キラル化合物の調製方法
【課題】キラル化合物を作製するための酵素化学的な２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）法を提供すること。
【解決手段】アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アセトアルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法であって、前記アルドラーゼが２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）アルドラーゼである方法。
【解決手段】アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アセトアルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法であって、前記アルドラーゼが２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）アルドラーゼである方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キラル化合物を作製するための酵素化学的な２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
酵素化学的方法におけるＤＥＲＡ（デオキシリボースアルドラーゼ）ファミリーのアルドラーゼの使用は、記載されている。米国特許第５７９５７４９号、ＷＯ０３／００６６５６、ＷＯ２００４／０２７０７５、ＷＯ２００５／０１２２４６；Ｇｉｊｓｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｍ．ら、ＪＡＣＳ、１９９４年、第１１６巻、８４２２〜８４２３ページ；Ｇｉｊｓｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｍ．ら．、ＪＡＣＳ、１９９５年、第１１７巻、７５８５〜７５９１ページ；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｗ．Ａ．ら．、ＰＮＡＳ、２００４年、第１０１巻、５７８８〜５７９３ページ、米国特許第６９６４８６３号、およびＢｉｏｔｅｃｈｏｎｏｌ Ｊ、第１０１巻、５３７〜５４８ページ（２００６年）を参照されたい。しかし、これらの方法には、全収率が不十分であるばかりでなく、生成物の混合物をもたらすものもあった。さらに、これらの方法は、特定の基質に限定されていた。
【特許文献１】米国特許第５７９５７４９号
【特許文献２】ＷＯ０３／００６６５６
【特許文献３】ＷＯ２００４／０２７０７５
【特許文献４】ＷＯ２００５／０１２２４６
【非特許文献１】Ｇｉｊｓｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｍ．ら、ＪＡＣＳ、１９９４年、第１１６巻、８４２２〜８４２３ページ
【非特許文献２】Ｇｉｊｓｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｍ．ら．、ＪＡＣＳ、１９９５年、第１１７巻、７５８５〜７５９１ページ
【非特許文献３】Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｗ．Ａ．ら．、ＰＮＡＳ、２００４年、第１０１巻、５７８８〜５７９３ページ
【特許文献５】米国特許第６９６４８６３号
【非特許文献４】Ｂｉｏｔｅｃｈｏｎｏｌ Ｊ、第１０１巻、５３７〜５４８ページ（２００６年）
【非特許文献５】Ｗｉｌｌｉａｍ Ａ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら．、ＰＮＡＳ（２００４年）、第１０１巻第１６号、５７８８〜５７９３ページ
【非特許文献６】Ｈａｒｕｈｉｋｏ Ｓａｋｕｒａｂａら．、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３年）、第２７８巻第１２号、１０７９９〜１０８０６ページ
【非特許文献７】ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、米国ニューヨーク、２００１年
【非特許文献８】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、第２２７９巻（１９９２年）
【特許文献６】米国特許第５１５５２５１号
【非特許文献９】Ｂａｕｍａｎ Ｋ．Ｌ．、Ｂｕｔｌｅｒ Ｄ．Ｅ．、Ｄｅｅｒｉｎｇ Ｃ．Ｆ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ１９９２年、第３３巻：２２８３〜２２８４ページ
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
したがって、当技術分野では、代替基質にとって有効かつ効率的な酵素化学的方法が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アセトアルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法に関する。
【０００５】
本発明はまた、前記アルドラーゼが２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）アルドラーゼである方法に関する。
【０００６】
本発明はまた、前記アルドラーゼが、
配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４、
配列番号３のヌクレオチド配列または配列番号１８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０６、
配列番号８のヌクレオチド配列または配列番号２３のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０１、
配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２、
配列番号１０のヌクレオチド配列または配列番号２５のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０３、
配列番号１１のヌクレオチド配列または配列番号２６のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０４、
配列番号１２のヌクレオチド配列または配列番号２７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０５、
配列番号１３のヌクレオチド配列または配列番号２８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０６、
配列番号１４のヌクレオチド配列または配列番号２９のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０７、
配列番号１５のヌクレオチド配列または配列番号３０のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０８、
またはアミノ酸配列同一性がその少なくとも約２０％であるアルドラーゼである方法に関する。
【０００７】
より詳細には、本発明はまた、前記アルドラーゼが、配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４、配列番号３のヌクレオチド配列または配列番号１８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０６、または配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２である方法に関する。
【０００８】
より詳細には、本発明はまた、前記アルドラーゼが、配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４である方法に関する。
【０００９】
より詳細には、本発明はまた、前記アルドラーゼが、配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２である方法に関する。
【００１０】
本発明はまた、前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質が３−フタルイミドプロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００１１】
本発明はまた、前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質がＮ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒドまたは３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００１２】
本発明はまた、前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質がＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００１３】
本発明は、
（ａ）アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応するラクトンを得るステップと、
（ｃ）そのように形成したラクトンを、酸性の触媒作用の下でイソプロピルアルコールおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと、
（ｄ）そのように形成したイソプロピルアセトニドエステルを塩基で処理して、対応するアミノアセトニドイソプロピルエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００１４】
本発明は、
（ａ）アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応するラクトンを得るステップと、
（ｃ）そのように形成したラクトンをシクロペンタノンと反応させて、対応するシクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステルを得るステップと、
（ｄ）そのように形成したシクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステルを塩基で処理して、対応するアミノシクロペンチリデンイソプロピルエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００１５】
本発明は、
（ａ）アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを、触媒的脱水素条件下で脱水素して、対応するヘプタン酸を得るステップと、
（ｃ）そのように形成した前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｄ）そのように形成した塩を、酸性の触媒作用の下でオルトギ酸トリイソプロピルおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと、
（ｅ）そのように形成したイソプロピルアセトニドエステルを塩基で処理して、対応するアミノジシクロヘキシルアミンイソプロピルエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００１６】
本発明は、
（ａ）アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｃ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｄ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと、
（ｅ）そのように形成したイソプロピルアセトニドエステルを塩基で処理して、対応するアミノアセトニドイソプロピルエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００１７】
本発明は、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドをアミノアルデヒド基質またはＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法に関する。
【００１８】
本発明はまた、前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドが、Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−アミノプロピオンアルデヒド、アミノアセトアルデヒド、Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、またはＮ−Ｆｍｏｃ−アミノアセトアルデヒドである方法に関する。
【００１９】
より詳細には、本発明はまた、前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００２０】
より詳細には、本発明はまた、前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒドまたはＮ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００２１】
より詳細には、本発明はまた、前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００２２】
本発明はまた、前記アルドラーゼがＤＥＲＡ１０２である方法に関する。
【００２３】
本発明は、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドをアミノアルデヒド基質またはＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成し、そのように形成したラクトールを酸化させて、対応するラクトンを得るステップを含む方法に関する。
【００２４】
本発明は、
（ａ）ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドをアミノアルデヒド基質またはＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを触媒的脱水素条件下で脱水素して、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｃ）そのように形成した前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｄ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００２５】
本発明は、
（ａ）ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドをアミノアルデヒド基質またはＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｃ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｄ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００２６】
本発明は、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、一般式（Ｉ）のアミノアルデヒド基質化合物
【００２７】
【化１】
［式中、
ｎ＝１、２、３、または４であり、
Ｒ’は、水素またはＮ保護基であり、
Ｒ”は、水素またはＮ保護基であり、またはＲ’およびＲ”は、これらが結合している窒素と一緒になって、５員または６員の複素環部分を形成している］と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法に関する。
【００２８】
本発明はまた、化合物２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオンに関する。
【００２９】
より詳細には、本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００３０】
【化２】
【００３１】
より詳細には、本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００３２】
【化３】
【００３３】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００３４】
【化４】
【００３５】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００３６】
【化５】
【００３７】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００３８】
【化６】
【００３９】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００４０】
【化７】
【００４１】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００４２】
【化８】
【００４３】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００４４】
【化９】
【００４５】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００４６】
【化１０】
【００４７】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００４８】
【化１１】
【００４９】
本発明は、粉末Ｘ線回折ピークが約９．０、１２．７、２０．２、２２．６、および２５．２度２θにあることを特徴とする４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドの結晶形態に関する。
【００５０】
本発明は、粉末Ｘ線回折ピークが約６．３、１２．７、１６．８、２１．１、および２５．５度２θにあることを特徴とする（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの結晶形態に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５１】
定義
別段の指摘がない限り、以下の用語は、以下のとおりに定義される。
冠詞「ａ」または「ａｎ」は、本明細書では、それが指す対象の単複両方の形を指す。
【００５２】
用語「アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件」とは、本明細書では、本明細書で記載するようなアルドラーゼによって触媒され得る、当技術分野で知られている任意のアルドール縮合条件を指す。
【００５３】
本発明で使用するアルデヒドは、本明細書で記載するようなアルドラーゼの存在下、本明細書で記載するような基質とのアルドール縮合を経る任意のアルデヒドでよい。適切なアルデヒドの例は、その限りでないが、アセトアルデヒドである。
【００５４】
本発明で使用する基質は、任意のアミノアルデヒドまたはＮ保護されたアミノアルデヒドでよい。そのようなアミノアルデヒドまたはＮ保護されたアミノアルデヒドは、それぞれ本明細書に記載の、アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下でアルデヒドと反応する。
【００５５】
アミノアルデヒドに適するＮ保護基には、フタルイミド、Ｎ−ホルミル、スクシンイミド、ジ−ブトキシカルボニル（ジ−Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）、ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル、およびジベンジルが含まれるがこの限りでない。
【００５６】
適切なアミノアルデヒド基質の例には、その限りでないが、以下のものが含まれる。
【００５７】
【化１２】
【００５８】
本発明の一実施形態では、アミノアルデヒド基質は、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒドまたはＮ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、３−アミノ−プロピオンアルデヒドである。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、アミノ−アセトアルデヒドである。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒド（Ａｌｄｒｉｃｈから市販されている）である。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒドである。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである。
【００５９】
Ｎ−Ｆｍｏｃ−アミノアルデヒドは両方とも、対応するＮ−Ｆｍｏｃアミノアルコールの標準のＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化によって得た。
【００６０】
Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒドは、３−アミノ−１−プロパノールから、２ステップの手順によって得た。すなわち、３−アミノ−１−プロパノールを酢酸メチルによってＮ−アセチル化した後、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化を経て、妥当なＥＳＩ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋１１６．２５および［Ｍ＋Ｎａ］＋１３８．２０を有する所望の生成物を得た。
【００６１】
本発明で使用するアルドラーゼは、それぞれ本明細書に記載のアミノアルデヒド基質、Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質、またはピロールアルデヒド基質に対してアルドラーゼ活性を有するどんな酵素でもよい。本発明の一実施形態では、アルドラーゼは、２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）である。適切なＤＥＲＡアルドラーゼの例には、その限りでないが、以下のものが含まれる。
ＤＥＲＡ０３（大腸菌）（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、米国ミズーリ州セントルイスから市販されている）、
ＤＥＲＡ０４（Ｗｉｌｌｉａｍ Ａ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ（２００４年）、第１０１巻第１６号、５７８８〜５７９３ページまたはその改変型）、
ＤＥＲＡ０６（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿２９４９２９またはその改変型）、
ＤＥＲＡ０８（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿４６５５１９またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿４３９２７３）、
ＤＥＲＡ１２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿２２９３５９）、
ＤＥＲＡ１５（Ｈａｒｕｈｉｋｏ Ｓａｋｕｒａｂａら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３年）、第２７８巻第１２号、１０７９９〜１０８０６ページ）、
ＤＥＲＡ１０１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿９０６０６８．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿８１３９７６．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０３（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿０１１３００４４．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０４（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＹＰ＿９２４７１５．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０５（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＹＰ＿１４８３５２．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０６（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿４７１４３７．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０７（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿２４２２１８．１またはその改変型）、および
ＤＥＲＡ１０８（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＺＰ＿００８７５０６９．１またはその改変型）。
【００６２】
本発明の一実施形態では、アルドラーゼは、本明細書に記載のＤＥＲＡアルドラーゼに対するアミノ酸配列同一性がその少なくとも約２０％、好ましくはその少なくとも７０％であるアルドラーゼである。本発明の一実施形態では、ＤＥＲＡアルドラーゼは、ＤＥＲＡ０４、ＤＥＲＡ０６、またはＤＥＲＡ１０２である。本発明の一実施形態では、ＤＥＲＡアルドラーゼはＤＥＲＡ１０２である。
【００６３】
本発明によれば、ＤＥＲＡ０３、ＤＥＲＡ０４、ＤＥＲＡ０６、ＤＥＲＡ０８、ＤＥＲＡ１１、ＤＥＲＡ１２、ＤＥＲＡ１５、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、およびＤＥＲＡ１０８は、実施例１〜３０に記載のこれらのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列によって確認される。
【００６４】
より詳細には、ＤＥＲＡ０３は、配列番号１のヌクレオチド配列および配列番号１６のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００６５】
ＤＥＲＡ０４は、配列番号２のヌクレオチド配列および配列番号１７のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００６６】
ＤＥＲＡ０６は、配列番号３のヌクレオチド配列および配列番号１８のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００６７】
ＤＥＲＡ０８は、配列番号４のヌクレオチド配列および配列番号１９のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００６８】
ＤＥＲＡ１１は、配列番号５のヌクレオチド配列および配列番号２０のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００６９】
ＤＥＲＡ１２は、配列番号６のヌクレオチド配列および配列番号２１のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７０】
ＤＥＲＡ１５は、配列番号７のヌクレオチド配列および配列番号２２のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７１】
ＤＥＲＡ１０１は、配列番号８のヌクレオチド配列および配列番号２３のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７２】
ＤＥＲＡ１０２は、配列番号９のヌクレオチド配列および配列番号２４のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７３】
ＤＥＲＡ１０３は、配列番号１０のヌクレオチド配列および配列番号２５のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７４】
ＤＥＲＡ１０４は、配列番号１１のヌクレオチド配列および配列番号２６のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７５】
ＤＥＲＡ１０５は、配列番号１２のヌクレオチド配列および配列番号２７のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７６】
ＤＥＲＡ１０６は、配列番号１３のヌクレオチド配列および配列番号２８のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７７】
ＤＥＲＡ１０７は、配列番号１４のヌクレオチド配列および配列番号２９のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７８】
ＤＥＲＡ１０８は、配列番号１５のヌクレオチド配列および配列番号３０のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７９】
本明細書に記載のＤＥＲＡアルドラーゼは、その限りでないが、組換え型大腸菌中でタンパク質を発現させるための標準のプロトコル（ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、米国ニューヨーク、２００１年）を含めて、当技術分野で知られているどんな手段によって調製してもよい。当業者には理解されるとおり、既知のＤＥＲＡアルドラーゼの改変型が必要となり、またはクローニング条件に応じて生じる場合もあるので、それらを本発明に包含する。
【００８０】
以下のスキームは、本発明を例示するものである。
【００８１】
調製Ａ
【００８２】
【化１３】
調製Ａでは、フタルイミドをベンジルトリメチルアンモニウム水酸化物（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｂ）の存在下でアクロレインと反応させることにより、３−フタルイミドプロピオンアルデヒドを調製する。反応液を約５３℃〜約６７．５℃の間の温度、好ましくは約６０℃で約３０分〜約３時間の間の期間、好ましくは約９０分間攪拌する。
【００８３】
調製Ｂ
【００８４】
【化１４】
調製Ｂでは、ギ酸エチルを１−アミノ−３，３−ジメトキシプロパンと反応させ、そのように形成したアミドを酸で処理することにより、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒドを調製する。
【００８５】
調製Ｃ
【００８６】
【化１５】
調製Ｃでは、１−アミノ−３，３−ジメトキシプロパンをＢＯＣ無水物と反応させ、そのように形成したアミドを酸で処理することにより、Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドを調製する。
【００８７】
調製Ｄ
【００８８】
【化１６】
調製Ｄでは、１−アミノ−３，３−ジメトキシプロパンを４−ジ（メチルアミノ）ピリジンの存在下でＢＯＣ無水物と反応させ、そのように形成したアミドを酸で処理することにより、Ｎ−ジ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドを調製する。
【００８９】
調製Ｅ
３−スクシンイミドプロピオンアルデヒド
触媒としてのナトリウムエトキシド、およびエタノールなどの極性プロトン性溶媒の存在下、スクシンイミドの溶液にアクロレインを加える。反応混合物を、約１０℃〜約４０℃の間の温度、好ましくは約２０〜３０℃で約２０時間〜約６０時間の期間、好ましくは約４８時間攪拌する。
【００９０】
【化１７】
【００９１】
スキーム１は一般に、本発明に包含される方法を記載している。スキーム１に記載のとおり、ＤＥＲＡアルドラーゼは、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）や水などの他の適切な溶媒の存在下で、３−フタルイミドプロピオンアルデヒドと２ｍｏｌのアセトアルデヒドとの２連続のアルドール縮合反応を触媒して、保護された所望のアミノ−ラクトール（Ａ）をもたらす。適切なＤＥＲＡアルドラーゼには、ＤＥＲＡ０４、ＤＥＲＡ０６、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、およびＤＥＲＡ１０８、好ましくはＤＥＲＡ０４およびＤＥＲＡ１０２が含まれるがこの限りでない。３−フタルイミドプロピオンアルデヒドとＤＥＲＡアルドラーゼの混合物に、アセトアルデヒドを約７時間〜約１２時間の期間、好ましくは約１０時間かけて加える。そのように形成した混合物を、約１５℃〜約３０℃の間の温度、好ましくは約２２℃で約２０時間〜約６０時間の間の期間、好ましくは約４８時間さらに攪拌する。
【００９２】
アミノ−ラクトール（Ａ）は、触媒的（たとえば白金担持炭素またはパラジウム担持炭素）脱水素を受けて、カルボン酸（Ｃ）を形成することができ、次いでラクトン化を受けて、（Ｂ）を形成することができる。
【００９３】
（Ａ）を（Ｃ）に転換する、当技術分野で知られているどんな触媒的脱水素手段も本発明に包含される。適切な触媒の例には、Ｐｔ／Ｃ、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｔ／Ｂｉ／Ｃ、Ｐｄ／Ｂｉ／Ｃ、および他の任意の脱水素触媒が含まれるがこの限りでない。本発明の一実施形態では、触媒的脱水素は、空気または酸素を末端酸化剤として使用して、ｐＨ約７〜ｐＨ約１０で実施する。
【００９４】
酸触媒、たとえばその限りでないが塩酸、硫酸、メタンスルホン酸（ＭＳＡ）、ｐ−トルエンスルホン酸（ＴＳＡ）、および当技術分野で知られている他の任意のラクトン化酸の使用を含むがこの限りでない、カルボン酸（Ｃ）をラクトン（Ｂ）に転換する、当技術分野で知られているどんなラクトン化手段も本発明に包含される。より詳細には、７−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインド−２−イル）−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸（Ｃ）を、酢酸エチルの存在下、無水塩酸で処理することにより、対応する２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ｂ）に転換する。反応液を室温で約１時間〜約４時間の間の期間、好ましくは約２〜３時間攪拌する。
【００９５】
別法として、ラクトール（Ａ）のラクトン（Ｂ）またはカルボン酸（Ｃ）への酸化は、所望の変換を実現する当技術分野で知られている任意の酸化手段を使用して実施することができる。より詳細には、２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ａ）を、亜塩素酸ナトリウムなどの酸化剤の存在下で酸化させて、対応する２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ｂ）に転換する。反応液を約１０℃〜約３０℃の温度、好ましくは約２３℃で約２時間〜約６時間の間の期間、好ましくは約４時間攪拌する。２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ａ）は、亜塩素酸ナトリウムなどの酸化剤、リン酸緩衝液、ジメチルスルホキシドなどの極性の非プロトン性溶媒や、イソプロパノールなどのアルコールの存在下で酸化させることによって、対応する７−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインド−２−イル）−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸（Ｃ）に転換することもできる。反応液を、約２時間〜約６時間の間の期間、好ましくは約４時間、室温かつ約５〜約６の間のｐＨに保つ。
【００９６】
７−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインド−２−イル）−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸（Ｃ）を、酢酸エチルの存在下、ジシクロヘキシルアミンで処理して、対応するジシクロヘキシルアミン（ＤＣＡ）塩（Ｄ）に転換する。次いで、ＤＣＡ塩（Ｄ）を、アセトンおよびメタンスルホン酸の存在下でＤＣＭ、オルトギ酸トリイソプロピルと反応させることにより、フタルイミドアセトニドイソプロピルエステル（Ｅ）に転換する。
【００９７】
フタルイミドアセトニドイソプロピルエステル（Ｅ）は、アセトンおよびメタンスルホン酸（ＭＳＡ）の存在下、２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ｂ）をイソプロピルアルコールと反応させて調製することもできる。反応混合物を室温かつ約１〜約２の間、好ましくは約１．５のｐＨで約２０時間〜約２８時間の間の期間、好ましくは約２４時間攪拌する。
【００９８】
フタルイミドアセトニドイソプロピルエステル（Ｅ）を、メタノールなどの極性のプロトン性溶媒の存在下、一級アミン、すなわちアルキルアミン、エチレンジアミンなどのジアミン、ヒドロキシルアミンといった塩基で処理することによって脱保護して、対応するアミノアセトニドイソプロピルエステル（Ｆ）を得る。反応混合物を室温で約３０分〜約４時間の間の期間、好ましくは約２時間攪拌した。
【００９９】
アミノアセトニドイソプロピルエステル（Ｆ）は、式ＩＩの４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド
【０１００】
【化１８】
とさらに反応させると、以下の式ＩＩＩの対応するピロール環含有アセトニドイソプロピルエステルが得られる。
【０１０１】
【化１９】
【０１０２】
本発明によれば、当業者には理解されるとおり、酵素的なステップの立体選択性は、ラセミ標準物質の化学的な調製および関連したキラルクロマトグラフィー法の開発によって確認することができる。
【０１０３】
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのＰＸＲＤパターンを図１に示す。
【０１０４】
（相対強度１３％より大きい）主要なピークを表１に示す。４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドは、９．０、１２．７、２０．２、２２．６、および２５．２度２θ＋０．１度で特徴的な回折ピークを示す。ＤＳＣ温度記録を図２に示す。４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドは、２１３℃±２℃で鋭い吸熱ピークを示す。ＦＴ−ＩＲスペクトルを図３で示す。ＦＴ−ＩＲピークテーブルを表２に示す。４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドは、６９６、１４９２、１３２７、８４３、１１５１ｃｍ−１で（この順に）特徴的なピークを示す。ＦＴ−ラマンスペクトルを図４で示す。ＦＴ−ラマンピークテーブルを表３に示す。４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドは、１００４、１１５、８７、８７７、１６０１ｃｍ−１で特徴的なピークを示す。
【０１０５】
【表１】
【０１０６】
【表２】
【０１０７】
【表３】
【０１０８】
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＰＸＲＤパターンを図５に示す。主要なピーク（相対強度１２％より大きい）を表４に示す。（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドは、６．３、１２．７、１６．８、２１．１、および２５．５度２θ＋０．１度で特徴的な回折ピークを示す。ＤＳＣ温度記録を図６に示す。（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドは、１６６℃±２℃で鋭い吸熱ピークを示す。ＦＴ−ＩＲスペクトルを図７で示す。ＦＴ−ＩＲピークテーブルを表５に示す。（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドは、８５１、１２２０、１０４７、７５７、１１５３ｃｍ−１で（この順に）特徴的なピークを示す。ＦＴ−ラマンスペクトルを図８で示す。ＦＴ−ラマンピークテーブルを表６に示す。（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドは、１５３１、９９７、１１４、９９、１６０５ｃｍ−１で特徴的なピークを示す。
【０１０９】
【表４】
【０１１０】
【表５】
【０１１１】
【表６】
【０１１２】
【化２０】
【０１１３】
スキーム２に記載のとおり、硫酸マグネシウムおよびメタンスルホン酸（ＭＳＡ）の存在下、２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ｂ）をシクロペンタノンおよびイソプロピルアルコールと反応させて、シクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステル（Ｇ）を調製することができる。反応混合物を、室温かつ約１〜約２の間、好ましくは約１．５のｐＨで約２０時間〜約２８時間の間の期間、好ましくは約２４時間攪拌する。
【０１１４】
シクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステル（Ｇ）を、メタノールなどの極性のプロトン性溶媒の存在下、一級アミン、すなわちアルキルアミン、エチレンジアミンなどのジアミン、ヒドロキシアミンなどの塩基で処理することにより脱保護して、対応するアミノシクロペンチリデンイソプロピルエステル（Ｈ）を得る。反応混合物を、室温で約３０分〜約４時間の間の期間、好ましくは約２時間攪拌する。
【０１１５】
そのように形成したアミノシクロペンチリデンイソプロピルエステル（Ｈ）は、式ＩＩの４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド
【０１１６】
【化２１】
とさらに反応させて、以下の対応する式ＩＶのピロール環含有シクロペンチリデンイソプロピルエステル
【０１１７】
【化２２】
を得ることができる。
【０１１８】
【化２３】
【０１１９】
スキーム３は一般に、本発明に包含される方法を記載している。スキーム３に記載のとおり、ＤＥＲＡアルドラーゼは、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）と水などの適切な共溶媒の存在下で、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、Ｎ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、アミノアセトアルデヒド、Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、またはＮ−Ｆｍｏｃ−アミノアセトアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノプロピオンアルデヒド基質（すなわちＲ１＝保護基）と、２ｍｏｌのアセトアルデヒドとの２連続のアルドール縮合反応を触媒して、所望の保護されたアミノ−ラクトール（Ｉ）をもたらす。適切なＤＥＲＡアルドラーゼには、ＤＥＲＡ０４、ＤＥＲＡ０６、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、およびＤＥＲＡ１０８、好ましくはＤＥＲＡ０４およびＤＥＲＡ１０２が含まれるがこの限りでない。Ｎ保護されたアミノアルデヒドとＤＥＲＡアルドラーゼの混合物に、約７時間〜約１２時間の間の期間、好ましくは約１０時間かけてアセトアルデヒドを加える。そのように形成した混合物を、約１５℃〜約３０℃の間の温度、好ましくは約２２℃で約２０時間〜約６０時間の間の期間、好ましくは約４８時間さらに攪拌する。
【０１２０】
アミノ−ラクトール（Ｉ）は、触媒的（たとえばＰｔ／Ｃ、Ｐｄ／Ｃ）脱水素を受けて、カルボン酸（Ｋ）を形成することができ、次いでラクトン化を受けて、（Ｊ）を形成することができる。
【０１２１】
（Ｉ）を（Ｋ）に転換する、当技術分野で知られているどんな触媒的脱水素手段も本発明に包含される。適切な触媒の例には、Ｐｔ／Ｃ、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｔ／Ｂｉ／Ｃ、Ｐｄ／Ｂｉ／Ｃ、および他の任意の脱水素触媒が含まれるがこの限りでない。本発明の一実施形態では、触媒的脱水素は、空気または酸素を末端酸化剤として使用し、ｐＨ約７〜ｐＨ約１０で実施する。
【０１２２】
その限りでないが塩酸、硫酸、メタンスルホン酸（ＭＳＡ）、ｐ−トルエンスルホン酸（ＴＳＡ）、当技術分野で知られている他の任意のラクトン化酸などの酸触媒の使用を含むがこの限りでない、カルボン酸（Ｋ）をラクトン（Ｊ）に転換する、当技術分野で知られているどんなラクトン化手段も本発明に包含される。
【０１２３】
別法として、ラクトール（Ｉ）のラクトン（Ｊ）またはカルボン酸（Ｋ）への酸化は、所望の変換を実現する、当技術分野で知られている任意の酸化手段を使用して実施することができる。
【０１２４】
【化２４】
【０１２５】
スキーム４に記載のとおり、ＤＥＲＡアルドラーゼは、アミノアルデヒドまたはＮ保護されたアミノアルデヒドと２ｍｏｌのアセトアルデヒドとのアルドール縮合反応を触媒して、所望のアミノ−ラクトール（Ｍ）をもたらす。
【０１２６】
以下の非限定的な実施例は、本発明を例示するものである。
【０１２７】
（実施例１）
２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン
【０１２８】
【化２５】
３−フタルイミド−プロピオンアルデヒド（１０．０グラム、４９．２ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）に懸濁させた懸濁液に、ＤＥＲＡ０４ライセート（５２．０ｍＬ、１０４００単位、リン酸緩衝液ｐＨ７．０、０．０１Ｍ中の１３．０グラムの湿ったＤＥＲＡ０４細胞から調製したもの）およびリン酸緩衝液（１０２ｍＬ、ｐＨ７．０、０．０１Ｍ）からなる溶液を２２℃で激しく攪拌しながら加えた。水（１０ｍＬ）に溶解させたアセトアルデヒド（４．８グラム、１０８．２ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を、プログラミングされたポンプによって、反応混合物に１０時間継続的に加えた。反応混合物のｐＨは、１．０Ｎ水酸化ナトリウムでの滴定によって７．０に保った。反応混合物をさらに２２℃で１０時間攪拌し、転換を高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によってモニターした。２０時間後、高圧液体クロマトグラフィー分析によると、開始材料の約９５％が消費され、５０〜５５％の所望のラクトールが生成したが、得られる反応混合物をその後の酸化ステップでそのまま使用した。ラクトールのＬＣ−ＥＳＩＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋２９２．３。
【０１２９】
（実施例２）
２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン
【０１３０】
【化２６】
粗製ラクトールの懸濁液（２００ｍＬ、実施例１に従って調製したもの）に、ジメチルスルホキシド（１０ｍＬ）を攪拌しながら加えた。次いで、亜塩素酸ナトリウム（１．５当量、８．３グラム、Ａｌｄｒｉｃｈ）の水（１８ｍＬ）溶液を３０分間かけて滴下した。温度は、２０〜２５℃の範囲で調節した。反応混合物のｐＨは、４．０より高く保つべきである。４時間後、アセトン（２００ｍＬ）を加えた。反応混合物を０〜５℃で１時間攪拌し、次いでｂｕｃｈｅｌ漏斗中にてセライトパッド（１０グラム）で濾過した。濾過ケーキをアセトン（５０ｍＬ２回）で洗浄した。合わせたアセトン濾液を真空中で濃縮して、アセトンおよびｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）を除去した。残りの水溶液をｐＨ約４．０に調整し、酢酸エチル（１００ｍＬ３回）で抽出した。酢酸エチル溶液を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で約１００ｍＬに濃縮し、これを硫酸マグネシウム（２グラム）存在下、無水塩酸（０．６ｍＬ、ジオキサン中４Ｍ）で処理し、室温で４時間攪拌した。次いで、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム／ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。酢酸エチルの溶液を５０ｍＬに濃縮し、次いでこれに５０ｍＬのヘプタンを加えた。形成した固体を濾過し、ヘプタン（２０ｍＬ）で洗浄し、オーブンで乾燥させて、ラクトンを白色固体として得た（３ステップで４０％〜４５％、化学純度９５％、ｅｅ＞９９％、ｄｅ＞８６％）。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ３１２．０。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．８２（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｍ，２Ｈ）、４．７８（ｍ，１Ｈ）、４．４１（ｍ，１Ｈ）、３．８４（ｍ，２Ｈ）、２．６５（ｍ，２Ｈ）、１．９４〜２．１４（ｍ，３Ｈ）、１．８１（ｍ，１Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、１００ＭＨｚ）δ１７０．１５、１６８．６１（２）、１３４．３２（２）、１３２．２０（２）、１２３．５８（２）、７３．８２（２）、６２．８５、３８．６３、３５．７０、３４．４７、３４．４０。
【０１３１】
（実施例３）
２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン
【０１３２】
【化２７】
ＤＥＲＡ１０２を含有する大腸菌細胞の懸濁液（４グラムの湿った細胞を１９０ｍＬのリン酸緩衝液、ｐＨ７．０、０．０１Ｍに懸濁させたもの）に、プログラミングされたポンプによって、ジメチルスルホキシド（１５ｍＬ）中の３−フタルイミド−プロピオンアルデヒド（２．０グラム、９．８ｍｍｏｌ）およびアセトアルデヒド（０．９６グラム、２１．８ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）の混合物を１０時間かけて加えた。反応混合物をさらに２２℃で１４時間攪拌した。反応の進行は、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によってモニターした。２４時間後、反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ２回）で抽出した。遠心分離によって２層を分離した後、有機層を乾燥させ、蒸発にかけて、粗製のラクトール（１．６グラム、４５〜５０％）を固体として得、これをそのまま次の酸化ステップへと進めた。ラクトールのＬＣ−ＥＳＩＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋２９２．３。
【０１３３】
（実施例４）
７−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインド−２−イル）−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸
【０１３４】
【化２８】
イソプロパノール（４．８ｍＬ）およびジメチルスルホキシド（１．０ｍＬ）中の粗製のラクトール（１．６グラム、実施例３に従って調製したもの）と２６ｍＬのリン酸緩衝液（ｐＨ６．０、０．０１Ｍ）の混合物に、亜塩素酸ナトリウム（０．９グラム、Ａｌｄｒｉｃｈ）の水（２ｍＬ）溶液を室温で加えた。反応混合物のｐＨは、５．０〜６．０の間に保った。４時間後、反応混合物を１Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に中和し、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機層を除去した後、水層を１Ｎ塩酸でｐＨ４．０に酸性化し、酢酸エチル（３０ｍＬ３回）で抽出した。粗製の酸を含有する有機層を合わせてジシクロヘキシルアミン（１．５ｍＬ）で処理して、冷温（５〜１０℃）で対応するジシクロヘキシルアミン塩（１．５グラム、純度約９０％）を得た。ＬＣ−ＥＳＩＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋３３０．０。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．５９（ｍ，４Ｈ）、３．８８（ｍ，１Ｈ）、３．５８（ｍ，１Ｈ）、３．５６（ｍ，２Ｈ）、３．０３（ｍ，２Ｈ）、２．０７〜２．１９（ｍ，２Ｈ）、１．４０〜１．８２（ｍ，１４Ｈ）、０．８０〜１．２０（ｍ，１０Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、１００ＭＨｚ）δ１８０．２２、１７０．８２、１３４．６５（２）、１３１．５２（２）、１２３．３２（２）、６７．３６、６７．３１、５３．２３（２）、４４．８７、４３．１４、３４．８２、３４．５７、２９．１４（４）、２４．６４（２）、２４．０４（４）。
【０１３５】
（実施例５）
２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソオンドール−１，３−ジオン
【０１３６】
【化２９】
酢酸エチル（２０ｍＬ）中の粗製の酸（１．０グラム、実施例４に従って調製したもの）を、ジオキサン中無水のヒドロコール酸（４Ｍ、５０μＬ）で処理し、反応混合物を室温で２〜３時間攪拌した。反応混合物を水（ｐＨ７．０、５０ｍＬ２回）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発にかけて、所望のラクトンを白色固体として得た（０．９４グラム、化学純度約９４％、＞９９％ｅｅ、＞９３％ｄｅ）。
【０１３７】
（実施例６）
フタルイミドアセトニドイソプロピルエステル
【０１３８】
【化３０】
フタルイミドラクトン（５．０グラム、１７．３ｍｍｏｌ）をトルエン（１００ｍＬ）に懸濁させた。ＩＰＡ（６．６ｍＬ、８６．０ｍｍｏｌ、５当量）、アセトン（６．３ｍＬ、８６．０ｍｍｏｌ、５当量）、硫酸マグネシウム（５．０グラム）、およびメタンスルホン酸（０．４ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ、０．３５当量）を加えた。ｐＨ＝１．５（＜２必須）。混合物を室温で２４時間攪拌した。反応をトリエチルアミン（０．９ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）で失活させ、混合物を、トルエン（２０ｍＬ）で洗浄しながらグレード４の焼結漏斗で濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、無色の油状物、６．８８グラム、１００％を得た。
【０１３９】
（実施例７）
アミノアセトニドイソプロピルエステル
【０１４０】
【化３１】
フタルイミドアセトニドイソプロピルエステル（６．５５ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）をメタノール（６５ｍＬ、１０体積）に溶解させた。エチレンジアミン（１０．１グラム、１６８ｍｍｏｌ、１０当量）を滴下し、溶液を室温で攪拌した。
【０１４１】
１時間後のＨＰＬＣ分析では、開始材料がないことが示された。２時間後、反応混合物をロータバップによって真空中で濃縮した。残渣をトルエン（６５ｍＬ、１０体積）と水（６５ｍＬ、１０体積）とに分配し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。濁った水相をトルエン（６５ｍＬ）で再度抽出し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。トルエン抽出物を合わせて水（６５ｍＬ）で洗浄し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。トルエン抽出物を真空中で濃縮して、油生成物、２．８５グラム、収率６５．０％を得た。
【０１４２】
（実施例８）
ピロリルアセトニドイソプロピルエステル（ＡＩＥ）
【０１４３】
【化３２】
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド（４．６４グラム、１１．１ｍｍｏｌ、１．０３当量）を５０ｍＬ容一口丸底フラスコ（ｒｂｆ）に量り入れた。アミノアセトニドイソプロピルエステル（２．８０グラム、１０．８ｍｍｏｌ）の入ったｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ、１１ｍＬ）を加えた後、テトラヒドロフラン（４．２ｍＬ）をフラッシュした。トリエチルアミン（１．０９グラム、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、スラリーを５０℃に加熱した。ピバル酸（１．１０グラム、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を８８時間加熱還流した（６７〜６８℃）。冷却すると、揮発性物質を真空中で除去し、残渣をイソプロピルアルコール（ＩＰＡ、１７．５ｍＬ）に溶かし、８０℃に加熱した。透明な溶液を得るのにＩＰＡ（１０ｍＬ）がさらに必要となった。溶液を室温に冷ました。結晶化は起こらなかった。溶液を確実な生成物でシード添加すると、結晶化が起こった。スラリーを０℃に冷却し、３０分間維持した。生成物をグレード２の焼結漏斗上に集め、イソプロピルアルコール（すなわちＩＰＡ、１０ｍＬで３回）で洗浄した。生成物を４０〜５０℃の真空オーブンで１８時間乾燥させて、淡黄色の固体（４．１５グラム、収率６０．０％）を得た。
【０１４４】
（実施例９）
シクロペンチリデン−フタルイミド−イソプロピルエステル
【０１４５】
【化３３】
フタルイミドラクトン（５．０グラム、１７．３ｍｍｏｌ）をトルエン（５０ｍＬ）に懸濁させた。ＩＰＡ（６．６ｍＬ、８６．０ｍｍｏｌ、５当量）、シクロペンタノン（３．０グラム、３４．８ｍｍｏｌ、２当量）、硫酸マグネシウム（５．０グラム）、およびメタンスルホン酸（０．４ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ、０．３５当量）を加えた。ｐＨ１．５（ｐＨ２未満が必須）。混合物を室温で２４時間攪拌した。反応をトリエチルアミン（０．９ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）で失活させ、混合物を、トルエン（２０ｍＬ）で洗浄しながらグレード４の焼結漏斗で濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、無色の油、７．１８グラム、１００％を得た。
【０１４６】
（実施例１０）
アミノシクロペンチリデンイソプロピルエステル
【０１４７】
【化３４】
シクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステル（１０．０グラム、２４．１ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ、５体積）に溶解させた。エチレンジアミン（２．９グラム、４８．２ｍｍｏｌ、２当量）を滴下し、溶液を室温で攪拌した。
【０１４８】
１時間後の高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析では、開始材料がないことが示された。２時間後、反応混合物をロータバップによって真空中で濃縮した。残渣をトルエン（１００ｍＬ、１０体積）と水（１００ｍＬ、１０体積）とに分配し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。濁った水相をトルエン（６５ｍＬ）で再度抽出し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。トルエン抽出物を合わせて水（６５ｍＬ）で洗浄し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。トルエン抽出物を真空中で濃縮して、生成物を油状物、６．４５グラム、収率９４．０％として得た。エチレンジアミンは、その後のＰａａｌ−Ｋｎｏｒｒ反応で不純物（ビスピロール）の形成をもたらすので、粗生成物からエチレンジアミンが確実になくなるようにすることが重要である。
【０１４９】
（実施例１１）
ピロリルシクロペンチリデンイソプロピルエステル（ＣＩＥ）
【０１５０】
【化３５】
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド（４．６４グラム、１１．１ｍｍｏｌ、１．０３当量）を５０ｍＬ容一口丸底フラスコに量り入れた。アミノシクロペンチリデンイソプロピルエステル（３．０８グラム、１０．８ｍｍｏｌ）の入ったＭＴＢＥ（１１ｍＬ）を加えた後、テトラヒドロフラン（４．２ｍＬ）をフラッシュした。トリエチルアミン（１．０９グラム、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、スラリーを５０℃に加熱した。ピバル酸（１．１０グラム、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を８８時間加熱還流した（６７〜６８℃）。冷却すると、揮発性物質を真空中で除去し、残渣をイソプロピルアルコール（１７．５ｍＬ）に溶かし、８０℃に加熱した。透明な溶液を得るのに、イソプロピルアルコール（１０ｍＬ）がさらに必要となった。溶液を確実な生成物でシード添加すると、結晶化が起こった。スラリーを０℃に冷却し、３０分間維持した。生成物をグレード２の焼結漏斗に集め、イソプロピルアルコール（１０ｍＬ３回）で洗浄した。生成物を４０〜５０℃の真空オーブンで１８時間乾燥させて、淡黄色の固体（４．３１グラム、収率６０．０％）を得た。高圧液体クロマトグラフィーによる純度は、純度９９％粋より高かった。
【０１５１】
（実施例１２）
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド
毎回窒素で真空にする少なくとも４回の真空サイクルを使用して、反応容器を不活性にする（ｉｓ ｉｎｅｒｔｅｄ）。２５０リットルのテトラヒドロフランを、スプレーノズルを介して反応容器に装入する。スプレーボールノズルによって、確実に反応容器のすべての面積、特に容器の上部内側表面まで到達させ、反応容器の内側に攪拌装置も置く。テトラヒドロフラン洗浄液を排出し、廃棄物再利用のために収集する。
【０１５２】
反応容器が乾燥しているとき、４８０ｋｇの２−ベンジルイジン（ｂｅｎｚｙｌｉｄｉｎｅ）イソブチリルアセトアミド（ＢＩＢＥＡ）、６０ｋｇの臭化エチルヒドロキシエチルメチルチアゾリウム（ＭＴＢまたはエチルヒドロキシエチルＭＴＢ）、２００リットル、２１６ｋｇの４−フルオロベンズアルデヒド、および１２０ｋｇのトリエチルアミンを反応容器に装入し、攪拌しながら６０℃〜７０℃の間に加熱する。反応混合物を、温度を６５＋／−５℃に保ちながら１６〜２４時間熟成させる。次いで、内容物を５４〜６６分間かけて６０＋／−５℃に冷却する。反応混合物に６００リットルのイソプロパノールを装入し、混合物を約１００℃に加熱して、溶液を得る。
【０１５３】
温度を６０＋／−５℃に保ちながら、反応容器に、６００リットルの脱イオン水を３０分間かけて装入する。バッチを５４〜６６分間熟成させ、内容物を２〜４時間かけて１時間あたり１５／２０℃の速度で２５＋／−５℃の間に冷却する。バッチをこの温度で少なくとも１時間熟成させ、内容物を０＋／−５℃にさらに冷却し、少なくとも１時間熟成させる。
【０１５４】
バッチをフィルターで単離し、イソプロパノールで洗浄する。生成物を５０＋／−５℃の真空中で乾燥させて、含水量を０．５％未満にする。次いで内容物を約３０℃未満に冷却した後、排出する。
【０１５５】
（実施例１３）
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのＰＸＲＤ
自動サンプル交換装置、θ−θゴニオメーター、自動ビームダイバージェンススリット、およびＰＳＤ Ｖａｎｔｅｃ−１検出器を装着したＢｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ Ｌｔｄ．のＤ４粉末Ｘ線回折計を使用して、粉末Ｘ線回折パターンを測定した。サンプルを低バックグラウンドのシリコンウェーハ検体取付台に載せて、分析の準備をした。検体を回転させ、その間Ｘ線管を４０ｋＶ／３０ｍＡで作動させながら銅Ｋ−α１Ｘ線（波長＝１．５４０６オングストローム）を照射した。分析は、ゴニオメーターを２°〜５５°の２θ範囲にわたって０．０１８°のステップあたり０．２秒のカウントにセットした持続方式で動かして行った。Ｂｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ Ｌｔｄ．のＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、閾値１およびピーク幅０．３°２θでピークを選択した。データは２１℃で収集した。
【０１５６】
当業者にはわかるとおり、以下で示す表１内の様々なピークの相対強度は、たとえば、Ｘ線ビーム中での結晶の配向効果、分析する材料の純度、サンプルの結晶化度などのいくつかの要素のために様々となり得る。ピーク位置は、サンプル高さの差異のために変化する場合もあるが、実質的に示した表で規定したとおりのままとなる。
【０１５７】
（実施例１４）
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのＤＳＣ
オートサンプラーと４ホールの側壁脱気孔付きアルミニウム受皿およびふたを備えたＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｄｉａｍｏｎｄ ＤＳＣを、窒素流動気体を用いながら使用し、３．１１７ｍｇの４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドを１０℃から２５０℃に毎分２０℃で加熱した。
【０１５８】
（実施例１５）
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのＦＴ−ＩＲ
ＩＲスペクトルは、「ＤｕｒａｓａｍｐｌＩＲ」単反射ＡＴＲ付属品（セレン化亜鉛基板上にダイアモンド表面）およびｄ−ＴＧＳ ＫＢｒ検出器を備え付けたＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｎｅｘｕｓ ＦＴＩＲ分光計を使用して得た。スペクトルは、２ｃｍ−１の分解能で収集し、２５６の走査を合算したものとした。Ｈａｐｐ−Ｇｅｎｚｅｌアポダイゼーションを使用した。ＦＴ−ＩＲスペクトルは、単反射ＡＴＲを使用して記録したため、サンプル調製は必要でなかった。ＡＴＲ ＦＴ−ＩＲを使用すると、赤外線バンドの相対強度が、ＫＢｒディスクまたはヌジョールサンプル調製物を使用する透過ＦＴ−ＩＲスペクトルで見られるものとは異なってくる。ＡＴＲ ＦＴ−ＩＲの性質のために、低い方の波数のバンドは、高い方の波数のものより強烈である。実験誤差は、別段の注釈がない限り±２ｃｍ−１であった。ピークは、ＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｏｍｎｉｃ６．０ａソフトウェアを使用して抜き取った。強度の割当は、スペクトル中の主要なバンドに関するものであり、基線から計った絶対値に基づくものではない。
【０１５９】
（実施例１６）
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのＦＴ−ラマンＩＲ
ラマンスペクトルは、１０６４ｎｍのＮｄＹＡＧレーザーおよびＬＮ−ゲルマニウム検出器を備え付けた、ＲａｍＩＩモジュールのＦＴ−Ｒａｍａｎ分光計を具備するＢｒｕｋｅｒ Ｖｅｒｔｅｘ７０を使用して収集した。スペクトルはすべて、２ｃｍ−１の分解能およびＢｌａｃｋｍａｎ−Ｈａｒｒｉｓ ４−ｔｅｒｍアポダイゼーションを使用して記録した。スペクトルは、３００ｍＷのレーザー出力を使用して収集し、４０９６の走査を合算したものとした。サンプルをガラスバイアルに入れ、レーザー照射にさらした。データは、ラマンシフト（ｃｍ−１）に対する強度として示し、基準ランプからの白色光スペクトルを使用して機器の反応および振動数依存的な散乱について補正する。Ｂｒｕｋｅｒ Ｒａｍａｎ Ｃｏｒｒｅｃｔ機能を使用して補正を行った（Ｂｒｕｋｅｒ ソフトウェア−ＯＰＵＳ６．０）。実験誤差は、別段の注釈がない限り±２ｃｍ−１であった。ピークは、ＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｏｍｎｉｃ６．０ａソフトウェアを使用して抜き取った。強度の割当は、スペクトル中の主要なバンドに関するものであり、基線から計った絶対値に基づくものではない。
【０１６０】
（実施例１７）
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、第２２７９巻（１９９２年）に記載のとおりに調製した５０グラムのｔ−ブチルイソプロピリデン（ＴＢＩＮ）、１３．２５グラムの湿った海綿状ニッケル触媒、２８％のアンモニア溶液（１３７．５ｍｌ）、および３７５ｍｌのイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）を圧力容器に加える。混合物を５０ｐｓｉの水素で還元し、次いで濾過し、真空中で濃縮する。得られる油状物を２５０ｍｌの温トルエンに溶解させ、水洗し、真空中で再び濃縮して、アミノエステルを得る。アミノエステル、８５グラムの４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド（米国特許第５１５５２５１号、およびＢａｕｍａｎ Ｋ．Ｌ．、Ｂｕｔｌｅｒ Ｄ．Ｅ．、Ｄｅｅｒｉｎｇ Ｃ．Ｆ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ１９９２年、第３３巻：２２８３〜２２８４ページ、両方の参考文献の全体が参照により援用される）、１２．５グラムのピバル酸、１３７．５ｍｌのテトラヒドロフラン、および１３７．５ｍｌのヘキサンをアルゴンで不活性にした圧力容器に装入し、それを密閉し、９６時間かけて７５℃に加熱する。冷却した後、溶液を４００ｍｌのメチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で希釈し、最初に希水酸化ナトリウム水溶液で洗浄した後、希塩酸水溶液で洗浄する。次いで、混合物を真空中で濃縮して、アセトニドエステルを得る。
【０１６１】
アセトニドエステルを２７５ｍｌの温メタノールに溶解させ、塩酸水溶液（７５ｍｌの水中に３７％の塩酸５グラム）を加える。混合物を３０℃で攪拌して、ジオールエステルを生成する。次いで、１００ｍｌのメチルｔ−ブチルエーテルおよび水酸化ナトリウム水溶液（１５０ｍｌの水および２５グラムの５０％水酸化ナトリウム水溶液）を加え、混合物を３０℃で攪拌して、ナトリウム塩を生成する。６００ｍｌの水を加え、混合物を４３７．５ｍｌのメチルｔ−ブチルエーテルで２回洗浄する。
【０１６２】
この場合では、混合物を大気圧下で蒸留して、バッチ温度を９９℃とする。混合物のメタノール含有量が０．４ｗ／ｖになるまで、蒸留を継続する。バッチを７５〜８５％で１８時間攪拌し、次いで冷却し、酸性化し、８７５ｍｌのトルエンに抽出する。混合物を４時間加熱還流し、共沸によって水を除去する。冷却した後、混合物を濾過し、トルエンで洗浄し、そのまま乾燥させる。表題化合物を白色固体（収量：３７．９グラム）として単離する。
【０１６３】
（実施例１８）
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＰＸＲＤ
粉末Ｘ線回折パターンは、自動サンプル交換装置、θ−θゴニオメーター、自動ビームダイバージェンススリット、およびＰＳＤ Ｖａｎｔｅｃ−１検出器を装着したＢｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ Ｌｔｄ．のＤ４粉末Ｘ線回折計を使用して測定した。サンプルを低バックグラウンドのケイ素ウェーハ検体取付台に載せて、分析の準備をした。検体を回転させ、その間Ｘ線管を４０ｋＶ／３０ｍＡで作動させながら銅Ｋ−α１Ｘ線（波長＝１．５４０６オングストローム）を照射した。分析は、ゴニオメーターを２°〜５５°の２θ範囲にわたって０．０１８°のステップあたり０．２秒のカウントにセットした持続方式で動かして行った。Ｂｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ Ｌｔｄ．のＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、閾値１およびピーク幅０．３°２θでピークを選択した。データは２１℃で収集した。
【０１６４】
当業者にはわかるとおり、以下で示す表１内の様々なピークの相対強度は、たとえば、Ｘ線ビーム中での結晶の配向効果、分析する材料の純度、サンプルの結晶化度などのいくつかの要素のために様々となり得る。ピーク位置は、サンプル高さの差異のために変化する場合もあるが、実質的に示した表で規定したとおりのままとなる。
【０１６５】
別の波長の使用によって生成されるこれ以外のＰＸＲＤパターンは、本発明の結晶性材料のＰＸＲＤパターンの別の表示であるとみなされ、それ自体として本発明の範囲内である。
【０１６６】
（実施例１９）
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＤＳＣ
オートサンプラーと４ホールの側壁脱気孔付きアルミニウム受皿およびふたを備えたＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｄｉａｍｏｎｄ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を、窒素流動気体を用いながら使用し、２．８９３ｍｇのサンプルを１０℃から３００℃に毎分２０℃で加熱した。
【０１６７】
（実施例２０）
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＦＴ−ＩＲ
ＩＲスペクトルは、「ＤｕｒａｓａｍｐｌＩＲ」単反射ＡＴＲ付属品（セレン化亜鉛基板上にダイアモンド表面）およびｄ−ＴＧＳ ＫＢｒ検出器を備え付けたＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｎｅｘｕｓ ＦＴＩＲ分光計を使用して得た。スペクトルは、２ｃｍ−１の分解能で収集し、２５６の走査を合算したものとした。Ｈａｐｐ−Ｇｅｎｚｅｌアポダイゼーションを使用した。ＦＴ−ＩＲスペクトルは、単反射ＡＴＲを使用して記録したため、サンプル調製は必要でなかった。ＡＴＲ ＦＴ−ＩＲを使用すると、赤外線バンドの相対強度が、ＫＢｒディスクまたはヌジョールサンプル調製物を使用する透過ＦＴ−ＩＲスペクトルで見られるものとは異なってくる。ＡＴＲ ＦＴ−ＩＲの性質のために、低い方の波数のバンドは、高い方の波数のものより強烈である。実験誤差は、別段の注釈がない限り±２ｃｍ−１であった。ピークは、ＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｏｍｎｉｃ６．０ａソフトウェアを使用して抜き取った。強度の割当は、スペクトル中の主要なバンドに関するものであり、基線から計った絶対値に基づくものではない。
【０１６８】
（実施例２１）
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＦＴ−ラマン
ラマンスペクトルは、１０６４ｎｍのＮｄＹＡＧレーザーおよびＬＮ−ゲルマニウム検出器を備え付けた、ＲａｍＩＩモジュールのＦＴ−Ｒａｍａｎ分光計を具備するＢｒｕｋｅｒ Ｖｅｒｔｅｘ７０を使用して収集した。スペクトルは、２ｃｍ−１の分解能およびＢｌａｃｋｍａｎ−Ｈａｒｒｉｓ ４−ｔｅｒｍアポダイゼーションを使用して記録した。スペクトルは、３００ｍＷのレーザー出力を使用して収集し、４０９６の走査を合算したものとした。サンプルをガラスバイアルに入れ、レーザー照射にさらした。データは、ラマンシフトに対する強度として示し、基準ランプからの白色光スペクトルを使用して機器の反応および振動数依存的な散乱について補正する。Ｂｒｕｋｅｒ Ｒａｍａｎ Ｃｏｒｒｅｃｔ機能を使用して補正を行った（Ｂｒｕｋｅｒソフトウェア−ＯＰＵＳ６．０）。実験誤差は、別段の注釈がない限り±２ｃｍ−１であった。ピークは、ＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｏｍｎｉｃ６．０ａソフトウェアを使用して抜き取った。強度の割当は、スペクトル中の主要なバンドに関するものであり、基線から計った絶対値に基づくものではない。
【０１６９】
（実施例２２）
フタルイミドアセタール
【０１７０】
【化３６】
５０．０グラムのカリウムフタルイミド（１当量）を、室温で４００ｍｌ（８体積）のＮ，Ｎジメチルホルムアミド中にスラリー化する。３−ブロモプロピオンアルデヒドジメチルアセタール５４．４グラム（１．１当量）を室温で滴下した。反応を約１５時間実施し、完了したとみなした。２−メチルテトラヒドロフラン２５０ｍｌおよび水２５０ｍｌを加え、攪拌し、安定させ、分離した。水層を１００ｍｌの２−ＭＴＨＦで２回洗浄し直し、有機層を合わせ、７０％の飽和ブラインで洗浄して水を除去した。次いで、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、大気圧下で蒸留してスラリーにした。白色のスラリーを０〜５℃の低温で１時間かけて粒状化し、濾紙で覆ったブフナー漏斗で濾過し、２−ＭＴＨＦで洗浄した。白色固体を真空オーブンにて４０℃未満で乾燥させると、収率４６．５％の表題生成物となった。
【０１７１】
（実施例２３）
３−フタルイミド−プロピオンアルデヒド
【０１７２】
【化３７】
１５．０グラムのフタルイミドアセタール（１当量）を７００ｍｌ（約４７体積）の氷酢酸および７０ｍｌ（約５体積）の水に加えた。この反応を３０℃までの室温で４８時間実施し、完了したとみなした。飽和炭酸水素ナトリウムを加えてｐＨ７にし、５００ｍｌの２−ＭＴＨＦで抽出し、５００ｍｌの２−ＭＴＨＦで再度抽出した。次いで、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧蒸留してスラリーにする。白色のスラリーを０〜５℃の低温で１時間かけて粒状化し、濾紙で覆ったブフナー漏斗で濾過し、２−ＭＴＨＦで洗浄した。白色固体を真空オーブンにて室温で乾燥させると、収率４７％の表題生成物となった。
【０１７３】
（実施例２４）
配列番号１−ＤＥＲＡ０３のヌクレオチド配列
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【０１７４】
（実施例２５）
配列番号２−ＤＥＲＡ０４のヌクレオチド配列
ａｔｇｇｇｔａａｔａｔｃｇｃｇａａａａｔｇａｔｔｇａｔｃａｃａｃｃｃｔｃｔｔａａａａｃｃｃｇａａｇｃａａｃｃｇａａｃａａｃａａａｔｔｇｔａｃａａｔｔａｔｇｃａｃｇｇａａｇｃｇａａａｃａａｔａｔｇｇｃｔｔｔｇｃａｇｃａｇｔａｔｇｃｇｔａａａｔｃｃｇａｃａｔｇｇｇｔｔａａａａｃｃｇｃｃｇｃａｃｇｔｇａａｔｔａａｇｃｇｇｇａｃａｇａｃｇｔｔｃｇｔｇｔｇｔｇｔａｃｔｇｔａａｔｔｇｇａｔｔｔｃｃｃｔｔｇｇｇｃｇｃｔａｃｇａｃｔｃｃａｇａａａｃｔａａａｇｃａｔｔｃｇａａａｃｔａｃｔａａｃｇｃｇａｔｔｇａａａａｔｇｇａｇｃａｃｇｇｇａａｇｔａｇａｔａｔｇｇｔａａｔｔａａｔａｔｔｇｇｔｇｃａｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａｃａａｇａｔｇａａｃｔｇｇｔｇｇａａｃｇｔｇａｔａｔｔｃｇｔｇｃｃｇｔｔｇｔｔｇａａｇｃｔｇｃａｇｃａｇｇｃｃｇｃｇｃｇｃｔｔｇｔｇａａａｇｔａａｔｔｇｔａｇａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃｔｔａｃｔｇａｔｇａａｇａａａａａｇｔｔｃｇｃｇｃｔｔｇｔｃａａｔｔａｇｃａｇｔａａａａｇｃｇｇｇｔｇｃｃｇａｔｔａｔｇｔｇａａｇａｃｇｔｃｇａｃａｇｇａｔｔｔａｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇｔｇｃａａｃｇｇｔｇｇａａｇａｔｇｔｇｇｃｔｔｔａａｔｇｃｇｇａａａａｃｇｇｔｔｇｇｔｇａｔｃｇｔｇｃａｇｇｇｇｔｃａａａｇｃａａｇｃｇｇｃｇｇａｇｔａｃｇｔｇａｃｔｇｇａａａａｃａｇｃａｇａａｇｃａａｔｇａｔｔａａｃｇｃａｇｇａｇｃａａｃｇｃｇｃａｔｔｇｇｃａｃａａｇｔｔｃｔｇｇａｇｔａｇｃａａｔｃｇｔａａｃａｇｇｔｇｇａａｃｃｇｇｃｃｇｇｇｃａｇａｃｔａｔｔａａ
【０１７５】
（実施例２６）
配列番号３−ＤＥＲＡ０６のヌクレオチド配列
ａｔｇｇｇａｃｔｃｇｃｃｔｃｃｔａｃａｔｃｇａｃｃａｃａｃｇｃｔｇｃｔｔａａｇｇｃｃａｃｃｇｃｃａｃｇｃｔｃｇｃｃｇａｃａｔｃｃｇｃａｃｇｃｔｇｔｇｔｇａｇｇａａｇｃｃｃｇｃｇａｇｃａｃｔｃｇｔｔｃｔａｃｇｃｇｇｔｇｔｇｃａｔｃａａｃｃｃｇｇｔｃｔｔｔａｔｔｃｃｃｃａｃｇｃｃｃｇｃｇｃｃｔｇｇｃｔｃｇａａｇｇｃａｇｃｇａｃｇｔｇａａｇｇｔｃｇｃｃａｃｃｇｔｃｔｇｃｇｇｃｔｔｔｃｃｃｃｔｃｇｇｃｇｃｃａｔｃａｇｃｔｃｃｇａｇｃａｇａａａｇｃｔｃｔｇｇａａｇｃｃｃｇｃｃｔｇａｇｃｇｃｃｇａａａｃｇｇｇｃｇｃｃｇａｃｇａａａｔｃｇａｔａｔｇｇｔｃａｔｃｃａｃａｔｃｇｇｃｔｃｇｇｃｇｃｔｔｇｃｃｇｇｃｇａｃｔｇｇｇａｃｇｃｇｇｔｇｇａａｇｃｃｇａｃｇｔｇｃｇｇｇｃａｇｔｇｃｇｃｃｇｃｇｃｇｇｔｇｃｃｃｇａｇｃａｇｇｔｇｃｔｃａａｇｇｔｇａｔｔａｔｃｇａａａｃｃｔｇｃｔａｃｃｔｇａｃｃｇａｃｇａｇｃａａａａｇｃｇｃｔｔｇｇｃｇａｃｔｇａｇｇｔｃｇｃｃｇｔａｃａｇｇｇｃｇｇｃｇｃｃｇａｃｔｔｃｇｔｇａａｇａｃｇａｇｃａｃａｇｇｃｔｔｃｇｇｃａｃｃｇｇｃｇｇｃｇｃｃａｃｃｇｔｇｇａｃｇａｃｇｔｇｃｇｃｃｔｇａｔｇｇｃｇｇａａｇｔｇａｔｃｇｇｇｇｇｃｃｇｃｇｃｃｇｇａｃｔｃａａｇｇｃｇｇｃｇｇｇｃｇｇｃｇｔｃｃｇｃａｃｔｃｃｔｇｃｃｇａｃｇｃｇｃａａｇｃｃａｔｇａｔｃｇａｇｇｃｇｇｇｃｇｃｇａｃｃｃｇｇｃｔｇｇｇｃａｃｃｔｃｇｇｇｃｇｇｃｇｔｇｇｇｔｃｔｇｇｔｇｔｃｇｇｇｃｇｇｃｇａａａａｃｇｇａｇｃｃｇｇｃｔａｃｔｇａ
【０１７６】
（実施例２７）
配列番号４−ＤＥＲＡ０８のヌクレオチド配列
ａｔｇｇｇａａｔｔｇｃｔａａａａｔｇａｔｃｇａｔｃａｃａｃｔｇｃｔｔｔａａａａｃｃａｇａｃａｃａａｃｇａａａｇａａｃａａａｔｔｔｔａａｃａｃｔａａｃａａａａｇａａｇｃａａｇａｇａａｔａｃｇｇｔｔｔｔｇｃｔｔｃｃｇｔａｔｇｃｇｔａａａｔｃｃａａｃｔｔｇｇｇｔａａａａｃｔａｔｃｃｇｃｔｇａａｃａａｃｔｔｇｃｔｇｇａｇｃａｇａａｔｃｔｇｔａｇｔａｔｇｔａｃｔｇｔｔａｔｃｇｇｔｔｔｃｃｃａｃｔａｇｇａｇｃｇａａｔａｃｃｃｃｔｇａａｇｔａａａａｇｃａｔｔｔｇａａｇｔａａａａｇａｔｇｃｔａｔｃｃａａａａｃｇｇｔｇｃａａａａｇａａｇｔｇｇａｔａｔｇｇｔｔａｔｔａａｔａｔｃｇｇｃｇｃａｃｔａａａａｇａｃａａａｇａｃｇａｃｇａａｃｔａｇｔａｇａａｃｇｔｇａｔａｔｔｃｇｃｇｃｔｇｔａｇｔｃｇａｔｇｃｔｇｃｃａａａｇｇａａａａｇｃａｔｔａｇｔａａａａｇｔａａｔｔａｔｃｇａａａｃｔｔｇｃｃｔａｔｔａａｃａｇａｃｇａａｇａａａａａｇｔｔｃｇｃｇｃａｔｇｔｇａａａｔｃｇｃｔｇｔａａａａｇｃｇｇｇａａｃａｇａｃｔｔｃｇｔｔａａａａｃａｔｃｃａｃｔｇｇａｔｔｃｔｃｃａｃａｇｇｔｇｇｃｇｃａａｃｔｇｃｃｇａａｇａｔａｔｃｇｃｃｔｔａａｔｇｃｇｔａａａａｃｔｇｔａｇｇａｃｃａａａｃａｔｃｇｇｃｇｔａａａａｇｃａｔｃｔｇｇｔｇｇｇｇｔｔｃｇｔａｃｇａａａｇａａｇａｃｇｔａｇａａａａａａｔｇａｔｃｇａａｇｃａｇｇｃｇｃａａｃｔｃｇｔａｔｔｇｇｃｇｃａａｇｔｇｃａｇｇｔｇｔｃｇｃａａｔｔｇｔｔｔｃｃｇｇｃｇａａａａａｃｃａｇｃｃａａａｃｃａｇａｔａａｔｔａｃｔａａ
【０１７７】
（実施例２８）
配列番号５−ＤＥＲＡ１１のヌクレオチド配列
ａｔｇａｃａｔｃａａａｔｃａａｃｔｔｇｃｔｃａａｔａｔａｔｃｇａｔｃａｃａｃｃｇｃａｃｔｔａｃｃｇｃａｇａａａａａａａｔｇａａｃａａｇａｔａｔｔｔｃｇａｃａｃｔｃｔｇｔａａｔｇａａｇｃｇａｔｔｇａａｃａｃｇｇａｔｔｔｔａｔｔｃｔｇｔａｔｇｔａｔｃａａｔｔｃｔｇｃｔｔａｔａｔｔｃｃａｃｔｃｇｃｔａａａｇａａａａａｃｔｔｇｃｔｇｇｃｔｃａａａｔｇｔａａａａａｔｔｔｇｃａｃｃｇｔａｇｔｔｇｇａｔｔｃｃｃｔｔｔｇｇｇｇｇｃｇａａｔｔｔａａｃｃｔｃａｇｔｃａａａｇｃａｔｔｔｇａａａｃｇｃａａｇａａｔｃｔａｔｔａａａｇｃｇｇｇｔｇｃａａａｔｇａａａｔｔｇａｔａｔｇｇｔｇａｔｔａａｔｇｔａｇｇｔｔｇｇａｔａａａａｔｃｇｃａａａａａｔｇｇｇａｔｇａａｇｔａａａａｃａａｇａｔａｔｔｃａａｇｃｇｇｔａｔｔｔａａｔｇｃｔｔｇｔａａｔｇｇｃａｃｇｃｃａｔｔａａａａｇｔｇａｔｔｔｔａｇａａａｃｔｔｇｔｔｔｇｃｔｃａｃｔａａａｇａｔｇａａａｔａｇｔｇａａａｇｃｃｔｇｃｇａａａｔｔｔｇｔａａａｇａａａｔｃｇｇｔｇｔａｇｃｔｔｔｔｇｔｔａａａａｃａｔｃａａｃａｇｇｃｔｔｔａａｔａａａｇｇｔｇｇｔｇｃｇａｃｃｇｔａｇａａｇａｔｇｔｔｇｃａｔｔｇａｔｇａａａａａｃａｃｇｇｔｃｇｇｃａａｔａｔｔｇｇｔｇｔｔａａａｇｃａｔｃａｇｇｔｇｇｔｇｔｇｃｇｔｇａｔａｃｔｇａａａｃｔｇｃａｃｔｔｇｃａａｔｇａｔｔａａｇｇｃｇｇｇｔｇｃｇａｃｔｃｇｃａｔｔｇｇｔｇｃａａｇｃｇｃｔｇｇｃａｔｔｇｃｇａｔｔａｔｔａｇｃｇｇｔａｃｔｃａａｇａｃａｃｔｃａａａｇｃａｃｔｔａｃｔａａ
【０１７８】
（実施例２９）
配列番号６−ＤＥＲＡ１２のヌクレオチド配列
ａｔｇａｔａｇａｇｔａｃａｇｇａｔｔｇａｇｇａｇｇｃａｇｔａｇｃｇａａｇｔａｃａｇａｇａｇｔｔｃｔａｃｇａａｔｔｃａａｇｃｃｃｇｔｃａｇａｇａａａｇｃｇｃａｇｇｔａｔｔｇａａｇａｔｇｔｇａａａａｇｔｇｃｔａｔａｇａｇｃａｃａｃｇａａｔｃｔｇａａａｃｃｇｔｔｔｇｃｃａｃａｃｃａｇａｃｇａｔａｔａａａａａａａｃｔｃｔｇｔｃｔｔｇａａｇｃａａｇｇｇａａａａｔｃｇｔｔｔｃｃａｔｇｇａｇｔｃｔｇｔｇｔｇａａｔｃｃｇｔｇｔｔａｔｇｔｇａａａｃｔｇｇｃｔｃｇｔｇａａｇａａｃｔｃｇａａｇｇａａｃｃｇａｔｇｔｇａａａｇｔｃｇｔｃａｃｃｇｔｔｇｔｔｇｇｔｔｔｔｃｃａｃｔｇｇｇａｇｃｇａａｃｇａａａｃｔｃｇｇａｃｇａａａｇｃｃｃａｔｇａｇｇｃｇａｔｔｔｔｃｇｃｔｇｔｔｇａｇａｇｔｇｇａｇｃｃｇａｔｇａｇａｔｃｇａｔａｔｇｇｔｃａｔｃａａｃｇｔｔｇｇｃａｔｇｃｔｃａａｇｇｃａａａｇｇａｇｔｇｇｇａｇｔａｃｇｔｔｔａｃｇａｇｇａｔａｔａａｇａａｇｔｇｔｔｇｔｃｇａａｔｃｇｇｔｇａａａｇｇａａａａｇｔｔｇｔｇａａｇｇｔｇａｔｃａｔｃｇａａａｃｇｔｇｃｔａｔｃｔｇｇａｔａｃｇｇａａｇａｇａａｇａｔａｇｃｇｇｃｇｔｇｔｇｔｃａｔｔｔｃｃａａａｃｔｔｇｃｔｇｇａｇｃｔｃａｔｔｔｃｇｔｇａａｇａｃｔｔｃｃａｃｇｇｇａｔｔｔｇｇａａｃａｇｇａｇｇｇｇｃｇａｃｃｇｃａｇａａｇａｃｇｔｔｃａｔｃｔｃａｔｇａａａｔｇｇａｔｃｇｔｇｇｇａｇａｔｇａｇａｔｇｇｇｔｇｔａａａａｇｃｔｔｃｃｇｇａｇｇｇａｔｃａｇａａｃｃｔｔｃｇａｇｇａｃｇｃｔｇｔｔａａａａｔｇａｔｃａｔｇｔａｃｇｇｔｇｃｔｇａｔａｇａａｔａｇｇａａｃｇａｇｔｔｃｇｇｇａｇｔｔａａｇａｔｃｇｔｔｃａｇｇｇｇｇｇａｇａａｇａｇａｇａｔａｔｇｇａｇｇｔｔｇａ
【０１７９】
（実施例３０）
配列番号７−ＤＥＲＡ１５のヌクレオチド配列
ａｔｇｃｃｇｔｃｇｇｃｃａｇｇｇａｔａｔａｃｔｇｃａｇｃａｇｇｇｔｃｔａｇａｃａｇｇｃｔａｇｇｇａｇｃｃｃｔｇａｇｇａｃｃｔｃｇｃｃｔｃｇａｇｇａｔａｇａｃｔｃｔａｃｇｃｔａｃｔａａｇｃｃｃｔａｇｇｇｃｔａｃｇｇａｇｇａｇｇａｃｇｔｔａｇｇａａｔｃｔｔｇｔｇａｇａｇａｇｇｃｇｔｃｇｇａｃｔａｃｇｇｇｔｔｔａｇａｔｇｃｇｃｇｇｔｔｃｔｇａｃｔｃｃａｇｔｇｔａｃａｃａｇｔａａａｇａｔｔｔｃｔｇｇｇｃｔｇｇｃｔｇａｇａａｇｃｔｔｇｇｔｇｔｇａａｇｃｔａｔｇｔａｇｃｇｔｔａｔａｇｇｃｔｔｔｃｃｃｃｔｇｇｇｃｃａｇｇｃｃｃｃｇｃｔｃｇａｇｇｔａａａｇｃｔａｇｔｔｇａｇｇｃａｃａａａｃｔｇｔｔｔｔａｇａｇｇｃｔｇｇｇｇｃｔａｃｔｇａｇｃｔｔｇａｔｇｔｔｇｔｃｃｃｃｃａｔｃｔｃｔｃａｃｔａｇｇｃｃｃｃｇａａｇｃｔｇｔｔｔａｃａｇｇｇａｇｇｔｃｔｃａｇｇｇａｔａｇｔｇａａｇｔｔｇｇｃｇａａａａｇｃｔａｔｇｇａｇｃｃｇｔｔｇｔｇａａａｇｔａａｔａｔｔａｇａａｇｃｇｃｃａｃｔｃｔｇｇｇａｔｇａｃａａａａｃｇｃｔｃｔｃｃｃｔｃｃｔｇｇｔｇｇａｃｔｃｇｔｃｇａｇｇａｇｇｇｃｇｇｇｇｇｃｇｇａｔａｔａｇｔｇａａｇａｃａａｇｃａｃｃｇｇｇｇｔｃｔａｔａｃａａａｇｇｇｔｇｇｔｇａｔｃｃａｇｔａａｃｇｇｔｃｔｔｃａｇｇｃｔｇｇｃｃａｇｔｃｔｔｇｃｃａａｇｃｃｃｃｔｔｇｇｔａｔｇｇｇｔｇｔａａａｇｇｃａａｇｃｇｇｃｇｇｔａｔａａｇｇａｇｔｇｇｃａｔｃｇａｃｇｃｃｇｔｃｃｔｃｇｃｃｇｔａｇｇａｇｃｔｇｇｃｇｃｇｇａｔａｔｃａｔａｇｇｇａｃａａｇｃａｇｔｇｃｔｇｔａａａｇｇｔｔｔｔｇｇａｇａｇｃｔｔｃａａａｔｃｃｃｔａｇｔｃｔａａ
【０１８０】
（実施例３１）
配列番号８−ＤＥＲＡ１０１のヌクレオチド配列
ａｔｇｇｃｔｇｃａａａｃａａａｔａｔｇａａａｔｇｇｃｃｔｔｃｇｃａｃａｇｔｔｃｇａｔｃｃａｇｃｔｇａａａｇｃｇａａｇａａｃｇｃａｔｃｃｔｇｃｔｇａａａａｃｔｇａｃｃａｇａｔｃａｔｔｃｇｔｇａｃｃａｃｔａｔｔｃｃｃｇｔｔｔｃｇａｃａｃｔｃｃａｇａａａｃｔａａａａａｇｔｔｃｃｔｇｃａｔｇｇｃｇｔｔａｔｃｇａｔｃｔｇａｃｇｔｃｔｃｔｇａａｃｇｃｃａｃｃｇａｃｔｃｔｇａｇｇａａｔｃｔａｔｃａｃｔａａａｔｔｃａｃｃｇａａｔｃｔｇｔａａａｃｇａｔｔｔｃｇａａｇａｔａｃｃｇａｃｃｃｇａｃｔａｔｃｃｃｔａｇｃｇｔｔｇｃｇｇｃｇａｔｃｔｇｃｇｔｔｔａｔｃｃｇａａｃｔｔｔｇｔｃａｇｃａｃｃｇｔｇｃｇｔｇａａａｃｃｃｔｇａｃｔｇｃｃｇａｇａａｔｇｔｇａａａｇｔｔｇｃａａｇｃｇｔｃａｇｃｇｇｔｔｇｃｔｔｃｃｃｇｇｃｃｔｃｃｃａｇａｇｃｔｔｃａｔｃｇａａｇｔｇａａａｃｔｇｇｃａｇａａａｃｃｇｃａｃｔｇｇｃｇｇｔｔａｇｃｇａｃｇｇｔｇｃｇｇａｔｇａａａｔｔｇａｃａｔｔｇｔｔｃｔｇａａｃａｔｇｇｇｔａａａｔｔｃｃｔｇｔｃｃｇｇｔｇａｔｔａｃｇａｇｇｃｃｇｃａｇｃｃａｃｔｇａｇａｔｃｇａｇｇａａｃａｇａｔｃｇｃｔｇｃｇｇｃｇａａｇｇｇｔｇｃｇａｃｃｇｔａａａａｇｔｔａｔｃｃｔｇｇａｇａｃｔｇｇｔｇｃｔｃｔｇａａｇａｃｇｃｃｇｇａａａａｃａｔｔｃｇｃｃｇｃｇｃａａｃｃａｔｃｃｔｇｔｃｔｃｔｇｔｔｔｔｇｔｇｇｃｇｃｃｃａｔｔｔｃｇｔｔａａａａｃｃｔｃｔａｃｔｇｇｃａａａｇｇｃｔａｃｃｃｇｇｇｃｇｃｃｔｃｔｃｔｇｇａａｇｃａｇｃｔｔａｃａｃｔａｔｇｔｇｔａａａｇｔｃｃｔｇａａａｃａｇｔａｃｔａｃｇｇｃｃｔｇｔｔｃｇｇｔｇａａｇｔｔｃｇｔｇｇｃａｔｃａａｇｃｔｇａｇｃｇｇｃｇｇｔａｔｃｃｇｔａｃｃａｃｃｇａａｇａｃｇｃｇｇｔｔａａｇｔａｃｔａｃｔｇｃｃｔｇａｔｃｇａａａｃｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃａａａｇａａｔｇｇｃｔｇａｃｃｃｃｇｇｃｇｔａｃｔｔｃｃｇｃａｔｃｇｇｃｇｃｃｔｃｃｔｃｔｃｔｇｇｔｔｇａｔｇｃｔｃｔｇｃｇｃｃａｇｇａｔａｔｔａｔｇｇｔｔｔａａ
【０１８１】
（実施例３２）
配列番号９−ＤＥＲＡ１０２のヌクレオチド配列
Ａｔｇｇａａｃｔｇａａｃｃｇｃａｔｇａｔｔｇａｃｃａｃａｃｔａｔｔｃｔｇａａａｃｃｇｇａａｇｃｃａｃｃｇａｇｇｃｇｇｃｔｇｔｇｃａｇａａａａｔｔａｔｃｇａｔｇａａｇｃｔａａａｇａａｔａｃａａｃｔｔｃｔｔｃａｇｃｇｔｃｔｇｔａｔｃａａｃｃｃｇｔｇｔｔｇｇｇｔｔｇｃｔｔｔｔｇｃｃｔｃｃｇａｇｃａｇｃｔｇｇｃｔｇａｔａｃｔｇａｔｇｔｔｇｃｃｇｔｃｔｇｔａｃｃｇｔａａｔｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｇａａｃａｃｇｃｃｇｇａｇｇｔｔａａａｇｃｇｔａｃｇａａｇｃａｇｃｔｇａｃｇｃｃａｔｔａａａａａｃｇｇｔｇｃｔａａｔｇａｇｇｔｇｇａｔａｔｇｇｔｇａｔｃａａｔａｔｔｇｇｔｇｃｔｃｔｇａａａｔｃｃｃａａｃａｇｔａｃｇａｃｔａｃｇｔｇｃｇｃｃａａｇａｃａｔｃｃａｇｇｇｔｇｔｇｇｔｔｇａｃｇｃｃｇｃａａａａｇｇｔａａａｇｃａｃｔｇｇｔｔａａａｇｔｔａｔｃａｔｃｇａａａｃｔｇｃｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａｔｇａａｇａｇａａａｇｔｔａａｇｇｃｔｔｇｃｇａａｃｔｇｇｃｇａａａｇａａｇｃａｇｇｃｇｃｔｇａｔｔｔｃｇｔｇａａａａｃｃａｇｃａｃｃｇｇｔｔｔｔｔｃｃａｃｔｇｇｃｇｇｔｇｃａａａａｇｔｔｇｃｔｇａｃａｔｔｃｇｔｃｔｇａｔｇｃｇｃｇａａａｃｃｇｔｇｇｇｔｃｃｇｇａｔａｔｇｇｇｃｇｔｔａａａｇｃａｔｃｃｇｇｔｇｇｃｇｔａｃａｃａａｃｇｃａｇａａｇａａｇｃａｃｔｇｇｃｃａｔｇａｔｃｇａａｇｃｇｇｇｃｇｃａａｃｔｃｇｔａｔｃｇｇｃｇｃｔｔｃｃａｃｃｇｇｔｇｔａｇｃｃａｔｃｇｔａａｇｃｇｇｔｇｃｔａｃｔｇｇｔｇａｇｇｇｔａｃｃａａａｔｇｇｔａａ
【０１８２】
（実施例３３）
配列番号１０−ＤＥＲＡ１０３のヌクレオチド配列
ａｔｇａｃｔａｔｔｇａａｔｃｃｇｃｔａｔｃｇｃｇｃｔｇｇｃａｃｃｔｇｃａｇａａｃｇｔｇｃｔｇｔｔａａｃｃｔｇａｔｔｇｇｔａｇｃｇａｃｃｔｇａｃｃｇａａａａａｔｃｔｃｔｇａａａｃｔｇｃａｃｃｔｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔｃｔｇｇｔｇｔｃｇａｃｇｃｇｇｔｔｇｇｔｃｔｇｇａａｃａｇｃｇｔｇｃｔｇｃｃｇｇｔｃｔｇｔｃｃａｃｃｃｇｃｔｃｔａｔｃａａａａｃｃａｃｃｔｃｃａａａｇｃｔｔｇｇｇｃｃｃｔｇｇａｃａｃｃａｔｃａｔｃａａａｃｔｇａｔｃｇａｔｃｔｇａｃｔａｃｔｃｔｇｇａｇｇｇｃｇｃａｇａｔａｃｔｃｃｇｇｇｃａａｇｇｔｔｃｇｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｇｃｇａａａｇｃａａｔｇｃｔｇｃｃｇｇａｃｇｃｃｔｃｔｇａｔｇｔｇｔｃｃｇｃｔｃｃｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃｔｇｔｇｔｇｃｇｔｔｔａｃｇｇｔｇａｔａｔｇｇｔｇｃｃａｔａｃｇｃｇｇｃｇｇａａｇｃａｃｔｇｇｇｃｔｃｃｔｃｔｔｇｇｔｃｔａａｔｇｇｔｔｃｔｇａｃａａｃｇｇｃａｔｔａａｃｇｔｔｇｃｔｇｃｇｇｔｇｇｃａａｃｔｇｃｇｔｔｃｃｃａｔｃｃｇｇｔｃｇｃａｇｃｔｃｃｃｔｇｃｃａａｔｃａａａａｔｃｇｃｔｇａｃａｃｃａａｇｇａａｇｃｃｇｔｔｇｃｃｃａｃｇｇｔｇｃｔｇａｃｇａａａｔｃｇａｃａｔｇｇｔａａｔｃｇａｔｃｇｔｇｇｔｇｃｇｔｔｃｃｔｇａｇｃｇｇｃａａａｔａｃｇｇｔｇｔｔｇｔｇｔｔｃｇａｃｃａｇａｔｃｇｔａｇｃｔｇｔｇａａａｇａａｇｃｔｔｇｃｃｇｃｃｇｃｇａａａａｃｇｇｃａｃｔｔａｃｇｃｇｃａｃｃｔｇａａａｇｔｔａｔｃｃｔｇｇａａａｃｃｇｇｃｇａａｃｔｇａａｃａｃｃｔａｔｇａｃａａｃｇｔｃｃｇｃｃｇｔｇｃｃｔｃｃｔｇｇｃｔｇｇｃｇａｔｃｃｔｇｇｃｇｇｇｔｇｇｔｇａｃｔｔｔｇｔｇａａａａｃｃｔｃｔａｃｃｇｇｃａａｇｇｔｔａｇｃｃｃｇｇｃｃｇｃａａｃｃｃｔｇｃｃｇｇｔｔａｃｇｃｔｇｃｔｇａｔｇｃｔｇｇａａｇｔｃｇｔｔｃｇｃｇａｔｔｇｇｃａｔｇｔｇｃｔｇａｃｔｇｇｃｇａｇａａａａｔｃｇｇｔｇｔｇａａａｃｃａｇｃｃｇｇｔｇｇｔａｔｃｃｇｃｔｃｃｔｃｃａａａｇａｃｇｃｇａｔｔａａａｔａｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｇｇｃｇｇａａａｃｃｇｔａｇｇｔｇａａｇａｇｔｇｇｃｔｇｃａａｃｃｇｃａｃｃｔｇｔｔｔｃｇｃｔｔｔｇｇｃｇｃｃｔｃｃｔｃｃｃｔｇｃｔｇａａｃｇａｃｇｔｔｃｔｇａｔｇｃａｇｃｇｔｃａｇａａｇｃｔｇｔｃｔａｃｃｇｇｃｃａｃｔａｃｔｃｃｇｇｃｃｃａｇａｔｔａｃｇｔｇａｃｃａｔｃｇａｃｔａａ
【０１８３】
（実施例３４）
配列番号１１−ＤＥＲＡ１０４のヌクレオチド配列
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【０１８４】
（実施例３５）
配列番号１２−ＤＥＲＡ１０５のヌクレオチド配列
ａｔｇｇａａｃｔｇａｔｃａｃｔｃａｇｃｃｇｔｃｔｔｇｔｔｇｇｇｔａｔｔｔｔｃｃｇｔｃｔｔｔｔｔｃｃｇｃｃｇｔｃａｇｔａｃｇｇｃｔｇｇｃｔｇｇｔｔｔｔｔｇｔｇｇａａｇｇｔｇｃｔｔｇｇｔａｃｇａｔｇｇｔｃｇｃｃｇｔｃａａａｃｔｔｔｃｃａｃｃｔｇｇａｔｇｇｔａａｃｇｇｃｃｇｃａａａｇｇｃｔｔｃｃｔｇｃｇｃａｔｇａｃｔａｔｇａａｔａｔｃｇｃａａａａａｔｇａｔｃｇａｔｃａｃａｃｃｃｔｇｃｔｇａａａｃｃｇｇａａｇｃｇａｃｔｇａｇｃａｇｃａｇａｔｃｇｔａｃａａｃｔｇｔｇｃａｃｃｇａａｇｃｔａａａｃａｇｔａｔｇｇｔｔｔｔｇｃｔｔｃｃｇｔｔｔｇｔｇｔｇａａｃｃｃｔａｃｇｔｇｇｇｔｇａａａａｃｃｇｃｃｇｃａｃｇｃｇａａｃｔｇｔｃｔｇｇｔａｃｃｇａｃｇｔｔｃｇｔｇｔｔｔｇｔａｃｃｇｔａａｔｔｇｇｃｔｔｃｃｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｇａｃｔａｃｃｃｃａｇａａａｃｃａａａｇｃｇｔｔｃｇａａａｃｔａｃｃａａｃｇｃｇａｔｃｇａａａａｃｇｇｃｇｃｔｃｇｔｇａａｇｔｃｇａｃａｔｇｇｔａａｔｃａａｃａｔｔｇｇｃｇｃｔｃｔｇａａａｔｃｔｇｇｔｃａｇｇａｃｇａａｃｔｇｇｔａｇａｇｃｇｔｇａｃａｔｃｃｇｃｇｃｃｇｔｃｇｔａｇａａｇｃｔｇｃｇｇｃａｇｇｃｃｇｔｇｃａｃｔｇｇｔａａａａｇｔａａｔｃｇｔｔｇａａａｃｃｇｃｔｃｔｇｃｔｇａｃｔｇａｔｇａａｇａｇａａａｇｔｔｃｇｔｇｃｇｔｇｔｃａｇｃｔｇｇｃｇｇｔｔａａａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇａｔｔａｃｇｔｇａａａａｃｇａｇｃａｃｔｇｇｔｔｔｃｔｃｃｇｇｔｇｇｔｇｇｃｇｃｔａｃｔｇｔｃｇａａｇａｃｇｔｇｇｃｇｃｔｇａｔｇｃｇｔａａａａｃｃｇｔａｇｇｃｇａｔｃｇｃｇｃａｇｇｃｇｔｔａａａｇｃｇａｇｃｇｇｃｇｇｔｇｔｔｃｇｔｇａｔｔｇｇａａｇａｃｔｇｃｃｇａａｇｃｔａｔｇａｔｔａａｃｇｃａｇｇｃｇｃｇａｃｔｃｇｔａｔｃｇｇｃａｃｔｔｃｔａｇｃｇｇｃｇｔｇｇｃａａｔｔｇｔｔａｃｔｇｇｃｇｇｃａｃｃｇｇｔｃｇｃｇｃｔｇａｃａｃｔａａａｔｇｇｔａａ
【０１８５】
（実施例３６）
配列番号１３−ＤＥＲＡ１０６のヌクレオチド配列
ａｔｇａｃｔａｔｃｇｃｔａａａａｔｇａｔｔｇａｔｃａｃａｃｇｇｃｇｃｔｇａａｇｃｃａｇａｔａｃｃａｃｃａａａｇａａｃａａａｔｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｃｃａａａｇａａｇｃａｃｇｔｇａａｔａｔｇｇｃｔｔｔｇｃｔａｇｃｇｔｃｔｇｔｇｔｇａａｔｃｃｇａｃｔｔｇｇｇｔｇａａａｃｔｇｔｃｔｇｃｇｇａａｃａｇｃｔｇａｇｃｇｇｃｇｃｔｇａａｔｃｔｇｔｇｇｔｇｔｇｃａｃｃｇｔｃａｔｃｇｇｔｔｔｔｃｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｇａａｔａｃｔｃｃｇｇａａｇｔｇａａｇｇｃａｔｔｃｇａａｇｔａａａａａａｃｇｃｔａｔｃｇａａａａｃｇｇｃｇｃｇａａｇｇａａｇｔａｇａｔａｔｇｇｔｔａｔｃａａｃａｔｔｇｇｔｇｃｔｃｔｇａａｇｇａｔａａｇｇａｃｇａｃｇａａｃｔｇｇｔｇｇａａｃｇｔｇａｔａｔｃｃｇｔｇｃｃｇｔｃｇｔｇｇａｔｇｃｔｇｃｔａａａｇｇｔａａａｇｃｇｃｔｇｇｔｇａａａｇｔｃａｔｔａｔｃｇａａａｃｃｔｇｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａｔｇａａｇａｇａａｇｇｔｃｃｇｔｇｃｔｔｇｃｇａａａｔｃｇｃｃｇｔｇａａａｇｃｔｇｇｃａｃｔｇａｔｔｔｃｇｔｔａａａａｃｔｔｃｔａｃｔｇｇｃｔｔｔｔｃｔａｃｔｇｇｔｇｇｃｇｃｇａｃｔｇｃａｇａａｇａｃａｔｃｇｃａｃｔｇａｔｇｃｇｔａａｇａｃｔｇｔｃｇｇｔｃｃｇａａｃａｔｃｇｇｔｇｔａａａａｇｃｇｔｃｃｇｇｔｇｇｔｇｔｔｃｇｔａｃｔａａａｇａａｇａｃｇｔｔｇａｇａａｇａｔｇａｔｃｇａａｇｃｇｇｇｔｇｃｃａｃｃｃｇｔａｔｃｇｇｃｇｃｔｔｃｔｇｃａｇｇｔｇｔｇｇｃａａｔｃｇｔａｔｃｃｇｇｔｇａａａａａｃｃｇｇｃｇａａａｃｃｔｇａｃａａｃａｃｃａａｇｔｇｇｔａａ
【０１８６】
（実施例３７）
配列番号１４−ＤＥＲＡ１０７のヌクレオチド配列
ａｔｇｔｃｔｃｇｃｔｃｔａｔｔｇｃａｃａａａｔｇａｔｃｇａｔｃａｃａｃｃｃｔｇｃｔｇａａａｃｃｔａａｔａｃｃａｃｃｇａａｇａｃｃａｇａｔｃｇｔｇａａａｃｔｇｔｇｃｇａａｇａｇｇｃｔａａａｇａａｔａｃｔｃｔｔｔｃｇｃｃｔｃｃｇｔａｔｇｃｇｔｃａａｃｃｃａａｃｇｔｇｇｇｔｃｇｃｇｃｔｇｇｃａｇｃｇｃａｇｃｔｇｃｔｇａａａｇａｃｇｃｔｃｃｔｇａｔｇｔｇａａａｇｔｇｔｇｃａｃｔｇｔｔａｔｃｇｇｃｔｔｃｃｃａｃｔｇｇｇｔｇｃａａｃｃａｃｇｃｃｔｇａａｇｔａａａａｇｃｇｔｔｔｇａａａｃｃａｃｔａａｃｇｃａａｔｃｇａｇａａｃｇｇｃｇｃａａｃｇｇａｇｇｔｔｇａｔａｔｇｇｔｔａｔｃａａｃａｔｃｇｇｔｇｃｃｃｔｇａａｇｇａｃａａａｃａｇｔａｃｇａａｃｔｇｇｔｔｇｇｔｃｇｔｇａｔａｔｃｃａｇｇｃｔｇｔｔｇｔｇａａｇｇｃａｇｃａｇａａｇｇｃａａａｇｃｃｃｔｇａｃｃａａａｇｔｇａｔｔａｔｃｇａａａｃｃｔｃｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａａｇａａｇａａａａｇａａｇｇｃｇｇｃｔｔｇｔｇａａｃｔｇｇｃｇｇｔａａａａｇｃａｇｇｔｇｃｔｇａｔｔｔｃｇｔｃａａａａｃｇｔｃｔａｃｃｇｇｔｔｔｃｔｃｔｇｇｔｇｇｃｇｇｔｇｃａａｃｃｇｃａｇａａｇａｃａｔｔｇｃｃｃｔｇａｔｇｃｇｔａａｇｇｔｔｇｔｔｇｇｔｃｃｔａａｃｃｔｇｇｇｃｇｔｔａａｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｇｇｔｇｔｇｃｇｔｇａｃｃｔｇｔｃｔｇａｃｇｃｇａａｇｇｃｇａｔｇａｔｔｇａｃｇｃｇｇｇｃｇｃｇａｃｔｃｇｔａｔｃｇｇｃｇｃｔｔｃｃｇｃａｇｇｔｇｔｔｇｃｇａｔｃｇｔｔａａｔｇｇｔｇａａｃｇｃｔｃｔｇａａｇｇｔｔｃｃａｃｇａａａｔｇｇａｃｃｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃｇｇｃｇａｃｇａｃｇｔｇｃｇｃｔｔｇｔａｃｇｇｇｃｇｇｃｔａａ
【０１８７】
（実施例３８）
配列番号１５−ＤＥＲＡ１０８のヌクレオチド配列
ａｔｇａａａｃｔｇａａｃａａａｔａｃａｔｃｇａｔｃａｃａｃｃａｔｃｃｔｇａａａｃｃｇｇａａａｃｇａｃｔｃａｇｇａａｃａｇｇｔｇｇａｇａａａａｔｃｃｔｇｇｃｔｇａａｇｃｇａａａｇａａｔａｃｇａｔｔｔｃｇｃｇｔｃｃｇｔｃｔｇｃｇｔｔａａｃｃｃｇａｃｇｔｇｇｇｔａｇｃｔｃｔｇｇｃａｇｃｔｇａａａｇｃｃｔｇａａａｇａｔａｇｃｇａｃｇｔｃａａａｇｔｃｔｇｃａｃｔｇｔｃａｔｃｇｇｃｔｔｃｃｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｔａａｃａｃｔｃｃｇｇｃａｇｔｇａａｇｇｃｇｔｔｃｇａａａｃｔａａａｇａｃｇｃｔａｔｔａｇｃａａｃｇｇｃｇｃｇｇａｔｇａａａｔｃｇａｃａｔｇｇｔｇａｔｔａａｃａｔｃｇｇｃｇｃａｃｔｇａａａａｃｇｇｇｔａａｃｔａｃｇａｔｃｔｇｇｔｔｃｔｇｇａａｇａｔａｔｔａａｇｇｃｔｇｔｃｇｔｔｇｃａｇｃａａｇｃｇｇｃｇａｔａａａｃｔｇｇｔａａａｇｇｔａａｔｃａｔｃｇａａｇｃｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａｃｇａｔｇａａａａｇｇｔｔａａａｇｃｇｔｇｃｃａｇｃｔｇｔｃｔｃａｇｇａａｇｃｇｇｇｃｇｃｔｇａｃｔａｃｇｔｃａａｇａｃｇａｇｃａｃｔｇｇｃｔｔｃｔｃｔａｃｃｇｇｃｇｇｔｇｃｇａｃｇｇｔｃｇｃａｇａｔｇｔｔｇｃｔｃｔｇａｔｇｃｇｔａａａａｃｔｇｔｔｇｇｃｃｃｇｇａｃａｔｇｇｇｃｇｔａａａａｇｃｇｔｃｔｇｇｃｇｇｔｇｃｇｃｇｃｔｃｔｔａｃｇａａｇａｃｇｃｔａｔｃｇｃｇｔｔｃａｔｔｇａａｇｃｔｇｇｃｇｃａａｇｃｃｇｔａｔｔｇｇｃｇｃｃａｇｃｔｃｔｇｇｃｇｔｇｇｃｇａｔｃａｔｇａａｔｇｇｔｇｃｇｃａｇｇｃｔｇａｔｇｇｃｇａｃａｃｃａａｇｔｇｇｔａａ
【０１８８】
（実施例３９）
配列番号１６−ＤＥＲＡ０３のアミノ酸配列
Ｍｔｄｌｋａｓｓｌｒａｌｋｌｍｄｌｔｔｌｎｄｄｄｔｄｅｋｖｉａｌｃｈｑａｋｔｐｖｇｎｔａａｉｃｉｙｐｒｆｉｐｉａｒｋｔｌｋｅｑｇｔｐｅｉｒｉａｔｖｔｎｆｐｈｇｎｄｄｉｄｉａｌａｅｔｒａａｉａｙｇａｄｅｖｄｖｖｆｐｙｒａｌｍａｇｎｅｑｖｇｆｄｌｖｋａｃｋｅａｃａａａｎｖｌｌｋｖｉｉｅｔｇｅｌｋｄｅａｌｉｒｋａｓｅｉｓｉｋａｇａｄｆｉｋｔｓｔｇｋｖａｖｎａｔｐｅｓａｒｉｍｍｅｖｉｒｄｍｇｖｅｋｔｖｇｆｋｐａｇｇｖｒｔａｅｄａｑｋｙｌａｉａｄｅｌｆｇａｄｗａｄａｒｈｙｒｆｇａｓｓｌｌａｓｌｌｋａｌｇｈｇｄｇｋｓａｓｓｙ．
【０１８９】
（実施例４０）
配列番号１７−ＤＥＲＡ０４のアミノ酸配列
Ｍｇｎｉａｋｍｉｄｈｔｌｌｋｐｅａｔｅｑｑｉｖｑｌｃｔｅａｋｑｙｇｆａａｖｃｖｎｐｔｗｖｋｔａａｒｅｌｓｇｔｄｖｒｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｔｔｐｅｔｋａｆｅｔｔｎａｉｅｎｇａｒｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｓｇｑｄｅｌｖｅｒｄｉｒａｖｖｅａａａｇｒａｌｖｋｖｉｖｅｔａｌｌｔｄｅｅｋｖｒａｃｑｌａｖｋａｇａｄｙｖｋｔｓｔｇｆｓｇｇｇａｔｖｅｄｖａｌｍｒｋｔｖｇｄｒａｇｖｋａｓｇｇｖｒｄｗｋｔａｅａｍｉｎａｇａｔｒｉｇｔｓｓｇｖａｉｖｔｇｇｔｇｒａｄｙ．
【０１９０】
（実施例４１）
配列番号１８−ＤＥＲＡ０６のアミノ酸配列
Ｍｇｌａｓｙｉｄｈｔｌｌｋａｔａｔｌａｄｉｒｔｌｃｅｅａｒｅｈｓｆｙａｖｃｉｎｐｖｆｉｐｈａｒａｗｌｅｇｓｄｖｋｖａｔｖｃｇｆｐｌｇａｉｓｓｅｑｋａｌｅａｒｌｓａｅｔｇａｄｅｉｄｍｖｉｈｉｇｓａｌａｇｄｗｄａｖｅａｄｖｒａｖｒｒａｖｐｅｑｖｌｋｖｉｉｅｔｃｙｌｔｄｅｑｋｒｌａｔｅｖａｖｑｇｇａｄｆｖｋｔｓｔｇｆｇｔｇｇａｔｖｄｄｖｒｌｍａｅｖｉｇｇｒａｇｌｋａａｇｇｖｒｔｐａｄａｑａｍｉｅａｇａｔｒｌｇｔｓｇｇｖｇｌｖｓｇｇｅｎｇａｇｙ．
【０１９１】
（実施例４２）
配列番号１９−ＤＥＲＡ０８のアミノ酸配列
Ｍｇｉａｋｍｉｄｈｔａｌｋｐｄｔｔｋｅｑｉｌｔｌｔｋｅａｒｅｙｇｆａｓｖｃｖｎｐｔｗｖｋｌｓａｅｑｌａｇａｅｓｖｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｎｔｐｅｖｋａｆｅｖｋｄａｉｑｎｇａｋｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｄｋｄｄｅｌｖｅｒｄｉｒａｖｖｄａａｋｇｋａｌｖｋｖｉｉｅｔｃｌｌｔｄｅｅｋｖｒａｃｅｉａｖｋａｇｔｄｆｖｋｔｓｔｇｆｓｔｇｇａｔａｅｄｉａｌｍｒｋｔｖｇｐｎｉｇｖｋａｓｇｇｖｒｔｋｅｄｖｅｋｍｉｅａｇａｔｒｉｇａｓａｇｖａｉｖｓｇｅｋｐａｋｐｄｎｙ．
【０１９２】
（実施例４３）
配列番号２０−ＤＥＲＡ１１のアミノ酸配列
Ｍｔｓｎｑｌａｑｙｉｄｈｔａｌｔａｅｋｎｅｑｄｉｓｔｌｃｎｅａｉｅｈｇｆｙｓｖｃｉｎｓａｙｉｐｌａｋｅｋｌａｇｓｎｖｋｉｃｔｖｖｇｆｐｌｇａｎｌｔｓｖｋａｆｅｔｑｅｓｉｋａｇａｎｅｉｄｍｖｉｎｖｇｗｉｋｓｑｋｗｄｅｖｋｑｄｉｑａｖｆｎａｃｎｇｔｐｌｋｖｉｌｅｔｃｌｌｔｋｄｅｉｖｋａｃｅｉｃｋｅｉｇｖａｆｖｋｔｓｔｇｆｎｋｇｇａｔｖｅｄｖａｌｍｋｎｔｖｇｎｉｇｖｋａｓｇｇｖｒｄｔｅｔａｌａｍｉｋａｇａｔｒｉｇａｓａｇｉａｉｉｓｇｔｑｄｔｑｓｔｙ．
【０１９３】
（実施例４４）
配列番号２１−ＤＥＲＡ１２のアミノ酸配列
Ｍｉｅｙｒｉｅｅａｖａｋｙｒｅｆｙｅｆｋｐｖｒｅｓａｇｉｅｄｖｋｓａｉｅｈｔｎｌｋｐｆａｔｐｄｄｉｋｋｌｃｌｅａｒｅｎｒｆｈｇｖｃｖｎｐｃｙｖｋｌａｒｅｅｌｅｇｔｄｖｋｖｖｔｖｖｇｆｐｌｇａｎｅｔｒｔｋａｈｅａｉｆａｖｅｓｇａｄｅｉｄｍｖｉｎｖｇｍｌｋａｋｅｗｅｙｖｙｅｄｉｒｓｖｖｅｓｖｋｇｋｖｖｋｖｉｉｅｔｃｙｌｄｔｅｅｋｉａａｃｖｉｓｋｌａｇａｈｆｖｋｔｓｔｇｆｇｔｇｇａｔａｅｄｖｈｌｍｋｗｉｖｇｄｅｍｇｖｋａｓｇｇｉｒｔｆｅｄａｖｋｍｉｍｙｇａｄｒｉｇｔｓｓｇｖｋｉｖｑｇｇｅｅｒｙｇｇ．
【０１９４】
（実施例４５）
配列番号２２−ＤＥＲＡ１５のアミノ酸配列
Ｍｐｓａｒｄｉｌｑｑｇｌｄｒｌｇｓｐｅｄｌａｓｒｉｄｓｔｌｌｓｐｒａｔｅｅｄｖｒｎｌｖｒｅａｓｄｙｇｆｒｃａｖｌｔｐｖｙｔｖｋｉｓｇｌａｅｋｌｇｖｋｌｃｓｖｉｇｆｐｌｇｑａｐｌｅｖｋｌｖｅａｑｔｖｌｅａｇａｔｅｌｄｖｖｐｈｌｓｌｇｐｅａｖｙｒｅｖｓｇｉｖｋｌａｋｓｙｇａｖｖｋｖｉｌｅａｐｌｗｄｄｋｔｌｓｌｌｖｄｓｓｒｒａｇａｄｉｖｋｔｓｔｇｖｙｔｋｇｇｄｐｖｔｖｆｒｌａｓｌａｋｐｌｇｍｇｖｋａｓｇｇｉｒｓｇｉｄａｖｌａｖｇａｇａｄｉｉｇｔｓｓａｖｋｖｌｅｓｆｋｓｌｖ．
【０１９５】
（実施例４６）
配列番号２３−ＤＥＲＡ１０１のアミノ酸配列
ｍａａｎｋｙｅｍａｆａｑｆｄｐａｅｓｅｅｒｉｌｌｋｔｄｑｉｉｒｄｈｙｓｒｆｄｔｐｅｔｋｋｆｌｈｇｖｉｄｌｔｓｌｎａｔｄｓｅｅｓｉｔｋｆｔｅｓｖｎｄｆｅｄｔｄｐｔｉｐｓｖａａｉｃｖｙｐｎｆｖｓｔｖｒｅｔｌｔａｅｎｖｋｖａｓｖｓｇｃｆｐａｓｑｓｆｉｅｖｋｌａｅｔａｌａｖｓｄｇａｄｅｉｄｉｖｌｎｍｇｋｆｌｓｇｄｙｅａａａｔｅｉｅｅｑｉａａａｋｇａｔｖｋｖｉｌｅｔｇａｌｋｔｐｅｎｉｒｒａｔｉｌｓｌｆｃｇａｈｆｖｋｔｓｔｇｋｇｙｐｇａｓｌｅａａｙｔｍｃｋｖｌｋｑｙｙｇｌｆｇｅｖｒｇｉｋｌｓｇｇｉｒｔｔｅｄａｖｋｙｙｃｌｉｅｔｌｌｇｋｅｗｌｔｐａｙｆｒｉｇａｓｓｌｖｄａｌｒｑｄｉｍｖ．
【０１９６】
（実施例４７）
配列番号２４−ＤＥＲＡ１０２のアミノ酸配列
ｍｅｌｎｒｍｉｄｈｔｉｌｋｐｅａｔｅａａｖｑｋｉｉｄｅａｋｅｙｎｆｆｓｖｃｉｎｐｃｗｖａｆａｓｅｑｌａｄｔｄｖａｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｎｔｐｅｖｋａｙｅａａｄａｉｋｎｇａｎｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｓｑｑｙｄｙｖｒｑｄｉｑｇｖｖｄａａｋｇｋａｌｖｋｖｉｉｅｔａｌｌｔｄｅｅｋｖｋａｃｅｌａｋｅａｇａｄｆｖｋｔｓｔｇｆｓｔｇｇａｋｖａｄｉｒｌｍｒｅｔｖｇｐｄｍｇｖｋａｓｇｇｖｈｎａｅｅａｌａｍｉｅａｇａｔｒｉｇａｓｔｇｖａｉｖｓｇａｔｇｅｇｔｋｗ．
【０１９７】
（実施例４８）
配列番号２５−ＤＥＲＡ１０３のアミノ酸配列
ｍｔｉｅｓａｉａｌａｐａｅｒａｖｎｌｉｇｓｄｌｔｅｋｓｌｋｌｈｌｅｇｌｓｇｖｄａｖｇｌｅｑｒａａｇｌｓｔｒｓｉｋｔｔｓｋａｗａｌｄｔｉｉｋｌｉｄｌｔｔｌｅｇａｄｔｐｇｋｖｒｓｌａａｋａｍｌｐｄａｓｄｖｓａｐｑｖａａｖｃｖｙｇｄｍｖｐｙａａｅａｌｇｓｓｗｓｎｇｓｄｎｇｉｎｖａａｖａｔａｆｐｓｇｒｓｓｌｐｉｋｉａｄｔｋｅａｖａｈｇａｄｅｉｄｍｖｉｄｒｇａｆｌｓｇｋｙｇｖｖｆｄｑｉｖａｖｋｅａｃｒｒｅｎｇｔｙａｈｌｋｖｉｌｅｔｇｅｌｎｔｙｄｎｖｒｒａｓｗｌａｉｌａｇｇｄｆｖｋｔｓｔｇｋｖｓｐａａｔｌｐｖｔｌｌｍｌｅｖｖｒｄｗｈｖｌｔｇｅｋｉｇｖｋｐａｇｇｉｒｓｓｋｄａｉｋｙｌｖｔｖａｅｔｖｇｅｅｗｌｑｐｈｌｆｒｆｇａｓｓｌｌｎｄｖｌｍｑｒｑｋｌｓｔｇｈｙｓｇｐｄｙｖｔｉｄ．
【０１９８】
（実施例４９）
配列番号２６−ＤＥＲＡ１０４のアミノ酸配列
ｍｓｓｔｐｔｉｌｄｐａｆｅｄｖｔｒｓｅａｓｌｒｒｆｌｈｇｌｐｇｖｄｑｖｇａｅａｒａａｇｌａｔｒｓｉｋｔｓａｋｅｆａｌｄｌａｉｒｍｖｄｌｔｔｌｅｇｑｄｔｐｇｋｖｒａｌｓａｋａｍｒｐｄｐｓｄｐｔｃｐａｔａａｖｃｖｙｐｄｍｖｇｉａｋｑａｌｇｔｓｇｖｈｖａａｖａｔａｆｐｓｇｒａａｌｄｉｋｌａｄｖｒｄａｖｄａｇａｄｅｉｄｍｖｉｄｒｇａｆｌａｇｒｙｑｈｖｙｄｅｉｖａｖｒｅａｃｒｒｅｎｇｅｇａｈｌｋｖｉｆｅｔｇｅｌｑｔｙｄｎｖｒｒａｓｗｌａｍｍａｇａｈｆｖｋｔｓｔｇｋｖｑｐａａｔｌｐｖｔｌｖｍｌｑａｖｒｄｆｒｇａｔｇｒｍｖｇｖｋｐａｇｇｉｒｔａｋｄａｉｋｙｌｖｍｖｎｅｖａｇｅｄｗｌｄｐｄｗｆｒｆｇａｓｔｌｌｎｄｌｌｍｑｒｔｋｍｋｔｇｒｙｓｇｐｄｙｆｔｌｄ．
【０１９９】
（実施例５０）
配列番号２７−ＤＥＲＡ１０５のアミノ酸配列
ｍｅｌｉｔｑｐｓｃｗｖｆｓｖｆｆｒｒｑｙｇｗｌｖｆｖｅｇａｗｙｄｇｒｒｑｔｆｈｌｄｇｎｇｒｋｇｆｌｒｍｔｍｎｉａｋｍｉｄｈｔｌｌｋｐｅａｔｅｑｑｉｖｑｌｃｔｅａｋｑｙｇｆａｓｖｃｖｎｐｔｗｖｋｔａａｒｅｌｓｇｔｄｖｒｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｔｔｐｅｔｋａｆｅｔｔｎａｉｅｎｇａｒｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｓｇｑｄｅｌｖｅｒｄｉｒａｖｖｅａａａｇｒａｌｖｋｖｉｖｅｔａｌｌｔｄｅｅｋｖｒａｃｑｌａｖｋａｇａｄｙｖｋｔｓｔｇｆｓｇｇｇａｔｖｅｄｖａｌｍｒｋｔｖｇｄｒａｇｖｋａｓｇｇｖｒｄｗｋｔａｅａｍｉｎａｇａｔｒｉｇｔｓｓｇｖａｉｖｔｇｇｔｇｒａｄｔｋｗ．
【０２００】
（実施例５１）
配列番号２８−ＤＥＲＡ１０６のアミノ酸配列
ｍｔｉａｋｍｉｄｈｔａｌｋｐｄｔｔｋｅｑｉｌｔｌｔｋｅａｒｅｙｇｆａｓｖｃｖｎｐｔｗｖｋｌｓａｅｑｌｓｇａｅｓｖｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｎｔｐｅｖｋａｆｅｖｋｎａｉｅｎｇａｋｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｄｋｄｄｅｌｖｅｒｄｉｒａｖｖｄａａｋｇｋａｌｖｋｖｉｉｅｔｃｌｌｔｄｅｅｋｖｒａｃｅｉａｖｋａｇｔｄｆｖｋｔｓｔｇｆｓｔｇｇａｔａｅｄｉａｌｍｒｋｔｖｇｐｎｉｇｖｋａｓｇｇｖｒｔｋｅｄｖｅｋｍｉｅａｇａｔｒｉｇａｓａｇｖａｉｖｓｇｅｋｐａｋｐｄｎｔｋｗ．
【０２０１】
（実施例５２）
配列番号２９−ＤＥＲＡ１０７のアミノ酸配列
ｍｓｒｓｉａｑｍｉｄｈｔｌｌｋｐｎｔｔｅｄｑｉｖｋｌｃｅｅａｋｅｙｓｆａｓｖｃｖｎｐｔｗｖａｌａａｑｌｌｋｄａｐｄｖｋｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｔｔｐｅｖｋａｆｅｔｔｎａｉｅｎｇａｔｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｄｋｑｙｅｌｖｇｒｄｉｑａｖｖｋａａｅｇｋａｌｔｋｖｉｉｅｔｓｌｌｔｅｅｅｋｋａａｃｅｌａｖｋａｇａｄｆｖｋｔｓｔｇｆｓｇｇｇａｔａｅｄｉａｌｍｒｋｖｖｇｐｎｌｇｖｋａｓｇｇｖｒｄｌｓｄａｋａｍｉｄａｇａｔｒｉｇａｓａｇｖａｉｖｎｇｅｒｓｅｇｓｔｋｗｔａａｇａａｔｔｃａｃｔｇｇ．
【０２０２】
（実施例５３）
配列番号３０−ＤＥＲＡ１０８のアミノ酸配列
ｍｋｌｎｋｙｉｄｈｔｉｌｋｐｅｔｔｑｅｑｖｅｋｉｌａｅａｋｅｙｄｆａｓｖｃｖｎｐｔｗｖａｌａａｅｓｌｋｄｓｄｖｋｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｎｔｐａｖｋａｆｅｔｋｄａｉｓｎｇａｄｅｉｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｔｇｎｙｄｌｖｌｅｄｉｋａｖｖａａｓｇｄｋｌｖｋｖｉｉｅａｃｌｌｔｄｄｅｋｖｋａｃｑｌｓｑｅａｇａｄｙｖｋｔｓｔｇｆｓｔｇｇａｔｖａｄｖａｌｍｒｋｔｖｇｐｄｍｇｖｋａｓｇｇａｒｓｙｅｄａｉａｆｉｅａｇａｓｒｉｇａｓｓｇｖａｉｍｎｇａｑａｄｇｄｔｋｗ．
【０２０３】
その限りでないが、発行された特許、特許出願、および学術誌の論文を含めて、本出願で引用したすべての刊行物はそれぞれ、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０２０４】
本発明について、開示する実施形態に即して上で述べてきたが、当業者ならば、詳述した特定の実験が本発明の実例にすぎないことは容易にわかるであろう。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってしか限定されない。
【図面の簡単な説明】
【０２０５】
【図１】４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドの実験的な粉末Ｘ線回折パターンを示すグラフである。横軸の尺度は２θの度数である。縦軸は数値の強度である。
【図２】４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）温度記録である。
【図３】４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドの赤外線（ＦＴＩＲ）スペクトルを示すグラフである。
【図４】４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのラマンスペクトルを示すグラフである。
【図５】（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの実験的な粉末Ｘ線回折パターンを示すグラフである。横軸の尺度は２θの度数である。縦軸は数値の強度である。
【図６】（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）温度記録を示すグラフである。
【図７】（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの赤外線（ＦＴＩＲ）スペクトルを示すグラフである。
【図８】（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのラマンスペクトルを示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キラル化合物を作製するための酵素化学的な２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
酵素化学的方法におけるＤＥＲＡ（デオキシリボースアルドラーゼ）ファミリーのアルドラーゼの使用は、記載されている。米国特許第５７９５７４９号、ＷＯ０３／００６６５６、ＷＯ２００４／０２７０７５、ＷＯ２００５／０１２２４６；Ｇｉｊｓｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｍ．ら、ＪＡＣＳ、１９９４年、第１１６巻、８４２２〜８４２３ページ；Ｇｉｊｓｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｍ．ら．、ＪＡＣＳ、１９９５年、第１１７巻、７５８５〜７５９１ページ；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｗ．Ａ．ら．、ＰＮＡＳ、２００４年、第１０１巻、５７８８〜５７９３ページ、米国特許第６９６４８６３号、およびＢｉｏｔｅｃｈｏｎｏｌ Ｊ、第１０１巻、５３７〜５４８ページ（２００６年）を参照されたい。しかし、これらの方法には、全収率が不十分であるばかりでなく、生成物の混合物をもたらすものもあった。さらに、これらの方法は、特定の基質に限定されていた。
【特許文献１】米国特許第５７９５７４９号
【特許文献２】ＷＯ０３／００６６５６
【特許文献３】ＷＯ２００４／０２７０７５
【特許文献４】ＷＯ２００５／０１２２４６
【非特許文献１】Ｇｉｊｓｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｍ．ら、ＪＡＣＳ、１９９４年、第１１６巻、８４２２〜８４２３ページ
【非特許文献２】Ｇｉｊｓｅｎ，Ｈ．Ｊ．Ｍ．ら．、ＪＡＣＳ、１９９５年、第１１７巻、７５８５〜７５９１ページ
【非特許文献３】Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｗ．Ａ．ら．、ＰＮＡＳ、２００４年、第１０１巻、５７８８〜５７９３ページ
【特許文献５】米国特許第６９６４８６３号
【非特許文献４】Ｂｉｏｔｅｃｈｏｎｏｌ Ｊ、第１０１巻、５３７〜５４８ページ（２００６年）
【非特許文献５】Ｗｉｌｌｉａｍ Ａ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら．、ＰＮＡＳ（２００４年）、第１０１巻第１６号、５７８８〜５７９３ページ
【非特許文献６】Ｈａｒｕｈｉｋｏ Ｓａｋｕｒａｂａら．、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３年）、第２７８巻第１２号、１０７９９〜１０８０６ページ
【非特許文献７】ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、米国ニューヨーク、２００１年
【非特許文献８】Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、第２２７９巻（１９９２年）
【特許文献６】米国特許第５１５５２５１号
【非特許文献９】Ｂａｕｍａｎ Ｋ．Ｌ．、Ｂｕｔｌｅｒ Ｄ．Ｅ．、Ｄｅｅｒｉｎｇ Ｃ．Ｆ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ１９９２年、第３３巻：２２８３〜２２８４ページ
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
したがって、当技術分野では、代替基質にとって有効かつ効率的な酵素化学的方法が求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アセトアルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法に関する。
【０００５】
本発明はまた、前記アルドラーゼが２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）アルドラーゼである方法に関する。
【０００６】
本発明はまた、前記アルドラーゼが、
配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４、
配列番号３のヌクレオチド配列または配列番号１８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０６、
配列番号８のヌクレオチド配列または配列番号２３のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０１、
配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２、
配列番号１０のヌクレオチド配列または配列番号２５のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０３、
配列番号１１のヌクレオチド配列または配列番号２６のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０４、
配列番号１２のヌクレオチド配列または配列番号２７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０５、
配列番号１３のヌクレオチド配列または配列番号２８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０６、
配列番号１４のヌクレオチド配列または配列番号２９のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０７、
配列番号１５のヌクレオチド配列または配列番号３０のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０８、
またはアミノ酸配列同一性がその少なくとも約２０％であるアルドラーゼである方法に関する。
【０００７】
より詳細には、本発明はまた、前記アルドラーゼが、配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４、配列番号３のヌクレオチド配列または配列番号１８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０６、または配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２である方法に関する。
【０００８】
より詳細には、本発明はまた、前記アルドラーゼが、配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４である方法に関する。
【０００９】
より詳細には、本発明はまた、前記アルドラーゼが、配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２である方法に関する。
【００１０】
本発明はまた、前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質が３−フタルイミドプロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００１１】
本発明はまた、前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質がＮ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒドまたは３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００１２】
本発明はまた、前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質がＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００１３】
本発明は、
（ａ）アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応するラクトンを得るステップと、
（ｃ）そのように形成したラクトンを、酸性の触媒作用の下でイソプロピルアルコールおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと、
（ｄ）そのように形成したイソプロピルアセトニドエステルを塩基で処理して、対応するアミノアセトニドイソプロピルエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００１４】
本発明は、
（ａ）アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応するラクトンを得るステップと、
（ｃ）そのように形成したラクトンをシクロペンタノンと反応させて、対応するシクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステルを得るステップと、
（ｄ）そのように形成したシクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステルを塩基で処理して、対応するアミノシクロペンチリデンイソプロピルエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００１５】
本発明は、
（ａ）アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを、触媒的脱水素条件下で脱水素して、対応するヘプタン酸を得るステップと、
（ｃ）そのように形成した前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｄ）そのように形成した塩を、酸性の触媒作用の下でオルトギ酸トリイソプロピルおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと、
（ｅ）そのように形成したイソプロピルアセトニドエステルを塩基で処理して、対応するアミノジシクロヘキシルアミンイソプロピルエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００１６】
本発明は、
（ａ）アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｃ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｄ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと、
（ｅ）そのように形成したイソプロピルアセトニドエステルを塩基で処理して、対応するアミノアセトニドイソプロピルエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００１７】
本発明は、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドをアミノアルデヒド基質またはＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法に関する。
【００１８】
本発明はまた、前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドが、Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−アミノプロピオンアルデヒド、アミノアセトアルデヒド、Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、またはＮ−Ｆｍｏｃ−アミノアセトアルデヒドである方法に関する。
【００１９】
より詳細には、本発明はまた、前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００２０】
より詳細には、本発明はまた、前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒドまたはＮ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００２１】
より詳細には、本発明はまた、前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒドである方法に関する。
【００２２】
本発明はまた、前記アルドラーゼがＤＥＲＡ１０２である方法に関する。
【００２３】
本発明は、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドをアミノアルデヒド基質またはＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成し、そのように形成したラクトールを酸化させて、対応するラクトンを得るステップを含む方法に関する。
【００２４】
本発明は、
（ａ）ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドをアミノアルデヒド基質またはＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを触媒的脱水素条件下で脱水素して、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｃ）そのように形成した前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｄ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００２５】
本発明は、
（ａ）ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドをアミノアルデヒド基質またはＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップと、
（ｂ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｃ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｄ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと
を含む方法に関する。
【００２６】
本発明は、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、一般式（Ｉ）のアミノアルデヒド基質化合物
【００２７】
【化１】
［式中、
ｎ＝１、２、３、または４であり、
Ｒ’は、水素またはＮ保護基であり、
Ｒ”は、水素またはＮ保護基であり、またはＲ’およびＲ”は、これらが結合している窒素と一緒になって、５員または６員の複素環部分を形成している］と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法に関する。
【００２８】
本発明はまた、化合物２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオンに関する。
【００２９】
より詳細には、本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００３０】
【化２】
【００３１】
より詳細には、本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００３２】
【化３】
【００３３】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００３４】
【化４】
【００３５】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００３６】
【化５】
【００３７】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００３８】
【化６】
【００３９】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００４０】
【化７】
【００４１】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００４２】
【化８】
【００４３】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００４４】
【化９】
【００４５】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００４６】
【化１０】
【００４７】
本発明はまた、次式の化合物に関する。
【００４８】
【化１１】
【００４９】
本発明は、粉末Ｘ線回折ピークが約９．０、１２．７、２０．２、２２．６、および２５．２度２θにあることを特徴とする４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドの結晶形態に関する。
【００５０】
本発明は、粉末Ｘ線回折ピークが約６．３、１２．７、１６．８、２１．１、および２５．５度２θにあることを特徴とする（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの結晶形態に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５１】
定義
別段の指摘がない限り、以下の用語は、以下のとおりに定義される。
冠詞「ａ」または「ａｎ」は、本明細書では、それが指す対象の単複両方の形を指す。
【００５２】
用語「アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件」とは、本明細書では、本明細書で記載するようなアルドラーゼによって触媒され得る、当技術分野で知られている任意のアルドール縮合条件を指す。
【００５３】
本発明で使用するアルデヒドは、本明細書で記載するようなアルドラーゼの存在下、本明細書で記載するような基質とのアルドール縮合を経る任意のアルデヒドでよい。適切なアルデヒドの例は、その限りでないが、アセトアルデヒドである。
【００５４】
本発明で使用する基質は、任意のアミノアルデヒドまたはＮ保護されたアミノアルデヒドでよい。そのようなアミノアルデヒドまたはＮ保護されたアミノアルデヒドは、それぞれ本明細書に記載の、アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下でアルデヒドと反応する。
【００５５】
アミノアルデヒドに適するＮ保護基には、フタルイミド、Ｎ−ホルミル、スクシンイミド、ジ−ブトキシカルボニル（ジ−Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ）、ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、ベンジル、およびジベンジルが含まれるがこの限りでない。
【００５６】
適切なアミノアルデヒド基質の例には、その限りでないが、以下のものが含まれる。
【００５７】
【化１２】
【００５８】
本発明の一実施形態では、アミノアルデヒド基質は、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、またはＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒドまたはＮ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、３−アミノ−プロピオンアルデヒドである。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、アミノ−アセトアルデヒドである。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒド（Ａｌｄｒｉｃｈから市販されている）である。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒドである。本発明の別の実施形態では、アミノアルデヒド基質は、Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである。
【００５９】
Ｎ−Ｆｍｏｃ−アミノアルデヒドは両方とも、対応するＮ−Ｆｍｏｃアミノアルコールの標準のＤｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化によって得た。
【００６０】
Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒドは、３−アミノ−１−プロパノールから、２ステップの手順によって得た。すなわち、３−アミノ−１−プロパノールを酢酸メチルによってＮ−アセチル化した後、Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化を経て、妥当なＥＳＩ−ＭＳ［Ｍ＋Ｈ］＋１１６．２５および［Ｍ＋Ｎａ］＋１３８．２０を有する所望の生成物を得た。
【００６１】
本発明で使用するアルドラーゼは、それぞれ本明細書に記載のアミノアルデヒド基質、Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質、またはピロールアルデヒド基質に対してアルドラーゼ活性を有するどんな酵素でもよい。本発明の一実施形態では、アルドラーゼは、２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）である。適切なＤＥＲＡアルドラーゼの例には、その限りでないが、以下のものが含まれる。
ＤＥＲＡ０３（大腸菌）（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、米国ミズーリ州セントルイスから市販されている）、
ＤＥＲＡ０４（Ｗｉｌｌｉａｍ Ａ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら、ＰＮＡＳ（２００４年）、第１０１巻第１６号、５７８８〜５７９３ページまたはその改変型）、
ＤＥＲＡ０６（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿２９４９２９またはその改変型）、
ＤＥＲＡ０８（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿４６５５１９またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿４３９２７３）、
ＤＥＲＡ１２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿２２９３５９）、
ＤＥＲＡ１５（Ｈａｒｕｈｉｋｏ Ｓａｋｕｒａｂａら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２００３年）、第２７８巻第１２号、１０７９９〜１０８０６ページ）、
ＤＥＲＡ１０１（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿９０６０６８．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０２（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿８１３９７６．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０３（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿０１１３００４４．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０４（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＹＰ＿９２４７１５．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０５（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＹＰ＿１４８３５２．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０６（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿４７１４３７．１またはその改変型）、
ＤＥＲＡ１０７（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＮＰ＿２４２２１８．１またはその改変型）、および
ＤＥＲＡ１０８（ＧｅｎＢａｎｋアクセッションＺＰ＿００８７５０６９．１またはその改変型）。
【００６２】
本発明の一実施形態では、アルドラーゼは、本明細書に記載のＤＥＲＡアルドラーゼに対するアミノ酸配列同一性がその少なくとも約２０％、好ましくはその少なくとも７０％であるアルドラーゼである。本発明の一実施形態では、ＤＥＲＡアルドラーゼは、ＤＥＲＡ０４、ＤＥＲＡ０６、またはＤＥＲＡ１０２である。本発明の一実施形態では、ＤＥＲＡアルドラーゼはＤＥＲＡ１０２である。
【００６３】
本発明によれば、ＤＥＲＡ０３、ＤＥＲＡ０４、ＤＥＲＡ０６、ＤＥＲＡ０８、ＤＥＲＡ１１、ＤＥＲＡ１２、ＤＥＲＡ１５、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、およびＤＥＲＡ１０８は、実施例１〜３０に記載のこれらのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列によって確認される。
【００６４】
より詳細には、ＤＥＲＡ０３は、配列番号１のヌクレオチド配列および配列番号１６のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００６５】
ＤＥＲＡ０４は、配列番号２のヌクレオチド配列および配列番号１７のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００６６】
ＤＥＲＡ０６は、配列番号３のヌクレオチド配列および配列番号１８のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００６７】
ＤＥＲＡ０８は、配列番号４のヌクレオチド配列および配列番号１９のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００６８】
ＤＥＲＡ１１は、配列番号５のヌクレオチド配列および配列番号２０のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００６９】
ＤＥＲＡ１２は、配列番号６のヌクレオチド配列および配列番号２１のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７０】
ＤＥＲＡ１５は、配列番号７のヌクレオチド配列および配列番号２２のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７１】
ＤＥＲＡ１０１は、配列番号８のヌクレオチド配列および配列番号２３のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７２】
ＤＥＲＡ１０２は、配列番号９のヌクレオチド配列および配列番号２４のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７３】
ＤＥＲＡ１０３は、配列番号１０のヌクレオチド配列および配列番号２５のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７４】
ＤＥＲＡ１０４は、配列番号１１のヌクレオチド配列および配列番号２６のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７５】
ＤＥＲＡ１０５は、配列番号１２のヌクレオチド配列および配列番号２７のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７６】
ＤＥＲＡ１０６は、配列番号１３のヌクレオチド配列および配列番号２８のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７７】
ＤＥＲＡ１０７は、配列番号１４のヌクレオチド配列および配列番号２９のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７８】
ＤＥＲＡ１０８は、配列番号１５のヌクレオチド配列および配列番号３０のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００７９】
本明細書に記載のＤＥＲＡアルドラーゼは、その限りでないが、組換え型大腸菌中でタンパク質を発現させるための標準のプロトコル（ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌｌ、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、第３版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、米国ニューヨーク、２００１年）を含めて、当技術分野で知られているどんな手段によって調製してもよい。当業者には理解されるとおり、既知のＤＥＲＡアルドラーゼの改変型が必要となり、またはクローニング条件に応じて生じる場合もあるので、それらを本発明に包含する。
【００８０】
以下のスキームは、本発明を例示するものである。
【００８１】
調製Ａ
【００８２】
【化１３】
調製Ａでは、フタルイミドをベンジルトリメチルアンモニウム水酸化物（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｂ）の存在下でアクロレインと反応させることにより、３−フタルイミドプロピオンアルデヒドを調製する。反応液を約５３℃〜約６７．５℃の間の温度、好ましくは約６０℃で約３０分〜約３時間の間の期間、好ましくは約９０分間攪拌する。
【００８３】
調製Ｂ
【００８４】
【化１４】
調製Ｂでは、ギ酸エチルを１−アミノ−３，３−ジメトキシプロパンと反応させ、そのように形成したアミドを酸で処理することにより、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒドを調製する。
【００８５】
調製Ｃ
【００８６】
【化１５】
調製Ｃでは、１−アミノ−３，３−ジメトキシプロパンをＢＯＣ無水物と反応させ、そのように形成したアミドを酸で処理することにより、Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドを調製する。
【００８７】
調製Ｄ
【００８８】
【化１６】
調製Ｄでは、１−アミノ−３，３−ジメトキシプロパンを４−ジ（メチルアミノ）ピリジンの存在下でＢＯＣ無水物と反応させ、そのように形成したアミドを酸で処理することにより、Ｎ−ジ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドを調製する。
【００８９】
調製Ｅ
３−スクシンイミドプロピオンアルデヒド
触媒としてのナトリウムエトキシド、およびエタノールなどの極性プロトン性溶媒の存在下、スクシンイミドの溶液にアクロレインを加える。反応混合物を、約１０℃〜約４０℃の間の温度、好ましくは約２０〜３０℃で約２０時間〜約６０時間の期間、好ましくは約４８時間攪拌する。
【００９０】
【化１７】
【００９１】
スキーム１は一般に、本発明に包含される方法を記載している。スキーム１に記載のとおり、ＤＥＲＡアルドラーゼは、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）や水などの他の適切な溶媒の存在下で、３−フタルイミドプロピオンアルデヒドと２ｍｏｌのアセトアルデヒドとの２連続のアルドール縮合反応を触媒して、保護された所望のアミノ−ラクトール（Ａ）をもたらす。適切なＤＥＲＡアルドラーゼには、ＤＥＲＡ０４、ＤＥＲＡ０６、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、およびＤＥＲＡ１０８、好ましくはＤＥＲＡ０４およびＤＥＲＡ１０２が含まれるがこの限りでない。３−フタルイミドプロピオンアルデヒドとＤＥＲＡアルドラーゼの混合物に、アセトアルデヒドを約７時間〜約１２時間の期間、好ましくは約１０時間かけて加える。そのように形成した混合物を、約１５℃〜約３０℃の間の温度、好ましくは約２２℃で約２０時間〜約６０時間の間の期間、好ましくは約４８時間さらに攪拌する。
【００９２】
アミノ−ラクトール（Ａ）は、触媒的（たとえば白金担持炭素またはパラジウム担持炭素）脱水素を受けて、カルボン酸（Ｃ）を形成することができ、次いでラクトン化を受けて、（Ｂ）を形成することができる。
【００９３】
（Ａ）を（Ｃ）に転換する、当技術分野で知られているどんな触媒的脱水素手段も本発明に包含される。適切な触媒の例には、Ｐｔ／Ｃ、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｔ／Ｂｉ／Ｃ、Ｐｄ／Ｂｉ／Ｃ、および他の任意の脱水素触媒が含まれるがこの限りでない。本発明の一実施形態では、触媒的脱水素は、空気または酸素を末端酸化剤として使用して、ｐＨ約７〜ｐＨ約１０で実施する。
【００９４】
酸触媒、たとえばその限りでないが塩酸、硫酸、メタンスルホン酸（ＭＳＡ）、ｐ−トルエンスルホン酸（ＴＳＡ）、および当技術分野で知られている他の任意のラクトン化酸の使用を含むがこの限りでない、カルボン酸（Ｃ）をラクトン（Ｂ）に転換する、当技術分野で知られているどんなラクトン化手段も本発明に包含される。より詳細には、７−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインド−２−イル）−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸（Ｃ）を、酢酸エチルの存在下、無水塩酸で処理することにより、対応する２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ｂ）に転換する。反応液を室温で約１時間〜約４時間の間の期間、好ましくは約２〜３時間攪拌する。
【００９５】
別法として、ラクトール（Ａ）のラクトン（Ｂ）またはカルボン酸（Ｃ）への酸化は、所望の変換を実現する当技術分野で知られている任意の酸化手段を使用して実施することができる。より詳細には、２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ａ）を、亜塩素酸ナトリウムなどの酸化剤の存在下で酸化させて、対応する２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ｂ）に転換する。反応液を約１０℃〜約３０℃の温度、好ましくは約２３℃で約２時間〜約６時間の間の期間、好ましくは約４時間攪拌する。２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ａ）は、亜塩素酸ナトリウムなどの酸化剤、リン酸緩衝液、ジメチルスルホキシドなどの極性の非プロトン性溶媒や、イソプロパノールなどのアルコールの存在下で酸化させることによって、対応する７−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインド−２−イル）−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸（Ｃ）に転換することもできる。反応液を、約２時間〜約６時間の間の期間、好ましくは約４時間、室温かつ約５〜約６の間のｐＨに保つ。
【００９６】
７−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインド−２−イル）−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸（Ｃ）を、酢酸エチルの存在下、ジシクロヘキシルアミンで処理して、対応するジシクロヘキシルアミン（ＤＣＡ）塩（Ｄ）に転換する。次いで、ＤＣＡ塩（Ｄ）を、アセトンおよびメタンスルホン酸の存在下でＤＣＭ、オルトギ酸トリイソプロピルと反応させることにより、フタルイミドアセトニドイソプロピルエステル（Ｅ）に転換する。
【００９７】
フタルイミドアセトニドイソプロピルエステル（Ｅ）は、アセトンおよびメタンスルホン酸（ＭＳＡ）の存在下、２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ｂ）をイソプロピルアルコールと反応させて調製することもできる。反応混合物を室温かつ約１〜約２の間、好ましくは約１．５のｐＨで約２０時間〜約２８時間の間の期間、好ましくは約２４時間攪拌する。
【００９８】
フタルイミドアセトニドイソプロピルエステル（Ｅ）を、メタノールなどの極性のプロトン性溶媒の存在下、一級アミン、すなわちアルキルアミン、エチレンジアミンなどのジアミン、ヒドロキシルアミンといった塩基で処理することによって脱保護して、対応するアミノアセトニドイソプロピルエステル（Ｆ）を得る。反応混合物を室温で約３０分〜約４時間の間の期間、好ましくは約２時間攪拌した。
【００９９】
アミノアセトニドイソプロピルエステル（Ｆ）は、式ＩＩの４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド
【０１００】
【化１８】
とさらに反応させると、以下の式ＩＩＩの対応するピロール環含有アセトニドイソプロピルエステルが得られる。
【０１０１】
【化１９】
【０１０２】
本発明によれば、当業者には理解されるとおり、酵素的なステップの立体選択性は、ラセミ標準物質の化学的な調製および関連したキラルクロマトグラフィー法の開発によって確認することができる。
【０１０３】
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのＰＸＲＤパターンを図１に示す。
【０１０４】
（相対強度１３％より大きい）主要なピークを表１に示す。４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドは、９．０、１２．７、２０．２、２２．６、および２５．２度２θ＋０．１度で特徴的な回折ピークを示す。ＤＳＣ温度記録を図２に示す。４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドは、２１３℃±２℃で鋭い吸熱ピークを示す。ＦＴ−ＩＲスペクトルを図３で示す。ＦＴ−ＩＲピークテーブルを表２に示す。４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドは、６９６、１４９２、１３２７、８４３、１１５１ｃｍ−１で（この順に）特徴的なピークを示す。ＦＴ−ラマンスペクトルを図４で示す。ＦＴ−ラマンピークテーブルを表３に示す。４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドは、１００４、１１５、８７、８７７、１６０１ｃｍ−１で特徴的なピークを示す。
【０１０５】
【表１】
【０１０６】
【表２】
【０１０７】
【表３】
【０１０８】
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＰＸＲＤパターンを図５に示す。主要なピーク（相対強度１２％より大きい）を表４に示す。（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドは、６．３、１２．７、１６．８、２１．１、および２５．５度２θ＋０．１度で特徴的な回折ピークを示す。ＤＳＣ温度記録を図６に示す。（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドは、１６６℃±２℃で鋭い吸熱ピークを示す。ＦＴ−ＩＲスペクトルを図７で示す。ＦＴ−ＩＲピークテーブルを表５に示す。（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドは、８５１、１２２０、１０４７、７５７、１１５３ｃｍ−１で（この順に）特徴的なピークを示す。ＦＴ−ラマンスペクトルを図８で示す。ＦＴ−ラマンピークテーブルを表６に示す。（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドは、１５３１、９９７、１１４、９９、１６０５ｃｍ−１で特徴的なピークを示す。
【０１０９】
【表４】
【０１１０】
【表５】
【０１１１】
【表６】
【０１１２】
【化２０】
【０１１３】
スキーム２に記載のとおり、硫酸マグネシウムおよびメタンスルホン酸（ＭＳＡ）の存在下、２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン（Ｂ）をシクロペンタノンおよびイソプロピルアルコールと反応させて、シクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステル（Ｇ）を調製することができる。反応混合物を、室温かつ約１〜約２の間、好ましくは約１．５のｐＨで約２０時間〜約２８時間の間の期間、好ましくは約２４時間攪拌する。
【０１１４】
シクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステル（Ｇ）を、メタノールなどの極性のプロトン性溶媒の存在下、一級アミン、すなわちアルキルアミン、エチレンジアミンなどのジアミン、ヒドロキシアミンなどの塩基で処理することにより脱保護して、対応するアミノシクロペンチリデンイソプロピルエステル（Ｈ）を得る。反応混合物を、室温で約３０分〜約４時間の間の期間、好ましくは約２時間攪拌する。
【０１１５】
そのように形成したアミノシクロペンチリデンイソプロピルエステル（Ｈ）は、式ＩＩの４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド
【０１１６】
【化２１】
とさらに反応させて、以下の対応する式ＩＶのピロール環含有シクロペンチリデンイソプロピルエステル
【０１１７】
【化２２】
を得ることができる。
【０１１８】
【化２３】
【０１１９】
スキーム３は一般に、本発明に包含される方法を記載している。スキーム３に記載のとおり、ＤＥＲＡアルドラーゼは、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）と水などの適切な共溶媒の存在下で、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、Ｎ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、アミノアセトアルデヒド、Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、またはＮ−Ｆｍｏｃ−アミノアセトアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノプロピオンアルデヒド基質（すなわちＲ１＝保護基）と、２ｍｏｌのアセトアルデヒドとの２連続のアルドール縮合反応を触媒して、所望の保護されたアミノ−ラクトール（Ｉ）をもたらす。適切なＤＥＲＡアルドラーゼには、ＤＥＲＡ０４、ＤＥＲＡ０６、ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、およびＤＥＲＡ１０８、好ましくはＤＥＲＡ０４およびＤＥＲＡ１０２が含まれるがこの限りでない。Ｎ保護されたアミノアルデヒドとＤＥＲＡアルドラーゼの混合物に、約７時間〜約１２時間の間の期間、好ましくは約１０時間かけてアセトアルデヒドを加える。そのように形成した混合物を、約１５℃〜約３０℃の間の温度、好ましくは約２２℃で約２０時間〜約６０時間の間の期間、好ましくは約４８時間さらに攪拌する。
【０１２０】
アミノ−ラクトール（Ｉ）は、触媒的（たとえばＰｔ／Ｃ、Ｐｄ／Ｃ）脱水素を受けて、カルボン酸（Ｋ）を形成することができ、次いでラクトン化を受けて、（Ｊ）を形成することができる。
【０１２１】
（Ｉ）を（Ｋ）に転換する、当技術分野で知られているどんな触媒的脱水素手段も本発明に包含される。適切な触媒の例には、Ｐｔ／Ｃ、Ｐｄ／Ｃ、Ｐｔ／Ｂｉ／Ｃ、Ｐｄ／Ｂｉ／Ｃ、および他の任意の脱水素触媒が含まれるがこの限りでない。本発明の一実施形態では、触媒的脱水素は、空気または酸素を末端酸化剤として使用し、ｐＨ約７〜ｐＨ約１０で実施する。
【０１２２】
その限りでないが塩酸、硫酸、メタンスルホン酸（ＭＳＡ）、ｐ−トルエンスルホン酸（ＴＳＡ）、当技術分野で知られている他の任意のラクトン化酸などの酸触媒の使用を含むがこの限りでない、カルボン酸（Ｋ）をラクトン（Ｊ）に転換する、当技術分野で知られているどんなラクトン化手段も本発明に包含される。
【０１２３】
別法として、ラクトール（Ｉ）のラクトン（Ｊ）またはカルボン酸（Ｋ）への酸化は、所望の変換を実現する、当技術分野で知られている任意の酸化手段を使用して実施することができる。
【０１２４】
【化２４】
【０１２５】
スキーム４に記載のとおり、ＤＥＲＡアルドラーゼは、アミノアルデヒドまたはＮ保護されたアミノアルデヒドと２ｍｏｌのアセトアルデヒドとのアルドール縮合反応を触媒して、所望のアミノ−ラクトール（Ｍ）をもたらす。
【０１２６】
以下の非限定的な実施例は、本発明を例示するものである。
【０１２７】
（実施例１）
２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン
【０１２８】
【化２５】
３−フタルイミド−プロピオンアルデヒド（１０．０グラム、４９．２ｍｍｏｌ）を２０ｍＬのｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）に懸濁させた懸濁液に、ＤＥＲＡ０４ライセート（５２．０ｍＬ、１０４００単位、リン酸緩衝液ｐＨ７．０、０．０１Ｍ中の１３．０グラムの湿ったＤＥＲＡ０４細胞から調製したもの）およびリン酸緩衝液（１０２ｍＬ、ｐＨ７．０、０．０１Ｍ）からなる溶液を２２℃で激しく攪拌しながら加えた。水（１０ｍＬ）に溶解させたアセトアルデヒド（４．８グラム、１０８．２ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を、プログラミングされたポンプによって、反応混合物に１０時間継続的に加えた。反応混合物のｐＨは、１．０Ｎ水酸化ナトリウムでの滴定によって７．０に保った。反応混合物をさらに２２℃で１０時間攪拌し、転換を高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によってモニターした。２０時間後、高圧液体クロマトグラフィー分析によると、開始材料の約９５％が消費され、５０〜５５％の所望のラクトールが生成したが、得られる反応混合物をその後の酸化ステップでそのまま使用した。ラクトールのＬＣ−ＥＳＩＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋２９２．３。
【０１２９】
（実施例２）
２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン
【０１３０】
【化２６】
粗製ラクトールの懸濁液（２００ｍＬ、実施例１に従って調製したもの）に、ジメチルスルホキシド（１０ｍＬ）を攪拌しながら加えた。次いで、亜塩素酸ナトリウム（１．５当量、８．３グラム、Ａｌｄｒｉｃｈ）の水（１８ｍＬ）溶液を３０分間かけて滴下した。温度は、２０〜２５℃の範囲で調節した。反応混合物のｐＨは、４．０より高く保つべきである。４時間後、アセトン（２００ｍＬ）を加えた。反応混合物を０〜５℃で１時間攪拌し、次いでｂｕｃｈｅｌ漏斗中にてセライトパッド（１０グラム）で濾過した。濾過ケーキをアセトン（５０ｍＬ２回）で洗浄した。合わせたアセトン濾液を真空中で濃縮して、アセトンおよびｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）を除去した。残りの水溶液をｐＨ約４．０に調整し、酢酸エチル（１００ｍＬ３回）で抽出した。酢酸エチル溶液を合わせて硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で約１００ｍＬに濃縮し、これを硫酸マグネシウム（２グラム）存在下、無水塩酸（０．６ｍＬ、ジオキサン中４Ｍ）で処理し、室温で４時間攪拌した。次いで、反応混合物を飽和炭酸水素ナトリウム／ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。酢酸エチルの溶液を５０ｍＬに濃縮し、次いでこれに５０ｍＬのヘプタンを加えた。形成した固体を濾過し、ヘプタン（２０ｍＬ）で洗浄し、オーブンで乾燥させて、ラクトンを白色固体として得た（３ステップで４０％〜４５％、化学純度９５％、ｅｅ＞９９％、ｄｅ＞８６％）。ＬＣ−ＥＳＩＭＳ［Ｍ＋Ｎａ］＋ｍ／ｚ３１２．０。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．８２（ｍ，２Ｈ）、７．６８（ｍ，２Ｈ）、４．７８（ｍ，１Ｈ）、４．４１（ｍ，１Ｈ）、３．８４（ｍ，２Ｈ）、２．６５（ｍ，２Ｈ）、１．９４〜２．１４（ｍ，３Ｈ）、１．８１（ｍ，１Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、１００ＭＨｚ）δ１７０．１５、１６８．６１（２）、１３４．３２（２）、１３２．２０（２）、１２３．５８（２）、７３．８２（２）、６２．８５、３８．６３、３５．７０、３４．４７、３４．４０。
【０１３１】
（実施例３）
２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン
【０１３２】
【化２７】
ＤＥＲＡ１０２を含有する大腸菌細胞の懸濁液（４グラムの湿った細胞を１９０ｍＬのリン酸緩衝液、ｐＨ７．０、０．０１Ｍに懸濁させたもの）に、プログラミングされたポンプによって、ジメチルスルホキシド（１５ｍＬ）中の３−フタルイミド−プロピオンアルデヒド（２．０グラム、９．８ｍｍｏｌ）およびアセトアルデヒド（０．９６グラム、２１．８ｍｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）の混合物を１０時間かけて加えた。反応混合物をさらに２２℃で１４時間攪拌した。反応の進行は、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によってモニターした。２４時間後、反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ２回）で抽出した。遠心分離によって２層を分離した後、有機層を乾燥させ、蒸発にかけて、粗製のラクトール（１．６グラム、４５〜５０％）を固体として得、これをそのまま次の酸化ステップへと進めた。ラクトールのＬＣ−ＥＳＩＭＳ：ｍ／ｚ［Ｍ＋Ｈ］＋２９２．３。
【０１３３】
（実施例４）
７−（１，３−ジオキソ−１，３−ジヒドロ−イソインド−２−イル）−３，５−ジヒドロキシ−ヘプタン酸
【０１３４】
【化２８】
イソプロパノール（４．８ｍＬ）およびジメチルスルホキシド（１．０ｍＬ）中の粗製のラクトール（１．６グラム、実施例３に従って調製したもの）と２６ｍＬのリン酸緩衝液（ｐＨ６．０、０．０１Ｍ）の混合物に、亜塩素酸ナトリウム（０．９グラム、Ａｌｄｒｉｃｈ）の水（２ｍＬ）溶液を室温で加えた。反応混合物のｐＨは、５．０〜６．０の間に保った。４時間後、反応混合物を１Ｎ水酸化ナトリウムでｐＨ７．０に中和し、酢酸エチル（３０ｍＬ）で抽出した。有機層を除去した後、水層を１Ｎ塩酸でｐＨ４．０に酸性化し、酢酸エチル（３０ｍＬ３回）で抽出した。粗製の酸を含有する有機層を合わせてジシクロヘキシルアミン（１．５ｍＬ）で処理して、冷温（５〜１０℃）で対応するジシクロヘキシルアミン塩（１．５グラム、純度約９０％）を得た。ＬＣ−ＥＳＩＭＳｍ／ｚ［Ｍ＋Ｎａ］＋３３０．０。１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）：δ７．５９（ｍ，４Ｈ）、３．８８（ｍ，１Ｈ）、３．５８（ｍ，１Ｈ）、３．５６（ｍ，２Ｈ）、３．０３（ｍ，２Ｈ）、２．０７〜２．１９（ｍ，２Ｈ）、１．４０〜１．８２（ｍ，１４Ｈ）、０．８０〜１．２０（ｍ，１０Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、１００ＭＨｚ）δ１８０．２２、１７０．８２、１３４．６５（２）、１３１．５２（２）、１２３．３２（２）、６７．３６、６７．３１、５３．２３（２）、４４．８７、４３．１４、３４．８２、３４．５７、２９．１４（４）、２４．６４（２）、２４．０４（４）。
【０１３５】
（実施例５）
２−［２−（４−ヒドロキシ−６−オキソ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソオンドール−１，３−ジオン
【０１３６】
【化２９】
酢酸エチル（２０ｍＬ）中の粗製の酸（１．０グラム、実施例４に従って調製したもの）を、ジオキサン中無水のヒドロコール酸（４Ｍ、５０μＬ）で処理し、反応混合物を室温で２〜３時間攪拌した。反応混合物を水（ｐＨ７．０、５０ｍＬ２回）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発にかけて、所望のラクトンを白色固体として得た（０．９４グラム、化学純度約９４％、＞９９％ｅｅ、＞９３％ｄｅ）。
【０１３７】
（実施例６）
フタルイミドアセトニドイソプロピルエステル
【０１３８】
【化３０】
フタルイミドラクトン（５．０グラム、１７．３ｍｍｏｌ）をトルエン（１００ｍＬ）に懸濁させた。ＩＰＡ（６．６ｍＬ、８６．０ｍｍｏｌ、５当量）、アセトン（６．３ｍＬ、８６．０ｍｍｏｌ、５当量）、硫酸マグネシウム（５．０グラム）、およびメタンスルホン酸（０．４ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ、０．３５当量）を加えた。ｐＨ＝１．５（＜２必須）。混合物を室温で２４時間攪拌した。反応をトリエチルアミン（０．９ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）で失活させ、混合物を、トルエン（２０ｍＬ）で洗浄しながらグレード４の焼結漏斗で濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、無色の油状物、６．８８グラム、１００％を得た。
【０１３９】
（実施例７）
アミノアセトニドイソプロピルエステル
【０１４０】
【化３１】
フタルイミドアセトニドイソプロピルエステル（６．５５ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）をメタノール（６５ｍＬ、１０体積）に溶解させた。エチレンジアミン（１０．１グラム、１６８ｍｍｏｌ、１０当量）を滴下し、溶液を室温で攪拌した。
【０１４１】
１時間後のＨＰＬＣ分析では、開始材料がないことが示された。２時間後、反応混合物をロータバップによって真空中で濃縮した。残渣をトルエン（６５ｍＬ、１０体積）と水（６５ｍＬ、１０体積）とに分配し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。濁った水相をトルエン（６５ｍＬ）で再度抽出し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。トルエン抽出物を合わせて水（６５ｍＬ）で洗浄し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。トルエン抽出物を真空中で濃縮して、油生成物、２．８５グラム、収率６５．０％を得た。
【０１４２】
（実施例８）
ピロリルアセトニドイソプロピルエステル（ＡＩＥ）
【０１４３】
【化３２】
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド（４．６４グラム、１１．１ｍｍｏｌ、１．０３当量）を５０ｍＬ容一口丸底フラスコ（ｒｂｆ）に量り入れた。アミノアセトニドイソプロピルエステル（２．８０グラム、１０．８ｍｍｏｌ）の入ったｔ−ブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ、１１ｍＬ）を加えた後、テトラヒドロフラン（４．２ｍＬ）をフラッシュした。トリエチルアミン（１．０９グラム、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、スラリーを５０℃に加熱した。ピバル酸（１．１０グラム、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を８８時間加熱還流した（６７〜６８℃）。冷却すると、揮発性物質を真空中で除去し、残渣をイソプロピルアルコール（ＩＰＡ、１７．５ｍＬ）に溶かし、８０℃に加熱した。透明な溶液を得るのにＩＰＡ（１０ｍＬ）がさらに必要となった。溶液を室温に冷ました。結晶化は起こらなかった。溶液を確実な生成物でシード添加すると、結晶化が起こった。スラリーを０℃に冷却し、３０分間維持した。生成物をグレード２の焼結漏斗上に集め、イソプロピルアルコール（すなわちＩＰＡ、１０ｍＬで３回）で洗浄した。生成物を４０〜５０℃の真空オーブンで１８時間乾燥させて、淡黄色の固体（４．１５グラム、収率６０．０％）を得た。
【０１４４】
（実施例９）
シクロペンチリデン−フタルイミド−イソプロピルエステル
【０１４５】
【化３３】
フタルイミドラクトン（５．０グラム、１７．３ｍｍｏｌ）をトルエン（５０ｍＬ）に懸濁させた。ＩＰＡ（６．６ｍＬ、８６．０ｍｍｏｌ、５当量）、シクロペンタノン（３．０グラム、３４．８ｍｍｏｌ、２当量）、硫酸マグネシウム（５．０グラム）、およびメタンスルホン酸（０．４ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ、０．３５当量）を加えた。ｐＨ１．５（ｐＨ２未満が必須）。混合物を室温で２４時間攪拌した。反応をトリエチルアミン（０．９ｍＬ、６．５ｍｍｏｌ）で失活させ、混合物を、トルエン（２０ｍＬ）で洗浄しながらグレード４の焼結漏斗で濾過した。濾液をＮａＨＣＯ３飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮して、無色の油、７．１８グラム、１００％を得た。
【０１４６】
（実施例１０）
アミノシクロペンチリデンイソプロピルエステル
【０１４７】
【化３４】
シクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステル（１０．０グラム、２４．１ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ、５体積）に溶解させた。エチレンジアミン（２．９グラム、４８．２ｍｍｏｌ、２当量）を滴下し、溶液を室温で攪拌した。
【０１４８】
１時間後の高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析では、開始材料がないことが示された。２時間後、反応混合物をロータバップによって真空中で濃縮した。残渣をトルエン（１００ｍＬ、１０体積）と水（１００ｍＬ、１０体積）とに分配し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。濁った水相をトルエン（６５ｍＬ）で再度抽出し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。トルエン抽出物を合わせて水（６５ｍＬ）で洗浄し、１５分間攪拌し、次いで１５分間静置した。トルエン抽出物を真空中で濃縮して、生成物を油状物、６．４５グラム、収率９４．０％として得た。エチレンジアミンは、その後のＰａａｌ−Ｋｎｏｒｒ反応で不純物（ビスピロール）の形成をもたらすので、粗生成物からエチレンジアミンが確実になくなるようにすることが重要である。
【０１４９】
（実施例１１）
ピロリルシクロペンチリデンイソプロピルエステル（ＣＩＥ）
【０１５０】
【化３５】
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド（４．６４グラム、１１．１ｍｍｏｌ、１．０３当量）を５０ｍＬ容一口丸底フラスコに量り入れた。アミノシクロペンチリデンイソプロピルエステル（３．０８グラム、１０．８ｍｍｏｌ）の入ったＭＴＢＥ（１１ｍＬ）を加えた後、テトラヒドロフラン（４．２ｍＬ）をフラッシュした。トリエチルアミン（１．０９グラム、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、スラリーを５０℃に加熱した。ピバル酸（１．１０グラム、１０．８ｍｍｏｌ、１当量）を加え、混合物を８８時間加熱還流した（６７〜６８℃）。冷却すると、揮発性物質を真空中で除去し、残渣をイソプロピルアルコール（１７．５ｍＬ）に溶かし、８０℃に加熱した。透明な溶液を得るのに、イソプロピルアルコール（１０ｍＬ）がさらに必要となった。溶液を確実な生成物でシード添加すると、結晶化が起こった。スラリーを０℃に冷却し、３０分間維持した。生成物をグレード２の焼結漏斗に集め、イソプロピルアルコール（１０ｍＬ３回）で洗浄した。生成物を４０〜５０℃の真空オーブンで１８時間乾燥させて、淡黄色の固体（４．３１グラム、収率６０．０％）を得た。高圧液体クロマトグラフィーによる純度は、純度９９％粋より高かった。
【０１５１】
（実施例１２）
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド
毎回窒素で真空にする少なくとも４回の真空サイクルを使用して、反応容器を不活性にする（ｉｓ ｉｎｅｒｔｅｄ）。２５０リットルのテトラヒドロフランを、スプレーノズルを介して反応容器に装入する。スプレーボールノズルによって、確実に反応容器のすべての面積、特に容器の上部内側表面まで到達させ、反応容器の内側に攪拌装置も置く。テトラヒドロフラン洗浄液を排出し、廃棄物再利用のために収集する。
【０１５２】
反応容器が乾燥しているとき、４８０ｋｇの２−ベンジルイジン（ｂｅｎｚｙｌｉｄｉｎｅ）イソブチリルアセトアミド（ＢＩＢＥＡ）、６０ｋｇの臭化エチルヒドロキシエチルメチルチアゾリウム（ＭＴＢまたはエチルヒドロキシエチルＭＴＢ）、２００リットル、２１６ｋｇの４−フルオロベンズアルデヒド、および１２０ｋｇのトリエチルアミンを反応容器に装入し、攪拌しながら６０℃〜７０℃の間に加熱する。反応混合物を、温度を６５＋／−５℃に保ちながら１６〜２４時間熟成させる。次いで、内容物を５４〜６６分間かけて６０＋／−５℃に冷却する。反応混合物に６００リットルのイソプロパノールを装入し、混合物を約１００℃に加熱して、溶液を得る。
【０１５３】
温度を６０＋／−５℃に保ちながら、反応容器に、６００リットルの脱イオン水を３０分間かけて装入する。バッチを５４〜６６分間熟成させ、内容物を２〜４時間かけて１時間あたり１５／２０℃の速度で２５＋／−５℃の間に冷却する。バッチをこの温度で少なくとも１時間熟成させ、内容物を０＋／−５℃にさらに冷却し、少なくとも１時間熟成させる。
【０１５４】
バッチをフィルターで単離し、イソプロパノールで洗浄する。生成物を５０＋／−５℃の真空中で乾燥させて、含水量を０．５％未満にする。次いで内容物を約３０℃未満に冷却した後、排出する。
【０１５５】
（実施例１３）
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのＰＸＲＤ
自動サンプル交換装置、θ−θゴニオメーター、自動ビームダイバージェンススリット、およびＰＳＤ Ｖａｎｔｅｃ−１検出器を装着したＢｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ Ｌｔｄ．のＤ４粉末Ｘ線回折計を使用して、粉末Ｘ線回折パターンを測定した。サンプルを低バックグラウンドのシリコンウェーハ検体取付台に載せて、分析の準備をした。検体を回転させ、その間Ｘ線管を４０ｋＶ／３０ｍＡで作動させながら銅Ｋ−α１Ｘ線（波長＝１．５４０６オングストローム）を照射した。分析は、ゴニオメーターを２°〜５５°の２θ範囲にわたって０．０１８°のステップあたり０．２秒のカウントにセットした持続方式で動かして行った。Ｂｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ Ｌｔｄ．のＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、閾値１およびピーク幅０．３°２θでピークを選択した。データは２１℃で収集した。
【０１５６】
当業者にはわかるとおり、以下で示す表１内の様々なピークの相対強度は、たとえば、Ｘ線ビーム中での結晶の配向効果、分析する材料の純度、サンプルの結晶化度などのいくつかの要素のために様々となり得る。ピーク位置は、サンプル高さの差異のために変化する場合もあるが、実質的に示した表で規定したとおりのままとなる。
【０１５７】
（実施例１４）
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのＤＳＣ
オートサンプラーと４ホールの側壁脱気孔付きアルミニウム受皿およびふたを備えたＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｄｉａｍｏｎｄ ＤＳＣを、窒素流動気体を用いながら使用し、３．１１７ｍｇの４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドを１０℃から２５０℃に毎分２０℃で加熱した。
【０１５８】
（実施例１５）
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのＦＴ−ＩＲ
ＩＲスペクトルは、「ＤｕｒａｓａｍｐｌＩＲ」単反射ＡＴＲ付属品（セレン化亜鉛基板上にダイアモンド表面）およびｄ−ＴＧＳ ＫＢｒ検出器を備え付けたＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｎｅｘｕｓ ＦＴＩＲ分光計を使用して得た。スペクトルは、２ｃｍ−１の分解能で収集し、２５６の走査を合算したものとした。Ｈａｐｐ−Ｇｅｎｚｅｌアポダイゼーションを使用した。ＦＴ−ＩＲスペクトルは、単反射ＡＴＲを使用して記録したため、サンプル調製は必要でなかった。ＡＴＲ ＦＴ−ＩＲを使用すると、赤外線バンドの相対強度が、ＫＢｒディスクまたはヌジョールサンプル調製物を使用する透過ＦＴ−ＩＲスペクトルで見られるものとは異なってくる。ＡＴＲ ＦＴ−ＩＲの性質のために、低い方の波数のバンドは、高い方の波数のものより強烈である。実験誤差は、別段の注釈がない限り±２ｃｍ−１であった。ピークは、ＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｏｍｎｉｃ６．０ａソフトウェアを使用して抜き取った。強度の割当は、スペクトル中の主要なバンドに関するものであり、基線から計った絶対値に基づくものではない。
【０１５９】
（実施例１６）
４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのＦＴ−ラマンＩＲ
ラマンスペクトルは、１０６４ｎｍのＮｄＹＡＧレーザーおよびＬＮ−ゲルマニウム検出器を備え付けた、ＲａｍＩＩモジュールのＦＴ−Ｒａｍａｎ分光計を具備するＢｒｕｋｅｒ Ｖｅｒｔｅｘ７０を使用して収集した。スペクトルはすべて、２ｃｍ−１の分解能およびＢｌａｃｋｍａｎ−Ｈａｒｒｉｓ ４−ｔｅｒｍアポダイゼーションを使用して記録した。スペクトルは、３００ｍＷのレーザー出力を使用して収集し、４０９６の走査を合算したものとした。サンプルをガラスバイアルに入れ、レーザー照射にさらした。データは、ラマンシフト（ｃｍ−１）に対する強度として示し、基準ランプからの白色光スペクトルを使用して機器の反応および振動数依存的な散乱について補正する。Ｂｒｕｋｅｒ Ｒａｍａｎ Ｃｏｒｒｅｃｔ機能を使用して補正を行った（Ｂｒｕｋｅｒ ソフトウェア−ＯＰＵＳ６．０）。実験誤差は、別段の注釈がない限り±２ｃｍ−１であった。ピークは、ＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｏｍｎｉｃ６．０ａソフトウェアを使用して抜き取った。強度の割当は、スペクトル中の主要なバンドに関するものであり、基線から計った絶対値に基づくものではない。
【０１６０】
（実施例１７）
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミド
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、第２２７９巻（１９９２年）に記載のとおりに調製した５０グラムのｔ−ブチルイソプロピリデン（ＴＢＩＮ）、１３．２５グラムの湿った海綿状ニッケル触媒、２８％のアンモニア溶液（１３７．５ｍｌ）、および３７５ｍｌのイソプロピルアルコール（ＩＰＡ）を圧力容器に加える。混合物を５０ｐｓｉの水素で還元し、次いで濾過し、真空中で濃縮する。得られる油状物を２５０ｍｌの温トルエンに溶解させ、水洗し、真空中で再び濃縮して、アミノエステルを得る。アミノエステル、８５グラムの４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミド（米国特許第５１５５２５１号、およびＢａｕｍａｎ Ｋ．Ｌ．、Ｂｕｔｌｅｒ Ｄ．Ｅ．、Ｄｅｅｒｉｎｇ Ｃ．Ｆ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ１９９２年、第３３巻：２２８３〜２２８４ページ、両方の参考文献の全体が参照により援用される）、１２．５グラムのピバル酸、１３７．５ｍｌのテトラヒドロフラン、および１３７．５ｍｌのヘキサンをアルゴンで不活性にした圧力容器に装入し、それを密閉し、９６時間かけて７５℃に加熱する。冷却した後、溶液を４００ｍｌのメチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で希釈し、最初に希水酸化ナトリウム水溶液で洗浄した後、希塩酸水溶液で洗浄する。次いで、混合物を真空中で濃縮して、アセトニドエステルを得る。
【０１６１】
アセトニドエステルを２７５ｍｌの温メタノールに溶解させ、塩酸水溶液（７５ｍｌの水中に３７％の塩酸５グラム）を加える。混合物を３０℃で攪拌して、ジオールエステルを生成する。次いで、１００ｍｌのメチルｔ−ブチルエーテルおよび水酸化ナトリウム水溶液（１５０ｍｌの水および２５グラムの５０％水酸化ナトリウム水溶液）を加え、混合物を３０℃で攪拌して、ナトリウム塩を生成する。６００ｍｌの水を加え、混合物を４３７．５ｍｌのメチルｔ−ブチルエーテルで２回洗浄する。
【０１６２】
この場合では、混合物を大気圧下で蒸留して、バッチ温度を９９℃とする。混合物のメタノール含有量が０．４ｗ／ｖになるまで、蒸留を継続する。バッチを７５〜８５％で１８時間攪拌し、次いで冷却し、酸性化し、８７５ｍｌのトルエンに抽出する。混合物を４時間加熱還流し、共沸によって水を除去する。冷却した後、混合物を濾過し、トルエンで洗浄し、そのまま乾燥させる。表題化合物を白色固体（収量：３７．９グラム）として単離する。
【０１６３】
（実施例１８）
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＰＸＲＤ
粉末Ｘ線回折パターンは、自動サンプル交換装置、θ−θゴニオメーター、自動ビームダイバージェンススリット、およびＰＳＤ Ｖａｎｔｅｃ−１検出器を装着したＢｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ Ｌｔｄ．のＤ４粉末Ｘ線回折計を使用して測定した。サンプルを低バックグラウンドのケイ素ウェーハ検体取付台に載せて、分析の準備をした。検体を回転させ、その間Ｘ線管を４０ｋＶ／３０ｍＡで作動させながら銅Ｋ−α１Ｘ線（波長＝１．５４０６オングストローム）を照射した。分析は、ゴニオメーターを２°〜５５°の２θ範囲にわたって０．０１８°のステップあたり０．２秒のカウントにセットした持続方式で動かして行った。Ｂｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ Ｌｔｄ．のＥｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアを使用して、閾値１およびピーク幅０．３°２θでピークを選択した。データは２１℃で収集した。
【０１６４】
当業者にはわかるとおり、以下で示す表１内の様々なピークの相対強度は、たとえば、Ｘ線ビーム中での結晶の配向効果、分析する材料の純度、サンプルの結晶化度などのいくつかの要素のために様々となり得る。ピーク位置は、サンプル高さの差異のために変化する場合もあるが、実質的に示した表で規定したとおりのままとなる。
【０１６５】
別の波長の使用によって生成されるこれ以外のＰＸＲＤパターンは、本発明の結晶性材料のＰＸＲＤパターンの別の表示であるとみなされ、それ自体として本発明の範囲内である。
【０１６６】
（実施例１９）
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＤＳＣ
オートサンプラーと４ホールの側壁脱気孔付きアルミニウム受皿およびふたを備えたＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｄｉａｍｏｎｄ示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を、窒素流動気体を用いながら使用し、２．８９３ｍｇのサンプルを１０℃から３００℃に毎分２０℃で加熱した。
【０１６７】
（実施例２０）
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＦＴ−ＩＲ
ＩＲスペクトルは、「ＤｕｒａｓａｍｐｌＩＲ」単反射ＡＴＲ付属品（セレン化亜鉛基板上にダイアモンド表面）およびｄ−ＴＧＳ ＫＢｒ検出器を備え付けたＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｎｅｘｕｓ ＦＴＩＲ分光計を使用して得た。スペクトルは、２ｃｍ−１の分解能で収集し、２５６の走査を合算したものとした。Ｈａｐｐ−Ｇｅｎｚｅｌアポダイゼーションを使用した。ＦＴ−ＩＲスペクトルは、単反射ＡＴＲを使用して記録したため、サンプル調製は必要でなかった。ＡＴＲ ＦＴ−ＩＲを使用すると、赤外線バンドの相対強度が、ＫＢｒディスクまたはヌジョールサンプル調製物を使用する透過ＦＴ−ＩＲスペクトルで見られるものとは異なってくる。ＡＴＲ ＦＴ−ＩＲの性質のために、低い方の波数のバンドは、高い方の波数のものより強烈である。実験誤差は、別段の注釈がない限り±２ｃｍ−１であった。ピークは、ＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｏｍｎｉｃ６．０ａソフトウェアを使用して抜き取った。強度の割当は、スペクトル中の主要なバンドに関するものであり、基線から計った絶対値に基づくものではない。
【０１６８】
（実施例２１）
（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのＦＴ−ラマン
ラマンスペクトルは、１０６４ｎｍのＮｄＹＡＧレーザーおよびＬＮ−ゲルマニウム検出器を備え付けた、ＲａｍＩＩモジュールのＦＴ−Ｒａｍａｎ分光計を具備するＢｒｕｋｅｒ Ｖｅｒｔｅｘ７０を使用して収集した。スペクトルは、２ｃｍ−１の分解能およびＢｌａｃｋｍａｎ−Ｈａｒｒｉｓ ４−ｔｅｒｍアポダイゼーションを使用して記録した。スペクトルは、３００ｍＷのレーザー出力を使用して収集し、４０９６の走査を合算したものとした。サンプルをガラスバイアルに入れ、レーザー照射にさらした。データは、ラマンシフトに対する強度として示し、基準ランプからの白色光スペクトルを使用して機器の反応および振動数依存的な散乱について補正する。Ｂｒｕｋｅｒ Ｒａｍａｎ Ｃｏｒｒｅｃｔ機能を使用して補正を行った（Ｂｒｕｋｅｒソフトウェア−ＯＰＵＳ６．０）。実験誤差は、別段の注釈がない限り±２ｃｍ−１であった。ピークは、ＴｈｅｒｍｏＮｉｃｏｌｅｔ Ｏｍｎｉｃ６．０ａソフトウェアを使用して抜き取った。強度の割当は、スペクトル中の主要なバンドに関するものであり、基線から計った絶対値に基づくものではない。
【０１６９】
（実施例２２）
フタルイミドアセタール
【０１７０】
【化３６】
５０．０グラムのカリウムフタルイミド（１当量）を、室温で４００ｍｌ（８体積）のＮ，Ｎジメチルホルムアミド中にスラリー化する。３−ブロモプロピオンアルデヒドジメチルアセタール５４．４グラム（１．１当量）を室温で滴下した。反応を約１５時間実施し、完了したとみなした。２−メチルテトラヒドロフラン２５０ｍｌおよび水２５０ｍｌを加え、攪拌し、安定させ、分離した。水層を１００ｍｌの２−ＭＴＨＦで２回洗浄し直し、有機層を合わせ、７０％の飽和ブラインで洗浄して水を除去した。次いで、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、大気圧下で蒸留してスラリーにした。白色のスラリーを０〜５℃の低温で１時間かけて粒状化し、濾紙で覆ったブフナー漏斗で濾過し、２−ＭＴＨＦで洗浄した。白色固体を真空オーブンにて４０℃未満で乾燥させると、収率４６．５％の表題生成物となった。
【０１７１】
（実施例２３）
３−フタルイミド−プロピオンアルデヒド
【０１７２】
【化３７】
１５．０グラムのフタルイミドアセタール（１当量）を７００ｍｌ（約４７体積）の氷酢酸および７０ｍｌ（約５体積）の水に加えた。この反応を３０℃までの室温で４８時間実施し、完了したとみなした。飽和炭酸水素ナトリウムを加えてｐＨ７にし、５００ｍｌの２−ＭＴＨＦで抽出し、５００ｍｌの２−ＭＴＨＦで再度抽出した。次いで、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧蒸留してスラリーにする。白色のスラリーを０〜５℃の低温で１時間かけて粒状化し、濾紙で覆ったブフナー漏斗で濾過し、２−ＭＴＨＦで洗浄した。白色固体を真空オーブンにて室温で乾燥させると、収率４７％の表題生成物となった。
【０１７３】
（実施例２４）
配列番号１−ＤＥＲＡ０３のヌクレオチド配列
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【０１７４】
（実施例２５）
配列番号２−ＤＥＲＡ０４のヌクレオチド配列
ａｔｇｇｇｔａａｔａｔｃｇｃｇａａａａｔｇａｔｔｇａｔｃａｃａｃｃｃｔｃｔｔａａａａｃｃｃｇａａｇｃａａｃｃｇａａｃａａｃａａａｔｔｇｔａｃａａｔｔａｔｇｃａｃｇｇａａｇｃｇａａａｃａａｔａｔｇｇｃｔｔｔｇｃａｇｃａｇｔａｔｇｃｇｔａａａｔｃｃｇａｃａｔｇｇｇｔｔａａａａｃｃｇｃｃｇｃａｃｇｔｇａａｔｔａａｇｃｇｇｇａｃａｇａｃｇｔｔｃｇｔｇｔｇｔｇｔａｃｔｇｔａａｔｔｇｇａｔｔｔｃｃｃｔｔｇｇｇｃｇｃｔａｃｇａｃｔｃｃａｇａａａｃｔａａａｇｃａｔｔｃｇａａａｃｔａｃｔａａｃｇｃｇａｔｔｇａａａａｔｇｇａｇｃａｃｇｇｇａａｇｔａｇａｔａｔｇｇｔａａｔｔａａｔａｔｔｇｇｔｇｃａｔｔｇａａａｔｃｔｇｇａｃａａｇａｔｇａａｃｔｇｇｔｇｇａａｃｇｔｇａｔａｔｔｃｇｔｇｃｃｇｔｔｇｔｔｇａａｇｃｔｇｃａｇｃａｇｇｃｃｇｃｇｃｇｃｔｔｇｔｇａａａｇｔａａｔｔｇｔａｇａａａｃａｇｃｃｃｔｔｃｔｔａｃｔｇａｔｇａａｇａａａａａｇｔｔｃｇｃｇｃｔｔｇｔｃａａｔｔａｇｃａｇｔａａａａｇｃｇｇｇｔｇｃｃｇａｔｔａｔｇｔｇａａｇａｃｇｔｃｇａｃａｇｇａｔｔｔａｇｃｇｇｔｇｇｔｇｇｔｇｃａａｃｇｇｔｇｇａａｇａｔｇｔｇｇｃｔｔｔａａｔｇｃｇｇａａａａｃｇｇｔｔｇｇｔｇａｔｃｇｔｇｃａｇｇｇｇｔｃａａａｇｃａａｇｃｇｇｃｇｇａｇｔａｃｇｔｇａｃｔｇｇａａａａｃａｇｃａｇａａｇｃａａｔｇａｔｔａａｃｇｃａｇｇａｇｃａａｃｇｃｇｃａｔｔｇｇｃａｃａａｇｔｔｃｔｇｇａｇｔａｇｃａａｔｃｇｔａａｃａｇｇｔｇｇａａｃｃｇｇｃｃｇｇｇｃａｇａｃｔａｔｔａａ
【０１７５】
（実施例２６）
配列番号３−ＤＥＲＡ０６のヌクレオチド配列
ａｔｇｇｇａｃｔｃｇｃｃｔｃｃｔａｃａｔｃｇａｃｃａｃａｃｇｃｔｇｃｔｔａａｇｇｃｃａｃｃｇｃｃａｃｇｃｔｃｇｃｃｇａｃａｔｃｃｇｃａｃｇｃｔｇｔｇｔｇａｇｇａａｇｃｃｃｇｃｇａｇｃａｃｔｃｇｔｔｃｔａｃｇｃｇｇｔｇｔｇｃａｔｃａａｃｃｃｇｇｔｃｔｔｔａｔｔｃｃｃｃａｃｇｃｃｃｇｃｇｃｃｔｇｇｃｔｃｇａａｇｇｃａｇｃｇａｃｇｔｇａａｇｇｔｃｇｃｃａｃｃｇｔｃｔｇｃｇｇｃｔｔｔｃｃｃｃｔｃｇｇｃｇｃｃａｔｃａｇｃｔｃｃｇａｇｃａｇａａａｇｃｔｃｔｇｇａａｇｃｃｃｇｃｃｔｇａｇｃｇｃｃｇａａａｃｇｇｇｃｇｃｃｇａｃｇａａａｔｃｇａｔａｔｇｇｔｃａｔｃｃａｃａｔｃｇｇｃｔｃｇｇｃｇｃｔｔｇｃｃｇｇｃｇａｃｔｇｇｇａｃｇｃｇｇｔｇｇａａｇｃｃｇａｃｇｔｇｃｇｇｇｃａｇｔｇｃｇｃｃｇｃｇｃｇｇｔｇｃｃｃｇａｇｃａｇｇｔｇｃｔｃａａｇｇｔｇａｔｔａｔｃｇａａａｃｃｔｇｃｔａｃｃｔｇａｃｃｇａｃｇａｇｃａａａａｇｃｇｃｔｔｇｇｃｇａｃｔｇａｇｇｔｃｇｃｃｇｔａｃａｇｇｇｃｇｇｃｇｃｃｇａｃｔｔｃｇｔｇａａｇａｃｇａｇｃａｃａｇｇｃｔｔｃｇｇｃａｃｃｇｇｃｇｇｃｇｃｃａｃｃｇｔｇｇａｃｇａｃｇｔｇｃｇｃｃｔｇａｔｇｇｃｇｇａａｇｔｇａｔｃｇｇｇｇｇｃｃｇｃｇｃｃｇｇａｃｔｃａａｇｇｃｇｇｃｇｇｇｃｇｇｃｇｔｃｃｇｃａｃｔｃｃｔｇｃｃｇａｃｇｃｇｃａａｇｃｃａｔｇａｔｃｇａｇｇｃｇｇｇｃｇｃｇａｃｃｃｇｇｃｔｇｇｇｃａｃｃｔｃｇｇｇｃｇｇｃｇｔｇｇｇｔｃｔｇｇｔｇｔｃｇｇｇｃｇｇｃｇａａａａｃｇｇａｇｃｃｇｇｃｔａｃｔｇａ
【０１７６】
（実施例２７）
配列番号４−ＤＥＲＡ０８のヌクレオチド配列
ａｔｇｇｇａａｔｔｇｃｔａａａａｔｇａｔｃｇａｔｃａｃａｃｔｇｃｔｔｔａａａａｃｃａｇａｃａｃａａｃｇａａａｇａａｃａａａｔｔｔｔａａｃａｃｔａａｃａａａａｇａａｇｃａａｇａｇａａｔａｃｇｇｔｔｔｔｇｃｔｔｃｃｇｔａｔｇｃｇｔａａａｔｃｃａａｃｔｔｇｇｇｔａａａａｃｔａｔｃｃｇｃｔｇａａｃａａｃｔｔｇｃｔｇｇａｇｃａｇａａｔｃｔｇｔａｇｔａｔｇｔａｃｔｇｔｔａｔｃｇｇｔｔｔｃｃｃａｃｔａｇｇａｇｃｇａａｔａｃｃｃｃｔｇａａｇｔａａａａｇｃａｔｔｔｇａａｇｔａａａａｇａｔｇｃｔａｔｃｃａａａａｃｇｇｔｇｃａａａａｇａａｇｔｇｇａｔａｔｇｇｔｔａｔｔａａｔａｔｃｇｇｃｇｃａｃｔａａａａｇａｃａａａｇａｃｇａｃｇａａｃｔａｇｔａｇａａｃｇｔｇａｔａｔｔｃｇｃｇｃｔｇｔａｇｔｃｇａｔｇｃｔｇｃｃａａａｇｇａａａａｇｃａｔｔａｇｔａａａａｇｔａａｔｔａｔｃｇａａａｃｔｔｇｃｃｔａｔｔａａｃａｇａｃｇａａｇａａａａａｇｔｔｃｇｃｇｃａｔｇｔｇａａａｔｃｇｃｔｇｔａａａａｇｃｇｇｇａａｃａｇａｃｔｔｃｇｔｔａａａａｃａｔｃｃａｃｔｇｇａｔｔｃｔｃｃａｃａｇｇｔｇｇｃｇｃａａｃｔｇｃｃｇａａｇａｔａｔｃｇｃｃｔｔａａｔｇｃｇｔａａａａｃｔｇｔａｇｇａｃｃａａａｃａｔｃｇｇｃｇｔａａａａｇｃａｔｃｔｇｇｔｇｇｇｇｔｔｃｇｔａｃｇａａａｇａａｇａｃｇｔａｇａａａａａａｔｇａｔｃｇａａｇｃａｇｇｃｇｃａａｃｔｃｇｔａｔｔｇｇｃｇｃａａｇｔｇｃａｇｇｔｇｔｃｇｃａａｔｔｇｔｔｔｃｃｇｇｃｇａａａａａｃｃａｇｃｃａａａｃｃａｇａｔａａｔｔａｃｔａａ
【０１７７】
（実施例２８）
配列番号５−ＤＥＲＡ１１のヌクレオチド配列
ａｔｇａｃａｔｃａａａｔｃａａｃｔｔｇｃｔｃａａｔａｔａｔｃｇａｔｃａｃａｃｃｇｃａｃｔｔａｃｃｇｃａｇａａａａａａａｔｇａａｃａａｇａｔａｔｔｔｃｇａｃａｃｔｃｔｇｔａａｔｇａａｇｃｇａｔｔｇａａｃａｃｇｇａｔｔｔｔａｔｔｃｔｇｔａｔｇｔａｔｃａａｔｔｃｔｇｃｔｔａｔａｔｔｃｃａｃｔｃｇｃｔａａａｇａａａａａｃｔｔｇｃｔｇｇｃｔｃａａａｔｇｔａａａａａｔｔｔｇｃａｃｃｇｔａｇｔｔｇｇａｔｔｃｃｃｔｔｔｇｇｇｇｇｃｇａａｔｔｔａａｃｃｔｃａｇｔｃａａａｇｃａｔｔｔｇａａａｃｇｃａａｇａａｔｃｔａｔｔａａａｇｃｇｇｇｔｇｃａａａｔｇａａａｔｔｇａｔａｔｇｇｔｇａｔｔａａｔｇｔａｇｇｔｔｇｇａｔａａａａｔｃｇｃａａａａａｔｇｇｇａｔｇａａｇｔａａａａｃａａｇａｔａｔｔｃａａｇｃｇｇｔａｔｔｔａａｔｇｃｔｔｇｔａａｔｇｇｃａｃｇｃｃａｔｔａａａａｇｔｇａｔｔｔｔａｇａａａｃｔｔｇｔｔｔｇｃｔｃａｃｔａａａｇａｔｇａａａｔａｇｔｇａａａｇｃｃｔｇｃｇａａａｔｔｔｇｔａａａｇａａａｔｃｇｇｔｇｔａｇｃｔｔｔｔｇｔｔａａａａｃａｔｃａａｃａｇｇｃｔｔｔａａｔａａａｇｇｔｇｇｔｇｃｇａｃｃｇｔａｇａａｇａｔｇｔｔｇｃａｔｔｇａｔｇａａａａａｃａｃｇｇｔｃｇｇｃａａｔａｔｔｇｇｔｇｔｔａａａｇｃａｔｃａｇｇｔｇｇｔｇｔｇｃｇｔｇａｔａｃｔｇａａａｃｔｇｃａｃｔｔｇｃａａｔｇａｔｔａａｇｇｃｇｇｇｔｇｃｇａｃｔｃｇｃａｔｔｇｇｔｇｃａａｇｃｇｃｔｇｇｃａｔｔｇｃｇａｔｔａｔｔａｇｃｇｇｔａｃｔｃａａｇａｃａｃｔｃａａａｇｃａｃｔｔａｃｔａａ
【０１７８】
（実施例２９）
配列番号６−ＤＥＲＡ１２のヌクレオチド配列
ａｔｇａｔａｇａｇｔａｃａｇｇａｔｔｇａｇｇａｇｇｃａｇｔａｇｃｇａａｇｔａｃａｇａｇａｇｔｔｃｔａｃｇａａｔｔｃａａｇｃｃｃｇｔｃａｇａｇａａａｇｃｇｃａｇｇｔａｔｔｇａａｇａｔｇｔｇａａａａｇｔｇｃｔａｔａｇａｇｃａｃａｃｇａａｔｃｔｇａａａｃｃｇｔｔｔｇｃｃａｃａｃｃａｇａｃｇａｔａｔａａａａａａａｃｔｃｔｇｔｃｔｔｇａａｇｃａａｇｇｇａａａａｔｃｇｔｔｔｃｃａｔｇｇａｇｔｃｔｇｔｇｔｇａａｔｃｃｇｔｇｔｔａｔｇｔｇａａａｃｔｇｇｃｔｃｇｔｇａａｇａａｃｔｃｇａａｇｇａａｃｃｇａｔｇｔｇａａａｇｔｃｇｔｃａｃｃｇｔｔｇｔｔｇｇｔｔｔｔｃｃａｃｔｇｇｇａｇｃｇａａｃｇａａａｃｔｃｇｇａｃｇａａａｇｃｃｃａｔｇａｇｇｃｇａｔｔｔｔｃｇｃｔｇｔｔｇａｇａｇｔｇｇａｇｃｃｇａｔｇａｇａｔｃｇａｔａｔｇｇｔｃａｔｃａａｃｇｔｔｇｇｃａｔｇｃｔｃａａｇｇｃａａａｇｇａｇｔｇｇｇａｇｔａｃｇｔｔｔａｃｇａｇｇａｔａｔａａｇａａｇｔｇｔｔｇｔｃｇａａｔｃｇｇｔｇａａａｇｇａａａａｇｔｔｇｔｇａａｇｇｔｇａｔｃａｔｃｇａａａｃｇｔｇｃｔａｔｃｔｇｇａｔａｃｇｇａａｇａｇａａｇａｔａｇｃｇｇｃｇｔｇｔｇｔｃａｔｔｔｃｃａａａｃｔｔｇｃｔｇｇａｇｃｔｃａｔｔｔｃｇｔｇａａｇａｃｔｔｃｃａｃｇｇｇａｔｔｔｇｇａａｃａｇｇａｇｇｇｇｃｇａｃｃｇｃａｇａａｇａｃｇｔｔｃａｔｃｔｃａｔｇａａａｔｇｇａｔｃｇｔｇｇｇａｇａｔｇａｇａｔｇｇｇｔｇｔａａａａｇｃｔｔｃｃｇｇａｇｇｇａｔｃａｇａａｃｃｔｔｃｇａｇｇａｃｇｃｔｇｔｔａａａａｔｇａｔｃａｔｇｔａｃｇｇｔｇｃｔｇａｔａｇａａｔａｇｇａａｃｇａｇｔｔｃｇｇｇａｇｔｔａａｇａｔｃｇｔｔｃａｇｇｇｇｇｇａｇａａｇａｇａｇａｔａｔｇｇａｇｇｔｔｇａ
【０１７９】
（実施例３０）
配列番号７−ＤＥＲＡ１５のヌクレオチド配列
ａｔｇｃｃｇｔｃｇｇｃｃａｇｇｇａｔａｔａｃｔｇｃａｇｃａｇｇｇｔｃｔａｇａｃａｇｇｃｔａｇｇｇａｇｃｃｃｔｇａｇｇａｃｃｔｃｇｃｃｔｃｇａｇｇａｔａｇａｃｔｃｔａｃｇｃｔａｃｔａａｇｃｃｃｔａｇｇｇｃｔａｃｇｇａｇｇａｇｇａｃｇｔｔａｇｇａａｔｃｔｔｇｔｇａｇａｇａｇｇｃｇｔｃｇｇａｃｔａｃｇｇｇｔｔｔａｇａｔｇｃｇｃｇｇｔｔｃｔｇａｃｔｃｃａｇｔｇｔａｃａｃａｇｔａａａｇａｔｔｔｃｔｇｇｇｃｔｇｇｃｔｇａｇａａｇｃｔｔｇｇｔｇｔｇａａｇｃｔａｔｇｔａｇｃｇｔｔａｔａｇｇｃｔｔｔｃｃｃｃｔｇｇｇｃｃａｇｇｃｃｃｃｇｃｔｃｇａｇｇｔａａａｇｃｔａｇｔｔｇａｇｇｃａｃａａａｃｔｇｔｔｔｔａｇａｇｇｃｔｇｇｇｇｃｔａｃｔｇａｇｃｔｔｇａｔｇｔｔｇｔｃｃｃｃｃａｔｃｔｃｔｃａｃｔａｇｇｃｃｃｃｇａａｇｃｔｇｔｔｔａｃａｇｇｇａｇｇｔｃｔｃａｇｇｇａｔａｇｔｇａａｇｔｔｇｇｃｇａａａａｇｃｔａｔｇｇａｇｃｃｇｔｔｇｔｇａａａｇｔａａｔａｔｔａｇａａｇｃｇｃｃａｃｔｃｔｇｇｇａｔｇａｃａａａａｃｇｃｔｃｔｃｃｃｔｃｃｔｇｇｔｇｇａｃｔｃｇｔｃｇａｇｇａｇｇｇｃｇｇｇｇｇｃｇｇａｔａｔａｇｔｇａａｇａｃａａｇｃａｃｃｇｇｇｇｔｃｔａｔａｃａａａｇｇｇｔｇｇｔｇａｔｃｃａｇｔａａｃｇｇｔｃｔｔｃａｇｇｃｔｇｇｃｃａｇｔｃｔｔｇｃｃａａｇｃｃｃｃｔｔｇｇｔａｔｇｇｇｔｇｔａａａｇｇｃａａｇｃｇｇｃｇｇｔａｔａａｇｇａｇｔｇｇｃａｔｃｇａｃｇｃｃｇｔｃｃｔｃｇｃｃｇｔａｇｇａｇｃｔｇｇｃｇｃｇｇａｔａｔｃａｔａｇｇｇａｃａａｇｃａｇｔｇｃｔｇｔａａａｇｇｔｔｔｔｇｇａｇａｇｃｔｔｃａａａｔｃｃｃｔａｇｔｃｔａａ
【０１８０】
（実施例３１）
配列番号８−ＤＥＲＡ１０１のヌクレオチド配列
ａｔｇｇｃｔｇｃａａａｃａａａｔａｔｇａａａｔｇｇｃｃｔｔｃｇｃａｃａｇｔｔｃｇａｔｃｃａｇｃｔｇａａａｇｃｇａａｇａａｃｇｃａｔｃｃｔｇｃｔｇａａａａｃｔｇａｃｃａｇａｔｃａｔｔｃｇｔｇａｃｃａｃｔａｔｔｃｃｃｇｔｔｔｃｇａｃａｃｔｃｃａｇａａａｃｔａａａａａｇｔｔｃｃｔｇｃａｔｇｇｃｇｔｔａｔｃｇａｔｃｔｇａｃｇｔｃｔｃｔｇａａｃｇｃｃａｃｃｇａｃｔｃｔｇａｇｇａａｔｃｔａｔｃａｃｔａａａｔｔｃａｃｃｇａａｔｃｔｇｔａａａｃｇａｔｔｔｃｇａａｇａｔａｃｃｇａｃｃｃｇａｃｔａｔｃｃｃｔａｇｃｇｔｔｇｃｇｇｃｇａｔｃｔｇｃｇｔｔｔａｔｃｃｇａａｃｔｔｔｇｔｃａｇｃａｃｃｇｔｇｃｇｔｇａａａｃｃｃｔｇａｃｔｇｃｃｇａｇａａｔｇｔｇａａａｇｔｔｇｃａａｇｃｇｔｃａｇｃｇｇｔｔｇｃｔｔｃｃｃｇｇｃｃｔｃｃｃａｇａｇｃｔｔｃａｔｃｇａａｇｔｇａａａｃｔｇｇｃａｇａａａｃｃｇｃａｃｔｇｇｃｇｇｔｔａｇｃｇａｃｇｇｔｇｃｇｇａｔｇａａａｔｔｇａｃａｔｔｇｔｔｃｔｇａａｃａｔｇｇｇｔａａａｔｔｃｃｔｇｔｃｃｇｇｔｇａｔｔａｃｇａｇｇｃｃｇｃａｇｃｃａｃｔｇａｇａｔｃｇａｇｇａａｃａｇａｔｃｇｃｔｇｃｇｇｃｇａａｇｇｇｔｇｃｇａｃｃｇｔａａａａｇｔｔａｔｃｃｔｇｇａｇａｃｔｇｇｔｇｃｔｃｔｇａａｇａｃｇｃｃｇｇａａａａｃａｔｔｃｇｃｃｇｃｇｃａａｃｃａｔｃｃｔｇｔｃｔｃｔｇｔｔｔｔｇｔｇｇｃｇｃｃｃａｔｔｔｃｇｔｔａａａａｃｃｔｃｔａｃｔｇｇｃａａａｇｇｃｔａｃｃｃｇｇｇｃｇｃｃｔｃｔｃｔｇｇａａｇｃａｇｃｔｔａｃａｃｔａｔｇｔｇｔａａａｇｔｃｃｔｇａａａｃａｇｔａｃｔａｃｇｇｃｃｔｇｔｔｃｇｇｔｇａａｇｔｔｃｇｔｇｇｃａｔｃａａｇｃｔｇａｇｃｇｇｃｇｇｔａｔｃｃｇｔａｃｃａｃｃｇａａｇａｃｇｃｇｇｔｔａａｇｔａｃｔａｃｔｇｃｃｔｇａｔｃｇａａａｃｇｃｔｇｃｔｇｇｇｃａａａｇａａｔｇｇｃｔｇａｃｃｃｃｇｇｃｇｔａｃｔｔｃｃｇｃａｔｃｇｇｃｇｃｃｔｃｃｔｃｔｃｔｇｇｔｔｇａｔｇｃｔｃｔｇｃｇｃｃａｇｇａｔａｔｔａｔｇｇｔｔｔａａ
【０１８１】
（実施例３２）
配列番号９−ＤＥＲＡ１０２のヌクレオチド配列
Ａｔｇｇａａｃｔｇａａｃｃｇｃａｔｇａｔｔｇａｃｃａｃａｃｔａｔｔｃｔｇａａａｃｃｇｇａａｇｃｃａｃｃｇａｇｇｃｇｇｃｔｇｔｇｃａｇａａａａｔｔａｔｃｇａｔｇａａｇｃｔａａａｇａａｔａｃａａｃｔｔｃｔｔｃａｇｃｇｔｃｔｇｔａｔｃａａｃｃｃｇｔｇｔｔｇｇｇｔｔｇｃｔｔｔｔｇｃｃｔｃｃｇａｇｃａｇｃｔｇｇｃｔｇａｔａｃｔｇａｔｇｔｔｇｃｃｇｔｃｔｇｔａｃｃｇｔａａｔｃｇｇｔｔｔｃｃｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｇａａｃａｃｇｃｃｇｇａｇｇｔｔａａａｇｃｇｔａｃｇａａｇｃａｇｃｔｇａｃｇｃｃａｔｔａａａａａｃｇｇｔｇｃｔａａｔｇａｇｇｔｇｇａｔａｔｇｇｔｇａｔｃａａｔａｔｔｇｇｔｇｃｔｃｔｇａａａｔｃｃｃａａｃａｇｔａｃｇａｃｔａｃｇｔｇｃｇｃｃａａｇａｃａｔｃｃａｇｇｇｔｇｔｇｇｔｔｇａｃｇｃｃｇｃａａａａｇｇｔａａａｇｃａｃｔｇｇｔｔａａａｇｔｔａｔｃａｔｃｇａａａｃｔｇｃｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａｔｇａａｇａｇａａａｇｔｔａａｇｇｃｔｔｇｃｇａａｃｔｇｇｃｇａａａｇａａｇｃａｇｇｃｇｃｔｇａｔｔｔｃｇｔｇａａａａｃｃａｇｃａｃｃｇｇｔｔｔｔｔｃｃａｃｔｇｇｃｇｇｔｇｃａａａａｇｔｔｇｃｔｇａｃａｔｔｃｇｔｃｔｇａｔｇｃｇｃｇａａａｃｃｇｔｇｇｇｔｃｃｇｇａｔａｔｇｇｇｃｇｔｔａａａｇｃａｔｃｃｇｇｔｇｇｃｇｔａｃａｃａａｃｇｃａｇａａｇａａｇｃａｃｔｇｇｃｃａｔｇａｔｃｇａａｇｃｇｇｇｃｇｃａａｃｔｃｇｔａｔｃｇｇｃｇｃｔｔｃｃａｃｃｇｇｔｇｔａｇｃｃａｔｃｇｔａａｇｃｇｇｔｇｃｔａｃｔｇｇｔｇａｇｇｇｔａｃｃａａａｔｇｇｔａａ
【０１８２】
（実施例３３）
配列番号１０−ＤＥＲＡ１０３のヌクレオチド配列
ａｔｇａｃｔａｔｔｇａａｔｃｃｇｃｔａｔｃｇｃｇｃｔｇｇｃａｃｃｔｇｃａｇａａｃｇｔｇｃｔｇｔｔａａｃｃｔｇａｔｔｇｇｔａｇｃｇａｃｃｔｇａｃｃｇａａａａａｔｃｔｃｔｇａａａｃｔｇｃａｃｃｔｇｇａａｇｇｃｃｔｇｔｃｔｇｇｔｇｔｃｇａｃｇｃｇｇｔｔｇｇｔｃｔｇｇａａｃａｇｃｇｔｇｃｔｇｃｃｇｇｔｃｔｇｔｃｃａｃｃｃｇｃｔｃｔａｔｃａａａａｃｃａｃｃｔｃｃａａａｇｃｔｔｇｇｇｃｃｃｔｇｇａｃａｃｃａｔｃａｔｃａａａｃｔｇａｔｃｇａｔｃｔｇａｃｔａｃｔｃｔｇｇａｇｇｇｃｇｃａｇａｔａｃｔｃｃｇｇｇｃａａｇｇｔｔｃｇｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｇｃｇａａａｇｃａａｔｇｃｔｇｃｃｇｇａｃｇｃｃｔｃｔｇａｔｇｔｇｔｃｃｇｃｔｃｃｇｃａｇｇｔｇｇｃａｇｃｔｇｔｇｔｇｃｇｔｔｔａｃｇｇｔｇａｔａｔｇｇｔｇｃｃａｔａｃｇｃｇｇｃｇｇａａｇｃａｃｔｇｇｇｃｔｃｃｔｃｔｔｇｇｔｃｔａａｔｇｇｔｔｃｔｇａｃａａｃｇｇｃａｔｔａａｃｇｔｔｇｃｔｇｃｇｇｔｇｇｃａａｃｔｇｃｇｔｔｃｃｃａｔｃｃｇｇｔｃｇｃａｇｃｔｃｃｃｔｇｃｃａａｔｃａａａａｔｃｇｃｔｇａｃａｃｃａａｇｇａａｇｃｃｇｔｔｇｃｃｃａｃｇｇｔｇｃｔｇａｃｇａａａｔｃｇａｃａｔｇｇｔａａｔｃｇａｔｃｇｔｇｇｔｇｃｇｔｔｃｃｔｇａｇｃｇｇｃａａａｔａｃｇｇｔｇｔｔｇｔｇｔｔｃｇａｃｃａｇａｔｃｇｔａｇｃｔｇｔｇａａａｇａａｇｃｔｔｇｃｃｇｃｃｇｃｇａａａａｃｇｇｃａｃｔｔａｃｇｃｇｃａｃｃｔｇａａａｇｔｔａｔｃｃｔｇｇａａａｃｃｇｇｃｇａａｃｔｇａａｃａｃｃｔａｔｇａｃａａｃｇｔｃｃｇｃｃｇｔｇｃｃｔｃｃｔｇｇｃｔｇｇｃｇａｔｃｃｔｇｇｃｇｇｇｔｇｇｔｇａｃｔｔｔｇｔｇａａａａｃｃｔｃｔａｃｃｇｇｃａａｇｇｔｔａｇｃｃｃｇｇｃｃｇｃａａｃｃｃｔｇｃｃｇｇｔｔａｃｇｃｔｇｃｔｇａｔｇｃｔｇｇａａｇｔｃｇｔｔｃｇｃｇａｔｔｇｇｃａｔｇｔｇｃｔｇａｃｔｇｇｃｇａｇａａａａｔｃｇｇｔｇｔｇａａａｃｃａｇｃｃｇｇｔｇｇｔａｔｃｃｇｃｔｃｃｔｃｃａａａｇａｃｇｃｇａｔｔａａａｔａｃｃｔｇｇｔｃａｃｃｇｔｇｇｃｇｇａａａｃｃｇｔａｇｇｔｇａａｇａｇｔｇｇｃｔｇｃａａｃｃｇｃａｃｃｔｇｔｔｔｃｇｃｔｔｔｇｇｃｇｃｃｔｃｃｔｃｃｃｔｇｃｔｇａａｃｇａｃｇｔｔｃｔｇａｔｇｃａｇｃｇｔｃａｇａａｇｃｔｇｔｃｔａｃｃｇｇｃｃａｃｔａｃｔｃｃｇｇｃｃｃａｇａｔｔａｃｇｔｇａｃｃａｔｃｇａｃｔａａ
【０１８３】
（実施例３４）
配列番号１１−ＤＥＲＡ１０４のヌクレオチド配列
ａｔｇｔｃｔｔｃｔａｃｔｃｃａａｃｔａｔｔｃｔｇｇａｔｃｃｇｇｃｇｔｔｔｇａｇｇａｃｇｔｔａｃｃｃｇｔｔｃｔｇａａｇｃａｔｃｔｃｔｇｃｇｃｃｇｔｔｔｃｃｔｇｃａｃｇｇｃｃｔｇｃｃｇｇｇｔｇｔｃｇａｔｃａｇｇｔｇｇｇｃｇｃａｇａｇｇｃｃｃｇｔｇｃｃｇｃｔｇｇｔｃｔｇｇｃａａｃｃｃｇｔｔｃｃａｔｔａａａａｃｇｔｃｃｇｃａａａａｇａａｔｔｔｇｃａｃｔｇｇａｃｃｔｇｇｃｇａｔｔｃｇｔａｔｇｇｔｔｇａｃｃｔｇａｃｃａｃｇｃｔｇｇａｇｇｇｃｃａｇｇａｔａｃｇｃｃｇｇｇｔａａｇｇｔｔｃｇｔｇｃｃｃｔｇａｇｃｇｃｇａａａｇｃａａｔｇｃｇｔｃｃｇｇａｔｃｃｇｔｃｔｇａｔｃｃａａｃｃｔｇｔｃｃｔｇｃｔａｃｔｇｃｔｇｃｔｇｔａｔｇｔｇｔｔｔａｃｃｃｇｇａｃａｔｇｇｔｔｇｇｃａｔｃｇｃｇａａａｃａｇｇｃｇｃｔｇｇｇｔａｃｔａｇｃｇｇｃｇｔａｃａｃｇｔａｇｃｔｇｃｔｇｔｇｇｃｔａｃｔｇｃｔｔｔｃｃｃｇｔｃｔｇｇｃｃｇｔｇｃｃｇｃｔｃｔｇｇａｃａｔｃａａａｃｔｇｇｃｇｇａｃｇｔｔｃｇｔｇａｔｇｃｇｇｔｇｇａｃｇｃａｇｇｃｇｃｔｇａｃｇａａａｔｃｇａｔａｔｇｇｔｔａｔｃｇａｃｃｇｃｇｇｔｇｃｔｔｔｔｃｔｇｇｃｔｇｇｔｃｇｔｔａｃｃａａｃａｃｇｔａｔａｃｇａｃｇａａａｔｔｇｔｔｇｃｇｇｔｇｃｇｃｇａａｇｃｃｔｇｃｃｇｃｃｇｔｇａａａａｃｇｇｔｇａａｇｇｃｇｃｔｃａｃｃｔｇａａｇｇｔａａｔｃｔｔｃｇａｇａｃｔｇｇｔｇａｇｃｔｇｃａｇａｃｃｔａｃｇａｃａａｃｇｔｔｃｇｃｃｇｔｇｃｇａｇｃｔｇｇｃｔｇｇｃｇａｔｇａｔｇｇｃｔｇｇｔｇｃａｃａｃｔｔｃｇｔｔａａａａｃｇｔｃｃａｃｃｇｇｃａａａｇｔｃｃａｇｃｃｇｇｃａｇｃｔａｃｃｃｔｇｃｃｇｇｔｔａｃｃｃｔｇｇｔｔａｔｇｃｔｇｃａｇｇｃｃｇｔａｃｇｔｇａｃｔｔｔｃｇｔｇｇｃｇｃａａｃｇｇｇｃｃｇｔａｔｇｇｔｔｇｇｃｇｔｔａａａｃｃｔｇｃｔｇｇｃｇｇｔａｔｃｃｇｔａｃｃｇｃｃａａｇｇａｃｇｃａａｔｃａａａｔａｃｃｔｇｇｔｔａｔｇｇｔａａａｃｇａｇｇｔａｇｃｇｇｇｃｇａａｇａｔｔｇｇｃｔｇｇａｃｃｃｇｇａｃｔｇｇｔｔｔｃｇｔｔｔｔｇｇｔｇｃａｔｃｔａｃｔｃｔｇｃｔｇａａｃｇａｃｃｔｇｃｔｇａｔｇｃａｇｃｇｔａｃｇａａｇａｔｇａａａａｃｃｇｇｃｃｇｔｔａｃａｇｃｇｇｃｃｃａｇａｃｔａｃｔｔｔａｃｃｃｔｇｇａｃｔａａ
【０１８４】
（実施例３５）
配列番号１２−ＤＥＲＡ１０５のヌクレオチド配列
ａｔｇｇａａｃｔｇａｔｃａｃｔｃａｇｃｃｇｔｃｔｔｇｔｔｇｇｇｔａｔｔｔｔｃｃｇｔｃｔｔｔｔｔｃｃｇｃｃｇｔｃａｇｔａｃｇｇｃｔｇｇｃｔｇｇｔｔｔｔｔｇｔｇｇａａｇｇｔｇｃｔｔｇｇｔａｃｇａｔｇｇｔｃｇｃｃｇｔｃａａａｃｔｔｔｃｃａｃｃｔｇｇａｔｇｇｔａａｃｇｇｃｃｇｃａａａｇｇｃｔｔｃｃｔｇｃｇｃａｔｇａｃｔａｔｇａａｔａｔｃｇｃａａａａａｔｇａｔｃｇａｔｃａｃａｃｃｃｔｇｃｔｇａａａｃｃｇｇａａｇｃｇａｃｔｇａｇｃａｇｃａｇａｔｃｇｔａｃａａｃｔｇｔｇｃａｃｃｇａａｇｃｔａａａｃａｇｔａｔｇｇｔｔｔｔｇｃｔｔｃｃｇｔｔｔｇｔｇｔｇａａｃｃｃｔａｃｇｔｇｇｇｔｇａａａａｃｃｇｃｃｇｃａｃｇｃｇａａｃｔｇｔｃｔｇｇｔａｃｃｇａｃｇｔｔｃｇｔｇｔｔｔｇｔａｃｃｇｔａａｔｔｇｇｃｔｔｃｃｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｇａｃｔａｃｃｃｃａｇａａａｃｃａａａｇｃｇｔｔｃｇａａａｃｔａｃｃａａｃｇｃｇａｔｃｇａａａａｃｇｇｃｇｃｔｃｇｔｇａａｇｔｃｇａｃａｔｇｇｔａａｔｃａａｃａｔｔｇｇｃｇｃｔｃｔｇａａａｔｃｔｇｇｔｃａｇｇａｃｇａａｃｔｇｇｔａｇａｇｃｇｔｇａｃａｔｃｃｇｃｇｃｃｇｔｃｇｔａｇａａｇｃｔｇｃｇｇｃａｇｇｃｃｇｔｇｃａｃｔｇｇｔａａａａｇｔａａｔｃｇｔｔｇａａａｃｃｇｃｔｃｔｇｃｔｇａｃｔｇａｔｇａａｇａｇａａａｇｔｔｃｇｔｇｃｇｔｇｔｃａｇｃｔｇｇｃｇｇｔｔａａａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇａｔｔａｃｇｔｇａａａａｃｇａｇｃａｃｔｇｇｔｔｔｃｔｃｃｇｇｔｇｇｔｇｇｃｇｃｔａｃｔｇｔｃｇａａｇａｃｇｔｇｇｃｇｃｔｇａｔｇｃｇｔａａａａｃｃｇｔａｇｇｃｇａｔｃｇｃｇｃａｇｇｃｇｔｔａａａｇｃｇａｇｃｇｇｃｇｇｔｇｔｔｃｇｔｇａｔｔｇｇａａｇａｃｔｇｃｃｇａａｇｃｔａｔｇａｔｔａａｃｇｃａｇｇｃｇｃｇａｃｔｃｇｔａｔｃｇｇｃａｃｔｔｃｔａｇｃｇｇｃｇｔｇｇｃａａｔｔｇｔｔａｃｔｇｇｃｇｇｃａｃｃｇｇｔｃｇｃｇｃｔｇａｃａｃｔａａａｔｇｇｔａａ
【０１８５】
（実施例３６）
配列番号１３−ＤＥＲＡ１０６のヌクレオチド配列
ａｔｇａｃｔａｔｃｇｃｔａａａａｔｇａｔｔｇａｔｃａｃａｃｇｇｃｇｃｔｇａａｇｃｃａｇａｔａｃｃａｃｃａａａｇａａｃａａａｔｃｃｔｇａｃｇｃｔｇａｃｃａａａｇａａｇｃａｃｇｔｇａａｔａｔｇｇｃｔｔｔｇｃｔａｇｃｇｔｃｔｇｔｇｔｇａａｔｃｃｇａｃｔｔｇｇｇｔｇａａａｃｔｇｔｃｔｇｃｇｇａａｃａｇｃｔｇａｇｃｇｇｃｇｃｔｇａａｔｃｔｇｔｇｇｔｇｔｇｃａｃｃｇｔｃａｔｃｇｇｔｔｔｔｃｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｇａａｔａｃｔｃｃｇｇａａｇｔｇａａｇｇｃａｔｔｃｇａａｇｔａａａａａａｃｇｃｔａｔｃｇａａａａｃｇｇｃｇｃｇａａｇｇａａｇｔａｇａｔａｔｇｇｔｔａｔｃａａｃａｔｔｇｇｔｇｃｔｃｔｇａａｇｇａｔａａｇｇａｃｇａｃｇａａｃｔｇｇｔｇｇａａｃｇｔｇａｔａｔｃｃｇｔｇｃｃｇｔｃｇｔｇｇａｔｇｃｔｇｃｔａａａｇｇｔａａａｇｃｇｃｔｇｇｔｇａａａｇｔｃａｔｔａｔｃｇａａａｃｃｔｇｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａｔｇａａｇａｇａａｇｇｔｃｃｇｔｇｃｔｔｇｃｇａａａｔｃｇｃｃｇｔｇａａａｇｃｔｇｇｃａｃｔｇａｔｔｔｃｇｔｔａａａａｃｔｔｃｔａｃｔｇｇｃｔｔｔｔｃｔａｃｔｇｇｔｇｇｃｇｃｇａｃｔｇｃａｇａａｇａｃａｔｃｇｃａｃｔｇａｔｇｃｇｔａａｇａｃｔｇｔｃｇｇｔｃｃｇａａｃａｔｃｇｇｔｇｔａａａａｇｃｇｔｃｃｇｇｔｇｇｔｇｔｔｃｇｔａｃｔａａａｇａａｇａｃｇｔｔｇａｇａａｇａｔｇａｔｃｇａａｇｃｇｇｇｔｇｃｃａｃｃｃｇｔａｔｃｇｇｃｇｃｔｔｃｔｇｃａｇｇｔｇｔｇｇｃａａｔｃｇｔａｔｃｃｇｇｔｇａａａａａｃｃｇｇｃｇａａａｃｃｔｇａｃａａｃａｃｃａａｇｔｇｇｔａａ
【０１８６】
（実施例３７）
配列番号１４−ＤＥＲＡ１０７のヌクレオチド配列
ａｔｇｔｃｔｃｇｃｔｃｔａｔｔｇｃａｃａａａｔｇａｔｃｇａｔｃａｃａｃｃｃｔｇｃｔｇａａａｃｃｔａａｔａｃｃａｃｃｇａａｇａｃｃａｇａｔｃｇｔｇａａａｃｔｇｔｇｃｇａａｇａｇｇｃｔａａａｇａａｔａｃｔｃｔｔｔｃｇｃｃｔｃｃｇｔａｔｇｃｇｔｃａａｃｃｃａａｃｇｔｇｇｇｔｃｇｃｇｃｔｇｇｃａｇｃｇｃａｇｃｔｇｃｔｇａａａｇａｃｇｃｔｃｃｔｇａｔｇｔｇａａａｇｔｇｔｇｃａｃｔｇｔｔａｔｃｇｇｃｔｔｃｃｃａｃｔｇｇｇｔｇｃａａｃｃａｃｇｃｃｔｇａａｇｔａａａａｇｃｇｔｔｔｇａａａｃｃａｃｔａａｃｇｃａａｔｃｇａｇａａｃｇｇｃｇｃａａｃｇｇａｇｇｔｔｇａｔａｔｇｇｔｔａｔｃａａｃａｔｃｇｇｔｇｃｃｃｔｇａａｇｇａｃａａａｃａｇｔａｃｇａａｃｔｇｇｔｔｇｇｔｃｇｔｇａｔａｔｃｃａｇｇｃｔｇｔｔｇｔｇａａｇｇｃａｇｃａｇａａｇｇｃａａａｇｃｃｃｔｇａｃｃａａａｇｔｇａｔｔａｔｃｇａａａｃｃｔｃｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａａｇａａｇａａａａｇａａｇｇｃｇｇｃｔｔｇｔｇａａｃｔｇｇｃｇｇｔａａａａｇｃａｇｇｔｇｃｔｇａｔｔｔｃｇｔｃａａａａｃｇｔｃｔａｃｃｇｇｔｔｔｃｔｃｔｇｇｔｇｇｃｇｇｔｇｃａａｃｃｇｃａｇａａｇａｃａｔｔｇｃｃｃｔｇａｔｇｃｇｔａａｇｇｔｔｇｔｔｇｇｔｃｃｔａａｃｃｔｇｇｇｃｇｔｔａａｇｇｃｃａｇｃｇｇｃｇｇｔｇｔｇｃｇｔｇａｃｃｔｇｔｃｔｇａｃｇｃｇａａｇｇｃｇａｔｇａｔｔｇａｃｇｃｇｇｇｃｇｃｇａｃｔｃｇｔａｔｃｇｇｃｇｃｔｔｃｃｇｃａｇｇｔｇｔｔｇｃｇａｔｃｇｔｔａａｔｇｇｔｇａａｃｇｃｔｃｔｇａａｇｇｔｔｃｃａｃｇａａａｔｇｇａｃｃｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃｇｇｃｇａｃｇａｃｇｔｇｃｇｃｔｔｇｔａｃｇｇｇｃｇｇｃｔａａ
【０１８７】
（実施例３８）
配列番号１５−ＤＥＲＡ１０８のヌクレオチド配列
ａｔｇａａａｃｔｇａａｃａａａｔａｃａｔｃｇａｔｃａｃａｃｃａｔｃｃｔｇａａａｃｃｇｇａａａｃｇａｃｔｃａｇｇａａｃａｇｇｔｇｇａｇａａａａｔｃｃｔｇｇｃｔｇａａｇｃｇａａａｇａａｔａｃｇａｔｔｔｃｇｃｇｔｃｃｇｔｃｔｇｃｇｔｔａａｃｃｃｇａｃｇｔｇｇｇｔａｇｃｔｃｔｇｇｃａｇｃｔｇａａａｇｃｃｔｇａａａｇａｔａｇｃｇａｃｇｔｃａａａｇｔｃｔｇｃａｃｔｇｔｃａｔｃｇｇｃｔｔｃｃｃｇｃｔｇｇｇｃｇｃｔａａｃａｃｔｃｃｇｇｃａｇｔｇａａｇｇｃｇｔｔｃｇａａａｃｔａａａｇａｃｇｃｔａｔｔａｇｃａａｃｇｇｃｇｃｇｇａｔｇａａａｔｃｇａｃａｔｇｇｔｇａｔｔａａｃａｔｃｇｇｃｇｃａｃｔｇａａａａｃｇｇｇｔａａｃｔａｃｇａｔｃｔｇｇｔｔｃｔｇｇａａｇａｔａｔｔａａｇｇｃｔｇｔｃｇｔｔｇｃａｇｃａａｇｃｇｇｃｇａｔａａａｃｔｇｇｔａａａｇｇｔａａｔｃａｔｃｇａａｇｃｇｔｇｃｃｔｇｃｔｇａｃｃｇａｃｇａｔｇａａａａｇｇｔｔａａａｇｃｇｔｇｃｃａｇｃｔｇｔｃｔｃａｇｇａａｇｃｇｇｇｃｇｃｔｇａｃｔａｃｇｔｃａａｇａｃｇａｇｃａｃｔｇｇｃｔｔｃｔｃｔａｃｃｇｇｃｇｇｔｇｃｇａｃｇｇｔｃｇｃａｇａｔｇｔｔｇｃｔｃｔｇａｔｇｃｇｔａａａａｃｔｇｔｔｇｇｃｃｃｇｇａｃａｔｇｇｇｃｇｔａａａａｇｃｇｔｃｔｇｇｃｇｇｔｇｃｇｃｇｃｔｃｔｔａｃｇａａｇａｃｇｃｔａｔｃｇｃｇｔｔｃａｔｔｇａａｇｃｔｇｇｃｇｃａａｇｃｃｇｔａｔｔｇｇｃｇｃｃａｇｃｔｃｔｇｇｃｇｔｇｇｃｇａｔｃａｔｇａａｔｇｇｔｇｃｇｃａｇｇｃｔｇａｔｇｇｃｇａｃａｃｃａａｇｔｇｇｔａａ
【０１８８】
（実施例３９）
配列番号１６−ＤＥＲＡ０３のアミノ酸配列
Ｍｔｄｌｋａｓｓｌｒａｌｋｌｍｄｌｔｔｌｎｄｄｄｔｄｅｋｖｉａｌｃｈｑａｋｔｐｖｇｎｔａａｉｃｉｙｐｒｆｉｐｉａｒｋｔｌｋｅｑｇｔｐｅｉｒｉａｔｖｔｎｆｐｈｇｎｄｄｉｄｉａｌａｅｔｒａａｉａｙｇａｄｅｖｄｖｖｆｐｙｒａｌｍａｇｎｅｑｖｇｆｄｌｖｋａｃｋｅａｃａａａｎｖｌｌｋｖｉｉｅｔｇｅｌｋｄｅａｌｉｒｋａｓｅｉｓｉｋａｇａｄｆｉｋｔｓｔｇｋｖａｖｎａｔｐｅｓａｒｉｍｍｅｖｉｒｄｍｇｖｅｋｔｖｇｆｋｐａｇｇｖｒｔａｅｄａｑｋｙｌａｉａｄｅｌｆｇａｄｗａｄａｒｈｙｒｆｇａｓｓｌｌａｓｌｌｋａｌｇｈｇｄｇｋｓａｓｓｙ．
【０１８９】
（実施例４０）
配列番号１７−ＤＥＲＡ０４のアミノ酸配列
Ｍｇｎｉａｋｍｉｄｈｔｌｌｋｐｅａｔｅｑｑｉｖｑｌｃｔｅａｋｑｙｇｆａａｖｃｖｎｐｔｗｖｋｔａａｒｅｌｓｇｔｄｖｒｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｔｔｐｅｔｋａｆｅｔｔｎａｉｅｎｇａｒｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｓｇｑｄｅｌｖｅｒｄｉｒａｖｖｅａａａｇｒａｌｖｋｖｉｖｅｔａｌｌｔｄｅｅｋｖｒａｃｑｌａｖｋａｇａｄｙｖｋｔｓｔｇｆｓｇｇｇａｔｖｅｄｖａｌｍｒｋｔｖｇｄｒａｇｖｋａｓｇｇｖｒｄｗｋｔａｅａｍｉｎａｇａｔｒｉｇｔｓｓｇｖａｉｖｔｇｇｔｇｒａｄｙ．
【０１９０】
（実施例４１）
配列番号１８−ＤＥＲＡ０６のアミノ酸配列
Ｍｇｌａｓｙｉｄｈｔｌｌｋａｔａｔｌａｄｉｒｔｌｃｅｅａｒｅｈｓｆｙａｖｃｉｎｐｖｆｉｐｈａｒａｗｌｅｇｓｄｖｋｖａｔｖｃｇｆｐｌｇａｉｓｓｅｑｋａｌｅａｒｌｓａｅｔｇａｄｅｉｄｍｖｉｈｉｇｓａｌａｇｄｗｄａｖｅａｄｖｒａｖｒｒａｖｐｅｑｖｌｋｖｉｉｅｔｃｙｌｔｄｅｑｋｒｌａｔｅｖａｖｑｇｇａｄｆｖｋｔｓｔｇｆｇｔｇｇａｔｖｄｄｖｒｌｍａｅｖｉｇｇｒａｇｌｋａａｇｇｖｒｔｐａｄａｑａｍｉｅａｇａｔｒｌｇｔｓｇｇｖｇｌｖｓｇｇｅｎｇａｇｙ．
【０１９１】
（実施例４２）
配列番号１９−ＤＥＲＡ０８のアミノ酸配列
Ｍｇｉａｋｍｉｄｈｔａｌｋｐｄｔｔｋｅｑｉｌｔｌｔｋｅａｒｅｙｇｆａｓｖｃｖｎｐｔｗｖｋｌｓａｅｑｌａｇａｅｓｖｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｎｔｐｅｖｋａｆｅｖｋｄａｉｑｎｇａｋｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｄｋｄｄｅｌｖｅｒｄｉｒａｖｖｄａａｋｇｋａｌｖｋｖｉｉｅｔｃｌｌｔｄｅｅｋｖｒａｃｅｉａｖｋａｇｔｄｆｖｋｔｓｔｇｆｓｔｇｇａｔａｅｄｉａｌｍｒｋｔｖｇｐｎｉｇｖｋａｓｇｇｖｒｔｋｅｄｖｅｋｍｉｅａｇａｔｒｉｇａｓａｇｖａｉｖｓｇｅｋｐａｋｐｄｎｙ．
【０１９２】
（実施例４３）
配列番号２０−ＤＥＲＡ１１のアミノ酸配列
Ｍｔｓｎｑｌａｑｙｉｄｈｔａｌｔａｅｋｎｅｑｄｉｓｔｌｃｎｅａｉｅｈｇｆｙｓｖｃｉｎｓａｙｉｐｌａｋｅｋｌａｇｓｎｖｋｉｃｔｖｖｇｆｐｌｇａｎｌｔｓｖｋａｆｅｔｑｅｓｉｋａｇａｎｅｉｄｍｖｉｎｖｇｗｉｋｓｑｋｗｄｅｖｋｑｄｉｑａｖｆｎａｃｎｇｔｐｌｋｖｉｌｅｔｃｌｌｔｋｄｅｉｖｋａｃｅｉｃｋｅｉｇｖａｆｖｋｔｓｔｇｆｎｋｇｇａｔｖｅｄｖａｌｍｋｎｔｖｇｎｉｇｖｋａｓｇｇｖｒｄｔｅｔａｌａｍｉｋａｇａｔｒｉｇａｓａｇｉａｉｉｓｇｔｑｄｔｑｓｔｙ．
【０１９３】
（実施例４４）
配列番号２１−ＤＥＲＡ１２のアミノ酸配列
Ｍｉｅｙｒｉｅｅａｖａｋｙｒｅｆｙｅｆｋｐｖｒｅｓａｇｉｅｄｖｋｓａｉｅｈｔｎｌｋｐｆａｔｐｄｄｉｋｋｌｃｌｅａｒｅｎｒｆｈｇｖｃｖｎｐｃｙｖｋｌａｒｅｅｌｅｇｔｄｖｋｖｖｔｖｖｇｆｐｌｇａｎｅｔｒｔｋａｈｅａｉｆａｖｅｓｇａｄｅｉｄｍｖｉｎｖｇｍｌｋａｋｅｗｅｙｖｙｅｄｉｒｓｖｖｅｓｖｋｇｋｖｖｋｖｉｉｅｔｃｙｌｄｔｅｅｋｉａａｃｖｉｓｋｌａｇａｈｆｖｋｔｓｔｇｆｇｔｇｇａｔａｅｄｖｈｌｍｋｗｉｖｇｄｅｍｇｖｋａｓｇｇｉｒｔｆｅｄａｖｋｍｉｍｙｇａｄｒｉｇｔｓｓｇｖｋｉｖｑｇｇｅｅｒｙｇｇ．
【０１９４】
（実施例４５）
配列番号２２−ＤＥＲＡ１５のアミノ酸配列
Ｍｐｓａｒｄｉｌｑｑｇｌｄｒｌｇｓｐｅｄｌａｓｒｉｄｓｔｌｌｓｐｒａｔｅｅｄｖｒｎｌｖｒｅａｓｄｙｇｆｒｃａｖｌｔｐｖｙｔｖｋｉｓｇｌａｅｋｌｇｖｋｌｃｓｖｉｇｆｐｌｇｑａｐｌｅｖｋｌｖｅａｑｔｖｌｅａｇａｔｅｌｄｖｖｐｈｌｓｌｇｐｅａｖｙｒｅｖｓｇｉｖｋｌａｋｓｙｇａｖｖｋｖｉｌｅａｐｌｗｄｄｋｔｌｓｌｌｖｄｓｓｒｒａｇａｄｉｖｋｔｓｔｇｖｙｔｋｇｇｄｐｖｔｖｆｒｌａｓｌａｋｐｌｇｍｇｖｋａｓｇｇｉｒｓｇｉｄａｖｌａｖｇａｇａｄｉｉｇｔｓｓａｖｋｖｌｅｓｆｋｓｌｖ．
【０１９５】
（実施例４６）
配列番号２３−ＤＥＲＡ１０１のアミノ酸配列
ｍａａｎｋｙｅｍａｆａｑｆｄｐａｅｓｅｅｒｉｌｌｋｔｄｑｉｉｒｄｈｙｓｒｆｄｔｐｅｔｋｋｆｌｈｇｖｉｄｌｔｓｌｎａｔｄｓｅｅｓｉｔｋｆｔｅｓｖｎｄｆｅｄｔｄｐｔｉｐｓｖａａｉｃｖｙｐｎｆｖｓｔｖｒｅｔｌｔａｅｎｖｋｖａｓｖｓｇｃｆｐａｓｑｓｆｉｅｖｋｌａｅｔａｌａｖｓｄｇａｄｅｉｄｉｖｌｎｍｇｋｆｌｓｇｄｙｅａａａｔｅｉｅｅｑｉａａａｋｇａｔｖｋｖｉｌｅｔｇａｌｋｔｐｅｎｉｒｒａｔｉｌｓｌｆｃｇａｈｆｖｋｔｓｔｇｋｇｙｐｇａｓｌｅａａｙｔｍｃｋｖｌｋｑｙｙｇｌｆｇｅｖｒｇｉｋｌｓｇｇｉｒｔｔｅｄａｖｋｙｙｃｌｉｅｔｌｌｇｋｅｗｌｔｐａｙｆｒｉｇａｓｓｌｖｄａｌｒｑｄｉｍｖ．
【０１９６】
（実施例４７）
配列番号２４−ＤＥＲＡ１０２のアミノ酸配列
ｍｅｌｎｒｍｉｄｈｔｉｌｋｐｅａｔｅａａｖｑｋｉｉｄｅａｋｅｙｎｆｆｓｖｃｉｎｐｃｗｖａｆａｓｅｑｌａｄｔｄｖａｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｎｔｐｅｖｋａｙｅａａｄａｉｋｎｇａｎｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｓｑｑｙｄｙｖｒｑｄｉｑｇｖｖｄａａｋｇｋａｌｖｋｖｉｉｅｔａｌｌｔｄｅｅｋｖｋａｃｅｌａｋｅａｇａｄｆｖｋｔｓｔｇｆｓｔｇｇａｋｖａｄｉｒｌｍｒｅｔｖｇｐｄｍｇｖｋａｓｇｇｖｈｎａｅｅａｌａｍｉｅａｇａｔｒｉｇａｓｔｇｖａｉｖｓｇａｔｇｅｇｔｋｗ．
【０１９７】
（実施例４８）
配列番号２５−ＤＥＲＡ１０３のアミノ酸配列
ｍｔｉｅｓａｉａｌａｐａｅｒａｖｎｌｉｇｓｄｌｔｅｋｓｌｋｌｈｌｅｇｌｓｇｖｄａｖｇｌｅｑｒａａｇｌｓｔｒｓｉｋｔｔｓｋａｗａｌｄｔｉｉｋｌｉｄｌｔｔｌｅｇａｄｔｐｇｋｖｒｓｌａａｋａｍｌｐｄａｓｄｖｓａｐｑｖａａｖｃｖｙｇｄｍｖｐｙａａｅａｌｇｓｓｗｓｎｇｓｄｎｇｉｎｖａａｖａｔａｆｐｓｇｒｓｓｌｐｉｋｉａｄｔｋｅａｖａｈｇａｄｅｉｄｍｖｉｄｒｇａｆｌｓｇｋｙｇｖｖｆｄｑｉｖａｖｋｅａｃｒｒｅｎｇｔｙａｈｌｋｖｉｌｅｔｇｅｌｎｔｙｄｎｖｒｒａｓｗｌａｉｌａｇｇｄｆｖｋｔｓｔｇｋｖｓｐａａｔｌｐｖｔｌｌｍｌｅｖｖｒｄｗｈｖｌｔｇｅｋｉｇｖｋｐａｇｇｉｒｓｓｋｄａｉｋｙｌｖｔｖａｅｔｖｇｅｅｗｌｑｐｈｌｆｒｆｇａｓｓｌｌｎｄｖｌｍｑｒｑｋｌｓｔｇｈｙｓｇｐｄｙｖｔｉｄ．
【０１９８】
（実施例４９）
配列番号２６−ＤＥＲＡ１０４のアミノ酸配列
ｍｓｓｔｐｔｉｌｄｐａｆｅｄｖｔｒｓｅａｓｌｒｒｆｌｈｇｌｐｇｖｄｑｖｇａｅａｒａａｇｌａｔｒｓｉｋｔｓａｋｅｆａｌｄｌａｉｒｍｖｄｌｔｔｌｅｇｑｄｔｐｇｋｖｒａｌｓａｋａｍｒｐｄｐｓｄｐｔｃｐａｔａａｖｃｖｙｐｄｍｖｇｉａｋｑａｌｇｔｓｇｖｈｖａａｖａｔａｆｐｓｇｒａａｌｄｉｋｌａｄｖｒｄａｖｄａｇａｄｅｉｄｍｖｉｄｒｇａｆｌａｇｒｙｑｈｖｙｄｅｉｖａｖｒｅａｃｒｒｅｎｇｅｇａｈｌｋｖｉｆｅｔｇｅｌｑｔｙｄｎｖｒｒａｓｗｌａｍｍａｇａｈｆｖｋｔｓｔｇｋｖｑｐａａｔｌｐｖｔｌｖｍｌｑａｖｒｄｆｒｇａｔｇｒｍｖｇｖｋｐａｇｇｉｒｔａｋｄａｉｋｙｌｖｍｖｎｅｖａｇｅｄｗｌｄｐｄｗｆｒｆｇａｓｔｌｌｎｄｌｌｍｑｒｔｋｍｋｔｇｒｙｓｇｐｄｙｆｔｌｄ．
【０１９９】
（実施例５０）
配列番号２７−ＤＥＲＡ１０５のアミノ酸配列
ｍｅｌｉｔｑｐｓｃｗｖｆｓｖｆｆｒｒｑｙｇｗｌｖｆｖｅｇａｗｙｄｇｒｒｑｔｆｈｌｄｇｎｇｒｋｇｆｌｒｍｔｍｎｉａｋｍｉｄｈｔｌｌｋｐｅａｔｅｑｑｉｖｑｌｃｔｅａｋｑｙｇｆａｓｖｃｖｎｐｔｗｖｋｔａａｒｅｌｓｇｔｄｖｒｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｔｔｐｅｔｋａｆｅｔｔｎａｉｅｎｇａｒｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｓｇｑｄｅｌｖｅｒｄｉｒａｖｖｅａａａｇｒａｌｖｋｖｉｖｅｔａｌｌｔｄｅｅｋｖｒａｃｑｌａｖｋａｇａｄｙｖｋｔｓｔｇｆｓｇｇｇａｔｖｅｄｖａｌｍｒｋｔｖｇｄｒａｇｖｋａｓｇｇｖｒｄｗｋｔａｅａｍｉｎａｇａｔｒｉｇｔｓｓｇｖａｉｖｔｇｇｔｇｒａｄｔｋｗ．
【０２００】
（実施例５１）
配列番号２８−ＤＥＲＡ１０６のアミノ酸配列
ｍｔｉａｋｍｉｄｈｔａｌｋｐｄｔｔｋｅｑｉｌｔｌｔｋｅａｒｅｙｇｆａｓｖｃｖｎｐｔｗｖｋｌｓａｅｑｌｓｇａｅｓｖｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｎｔｐｅｖｋａｆｅｖｋｎａｉｅｎｇａｋｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｄｋｄｄｅｌｖｅｒｄｉｒａｖｖｄａａｋｇｋａｌｖｋｖｉｉｅｔｃｌｌｔｄｅｅｋｖｒａｃｅｉａｖｋａｇｔｄｆｖｋｔｓｔｇｆｓｔｇｇａｔａｅｄｉａｌｍｒｋｔｖｇｐｎｉｇｖｋａｓｇｇｖｒｔｋｅｄｖｅｋｍｉｅａｇａｔｒｉｇａｓａｇｖａｉｖｓｇｅｋｐａｋｐｄｎｔｋｗ．
【０２０１】
（実施例５２）
配列番号２９−ＤＥＲＡ１０７のアミノ酸配列
ｍｓｒｓｉａｑｍｉｄｈｔｌｌｋｐｎｔｔｅｄｑｉｖｋｌｃｅｅａｋｅｙｓｆａｓｖｃｖｎｐｔｗｖａｌａａｑｌｌｋｄａｐｄｖｋｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｔｔｐｅｖｋａｆｅｔｔｎａｉｅｎｇａｔｅｖｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｄｋｑｙｅｌｖｇｒｄｉｑａｖｖｋａａｅｇｋａｌｔｋｖｉｉｅｔｓｌｌｔｅｅｅｋｋａａｃｅｌａｖｋａｇａｄｆｖｋｔｓｔｇｆｓｇｇｇａｔａｅｄｉａｌｍｒｋｖｖｇｐｎｌｇｖｋａｓｇｇｖｒｄｌｓｄａｋａｍｉｄａｇａｔｒｉｇａｓａｇｖａｉｖｎｇｅｒｓｅｇｓｔｋｗｔａａｇａａｔｔｃａｃｔｇｇ．
【０２０２】
（実施例５３）
配列番号３０−ＤＥＲＡ１０８のアミノ酸配列
ｍｋｌｎｋｙｉｄｈｔｉｌｋｐｅｔｔｑｅｑｖｅｋｉｌａｅａｋｅｙｄｆａｓｖｃｖｎｐｔｗｖａｌａａｅｓｌｋｄｓｄｖｋｖｃｔｖｉｇｆｐｌｇａｎｔｐａｖｋａｆｅｔｋｄａｉｓｎｇａｄｅｉｄｍｖｉｎｉｇａｌｋｔｇｎｙｄｌｖｌｅｄｉｋａｖｖａａｓｇｄｋｌｖｋｖｉｉｅａｃｌｌｔｄｄｅｋｖｋａｃｑｌｓｑｅａｇａｄｙｖｋｔｓｔｇｆｓｔｇｇａｔｖａｄｖａｌｍｒｋｔｖｇｐｄｍｇｖｋａｓｇｇａｒｓｙｅｄａｉａｆｉｅａｇａｓｒｉｇａｓｓｇｖａｉｍｎｇａｑａｄｇｄｔｋｗ．
【０２０３】
その限りでないが、発行された特許、特許出願、および学術誌の論文を含めて、本出願で引用したすべての刊行物はそれぞれ、その全体が参照により本明細書に援用される。
【０２０４】
本発明について、開示する実施形態に即して上で述べてきたが、当業者ならば、詳述した特定の実験が本発明の実例にすぎないことは容易にわかるであろう。したがって、本発明は、以下の特許請求の範囲によってしか限定されない。
【図面の簡単な説明】
【０２０５】
【図１】４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドの実験的な粉末Ｘ線回折パターンを示すグラフである。横軸の尺度は２θの度数である。縦軸は数値の強度である。
【図２】４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）温度記録である。
【図３】４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドの赤外線（ＦＴＩＲ）スペクトルを示すグラフである。
【図４】４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドのラマンスペクトルを示すグラフである。
【図５】（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの実験的な粉末Ｘ線回折パターンを示すグラフである。横軸の尺度は２θの度数である。縦軸は数値の強度である。
【図６】（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの示差走査熱量測定（ＤＳＣ）温度記録を示すグラフである。
【図７】（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの赤外線（ＦＴＩＲ）スペクトルを示すグラフである。
【図８】（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドのラマンスペクトルを示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アセトアルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、およびＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法。
【請求項２】
前記アルドラーゼが２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）というアルドラーゼである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アルドラーゼが、
配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４、
配列番号３のヌクレオチド配列または配列番号１８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０６、
配列番号８のヌクレオチド配列または配列番号２３のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０１、
配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２、
配列番号１０のヌクレオチド配列または配列番号２５のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０３、
配列番号１１のヌクレオチド配列または配列番号２６のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０４、
配列番号１２のヌクレオチド配列または配列番号２７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０５、
配列番号１３のヌクレオチド配列または配列番号２８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０６、
配列番号１４のヌクレオチド配列または配列番号２９のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０７、
配列番号１５のヌクレオチド配列または配列番号３０のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０８、
またはアミノ酸配列同一性がその少なくとも約２０％であるアルドラーゼである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記アルドラーゼが、配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４、配列番号３のヌクレオチド配列または配列番号１８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０６、または配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記アルドラーゼが、配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記アルドラーゼが、配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２である、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質が３−フタルイミドプロピオンアルデヒドである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質がＮ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒドまたは３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒドである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質がＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
そのように形成したラクトールを酸化させて、対応するラクトンを得るステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
そのように形成したラクトンをイソプロピルアルコールおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
そのように形成したラクトンをシクロペンタノンおよびイソプロピルアルコールと反応させて、対応するシクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステルを得るステップをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
（ａ）そのように形成したラクトールを、触媒的脱水素条件下で脱水素して、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｂ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｃ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップとをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｂ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｃ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質は３−フタルイミドプロピオンアルデヒドであり、そのように形成したイソプロピルアセトニドエステルを塩基で処理して、対応するアミノアセトニドイソプロピルエステルを得るステップをさらに含む、請求項１１、請求項１３、または請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
そのように形成したシクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステルを塩基で処理して、対応するアミノシクロペンチリデンイソプロピルエステルを得るステップをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記塩基がエチレンジアミンである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、アミノアルデヒド基質またはＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法。
【請求項１９】
前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドが、Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−アミノプロピオンアルデヒド、アミノアセトアルデヒド、Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、またはＮ−Ｆｍｏｃ−アミノアセトアルデヒドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒドまたはＮ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記アルドラーゼがＤＥＲＡ１０２である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
そのように形成したラクトールを酸化させて、対応するラクトンを得るステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
そのように形成したラクトンをイソプロピルアルコールおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
そのように形成したラクトンをシクロペンタノンおよびイソプロピルアルコールと反応させて、対応するシクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステルを得るステップをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
（ａ）そのように形成したラクトールを、触媒的脱水素条件下で脱水素して、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｂ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｃ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと
をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｂ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｃ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと
をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２９】
ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、一般式（Ｉ）のアミノアルデヒド基質化合物
【化１】
［式中、
ｎ＝１、２、３、または４であり、
Ｒ’は、水素またはＮ保護基であり、
Ｒ”は、水素またはＮ保護基であり、またはＲ’およびＲ”は、これらが結合している窒素と一緒になって、５員または６員の複素環部分を形成している］と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法。
【請求項３０】
ｎが１または２である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記アルドラーゼがＤＥＲＡ１０２である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン。
【請求項３３】
前記化合物が次式である請求項３２に記載の化合物。
【化２】
【請求項３４】
前記化合物が次式である請求項３２に記載の化合物。
【化３】
【請求項３５】
次式の化合物。
【化４】
【請求項３６】
次式の化合物。
【化５】
【請求項３７】
次式の化合物。
【化６】
【請求項３８】
次式の化合物。
【化７】
【請求項３９】
次式の化合物。
【化８】
【請求項４０】
次式の化合物。
【化９】
【請求項４１】
次式の化合物。
【化１０】
【請求項４２】
次式の化合物。
【化１１】
【請求項４３】
粉末Ｘ線回折ピークが約９．０、１２．７、２０．２、２２．６、および２５．２度２θにあることを特徴とする、４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドの結晶形態。
【請求項４４】
粉末Ｘ線回折ピークが約６．３、１２．７、１６．８、２１．１、および２５．５度２θにあることを特徴とする（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの結晶形態。
【請求項１】
アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アセトアルデヒドを、３−フタルイミドプロピオンアルデヒド、Ｎ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒド、およびＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドからなる群から選択されるＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法。
【請求項２】
前記アルドラーゼが２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（ＤＥＲＡ）というアルドラーゼである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記アルドラーゼが、
配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４、
配列番号３のヌクレオチド配列または配列番号１８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０６、
配列番号８のヌクレオチド配列または配列番号２３のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０１、
配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２、
配列番号１０のヌクレオチド配列または配列番号２５のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０３、
配列番号１１のヌクレオチド配列または配列番号２６のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０４、
配列番号１２のヌクレオチド配列または配列番号２７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０５、
配列番号１３のヌクレオチド配列または配列番号２８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０６、
配列番号１４のヌクレオチド配列または配列番号２９のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０７、
配列番号１５のヌクレオチド配列または配列番号３０のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０８、
またはアミノ酸配列同一性がその少なくとも約２０％であるアルドラーゼである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記アルドラーゼが、配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４、配列番号３のヌクレオチド配列または配列番号１８のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０６、または配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記アルドラーゼが、配列番号２のヌクレオチド配列または配列番号１７のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ０４である、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記アルドラーゼが、配列番号９のヌクレオチド配列または配列番号２４のアミノ酸配列を含むＤＥＲＡ１０２である、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質が３−フタルイミドプロピオンアルデヒドである、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質がＮ−ホルミル−３−アミノプロピオンアルデヒドまたは３−スクシンイミド−プロピオンアルデヒドである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質がＮ−ジＢｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
そのように形成したラクトールを酸化させて、対応するラクトンを得るステップをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
そのように形成したラクトンをイソプロピルアルコールおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
そのように形成したラクトンをシクロペンタノンおよびイソプロピルアルコールと反応させて、対応するシクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステルを得るステップをさらに含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
（ａ）そのように形成したラクトールを、触媒的脱水素条件下で脱水素して、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｂ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｃ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップとをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
（ａ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｂ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｃ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ｎ保護されたアミノアルデヒド基質は３−フタルイミドプロピオンアルデヒドであり、そのように形成したイソプロピルアセトニドエステルを塩基で処理して、対応するアミノアセトニドイソプロピルエステルを得るステップをさらに含む、請求項１１、請求項１３、または請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
そのように形成したシクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステルを塩基で処理して、対応するアミノシクロペンチリデンイソプロピルエステルを得るステップをさらに含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１７】
前記塩基がエチレンジアミンである、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、アミノアルデヒド基質またはＮ保護されたアミノアルデヒド基質と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法。
【請求項１９】
前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドが、Ｎ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、３−アミノプロピオンアルデヒド、アミノアセトアルデヒド、Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒド、またはＮ−Ｆｍｏｃ−アミノアセトアルデヒドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−Ｂｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒドまたはＮ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記アミノアルデヒドまたは前記Ｎ保護されたアミノアルデヒドがＮ−ＣＢｚ−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
前記アルドラーゼがＤＥＲＡ１０２である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２４】
そのように形成したラクトールを酸化させて、対応するラクトンを得るステップをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２５】
そのように形成したラクトンをイソプロピルアルコールおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
そのように形成したラクトンをシクロペンタノンおよびイソプロピルアルコールと反応させて、対応するシクロペンチリデンフタルイミドイソプロピルエステルを得るステップをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
（ａ）そのように形成したラクトールを、触媒的脱水素条件下で脱水素して、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｂ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｃ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと
をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
（ａ）そのように形成したラクトールを酸化させて、対応する３，５−ジヒドロキシヘプタン酸を得るステップと、
（ｂ）前記３，５−ジヒドロキシヘプタン酸をジシクロヘキシルアミンで処理して、対応する塩を形成するステップと、
（ｃ）そのように形成した塩をオルトギ酸トリイソプロピルおよびアセトンと反応させて、対応するイソプロピルアセトニドエステルを得るステップと
をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２９】
ＤＥＲＡ１０１、ＤＥＲＡ１０２、ＤＥＲＡ１０３、ＤＥＲＡ１０４、ＤＥＲＡ１０５、ＤＥＲＡ１０６、ＤＥＲＡ１０７、またはＤＥＲＡ１０８アルドラーゼを触媒とするアルドール縮合条件下、アルデヒドを、一般式（Ｉ）のアミノアルデヒド基質化合物
【化１】
［式中、
ｎ＝１、２、３、または４であり、
Ｒ’は、水素またはＮ保護基であり、
Ｒ”は、水素またはＮ保護基であり、またはＲ’およびＲ”は、これらが結合している窒素と一緒になって、５員または６員の複素環部分を形成している］と反応させて、対応するラクトールを形成するステップを含む方法。
【請求項３０】
ｎが１または２である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記アルドラーゼがＤＥＲＡ１０２である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
２−［２−（４，６−ジヒドロキシ−テトラヒドロ−ピラン−２−イル］−イソインドール−１，３−ジオン。
【請求項３３】
前記化合物が次式である請求項３２に記載の化合物。
【化２】
【請求項３４】
前記化合物が次式である請求項３２に記載の化合物。
【化３】
【請求項３５】
次式の化合物。
【化４】
【請求項３６】
次式の化合物。
【化５】
【請求項３７】
次式の化合物。
【化６】
【請求項３８】
次式の化合物。
【化７】
【請求項３９】
次式の化合物。
【化８】
【請求項４０】
次式の化合物。
【化９】
【請求項４１】
次式の化合物。
【化１０】
【請求項４２】
次式の化合物。
【化１１】
【請求項４３】
粉末Ｘ線回折ピークが約９．０、１２．７、２０．２、２２．６、および２５．２度２θにあることを特徴とする、４−フルオロ−α−［２−メチル−１−オキソプロピル］−γ−オキソ−Ｎ，β−ジフェニルベンゼンブタンアミドの結晶形態。
【請求項４４】
粉末Ｘ線回折ピークが約６．３、１２．７、１６．８、２１．１、および２５．５度２θにあることを特徴とする（２Ｒ−トランス）−５−（４−フルオロフェニル）−２−（１−メチルエチル）−Ｎ，４−ジフェニル−１−［２−（テトラヒドロ−４−ヒドロキシ−６−オキソ−２Ｈ−ピラン−２−イル）エチル］−１Ｈ−ピロール−３−カルボキサミドの結晶形態。
【図１】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【公開番号】特開２００９−８２１２９（Ｐ２００９−８２１２９Ａ）
【公開日】平成２１年４月２３日（２００９．４．２３）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２００８−１９７５５１（Ｐ２００８−１９７５５１）
【出願日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【出願人】（３９７０６７１５２）ファイザー・プロダクツ・インク (504)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年４月２３日（２００９．４．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１９７５５１（Ｐ２００８−１９７５５１）
【出願日】平成２０年７月３１日（２００８．７．３１）
【出願人】（３９７０６７１５２）ファイザー・プロダクツ・インク (504)
【Ｆターム（参考）】
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