【課題】裸のDNAを動物組織に直接インジェクションする従来の実験において用いられたDNAは、細胞内での保持性、核内への取り込み、または標的細胞の核内での転写効率を改善するような修飾または折り畳みを受けていなかった。
【解決手段】凝縮物質を投与した組織の標的細胞による、核酸の取り込みを促進するため、核酸は実質的に凝集することなく、凝縮される。核酸はその遺伝子発現、発現が望まれない内在性核酸とのハイブリッド形成、または部位特異的インテグレーションでの標的遺伝子の置き換え、修飾、または欠損、の結果により医療的効果をもたらす。標的化は、標的細胞結合部位による方法により増強される。核酸は好ましく凝縮状態にされる。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程
a） i)セルピン酵素複合体受容体に結合可能な標的結合部位；
ii)核酸結合部位；
iii)１つまたはそれ以上の遺伝子産物をコードするオリゴヌクレオチドよりなる発現ベクターであって、折り畳まれている発現ベクター；
iv)セルピン酵素複合体受容体を外側表面に有するヒト以外の哺乳類細胞；
の供給；
b)前述標的結合部位と前述核酸結合部位の担体形成のための結合；
c)前述発現ベクターと前述担体の治療的化合物の形成のためのカップリング；そして
d)前述の哺乳類細胞と前述の治療的化合物の、前述の治療的化合物が前述の受容体に結合し、前述の治療的化合物を前述の哺乳類細胞内に輸送するような条件での接触
よりなるヒト以外の哺乳類細胞へのオリゴヌクレオチドの導入方法。
【請求項２】
前述の発現ベクターはさらに、制御可能に前述の１つまたはそれ以上の遺伝子産物をコードするオリゴヌクレオチドと連結したプロモータ一配列を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
プロモーター配列は哺乳類遺伝子に由来する、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前述のプロモーター配列はウィルスプロモーター配列である、請求項２記載の方法。
【請求項５】
前述のウィルスプロモーター配列はシミアンウィルス40プロモーター、モロニーマリンロイケミアウィルスプロモーター、およびサイトメガロウィルスプロモーターよりなる組から選択される、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前述の標的結合部位は前述の受容体の認識配列を含むペプチドである、請求項１記載の方法。
【請求項７】
認識配列はSEQ ID NOS:28および29を含む組から選択される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
標的結合部位はSEQ ID NO:31のアミノ酸配列を有するペプチドである、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前述の核酸結合部位はポリ陽イオンである、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
ポリ陽イオンは、ポリLリジンである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前述のヒト以外の哺乳類細胞は受容動物に位置される、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前述のヒト以外の哺乳類細胞は、肝細胞、単核食胞、好中球、小腸上皮細胞、グリア細胞、および神経細胞からなる組から選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
前述のヒト以外の哺乳類細胞と前述治療的化合物の、前述の接触は前述化合物の前述のヒト以外の受容動物への投与からなる、請求項１１記載の方法。
【請求項１４】
前述の投与は前述の治療的化合物を含む水溶性溶液の注射からなる、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前述の注射は、静脈注射である、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
前述のヒト以外の哺乳類細胞と前述治療的化合物との接触に続く、前述発現ベクターによりコードされる前述の１つまたはそれ以上の遺伝子産物の発現を前述の接触細胞での試験を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前述の治療的化合物の注射に続き、前述受容動物中の組織での前述発現ベクターによりコードされる前述の１つまたはそれ以上の遺伝子産物の発現を前述の接触細胞での試験を含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
核酸結合部位、および哺乳類細胞表面に存在するセルピン酵素複合体受容体に結合可能な標的結合部位を含む、化合物。
【請求項１９】
標的結合部位は前述の受容体に対する認識配列を含むペプチドである、請求項１８記載の化合物。
【請求項２０】
認識配列はSEQ ID NOS:28および29からなる組より選択される、請求項１９記載の化合物。
【請求項２１】
標的結合部位はSEQ ID NO:31にあるアミノ酸配列を有するペプチドである、請求項２０記載の化合物。
【請求項２２】
核酸結合部位はポリ陽イオンである、請求項１８記載の化合物。
【請求項２３】
前述のポリ陽イオンはポリLリジンである、請求項２２記載の化合物。
【請求項２４】
哺乳類細胞表面に存在するセルピン酵素複合体受容体に結合可能な標的結合部位、および核酸結合部位よりなる、融合タンパク質であって、認識配列がSEQ ID NOS:28および29からなる組から選択される、融合タンパク質。
【請求項２５】
標的結合部位はSEQ ID NO:31にあるアミノ酸配列を有するペプチドである、請求項２４記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
前述の核酸結合部位は最低プロタミンタンパク質の一部分を含む、請求項２４記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
核酸分子に結合した、請求項２４記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
３０ｎｍ未満の粒子サイズを有する、請求項２７記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
治療用タンパク質に共有結合された受容体であって重合性イムノグロブリン受容体のヒト分泌性成分である受容体に対して向けられた単鎖Ｆｖ分子を含む融合タンパク質。
【請求項３０】
治療用タンパク質がα_１−アンチトリプシンである、請求項２９記載の融合タンパク質。
【請求項３１】
治療用タンパク質がサイトカインである、請求項３０記載の融合タンパク質。
【請求項３２】
治療用タンパク質がインターロイキン−２である、請求項３１記載の融合タンパク質。
【請求項３３】
治療用タンパク質がインターロイキン−１０である、請求項３１記載の融合タンパク質。
【請求項３４】
治療用タンパク質がペプチド性抗生物質である、請求項３０記載の融合タンパク質。
【請求項３５】
単鎖Ｆｖ分子と治療用タンパク質の間に共有結合された３０を超えないアミノ酸残基のリンカー領域をさらに含む、請求項３０記載の融合タンパク質。
【請求項３６】
請求項２９記載の融合タンパク質をヒト以外の動物に投与することにより、治療用タンパク質を細胞に到達させることを含む、治療用タンパク質を細胞に到達させる方法。
【請求項３７】
経細胞輸送性受容体が重合性イムノグロブリン受容体のヒト分泌性成分である、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
細胞が気道上皮細胞である、請求項３７記載の方法。
【請求項３９】
細胞が肺細胞である、請求項３７記載の方法。
【請求項４０】
細胞が腸細胞である、請求項３７記載の方法。
【請求項４１】
細胞が胆管細胞である、請求項３７記載の方法。
【請求項４２】
折り畳みがカオトロピック剤の存在下で実施される、請求項１記載の方法。
【請求項４３】
折り畳みが添加されたカオトロピック剤の不在下で実施される、請求項１記載の方法。
【請求項４４】
折り畳みが添加された塩化ナトリウムの不在下で実施される、請求項１記載の方法。
【請求項４５】
核酸および担体が１００ｎｍ未満の直径まで折り畳まれる、請求項１記載の方法。
【請求項４６】
核酸および担体が９０ｎｍ未満の直径まで折り畳まれる、請求項１記載の方法。
【請求項４７】
核酸および担体が３０ｎｍ未満の直径まで折り畳まれる、請求項１記載の方法。
【請求項４８】
核酸および担体が２３ｎｍ未満の直径まで折り畳まれる、請求項１記載の方法。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図１Ｃ】

【図１Ｄ】

【図１Ｅ】

【図１Ｆ】

【図１Ｇ】

【図１Ｈ】

【図１Ｉ】

【図１Ｊ】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６Ａ】

【図１６Ｂ】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３Ａ】

【図２３Ｂ】

【図２４】

【公開番号】特開２００８−９２９５３（Ｐ２００８−９２９５３Ａ）
【公開日】平成２０年４月２４日（２００８．４．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２７１３９９（Ｐ２００７−２７１３９９）
【出願日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【分割の表示】特願平１０−５００８７５の分割
【原出願日】平成９年６月３日（１９９７．６．３）
【出願人】（５００４２９３３２）ケース　ウェスタン　リザーブ　ユニバーシティ (12)
【氏名又は名称原語表記】ＣＡＳＥ　ＷＥＳＴＥＲＮ　ＲＥＳＥＲＶＥ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
【Ｆターム（参考）】