グルコース吸収抑制剤
【課題】天然物由来の安全で，温和な効力を有するグルコース吸収抑制剤，及び，該グルコース吸収抑制剤を含有する血糖値上昇予防又は治療薬，或いは，血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いはペットフードを提供すること。
【解決手段】
マルチフロリンＡを有効成分とするモモの葉またはモモの花をアルコール又は熱水で抽出して得た抽出液を，６０％メタノール／ジクロロメタンで分画し，６０％メタノール側に抽出される精製画分を採取することにより調製することができる。また，更に，シリカカラム及び／又はＯＤＳカラムによるカラムクロマトグラフィーにより精製・分離し，精製画分を採取することにより，更に精製することができる。
【解決手段】
マルチフロリンＡを有効成分とするモモの葉またはモモの花をアルコール又は熱水で抽出して得た抽出液を，６０％メタノール／ジクロロメタンで分画し，６０％メタノール側に抽出される精製画分を採取することにより調製することができる。また，更に，シリカカラム及び／又はＯＤＳカラムによるカラムクロマトグラフィーにより精製・分離し，精製画分を採取することにより，更に精製することができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は，モモ葉由来のグルコース吸収抑制剤，特に，モモの葉またはモモの花から精製・分離したマルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤，及び該グルコース吸収抑制剤を含有する血糖値上昇予防又は治療薬，或いは，血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いはペットフードに関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満や糖尿病等は，食生活のような生活習慣，環境因子によりその発症が大きく影響されることから，生活習慣病とも呼ばれている。近年，日本では食べ過ぎ等の食生活が原因となるＩＩ型糖尿病が増加の一途をたどっている。糖尿病には，インスリン依存性糖尿病（Ｉ型糖尿病）とインスリン非依存型糖尿病（ＩＩ型糖尿病）の２タイプがあるが，その９０％は後者のタイプである。インスリン非依存型糖尿病における高血糖の原因として，食後の急峻な血糖上昇に対応し，瞬時に分泌されるべきインスリン早期相の欠如と食後高血糖の持続により誘導される内因性基礎インスリン分泌低下が挙げられる。
【０００３】
食後高血糖の是正は経口血糖値降下剤やインスリンを用いても困難なことがあり，消化系における糖質の急速な吸収を防ぐ方法が有望である。消化系における糖質の吸収としては，小腸中のα−グルコシダーゼが関与しており，これらの酵素を阻害することにより，食後の血糖値上昇が抑制され，更にそれに続くインスリン値の上昇も抑制されることが明らかにされている。また，消化系における糖質の吸収を防ぐ方法として，腸管等の消化管にけるグルコース等の吸収を抑制する方法も知られている。さらに，腎尿細管においてグルコースの再吸収を抑制する方法も知られている。
【０００４】
昨今，糖尿病の予防，改善のために，血糖値上昇抑制のために各種の方法が提案され，多くの血糖値上昇抑制剤が開示されている。それらの血糖値上昇抑制剤として，植物或いは植物抽出物を有効成分とする血糖値上昇抑制剤も多く知られている。例えば，植物由来として，茶水溶性多糖成分のテアラクトンを有効成分とする抗糖尿病剤（特開平４−１２４１３９号公報）が，バナバ葉の熱水抽出画分を有効成分とする抗糖尿病剤（特許平７−２２８５３９号公報）が，センブリより抽出単離したキサントン類の血糖降下剤（特開平７−２０６６７３号公報）が開示されている。
【０００５】
また，アキノワスレグサ，イタドリ，オオイタビ，オオゴチョウ，カタバミ，クマツヅラ，サツマイモ，ジュズダマ，ツルグミ，ツルソバ，トウアズキ，トウガン，ニガニガグサ，ノカラムシ，ノビル，パパイヤ，ビョウヤナギ，モクセンナ，ヤマモモの乾燥粉末或いは抽出物からなる血糖値上昇抑制剤（特開２００４−７５６３８号公報）が，或いは，桑葉抽出物（特開２００４−２１７５３２号公報，特開２００６−２７３７９７号公報），コケモモ抽出物，ブドウ種子抽出物（特表２００５−５１５９６２号公報），アセロラ抽出物（特開２００５−８２５０９号公報），バカス，熊笹，トウモロコシの茎からなる血糖値上昇抑制剤がそれぞれ開示されている。
【０００６】
更に，枇杷種子の粉砕物（特開２００５−３２５０２９号公報），オオベニゴウカンの葉抽出物（特開２００６−２３２７５０号公報），ライチ種子抽出物（特開２００７−７０２６６号公報），モミジの成分（特開２００７−１８６４８６号公報），茶の葉及び枇杷（特開２００７−２３０９８５号公報），フェヌグリーク種子の部分加水分解物（特開２００７−２６９６８５号公報），トウカエデ，チドリノキ（特開２００７−３２０９４８号公報），シソ乾燥物，抽出物（特開２００８−８８０８７号公報）からなる血糖値上昇抑制剤がそれぞれ開示されている。
【０００７】
本発明の化合物であるマルチフロリンＡは，モモの花に含まれる成分として知られている。また，本発明の化合物と分子量は若干異なるが類似した構造を持つ化合物としてマルチフロリンＢまたはベンケイソウ科石蓮属の石蓮花の含有成分の化合物１０がある。他にもフラボノイド配糖体のルチン，ヘスペリジン，ナリンギンなどがある。バラ科プルナス属の植物の抽出物を有効成分として含有する過剰食欲抑制剤が開示されており，この抽出物にマルチフロチンＢが含まれていることが述べられている。また，その実施例において，この抽出物の血糖値改善作用が確認されている（特開２００７−５５９４２号公報）。ベンケイソウ科石蓮属の石蓮花の含有成分の少なくとも１種を有効成分として含有する糖吸収抑制用組成物が開示されている。有効成分の１種として化合物１０が報告されている（特開２００６−２４１０５４号公報）。バイオフラボノイドを含有する血糖降下剤が開示されており，含有するバイオフラボノイドとしてヘスペリジン，ルチン，ナリンギンが報告されている（特開２００２−５２４４８０号公報）。ヘスペリジン，ナリンギン等のフラバノン類を有効成分として含有する前駆脂肪細胞分化促進用組成物が開示されており，血糖低下作用があるとしている（特許第３０６９６８６号）。
【０００８】
上記のように，これまで植物或いは植物抽出物からなる各種の血糖値上昇抑制剤が開示されているが，モモの葉またはモモの花等から抽出，精製・分離された特定のマルチフロリンＡのような成分からなる血糖値上昇抑制剤は開示されていない。
【０００９】
また，本発明の化合物であるマルチフロリンＡには通便作用が報告されている（非特許文献）。しかしながらマルチフロリンＡをグルコース吸収抑制に用いることについては，報告されていない。
【００１０】
【特許文献１】特開平４−１２４１３９号公報。
【特許文献２】特開平７−２０６６７３号公報。
【特許文献３】特開平７−２２８５３９号公報。
【特許文献４】特開２００４−７５６３８号公報。
【特許文献５】特開２００４−２１７５３２号公報。
【特許文献６】特開２００５−８２５０９号公報。
【特許文献７】特開２００５−３２５０２９号公報。
【特許文献８】特表２００５−５１５９６２公報。
【特許文献９】特開２００６−２３２７５０号公報。
【特許文献１０】特開２００６−２７３７９７号公報。
【特許文献１１】特開２００７−７０２６６号公報。
【特許文献１２】特開２００７−１８６４８６号公報。
【特許文献１３】特開２００７−２２８９６４号公報。
【特許文献１４】特開２００７−２３０９８５号公報。
【特許文献１５】特開２００７−２６９６８５号公報。
【特許文献１６】特開２００７３２０９４８号公報。
【特許文献１７】特開２００８−８８０８７号公報。
【非特許文献１】薬学雑誌Ｖｏｌ．９７，Ｎｏ．１，Ｐａｇｅ．１０９−１１１，１９７７。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の課題は，天然物由来の安全で，温和な効力を有するグルコース吸収阻害剤，及び，該グルコース吸阻害剤を含有する血糖値上昇予防又は，治療薬，或いは，血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いは，ペットフードを提供することにある。
【発明が解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは，先に，バラ科の下位分類の１つで，サクラ，ウメ，モモなどが属するサクラ亜科（学名 Ｐｒｕｎｏｉｄｅａｅ）の花木類の中で，血糖値上昇抑制効果を有するものがあることを見い出し，特に，モモ（Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ）の葉のメタノール抽出物が顕著な血糖値上昇抑制作用を有することを見い出し，該抽出物を有効成分とする血糖値上昇抑制剤等について，特許出願を行なった（特開２００７−３５４８１号優先権特願２００８−３３７４７号）。そして更に，モモの葉の血糖値上昇を抑制する物質について，鋭意検討する中で，モモの葉の血糖値上昇を抑制する物質の１つとしてマルチフロリンＡを精製・単離することに成功し，該物質が腸管でのグルコース吸収阻害を有することを確認し，本発明を完成するに至った。また，モモの花を原料とした場合にも該成分が含まれていることを示し，メタノール以外にエタノールや熱水で抽出した場合にも，さらに原料を乾燥させた場合も乾燥させない場合にも，十分にその効果が認められることを示した。
【００１３】
すなわち，本発明は，マルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤からなる。本発明の，マルチフロリンＡは，下記一般式（１）で表される。
【００１４】
【化１】
【００１５】
本発明のグルコース吸収抑制剤の有効成分であるマルチフロリンＡは，モモの葉又はモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物を抽出して得られるマルチフロリンＡ精製画分を採取することにより調製できる。また，モモの葉又はモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物を抽出して得られるマルチフロリンＡ精製画分を９０％メタノールで抽出して得られるマルチフロリンＡ精製画分を採取することにより調製できる。また，モモの葉又はモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物を９０％メタノールで抽出し，６０％メタノール／ジクロロメタンで分画し，６０％メタノール側に抽出されるマルチフロリンＡ精製画分を採取することにより調製することができる。更に，シリカカラム及び／又はＯＤＳカラムによるカラムクロマトグラフィーにより精製・分離し，マルチフロリンＡ精製画分を採取することにより，更に精製されたマルチフロリンＡを調製することができる。
【００１６】
本発明のマルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤は，腸管または腎尿細管におけるグルコースの吸収を抑制し，該グルコース吸収抑制剤を添加，含有させることにより，血糖値上昇予防または治療薬を，或いは，血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いはペットフードを提供することができる。
【００１７】
すなわち具体的には本発明は，（１）マルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤や，（２）有効成分のマルチフロリンＡが，モモの葉またはモモの花をアルコール又は熱水で抽出した抽出物であることを特徴とする上記（１）記載のグルコース吸収抑制剤や，（３）マルチフロリンＡ精製画分が，モモの葉またはモモの花を原料としてアルコール抽出または熱水抽出した抽出物を，９０％メタノールで抽出して得られるマルチフロリンＡ精製画分であることを特徴とする上記（１）記載のグルコース吸収抑制剤や，（４）マルチフロリンＡ精製画分が，モモの葉またはモモの花を原料としてアルコール抽出または熱水抽出した抽出物を，６０％メタノールで抽出して得たものを，シリカカラム及び／またはＯＤＳカラムによるカラムクロマトグラフィーにより精製・分離した精製画分であることを特徴とする上記（１）記載のグルコース吸収抑制剤や，（５）グルコース吸収抑制が，腸管または腎尿細管におけるグルコースの吸収を抑止するものであることを特徴とする上記（１）〜（４）のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤からなる。
【００１８】
また本発明は，（６）上記（１）〜（５）のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を含有することと特徴とする血糖値上昇予防または治療薬や，（７）上記（１）〜（５）のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を添加したことを特徴とする血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品や，（８）上記（１）〜（５）のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を添加したことを特徴とする血糖値上昇抑制機能を付与したペットフードや，（９）糖尿病，肥満予防・改善，メタボリックシンドロームの予防・改善，ダイエット等の用途を示す表示がされた飲食品，または医薬部外品，医薬品。（１０）モモの葉または花を原料としたアルコール抽出または熱水抽出した抽出液からグルコース吸収抑制有効成分を採取することを特徴とする上記（２）〜（４）記載のグルコース吸収抑制剤有効成分の調製方法からなる。
【発明の効果】
【００１９】
本発明のグルコース吸収抑制剤の有効成分であるマルチフロリンＡは，本来，モモの葉または花の一成分であるため，毒性はなく，また，植物のような天然由来の有効成分として，穏やかなかつ顕著なグルコース吸収抑制作用を奏する。したがって，本発明は，天然物由来の安全で，温和かつ顕著な効力を有するグルコース吸収抑制剤を提供するとともに，該グルコース吸収抑制剤を含有する血糖値上昇予防又は治療薬，或いは，血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いは，ペットフードを提供し、人間又は動物の糖尿病のような生活習慣病の予防，改善のための有力な対処法を提供することができる。
【００２０】
本発明は，モモの葉またはモモの花由来のマルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤，及び，該グルコース吸収抑制剤を含有する血糖値上昇予防又は治療薬，或いは，グルコース吸収抑制剤を添加した血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いは，ペットフードからなる。
【００２１】
本発明のグルコース吸収抑制剤の有効成分であるマルチフロリンＡを調製するには，フラボノイド類および糖類からの合成法により製造することもできるが，グルコース吸収抑制剤の有効成分としての用途の目的からは，モモの葉またはモモの花からの抽出・精製することによる調製方法が特に好ましい。モモの葉またはモモの花から抽出・精製により，本発明のグルコース吸収抑制剤の有効成分であるマルチフロリンＡを調製するには，まず，モモの葉またはモモの花からの抽出液を調製する。モモは，葉部および花部，或いは植物全体をそのまま用いてもよく，これらを乾燥した乾燥体，若しくは乾燥後粉砕した粉末を用いることもできる。また，これらを水抽出，熱水抽出，酸性下での抽出，アルカリ性下での抽出，メタノール，エタノール，アセトン，酢酸エチル，ヘキサン等各種の有機溶媒を用いて，抽出した抽出物を用いることもできるが，その後の処理等の関連から，エタノールで抽出した抽出物を用いることが好ましい。
【００２２】
モモの葉またはモモの花から抽出した本発明の有効成分を含有する抽出液から，本発明の有効成分であるマルチフロリンＡの精製画分を精製・分離して採取するには，例えば，モモの葉のメタノール抽出液またはモモの花の熱水抽出液を，おのおの６０％メタノール／ジクロロメタンで分画し，６０％メタノール側に抽出されるマルチフロリンＡ精製画分を採取する。該画分は，更に，シリカカラム及び／又はＯＤＳ（Ｏｃｔａｄｅｃｙｌｓｉｌａｎｅ）カラムによるカラムクロマトグラフィーにより精製・分離し，マルチフロリンＡ精製画分を採取することができる。
【００２３】
モモの葉またはモモの花から，精製・分離したマルチフロリンＡ精製画分を用いて，血糖値上昇抑制剤，或いは，血糖値上昇予防又は治療薬を製造するには，上記の方法で製造した精製画分を情報に従って公知の医薬用無毒性担体と組み合わせて製剤化すればよい。本発明に関わる血糖値上昇抑制剤は，種々の剤型での投与が可能であるが，経口投与剤として製剤化される。例えば，経口投与剤としては錠剤，顆粒剤，散剤，カプセル剤，ソフトカプセル剤などの固形剤，溶液剤，懸濁剤，乳化剤等の液剤，凍結乾燥剤等が挙げられ，これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。
【００２４】
上記医薬用無毒性担体としては，例えば，グルコース，乳糖，ショ糖，でんぷん，マンニトール，デキストリン，脂肪酸グリセリド，ポリエチレングリコール，ヒドロキシエチルでんぷん，エチレングリコール，ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル，アミノ酸，アルブミン，水，生理食塩水などが挙げられる。また，必要に応じて安定化剤，滑沢剤，湿潤剤，乳化剤，結合剤等の慣用の添加剤を適宜添加することができる。本発明に関わる血糖値上昇抑制剤において，有効成分であるマルチフロリンＡの投与量は，患者の年齢，体重，症状，疾患の程度，投与スケジュール，製剤形態等により，適宜選択，決定されるが，例えば，一日当たり生薬当価量として０．１〜１００ｇ／ｋｇ体重程度とされ，一日数回に分けて投与してもよい。
【００２５】
また，本発明に関わるモモの葉またはモモの花由来の有効成分は，毒性を有することは報告されていないことから，血糖値上昇抑制を目的とした飲食品として摂取することもできる。本発明の有効成分を添加した血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品は，特定保健用食品，栄養機能食品，又は健康食品等として位置付けることができる。機能性食品としては，例えば，本発明の有効成分に適当な所剤を添加した後，慣用の手段を用いて，食用に適した状態，例えば，顆粒状，粒状，錠剤，カプセル剤，ソフトカプセル剤，ペースト状等に形成したものを用いることができる。この飲食品はそのまま食用に供してもよく，また種々の食品（例えばハム，ソーセージ，かまぼこ，ちくわ，パン，バター，粉乳，菓子など）に添加して使用したり，水，酒類，果汁，牛乳，清涼飲料水等の飲物に添加して使用してもよい。かかる食品の形態における本発明の有効成分の摂取量は，年齢，体重，症状，疾患の程度，食品の形態等により適宜選択・決定されるが，例えば，一日当たり生葉等価量として０．１〜１００ｇ／ｋｇ体重程度とされ，一日数回に分けて投与してもよい。
【００２６】
また，本発明に関わるモモの葉またはモモの花由来の有効成分は，動物用にペットフードとして用いることもでき，摂取量はペットの種類，年齢，体重，症状，疾患の程度，食品の形態等により適宜選択されるが，食品に準拠して投与すればよい。
【００２７】
以下，実施例により本発明を具体的に説明するが，本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２８】
［モモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の抽出分離］
モモの葉エキスに有意な血糖値上昇抑制作用があることから，該血糖値上昇抑制作用を有する活性成分の抽出分離を，活性成分の抽出分離は，図１のフローに従って行なった。すなわち，モモの葉のメタノール（ＭｅＯＨ）抽出エキス（１８．０ｇ）を１．５Ｌの蒸留水（Ｗａｔｅｒ）に溶解させ，等量の酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を加え，Ｗａｔｅｒ［１］画分とＥｔＯＡｃ画分に分配した。この操作を３回繰り返した。酢酸エチル画分をエバポレーターで減圧濃縮後，同様の操作により，更に９０％メタノール画分とｎ−Ｈｅｘ画分（ｎ−ヘキサン）画分に分配した。全ての画分をエバポレーターで減圧濃縮後，凍結乾燥し，重量を測定した。これらの分配操作により，Ｗａｔｅｒ［１］画分１２．６ｇ，９０％ＭｅＯＨ画分４．８ｇ，ｎ−Ｈｅｘ画分０．６ｇの３つの画分を得た。３つの画分のうち、９０％ＭｅＯＨ画分のみが、グルコースを負荷したマウスにおいて血糖値上昇抑制作用を示したことから，さらにこの９０％ＭｅＯＨ画分４．８ｇを１Ｌの６０％ＭｅＯＨ溶液に溶解させて，ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）を加えて分配する操作により，６０％ＭｅＯＨ画分（１．５ｇ）とＣＨ２Ｃｌ２画分（３．３ｇ）の２つの画分を得た。２つの画分のうち、６０％ＭｅＯＨ画分のみが、グルコースを負荷したマウスにおいて血糖値上昇抑制作用を示した。
【００２９】
上記で得られたモモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分を含有する６０％ＭｅＯＨ画分を精製・分離して，該グルコース吸収阻害活性成分の構造について分析した（図１）。６０％ＭｅＯＨ画分の精製・分離のフローを上記に続いて図１に示す。すなわち，上記で得られたモモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分を含有する６０％ＭｅＯＨ画分を，ＯＤＳ（Ｏｃｔａｄｅｃｙｌｓｉｌａｎｅ）カラム（ＯＤＳゲル３０ｇ，Ｗａｔｅｒ／ＭｅＯＨ＝１／１（３Ｖｏｌ．）→ＭｅＯＨ（３Ｖｏｌ．））クロマトグラフィーにより，１５個の画分（Ｆｒ．）に分画したところ，５〜９番目を合わせた画分（Ｆｒ．５−９）がグルコースを負荷したマウスにおいて血糖値上昇抑制作用を示した。この画分（Ｆｒ．５−９）を，ＯＤＳカラム（ＯＤＳゲル２０ｇ，Ｗａｔｅｒ／ＭｅＯＨ＝２／１（３Ｖｏｌ．）→ＭｅＯＨ（３Ｖｏｌ．））クロマトグラフィーにより，８個の画分に分画したところ，４〜７番目を合わせた画分（Ｆｒ．４−７）がグルコースを負荷したマウスにおいて血糖値上昇抑制作用を示した。さらに，この画分（Ｆｒ．４−７）をプレパックシリカゲルカラム（Ｓｅｐ−Ｐａｃ，３ｃｃ，ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝１０／１（３Ｖｏｌ．））クロマトグラフィーにより，３個の画分に分画したところ，２番目の画分（Ｆｒ．２）がグルコースを負荷したマウスにおいて血糖値上昇抑制作用を示した。最終的に，この画分を高速液体クロマトグラフィーシステムを用いたＯＤＳカラム（ＨＧ−５，直径２０ｍｍ，６０％ＭｅＯＨ→ＭｅＯＨ）クロマトグラフィーにより分画し，単一の成分に分離した。単一成分であることは，得られた画分を濃縮して，薄層クロマトグラフィーにより単一スポットを示すことで確認した。
【００３０】
［モモ葉の粗抽出物の血糖値上昇抑制作用の確認］
上記モモ葉エキス（粗抽出物）について，糖負荷による血糖値上昇の抑制作用を確認するとともに，予想されるメカニズムとして，腸管におけるグルコース吸収阻害作用について試験した。
【００３１】
（グルコース負荷試験）
上記モモ葉エキス（粗抽出物）について，グルコース負荷試験を行なった結果を，図２に示す。グルコース（１，０００ｍｇ／ｋｇ）とサンプル水溶液または蒸留水を混合させたものをマウスに強制経口投与し，経時的に採血して血糖値を測定した。図に示されるように，モモ葉エキス（１，０００ｍｇ／ｋｇ）投与群では糖負荷後３０分時に対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）に対して有意に血糖値上昇抑制が示された。このことから，モモ葉エキス粗抽出物には血糖値上昇を抑制する活性成分が含有されていることが示された。
【００３２】
（腸管におけるグルコース吸収阻害試験）
腸管におけるグルコース吸収阻害試験の概要を図２に示す。腸管におけるグルコース吸収阻害試験にマウスを用いた。マウスの腸管を結紮して腸管から血中へのグルコース吸収に及ぼす影響を測定した。操作は，（１）供試試料（糖を含む）の胃底部からの投与，（２）マウスの腸管結紮，（３）供試試料投与３０分後に尾採血，（４）生理食塩水で内容物を洗浄，（５）腸管内グルコース濃度測定，の手順で行なった。この試験では，糖としてグルコースを用いた。糖（グルコース１，０００ｍｇ／ｋｇ）負荷後３０分間に上昇した血糖値を測定し，腸管内のグルコース残存％（腸管に投与したグルコースを１００％とした時に血中に吸収されずに腸管内に残ったグルコース量％）を測定した。この結果から，供試試料の腸管におけるグルコース吸収阻害作用を調べた。
【００３３】
（腸管におけるグルコース吸収阻害試験の結果）
上記モモ葉エキス（粗抽出物）について，腸管におけるグルコース吸収阻害試験を実施した結果を，図３に示す。図に示されるように，モモ葉エキス（１，０００ｍｇ／ｋｇ）投与群では糖負荷後３０分時に対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）に対して有意に血糖値上昇抑制を示した。このことより，モモ葉エキスは腸管におけるグルコース吸収を抑制することで，グルコース負荷時の血糖値上昇を抑制していることが示された。
【００３４】
［モモ葉エキスの分離画分の血糖値上昇抑制作用の確認］
上記モモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の抽出分離によって，分離途中で得られたＷａｔｅｒ［１］画分，９０％ＭｅＯＨ画分，ｎ−Ｈｅｘ画分の３つの画分，および次の段階で９０％ＭｅＯＨ画分を分離することにより得られた６０％ＭｅＯＨ画分及びＣＨ２Ｃｌ２画分の２つの画分について，各々の段階でグルコース負荷（１，０００ｍｇ／ｋｇ）による血糖値上昇の抑制作用を確認するために試験した。
【００３５】
（モモ葉エキスの分離画分のグルコース負荷試験の結果）
上記モモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の分離において得られたＷａｔｅｒ［１］画分，９０％ＭｅＯＨ画分，ｎ−Ｈｅｘ画分の３つの画分について，グルコース負荷試験を行なった結果を，図４に示す。図に示されるように，９０％ＭｅＯＨ画分のみにおいて，糖負荷後３０分時に対照群に対して有意な血糖値上昇抑制作用を示した。このことから，この画分に血糖値上昇を抑制する活性成分が含有されていることが示された。
【００３６】
上記の次の分画段階で得られた６０％ＭｅＯＨ画分及びＣＨ２Ｃｌ２画分について，グルコース負荷試験を行なった結果を，図５に示す。図に示されるように，６０％ＭｅＯＨ画分が，糖負荷後３０分時に対照群に対して有意な血糖値上昇抑制作用を示した。このことから，この画分に血糖値上昇を抑制する活性成分が含有されていることが示された。
【００３７】
［モモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の同定］
上記の分離操作により６０％ＭｅＯＨ画分から分離されたグルコース吸収阻害活性成分は，ＴＬＣ上で，単一スポットとして確認されたため，ＮＭＲによる分析（１Ｈ ＮＭＲ；１３Ｃ ＮＭＲ；ＤＥＰＴ；ＣＯＳＹ；ＨＭＱＣ；ＨＭＢＣ）を行なった。１Ｈ ＮＭＲによる分析の結果を，図６に示す。１Ｈ ＮＭＲスペクトルにおいて，特徴的なシグナルとして，δＨ０．９ｐｐｍに二重線で現れるメチル基と考えられるシグナル，δＨ２．０ｐｐｍ付近に一重線で現れるメチル基と考えられるシグナル，δＨ３から５ｐｐｍ付近に酸素と隣り合った炭素に結合する水素と考えられるシグナル（合計で１３Ｈ分と計算された），低磁場（δＨ６から８ｐｐｍ付近）にオレフィンプロトンと考えられる６Ｈ分のシグナルが観測された。また，１３Ｃ ＮＭＲスペクトルによる分析の結果を，図７に示す。１３Ｃ ＮＭＲスペクトル，ＤＥＰＴスペクトル及びＨＭＱＣスペクトルより，２個のカルボニル炭素（δＣ１７９．８，１７３．２），１４個のオレフィン炭素（δＣ１５９．６，１３６．５，１５８．８，１００．４，１６３．５，９５．３，１６１．８，１０６．０，１２３．０，１３２．３，１３２．３，１１６．９，１１６．９，１６１．８），８個のオキシメチン炭素（δＣ７２．２，７２．４，８３．７，７０．９，７６．３，７８．４，７２．１，７５．６）１個のオキシメチレン炭素（δＣ６５．２），２個のアセタール炭素（δＣ１０３．６，１０６．３），２個のメチル炭素（δＣ１８．２，２１．２）の存在が示唆された。
【００３８】
また，ＣＯＳＹスペクトル，ＨＭＢＣスペクトルにより，ポリフェノールの一種であるケンフェロール骨格およびグルコースおよびラムノースの３つの部分構造が明らかとなった。更に詳細な解析により，これらの部分構造の結合をケンフェロールの３位にラムノースとグルコースが連続して一般式（１）のように結合したものであることが示された。この化合物は赤茶色粉末状物として得られ，メタノールに可溶である。高分解能質量分析（ＥＳＩＭＳ）より，［ｍ／ｚ６５９．１５８８（Ｍ＋Ｎａ）＋］に分子イオンピークが確認されたことから，分子式はＣ２９Ｈ３２Ｏ１６であると決定された。以上の分析結果から，この化合物はマルチフロリンＡであると同定された。
【００３９】
（精製成分マルチフロリンＡの血糖値上昇抑制作用の確認）
上記により精製・同定したモモ葉エキス中のグルコース吸収阻害活性成分マルチフロリンＡについて，グルコース負荷試験を行った結果を図８に示した。図に示したようにマルチフロリンＡは濃度依存的にグルコース負荷３０分後の血糖値上昇を抑制して，０．５ｍｇ／ｋｇ以上の濃度において，対照群に対して有意な上昇抑制作用を示した。
【００４０】
（モモ葉エキスの安全性確認）
モモ葉抽出物の毒性の有無を確認するために，マウスに高用量の粗抽出物を単回経口投与（２，５００ｍｇ／ｋｇ，５，０００ｍｇ／ｋｇ）して，経過を観察した（各群２匹）。投与４時間以内の観察ではマウスの行動や状態にとくに異常は見られず，下痢などの症状も観察されなかった。さらに７日間の継続飼育中にも異常を示した個体や死亡した個体は見られなかったことから，モモ葉抽出物による生体への悪影響は見当たらず，安全であることが確認された。
【実施例２】
【００４１】
［モモ花エキスのグルコース吸収阻害活性成分の抽出分離］
モモの花エキスにも該グルコース吸収阻害活性成分が含まれていることを，モモの花投与によるグルコース負荷試験を確認したことから，該血糖値上昇抑制作用を有する活性成分の抽出分離を，図９のフローに従って行なった。すなわち，モモの花の熱水抽出エキス（１００％）から上記で示したモモ葉エキスの分離精製に準じる操作により，該グルコース吸収阻害活性成分を含む６０％ＭｅＯＨ画分を得た。この画分にはグルコース負荷試験により，血糖値上昇抑制作用があることを確認した。さらにこの６０％ＭｅＯＨ画分を，ＯＤＳカラム（ＯＤＳゲル２０ｇ，Ｗａｔｅｒ／ＭｅＯＨ＝２／１（３Ｖｏｌ．）→ＭｅＯＨ（３Ｖｏｌ．））クロマトグラフィーおよび，高速液体クロマトグラフィーシステムを用いたＯＤＳカラム（ＨＧ−５，直径２０ｍｍ，６０％ＭｅＯＨ→ＭｅＯＨ）クロマトグラフィーにより分画し，単一の成分に分離した。モモ花熱水抽出物から得られたこの成分（収率：０．７６％，図９）についてＮＭＲなどのスペクトルを解析したころ，上記でモモ葉エキスから得られたマルチフロリンＡ（収率：０．０２％，図１）と同一であることが明らかとなった。
【００４２】
（抽出処理法を変化させたモモ花エキスによるグルコース負荷試験の結果）
上記モモ花の熱水抽出物は該グルコース吸収抑制活性成分マルチフロリンＡが比較的多く含まれていることから，次に示した５種類の抽出処理法による活性の変化を調べた。すなわち，メタノール抽出，エタノール抽出，乾燥せずに熱水抽出，１００℃で乾燥させた後に熱水抽出，２００℃で乾燥させた後に熱水抽出の５種類で比較を行なった結果を図１０に示した。図に示したとおり，いずれの抽出法においてもモモ葉な抽出物は顕著な血糖値上昇抑制作用を示したことから，活性成分は通常用いられる溶媒，乾燥，熱にも安定であり，原料であるモモの花又はモモの葉が，加工処理によっても該グルコース吸収抑制活性を保持できることが示された。
【００４３】
（モモ葉由来成分およびモモ葉由来成分のグルコース負荷試験の結果）
モモ葉由来の該グルコース吸収抑制活性成分とモモ花の由来グルコース吸収抑制活性成分は，各種分析によりどちらも同一のマルチフロリンＡであることを示したが，その活性についてグルコース負荷試験により確認した結果を図１１に示した。図に示した通り，両方の成分ともに同じ濃度で同程度の活性を有することが示された。これによって，モモの葉にもモモの花にも含まれているマルチフロリンＡが，グルコース吸収阻害活性を示す活性本体であることが示された。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】本発明の実施例におけるモモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の抽出分離において，活性成分の抽出分離のフローおよびを示す図である。
【図２】本発明の実施例における，粗抽出物のグルコース負荷試験の結果を示す図である。
【図３】本発明の実施例における供試試料の腸管におけるグルコース吸収阻害試験において，該グルコース吸収阻害試験の概要を示す図である。
【図４】本発明の実施例における，９０％ＭｅＯＨ画分のグルコース負荷試験の結果を示す図である。
【図５】本発明の実施例における，６０％ＭｅＯＨ画分のグルコース負荷試験の結果を示す図である。
【図６】本発明の実施例におけるモモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の同定において，分離されたグルコース吸収阻害活性成分の１Ｈ ＮＭＲによる分析の結果を示す図である。
【図７】本発明の実施例におけるモモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の同定において，分離されたグルコース吸収阻害活性成分の１３Ｃ ＮＭＲによる分析の結果を示す図である。
【図８】本発明の実施例における，精製成分マルチフロリンＡのグルコース負荷試験の結果および濃度依存性を示す図である。
【図９】本発明の実施例におけるモモ花エキスのグルコース吸収阻害活性成分の抽出分離において，活性成分の抽出分離のフローおよびを示す図である。
【図１０】本発明の実施例における，モモ花エキスの処理方法の違った抽出物のグルコース負荷試験の結果を示す図である。
【図１１】本発明の実施例におけるモモ葉エキスから精製したマルチフロリンＡとモモ花エキスから精製したマルチフロリンＡとのグルコース吸収阻害活性の比較を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は，モモ葉由来のグルコース吸収抑制剤，特に，モモの葉またはモモの花から精製・分離したマルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤，及び該グルコース吸収抑制剤を含有する血糖値上昇予防又は治療薬，或いは，血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いはペットフードに関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満や糖尿病等は，食生活のような生活習慣，環境因子によりその発症が大きく影響されることから，生活習慣病とも呼ばれている。近年，日本では食べ過ぎ等の食生活が原因となるＩＩ型糖尿病が増加の一途をたどっている。糖尿病には，インスリン依存性糖尿病（Ｉ型糖尿病）とインスリン非依存型糖尿病（ＩＩ型糖尿病）の２タイプがあるが，その９０％は後者のタイプである。インスリン非依存型糖尿病における高血糖の原因として，食後の急峻な血糖上昇に対応し，瞬時に分泌されるべきインスリン早期相の欠如と食後高血糖の持続により誘導される内因性基礎インスリン分泌低下が挙げられる。
【０００３】
食後高血糖の是正は経口血糖値降下剤やインスリンを用いても困難なことがあり，消化系における糖質の急速な吸収を防ぐ方法が有望である。消化系における糖質の吸収としては，小腸中のα−グルコシダーゼが関与しており，これらの酵素を阻害することにより，食後の血糖値上昇が抑制され，更にそれに続くインスリン値の上昇も抑制されることが明らかにされている。また，消化系における糖質の吸収を防ぐ方法として，腸管等の消化管にけるグルコース等の吸収を抑制する方法も知られている。さらに，腎尿細管においてグルコースの再吸収を抑制する方法も知られている。
【０００４】
昨今，糖尿病の予防，改善のために，血糖値上昇抑制のために各種の方法が提案され，多くの血糖値上昇抑制剤が開示されている。それらの血糖値上昇抑制剤として，植物或いは植物抽出物を有効成分とする血糖値上昇抑制剤も多く知られている。例えば，植物由来として，茶水溶性多糖成分のテアラクトンを有効成分とする抗糖尿病剤（特開平４−１２４１３９号公報）が，バナバ葉の熱水抽出画分を有効成分とする抗糖尿病剤（特許平７−２２８５３９号公報）が，センブリより抽出単離したキサントン類の血糖降下剤（特開平７−２０６６７３号公報）が開示されている。
【０００５】
また，アキノワスレグサ，イタドリ，オオイタビ，オオゴチョウ，カタバミ，クマツヅラ，サツマイモ，ジュズダマ，ツルグミ，ツルソバ，トウアズキ，トウガン，ニガニガグサ，ノカラムシ，ノビル，パパイヤ，ビョウヤナギ，モクセンナ，ヤマモモの乾燥粉末或いは抽出物からなる血糖値上昇抑制剤（特開２００４−７５６３８号公報）が，或いは，桑葉抽出物（特開２００４−２１７５３２号公報，特開２００６−２７３７９７号公報），コケモモ抽出物，ブドウ種子抽出物（特表２００５−５１５９６２号公報），アセロラ抽出物（特開２００５−８２５０９号公報），バカス，熊笹，トウモロコシの茎からなる血糖値上昇抑制剤がそれぞれ開示されている。
【０００６】
更に，枇杷種子の粉砕物（特開２００５−３２５０２９号公報），オオベニゴウカンの葉抽出物（特開２００６−２３２７５０号公報），ライチ種子抽出物（特開２００７−７０２６６号公報），モミジの成分（特開２００７−１８６４８６号公報），茶の葉及び枇杷（特開２００７−２３０９８５号公報），フェヌグリーク種子の部分加水分解物（特開２００７−２６９６８５号公報），トウカエデ，チドリノキ（特開２００７−３２０９４８号公報），シソ乾燥物，抽出物（特開２００８−８８０８７号公報）からなる血糖値上昇抑制剤がそれぞれ開示されている。
【０００７】
本発明の化合物であるマルチフロリンＡは，モモの花に含まれる成分として知られている。また，本発明の化合物と分子量は若干異なるが類似した構造を持つ化合物としてマルチフロリンＢまたはベンケイソウ科石蓮属の石蓮花の含有成分の化合物１０がある。他にもフラボノイド配糖体のルチン，ヘスペリジン，ナリンギンなどがある。バラ科プルナス属の植物の抽出物を有効成分として含有する過剰食欲抑制剤が開示されており，この抽出物にマルチフロチンＢが含まれていることが述べられている。また，その実施例において，この抽出物の血糖値改善作用が確認されている（特開２００７−５５９４２号公報）。ベンケイソウ科石蓮属の石蓮花の含有成分の少なくとも１種を有効成分として含有する糖吸収抑制用組成物が開示されている。有効成分の１種として化合物１０が報告されている（特開２００６−２４１０５４号公報）。バイオフラボノイドを含有する血糖降下剤が開示されており，含有するバイオフラボノイドとしてヘスペリジン，ルチン，ナリンギンが報告されている（特開２００２−５２４４８０号公報）。ヘスペリジン，ナリンギン等のフラバノン類を有効成分として含有する前駆脂肪細胞分化促進用組成物が開示されており，血糖低下作用があるとしている（特許第３０６９６８６号）。
【０００８】
上記のように，これまで植物或いは植物抽出物からなる各種の血糖値上昇抑制剤が開示されているが，モモの葉またはモモの花等から抽出，精製・分離された特定のマルチフロリンＡのような成分からなる血糖値上昇抑制剤は開示されていない。
【０００９】
また，本発明の化合物であるマルチフロリンＡには通便作用が報告されている（非特許文献）。しかしながらマルチフロリンＡをグルコース吸収抑制に用いることについては，報告されていない。
【００１０】
【特許文献１】特開平４−１２４１３９号公報。
【特許文献２】特開平７−２０６６７３号公報。
【特許文献３】特開平７−２２８５３９号公報。
【特許文献４】特開２００４−７５６３８号公報。
【特許文献５】特開２００４−２１７５３２号公報。
【特許文献６】特開２００５−８２５０９号公報。
【特許文献７】特開２００５−３２５０２９号公報。
【特許文献８】特表２００５−５１５９６２公報。
【特許文献９】特開２００６−２３２７５０号公報。
【特許文献１０】特開２００６−２７３７９７号公報。
【特許文献１１】特開２００７−７０２６６号公報。
【特許文献１２】特開２００７−１８６４８６号公報。
【特許文献１３】特開２００７−２２８９６４号公報。
【特許文献１４】特開２００７−２３０９８５号公報。
【特許文献１５】特開２００７−２６９６８５号公報。
【特許文献１６】特開２００７３２０９４８号公報。
【特許文献１７】特開２００８−８８０８７号公報。
【非特許文献１】薬学雑誌Ｖｏｌ．９７，Ｎｏ．１，Ｐａｇｅ．１０９−１１１，１９７７。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明の課題は，天然物由来の安全で，温和な効力を有するグルコース吸収阻害剤，及び，該グルコース吸阻害剤を含有する血糖値上昇予防又は，治療薬，或いは，血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いは，ペットフードを提供することにある。
【発明が解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは，先に，バラ科の下位分類の１つで，サクラ，ウメ，モモなどが属するサクラ亜科（学名 Ｐｒｕｎｏｉｄｅａｅ）の花木類の中で，血糖値上昇抑制効果を有するものがあることを見い出し，特に，モモ（Ｐｒｕｎｕｓ ｐｅｒｓｉｃａ）の葉のメタノール抽出物が顕著な血糖値上昇抑制作用を有することを見い出し，該抽出物を有効成分とする血糖値上昇抑制剤等について，特許出願を行なった（特開２００７−３５４８１号優先権特願２００８−３３７４７号）。そして更に，モモの葉の血糖値上昇を抑制する物質について，鋭意検討する中で，モモの葉の血糖値上昇を抑制する物質の１つとしてマルチフロリンＡを精製・単離することに成功し，該物質が腸管でのグルコース吸収阻害を有することを確認し，本発明を完成するに至った。また，モモの花を原料とした場合にも該成分が含まれていることを示し，メタノール以外にエタノールや熱水で抽出した場合にも，さらに原料を乾燥させた場合も乾燥させない場合にも，十分にその効果が認められることを示した。
【００１３】
すなわち，本発明は，マルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤からなる。本発明の，マルチフロリンＡは，下記一般式（１）で表される。
【００１４】
【化１】
【００１５】
本発明のグルコース吸収抑制剤の有効成分であるマルチフロリンＡは，モモの葉又はモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物を抽出して得られるマルチフロリンＡ精製画分を採取することにより調製できる。また，モモの葉又はモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物を抽出して得られるマルチフロリンＡ精製画分を９０％メタノールで抽出して得られるマルチフロリンＡ精製画分を採取することにより調製できる。また，モモの葉又はモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物を９０％メタノールで抽出し，６０％メタノール／ジクロロメタンで分画し，６０％メタノール側に抽出されるマルチフロリンＡ精製画分を採取することにより調製することができる。更に，シリカカラム及び／又はＯＤＳカラムによるカラムクロマトグラフィーにより精製・分離し，マルチフロリンＡ精製画分を採取することにより，更に精製されたマルチフロリンＡを調製することができる。
【００１６】
本発明のマルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤は，腸管または腎尿細管におけるグルコースの吸収を抑制し，該グルコース吸収抑制剤を添加，含有させることにより，血糖値上昇予防または治療薬を，或いは，血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いはペットフードを提供することができる。
【００１７】
すなわち具体的には本発明は，（１）マルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤や，（２）有効成分のマルチフロリンＡが，モモの葉またはモモの花をアルコール又は熱水で抽出した抽出物であることを特徴とする上記（１）記載のグルコース吸収抑制剤や，（３）マルチフロリンＡ精製画分が，モモの葉またはモモの花を原料としてアルコール抽出または熱水抽出した抽出物を，９０％メタノールで抽出して得られるマルチフロリンＡ精製画分であることを特徴とする上記（１）記載のグルコース吸収抑制剤や，（４）マルチフロリンＡ精製画分が，モモの葉またはモモの花を原料としてアルコール抽出または熱水抽出した抽出物を，６０％メタノールで抽出して得たものを，シリカカラム及び／またはＯＤＳカラムによるカラムクロマトグラフィーにより精製・分離した精製画分であることを特徴とする上記（１）記載のグルコース吸収抑制剤や，（５）グルコース吸収抑制が，腸管または腎尿細管におけるグルコースの吸収を抑止するものであることを特徴とする上記（１）〜（４）のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤からなる。
【００１８】
また本発明は，（６）上記（１）〜（５）のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を含有することと特徴とする血糖値上昇予防または治療薬や，（７）上記（１）〜（５）のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を添加したことを特徴とする血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品や，（８）上記（１）〜（５）のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を添加したことを特徴とする血糖値上昇抑制機能を付与したペットフードや，（９）糖尿病，肥満予防・改善，メタボリックシンドロームの予防・改善，ダイエット等の用途を示す表示がされた飲食品，または医薬部外品，医薬品。（１０）モモの葉または花を原料としたアルコール抽出または熱水抽出した抽出液からグルコース吸収抑制有効成分を採取することを特徴とする上記（２）〜（４）記載のグルコース吸収抑制剤有効成分の調製方法からなる。
【発明の効果】
【００１９】
本発明のグルコース吸収抑制剤の有効成分であるマルチフロリンＡは，本来，モモの葉または花の一成分であるため，毒性はなく，また，植物のような天然由来の有効成分として，穏やかなかつ顕著なグルコース吸収抑制作用を奏する。したがって，本発明は，天然物由来の安全で，温和かつ顕著な効力を有するグルコース吸収抑制剤を提供するとともに，該グルコース吸収抑制剤を含有する血糖値上昇予防又は治療薬，或いは，血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いは，ペットフードを提供し、人間又は動物の糖尿病のような生活習慣病の予防，改善のための有力な対処法を提供することができる。
【００２０】
本発明は，モモの葉またはモモの花由来のマルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤，及び，該グルコース吸収抑制剤を含有する血糖値上昇予防又は治療薬，或いは，グルコース吸収抑制剤を添加した血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品，或いは，ペットフードからなる。
【００２１】
本発明のグルコース吸収抑制剤の有効成分であるマルチフロリンＡを調製するには，フラボノイド類および糖類からの合成法により製造することもできるが，グルコース吸収抑制剤の有効成分としての用途の目的からは，モモの葉またはモモの花からの抽出・精製することによる調製方法が特に好ましい。モモの葉またはモモの花から抽出・精製により，本発明のグルコース吸収抑制剤の有効成分であるマルチフロリンＡを調製するには，まず，モモの葉またはモモの花からの抽出液を調製する。モモは，葉部および花部，或いは植物全体をそのまま用いてもよく，これらを乾燥した乾燥体，若しくは乾燥後粉砕した粉末を用いることもできる。また，これらを水抽出，熱水抽出，酸性下での抽出，アルカリ性下での抽出，メタノール，エタノール，アセトン，酢酸エチル，ヘキサン等各種の有機溶媒を用いて，抽出した抽出物を用いることもできるが，その後の処理等の関連から，エタノールで抽出した抽出物を用いることが好ましい。
【００２２】
モモの葉またはモモの花から抽出した本発明の有効成分を含有する抽出液から，本発明の有効成分であるマルチフロリンＡの精製画分を精製・分離して採取するには，例えば，モモの葉のメタノール抽出液またはモモの花の熱水抽出液を，おのおの６０％メタノール／ジクロロメタンで分画し，６０％メタノール側に抽出されるマルチフロリンＡ精製画分を採取する。該画分は，更に，シリカカラム及び／又はＯＤＳ（Ｏｃｔａｄｅｃｙｌｓｉｌａｎｅ）カラムによるカラムクロマトグラフィーにより精製・分離し，マルチフロリンＡ精製画分を採取することができる。
【００２３】
モモの葉またはモモの花から，精製・分離したマルチフロリンＡ精製画分を用いて，血糖値上昇抑制剤，或いは，血糖値上昇予防又は治療薬を製造するには，上記の方法で製造した精製画分を情報に従って公知の医薬用無毒性担体と組み合わせて製剤化すればよい。本発明に関わる血糖値上昇抑制剤は，種々の剤型での投与が可能であるが，経口投与剤として製剤化される。例えば，経口投与剤としては錠剤，顆粒剤，散剤，カプセル剤，ソフトカプセル剤などの固形剤，溶液剤，懸濁剤，乳化剤等の液剤，凍結乾燥剤等が挙げられ，これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。
【００２４】
上記医薬用無毒性担体としては，例えば，グルコース，乳糖，ショ糖，でんぷん，マンニトール，デキストリン，脂肪酸グリセリド，ポリエチレングリコール，ヒドロキシエチルでんぷん，エチレングリコール，ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル，アミノ酸，アルブミン，水，生理食塩水などが挙げられる。また，必要に応じて安定化剤，滑沢剤，湿潤剤，乳化剤，結合剤等の慣用の添加剤を適宜添加することができる。本発明に関わる血糖値上昇抑制剤において，有効成分であるマルチフロリンＡの投与量は，患者の年齢，体重，症状，疾患の程度，投与スケジュール，製剤形態等により，適宜選択，決定されるが，例えば，一日当たり生薬当価量として０．１〜１００ｇ／ｋｇ体重程度とされ，一日数回に分けて投与してもよい。
【００２５】
また，本発明に関わるモモの葉またはモモの花由来の有効成分は，毒性を有することは報告されていないことから，血糖値上昇抑制を目的とした飲食品として摂取することもできる。本発明の有効成分を添加した血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品は，特定保健用食品，栄養機能食品，又は健康食品等として位置付けることができる。機能性食品としては，例えば，本発明の有効成分に適当な所剤を添加した後，慣用の手段を用いて，食用に適した状態，例えば，顆粒状，粒状，錠剤，カプセル剤，ソフトカプセル剤，ペースト状等に形成したものを用いることができる。この飲食品はそのまま食用に供してもよく，また種々の食品（例えばハム，ソーセージ，かまぼこ，ちくわ，パン，バター，粉乳，菓子など）に添加して使用したり，水，酒類，果汁，牛乳，清涼飲料水等の飲物に添加して使用してもよい。かかる食品の形態における本発明の有効成分の摂取量は，年齢，体重，症状，疾患の程度，食品の形態等により適宜選択・決定されるが，例えば，一日当たり生葉等価量として０．１〜１００ｇ／ｋｇ体重程度とされ，一日数回に分けて投与してもよい。
【００２６】
また，本発明に関わるモモの葉またはモモの花由来の有効成分は，動物用にペットフードとして用いることもでき，摂取量はペットの種類，年齢，体重，症状，疾患の程度，食品の形態等により適宜選択されるが，食品に準拠して投与すればよい。
【００２７】
以下，実施例により本発明を具体的に説明するが，本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２８】
［モモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の抽出分離］
モモの葉エキスに有意な血糖値上昇抑制作用があることから，該血糖値上昇抑制作用を有する活性成分の抽出分離を，活性成分の抽出分離は，図１のフローに従って行なった。すなわち，モモの葉のメタノール（ＭｅＯＨ）抽出エキス（１８．０ｇ）を１．５Ｌの蒸留水（Ｗａｔｅｒ）に溶解させ，等量の酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を加え，Ｗａｔｅｒ［１］画分とＥｔＯＡｃ画分に分配した。この操作を３回繰り返した。酢酸エチル画分をエバポレーターで減圧濃縮後，同様の操作により，更に９０％メタノール画分とｎ−Ｈｅｘ画分（ｎ−ヘキサン）画分に分配した。全ての画分をエバポレーターで減圧濃縮後，凍結乾燥し，重量を測定した。これらの分配操作により，Ｗａｔｅｒ［１］画分１２．６ｇ，９０％ＭｅＯＨ画分４．８ｇ，ｎ−Ｈｅｘ画分０．６ｇの３つの画分を得た。３つの画分のうち、９０％ＭｅＯＨ画分のみが、グルコースを負荷したマウスにおいて血糖値上昇抑制作用を示したことから，さらにこの９０％ＭｅＯＨ画分４．８ｇを１Ｌの６０％ＭｅＯＨ溶液に溶解させて，ジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）を加えて分配する操作により，６０％ＭｅＯＨ画分（１．５ｇ）とＣＨ２Ｃｌ２画分（３．３ｇ）の２つの画分を得た。２つの画分のうち、６０％ＭｅＯＨ画分のみが、グルコースを負荷したマウスにおいて血糖値上昇抑制作用を示した。
【００２９】
上記で得られたモモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分を含有する６０％ＭｅＯＨ画分を精製・分離して，該グルコース吸収阻害活性成分の構造について分析した（図１）。６０％ＭｅＯＨ画分の精製・分離のフローを上記に続いて図１に示す。すなわち，上記で得られたモモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分を含有する６０％ＭｅＯＨ画分を，ＯＤＳ（Ｏｃｔａｄｅｃｙｌｓｉｌａｎｅ）カラム（ＯＤＳゲル３０ｇ，Ｗａｔｅｒ／ＭｅＯＨ＝１／１（３Ｖｏｌ．）→ＭｅＯＨ（３Ｖｏｌ．））クロマトグラフィーにより，１５個の画分（Ｆｒ．）に分画したところ，５〜９番目を合わせた画分（Ｆｒ．５−９）がグルコースを負荷したマウスにおいて血糖値上昇抑制作用を示した。この画分（Ｆｒ．５−９）を，ＯＤＳカラム（ＯＤＳゲル２０ｇ，Ｗａｔｅｒ／ＭｅＯＨ＝２／１（３Ｖｏｌ．）→ＭｅＯＨ（３Ｖｏｌ．））クロマトグラフィーにより，８個の画分に分画したところ，４〜７番目を合わせた画分（Ｆｒ．４−７）がグルコースを負荷したマウスにおいて血糖値上昇抑制作用を示した。さらに，この画分（Ｆｒ．４−７）をプレパックシリカゲルカラム（Ｓｅｐ−Ｐａｃ，３ｃｃ，ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝１０／１（３Ｖｏｌ．））クロマトグラフィーにより，３個の画分に分画したところ，２番目の画分（Ｆｒ．２）がグルコースを負荷したマウスにおいて血糖値上昇抑制作用を示した。最終的に，この画分を高速液体クロマトグラフィーシステムを用いたＯＤＳカラム（ＨＧ−５，直径２０ｍｍ，６０％ＭｅＯＨ→ＭｅＯＨ）クロマトグラフィーにより分画し，単一の成分に分離した。単一成分であることは，得られた画分を濃縮して，薄層クロマトグラフィーにより単一スポットを示すことで確認した。
【００３０】
［モモ葉の粗抽出物の血糖値上昇抑制作用の確認］
上記モモ葉エキス（粗抽出物）について，糖負荷による血糖値上昇の抑制作用を確認するとともに，予想されるメカニズムとして，腸管におけるグルコース吸収阻害作用について試験した。
【００３１】
（グルコース負荷試験）
上記モモ葉エキス（粗抽出物）について，グルコース負荷試験を行なった結果を，図２に示す。グルコース（１，０００ｍｇ／ｋｇ）とサンプル水溶液または蒸留水を混合させたものをマウスに強制経口投与し，経時的に採血して血糖値を測定した。図に示されるように，モモ葉エキス（１，０００ｍｇ／ｋｇ）投与群では糖負荷後３０分時に対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）に対して有意に血糖値上昇抑制が示された。このことから，モモ葉エキス粗抽出物には血糖値上昇を抑制する活性成分が含有されていることが示された。
【００３２】
（腸管におけるグルコース吸収阻害試験）
腸管におけるグルコース吸収阻害試験の概要を図２に示す。腸管におけるグルコース吸収阻害試験にマウスを用いた。マウスの腸管を結紮して腸管から血中へのグルコース吸収に及ぼす影響を測定した。操作は，（１）供試試料（糖を含む）の胃底部からの投与，（２）マウスの腸管結紮，（３）供試試料投与３０分後に尾採血，（４）生理食塩水で内容物を洗浄，（５）腸管内グルコース濃度測定，の手順で行なった。この試験では，糖としてグルコースを用いた。糖（グルコース１，０００ｍｇ／ｋｇ）負荷後３０分間に上昇した血糖値を測定し，腸管内のグルコース残存％（腸管に投与したグルコースを１００％とした時に血中に吸収されずに腸管内に残ったグルコース量％）を測定した。この結果から，供試試料の腸管におけるグルコース吸収阻害作用を調べた。
【００３３】
（腸管におけるグルコース吸収阻害試験の結果）
上記モモ葉エキス（粗抽出物）について，腸管におけるグルコース吸収阻害試験を実施した結果を，図３に示す。図に示されるように，モモ葉エキス（１，０００ｍｇ／ｋｇ）投与群では糖負荷後３０分時に対照群（Ｃｏｎｔｒｏｌ）に対して有意に血糖値上昇抑制を示した。このことより，モモ葉エキスは腸管におけるグルコース吸収を抑制することで，グルコース負荷時の血糖値上昇を抑制していることが示された。
【００３４】
［モモ葉エキスの分離画分の血糖値上昇抑制作用の確認］
上記モモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の抽出分離によって，分離途中で得られたＷａｔｅｒ［１］画分，９０％ＭｅＯＨ画分，ｎ−Ｈｅｘ画分の３つの画分，および次の段階で９０％ＭｅＯＨ画分を分離することにより得られた６０％ＭｅＯＨ画分及びＣＨ２Ｃｌ２画分の２つの画分について，各々の段階でグルコース負荷（１，０００ｍｇ／ｋｇ）による血糖値上昇の抑制作用を確認するために試験した。
【００３５】
（モモ葉エキスの分離画分のグルコース負荷試験の結果）
上記モモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の分離において得られたＷａｔｅｒ［１］画分，９０％ＭｅＯＨ画分，ｎ−Ｈｅｘ画分の３つの画分について，グルコース負荷試験を行なった結果を，図４に示す。図に示されるように，９０％ＭｅＯＨ画分のみにおいて，糖負荷後３０分時に対照群に対して有意な血糖値上昇抑制作用を示した。このことから，この画分に血糖値上昇を抑制する活性成分が含有されていることが示された。
【００３６】
上記の次の分画段階で得られた６０％ＭｅＯＨ画分及びＣＨ２Ｃｌ２画分について，グルコース負荷試験を行なった結果を，図５に示す。図に示されるように，６０％ＭｅＯＨ画分が，糖負荷後３０分時に対照群に対して有意な血糖値上昇抑制作用を示した。このことから，この画分に血糖値上昇を抑制する活性成分が含有されていることが示された。
【００３７】
［モモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の同定］
上記の分離操作により６０％ＭｅＯＨ画分から分離されたグルコース吸収阻害活性成分は，ＴＬＣ上で，単一スポットとして確認されたため，ＮＭＲによる分析（１Ｈ ＮＭＲ；１３Ｃ ＮＭＲ；ＤＥＰＴ；ＣＯＳＹ；ＨＭＱＣ；ＨＭＢＣ）を行なった。１Ｈ ＮＭＲによる分析の結果を，図６に示す。１Ｈ ＮＭＲスペクトルにおいて，特徴的なシグナルとして，δＨ０．９ｐｐｍに二重線で現れるメチル基と考えられるシグナル，δＨ２．０ｐｐｍ付近に一重線で現れるメチル基と考えられるシグナル，δＨ３から５ｐｐｍ付近に酸素と隣り合った炭素に結合する水素と考えられるシグナル（合計で１３Ｈ分と計算された），低磁場（δＨ６から８ｐｐｍ付近）にオレフィンプロトンと考えられる６Ｈ分のシグナルが観測された。また，１３Ｃ ＮＭＲスペクトルによる分析の結果を，図７に示す。１３Ｃ ＮＭＲスペクトル，ＤＥＰＴスペクトル及びＨＭＱＣスペクトルより，２個のカルボニル炭素（δＣ１７９．８，１７３．２），１４個のオレフィン炭素（δＣ１５９．６，１３６．５，１５８．８，１００．４，１６３．５，９５．３，１６１．８，１０６．０，１２３．０，１３２．３，１３２．３，１１６．９，１１６．９，１６１．８），８個のオキシメチン炭素（δＣ７２．２，７２．４，８３．７，７０．９，７６．３，７８．４，７２．１，７５．６）１個のオキシメチレン炭素（δＣ６５．２），２個のアセタール炭素（δＣ１０３．６，１０６．３），２個のメチル炭素（δＣ１８．２，２１．２）の存在が示唆された。
【００３８】
また，ＣＯＳＹスペクトル，ＨＭＢＣスペクトルにより，ポリフェノールの一種であるケンフェロール骨格およびグルコースおよびラムノースの３つの部分構造が明らかとなった。更に詳細な解析により，これらの部分構造の結合をケンフェロールの３位にラムノースとグルコースが連続して一般式（１）のように結合したものであることが示された。この化合物は赤茶色粉末状物として得られ，メタノールに可溶である。高分解能質量分析（ＥＳＩＭＳ）より，［ｍ／ｚ６５９．１５８８（Ｍ＋Ｎａ）＋］に分子イオンピークが確認されたことから，分子式はＣ２９Ｈ３２Ｏ１６であると決定された。以上の分析結果から，この化合物はマルチフロリンＡであると同定された。
【００３９】
（精製成分マルチフロリンＡの血糖値上昇抑制作用の確認）
上記により精製・同定したモモ葉エキス中のグルコース吸収阻害活性成分マルチフロリンＡについて，グルコース負荷試験を行った結果を図８に示した。図に示したようにマルチフロリンＡは濃度依存的にグルコース負荷３０分後の血糖値上昇を抑制して，０．５ｍｇ／ｋｇ以上の濃度において，対照群に対して有意な上昇抑制作用を示した。
【００４０】
（モモ葉エキスの安全性確認）
モモ葉抽出物の毒性の有無を確認するために，マウスに高用量の粗抽出物を単回経口投与（２，５００ｍｇ／ｋｇ，５，０００ｍｇ／ｋｇ）して，経過を観察した（各群２匹）。投与４時間以内の観察ではマウスの行動や状態にとくに異常は見られず，下痢などの症状も観察されなかった。さらに７日間の継続飼育中にも異常を示した個体や死亡した個体は見られなかったことから，モモ葉抽出物による生体への悪影響は見当たらず，安全であることが確認された。
【実施例２】
【００４１】
［モモ花エキスのグルコース吸収阻害活性成分の抽出分離］
モモの花エキスにも該グルコース吸収阻害活性成分が含まれていることを，モモの花投与によるグルコース負荷試験を確認したことから，該血糖値上昇抑制作用を有する活性成分の抽出分離を，図９のフローに従って行なった。すなわち，モモの花の熱水抽出エキス（１００％）から上記で示したモモ葉エキスの分離精製に準じる操作により，該グルコース吸収阻害活性成分を含む６０％ＭｅＯＨ画分を得た。この画分にはグルコース負荷試験により，血糖値上昇抑制作用があることを確認した。さらにこの６０％ＭｅＯＨ画分を，ＯＤＳカラム（ＯＤＳゲル２０ｇ，Ｗａｔｅｒ／ＭｅＯＨ＝２／１（３Ｖｏｌ．）→ＭｅＯＨ（３Ｖｏｌ．））クロマトグラフィーおよび，高速液体クロマトグラフィーシステムを用いたＯＤＳカラム（ＨＧ−５，直径２０ｍｍ，６０％ＭｅＯＨ→ＭｅＯＨ）クロマトグラフィーにより分画し，単一の成分に分離した。モモ花熱水抽出物から得られたこの成分（収率：０．７６％，図９）についてＮＭＲなどのスペクトルを解析したころ，上記でモモ葉エキスから得られたマルチフロリンＡ（収率：０．０２％，図１）と同一であることが明らかとなった。
【００４２】
（抽出処理法を変化させたモモ花エキスによるグルコース負荷試験の結果）
上記モモ花の熱水抽出物は該グルコース吸収抑制活性成分マルチフロリンＡが比較的多く含まれていることから，次に示した５種類の抽出処理法による活性の変化を調べた。すなわち，メタノール抽出，エタノール抽出，乾燥せずに熱水抽出，１００℃で乾燥させた後に熱水抽出，２００℃で乾燥させた後に熱水抽出の５種類で比較を行なった結果を図１０に示した。図に示したとおり，いずれの抽出法においてもモモ葉な抽出物は顕著な血糖値上昇抑制作用を示したことから，活性成分は通常用いられる溶媒，乾燥，熱にも安定であり，原料であるモモの花又はモモの葉が，加工処理によっても該グルコース吸収抑制活性を保持できることが示された。
【００４３】
（モモ葉由来成分およびモモ葉由来成分のグルコース負荷試験の結果）
モモ葉由来の該グルコース吸収抑制活性成分とモモ花の由来グルコース吸収抑制活性成分は，各種分析によりどちらも同一のマルチフロリンＡであることを示したが，その活性についてグルコース負荷試験により確認した結果を図１１に示した。図に示した通り，両方の成分ともに同じ濃度で同程度の活性を有することが示された。これによって，モモの葉にもモモの花にも含まれているマルチフロリンＡが，グルコース吸収阻害活性を示す活性本体であることが示された。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】本発明の実施例におけるモモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の抽出分離において，活性成分の抽出分離のフローおよびを示す図である。
【図２】本発明の実施例における，粗抽出物のグルコース負荷試験の結果を示す図である。
【図３】本発明の実施例における供試試料の腸管におけるグルコース吸収阻害試験において，該グルコース吸収阻害試験の概要を示す図である。
【図４】本発明の実施例における，９０％ＭｅＯＨ画分のグルコース負荷試験の結果を示す図である。
【図５】本発明の実施例における，６０％ＭｅＯＨ画分のグルコース負荷試験の結果を示す図である。
【図６】本発明の実施例におけるモモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の同定において，分離されたグルコース吸収阻害活性成分の１Ｈ ＮＭＲによる分析の結果を示す図である。
【図７】本発明の実施例におけるモモ葉エキスのグルコース吸収阻害活性成分の同定において，分離されたグルコース吸収阻害活性成分の１３Ｃ ＮＭＲによる分析の結果を示す図である。
【図８】本発明の実施例における，精製成分マルチフロリンＡのグルコース負荷試験の結果および濃度依存性を示す図である。
【図９】本発明の実施例におけるモモ花エキスのグルコース吸収阻害活性成分の抽出分離において，活性成分の抽出分離のフローおよびを示す図である。
【図１０】本発明の実施例における，モモ花エキスの処理方法の違った抽出物のグルコース負荷試験の結果を示す図である。
【図１１】本発明の実施例におけるモモ葉エキスから精製したマルチフロリンＡとモモ花エキスから精製したマルチフロリンＡとのグルコース吸収阻害活性の比較を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
マルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤。
【請求項２】
有効成分のマルチフロリンＡが，モモの葉やモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出で抽出して得られるマルチフロリンＡ含有組成物であるとこと特徴とする請求項１記載のグルコース吸収抑制剤。
【請求項３】
マルチフロリンＡ精製画分が，モモの葉やモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物を９０％メタノールで抽出して得られるマルチフロリンＡ精製画分であることを特徴とする請求項１記載のグルコース吸収抑制剤。
【請求項４】
マルチフロリンＡ精製画分が，モモの葉やモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物を６０％メタノール／ジクロロメタン分画し，６０％メタノール側に抽出された得たものを，シリカカラム及び／またはＯＤＳカラムによるカラムクロマトグラフィーにより精製・分離した精製画分であることを特徴とする請求項１記載のグルコース吸収抑制剤。
【請求項５】
グルコース吸収抑制剤が，腸管におけるグルコースの吸収，又は腎尿細管におけるグルコース吸収を抑制するものであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を含有することを特徴とする血糖値上昇予防又は治療薬。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を添加したことを特徴とする血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を添加したことを特徴とする血糖値上昇抑制機能を付与したペットフード。
【請求項９】
糖尿病，肥満予防・改善，メタボリックシンドロームの予防・改善，ダイエット等の用途を示す表示がされた飲食品，又は医薬部外品，医薬品。
【請求項１０】
モモの葉又はモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物からグルコース吸収抑制有効成分を採取することを特徴とする請求項２〜４のいずれか記載の調製方法。
【請求項１】
マルチフロリンＡを有効成分とするグルコース吸収抑制剤。
【請求項２】
有効成分のマルチフロリンＡが，モモの葉やモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出で抽出して得られるマルチフロリンＡ含有組成物であるとこと特徴とする請求項１記載のグルコース吸収抑制剤。
【請求項３】
マルチフロリンＡ精製画分が，モモの葉やモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物を９０％メタノールで抽出して得られるマルチフロリンＡ精製画分であることを特徴とする請求項１記載のグルコース吸収抑制剤。
【請求項４】
マルチフロリンＡ精製画分が，モモの葉やモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物を６０％メタノール／ジクロロメタン分画し，６０％メタノール側に抽出された得たものを，シリカカラム及び／またはＯＤＳカラムによるカラムクロマトグラフィーにより精製・分離した精製画分であることを特徴とする請求項１記載のグルコース吸収抑制剤。
【請求項５】
グルコース吸収抑制剤が，腸管におけるグルコースの吸収，又は腎尿細管におけるグルコース吸収を抑制するものであることを特徴とする請求項１〜４のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を含有することを特徴とする血糖値上昇予防又は治療薬。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を添加したことを特徴とする血糖値上昇抑制機能を付与した飲食品。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか記載のグルコース吸収抑制剤を添加したことを特徴とする血糖値上昇抑制機能を付与したペットフード。
【請求項９】
糖尿病，肥満予防・改善，メタボリックシンドロームの予防・改善，ダイエット等の用途を示す表示がされた飲食品，又は医薬部外品，医薬品。
【請求項１０】
モモの葉又はモモの花を原料としたアルコール又は熱水抽出物からグルコース吸収抑制有効成分を採取することを特徴とする請求項２〜４のいずれか記載の調製方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【公開番号】特開２０１０−２７００９６（Ｐ２０１０−２７００９６Ａ）
【公開日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１３７６７１（Ｐ２００９−１３７６７１）
【出願日】平成２１年５月１９日（２００９．５．１９）
【出願人】（５０７３９１４６５）
【出願人】（５０９１６０９４８）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年５月１９日（２００９．５．１９）
【出願人】（５０７３９１４６５）
【出願人】（５０９１６０９４８）
【Ｆターム（参考）】
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