フィターゼ変異体
本発明は、シトロバクター・ブラキ由来のフィターゼに対して少なくとも74％の同一性を有するフィターゼに関して、そしてこのフィターゼに比較して、少なくとも１つの変更を含んで成る。それらのフィターゼ変異体は、修正された、好ましくは改良された性質、例えば熱安定性、温度プロフィール、pHプロフィール、比活性、動物飼料における性能、低められたプロテアーゼ感受性及び/又は修正されたグリコシル化パターンを有する。本発明はまた、それらのフィターゼをコードするDNA、それらの生成方法、及び例えば動物飼料添加剤へのその使用にも関する。
Notice: Undefined index: DEJ in /mnt/www/gzt_disp.php on line 298
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２に対して少なくとも74％の同一性を有し、そして下記のもの：
1 、2、3、4、5、31 、41 、46、52、53、55、57、59、74、76、82、84、91、99、100、104、105、107、109、111 、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、136、137、141、154、161、162、164、167、171、176、177、179、180、181、182、183、184、185、186、196、199、200、202、203、218、223、239、240、241、247、273、276、281、282、283、284、285、286、289、294、299、308、314、316、324、331 、339、351 、355、362、379、385、406、409、410及び411から選択された少なくとも１つの位置において、配列番号２に比較して、少なくとも１つの変更を含んで成り、但し配列番号３、配列番号４及び配列番号６ではない、フィターゼ。
【請求項２】
配列番号９及び図１に列挙されるその変異体ではない請求項１記載のフィターゼ。
【請求項３】
次の変更：1*、 2*、 3*、 4P、 5P、 31C、T、 41 P、 46C、D、E、 52C、E、 53V、Q、55D、I、 57Y、 59C、 74A、 76G、 82E、 84Y、 91C、P、 99C、 100C、 104A、 105F、 107D、E、G、 109A、G、 111P、 114H、N、T、 115Q、 116A、E、P、T、Q、 117D、E、K、118I、L、M、T、 119G、K、R、S、 12OK、S、T、Q、 121 A、D、M、P、T、V、 122D、 123P、S、 124L、T、V、 136P、 137P、 141C、 154P、 161P、 162C、 164D、E、 167Q、 171T、 176C、177C、 179G、I、K、N、Q、 18OA、E、G、T、 181D、G、I、K、 182H、K、S、Q、 183A、L、P、S、V、Q、 184*、 185*、 186*、 196Q、 199C、200K、R、 202N、 203T、 218Q、 223E、 239Q、 240P、 241Q、 247C、 273L、Q、 276K、R、 281 H、 282P、 283P、 284P、 285G、N、R、 286K、Q、 289P、 294T、 299L、 308A、 314G、N、 316D、 324N、 331K、 339D、 351Y、 355P、 362K、R、 379K、R、 385D、 406A、 409D、E、41OD、E、及び/又は 411R、Kの少なくとも１つを含んで成る請求項１及び２のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項４】
位置179、180、181 、182、183、184、185及び186におけるアミノ酸が、QADKP、GEDKP、 NGISA、 IAGKS、 KEKHQ、 KEKQQ、 KEKKV、 又はKTDKLにより置換されている請求項３記載のフィターゼ。
【請求項５】
配列番号２に対して少なくとも74％の同一性を有し、そして次の変更：1H、K、R、 60P、 105E、 106A、G、 155F、 157F、 173P、 175L、 188P、 205P、 215M、 231P、 254Y、 280P、 330D、 及び/又は371Pの少なくとも１つを含んで成り；但し配列番号３、配列番号４、配列番号６、及び配列番号９及び図１に列挙されるそれらの変異体ではない、フィターゼ。
【請求項６】
下記のもの：52C、 141C、 162C、 31C、 52C、 99C、 59C、 100C、 141 C/199C、 4P、 5P、 111P、 137P、 161P、 52E、 57Y、 76G、 107D、 107G、 109A、 1*、 1*/2*、 1*/2*/3*、 121T、 273L、 285G、 286Q、 299L、362K、 331K/55D、 107E、 46E、 82E、 119R、 119K、 164E、 223E、 276R、 276K、 362R、 379R、 379K、 385D、 410D、 410E、 411R、 411K、 53V、 121 D、 167Q、 196Q、 200K、 202N、 218Q、 241Q、 285N、 314N、 314G、406A、
179K/180E/181 K/182H/183Q/184*/185*/186*、
179K/180E/181 K/182Q/183Q/184*/185*/186*、
179K/180E/181 K/182K/183V/184*/185*/186*、
179K/180T/181 D/182K/183L/184*/185*/186*、
111P/241Q、1K、
114T/115Q/116A/117D/118T/119S/120S/121 P/122D/123P/124L、 及び114T/115Q/116T/117D/118T/119S/120S/121P/122D/123P/124L
から選択された変更を含んで成る請求項１〜４のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項７】
配列番号２のフィターゼの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項８】
配列番号３のフィターゼの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項９】
配列番号４のフィターゼの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１０】
配列番号６のフィターゼの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１１】
配列番号９のフィターゼの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１２】
配列番号９に関連し、そして図１に列挙されるフィターゼ変異体のいずれか１つの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１３】
図１の個々の列に列挙される置換及び置換の組合せから選択された置換又は置換の組合せを、さらに含んで成る請求項１〜12のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１４】
改良された熱安定性、改良されたpHプロフィール、改良された比活性、修正されたグリコシル化パターン、改良された温度プロフィール、動物飼料における改良された性能を有し、そして/又は可能性あるプロテアーゼ切断部位の変化を組込む請求項１〜13のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１５】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼをコードする核酸配列を含んでなる単離された核酸配列。
【請求項１６】
適切な発現宿主におけるフィターゼの生成を指図する１又は複数の制御配列に操作可能的に結合される請求項15記載の核酸配列を含んで成る核酸構造体。
【請求項１７】
請求項16記載の核酸構造体を含んで成る組換え発現ベクター。
【請求項１８】
請求項16記載の核酸構造体及び/又は請求項17記載の発現ベクターを含んで成る組換え宿主細胞。
【請求項１９】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼの生成方法であって、
（ａ）前記フィターゼを含んで成る上清液を生成するために請求項18記載の宿主細胞を栽培し；そして
（ｂ）前記フィターゼを回収することを含んで成る方法。
【請求項２０】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼを発現できるトランスジェニック植物又はその一部。
【請求項２１】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼを発現できるトランスジェニック非ヒト動物、又はその生成物又は要素。
【請求項２２】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼ、及び
（ａ）少なくとも１つの脂溶性ビタミン；
（ｂ）少なくとも１つの水溶性ビタミン；及び/又は
（ｃ）少なくとも１つの微量鉱物を含んで成る組成物。
【請求項２３】
次の酵素群：アミラーゼ、フィターゼ、ホスファターゼ、キシラナーゼ、ガラクタナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、プロテアーゼ、ホスホリパーゼ及び/又はβ−グルカナーゼから選択された少なくとも１つの酵素をさらに含んで成る請求項22記載の組成物。
【請求項２４】
動物飼料添加物である請求項22〜23のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２５】
50〜800g/kgの含有率の粗タンパク質を有し、そして請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼ、又は請求項22〜24のいずれか１項記載の組成物を含んで成る動物用飼料組成物。
【請求項２６】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼ又は請求項22〜24のいずれか１項記載の組成物を動物飼料に添加する、動物飼料の栄養価値を改良するための方法。
【請求項２７】
有効量の請求項25記載の飼料を動物に供給することを含んで成る、動物飼料におけるフィターゼレベルを低めるための方法。
【請求項２８】
植物性タンパク質の処理方法であって、少なくとも１つの植物性タンパク質又はタンパク質源に、請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼ又は請求項22〜24のいずれか１項記載の組成物を添加する段階を含んで成る方法。
【請求項２９】
動物飼料への；動物飼料の調製への；動物飼料の栄養価値の改良への；動物飼料におけるフィテートレベルを低めるための；植物性タンパク質の処理への；又はフィターゼ基質からのリンの遊離のためへの、請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼ又は請求項22〜24のいずれか１項記載の組成物の使用。
【請求項１】
配列番号２に対して少なくとも74％の同一性を有し、そして下記のもの：
1 、2、3、4、5、31 、41 、46、52、53、55、57、59、74、76、82、84、91、99、100、104、105、107、109、111 、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、136、137、141、154、161、162、164、167、171、176、177、179、180、181、182、183、184、185、186、196、199、200、202、203、218、223、239、240、241、247、273、276、281、282、283、284、285、286、289、294、299、308、314、316、324、331 、339、351 、355、362、379、385、406、409、410及び411から選択された少なくとも１つの位置において、配列番号２に比較して、少なくとも１つの変更を含んで成り、但し配列番号３、配列番号４及び配列番号６ではない、フィターゼ。
【請求項２】
配列番号９及び図１に列挙されるその変異体ではない請求項１記載のフィターゼ。
【請求項３】
次の変更：1*、 2*、 3*、 4P、 5P、 31C、T、 41 P、 46C、D、E、 52C、E、 53V、Q、55D、I、 57Y、 59C、 74A、 76G、 82E、 84Y、 91C、P、 99C、 100C、 104A、 105F、 107D、E、G、 109A、G、 111P、 114H、N、T、 115Q、 116A、E、P、T、Q、 117D、E、K、118I、L、M、T、 119G、K、R、S、 12OK、S、T、Q、 121 A、D、M、P、T、V、 122D、 123P、S、 124L、T、V、 136P、 137P、 141C、 154P、 161P、 162C、 164D、E、 167Q、 171T、 176C、177C、 179G、I、K、N、Q、 18OA、E、G、T、 181D、G、I、K、 182H、K、S、Q、 183A、L、P、S、V、Q、 184*、 185*、 186*、 196Q、 199C、200K、R、 202N、 203T、 218Q、 223E、 239Q、 240P、 241Q、 247C、 273L、Q、 276K、R、 281 H、 282P、 283P、 284P、 285G、N、R、 286K、Q、 289P、 294T、 299L、 308A、 314G、N、 316D、 324N、 331K、 339D、 351Y、 355P、 362K、R、 379K、R、 385D、 406A、 409D、E、41OD、E、及び/又は 411R、Kの少なくとも１つを含んで成る請求項１及び２のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項４】
位置179、180、181 、182、183、184、185及び186におけるアミノ酸が、QADKP、GEDKP、 NGISA、 IAGKS、 KEKHQ、 KEKQQ、 KEKKV、 又はKTDKLにより置換されている請求項３記載のフィターゼ。
【請求項５】
配列番号２に対して少なくとも74％の同一性を有し、そして次の変更：1H、K、R、 60P、 105E、 106A、G、 155F、 157F、 173P、 175L、 188P、 205P、 215M、 231P、 254Y、 280P、 330D、 及び/又は371Pの少なくとも１つを含んで成り；但し配列番号３、配列番号４、配列番号６、及び配列番号９及び図１に列挙されるそれらの変異体ではない、フィターゼ。
【請求項６】
下記のもの：52C、 141C、 162C、 31C、 52C、 99C、 59C、 100C、 141 C/199C、 4P、 5P、 111P、 137P、 161P、 52E、 57Y、 76G、 107D、 107G、 109A、 1*、 1*/2*、 1*/2*/3*、 121T、 273L、 285G、 286Q、 299L、362K、 331K/55D、 107E、 46E、 82E、 119R、 119K、 164E、 223E、 276R、 276K、 362R、 379R、 379K、 385D、 410D、 410E、 411R、 411K、 53V、 121 D、 167Q、 196Q、 200K、 202N、 218Q、 241Q、 285N、 314N、 314G、406A、
179K/180E/181 K/182H/183Q/184*/185*/186*、
179K/180E/181 K/182Q/183Q/184*/185*/186*、
179K/180E/181 K/182K/183V/184*/185*/186*、
179K/180T/181 D/182K/183L/184*/185*/186*、
111P/241Q、1K、
114T/115Q/116A/117D/118T/119S/120S/121 P/122D/123P/124L、 及び114T/115Q/116T/117D/118T/119S/120S/121P/122D/123P/124L
から選択された変更を含んで成る請求項１〜４のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項７】
配列番号２のフィターゼの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項８】
配列番号３のフィターゼの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項９】
配列番号４のフィターゼの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１０】
配列番号６のフィターゼの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１１】
配列番号９のフィターゼの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１２】
配列番号９に関連し、そして図１に列挙されるフィターゼ変異体のいずれか１つの変異体である請求項１〜６のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１３】
図１の個々の列に列挙される置換及び置換の組合せから選択された置換又は置換の組合せを、さらに含んで成る請求項１〜12のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１４】
改良された熱安定性、改良されたpHプロフィール、改良された比活性、修正されたグリコシル化パターン、改良された温度プロフィール、動物飼料における改良された性能を有し、そして/又は可能性あるプロテアーゼ切断部位の変化を組込む請求項１〜13のいずれか１項記載のフィターゼ。
【請求項１５】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼをコードする核酸配列を含んでなる単離された核酸配列。
【請求項１６】
適切な発現宿主におけるフィターゼの生成を指図する１又は複数の制御配列に操作可能的に結合される請求項15記載の核酸配列を含んで成る核酸構造体。
【請求項１７】
請求項16記載の核酸構造体を含んで成る組換え発現ベクター。
【請求項１８】
請求項16記載の核酸構造体及び/又は請求項17記載の発現ベクターを含んで成る組換え宿主細胞。
【請求項１９】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼの生成方法であって、
（ａ）前記フィターゼを含んで成る上清液を生成するために請求項18記載の宿主細胞を栽培し；そして
（ｂ）前記フィターゼを回収することを含んで成る方法。
【請求項２０】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼを発現できるトランスジェニック植物又はその一部。
【請求項２１】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼを発現できるトランスジェニック非ヒト動物、又はその生成物又は要素。
【請求項２２】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼ、及び
（ａ）少なくとも１つの脂溶性ビタミン；
（ｂ）少なくとも１つの水溶性ビタミン；及び/又は
（ｃ）少なくとも１つの微量鉱物を含んで成る組成物。
【請求項２３】
次の酵素群：アミラーゼ、フィターゼ、ホスファターゼ、キシラナーゼ、ガラクタナーゼ、α−ガラクトシダーゼ、プロテアーゼ、ホスホリパーゼ及び/又はβ−グルカナーゼから選択された少なくとも１つの酵素をさらに含んで成る請求項22記載の組成物。
【請求項２４】
動物飼料添加物である請求項22〜23のいずれか１項記載の組成物。
【請求項２５】
50〜800g/kgの含有率の粗タンパク質を有し、そして請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼ、又は請求項22〜24のいずれか１項記載の組成物を含んで成る動物用飼料組成物。
【請求項２６】
請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼ又は請求項22〜24のいずれか１項記載の組成物を動物飼料に添加する、動物飼料の栄養価値を改良するための方法。
【請求項２７】
有効量の請求項25記載の飼料を動物に供給することを含んで成る、動物飼料におけるフィターゼレベルを低めるための方法。
【請求項２８】
植物性タンパク質の処理方法であって、少なくとも１つの植物性タンパク質又はタンパク質源に、請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼ又は請求項22〜24のいずれか１項記載の組成物を添加する段階を含んで成る方法。
【請求項２９】
動物飼料への；動物飼料の調製への；動物飼料の栄養価値の改良への；動物飼料におけるフィテートレベルを低めるための；植物性タンパク質の処理への；又はフィターゼ基質からのリンの遊離のためへの、請求項１〜14のいずれか１項記載のフィターゼ又は請求項22〜24のいずれか１項記載の組成物の使用。
【図１】
【図１−２】
【図１−３】
【図２】
【図１−２】
【図１−３】
【図２】
【公表番号】特表２００９−５３２０４３（Ｐ２００９−５３２０４３Ａ）
【公表日】平成２１年９月１０日（２００９．９．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０３４０８（Ｐ２００９−５０３４０８）
【出願日】平成１９年３月１９日（２００７．３．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＫ２００７／０００１３５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１２７３９
【国際公開日】平成１９年１０月１１日（２００７．１０．１１）
【出願人】（５００５８６２９９）ノボザイムス アクティーゼルスカブ (164)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年９月１０日（２００９．９．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月１９日（２００７．３．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＤＫ２００７／０００１３５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１２７３９
【国際公開日】平成１９年１０月１１日（２００７．１０．１１）
【出願人】（５００５８６２９９）ノボザイムス アクティーゼルスカブ (164)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]