マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤
【課題】 天然抽出物を含有したマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を提供する。
【解決手段】 ウーロンチャを水、親水性有機溶媒の混合物で抽出処理して得られる抽出物がマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用を有することを利用する。
【解決手段】 ウーロンチャを水、親水性有機溶媒の混合物で抽出処理して得られる抽出物がマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用を有することを利用する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の真皮・表皮は、表皮細胞、繊維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン等の真皮細胞外マトリックスによって構成されており、若い皮膚においてはこれらの皮膚組織が恒常性を維持することにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【０００３】
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすることによって、真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるエラスチン、コラーゲン等の産生量が減少するとともに、変性や分解を引き起こす。その結果、角質は以上剥離を始め、肌は張りや艶を失い、肌荒れやシワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワの形成、張りの消失、弾力性の低下等には、エラスチン、コラーゲン等の真皮細胞外マトリックス成分の減少、変性が関与している。
【０００４】
近年、皮膚の老化に伴う変化を誘導する因子として、マトリックス系プロテアーゼの関与が指摘されている。マトリックス系プロテアーゼの中でも、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）は、皮膚の真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンを分解する酵素として知られているが、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、コラーゲンの減少・変性の一因となり、皮膚のシワの形成、弾力性の低下等の大きな要因となると考えられている。
【０００５】
このような考えに基づき、ＭＭＰ−１阻害作用を有する物質を、安全性の点で有利な天然物より取得する試みがなされており、例えば、ニ葉松類の樹皮からの抽出物（特許文献１）、コロソリン酸（特許文献２）などに有効性が確認されている。
【０００６】
【特許文献１】特開２００３−３００８９３号
【特許文献２】特願２００６−３７１１４号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで本発明の目的は、安全性の高い天然物由来の物質の中から安定性や使用感にも優れた効果的なマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を提供することにある。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤が提供される。本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤は優れたマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用を有するだけでなく使用感にも優れているので、各種化粧品や飲食品に配合して使用するのに好適なものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明が提供することに成功したマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤は、ウーロンチャからの抽出物を有効成分としてなるものである。
【００１０】
ここで言う植物抽出物、ウーロンチャとはツバキ科植物チャノキ（学名：Ｔｈｅａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の葉を半発酵したものを用いたものである。
【００１１】
ウーロンチャからの抽出物を有効成分とするマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を製造する場合、有効成分の抽出には水または含水アルコールを用いる。含水アルコールを使用する場合におけるアルコールとしては、メタノール、エタノール等の低級脂肪族アルコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコールが好適であり、含水率は約３０〜５０％のものが適当である。
【００１２】
抽出方法には特殊なものは不要であり、室温ないし還流加熱下に、任意の装置を用いて抽出することが出来る。簡単には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、ときどき攪拌しながら可溶性成分を抽出させる。得られた抽出液を濃縮すると、濃い茶褐色の濃縮液（エキス）が得られる。乾燥して粉末化することは困難なので、通常はこのエキスをマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤に使用する。
【００１３】
得られた抽出液はそのままでもマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。また、抽出原料となる植物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００１４】
ウーロンチャからの抽出物は、そのままでもマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して提供することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーや、その他任意の助剤を添加することができる。
【００１５】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤は皮膚に適用した場合の安全性に優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。皮膚化粧料には、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤のみを配合してもよいし、その他の有効素材を組み合わせて配合してもよい。
【００１６】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を配合し得る皮膚化粧料は特に限定されないが、その具体例としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、入浴剤等を例示することができる。
【００１７】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤の配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は標準的な抽出物に換算して約０．０１〜１０質量％である。
【００１８】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を配合する皮膚化粧料には、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用の妨げにならない限り、皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他任意の助剤を配合することができ、本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤のみが主剤となるものに限られるわけではない。
【００１９】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤は安全性に優れているため、飲食品に配合するのに好適である。その場合の配合量は、添加対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して成人１日当たりの抽出物摂取量が約１〜１０００ｍｇになるようにするのが適当である。
【００２０】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を配合し得る飲食品は特に限定されないが、その具体例としては、 清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物などが挙げられる。
【００２１】
以上説明した本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００２２】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明する。なお、本発明の範囲はこれらの実施例等に限定されるものではない。
【００２３】
［製造例１］
ウーロンチャの粗粉砕物１００ｇに抽出溶媒として５０％エタノールを１０００ｍｌ加え、還流抽出器で８０℃にて２時間抽出し、濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮を行い、乾燥して該抽出物を得た。各抽出物の収率は表１に示す。
【００２４】
［表１］抽出物の収率
原料 ５０％エタノール（％）
ウーロンチャ ８．４
【００２５】
［試験例１］マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用試験
蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）で調整した試料溶液５０μＬ、０．４ｍｏｌ／Ｌのマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１，シグマ社製）溶液（溶媒：２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．１））５０μＬ、及び０．０１ｍｇ／ｍＬのＰｚ−ペプチド（ＢＡＣＨＥＭ Ｆｅｉｎｃｈｅｍｉｌａｌｉｅｎ ＡＧ社製）溶液（溶媒：２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．１））４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸１ｍｌを加え、反応を停止させた。
その後、酢酸エチル５ｍｌをさらに加えて、激しく振とうした。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、同様の方法により空試験を行った。得られた結果から、次式に基づき、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害率（％）を算出した。
ＭＭＰ−１阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
式中、Ａは「試料無添加・酵素添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加・酵素無添加時の吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・酵素添加時の吸光度」を表し、Ｄは「試料添加・酵素無添加時の吸光度」を表す。
試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、マトリックスメタロプロテアーゼ−１の活性を５０％阻害する試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表２に示す。
【００２６】
［表２］
試 料 ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
ウーロンチャ・５０％エタノール抽出物 ８８．３
【技術分野】
【０００１】
本発明は、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の真皮・表皮は、表皮細胞、繊維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン等の真皮細胞外マトリックスによって構成されており、若い皮膚においてはこれらの皮膚組織が恒常性を維持することにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【０００３】
ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすることによって、真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるエラスチン、コラーゲン等の産生量が減少するとともに、変性や分解を引き起こす。その結果、角質は以上剥離を始め、肌は張りや艶を失い、肌荒れやシワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワの形成、張りの消失、弾力性の低下等には、エラスチン、コラーゲン等の真皮細胞外マトリックス成分の減少、変性が関与している。
【０００４】
近年、皮膚の老化に伴う変化を誘導する因子として、マトリックス系プロテアーゼの関与が指摘されている。マトリックス系プロテアーゼの中でも、マトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）は、皮膚の真皮細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンを分解する酵素として知られているが、その発現は紫外線の照射により大きく増加し、コラーゲンの減少・変性の一因となり、皮膚のシワの形成、弾力性の低下等の大きな要因となると考えられている。
【０００５】
このような考えに基づき、ＭＭＰ−１阻害作用を有する物質を、安全性の点で有利な天然物より取得する試みがなされており、例えば、ニ葉松類の樹皮からの抽出物（特許文献１）、コロソリン酸（特許文献２）などに有効性が確認されている。
【０００６】
【特許文献１】特開２００３−３００８９３号
【特許文献２】特願２００６−３７１１４号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで本発明の目的は、安全性の高い天然物由来の物質の中から安定性や使用感にも優れた効果的なマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を提供することにある。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤が提供される。本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤は優れたマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用を有するだけでなく使用感にも優れているので、各種化粧品や飲食品に配合して使用するのに好適なものである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明が提供することに成功したマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤は、ウーロンチャからの抽出物を有効成分としてなるものである。
【００１０】
ここで言う植物抽出物、ウーロンチャとはツバキ科植物チャノキ（学名：Ｔｈｅａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）の葉を半発酵したものを用いたものである。
【００１１】
ウーロンチャからの抽出物を有効成分とするマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を製造する場合、有効成分の抽出には水または含水アルコールを用いる。含水アルコールを使用する場合におけるアルコールとしては、メタノール、エタノール等の低級脂肪族アルコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコールが好適であり、含水率は約３０〜５０％のものが適当である。
【００１２】
抽出方法には特殊なものは不要であり、室温ないし還流加熱下に、任意の装置を用いて抽出することが出来る。簡単には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、ときどき攪拌しながら可溶性成分を抽出させる。得られた抽出液を濃縮すると、濃い茶褐色の濃縮液（エキス）が得られる。乾燥して粉末化することは困難なので、通常はこのエキスをマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤に使用する。
【００１３】
得られた抽出液はそのままでもマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。また、抽出原料となる植物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００１４】
ウーロンチャからの抽出物は、そのままでもマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して提供することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーや、その他任意の助剤を添加することができる。
【００１５】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤は皮膚に適用した場合の安全性に優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。皮膚化粧料には、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤のみを配合してもよいし、その他の有効素材を組み合わせて配合してもよい。
【００１６】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を配合し得る皮膚化粧料は特に限定されないが、その具体例としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、入浴剤等を例示することができる。
【００１７】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤の配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は標準的な抽出物に換算して約０．０１〜１０質量％である。
【００１８】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を配合する皮膚化粧料には、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用の妨げにならない限り、皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他任意の助剤を配合することができ、本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤のみが主剤となるものに限られるわけではない。
【００１９】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤は安全性に優れているため、飲食品に配合するのに好適である。その場合の配合量は、添加対象飲食品の一般的な摂取量を考慮して成人１日当たりの抽出物摂取量が約１〜１０００ｍｇになるようにするのが適当である。
【００２０】
本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤を配合し得る飲食品は特に限定されないが、その具体例としては、 清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物などが挙げられる。
【００２１】
以上説明した本発明のマトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００２２】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明する。なお、本発明の範囲はこれらの実施例等に限定されるものではない。
【００２３】
［製造例１］
ウーロンチャの粗粉砕物１００ｇに抽出溶媒として５０％エタノールを１０００ｍｌ加え、還流抽出器で８０℃にて２時間抽出し、濾過した。残渣について更に同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮を行い、乾燥して該抽出物を得た。各抽出物の収率は表１に示す。
【００２４】
［表１］抽出物の収率
原料 ５０％エタノール（％）
ウーロンチャ ８．４
【００２５】
［試験例１］マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害作用試験
蓋付試験管にて、２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌのトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．１）で調整した試料溶液５０μＬ、０．４ｍｏｌ／Ｌのマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１，シグマ社製）溶液（溶媒：２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．１））５０μＬ、及び０．０１ｍｇ／ｍＬのＰｚ−ペプチド（ＢＡＣＨＥＭ Ｆｅｉｎｃｈｅｍｉｌａｌｉｅｎ ＡＧ社製）溶液（溶媒：２０ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウムを含有する０．１ｍｏｌ／Ｌトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．１））４００μＬを混合し、３７℃にて３０分間反応させた後、２５ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸１ｍｌを加え、反応を停止させた。
その後、酢酸エチル５ｍｌをさらに加えて、激しく振とうした。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、酢酸エチル層の波長３２０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、同様の方法により空試験を行った。得られた結果から、次式に基づき、マトリックスメタロプロテアーゼ−１阻害率（％）を算出した。
ＭＭＰ−１阻害率（％）＝｛１−（Ｃ−Ｄ）／（Ａ−Ｂ）｝×１００
式中、Ａは「試料無添加・酵素添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加・酵素無添加時の吸光度」を表し、Ｃは「試料添加・酵素添加時の吸光度」を表し、Ｄは「試料添加・酵素無添加時の吸光度」を表す。
試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、マトリックスメタロプロテアーゼ−１の活性を５０％阻害する試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表２に示す。
【００２６】
［表２］
試 料 ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
ウーロンチャ・５０％エタノール抽出物 ８８．３
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウーロンチャからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）阻害剤。
【請求項１】
ウーロンチャからの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするマトリックスメタロプロテアーゼ−１（ＭＭＰ−１）阻害剤。
【公開番号】特開２００７−３０２６０４（Ｐ２００７−３０２６０４Ａ）
【公開日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−１３２５１５（Ｐ２００６−１３２５１５）
【出願日】平成１８年５月１１日（２００６．５．１１）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年５月１１日（２００６．５．１１）
【出願人】（５９１０８２４２１）丸善製薬株式会社 (239)
【Ｆターム（参考）】
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