本発明は、Ｔｏｌｌ様レセプター４／ＭＤ−２レセプター複合体を認識するモノクローナル抗体、およびＴＬＲ４／ＭＤ２複合体ならびにＭＤ−２と複合体化してない場合のＴＬＲ４を認識するモノクローナル抗体を提供する。本発明は、さらに、治療剤としてモノクローナル抗体を用いる方法を提供する。また、本発明は、可溶性キメラ蛋白質、可溶性キメラ蛋白質を発現させ、精製する方法、およびスクリーニングアッセイにおいて、および抗体の産生において、可溶性キメラ蛋白質を治療剤として用いる方法も提供する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔｏｌｌ様レセプター４（ＴＬＲ４）／ＭＤ−２複合体に免疫特異的に結合する抗体であって、ここで該抗体は、１０μｇ／ｍｌの濃度においてヒトＴＬＲ４／ＭＤ−２をトランスフェクトされたＨＥＫ２９３細胞におけるリポ多糖（ＬＰＳ）誘導ＩＬ−８産生の５０％を超える阻害を示す、抗体。
【請求項２】
前記抗体が、ＴＬＲ４に複合体化していない場合、ＭＤ−２蛋白質に免疫特異的に結合しない、請求項１に記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体が、さらに、可溶性ＴＬＲ４に免疫特異的に結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体が、さらに、細胞表面のＴＬＲ４に免疫特異的に結合する、請求項１に記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項１に記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体が、ＤＳＹＩＨ（配列番号３）；ＷＴＤＰＥＮＶＮＳＩＹＤＰＲＦＱＧ（配列番号４）、ＧＹＮＧＶＹＹＡＭＤＹ（配列番号５）；ＤＹＷＩＥ（配列番号１３）；ＥＩＬＰＧＳＧＳＴＮＹＮＥＤＦＫＤ（配列番号１４）；ＥＥＲＡＹＹＦＧＹ（配列番号１５）；ＧＧＹＳＷＨ（配列番号２３）；ＹＩＨＹＳＧＹＴＤＦＮＰＳＬＫＴ（配列番号２４）；ＫＤＰＳＤＧＦＰＹ（配列番号２５）；ＴＹＮＩＧＶＧ（配列番号３３）；ＨＩＷＷＮＤＮＩＹＹＮＴＶＬＫＳ（配列番号３４）；およびＭＡＥＧＲＹＤＡＭＤＹ（配列番号３５）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体が、ＳＡＳＳＳＶＩＹＭＨ（配列番号８）；ＲＴＹＮＬＡＳ（配列番号９）；ＨＱＷＳＳＦＰＹＴ（配列番号１０）；ＲＳＳＱＳＬＥＮＳＮＧＮＴＹＬＮ（配列番号１８）；ＲＶＳＮＲＦＳ（配列番号１９）；ＬＱＶＴＨＶＰＰＴ（配列番号２０）；ＲＡＳＱＳＩＳＤＨＬＨ（配列番号２８）；ＹＡＳＨＡＩＳ（配列番号２９）；ＱＮＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号３０）；ＲＡＳＱＤＩＴＮＹＬＮ（配列番号３８）；ＹＴＳＫＬＨＳ（配列番号３９）；およびＱＱＧＮＴＦＰＷＴ（配列番号４０）のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む、３つのＣＤＲを有する軽鎖を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体が、ＤＳＹＩＨ（配列番号３）；ＷＴＤＰＥＮＶＮＳＩＹＤＰＲＦＱＧ（配列番号４）、ＧＹＮＧＶＹＹＡＭＤＹ（配列番号５）；ＤＹＷＩＥ（配列番号１３）；ＥＩＬＰＧＳＧＳＴＮＹＮＥＤＦＫＤ（配列番号１４）；ＥＥＲＡＹＹＦＧＹ（配列番号１５）；ＧＧＹＳＷＨ（配列番号２３）；ＹＩＨＹＳＧＹＴＤＦＮＰＳＬＫＴ（配列番号２４）；ＫＤＰＳＤＧＦＰＹ（配列番号２５）；ＴＹＮＩＧＶＧ（配列番号３３）；ＨＩＷＷＮＤＮＩＹＹＮＴＶＬＫＳ（配列番号３４）；およびＭＡＥＧＲＹＤＡＭＤＹ（配列番号３５）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する重鎖と、ＳＡＳＳＳＶＩＹＭＨ（配列番号８）；ＲＴＹＮＬＡＳ（配列番号９）；ＨＱＷＳＳＦＰＹＴ（配列番号１０）；ＲＳＳＱＳＬＥＮＳＮＧＮＴＹＬＮ（配列番号１８）；ＲＶＳＮＲＦＳ（配列番号１９）；ＬＱＶＴＨＶＰＰＴ（配列番号２０）；ＲＡＳＱＳＩＳＤＨＬＨ（配列番号２８）；ＹＡＳＨＡＩＳ（配列番号２９）；ＱＮＧＨＳＦＰＬＴ（配列番号３０）；ＲＡＳＱＤＩＴＮＹＬＮ（配列番号３８）；ＹＴＳＫＬＨＳ（配列番号３９）；およびＱＱＧＮＴＦＰＷＴ（配列番号４０）のアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含む３つのＣＤＲを有する軽鎖とを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体が、配列番号２、１２、２２および３２からなる群より選択される重鎖可変アミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体が、配列番号７、１７、２７および３７からなる群より選択される軽鎖可変アミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体が、配列番号２、１２、２２および３２からなる群より選択される重鎖可変アミノ酸配列と、配列番号７、１７、２７および３７からなる群より選択される軽鎖可変アミノ酸配列とを含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項１３】
異常なＴＬＲ４シグナル伝達に関連する病理の症状を軽減する方法であって、該方法は、そのような軽減が所望される被験体に、該被験体において該病理の症状を軽減するのに十分な量にて請求項１に記載の抗体を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１４】
前記被験体がヒトである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記異常なＴＬＲ４シグナル伝達に関連する病理の症状を軽減するのに十分な請求項１に記載の抗体の量が、ＬＰＳ誘導ＩＬ−８産生を低下させるのに十分な量である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記病理が、敗血症、ベンチレーター誘導肺損傷、急性炎症、慢性炎症、自己免疫疾患、および内因性可溶性ストレス因子によって誘導される障害からなる群より選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記慢性炎症が、アレルギー状態、または喘息に関連する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記病理が、炎症性腸障害またはアテローム性動脈硬化症である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
内因性可溶性ストレス因子によって誘導される前記障害が、変形性関節症または慢性関節リウマチである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記内因性可溶性ストレス因子が、Ｈｓｐ６０、フィブロネクチン、ヘパラン硫酸、ヒアルロナン、ｇｐ９６、β−ディフェンシン−２または界面活性剤プロテインＡである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１に記載の抗体とキャリアとを含む、薬学的組成物。
【請求項２２】
請求項１に記載の抗体を含む、キット。
【請求項２３】
ＭＤ−２アクセサリーポリペプチド、またはその生物学的に活性な誘導体をコードする核酸配列に結合されたＴＬＲ４ポリペプチド、またはその生物学的に活性な誘導体をコードする核酸配列を含む、ベクター。
【請求項２４】
請求項２２に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項２５】
Ｔｏｌｌ様レセプター４／ＭＤ−２（ＴＬＲ４／ＭＤ２）複合体に免疫特異的に結合する抗体を作製する方法であって、該方法は、請求項２４に記載の細胞の第一の投薬量を被験体に投与する工程を包含し、ここで該第一の投薬量は、該被験体において免疫応答を生じさせるのに十分である、方法。
【請求項２６】
前記細胞の第二の投薬量を前記被験体に投与する工程をさらに包含する方法であって、ここで該第二の投薬量は、該被験体において免疫応答を生じさせるのに十分である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
産生された抗体が、前記被験体においてＴＬＲ４／ＭＤ−２複合体によって媒介されるシグナル伝達を中和する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
ＭＤアクセサリーポリペプチドに作動可能に連結された、ｔｏｌｌ様レセプターポリペプチド、またはそのフラグメントを含む、単離されたキメラポリペプチド。
【請求項２９】
前記ＭＤアクセサリーポリペプチドが、ＭＤ−１またはＭＤ−２であって、前記ｔｏｌｌ様レセプターポリペプチドが、ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０およびＲＰ１０５からなる群より選択される、請求項２８に記載の単離されたキメラポリペプチド。
【請求項３０】
前記ｔｏｌｌ様レセプターポリペプチドが、該ｔｏｌｌ様レセプターの細胞外部分の少なくともフラグメントを含む、請求項２８に記載の単離されたキメラポリペプチド。
【請求項３１】
前記ｔｏｌｌ様レセプターポリペプチドが、リンカーによって前記ＭＤアクセサリーポリペプチドに作動可能に連結される、請求項２８に記載の単離されたキメラポリペプチド。
【請求項３２】
前記リンカーが、グリシン−セリンリンカーである、請求項３１に記載の単離されたキメラポリペプチド。
【請求項３３】
前記グリシン−セリンリンカーが、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ_３（ＧＧＧＧＳ_３）リンカーである、請求項３１に記載の単離されたキメラポリペプチド。
【請求項３４】
可溶性キメラ融合蛋白質を産生するための方法であって、該方法は、ｔｏｌｌ様レセプターポリペプチドをＭＤアクセサリーポリペプチドに結合させる工程を包含する、方法。
【請求項３５】
前記ＭＤアクセサリーポリペプチドが、ＭＤ−１またはＭＤ−２であって、前記ｔｏｌｌ様レセプターポリペプチドが、ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０およびＲＰ１０５からなる群より選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ｔｏｌｌ様レセプターポリペプチドが、リンカーによって前記ＭＤアクセサリーポリペプチドに作動可能に連結される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
前記リンカーが、グリシン−セリンリンカーである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
前記グリシン−セリンリンカーが、Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ_３（ＧＧＧＧＳ_３）リンカーである、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
ＭＤアクセサリーポリペプチド、またはその生物学的に活性な誘導体をコードする核酸配列に結合された、ｔｏｌｌ様レセプターポリペプチド、またはその生物学的に活性な誘導体をコードする核酸配列を含む、ベクター。
【請求項４０】
請求項３９に記載のベクターを含む、細胞。
【請求項４１】
可溶性キメラ融合蛋白質を産生するための方法であって、該方法は、ＭＤアクセサリーポリペプチドに結合されたｔｏｌｌ様レセプターポリペプチドを含む融合蛋白質の産生を可能とする条件下で、請求項４０に記載の細胞を培養する工程を包含する、方法。
【請求項４２】
前記ＭＤアクセサリーポリペプチドが、ＭＤ−１またはＭＤ−２であって、前記ｔｏｌｌ様レセプターポリペプチドが、ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０およびＲＰ１０５からなる群より選択される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ｔｏｌｌ様レセプターポリペプチドが、グリシン−セリンリンカーによって前記ＭＤアクセサリーポリペプチドに結合される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
異常なｔｏｌｌ様レセプター機能に関連する病理の症状を軽減する方法であって、該方法は、そのような軽減が所望される被験体に、該被験体において該症状を軽減するのに十分な量にて請求項２８に記載のポリペプチドを投与する工程を包含する、方法。
【請求項４５】
前記被験体がヒトである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記異常なｔｏｌｌ様レセプター機能に関連する病理の症状を軽減するのに十分な請求項２８に記載のポリペプチドの量が、前記被験体においてｔｏｌｌ様レセプターの活性化を低下させるのに十分な量である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４７】
前記病理が、敗血症、急性炎症、慢性炎症および自己免疫疾患からなる群より選択される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４８】
前記病理が関節炎である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
請求項２８に記載のポリペプチドに免疫特異的に結合する、抗体。
【請求項５０】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項４９に記載の抗体。
【請求項５１】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項４９に記載の抗体。
【請求項５２】
ｔｏｌｌ様レセプターに結合し、そしてｔｏｌｌ様レセプター活性を調節するリガンドをスクリーニングする方法であって、該方法は、
（ａ）請求項２８に記載のポリペプチドに起因する特性または機能を有するポリペプチドを提供する工程；
（ｂ）細胞を候補化合物を含む組成物と接触させる工程；および
（ｃ）該候補化合物が、該ポリペプチドに起因する特性または機能を変更するか否かを決定する工程
を包含し、それにより、該候補化合物の存在下における該ポリペプチドに起因する特性または機能の変更は、該候補化合物がｔｏｌｌ様レセプター活性を調節するリガンドであることを示す、方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４−１】

【図４−２】

【図４−３】

【図５−１】

【図５−２】

【図６−１】

【図６−２】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２−１】

【図１２−２】

【図１２−３】

【図１３−１】

【図１３−２】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７−１】

【図１７−２】

【図１８−１】

【図１８−２】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４−１】

【図２４−２】

【図２５−１】

【図２５−２】

【図２６】

【図２７】

【図２８Ａ】

【図２８Ｂ】

【図２８Ｃ】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【公表番号】特表２００７−５１７５０３（Ｐ２００７−５１７５０３Ａ）
【公表日】平成１９年７月５日（２００７．７．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４３６６５（Ｐ２００６−５４３６６５）
【出願日】平成１６年１２月１０日（２００４．１２．１０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００４／００４４３３
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６５０１５
【国際公開日】平成１７年７月２１日（２００５．７．２１）
【出願人】（５０６１９８５６２）
【Ｆターム（参考）】