ヒストンデアセチラーゼ阻害剤と細胞死受容体リガンドの組み合わせ
本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける癌のような増殖性疾患を：(ａ)ＨＤＡＩ；および(ｂ)細胞死受容体リガンドを含む医薬の組み合わせにより予防または処置する方法に関する。本発明はさらに：(ａ)ＨＤＡＩ；(ｂ)細胞死受容体リガンド；および(ｃ)薬学的に許容される担体を含む医薬組成物にも関する。本発明はまた：(ａ)ＨＤＡＩの医薬製剤；および(ｂ)同時の、一緒の、別々または連続使用のための、細胞死受容体リガンドの医薬製剤を含む、商品パッケージまたは製品にも関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける癌のような増殖性疾患を：
(ａ)ヒストンデアセチラーゼ阻害剤(ＨＤＡＩ)；および
(ｂ)細胞死受容体リガンド（Death receptor ligand）
を含む医薬の組み合わせで予防または処置する方法に関する。
【０００２】
本発明はさらに：
(ａ)ＨＤＡＩ；
(ｂ)細胞死受容体リガンド；および
(ｃ)薬学的に許容される担体
を含む、医薬組成物に関する。
【０００３】
本発明は、さらに：
(ａ)ＨＤＡＩの医薬製剤；および
(ｂ)同時の、一緒の、別々または連続使用のための、細胞死受容体リガンドの医薬製剤
を含む、商品パッケージまたは製品に関する。
【０００４】
発明の背景
ヒストンの可逆性アセチル化は、転写因子のＤＮＡへの接近性を代えることにより作用する、遺伝子発現の主要なレギュレーターである。正常細胞において、ヒストンデアセチラーゼ(ＨＤＡ)およびヒストンアセチルトランスフェラーゼは、バランスを維持するためにヒストンのアセチル化のレベルを一体となって制御する。ＨＤＡの阻害は、過アセチル化されたヒストンの蓄積をもたらし、それは様々な細胞応答をもたらす。ＨＤＡの阻害剤(ＨＤＡＩ)は、癌細胞におけるそれらの治療効果について試験されている。ＨＤＡＩ研究の分野での最近の発達は、非常に有効で安定であり、腫瘍の処置に適した活性化合物を提供している。
【０００５】
腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)関連アポトーシス誘導リガンド(ＴＲＡＩＬ、Ａｐｏ−２Ｌとしても既知)は、サイトカインのＴＮＦファミリーのメンバーであり、そのアゴニスト細胞膜細胞死受容体ＴＲＡＩＬ−Ｒ１(ＤＲ４)およびＴＲＡＩＬ−Ｒ２(ＤＲ５)と結合し、そのオリゴマー化を誘導できる。Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ、またはアゴニスト抗体の結合および架橋により、細胞死受容体ＤＲ４およびＤＲ５は、細胞膜結合多タンパク質死誘発シグナル伝達複合体(ＤＩＳＣ)の集合を介して、カスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くことができる。
【０００６】
発明の概要
本発明により、ＨＤＡＩでの処置が、上昇したＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣ活性と関連する、ＤＲ４およびＤＲ５を誘導するが、ｃＦＬＩＰレベルを抑制しないことが示された。ＨＤＡＩとの併用処置は、ヒト急性白血病細胞のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発死誘発シグナル伝達複合体活性およびアポトーシスを増強する。この証拠は、ＴＲＡＩＬが、ＨＤＡＩと併用したとき、よりさらに有効であることを示唆する。効果および安全性の両方に、相乗的、かつ相加的利点の両方がある。ＨＤＡＩとＴＲＡＩＬの組み合わせの治療効果は、組み合わせの各成分のより低い安全投与量範囲をもたらし得る。
【０００７】
本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける癌のような増殖性疾患を予防または処置するための：
(ａ)ＨＤＡＩ；および
(ｂ)細胞死受容体リガンド
を含む組み合わせに関する。
【０００８】
本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける癌のような増殖性疾患を：
(ａ)ＨＤＡＩ；および
(ｂ)細胞死受容体リガンド
を含む医薬の組み合わせで予防または処置する方法に関する。
【０００９】
本発明はさらに：
(ａ)ＨＤＡＩ；
(ｂ)細胞死受容体リガンド；および
(ｃ)薬学的に許容される担体
を含む、医薬組成物に関する。
【００１０】
本発明はさらに：
(ａ)ＨＤＡＩの医薬製剤；および
(ｂ)同時の、一緒の、別々または連続使用のための、細胞死受容体リガンドの医薬製剤
を含む、商品パッケージまたは製品に関する。
【００１１】
発明の詳細な説明
処置すべき疾患
本発明の組み合わせは、増殖性疾患の処置に有用である。増殖性疾患は、主に腫瘍疾患(または癌)(および／または全ての転移巣)である。本発明の組成物は、特に乳癌、尿生殖器癌、肺癌、消化器癌、類表皮癌、黒色腫、神経膠腫、卵巣癌、膵臓癌、神経芽腫、頭頚部癌または膀胱癌、または広い意味では腎臓、脳または胃癌；特に：
(ｉ)乳房腫瘍；類表皮腫瘍、例えば類表皮頭頚部腫瘍または口腔腫瘍；肺腫瘍、例えば、小細胞または非小細胞肺腫瘍；消化器腫瘍、例えば、結腸直腸腫瘍；または尿生殖器腫瘍、例えば、前立腺腫瘍、とりわけホルモン難治性前立腺腫瘍；
(ii)他の化学療法剤での処置に難治性の増殖性疾患；または
(iii)多剤耐性のために他の化学療法剤での処置に難治性の腫瘍
である腫瘍の処置に有用である。
【００１２】
本発明の広い意味において、増殖性疾患は、さらに、例えば白血病(とりわけ急性骨髄性白血病またはＡＭＬ)、過形成、線維症(とりわけ肺であるが、他のタイプの線維症、例えば腎線維症も)、血管形成、感染、アテローム性動脈硬化症および血管における平滑筋増殖、例えば狭窄または血管形成術後の再狭窄のような過増殖性状態であり得る。
【００１３】
本発明により処置し得る他の悪性腫瘍は、ＴＲＡＩＬ化合物での処置に感受性の悪性腫瘍を含む。
【００１４】
腫瘍、腫瘍疾患、癌腫または癌を記載しているとき、また、原発臓器または組織および／または全ての他の位置における転移も、腫瘍および／または転移の位置がどこであれ、それに代えてまたはそれに加えて包含される。
【００１５】
組み合わせは、正常細胞よりも急速に増殖している細胞、特にヒト癌細胞、例えば、癌様腫瘍に対して選択的に毒性であるかより毒性であり、本化合物は、著しい抗増殖効果を有し、分化、例えば、細胞サイクル停止およびアポトーシスを促進する。本組み合わせは、アポトーシス細胞死および壊死を誘発できる。
【００１６】
細胞死受容体リガンド
本明細書で使用する“細胞死受容体リガンド”は、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ、ＴＲＡＩＬ模倣体、アゴニスト抗体および細胞膜結合多タンパク質死誘発シグナル伝達複合体(ＤＩＳＣ)の集合を介してカスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くＤＲ４およびＤＲ５に結合できる他の因子を意味する。
【００１７】
ＴＲＡＩＬは、多くの様々なタイプの癌細胞、ならびにウイルス感染した細胞を含む、ある種の形質転換細胞におけるアポトーシスを誘導する能力が証明されている。ＴＲＡＩＬは、その全体を引用により本明細書に包含する米国特許５,７６３,２２３に記載されている。Wiley et al., “Identification and Characterization of New Member of the TNF Family that Induces Apoptosis”, Immunity, Vol. 3, pp. 673-682(1995);およびPitti et al., “Induction of Apoptosis by Apo-2 Ligand, New Member of the Tumor Necrosis Factor Cytokine Family”, J Biol Chem, Vol. 271, No. 22, pp. 12687-12690(1996)参照。
【００１８】
本明細書に記載の組み合わせは、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ、ＴＲＡＩＬ模倣体、アゴニスト(agnostic)抗体、ならびに、細胞膜結合多タンパク質ＤＩＳＣを介したカスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くＤＲ４およびＤＲ５に結合できる他の因子を含む。
【００１９】
ＨＤＡＩ化合物
本発明の組み合わせで使用するための特に興味深いＨＤＡＩ化合物は、式(Ｉ)：
【化１】
〔式中、
Ｒ１はＨ；ハロ；または直鎖Ｃ１−Ｃ６アルキル、とりわけメチル、エチルまたはｎ−プロピル(該メチル、エチルおよびｎ−プロピル置換基は、非置換であるか、またはアルキル置換基に関して下記の１個またはそれ以上の置換基で置換されている)であり；
Ｒ２はＨ；Ｃ１−Ｃ１０アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、メチル、エチルまたは−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６；−(ＣＨ２)ｎＯＣ(Ｏ)Ｒ６；アミノアシル；ＨＯＮ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ＝Ｃ(Ｒ１)−アリール−アルキル−；および−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；アシル；またはアシルアミノであるか；または
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素と一体となって、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ＝ＮＲ８であるか；または
Ｒ２は、それが結合している窒素と一体となって、およびＲ３は、それが結合している炭素と一体となって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；またはアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環を形成でき；
Ｒ５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アシル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；芳香族性多環；非芳香族性多環；アリールおよび非アリール混合多環；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；およびアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環から選択され；
ｎ、ｎ１、ｎ２およびｎ３は、同一または異なり、かつ独立して０−６から選択され、ｎ１が１−６であるとき、各炭素原子は、所望によりかつ独立してＲ３および／またはＲ４で置換されていてよく；
ＸおよびＹは、同一または異なり、かつ独立してＨ；ハロ；ＣＨ３およびＣＦ３のようなＣ１−Ｃ４アルキル；ＮＯ２；Ｃ(Ｏ)Ｒ１；ＯＲ９；ＳＲ９；ＣＮ；およびＮＲ１０Ｒ１１から選択され；
Ｒ６はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジルおよび２−フェニルエテニル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；ＯＲ１２；およびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
Ｒ７はＯＲ１５；ＳＲ１５；Ｓ(Ｏ)Ｒ１６；ＳＯ２Ｒ１７；ＮＲ１３Ｒ１４；およびＮＲ１２ＳＯ２Ｒ６から選択され；
Ｒ８はＨ；ＯＲ１５；ＮＲ１３Ｒ１４；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ９はＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、ＣＨ３およびＣＦ３；Ｃ(Ｏ)−アルキル、例えば、Ｃ(Ｏ)ＣＨ３；およびＣ(Ｏ)ＣＦ３から選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、かつ独立してＨ；Ｃ１−Ｃ４アルキル；および−Ｃ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１２はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；アリール；アリールおよび非アリール混合多環；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ１３およびＲ１４は、同一または異なり、かつ独立してＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アミノアシルから選択されるか；または
Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合している窒素と一体となって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；またはアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環であり；
Ｒ１５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１６はＣ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１７はＣ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；芳香族性多環；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；ポリヘテロアリールおよびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
ｍは０−６から選択される整数であり；そして
ＺはＯ；ＮＲ１３；Ｓ；およびＳ(Ｏ)から選択される。〕
により記載されるヒドロキサメート化合物または薬学的に許容されるその塩である。
【００２０】
必要に応じて、“非置換”は置換基が存在しないか、または唯一の置換基が水素であることを意味する。
【００２１】
ハロ置換基は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨード、好ましくはフルオロまたはクロロから選択される。
【００２２】
アルキル置換基は、特記されない限り、直鎖および分枝鎖Ｃ１−Ｃ６アルキルを含む。適当な直鎖および分枝鎖Ｃ１−Ｃ６アルキル置換基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチルなどを含む。特記されない限り、アルキル置換基は非置換アルキル基ならびに、１個またはそれ以上の適当な、不飽和を含む置換基で置換されている、すなわち、１個またはそれ以上の二重または３重Ｃ−Ｃ結合；アシル；シクロアルキル；ハロ；オキシアルキル；アルキルアミノ；アミノアルキル；アシルアミノ；およびＯＲ１５、例えば、アルコキシが存在するアルキル基の両方を含む。アルキル基の好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、オキシアルキル、アルキルアミノおよびアミノアルキルを含む。
【００２３】
シクロアルキル置換基は、特記されない限り、Ｃ３−Ｃ９シクロアルキル基、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含む。特記されない限り、シクロアルキル置換基は、非置換シクロアルキル基ならびに、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ、ヒドロキシ、アミノアルキル、オキシアルキル、アルキルアミノおよびＯＲ１５、例えばアルコキシを含む、１個またはそれ以上の適当な置換基により置換されたシクロアルキル基の両方を含む。シクロアルキル基の好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、オキシアルキル、アルキルアミノおよびアミノアルキルを含む。
【００２４】
アルキルおよびシクロアルキル置換基に関する記載は、他の置換基、例えば、限定しないが、アルコキシ、アルキルアミン、アルキルケトン、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキルスルホニルおよびアルキルエステル置換基などのアルキル部分にも当てはまる。
【００２５】
ヘテロシクロアルキル置換基は、窒素、硫黄、酸素から選択される１−３個のヘテロ原子を含む、３−から９−員脂肪族環、例えば４−から７−員脂肪族環を含む。適当なヘテロシクロアルキル置換基の例は、ピロリジル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロチオフラニル、ピペリジル、ピペラジル、テトラヒドロピラニル、モルホリノ、１,３−ジアザパン、１,４−ジアザパン、１,４−オキサゼパンおよび１,４−オキサチアパンを含む。特記されない限り、環は、非置換であるか、または炭素原子上を、Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；ハロ；アミノ；アルキルアミノおよびＯＲ１５、例えば、アルコキシを含む、１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されている。特記されない限り、窒素ヘテロ原子は、非置換であるか、またはＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アシル；アミノアシル；アルキルスルホニル；およびアリールスルホニルで置換されている。
【００２６】
シクロアルキルアルキル置換基は、式−(ＣＨ２)ｎ５−シクロアルキル(式中、ｎ５は１−６の数字である)の化合物を含む。適当なアルキルシクロアルキル置換基は、シクロペンチルメチル、シクロペンチルエチル、シクロヘキシルメチルなどを含む。このような置換基は、非置換であるか、またはアルキル部分もしくはシクロアルキル部分を、アルキルおよびシクロアルキルについて上記に挙げたものを含む、適当な置換基で置換されている。
【００２７】
アリール置換基は非置換フェニルならびに、Ｃ１−Ｃ６アルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；Ｏ(ＣＯ)アルキル；オキシアルキル；ハロ；ニトロ；アミノ；アルキルアミノ；アミノアルキル；アルキルケトン；ニトリル；カルボキシアルキル；アルキルスルホニル；アミノスルホニル；アリールスルホニルおよびＯＲ１５、例えばアルコキシを含む１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されたフェニルを含む。好ましい置換基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル；シクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アルコキシ；オキシアルキル；ハロ；ニトロ；アミノ；アルキルアミノ；アミノアルキル；アルキルケトン；ニトリル；カルボキシアルキル；アルキルスルホニル；アリールスルホニルおよびアミノスルホニルを含む。適当なアリール基の例は、Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシフェニル、トリフルオロメチルフェニル、メトキシフェニル、ヒドロキシエチルフェニル、ジメチルアミノフェニル、アミノプロピルフェニル、カルボエトキシフェニル、メタンスルホニルフェニルおよびトリルスルホニルフェニルを含む。
【００２８】
芳香族性多環は、ナフチル、ならびに、Ｃ１−Ｃ６アルキル；アルキルシクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；オキシアルキル；ハロ；ニトロ；アミノ；アルキルアミノ；アミノアルキル；アルキルケトン；ニトリル；カルボキシアルキル；アルキルスルホニル；アリールスルホニル；アミノスルホニルおよびＯＲ１５、例えばアルコキシを含む１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されたナフチルを含む。
【００２９】
ヘテロアリール置換基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個またはそれ以上のヘテロ原子、例えば、１−４個のヘテロ原子を含む、５−から７−員芳香環を有する化合物を含む。典型的ヘテロアリール置換基は、フリル、チエニル、ピロール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、ピリジン、ピリミジン、イソオキサゾリル、ピラジンなどを含む。特記されない限り、ヘテロアリール置換基は、非置換であるか、または炭素原子上を、アルキル、上記で定義のアルキル置換基、および他のヘテロアリール置換基を含む、１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されている。窒素原子は非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されている；とりわけ有用なＮ置換基はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００３０】
アリールアルキル置換基は、式−(ＣＨ２)ｎ５−アリール、−(ＣＨ２)ｎ５−１−(ＣＨ−アリール)−(ＣＨ２)ｎ５−アリールまたは−(ＣＨ２)ｎ５−１ＣＨ(アリール)(アリール)(式中、アリールおよびｎ５は上記で定義の通り)の基を含む。このようなアリールアルキル置換基は、ベンジル、２−フェニルエチル、１−フェニルエチル、トリル−３−プロピル、２−フェニルプロピル、ジフェニルメチル、２−ジフェニルエチル、５,５−ジメチル−３−フェニルペンチルなどを含む。アリールアルキル置換基は、非置換であるか、またはアルキル部分もしくはアリール部分もしくは両方を、アルキルおよびアリール置換基について上記の通り置換されている。
【００３１】
ヘテロアリールアルキル置換基は、式−(ＣＨ２)ｎ５−ヘテロアリール(式中、ヘテロアリールおよびｎ５は上記で定義の通りであり、架橋記はヘテロアリール部分の炭素または窒素に連結している)の基、例えば２−、３−または４−ピリジルメチル、イミダゾリルメチル、キノリルエチルおよびピロリルブチルを含む。ヘテロアリール置換基は、非置換であるか、またはヘテロアリールおよびアルキル置換基について上記の通り置換されている。
【００３２】
アミノアシル置換基は、式−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｈ)(ＮＲ１３Ｒ１４)−(ＣＨ２)ｎ−Ｒ５(式中、ｎ、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ５は上記の通り)の基を含む。適当なアミノアシル置換基は、天然および非天然アミノ酸、例えばグリシニル、Ｄ−トリプトファニル、Ｌ−リシニル、Ｄ−またはＬ−ホモセリニル、４−アミノブチリックアシルおよび±−３−アミン−４−ヘキセノイルを含む。
【００３３】
非芳香族性多環置換基は、各環が４−から９−員であり得て、かつ各環が０個、１個またはそれ以上の二重および／または三重結合を含み得るものである、二環式および三環式縮合環系を含む。適当な非芳香族性多環の例は、デカリン、オクタヒドロインデン、ペルヒドロベンゾシクロヘプテンおよびペルヒドロベンゾ−[ｆ]−アズレンを含む。このような置換基は非置換であるか、または上記でシクロアルキル基について記載の通り置換されている。
【００３４】
アリールおよび非アリール混合多環置換基は、各環が４−から９−員であり得て、かつ少なくとも１個の環が芳香族性であるものである、二環式および三環式縮合環系を含む。アリールおよび非アリール混合多環の適当な例は、メチレンジオキシフェニル、ビス−メチレンジオキシフェニル、１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン、ジベンゾスベラン、ジヒドロアントラセンおよび９Ｈ−フルオレンを含む。このような置換基は非置換であるか、またはニトロでもしくはシクロアルキル基について上記の通りに置換されている。
【００３５】
ポリヘテロアリール置換基は、各環が独立して５または６員であり得て、かつＯ、ＮまたはＳから選択される１個またはそれ以上のヘテロ原子、例えば、１個、２個、３個または４個のヘテロ原子を、縮合環系が芳香族性であるように含むものである、二環式および三環式縮合環系を含む。ポリヘテロアリール環系の適当な例は、キノリン、イソキノリン、ピリドピラジン、ピロロピリジン、フロピリジン、インドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフラン、ベンズインドール、ベンゾオキサゾール、ピロロキノリンなどを含む。特記されない限り、ポリヘテロアリール置換基は非置換であるか、または炭素原子上を、アルキル、上記で定義のアルキル置換基式−Ｏ−(ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２))１−３Ｈの置換基を含む、１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されている。窒素原子は非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されており、とりわけ有用なＮ置換基はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００３６】
非芳香族性ポリヘテロ環式置換基は、各環がＯ、ＮまたはＳから選択される１個またはそれ以上のヘテロ原子、例えば、１個、２個、３個または４個のヘテロ原子を含んで４−から９−員であり得て、かつ０個または１個またはそれ以上のＣ−Ｃ二重または三重結合を含むものである、二環式および三環式縮合環系を含む。非芳香族性ポリヘテロ環の適当な例は、ヘキシトール、ｃｉｓ−ペルヒドロ−シクロヘプタ[ｂ]ピリジニル、デカヒドロ−ベンゾ[ｆ][１,４]オキサゼピニル、２,８−ジオキサビシクロ[３.３.０]オクタン、ヘキサヒドロ−チエノ[３,２−ｂ]チオフェン、ペルヒドロピロロ[３,２−ｂ]ピロール、ペルヒドロナフチリジン、ペルヒドロ−１Ｈ−ジシクロペンタ[ｂ,ｅ]ピランを含む。特記されない限り、非芳香族性ポリヘテロ環式置換基は、非置換であるか、または、炭素原子上を、アルキルおよび上記で定義のアルキル置換基を含む、１個またはそれ以上の置換基で置換されている。窒素原子は、非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されており、とりわけ有用なＮ置換基はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００３７】
アリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環置換基は、各環がＯ、ＮまたはＳから選択される１個またはそれ以上のヘテロ原子を含む４−から９−員であり得て、かつ環の少なくとも１個が芳香族性であるべきである、二環式および三環式縮合環系を含む。アリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環の適当な例は、２,３−ジヒドロインドール、１,２,３,４−テトラヒドロキノリン、５,１１−ジヒドロ−１０Ｈ−ジベンズ[ｂ,ｅ][１,４]ジアゼピン、５Ｈ−ジベンゾ[ｂ,ｅ][１,４]ジアゼピン、１,２−ジヒドロピロロ[３,４−ｂ][１,５]ベンゾジアゼピン、１,５−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｂ][１,４]ジアゼピン−４−オン、１,２,３,４,６,１１−ヘキサヒドロ−ベンゾ[ｂ]ピリド[２,３−ｅ][１,４]ジアゼピン−５−オンを含む。特記されない限り、アリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環式置換基は、非置換であるか、または、炭素原子上を、−Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＨ、アルキルおよび上記で定義のアルキル置換基を含む、１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されている。窒素原子は、非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されている；とりわけ有用なＮ置換基はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００３８】
アミノ置換基は、１級、２級および２級アミンおよび塩形では、４級アミンを含む。アミノ置換基の例は、モノ−およびジ−アルキルアミノ、モノ−およびジ−アリールアミノ、モノ−およびジ−アリールアルキルアミノ、アリール−アリールアルキルアミノ、アルキル−アリールアミノ、アルキル−アリールアルキルアミノなどを含む。
【００３９】
スルホニル置換基は、アルキルスルホニルおよびアリールスルホニル、例えば、メタンスルホニル、ベンゼンスルホニル、トシルなどを含む。
【００４０】
アシル置換基は、式−Ｃ(Ｏ)−Ｗ、−ＯＣ(Ｏ)−Ｗ、−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−ＷまたはＣ(Ｏ)ＮＲ１３Ｒ１４(式中、ＷはＲ１６、Ｈまたはシクロアルキルアルキルである)の基を含む。
【００４１】
アシルアミノ置換基は、式−Ｎ(Ｒ１２)Ｃ(Ｏ)−Ｗ、−Ｎ(Ｒ１２)Ｃ(Ｏ)−Ｏ−Ｗおよび−Ｎ(Ｒ１２)Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ(式中、Ｒ１２およびＷは上記で定義の通りである)の置換基を含む。
【００４２】
Ｒ２置換基ＨＯＮ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ＝Ｃ(Ｒ１)−アリール−アルキル−は、式
【化２】
の基である。
【００４３】
好ましい各置換基は、下記を含む：
Ｒ１がＨ、ハロまたは直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ２がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ３およびＲ４が、同一または異なり、かつ独立してＨおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択されるか；または
Ｒ３およびＲ４が、それらが結合している炭素と一体となって、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ＝ＮＲ８であり；
Ｒ５がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、芳香族性ポリサイクル、非芳香族性ポリサイクル、アリールおよび非アリール混合多環、ポリヘテロアリール、非芳香族性ポリヘテロ環、およびアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環から選択され；
ｎ、ｎ１、ｎ２およびｎ３が、同一または異なり、かつ独立して０−６から選択され、ここで、ｎ１が１−６であるとき、各炭素原子は非置換であるか、または独立してＲ３および／またはＲ４で置換されており；
ＸおよびＹは、同一または異なり、かつ独立してＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ＣＦ３、ＮＯ２、Ｃ(Ｏ)Ｒ１、ＯＲ９、ＳＲ９、ＣＮおよびＮＲ１０Ｒ１１から選択され；
Ｒ６がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ＯＲ１２およびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
Ｒ７がＯＲ１５、ＳＲ１５、Ｓ(Ｏ)Ｒ１６、ＳＯ２Ｒ１７、ＮＲ１３Ｒ１４およびＮＲ１２ＳＯ２Ｒ６から選択され；
Ｒ８がＨ、ＯＲ１５、ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択され；
Ｒ９がＣ１−Ｃ４アルキルおよびＣ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、かつ独立してＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１２がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択され；
Ｒ１３およびＲ１４が、同一または異なり、かつ独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよびアミノアシルから選択され；
Ｒ１５がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよび(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１６がＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよび(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１７がＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
ｍが０−６から選択される整数であり；そして
ＺがＯ、ＮＲ１３、ＳおよびＳ(Ｏ)から選択される；
または薬学的に許容されるその塩。
【００４４】
有用な式(Ｉ)の化合物は、ｎ２およびｎ３の一方が０であり、そして他方が１であるものを含む、Ｒ１、Ｘ、Ｙ、Ｒ３およびＲ４の各々がＨであるもの、とりわけＲ２がＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであるものを含む。
【００４５】
ヒドロキサメート化合物の一つの適当な群は、式(Ｉａ)
【化３】
〔式中、
ｎ４は０−３であり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；そして
Ｒ５’はヘテロアリール；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；芳香族性多環；非芳香族性多環；アリールおよび非アリール混合多環；ポリヘテロアリールまたは混合アリール；および非アリールポリヘテロ環である。〕
の化合物または薬学的に許容されるその塩である。
【００４６】
ヒドロキサメート化合物の他の適当な群は、式(Ｉａ)
【化４】
〔式中、
ｎ４は０−３であり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ５’はアリール；アリールアルキル；芳香族性多環；非芳香族性多環および混合アリール；および非アリール多環、とりわけアリール、例えばｐ−フルオロフェニル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル、例えばｐ−メトキシフェニル、およびｐ−Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル；およびアリールアルキル、例えばベンジル、オルト−、メタ−またはパラ−フルオロベンジル、オルト−、メタ−またはパラ−クロロベンジル、オルト−、メタ−またはパラ−モノ−、ジ−またはトリ−Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルベンジル、例えばオルト−、メタ−またはパラ−メトキシベンジル、ｍ,ｐ−ジエトキシベンジル、ｏ,ｍ,ｐ−トリメトキシベンジルおよびオルト−、メタ−またはパラ−モノ−、ジ−またはトリ−Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル、例えばｐ−メチル、ｍ,ｍ−ジエチルフェニルである。〕
の化合物、薬学的に許容されるその塩である。
【００４７】
他の興味深い群は、式(Ｉｂ)
【化５】
〔式中、
Ｒ’２はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ６シクロアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；(ＣＨ２)２−４ＯＲ２１(ここで、Ｒ２１はＨ、メチル、エチル、プロピルおよびｉ−プロピルである)から選択され；そして
Ｒ５”は非置換１Ｈ−インドル−３−イル、ベンゾフラン−３−イルまたはキノリン−３−イル、または置換１Ｈ−インドル−３−イル、例えば５−フルオロ−１Ｈ−インドル−３−イルまたは５−メトキシ−１Ｈ−インドル−３−イル、ベンゾフラン−３−イルまたはキノリン−３−イルである。〕
の化合物または薬学的に許容されるその塩である。
【００４８】
ヒドロキサメート化合物の他の好ましい群は、式(Ｉｃ)
【化６】
〔式中、
Ｚ１含有環は芳香族性または非芳香族性であり、該非芳香環は飽和または不飽和であり、
Ｚ１はＯ、ＳまたはＮ−Ｒ２０であり；
Ｒ１８はＨ；ハロ；Ｃ１−Ｃ６アルキル(メチル、エチル、ｔ−ブチル)；Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル；アリール、例えば、非置換フェニルまたは４−ＯＣＨ３もしくは４−ＣＦ３で置換されているフェニル；またはヘテロアリール、例えば２−フラニル、２−チオフェニルまたは２−、３−または４−ピリジルであり；
Ｒ２０はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ１−Ｃ６アルキル−Ｃ３−Ｃ９シクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アシル、例えば、アセチル、プロピオニルおよびベンゾイル；またはスルホニル、例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニル、ベンゼンスルホニルおよびトルエンスルホニルであり；
Ａ１は各々独立してＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；−ＯＲ１９；ハロ；アルキルアミノ；アミノアルキル；ハロ；またはヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルである、１個、２個または３個の置換基であり；
Ｒ１９はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルおよび(ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２))１−３Ｈから選択され；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
ｖは０、１または２であり；
ｐは０−３であり；そして
ｑは１−５であり、かつｒは０であるか；または
ｑは０であり、かつｒは１−５である。〕
の化合物または薬学的に許容されるその塩である。他の可変置換基は上記で定義の通りである。
【００４９】
とりわけ有用な式(Ｉｃ)の化合物は、Ｒ２がＨまたは(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨ(ここで、ｐは１−３である)であるもの、とりわけＲ１がＨであるもの；例えばＲ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、かつｒが０であるか、またはｑが０であり、かつｒが１−３であるもの、とりわけＺ１がＮ−Ｒ２０であるものである。これらの化合物の中で、Ｒ２は好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００５０】
ヒドロキサメート化合物の他の好ましい群は、式(Ｉｄ)
【化７】
〔式中、
Ｚ１はＯ、ＳまたはＮ−Ｒ２０であり；
Ｒ１８はＨ；ハロ；Ｃ１−Ｃ６アルキル(メチル、エチル、ｔ−ブチル)；Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル；アリール、例えば、非置換フェニルまたは４−ＯＣＨ３もしくは４−ＣＦ３で置換されているフェニル；またはヘテロアリールであり；
Ｒ２０はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキル−Ｃ３−Ｃ９シクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アシル、例えば、アセチル、プロピオニルおよびベンゾイル；またはスルホニル、例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニル、ベンゼンスルホニル、トルエンスルホニルであり；
Ａ１は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＲ１９またはハロである１個、２個または３個の置換基であり；
Ｒ１９はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
ｐは０−３であり；そして
ｑは１−５であり、かつｒは０であるか；または
ｑは０であり、かつｒは１−５である。〕
の化合物または薬学的に許容されるその塩である。他の可変置換基は上記で定義の通りである。
【００５１】
とりわけ有用な式(Ｉｄ)の化合物は、Ｒ２がＨまたは(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨ(ここで、ｐは１−３である)であるもの、とりわけＲ１がＨであるもの；例えば、Ｒ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、かつｒが０であるか、またはｑが０であり、かつｒが１−３であるものである。これらの化合物の中で、Ｒ２は好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００５２】
本発明は、さらに式(Ｉｅ)
【化８】
の化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。可変置換基は上記で定義の通りである。
【００５３】
とりわけ有用な式(Ｉｅ)の化合物は、Ｒ１８がＨ、フルオロ、クロロ、ブロモ、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、置換Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル基、非置換フェニル、パラ位を置換されているフェニル、またはヘテロアリール、例えば、ピリジル環であるものである。
【００５４】
有用な式(Ｉｅ)の化合物の他の群は、Ｒ２がＨまたは(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨ(ここで、ｐは１−３である)であるもの、とりわけＲ１がＨであるもの；例えば、Ｒ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、かつｒが０であるか、またはｑが０であり、かつｒが１−３であるものである。これらの化合物の中で、Ｒ２は好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。これらの化合物の中で、ｐは好ましくは１であり、そしてＲ３およびＲ４は好ましくはＨである。
【００５５】
有用な式(Ｉｅ)の化合物の他の群は、Ｒ１８がＨ、メチル、エチル、ｔ−ブチル、トリフルオロメチル、シクロヘキシル、フェニル、４−メトキシフェニル、４−トリフルオロメチルフェニル、２−フラニル、２−チオフェニル、または２−、３−または４−ピリジル(ここで、該２−フラニル、２−チオフェニルおよび２−、３−または４−ピリジル置換基は、非置換であるか、またはヘテロアリール環に関して上記の通り置換されている)であり；Ｒ２がＨまたは−(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨ(ここで、ｐは１−３である)であるもの；とりわけＲ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、かつｒが０であるか、またはｑが０であり、かつｒが１−３であるものである。これらの化合物の中で、Ｒ２は好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００５６】
Ｒ２０がＨまたはＣ１−Ｃ６アルキル、とりわけＨである式(Ｉｅ)の化合物は、上記の式(Ｉｅ)の化合物の各下位群の重要なメンバーである。
【００５７】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[(２−ヒドロキシエチル)[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドおよびＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドまたは薬学的に許容されるその塩が、重要な式(Ｉｅ)の化合物である。
【００５８】
本発明は、さらに式(Ｉｆ)
【化９】
の化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。可変置換基は上記で定義の通りである。
【００５９】
有用な式(Ｉｆ)の化合物は、Ｒ２がＨまたは−(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨ(ここで、ｐは１−３である)であるもの、とりわけＲ１がＨであるもの；例えばＲ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、かつｒが０であるか、またはｑが０であり、かつｒが１−３であるものを含む。これらの化合物の中で、Ｒ２は好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００６０】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(ベンゾフル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドまたは薬学的に許容されるその塩が重要な式(Ｉｆ)の化合物である。
【００６１】
上記の化合物は、しばしば薬学的に許容される塩の形で使用される。薬学的に許容される塩は、適当であれば、薬学的に許容される塩基付加塩および酸付加塩、例えば、金属塩、例えばアルカリおよびアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩およびアミノ酸付加塩およびスルホン酸塩を含む。酸付加塩は、無機酸付加塩、例えば塩酸塩、硫酸塩およびリン酸塩；および有機酸付加塩、例えばアルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩および乳酸塩を含む。金属塩の例は、アルカリ金属塩、例えばリチウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばマグネシウム塩およびカルシウム塩、アルミニウム塩および亜鉛塩を含む。アンモニウム塩の例は、アンモニウム塩およびテトラメチルアンモニウム塩である。有機アミン付加塩の例は、モルホリンおよびピペリジンとの塩である。アミノ酸付加塩の例は、グリシン、フェニルアラニン、グルタミン酸およびリシンとの塩である。スルホン酸塩は、メシレート、トシレートおよびベンゼンスルホン酸塩を含む。
【００６２】
式(Ｉ)の範囲内のさらなるＨＤＡＩ化合物およびそれらの合成は、その全体を引用して本明細書に包含する２００２年３月２１日公開のＷＯ０２／２２５７７に記載されている。
【００６３】
組み合わせ
故に、第一の局面において、本発明は、薬学的に有効量の：
(ａ)式(Ｉ)のＨＤＡＩ；および
(ｂ)細胞死受容体リガンド
の組み合わせを含む、組み合わせに関する。
【００６４】
他の局面において、本発明は、患者を薬学的に有効量の：
(ａ)式(Ｉ)のＨＤＡＩ；および
(ｂ)細胞死受容体リガンド
の組み合わせで同時にまたは連続的に処置することを含む、哺乳動物、好ましくはヒト患者における癌のような増殖性疾患を予防または処置する方法に関する。
【００６５】
具体的態様において、本発明の方法は、白血病を予防または処置する方法である。他の態様において、本発明の方法はＡＭＬを予防または処置する方法である。
【００６６】
本発明によって、患者を、個々の試薬に適した投与レジメンに従って、癌のような増殖性疾患を予防または処置するために、治療的有効量のＨＤＡＩおよび細胞死受容体リガンドで同時にまたは連続して処置する。例えば、ＨＤＡＩを１日１回またはそれ以上投与でき、細胞死受容体リガンドを、１日１回または隔日またはＨＤＡＩ無しで使用するとき細胞死受容体リガンドについて適当であるいくつかの他のスケジュールで、投与できる。当業者は、組み合わせ成分の適当な薬学的有効量を決定する能力を有する。ＨＤＡＩを１日あたり１００−１５００mg、例えば、２００−１０００mg／日、例えば２００、４００、５００、６００、８００、９００または１０００mg／日の範囲の適当な投与量を、１日１回または２回投与する。細胞死受容体リガンドの適当な投与量および頻度は、処置している適応症の性質および重症度、所望の応答、患者の状態などのような因子に依存するであろう。
【００６７】
本化合物または薬学的に許容されるその塩は、局所的に、静脈内注射、連続輸液、インプラントからの持続的放出、非経腸注射または他の適当な技術により投与する。それらはまた錠剤、カプセルまたはシロップの形の経口医薬製剤として投与し得る。
【００６８】
本発明は、さらに“組み合わせ製剤”に関し、これは、本明細書で使用するとき、とりわけ、上記で定義の組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)が、独立して投与でき、または、組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の区別できる量の異なる固定された組み合わせの使用により、すなわち、同時にまたは異なる時点で投与できる点で、“複数部分のキット”を規定する。次いで、複数部分のキットの各パーツを、例えば、同時に、または、時間をずらして、すなわち、異なる時点で、複数部分のキットの任意のパーツと同じまたは異なる間隔で投与できる。２つの薬剤は同じ経路で投与でき、または異なる経路を使用できる。組み合わせ製剤において投与すべき組み合わせパートナー(ａ)の組み合わせパートナー(ｂ)に対する比率は、例えば、処置すべき患者の下位集団の必要性に合うように、または、患者が経験する何らかの副作用の重症度に基づいて、単独の患者の必要性に合うように変化できる。
【００６９】
組み合わせパートナー(ａ)または(ｂ)の化合物または薬学的に許容されるその塩はまた水和物または他の溶媒和物の形で使用できる。
【００７０】
前癌病巣ならびに、前癌結腸病巣または結腸癌もしくは他の悪性巣（malignancies）のような、固形および未分化悪性巣を含む増殖性疾患に対して治療的に有効である量の本発明の組み合わせを含む、医薬組成物を提供することが本発明の一つの目的である。本組成物において、組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)は共に、交互にまたは別々に、一つの組み合わせ単位投与形として、または２つの別々の単位投与形として投与できる。単位投与形はまた固定された組み合わせであってもよい。
【００７１】
下記実施例は上記の本発明を説明する；しかしながら、それは本発明をいかなる方法でも限定することを意図しない。本発明の組み合わせの利点はまた当分野の当業者に既知の他の試験モデルにより測定できる。
【００７２】
実施例
方法
試薬
ＬＡＱ８２４をNovartis Pharmaceuticals Inc. (East Hanover, NJ)から得る。Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの組み換えヒト三量体形はGenentech, Inc. (South San Francisco, CA)からであり、それは大腸菌で産生される。抗Ｂｉｄおよび抗Ｓｍａｃ／ＤＩＡＢＬＯ抗体はUniversity of Texas, Southwestern School of Medicine(Dallas, TX)のDr. Xiaodong Wangから得る。モノクローナル抗ＸＩＡＰ抗体はBoehringer Mannheim(Indianapolis, IN)から購入する。ポリクローナル抗ＰＡＲＰおよびモノクローナル抗ｃＩＡＰ−１、カスパーゼ−９およびカスパーゼ−３抗体はPharmingen Inc. (San Diego, CA)から購入する。ポリクローナル抗カスパーゼ−８抗体はUpstate Biotechnology(Lake Placid, NY)から購入し、一方モノクローナル抗survivinはAlpha Diagnostic(San Antonio, TX)から購入する。ＤＲ４抗体はAlexis Corp. (San Diego, CA)から購入する。ポリクローナル抗ＤＲ５はCayman Chemicals Co. (Ann Arbor, MI)から得る。ｐ２１およびｐ２７のレベルを検出するための免疫ブロット分析用の抗体は、前記の通りに得る。モノクローナル抗チトクロームオキシダーゼ−２抗体はMolecular Probe(Eugene, OR)から購入する。ｚ−ＶＡＤ−ＦＭＫおよびＬＬｎＬはCalbiochem(San Diego, CA)から購入する。
【００７３】
細胞
ジャーカットＴ細胞白血病およびＳＫＷ６.４Ｂリンパ芽球細胞はAmerican Tissue Culture Collection(Manassas, VA)から得る。Ｂｃｌ−２の異所性過剰発現を伴うＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２細胞およびコントロールＨＬ−６０／Ｎｅｏ細胞は、前記の通り創成し、培養して維持する。再発したＡＭＬの６名の患者からの初代白血病芽球を、現地の内部倫理委員会により認可された試験プロトコールの一部として、インフォームドコンセント後、末梢血または骨髄から回収する。ＬＡＱ８２４および／またはＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬで培養する前のサンプル中の白血病芽球の純度は、Wright染色後形態学的評価で測定して、少なくとも８０％以上であった。
【００７４】
細胞サイクル状態のフローサイトメトリー分析
細胞サイクル状態のフローサイトメトリー評価を、先に記載の方法に従い行う。Ｇ１、Ｓ相、およびＧ２／Ｍ相の細胞の割合をMulticycle software(Phoenix Flow Systems, San Diego, CA)を使用して計算する。
【００７５】
アネキシン−Ｖ染色によるアポトーシス評価
薬剤処置の後、細胞をＨＥＰＥＳ緩衝液中にアネキシン−Ｖフルオレッセインおよびヨウ化プロピジウムを含む１００μLの染色溶液(アネキシン−Ｖ−ＦＬＵＯＳ染色キット、Boehringer-Mannheim, and Indianapolis, IN)に再懸濁する。室温で１５分インキュベーションした後、アネキシンＶ陽性細胞を、先に記載の通りフローサイトメトリーで概算する。
【００７６】
アポトーシスの形態学的評価
薬剤処置後、５０×１０３細胞を洗浄し、ＰＢＳ(ｐＨ７.３)に再懸濁する。細胞懸濁液のCytospun調製物を固定し、Wright染色で染色する。細胞形態学を光学顕微鏡で測定した。全体として、少なくとも５００細胞を計数するために、５個の異なる視野を無作為に選択する。アポトーシス細胞の割合を、各実験について、先に記載の通り計算した。
【００７７】
Ｓ−１００の調製およびサイトソルチトクロームｃ(ｃｙｔ ｃ)、ＳｍａｃおよびＯｍｉのウェスタン分析
薬剤非処置および処置細胞を１,０００×ｇ、１０分、４℃の遠心分離により回収する。細胞ペレットを１回氷冷ＰＢＳで洗浄し、５容量の２５０mMスクロース含有緩衝液(２０mM ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７.５、１０mM ＫＣｌ、１.５mM ＭｇＣｌ２、１mM ナトリウムＥＤＴＡ、１mM ナトリウムＥＧＴＡ、１mM ジチオスレイトールおよび０.１mM ＰＭＳＦ)に再懸濁する。細胞を２２ゲージ針で均質化し、ホモジネートを１０,０００×ｇ、１０分、４℃で遠心分離する。上清を、さらに１００,０００×ｇで３０分遠心分離する。得られた上清(Ｓ−１００)を回収し、タンパク質濃度をPierce Biotechnology Inc. (Rockford, IL)からのＢＣＡタンパク質アッセイ試薬を使用して測定する。合計７５μgのＳ−１００フラクションをｃｙｔ ｃ、ＳｍａｃおよびＯｍｉ／ＨｔｒＡ２のウェスタンブロット分析に使用した。
【００７８】
タンパク質のウェスタン分析
ＤＲ４、ＤＲ５、Ａｐｏ−２Ｌ、ＦＡＤＤ、カスパーゼ−８、ｃ−ＦＬＩＰＬ＆Ｓ、ＢＩＤ、カスパーゼ−９、カスパーゼ−３、ＰＡＲＰ、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、survivinおよびβ−アクチンのウェスタン分析を、先に報告されたプロトコールに従い、特異的抗血清またはモノクローナル抗体を使用して行う。水平走査デンシトメトリーを、Adobe Photo Shop(Apple, Inc., Cupertino, CA)への獲得およびNIH Image Program(U.S. National Institutes of Health, Bethesda, MD)による分析を使用して、ウェスタンブロット上で行った。β−アクチンの発現をコントロールとして使用した。
【００７９】
Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣ分析
非処置またはＬＡＱ８２４処置ＳＫＷ６.４またはジャーカット細胞を１０６細胞／mLの最終濃度で予め温めた完全ＲＰＭＩ培地に懸濁させる。細胞を１００ng／mL Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬで２時間、３７℃で処置し、続いて１mLの氷冷ＰＢＳで洗浄する。細胞を５００μL融解緩衝液(２５mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.２、１５０mM ＮａＣｌ、２５mM ＮａＦ、１mM ベンズアミジン、１.０％Triton X-100、２μg／mL アプロチニン、２μg／mL ロイペプチン、１μg／mL ペプスチン−Ａおよび０.１μg／mL ＰＭＳＦ)で３０分、氷上で融解する。非処置コントロールにおいて、１００ng／mL Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬを細胞融解後添加し、非刺激Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ受容体を免疫沈降させた。百マイクログラム(１００μg)の融解物を４℃で２時間、Immunex Corp., Seattle WAから提供された各１μgの抗Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ受容体１＆２(ＤＲ４およびＤＲ５)抗体とインキュベートした。免疫複合体を、一晩、４℃で２０μLのタンパク質Ａ−アガロースビーズ(Roche, Indianapolis, IN)とインキュベートする。ビーズを遠心分離により回収し、２回融解緩衝液で洗浄する。ペレットをサンプル緩衝液に再懸濁させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびカスパーゼ−８、ＤＲ５、ＤＲ４およびＦＡＤＤに対する抗体を使用した免疫ブロット分析により分析した。
【００８０】
ドミナント・ネガティブＦＡＤＤ ｃＤＮＡのトランスフェクション
生存可能ジャーカット細胞を、ｐｃＤＮＡ３.１プラスミド(Invitrogen Corp., Carlsbad, CA)にクローン化された、８０−２０８アミノ酸死エフェクタードメイン含有Ｎ末端欠失フラグメント(ＮＦＤ−４)をコード化するドミナント・ネガティブＦＡＤＤのｃＤＮＡまたはコントロールベクター(ｐｃＤＮＡ３.１Ｚｅｏ)で、LipofectAMINEPLUS試薬(Invitrogen Corp.)を使用してトランスフェクトする。トランスフェクタントをＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬおよび／またはＬＡＱ８２４で処置し、続いてアポトーシス細胞の割合を概算する。
【００８１】
クロマチン免疫沈降(ＣｈＩＰ)アッセイ
ＣｈＩＰ分析を、先に記載の方法をわずかに改変して行った。細胞を一晩、０.２５×１０６細胞／mlの密度で、３７℃で５％ＣＯ２でインキュベートする。翌日、細胞を０、５０、１００または２５０nMのＬＡＱ８２４と２４時間培養する。ホルムアルデヒドを、次いで細胞に１％の最終濃度で添加し、細胞を室温で１０分穏やかに振盪する。この後、細胞をペレット化し、プロテアーゼ阻害剤(Complete, Boehringer Mannheim)を含む１mLの氷冷ＰＢＳに懸濁する。細胞を再びペレット化し、０.５mLのＳＤＳ融解緩衝液(１％ＳＤＳ／１.０ｍＭ ＥＤＴＡ／５０mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ８.１)に懸濁させ、氷上で２０分インキュベートする。融解物を１５秒バーストで超音波処理する。残骸を２０分、１５,０００×ｇ、４℃の遠心分離によりサンプルから除去した。クロマチン調製物のアリコート(１００μL)を取り、インプット・フラクションと名付けた。上清を免疫沈降緩衝液(０.０１％ＳＤＳ／１.０％Triton X-100／１.２mM ＥＤＴＡ／１６.７mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ８.１／１５０mM ＮａＣｌ)で３倍希釈し、ＴＥ緩衝液(１０mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ８.０／ １mM ＥＤＴＡ)中に２０μg超音波処理サケ精子ＤＮＡおよび１mg／mL ＢＳＡを含む８０μLの５０％タンパク質Ａセファローススラリーを添加し、揺すりながら２時間、４℃でインキュベートした。ビーズを遠心によりペレット化し、上清を５μgの抗アセチル化ヒストンＨ３抗体、抗アセチル化ヒストンＨ４抗体、または正常血清を含む新しい試験管に入れ、一晩、４℃でインキュベートする。タンパク質Ａセファローススラリー(６０μL)を添加し、サンプルを１時間、４℃で揺する。タンパク質Ａ複合体を遠心分離し、３回、各５分免疫沈降緩衝液で２回、各５分５００mM ＮａＣｌ含有免疫沈降緩衝液で洗浄する。免疫複合体を２５０μLの溶出緩衝液(１％ＳＤＳ／０.１Ｍ ＮａＨＣＯ３)で、１５分、室温で２回溶出する。二十マイクロリットル(２０mL)の５Ｍ ＮａＣｌを合わせた溶出液に添加し、サンプルを６５℃で２４時間インキュベートする。ＥＤＴＡ、Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ６.５およびプロテイナーゼＫを次いでサンプルに各々１０mM、４０mMおよび０.０４μg／μLの最終濃度で添加する。サンプルを３７℃で３０分インキュベートする。
【００８２】
免疫沈降したＤＮＡ(免疫沈降サンプルおよびインプットの両方)をフェノール／クロロホルム抽出およびエタノール沈殿により回収し、ＰＣＲで分析した。ＤＲ５およびｐ２１ＷＡＦ１特異的プライマーを使用し、ＣｈＩＰ実験およびインプットサンプルから単離したＤＮＡのＰＣＲを行う。ＰＣＲの最適反応条件を、各プライマー対について測定する。ＤＲ５プロモーターＰＣＲ：前向きプライマーは５'−ＧＧＡ ＧＧＡ ＡＡＧ ＡＧＡ ＡＡＧ ＡＧＡ ＧＡＡ ＡＧＧ ＡＡＧ Ｇ−３'および後向きプライマーは５'−ＴＴＧ ＧＧＧ ＧＡＡ ＡＴＧ ＡＧＴ ＴＧＡ ＧＧＧ ＡＧＧ−３'であった。ＰＣＲ反応物は、０.２mM濃度のｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰ、２００nMの各ＤＲ５プロモータープライマー、１.５mMのＭｇＣｌ２、およびＴｒｉｓ−ＨＣＬ(ｐＨ８.０)５００mM ＫＣＬ、および１ＵのＴａｇポリメラーゼ(Invitrogen Carlsbad, CA)含有１０×ＰＣＲ緩衝液を含んだ。ｐ２１ＷＡＦ１分析に使用するプライマー対は：５'−ＧＧＴ ＧＴＣ ＴＡＧ ＧＴＧ ＣＴＣ ＣＡＧ ＧＴ−３'(ｄｐ１)、５' ＴＧＴＣＴＡＧＧＴＧＣＴＣＣＡＧ−３'(ｕｐ１)である。反応を９５℃で５分行い、その後３５サイクルの９５℃で１分の変性、５６℃で１分のアニーリングおよび７２℃で１分の伸張が続く。ＰＣＲ産物を２％アガロース／臭化エチジウムゲルで分離する。増幅産物のサイズは２５３塩基対であった。免疫沈降したＤＮＡとインプットＤＮＡの比率を各処置とプライマーセットについて計算した。ＬＡＱ８２４で処置した後の増加倍率を示された比率から計算した。
【００８３】
ＲＮａｓｅ保護アッセイ
RiboQuant Multi-Probe RNase Protection Assay Systeを、製造業者(BD/PharMingen, San Diego, CA)の指示に従って使用した。プローブセット、ｈＡＰＯ−３ｄ(ＦＬＩＣＥ、ＦＡＳ、ＤＲ５、ＤＲ４およびＴＲＡＩＬ)を[α−３２Ｐ]ＵＴＰ−標識アンチセンスＲＮＡプローブのＴ７ ＲＮＡ−ポリメラーゼ指示合成に使用した。プローブセットは、内部対照として使用したグリセルアルデヒド−３−リン酸塩デヒドロゲナーゼ(ＧＡＰＤＨ)を含む、ＤＮＡ鋳型を含む。プローブ(１×１０６cpm／反応)をＳＫＷ６.４およびジャーカット白血病細胞から単離した、２０μgのＲＮＡとハイブリダイズし、続いてRNeasy Mini kit(Qiagen, Valencia, CA)を使用して、異なる時点で１００nM ＬＡＱ８２４で処理する。一晩のハイブリダイゼーション後、サンプルをＲＮａｓｅで消化し、一本鎖(ハイブリダイズしていない)ＲＮＡを除去する。残ったプローブを５％変性ポリアクリルアミドゲル上で分離し、オートラジオグラフィーにより分析する。
【００８４】
ｃ−ＦＬＩＰ ｍＲＮＡレベルのＲＴ−ＰＣＲアッセイ
TRIZOL LS試薬(Invitrogen Carlsbad, CA)を使用して、細胞から全ＲＮＡを単離した。ＲＴ−ＰＣＲ分析を、先に記載の通り行った。ＲＮＡ(１.０μg)を、SuperScript IIRT(Invitrogen Carlsbad, CA)を製造業者のプロトコールに従い使用して、ｃＤＮＡに逆転写した。ｃ−ＦＬＩＰ ＰＣＲについて、プライマー配列は下記の通りである、前向きプライマー：５'−ＧＣＣ ＣＧＡ ＧＣＡ ＣＣＧ ＡＧＡ ＣＴＡ ＣＧ−３'；および後向きプライマー：５'−ＡＧＧ ＧＡＣ ＧＧＤ ＧＡＧ ＣＴＧ ＴＧＡ ＧＡＣ ＴＧ−３'。β−アクチン前向きプライマー：５'−ＣＴＡ ＣＡＡ ＴＧＡ ＧＣＴ ＧＣＧ ＴＧＴ ＧＧ−３'；および後ろ向きプライマー：ＡＡＧ ＧＡＡ ＧＧＣ ＴＧＧ ＡＡＧ ＡＧＴ ＧＣ。ＰＣＲ反応物は、０.２mM濃度のｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰおよび２００nM濃度の各ｃ−ＦＬＩＰプライマーおよび５０nMの各β−アクチンプライマー、１.５mMのＭｇＣｌ２、およびＴｒｉｓ−ＨＣＬ(ｐＨ８.０)、５００mM ＫＣＬおよび１ＵのＴａｇポリメラーゼ(Invitrogen Carlsbad, CA)含有１０×ＰＣＲ緩衝液を含む。反応を９５℃で５分行い、その後３０サイクルの９５℃で４５秒の変性、５２℃で４５秒のアニーリングおよび７２℃で１分の伸張が続く。ＰＣＲ産物を２％アガロース／臭化エチジウムゲルで分離する。増幅産物のサイズは各々、ｃ−ＦＬＩＰについて３９５塩基対およびβ−アクチン産物について５２７塩基対であった。
【００８５】
統計分析
データを平均±ＳＥＭで示す。比較は、必要に応じて、スチューデントのｔ検定またはＡＮＯＶＡを使用した。＜０.０５のＰ値を有意と見なす。
【００８６】
結果
ＬＡＱ８２４処置はジャーカットおよびＳＫＷ６.４細胞のｐ２１およびｐ２７を誘発し、そして、細胞サイクルＧ１相蓄積およびアポトーシスをもたらす
ＬＡＱ８２４(５−２５０nM)の処置が、ＨｅＬａ細胞核抽出物において、インビトロＨＤＡＣ活性を用量依存的方法で阻害することは以前報告されている。従って、ＬＡＱ８２４の、ヒト急性白血病ジャーカットおよびＳＫＷ６.４細胞における、ヒストンアセチル化、ｐ２１およびｐ２７レベルならびに増殖停止およびアポトーシスに対する効果を測定する。５０nMまたは２００nM ＬＡＱ８２４で２４時間の処置は、ジャーカットおよびＳＫＷ６.４細胞におけるヒストンＨ３およびヒストンＨ４のアセチル化を増加させる。ＬＡＱ８２４介在ヒストン過アセチル化は、ＳＫＷ６.４細胞ではｐ２１のレベルと用量依存的に相関するが、ジャーカット細胞ではしない。対照的に、５０nM ＬＡＱ８２４への暴露がＳＫＷ６.４およびジャーカット細胞の両方のｐ２７の細胞内レベルを増加させるが、２００nMのＬＡＱ２８４は、両方の細胞系でｐ２７レベルを減弱させる。これらの結果は、ＬＡＱ８２４が、ｐ２１遺伝子プロモーターと関係するが、ｐ２７遺伝子プロモーターと関係しないヌクレオソームヒストンの過アセチル化を誘発し、それにより、ｐ２１を転写的に上方制御するが、別の非転写機構によりｐ２７レベルを上昇させるという、先の報告と一致する。ＬＡＱ８２４の、ＳＫＷ６.４およびジャーカット細胞における細胞サイクル状態に対する効果は、ＬＡＱ８２４への２４時間の暴露がＧ１相にある細胞の割合を著しく増加させ、細胞サイクルのＳ相を減少させることを示す。重要なことに、１０−２００nMのＬＡＱ８２４への２４時間の暴露は、アネキシンＶの陽性染色で検出される通り、ＳＫＷ６.４細胞よりもジャーカット細胞において、アポトーシスを、用量依存的方法でより誘発する。
【００８７】
ＬＡＱ８２４はＤＲ４、ＤＲ５およびＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬを誘発するが、タンパク質のＦＬＩＰ、Ｂｃｌ−２およびＩＡＰファミリーのレベルを減弱させる
アポトーシスを誘発するその能力に基づき、ＬＡＱ８２４の、ＳＫＷ６.４およびジャーカット細胞におけるアポトーシスの外因性および内因性経路の分子決定基の細胞内レベルに対する効果を測定する。ＬＡＱ８２４への２４時間の暴露は、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ、ＤＲ４およびＤＲ５レベルを誘発する。ＬＡＱ８２４での処置は、ＳＫＷ６.４およびジャーカット細胞の両方でＦＬＩＰＬおよびＦＬＩＰＳのレベルを減弱させる。これは、カスパーゼ−９および−３のプロセッシングと関連し、ＬＡＱ８２４での処置が内因性経路を誘発するだけでなく、細胞をＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬにより誘発される外因性経路に導くことを示唆する。加えて、ＬＡＱ８２４での処置はまたＢｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−２、ＸＩＡＰ、ｃ−ＩＡＰおよびsurvivinのレベルを減弱させ、これは一体となってさらにＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬによるアポトーシスの閾値を低下させ得る。ジャーカット細胞において、これらの効果は、１６時間またはそれより短い間隔でのＬＡＱ８２４への暴露により明白である。先の報告は、アポトーシス中、Ｂｃｌ−２およびＩＡＰファミリーに属するアポトーシス決定基のいくつかが、カスパーゼにより処理されおよび／またはプロテアソームにより分解され得ることを示唆している。カスパーゼ−３およびＰＡＲＰのプロセッシングを阻害するｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで共処置したジャーカット細胞において、ＬＡＱ８２４のＸＩＡＰ、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬおよびｃ−ＦＬＩＰＬに対する減弱効果を回復させることは不可能である。加えて、プロテオソーム阻害剤ＡＬＬｎＬとの共処置は、ＬＡＱ８２４により減弱されたＸＩＡＰ、Ｂｃｌ−２、ｃ−ＦＬＩＰＬおよびｃ−ＦＬＩＰＳのレベルを回復させない。ＬＡＱ８２４処置がＤＲ５、ＤＲ４およびＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの細胞表面発現を増加させるか否かを測定する。ジャーカット細胞のＬＡＱ８２４での処置は、フローサイトメトリーで測定して、ＤＲ５の細胞膜発現を誘発する。
【００８８】
ＬＡＱ８２４は、ＤＲ４およびＤＲ５のｍＲＮＡレベルを増加させるが、ｃ−ＦＬＩＰＬのｍＲＮＡを枯渇させる
ＬＡＱ８２４の、ｃ−ＦＬＩＰＬ、ＤＲ５、ＤＲ４およびＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩのｍＲＮＡレベルに対する効果を、マルチプローブＲＮＡｓｅ保護アッセイを使用し、ローディングコントロールとしてのＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡと共にデンシトメトリーで概算して、測定する。ＬＡＱ８２４で８時間または１６時間の処置は、ＤＲ５(２.４倍)およびＦＡＳ(１.５倍)のｍＲＮＡ発現を増加させる。ＤＲ４レベルは、ＳＫＷ６.４細胞においてのみ２.２倍増加する。ＬＡＱ８２４への暴露は、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬおよびカスパーゼ−８(ＦＬＩＣＥ)のｍＲＮＡレベルにほとんど影響しない。なぜＬＡＱ８２４が、ヒストン過アセチル化をもたらすことによりＤＲ５ ｍＲＮＡレベルを転写的に上方制御するかの説明をするであろう、ＤＲ５のプロモーターがアセチル化ヒストンと関係するか否かを測定する。非処置またはＬＡＱ８２４処置ジャーカット細胞の融解物で行ったＣｈＩＰ分析の結果は、１００nMおよび２００nM ＬＡＱ８２４での８時間の処置が、アセチル化ヒストンＨ３およびＨ４と関連するＤＲ５プロモーターのレベルを各々３.３倍および５.７倍増加させることを示す。先に報告されているように、ＬＡＱ８２４はまたジャーカットおよびＳＫＷ６.４細胞における、ｐ２１ＷＡＦ１プロモーターＤＮＡとアセチル化ヒストンの結合を増加させる。ＤＲ５およびＤＲ４ ｍＲＮＡレベルの上昇と対照的に、ＬＡＱ８２４への８時間の暴露は、ＲＴ−ＰＣＲアッセイで測定して、ｃ−ＦＬＩＰＬのｍＲＮＡレベルを７５％まで阻害する。これは、ＬＡＱ８２４とシクロヘキシミド(ＣＨＸ)での共処置により回復する。これらの結果は、ｃ−ＦＬＩＰＬメッセージのＬＡＱ８２４介在抑制が、新規タンパク質合成を必要とすることを示唆する。これらの結果はまたＬＡＱ８２４が、ＣＨＸとの共処置により中和される結果である、ｃ−ＦＬＩＰＬの転写リプレッサーのレベルおよび活性を増加させるとの解釈も指示する。
【００８９】
ＬＡＱ８２４はＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣ集合および活性ならびにアポトーシスを促進する
ｃ−ＦＬＩＰレベルおよび上昇したＤＲ５およびＤＲ４レベルが、白血病および上皮性癌細胞のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣ活性およびアポトーシスを増加することが先に示されていたため、ＬＡＱ８２４のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣおよびアポトーシスに対する効果を測定する。ＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置は、ジャーカットおよびＳＫＷ６.４細胞において、いずれかの薬剤単独での処置と比較して、有意に高いアポトーシスを誘発する(ｐ＜０.０５)。同時に、ＬＡＱ８２４またはＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬで単独の処置と比較して、ＬＡＱ８２４(２０nM)とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ(１０ng／mL)の２４時間の併用処置は、カスパーゼ−８およびＢＩＤのより大きなプロセッシングを誘発し、ならびにカスパーゼ−３のプロセッシングおよびＰＡＲＰ開裂活性を増加させる。これは、ＬＡＱ８２４またはＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ単独と比較して、ＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置が、前死分子チトクロームｃ、ＳｍａｃおよびＯｍｉのサイトソルへの蓄積をよりもたらすため、ミトコンドリア透過性遷移の増加に関与する。ＬＡＱ８２４のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣに対する効果を測定するために、ＤＲ５およびＤＲ４の免疫沈降物へのカスパーゼ−８、ＦＡＤＤおよびｃ−ＦＬＩＰＬの集合を、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ(１００nMで２時間)での処置後と、ＬＡＱ８２４(１００nMで２４時間)、続いてＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬでの処置後を比較する。ＬＡＱ８２４での前処置は、ＤＲ４およびＤＲ５の免疫沈降物へのＦＡＤＤおよびカスパーゼ−８の集合を誘導するが、ｃ−ＦＬＩＰＬは誘導せず、カスパーゼ−８のより多くのプロセッシングをもたらすが、ｃ−ＦＬＩＰＬではあまりない。ＤＲ４およびＤＲ５の上方制御とｃ−ＦＬＩＰＬおよびｃ−ＦＬＩＰＳの下方制御によるＤＩＳＣの増加した集合および活性が、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスの増加に関与するかを決定するため、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬにより、またはＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬでの共処置により誘発されたジャーカット細胞のアポトーシスにおけるＤＮ−ＦＡＤＤのＤＥＤ枯渇ｃＤＮＡの一過性トランスフェクションの効果を測定する。コントロールベクター単独でトランスフェクトしたジャーカット細胞(ジャーカット−Ｚｅｏ細胞)と比較して、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬでの処置またはＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置により誘導されるアポトーシスは、ＤＮ−ＦＡＤＤでトランスフェクトしたジャーカット細胞で阻害される。重要なことに、ＬＡＱ８２４のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに対する増感効果は、ジャーカット−Ｚｅｏ細胞に対して、ジャーカット−ＤＮ ＦＡＤＤで減少する。これらの発見は、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣの成分および活性のＬＡＱ８２４誘発調節が、ＬＡＱ８２４のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに対する全体的効果に関与していることを示唆する。
【００９０】
ＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置は、Ｂｃｌ−２過剰発現によるアポトーシスの阻害に打ち勝つ
ＬＡＱ８２４および／またはＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの効果を、Ｂｃｌ−２の遺書性過剰発現をする(５倍)ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２細胞と、コントロールＨＬ−６０／Ｎｅｏ細胞で非アックする。ＬＡＱ８２４は、ｐ２１、ｐ２７、ＤＲ４＆５レベルの増加を仲介し、そしてＦＬＩＰＬおよびＦＬＩＰＳレベルの減少は、非処置ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２とＨＬ−６０／Ｎｅｏ細胞で比較してほぼ同じである。先に報告されているように、Ａｐｏ ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスは、ＨＬ−６０／Ｎｅｏ細胞と比較して、ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２で阻害された。５０nM ＬＡＱ８２４での処置後、カスパーゼ−３のＰＡＲＰ開裂活性およびのカスパーゼ−８のプロセッシングはまたＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２細胞で阻害されたが、より高濃度のＬＡＱ８２４(１００nM)への暴露は、ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２およびＨＬ−６０／Ｎｅｏ細胞でのＰＡＲＰおよびカスパーゼ−８の類似のプロセッシングをもたらした。さらに、５０ng／mLのＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬとＬＡＱ８２４(５０nMまたは１００nM)の併用処置は、ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２細胞においていずれかの薬剤単独と比較してよりアポトーシスを誘発し、それは一貫して５０％を超えた。これはまた、より高レベルのｔＢＩＤの産生を伴う、カスパーゼ−８およびＢＩＤのより多くのプロセッシングと関係する。それはまたカスパーゼ−３のＰＡＲＰ開裂活性の増加およびＸＩＡＰの下方制御と関連する。これらの発見は、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬおよび低レベルのＬＡＱ８２４によるＢｃｌ−２によるアポトーシスの抑制が、高レベルのＬＡＱ８２４またはＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬとＬＡＱ８２４の共処置により阻止されることを示唆する。
【００９１】
ＬＡＱ８２４との共処置は、再発したＡＭＬの患者からの白血病芽球のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに対する耐性に打ち勝つ
再発ＡＭＬの患者から得た新鮮なＡＭＬ細胞の、Ａｐｏ−Ｌ／ＴＲＡＩＬおよび／またはＬＡＱ８２４誘発アポトーシスに対する感受性を測定する。表１は、全６サンプルのＡＭＬ芽球が、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ(１００ng／mL)により誘発されるアポトーシスに耐性であることを示す。対照的に、ＬＡＱ８２４(１００nM)への暴露は、初代ＡＭＬ細胞のアポトーシスをより誘発する。ＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置は、いずれかの薬剤単独よりもアポトーシスを誘発する。これらのデータは、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに対する初代ＡＭＬ細胞の耐性に、ＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置により打ち勝つ点で、ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２細胞のものと類似である。Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣ決定基に対するＬＡＱ８２４の効果を測定する。初代ＡＭＬ芽球の代表的サンプル、および培養急性白血病細胞に類似のものにおいて、１００nMまたは２５０nM ＬＡＱ８２４で２４時間の処置は、ヒストンＨ３およびＨ４のアセチル化を誘発する。ＬＡＱ８２４処置はまたＤＲ４およびＤＲ５レベルを増加させ、そして、ＦＬＩＰＬおよびｃ−ＦＬＩＰＳのレベルを下方制御する。ウェスタン分析で決定したＤＲ５の細胞内レベルの上昇と対応して、初代ＡＭＬサンプルの１００nMおよび２５０nM ＬＡＱ８２４での処置はまた、フローサイトメトリーで測定して、細胞膜上でのＤＲ５の発現を各々細胞の１７.５％の基底値から３３.２および６２.４％に上昇させる。
【００９２】
【表１】
説明：ＬＡＱ８２４の共処置は、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスを増加させる。６名の患者からの初代ＡＭＬ細胞をＬＡＱ８２４(１００nM)および／またはＡｐｏ−２／Ｌ ＴＲＡＩＬ(１００ng／mL)で２４時間処置した。この後、アポトーシス細胞のパーセントを、アネキシンＶ染色およびフローサイトメトリーで測定した。値はデュプリケートで行った２回の実験の平均を示す。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける癌のような増殖性疾患を：
(ａ)ヒストンデアセチラーゼ阻害剤(ＨＤＡＩ)；および
(ｂ)細胞死受容体リガンド（Death receptor ligand）
を含む医薬の組み合わせで予防または処置する方法に関する。
【０００２】
本発明はさらに：
(ａ)ＨＤＡＩ；
(ｂ)細胞死受容体リガンド；および
(ｃ)薬学的に許容される担体
を含む、医薬組成物に関する。
【０００３】
本発明は、さらに：
(ａ)ＨＤＡＩの医薬製剤；および
(ｂ)同時の、一緒の、別々または連続使用のための、細胞死受容体リガンドの医薬製剤
を含む、商品パッケージまたは製品に関する。
【０００４】
発明の背景
ヒストンの可逆性アセチル化は、転写因子のＤＮＡへの接近性を代えることにより作用する、遺伝子発現の主要なレギュレーターである。正常細胞において、ヒストンデアセチラーゼ(ＨＤＡ)およびヒストンアセチルトランスフェラーゼは、バランスを維持するためにヒストンのアセチル化のレベルを一体となって制御する。ＨＤＡの阻害は、過アセチル化されたヒストンの蓄積をもたらし、それは様々な細胞応答をもたらす。ＨＤＡの阻害剤(ＨＤＡＩ)は、癌細胞におけるそれらの治療効果について試験されている。ＨＤＡＩ研究の分野での最近の発達は、非常に有効で安定であり、腫瘍の処置に適した活性化合物を提供している。
【０００５】
腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)関連アポトーシス誘導リガンド(ＴＲＡＩＬ、Ａｐｏ−２Ｌとしても既知)は、サイトカインのＴＮＦファミリーのメンバーであり、そのアゴニスト細胞膜細胞死受容体ＴＲＡＩＬ−Ｒ１(ＤＲ４)およびＴＲＡＩＬ−Ｒ２(ＤＲ５)と結合し、そのオリゴマー化を誘導できる。Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ、またはアゴニスト抗体の結合および架橋により、細胞死受容体ＤＲ４およびＤＲ５は、細胞膜結合多タンパク質死誘発シグナル伝達複合体(ＤＩＳＣ)の集合を介して、カスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くことができる。
【０００６】
発明の概要
本発明により、ＨＤＡＩでの処置が、上昇したＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣ活性と関連する、ＤＲ４およびＤＲ５を誘導するが、ｃＦＬＩＰレベルを抑制しないことが示された。ＨＤＡＩとの併用処置は、ヒト急性白血病細胞のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発死誘発シグナル伝達複合体活性およびアポトーシスを増強する。この証拠は、ＴＲＡＩＬが、ＨＤＡＩと併用したとき、よりさらに有効であることを示唆する。効果および安全性の両方に、相乗的、かつ相加的利点の両方がある。ＨＤＡＩとＴＲＡＩＬの組み合わせの治療効果は、組み合わせの各成分のより低い安全投与量範囲をもたらし得る。
【０００７】
本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける癌のような増殖性疾患を予防または処置するための：
(ａ)ＨＤＡＩ；および
(ｂ)細胞死受容体リガンド
を含む組み合わせに関する。
【０００８】
本発明は、哺乳動物、特にヒトにおける癌のような増殖性疾患を：
(ａ)ＨＤＡＩ；および
(ｂ)細胞死受容体リガンド
を含む医薬の組み合わせで予防または処置する方法に関する。
【０００９】
本発明はさらに：
(ａ)ＨＤＡＩ；
(ｂ)細胞死受容体リガンド；および
(ｃ)薬学的に許容される担体
を含む、医薬組成物に関する。
【００１０】
本発明はさらに：
(ａ)ＨＤＡＩの医薬製剤；および
(ｂ)同時の、一緒の、別々または連続使用のための、細胞死受容体リガンドの医薬製剤
を含む、商品パッケージまたは製品に関する。
【００１１】
発明の詳細な説明
処置すべき疾患
本発明の組み合わせは、増殖性疾患の処置に有用である。増殖性疾患は、主に腫瘍疾患(または癌)(および／または全ての転移巣)である。本発明の組成物は、特に乳癌、尿生殖器癌、肺癌、消化器癌、類表皮癌、黒色腫、神経膠腫、卵巣癌、膵臓癌、神経芽腫、頭頚部癌または膀胱癌、または広い意味では腎臓、脳または胃癌；特に：
(ｉ)乳房腫瘍；類表皮腫瘍、例えば類表皮頭頚部腫瘍または口腔腫瘍；肺腫瘍、例えば、小細胞または非小細胞肺腫瘍；消化器腫瘍、例えば、結腸直腸腫瘍；または尿生殖器腫瘍、例えば、前立腺腫瘍、とりわけホルモン難治性前立腺腫瘍；
(ii)他の化学療法剤での処置に難治性の増殖性疾患；または
(iii)多剤耐性のために他の化学療法剤での処置に難治性の腫瘍
である腫瘍の処置に有用である。
【００１２】
本発明の広い意味において、増殖性疾患は、さらに、例えば白血病(とりわけ急性骨髄性白血病またはＡＭＬ)、過形成、線維症(とりわけ肺であるが、他のタイプの線維症、例えば腎線維症も)、血管形成、感染、アテローム性動脈硬化症および血管における平滑筋増殖、例えば狭窄または血管形成術後の再狭窄のような過増殖性状態であり得る。
【００１３】
本発明により処置し得る他の悪性腫瘍は、ＴＲＡＩＬ化合物での処置に感受性の悪性腫瘍を含む。
【００１４】
腫瘍、腫瘍疾患、癌腫または癌を記載しているとき、また、原発臓器または組織および／または全ての他の位置における転移も、腫瘍および／または転移の位置がどこであれ、それに代えてまたはそれに加えて包含される。
【００１５】
組み合わせは、正常細胞よりも急速に増殖している細胞、特にヒト癌細胞、例えば、癌様腫瘍に対して選択的に毒性であるかより毒性であり、本化合物は、著しい抗増殖効果を有し、分化、例えば、細胞サイクル停止およびアポトーシスを促進する。本組み合わせは、アポトーシス細胞死および壊死を誘発できる。
【００１６】
細胞死受容体リガンド
本明細書で使用する“細胞死受容体リガンド”は、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ、ＴＲＡＩＬ模倣体、アゴニスト抗体および細胞膜結合多タンパク質死誘発シグナル伝達複合体(ＤＩＳＣ)の集合を介してカスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くＤＲ４およびＤＲ５に結合できる他の因子を意味する。
【００１７】
ＴＲＡＩＬは、多くの様々なタイプの癌細胞、ならびにウイルス感染した細胞を含む、ある種の形質転換細胞におけるアポトーシスを誘導する能力が証明されている。ＴＲＡＩＬは、その全体を引用により本明細書に包含する米国特許５,７６３,２２３に記載されている。Wiley et al., “Identification and Characterization of New Member of the TNF Family that Induces Apoptosis”, Immunity, Vol. 3, pp. 673-682(1995);およびPitti et al., “Induction of Apoptosis by Apo-2 Ligand, New Member of the Tumor Necrosis Factor Cytokine Family”, J Biol Chem, Vol. 271, No. 22, pp. 12687-12690(1996)参照。
【００１８】
本明細書に記載の組み合わせは、ＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ、ＴＲＡＩＬ模倣体、アゴニスト(agnostic)抗体、ならびに、細胞膜結合多タンパク質ＤＩＳＣを介したカスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くＤＲ４およびＤＲ５に結合できる他の因子を含む。
【００１９】
ＨＤＡＩ化合物
本発明の組み合わせで使用するための特に興味深いＨＤＡＩ化合物は、式(Ｉ)：
【化１】
〔式中、
Ｒ１はＨ；ハロ；または直鎖Ｃ１−Ｃ６アルキル、とりわけメチル、エチルまたはｎ−プロピル(該メチル、エチルおよびｎ−プロピル置換基は、非置換であるか、またはアルキル置換基に関して下記の１個またはそれ以上の置換基で置換されている)であり；
Ｒ２はＨ；Ｃ１−Ｃ１０アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、メチル、エチルまたは−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６；−(ＣＨ２)ｎＯＣ(Ｏ)Ｒ６；アミノアシル；ＨＯＮ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ＝Ｃ(Ｒ１)−アリール−アルキル−；および−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；アシル；またはアシルアミノであるか；または
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素と一体となって、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ＝ＮＲ８であるか；または
Ｒ２は、それが結合している窒素と一体となって、およびＲ３は、それが結合している炭素と一体となって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；またはアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環を形成でき；
Ｒ５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アシル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；芳香族性多環；非芳香族性多環；アリールおよび非アリール混合多環；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；およびアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環から選択され；
ｎ、ｎ１、ｎ２およびｎ３は、同一または異なり、かつ独立して０−６から選択され、ｎ１が１−６であるとき、各炭素原子は、所望によりかつ独立してＲ３および／またはＲ４で置換されていてよく；
ＸおよびＹは、同一または異なり、かつ独立してＨ；ハロ；ＣＨ３およびＣＦ３のようなＣ１−Ｃ４アルキル；ＮＯ２；Ｃ(Ｏ)Ｒ１；ＯＲ９；ＳＲ９；ＣＮ；およびＮＲ１０Ｒ１１から選択され；
Ｒ６はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジルおよび２−フェニルエテニル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；ＯＲ１２；およびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
Ｒ７はＯＲ１５；ＳＲ１５；Ｓ(Ｏ)Ｒ１６；ＳＯ２Ｒ１７；ＮＲ１３Ｒ１４；およびＮＲ１２ＳＯ２Ｒ６から選択され；
Ｒ８はＨ；ＯＲ１５；ＮＲ１３Ｒ１４；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ９はＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、ＣＨ３およびＣＦ３；Ｃ(Ｏ)−アルキル、例えば、Ｃ(Ｏ)ＣＨ３；およびＣ(Ｏ)ＣＦ３から選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、かつ独立してＨ；Ｃ１−Ｃ４アルキル；および−Ｃ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１２はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；アリール；アリールおよび非アリール混合多環；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ１３およびＲ１４は、同一または異なり、かつ独立してＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アミノアシルから選択されるか；または
Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合している窒素と一体となって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；またはアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環であり；
Ｒ１５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１６はＣ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１７はＣ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；芳香族性多環；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；ポリヘテロアリールおよびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
ｍは０−６から選択される整数であり；そして
ＺはＯ；ＮＲ１３；Ｓ；およびＳ(Ｏ)から選択される。〕
により記載されるヒドロキサメート化合物または薬学的に許容されるその塩である。
【００２０】
必要に応じて、“非置換”は置換基が存在しないか、または唯一の置換基が水素であることを意味する。
【００２１】
ハロ置換基は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨード、好ましくはフルオロまたはクロロから選択される。
【００２２】
アルキル置換基は、特記されない限り、直鎖および分枝鎖Ｃ１−Ｃ６アルキルを含む。適当な直鎖および分枝鎖Ｃ１−Ｃ６アルキル置換基の例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、２−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチルなどを含む。特記されない限り、アルキル置換基は非置換アルキル基ならびに、１個またはそれ以上の適当な、不飽和を含む置換基で置換されている、すなわち、１個またはそれ以上の二重または３重Ｃ−Ｃ結合；アシル；シクロアルキル；ハロ；オキシアルキル；アルキルアミノ；アミノアルキル；アシルアミノ；およびＯＲ１５、例えば、アルコキシが存在するアルキル基の両方を含む。アルキル基の好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、オキシアルキル、アルキルアミノおよびアミノアルキルを含む。
【００２３】
シクロアルキル置換基は、特記されない限り、Ｃ３−Ｃ９シクロアルキル基、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルなどを含む。特記されない限り、シクロアルキル置換基は、非置換シクロアルキル基ならびに、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ、ヒドロキシ、アミノアルキル、オキシアルキル、アルキルアミノおよびＯＲ１５、例えばアルコキシを含む、１個またはそれ以上の適当な置換基により置換されたシクロアルキル基の両方を含む。シクロアルキル基の好ましい置換基は、ハロ、ヒドロキシ、アルコキシ、オキシアルキル、アルキルアミノおよびアミノアルキルを含む。
【００２４】
アルキルおよびシクロアルキル置換基に関する記載は、他の置換基、例えば、限定しないが、アルコキシ、アルキルアミン、アルキルケトン、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、アルキルスルホニルおよびアルキルエステル置換基などのアルキル部分にも当てはまる。
【００２５】
ヘテロシクロアルキル置換基は、窒素、硫黄、酸素から選択される１−３個のヘテロ原子を含む、３−から９−員脂肪族環、例えば４−から７−員脂肪族環を含む。適当なヘテロシクロアルキル置換基の例は、ピロリジル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロチオフラニル、ピペリジル、ピペラジル、テトラヒドロピラニル、モルホリノ、１,３−ジアザパン、１,４−ジアザパン、１,４−オキサゼパンおよび１,４−オキサチアパンを含む。特記されない限り、環は、非置換であるか、または炭素原子上を、Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；ハロ；アミノ；アルキルアミノおよびＯＲ１５、例えば、アルコキシを含む、１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されている。特記されない限り、窒素ヘテロ原子は、非置換であるか、またはＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アシル；アミノアシル；アルキルスルホニル；およびアリールスルホニルで置換されている。
【００２６】
シクロアルキルアルキル置換基は、式−(ＣＨ２)ｎ５−シクロアルキル(式中、ｎ５は１−６の数字である)の化合物を含む。適当なアルキルシクロアルキル置換基は、シクロペンチルメチル、シクロペンチルエチル、シクロヘキシルメチルなどを含む。このような置換基は、非置換であるか、またはアルキル部分もしくはシクロアルキル部分を、アルキルおよびシクロアルキルについて上記に挙げたものを含む、適当な置換基で置換されている。
【００２７】
アリール置換基は非置換フェニルならびに、Ｃ１−Ｃ６アルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；Ｏ(ＣＯ)アルキル；オキシアルキル；ハロ；ニトロ；アミノ；アルキルアミノ；アミノアルキル；アルキルケトン；ニトリル；カルボキシアルキル；アルキルスルホニル；アミノスルホニル；アリールスルホニルおよびＯＲ１５、例えばアルコキシを含む１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されたフェニルを含む。好ましい置換基は、Ｃ１−Ｃ６アルキル；シクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アルコキシ；オキシアルキル；ハロ；ニトロ；アミノ；アルキルアミノ；アミノアルキル；アルキルケトン；ニトリル；カルボキシアルキル；アルキルスルホニル；アリールスルホニルおよびアミノスルホニルを含む。適当なアリール基の例は、Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシフェニル、トリフルオロメチルフェニル、メトキシフェニル、ヒドロキシエチルフェニル、ジメチルアミノフェニル、アミノプロピルフェニル、カルボエトキシフェニル、メタンスルホニルフェニルおよびトリルスルホニルフェニルを含む。
【００２８】
芳香族性多環は、ナフチル、ならびに、Ｃ１−Ｃ６アルキル；アルキルシクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；オキシアルキル；ハロ；ニトロ；アミノ；アルキルアミノ；アミノアルキル；アルキルケトン；ニトリル；カルボキシアルキル；アルキルスルホニル；アリールスルホニル；アミノスルホニルおよびＯＲ１５、例えばアルコキシを含む１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されたナフチルを含む。
【００２９】
ヘテロアリール置換基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個またはそれ以上のヘテロ原子、例えば、１−４個のヘテロ原子を含む、５−から７−員芳香環を有する化合物を含む。典型的ヘテロアリール置換基は、フリル、チエニル、ピロール、ピラゾール、トリアゾール、チアゾール、オキサゾール、ピリジン、ピリミジン、イソオキサゾリル、ピラジンなどを含む。特記されない限り、ヘテロアリール置換基は、非置換であるか、または炭素原子上を、アルキル、上記で定義のアルキル置換基、および他のヘテロアリール置換基を含む、１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されている。窒素原子は非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されている；とりわけ有用なＮ置換基はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００３０】
アリールアルキル置換基は、式−(ＣＨ２)ｎ５−アリール、−(ＣＨ２)ｎ５−１−(ＣＨ−アリール)−(ＣＨ２)ｎ５−アリールまたは−(ＣＨ２)ｎ５−１ＣＨ(アリール)(アリール)(式中、アリールおよびｎ５は上記で定義の通り)の基を含む。このようなアリールアルキル置換基は、ベンジル、２−フェニルエチル、１−フェニルエチル、トリル−３−プロピル、２−フェニルプロピル、ジフェニルメチル、２−ジフェニルエチル、５,５−ジメチル−３−フェニルペンチルなどを含む。アリールアルキル置換基は、非置換であるか、またはアルキル部分もしくはアリール部分もしくは両方を、アルキルおよびアリール置換基について上記の通り置換されている。
【００３１】
ヘテロアリールアルキル置換基は、式−(ＣＨ２)ｎ５−ヘテロアリール(式中、ヘテロアリールおよびｎ５は上記で定義の通りであり、架橋記はヘテロアリール部分の炭素または窒素に連結している)の基、例えば２−、３−または４−ピリジルメチル、イミダゾリルメチル、キノリルエチルおよびピロリルブチルを含む。ヘテロアリール置換基は、非置換であるか、またはヘテロアリールおよびアルキル置換基について上記の通り置換されている。
【００３２】
アミノアシル置換基は、式−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｈ)(ＮＲ１３Ｒ１４)−(ＣＨ２)ｎ−Ｒ５(式中、ｎ、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ５は上記の通り)の基を含む。適当なアミノアシル置換基は、天然および非天然アミノ酸、例えばグリシニル、Ｄ−トリプトファニル、Ｌ−リシニル、Ｄ−またはＬ−ホモセリニル、４−アミノブチリックアシルおよび±−３−アミン−４−ヘキセノイルを含む。
【００３３】
非芳香族性多環置換基は、各環が４−から９−員であり得て、かつ各環が０個、１個またはそれ以上の二重および／または三重結合を含み得るものである、二環式および三環式縮合環系を含む。適当な非芳香族性多環の例は、デカリン、オクタヒドロインデン、ペルヒドロベンゾシクロヘプテンおよびペルヒドロベンゾ−[ｆ]−アズレンを含む。このような置換基は非置換であるか、または上記でシクロアルキル基について記載の通り置換されている。
【００３４】
アリールおよび非アリール混合多環置換基は、各環が４−から９−員であり得て、かつ少なくとも１個の環が芳香族性であるものである、二環式および三環式縮合環系を含む。アリールおよび非アリール混合多環の適当な例は、メチレンジオキシフェニル、ビス−メチレンジオキシフェニル、１,２,３,４−テトラヒドロナフタレン、ジベンゾスベラン、ジヒドロアントラセンおよび９Ｈ−フルオレンを含む。このような置換基は非置換であるか、またはニトロでもしくはシクロアルキル基について上記の通りに置換されている。
【００３５】
ポリヘテロアリール置換基は、各環が独立して５または６員であり得て、かつＯ、ＮまたはＳから選択される１個またはそれ以上のヘテロ原子、例えば、１個、２個、３個または４個のヘテロ原子を、縮合環系が芳香族性であるように含むものである、二環式および三環式縮合環系を含む。ポリヘテロアリール環系の適当な例は、キノリン、イソキノリン、ピリドピラジン、ピロロピリジン、フロピリジン、インドール、ベンゾフラン、ベンゾチオフラン、ベンズインドール、ベンゾオキサゾール、ピロロキノリンなどを含む。特記されない限り、ポリヘテロアリール置換基は非置換であるか、または炭素原子上を、アルキル、上記で定義のアルキル置換基式−Ｏ−(ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２))１−３Ｈの置換基を含む、１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されている。窒素原子は非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されており、とりわけ有用なＮ置換基はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００３６】
非芳香族性ポリヘテロ環式置換基は、各環がＯ、ＮまたはＳから選択される１個またはそれ以上のヘテロ原子、例えば、１個、２個、３個または４個のヘテロ原子を含んで４−から９−員であり得て、かつ０個または１個またはそれ以上のＣ−Ｃ二重または三重結合を含むものである、二環式および三環式縮合環系を含む。非芳香族性ポリヘテロ環の適当な例は、ヘキシトール、ｃｉｓ−ペルヒドロ−シクロヘプタ[ｂ]ピリジニル、デカヒドロ−ベンゾ[ｆ][１,４]オキサゼピニル、２,８−ジオキサビシクロ[３.３.０]オクタン、ヘキサヒドロ−チエノ[３,２−ｂ]チオフェン、ペルヒドロピロロ[３,２−ｂ]ピロール、ペルヒドロナフチリジン、ペルヒドロ−１Ｈ−ジシクロペンタ[ｂ,ｅ]ピランを含む。特記されない限り、非芳香族性ポリヘテロ環式置換基は、非置換であるか、または、炭素原子上を、アルキルおよび上記で定義のアルキル置換基を含む、１個またはそれ以上の置換基で置換されている。窒素原子は、非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されており、とりわけ有用なＮ置換基はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００３７】
アリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環置換基は、各環がＯ、ＮまたはＳから選択される１個またはそれ以上のヘテロ原子を含む４−から９−員であり得て、かつ環の少なくとも１個が芳香族性であるべきである、二環式および三環式縮合環系を含む。アリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環の適当な例は、２,３−ジヒドロインドール、１,２,３,４−テトラヒドロキノリン、５,１１−ジヒドロ−１０Ｈ−ジベンズ[ｂ,ｅ][１,４]ジアゼピン、５Ｈ−ジベンゾ[ｂ,ｅ][１,４]ジアゼピン、１,２−ジヒドロピロロ[３,４−ｂ][１,５]ベンゾジアゼピン、１,５−ジヒドロ−ピリド[２,３−ｂ][１,４]ジアゼピン−４−オン、１,２,３,４,６,１１−ヘキサヒドロ−ベンゾ[ｂ]ピリド[２,３−ｅ][１,４]ジアゼピン−５−オンを含む。特記されない限り、アリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環式置換基は、非置換であるか、または、炭素原子上を、−Ｎ−ＯＨ、＝Ｎ−ＯＨ、アルキルおよび上記で定義のアルキル置換基を含む、１個またはそれ以上の適当な置換基で置換されている。窒素原子は、非置換であるか、または、例えば、Ｒ１３で置換されている；とりわけ有用なＮ置換基はＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、アシル、アミノアシルおよびスルホニルを含む。
【００３８】
アミノ置換基は、１級、２級および２級アミンおよび塩形では、４級アミンを含む。アミノ置換基の例は、モノ−およびジ−アルキルアミノ、モノ−およびジ−アリールアミノ、モノ−およびジ−アリールアルキルアミノ、アリール−アリールアルキルアミノ、アルキル−アリールアミノ、アルキル−アリールアルキルアミノなどを含む。
【００３９】
スルホニル置換基は、アルキルスルホニルおよびアリールスルホニル、例えば、メタンスルホニル、ベンゼンスルホニル、トシルなどを含む。
【００４０】
アシル置換基は、式−Ｃ(Ｏ)−Ｗ、−ＯＣ(Ｏ)−Ｗ、−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−ＷまたはＣ(Ｏ)ＮＲ１３Ｒ１４(式中、ＷはＲ１６、Ｈまたはシクロアルキルアルキルである)の基を含む。
【００４１】
アシルアミノ置換基は、式−Ｎ(Ｒ１２)Ｃ(Ｏ)−Ｗ、−Ｎ(Ｒ１２)Ｃ(Ｏ)−Ｏ−Ｗおよび−Ｎ(Ｒ１２)Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ(式中、Ｒ１２およびＷは上記で定義の通りである)の置換基を含む。
【００４２】
Ｒ２置換基ＨＯＮ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ＝Ｃ(Ｒ１)−アリール−アルキル−は、式
【化２】
の基である。
【００４３】
好ましい各置換基は、下記を含む：
Ｒ１がＨ、ハロまたは直鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルであり；
Ｒ２がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ３およびＲ４が、同一または異なり、かつ独立してＨおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択されるか；または
Ｒ３およびＲ４が、それらが結合している炭素と一体となって、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ＝ＮＲ８であり；
Ｒ５がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、芳香族性ポリサイクル、非芳香族性ポリサイクル、アリールおよび非アリール混合多環、ポリヘテロアリール、非芳香族性ポリヘテロ環、およびアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環から選択され；
ｎ、ｎ１、ｎ２およびｎ３が、同一または異なり、かつ独立して０−６から選択され、ここで、ｎ１が１−６であるとき、各炭素原子は非置換であるか、または独立してＲ３および／またはＲ４で置換されており；
ＸおよびＹは、同一または異なり、かつ独立してＨ、ハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、ＣＦ３、ＮＯ２、Ｃ(Ｏ)Ｒ１、ＯＲ９、ＳＲ９、ＣＮおよびＮＲ１０Ｒ１１から選択され；
Ｒ６がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アルキルシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、ＯＲ１２およびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
Ｒ７がＯＲ１５、ＳＲ１５、Ｓ(Ｏ)Ｒ１６、ＳＯ２Ｒ１７、ＮＲ１３Ｒ１４およびＮＲ１２ＳＯ２Ｒ６から選択され；
Ｒ８がＨ、ＯＲ１５、ＮＲ１３Ｒ１４、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択され；
Ｒ９がＣ１−Ｃ４アルキルおよびＣ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、かつ独立してＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキルおよび−Ｃ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１２がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキルおよびヘテロアリールアルキルから選択され；
Ｒ１３およびＲ１４が、同一または異なり、かつ独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよびアミノアシルから選択され；
Ｒ１５がＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよび(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１６がＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよび(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１７がＣ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキルおよびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
ｍが０−６から選択される整数であり；そして
ＺがＯ、ＮＲ１３、ＳおよびＳ(Ｏ)から選択される；
または薬学的に許容されるその塩。
【００４４】
有用な式(Ｉ)の化合物は、ｎ２およびｎ３の一方が０であり、そして他方が１であるものを含む、Ｒ１、Ｘ、Ｙ、Ｒ３およびＲ４の各々がＨであるもの、とりわけＲ２がＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであるものを含む。
【００４５】
ヒドロキサメート化合物の一つの適当な群は、式(Ｉａ)
【化３】
〔式中、
ｎ４は０−３であり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；そして
Ｒ５’はヘテロアリール；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；芳香族性多環；非芳香族性多環；アリールおよび非アリール混合多環；ポリヘテロアリールまたは混合アリール；および非アリールポリヘテロ環である。〕
の化合物または薬学的に許容されるその塩である。
【００４６】
ヒドロキサメート化合物の他の適当な群は、式(Ｉａ)
【化４】
〔式中、
ｎ４は０−３であり；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ５’はアリール；アリールアルキル；芳香族性多環；非芳香族性多環および混合アリール；および非アリール多環、とりわけアリール、例えばｐ−フルオロフェニル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル、例えばｐ−メトキシフェニル、およびｐ−Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル；およびアリールアルキル、例えばベンジル、オルト−、メタ−またはパラ−フルオロベンジル、オルト−、メタ−またはパラ−クロロベンジル、オルト−、メタ−またはパラ−モノ−、ジ−またはトリ−Ｏ−Ｃ１−Ｃ４アルキルベンジル、例えばオルト−、メタ−またはパラ−メトキシベンジル、ｍ,ｐ−ジエトキシベンジル、ｏ,ｍ,ｐ−トリメトキシベンジルおよびオルト−、メタ−またはパラ−モノ−、ジ−またはトリ−Ｃ１−Ｃ４アルキルフェニル、例えばｐ−メチル、ｍ,ｍ−ジエチルフェニルである。〕
の化合物、薬学的に許容されるその塩である。
【００４７】
他の興味深い群は、式(Ｉｂ)
【化５】
〔式中、
Ｒ’２はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ６シクロアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；(ＣＨ２)２−４ＯＲ２１(ここで、Ｒ２１はＨ、メチル、エチル、プロピルおよびｉ−プロピルである)から選択され；そして
Ｒ５”は非置換１Ｈ−インドル−３−イル、ベンゾフラン−３−イルまたはキノリン−３−イル、または置換１Ｈ−インドル−３−イル、例えば５−フルオロ−１Ｈ−インドル−３−イルまたは５−メトキシ−１Ｈ−インドル−３−イル、ベンゾフラン−３−イルまたはキノリン−３−イルである。〕
の化合物または薬学的に許容されるその塩である。
【００４８】
ヒドロキサメート化合物の他の好ましい群は、式(Ｉｃ)
【化６】
〔式中、
Ｚ１含有環は芳香族性または非芳香族性であり、該非芳香環は飽和または不飽和であり、
Ｚ１はＯ、ＳまたはＮ−Ｒ２０であり；
Ｒ１８はＨ；ハロ；Ｃ１−Ｃ６アルキル(メチル、エチル、ｔ−ブチル)；Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル；アリール、例えば、非置換フェニルまたは４−ＯＣＨ３もしくは４−ＣＦ３で置換されているフェニル；またはヘテロアリール、例えば２−フラニル、２−チオフェニルまたは２−、３−または４−ピリジルであり；
Ｒ２０はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ１−Ｃ６アルキル−Ｃ３−Ｃ９シクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アシル、例えば、アセチル、プロピオニルおよびベンゾイル；またはスルホニル、例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニル、ベンゼンスルホニルおよびトルエンスルホニルであり；
Ａ１は各々独立してＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；−ＯＲ１９；ハロ；アルキルアミノ；アミノアルキル；ハロ；またはヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルである、１個、２個または３個の置換基であり；
Ｒ１９はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルおよび(ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ(ＣＨ３)(ＣＨ２))１−３Ｈから選択され；
Ｒ２はＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６、アミノアシルおよび−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
ｖは０、１または２であり；
ｐは０−３であり；そして
ｑは１−５であり、かつｒは０であるか；または
ｑは０であり、かつｒは１−５である。〕
の化合物または薬学的に許容されるその塩である。他の可変置換基は上記で定義の通りである。
【００４９】
とりわけ有用な式(Ｉｃ)の化合物は、Ｒ２がＨまたは(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨ(ここで、ｐは１−３である)であるもの、とりわけＲ１がＨであるもの；例えばＲ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、かつｒが０であるか、またはｑが０であり、かつｒが１−３であるもの、とりわけＺ１がＮ−Ｒ２０であるものである。これらの化合物の中で、Ｒ２は好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００５０】
ヒドロキサメート化合物の他の好ましい群は、式(Ｉｄ)
【化７】
〔式中、
Ｚ１はＯ、ＳまたはＮ−Ｒ２０であり；
Ｒ１８はＨ；ハロ；Ｃ１−Ｃ６アルキル(メチル、エチル、ｔ−ブチル)；Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル；アリール、例えば、非置換フェニルまたは４−ＯＣＨ３もしくは４−ＣＦ３で置換されているフェニル；またはヘテロアリールであり；
Ｒ２０はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルキル−Ｃ３−Ｃ９シクロアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アシル、例えば、アセチル、プロピオニルおよびベンゾイル；またはスルホニル、例えば、メタンスルホニル、エタンスルホニル、ベンゼンスルホニル、トルエンスルホニルであり；
Ａ１は、独立してＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、−ＯＲ１９またはハロである１個、２個または３個の置換基であり；
Ｒ１９はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
ｐは０−３であり；そして
ｑは１−５であり、かつｒは０であるか；または
ｑは０であり、かつｒは１−５である。〕
の化合物または薬学的に許容されるその塩である。他の可変置換基は上記で定義の通りである。
【００５１】
とりわけ有用な式(Ｉｄ)の化合物は、Ｒ２がＨまたは(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨ(ここで、ｐは１−３である)であるもの、とりわけＲ１がＨであるもの；例えば、Ｒ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、かつｒが０であるか、またはｑが０であり、かつｒが１−３であるものである。これらの化合物の中で、Ｒ２は好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００５２】
本発明は、さらに式(Ｉｅ)
【化８】
の化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。可変置換基は上記で定義の通りである。
【００５３】
とりわけ有用な式(Ｉｅ)の化合物は、Ｒ１８がＨ、フルオロ、クロロ、ブロモ、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、置換Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ３−Ｃ７シクロアルキル基、非置換フェニル、パラ位を置換されているフェニル、またはヘテロアリール、例えば、ピリジル環であるものである。
【００５４】
有用な式(Ｉｅ)の化合物の他の群は、Ｒ２がＨまたは(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨ(ここで、ｐは１−３である)であるもの、とりわけＲ１がＨであるもの；例えば、Ｒ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、かつｒが０であるか、またはｑが０であり、かつｒが１−３であるものである。これらの化合物の中で、Ｒ２は好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。これらの化合物の中で、ｐは好ましくは１であり、そしてＲ３およびＲ４は好ましくはＨである。
【００５５】
有用な式(Ｉｅ)の化合物の他の群は、Ｒ１８がＨ、メチル、エチル、ｔ−ブチル、トリフルオロメチル、シクロヘキシル、フェニル、４−メトキシフェニル、４−トリフルオロメチルフェニル、２−フラニル、２−チオフェニル、または２−、３−または４−ピリジル(ここで、該２−フラニル、２−チオフェニルおよび２−、３−または４−ピリジル置換基は、非置換であるか、またはヘテロアリール環に関して上記の通り置換されている)であり；Ｒ２がＨまたは−(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨ(ここで、ｐは１−３である)であるもの；とりわけＲ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、かつｒが０であるか、またはｑが０であり、かつｒが１−３であるものである。これらの化合物の中で、Ｒ２は好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００５６】
Ｒ２０がＨまたはＣ１−Ｃ６アルキル、とりわけＨである式(Ｉｅ)の化合物は、上記の式(Ｉｅ)の化合物の各下位群の重要なメンバーである。
【００５７】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[(２−ヒドロキシエチル)[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドおよびＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドまたは薬学的に許容されるその塩が、重要な式(Ｉｅ)の化合物である。
【００５８】
本発明は、さらに式(Ｉｆ)
【化９】
の化合物または薬学的に許容されるその塩に関する。可変置換基は上記で定義の通りである。
【００５９】
有用な式(Ｉｆ)の化合物は、Ｒ２がＨまたは−(ＣＨ２)ｐＣＨ２ＯＨ(ここで、ｐは１−３である)であるもの、とりわけＲ１がＨであるもの；例えばＲ１がＨであり、そしてＸおよびＹが各々Ｈであり、そしてｑが１−３であり、かつｒが０であるか、またはｑが０であり、かつｒが１−３であるものを含む。これらの化合物の中で、Ｒ２は好ましくはＨまたは−ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨであり、そしてｑとｒの合計が好ましくは１である。
【００６０】
Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(ベンゾフル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドまたは薬学的に許容されるその塩が重要な式(Ｉｆ)の化合物である。
【００６１】
上記の化合物は、しばしば薬学的に許容される塩の形で使用される。薬学的に許容される塩は、適当であれば、薬学的に許容される塩基付加塩および酸付加塩、例えば、金属塩、例えばアルカリおよびアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩およびアミノ酸付加塩およびスルホン酸塩を含む。酸付加塩は、無機酸付加塩、例えば塩酸塩、硫酸塩およびリン酸塩；および有機酸付加塩、例えばアルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩および乳酸塩を含む。金属塩の例は、アルカリ金属塩、例えばリチウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばマグネシウム塩およびカルシウム塩、アルミニウム塩および亜鉛塩を含む。アンモニウム塩の例は、アンモニウム塩およびテトラメチルアンモニウム塩である。有機アミン付加塩の例は、モルホリンおよびピペリジンとの塩である。アミノ酸付加塩の例は、グリシン、フェニルアラニン、グルタミン酸およびリシンとの塩である。スルホン酸塩は、メシレート、トシレートおよびベンゼンスルホン酸塩を含む。
【００６２】
式(Ｉ)の範囲内のさらなるＨＤＡＩ化合物およびそれらの合成は、その全体を引用して本明細書に包含する２００２年３月２１日公開のＷＯ０２／２２５７７に記載されている。
【００６３】
組み合わせ
故に、第一の局面において、本発明は、薬学的に有効量の：
(ａ)式(Ｉ)のＨＤＡＩ；および
(ｂ)細胞死受容体リガンド
の組み合わせを含む、組み合わせに関する。
【００６４】
他の局面において、本発明は、患者を薬学的に有効量の：
(ａ)式(Ｉ)のＨＤＡＩ；および
(ｂ)細胞死受容体リガンド
の組み合わせで同時にまたは連続的に処置することを含む、哺乳動物、好ましくはヒト患者における癌のような増殖性疾患を予防または処置する方法に関する。
【００６５】
具体的態様において、本発明の方法は、白血病を予防または処置する方法である。他の態様において、本発明の方法はＡＭＬを予防または処置する方法である。
【００６６】
本発明によって、患者を、個々の試薬に適した投与レジメンに従って、癌のような増殖性疾患を予防または処置するために、治療的有効量のＨＤＡＩおよび細胞死受容体リガンドで同時にまたは連続して処置する。例えば、ＨＤＡＩを１日１回またはそれ以上投与でき、細胞死受容体リガンドを、１日１回または隔日またはＨＤＡＩ無しで使用するとき細胞死受容体リガンドについて適当であるいくつかの他のスケジュールで、投与できる。当業者は、組み合わせ成分の適当な薬学的有効量を決定する能力を有する。ＨＤＡＩを１日あたり１００−１５００mg、例えば、２００−１０００mg／日、例えば２００、４００、５００、６００、８００、９００または１０００mg／日の範囲の適当な投与量を、１日１回または２回投与する。細胞死受容体リガンドの適当な投与量および頻度は、処置している適応症の性質および重症度、所望の応答、患者の状態などのような因子に依存するであろう。
【００６７】
本化合物または薬学的に許容されるその塩は、局所的に、静脈内注射、連続輸液、インプラントからの持続的放出、非経腸注射または他の適当な技術により投与する。それらはまた錠剤、カプセルまたはシロップの形の経口医薬製剤として投与し得る。
【００６８】
本発明は、さらに“組み合わせ製剤”に関し、これは、本明細書で使用するとき、とりわけ、上記で定義の組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)が、独立して投与でき、または、組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の区別できる量の異なる固定された組み合わせの使用により、すなわち、同時にまたは異なる時点で投与できる点で、“複数部分のキット”を規定する。次いで、複数部分のキットの各パーツを、例えば、同時に、または、時間をずらして、すなわち、異なる時点で、複数部分のキットの任意のパーツと同じまたは異なる間隔で投与できる。２つの薬剤は同じ経路で投与でき、または異なる経路を使用できる。組み合わせ製剤において投与すべき組み合わせパートナー(ａ)の組み合わせパートナー(ｂ)に対する比率は、例えば、処置すべき患者の下位集団の必要性に合うように、または、患者が経験する何らかの副作用の重症度に基づいて、単独の患者の必要性に合うように変化できる。
【００６９】
組み合わせパートナー(ａ)または(ｂ)の化合物または薬学的に許容されるその塩はまた水和物または他の溶媒和物の形で使用できる。
【００７０】
前癌病巣ならびに、前癌結腸病巣または結腸癌もしくは他の悪性巣（malignancies）のような、固形および未分化悪性巣を含む増殖性疾患に対して治療的に有効である量の本発明の組み合わせを含む、医薬組成物を提供することが本発明の一つの目的である。本組成物において、組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)は共に、交互にまたは別々に、一つの組み合わせ単位投与形として、または２つの別々の単位投与形として投与できる。単位投与形はまた固定された組み合わせであってもよい。
【００７１】
下記実施例は上記の本発明を説明する；しかしながら、それは本発明をいかなる方法でも限定することを意図しない。本発明の組み合わせの利点はまた当分野の当業者に既知の他の試験モデルにより測定できる。
【００７２】
実施例
方法
試薬
ＬＡＱ８２４をNovartis Pharmaceuticals Inc. (East Hanover, NJ)から得る。Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの組み換えヒト三量体形はGenentech, Inc. (South San Francisco, CA)からであり、それは大腸菌で産生される。抗Ｂｉｄおよび抗Ｓｍａｃ／ＤＩＡＢＬＯ抗体はUniversity of Texas, Southwestern School of Medicine(Dallas, TX)のDr. Xiaodong Wangから得る。モノクローナル抗ＸＩＡＰ抗体はBoehringer Mannheim(Indianapolis, IN)から購入する。ポリクローナル抗ＰＡＲＰおよびモノクローナル抗ｃＩＡＰ−１、カスパーゼ−９およびカスパーゼ−３抗体はPharmingen Inc. (San Diego, CA)から購入する。ポリクローナル抗カスパーゼ−８抗体はUpstate Biotechnology(Lake Placid, NY)から購入し、一方モノクローナル抗survivinはAlpha Diagnostic(San Antonio, TX)から購入する。ＤＲ４抗体はAlexis Corp. (San Diego, CA)から購入する。ポリクローナル抗ＤＲ５はCayman Chemicals Co. (Ann Arbor, MI)から得る。ｐ２１およびｐ２７のレベルを検出するための免疫ブロット分析用の抗体は、前記の通りに得る。モノクローナル抗チトクロームオキシダーゼ−２抗体はMolecular Probe(Eugene, OR)から購入する。ｚ−ＶＡＤ−ＦＭＫおよびＬＬｎＬはCalbiochem(San Diego, CA)から購入する。
【００７３】
細胞
ジャーカットＴ細胞白血病およびＳＫＷ６.４Ｂリンパ芽球細胞はAmerican Tissue Culture Collection(Manassas, VA)から得る。Ｂｃｌ−２の異所性過剰発現を伴うＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２細胞およびコントロールＨＬ−６０／Ｎｅｏ細胞は、前記の通り創成し、培養して維持する。再発したＡＭＬの６名の患者からの初代白血病芽球を、現地の内部倫理委員会により認可された試験プロトコールの一部として、インフォームドコンセント後、末梢血または骨髄から回収する。ＬＡＱ８２４および／またはＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬで培養する前のサンプル中の白血病芽球の純度は、Wright染色後形態学的評価で測定して、少なくとも８０％以上であった。
【００７４】
細胞サイクル状態のフローサイトメトリー分析
細胞サイクル状態のフローサイトメトリー評価を、先に記載の方法に従い行う。Ｇ１、Ｓ相、およびＧ２／Ｍ相の細胞の割合をMulticycle software(Phoenix Flow Systems, San Diego, CA)を使用して計算する。
【００７５】
アネキシン−Ｖ染色によるアポトーシス評価
薬剤処置の後、細胞をＨＥＰＥＳ緩衝液中にアネキシン−Ｖフルオレッセインおよびヨウ化プロピジウムを含む１００μLの染色溶液(アネキシン−Ｖ−ＦＬＵＯＳ染色キット、Boehringer-Mannheim, and Indianapolis, IN)に再懸濁する。室温で１５分インキュベーションした後、アネキシンＶ陽性細胞を、先に記載の通りフローサイトメトリーで概算する。
【００７６】
アポトーシスの形態学的評価
薬剤処置後、５０×１０３細胞を洗浄し、ＰＢＳ(ｐＨ７.３)に再懸濁する。細胞懸濁液のCytospun調製物を固定し、Wright染色で染色する。細胞形態学を光学顕微鏡で測定した。全体として、少なくとも５００細胞を計数するために、５個の異なる視野を無作為に選択する。アポトーシス細胞の割合を、各実験について、先に記載の通り計算した。
【００７７】
Ｓ−１００の調製およびサイトソルチトクロームｃ(ｃｙｔ ｃ)、ＳｍａｃおよびＯｍｉのウェスタン分析
薬剤非処置および処置細胞を１,０００×ｇ、１０分、４℃の遠心分離により回収する。細胞ペレットを１回氷冷ＰＢＳで洗浄し、５容量の２５０mMスクロース含有緩衝液(２０mM ＨＥＰＥＳ−ＫＯＨ、ｐＨ７.５、１０mM ＫＣｌ、１.５mM ＭｇＣｌ２、１mM ナトリウムＥＤＴＡ、１mM ナトリウムＥＧＴＡ、１mM ジチオスレイトールおよび０.１mM ＰＭＳＦ)に再懸濁する。細胞を２２ゲージ針で均質化し、ホモジネートを１０,０００×ｇ、１０分、４℃で遠心分離する。上清を、さらに１００,０００×ｇで３０分遠心分離する。得られた上清(Ｓ−１００)を回収し、タンパク質濃度をPierce Biotechnology Inc. (Rockford, IL)からのＢＣＡタンパク質アッセイ試薬を使用して測定する。合計７５μgのＳ−１００フラクションをｃｙｔ ｃ、ＳｍａｃおよびＯｍｉ／ＨｔｒＡ２のウェスタンブロット分析に使用した。
【００７８】
タンパク質のウェスタン分析
ＤＲ４、ＤＲ５、Ａｐｏ−２Ｌ、ＦＡＤＤ、カスパーゼ−８、ｃ−ＦＬＩＰＬ＆Ｓ、ＢＩＤ、カスパーゼ−９、カスパーゼ−３、ＰＡＲＰ、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１、survivinおよびβ−アクチンのウェスタン分析を、先に報告されたプロトコールに従い、特異的抗血清またはモノクローナル抗体を使用して行う。水平走査デンシトメトリーを、Adobe Photo Shop(Apple, Inc., Cupertino, CA)への獲得およびNIH Image Program(U.S. National Institutes of Health, Bethesda, MD)による分析を使用して、ウェスタンブロット上で行った。β−アクチンの発現をコントロールとして使用した。
【００７９】
Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣ分析
非処置またはＬＡＱ８２４処置ＳＫＷ６.４またはジャーカット細胞を１０６細胞／mLの最終濃度で予め温めた完全ＲＰＭＩ培地に懸濁させる。細胞を１００ng／mL Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬで２時間、３７℃で処置し、続いて１mLの氷冷ＰＢＳで洗浄する。細胞を５００μL融解緩衝液(２５mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.２、１５０mM ＮａＣｌ、２５mM ＮａＦ、１mM ベンズアミジン、１.０％Triton X-100、２μg／mL アプロチニン、２μg／mL ロイペプチン、１μg／mL ペプスチン−Ａおよび０.１μg／mL ＰＭＳＦ)で３０分、氷上で融解する。非処置コントロールにおいて、１００ng／mL Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬを細胞融解後添加し、非刺激Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ受容体を免疫沈降させた。百マイクログラム(１００μg)の融解物を４℃で２時間、Immunex Corp., Seattle WAから提供された各１μgの抗Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ受容体１＆２(ＤＲ４およびＤＲ５)抗体とインキュベートした。免疫複合体を、一晩、４℃で２０μLのタンパク質Ａ−アガロースビーズ(Roche, Indianapolis, IN)とインキュベートする。ビーズを遠心分離により回収し、２回融解緩衝液で洗浄する。ペレットをサンプル緩衝液に再懸濁させ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびカスパーゼ−８、ＤＲ５、ＤＲ４およびＦＡＤＤに対する抗体を使用した免疫ブロット分析により分析した。
【００８０】
ドミナント・ネガティブＦＡＤＤ ｃＤＮＡのトランスフェクション
生存可能ジャーカット細胞を、ｐｃＤＮＡ３.１プラスミド(Invitrogen Corp., Carlsbad, CA)にクローン化された、８０−２０８アミノ酸死エフェクタードメイン含有Ｎ末端欠失フラグメント(ＮＦＤ−４)をコード化するドミナント・ネガティブＦＡＤＤのｃＤＮＡまたはコントロールベクター(ｐｃＤＮＡ３.１Ｚｅｏ)で、LipofectAMINEPLUS試薬(Invitrogen Corp.)を使用してトランスフェクトする。トランスフェクタントをＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬおよび／またはＬＡＱ８２４で処置し、続いてアポトーシス細胞の割合を概算する。
【００８１】
クロマチン免疫沈降(ＣｈＩＰ)アッセイ
ＣｈＩＰ分析を、先に記載の方法をわずかに改変して行った。細胞を一晩、０.２５×１０６細胞／mlの密度で、３７℃で５％ＣＯ２でインキュベートする。翌日、細胞を０、５０、１００または２５０nMのＬＡＱ８２４と２４時間培養する。ホルムアルデヒドを、次いで細胞に１％の最終濃度で添加し、細胞を室温で１０分穏やかに振盪する。この後、細胞をペレット化し、プロテアーゼ阻害剤(Complete, Boehringer Mannheim)を含む１mLの氷冷ＰＢＳに懸濁する。細胞を再びペレット化し、０.５mLのＳＤＳ融解緩衝液(１％ＳＤＳ／１.０ｍＭ ＥＤＴＡ／５０mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ８.１)に懸濁させ、氷上で２０分インキュベートする。融解物を１５秒バーストで超音波処理する。残骸を２０分、１５,０００×ｇ、４℃の遠心分離によりサンプルから除去した。クロマチン調製物のアリコート(１００μL)を取り、インプット・フラクションと名付けた。上清を免疫沈降緩衝液(０.０１％ＳＤＳ／１.０％Triton X-100／１.２mM ＥＤＴＡ／１６.７mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ８.１／１５０mM ＮａＣｌ)で３倍希釈し、ＴＥ緩衝液(１０mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ８.０／ １mM ＥＤＴＡ)中に２０μg超音波処理サケ精子ＤＮＡおよび１mg／mL ＢＳＡを含む８０μLの５０％タンパク質Ａセファローススラリーを添加し、揺すりながら２時間、４℃でインキュベートした。ビーズを遠心によりペレット化し、上清を５μgの抗アセチル化ヒストンＨ３抗体、抗アセチル化ヒストンＨ４抗体、または正常血清を含む新しい試験管に入れ、一晩、４℃でインキュベートする。タンパク質Ａセファローススラリー(６０μL)を添加し、サンプルを１時間、４℃で揺する。タンパク質Ａ複合体を遠心分離し、３回、各５分免疫沈降緩衝液で２回、各５分５００mM ＮａＣｌ含有免疫沈降緩衝液で洗浄する。免疫複合体を２５０μLの溶出緩衝液(１％ＳＤＳ／０.１Ｍ ＮａＨＣＯ３)で、１５分、室温で２回溶出する。二十マイクロリットル(２０mL)の５Ｍ ＮａＣｌを合わせた溶出液に添加し、サンプルを６５℃で２４時間インキュベートする。ＥＤＴＡ、Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ６.５およびプロテイナーゼＫを次いでサンプルに各々１０mM、４０mMおよび０.０４μg／μLの最終濃度で添加する。サンプルを３７℃で３０分インキュベートする。
【００８２】
免疫沈降したＤＮＡ(免疫沈降サンプルおよびインプットの両方)をフェノール／クロロホルム抽出およびエタノール沈殿により回収し、ＰＣＲで分析した。ＤＲ５およびｐ２１ＷＡＦ１特異的プライマーを使用し、ＣｈＩＰ実験およびインプットサンプルから単離したＤＮＡのＰＣＲを行う。ＰＣＲの最適反応条件を、各プライマー対について測定する。ＤＲ５プロモーターＰＣＲ：前向きプライマーは５'−ＧＧＡ ＧＧＡ ＡＡＧ ＡＧＡ ＡＡＧ ＡＧＡ ＧＡＡ ＡＧＧ ＡＡＧ Ｇ−３'および後向きプライマーは５'−ＴＴＧ ＧＧＧ ＧＡＡ ＡＴＧ ＡＧＴ ＴＧＡ ＧＧＧ ＡＧＧ−３'であった。ＰＣＲ反応物は、０.２mM濃度のｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰ、２００nMの各ＤＲ５プロモータープライマー、１.５mMのＭｇＣｌ２、およびＴｒｉｓ−ＨＣＬ(ｐＨ８.０)５００mM ＫＣＬ、および１ＵのＴａｇポリメラーゼ(Invitrogen Carlsbad, CA)含有１０×ＰＣＲ緩衝液を含んだ。ｐ２１ＷＡＦ１分析に使用するプライマー対は：５'−ＧＧＴ ＧＴＣ ＴＡＧ ＧＴＧ ＣＴＣ ＣＡＧ ＧＴ−３'(ｄｐ１)、５' ＴＧＴＣＴＡＧＧＴＧＣＴＣＣＡＧ−３'(ｕｐ１)である。反応を９５℃で５分行い、その後３５サイクルの９５℃で１分の変性、５６℃で１分のアニーリングおよび７２℃で１分の伸張が続く。ＰＣＲ産物を２％アガロース／臭化エチジウムゲルで分離する。増幅産物のサイズは２５３塩基対であった。免疫沈降したＤＮＡとインプットＤＮＡの比率を各処置とプライマーセットについて計算した。ＬＡＱ８２４で処置した後の増加倍率を示された比率から計算した。
【００８３】
ＲＮａｓｅ保護アッセイ
RiboQuant Multi-Probe RNase Protection Assay Systeを、製造業者(BD/PharMingen, San Diego, CA)の指示に従って使用した。プローブセット、ｈＡＰＯ−３ｄ(ＦＬＩＣＥ、ＦＡＳ、ＤＲ５、ＤＲ４およびＴＲＡＩＬ)を[α−３２Ｐ]ＵＴＰ−標識アンチセンスＲＮＡプローブのＴ７ ＲＮＡ−ポリメラーゼ指示合成に使用した。プローブセットは、内部対照として使用したグリセルアルデヒド−３−リン酸塩デヒドロゲナーゼ(ＧＡＰＤＨ)を含む、ＤＮＡ鋳型を含む。プローブ(１×１０６cpm／反応)をＳＫＷ６.４およびジャーカット白血病細胞から単離した、２０μgのＲＮＡとハイブリダイズし、続いてRNeasy Mini kit(Qiagen, Valencia, CA)を使用して、異なる時点で１００nM ＬＡＱ８２４で処理する。一晩のハイブリダイゼーション後、サンプルをＲＮａｓｅで消化し、一本鎖(ハイブリダイズしていない)ＲＮＡを除去する。残ったプローブを５％変性ポリアクリルアミドゲル上で分離し、オートラジオグラフィーにより分析する。
【００８４】
ｃ−ＦＬＩＰ ｍＲＮＡレベルのＲＴ−ＰＣＲアッセイ
TRIZOL LS試薬(Invitrogen Carlsbad, CA)を使用して、細胞から全ＲＮＡを単離した。ＲＴ−ＰＣＲ分析を、先に記載の通り行った。ＲＮＡ(１.０μg)を、SuperScript IIRT(Invitrogen Carlsbad, CA)を製造業者のプロトコールに従い使用して、ｃＤＮＡに逆転写した。ｃ−ＦＬＩＰ ＰＣＲについて、プライマー配列は下記の通りである、前向きプライマー：５'−ＧＣＣ ＣＧＡ ＧＣＡ ＣＣＧ ＡＧＡ ＣＴＡ ＣＧ−３'；および後向きプライマー：５'−ＡＧＧ ＧＡＣ ＧＧＤ ＧＡＧ ＣＴＧ ＴＧＡ ＧＡＣ ＴＧ−３'。β−アクチン前向きプライマー：５'−ＣＴＡ ＣＡＡ ＴＧＡ ＧＣＴ ＧＣＧ ＴＧＴ ＧＧ−３'；および後ろ向きプライマー：ＡＡＧ ＧＡＡ ＧＧＣ ＴＧＧ ＡＡＧ ＡＧＴ ＧＣ。ＰＣＲ反応物は、０.２mM濃度のｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰおよび２００nM濃度の各ｃ−ＦＬＩＰプライマーおよび５０nMの各β−アクチンプライマー、１.５mMのＭｇＣｌ２、およびＴｒｉｓ−ＨＣＬ(ｐＨ８.０)、５００mM ＫＣＬおよび１ＵのＴａｇポリメラーゼ(Invitrogen Carlsbad, CA)含有１０×ＰＣＲ緩衝液を含む。反応を９５℃で５分行い、その後３０サイクルの９５℃で４５秒の変性、５２℃で４５秒のアニーリングおよび７２℃で１分の伸張が続く。ＰＣＲ産物を２％アガロース／臭化エチジウムゲルで分離する。増幅産物のサイズは各々、ｃ−ＦＬＩＰについて３９５塩基対およびβ−アクチン産物について５２７塩基対であった。
【００８５】
統計分析
データを平均±ＳＥＭで示す。比較は、必要に応じて、スチューデントのｔ検定またはＡＮＯＶＡを使用した。＜０.０５のＰ値を有意と見なす。
【００８６】
結果
ＬＡＱ８２４処置はジャーカットおよびＳＫＷ６.４細胞のｐ２１およびｐ２７を誘発し、そして、細胞サイクルＧ１相蓄積およびアポトーシスをもたらす
ＬＡＱ８２４(５−２５０nM)の処置が、ＨｅＬａ細胞核抽出物において、インビトロＨＤＡＣ活性を用量依存的方法で阻害することは以前報告されている。従って、ＬＡＱ８２４の、ヒト急性白血病ジャーカットおよびＳＫＷ６.４細胞における、ヒストンアセチル化、ｐ２１およびｐ２７レベルならびに増殖停止およびアポトーシスに対する効果を測定する。５０nMまたは２００nM ＬＡＱ８２４で２４時間の処置は、ジャーカットおよびＳＫＷ６.４細胞におけるヒストンＨ３およびヒストンＨ４のアセチル化を増加させる。ＬＡＱ８２４介在ヒストン過アセチル化は、ＳＫＷ６.４細胞ではｐ２１のレベルと用量依存的に相関するが、ジャーカット細胞ではしない。対照的に、５０nM ＬＡＱ８２４への暴露がＳＫＷ６.４およびジャーカット細胞の両方のｐ２７の細胞内レベルを増加させるが、２００nMのＬＡＱ２８４は、両方の細胞系でｐ２７レベルを減弱させる。これらの結果は、ＬＡＱ８２４が、ｐ２１遺伝子プロモーターと関係するが、ｐ２７遺伝子プロモーターと関係しないヌクレオソームヒストンの過アセチル化を誘発し、それにより、ｐ２１を転写的に上方制御するが、別の非転写機構によりｐ２７レベルを上昇させるという、先の報告と一致する。ＬＡＱ８２４の、ＳＫＷ６.４およびジャーカット細胞における細胞サイクル状態に対する効果は、ＬＡＱ８２４への２４時間の暴露がＧ１相にある細胞の割合を著しく増加させ、細胞サイクルのＳ相を減少させることを示す。重要なことに、１０−２００nMのＬＡＱ８２４への２４時間の暴露は、アネキシンＶの陽性染色で検出される通り、ＳＫＷ６.４細胞よりもジャーカット細胞において、アポトーシスを、用量依存的方法でより誘発する。
【００８７】
ＬＡＱ８２４はＤＲ４、ＤＲ５およびＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬを誘発するが、タンパク質のＦＬＩＰ、Ｂｃｌ−２およびＩＡＰファミリーのレベルを減弱させる
アポトーシスを誘発するその能力に基づき、ＬＡＱ８２４の、ＳＫＷ６.４およびジャーカット細胞におけるアポトーシスの外因性および内因性経路の分子決定基の細胞内レベルに対する効果を測定する。ＬＡＱ８２４への２４時間の暴露は、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ、ＤＲ４およびＤＲ５レベルを誘発する。ＬＡＱ８２４での処置は、ＳＫＷ６.４およびジャーカット細胞の両方でＦＬＩＰＬおよびＦＬＩＰＳのレベルを減弱させる。これは、カスパーゼ−９および−３のプロセッシングと関連し、ＬＡＱ８２４での処置が内因性経路を誘発するだけでなく、細胞をＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬにより誘発される外因性経路に導くことを示唆する。加えて、ＬＡＱ８２４での処置はまたＢｃｌ−ｘＬ、Ｂｃｌ−２、ＸＩＡＰ、ｃ−ＩＡＰおよびsurvivinのレベルを減弱させ、これは一体となってさらにＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬによるアポトーシスの閾値を低下させ得る。ジャーカット細胞において、これらの効果は、１６時間またはそれより短い間隔でのＬＡＱ８２４への暴露により明白である。先の報告は、アポトーシス中、Ｂｃｌ−２およびＩＡＰファミリーに属するアポトーシス決定基のいくつかが、カスパーゼにより処理されおよび／またはプロテアソームにより分解され得ることを示唆している。カスパーゼ−３およびＰＡＲＰのプロセッシングを阻害するｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋで共処置したジャーカット細胞において、ＬＡＱ８２４のＸＩＡＰ、Ｂｃｌ−２、Ｂｃｌ−ｘＬおよびｃ−ＦＬＩＰＬに対する減弱効果を回復させることは不可能である。加えて、プロテオソーム阻害剤ＡＬＬｎＬとの共処置は、ＬＡＱ８２４により減弱されたＸＩＡＰ、Ｂｃｌ−２、ｃ−ＦＬＩＰＬおよびｃ−ＦＬＩＰＳのレベルを回復させない。ＬＡＱ８２４処置がＤＲ５、ＤＲ４およびＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの細胞表面発現を増加させるか否かを測定する。ジャーカット細胞のＬＡＱ８２４での処置は、フローサイトメトリーで測定して、ＤＲ５の細胞膜発現を誘発する。
【００８８】
ＬＡＱ８２４は、ＤＲ４およびＤＲ５のｍＲＮＡレベルを増加させるが、ｃ−ＦＬＩＰＬのｍＲＮＡを枯渇させる
ＬＡＱ８２４の、ｃ−ＦＬＩＰＬ、ＤＲ５、ＤＲ４およびＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩのｍＲＮＡレベルに対する効果を、マルチプローブＲＮＡｓｅ保護アッセイを使用し、ローディングコントロールとしてのＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡと共にデンシトメトリーで概算して、測定する。ＬＡＱ８２４で８時間または１６時間の処置は、ＤＲ５(２.４倍)およびＦＡＳ(１.５倍)のｍＲＮＡ発現を増加させる。ＤＲ４レベルは、ＳＫＷ６.４細胞においてのみ２.２倍増加する。ＬＡＱ８２４への暴露は、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬおよびカスパーゼ−８(ＦＬＩＣＥ)のｍＲＮＡレベルにほとんど影響しない。なぜＬＡＱ８２４が、ヒストン過アセチル化をもたらすことによりＤＲ５ ｍＲＮＡレベルを転写的に上方制御するかの説明をするであろう、ＤＲ５のプロモーターがアセチル化ヒストンと関係するか否かを測定する。非処置またはＬＡＱ８２４処置ジャーカット細胞の融解物で行ったＣｈＩＰ分析の結果は、１００nMおよび２００nM ＬＡＱ８２４での８時間の処置が、アセチル化ヒストンＨ３およびＨ４と関連するＤＲ５プロモーターのレベルを各々３.３倍および５.７倍増加させることを示す。先に報告されているように、ＬＡＱ８２４はまたジャーカットおよびＳＫＷ６.４細胞における、ｐ２１ＷＡＦ１プロモーターＤＮＡとアセチル化ヒストンの結合を増加させる。ＤＲ５およびＤＲ４ ｍＲＮＡレベルの上昇と対照的に、ＬＡＱ８２４への８時間の暴露は、ＲＴ−ＰＣＲアッセイで測定して、ｃ−ＦＬＩＰＬのｍＲＮＡレベルを７５％まで阻害する。これは、ＬＡＱ８２４とシクロヘキシミド(ＣＨＸ)での共処置により回復する。これらの結果は、ｃ−ＦＬＩＰＬメッセージのＬＡＱ８２４介在抑制が、新規タンパク質合成を必要とすることを示唆する。これらの結果はまたＬＡＱ８２４が、ＣＨＸとの共処置により中和される結果である、ｃ−ＦＬＩＰＬの転写リプレッサーのレベルおよび活性を増加させるとの解釈も指示する。
【００８９】
ＬＡＱ８２４はＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣ集合および活性ならびにアポトーシスを促進する
ｃ−ＦＬＩＰレベルおよび上昇したＤＲ５およびＤＲ４レベルが、白血病および上皮性癌細胞のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣ活性およびアポトーシスを増加することが先に示されていたため、ＬＡＱ８２４のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣおよびアポトーシスに対する効果を測定する。ＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置は、ジャーカットおよびＳＫＷ６.４細胞において、いずれかの薬剤単独での処置と比較して、有意に高いアポトーシスを誘発する(ｐ＜０.０５)。同時に、ＬＡＱ８２４またはＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬで単独の処置と比較して、ＬＡＱ８２４(２０nM)とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ(１０ng／mL)の２４時間の併用処置は、カスパーゼ−８およびＢＩＤのより大きなプロセッシングを誘発し、ならびにカスパーゼ−３のプロセッシングおよびＰＡＲＰ開裂活性を増加させる。これは、ＬＡＱ８２４またはＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ単独と比較して、ＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置が、前死分子チトクロームｃ、ＳｍａｃおよびＯｍｉのサイトソルへの蓄積をよりもたらすため、ミトコンドリア透過性遷移の増加に関与する。ＬＡＱ８２４のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣに対する効果を測定するために、ＤＲ５およびＤＲ４の免疫沈降物へのカスパーゼ−８、ＦＡＤＤおよびｃ−ＦＬＩＰＬの集合を、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ(１００nMで２時間)での処置後と、ＬＡＱ８２４(１００nMで２４時間)、続いてＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬでの処置後を比較する。ＬＡＱ８２４での前処置は、ＤＲ４およびＤＲ５の免疫沈降物へのＦＡＤＤおよびカスパーゼ−８の集合を誘導するが、ｃ−ＦＬＩＰＬは誘導せず、カスパーゼ−８のより多くのプロセッシングをもたらすが、ｃ−ＦＬＩＰＬではあまりない。ＤＲ４およびＤＲ５の上方制御とｃ−ＦＬＩＰＬおよびｃ−ＦＬＩＰＳの下方制御によるＤＩＳＣの増加した集合および活性が、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスの増加に関与するかを決定するため、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬにより、またはＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬでの共処置により誘発されたジャーカット細胞のアポトーシスにおけるＤＮ−ＦＡＤＤのＤＥＤ枯渇ｃＤＮＡの一過性トランスフェクションの効果を測定する。コントロールベクター単独でトランスフェクトしたジャーカット細胞(ジャーカット−Ｚｅｏ細胞)と比較して、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬでの処置またはＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置により誘導されるアポトーシスは、ＤＮ−ＦＡＤＤでトランスフェクトしたジャーカット細胞で阻害される。重要なことに、ＬＡＱ８２４のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに対する増感効果は、ジャーカット−Ｚｅｏ細胞に対して、ジャーカット−ＤＮ ＦＡＤＤで減少する。これらの発見は、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣの成分および活性のＬＡＱ８２４誘発調節が、ＬＡＱ８２４のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに対する全体的効果に関与していることを示唆する。
【００９０】
ＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置は、Ｂｃｌ−２過剰発現によるアポトーシスの阻害に打ち勝つ
ＬＡＱ８２４および／またはＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの効果を、Ｂｃｌ−２の遺書性過剰発現をする(５倍)ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２細胞と、コントロールＨＬ−６０／Ｎｅｏ細胞で非アックする。ＬＡＱ８２４は、ｐ２１、ｐ２７、ＤＲ４＆５レベルの増加を仲介し、そしてＦＬＩＰＬおよびＦＬＩＰＳレベルの減少は、非処置ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２とＨＬ−６０／Ｎｅｏ細胞で比較してほぼ同じである。先に報告されているように、Ａｐｏ ２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスは、ＨＬ−６０／Ｎｅｏ細胞と比較して、ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２で阻害された。５０nM ＬＡＱ８２４での処置後、カスパーゼ−３のＰＡＲＰ開裂活性およびのカスパーゼ−８のプロセッシングはまたＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２細胞で阻害されたが、より高濃度のＬＡＱ８２４(１００nM)への暴露は、ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２およびＨＬ−６０／Ｎｅｏ細胞でのＰＡＲＰおよびカスパーゼ−８の類似のプロセッシングをもたらした。さらに、５０ng／mLのＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬとＬＡＱ８２４(５０nMまたは１００nM)の併用処置は、ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２細胞においていずれかの薬剤単独と比較してよりアポトーシスを誘発し、それは一貫して５０％を超えた。これはまた、より高レベルのｔＢＩＤの産生を伴う、カスパーゼ−８およびＢＩＤのより多くのプロセッシングと関係する。それはまたカスパーゼ−３のＰＡＲＰ開裂活性の増加およびＸＩＡＰの下方制御と関連する。これらの発見は、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬおよび低レベルのＬＡＱ８２４によるＢｃｌ−２によるアポトーシスの抑制が、高レベルのＬＡＱ８２４またはＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬとＬＡＱ８２４の共処置により阻止されることを示唆する。
【００９１】
ＬＡＱ８２４との共処置は、再発したＡＭＬの患者からの白血病芽球のＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに対する耐性に打ち勝つ
再発ＡＭＬの患者から得た新鮮なＡＭＬ細胞の、Ａｐｏ−Ｌ／ＴＲＡＩＬおよび／またはＬＡＱ８２４誘発アポトーシスに対する感受性を測定する。表１は、全６サンプルのＡＭＬ芽球が、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ(１００ng／mL)により誘発されるアポトーシスに耐性であることを示す。対照的に、ＬＡＱ８２４(１００nM)への暴露は、初代ＡＭＬ細胞のアポトーシスをより誘発する。ＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置は、いずれかの薬剤単独よりもアポトーシスを誘発する。これらのデータは、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスに対する初代ＡＭＬ細胞の耐性に、ＬＡＱ８２４とＡｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬの共処置により打ち勝つ点で、ＨＬ−６０／Ｂｃｌ−２細胞のものと類似である。Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発ＤＩＳＣ決定基に対するＬＡＱ８２４の効果を測定する。初代ＡＭＬ芽球の代表的サンプル、および培養急性白血病細胞に類似のものにおいて、１００nMまたは２５０nM ＬＡＱ８２４で２４時間の処置は、ヒストンＨ３およびＨ４のアセチル化を誘発する。ＬＡＱ８２４処置はまたＤＲ４およびＤＲ５レベルを増加させ、そして、ＦＬＩＰＬおよびｃ−ＦＬＩＰＳのレベルを下方制御する。ウェスタン分析で決定したＤＲ５の細胞内レベルの上昇と対応して、初代ＡＭＬサンプルの１００nMおよび２５０nM ＬＡＱ８２４での処置はまた、フローサイトメトリーで測定して、細胞膜上でのＤＲ５の発現を各々細胞の１７.５％の基底値から３３.２および６２.４％に上昇させる。
【００９２】
【表１】
説明：ＬＡＱ８２４の共処置は、Ａｐｏ−２Ｌ／ＴＲＡＩＬ誘発アポトーシスを増加させる。６名の患者からの初代ＡＭＬ細胞をＬＡＱ８２４(１００nM)および／またはＡｐｏ−２／Ｌ ＴＲＡＩＬ(１００ng／mL)で２４時間処置した。この後、アポトーシス細胞のパーセントを、アネキシンＶ染色およびフローサイトメトリーで測定した。値はデュプリケートで行った２回の実験の平均を示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(ａ)細胞死受容体リガンド、および
(ｂ)式(Ｉ)
【化１】
〔式中、
Ｒ１はＨ；ハロ；または直鎖Ｃ１−Ｃ６アルキル、とりわけメチル、エチルまたはｎ−プロピル(該メチル、エチルおよびｎ−プロピル置換基は、非置換であるか、またはアルキル置換基に関して下記の１個またはそれ以上の置換基で置換されている)であり；
Ｒ２はＨ；Ｃ１−Ｃ１０アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、メチル、エチルまたは−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６；−(ＣＨ２)ｎＯＣ(Ｏ)Ｒ６；アミノアシル；ＨＯＮ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ＝Ｃ(Ｒ１)−アリール−アルキル−；および−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；アシル；またはアシルアミノであるか；または
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素と一体となって、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ＝ＮＲ８を意味するか；または
Ｒ２は、それが結合している窒素と一体となって、そしてＲ３は、それが結合している炭素と一体となって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；またはアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環を形成でき；
Ｒ５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アシル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；芳香族性多環；非芳香族性多環；アリールおよび非アリール混合多環；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；およびアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環から選択され；
ｎ、ｎ１、ｎ２およびｎ３は、同一または異なり、かつ独立して０−６から選択され、ｎ１が１−６であるとき、各炭素原子は、所望によりかつ独立してＲ３および／またはＲ４で置換されていてよく；
ＸおよびＹは、同一または異なり、かつ独立してＨ；ハロ；ＣＨ３およびＣＦ３のようなＣ１−Ｃ４アルキル；ＮＯ２；Ｃ(Ｏ)Ｒ１；ＯＲ９；ＳＲ９；ＣＮ；およびＮＲ１０Ｒ１１から選択され；
Ｒ６はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジルおよび２−フェニルエテニル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；ＯＲ１２；およびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
Ｒ７はＯＲ１５；ＳＲ１５；Ｓ(Ｏ)Ｒ１６；ＳＯ２Ｒ１７；ＮＲ１３Ｒ１４；およびＮＲ１２ＳＯ２Ｒ６から選択され；
Ｒ８はＨ；ＯＲ１５；ＮＲ１３Ｒ１４；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ９はＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、ＣＨ３およびＣＦ３；Ｃ(Ｏ)−アルキル、例えば、Ｃ(Ｏ)ＣＨ３；およびＣ(Ｏ)ＣＦ３から選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、かつ独立してＨ；Ｃ１−Ｃ４アルキル；および−Ｃ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１２はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；アリール；アリールおよび非アリール混合多環；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ１３およびＲ１４は、同一または異なり、かつ独立してＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アミノアシルから選択されるか；または
Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合している窒素と一体となって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；またはアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環であり；
Ｒ１５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１６はＣ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１７はＣ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；芳香族性多環；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；ポリヘテロアリールおよびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
ｍは０−６から選択される整数であり；そして
ＺはＯ；ＮＲ１３；Ｓ；およびＳ(Ｏ)から選択される。〕
のヒストンデアセチラーゼ阻害剤(ＨＤＡＩ)または薬学的に許容されるその塩
を含む、組み合わせ。
【請求項２】
哺乳動物を薬学的に有効量の：
(ａ)細胞死受容体リガンド、および
(ｂ)請求項１記載の式(Ｉ)のヒストンデアセチラーゼ阻害剤
の組み合わせで処置することを含む、哺乳動物における増殖性疾患を予防または処置する方法。
【請求項３】
細胞死受容体リガンドがＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ、ＴＲＡＩＬ模倣体、アゴニスト抗体、または細胞膜結合多タンパク質死誘発シグナル伝達複合体(ＤＩＳＣ)の集合を介してカスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くＤＲ４およびＤＲ５に結合できる他の因子である、請求項１記載の組み合わせ。
【請求項４】
ＨＤＡＩが、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[(２−ヒドロキシエチル)[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドおよびＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、または薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される、請求項１記載の組み合わせ。
【請求項５】
白血病の予防または処置のための、請求項１記載の組み合わせ。
【請求項６】
哺乳動物がヒトである、請求項２記載の方法。
【請求項７】
急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)の予防または処置のための、請求項１記載の組み合わせ。
【請求項８】
(ａ)１個またはそれ以上の単位投与形の細胞死受容体リガンド；および
(ｂ)１個またはそれ以上の単位投与形の請求項１記載の式(Ｉ)のＨＤＡＩ
を含む、組み合わせ製剤。
【請求項９】
細胞死受容体リガンドがＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ、ＴＲＡＩＬ模倣体、アゴニスト抗体、または細胞膜結合多タンパク質死誘発シグナル伝達複合体(ＤＩＳＣ)の集合を介してカスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くＤＲ４およびＤＲ５に結合できる他の因子である、請求項８記載の組み合わせ製剤。
【請求項１０】
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤がＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[(２−ヒドロキシエチル)[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドおよびＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、または薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される、請求項９記載の組み合わせ製剤。
【請求項１１】
哺乳動物を：
(ａ)薬学的に有効量の細胞死受容体リガンド；および
(ｂ)薬学的に有効量のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[(２−ヒドロキシエチル)[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドまたはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド；または薬学的に有効なそれらの塩
の組み合わせで処置することを含む、哺乳動物における前癌増殖性疾患を処置または予防する方法。
【請求項１２】
細胞死受容体リガンドがＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ、ＴＲＡＩＬ模倣体、アゴニスト抗体、または細胞膜結合多タンパク質死誘発シグナル伝達複合体(ＤＩＳＣ)の集合を介してカスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くＤＲ４およびＤＲ５に結合できる他の因子である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
哺乳動物を：
(ａ)薬学的に有効量の細胞死受容体リガンド；および
(ｂ)薬学的に有効量のＨＤＡＩ
の組み合わせで処置することを含む、哺乳動物における増殖性疾患を処置または予防する方法。
【請求項１４】
(ａ)１個またはそれ以上の単位投与形の細胞死受容体リガンド；および
(ｂ)１個またはそれ以上の単位投与形のＨＤＡＩ
を含む、組み合わせ製剤。
【請求項１】
(ａ)細胞死受容体リガンド、および
(ｂ)式(Ｉ)
【化１】
〔式中、
Ｒ１はＨ；ハロ；または直鎖Ｃ１−Ｃ６アルキル、とりわけメチル、エチルまたはｎ−プロピル(該メチル、エチルおよびｎ−プロピル置換基は、非置換であるか、またはアルキル置換基に関して下記の１個またはそれ以上の置換基で置換されている)であり；
Ｒ２はＨ；Ｃ１−Ｃ１０アルキル、好ましくはＣ１−Ｃ６アルキル、例えば、メチル、エチルまたは−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＨ；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；−(ＣＨ２)ｎＣ(Ｏ)Ｒ６；−(ＣＨ２)ｎＯＣ(Ｏ)Ｒ６；アミノアシル；ＨＯＮ−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ＝Ｃ(Ｒ１)−アリール−アルキル−；および−(ＣＨ２)ｎＲ７から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、同一または異なり、かつ独立して、Ｈ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；アシル；またはアシルアミノであるか；または
Ｒ３およびＲ４は、それらが結合している炭素と一体となって、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝ＳまたはＣ＝ＮＲ８を意味するか；または
Ｒ２は、それが結合している窒素と一体となって、そしてＲ３は、それが結合している炭素と一体となって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；またはアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環を形成でき；
Ｒ５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アシル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；芳香族性多環；非芳香族性多環；アリールおよび非アリール混合多環；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；およびアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環から選択され；
ｎ、ｎ１、ｎ２およびｎ３は、同一または異なり、かつ独立して０−６から選択され、ｎ１が１−６であるとき、各炭素原子は、所望によりかつ独立してＲ３および／またはＲ４で置換されていてよく；
ＸおよびＹは、同一または異なり、かつ独立してＨ；ハロ；ＣＨ３およびＣＦ３のようなＣ１−Ｃ４アルキル；ＮＯ２；Ｃ(Ｏ)Ｒ１；ＯＲ９；ＳＲ９；ＣＮ；およびＮＲ１０Ｒ１１から選択され；
Ｒ６はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；シクロアルキルアルキル、例えば、シクロプロピルメチル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジルおよび２−フェニルエテニル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；ＯＲ１２；およびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
Ｒ７はＯＲ１５；ＳＲ１５；Ｓ(Ｏ)Ｒ１６；ＳＯ２Ｒ１７；ＮＲ１３Ｒ１４；およびＮＲ１２ＳＯ２Ｒ６から選択され；
Ｒ８はＨ；ＯＲ１５；ＮＲ１３Ｒ１４；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ９はＣ１−Ｃ４アルキル、例えば、ＣＨ３およびＣＦ３；Ｃ(Ｏ)−アルキル、例えば、Ｃ(Ｏ)ＣＨ３；およびＣ(Ｏ)ＣＦ３から選択され；
Ｒ１０およびＲ１１は、同一または異なり、かつ独立してＨ；Ｃ１−Ｃ４アルキル；および−Ｃ(Ｏ)−アルキルから選択され；
Ｒ１２はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキルアルキル；アリール；アリールおよび非アリール混合多環；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；およびヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチルから選択され；
Ｒ１３およびＲ１４は、同一または異なり、かつ独立してＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル、例えば、ベンジル；ヘテロアリールアルキル、例えば、ピリジルメチル；アミノアシルから選択されるか；または
Ｒ１３およびＲ１４は、それらが結合している窒素と一体となって、Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；非芳香族性ポリヘテロ環；またはアリールおよび非アリール混合ポリヘテロ環であり；
Ｒ１５はＨ；Ｃ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１６はＣ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；ヘテロアリール；ポリヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；および(ＣＨ２)ｍＺＲ１２から選択され；
Ｒ１７はＣ１−Ｃ６アルキル；Ｃ４−Ｃ９シクロアルキル；Ｃ４−Ｃ９ヘテロシクロアルキル；アリール；芳香族性多環；ヘテロアリール；アリールアルキル；ヘテロアリールアルキル；ポリヘテロアリールおよびＮＲ１３Ｒ１４から選択され；
ｍは０−６から選択される整数であり；そして
ＺはＯ；ＮＲ１３；Ｓ；およびＳ(Ｏ)から選択される。〕
のヒストンデアセチラーゼ阻害剤(ＨＤＡＩ)または薬学的に許容されるその塩
を含む、組み合わせ。
【請求項２】
哺乳動物を薬学的に有効量の：
(ａ)細胞死受容体リガンド、および
(ｂ)請求項１記載の式(Ｉ)のヒストンデアセチラーゼ阻害剤
の組み合わせで処置することを含む、哺乳動物における増殖性疾患を予防または処置する方法。
【請求項３】
細胞死受容体リガンドがＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ、ＴＲＡＩＬ模倣体、アゴニスト抗体、または細胞膜結合多タンパク質死誘発シグナル伝達複合体(ＤＩＳＣ)の集合を介してカスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くＤＲ４およびＤＲ５に結合できる他の因子である、請求項１記載の組み合わせ。
【請求項４】
ＨＤＡＩが、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[(２−ヒドロキシエチル)[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドおよびＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、または薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される、請求項１記載の組み合わせ。
【請求項５】
白血病の予防または処置のための、請求項１記載の組み合わせ。
【請求項６】
哺乳動物がヒトである、請求項２記載の方法。
【請求項７】
急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)の予防または処置のための、請求項１記載の組み合わせ。
【請求項８】
(ａ)１個またはそれ以上の単位投与形の細胞死受容体リガンド；および
(ｂ)１個またはそれ以上の単位投与形の請求項１記載の式(Ｉ)のＨＤＡＩ
を含む、組み合わせ製剤。
【請求項９】
細胞死受容体リガンドがＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ、ＴＲＡＩＬ模倣体、アゴニスト抗体、または細胞膜結合多タンパク質死誘発シグナル伝達複合体(ＤＩＳＣ)の集合を介してカスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くＤＲ４およびＤＲ５に結合できる他の因子である、請求項８記載の組み合わせ製剤。
【請求項１０】
ヒストンデアセチラーゼ阻害剤がＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[(２−ヒドロキシエチル)[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドおよびＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、または薬学的に許容されるその塩からなる群から選択される、請求項９記載の組み合わせ製剤。
【請求項１１】
哺乳動物を：
(ａ)薬学的に有効量の細胞死受容体リガンド；および
(ｂ)薬学的に有効量のＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[(２−ヒドロキシエチル)[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(１Ｈ−インドル−３−イル)エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミドまたはＮ−ヒドロキシ−３−[４−[[[２−(２−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−エチル]−アミノ]メチル]フェニル]−２Ｅ−２−プロペンアミド；または薬学的に有効なそれらの塩
の組み合わせで処置することを含む、哺乳動物における前癌増殖性疾患を処置または予防する方法。
【請求項１２】
細胞死受容体リガンドがＴＲＡＩＬ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ−２Ｌ、ＴＲＡＩＬ模倣体、アゴニスト抗体、または細胞膜結合多タンパク質死誘発シグナル伝達複合体(ＤＩＳＣ)の集合を介してカスパーゼ−８の活性およびアポトーシスの引き金を引くＤＲ４およびＤＲ５に結合できる他の因子である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
哺乳動物を：
(ａ)薬学的に有効量の細胞死受容体リガンド；および
(ｂ)薬学的に有効量のＨＤＡＩ
の組み合わせで処置することを含む、哺乳動物における増殖性疾患を処置または予防する方法。
【請求項１４】
(ａ)１個またはそれ以上の単位投与形の細胞死受容体リガンド；および
(ｂ)１個またはそれ以上の単位投与形のＨＤＡＩ
を含む、組み合わせ製剤。
【公表番号】特表２００７−５０５８６０（Ｐ２００７−５０５８６０Ａ）
【公表日】平成１９年３月１５日（２００７．３．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５２６５９７（Ｐ２００６−５２６５９７）
【出願日】平成１６年９月１７日（２００４．９．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１０４６８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２５６１９
【国際公開日】平成１７年３月２４日（２００５．３．２４）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【出願人】（５０６０９２５１４）ユニバーシティ・オブ・サウス・フロリダ・ボード・オブ・トラスティーズ (1)
【氏名又は名称原語表記】Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｏｕｔｈ Ｆｌｏｒｉｄａ Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｔｒｕｓｔｅｅｓ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年３月１５日（２００７．３．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年９月１７日（２００４．９．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０１０４６８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２５６１９
【国際公開日】平成１７年３月２４日（２００５．３．２４）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【出願人】（５０６０９２５１４）ユニバーシティ・オブ・サウス・フロリダ・ボード・オブ・トラスティーズ (1)
【氏名又は名称原語表記】Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｏｕｔｈ Ｆｌｏｒｉｄａ Ｂｏａｒｄ ｏｆ Ｔｒｕｓｔｅｅｓ
【Ｆターム（参考）】
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