ドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤
【課題】メラニンの産生を抑制しメラノサイトの増殖を促進するドーパオキシダーゼ活性抑制剤及び細胞増殖活性促進剤を提供する。
【解決手段】レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を含有する、ドーパオキシダーゼ活性抑制剤及び細胞増殖活性促進剤。
【解決手段】レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を含有する、ドーパオキシダーゼ活性抑制剤及び細胞増殖活性促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
日焼け後の色素沈着やシミ・ソバカスは、一般に皮膚の紫外線暴露による刺激やホルモンの異常又は遺伝的要素等によって皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）が活性化されメラニン産生が亢進した結果生じるものと考えられている。このような色素メラニンは、メラノサイトにおいて、酵素チロシナーゼの一種であるドーパオキシダーゼによってドーパ（ジヒドロキシフェニルアラニン）から生合成される。このため、従来から、チロシナーゼの活性を阻害してメラニン産生を抑制したり、産生したメラニンを減少させる物質の使用が検討され、アスコルビン酸、アルブチン、コウジ酸、グルタチオン等に当該作用があることが報告されている。しかし、これらの物質は、メラニン産生抑制効果が微弱であったり、また効果が高いものには皮膚刺激性があったり、アレルギー反応を引き起こす等、安全性の面で問題がある場合があり、まだ満足できるものは得られていない。
【０００３】
また、いわゆるシミと呼ばれるものの一つとして老人性色素斑、肝斑などが知られている。老人性色素斑の部位においては、活性化したメラノサイトの増殖が報告されている。また、肝斑の部位においては、メラノサイトの活性化によるメラニン産生の増加が起こっていることが知られている。このようなシミに対するケアの方法としてこれまではメラニン産生抑制技術やメラノサイトの増殖抑制技術が用いられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、メラニンの産生を抑制しメラノサイトの増殖を促進するドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者等は上記課題に鑑み、鋭意検討を行った。その結果、ある種の植物の抽出物がドーパオキシダーゼ活性抑制作用および細胞増殖活性促進作用を有することを見い出した。さらに、この抽出物を用いることで、優れたドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤を提供することができることを見い出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものである。
【０００６】
本発明は、レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を含有するドーパオキシダーゼ活性抑制剤に関する。
また、本発明は、レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を含有する細胞増殖活性促進剤に関する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、メラニンの産生を抑制しメラノサイトの増殖を促進するドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウおよびコショウ抽出物のドーパオキシダーゼ活性抑制効果を示す図である。
【図２】レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウおよびコショウ抽出物の細胞増殖活性促進効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤は、レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を有効成分として含有する。
前記植物の抽出物を有する剤は、ドーパオキシダーゼ活性抑制効果を有する。したがって、前記植物の抽出物を含有する本発明のドーパオキシダーゼ活性抑制剤は、皮膚におけるメラニンの産生を抑制することができ、美白効果を奏する。また、前記植物の抽出物を有する剤は、細胞増殖活性、特にメラノサイト増殖活性も有する。従って、前記植物の抽出物を有する剤はメラニン産生抑制効果及びメラノサイト増殖促進効果を同時に有する。そのため本発明によれば、従来からのシミに対するケアとは異なり、メラニン産生能の低下したメラノサイトの増殖を促進することによりシミを改善することができる。
【００１０】
本発明におけるレンギョウ（Forsythia suspense Vahl）は、モクセイ科（Oleaceae）に属する植物である。
本発明におけるホウセンカ（Impatiens balsamina L.）は、ツリフネソウ科（Balsaminaceae）に属する植物である。
本発明におけるソウキョウ（Gleditsia sinensis Lam.）は、マメ科（Leguminosae）に属する植物である。
本発明におけるコショウ（Piper nigrum L.）は、コショウ科（Piperaceae）に属する植物である。
【００１１】
本発明において、前記植物の全ての任意の部分が使用可能である。例えば、上記植物の全木、または任意の部位（根、根茎、幹、枝、茎、葉、樹皮、樹液、樹脂、花、果実、種子等）、およびそれらの組み合わせのいずれか１つまたは複数を使用することができる。
【００１２】
本発明において、レンギョウ（Forsythia suspense Vahl）の抽出物を得るためには、前記植物の果実を用いるのが好ましく、レンギョウ（Forsythia suspense Vahl）を基原植物として得られた生薬（連翹（レンギョウ））を用いることもできる。
本発明において、ホウセンカ（Impatiens balsamina L.）の抽出物を得るためには、前記植物の花、種子または地上部を用いるのが好ましく、ホウセンカ（Impatiens balsamina L.）を基原植物として得られた生薬（鳳仙花（ホウセンカ））を用いることもできる。
本発明において、ソウキョウ（Gleditsia sinensis Lam.）の抽出物を得るためには、前記植物の果実または奇形果実を用いるのが好ましく、ソウキョウ（Gleditsia sinensis Lam.）を基原植物として得られた生薬（チョガソウ）を用いることもできる。
本発明において、コショウ（Piper nigrum L.）の抽出物を得るためには、前記植物の果実を用いるのが好ましく、コショウ（Piper nigrum L.）を基原植物として得られた生薬（胡椒（コショウ））を用いることもできる。
【００１３】
本発明において用いる、前記植物の抽出物は、適当な溶媒を用いた常法の抽出方法によって調製することができる。
【００１４】
本発明において、前記植物の抽出物の調製に、上記植物をそのまま、又は乾燥粉砕して用いることもできるが、その水蒸気蒸留物又は圧搾物を用いることもでき、これらは精油等、より精製したものを用いることもでき、また市販品を利用することもできる。上記植物又はその水蒸気蒸留物若しくは圧搾物は、いずれかを単独で、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１５】
抽出に用いる溶媒としては、通常植物成分の抽出に用いられるもの、例えば水、石油エーテル、ｎ−ヘキサン、トルエン、ジクロロエタン、クロロホルム、エーテル、酢酸エチル、アセトン、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等が挙げられ、特に水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコールが好ましい。これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用できる。また抽出条件も通常の条件を適用でき、例えば上記植物を0〜100℃で1時間〜2週間浸漬又は加熱還流すればよい。上記植物の抽出物は、そのまま使用できるが、さらに適当な分離手段、例えばゲル濾過、クロマトグラフィー、精密蒸留等により活性の高い画分を分画して用いることもできる。
【００１６】
本発明において、レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及び／またはコショウの抽出物はそのまま用いてもよい。または、当該抽出物を希釈、濃縮または凍結乾燥した後、粉末またはペースト状に調製して用いることもできる。
【００１７】
前記植物の抽出物は、ドーパオキシダーゼ活性抑制作用および細胞増殖活性促進作用を奏する。これら植物の抽出物を含有させれば、ドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤が得られる。この場合、これら植物の抽出物の量は特に制限されないが、前記抽出物が固形分換算で0.00001〜5重量％含まれるのが好ましく、0.0001〜0.5重量％含まれるのが特に好ましい。
【００１８】
本発明のドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤は、皮膚外用組成物および化粧料組成物に用いることができる。本発明の皮膚外用剤又は化粧料組成物の使用量は、有効成分の含有量により異なるが、例えばクリーム状、軟膏状の場合、皮膚面１cm2当たり0.1μｇ〜5μｇ、液状製剤の場合、同じく0.1μｇ〜10μｇ使用するのが好ましい。
【実施例】
【００１９】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２０】
（製造例１）レンギョウの抽出物の調製
レンギョウを基原植物とする生薬レンギョウ（新和物産社製）100ｇを細切し、９５％エタノール1Ｌを加え、室温で1週間抽出後、濾過して抽出液を得た（収量0.89Ｌ、蒸発残分0.49ｗ／ｖ％）。
【００２１】
（製造例２）ホウセンカ抽出物の調製
ホウセンカを基原植物とする生薬ホウセンカ（新和物産社製）100ｇを細切し、９５％エタノール1Ｌを加え、室温で1週間抽出後、濾過して抽出液を得た（収量0.85Ｌ、蒸発残分0.73ｗ／ｖ％）。
【００２２】
（製造例３）ソウキョウ抽出物の調製
ソウキョウを基原植物とする生薬チョガソウ（新和物産社製）100ｇを細切し、９５％エタノール1Ｌを加え、室温で1週間抽出後、濾過して抽出液を得た（収量0.90Ｌ、蒸発残分1.15ｗ／ｖ％）。
【００２３】
（製造例４）コショウ抽出物の調製
コショウを基原植物とする生薬コショウ（新和物産社製）100ｇを細切し、９５％エタノール1Ｌを加え、室温で1週間抽出後、濾過して抽出液を得た（収量0.95Ｌ、蒸発残分0.06ｗ／ｖ％）。
【００２４】
（実施例１）ドーパオキシダーゼ活性抑制効果
９６穴プレートにヒト表皮細胞由来のメラノサイト１００μｌを５×１０３ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌの細胞密度となるように各穴に播種した。培地はＭｅｄｉｕｍ２５４にＰＭＡを除くＨＭＧＳ（Human Melanocyte Growth Supplement）（いずれもＣａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）を添加したものを用いた。
２４時間の培養後、メラノサイト活性化因子エンドセリン−１（ＥＴ−１）、幹細胞増殖因子（ＳＣＦ）、αメラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、ヒスタミンおよびプロスタグランジンＥ2（ＰＧＥ2）を、それぞれ培地中終濃度で１０×１０-7ｍｏｌ/ｍ3になるように添加した。
【００２５】
また、前記製造例１〜製造例４で調製した植物の抽出物を０．０１％、０．０５％、０．１０％となるように添加した。最終的に培地量は２００μｌ／ｗｅｌｌで、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養を行った。３日後に培地１００μｌを除去後、新たな培地（メラノサイト活性化因子および各種抽出物含有）１００μｌを添加し、更に４日間培養した。
【００２６】
なお、培地には、以下の添加物も添加されている。
ｂＦＧＦ（塩基性線維芽細胞成長因子） ３ｎｇ／ｍｌ
ＢＰＥ（ウシ脳下垂体抽出液） ０．２体積％
ＦＢＳ（ウシ胎児血清） ０．５体積％
ハイドロコーチゾン ５×１０-4ｍｏｌ／ｍ3
インスリン ５μｇ／ｍｌ
トランスフェリン ５μｇ／ｍｌ
ヘパリン ５μｇ／ｍｌ
【００２７】
培養終了後、メラノサイトをＣａ２＋およびＭｇ２＋を除去したＰｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）で洗浄し、抽出バッファー（０．１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ（ｐＨ７．２）、１％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０、０．０１％ＳＤＳ、１００μＭ ＰＭＳＦ（フェニルメチルスルホニルフルオライド）、１μｇ／ｍｌアプロチニン）を２０μｌ／ｗｅｌｌ、Ａｓｓａｙ ｂｕｆｆｅｒ（４％ジメチルホルムアミドを含有する１００ｍＭ Ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ（ｐＨ７．１））を２０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、０℃、３時間で細胞を可溶化し、ドーパオキシターゼ活性の測定を行った。ドーパオキシターゼ活性測定は、ＭＢＴＨ法（例えば、Ｗｉｎｄｅｒ Ａ．Ｊ．，Ｈａｒｒｉｓ Ｈ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８，３１７−３２６，１９９１参照）を参考に、以下のように行った。
可溶化した細胞溶液の各ｗｅｌｌに、Ａｓｓａｙ ｂｕｆｆｅｒを８０μＬ／ｗｅｌｌ、２０．７ｍＭ ＭＢＴＨ（３−メチル−２−ベンゾチアゾリノン ヒドラゾン）溶液を６０μＬ、基質として５ｍＭ Ｌ−ドーパ（Ｌ−ジヒドロキシフェニルアラニン）溶液を４０μｌ、それぞれ加え、３７℃３０〜６０分反応させた後、その呈色反応を４９０ｎｍの吸光度で測定した。
その結果を図１に示す。なお、図１は、各種植物の抽出物を添加しなかった場合の吸光度に対する相対値で示している。また、棒グラフ上の数値は、各試料の吸光度の相対値を示している。
【００２８】
図１に示したとおり、前記植物の抽出物は、ドーパオキシダーゼ活性を抑制することが認められた。
【００２９】
（実施例２）細胞増殖活性促進効果
製造例１〜４で調製した抽出物における細胞増殖活性促進試験をalamar Blue法に従い、以下のように行った。
９６穴プレートを用いてヒト表皮細胞由来のメラノサイトを実施例１と同様に培養した。培養終了後、各ｗｅｌｌにアラマーブルー（Alamar Blue、商品名、インビトロジェン社製）溶液２０μｌを添加し、さらに２〜３時間培養を行った。その後、培養液の蛍光強度（励起波長；５４４ｎｍ、蛍光波長；５９０ｎｍ）を測定した。
その結果を図２に示す。なお、図２は、各種植物の抽出物を添加しなかった場合の吸光度に対する相対値で示している。また、棒グラフ上の数値は、各試料の吸光度の相対値を示している。
【００３０】
図２に示したとおり、前記植物の抽出物は、細胞増殖を促進することが認められた。
【００３１】
（処方例）
前記製造例で得られた抽出物を有効成分として、下記に示す組成のローション、乳液、美容液及びクリームを常法により各々調製した。
【００３２】
１．ローションの調製
（組成） （配合：質量％）
１，３−ブチレングリコール ８．０
グリセリン ５．０
エタノール ３．０
レンギョウ抽出物 ３．０
カミツレエキス ３．０
キキョウエキス １．０
チョウジエキス １．０
キサンタンガム ０．１
ヒアルロン酸 ０．１
リン酸二ナトリウム ０．１
リン酸二水素ナトリウム ０．１
アスコルビン酸２−グルコシド ２．０
精製水 残部
香料 適量
防腐剤 適量
【００３３】
２．乳液の調製
（組成） （配合：質量％）
ホウセンカ抽出物 ５．０
カミツレエキス １．０
キキョウエキス １．０
アルテアエキス ２．０
スクワラン ３．０
オリブ油 ３．０
グリセリン ５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（エチレンオキサイドの付加モル数：40） １．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
水酸化カリウム ０．１
キサンタンガム ０．２
エデト酸二ナトリウム ０．０２
精製水 残部
防腐剤 適量
【００３４】
３．美容液の調製
（組成） （配合：質量％）
ソウキョウ抽出物 ５．０
カミツレエキス １．０
キキョウエキス １．０
チョウジエキス １．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体 ０．２
水酸化カリウム ０．２
キサンタンガム ０．１
ヒアルロン酸 ０．２
クエン酸ナトリウム ０．１５
クエン酸 ０．０３
グリセリン １０．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
エデト酸二ナトリム ０．０５
精製水 残部
防腐剤 適量
香料 適量
【００３５】
４．クリームの調製
（組成） （配合：質量％）
コショウ抽出物 ３．０
ソウキョウ抽出物 ３．０
カミツレエキス ２．０
キキョウエキス ２．０
チョウジエキス ２．０
メチルポリシロキサン ３．０
スクワラン ２．０
ジカプリン酸ネオペンチルグリコール ３．０
ステアリルアルコール １．５
セタノール １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（エチレンオキサイドの付加モル数：60） ０．５
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体 ０．３
水酸化カリウム ０．１５
キサンタンガム ０．１
エデト酸二ナトリウム ０．０５
精製水 残部
防腐剤 適量
香料 適量
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
日焼け後の色素沈着やシミ・ソバカスは、一般に皮膚の紫外線暴露による刺激やホルモンの異常又は遺伝的要素等によって皮膚内に存在する色素細胞（メラノサイト）が活性化されメラニン産生が亢進した結果生じるものと考えられている。このような色素メラニンは、メラノサイトにおいて、酵素チロシナーゼの一種であるドーパオキシダーゼによってドーパ（ジヒドロキシフェニルアラニン）から生合成される。このため、従来から、チロシナーゼの活性を阻害してメラニン産生を抑制したり、産生したメラニンを減少させる物質の使用が検討され、アスコルビン酸、アルブチン、コウジ酸、グルタチオン等に当該作用があることが報告されている。しかし、これらの物質は、メラニン産生抑制効果が微弱であったり、また効果が高いものには皮膚刺激性があったり、アレルギー反応を引き起こす等、安全性の面で問題がある場合があり、まだ満足できるものは得られていない。
【０００３】
また、いわゆるシミと呼ばれるものの一つとして老人性色素斑、肝斑などが知られている。老人性色素斑の部位においては、活性化したメラノサイトの増殖が報告されている。また、肝斑の部位においては、メラノサイトの活性化によるメラニン産生の増加が起こっていることが知られている。このようなシミに対するケアの方法としてこれまではメラニン産生抑制技術やメラノサイトの増殖抑制技術が用いられている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、メラニンの産生を抑制しメラノサイトの増殖を促進するドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者等は上記課題に鑑み、鋭意検討を行った。その結果、ある種の植物の抽出物がドーパオキシダーゼ活性抑制作用および細胞増殖活性促進作用を有することを見い出した。さらに、この抽出物を用いることで、優れたドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤を提供することができることを見い出した。本発明はこれらの知見に基づいて完成するに至ったものである。
【０００６】
本発明は、レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を含有するドーパオキシダーゼ活性抑制剤に関する。
また、本発明は、レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を含有する細胞増殖活性促進剤に関する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、メラニンの産生を抑制しメラノサイトの増殖を促進するドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウおよびコショウ抽出物のドーパオキシダーゼ活性抑制効果を示す図である。
【図２】レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウおよびコショウ抽出物の細胞増殖活性促進効果を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明のドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤は、レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を有効成分として含有する。
前記植物の抽出物を有する剤は、ドーパオキシダーゼ活性抑制効果を有する。したがって、前記植物の抽出物を含有する本発明のドーパオキシダーゼ活性抑制剤は、皮膚におけるメラニンの産生を抑制することができ、美白効果を奏する。また、前記植物の抽出物を有する剤は、細胞増殖活性、特にメラノサイト増殖活性も有する。従って、前記植物の抽出物を有する剤はメラニン産生抑制効果及びメラノサイト増殖促進効果を同時に有する。そのため本発明によれば、従来からのシミに対するケアとは異なり、メラニン産生能の低下したメラノサイトの増殖を促進することによりシミを改善することができる。
【００１０】
本発明におけるレンギョウ（Forsythia suspense Vahl）は、モクセイ科（Oleaceae）に属する植物である。
本発明におけるホウセンカ（Impatiens balsamina L.）は、ツリフネソウ科（Balsaminaceae）に属する植物である。
本発明におけるソウキョウ（Gleditsia sinensis Lam.）は、マメ科（Leguminosae）に属する植物である。
本発明におけるコショウ（Piper nigrum L.）は、コショウ科（Piperaceae）に属する植物である。
【００１１】
本発明において、前記植物の全ての任意の部分が使用可能である。例えば、上記植物の全木、または任意の部位（根、根茎、幹、枝、茎、葉、樹皮、樹液、樹脂、花、果実、種子等）、およびそれらの組み合わせのいずれか１つまたは複数を使用することができる。
【００１２】
本発明において、レンギョウ（Forsythia suspense Vahl）の抽出物を得るためには、前記植物の果実を用いるのが好ましく、レンギョウ（Forsythia suspense Vahl）を基原植物として得られた生薬（連翹（レンギョウ））を用いることもできる。
本発明において、ホウセンカ（Impatiens balsamina L.）の抽出物を得るためには、前記植物の花、種子または地上部を用いるのが好ましく、ホウセンカ（Impatiens balsamina L.）を基原植物として得られた生薬（鳳仙花（ホウセンカ））を用いることもできる。
本発明において、ソウキョウ（Gleditsia sinensis Lam.）の抽出物を得るためには、前記植物の果実または奇形果実を用いるのが好ましく、ソウキョウ（Gleditsia sinensis Lam.）を基原植物として得られた生薬（チョガソウ）を用いることもできる。
本発明において、コショウ（Piper nigrum L.）の抽出物を得るためには、前記植物の果実を用いるのが好ましく、コショウ（Piper nigrum L.）を基原植物として得られた生薬（胡椒（コショウ））を用いることもできる。
【００１３】
本発明において用いる、前記植物の抽出物は、適当な溶媒を用いた常法の抽出方法によって調製することができる。
【００１４】
本発明において、前記植物の抽出物の調製に、上記植物をそのまま、又は乾燥粉砕して用いることもできるが、その水蒸気蒸留物又は圧搾物を用いることもでき、これらは精油等、より精製したものを用いることもでき、また市販品を利用することもできる。上記植物又はその水蒸気蒸留物若しくは圧搾物は、いずれかを単独で、又は２種以上を組み合わせて使用してもよい。
【００１５】
抽出に用いる溶媒としては、通常植物成分の抽出に用いられるもの、例えば水、石油エーテル、ｎ−ヘキサン、トルエン、ジクロロエタン、クロロホルム、エーテル、酢酸エチル、アセトン、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等が挙げられ、特に水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコールが好ましい。これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用できる。また抽出条件も通常の条件を適用でき、例えば上記植物を0〜100℃で1時間〜2週間浸漬又は加熱還流すればよい。上記植物の抽出物は、そのまま使用できるが、さらに適当な分離手段、例えばゲル濾過、クロマトグラフィー、精密蒸留等により活性の高い画分を分画して用いることもできる。
【００１６】
本発明において、レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及び／またはコショウの抽出物はそのまま用いてもよい。または、当該抽出物を希釈、濃縮または凍結乾燥した後、粉末またはペースト状に調製して用いることもできる。
【００１７】
前記植物の抽出物は、ドーパオキシダーゼ活性抑制作用および細胞増殖活性促進作用を奏する。これら植物の抽出物を含有させれば、ドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤が得られる。この場合、これら植物の抽出物の量は特に制限されないが、前記抽出物が固形分換算で0.00001〜5重量％含まれるのが好ましく、0.0001〜0.5重量％含まれるのが特に好ましい。
【００１８】
本発明のドーパオキシダーゼ活性抑制剤および細胞増殖活性促進剤は、皮膚外用組成物および化粧料組成物に用いることができる。本発明の皮膚外用剤又は化粧料組成物の使用量は、有効成分の含有量により異なるが、例えばクリーム状、軟膏状の場合、皮膚面１cm2当たり0.1μｇ〜5μｇ、液状製剤の場合、同じく0.1μｇ〜10μｇ使用するのが好ましい。
【実施例】
【００１９】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２０】
（製造例１）レンギョウの抽出物の調製
レンギョウを基原植物とする生薬レンギョウ（新和物産社製）100ｇを細切し、９５％エタノール1Ｌを加え、室温で1週間抽出後、濾過して抽出液を得た（収量0.89Ｌ、蒸発残分0.49ｗ／ｖ％）。
【００２１】
（製造例２）ホウセンカ抽出物の調製
ホウセンカを基原植物とする生薬ホウセンカ（新和物産社製）100ｇを細切し、９５％エタノール1Ｌを加え、室温で1週間抽出後、濾過して抽出液を得た（収量0.85Ｌ、蒸発残分0.73ｗ／ｖ％）。
【００２２】
（製造例３）ソウキョウ抽出物の調製
ソウキョウを基原植物とする生薬チョガソウ（新和物産社製）100ｇを細切し、９５％エタノール1Ｌを加え、室温で1週間抽出後、濾過して抽出液を得た（収量0.90Ｌ、蒸発残分1.15ｗ／ｖ％）。
【００２３】
（製造例４）コショウ抽出物の調製
コショウを基原植物とする生薬コショウ（新和物産社製）100ｇを細切し、９５％エタノール1Ｌを加え、室温で1週間抽出後、濾過して抽出液を得た（収量0.95Ｌ、蒸発残分0.06ｗ／ｖ％）。
【００２４】
（実施例１）ドーパオキシダーゼ活性抑制効果
９６穴プレートにヒト表皮細胞由来のメラノサイト１００μｌを５×１０３ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌの細胞密度となるように各穴に播種した。培地はＭｅｄｉｕｍ２５４にＰＭＡを除くＨＭＧＳ（Human Melanocyte Growth Supplement）（いずれもＣａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ社）を添加したものを用いた。
２４時間の培養後、メラノサイト活性化因子エンドセリン−１（ＥＴ−１）、幹細胞増殖因子（ＳＣＦ）、αメラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、ヒスタミンおよびプロスタグランジンＥ2（ＰＧＥ2）を、それぞれ培地中終濃度で１０×１０-7ｍｏｌ/ｍ3になるように添加した。
【００２５】
また、前記製造例１〜製造例４で調製した植物の抽出物を０．０１％、０．０５％、０．１０％となるように添加した。最終的に培地量は２００μｌ／ｗｅｌｌで、３７℃、５％ＣＯ２の条件下で培養を行った。３日後に培地１００μｌを除去後、新たな培地（メラノサイト活性化因子および各種抽出物含有）１００μｌを添加し、更に４日間培養した。
【００２６】
なお、培地には、以下の添加物も添加されている。
ｂＦＧＦ（塩基性線維芽細胞成長因子） ３ｎｇ／ｍｌ
ＢＰＥ（ウシ脳下垂体抽出液） ０．２体積％
ＦＢＳ（ウシ胎児血清） ０．５体積％
ハイドロコーチゾン ５×１０-4ｍｏｌ／ｍ3
インスリン ５μｇ／ｍｌ
トランスフェリン ５μｇ／ｍｌ
ヘパリン ５μｇ／ｍｌ
【００２７】
培養終了後、メラノサイトをＣａ２＋およびＭｇ２＋を除去したＰｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）で洗浄し、抽出バッファー（０．１Ｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ（ｐＨ７．２）、１％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０、０．０１％ＳＤＳ、１００μＭ ＰＭＳＦ（フェニルメチルスルホニルフルオライド）、１μｇ／ｍｌアプロチニン）を２０μｌ／ｗｅｌｌ、Ａｓｓａｙ ｂｕｆｆｅｒ（４％ジメチルホルムアミドを含有する１００ｍＭ Ｓｏｄｉｕｍ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ（ｐＨ７．１））を２０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、０℃、３時間で細胞を可溶化し、ドーパオキシターゼ活性の測定を行った。ドーパオキシターゼ活性測定は、ＭＢＴＨ法（例えば、Ｗｉｎｄｅｒ Ａ．Ｊ．，Ｈａｒｒｉｓ Ｈ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１９８，３１７−３２６，１９９１参照）を参考に、以下のように行った。
可溶化した細胞溶液の各ｗｅｌｌに、Ａｓｓａｙ ｂｕｆｆｅｒを８０μＬ／ｗｅｌｌ、２０．７ｍＭ ＭＢＴＨ（３−メチル−２−ベンゾチアゾリノン ヒドラゾン）溶液を６０μＬ、基質として５ｍＭ Ｌ−ドーパ（Ｌ−ジヒドロキシフェニルアラニン）溶液を４０μｌ、それぞれ加え、３７℃３０〜６０分反応させた後、その呈色反応を４９０ｎｍの吸光度で測定した。
その結果を図１に示す。なお、図１は、各種植物の抽出物を添加しなかった場合の吸光度に対する相対値で示している。また、棒グラフ上の数値は、各試料の吸光度の相対値を示している。
【００２８】
図１に示したとおり、前記植物の抽出物は、ドーパオキシダーゼ活性を抑制することが認められた。
【００２９】
（実施例２）細胞増殖活性促進効果
製造例１〜４で調製した抽出物における細胞増殖活性促進試験をalamar Blue法に従い、以下のように行った。
９６穴プレートを用いてヒト表皮細胞由来のメラノサイトを実施例１と同様に培養した。培養終了後、各ｗｅｌｌにアラマーブルー（Alamar Blue、商品名、インビトロジェン社製）溶液２０μｌを添加し、さらに２〜３時間培養を行った。その後、培養液の蛍光強度（励起波長；５４４ｎｍ、蛍光波長；５９０ｎｍ）を測定した。
その結果を図２に示す。なお、図２は、各種植物の抽出物を添加しなかった場合の吸光度に対する相対値で示している。また、棒グラフ上の数値は、各試料の吸光度の相対値を示している。
【００３０】
図２に示したとおり、前記植物の抽出物は、細胞増殖を促進することが認められた。
【００３１】
（処方例）
前記製造例で得られた抽出物を有効成分として、下記に示す組成のローション、乳液、美容液及びクリームを常法により各々調製した。
【００３２】
１．ローションの調製
（組成） （配合：質量％）
１，３−ブチレングリコール ８．０
グリセリン ５．０
エタノール ３．０
レンギョウ抽出物 ３．０
カミツレエキス ３．０
キキョウエキス １．０
チョウジエキス １．０
キサンタンガム ０．１
ヒアルロン酸 ０．１
リン酸二ナトリウム ０．１
リン酸二水素ナトリウム ０．１
アスコルビン酸２−グルコシド ２．０
精製水 残部
香料 適量
防腐剤 適量
【００３３】
２．乳液の調製
（組成） （配合：質量％）
ホウセンカ抽出物 ５．０
カミツレエキス １．０
キキョウエキス １．０
アルテアエキス ２．０
スクワラン ３．０
オリブ油 ３．０
グリセリン ５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（エチレンオキサイドの付加モル数：40） １．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
水酸化カリウム ０．１
キサンタンガム ０．２
エデト酸二ナトリウム ０．０２
精製水 残部
防腐剤 適量
【００３４】
３．美容液の調製
（組成） （配合：質量％）
ソウキョウ抽出物 ５．０
カミツレエキス １．０
キキョウエキス １．０
チョウジエキス １．０
カルボキシビニルポリマー ０．２
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体 ０．２
水酸化カリウム ０．２
キサンタンガム ０．１
ヒアルロン酸 ０．２
クエン酸ナトリウム ０．１５
クエン酸 ０．０３
グリセリン １０．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
エデト酸二ナトリム ０．０５
精製水 残部
防腐剤 適量
香料 適量
【００３５】
４．クリームの調製
（組成） （配合：質量％）
コショウ抽出物 ３．０
ソウキョウ抽出物 ３．０
カミツレエキス ２．０
キキョウエキス ２．０
チョウジエキス ２．０
メチルポリシロキサン ３．０
スクワラン ２．０
ジカプリン酸ネオペンチルグリコール ３．０
ステアリルアルコール １．５
セタノール １．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（エチレンオキサイドの付加モル数：60） ０．５
アクリル酸・メタクリル酸アルキル共重合体 ０．３
水酸化カリウム ０．１５
キサンタンガム ０．１
エデト酸二ナトリウム ０．０５
精製水 残部
防腐剤 適量
香料 適量
【特許請求の範囲】
【請求項１】
レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を含有するドーパオキシダーゼ活性抑制剤。
【請求項２】
レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を含有する細胞増殖活性促進剤。
【請求項１】
レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を含有するドーパオキシダーゼ活性抑制剤。
【請求項２】
レンギョウ、ホウセンカ、ソウキョウ及びコショウからなる群より選ばれる少なくとも１種の植物の抽出物を含有する細胞増殖活性促進剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１０−１５９２２０（Ｐ２０１０−１５９２２０Ａ）
【公開日】平成２２年７月２２日（２０１０．７．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１８１２（Ｐ２００９−１８１２）
【出願日】平成２１年１月７日（２００９．１．７）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年７月２２日（２０１０．７．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１月７日（２００９．１．７）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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