、超臨界状態の二酸化炭素を用いてもよい。
【００１４】
本明細書において、「アスタキサンチン類」とは、アスタキサンチンおよびその誘導体の両者を包含するものである。
【００１５】
アスタキサンチンは、下記一般式（８）で示されるカロチノイドである。
一般式（８）
【００１６】
【化２】
【００１７】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。該アシル基、燐酸エステル基およびグルコシド基は、置換基を有していてもよい。
【００１８】
以下、一般式（８）においてエステル基を有する場合、本明細書において、アスタキサンチンエステルと言う。アスタキサンチンエステルとしては、例えば、グリシン、アラニン等のアミノ酸エステル類、酢酸エステル、クエン酸エステル等のカルボン酸エステル及びその塩類、リン酸エステル、グルコシド等の配糖体類、またはエイコサペンタエン酸やドコサヘキサエン酸等の高度不飽和脂肪酸、オレイン酸やリノール酸等の不飽和脂肪酸またはパルミチン酸やステアリン酸等の飽和脂肪酸から選択される脂肪酸エステル類等から選択されるモノエステル体及び同種または異種のジエステル体等が挙げられる。これらの誘導体のうち、脂肪酸酸エステル類が望ましく、オレイン酸やパルミチン酸のような炭素数12以上の不飽和脂肪酸エステルが特に望ましい。
【００１９】
本発明において有用なコラーゲンペプチドは、特に限定されず何れのものも使用することができる。コラーゲン自体でも人工的に変性させたものでもよく、天然由来抽出コラーゲンでも、また、それに化学処理や酵素処理をして得られたコラーゲンペプチドであってもよく、遺伝子組み換えコラーゲンでもよい。
分子量は600から50万が好ましく、1000から15万がさらに好ましい。
天然由来の多重鎖コラーゲンペプチドでも、それが解けた単鎖コラーゲンペプチドでもよい。一般にゼラチンと呼ばれるコラーゲン由来ペプチドを利用してもよい。天然コラーゲンの原料として、魚類、牛やブタなどの哺乳類、鯛などの魚類、クロレラなどの藻類などが知られているが、特に限定されることは無い。これらコラーゲンペプチドについては、コラーゲン実験法（永井裕、藤本大三郎／編、講談社）及びコラーゲン（藤本大三郎／著、共立出版）を参照出来る。
【００２０】
本発明のカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体は、下記一般式（１）で表されるも
のである。
一般式（１）
【００２１】
【化３】
【００２２】
式中、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【００２３】
前記一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体としては、下記一般式（２）で表されるアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体が好ましい。
一般式（２）
【００２４】
【化４】
【００２５】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【００２６】
尚、カロチノイド残基とは、本発明において有用な、水酸基を有するカロチノイドにおいて、縮合反応に用いられる水酸基を除いた基を言う。
【００２７】
前記一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体は、下記合成ルートによって製造することができる。下記合成ルートにおいて、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【００２８】
【化５】
【００２９】
まず、水酸基を有するカロチノイド（７）と、無水コハク酸とを縮合してカロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とする。この化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとを縮合させてカロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）を得る。さらにこの化合物（４）とコラーゲンペプチドとを反応させてカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体（１）を得ることができる。
【００３０】
本発明の製造方法に関し、さらに詳細に説明する。
カロチノイド（７）と無水コハク酸との縮合では、両者を有機溶剤中で縮合させる。その際、塩基を用いても用いなくてもよいが、塩基を用いることが好ましい。この塩基としては有機塩基でも無機塩基でもよい。有機塩基としては、ピリジン、メチルピリジン、ジメチルピリジン、トリメチルピリジンなどのピリジン類やイミダゾールなどのアゾール類、トリエチルアミンやトリブチルアミンのようなトリアルキルアミン類が好ましく、無機塩基としては、炭酸ナトリウムや炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウムなどの炭酸塩が好ましい。
【００３１】
カロチノイド（７）と無水コハク酸との縮合に用いられる有機溶媒としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）やアルコール類などの無水コハク酸と反応する溶媒を除けば特に限定は無いが、塩化メチレンなどの有機塩素溶媒、酢酸エステル、アセトニトリル、エーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルイミダゾリジノンが好ましい。
【００３２】
カロチノイド（７）と無水コハク酸との縮合における反応温度は20℃から70℃が好ましく、20℃から50℃がさらに好ましい。
【００３３】
カロチノイド（７）と無水コハク酸のモル比は１倍から５倍が好ましく、１倍から２倍が好ましく、1.05倍から1.2倍が特に好ましい。
【００３４】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとの縮合においては、カルボン酸とＮ−ヒドロキシフタルイミドの縮合法として既知の方法を用いることができる。すなわち、カルボジイミドなどの脱水縮合剤を用いる方法や、カルボン酸を塩化チオニルやオキシ塩化リンなどの塩素化剤を用いていったん三塩化物に変えた後、塩基存在下、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドと反応させる方法等を用いることができる。それらの中では、カルボジイミドを用いる方法が特に好ましい。
【００３５】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとの縮合に用いられる溶媒は、カルボジイミドを用いる場合は、エーテル、ＴＨＦ、アセトニトリル、酢酸エチル、ＤＭＦ、ＤＭＡｃ、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルイミダゾリジノンが好ましい。
【００３６】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとの縮合における反応温度は、カルボジイミドを用いる場合は、20℃から70℃が好ましく、20℃から50℃がさらに好ましい。
【００３７】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドのモル比は１倍から５倍が好ましく、１倍から２倍が好ましく、1.05倍から1.2倍が特に好ましい。
【００３８】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとの縮合に用いられるカルボジイミドは、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）が特に好ましく、その量は、モル比で、カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）に対して、１倍から２倍が好ましく、1.05倍から1.2倍が特に好ましい。
【００３９】
カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）とコラーゲンペプチドとの縮合では、カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）を非水溶性の溶剤に、コラーゲンペプチドを水に溶解し、二層系で反応させる方法や、カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）をＤＭＦなどの水溶性の溶剤に溶解し、コラーゲンペプチドの水溶液と混合して単層系で反応させる方法のいずれも用いることができるが、単層系の反応が好ましい。このとき用いられる溶剤はＤＭＦ、ＤＭＡｃ、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルイミダゾリジノンが特に好ましい。
【００４０】
カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）とコラーゲンペプチドとの縮合における温度は、単層系の場合、25℃から95℃が好ましく、30℃から70℃がさらに好ましく、40℃から60℃がもっとも好ましい。
【００４１】
カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）とコラーゲンペプチドの比はコラーゲンペプチド中のリジン比に依存する。カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）はコラーゲンペプチド中のリジン残基に対し、0.1から5当量が好ましく、0.2から3当量がさらに好ましく、0.2から2当量が特に好ましい。
【００４２】
前記一般式（２）で表されるアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体は、下記合成ルートによって製造することができる。下記合成ルートにおいて、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【００４３】
【化６】
【００４４】
まず、水酸基を有するアスタキサンチン（８）と、無水コハク酸とを縮合してアスタキサンチンエステルカルボン酸化合物（５）とする。この化合物（５）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとを縮合させてカロチノイドエステル−フタルイミド化合物（６）を得る。さらにこの化合物（６）とコラーゲンペプチドとを反応させてカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体（２）を得ることができる。
【００４５】
カロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体（２）の製造方法の詳細は、前記カロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体（１）の製造方法と同様であり、各縮合反応における好ましい縮合法、有機溶媒、反応温度、等も同様である。
【実施例】
【００４６】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらになんら制限されるものではない。
【００４７】
参考例１：アスタキサンチンの精製
（１）前吸着
ヘマトコッカス抽出物(武田紙器製 79g)を酢酸エチル800mLに溶解させ、シリカゲル(和光純薬 C-200 165g)を添加し減圧濃縮した。濃縮後は窒素でブローした。
【００４８】
（２）カラム充填
シリカゲル(和光純薬 C-200 2342g 3900mL)をヘキサン/酢酸エチル9:1で懸濁し、太さ16cm 長さ60cmのカラムに充填した。
【００４９】
（３）展開
カラムの上部に展開溶媒を張り、前吸着させたシリカゲルを添加した。ヘキサン/酢酸エチル＝9:1の溶離液を12L流した。ついで、ヘキサン/酢酸エチル＝5:1の溶離液を6L流した。さらにヘキサン/酢酸エチル＝5:1の溶離液を7L流した。
展開液をTLCで分析し、モノエステル分画部を減圧溜去しモノエステル体14gを得た。このモノエステル体はカルボン酸部が炭素数18の不飽和脂肪酸の混合物（Ｒ1＝Ｃ17Ｈ29-33ＣＯ）であった。
【００５０】
実施例１：アスタキサンチンエステルカルボン酸化合物（５Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）の合成
アスタキサンチンモノエステル（８Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）3.0ｇ（3.5mmol）と無水コハク酸0.41ｇ（4.1mmol）を塩化メチレン20mlに溶解しトリエチルアミン0.42ｇ（4.1mmol）を添加し室温で16時間反応させた。反応液に１モル／Ｌ ＨＣｌ 10mlを添加し分液しさらに水で有機層を洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後で濃縮し、3.1ｇ（収率 93％）でアスタキサンチンエステルカルボン酸化合物（５Ａ）を得た。
（1HNMR（CDCl3 6.1-6.7(14H,m）, 5.5-5.6(2H,m）, 5.3-5.4(4H,m),1.99(12H,s), 1.90(6H,s), 1.33(6H,s), 1.23(6H,s). MS m/z =990.7（R1=C17H33）, 988.7（R1=C17H31） . mp 72℃分解
【００５１】
【化７】
【００５２】
実施例２：アスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物（６Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）の合成
アスタキサンチンエステルカルボン酸化合物（５Ａ）2.8ｇ（2.9mmol）とＮ−ヒドロキシフタルイミド0.57ｇ（3.5mmol）をＴＨＦ 20mlに溶解し、ＤＣＣ 0.72ｇ（3.5mmol）
を添加し室温で16時間反応させた。析出したジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を濾別し、ＤＣＵをＴＨＦで洗浄した。有機層を濃縮し、アスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物（６Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）濃縮物3.1gを得た。
（1HNMR（CDCl3 6.1-6.7(14H,m）, 5.5-5.6(2H,m）, 5.3-5.4(4H,m),2.02(12H,s), 1.90(6H,s), 1.32(6H,s), 1.22(6H,s). MS m/z =1015.6（R1=C17H33）, 1013.6（R1=C17H31） . mp 46℃ 分解
得られた濃縮物はこのまま次の反応に用いた。
【００５３】
【化８】
【００５４】
実施例３：アスタキサンチン-コラーゲンペプチド縮合体（２Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）の合成
実施例３で得られたアスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物（６Ａ）濃縮物3.1gをＤＭＡｃ 20ｇで溶解した。コラーゲンペプチド（ニッピ製 FCP-A 平均分子量：１万、Lys比率2.6％）15ｇをＤＭＡｃと水に50℃で溶解させた。このコラーゲンペプチド溶液に、窒素気流下で上記アスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物（６Ａ）のＤＭＡｃ溶液を添加し、60℃で５時間反応させた。さらに室温で16時間反応させた。反応液をアセトニトリルに添加し窒素気流下で室温で終夜撹拌した。析出したアスタキサンチン-コラーゲンペプチド縮合体（２Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）を濾取し、30℃で減圧乾燥した。収量9.8ｇ。スペクトル分析から、アスタキサンチン部の重量比は25％であった。1HNMR CDCl3 6.1-6.7の積分を14Hとして、計算値から求めた。
【００５５】
【化９】
【００５６】
実施例４：アスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体（２Ａ）の固体分散液
前記で得られたアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体（２Ａ）を下記（１）の方法により分散固体とした。
（１） 蒸留水２１．4gおよびリン脂質コポリマー界面活性剤(日本油脂 Lipidure-PMB）の溶液２．６５ｇとを６０mlネジブタ瓶に入れた。アスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体（２Ａ）１．０ｇをこの溶液に添加した。酸化ジルコニウム（ＺｒＯ）のビーズ４０ml（２mm径）を添加し、ふたをしっかりしめたのちミルに置き回転数4800r.p.m.にて粒子サイズ１μｍ以下の化合物の微粉体分散物を得た。
【００５７】
試料液の調整
上記のようにして調製した微粉体分散物を、表１に示す重量濃度になるように蒸留水で希釈して試料液を調製した。
【００５８】
比較例１
蒸留水21.3ｇおよびリン脂質コポリマー界面活性剤(日本油脂 Lipidure-PMB)の溶液2.65gとを60mlネジブタ瓶に入れた。前記参考例によって精製したアスタキサンチンモノエステル0.10gとＴＨＦ １mlの溶液をこの溶液に添加した。酸化ジルコニウム（ＺｒＯ）のビーズ４０ml（２mm径）を添加し、ふたをしっかりしめたのちミルに置き回転数4800r.p.m.にて分散液を得た。
【００５９】
試料液の調整
上記のようにして調製した分散液を、表１に示す重量濃度になるように蒸留水で希釈して比較試料液とした。
【００６０】
〔分散物の評価〕
｛空気酸化に対する安定性｝
評価用の試料は、50mlのナス型フラスコに試料15ml入れて25℃、空気雰囲気下攪拌して試験を行った。評価は、窒素雰囲気下の470nmの吸収（アスタキサンチンの吸収極大）を100として空気雰囲気下の残存率を算出した。結果を表１に示す。
【００６１】
｛光照射に対する安定性｝
メリーゴーランド型キセノン退色試験機を用いて、光照射実験を行った。キセノン光原は、500Ｗのランプを使用した。評価用の試料は、４面透明な蓋付の10mm石英セルに試料３ml入れて25℃、無攪拌で試験を行った。評価は、光照射なしの470nmの吸収（アスタキサンチンの吸収極大）を100として光照射後の残存率を算出した。結果を表１に示す。
【００６２】
【表１】
【００６３】
表１に示したように、本発明のアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体は、比較例のアスタキサンチンより高い安定性を示した。
【００６４】
実施例５：抗酸化活性［スーパーオキサイド除去活性］
実施例４で得られた試料を下記測定方法によりスーパーオキサイド除去活性を測定した。すなわち、０.０５Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０.２）２.４ｍｌに基質溶液［３.０ｍＭ キサンチン（０.０５Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液に溶解）］０.１ｍｌ、３.０ｍＭ ＥＤＴＡ ０.１ｍｌ、０.１５％（W/V）ウシ血清アルブミン０.１ｍｌ、０.７５ｍＭ ニトロブル−テトラゾリウム ０.１ｍｌ及び各被験試料０.１ｍｌを混合し、２５℃で１０分間放置した。次いで、酵素溶液［キサンチンオキシダーゼ溶液（精製水にて約０.０４units／ml希釈）］０.１ｍｌを加えて反応を開始し、２５℃で２０分間インキュベートした後、６ｍＭ ＣａＣｌ2 ０．１ｍｌを加えて反応を停止した。次いで５６０ｎｍにおける吸光度（Ａ）を測定した。
【００６５】
対照には被験試料のかわりに蒸留水を加えた試料の吸光度（Ｂ）、また各試料のブランクには、６ｍＭ ＣａＣｌ2 ０．１ｍｌを加えて反応停止後に、キサンチンオキシダーゼ０．１ｍｌを添加した試料の吸光度（Ｃ）を測定し、次式より、スーパーオキサイド除去率を算出した。その結果を表２に示す。
【００６６】
除去率＝（（Ｂ−（Ａ−Ｃ））／Ｂ）×１００
Ａ：試料の酵素反応による吸光度
Ｂ：対照の酵素反応による吸光度
Ｃ：試料の無酵素反応による吸光度
【００６７】
【表２】
【００６８】
表２に示したように本発明のアスタキサンチン-コラーゲンペプチド縮合体はアスタキサンチンモノエステルと同等以上の抗酸化活性を示した。さらに、抗酸化性が知られているビタミンC、ビタミンEとの併用により、特に低濃度領域で抗酸化性が強くなることが示された。
【００６９】
このことは、本発明のアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体は活性酸素除去剤を併用することにより、皮膚中での活性酸素生成に起因する過酸化脂質の生成、炎症、黒化、老化に対し、極めて高い予防効果を有することを示すものと言える。
【００７０】
実施例６：アスタキサンチンステアリン酸エステル（R1=C17H35）
アスタキサンチン（和光純薬、生化学用）0.60g（1.0mmol）とステアリン酸塩化物（アルドリッチ）0.33g（1.1mmol）をアセトニトリル10mlに溶解し、4℃で、トリエチルアミ
ン1mlを加えた。その後、22℃に温度を上げ、その温度で、4時間攪拌した。反応液を40mlの水に投じ、20mlの酢酸エチルで3回抽出した。酢酸エチル抽出液を1規定塩酸液で洗浄し、飽和重曹水と飽和食塩水で洗浄した。酢酸エチル溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒溜去し、シリカゲル(和光純薬 C-200) 40gを用い、ヘキサン／酢酸エチルで溶出させ精製した。収量0.32g（融点79-83℃）。
実施例１〜５と同様にして、固体分散液を得た後、同様の評価を行ったところ、同様の結果が得られた。
【００７１】
実施例７：アスタキサンチン酢酸エステル
実施例６のステアリン酸塩化物を酢酸塩化物に変えた以外は同様にして酢酸エステル（R1=CH3、融点141℃分解）を合成した。
実施例１〜５と同様にして、固体分散液を得た後、同様の評価を行ったところ、同様の結果が得られた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は外用に適した組成物に関し、更に詳細には、カロチノイド-コラーゲンペプチド縮合体を有効成分として含有する化粧品、外用医薬品等外用に適する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、乳液、クリーム、化粧水、パック、分散液、洗浄料等の化粧品や、軟膏剤、クリーム剤、外用液剤等の外用医薬品には、これらに所定の薬効を付与することを目的として薬効成分が加えられている。カロチノイドは細胞賦活性や抗酸化性に優れ、これらに広く用いられている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、カロチノイドを配合した化粧品、外用医薬品等の外用に適する組成物（以下、「外用剤」ということがある）では、カロチノイドが製剤中で変質するなどして所期の薬効が得られない場合が多く、また、カロチノイドは親水性に欠けるため製剤の安定性に問題があり、その改善が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、外用剤に配合されるカロチノイドの効果を向上させるべく鋭意検討を行った結果、カロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体が、カロチノイドが本来有する作用を維持しつつ、かつ、高い安定性を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００５】
すなわち、本発明は、下記一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体を提供するものである。
一般式（１）
【０００６】
【化１】
【０００７】
式中、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、皮膚外用剤などに有用な安定性、特に空気酸化と光照射への安定性に優れたカロチノイド誘導体を提供できる。さらには、該カロチノイド誘導体により、皮膚への安全性に優れ、抗酸化性能に優れ、且つ、製剤注で安定な皮膚用外用剤を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明において有用なカロチノイドは、水酸基を有するカロチノイドであり、複数の水酸基を有する場合、その水酸基は置換されていなくても、置換されていてもよい。このようなカロチノイドとしては、アスタキサンチン、カプサンチン、フコキサンチン、ヘテロキサンチン、ロロキサンチン、ルテオキサンチン、リコフィル、リコキサンチン、ネオクロム、ネオキサンチン、ロドピン、ロドピナール、ロドピノール、ロドビブリン、トロリキサンチン、キサントフィル、ゼアキサンチンが挙げられる。
【００１０】
本発明においてはアスタキサンチン類が特に好ましい。本発明に用いられるアスタキサンチン類は、既に酸化防止効果、抗炎症効果（特開平２−４９０９１号）、皮膚老化防止効果（特開平５−１５５７３６号）、美白効果（日本香粧品科学会第１９回学術大会講演
要旨集、ｐ.６６,１９９４年）を有することが知られたものである。
【００１１】
このアスタキサンチン類は、化学合成品でも、オキアミ、サケ、マス、福寿草、赤色酵母等の天然物から抽出されたものでもよく、それらの天然抽出物から種々の方法で精製されたものでもよい。
【００１２】
すなわち、ヘマトコッカス藻に抽出溶媒を加え抽出し、この抽出液を濾別して得られるアスタキサンチン類抽出エキスや、この抽出エキスから更に抽出溶媒を留去し、必要に応じて水素添加や加水分解等の化学反応を行った後、分子蒸留、あるいはカラムクロマトグラフィーや高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の手段を用いて脱臭、精製を行った精製アスタキサンチン類を用いることができる。
【００１３】
上記抽出溶媒としては、アセトン、エーテル、クロロホルム及びアルコール（エタノール、メタノール等）等の有機溶媒を用いることができ、また、これらの混合溶液を用いることもできる。あるいは、超臨界状態の二酸化炭素を用いてもよい。
【００１４】
本明細書において、「アスタキサンチン類」とは、アスタキサンチンおよびその誘導体の両者を包含するものである。
【００１５】
アスタキサンチンは、下記一般式（８）で示されるカロチノイドである。
一般式（８）
【００１６】
【化２】
【００１７】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。該アシル基、燐酸エステル基およびグルコシド基は、置換基を有していてもよい。
【００１８】
以下、一般式（８）においてエステル基を有する場合、本明細書において、アスタキサンチンエステルと言う。アスタキサンチンエステルとしては、例えば、グリシン、アラニン等のアミノ酸エステル類、酢酸エステル、クエン酸エステル等のカルボン酸エステル及びその塩類、リン酸エステル、グルコシド等の配糖体類、またはエイコサペンタエン酸やドコサヘキサエン酸等の高度不飽和脂肪酸、オレイン酸やリノール酸等の不飽和脂肪酸またはパルミチン酸やステアリン酸等の飽和脂肪酸から選択される脂肪酸エステル類等から選択されるモノエステル体及び同種または異種のジエステル体等が挙げられる。これらの誘導体のうち、脂肪酸酸エステル類が望ましく、オレイン酸やパルミチン酸のような炭素数12以上の不飽和脂肪酸エステルが特に望ましい。
【００１９】
本発明において有用なコラーゲンペプチドは、特に限定されず何れのものも使用することができる。コラーゲン自体でも人工的に変性させたものでもよく、天然由来抽出コラーゲンでも、また、それに化学処理や酵素処理をして得られたコラーゲンペプチドであってもよく、遺伝子組み換えコラーゲンでもよい。
分子量は600から50万が好ましく、1000から15万がさらに好ましい。
天然由来の多重鎖コラーゲンペプチドでも、それが解けた単鎖コラーゲンペプチドでもよい。一般にゼラチンと呼ばれるコラーゲン由来ペプチドを利用してもよい。天然コラーゲンの原料として、魚類、牛やブタなどの哺乳類、鯛などの魚類、クロレラなどの藻類などが知られているが、特に限定されることは無い。これらコラーゲンペプチドについては、コラーゲン実験法（永井裕、藤本大三郎／編、講談社）及びコラーゲン（藤本大三郎／著、共立出版）を参照出来る。
【００２０】
本発明のカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体は、下記一般式（１）で表されるも
のである。
一般式（１）
【００２１】
【化３】
【００２２】
式中、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【００２３】
前記一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体としては、下記一般式（２）で表されるアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体が好ましい。
一般式（２）
【００２４】
【化４】
【００２５】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【００２６】
尚、カロチノイド残基とは、本発明において有用な、水酸基を有するカロチノイドにおいて、縮合反応に用いられる水酸基を除いた基を言う。
【００２７】
前記一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体は、下記合成ルートによって製造することができる。下記合成ルートにおいて、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【００２８】
【化５】
【００２９】
まず、水酸基を有するカロチノイド（７）と、無水コハク酸とを縮合してカロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とする。この化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとを縮合させてカロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）を得る。さらにこの化合物（４）とコラーゲンペプチドとを反応させてカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体（１）を得ることができる。
【００３０】
本発明の製造方法に関し、さらに詳細に説明する。
カロチノイド（７）と無水コハク酸との縮合では、両者を有機溶剤中で縮合させる。その際、塩基を用いても用いなくてもよいが、塩基を用いることが好ましい。この塩基としては有機塩基でも無機塩基でもよい。有機塩基としては、ピリジン、メチルピリジン、ジメチルピリジン、トリメチルピリジンなどのピリジン類やイミダゾールなどのアゾール類、トリエチルアミンやトリブチルアミンのようなトリアルキルアミン類が好ましく、無機塩基としては、炭酸ナトリウムや炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウムなどの炭酸塩が好ましい。
【００３１】
カロチノイド（７）と無水コハク酸との縮合に用いられる有機溶媒としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）やアルコール類などの無水コハク酸と反応する溶媒を除けば特に限定は無いが、塩化メチレンなどの有機塩素溶媒、酢酸エステル、アセトニトリル、エーテル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルイミダゾリジノンが好ましい。
【００３２】
カロチノイド（７）と無水コハク酸との縮合における反応温度は20℃から70℃が好ましく、20℃から50℃がさらに好ましい。
【００３３】
カロチノイド（７）と無水コハク酸のモル比は１倍から５倍が好ましく、１倍から２倍が好ましく、1.05倍から1.2倍が特に好ましい。
【００３４】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとの縮合においては、カルボン酸とＮ−ヒドロキシフタルイミドの縮合法として既知の方法を用いることができる。すなわち、カルボジイミドなどの脱水縮合剤を用いる方法や、カルボン酸を塩化チオニルやオキシ塩化リンなどの塩素化剤を用いていったん三塩化物に変えた後、塩基存在下、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドと反応させる方法等を用いることができる。それらの中では、カルボジイミドを用いる方法が特に好ましい。
【００３５】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとの縮合に用いられる溶媒は、カルボジイミドを用いる場合は、エーテル、ＴＨＦ、アセトニトリル、酢酸エチル、ＤＭＦ、ＤＭＡｃ、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルイミダゾリジノンが好ましい。
【００３６】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとの縮合における反応温度は、カルボジイミドを用いる場合は、20℃から70℃が好ましく、20℃から50℃がさらに好ましい。
【００３７】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドのモル比は１倍から５倍が好ましく、１倍から２倍が好ましく、1.05倍から1.2倍が特に好ましい。
【００３８】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとの縮合に用いられるカルボジイミドは、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）が特に好ましく、その量は、モル比で、カロチノイドエステルカルボン酸化合物（３）に対して、１倍から２倍が好ましく、1.05倍から1.2倍が特に好ましい。
【００３９】
カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）とコラーゲンペプチドとの縮合では、カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）を非水溶性の溶剤に、コラーゲンペプチドを水に溶解し、二層系で反応させる方法や、カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）をＤＭＦなどの水溶性の溶剤に溶解し、コラーゲンペプチドの水溶液と混合して単層系で反応させる方法のいずれも用いることができるが、単層系の反応が好ましい。このとき用いられる溶剤はＤＭＦ、ＤＭＡｃ、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ，Ｎ−ジメチルイミダゾリジノンが特に好ましい。
【００４０】
カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）とコラーゲンペプチドとの縮合における温度は、単層系の場合、25℃から95℃が好ましく、30℃から70℃がさらに好ましく、40℃から60℃がもっとも好ましい。
【００４１】
カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）とコラーゲンペプチドの比はコラーゲンペプチド中のリジン比に依存する。カロチノイドエステル−フタルイミド化合物（４）はコラーゲンペプチド中のリジン残基に対し、0.1から5当量が好ましく、0.2から3当量がさらに好ましく、0.2から2当量が特に好ましい。
【００４２】
前記一般式（２）で表されるアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体は、下記合成ルートによって製造することができる。下記合成ルートにおいて、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【００４３】
【化６】
【００４４】
まず、水酸基を有するアスタキサンチン（８）と、無水コハク酸とを縮合してアスタキサンチンエステルカルボン酸化合物（５）とする。この化合物（５）とＮ−ヒドロキシフタルイミドとを縮合させてカロチノイドエステル−フタルイミド化合物（６）を得る。さらにこの化合物（６）とコラーゲンペプチドとを反応させてカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体（２）を得ることができる。
【００４５】
カロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体（２）の製造方法の詳細は、前記カロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体（１）の製造方法と同様であり、各縮合反応における好ましい縮合法、有機溶媒、反応温度、等も同様である。
【実施例】
【００４６】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらになんら制限されるものではない。
【００４７】
参考例１：アスタキサンチンの精製
（１）前吸着
ヘマトコッカス抽出物(武田紙器製 79g)を酢酸エチル800mLに溶解させ、シリカゲル(和光純薬 C-200 165g)を添加し減圧濃縮した。濃縮後は窒素でブローした。
【００４８】
（２）カラム充填
シリカゲル(和光純薬 C-200 2342g 3900mL)をヘキサン/酢酸エチル9:1で懸濁し、太さ16cm 長さ60cmのカラムに充填した。
【００４９】
（３）展開
カラムの上部に展開溶媒を張り、前吸着させたシリカゲルを添加した。ヘキサン/酢酸エチル＝9:1の溶離液を12L流した。ついで、ヘキサン/酢酸エチル＝5:1の溶離液を6L流した。さらにヘキサン/酢酸エチル＝5:1の溶離液を7L流した。
展開液をTLCで分析し、モノエステル分画部を減圧溜去しモノエステル体14gを得た。このモノエステル体はカルボン酸部が炭素数18の不飽和脂肪酸の混合物（Ｒ1＝Ｃ17Ｈ29-33ＣＯ）であった。
【００５０】
実施例１：アスタキサンチンエステルカルボン酸化合物（５Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）の合成
アスタキサンチンモノエステル（８Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）3.0ｇ（3.5mmol）と無水コハク酸0.41ｇ（4.1mmol）を塩化メチレン20mlに溶解しトリエチルアミン0.42ｇ（4.1mmol）を添加し室温で16時間反応させた。反応液に１モル／Ｌ ＨＣｌ 10mlを添加し分液しさらに水で有機層を洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥した後で濃縮し、3.1ｇ（収率 93％）でアスタキサンチンエステルカルボン酸化合物（５Ａ）を得た。
（1HNMR（CDCl3 6.1-6.7(14H,m）, 5.5-5.6(2H,m）, 5.3-5.4(4H,m),1.99(12H,s), 1.90(6H,s), 1.33(6H,s), 1.23(6H,s). MS m/z =990.7（R1=C17H33）, 988.7（R1=C17H31） . mp 72℃分解
【００５１】
【化７】
【００５２】
実施例２：アスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物（６Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）の合成
アスタキサンチンエステルカルボン酸化合物（５Ａ）2.8ｇ（2.9mmol）とＮ−ヒドロキシフタルイミド0.57ｇ（3.5mmol）をＴＨＦ 20mlに溶解し、ＤＣＣ 0.72ｇ（3.5mmol）
を添加し室温で16時間反応させた。析出したジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を濾別し、ＤＣＵをＴＨＦで洗浄した。有機層を濃縮し、アスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物（６Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）濃縮物3.1gを得た。
（1HNMR（CDCl3 6.1-6.7(14H,m）, 5.5-5.6(2H,m）, 5.3-5.4(4H,m),2.02(12H,s), 1.90(6H,s), 1.32(6H,s), 1.22(6H,s). MS m/z =1015.6（R1=C17H33）, 1013.6（R1=C17H31） . mp 46℃ 分解
得られた濃縮物はこのまま次の反応に用いた。
【００５３】
【化８】
【００５４】
実施例３：アスタキサンチン-コラーゲンペプチド縮合体（２Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）の合成
実施例３で得られたアスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物（６Ａ）濃縮物3.1gをＤＭＡｃ 20ｇで溶解した。コラーゲンペプチド（ニッピ製 FCP-A 平均分子量：１万、Lys比率2.6％）15ｇをＤＭＡｃと水に50℃で溶解させた。このコラーゲンペプチド溶液に、窒素気流下で上記アスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物（６Ａ）のＤＭＡｃ溶液を添加し、60℃で５時間反応させた。さらに室温で16時間反応させた。反応液をアセトニトリルに添加し窒素気流下で室温で終夜撹拌した。析出したアスタキサンチン-コラーゲンペプチド縮合体（２Ａ ： Ｒ1＝Ｃ17Ｈ31ＣＯ）を濾取し、30℃で減圧乾燥した。収量9.8ｇ。スペクトル分析から、アスタキサンチン部の重量比は25％であった。1HNMR CDCl3 6.1-6.7の積分を14Hとして、計算値から求めた。
【００５５】
【化９】
【００５６】
実施例４：アスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体（２Ａ）の固体分散液
前記で得られたアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体（２Ａ）を下記（１）の方法により分散固体とした。
（１） 蒸留水２１．4gおよびリン脂質コポリマー界面活性剤(日本油脂 Lipidure-PMB）の溶液２．６５ｇとを６０mlネジブタ瓶に入れた。アスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体（２Ａ）１．０ｇをこの溶液に添加した。酸化ジルコニウム（ＺｒＯ）のビーズ４０ml（２mm径）を添加し、ふたをしっかりしめたのちミルに置き回転数4800r.p.m.にて粒子サイズ１μｍ以下の化合物の微粉体分散物を得た。
【００５７】
試料液の調整
上記のようにして調製した微粉体分散物を、表１に示す重量濃度になるように蒸留水で希釈して試料液を調製した。
【００５８】
比較例１
蒸留水21.3ｇおよびリン脂質コポリマー界面活性剤(日本油脂 Lipidure-PMB)の溶液2.65gとを60mlネジブタ瓶に入れた。前記参考例によって精製したアスタキサンチンモノエステル0.10gとＴＨＦ １mlの溶液をこの溶液に添加した。酸化ジルコニウム（ＺｒＯ）のビーズ４０ml（２mm径）を添加し、ふたをしっかりしめたのちミルに置き回転数4800r.p.m.にて分散液を得た。
【００５９】
試料液の調整
上記のようにして調製した分散液を、表１に示す重量濃度になるように蒸留水で希釈して比較試料液とした。
【００６０】
〔分散物の評価〕
｛空気酸化に対する安定性｝
評価用の試料は、50mlのナス型フラスコに試料15ml入れて25℃、空気雰囲気下攪拌して試験を行った。評価は、窒素雰囲気下の470nmの吸収（アスタキサンチンの吸収極大）を100として空気雰囲気下の残存率を算出した。結果を表１に示す。
【００６１】
｛光照射に対する安定性｝
メリーゴーランド型キセノン退色試験機を用いて、光照射実験を行った。キセノン光原は、500Ｗのランプを使用した。評価用の試料は、４面透明な蓋付の10mm石英セルに試料３ml入れて25℃、無攪拌で試験を行った。評価は、光照射なしの470nmの吸収（アスタキサンチンの吸収極大）を100として光照射後の残存率を算出した。結果を表１に示す。
【００６２】
【表１】
【００６３】
表１に示したように、本発明のアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体は、比較例のアスタキサンチンより高い安定性を示した。
【００６４】
実施例５：抗酸化活性［スーパーオキサイド除去活性］
実施例４で得られた試料を下記測定方法によりスーパーオキサイド除去活性を測定した。すなわち、０.０５Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０.２）２.４ｍｌに基質溶液［３.０ｍＭ キサンチン（０.０５Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液に溶解）］０.１ｍｌ、３.０ｍＭ ＥＤＴＡ ０.１ｍｌ、０.１５％（W/V）ウシ血清アルブミン０.１ｍｌ、０.７５ｍＭ ニトロブル−テトラゾリウム ０.１ｍｌ及び各被験試料０.１ｍｌを混合し、２５℃で１０分間放置した。次いで、酵素溶液［キサンチンオキシダーゼ溶液（精製水にて約０.０４units／ml希釈）］０.１ｍｌを加えて反応を開始し、２５℃で２０分間インキュベートした後、６ｍＭ ＣａＣｌ2 ０．１ｍｌを加えて反応を停止した。次いで５６０ｎｍにおける吸光度（Ａ）を測定した。
【００６５】
対照には被験試料のかわりに蒸留水を加えた試料の吸光度（Ｂ）、また各試料のブランクには、６ｍＭ ＣａＣｌ2 ０．１ｍｌを加えて反応停止後に、キサンチンオキシダーゼ０．１ｍｌを添加した試料の吸光度（Ｃ）を測定し、次式より、スーパーオキサイド除去率を算出した。その結果を表２に示す。
【００６６】
除去率＝（（Ｂ−（Ａ−Ｃ））／Ｂ）×１００
Ａ：試料の酵素反応による吸光度
Ｂ：対照の酵素反応による吸光度
Ｃ：試料の無酵素反応による吸光度
【００６７】
【表２】
【００６８】
表２に示したように本発明のアスタキサンチン-コラーゲンペプチド縮合体はアスタキサンチンモノエステルと同等以上の抗酸化活性を示した。さらに、抗酸化性が知られているビタミンC、ビタミンEとの併用により、特に低濃度領域で抗酸化性が強くなることが示された。
【００６９】
このことは、本発明のアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体は活性酸素除去剤を併用することにより、皮膚中での活性酸素生成に起因する過酸化脂質の生成、炎症、黒化、老化に対し、極めて高い予防効果を有することを示すものと言える。
【００７０】
実施例６：アスタキサンチンステアリン酸エステル（R1=C17H35）
アスタキサンチン（和光純薬、生化学用）0.60g（1.0mmol）とステアリン酸塩化物（アルドリッチ）0.33g（1.1mmol）をアセトニトリル10mlに溶解し、4℃で、トリエチルアミ
ン1mlを加えた。その後、22℃に温度を上げ、その温度で、4時間攪拌した。反応液を40mlの水に投じ、20mlの酢酸エチルで3回抽出した。酢酸エチル抽出液を1規定塩酸液で洗浄し、飽和重曹水と飽和食塩水で洗浄した。酢酸エチル溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒溜去し、シリカゲル(和光純薬 C-200) 40gを用い、ヘキサン／酢酸エチルで溶出させ精製した。収量0.32g（融点79-83℃）。
実施例１〜５と同様にして、固体分散液を得た後、同様の評価を行ったところ、同様の結果が得られた。
【００７１】
実施例７：アスタキサンチン酢酸エステル
実施例６のステアリン酸塩化物を酢酸塩化物に変えた以外は同様にして酢酸エステル（R1=CH3、融点141℃分解）を合成した。
実施例１〜５と同様にして、固体分散液を得た後、同様の評価を行ったところ、同様の結果が得られた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体。
一般式（１）
【化１】
式中、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【請求項２】
カロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体が下記一般式（２）で表されるアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体である請求項１記載の縮合体。
一般式（２）
【化２】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【請求項３】
下記一般式（３）で表されるカロチノイドエステルカルボン酸化合物。
一般式（３）
【化３】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
【請求項４】
下記一般式（４）で表されるカロチノイドエステル−フタルイミド化合物。
一般式（４）
【化４】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
【請求項５】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物が下記一般式（５）で表されるアスタキサンチンエステルカルボン酸化合物である請求項３記載の化合物。
一般式（５）
【化５】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
【請求項６】
カロチノイドエステル−フタルイミド化合物が下記一般式（６）で表されるアスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物である請求項４記載の化合物。
一般式（６）
【化６】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
【請求項７】
下記一般式（７）で表されるカロチノイドと、無水コハク酸とを縮合することを特徴とする、下記一般式（３）で表されるカロチノイドエステルカルボン酸化合物の製造方法。
一般式（７）
【化７】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
一般式（３）
【化８】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
【請求項８】
下記一般式（３）で表されるカロチノイドエステルカルボン酸化合物と、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドとを縮合することを特徴とする、下記一般式（４）で表されるカロチノイドエステル−フタルイミド化合物の製造方法。
一般式（３）
【化９】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
一般式（４）
【化１０】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
【請求項９】
下記一般式（８）で表されるアスタキサンチンと、無水コハク酸とを縮合することを特徴とする、下記一般式（５）で表されるアスタキサンチンエステルカルボン酸化合物の製造方法。
一般式（８）
【化１１】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
一般式（５）
【化１２】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
【請求項１０】
下記一般式（５）で表されるアスタキサンチンエステルカルボン酸化合物と、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドとを縮合することを特徴とする、下記一般式（６）で表されるアスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物の製造方法。
一般式（５）
【化１３】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
一般式（６）
【化１４】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
【請求項１１】
下記一般式（４）で表されるカロチノイドエステル−フタルイミド化合物と、コラーゲンペプチドとを縮合することを特徴とする、下記一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体の製造方法。
一般式（４）
【化１５】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
一般式（１）
【化１６】
式中、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【請求項１２】
下記一般式（６）で表されるアスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物と、コラーゲンペプチドとを縮合することを特徴とする、下記一般式（２）で表されるアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体の製造方法。
一般式（６）
【化１７】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
一般式（２）
【化１８】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【請求項１】
下記一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体。
一般式（１）
【化１】
式中、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【請求項２】
カロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体が下記一般式（２）で表されるアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体である請求項１記載の縮合体。
一般式（２）
【化２】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【請求項３】
下記一般式（３）で表されるカロチノイドエステルカルボン酸化合物。
一般式（３）
【化３】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
【請求項４】
下記一般式（４）で表されるカロチノイドエステル−フタルイミド化合物。
一般式（４）
【化４】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
【請求項５】
カロチノイドエステルカルボン酸化合物が下記一般式（５）で表されるアスタキサンチンエステルカルボン酸化合物である請求項３記載の化合物。
一般式（５）
【化５】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
【請求項６】
カロチノイドエステル−フタルイミド化合物が下記一般式（６）で表されるアスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物である請求項４記載の化合物。
一般式（６）
【化６】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
【請求項７】
下記一般式（７）で表されるカロチノイドと、無水コハク酸とを縮合することを特徴とする、下記一般式（３）で表されるカロチノイドエステルカルボン酸化合物の製造方法。
一般式（７）
【化７】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
一般式（３）
【化８】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
【請求項８】
下記一般式（３）で表されるカロチノイドエステルカルボン酸化合物と、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドとを縮合することを特徴とする、下記一般式（４）で表されるカロチノイドエステル−フタルイミド化合物の製造方法。
一般式（３）
【化９】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
一般式（４）
【化１０】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
【請求項９】
下記一般式（８）で表されるアスタキサンチンと、無水コハク酸とを縮合することを特徴とする、下記一般式（５）で表されるアスタキサンチンエステルカルボン酸化合物の製造方法。
一般式（８）
【化１１】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
一般式（５）
【化１２】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
【請求項１０】
下記一般式（５）で表されるアスタキサンチンエステルカルボン酸化合物と、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドとを縮合することを特徴とする、下記一般式（６）で表されるアスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物の製造方法。
一般式（５）
【化１３】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
一般式（６）
【化１４】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
【請求項１１】
下記一般式（４）で表されるカロチノイドエステル−フタルイミド化合物と、コラーゲンペプチドとを縮合することを特徴とする、下記一般式（１）で表されるカロチノイド−コラーゲンペプチド縮合体の製造方法。
一般式（４）
【化１５】
式中、Calはカロチノイド残基を表す。
一般式（１）
【化１６】
式中、Calはカロチノイド残基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【請求項１２】
下記一般式（６）で表されるアスタキサンチンエステル−フタルイミド化合物と、コラーゲンペプチドとを縮合することを特徴とする、下記一般式（２）で表されるアスタキサンチン−コラーゲンペプチド縮合体の製造方法。
一般式（６）
【化１７】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表す。
一般式（２）
【化１８】
式中、Ｒ1は、水素原子、アシル基、燐酸エステル基またはグルコシド基を表し、Colはコラーゲンペプチド鎖を表す。
【公開番号】特開２００７−２３８５６４（Ｐ２００７−２３８５６４Ａ）
【公開日】平成１９年９月２０日（２００７．９．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−６６５６４（Ｐ２００６−６６５６４）
【出願日】平成１８年３月１０日（２００６．３．１０）
【出願人】（３０６０３７３１１）富士フイルム株式会社 (25,513)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年９月２０日（２００７．９．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年３月１０日（２００６．３．１０）
【出願人】（３０６０３７３１１）富士フイルム株式会社 (25,513)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]