モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤
【課題】食経験が豊富で安全性が高く、優れたモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制作用を有するモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤の提供。
【解決手段】オリーブ又はその抽出物を有効成分とするモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤。
【解決手段】オリーブ又はその抽出物を有効成分とするモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制に関する。
【背景技術】
【０００２】
トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）は、真核生物におけるエネルギーの主要な貯蔵形態であり、ＴＡＧの生合成には主に２つの経路が存在する。一つは、モノアシルグリセロール（ＭＡＧ）経路で、ＭＡＧとアシルＣｏＡがモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（以下、ＭＧＡＴと記す）の作用によりジアシルグリセロール（ＤＡＧ）となり、ＤＡＧはジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（以下、ＤＧＡＴと記す）の作用によりＴＡＧとなる。食事から摂取したＴＡＧは、消化管内において加水分解されて、小腸においてＭＡＧ経路によりＴＡＧへと再合成されて吸収される。
もう一つは、グリセロール−３−リン酸（Ｇ３Ｐ）経路で、Ｇ３ＰとアシルＣｏＡの反応によるリゾホスファチジン酸の生成と、それに続くアシル化と脱リン酸化によりＤＡＧが生じる。このＤＡＧはＭＡＧ経路と同様にＤＧＡＴによりＴＡＧへと変換される（非特許文献１）。
【０００３】
ＭＧＡＴとＤＧＡＴにはそれぞれ複数のアイソフォームが存在する。ＭＧＡＴはＭＧＡＴ１、ＭＧＡＴ２、ＭＧＡＴ３の３種類が存在することが知られている。ＭＧＡＴ１は、小腸、胃、腎臓、肝臓、脂肪組織など多くの組織で発現しているが、ＭＧＡＴ２とＭＧＡＴ３は小腸でのみ高発現している（非特許文献２、３、４）。一方、ＤＧＡＴは、ＤＧＡＴ１とＤＧＡＴ２が存在し、ＤＧＡＴ１は小腸をはじめ多くの組織で普遍的に発現しているが、ＤＧＡＴ２は肝臓において高い発現量を示すことが報告されている（非特許文献５、６）。
【０００４】
ＤＧＡＴ１については、ＤＧＡＴ１のノックアウトマウスにおいて、組織中のＴＡＧ含量の減少や、脂肪組織における脂質燃焼系遺伝子及び熱産生系遺伝子の発現亢進がみられ、さらにインスリンやレプチンに対する感受性が増加することが報告されている（非特許文献７、８）。
従って、このことからも、組織におけるＴＡＧ合成酵素であるＭＧＡＴ及びＤＧＡＴの発現を抑制することは、内臓脂肪の過剰蓄積、ひいてはメタボリックシンドロームの予防・改善にとって効果的であると考えられる。
【０００５】
ＭＧＡＴ及びＤＧＡＴの発現を経口的に摂取するもので抑制することができれば、メタボリックシンドロームの予防、改善をより簡便かつ効果的に行うことができると考えられる。実際、ホスホン酸ジエステル誘導体を有効性分として含有するＤＧＡＴ活性阻害剤（特許文献１）や、ＤＧＡＴ２をコードする核酸を標的としたオリゴヌクレオチドを用いたＤＧＡＴ２発現調節剤（特許文献２）などが知られている。
しかし、多くの人がより手軽に使用でき、かつ安全性の問題がないもの、と考えると食経験の豊富な食品がより好ましいと考えられるが、これまでにそのような例はほとんど報告されていない。
【０００６】
一方、オリーブは、モクセイ科オリーブ属に属する植物で、地中海地域をはじめとして広く栽培されている。その果実はオリーブ油の製造や、食用として全世界で幅広く利用されており、食経験は非常に豊富である。オリーブの果実には、ヒドロキシチロソール等のポリフェノール成分が含まれていることが知られている（非特許文献９、１０）。オリーブ抽出物や果実に含まれるポリフェノール成分は、抗動脈硬化作用（非特許文献１１）や高血圧抑制作用（非特許文献１２）、骨量減少抑制作用（非特許文献１３）等を有することが報告されている。また、オリーブ抽出物は、抗酸化作用、美白作用、皮膚の抗老化作用、抗腫瘍作用等を有することが報告されている（特許文献３）。
しかしながら、オリーブやオリーブ抽出物、及びそれらに含まれるポリフェノール成分が、ＭＧＡＴ及び／又ＤＧＡＴに対して如何なる影響を与えるかについてはこれまで報告されていなく、オリーブやその抽出物にＭＧＡＴ及び／又ＤＧＡＴ抑制作用があることは全く知られていない。
【特許文献１】特開２００４−６７６３５号広報
【特許文献２】特表２００７−５０２６１６号広報
【特許文献３】特開２００２−１８６４５３号公報
【非特許文献１】Prog Lipid Res, vol43, No.2, 134-176, 2004
【非特許文献２】Proc Natl Acad Sci U S A, Vol.99, No.13, 8512-8517, 2002
【非特許文献３】J Biol Chem, Vol.278, No.16, 13860-13866, 2003
【非特許文献４】J Biol Chem, Vol.278, No.16, 13611-13614, 2003
【非特許文献５】Proc Natl Acad Sci U S A, Vol.95, No.22, 13018-13023, 1998
【非特許文献６】J Biol Chem, Vol.276, No.42, 38870-38876, 2001
【非特許文献７】J Clin Invest, Vol.109, No.8, 1049-1055, 2002
【非特許文献８】Nat Genet, Vol.25, No.1, 87-90, 2000
【非特許文献９】J Agric Food Chem, vol.34, pp823-826, 1986
【非特許文献１０】J Agric Food Chem, vol.52， pp479-484， 2004
【非特許文献１１】Atherosclerosis， vol.188， No.1, pp35-42， 2006
【非特許文献１２】Int J Food Sci Nutr, vol.56, No.8, 613-620, 2005
【非特許文献１３】Clin Nutr, vol.25, No.5, 859-868, 2006
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、食経験が豊富で安全性が高く、優れたＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制作用を有するＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題に鑑み、食経験が豊富で安全性の高い天然物素材の中から有効成分の検索を行ったところ、オリーブ果実抽出物にＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制作用があることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、オリーブ又はその抽出物を有効成分とするＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤を提供するものである。
また、本発明は、モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤の製造のためのオリーブ又はその抽出物の使用を提供するものである。
また、本発明は、オリーブ又はその抽出物を乾燥物換算で０．０００１〜１０質量％含有するモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制用飲食品を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤は、食経験が豊富で安全性が高いオリーブ又はその抽出物を有効成分とするものであり、ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴを抑制するための医薬品、飲食品として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明において、オリーブとは、モクセイ科（Oleaceae）オリーブ属のオリーブ（Olea europaea）を意味する。オリーブの品種には、マンザニロ、ラ・タンシュ、ジェンティーレ・ディ・キエーティ、カザリーバ、ピクード、タジャスカ、コロネイキ、ペンドリーノ、ネバディロ・ブランコ、ミッション、ピクアル、オヒブランカ、アルベキナ、コルニカブラ、ゴルダル、フラントイオ、モロイオロ、レッチーノ、コラティーナ、アスコラーナ・テレナ等が知られているが、本発明においてはいずれの品種も使用することができる。
【００１２】
オリーブの使用部位としては、果実、果皮、種子、種皮、葉、茎、芽等が挙げられるが、主として果実を用いるのが好ましい。これらは、そのまま又は乾燥粉砕して用いることができる。
【００１３】
オリーブ抽出物としては、前記の使用部位、好ましくは果実を、そのままあるいは乾燥した後に適当な大きさに切断したり、粉砕加工したりしたものを抽出して得られる抽出エキスや果汁の他、さらに分離精製して得られるより活性の高い画分（成分）が包含される。例えば、オリーブの果実を圧搾し、得られた果汁を遠心分離により油層（オリーブオイル）と水層に分離し、得られた水層を噴霧乾燥することにより得られた粉末エキスを利用することができる。更に、得られた粉末エキスから有機溶剤等によりオリーブポリフェノールを濃縮、精製して用いることもできる。また、オリーブオイルを抽出溶剤を用いて処理し、オリーブオイル中に含まれる成分を分離精製したものを用いても良い。
【００１４】
前記の使用部位からの抽出は、室温又は加熱した状態で溶剤に含浸させるか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて行われる溶剤抽出の他に、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて抽出する方法、炭酸ガスを超臨界状態にして行う超臨界抽出法、あるいは圧搾して抽出物を得る圧搾法等を用いることができる。果汁等はそのまま噴霧乾燥等の処理をしたものを用いることもできる。
【００１５】
溶剤抽出に用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル等が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用でき、溶剤を変えて繰り返し行うことも可能である。このうち、水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等を用いるのが好ましく、水・エタノール混液を用いるのがより好ましい。
前記の使用部位からの抽出は、例えばオリーブ１質量部に対して１〜５０質量部の溶剤を用い、３〜１００℃で数時間〜数週間浸漬又は加熱還流するのが好ましい。
【００１６】
また、抽出物の分離精製手段としては、例えば、抽出物を活性炭処理、液液分配、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、ゲル濾過、精密蒸留等を挙げることができる。
【００１７】
本発明のオリーブ抽出物は、斯くして得られる抽出液や画分をそのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、或いは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。
【００１８】
オリーブには、ヒドロキシチロソール、及びこの配糖体等のオリーブポリフェノールや、チロソール及びその配糖体等のその他のフェノール化合物が含まれる。
本発明のオリーブ抽出物は、当該化合物を１種以上含有するものが好ましく、また、有効性及び食品配合時の色調、味等の観点から、不純物が少ないオリーブポリフェノールを２０質量％以上、好ましくは３０質量％以上、より好ましくは５０質量％以上、さらに好ましくは５０〜１００質量％含有するものが望ましい。
なお、本発明において、オリーブポリフェノール含有量は、ＯＤ２８０ｎｍを計測することにより求められ（J Chromatogr B Biomed Appl. 24;665(2):383-9.(1995)）、その含量をカテキン相当量として算出したものである。
チロソール、ヒドロキシチロソール又はこれらの配糖体を豊富に含むオリーブ抽出物としてはガルドネンク社（フランス）のオリーブポリフェノール(Olivex PHO6)等が挙げられる。
【００１９】
本発明のオリーブ又はその抽出物は、後記実施例に示すように、マウスを用いたオリーブ抽出物含有食の給餌試験において、肝臓のＭＧＡＴ１及びＤＧＡＴ１の遺伝子発現量の抑制が確認された。従って、オリーブ又はその抽出物は、ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴを抑制するために使用することができ、さらにＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤を製造するために使用することができる。当該ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤は、ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴを抑制するための、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品、飲食品として使用可能である。また、当該ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤は、ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴの抑制をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した医薬部外品等として使用することもできる。
【００２０】
ここで、本発明のＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤は、ＭＧＡＴ及びＤＧＡＴのいずれのアイソフォームをも対象とするものであるが、好ましくはＭＧＡＴ１、ＤＧＡＴ１を抑制するものが好ましい。
【００２１】
本発明のＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤を医薬品、医薬部外品として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与、又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。また、このような種々の剤型の製剤を調製するには、本発明のオリーブ又はその抽出物を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。また、これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口用液体製剤を調製する場合は、嬌味剤、緩衝剤、安定化剤等を加えて常法により製造することができる。
【００２２】
本発明のＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤を飲食品として用いる場合の形態としては、パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、ゼリー類、冷凍食品、アイスクリーム類、乳製品、飲料、スープ類、食用油等の各種食品の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。飲料としては、例えば、果汁飲料、炭酸飲料、茶系飲料、ニアウオーター、スポーツ飲料、乳飲料、アルコール飲料、清涼飲料等が挙げられる。また、飲料は、容器に充填した容器詰飲料とすることができる。
さらには調理用油や、調味料、マヨネーズ、ドレッシング、マーガリン等の油脂加工品類、パスタソース類等が挙げられる。
種々の形態の食品を調製するには、本発明のオリーブ又はその抽出物を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせてＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制用食品、ペットフード等として用いることが可能である。
【００２３】
これらのものに対するオリーブ又はその抽出物の配合量は、その使用形態により異なるが、飲食品の形態では、オリーブ又はその抽出物（乾燥物換算、以下同じ）は、通常０．０００１〜１０質量％、さらに０．００１〜５質量％、特に０．００２〜２質量％とするのが好ましい。例えば飲料の場合では、飲料中にオリーブ又はその抽出物は、０．００１〜０．５質量％、さらに０．００５〜０．２５質量％、特に０．０１〜０．１質量％とするのが好ましい。タブレット等の食品錠剤及び／又はカプセル剤の場合では、オリーブ又はその抽出物を０．１〜９５質量％、さらに１〜９０質量％、特に５〜５０質量％含有しているものが好ましい。パン類やケーキ類等の一般的な食品の場合では、オリーブ又はその抽出物を０．００１〜９５質量％、さらに０．００１〜１０質量％、さらに０．０１〜５質量％、特に０．０２〜３質量％含有しているものが好ましい。調理用油等の食用油や油脂加工品等の場合では、オリーブ抽出物を０．０１〜２質量％、さらに０．０２〜１．０質量％、特に０．０５〜０．５質量％含有しているものが好ましい。なお、オリーブ又はその抽出物は、溶解状態であっても、分散状態であっても良く、その存在状態は問わない。
【００２４】
上記以外の医薬品、例えば錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の場合には、オリーブ又はその抽出物（乾燥物換算）は、通常０．０１〜９５質量％、さらに５〜９０質量％、特に１０〜５０質量％とするのが好ましい。
【００２５】
本発明のＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤の投与量（有効摂取量）は、オリーブ又はその抽出物（乾燥物換算）として、一日あたり１〜５０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく、さらに５〜３０００ｍｇ／６０ｋｇ体重、特に１０〜２０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく、５０〜１０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが最も好ましい。
【００２６】
以下に本発明の代表的な試験例と実施例を示す。
【実施例】
【００２７】
試験例 オリーブ抽出物摂取によるＭＧＡＴ１及びＤＧＡＴ１発現抑制作用
オリーブ抽出物のＭＧＡＴ１及びＤＧＡＴ１発現抑制作用に対する評価を下記の通り行った。尚、オリーブ抽出物は、ガルドネンク社（フランス）のオリーブ果実ポリフェノールＰＨＯ６（Ｏｌｉｖｅｘ ＰＨＯ６）を用いた。
２１週齢のＳＡＭ−Ｐ１雄性マウスを、体重に差がないように対照食群、試験食群に群分けした（各群８匹）。
表１に示す配合で調製した対照食及び試験食を用いて１３週間飼育を行った。なお、この飼育期間中の餌の摂食量は群間で差は見られなかった。飼育試験の最終日に、体重測定を行った後に解剖を行い、肝臓を採取した。その後、肝臓よりＲＮＡ抽出試薬を用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、リアルタイムＰＣＲ法により脂肪合成関連遺伝子の発現解析を行った。ここでは、Ｍｏｎｏａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ Ｏ−ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ １（Ｍｏｇａｔ１）及びＤｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ Ｏ−ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ １（Ｄｇａｔ１）の発現量の解析を行った。反応に用いたプライマーは表２に示した。なお、各遺伝子の発現量は、ハウスキーピング遺伝子の一種である、Ａｃｉｄｉｃ Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｐ０（Ａｒｂｐ）の発現量を基準として補正を行い比較した。
【００２８】
【表１】
【００２９】
【表２】
【００３０】
肝臓中のＭｏｇａｔ１及びＤｇａｔ１の発現量を測定したところ、対照食群と比較して試験食群において有意に発現が抑制されていることが明らかとなった（図１）。
これらの結果から、オリーブ抽出物を摂取することによりＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴを抑制することができ、オリーブ抽出物は、ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤として有用であることが確認された。
【００３１】
実施例
ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤（１）〜（１１）を製造した。
（１）清涼飲料
表３に示した配合で、清涼飲料を製造した。
【００３２】
【表３】
【００３３】
（２）清涼飲料
表４に示した配合で、清涼飲料を製造した。
【００３４】
【表４】
【００３５】
（３）カプセル剤
表５に示す組成物（３００ｍｇ）をカプセル中に封入し、カプセル剤を製造した。
【００３６】
【表５】
【００３７】
（４）錠剤
表６に示す組成物（１錠＝２５０ｍｇ）を打錠し、錠剤を製造した。
【００３８】
【表６】
【００３９】
（５）顆粒剤
表７に示す組成物（１袋＝５００ｍｇ）を混合し顆粒剤を製造した。
【００４０】
【表７】
【００４１】
（６）食品
表８に示す組成物（１錠＝１０００ｍｇ）を打錠し、チュアブルタイプのタブレット食品を製造した。
【００４２】
【表８】
【００４３】
（７）スポーツ飲料
表９に示した配合及び条件で、本発明のスポーツ飲料を調製した。
【００４４】
【表９】
【００４５】
（８）食用油
表１０に示した組成で、調理用油を調製した。
【００４６】
【表１０】
【００４７】
（９）食用油
表１１に示した組成で、調理用油を調製した。
【００４８】
【表１１】
【００４９】
（１０）食用油
表１２に示した組成で、調理用油を調製した。
【００５０】
【表１２】
【００５１】
（１１）食用油
表１３に示した組成で、調理用油を調製した。
【００５２】
【表１３】
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】肝臓におけるトリアシルグリセロール合成系遺伝子であるＭｏｇａｔ１及びＤｇａｔ１の発現量を示したグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制に関する。
【背景技術】
【０００２】
トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）は、真核生物におけるエネルギーの主要な貯蔵形態であり、ＴＡＧの生合成には主に２つの経路が存在する。一つは、モノアシルグリセロール（ＭＡＧ）経路で、ＭＡＧとアシルＣｏＡがモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（以下、ＭＧＡＴと記す）の作用によりジアシルグリセロール（ＤＡＧ）となり、ＤＡＧはジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（以下、ＤＧＡＴと記す）の作用によりＴＡＧとなる。食事から摂取したＴＡＧは、消化管内において加水分解されて、小腸においてＭＡＧ経路によりＴＡＧへと再合成されて吸収される。
もう一つは、グリセロール−３−リン酸（Ｇ３Ｐ）経路で、Ｇ３ＰとアシルＣｏＡの反応によるリゾホスファチジン酸の生成と、それに続くアシル化と脱リン酸化によりＤＡＧが生じる。このＤＡＧはＭＡＧ経路と同様にＤＧＡＴによりＴＡＧへと変換される（非特許文献１）。
【０００３】
ＭＧＡＴとＤＧＡＴにはそれぞれ複数のアイソフォームが存在する。ＭＧＡＴはＭＧＡＴ１、ＭＧＡＴ２、ＭＧＡＴ３の３種類が存在することが知られている。ＭＧＡＴ１は、小腸、胃、腎臓、肝臓、脂肪組織など多くの組織で発現しているが、ＭＧＡＴ２とＭＧＡＴ３は小腸でのみ高発現している（非特許文献２、３、４）。一方、ＤＧＡＴは、ＤＧＡＴ１とＤＧＡＴ２が存在し、ＤＧＡＴ１は小腸をはじめ多くの組織で普遍的に発現しているが、ＤＧＡＴ２は肝臓において高い発現量を示すことが報告されている（非特許文献５、６）。
【０００４】
ＤＧＡＴ１については、ＤＧＡＴ１のノックアウトマウスにおいて、組織中のＴＡＧ含量の減少や、脂肪組織における脂質燃焼系遺伝子及び熱産生系遺伝子の発現亢進がみられ、さらにインスリンやレプチンに対する感受性が増加することが報告されている（非特許文献７、８）。
従って、このことからも、組織におけるＴＡＧ合成酵素であるＭＧＡＴ及びＤＧＡＴの発現を抑制することは、内臓脂肪の過剰蓄積、ひいてはメタボリックシンドロームの予防・改善にとって効果的であると考えられる。
【０００５】
ＭＧＡＴ及びＤＧＡＴの発現を経口的に摂取するもので抑制することができれば、メタボリックシンドロームの予防、改善をより簡便かつ効果的に行うことができると考えられる。実際、ホスホン酸ジエステル誘導体を有効性分として含有するＤＧＡＴ活性阻害剤（特許文献１）や、ＤＧＡＴ２をコードする核酸を標的としたオリゴヌクレオチドを用いたＤＧＡＴ２発現調節剤（特許文献２）などが知られている。
しかし、多くの人がより手軽に使用でき、かつ安全性の問題がないもの、と考えると食経験の豊富な食品がより好ましいと考えられるが、これまでにそのような例はほとんど報告されていない。
【０００６】
一方、オリーブは、モクセイ科オリーブ属に属する植物で、地中海地域をはじめとして広く栽培されている。その果実はオリーブ油の製造や、食用として全世界で幅広く利用されており、食経験は非常に豊富である。オリーブの果実には、ヒドロキシチロソール等のポリフェノール成分が含まれていることが知られている（非特許文献９、１０）。オリーブ抽出物や果実に含まれるポリフェノール成分は、抗動脈硬化作用（非特許文献１１）や高血圧抑制作用（非特許文献１２）、骨量減少抑制作用（非特許文献１３）等を有することが報告されている。また、オリーブ抽出物は、抗酸化作用、美白作用、皮膚の抗老化作用、抗腫瘍作用等を有することが報告されている（特許文献３）。
しかしながら、オリーブやオリーブ抽出物、及びそれらに含まれるポリフェノール成分が、ＭＧＡＴ及び／又ＤＧＡＴに対して如何なる影響を与えるかについてはこれまで報告されていなく、オリーブやその抽出物にＭＧＡＴ及び／又ＤＧＡＴ抑制作用があることは全く知られていない。
【特許文献１】特開２００４−６７６３５号広報
【特許文献２】特表２００７−５０２６１６号広報
【特許文献３】特開２００２−１８６４５３号公報
【非特許文献１】Prog Lipid Res, vol43, No.2, 134-176, 2004
【非特許文献２】Proc Natl Acad Sci U S A, Vol.99, No.13, 8512-8517, 2002
【非特許文献３】J Biol Chem, Vol.278, No.16, 13860-13866, 2003
【非特許文献４】J Biol Chem, Vol.278, No.16, 13611-13614, 2003
【非特許文献５】Proc Natl Acad Sci U S A, Vol.95, No.22, 13018-13023, 1998
【非特許文献６】J Biol Chem, Vol.276, No.42, 38870-38876, 2001
【非特許文献７】J Clin Invest, Vol.109, No.8, 1049-1055, 2002
【非特許文献８】Nat Genet, Vol.25, No.1, 87-90, 2000
【非特許文献９】J Agric Food Chem, vol.34, pp823-826, 1986
【非特許文献１０】J Agric Food Chem, vol.52， pp479-484， 2004
【非特許文献１１】Atherosclerosis， vol.188， No.1, pp35-42， 2006
【非特許文献１２】Int J Food Sci Nutr, vol.56, No.8, 613-620, 2005
【非特許文献１３】Clin Nutr, vol.25, No.5, 859-868, 2006
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、食経験が豊富で安全性が高く、優れたＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制作用を有するＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題に鑑み、食経験が豊富で安全性の高い天然物素材の中から有効成分の検索を行ったところ、オリーブ果実抽出物にＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制作用があることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、オリーブ又はその抽出物を有効成分とするＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤を提供するものである。
また、本発明は、モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤の製造のためのオリーブ又はその抽出物の使用を提供するものである。
また、本発明は、オリーブ又はその抽出物を乾燥物換算で０．０００１〜１０質量％含有するモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制用飲食品を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤は、食経験が豊富で安全性が高いオリーブ又はその抽出物を有効成分とするものであり、ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴを抑制するための医薬品、飲食品として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明において、オリーブとは、モクセイ科（Oleaceae）オリーブ属のオリーブ（Olea europaea）を意味する。オリーブの品種には、マンザニロ、ラ・タンシュ、ジェンティーレ・ディ・キエーティ、カザリーバ、ピクード、タジャスカ、コロネイキ、ペンドリーノ、ネバディロ・ブランコ、ミッション、ピクアル、オヒブランカ、アルベキナ、コルニカブラ、ゴルダル、フラントイオ、モロイオロ、レッチーノ、コラティーナ、アスコラーナ・テレナ等が知られているが、本発明においてはいずれの品種も使用することができる。
【００１２】
オリーブの使用部位としては、果実、果皮、種子、種皮、葉、茎、芽等が挙げられるが、主として果実を用いるのが好ましい。これらは、そのまま又は乾燥粉砕して用いることができる。
【００１３】
オリーブ抽出物としては、前記の使用部位、好ましくは果実を、そのままあるいは乾燥した後に適当な大きさに切断したり、粉砕加工したりしたものを抽出して得られる抽出エキスや果汁の他、さらに分離精製して得られるより活性の高い画分（成分）が包含される。例えば、オリーブの果実を圧搾し、得られた果汁を遠心分離により油層（オリーブオイル）と水層に分離し、得られた水層を噴霧乾燥することにより得られた粉末エキスを利用することができる。更に、得られた粉末エキスから有機溶剤等によりオリーブポリフェノールを濃縮、精製して用いることもできる。また、オリーブオイルを抽出溶剤を用いて処理し、オリーブオイル中に含まれる成分を分離精製したものを用いても良い。
【００１４】
前記の使用部位からの抽出は、室温又は加熱した状態で溶剤に含浸させるか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて行われる溶剤抽出の他に、水蒸気蒸留等の蒸留法を用いて抽出する方法、炭酸ガスを超臨界状態にして行う超臨界抽出法、あるいは圧搾して抽出物を得る圧搾法等を用いることができる。果汁等はそのまま噴霧乾燥等の処理をしたものを用いることもできる。
【００１５】
溶剤抽出に用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル等が挙げられ、これらは単独で又は２種以上を組み合わせて使用でき、溶剤を変えて繰り返し行うことも可能である。このうち、水、エタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等を用いるのが好ましく、水・エタノール混液を用いるのがより好ましい。
前記の使用部位からの抽出は、例えばオリーブ１質量部に対して１〜５０質量部の溶剤を用い、３〜１００℃で数時間〜数週間浸漬又は加熱還流するのが好ましい。
【００１６】
また、抽出物の分離精製手段としては、例えば、抽出物を活性炭処理、液液分配、カラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー、ゲル濾過、精密蒸留等を挙げることができる。
【００１７】
本発明のオリーブ抽出物は、斯くして得られる抽出液や画分をそのまま用いてもよく、適宜な溶媒で希釈した希釈液として用いてもよく、或いは濃縮エキスや乾燥粉末としたり、ペースト状に調製したものでもよい。
【００１８】
オリーブには、ヒドロキシチロソール、及びこの配糖体等のオリーブポリフェノールや、チロソール及びその配糖体等のその他のフェノール化合物が含まれる。
本発明のオリーブ抽出物は、当該化合物を１種以上含有するものが好ましく、また、有効性及び食品配合時の色調、味等の観点から、不純物が少ないオリーブポリフェノールを２０質量％以上、好ましくは３０質量％以上、より好ましくは５０質量％以上、さらに好ましくは５０〜１００質量％含有するものが望ましい。
なお、本発明において、オリーブポリフェノール含有量は、ＯＤ２８０ｎｍを計測することにより求められ（J Chromatogr B Biomed Appl. 24;665(2):383-9.(1995)）、その含量をカテキン相当量として算出したものである。
チロソール、ヒドロキシチロソール又はこれらの配糖体を豊富に含むオリーブ抽出物としてはガルドネンク社（フランス）のオリーブポリフェノール(Olivex PHO6)等が挙げられる。
【００１９】
本発明のオリーブ又はその抽出物は、後記実施例に示すように、マウスを用いたオリーブ抽出物含有食の給餌試験において、肝臓のＭＧＡＴ１及びＤＧＡＴ１の遺伝子発現量の抑制が確認された。従って、オリーブ又はその抽出物は、ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴを抑制するために使用することができ、さらにＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤を製造するために使用することができる。当該ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤は、ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴを抑制するための、ヒト若しくは動物用の医薬品、医薬部外品、飲食品として使用可能である。また、当該ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤は、ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴの抑制をコンセプトとし、必要に応じてその旨を表示した医薬部外品等として使用することもできる。
【００２０】
ここで、本発明のＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤は、ＭＧＡＴ及びＤＧＡＴのいずれのアイソフォームをも対象とするものであるが、好ましくはＭＧＡＴ１、ＤＧＡＴ１を抑制するものが好ましい。
【００２１】
本発明のＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤を医薬品、医薬部外品として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与、又は注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。また、このような種々の剤型の製剤を調製するには、本発明のオリーブ又はその抽出物を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。また、これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口用液体製剤を調製する場合は、嬌味剤、緩衝剤、安定化剤等を加えて常法により製造することができる。
【００２２】
本発明のＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤を飲食品として用いる場合の形態としては、パン類、ケーキ類、麺類、菓子類、ゼリー類、冷凍食品、アイスクリーム類、乳製品、飲料、スープ類、食用油等の各種食品の他、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。飲料としては、例えば、果汁飲料、炭酸飲料、茶系飲料、ニアウオーター、スポーツ飲料、乳飲料、アルコール飲料、清涼飲料等が挙げられる。また、飲料は、容器に充填した容器詰飲料とすることができる。
さらには調理用油や、調味料、マヨネーズ、ドレッシング、マーガリン等の油脂加工品類、パスタソース類等が挙げられる。
種々の形態の食品を調製するには、本発明のオリーブ又はその抽出物を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせてＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制用食品、ペットフード等として用いることが可能である。
【００２３】
これらのものに対するオリーブ又はその抽出物の配合量は、その使用形態により異なるが、飲食品の形態では、オリーブ又はその抽出物（乾燥物換算、以下同じ）は、通常０．０００１〜１０質量％、さらに０．００１〜５質量％、特に０．００２〜２質量％とするのが好ましい。例えば飲料の場合では、飲料中にオリーブ又はその抽出物は、０．００１〜０．５質量％、さらに０．００５〜０．２５質量％、特に０．０１〜０．１質量％とするのが好ましい。タブレット等の食品錠剤及び／又はカプセル剤の場合では、オリーブ又はその抽出物を０．１〜９５質量％、さらに１〜９０質量％、特に５〜５０質量％含有しているものが好ましい。パン類やケーキ類等の一般的な食品の場合では、オリーブ又はその抽出物を０．００１〜９５質量％、さらに０．００１〜１０質量％、さらに０．０１〜５質量％、特に０．０２〜３質量％含有しているものが好ましい。調理用油等の食用油や油脂加工品等の場合では、オリーブ抽出物を０．０１〜２質量％、さらに０．０２〜１．０質量％、特に０．０５〜０．５質量％含有しているものが好ましい。なお、オリーブ又はその抽出物は、溶解状態であっても、分散状態であっても良く、その存在状態は問わない。
【００２４】
上記以外の医薬品、例えば錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤の場合には、オリーブ又はその抽出物（乾燥物換算）は、通常０．０１〜９５質量％、さらに５〜９０質量％、特に１０〜５０質量％とするのが好ましい。
【００２５】
本発明のＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤の投与量（有効摂取量）は、オリーブ又はその抽出物（乾燥物換算）として、一日あたり１〜５０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく、さらに５〜３０００ｍｇ／６０ｋｇ体重、特に１０〜２０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく、５０〜１０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが最も好ましい。
【００２６】
以下に本発明の代表的な試験例と実施例を示す。
【実施例】
【００２７】
試験例 オリーブ抽出物摂取によるＭＧＡＴ１及びＤＧＡＴ１発現抑制作用
オリーブ抽出物のＭＧＡＴ１及びＤＧＡＴ１発現抑制作用に対する評価を下記の通り行った。尚、オリーブ抽出物は、ガルドネンク社（フランス）のオリーブ果実ポリフェノールＰＨＯ６（Ｏｌｉｖｅｘ ＰＨＯ６）を用いた。
２１週齢のＳＡＭ−Ｐ１雄性マウスを、体重に差がないように対照食群、試験食群に群分けした（各群８匹）。
表１に示す配合で調製した対照食及び試験食を用いて１３週間飼育を行った。なお、この飼育期間中の餌の摂食量は群間で差は見られなかった。飼育試験の最終日に、体重測定を行った後に解剖を行い、肝臓を採取した。その後、肝臓よりＲＮＡ抽出試薬を用いてｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、リアルタイムＰＣＲ法により脂肪合成関連遺伝子の発現解析を行った。ここでは、Ｍｏｎｏａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ Ｏ−ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ １（Ｍｏｇａｔ１）及びＤｉａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌ Ｏ−ａｃｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ １（Ｄｇａｔ１）の発現量の解析を行った。反応に用いたプライマーは表２に示した。なお、各遺伝子の発現量は、ハウスキーピング遺伝子の一種である、Ａｃｉｄｉｃ Ｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｐｈｏｓｐｈｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｐ０（Ａｒｂｐ）の発現量を基準として補正を行い比較した。
【００２８】
【表１】
【００２９】
【表２】
【００３０】
肝臓中のＭｏｇａｔ１及びＤｇａｔ１の発現量を測定したところ、対照食群と比較して試験食群において有意に発現が抑制されていることが明らかとなった（図１）。
これらの結果から、オリーブ抽出物を摂取することによりＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴを抑制することができ、オリーブ抽出物は、ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤として有用であることが確認された。
【００３１】
実施例
ＭＧＡＴ及び／又はＤＧＡＴ抑制剤（１）〜（１１）を製造した。
（１）清涼飲料
表３に示した配合で、清涼飲料を製造した。
【００３２】
【表３】
【００３３】
（２）清涼飲料
表４に示した配合で、清涼飲料を製造した。
【００３４】
【表４】
【００３５】
（３）カプセル剤
表５に示す組成物（３００ｍｇ）をカプセル中に封入し、カプセル剤を製造した。
【００３６】
【表５】
【００３７】
（４）錠剤
表６に示す組成物（１錠＝２５０ｍｇ）を打錠し、錠剤を製造した。
【００３８】
【表６】
【００３９】
（５）顆粒剤
表７に示す組成物（１袋＝５００ｍｇ）を混合し顆粒剤を製造した。
【００４０】
【表７】
【００４１】
（６）食品
表８に示す組成物（１錠＝１０００ｍｇ）を打錠し、チュアブルタイプのタブレット食品を製造した。
【００４２】
【表８】
【００４３】
（７）スポーツ飲料
表９に示した配合及び条件で、本発明のスポーツ飲料を調製した。
【００４４】
【表９】
【００４５】
（８）食用油
表１０に示した組成で、調理用油を調製した。
【００４６】
【表１０】
【００４７】
（９）食用油
表１１に示した組成で、調理用油を調製した。
【００４８】
【表１１】
【００４９】
（１０）食用油
表１２に示した組成で、調理用油を調製した。
【００５０】
【表１２】
【００５１】
（１１）食用油
表１３に示した組成で、調理用油を調製した。
【００５２】
【表１３】
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】肝臓におけるトリアシルグリセロール合成系遺伝子であるＭｏｇａｔ１及びＤｇａｔ１の発現量を示したグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オリーブ又はその抽出物を有効成分とするモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤。
【請求項２】
オリーブ抽出物がオリーブポリフェノールを２０質量％以上含有する請求項１記載のモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤。
【請求項３】
オリーブ抽出物が、ヒドロキシチロソール、チロソール及びこれらの配糖体から選ばれる１種以上を含有する請求項１又は２記載のモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤。
【請求項４】
モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤の製造のためのオリーブ又はその抽出物の使用。
【請求項５】
オリーブ又はその抽出物を乾燥物換算で０．０００１〜１０質量％含有するモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制用飲食品。
【請求項１】
オリーブ又はその抽出物を有効成分とするモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤。
【請求項２】
オリーブ抽出物がオリーブポリフェノールを２０質量％以上含有する請求項１記載のモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤。
【請求項３】
オリーブ抽出物が、ヒドロキシチロソール、チロソール及びこれらの配糖体から選ばれる１種以上を含有する請求項１又は２記載のモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤。
【請求項４】
モノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制剤の製造のためのオリーブ又はその抽出物の使用。
【請求項５】
オリーブ又はその抽出物を乾燥物換算で０．０００１〜１０質量％含有するモノアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ及び／又はジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ抑制用飲食品。
【図１】
【公開番号】特開２００９−２６３２５６（Ｐ２００９−２６３２５６Ａ）
【公開日】平成２１年１１月１２日（２００９．１１．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１１２６３９（Ｐ２００８−１１２６３９）
【出願日】平成２０年４月２３日（２００８．４．２３）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１１月１２日（２００９．１１．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年４月２３日（２００８．４．２３）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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