プロテアーゼスクリーニング方法およびそれにより同定されるプロテアーゼ
【課題】
所望の基質特異性および活性をもつプロテアーゼまたは突然変異体プロテアーゼの選択方法を提供すること。
【解決手段】
候補および修飾プロテアーゼを、基質の開裂時に、安定した複合体を形成することによりプロテアーゼを捕捉する基質、例えばセルピン、アルファマクログロブリンまたはｐ３５ファミリータンパク質または修飾セルピンおよび修飾ｐ３５ファミリーメンバーまたは修飾アルファマクログロブリンと接触させることにより、それらをスクリーニングし、改変された機能を有する修飾プロテアーゼを同定することにより上記課題を解決する。
所望の基質特異性および活性をもつプロテアーゼまたは突然変異体プロテアーゼの選択方法を提供すること。
【解決手段】
候補および修飾プロテアーゼを、基質の開裂時に、安定した複合体を形成することによりプロテアーゼを捕捉する基質、例えばセルピン、アルファマクログロブリンまたはｐ３５ファミリータンパク質または修飾セルピンおよび修飾ｐ３５ファミリーメンバーまたは修飾アルファマクログロブリンと接触させることにより、それらをスクリーニングし、改変された機能を有する修飾プロテアーゼを同定することにより上記課題を解決する。
Notice: Undefined index: DEJ in /mnt/www/gzt_disp.php on line 298
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キモトリプシンのナンバリングに基づいた３０、７３、８９および１５５から選択される１つまたはそれ以上の位置に１個以上の突然変異を含み、それにより、該突然変異を含まないプロテアーゼと比較して基質特異性または活性が改変されている修飾セリンプロテアーゼまたはその触媒活性フラグメントであって、該プロテアーゼまたはその触媒活性フラグメントがセリンプロテアーゼのキモトリプシンファミリーのものである、修飾セリンプロテアーゼまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２】
プロテアーゼが修飾尿中プラスミノーゲンアクティベーター（ｕ−ＰＡ）である、請求項１に記載の修飾プロテアーゼまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項３】
キモトリプシンのナンバリングに基づいた２１、２４、３０、３８、３９、６１（Ａ）、７２、７３、７５、８０、８２、８４、８９、９２、１３２、１３３、１３７、１３８、１５５、１５６、１５８、１５９、１６０、１８７および２１７の位置のいずれかに対応する位置にアミノ酸置換を含み、それにより、該アミノ酸置換を含まないｕ−ＰＡポリペプチドと比較して基質特異性または活性が改変されている、飾尿中プラスミノーゲンアクティベーター（ｕ−ＰＡ）ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項４】
アミノ酸置換が、キモトリプシンのナンバリングに基づいたｕ−ＰＡポリペプチドのＦ２１、Ｉ２４、Ｆ３０、Ｖ３８、Ｔ３９、Ｙ６１（Ａ）、Ｒ７２、Ｌ７３、Ｓ７５、Ｅ８０、Ｋ８２、Ｅ８４、Ｉ８９、Ｋ９２、Ｆ１３２、Ｇ１３３、Ｅ１３７、Ｉ１３８、Ｌ１５５、Ｋ１５６、Ｔ１５８、Ｖ１５９、Ｖ１６０、Ｋ１８７、およびＲ２１７から選択されるアミノ酸残基である、請求項３に記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項５】
Ｆ２１Ｖ、Ｉ２４Ｌ、Ｆ３０Ｉ、Ｆ３０Ｖ、Ｆ３０Ｌ、Ｆ３０Ｔ、Ｆ３０Ｇ、Ｆ３０Ｍ、Ｖ３８Ｄ、Ｔ３９Ａ、Ｙ６１（Ａ）Ｈ、Ｒ７２Ｇ、Ｌ７３Ａ、Ｌ７３Ｐ、Ｓ７５Ｐ、Ｅ８０Ｇ、Ｋ８２Ｅ、Ｅ８４Ｋ、Ｉ８９Ｖ、Ｋ９２Ｅ、Ｆ１３２Ｌ、Ｇ１３３Ｄ、Ｅ１３７Ｇ、Ｉ１３８Ｔ、Ｌ１５５Ｐ、Ｌ１５５Ｖ、Ｌ１５５Ｍ、Ｋ１５６Ｙ、Ｔ１５８Ａ、Ｖ１５９Ａ、Ｖ１６０Ａ、Ｋ１８７Ｅ、およびＲ２１７Ｃから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項３または４に記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項６】
ｕ−ＰＡポリペプチドが配列番号４３３に示す野生型ｕ−ＰＡポリペプチドと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有し；そして
該ポリペプチドが１つまたはそれ以上の修飾を有する、
請求項２〜５のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項７】
アミノ酸修飾が配列番号４３３に示すｕ−ＰＡポリペプチドにある、請求項１〜５のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項８】
ＶＥＧＦＲ−２、またはその配列に対する基質特異性が改変されている、請求項３〜７のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項９】
キモトリプシンのナンバリングに基づいたＶ３８Ｄ、Ｆ３０Ｉ、Ｆ３０Ｔ、Ｆ３０Ｌ、Ｆ３０Ｖ、Ｆ３０Ｇ、Ｆ３０Ｍ、Ｒ７２Ｇ、Ｌ７３Ａ、Ｌ７３Ｐ、Ｓ７５Ｐ、Ｉ８９Ｖ、Ｆ１３２Ｌ、Ｇ１３３Ｄ、Ｅ１３７Ｇ、Ｉ１３８Ｔ、Ｌ１５５Ｐ、Ｌ１５５Ｖ、Ｌ１５５Ｍ、Ｖ１６０Ａ、およびＲ２１７Ｃから選択されるアミノ酸置換を含む、修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１０】
ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性部分がＬ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ；Ｓ７５Ｐ／Ｉ８９Ｖ／Ｉ１３８Ｔ；Ｒ７２Ｇ／Ｌ１５５Ｐ；Ｆ１３２Ｌ／Ｖ１６０Ａ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｔ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｌ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｖ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｇ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｌ１５５Ｖ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｍ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｌ１５５Ｍ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｌ／Ｌ１５５Ｍ；およびＬ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｇ／Ｌ１５５Ｍから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項３〜９のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１１】
配列番号４３４−４５９のいずれかに示すアミノ酸配列、または突然変異を含み、かつ触媒活性を有する連続アミノ酸のそのフラグメントを有する、請求項３〜９のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１２】
ｔ−ＰＡ基質、またはその配列に対する基質特異性が改変されている、請求項３〜７のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１３】
キモトリプシンのナンバリングに基づいたＦ２１Ｖ、Ｉ２４Ｌ、Ｆ３０Ｖ、Ｆ３０Ｌ、Ｔ３９Ａ、Ｙ６１（Ａ）Ｈ、Ｅ８０Ｇ、Ｋ８２Ｅ、Ｅ８４Ｋ、Ｉ８９Ｖ、Ｋ９２Ｅ、Ｋ１５６Ｔ、Ｔ１５８Ａ、Ｖ１５９Ａ、およびＫ１８７Ｅから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１２に記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１４】
ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性部分がＦ３０Ｖ／Ｙ６１（Ａ）Ｈ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ１５６Ｔ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ／Ｖ１５９Ａ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ／Ｔ３９Ａ／Ｖ１５９Ａ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ／Ｔ１５８Ａ／Ｖ１５９Ａ；Ｆ３０Ｖ／Ｙ６１（Ａ）Ｈ／Ｋ９２Ｅ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ／Ｖ１５９Ａ／Ｅ８０Ｇ／Ｉ８９Ｖ／Ｋ１８７Ｅ；およびＦ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ／Ｖ１５９Ａ／Ｅ８０Ｇ／Ｅ８４Ｋ／Ｉ８９Ｖ／Ｋ１８７Ｅから選択されるアミノ酸置換を有する、請求項３〜１３のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１５】
配列番号４６０−４７２のいずれかに示すアミノ酸配列、または突然変異を含み、かつ触媒活性を有する連続アミノ酸のそのフラグメントを有する、請求項３〜１４のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１６】
キモトリプシンのナンバリングに基づいた２３、５２、６０（ｇ）、６５、７１、９３、９５、１２６、１２９、１３１、１３６、１４３、１４４、１５４、１６４、１６６、１８４（ａ）、２０１、２０９、２３０、２３４、および２４４から選択される位置に対応する位置にアミノ酸置換を含み、それにより、該アミノ酸置換を含まないＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドと比較して基質特異性または活性が改変されている、修飾マトリックスタイプセリンプロテアーゼＩ（ＭＴ−ＳＰ１）ポリペプチドまたはその触媒活性部分。
【請求項１７】
アミノ酸置換がキモトリプシンのナンバリングに基づいたＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドのＤ２３、Ｌ５２、Ｙ６０（ｇ）、Ｔ６５、Ｈ７１、Ｆ９３、Ｎ９５、Ａ１２６、Ｖ１２９、Ｐ１３１、Ｉ１３６、Ｈ１４３、Ｔ１４４、Ｉ１５４、Ｎ１６４、Ｔ１６６、Ｆ１８４（ａ）、Ｓ２０１、Ｑ２０９、Ｒ２３０、Ｆ２３４、およびＶ２４４から選択されるアミノ酸残基である、請求項１６に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性部分。
【請求項１８】
Ｄ２３Ｅ、Ｌ５２Ｍ、Ｙ６０（ｇ）ｓ、Ｈ７１Ｒ、Ｆ９３Ｌ、Ｎ９５Ｋ、Ａ１２６Ｔ、Ｖ１２９Ｄ、Ｐ１３１Ｓ、Ｉ１３６Ｔ、Ｉ１３６Ｖ、Ｈ１４３Ｒ、Ｔ１４４Ｉ、Ｉ１５４Ｖ、Ｎ１６４Ｄ、Ｔ１６６Ａ、Ｆ１８４（ａ）Ｌ、Ｓ２０１Ｉ、Ｑ２０９Ｌ、Ｒ２３０Ｗ、Ｆ２３４Ｌ、およびＶ２４４Ｇから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１６または１７に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１９】
さらにＤ２３Ｅ、Ｉ４１Ｆ、Ｉ４１Ｔ、Ｌ５２Ｍ、Ｙ６０（ｇ）ｓ、Ｔ６５Ｋ、Ｈ７１Ｒ、Ｆ９３Ｌ、Ｎ９５Ｋ、Ｆ９７Ｙ、Ｆ９７Ｌ、Ｔ９８Ｐ、Ｆ９９Ｌ、Ａ１２６Ｔ、Ｖ１２９Ｄ、Ｐ１３１Ｓ、Ｉ１３６Ｔ、Ｉ１３６Ｖ、Ｈ１４３Ｒ、Ｔ１４４Ｉ、Ｉ１５４Ｖ、Ｎ１６４Ｄ、Ｔ１６６Ａ、Ｌ１７１Ｆ、Ｐ１７３Ｓ、Ｑ１７５Ｒ、Ｆ１８４（ａ）Ｌ、Ｑ１９２Ｈ、Ｓ２０１Ｉ、Ｑ２０９Ｌ、Ｄ２１７Ｖ、Ｑ２２１（ａ）Ｌ、Ｒ２３０Ｗ、Ｆ２３４Ｌ、およびＶ２４４Ｇから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１８に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２０】
ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性部分がＩ１３６Ｔ／Ｎ１６４Ｄ／Ｔ１６６Ａ／Ｆ１８４（Ａ）Ｌ／Ｄ２１７Ｖ；Ｉ４１Ｆ／Ａ１２６Ｔ／Ｖ２４４Ｇ；Ｄ２３Ｅ／Ｉ４１Ｆ／Ｔ９８Ｐ／Ｔ１４４Ｉ；Ｉ４１Ｆ／Ｌ１７１Ｆ／Ｖ２４４Ｇ；Ｈ１４３Ｒ／Ｑ１７５Ｒ；Ｉ４１Ｆ／Ｉ１５４Ｖ／Ｖ２４４Ｇ；Ｉ１４１Ｆ／Ｌ５２Ｍ／Ｖ１２９Ｄ／Ｑ２２１（Ａ）Ｌ；Ｆ９７Ｙ／Ｉ１３６Ｖ／Ｑ１９２Ｈ／Ｓ２０１Ｉ；Ｈ７１Ｒ／Ｐ１３１Ｓ／Ｄ２１７Ｖ；Ｔ６５Ｋ／Ｆ９３Ｌ／Ｆ９７Ｙ／Ｄ２１７Ｖ；Ｉ４１Ｔ／Ｐ１７３Ｓ／Ｑ２０９ＬおよびＦ９７Ｌ／Ｆ２３４Ｌから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１６〜１９のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２１】
キモトリプシンのナンバリングに基づいたＴ６５Ｋ、Ｆ９７Ｙ、Ｆ９７Ｌ、Ｔ９８Ｐ、Ｆ９９Ｌ、Ｌ１７１Ｆ、Ｐ１７３Ｓ、Ｑ１９２Ｈ、およびＱ２２１（ａ）Ｌから選択される１個またはそれ以上のアミノ酸修飾を含み、それにより該突然変異を含まないＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドと比較して基質特異性または活性が改変されている、修飾マトリックスタイプセリンプロテアーゼＩ（ＭＴ−ＳＰ１）ポリペプチドまたはその触媒活性部分。
【請求項２２】
さらにアミノ酸置換Ｉ４１Ｆ、Ｉ４１Ｔ、Ｑ１７５ＲまたはＤ２１７Ｖを含む、請求項２１に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２３】
アミノ酸置換がＩ４１Ｆ／Ｌ１７１Ｆである、請求項２２に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２４】
修飾が、配列番号２５３に示すアミノ酸配列を有するＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドにあるか、または配列番号５０５に示すアミノ酸配列を有するＭＴ−ＳＰ１の触媒活性部分にある、請求項１６〜２３のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２５】
修飾がさらにキモトリプシンのナンバリングに基づいた配列番号２５３に示すＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドにおけるＣ１２２Ｓの改変に対応する改変を有するＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドにある、請求項１〜２４のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２６】
修飾が配列番号５０７または５１７に示すアミノ酸配列を有するＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドにある、請求項２５に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２７】
ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドが配列番号２５３に示す野生型ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたは配列番号５０５に示すその触媒活性部分と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を示し；そして
該ポリペプチドが１個またはそれ以上の修飾を含む、
請求項１６〜２６のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２８】
修飾がＣ２補体タンパク質に対する特異性またはＣ２補体タンパク質に対する活性の一方または両方を高める、請求項１６〜２７のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２９】
配列番号５６８−６０９のいずれかに示すアミノ酸配列を有する、請求項１６〜２８のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性部分。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれかに記載の修飾プロテアーゼまたはその触媒活性フラグメントを含む、医薬組成物。
【請求項３１】
医薬上許容される賦形剤をさらに含む、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
全身、経口、経鼻、経肺、限局的または局所的投与用に処方されている、請求項３０または３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
請求項３０〜３２のいずれかに記載の医薬組成物、該組成物投与装置および所望による投与説明書を含む、キット。
【請求項３４】
請求項１〜２９のいずれかに記載の修飾プロテアーゼまたはその触媒活性フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項３５】
請求項３４に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項３６】
請求項３３に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項３７】
ＶＥＧＦＲ−２が介在する疾患または状態の処置に使用するための、請求項８〜１１のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメントを含む医薬組成物。
【請求項３８】
ＶＥＧＦＲ−２が介在する疾患または状態の処置のための、請求項８〜１１のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメントを含む医薬組成物の使用。
【請求項３９】
処置される疾患または状態が脈管形成疾患である、請求項３７または３８に記載の医薬組成物または使用。
【請求項４０】
脈管形成疾患が癌、黄斑変性症、炎症、および糖尿病から選択される、請求項３９に記載の医薬組成物または使用。
【請求項４１】
さらに他の抗腫瘍剤を含む、請求項３７〜４０のいずれかに記載の医薬組成物または使用。
【請求項４２】
ｔ−ＰＡの投与により処置される疾患または状態の処置に使用するための、請求項１２〜１５のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメントを含む、医薬組成物。
【請求項４３】
ｔ−ＰＡにより処置される疾患または状態の処置のための、請求項１２〜１５のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメントを含む医薬組成物の使用。
【請求項４４】
疾患または状態が、動脈血栓症、静脈血栓症および血栓性塞栓症、虚血性卒中、後天的凝固障害、汎発性血管内凝固症候群、細菌感染症および歯周炎、および神経学的状態から選択される、請求項４２または４３に記載の医薬組成物または使用。
【請求項４５】
補体タンパク質Ｃ２が介在する疾患または状態の処置に使用するための、請求項１６〜２９のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性部分を含む、医薬組成物。
【請求項４６】
補体タンパク質Ｃ２が介在する疾患または状態の処置のための、請求項１６〜２９のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性部分を含む医薬組成物の使用。
【請求項４７】
疾患または状態が、自己免疫疾患、敗血症、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、喘息、炎症性腸疾患、免疫複合体（ＩＣ）性急性炎症性組織損傷、アルツハイマー病（ＡＤ）、虚血−再灌流損傷、移植臓器の拒絶、黄斑変性、およびギラン−バレー症候群から選択される、請求項４５または４６に記載の医薬組成物または使用。
【請求項４８】
虚血−再灌流損傷が、心筋梗塞（ＭＩ）、卒中、血管形成術、冠動脈バイパス移植、心肺バイパス（ＣＰＢ）および血液透析から選択される事象または処置により誘発される、請求項４７に記載の医薬組成物または使用。
【請求項１】
キモトリプシンのナンバリングに基づいた３０、７３、８９および１５５から選択される１つまたはそれ以上の位置に１個以上の突然変異を含み、それにより、該突然変異を含まないプロテアーゼと比較して基質特異性または活性が改変されている修飾セリンプロテアーゼまたはその触媒活性フラグメントであって、該プロテアーゼまたはその触媒活性フラグメントがセリンプロテアーゼのキモトリプシンファミリーのものである、修飾セリンプロテアーゼまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２】
プロテアーゼが修飾尿中プラスミノーゲンアクティベーター（ｕ−ＰＡ）である、請求項１に記載の修飾プロテアーゼまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項３】
キモトリプシンのナンバリングに基づいた２１、２４、３０、３８、３９、６１（Ａ）、７２、７３、７５、８０、８２、８４、８９、９２、１３２、１３３、１３７、１３８、１５５、１５６、１５８、１５９、１６０、１８７および２１７の位置のいずれかに対応する位置にアミノ酸置換を含み、それにより、該アミノ酸置換を含まないｕ−ＰＡポリペプチドと比較して基質特異性または活性が改変されている、飾尿中プラスミノーゲンアクティベーター（ｕ−ＰＡ）ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項４】
アミノ酸置換が、キモトリプシンのナンバリングに基づいたｕ−ＰＡポリペプチドのＦ２１、Ｉ２４、Ｆ３０、Ｖ３８、Ｔ３９、Ｙ６１（Ａ）、Ｒ７２、Ｌ７３、Ｓ７５、Ｅ８０、Ｋ８２、Ｅ８４、Ｉ８９、Ｋ９２、Ｆ１３２、Ｇ１３３、Ｅ１３７、Ｉ１３８、Ｌ１５５、Ｋ１５６、Ｔ１５８、Ｖ１５９、Ｖ１６０、Ｋ１８７、およびＲ２１７から選択されるアミノ酸残基である、請求項３に記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項５】
Ｆ２１Ｖ、Ｉ２４Ｌ、Ｆ３０Ｉ、Ｆ３０Ｖ、Ｆ３０Ｌ、Ｆ３０Ｔ、Ｆ３０Ｇ、Ｆ３０Ｍ、Ｖ３８Ｄ、Ｔ３９Ａ、Ｙ６１（Ａ）Ｈ、Ｒ７２Ｇ、Ｌ７３Ａ、Ｌ７３Ｐ、Ｓ７５Ｐ、Ｅ８０Ｇ、Ｋ８２Ｅ、Ｅ８４Ｋ、Ｉ８９Ｖ、Ｋ９２Ｅ、Ｆ１３２Ｌ、Ｇ１３３Ｄ、Ｅ１３７Ｇ、Ｉ１３８Ｔ、Ｌ１５５Ｐ、Ｌ１５５Ｖ、Ｌ１５５Ｍ、Ｋ１５６Ｙ、Ｔ１５８Ａ、Ｖ１５９Ａ、Ｖ１６０Ａ、Ｋ１８７Ｅ、およびＲ２１７Ｃから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項３または４に記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項６】
ｕ−ＰＡポリペプチドが配列番号４３３に示す野生型ｕ−ＰＡポリペプチドと８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を有し；そして
該ポリペプチドが１つまたはそれ以上の修飾を有する、
請求項２〜５のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項７】
アミノ酸修飾が配列番号４３３に示すｕ−ＰＡポリペプチドにある、請求項１〜５のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項８】
ＶＥＧＦＲ−２、またはその配列に対する基質特異性が改変されている、請求項３〜７のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項９】
キモトリプシンのナンバリングに基づいたＶ３８Ｄ、Ｆ３０Ｉ、Ｆ３０Ｔ、Ｆ３０Ｌ、Ｆ３０Ｖ、Ｆ３０Ｇ、Ｆ３０Ｍ、Ｒ７２Ｇ、Ｌ７３Ａ、Ｌ７３Ｐ、Ｓ７５Ｐ、Ｉ８９Ｖ、Ｆ１３２Ｌ、Ｇ１３３Ｄ、Ｅ１３７Ｇ、Ｉ１３８Ｔ、Ｌ１５５Ｐ、Ｌ１５５Ｖ、Ｌ１５５Ｍ、Ｖ１６０Ａ、およびＲ２１７Ｃから選択されるアミノ酸置換を含む、修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１０】
ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性部分がＬ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ；Ｓ７５Ｐ／Ｉ８９Ｖ／Ｉ１３８Ｔ；Ｒ７２Ｇ／Ｌ１５５Ｐ；Ｆ１３２Ｌ／Ｖ１６０Ａ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｔ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｌ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｖ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｇ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｌ１５５Ｖ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｍ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｌ１５５Ｍ；Ｌ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｌ／Ｌ１５５Ｍ；およびＬ７３Ａ／Ｉ８９Ｖ／Ｆ３０Ｇ／Ｌ１５５Ｍから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項３〜９のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１１】
配列番号４３４−４５９のいずれかに示すアミノ酸配列、または突然変異を含み、かつ触媒活性を有する連続アミノ酸のそのフラグメントを有する、請求項３〜９のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１２】
ｔ−ＰＡ基質、またはその配列に対する基質特異性が改変されている、請求項３〜７のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１３】
キモトリプシンのナンバリングに基づいたＦ２１Ｖ、Ｉ２４Ｌ、Ｆ３０Ｖ、Ｆ３０Ｌ、Ｔ３９Ａ、Ｙ６１（Ａ）Ｈ、Ｅ８０Ｇ、Ｋ８２Ｅ、Ｅ８４Ｋ、Ｉ８９Ｖ、Ｋ９２Ｅ、Ｋ１５６Ｔ、Ｔ１５８Ａ、Ｖ１５９Ａ、およびＫ１８７Ｅから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１２に記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１４】
ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性部分がＦ３０Ｖ／Ｙ６１（Ａ）Ｈ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ１５６Ｔ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ／Ｖ１５９Ａ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ／Ｔ３９Ａ／Ｖ１５９Ａ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ／Ｔ１５８Ａ／Ｖ１５９Ａ；Ｆ３０Ｖ／Ｙ６１（Ａ）Ｈ／Ｋ９２Ｅ；Ｆ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ／Ｖ１５９Ａ／Ｅ８０Ｇ／Ｉ８９Ｖ／Ｋ１８７Ｅ；およびＦ３０Ｖ／Ｋ８２Ｅ／Ｖ１５９Ａ／Ｅ８０Ｇ／Ｅ８４Ｋ／Ｉ８９Ｖ／Ｋ１８７Ｅから選択されるアミノ酸置換を有する、請求項３〜１３のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１５】
配列番号４６０−４７２のいずれかに示すアミノ酸配列、または突然変異を含み、かつ触媒活性を有する連続アミノ酸のそのフラグメントを有する、請求項３〜１４のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１６】
キモトリプシンのナンバリングに基づいた２３、５２、６０（ｇ）、６５、７１、９３、９５、１２６、１２９、１３１、１３６、１４３、１４４、１５４、１６４、１６６、１８４（ａ）、２０１、２０９、２３０、２３４、および２４４から選択される位置に対応する位置にアミノ酸置換を含み、それにより、該アミノ酸置換を含まないＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドと比較して基質特異性または活性が改変されている、修飾マトリックスタイプセリンプロテアーゼＩ（ＭＴ−ＳＰ１）ポリペプチドまたはその触媒活性部分。
【請求項１７】
アミノ酸置換がキモトリプシンのナンバリングに基づいたＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドのＤ２３、Ｌ５２、Ｙ６０（ｇ）、Ｔ６５、Ｈ７１、Ｆ９３、Ｎ９５、Ａ１２６、Ｖ１２９、Ｐ１３１、Ｉ１３６、Ｈ１４３、Ｔ１４４、Ｉ１５４、Ｎ１６４、Ｔ１６６、Ｆ１８４（ａ）、Ｓ２０１、Ｑ２０９、Ｒ２３０、Ｆ２３４、およびＶ２４４から選択されるアミノ酸残基である、請求項１６に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性部分。
【請求項１８】
Ｄ２３Ｅ、Ｌ５２Ｍ、Ｙ６０（ｇ）ｓ、Ｈ７１Ｒ、Ｆ９３Ｌ、Ｎ９５Ｋ、Ａ１２６Ｔ、Ｖ１２９Ｄ、Ｐ１３１Ｓ、Ｉ１３６Ｔ、Ｉ１３６Ｖ、Ｈ１４３Ｒ、Ｔ１４４Ｉ、Ｉ１５４Ｖ、Ｎ１６４Ｄ、Ｔ１６６Ａ、Ｆ１８４（ａ）Ｌ、Ｓ２０１Ｉ、Ｑ２０９Ｌ、Ｒ２３０Ｗ、Ｆ２３４Ｌ、およびＶ２４４Ｇから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１６または１７に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項１９】
さらにＤ２３Ｅ、Ｉ４１Ｆ、Ｉ４１Ｔ、Ｌ５２Ｍ、Ｙ６０（ｇ）ｓ、Ｔ６５Ｋ、Ｈ７１Ｒ、Ｆ９３Ｌ、Ｎ９５Ｋ、Ｆ９７Ｙ、Ｆ９７Ｌ、Ｔ９８Ｐ、Ｆ９９Ｌ、Ａ１２６Ｔ、Ｖ１２９Ｄ、Ｐ１３１Ｓ、Ｉ１３６Ｔ、Ｉ１３６Ｖ、Ｈ１４３Ｒ、Ｔ１４４Ｉ、Ｉ１５４Ｖ、Ｎ１６４Ｄ、Ｔ１６６Ａ、Ｌ１７１Ｆ、Ｐ１７３Ｓ、Ｑ１７５Ｒ、Ｆ１８４（ａ）Ｌ、Ｑ１９２Ｈ、Ｓ２０１Ｉ、Ｑ２０９Ｌ、Ｄ２１７Ｖ、Ｑ２２１（ａ）Ｌ、Ｒ２３０Ｗ、Ｆ２３４Ｌ、およびＶ２４４Ｇから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１８に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２０】
ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性部分がＩ１３６Ｔ／Ｎ１６４Ｄ／Ｔ１６６Ａ／Ｆ１８４（Ａ）Ｌ／Ｄ２１７Ｖ；Ｉ４１Ｆ／Ａ１２６Ｔ／Ｖ２４４Ｇ；Ｄ２３Ｅ／Ｉ４１Ｆ／Ｔ９８Ｐ／Ｔ１４４Ｉ；Ｉ４１Ｆ／Ｌ１７１Ｆ／Ｖ２４４Ｇ；Ｈ１４３Ｒ／Ｑ１７５Ｒ；Ｉ４１Ｆ／Ｉ１５４Ｖ／Ｖ２４４Ｇ；Ｉ１４１Ｆ／Ｌ５２Ｍ／Ｖ１２９Ｄ／Ｑ２２１（Ａ）Ｌ；Ｆ９７Ｙ／Ｉ１３６Ｖ／Ｑ１９２Ｈ／Ｓ２０１Ｉ；Ｈ７１Ｒ／Ｐ１３１Ｓ／Ｄ２１７Ｖ；Ｔ６５Ｋ／Ｆ９３Ｌ／Ｆ９７Ｙ／Ｄ２１７Ｖ；Ｉ４１Ｔ／Ｐ１７３Ｓ／Ｑ２０９ＬおよびＦ９７Ｌ／Ｆ２３４Ｌから選択されるアミノ酸置換を含む、請求項１６〜１９のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２１】
キモトリプシンのナンバリングに基づいたＴ６５Ｋ、Ｆ９７Ｙ、Ｆ９７Ｌ、Ｔ９８Ｐ、Ｆ９９Ｌ、Ｌ１７１Ｆ、Ｐ１７３Ｓ、Ｑ１９２Ｈ、およびＱ２２１（ａ）Ｌから選択される１個またはそれ以上のアミノ酸修飾を含み、それにより該突然変異を含まないＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドと比較して基質特異性または活性が改変されている、修飾マトリックスタイプセリンプロテアーゼＩ（ＭＴ−ＳＰ１）ポリペプチドまたはその触媒活性部分。
【請求項２２】
さらにアミノ酸置換Ｉ４１Ｆ、Ｉ４１Ｔ、Ｑ１７５ＲまたはＤ２１７Ｖを含む、請求項２１に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２３】
アミノ酸置換がＩ４１Ｆ／Ｌ１７１Ｆである、請求項２２に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２４】
修飾が、配列番号２５３に示すアミノ酸配列を有するＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドにあるか、または配列番号５０５に示すアミノ酸配列を有するＭＴ−ＳＰ１の触媒活性部分にある、請求項１６〜２３のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２５】
修飾がさらにキモトリプシンのナンバリングに基づいた配列番号２５３に示すＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドにおけるＣ１２２Ｓの改変に対応する改変を有するＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドにある、請求項１〜２４のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２６】
修飾が配列番号５０７または５１７に示すアミノ酸配列を有するＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドにある、請求項２５に記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２７】
ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドが配列番号２５３に示す野生型ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたは配列番号５０５に示すその触媒活性部分と８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上の配列同一性を示し；そして
該ポリペプチドが１個またはそれ以上の修飾を含む、
請求項１６〜２６のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２８】
修飾がＣ２補体タンパク質に対する特異性またはＣ２補体タンパク質に対する活性の一方または両方を高める、請求項１６〜２７のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性フラグメント。
【請求項２９】
配列番号５６８−６０９のいずれかに示すアミノ酸配列を有する、請求項１６〜２８のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性部分。
【請求項３０】
請求項１〜２９のいずれかに記載の修飾プロテアーゼまたはその触媒活性フラグメントを含む、医薬組成物。
【請求項３１】
医薬上許容される賦形剤をさらに含む、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
全身、経口、経鼻、経肺、限局的または局所的投与用に処方されている、請求項３０または３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
請求項３０〜３２のいずれかに記載の医薬組成物、該組成物投与装置および所望による投与説明書を含む、キット。
【請求項３４】
請求項１〜２９のいずれかに記載の修飾プロテアーゼまたはその触媒活性フラグメントをコードするヌクレオチド配列を含む、核酸分子。
【請求項３５】
請求項３４に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項３６】
請求項３３に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項３７】
ＶＥＧＦＲ−２が介在する疾患または状態の処置に使用するための、請求項８〜１１のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメントを含む医薬組成物。
【請求項３８】
ＶＥＧＦＲ−２が介在する疾患または状態の処置のための、請求項８〜１１のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメントを含む医薬組成物の使用。
【請求項３９】
処置される疾患または状態が脈管形成疾患である、請求項３７または３８に記載の医薬組成物または使用。
【請求項４０】
脈管形成疾患が癌、黄斑変性症、炎症、および糖尿病から選択される、請求項３９に記載の医薬組成物または使用。
【請求項４１】
さらに他の抗腫瘍剤を含む、請求項３７〜４０のいずれかに記載の医薬組成物または使用。
【請求項４２】
ｔ−ＰＡの投与により処置される疾患または状態の処置に使用するための、請求項１２〜１５のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメントを含む、医薬組成物。
【請求項４３】
ｔ−ＰＡにより処置される疾患または状態の処置のための、請求項１２〜１５のいずれかに記載の修飾ｕ−ＰＡポリペプチドまたはその触媒活性フラグメントを含む医薬組成物の使用。
【請求項４４】
疾患または状態が、動脈血栓症、静脈血栓症および血栓性塞栓症、虚血性卒中、後天的凝固障害、汎発性血管内凝固症候群、細菌感染症および歯周炎、および神経学的状態から選択される、請求項４２または４３に記載の医薬組成物または使用。
【請求項４５】
補体タンパク質Ｃ２が介在する疾患または状態の処置に使用するための、請求項１６〜２９のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性部分を含む、医薬組成物。
【請求項４６】
補体タンパク質Ｃ２が介在する疾患または状態の処置のための、請求項１６〜２９のいずれかに記載の修飾ＭＴ−ＳＰ１ポリペプチドまたはその触媒活性部分を含む医薬組成物の使用。
【請求項４７】
疾患または状態が、自己免疫疾患、敗血症、慢性関節リウマチ（ＲＡ）、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症（ＭＧ）、喘息、炎症性腸疾患、免疫複合体（ＩＣ）性急性炎症性組織損傷、アルツハイマー病（ＡＤ）、虚血−再灌流損傷、移植臓器の拒絶、黄斑変性、およびギラン−バレー症候群から選択される、請求項４５または４６に記載の医薬組成物または使用。
【請求項４８】
虚血−再灌流損傷が、心筋梗塞（ＭＩ）、卒中、血管形成術、冠動脈バイパス移植、心肺バイパス（ＣＰＢ）および血液透析から選択される事象または処置により誘発される、請求項４７に記載の医薬組成物または使用。
【図１】
【公開番号】特開２０１２−３４７０１（Ｐ２０１２−３４７０１Ａ）
【公開日】平成２４年２月２３日（２０１２．２．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２２１５４６（Ｐ２０１１−２２１５４６）
【出願日】平成２３年１０月６日（２０１１．１０．６）
【分割の表示】特願２００９−２９２８４１（Ｐ２００９−２９２８４１）の分割
【原出願日】平成１９年７月５日（２００７．７．５）
【出願人】（５０８１２１５９９）カタリスト・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド (7)
【氏名又は名称原語表記】ＣＡＴＡＬＹＳＴ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ， ＩＮＣ．
【出願人】（５０９００４６８６）トーリー・パインズ・インスティテュート・フォー・モレキュラー・スタディーズ (3)
【氏名又は名称原語表記】ＴＯＲＲＥＹ ＰＩＮＥＳ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＦＯＲ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＳＴＵＤＩＥＳ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年２月２３日（２０１２．２．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年１０月６日（２０１１．１０．６）
【分割の表示】特願２００９−２９２８４１（Ｐ２００９−２９２８４１）の分割
【原出願日】平成１９年７月５日（２００７．７．５）
【出願人】（５０８１２１５９９）カタリスト・バイオサイエンシーズ・インコーポレイテッド (7)
【氏名又は名称原語表記】ＣＡＴＡＬＹＳＴ ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥＳ， ＩＮＣ．
【出願人】（５０９００４６８６）トーリー・パインズ・インスティテュート・フォー・モレキュラー・スタディーズ (3)
【氏名又は名称原語表記】ＴＯＲＲＥＹ ＰＩＮＥＳ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＦＯＲ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＳＴＵＤＩＥＳ
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]