光学活性な２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの製造方法
本発明は、２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンのエナンチオマー混合物を加水分解酵素の存在下でアシル化剤と反応させるトランス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン又はシス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンのエナンチオ選択的アシル化方法を提供する。本発明は、２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの光学活性なトランス立体異性体の製造方法にも関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トランス−又はシス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンのエナンチオ選択的アシル化方法、及び２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの光学活性なトランス立体異性体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くの場合、特定の光学活性異性体のみが治療活性を有しているので、光学活性な化合物は特に製薬業界において非常に大きな重要性を有している。よって、活性成分をエナンチオ選択的合成するための前駆体としての光学活性化合物に対する需要が増え続けている。新規な活性成分を合成するための主要構築ブロックの１つは光学活性なトランス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンである。
【０００３】
（特許文献１）は、エステルを加水分解酵素の存在下で反応させ、その後ヘテロ原子置換アミンのエナンチオ選択的にアシル化されたエナンチオマーを未反応エナンチオマーから分離することにより第１級及び第２級ヘテロ原子置換アミンのラセミ化合物を分割する方法を概説している。しかしながら、生成物のエナンチオマー純度はなお不満足である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第９６／２３８９４号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの実質的にエナンチオマー的に純粋なトランス及びシス立体異性体を製造するための効率的な方法を提供することである。この方法は特に、実質的にエナンチオマー的に純粋な（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンを特に少なくとも９９％ｅｅ、好ましくは少なくとも９９．５％ｅｅ、特に少なくとも９９．９％ｅｅのエナンチオマー純度で製造できるように意図されている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
驚くことに、光学活性な２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンが、エナンチオマーの混合物、特に前記アミンのラセミ化合物を加水分解酵素の存在下でエナンチオ選択的にＮ−アシル化することにより得られることが知見された。
【０００７】
さらに、それぞれのシス又はトランスエナンチオマーは、酸（例えば、カルボン酸、無機酸）を添加することによりその酸付加塩の形態で沈殿させた場合にかなり純粋な形態で得られることが知見された。
【０００８】
よって、本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
【０００９】
で表される化合物のトランス立体異性体又はシス立体異性体のエナンチオマーの混合物を、加水分解酵素の存在下でアシル化剤と反応させ、トランス又はシス立体異性体の１つのエナンチオマーが実質的にアシル化された形態で存在し、トランス又はシス立体異性体の他のエナンチオマーが実質的にアシル化されていない形態で存在している混合物を得る、トランス−又はシス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（Ｉ）をエナンチオ選択的にアシル化するための方法（方法Ａ）に関する。
【００１０】
本発明はさらに、式（（Ｒ，Ｒ）-Ｉ）及び／又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）
【化２】
【００１１】
で表される光学活性化合物の製造方法（方法Ｂ）に関し、その方法は
（ａ）上に定義した式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体のエナンチオマーの混合物（すなわち、化合物（（Ｒ，Ｒ）-Ｉ）及び（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）の混合物）を、加水分解酵素の存在下でアシル化剤と反応させ、化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の１つのエナンチオマーが実質的にアシル化された形態で存在し、化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の他のエナンチオマーが実質的にアシル化されていない形態で存在している混合物を得るステップ；
（ｂ）ステップ（ａ）で得た混合物から化合物（Ｉ）のトランス立体異性体のアシル化されていないエナンチオマーを除去するステップ；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得た化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の実質的にアシル化されたエナンチオマーを、対応する非アシル化エナンチオマーに加水分解するステップ；
を含む。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に記載されている本発明の方法の好ましい特徴及び実施形態は、各場合独立して、又は特に相互に組み合わせて適用する。
【００１３】
用語「トランス」及び「シス」は、本発明の関係においてシクロヘキシル環上の２つの置換基の相互の相対配置を示す。よって、表現「トランス立体異性体」は（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン及び（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンからなる。表現「シス立体異性体」は（Ｒ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン及び（Ｓ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンから構成される他のジアステレオマーからなる。
【００１４】
表現「エナンチオ選択的」は、相互の鏡像である考えられる反応生成物が、等しくない割合で形成される反応を指す。本発明の関係において、この表現は、所望のエナンチオマーが好ましくは少なくとも９５％ｅｅ、特に好ましくは少なくとも９６％ｅｅ、より好ましくは少なくとも９８％ｅｅ、さらにより好ましくは少なくとも９９％ｅｅ、特に少なくとも９９．５％ｅｅ、具体的には少なくとも９９．９％ｅｅで形成されている反応を表す。
【００１５】
表現「実質的にエナンチオマー的に純粋な」は、本発明の関係において少なくとも９５％ｅｅ、好ましくは少なくとも９６％ｅｅ、より好ましくは少なくとも９８％ｅｅ、さらにより好ましくは少なくとも９９％ｅｅ、特に少なくとも９９．５％ｅｅ、具体的には少なくとも９９．９％ｅｅのエナンチオマー純度を表す。
【００１６】
単位“％ｅｅ”はエナンチオマー過剰率を指し、よって光学純度とも称されるエナンチオマー純度の尺度である。これは、エナンチオマー混合物中の２つのエナンチオマーのモル比率の差から計算される。例えば、９５％ｅｅは、エナンチオマーの混合物中の主エナンチオマーの比率が９７．５％であり、その鏡像である化合物の比率が２．５％であることを意味する。
【００１７】
化合物（Ｉ）のトランス立体異性体をエナンチオ選択的にアシル化すると、好ましくは（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーが実質的にアシル化されていない形態で存在し、（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーが実質的にアシル化された形態で存在している混合物が生ずる。
【００１８】
表現「実質的にアシル化されていないエナンチオマー」は、このエナンチオマーの少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％、特に少なくとも９８％がアシル化されていない状況を指す。同様に、表現「実質的にアシル化されたエナンチオマー」は、このエナンチオマーの少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％、特に好ましくは少なくとも９８％がアシル化された形態であることを意味する。
【００１９】
対応して、表現「化合物（Ｉ）の実質的にアシル化されていない（Ｓ，Ｓ）エナンチオマー」は、化合物（Ｉ）の（Ｓ，Ｓ）のエナンチオマーの少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％、特に少なくとも９８％がアシル化されていないことを意味すると理解される。同様に、表現「化合物（Ｉ）の実質的にアシル化された（Ｒ，Ｒ）のエナンチオマー」は、化合物（Ｉ）の（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーの少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％、特に好ましくは少なくとも９８％がアシル化された形態であることを意味する。
【００２０】
本発明の方法において使用される加水分解酵素は、好ましくはプロテアーゼ、特にリパーゼである。これにより、化合物（Ｉ）のトランス立体異性体又はシス立体異性体、好ましくは化合物（Ｉ）のトランス立体異性体のそれぞれの２つのエナンチオマーの１つのみが選択的にＮ−アシル化（アミド化）される。化合物（Ｉ）の（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーが選択的にアミド化されることが特に好ましい。
【００２１】
加水分解酵素が微生物、特に細菌又は酵母から得られることが好ましい。組換え方法により得られ得る加水分解酵素も好適である。加水分解酵素は精製又は部分精製された形態で、又は微生物そのものの形態で使用され得る。微生物から加水分解酵素を獲得し、精製する方法は、例えば欧州特許出願公開第１１４９８４９号明細書又は欧州特許出願公開第１０６９１８３号明細書から当業者に公知である。加水分解酵素を精製形態で使用することが好ましい。
【００２２】
加水分解酵素は遊離（すなわち、天然形態）で使用しても、固定化してもよい。固定化酵素は不活性担体上に固定した酵素を意味する。適当な担体材料及びこの担体材料上に固定化される酵素は、欧州特許出願公開第１１４９８４９号明細書、欧州特許出願公開第１０６９１８３号明細書及び独国特許出願公開第１００１９３７７号明細書、並びにこれらの中で引用されている参考文献に開示されている。これらの刊行物の開示内容は参照により本明細書に組み入れる。適当な担体材料には、例えば粘土、粘土鉱物（例えば、カオリン、珪藻土、ペーライト、二酸化ケイ素、酸化アルミニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム）、セルロース粉末、アニオン性交換材料、合成ポリマー（例えば、ポリスチレン、アクリル樹脂、フェノール−ホルムアルデヒド樹脂、ポリウレタン、及びポリエチレンやポリプロピレンのようなポリオレフィン）が含まれる。担体材料は、通常担体結合酵素を作製するために微細な粒状形態で、好ましくは多孔質形態で使用される。担体材料の粒子サイズは通常５ｍｍ以下、特に２ｍｍ以下（グレーディング曲線）である。
【００２３】
好ましくは、リパーゼ（トリアシルグリセロールアシル加水分解酵素；ＥＣ３．１．１．３）が使用される。これらの中でも、バークホルデリア（Burkholderia）属又はシュードモナス（Pseudomonas）属の細菌から、あるいはカンジダ（Candida）属の酵母から得られるリパーゼが好ましい。
【００２４】
バークホルデリア種の例は、バークホルデリア・アンビファリア（Burkholderia ambifaria）（例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ-２４４株、ＣＣＵＧ４４３５６株、ＬＭＧ１９１８２株）；バークホルデリア・アンドロポゴニス（Burkholderia andropogonis）（例えば、ＡＴＣＣ２３０６１株、ＣＣＵＧ３２７７２株、ＣＦＢＰ２４２１株、ＣＩＰ１０５７７１株、ＤＳＭ９５１１株、ＩＣＭＰ２８０７株、ＪＣＭ１０４８７株、ＬＭＧ２１２９株、ＮＣＰＰＢ９３４株、ＮＲＲＬ Ｂ−１４２９６株）；バークホルデリア・カレドニカ（Burkholderia caledonica）（例えば、Ｗ５０Ｄ株、ＣＣＵＧ４２２３６株、ＣＩＰ１０７０９８株、ＬＭＧ１９０７６株）；バークホルデリア・カリベンシス（Burkholderia caribensis）（例えば、ＭＷＡＰ６４株、ＣＣＵＧ４２８４７株、ＣＩＰ１０６７８４株、ＤＳＭ１３２３６株、ＬＭＧ１８５３１株）；バークホルデリア・カリオフィリ（Burkholderia caryophylli）（例えば、ＡＴＣＣ２５４１８株、ＣＣＵＧ２０８３４株、ＣＦＢＰ２４２９株、ＣＦＢＰ３８１８株、ＣＩＰ１０５７７０株、ＤＳＭ５０３４１株、ＨＡＭＢＩ２１５９株、ＩＣＭＰ５１２株、ＪＣＭ９３１０株、ＪＣＭ１０４８８株、ＬＭＧ２１５５株、ＮＣＰＰＢ２１５１株）；バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）（例えば、Ｂａｌｌａｒｄ７１７株、７１７−ＩＣＰＢ２５株、ＡＴＣＣ２５４１６株、ＣＣＵＧ１２６９１株、ＣＣＵＧ１３２２６株、ＣＦＢＰ２２２７株、ＣＩＰ８０．２４株、ＤＳＭ７２８８株、ＨＡＭＢＩ１９７６株、ＩＣＭＰ５７９６株、ＩＦＯ１４０７４株、ＪＣＭ５９６４株、ＬＭＧ１２２２株、ＮＣＣＢ７６０４７、ＮＣＰＰＢ２９９３株、ＮＣＴＣ１０７４３株、ＮＲＲＬ Ｂ−１４８１０株）；バークホルデリア・ココベネナンス（Burkholderia cocovenenans）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６４株、ＣＦＢＰ４７９０株、ＤＳＭ１１３１８株、ＪＣＭ１０５６１株、ＬＭＧ１１６２６株、ＮＣＩＭＢ９４５０株）；バークホルデリア・フンゴルム（Burkholderia fungorum）（例えば、Ｃｒｏｉｚｅ Ｐ７６３−２株、ＣＣＵＧ３１９６１株、ＣＩＰ１０７０９６株、ＬＭＧ１６２２５株）；バークホルデリア・グラジオリ（Burkholderia gladioli）（例えば、ＡＴＣＣ１０２４８株、ＣＣＵＧ１７８２株、ＣＦＢＰ２４２７株、ＣＩＰ１０５４１０株、ＤＳＭ４２８５株、ＨＡＭＢＩ２１５７株、ＩＣＭＰ３９５０株、ＩＦＯ１３７００株、ＪＣＭ９３１１株、ＬＭＧ２２１６株、ＮＣＣＢ３８０１８株、ＮＣＰＰＢ１８９１株、ＮＣＴＣ１２３７８株、ＮＲＲＬ Ｂ-７９３株）；バークホルデリア・グラテイ（Burkholderia glathei）（例えば、ＡＴＣＣ２９１９５株、ＣＦＢＰ４７９株、ＣＩＰ１０５４２１株、ＤＳＭ５００１４株、ＪＣＭ１０５６３株、ＬＭＧ１４１９０株）；バークホルデリア・グルマエ（Burkholderia glumae）（例えば、ＡＴＣＣ３３６１７株、ＣＣＵＧ２０８３５株、ＣＦＢＰ４９００株、ＣＦＢＰ２４３０株、ＣＩＰ１０６４１８株、ＤＳＭ９５１２株、ＩＣＭＰ３６５５株、ＬＭＧ２１９６株、ＮＣＰＰＢ２９８１株、ＮＩＡＥＳ１１６９株）；バークホルデリア・グラミニス（Burkholderia graminis）（例えば、Ｃ４Ｄ１Ｍ株、ＡＴＣＣ７００５４４株、ＣＣＵＧ４２２３１株、ＣＩＰ１０６６４９株、ＬＭＧ１８９２４株）；バークホルデリア・クルリエンシス（Burkholderia kururiensis）（例えば、ＫＰ２３株、ＡＴＣＣ７００９７７株、ＣＩＰ１０６６４３株、ＤＳＭ１３６４６株、ＪＣＭ１０５９９株、ＬＭＧ１９４４７株）；バークホルデリア・マレイ（Burkholderia mallei）（例えば、ＡＴＣＣ２３３４４株、ＮＣＴＣ１２９３８株）；バークホルデリア・マルチボランス（Burkholderia multivorans）（例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−２４７株、ＣＣＵＧ３４０８０株、ＣＩＰ１０５４９５株、ＤＳＭ１３２４３株、ＬＭＧ１３０１０株、ＮＣＴＣ１３００７株）；バークホルデリア・ノリムベルゲンシス（Burkholderia norimbergensis）（例えば、Ｒ２株、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−６５株、ＣＣＵＧ３９１８８株、ＣＦＢＰ４７９２株、ＤＳＭ１１６２８株、ＣＩＰ１０５４６３株、ＪＣＭ１０５６５株、ＬＭＧ１８３７９株）；バークホルデリア・フェナジニウム（Burkholderia phenazinium）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６６株、ＣＣＵＧ２０８３６株、ＣＦＢＰ４７９３株、ＣＩＰ１０６５０２株、ＤＳＭ１０６８４株、ＪＣＭ１０５６４株、ＬＭＧ２２４７株、ＮＣＩＢ１１０２７株）；バークホルデリア・ピケッテイ（Burkholderia pikettii）（例えば、ＡＴＣＣ２７５１１株、ＣＣＵＧ３３１８株、ＣＦＢＰ２４５９株、ＣＩＰ７３．２３株、ＤＳＭ６２９７株、ＨＡＭＢＩ２１５８株、ＪＣＭ５９６９株、ＬＭＧ５９４２株、ＮＣＴＣ１１１４９株）；バークホルデリア・プランタリイ（Burkholderia plantarii）（例えば、ＡＺ８２０１株、ＡＴＣＣ４３７３３株、ＣＣＵＧ２３３６８株、ＣＦＢＰ３５７３株、ＣＦＢＰ３９９７株、ＣＩＰ１０５７６９株、ＤＳＭ９５０９株、ＩＣＭＰ９４２４株、ＪＣＭ５４９２株、ＬＭＧ９０３５株、ＮＣＰＰＢ３５９０株、ＮＩＡＥＳ１７２３株）；バークホルデリア・シュードマレイ（Burkholderia pseudomallei）（例えば、ＷＲＡＩＲ２８６株、ＡＴＣＣ２３３４３株、ＮＣＴＣ１２９３９株）；バークホルデリア・ピロシニア（Burkholderia pyrrocinia）（例えば、ＡＴＣＣ１５９５８株、ＣＦＢＰ４７９４株、ＣＩＰ１０５８７４株、ＤＳＭ１０６８５株、ＬＭＧ１４１９１株）；バークホルデリア・サッカリ（Burkholderia sacchari）（例えば、ＣＣＴ６７７１株、ＣＩＰ１０７２１１株、ＩＰＴ１０１株、ＬＭＧ１９４５０株）；バークホルデリア・ソラナセアルム（Burkholderia solanacearum）（例えば、Ａ．Ｋｅｌｍａｎ６０−１株、ＡＴＣＣ１１６９６株、ＣＣＵＧ１４２７２株、ＣＦＢＰ２０４７株、ＣＩＰ１０４７６２株、ＤＳＭ９５４４株、ＩＣＭＰ５７１２株、ＪＣＭ１０４８９株、ＬＭＧ２２９９株、ＮＣＡＩＭＢ．０１４５９株、ＮＣＰＰＢ３２５株、ＮＲＲＬ Ｂ−３２１２株）；バークホルデリア・スタビリス（Burkholderia stabilis）（例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−６７株、ＣＣＵＧ３４１６８株、ＣＩＰ１０６８４５株、ＬＭＧ１４２９４株、ＮＣＴＣ１３０１１株）；バークホルデリア・タイランデンシス（Burkholderia thailandensis）（例えば、Ｅ２６４株、ＡＴＣＣ７００３８８株、ＣＩＰ１０６３０１株、ＤＳＭ１３２７６株）；バークホルデリア・ウボネンシス（Burkholderia ubonensis）（例えば、ＥＹ３３８３株、ＣＩＰ１０７０７８株、ＮＣＴＣ１３１４７株）；バークホルデリア・バンディイ（Burkholderia vandii）（例えば、ＶＡ-１３１６株、ＡＴＣＣ５１５４５株、ＣＦＢＰ４７９５株、ＤＳＭ９５１０株、ＪＣＭ７９５７株、ＬＭＧ１６０２０株）；バークホルデリア・ベトナミエンシス（Burkholderia vietnamiensis）（例えば、ＴＶＶ７５株、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−２４８株、ＣＣＵＧ３４１６９株、ＣＦＢＰ４７９６株、ＣＩＰ１０５８７５株、ＤＳＭ１１３１９株、ＪＣＭ１０５６２株、ＬＭＧ１０９２９株）である。
【００２５】
シュードモナス種の例は、シュードモナス・アエルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）（例えば、ＡＴＣＣ１０１４５株、ＤＳＭ５００７１株）、シュードモナス・アガリシ（Pseudomonas agarici）（例えば、ＡＴＣＣ２５９４１株、ＤＳＭ１１８１０株）、シュードモナス・アルカリゲネス（Pseudomonas alcaligenes）（例えば、ＡＴＣＣ１４９０９株、ＤＳＭ５０３４２株）、シュードモナス・アミグダリ（Pseudomonas amygdali）（例えば、ＡＴＣＣ３３７６１４株、ＤＳＭ７２９８株）、シュードモナス・アングイリセプティカ（Pseudomonas anguiliseptica）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６０株、ＤＳＭ１２１１１株）、シュードモナス・アンチミクロビカ（Pseudomonas antimicrobica）（例えば、ＤＳＭ８３６１株、ＮＣＩＢ９８９８株、ＬＭＧ１８９２０株）、シュードモナス・アスプレニ（Pseudomonas aspleni）（例えば、ＡＴＣＣ２３８３５株、ＣＣＵＧ３２７７３株）、シュードモナス・オーランチアカ（Pseudomonas aurantiaca）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６３株、ＣＩＰ１０６７１０株）、シュードモナス・オーレオファシエンス（Pseudomonas aureofaciens）（例えば、ＡＴＣＣ１３９８５株、ＣＦＢＰ２１３３株）、シュードモナス・アベラナエ（Pseudomonas avellanae）（例えば、ＤＳＭ１１８０９株、ＮＣＰＰＢ３４８７株）、シュードモナス・アゾトフォルマンス（Pseudomonas azotoformans）（例えば、ＣＩＰ１０６７４４株、ＪＣＭ７７３３株）、シュードモナス・バレアリカ（Pseudomonas balearica）（例えば、ＤＳＭ６０８３株、ＣＩＰ１０５２９７株）、シュードモナス・ベイジェリンスキイ（Pseudomonas beijerinsckii）（例えば、ＡＴＣＣ１９３７２株、ＤＳＭ６０８３株）、シュードモナス・ベテリ（Pseudomonas beteli）（例えば、ＡＴＣＣ１９８６１株、ＣＦＢＰ４３３７株）、シュードモナス・ボレオポリス（Pseudomonas boreopolis）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６２株、ＣＩＰ１０６７１７株）、シュードモナス・カルボキシハイドロゲナ（Pseudomonas carboxyhydrogena）（例えば、ＡＴＣＣ２９９７８株、ＤＳＭ１０８３株）、シュードモナス・カリカパパイエ（Pseudomonas caricapapayae）（例えば、ＡＴＣＣ３３６１５株、ＣＣＵＧ３２７７５株）、シュードモナス・チコリ（Pseudomonas cichorii）（例えば、ＡＴＣＣ１０８５７株、ＤＳＭ５０２５９株）、シュードモナス・シシコラ（Pseudomonas cissicola）（例えば、ＡＴＣＣ３３６１６株、ＣＣＵＧ１８８３９株）、シュードモナス・シトロネロリス（Pseudomonas citronellolis）（例えば、ＡＴＣＣ１３６７４株、ＤＳＭ５０３３２株）、シュードモナス・コロナファシエンス（Pseudomonas coronafaciens）（例えば、ＤＳＭ５０２６１株、ＤＳＭ５０２６２株）、シュードモナス・コルガタ（Pseudomonas corrugata）（例えば、ＡＴＣＣ２９７３６株、ＤＳＭ７２２８株）、シュードモナス・ドウドロフィイ（Pseudomonas doudoroffii）（例えば、ＡＴＣＣ２７１２３株、ＤＳＭ７０２８株）、シュードモナス・エキノイデス（Pseudomonas echinoides）（例えば、ＡＴＣＣ１４８２０株、ＤＳＭ１８０５株）、シュードモナス・エロンガータ（Pseudomonas elongata）（例えば、ＡＴＣＣ１０１４４株、ＤＳＭ６８１０株）、シュードモナス・フィクセレクタエ（Pseudomonas ficuserectae）（例えば、ＡＴＣＣ３５１０４株、ＣＣＵＧ３２７７９株）、シュードモナス・フラベセンス（Pseudomonas flavescens）（例えば、ＡＴＣＣ５１５５５株、ＤＳＭ１２０７１株）、シュードモナス・フレクテンス（Pseudomonas flectens）（例えば、ＡＴＣＣ１２７７５株、ＣＦＢＢ３２８１株）、シュードモナス・フルオレセンス（Pseudomonas fluorescens）（例えば、ＡＴＣＣ１３５２５株、ＤＳＭ５００９０株）、シュードモナス・フラジ（Pseudomonas fragi）（例えば、ＡＴＣＣ４９７３株、ＤＳＭ３４５６株）、シュードモナス・フルバ（Pseudomonas fulva）（例えば、ＡＴＣＣ３１４１８株、ＣＩＰ１０６７６５株）、シュードモナス・フスコバギナエ（Pseudomonas fuscovaginae）（例えば、ＣＣＵＧ３２７８０株、ＤＳＭ７２３１株）、シュードモナス・ゲリジコラ（Pseudomonas gelidicola）（例えば、ＣＩＰ１０６７４８株）、シュードモナス・ゲニクラタ（Pseudomonas geniculata）（例えば、ＡＴＣＣ１９３７４株、ＬＭＧ２１９５株）、シュードモナス・グラセイ（Pseudomonas glathei）（例えば、ＡＴＣＣ２９１９５株、ＤＳＭ５００１４株）、シュードモナス・ハロフィラ（Pseudomonas halophila）（例えば、ＡＴＣＣ４９２４１株、ＤＳＭ３０５０株）、シュードモナス・ヒビシコラ（Pseudomonas hibiscicola）（例えば、ＡＴＣＣ１９８６７株、ＬＭＧ９８０株）、シュードモナス・フティエンシス（Pseudomonas huttiensis）（例えば、ＡＴＣＣ１４６７０株、ＤＳＭ１０２８１株）、シュードモナス・イナース（Pseudomonas iners）（例えば、ＣＩＰ１０６７４６株）、シュードモナス・ランセロタ（Pseudomonas lancelota）（例えば、ＡＴＣＣ１４６６９株、ＣＦＢＰ５５８７株）、シュードモナス・レモイグネイ（Pseudomonas lemoignei）（例えば、ＡＴＣＣ１７９８９株、ＤＳＭ７４４５株）、シュードモナス・ルンデンシス（Pseudomonas lundensis）（例えば、ＡＴＣＣ１９９６８株、ＤＳＭ６２５２株）、シュードモナス・ルテオラ（Pseudomonas luteola）（例えば、ＡＴＣＣ４３２７３株、ＤＳＭ６９７５株）、シュードモナス・マルギナリス（Pseudomonas marginalis）（例えば、ＡＴＣＣ１０８４４株、ＤＳＭ１３１２４株）、シュードモナス・メリアエ（Pseudomonas meliae）（例えば、ＡＴＣＣ３３０５０株、ＤＳＭ６７５９株）、シュードモナス・メンドシナ（Pseudomonas mendocina）（例えば、ＡＴＣＣ２５４１１株、ＤＳＭ５００１７株）、シュードモナス・ムシドレンス（Pseudomonas mucidolens）（例えば、ＡＴＣＣ４６８５株、ＣＣＵＧ１４２４株）、シュードモナス・モンテイリイ（Pseudomonas monteilli）（例えば、ＡＴＣＣ７００４７６株、ＤＳＭ１４１６４株）、シュードモナス・ノーティカ（Pseudomonas nautica）（例えば、ＡＴＣＣ２７１３２株、ＤＳＭ５０４１８株）、シュードモナス・ニトロレデュセンス（Pseudomonas nitroreducens）（例えば、ＡＴＣＣ３３６３４株、ＤＳＭ１４３９９株）、シュードモナス・オレオボランス（Pseudomonas oleovorans）（例えば、ＡＴＣＣ８０６２株、ＤＳＭ１０４５株）、シュードモナス・オリジハビタンス（Pseudomonas oryzihabitans）（例えば、ＡＴＣＣ４３２７２株、ＤＳＭ６８３５株）、シュードモナス・ペルツチノゲーナ（Pseudomonas pertucinogena）（例えば、ＡＴＣＣ１９０株、ＣＣＵＧ７８３２株）、シュードモナス・フェナジニウム（Pseudomonas phenazinium）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６６株、ＤＳＭ１０６８４株）、シュードモナス・ピクトルム（Pseudomonas pictorum）（例えば、ＡＴＣＣ２３３２８株、ＬＭＧ９８１株）、シュードモナス・シュードアルカリゲネス（Pseudomonas pseudoalcaligenes）（例えば、ＡＴＣＣ１７４４０株、ＤＳＭ５０１８８株）、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）（例えば、ＡＴＣＣ１２６３３株、ＤＳＭ２９１株）、シュードモナス・ピロチニア（Pseudomonas pyrrocinia）（例えば、ＡＴＣＣ１５９５８株、ＤＳＭ１０６８５株）、シュードモナス・レシノボランス（Pseudomonas resinovorans）（例えば、ＡＴＣＣ１４２３５株、ＣＣＵＧ２４７３株）、シュードモナス・ローデシアエ（Pseudomonas rhodesiae）（例えば、ＣＣＵＧ３８７３２株、ＤＳＭ１４０２０株）、シュードモナス・サッカロフィラ（Pseudomonas saccharophila）（例えば、ＡＴＣＣ１５９４６株、ＤＳＭ６５４株）、シュードモナス・サバスタノイ（Pseudomonas savastanoi）（例えば、ＡＴＣＣ１３５２２株、ＣＦＢＰ１６７０株）、シュードモナス・スピノサ（Pseudomonas spinosa）（例えば、ＡＴＣＣ１４６０６株）、シュードモナス・スタニエリ（Pseudomonas stanieri）（例えば、ＡＴＣＣ２７１３０株、ＤＳＭ７０２７株）、シュードモナス・ストラミナエ（Pseudomonas straminae）（例えば、ＡＴＣＣ３３６３６株、ＣＩＰ１０６７４５株）、シュードモナス・スツツェリ（Pseudomonas stutzeri）（例えば、ＡＴＣＣ１７５８８株、ＤＳＭ５１９０株）、シュードモナス・シンクサンタ（Pseudomonas synxantha）（例えば、ＡＴＣＣ９８９０株、ＣＦＢＰ５５９株１）、シュードモナス・シリンゲ（Pseudomonas syringae）（例えば、ＡＴＣＣ１９３１０株、ＤＳＭ６６９３株）、シュードモナス・シジギィ（Pseudomonas syzygii）（例えば、ＡＴＣＣ４９５４３株、ＤＳＭ７３８５株）、シュードモナス・タエトロレンス（Pseudomonas taetrolens）（例えば、ＡＴＣＣ４６８３株、ＣＦＢＰ５５９２株）、シュードモナス・トラシイ（Pseudomonas tolaasii）（例えば、ＡＴＣＣ３３６１８株、ＣＣＵＧ３２７８２株）、シュードモナス・ベロニイ（Pseudomonas veronii）（例えば、ＡＴＣＣ７００２７２株、ＤＳＭ１１３３１株）、シュードモナス・ビリディフラバ（Pseudomonas viridiflava）（例えば、ＡＴＣＣ１３２２３株、ＤＳＭ１１１２４株）、シュードモナス・ブルガリス（Pseudomonas vulgaris）、シュードモナス・ウィスコンシネンシス（Pseudomonas wisconsinensis）及びシュードモナ種ＤＳＭ８２４６である。これらの中で、バークホルデリア・グルマエ、バークホルデリア・プランタリイ、バークホルデリア・セパシア、シュードモナス・アエルギノーサ、シュードモナス・フルオレセンス、シュードモナス・フラジ、シュードモナス・ルテオラ、シュードモナス・ブルガリス、シュードモナス・ウィスコンシネンシス及びシュードモナス種ＤＳＭ８２４６由来のリパーゼが好ましい。シュードモナス種ＤＳＭ８２４６由来のリパーゼが特に好ましい。
【００２６】
カンジダ種の例は、カンジダ・アルボマルギナタ（Candida albomarginata）（例えば、ＤＳＭ７００１５株）、カンジダ・アンタルクティカ（Candida antarctica）（例えば、ＤＳＭ７０７２５株）、カンジダ・バカルム（Candida bacarum）（例えば、ＤＳＭ７０８５４株）、カンジダ・ボゴリエンス（Candida bogoriensis）（例えば、ＤＳＭ７０８７２株）、カンジダ・ボイジニイ（Candida boidinii）（例えば、ＤＳＭ７００２６株、７００２４株、７００３３株、７００３４株）、カンジダ・ボビナ（Candida bovina）（例えば、ＤＳＭ７０１５６株）、カンジダ・ブルムプティ（Candida brumptii）（例えば、ＤＳＭ７００４０株）、カンジダ・カカオイ（Candida cacaoi）（例えば、ＤＳＭ２２２６株）、カンジダ・カリオシリグニコラ（Candida cariosilignicola）（例えば、ＤＳＭ２１４８株）、カンジダ・カルメルシ（Candida chalmersii）（例えば、ＤＳＭ７０１２６株）、カンジダ・シフェリ（Candida ciferii）（例えば、ＤＳＭ７０７４９株）、カンジダ・シリンドラセア（Candida cylindracea）（例えば、ＤＳＭ２０３１株）、カンジダ・エルノビイ（Candida ernobii）（例えば、ＤＳＭ７０８５８株）、カンジダ・ファマタ（Candida famata）（例えば、ＤＳＭ７０５９０株）、カンジダ・フレイシュシイ（Candida freyschussii）（例えば、ＤＳＭ７００４７株）、カンジダ・フリエデリチイ（Candida friederichii）（例えば、ＤＳＭ７００５０株）、カンジダ・グラブラータ（Candida glabrata）（例えば、ＤＳＭ６４２５株、１１２２６株、７０６１４株、７０６１５株）、カンジダ・グイレルモンディ（Candida guillermondi）（例えば、ＤＳＭ１１９４７株、７００５１株、７００５２株）、カンジダ・ハエムロニイ（Candida haemulonii）（例えば、ＤＳＭ７０６２４株）、カンジダ・インコンスピクア（Candida inconspicua）（例えば、ＤＳＭ７０６３１株）、カンジダ・インゲンス（Candida ingens）（例えば、ＤＳＭ７００６８株、７００６９株）、カンジダ・インテルメディア（Candida intermedia）（例えば、ＤＳＭ７０７５３株）、カンジダ・ケフィール（Candida kefyr）（例えば、ＤＳＭ７００７３株、７０１０６株）、カンジダ・クルセイ（Candida krusei）（例えば、ＤＳＭ６１２８株、１１９５６株、７００７５株、７００７９株、７００８６株）、カンジダ・ラクチスコンデンシ（Candida lactiscondensi）（例えば、ＤＳＭ７０６３５株）、カンジダ・ランビカ（Candida lambica）（例えば、ＤＳＭ７００９０株、７００９５株）、カンジダ・リポリティカ（Candida lipolytica）（例えば、ＤＳＭ１３４５株、３２８６株、８２１８株、７０５６１株又は７０５６２株）、カンジダ・ルシタニアエ（Candida lusitaniae）（例えば、ＤＳＭ７０１０２株）、カンジダ・マセドニエンシス（Candida macedoniensis）（例えば、ＤＳＭ７０１０６株）、カンジダ・マグノリアエ（Candida magnoliae）（例えば、ＤＳＭ７０６３８株、７０６３９株）、カンジダ・メンブラナエファシエンス（Candida membranaefaciens）（例えば、ＤＳＭ７０１０９株）、カンジダ・ムルチゲムニス（Candida multigemnis）（例えば、ＤＳＭ７０８６２株）、カンジダ・ミコデルマ（Candida mycoderma）（例えば、ＤＳＭ７０１８４株）、カンジダ・ネモデンドラ（Candida nemodendra）（例えば、ＤＳＭ７０６４７株）、カンジダ・ニトラトフィラ（Candida nitratophila）（例えば、ＤＳＭ７０６４９株）、カンジダ・ノルベジカ（Candida norvegica）（例えば、ＤＳＭ７０８６２株）、カンジダ・パラプシロシス（Candida parapsilosis）（例えば、ＤＳＭ５７８４株、４２３７株、１１２２４株、７０１２５株、７０１２６株）、カンジダ・ペリキュローサ（Candida pelliculosa）（例えば、ＤＳＭ７０１３０株）、カンジダ・ピニ（Candida pini）（例えば、ＤＳＭ７０６５３株）、カンジダ・プロケリマ（Candida pulcherrima）（例えば、ＤＳＭ７０３３６株）、カンジダ・プニセア（Candida punicea）（例えば、ＤＳＭ４６５７株）、カンジダ・プスツラ（Candida pustula）（例えば、ＤＳＭ７０８６５株）、カンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）（例えば、ＤＳＭ７０７６１株）、カンジダ・サケ（Candida sake）（例えば、ＤＳＭ７０７６３株）、カンジダ・シルビコラ（Candida silvicola）（例えば、ＤＳＭ７０７６４株）、カンジダ・ソラニ（Candida solani）（例えば、ＤＳＭ３３１５株）、カンジダ（Candida）種（例えば、ＤＳＭ１２４７株）、カンジダ・スパンドベンシス（Candida spandovensis）（例えば、ＤＳＭ７０８６６株）、カンジダ・サクシフィラ（Candida succiphila）（例えば、ＤＳＭ２１４９株）、カンジダ・ウチリス（Candida utilis）（例えば、ＤＳＭ２３６１株、７０１６３株又は７０１６７株）、カンジダ・バリダ（Candida valida）（例えば、ＤＳＭ７０１６９株、７０１７８株、７０１７９株）、カンジダ・ベルサティリス（Candida versatilis）（例えば、ＤＳＭ６９５６株）、カンジダ・ビニ（Candida vini）（例えば、ＤＳＭ７０１８４株）及びカンジダ・ゼイラノイデス（Candida zeylanoides）（例えば、ＤＳＭ７０１８５株）である。
【００２７】
カンジダ属の酵母、特にカンジダ・アントラクティカ由来のリパーゼが本発明の方法において特に好ましく使用される。従って、本発明の方法の具体的実施形態では、カンジダ・アントラクティカ由来のＬｉｐａｓｅＢを使用する。このリパーゼの固定化形態、例えばアクリル樹脂上に固定化されているカンジダ・アントラクティカ由来のＬｉｐａｓｅＢが好ましく、これは“Ｎｏｖｏｚｙｍｅ４３５（登録商標）”の名前で市販されている。
【００２８】
本発明の方法のエナンチオ選択的アシル化において使用しようとする加水分解酵素の量は、加水分解酵素の種類及び酵素製剤の活性に依存する。反応に最適な酵素の量は簡単な予備検査により容易に確定され得る。通常、分離しようとするエナンチオマーの混合物１ミリモルあたり約１０００単位の加水分解酵素を使用する。
【００２９】
単位「ユニット」は加水分解酵素の活性を表し、規定の標準条件下で加水分解酵素により変換される基準化合物の量を指す。
【００３０】
本発明の方法で使用されるアシル化剤を、酸成分がカルボニル炭素原子の付近に電子豊富なヘテロ原子（例えば、フッ素原子、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択される）を有するものから選択することが好ましい。アシル化剤は好ましくはエステルである。アシル化剤を、酸成分がカルボニル炭素原子に対してα、β又はγ位に酸素−、窒素−、フッ素−又は硫黄−含有基を有しているエステルから選択することが特に好ましい。特に好ましいアシル化剤は、ヘテロ原子それ自体がカルボニル炭素原子に対してα、β又はγ位、特にα位に結合しているものである。
【００３１】
酸素含有基は例えばヒドロキシ基又はアルコキシ基である。窒素含有基は例えばアミノ基であり、硫黄含有基はチオール基（ＳＨ）又はアルキルチオ基であり得る。
【００３２】
エステルのアルコール成分は好ましくは直鎖状又は分岐状Ｃ１〜Ｃ１０アルコールから誘導され、前記アルコールは置換されていてもよいが、未置換であることが好ましい。しかしながら、アルコール成分を第２級アルコール、例えばイソプロパノール、２−ブタノール、２−又は３−ペンタノール等から誘導することが特に好ましい。具体的にはイソプロパノールから誘導する。
【００３３】
特に適当なエステルは、式（ＩＩＩ）
【化３】
【００３４】
［式中、
Ｒ１はＣ１〜Ｃ１０−アルキルであり、
Ｒ２は水素又はＣ１〜Ｃ１０−アルキルであり、
Ｒ３は水素、Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル、又は場合によりＮＨ２、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシもしくはハロゲンで置換されているフェニルであり、
ＡはＯ、Ｓ又はＮＲ４であり、好ましくはＯであり、
Ｒ４は水素、Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル、又は場合によりＮＨ２、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシもしくはハロゲンで置換されているフェニルであり、
ｎは０、１又は２である］
を有するものである。
【００３５】
Ｒ１は好ましくは直鎖状又は分岐状Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである。Ｒ１は特に第２級アルコールから誘導され、従って特に好ましく第３級炭素原子を介して結合しているＣ３〜Ｃ４−アルキル基、例えばイソプロピル又は２−ブチルである。Ｒ１は具体的にはイソプロピルである。
【００３６】
Ｒ２は好ましくは水素又はＣ１〜Ｃ４−アルキル、特に水素である。
【００３７】
Ｒ３は好ましくはＣ１〜Ｃ４−アルキル、特に好ましくはメチル又はエチル、具体的にはメチルである。
【００３８】
Ａは好ましくはＯである。
【００３９】
本発明の関係において、表現「Ｃ１〜Ｃ４−アルキル」は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチルを表す。
【００４０】
表現「Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル」は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルキル基である。その例は上記したＣ１-Ｃ４-アルキル基以外にペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、２−エチルヘキシル、ノニル、ネオノニル、デシル及びネオデシルである。
【００４１】
表現「Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ」は、酸素を介して連結している１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を表す。その例はメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ-ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ及びｔｅｒｔ−ブトキシである。
【００４２】
表現「Ｃ１〜Ｃ１０アルコール」は、少なくとも１個のヒドロキシ基で置換されている１〜１０個の炭素原子を有する脂肪族炭化水素を表す。Ｃ１〜Ｃ１０−アルコールは、好ましくはヒドロキシ基で置換されているアルカンを表す。その例はメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール、２−エチルヘキサノール、ノナノール及びデカノールである。
【００４３】
本発明の関係において、ハロゲンは好ましくはフッ素、塩素又は臭素、特に好ましくはフッ素又は塩素である。
【００４４】
本発明の方法のエナンチオ選択的アシル化において、アシル化される式（Ｉ）を有する化合物のエナンチオマーの量に基づいて好ましくは１〜３モル当量、特に好ましくは１〜２モル当量、より好ましくは１〜１．５モル当量、特に１〜１．２モル当量のアシル化剤を使用する。本明細書中、表現「モル当量」は、アシル化される化合物（Ｉ）のエナンチオマー１モルと反応し得るアシル化剤のカルボキシル基の数をモルで指す。従って、式（ＩＩＩ）を有するエステルを使用する場合、アシル化される式（Ｉ）を有する化合物のエナンチオマー１モルあたり好ましくは１〜３モル、特に好ましくは１〜２モル、より好ましくは１〜１．５モル、特に１〜１．２モルのエステルを使用する。あるいは、式（ＩＩＩ）を有するエステルを使用する場合、特にこの混合物がラセミ化合物の場合には、分離しようとするエナンチオマーの混合物１モルに基づいて０．５〜１．５モル、特に好ましくは０．５〜１モル、より好ましくは０．５〜０．７５モル、特に０．５〜０．６モルのエステルを使用する。
【００４５】
本発明の方法の好ましい実施形態では、方法Ａにおける反応及び方法Ｂのステップ（ａ）における反応は希釈せずに、すなわち水性又は有機溶媒を添加することなく実施する。
【００４６】
別の好ましい実施形態では、本発明の方法のアシル化を非水性反応媒体中で実施する。非水性反応媒体は、反応媒体の全重量に基づいて１重量％未満の水、好ましくは０．５重量％未満の水、特に好ましくは０．１重量％未満の水、特に０．０５重量％未満の水しか含んでいない反応媒体を意味する。この実施形態では、アシル化を好ましくは有機溶媒中で実施する。適当な溶媒の例は脂肪族及び脂環式炭化水素、好ましくは５〜８個の炭素原子を有するもの（例えば、ペンタン、シクロペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタン又はシクロオクタン）；ハロゲン化脂肪族炭化水素、好ましくは１又は２個の炭素原子を有するもの（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、ジクロロエタン又はテトラクロロエタン）；芳香族炭化水素（例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロペンゼン又はジクロロベンゼン）；脂肪族非環式及び環式エーテル、好ましくは４〜８個の炭素原子を有するもの（例えば、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、エチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトセヒドロフラン又はジオキサン）；あるいは上記した溶媒の混合物である。上記したエーテル及び芳香族炭化水素が特に好ましくは使用される。具体的にはトルエンが使用される。
【００４７】
式（Ｉ）で表される化合物とアシル化剤との反応は、通常使用する加水分解酵素の失活温度以下の反応温度、特に−１０℃以上の温度で起こる。特に好ましくは０〜８０℃、特に１０〜４０℃の範囲である。反応は具体的には室温で起こる。
【００４８】
例えば、式（Ｉ）で表される化合物のトランス又はシス立体異性体のエナンチオマーの混合物を加水分解酵素、アシル化剤及び適当ならば溶媒と、例えば攪拌又は振とうすることにより十分に混合することによって実施され得る。しかしながら、反応器（例えば、カラム）中に加水分解酵素を固定化し、その反応器にエナンチオマー混合物及びアシル化剤からなる混合物を流すこともできる。この目的で、所望の変換に達するまで混合物を反応器中に循環させることができる。この間、アシル化剤のカルボキシル基はエナンチオ選択的にアシル化される化合物（Ｉ）のエナンチオマーのアミドに逐次変換され、他のエナンチオマーは実質的に未変化のままである。アシル化は通常、混合物中に存在し、エナンチオ特異的にアシル化される化合物（Ｉ）のエナンチオマーに基づいて少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％、特に少なくとも９９％の変換率まで実施される。さらに、反応の進行、すなわち逐次のアミド形成は通常の方法、例えばガスクロマトグラフィー又はＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）により追跡され得る。
【００４９】
反応混合物は慣用の方法で、例えば適当ならば加水分解酵素を反応混合物から例えば濾過又は遠心により除去し、濾液又は遠心分離液から溶媒を除去した後、残渣を分離操作にかけることにより後処理され得る。
【００５０】
本発明の方法の具体的実施形態では、使用されるエナンチオマーの混合物はアミン（Ｉ）のラセミ化合物であるが、エナンチオマーの１つを多く含む混合物も同様に好適である。
【００５１】
化合物（Ｉ）のトランス又はシス異性体のエナンチオマーの混合物をエナンチオ選択的に反応させると、化合物（Ｉ）の実質的にアシル化されたエナンチオマー（すなわち、アミド）及び実質的にアシル化されていない反対のエナンチオマーが生ずる。ここに存在するアミンとアミドの混合物は慣用の方法により容易に分離され得る。適当な分離操作の例は抽出、蒸留、結晶化又はクロマトグラフィーである。アミン及びアミドを蒸留により分離することが好ましい。代替の好ましい分離方法では、有機溶媒中に溶解又は懸濁されている反応混合物を酸性塩形成剤と混合して、非アシル化エナンチオマーのアンモニウム塩を形成し、沈殿させる。次いで、このアンモニウム塩を化合物（Ｉ）の反対のエナンチオマーのアミドを含む上清から濾過又は遠心により分離し得る。適当な酸性塩形成剤は、例えばプロトン酸、特に無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸又は硝酸）、有機酸（例えば、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸又はｐ−トルエンスルホン酸）及びそのアルカリ金属塩であるが、酸、特に無機酸、具体的には塩酸又は硫酸が好ましい。酸を好ましくは非アシル化エナンチオマーの量に対してほぼ等モル量で、例えば非アシル化エナンチオマー１モルに基づいて０．９〜１．５モル、好ましくは１〜１．２モル、特に約１モルの量で使用する。硫酸のようなポリプロトン酸の場合のモル比は勿論酸中に存在する酸性プロトンの数に基づいている。
【００５２】
除去された化合物（Ｉ）の実質的にアシル化されていないエナンチオマーは、適当ならば当業者に公知の方法を用いてさらに精製してもよい。アシル化後除去される非アシル化エナンチオマーは特に（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）［すなわち、特に（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）は方法Ｂのステップ（ｂ）において得られる］である。
【００５３】
化合物（Ｉ）の実質的にアシル化されていないエナンチオマーが、本分離方法によりアンモニウム塩の形態で得られる場合は、アミンは適当な塩基を用いてアンモニウム塩から遊離される。適当な塩基の例は、アルカリ金属水酸化物（例えば、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム）、アルカリ土類金属水酸化物（例えば、水酸化カルシウム又は水酸化マグネシウム）、アルカリ金属又はアルカリ土類金属炭酸塩（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム又は炭酸カルシウム）である。好ましくはアルカリ水酸化物（例えば、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム）が使用される。中和は好ましくは水性媒体中で行う。アミンの単離を容易とするために、遊離された化合物が中性の形態であるように塩基を使用することが好ましい。得られた遊離アミンをその後所望により更なる精製ステップにかけてもよい。
【００５４】
本発明の方法においてエナンチオ選択的にアシル化された他のエナンチオマーは、アシル化で得られた化合物（Ｉ）の実質的にアシル化されたエナンチオマー、すなわち化合物（Ｉ）のアミドを加水分解してアシル官能基を除去して、化合物（Ｉ）の対応するエナンチオマーを生じさせることにより得られ得る。得られる生成物は、好ましくは（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）［すなわち、好ましくは（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）は方法Ｂのステップ（ｃ）で得られる］である。
【００５５】
この場合、加水分解は通常アミドの加水分解について公知の反応条件下で起こる。反応条件は、例えばいずれも参照により本明細書に組み入れる独国特許出願公開第１９５３４２０８号明細書；Organikum, VEB Deutscher Verlag der Wissenschaften, Berlin, 1988, 17th edition, p.419；又はJerry March, Advanced Organic Chemistry, 3rd edition, John Wiley and Sons, p.338以降に記載されている。アミンを与えるための加水分解は好ましくは塩基との反応により起こる。適当な塩基の例は、アルカリ金属水酸化物（例えば、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウム）、アルカリ土類金属水酸化物（例えば、水酸化カルシウム）、アルカリ金属及びアルカリ土類金属炭酸塩（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム及び炭酸カルシウム）、アンモニア、アミン（例えば、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン及びジイソプロピルエチルアミン）、又はアミノアルコール（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン及びトリエタノールアミン）である。上記したアルカリ金属水酸化物が特に好ましく使用され、適当ならばアミン又はアミノアルコールと組み合わせて使用される。
【００５６】
加水分解は水中、有機溶媒中、又は水と有機溶媒の混合物中で実施され得る。適当な有機溶媒はアルコール、好ましくは１〜３個の炭素原子を有するもの（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール又はイソプロパノール）；グリコール、特に２〜８個の炭素原子を有するもの（例えば、エチレングリコール、ジ−及びトリエチレングリコール）；アミン及びアミノアルコール（例えば、上記したアミン及びアミノアルコール）；並びに上記した溶媒の混合物及び上記した溶媒と水の混合物である。加水分解を高温で、例えば使用する溶媒の沸点で行うことが好ましい。
【００５７】
反応生成物を通常の方法により、例えば蒸留、昇華、抽出又はクロマトグラフィーにより精製してもよい。
【００５８】
例えばアシル化生成物を酸で加水分解したために化合物（Ｉ）の加水分解されたエナンチオマーがアンモニウム塩の形態で生じたならば、アミンを実質的にアシル化されていないエナンチオマーについて上記した適当な塩基を用いてアンモニウム塩から遊離させる。この場合も、適当ならば得られた遊離アミンをその後当業者に公知の更なる精製ステップにかけることができる。
【００５９】
また、化合物（Ｉ）の（Ｒ，Ｓ）及び（Ｓ，Ｒ）エナンチオマーを製造するためにシス立体異性体を使用することも同様に可能である。
【００６０】
本発明の方法の好ましい実施形態では、方法Ｂのステップ（ｂ）又は（ｃ）で得られた式（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）を有する光学活性化合物は、所望により化学純度及び／又は光学純度を向上させるために酸性塩形成剤を添加することによりそのアンモニウム塩に変換し（ステップ（ｄ））、そのまま単離し（ステップ（ｅ））、その後再び遊離塩基として単離する（ステップ（ｆ））。これらのステップは、ステップ（ｂ）及び（ｃ）で得たエナンチオマーの光学純度又は化学純度がまだ十分でないときに特に適当である。
【００６１】
塩形成を化合物（（Ｒ，Ｒ−Ｉ）又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）の酸付加塩の沈殿と一緒に起こすことが有利である。手順、特に酸性塩形成剤の選択に関して、実質的にアシル化されていないエナンチオマーの沈殿による分離（ステップ（ｂ））に関する記述が当てはまる。
【００６２】
この目的で、精製しようとするエナンチオマーを有機溶媒に導入し、その溶液に酸性塩形成剤を添加することが好ましい。無論、適当ならば溶媒中の酸性塩形成剤にエナンチオマーを添加することも可能であるが、第１の形態が好ましい。遊離塩基、すなわち精製しようとするエナンチオマー（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）のアミン形態を溶解し得るが、そのアンモニウム塩を本質的に溶解させない、すなわち多くとも５％、好ましくは多くとも２％、特に多くとも１％しか溶解させないように溶媒を選択することが好ましい。適当な溶媒の例は脂肪族及び脂環式炭化水素、好ましくは５〜８個の炭素原子を有するもの（例えば、ペンタン、シクロペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタン又はシクロオクタン）；ハロゲン化脂肪族炭化水素、好ましくは１又は２個の炭素原子を有するもの（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、ジクロロエタン又はテトラクロロエタン）；芳香族炭化水素（例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロベンゼン又はジクロロベンゼン）；脂肪族非環式及び環式エーテル、好ましくは４〜８個の炭素原子を有するもの（例えば、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、エチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン又はジオキサン）；上記した溶媒の混合物である。上記したエーテル及び芳香族炭化水素が特に好ましく使用される。具体的には、トルエンが使用される。
【００６３】
式（Ｉ）を有する化合物のアンモニウム塩を沈殿させる際に酸性塩形成剤を水溶液の形態で添加することが特に好ましい。無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸，硫酸、硝酸又はリン酸）の水溶液が好ましく使用される。塩酸が酸性塩形成剤として特に適当である。これは、水が存在しているにもかかわらず収率を無視できる程度しかロスせずに精製しようとするエナンチオマーのアンモニウム塩が選択的に沈殿するので驚くことである。
【００６４】
本発明の方法のこの具体的実施形態では、酸性塩形成剤と一緒に添加した水を再び当業者に公知の方法により完全又は部分的に除去することが有利であり得る。この目的のために、溶媒に応じて例えば共沸蒸留が適当である。
【００６５】
有利なことに、最終生成物が満たさなければならない仕様に応じて、反応混合物中の水含量により、沈殿から得られる式（Ｉ）で表される化合物の塩の純度及び収率に対し目標通りに影響を与えることが可能である。
【００６６】
形成されたアンモニウム塩は、沈殿した固体を除去するための一般的な慣用方法（例えば、濾過、沈降、遠心等）により単離されるが、この場合、場合により反応混合物中に存在する液相を予め除去してもよい。液相は、例えばデカント又は蒸留により除去され得る。所望により、除去されたアンモニウム塩を該塩が不溶性の溶媒を用いて洗浄又は消化するような更なる精製ステップにかけてもよい。
【００６７】
実質的にエナンチオマー的に純粋な化合物（Ｉ）は、沈殿した生成物を単離した後塩基で中和することによりそのアンモニウム塩から再び遊離され得る。ステップ（ｂ）についての適当な塩基についてなされた記述はここでも当てはまる。中和は特に水性ＮａＯＨ溶液中で起こる。
【００６８】
この好ましい実施形態によれば、実質的にエナンチオマー的に純粋な化合物（Ｉ）（特に、（Ｒ，Ｒ）−Ｉ及び（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）の光学純度及び化学純度をさらに向上させることができる。純度が余り低いために本発明の関係において実質的にエナンチオマー的に純粋な化合物（Ｉ）とは称されない式（Ｉ）を有する光学活性化合物の化学純度及び／又は光学純度もこのように向上させ得る。
【００６９】
この好ましい実施形態によれば、２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンエナンチオマーの化学純度及び光学純度をそれぞれ少なくとも９９％及び少なくとも９９％ｅｅ、好ましくは少なくとも９９．５％及び少なくとも９９．５％ｅｅ、特に少なくとも９９．９％及び少なくとも９９．９％ｅｅとすることができる。
【００７０】
化学純度及び／又は光学純度を向上させるために酸性塩形成剤を添加することによりアンモニウム塩の形態で化合物（Ｉ）を沈殿させると達成し得る収率は、出発化合物の化学純度及び光学純度、並びに出発物質から得られる生成物の所望純度に依存している。収率のロスは、単離しようとする両エナンチオマーの全量に基づいて好ましくは１５％未満、特に１０％未満である。
【００７１】
本発明の方法のさらに好ましい実施形態では、式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体は、
（ｉ）シクロヘキセンオキシド（エポキシシクロヘキサン）をアンモニアと反応させて、式（ＩＩ）：
【化４】
【００７２】
で表される化合物を得、次いで
（ｉｉ）式（ＩＩ）で表される化合物のトランス立体異性体を適当なベンジル化合物と反応させて、式（Ｉ）を有する化合物のトランス立体異性体を得るか、又は
（ｉｉｉ）式（ＩＩ）で表される化合物のシス及びトランス異性体の混合物を適当なベンジル化合物と反応させて、対応するシス−及びトランス−ベンジルエーテルの混合物を形成し（すなわち、化合物Ｉのトランス及びシス異性体の混合物を得）、この混合物から式（Ｉ）を有する化合物のトランス立体異性体を単離する、ことにより得られる。
【００７３】
本発明の関係においてステップ（ｉ）と称されるシクロヘキセンオキシドからのアミノシクロヘキサノールの製造は、例えばＳｃｈｌｉｃｈｔｅｒ及びＦｒａｈｍ（Arch. Pharm. (Weinheim), 326, 429-436 (1993)）により公表されている方法により実施され得る。この場合、水性３５〜４０％濃度のアンモニア溶液にシクロヘキセンオキシドを添加し、一晩攪拌し、溶液を蒸発乾固する。こうすると、反応は通常立体特異的に進行し、トランス−２−アミノシクロヘキサノールが選択的に生ずる。
【００７４】
化合物（ＩＩ）の対応するベンジルエーテルへの変換は、ステップ（ｉｉ）において化合物（ＩＩ）のトランス異性体を適当なベンジル化合物と反応させることにより起こる。適当なベンジル化合物は、例えばハロゲン化ベンジル（例えば、臭化ベンジル又は塩化ベンジル）である。反応は通常塩基の存在下で実施される。適当な塩基は上記したアルカリ金属及びアルカリ土類金属水酸化物、並びにアルカリ金属及びアルカリ土類金属炭酸塩である。このようにして得られるエナンチオマーの混合物は、適当ならば当業者に公知の方法により単離、精製され得る。蒸留及び抽出方法がこの目的で特に適している。
【００７５】
上記した反応シーケンスにより、通常ステップ（ｉ）では実質的に化合物（ＩＩ）のトランス立体異性体が生じ、その後のステップ（ｉｉ）では実質的に化合物（Ｉ）のトランス立体異性体、特に少なくとも９９％ｄｅのジアステレオマー過剰率を有するトランス立体異性体が生ずる。エナンチオマーの単離混合物は具体的には化合物（Ｉ）のトランスジアステレオマーのラセミ化合物である。しかしながら、ステップ（ｉ）の反応混合物がかなりの量、すなわちシス／トランス異性体の全重量に基づいて１％以上のシス異性体を含んでいるならば、適当な方法によりトランス異性体から除去することが好ましい。通常、ステップ（ｉ）からの反応混合物を分離方法にかける。すなわち、ステップ（ｉｉ）を実施する前のステップ（ｉ）の反応混合物はシス異性体を含有していない。しかしながら、ステップ（ｉ）で得た混合物をステップ（ｉｉｉ）にかけることも可能である。すなわち、まずシス／トランス混合物を適当なベンジル化合物と反応させた後、このベンジル化反応の反応混合物を分離する。ベンジル化反応の反応混合物は化合物Ｉのトランス及びシス異性体を含む。この混合物からトランス異性体を単離する。適当な及び好ましいベンジル化合物及びベンジル化反応条件に関しては、上記を参照されたい。適当な分離方法は当業者に公知であり、例えば抽出及びクロマトグラフィー方法を含む。
【００７６】
このようにして得た化合物（Ｉ）のトランス立体異性体を単離し、適当ならば例えばクロマトグラフィー、抽出又はアンモニウム塩としての沈殿により精製し得る。
【００７７】
本発明の方法により、化合物（Ｉ）の個々のエナンチオマーが非常に高い光学純度及び化学純度で、高い収率で得られ得る。具体的には、本発明の方法（Ｂ）により、（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンが好ましくは少なくとも９８％ｅｅ、特に好ましくは少なくとも９９％ｅｅ、より好ましくは少なくとも９９．５％ｅｅ、特に少なくとも９９．９％ｅｅのエナンチオマー過剰率（ｅｅ値）で得ることができる。対応する（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーのエナンチオマー純度は好ましくは少なくとも９７％ｅｅ、特に好ましくは少なくとも９８％ｅｅ、より好ましくは少なくとも９９％ｅｅ、さらにより好ましくは少なくとも９９．５％ｅｅ、特に少なくとも９９．９％ｅｅである。エナンチオマーの化学純度は好ましくは少なくとも９７％、特に好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％、さらにより好ましくは少なくとも９９．５％、特に少なくとも９９．９％である。
【００７８】
アミン（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）及び（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）のエナンチオマー過剰率は慣用の方法により、例えば比旋光度を測定することにより、又はキラル相を用いたクロマトグラフィー（例えば、キラルカラムを用いるＨＰＬＣ又はガスクロマトグラフィー）により求められ得る。
【実施例】
【００７９】
以下の非限定的実施例により本発明を説明する。
【００８０】
１．）エナンチオ選択的アシル化及びラセミ化合物分割
等部の（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン及び（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンからなるラセミトランス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（１５３７ｇ、７．４９モル）をイソプロピルメトキシアセテート（ＩＰＭＡ）（４２５ｇ、３．９７モル、０．５３当量）と混合し、１５℃に冷却した後、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ４３５（登録商標）（３０ｇ）を添加した。冷却浴を外した後、酵素がちょうど懸濁状態を維持するように攪拌速度を調節しながら反応溶液を一晩攪拌した。２０時間後、酵素を濾別し、フィルター上の残渣をトルエン（０．５ｌ）で洗浄し、真空（１５ミリバール）中５０℃の最高温度で濾液から揮発性成分を除去した。蒸留残渣をトルエン（２．５ｌ）に取り、温度が２０℃を越えないように注意しながら冷却しつつ１０％濃度の硫酸（約１．８ｌ）を添加することによってｐＨを１に調節した。水性相を分離し、トルエン（毎回２００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を１０％濃度の硫酸（１００ｍｌ）及び水（２００ｍｌ）で洗浄した。次いで、溶媒を減圧下で除去し、０．５ミリバール及び１８０℃の浴温度で蒸留残渣から低沸点成分を除去した。（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２−ベンジルオキシシクロヘキシル）メトキシアセトアミド（９２０ｇ、８９％）を残渣として、高粘性油状物として得た。高温シクロヘキサン及びｎ−ペンタンから再結晶して、生成物を結晶性固体（融点４５〜４８℃）として得た。ｅｅは＞９９．９％であった。（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーは抽出の合わせた水性相中に実質的に塩の形態で存在していた。
【００８１】
（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２−ベンジルオキシシクロヘキシル）メトキシアセトアミドの1H-NMR (400MHz,CDCl3): δ = 1.22 (m, 2H), 1.38 (m, 2H), 1.58-1.68 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 2.15 (m, 2H), 3.25 (m, 1H), 3.40 (s, 3H), 3.84 and 3.92 (JAB = 20Hz, 2H), 3.05 (m, 1H), 4.48 and 4.68 (JAB = 16Hz, 2H), 6.55 (s, broad, 1H), 7.22-7.40 (m, 5H)。
【００８２】
２．）エナンチオマーの単離
２．１）（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの単離
１で得た合わせた水性相をトルエン（２ｌ）と混合した。混合物を冷却することにより３０℃未満の温度に維持しながら水性ＮａＯＨ溶液（５０％濃度）を用いてｐＨを約１３に調節した。ガラスウールを介して濾過した後、水性相を分離し、トルエンで２回（毎回２００ｍｌ）抽出した。合わせた有機相を水（２００ｍｌ）で洗浄した。次いで、水性相を捨て、有機相の溶媒を回転蒸発器を用いて除去した。褐色油状物（９５０ｇ）を、溶媒残渣の他に主成分として８７％（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンを含む残渣として得た。減圧下で（０．５ミリバール／１００℃）蒸留して、（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（６５３ｇ，８５％）を９７％の化学純度及び９７．３％のｅｅで得た。
【００８３】
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ = 1.08-1.38 (m, 4H), 1.58-1.82 (m, 4H), 1.90 (m, 1H), 2.25 (m, 1H), 2.65 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 4.45 and 4.70 (JAB = 16Hz, 2H), 7.22-7.40 (m, 5H)。
【００８４】
２．２）（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの製造
（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２-ベンジルオキシシクロヘキシル）メトキシアセトアミド（１６８７ｇ、６．０８モル）をトリエタノールアミン（３００ｇ）で希釈し、攪拌しながら水性水酸化ナトリウム溶液（５０％濃度、７８０ｇ、９．７５モル）を添加した。混合物を１２０℃の内部温度まで加熱し、激しく攪拌した。７時間後、反応混合物を水（５００ｍｌ）で希釈した。室温まで冷却した後、トルエン（２ｌ）を添加し、相を相互に分離した。水性相を再びトルエン（２００ｍｌ）で抽出し、有機相を合わせ、合わせた有機相を水（２００ｍｌ）で洗浄した。水性相を除去した後、溶媒を回転蒸発器を用いて除去し、残渣を減圧下で（沸点：０．４〜０．５ミリバール下で１００℃）分別蒸留した。（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンは透明無色液体として１１２５ｇ（９０％）の収率で得た。ｅｅは＞９９．９％であった。
【００８５】
比旋光度［α］Ｄ＝−９６．８（メタノール中ｃ＝２）；１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーと同一であった。
【００８６】
３．）化学及び／又は光学純度の増加
以下の実施例は本発明の沈殿の高い効率を示すのに役立つ。
【００８７】
３．１）（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン塩酸塩の沈殿
９８．５％の化学純度及び８９．６％ｅｅの光学純度（（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーと混合して調節）を有する（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンをトルエン（９０ｍｌ）に導入し、攪拌しながら濃塩酸を添加した。添加完了後、混合物を還流加熱し、トルエンを充填した水トラップを介して留出物を反応容器に戻した。水の除去が完了したら、水トラップを還流冷却器に取り替え、イソプロパノール（１０ｍｌ）を添加した。室温まで冷却した後、沈殿した固体を濾過により単離し、冷トルエン（１０ｍｌ）で洗浄し、減圧下で乾燥した。（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの塩酸塩を１８２〜１８４℃の融点を有する無色固体（２０．１ｇ，８３％）として得た。水性水酸化ナトリウム溶液により遊離させた遊離２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンのサンプルは＞９９．９％の化学純度及び＞９９．９％ｅｅの光学純度を有していた。
【００８８】
３．２）（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン塩酸塩の沈殿
８５％ｅｅの光学純度（（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーと混合して調節）を有する（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンを用いて実施例３．１）の方法を適用すると、９５％ｅｅの光学純度を有する塩酸塩を８２．５％の収率で得た。
【００８９】
沈殿を繰り返すと、＞９９％ｅｅの生成物が得られた。
【００９０】
アンモニウム塩の比旋光度［α］Ｄ＝＋７８．８°（メタノール中ｃ＝２）。
【００９１】
塩酸塩の1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ = 1.05-1.38 (m=3H), 1.70 (m, 3H), 2.10 (m, 1H), 2.35 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 3.55 (m, 1H), 4.50 and 4.70 (JAB = 16Hz, 2H), 7.25- 7.50 (m, 5H), 8.50 (s, broad, 3H)。
【００９２】
３．３）（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン塩酸塩の沈殿
９６％の化学純度及び＞９９．９％ｅｅの光学純度を有する（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンから出発して、塩酸塩（３２４．３ｇ，８５％）を無色固体として得た。水性水酸化ナトリウム溶液により遊離させた遊離アミンのサンプルは＞９９．９％の化学純度及び＞９９．９％ｅｅの光学純度を有していた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、トランス−又はシス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンのエナンチオ選択的アシル化方法、及び２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの光学活性なトランス立体異性体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多くの場合、特定の光学活性異性体のみが治療活性を有しているので、光学活性な化合物は特に製薬業界において非常に大きな重要性を有している。よって、活性成分をエナンチオ選択的合成するための前駆体としての光学活性化合物に対する需要が増え続けている。新規な活性成分を合成するための主要構築ブロックの１つは光学活性なトランス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンである。
【０００３】
（特許文献１）は、エステルを加水分解酵素の存在下で反応させ、その後ヘテロ原子置換アミンのエナンチオ選択的にアシル化されたエナンチオマーを未反応エナンチオマーから分離することにより第１級及び第２級ヘテロ原子置換アミンのラセミ化合物を分割する方法を概説している。しかしながら、生成物のエナンチオマー純度はなお不満足である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第９６／２３８９４号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの実質的にエナンチオマー的に純粋なトランス及びシス立体異性体を製造するための効率的な方法を提供することである。この方法は特に、実質的にエナンチオマー的に純粋な（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンを特に少なくとも９９％ｅｅ、好ましくは少なくとも９９．５％ｅｅ、特に少なくとも９９．９％ｅｅのエナンチオマー純度で製造できるように意図されている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
驚くことに、光学活性な２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンが、エナンチオマーの混合物、特に前記アミンのラセミ化合物を加水分解酵素の存在下でエナンチオ選択的にＮ−アシル化することにより得られることが知見された。
【０００７】
さらに、それぞれのシス又はトランスエナンチオマーは、酸（例えば、カルボン酸、無機酸）を添加することによりその酸付加塩の形態で沈殿させた場合にかなり純粋な形態で得られることが知見された。
【０００８】
よって、本発明は、式（Ｉ）：
【化１】
【０００９】
で表される化合物のトランス立体異性体又はシス立体異性体のエナンチオマーの混合物を、加水分解酵素の存在下でアシル化剤と反応させ、トランス又はシス立体異性体の１つのエナンチオマーが実質的にアシル化された形態で存在し、トランス又はシス立体異性体の他のエナンチオマーが実質的にアシル化されていない形態で存在している混合物を得る、トランス−又はシス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（Ｉ）をエナンチオ選択的にアシル化するための方法（方法Ａ）に関する。
【００１０】
本発明はさらに、式（（Ｒ，Ｒ）-Ｉ）及び／又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）
【化２】
【００１１】
で表される光学活性化合物の製造方法（方法Ｂ）に関し、その方法は
（ａ）上に定義した式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体のエナンチオマーの混合物（すなわち、化合物（（Ｒ，Ｒ）-Ｉ）及び（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）の混合物）を、加水分解酵素の存在下でアシル化剤と反応させ、化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の１つのエナンチオマーが実質的にアシル化された形態で存在し、化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の他のエナンチオマーが実質的にアシル化されていない形態で存在している混合物を得るステップ；
（ｂ）ステップ（ａ）で得た混合物から化合物（Ｉ）のトランス立体異性体のアシル化されていないエナンチオマーを除去するステップ；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得た化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の実質的にアシル化されたエナンチオマーを、対応する非アシル化エナンチオマーに加水分解するステップ；
を含む。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に記載されている本発明の方法の好ましい特徴及び実施形態は、各場合独立して、又は特に相互に組み合わせて適用する。
【００１３】
用語「トランス」及び「シス」は、本発明の関係においてシクロヘキシル環上の２つの置換基の相互の相対配置を示す。よって、表現「トランス立体異性体」は（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン及び（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンからなる。表現「シス立体異性体」は（Ｒ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン及び（Ｓ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンから構成される他のジアステレオマーからなる。
【００１４】
表現「エナンチオ選択的」は、相互の鏡像である考えられる反応生成物が、等しくない割合で形成される反応を指す。本発明の関係において、この表現は、所望のエナンチオマーが好ましくは少なくとも９５％ｅｅ、特に好ましくは少なくとも９６％ｅｅ、より好ましくは少なくとも９８％ｅｅ、さらにより好ましくは少なくとも９９％ｅｅ、特に少なくとも９９．５％ｅｅ、具体的には少なくとも９９．９％ｅｅで形成されている反応を表す。
【００１５】
表現「実質的にエナンチオマー的に純粋な」は、本発明の関係において少なくとも９５％ｅｅ、好ましくは少なくとも９６％ｅｅ、より好ましくは少なくとも９８％ｅｅ、さらにより好ましくは少なくとも９９％ｅｅ、特に少なくとも９９．５％ｅｅ、具体的には少なくとも９９．９％ｅｅのエナンチオマー純度を表す。
【００１６】
単位“％ｅｅ”はエナンチオマー過剰率を指し、よって光学純度とも称されるエナンチオマー純度の尺度である。これは、エナンチオマー混合物中の２つのエナンチオマーのモル比率の差から計算される。例えば、９５％ｅｅは、エナンチオマーの混合物中の主エナンチオマーの比率が９７．５％であり、その鏡像である化合物の比率が２．５％であることを意味する。
【００１７】
化合物（Ｉ）のトランス立体異性体をエナンチオ選択的にアシル化すると、好ましくは（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーが実質的にアシル化されていない形態で存在し、（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーが実質的にアシル化された形態で存在している混合物が生ずる。
【００１８】
表現「実質的にアシル化されていないエナンチオマー」は、このエナンチオマーの少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％、特に少なくとも９８％がアシル化されていない状況を指す。同様に、表現「実質的にアシル化されたエナンチオマー」は、このエナンチオマーの少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％、特に好ましくは少なくとも９８％がアシル化された形態であることを意味する。
【００１９】
対応して、表現「化合物（Ｉ）の実質的にアシル化されていない（Ｓ，Ｓ）エナンチオマー」は、化合物（Ｉ）の（Ｓ，Ｓ）のエナンチオマーの少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％、特に少なくとも９８％がアシル化されていないことを意味すると理解される。同様に、表現「化合物（Ｉ）の実質的にアシル化された（Ｒ，Ｒ）のエナンチオマー」は、化合物（Ｉ）の（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーの少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％、特に好ましくは少なくとも９８％がアシル化された形態であることを意味する。
【００２０】
本発明の方法において使用される加水分解酵素は、好ましくはプロテアーゼ、特にリパーゼである。これにより、化合物（Ｉ）のトランス立体異性体又はシス立体異性体、好ましくは化合物（Ｉ）のトランス立体異性体のそれぞれの２つのエナンチオマーの１つのみが選択的にＮ−アシル化（アミド化）される。化合物（Ｉ）の（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーが選択的にアミド化されることが特に好ましい。
【００２１】
加水分解酵素が微生物、特に細菌又は酵母から得られることが好ましい。組換え方法により得られ得る加水分解酵素も好適である。加水分解酵素は精製又は部分精製された形態で、又は微生物そのものの形態で使用され得る。微生物から加水分解酵素を獲得し、精製する方法は、例えば欧州特許出願公開第１１４９８４９号明細書又は欧州特許出願公開第１０６９１８３号明細書から当業者に公知である。加水分解酵素を精製形態で使用することが好ましい。
【００２２】
加水分解酵素は遊離（すなわち、天然形態）で使用しても、固定化してもよい。固定化酵素は不活性担体上に固定した酵素を意味する。適当な担体材料及びこの担体材料上に固定化される酵素は、欧州特許出願公開第１１４９８４９号明細書、欧州特許出願公開第１０６９１８３号明細書及び独国特許出願公開第１００１９３７７号明細書、並びにこれらの中で引用されている参考文献に開示されている。これらの刊行物の開示内容は参照により本明細書に組み入れる。適当な担体材料には、例えば粘土、粘土鉱物（例えば、カオリン、珪藻土、ペーライト、二酸化ケイ素、酸化アルミニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カルシウム）、セルロース粉末、アニオン性交換材料、合成ポリマー（例えば、ポリスチレン、アクリル樹脂、フェノール−ホルムアルデヒド樹脂、ポリウレタン、及びポリエチレンやポリプロピレンのようなポリオレフィン）が含まれる。担体材料は、通常担体結合酵素を作製するために微細な粒状形態で、好ましくは多孔質形態で使用される。担体材料の粒子サイズは通常５ｍｍ以下、特に２ｍｍ以下（グレーディング曲線）である。
【００２３】
好ましくは、リパーゼ（トリアシルグリセロールアシル加水分解酵素；ＥＣ３．１．１．３）が使用される。これらの中でも、バークホルデリア（Burkholderia）属又はシュードモナス（Pseudomonas）属の細菌から、あるいはカンジダ（Candida）属の酵母から得られるリパーゼが好ましい。
【００２４】
バークホルデリア種の例は、バークホルデリア・アンビファリア（Burkholderia ambifaria）（例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ-２４４株、ＣＣＵＧ４４３５６株、ＬＭＧ１９１８２株）；バークホルデリア・アンドロポゴニス（Burkholderia andropogonis）（例えば、ＡＴＣＣ２３０６１株、ＣＣＵＧ３２７７２株、ＣＦＢＰ２４２１株、ＣＩＰ１０５７７１株、ＤＳＭ９５１１株、ＩＣＭＰ２８０７株、ＪＣＭ１０４８７株、ＬＭＧ２１２９株、ＮＣＰＰＢ９３４株、ＮＲＲＬ Ｂ−１４２９６株）；バークホルデリア・カレドニカ（Burkholderia caledonica）（例えば、Ｗ５０Ｄ株、ＣＣＵＧ４２２３６株、ＣＩＰ１０７０９８株、ＬＭＧ１９０７６株）；バークホルデリア・カリベンシス（Burkholderia caribensis）（例えば、ＭＷＡＰ６４株、ＣＣＵＧ４２８４７株、ＣＩＰ１０６７８４株、ＤＳＭ１３２３６株、ＬＭＧ１８５３１株）；バークホルデリア・カリオフィリ（Burkholderia caryophylli）（例えば、ＡＴＣＣ２５４１８株、ＣＣＵＧ２０８３４株、ＣＦＢＰ２４２９株、ＣＦＢＰ３８１８株、ＣＩＰ１０５７７０株、ＤＳＭ５０３４１株、ＨＡＭＢＩ２１５９株、ＩＣＭＰ５１２株、ＪＣＭ９３１０株、ＪＣＭ１０４８８株、ＬＭＧ２１５５株、ＮＣＰＰＢ２１５１株）；バークホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）（例えば、Ｂａｌｌａｒｄ７１７株、７１７−ＩＣＰＢ２５株、ＡＴＣＣ２５４１６株、ＣＣＵＧ１２６９１株、ＣＣＵＧ１３２２６株、ＣＦＢＰ２２２７株、ＣＩＰ８０．２４株、ＤＳＭ７２８８株、ＨＡＭＢＩ１９７６株、ＩＣＭＰ５７９６株、ＩＦＯ１４０７４株、ＪＣＭ５９６４株、ＬＭＧ１２２２株、ＮＣＣＢ７６０４７、ＮＣＰＰＢ２９９３株、ＮＣＴＣ１０７４３株、ＮＲＲＬ Ｂ−１４８１０株）；バークホルデリア・ココベネナンス（Burkholderia cocovenenans）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６４株、ＣＦＢＰ４７９０株、ＤＳＭ１１３１８株、ＪＣＭ１０５６１株、ＬＭＧ１１６２６株、ＮＣＩＭＢ９４５０株）；バークホルデリア・フンゴルム（Burkholderia fungorum）（例えば、Ｃｒｏｉｚｅ Ｐ７６３−２株、ＣＣＵＧ３１９６１株、ＣＩＰ１０７０９６株、ＬＭＧ１６２２５株）；バークホルデリア・グラジオリ（Burkholderia gladioli）（例えば、ＡＴＣＣ１０２４８株、ＣＣＵＧ１７８２株、ＣＦＢＰ２４２７株、ＣＩＰ１０５４１０株、ＤＳＭ４２８５株、ＨＡＭＢＩ２１５７株、ＩＣＭＰ３９５０株、ＩＦＯ１３７００株、ＪＣＭ９３１１株、ＬＭＧ２２１６株、ＮＣＣＢ３８０１８株、ＮＣＰＰＢ１８９１株、ＮＣＴＣ１２３７８株、ＮＲＲＬ Ｂ-７９３株）；バークホルデリア・グラテイ（Burkholderia glathei）（例えば、ＡＴＣＣ２９１９５株、ＣＦＢＰ４７９株、ＣＩＰ１０５４２１株、ＤＳＭ５００１４株、ＪＣＭ１０５６３株、ＬＭＧ１４１９０株）；バークホルデリア・グルマエ（Burkholderia glumae）（例えば、ＡＴＣＣ３３６１７株、ＣＣＵＧ２０８３５株、ＣＦＢＰ４９００株、ＣＦＢＰ２４３０株、ＣＩＰ１０６４１８株、ＤＳＭ９５１２株、ＩＣＭＰ３６５５株、ＬＭＧ２１９６株、ＮＣＰＰＢ２９８１株、ＮＩＡＥＳ１１６９株）；バークホルデリア・グラミニス（Burkholderia graminis）（例えば、Ｃ４Ｄ１Ｍ株、ＡＴＣＣ７００５４４株、ＣＣＵＧ４２２３１株、ＣＩＰ１０６６４９株、ＬＭＧ１８９２４株）；バークホルデリア・クルリエンシス（Burkholderia kururiensis）（例えば、ＫＰ２３株、ＡＴＣＣ７００９７７株、ＣＩＰ１０６６４３株、ＤＳＭ１３６４６株、ＪＣＭ１０５９９株、ＬＭＧ１９４４７株）；バークホルデリア・マレイ（Burkholderia mallei）（例えば、ＡＴＣＣ２３３４４株、ＮＣＴＣ１２９３８株）；バークホルデリア・マルチボランス（Burkholderia multivorans）（例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−２４７株、ＣＣＵＧ３４０８０株、ＣＩＰ１０５４９５株、ＤＳＭ１３２４３株、ＬＭＧ１３０１０株、ＮＣＴＣ１３００７株）；バークホルデリア・ノリムベルゲンシス（Burkholderia norimbergensis）（例えば、Ｒ２株、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−６５株、ＣＣＵＧ３９１８８株、ＣＦＢＰ４７９２株、ＤＳＭ１１６２８株、ＣＩＰ１０５４６３株、ＪＣＭ１０５６５株、ＬＭＧ１８３７９株）；バークホルデリア・フェナジニウム（Burkholderia phenazinium）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６６株、ＣＣＵＧ２０８３６株、ＣＦＢＰ４７９３株、ＣＩＰ１０６５０２株、ＤＳＭ１０６８４株、ＪＣＭ１０５６４株、ＬＭＧ２２４７株、ＮＣＩＢ１１０２７株）；バークホルデリア・ピケッテイ（Burkholderia pikettii）（例えば、ＡＴＣＣ２７５１１株、ＣＣＵＧ３３１８株、ＣＦＢＰ２４５９株、ＣＩＰ７３．２３株、ＤＳＭ６２９７株、ＨＡＭＢＩ２１５８株、ＪＣＭ５９６９株、ＬＭＧ５９４２株、ＮＣＴＣ１１１４９株）；バークホルデリア・プランタリイ（Burkholderia plantarii）（例えば、ＡＺ８２０１株、ＡＴＣＣ４３７３３株、ＣＣＵＧ２３３６８株、ＣＦＢＰ３５７３株、ＣＦＢＰ３９９７株、ＣＩＰ１０５７６９株、ＤＳＭ９５０９株、ＩＣＭＰ９４２４株、ＪＣＭ５４９２株、ＬＭＧ９０３５株、ＮＣＰＰＢ３５９０株、ＮＩＡＥＳ１７２３株）；バークホルデリア・シュードマレイ（Burkholderia pseudomallei）（例えば、ＷＲＡＩＲ２８６株、ＡＴＣＣ２３３４３株、ＮＣＴＣ１２９３９株）；バークホルデリア・ピロシニア（Burkholderia pyrrocinia）（例えば、ＡＴＣＣ１５９５８株、ＣＦＢＰ４７９４株、ＣＩＰ１０５８７４株、ＤＳＭ１０６８５株、ＬＭＧ１４１９１株）；バークホルデリア・サッカリ（Burkholderia sacchari）（例えば、ＣＣＴ６７７１株、ＣＩＰ１０７２１１株、ＩＰＴ１０１株、ＬＭＧ１９４５０株）；バークホルデリア・ソラナセアルム（Burkholderia solanacearum）（例えば、Ａ．Ｋｅｌｍａｎ６０−１株、ＡＴＣＣ１１６９６株、ＣＣＵＧ１４２７２株、ＣＦＢＰ２０４７株、ＣＩＰ１０４７６２株、ＤＳＭ９５４４株、ＩＣＭＰ５７１２株、ＪＣＭ１０４８９株、ＬＭＧ２２９９株、ＮＣＡＩＭＢ．０１４５９株、ＮＣＰＰＢ３２５株、ＮＲＲＬ Ｂ−３２１２株）；バークホルデリア・スタビリス（Burkholderia stabilis）（例えば、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−６７株、ＣＣＵＧ３４１６８株、ＣＩＰ１０６８４５株、ＬＭＧ１４２９４株、ＮＣＴＣ１３０１１株）；バークホルデリア・タイランデンシス（Burkholderia thailandensis）（例えば、Ｅ２６４株、ＡＴＣＣ７００３８８株、ＣＩＰ１０６３０１株、ＤＳＭ１３２７６株）；バークホルデリア・ウボネンシス（Burkholderia ubonensis）（例えば、ＥＹ３３８３株、ＣＩＰ１０７０７８株、ＮＣＴＣ１３１４７株）；バークホルデリア・バンディイ（Burkholderia vandii）（例えば、ＶＡ-１３１６株、ＡＴＣＣ５１５４５株、ＣＦＢＰ４７９５株、ＤＳＭ９５１０株、ＪＣＭ７９５７株、ＬＭＧ１６０２０株）；バークホルデリア・ベトナミエンシス（Burkholderia vietnamiensis）（例えば、ＴＶＶ７５株、ＡＴＣＣ ＢＡＡ−２４８株、ＣＣＵＧ３４１６９株、ＣＦＢＰ４７９６株、ＣＩＰ１０５８７５株、ＤＳＭ１１３１９株、ＪＣＭ１０５６２株、ＬＭＧ１０９２９株）である。
【００２５】
シュードモナス種の例は、シュードモナス・アエルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）（例えば、ＡＴＣＣ１０１４５株、ＤＳＭ５００７１株）、シュードモナス・アガリシ（Pseudomonas agarici）（例えば、ＡＴＣＣ２５９４１株、ＤＳＭ１１８１０株）、シュードモナス・アルカリゲネス（Pseudomonas alcaligenes）（例えば、ＡＴＣＣ１４９０９株、ＤＳＭ５０３４２株）、シュードモナス・アミグダリ（Pseudomonas amygdali）（例えば、ＡＴＣＣ３３７６１４株、ＤＳＭ７２９８株）、シュードモナス・アングイリセプティカ（Pseudomonas anguiliseptica）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６０株、ＤＳＭ１２１１１株）、シュードモナス・アンチミクロビカ（Pseudomonas antimicrobica）（例えば、ＤＳＭ８３６１株、ＮＣＩＢ９８９８株、ＬＭＧ１８９２０株）、シュードモナス・アスプレニ（Pseudomonas aspleni）（例えば、ＡＴＣＣ２３８３５株、ＣＣＵＧ３２７７３株）、シュードモナス・オーランチアカ（Pseudomonas aurantiaca）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６３株、ＣＩＰ１０６７１０株）、シュードモナス・オーレオファシエンス（Pseudomonas aureofaciens）（例えば、ＡＴＣＣ１３９８５株、ＣＦＢＰ２１３３株）、シュードモナス・アベラナエ（Pseudomonas avellanae）（例えば、ＤＳＭ１１８０９株、ＮＣＰＰＢ３４８７株）、シュードモナス・アゾトフォルマンス（Pseudomonas azotoformans）（例えば、ＣＩＰ１０６７４４株、ＪＣＭ７７３３株）、シュードモナス・バレアリカ（Pseudomonas balearica）（例えば、ＤＳＭ６０８３株、ＣＩＰ１０５２９７株）、シュードモナス・ベイジェリンスキイ（Pseudomonas beijerinsckii）（例えば、ＡＴＣＣ１９３７２株、ＤＳＭ６０８３株）、シュードモナス・ベテリ（Pseudomonas beteli）（例えば、ＡＴＣＣ１９８６１株、ＣＦＢＰ４３３７株）、シュードモナス・ボレオポリス（Pseudomonas boreopolis）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６２株、ＣＩＰ１０６７１７株）、シュードモナス・カルボキシハイドロゲナ（Pseudomonas carboxyhydrogena）（例えば、ＡＴＣＣ２９９７８株、ＤＳＭ１０８３株）、シュードモナス・カリカパパイエ（Pseudomonas caricapapayae）（例えば、ＡＴＣＣ３３６１５株、ＣＣＵＧ３２７７５株）、シュードモナス・チコリ（Pseudomonas cichorii）（例えば、ＡＴＣＣ１０８５７株、ＤＳＭ５０２５９株）、シュードモナス・シシコラ（Pseudomonas cissicola）（例えば、ＡＴＣＣ３３６１６株、ＣＣＵＧ１８８３９株）、シュードモナス・シトロネロリス（Pseudomonas citronellolis）（例えば、ＡＴＣＣ１３６７４株、ＤＳＭ５０３３２株）、シュードモナス・コロナファシエンス（Pseudomonas coronafaciens）（例えば、ＤＳＭ５０２６１株、ＤＳＭ５０２６２株）、シュードモナス・コルガタ（Pseudomonas corrugata）（例えば、ＡＴＣＣ２９７３６株、ＤＳＭ７２２８株）、シュードモナス・ドウドロフィイ（Pseudomonas doudoroffii）（例えば、ＡＴＣＣ２７１２３株、ＤＳＭ７０２８株）、シュードモナス・エキノイデス（Pseudomonas echinoides）（例えば、ＡＴＣＣ１４８２０株、ＤＳＭ１８０５株）、シュードモナス・エロンガータ（Pseudomonas elongata）（例えば、ＡＴＣＣ１０１４４株、ＤＳＭ６８１０株）、シュードモナス・フィクセレクタエ（Pseudomonas ficuserectae）（例えば、ＡＴＣＣ３５１０４株、ＣＣＵＧ３２７７９株）、シュードモナス・フラベセンス（Pseudomonas flavescens）（例えば、ＡＴＣＣ５１５５５株、ＤＳＭ１２０７１株）、シュードモナス・フレクテンス（Pseudomonas flectens）（例えば、ＡＴＣＣ１２７７５株、ＣＦＢＢ３２８１株）、シュードモナス・フルオレセンス（Pseudomonas fluorescens）（例えば、ＡＴＣＣ１３５２５株、ＤＳＭ５００９０株）、シュードモナス・フラジ（Pseudomonas fragi）（例えば、ＡＴＣＣ４９７３株、ＤＳＭ３４５６株）、シュードモナス・フルバ（Pseudomonas fulva）（例えば、ＡＴＣＣ３１４１８株、ＣＩＰ１０６７６５株）、シュードモナス・フスコバギナエ（Pseudomonas fuscovaginae）（例えば、ＣＣＵＧ３２７８０株、ＤＳＭ７２３１株）、シュードモナス・ゲリジコラ（Pseudomonas gelidicola）（例えば、ＣＩＰ１０６７４８株）、シュードモナス・ゲニクラタ（Pseudomonas geniculata）（例えば、ＡＴＣＣ１９３７４株、ＬＭＧ２１９５株）、シュードモナス・グラセイ（Pseudomonas glathei）（例えば、ＡＴＣＣ２９１９５株、ＤＳＭ５００１４株）、シュードモナス・ハロフィラ（Pseudomonas halophila）（例えば、ＡＴＣＣ４９２４１株、ＤＳＭ３０５０株）、シュードモナス・ヒビシコラ（Pseudomonas hibiscicola）（例えば、ＡＴＣＣ１９８６７株、ＬＭＧ９８０株）、シュードモナス・フティエンシス（Pseudomonas huttiensis）（例えば、ＡＴＣＣ１４６７０株、ＤＳＭ１０２８１株）、シュードモナス・イナース（Pseudomonas iners）（例えば、ＣＩＰ１０６７４６株）、シュードモナス・ランセロタ（Pseudomonas lancelota）（例えば、ＡＴＣＣ１４６６９株、ＣＦＢＰ５５８７株）、シュードモナス・レモイグネイ（Pseudomonas lemoignei）（例えば、ＡＴＣＣ１７９８９株、ＤＳＭ７４４５株）、シュードモナス・ルンデンシス（Pseudomonas lundensis）（例えば、ＡＴＣＣ１９９６８株、ＤＳＭ６２５２株）、シュードモナス・ルテオラ（Pseudomonas luteola）（例えば、ＡＴＣＣ４３２７３株、ＤＳＭ６９７５株）、シュードモナス・マルギナリス（Pseudomonas marginalis）（例えば、ＡＴＣＣ１０８４４株、ＤＳＭ１３１２４株）、シュードモナス・メリアエ（Pseudomonas meliae）（例えば、ＡＴＣＣ３３０５０株、ＤＳＭ６７５９株）、シュードモナス・メンドシナ（Pseudomonas mendocina）（例えば、ＡＴＣＣ２５４１１株、ＤＳＭ５００１７株）、シュードモナス・ムシドレンス（Pseudomonas mucidolens）（例えば、ＡＴＣＣ４６８５株、ＣＣＵＧ１４２４株）、シュードモナス・モンテイリイ（Pseudomonas monteilli）（例えば、ＡＴＣＣ７００４７６株、ＤＳＭ１４１６４株）、シュードモナス・ノーティカ（Pseudomonas nautica）（例えば、ＡＴＣＣ２７１３２株、ＤＳＭ５０４１８株）、シュードモナス・ニトロレデュセンス（Pseudomonas nitroreducens）（例えば、ＡＴＣＣ３３６３４株、ＤＳＭ１４３９９株）、シュードモナス・オレオボランス（Pseudomonas oleovorans）（例えば、ＡＴＣＣ８０６２株、ＤＳＭ１０４５株）、シュードモナス・オリジハビタンス（Pseudomonas oryzihabitans）（例えば、ＡＴＣＣ４３２７２株、ＤＳＭ６８３５株）、シュードモナス・ペルツチノゲーナ（Pseudomonas pertucinogena）（例えば、ＡＴＣＣ１９０株、ＣＣＵＧ７８３２株）、シュードモナス・フェナジニウム（Pseudomonas phenazinium）（例えば、ＡＴＣＣ３３６６６株、ＤＳＭ１０６８４株）、シュードモナス・ピクトルム（Pseudomonas pictorum）（例えば、ＡＴＣＣ２３３２８株、ＬＭＧ９８１株）、シュードモナス・シュードアルカリゲネス（Pseudomonas pseudoalcaligenes）（例えば、ＡＴＣＣ１７４４０株、ＤＳＭ５０１８８株）、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas putida）（例えば、ＡＴＣＣ１２６３３株、ＤＳＭ２９１株）、シュードモナス・ピロチニア（Pseudomonas pyrrocinia）（例えば、ＡＴＣＣ１５９５８株、ＤＳＭ１０６８５株）、シュードモナス・レシノボランス（Pseudomonas resinovorans）（例えば、ＡＴＣＣ１４２３５株、ＣＣＵＧ２４７３株）、シュードモナス・ローデシアエ（Pseudomonas rhodesiae）（例えば、ＣＣＵＧ３８７３２株、ＤＳＭ１４０２０株）、シュードモナス・サッカロフィラ（Pseudomonas saccharophila）（例えば、ＡＴＣＣ１５９４６株、ＤＳＭ６５４株）、シュードモナス・サバスタノイ（Pseudomonas savastanoi）（例えば、ＡＴＣＣ１３５２２株、ＣＦＢＰ１６７０株）、シュードモナス・スピノサ（Pseudomonas spinosa）（例えば、ＡＴＣＣ１４６０６株）、シュードモナス・スタニエリ（Pseudomonas stanieri）（例えば、ＡＴＣＣ２７１３０株、ＤＳＭ７０２７株）、シュードモナス・ストラミナエ（Pseudomonas straminae）（例えば、ＡＴＣＣ３３６３６株、ＣＩＰ１０６７４５株）、シュードモナス・スツツェリ（Pseudomonas stutzeri）（例えば、ＡＴＣＣ１７５８８株、ＤＳＭ５１９０株）、シュードモナス・シンクサンタ（Pseudomonas synxantha）（例えば、ＡＴＣＣ９８９０株、ＣＦＢＰ５５９株１）、シュードモナス・シリンゲ（Pseudomonas syringae）（例えば、ＡＴＣＣ１９３１０株、ＤＳＭ６６９３株）、シュードモナス・シジギィ（Pseudomonas syzygii）（例えば、ＡＴＣＣ４９５４３株、ＤＳＭ７３８５株）、シュードモナス・タエトロレンス（Pseudomonas taetrolens）（例えば、ＡＴＣＣ４６８３株、ＣＦＢＰ５５９２株）、シュードモナス・トラシイ（Pseudomonas tolaasii）（例えば、ＡＴＣＣ３３６１８株、ＣＣＵＧ３２７８２株）、シュードモナス・ベロニイ（Pseudomonas veronii）（例えば、ＡＴＣＣ７００２７２株、ＤＳＭ１１３３１株）、シュードモナス・ビリディフラバ（Pseudomonas viridiflava）（例えば、ＡＴＣＣ１３２２３株、ＤＳＭ１１１２４株）、シュードモナス・ブルガリス（Pseudomonas vulgaris）、シュードモナス・ウィスコンシネンシス（Pseudomonas wisconsinensis）及びシュードモナ種ＤＳＭ８２４６である。これらの中で、バークホルデリア・グルマエ、バークホルデリア・プランタリイ、バークホルデリア・セパシア、シュードモナス・アエルギノーサ、シュードモナス・フルオレセンス、シュードモナス・フラジ、シュードモナス・ルテオラ、シュードモナス・ブルガリス、シュードモナス・ウィスコンシネンシス及びシュードモナス種ＤＳＭ８２４６由来のリパーゼが好ましい。シュードモナス種ＤＳＭ８２４６由来のリパーゼが特に好ましい。
【００２６】
カンジダ種の例は、カンジダ・アルボマルギナタ（Candida albomarginata）（例えば、ＤＳＭ７００１５株）、カンジダ・アンタルクティカ（Candida antarctica）（例えば、ＤＳＭ７０７２５株）、カンジダ・バカルム（Candida bacarum）（例えば、ＤＳＭ７０８５４株）、カンジダ・ボゴリエンス（Candida bogoriensis）（例えば、ＤＳＭ７０８７２株）、カンジダ・ボイジニイ（Candida boidinii）（例えば、ＤＳＭ７００２６株、７００２４株、７００３３株、７００３４株）、カンジダ・ボビナ（Candida bovina）（例えば、ＤＳＭ７０１５６株）、カンジダ・ブルムプティ（Candida brumptii）（例えば、ＤＳＭ７００４０株）、カンジダ・カカオイ（Candida cacaoi）（例えば、ＤＳＭ２２２６株）、カンジダ・カリオシリグニコラ（Candida cariosilignicola）（例えば、ＤＳＭ２１４８株）、カンジダ・カルメルシ（Candida chalmersii）（例えば、ＤＳＭ７０１２６株）、カンジダ・シフェリ（Candida ciferii）（例えば、ＤＳＭ７０７４９株）、カンジダ・シリンドラセア（Candida cylindracea）（例えば、ＤＳＭ２０３１株）、カンジダ・エルノビイ（Candida ernobii）（例えば、ＤＳＭ７０８５８株）、カンジダ・ファマタ（Candida famata）（例えば、ＤＳＭ７０５９０株）、カンジダ・フレイシュシイ（Candida freyschussii）（例えば、ＤＳＭ７００４７株）、カンジダ・フリエデリチイ（Candida friederichii）（例えば、ＤＳＭ７００５０株）、カンジダ・グラブラータ（Candida glabrata）（例えば、ＤＳＭ６４２５株、１１２２６株、７０６１４株、７０６１５株）、カンジダ・グイレルモンディ（Candida guillermondi）（例えば、ＤＳＭ１１９４７株、７００５１株、７００５２株）、カンジダ・ハエムロニイ（Candida haemulonii）（例えば、ＤＳＭ７０６２４株）、カンジダ・インコンスピクア（Candida inconspicua）（例えば、ＤＳＭ７０６３１株）、カンジダ・インゲンス（Candida ingens）（例えば、ＤＳＭ７００６８株、７００６９株）、カンジダ・インテルメディア（Candida intermedia）（例えば、ＤＳＭ７０７５３株）、カンジダ・ケフィール（Candida kefyr）（例えば、ＤＳＭ７００７３株、７０１０６株）、カンジダ・クルセイ（Candida krusei）（例えば、ＤＳＭ６１２８株、１１９５６株、７００７５株、７００７９株、７００８６株）、カンジダ・ラクチスコンデンシ（Candida lactiscondensi）（例えば、ＤＳＭ７０６３５株）、カンジダ・ランビカ（Candida lambica）（例えば、ＤＳＭ７００９０株、７００９５株）、カンジダ・リポリティカ（Candida lipolytica）（例えば、ＤＳＭ１３４５株、３２８６株、８２１８株、７０５６１株又は７０５６２株）、カンジダ・ルシタニアエ（Candida lusitaniae）（例えば、ＤＳＭ７０１０２株）、カンジダ・マセドニエンシス（Candida macedoniensis）（例えば、ＤＳＭ７０１０６株）、カンジダ・マグノリアエ（Candida magnoliae）（例えば、ＤＳＭ７０６３８株、７０６３９株）、カンジダ・メンブラナエファシエンス（Candida membranaefaciens）（例えば、ＤＳＭ７０１０９株）、カンジダ・ムルチゲムニス（Candida multigemnis）（例えば、ＤＳＭ７０８６２株）、カンジダ・ミコデルマ（Candida mycoderma）（例えば、ＤＳＭ７０１８４株）、カンジダ・ネモデンドラ（Candida nemodendra）（例えば、ＤＳＭ７０６４７株）、カンジダ・ニトラトフィラ（Candida nitratophila）（例えば、ＤＳＭ７０６４９株）、カンジダ・ノルベジカ（Candida norvegica）（例えば、ＤＳＭ７０８６２株）、カンジダ・パラプシロシス（Candida parapsilosis）（例えば、ＤＳＭ５７８４株、４２３７株、１１２２４株、７０１２５株、７０１２６株）、カンジダ・ペリキュローサ（Candida pelliculosa）（例えば、ＤＳＭ７０１３０株）、カンジダ・ピニ（Candida pini）（例えば、ＤＳＭ７０６５３株）、カンジダ・プロケリマ（Candida pulcherrima）（例えば、ＤＳＭ７０３３６株）、カンジダ・プニセア（Candida punicea）（例えば、ＤＳＭ４６５７株）、カンジダ・プスツラ（Candida pustula）（例えば、ＤＳＭ７０８６５株）、カンジダ・ルゴサ（Candida rugosa）（例えば、ＤＳＭ７０７６１株）、カンジダ・サケ（Candida sake）（例えば、ＤＳＭ７０７６３株）、カンジダ・シルビコラ（Candida silvicola）（例えば、ＤＳＭ７０７６４株）、カンジダ・ソラニ（Candida solani）（例えば、ＤＳＭ３３１５株）、カンジダ（Candida）種（例えば、ＤＳＭ１２４７株）、カンジダ・スパンドベンシス（Candida spandovensis）（例えば、ＤＳＭ７０８６６株）、カンジダ・サクシフィラ（Candida succiphila）（例えば、ＤＳＭ２１４９株）、カンジダ・ウチリス（Candida utilis）（例えば、ＤＳＭ２３６１株、７０１６３株又は７０１６７株）、カンジダ・バリダ（Candida valida）（例えば、ＤＳＭ７０１６９株、７０１７８株、７０１７９株）、カンジダ・ベルサティリス（Candida versatilis）（例えば、ＤＳＭ６９５６株）、カンジダ・ビニ（Candida vini）（例えば、ＤＳＭ７０１８４株）及びカンジダ・ゼイラノイデス（Candida zeylanoides）（例えば、ＤＳＭ７０１８５株）である。
【００２７】
カンジダ属の酵母、特にカンジダ・アントラクティカ由来のリパーゼが本発明の方法において特に好ましく使用される。従って、本発明の方法の具体的実施形態では、カンジダ・アントラクティカ由来のＬｉｐａｓｅＢを使用する。このリパーゼの固定化形態、例えばアクリル樹脂上に固定化されているカンジダ・アントラクティカ由来のＬｉｐａｓｅＢが好ましく、これは“Ｎｏｖｏｚｙｍｅ４３５（登録商標）”の名前で市販されている。
【００２８】
本発明の方法のエナンチオ選択的アシル化において使用しようとする加水分解酵素の量は、加水分解酵素の種類及び酵素製剤の活性に依存する。反応に最適な酵素の量は簡単な予備検査により容易に確定され得る。通常、分離しようとするエナンチオマーの混合物１ミリモルあたり約１０００単位の加水分解酵素を使用する。
【００２９】
単位「ユニット」は加水分解酵素の活性を表し、規定の標準条件下で加水分解酵素により変換される基準化合物の量を指す。
【００３０】
本発明の方法で使用されるアシル化剤を、酸成分がカルボニル炭素原子の付近に電子豊富なヘテロ原子（例えば、フッ素原子、窒素原子、酸素原子及び硫黄原子から選択される）を有するものから選択することが好ましい。アシル化剤は好ましくはエステルである。アシル化剤を、酸成分がカルボニル炭素原子に対してα、β又はγ位に酸素−、窒素−、フッ素−又は硫黄−含有基を有しているエステルから選択することが特に好ましい。特に好ましいアシル化剤は、ヘテロ原子それ自体がカルボニル炭素原子に対してα、β又はγ位、特にα位に結合しているものである。
【００３１】
酸素含有基は例えばヒドロキシ基又はアルコキシ基である。窒素含有基は例えばアミノ基であり、硫黄含有基はチオール基（ＳＨ）又はアルキルチオ基であり得る。
【００３２】
エステルのアルコール成分は好ましくは直鎖状又は分岐状Ｃ１〜Ｃ１０アルコールから誘導され、前記アルコールは置換されていてもよいが、未置換であることが好ましい。しかしながら、アルコール成分を第２級アルコール、例えばイソプロパノール、２−ブタノール、２−又は３−ペンタノール等から誘導することが特に好ましい。具体的にはイソプロパノールから誘導する。
【００３３】
特に適当なエステルは、式（ＩＩＩ）
【化３】
【００３４】
［式中、
Ｒ１はＣ１〜Ｃ１０−アルキルであり、
Ｒ２は水素又はＣ１〜Ｃ１０−アルキルであり、
Ｒ３は水素、Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル、又は場合によりＮＨ２、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシもしくはハロゲンで置換されているフェニルであり、
ＡはＯ、Ｓ又はＮＲ４であり、好ましくはＯであり、
Ｒ４は水素、Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル、又は場合によりＮＨ２、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシもしくはハロゲンで置換されているフェニルであり、
ｎは０、１又は２である］
を有するものである。
【００３５】
Ｒ１は好ましくは直鎖状又は分岐状Ｃ１〜Ｃ４−アルキルである。Ｒ１は特に第２級アルコールから誘導され、従って特に好ましく第３級炭素原子を介して結合しているＣ３〜Ｃ４−アルキル基、例えばイソプロピル又は２−ブチルである。Ｒ１は具体的にはイソプロピルである。
【００３６】
Ｒ２は好ましくは水素又はＣ１〜Ｃ４−アルキル、特に水素である。
【００３７】
Ｒ３は好ましくはＣ１〜Ｃ４−アルキル、特に好ましくはメチル又はエチル、具体的にはメチルである。
【００３８】
Ａは好ましくはＯである。
【００３９】
本発明の関係において、表現「Ｃ１〜Ｃ４−アルキル」は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル又はｔｅｒｔ−ブチルを表す。
【００４０】
表現「Ｃ１〜Ｃ１０−アルキル」は、１〜１０個の炭素原子を有する直鎖状又は分岐状アルキル基である。その例は上記したＣ１-Ｃ４-アルキル基以外にペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、２−エチルヘキシル、ノニル、ネオノニル、デシル及びネオデシルである。
【００４１】
表現「Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ」は、酸素を介して連結している１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を表す。その例はメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ-ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、イソブトキシ及びｔｅｒｔ−ブトキシである。
【００４２】
表現「Ｃ１〜Ｃ１０アルコール」は、少なくとも１個のヒドロキシ基で置換されている１〜１０個の炭素原子を有する脂肪族炭化水素を表す。Ｃ１〜Ｃ１０−アルコールは、好ましくはヒドロキシ基で置換されているアルカンを表す。その例はメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｓｅｃ−ブタノール、イソブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、ヘプタノール、オクタノール、２−エチルヘキサノール、ノナノール及びデカノールである。
【００４３】
本発明の関係において、ハロゲンは好ましくはフッ素、塩素又は臭素、特に好ましくはフッ素又は塩素である。
【００４４】
本発明の方法のエナンチオ選択的アシル化において、アシル化される式（Ｉ）を有する化合物のエナンチオマーの量に基づいて好ましくは１〜３モル当量、特に好ましくは１〜２モル当量、より好ましくは１〜１．５モル当量、特に１〜１．２モル当量のアシル化剤を使用する。本明細書中、表現「モル当量」は、アシル化される化合物（Ｉ）のエナンチオマー１モルと反応し得るアシル化剤のカルボキシル基の数をモルで指す。従って、式（ＩＩＩ）を有するエステルを使用する場合、アシル化される式（Ｉ）を有する化合物のエナンチオマー１モルあたり好ましくは１〜３モル、特に好ましくは１〜２モル、より好ましくは１〜１．５モル、特に１〜１．２モルのエステルを使用する。あるいは、式（ＩＩＩ）を有するエステルを使用する場合、特にこの混合物がラセミ化合物の場合には、分離しようとするエナンチオマーの混合物１モルに基づいて０．５〜１．５モル、特に好ましくは０．５〜１モル、より好ましくは０．５〜０．７５モル、特に０．５〜０．６モルのエステルを使用する。
【００４５】
本発明の方法の好ましい実施形態では、方法Ａにおける反応及び方法Ｂのステップ（ａ）における反応は希釈せずに、すなわち水性又は有機溶媒を添加することなく実施する。
【００４６】
別の好ましい実施形態では、本発明の方法のアシル化を非水性反応媒体中で実施する。非水性反応媒体は、反応媒体の全重量に基づいて１重量％未満の水、好ましくは０．５重量％未満の水、特に好ましくは０．１重量％未満の水、特に０．０５重量％未満の水しか含んでいない反応媒体を意味する。この実施形態では、アシル化を好ましくは有機溶媒中で実施する。適当な溶媒の例は脂肪族及び脂環式炭化水素、好ましくは５〜８個の炭素原子を有するもの（例えば、ペンタン、シクロペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタン又はシクロオクタン）；ハロゲン化脂肪族炭化水素、好ましくは１又は２個の炭素原子を有するもの（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、ジクロロエタン又はテトラクロロエタン）；芳香族炭化水素（例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロペンゼン又はジクロロベンゼン）；脂肪族非環式及び環式エーテル、好ましくは４〜８個の炭素原子を有するもの（例えば、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、エチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトセヒドロフラン又はジオキサン）；あるいは上記した溶媒の混合物である。上記したエーテル及び芳香族炭化水素が特に好ましくは使用される。具体的にはトルエンが使用される。
【００４７】
式（Ｉ）で表される化合物とアシル化剤との反応は、通常使用する加水分解酵素の失活温度以下の反応温度、特に−１０℃以上の温度で起こる。特に好ましくは０〜８０℃、特に１０〜４０℃の範囲である。反応は具体的には室温で起こる。
【００４８】
例えば、式（Ｉ）で表される化合物のトランス又はシス立体異性体のエナンチオマーの混合物を加水分解酵素、アシル化剤及び適当ならば溶媒と、例えば攪拌又は振とうすることにより十分に混合することによって実施され得る。しかしながら、反応器（例えば、カラム）中に加水分解酵素を固定化し、その反応器にエナンチオマー混合物及びアシル化剤からなる混合物を流すこともできる。この目的で、所望の変換に達するまで混合物を反応器中に循環させることができる。この間、アシル化剤のカルボキシル基はエナンチオ選択的にアシル化される化合物（Ｉ）のエナンチオマーのアミドに逐次変換され、他のエナンチオマーは実質的に未変化のままである。アシル化は通常、混合物中に存在し、エナンチオ特異的にアシル化される化合物（Ｉ）のエナンチオマーに基づいて少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９８％、特に少なくとも９９％の変換率まで実施される。さらに、反応の進行、すなわち逐次のアミド形成は通常の方法、例えばガスクロマトグラフィー又はＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）により追跡され得る。
【００４９】
反応混合物は慣用の方法で、例えば適当ならば加水分解酵素を反応混合物から例えば濾過又は遠心により除去し、濾液又は遠心分離液から溶媒を除去した後、残渣を分離操作にかけることにより後処理され得る。
【００５０】
本発明の方法の具体的実施形態では、使用されるエナンチオマーの混合物はアミン（Ｉ）のラセミ化合物であるが、エナンチオマーの１つを多く含む混合物も同様に好適である。
【００５１】
化合物（Ｉ）のトランス又はシス異性体のエナンチオマーの混合物をエナンチオ選択的に反応させると、化合物（Ｉ）の実質的にアシル化されたエナンチオマー（すなわち、アミド）及び実質的にアシル化されていない反対のエナンチオマーが生ずる。ここに存在するアミンとアミドの混合物は慣用の方法により容易に分離され得る。適当な分離操作の例は抽出、蒸留、結晶化又はクロマトグラフィーである。アミン及びアミドを蒸留により分離することが好ましい。代替の好ましい分離方法では、有機溶媒中に溶解又は懸濁されている反応混合物を酸性塩形成剤と混合して、非アシル化エナンチオマーのアンモニウム塩を形成し、沈殿させる。次いで、このアンモニウム塩を化合物（Ｉ）の反対のエナンチオマーのアミドを含む上清から濾過又は遠心により分離し得る。適当な酸性塩形成剤は、例えばプロトン酸、特に無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸又は硝酸）、有機酸（例えば、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸又はｐ−トルエンスルホン酸）及びそのアルカリ金属塩であるが、酸、特に無機酸、具体的には塩酸又は硫酸が好ましい。酸を好ましくは非アシル化エナンチオマーの量に対してほぼ等モル量で、例えば非アシル化エナンチオマー１モルに基づいて０．９〜１．５モル、好ましくは１〜１．２モル、特に約１モルの量で使用する。硫酸のようなポリプロトン酸の場合のモル比は勿論酸中に存在する酸性プロトンの数に基づいている。
【００５２】
除去された化合物（Ｉ）の実質的にアシル化されていないエナンチオマーは、適当ならば当業者に公知の方法を用いてさらに精製してもよい。アシル化後除去される非アシル化エナンチオマーは特に（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）［すなわち、特に（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）は方法Ｂのステップ（ｂ）において得られる］である。
【００５３】
化合物（Ｉ）の実質的にアシル化されていないエナンチオマーが、本分離方法によりアンモニウム塩の形態で得られる場合は、アミンは適当な塩基を用いてアンモニウム塩から遊離される。適当な塩基の例は、アルカリ金属水酸化物（例えば、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム）、アルカリ土類金属水酸化物（例えば、水酸化カルシウム又は水酸化マグネシウム）、アルカリ金属又はアルカリ土類金属炭酸塩（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム又は炭酸カルシウム）である。好ましくはアルカリ水酸化物（例えば、水酸化ナトリウム又は水酸化カリウム）が使用される。中和は好ましくは水性媒体中で行う。アミンの単離を容易とするために、遊離された化合物が中性の形態であるように塩基を使用することが好ましい。得られた遊離アミンをその後所望により更なる精製ステップにかけてもよい。
【００５４】
本発明の方法においてエナンチオ選択的にアシル化された他のエナンチオマーは、アシル化で得られた化合物（Ｉ）の実質的にアシル化されたエナンチオマー、すなわち化合物（Ｉ）のアミドを加水分解してアシル官能基を除去して、化合物（Ｉ）の対応するエナンチオマーを生じさせることにより得られ得る。得られる生成物は、好ましくは（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）［すなわち、好ましくは（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）は方法Ｂのステップ（ｃ）で得られる］である。
【００５５】
この場合、加水分解は通常アミドの加水分解について公知の反応条件下で起こる。反応条件は、例えばいずれも参照により本明細書に組み入れる独国特許出願公開第１９５３４２０８号明細書；Organikum, VEB Deutscher Verlag der Wissenschaften, Berlin, 1988, 17th edition, p.419；又はJerry March, Advanced Organic Chemistry, 3rd edition, John Wiley and Sons, p.338以降に記載されている。アミンを与えるための加水分解は好ましくは塩基との反応により起こる。適当な塩基の例は、アルカリ金属水酸化物（例えば、水酸化ナトリウム及び水酸化カリウム）、アルカリ土類金属水酸化物（例えば、水酸化カルシウム）、アルカリ金属及びアルカリ土類金属炭酸塩（例えば、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム及び炭酸カルシウム）、アンモニア、アミン（例えば、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルアミン及びジイソプロピルエチルアミン）、又はアミノアルコール（例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン及びトリエタノールアミン）である。上記したアルカリ金属水酸化物が特に好ましく使用され、適当ならばアミン又はアミノアルコールと組み合わせて使用される。
【００５６】
加水分解は水中、有機溶媒中、又は水と有機溶媒の混合物中で実施され得る。適当な有機溶媒はアルコール、好ましくは１〜３個の炭素原子を有するもの（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール又はイソプロパノール）；グリコール、特に２〜８個の炭素原子を有するもの（例えば、エチレングリコール、ジ−及びトリエチレングリコール）；アミン及びアミノアルコール（例えば、上記したアミン及びアミノアルコール）；並びに上記した溶媒の混合物及び上記した溶媒と水の混合物である。加水分解を高温で、例えば使用する溶媒の沸点で行うことが好ましい。
【００５７】
反応生成物を通常の方法により、例えば蒸留、昇華、抽出又はクロマトグラフィーにより精製してもよい。
【００５８】
例えばアシル化生成物を酸で加水分解したために化合物（Ｉ）の加水分解されたエナンチオマーがアンモニウム塩の形態で生じたならば、アミンを実質的にアシル化されていないエナンチオマーについて上記した適当な塩基を用いてアンモニウム塩から遊離させる。この場合も、適当ならば得られた遊離アミンをその後当業者に公知の更なる精製ステップにかけることができる。
【００５９】
また、化合物（Ｉ）の（Ｒ，Ｓ）及び（Ｓ，Ｒ）エナンチオマーを製造するためにシス立体異性体を使用することも同様に可能である。
【００６０】
本発明の方法の好ましい実施形態では、方法Ｂのステップ（ｂ）又は（ｃ）で得られた式（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）を有する光学活性化合物は、所望により化学純度及び／又は光学純度を向上させるために酸性塩形成剤を添加することによりそのアンモニウム塩に変換し（ステップ（ｄ））、そのまま単離し（ステップ（ｅ））、その後再び遊離塩基として単離する（ステップ（ｆ））。これらのステップは、ステップ（ｂ）及び（ｃ）で得たエナンチオマーの光学純度又は化学純度がまだ十分でないときに特に適当である。
【００６１】
塩形成を化合物（（Ｒ，Ｒ−Ｉ）又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）の酸付加塩の沈殿と一緒に起こすことが有利である。手順、特に酸性塩形成剤の選択に関して、実質的にアシル化されていないエナンチオマーの沈殿による分離（ステップ（ｂ））に関する記述が当てはまる。
【００６２】
この目的で、精製しようとするエナンチオマーを有機溶媒に導入し、その溶液に酸性塩形成剤を添加することが好ましい。無論、適当ならば溶媒中の酸性塩形成剤にエナンチオマーを添加することも可能であるが、第１の形態が好ましい。遊離塩基、すなわち精製しようとするエナンチオマー（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）のアミン形態を溶解し得るが、そのアンモニウム塩を本質的に溶解させない、すなわち多くとも５％、好ましくは多くとも２％、特に多くとも１％しか溶解させないように溶媒を選択することが好ましい。適当な溶媒の例は脂肪族及び脂環式炭化水素、好ましくは５〜８個の炭素原子を有するもの（例えば、ペンタン、シクロペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン、ヘプタン、オクタン又はシクロオクタン）；ハロゲン化脂肪族炭化水素、好ましくは１又は２個の炭素原子を有するもの（例えば、ジクロロメタン、クロロホルム、テトラクロロメタン、ジクロロエタン又はテトラクロロエタン）；芳香族炭化水素（例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、クロロベンゼン又はジクロロベンゼン）；脂肪族非環式及び環式エーテル、好ましくは４〜８個の炭素原子を有するもの（例えば、ジエチルエーテル、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、エチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、テトラヒドロフラン又はジオキサン）；上記した溶媒の混合物である。上記したエーテル及び芳香族炭化水素が特に好ましく使用される。具体的には、トルエンが使用される。
【００６３】
式（Ｉ）を有する化合物のアンモニウム塩を沈殿させる際に酸性塩形成剤を水溶液の形態で添加することが特に好ましい。無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸，硫酸、硝酸又はリン酸）の水溶液が好ましく使用される。塩酸が酸性塩形成剤として特に適当である。これは、水が存在しているにもかかわらず収率を無視できる程度しかロスせずに精製しようとするエナンチオマーのアンモニウム塩が選択的に沈殿するので驚くことである。
【００６４】
本発明の方法のこの具体的実施形態では、酸性塩形成剤と一緒に添加した水を再び当業者に公知の方法により完全又は部分的に除去することが有利であり得る。この目的のために、溶媒に応じて例えば共沸蒸留が適当である。
【００６５】
有利なことに、最終生成物が満たさなければならない仕様に応じて、反応混合物中の水含量により、沈殿から得られる式（Ｉ）で表される化合物の塩の純度及び収率に対し目標通りに影響を与えることが可能である。
【００６６】
形成されたアンモニウム塩は、沈殿した固体を除去するための一般的な慣用方法（例えば、濾過、沈降、遠心等）により単離されるが、この場合、場合により反応混合物中に存在する液相を予め除去してもよい。液相は、例えばデカント又は蒸留により除去され得る。所望により、除去されたアンモニウム塩を該塩が不溶性の溶媒を用いて洗浄又は消化するような更なる精製ステップにかけてもよい。
【００６７】
実質的にエナンチオマー的に純粋な化合物（Ｉ）は、沈殿した生成物を単離した後塩基で中和することによりそのアンモニウム塩から再び遊離され得る。ステップ（ｂ）についての適当な塩基についてなされた記述はここでも当てはまる。中和は特に水性ＮａＯＨ溶液中で起こる。
【００６８】
この好ましい実施形態によれば、実質的にエナンチオマー的に純粋な化合物（Ｉ）（特に、（Ｒ，Ｒ）−Ｉ及び（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）の光学純度及び化学純度をさらに向上させることができる。純度が余り低いために本発明の関係において実質的にエナンチオマー的に純粋な化合物（Ｉ）とは称されない式（Ｉ）を有する光学活性化合物の化学純度及び／又は光学純度もこのように向上させ得る。
【００６９】
この好ましい実施形態によれば、２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンエナンチオマーの化学純度及び光学純度をそれぞれ少なくとも９９％及び少なくとも９９％ｅｅ、好ましくは少なくとも９９．５％及び少なくとも９９．５％ｅｅ、特に少なくとも９９．９％及び少なくとも９９．９％ｅｅとすることができる。
【００７０】
化学純度及び／又は光学純度を向上させるために酸性塩形成剤を添加することによりアンモニウム塩の形態で化合物（Ｉ）を沈殿させると達成し得る収率は、出発化合物の化学純度及び光学純度、並びに出発物質から得られる生成物の所望純度に依存している。収率のロスは、単離しようとする両エナンチオマーの全量に基づいて好ましくは１５％未満、特に１０％未満である。
【００７１】
本発明の方法のさらに好ましい実施形態では、式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体は、
（ｉ）シクロヘキセンオキシド（エポキシシクロヘキサン）をアンモニアと反応させて、式（ＩＩ）：
【化４】
【００７２】
で表される化合物を得、次いで
（ｉｉ）式（ＩＩ）で表される化合物のトランス立体異性体を適当なベンジル化合物と反応させて、式（Ｉ）を有する化合物のトランス立体異性体を得るか、又は
（ｉｉｉ）式（ＩＩ）で表される化合物のシス及びトランス異性体の混合物を適当なベンジル化合物と反応させて、対応するシス−及びトランス−ベンジルエーテルの混合物を形成し（すなわち、化合物Ｉのトランス及びシス異性体の混合物を得）、この混合物から式（Ｉ）を有する化合物のトランス立体異性体を単離する、ことにより得られる。
【００７３】
本発明の関係においてステップ（ｉ）と称されるシクロヘキセンオキシドからのアミノシクロヘキサノールの製造は、例えばＳｃｈｌｉｃｈｔｅｒ及びＦｒａｈｍ（Arch. Pharm. (Weinheim), 326, 429-436 (1993)）により公表されている方法により実施され得る。この場合、水性３５〜４０％濃度のアンモニア溶液にシクロヘキセンオキシドを添加し、一晩攪拌し、溶液を蒸発乾固する。こうすると、反応は通常立体特異的に進行し、トランス−２−アミノシクロヘキサノールが選択的に生ずる。
【００７４】
化合物（ＩＩ）の対応するベンジルエーテルへの変換は、ステップ（ｉｉ）において化合物（ＩＩ）のトランス異性体を適当なベンジル化合物と反応させることにより起こる。適当なベンジル化合物は、例えばハロゲン化ベンジル（例えば、臭化ベンジル又は塩化ベンジル）である。反応は通常塩基の存在下で実施される。適当な塩基は上記したアルカリ金属及びアルカリ土類金属水酸化物、並びにアルカリ金属及びアルカリ土類金属炭酸塩である。このようにして得られるエナンチオマーの混合物は、適当ならば当業者に公知の方法により単離、精製され得る。蒸留及び抽出方法がこの目的で特に適している。
【００７５】
上記した反応シーケンスにより、通常ステップ（ｉ）では実質的に化合物（ＩＩ）のトランス立体異性体が生じ、その後のステップ（ｉｉ）では実質的に化合物（Ｉ）のトランス立体異性体、特に少なくとも９９％ｄｅのジアステレオマー過剰率を有するトランス立体異性体が生ずる。エナンチオマーの単離混合物は具体的には化合物（Ｉ）のトランスジアステレオマーのラセミ化合物である。しかしながら、ステップ（ｉ）の反応混合物がかなりの量、すなわちシス／トランス異性体の全重量に基づいて１％以上のシス異性体を含んでいるならば、適当な方法によりトランス異性体から除去することが好ましい。通常、ステップ（ｉ）からの反応混合物を分離方法にかける。すなわち、ステップ（ｉｉ）を実施する前のステップ（ｉ）の反応混合物はシス異性体を含有していない。しかしながら、ステップ（ｉ）で得た混合物をステップ（ｉｉｉ）にかけることも可能である。すなわち、まずシス／トランス混合物を適当なベンジル化合物と反応させた後、このベンジル化反応の反応混合物を分離する。ベンジル化反応の反応混合物は化合物Ｉのトランス及びシス異性体を含む。この混合物からトランス異性体を単離する。適当な及び好ましいベンジル化合物及びベンジル化反応条件に関しては、上記を参照されたい。適当な分離方法は当業者に公知であり、例えば抽出及びクロマトグラフィー方法を含む。
【００７６】
このようにして得た化合物（Ｉ）のトランス立体異性体を単離し、適当ならば例えばクロマトグラフィー、抽出又はアンモニウム塩としての沈殿により精製し得る。
【００７７】
本発明の方法により、化合物（Ｉ）の個々のエナンチオマーが非常に高い光学純度及び化学純度で、高い収率で得られ得る。具体的には、本発明の方法（Ｂ）により、（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンが好ましくは少なくとも９８％ｅｅ、特に好ましくは少なくとも９９％ｅｅ、より好ましくは少なくとも９９．５％ｅｅ、特に少なくとも９９．９％ｅｅのエナンチオマー過剰率（ｅｅ値）で得ることができる。対応する（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーのエナンチオマー純度は好ましくは少なくとも９７％ｅｅ、特に好ましくは少なくとも９８％ｅｅ、より好ましくは少なくとも９９％ｅｅ、さらにより好ましくは少なくとも９９．５％ｅｅ、特に少なくとも９９．９％ｅｅである。エナンチオマーの化学純度は好ましくは少なくとも９７％、特に好ましくは少なくとも９８％、より好ましくは少なくとも９９％、さらにより好ましくは少なくとも９９．５％、特に少なくとも９９．９％である。
【００７８】
アミン（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）及び（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）のエナンチオマー過剰率は慣用の方法により、例えば比旋光度を測定することにより、又はキラル相を用いたクロマトグラフィー（例えば、キラルカラムを用いるＨＰＬＣ又はガスクロマトグラフィー）により求められ得る。
【実施例】
【００７９】
以下の非限定的実施例により本発明を説明する。
【００８０】
１．）エナンチオ選択的アシル化及びラセミ化合物分割
等部の（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン及び（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンからなるラセミトランス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（１５３７ｇ、７．４９モル）をイソプロピルメトキシアセテート（ＩＰＭＡ）（４２５ｇ、３．９７モル、０．５３当量）と混合し、１５℃に冷却した後、Ｎｏｖｏｚｙｍｅ４３５（登録商標）（３０ｇ）を添加した。冷却浴を外した後、酵素がちょうど懸濁状態を維持するように攪拌速度を調節しながら反応溶液を一晩攪拌した。２０時間後、酵素を濾別し、フィルター上の残渣をトルエン（０．５ｌ）で洗浄し、真空（１５ミリバール）中５０℃の最高温度で濾液から揮発性成分を除去した。蒸留残渣をトルエン（２．５ｌ）に取り、温度が２０℃を越えないように注意しながら冷却しつつ１０％濃度の硫酸（約１．８ｌ）を添加することによってｐＨを１に調節した。水性相を分離し、トルエン（毎回２００ｍｌ）で抽出した。合わせた有機抽出物を１０％濃度の硫酸（１００ｍｌ）及び水（２００ｍｌ）で洗浄した。次いで、溶媒を減圧下で除去し、０．５ミリバール及び１８０℃の浴温度で蒸留残渣から低沸点成分を除去した。（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２−ベンジルオキシシクロヘキシル）メトキシアセトアミド（９２０ｇ、８９％）を残渣として、高粘性油状物として得た。高温シクロヘキサン及びｎ−ペンタンから再結晶して、生成物を結晶性固体（融点４５〜４８℃）として得た。ｅｅは＞９９．９％であった。（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーは抽出の合わせた水性相中に実質的に塩の形態で存在していた。
【００８１】
（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２−ベンジルオキシシクロヘキシル）メトキシアセトアミドの1H-NMR (400MHz,CDCl3): δ = 1.22 (m, 2H), 1.38 (m, 2H), 1.58-1.68 (m, 1H), 1.80 (m, 2H), 2.15 (m, 2H), 3.25 (m, 1H), 3.40 (s, 3H), 3.84 and 3.92 (JAB = 20Hz, 2H), 3.05 (m, 1H), 4.48 and 4.68 (JAB = 16Hz, 2H), 6.55 (s, broad, 1H), 7.22-7.40 (m, 5H)。
【００８２】
２．）エナンチオマーの単離
２．１）（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの単離
１で得た合わせた水性相をトルエン（２ｌ）と混合した。混合物を冷却することにより３０℃未満の温度に維持しながら水性ＮａＯＨ溶液（５０％濃度）を用いてｐＨを約１３に調節した。ガラスウールを介して濾過した後、水性相を分離し、トルエンで２回（毎回２００ｍｌ）抽出した。合わせた有機相を水（２００ｍｌ）で洗浄した。次いで、水性相を捨て、有機相の溶媒を回転蒸発器を用いて除去した。褐色油状物（９５０ｇ）を、溶媒残渣の他に主成分として８７％（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンを含む残渣として得た。減圧下で（０．５ミリバール／１００℃）蒸留して、（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（６５３ｇ，８５％）を９７％の化学純度及び９７．３％のｅｅで得た。
【００８３】
1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ = 1.08-1.38 (m, 4H), 1.58-1.82 (m, 4H), 1.90 (m, 1H), 2.25 (m, 1H), 2.65 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 4.45 and 4.70 (JAB = 16Hz, 2H), 7.22-7.40 (m, 5H)。
【００８４】
２．２）（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの製造
（Ｒ，Ｒ）−Ｎ−（２-ベンジルオキシシクロヘキシル）メトキシアセトアミド（１６８７ｇ、６．０８モル）をトリエタノールアミン（３００ｇ）で希釈し、攪拌しながら水性水酸化ナトリウム溶液（５０％濃度、７８０ｇ、９．７５モル）を添加した。混合物を１２０℃の内部温度まで加熱し、激しく攪拌した。７時間後、反応混合物を水（５００ｍｌ）で希釈した。室温まで冷却した後、トルエン（２ｌ）を添加し、相を相互に分離した。水性相を再びトルエン（２００ｍｌ）で抽出し、有機相を合わせ、合わせた有機相を水（２００ｍｌ）で洗浄した。水性相を除去した後、溶媒を回転蒸発器を用いて除去し、残渣を減圧下で（沸点：０．４〜０．５ミリバール下で１００℃）分別蒸留した。（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンは透明無色液体として１１２５ｇ（９０％）の収率で得た。ｅｅは＞９９．９％であった。
【００８５】
比旋光度［α］Ｄ＝−９６．８（メタノール中ｃ＝２）；１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーと同一であった。
【００８６】
３．）化学及び／又は光学純度の増加
以下の実施例は本発明の沈殿の高い効率を示すのに役立つ。
【００８７】
３．１）（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン塩酸塩の沈殿
９８．５％の化学純度及び８９．６％ｅｅの光学純度（（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーと混合して調節）を有する（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンをトルエン（９０ｍｌ）に導入し、攪拌しながら濃塩酸を添加した。添加完了後、混合物を還流加熱し、トルエンを充填した水トラップを介して留出物を反応容器に戻した。水の除去が完了したら、水トラップを還流冷却器に取り替え、イソプロパノール（１０ｍｌ）を添加した。室温まで冷却した後、沈殿した固体を濾過により単離し、冷トルエン（１０ｍｌ）で洗浄し、減圧下で乾燥した。（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンの塩酸塩を１８２〜１８４℃の融点を有する無色固体（２０．１ｇ，８３％）として得た。水性水酸化ナトリウム溶液により遊離させた遊離２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンのサンプルは＞９９．９％の化学純度及び＞９９．９％ｅｅの光学純度を有していた。
【００８８】
３．２）（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン塩酸塩の沈殿
８５％ｅｅの光学純度（（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーと混合して調節）を有する（Ｓ，Ｓ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンを用いて実施例３．１）の方法を適用すると、９５％ｅｅの光学純度を有する塩酸塩を８２．５％の収率で得た。
【００８９】
沈殿を繰り返すと、＞９９％ｅｅの生成物が得られた。
【００９０】
アンモニウム塩の比旋光度［α］Ｄ＝＋７８．８°（メタノール中ｃ＝２）。
【００９１】
塩酸塩の1H-NMR (400MHz, CDCl3): δ = 1.05-1.38 (m=3H), 1.70 (m, 3H), 2.10 (m, 1H), 2.35 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 3.55 (m, 1H), 4.50 and 4.70 (JAB = 16Hz, 2H), 7.25- 7.50 (m, 5H), 8.50 (s, broad, 3H)。
【００９２】
３．３）（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン塩酸塩の沈殿
９６％の化学純度及び＞９９．９％ｅｅの光学純度を有する（Ｒ，Ｒ）−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミンから出発して、塩酸塩（３２４．３ｇ，８５％）を無色固体として得た。水性水酸化ナトリウム溶液により遊離させた遊離アミンのサンプルは＞９９．９％の化学純度及び＞９９．９％ｅｅの光学純度を有していた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
で表される化合物のトランス立体異性体又はシス立体異性体のエナンチオマーの混合物を、加水分解酵素の存在下でアシル化剤と反応させ、トランス又はシス立体異性体の１つのエナンチオマーが実質的にアシル化された形態で存在し、トランス又はシス立体異性体の他のエナンチオマーが実質的にアシル化されていない形態で存在している混合物を得る、トランス−又はシス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（Ｉ）のエナンチオ選択的アシル化方法。
【請求項２】
式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体を使用すると、実質的にアシル化された（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーと実質的にアシル化されていない（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーの混合物が得られる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）請求項１に定義されている式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体のエナンチオマーの混合物を、加水分解酵素の存在下でアシル化剤と反応させ、化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の１つのエナンチオマーが実質的にアシル化された形態で存在し、化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の他のエナンチオマーが実質的にアシル化されていない形態で存在している混合物を得るステップ；
（ｂ）ステップ（ａ）で得た混合物から化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の非アシル化エナンチオマーを除去するステップ；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得た化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の実質的にアシル化されたエナンチオマーを、対応するアミン（Ｉ）の非アシル化エナンチオマーに加水分解するステップ；
を含む、式（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）及び／又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）
【化２】
で表される光学活性化合物の製造方法。
【請求項４】
ステップ（ａ）で得た実質的にアシル化されていないエナンチオマーは化合物（Ｉ）の（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーであり、実質的にアシル化されたエナンチオマーは化合物（Ｉ）の（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
アシル化剤が、酸成分がカルボニル炭素原子に対してα、β又はγ位に酸素−、窒素−、フッ素−又は硫黄−含有基を有しているエステルから選択される請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
アシル化剤が、ステップ（ａ）において、アシル化しようとするエナンチオマーのモル量に基づき１．０〜１．５当量の量で用いられる請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
加水分解酵素が、バークホルデリア（Burkholderia）属又はシュードモナス（Pseudomonas）属の細菌、あるいはカンジダ（Candida）属の酵母に由来するリパーゼから選択される請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
リパーゼが、カンジダ・アンタルクティカ（Candida antarctica）由来のＬｉｐａｓｅＢである請求項７に記載の方法。
【請求項９】
アシル化剤との反応が、溶媒を添加することなく加水分解酵素の存在下で実施される請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
アシル化剤との反応が、非水性反応媒体中で加水分解酵素の存在下で実施される請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
以下のステップ：
（ｄ）ステップ（ｂ）又は（ｃ）で得た式（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）で表される光学活性化合物を、酸性塩形成剤を添加することによりそのアンモニウム塩に変換するステップ；
（ｅ）アンモニウム塩を単離するステップ；及び
（ｆ）アンモニウム塩から式（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）の遊離塩基を遊離させるステップ；
をさらに含む請求項３〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
酸性塩形成剤を水溶液の形態で添加する請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
水溶液を添加後、水を反応溶液から少なくとも一部除去する請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
酸性塩形成剤が、プロトン酸及びそのアルカリ金属塩から選択される請求項１１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体を、
（ｉ）シクロヘキセンオキシドをアンモニアと反応させて、式（ＩＩ）：
【化３】
で表される化合物を得、次いで
（ｉｉ）式（ＩＩ）で表される化合物のトランス立体異性体を、適当なベンジル化合物と反応させて、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体を得；又は
（ｉｉｉ）式（ＩＩ）で表される化合物のシス及びトランス異性体の混合物を、適当なベンジル化合物と反応させ、対応するシス−及びトランス−ベンジルエーテルの混合物を形成し、この混合物からトランス立体異性体を単離する；
ことにより得る、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
で表される化合物のトランス立体異性体又はシス立体異性体のエナンチオマーの混合物を、加水分解酵素の存在下でアシル化剤と反応させ、トランス又はシス立体異性体の１つのエナンチオマーが実質的にアシル化された形態で存在し、トランス又はシス立体異性体の他のエナンチオマーが実質的にアシル化されていない形態で存在している混合物を得る、トランス−又はシス−２−ベンジルオキシシクロヘキシルアミン（Ｉ）のエナンチオ選択的アシル化方法。
【請求項２】
式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体を使用すると、実質的にアシル化された（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーと実質的にアシル化されていない（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーの混合物が得られる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
（ａ）請求項１に定義されている式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体のエナンチオマーの混合物を、加水分解酵素の存在下でアシル化剤と反応させ、化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の１つのエナンチオマーが実質的にアシル化された形態で存在し、化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の他のエナンチオマーが実質的にアシル化されていない形態で存在している混合物を得るステップ；
（ｂ）ステップ（ａ）で得た混合物から化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の非アシル化エナンチオマーを除去するステップ；
（ｃ）ステップ（ｂ）で得た化合物（Ｉ）のトランス立体異性体の実質的にアシル化されたエナンチオマーを、対応するアミン（Ｉ）の非アシル化エナンチオマーに加水分解するステップ；
を含む、式（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）及び／又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）
【化２】
で表される光学活性化合物の製造方法。
【請求項４】
ステップ（ａ）で得た実質的にアシル化されていないエナンチオマーは化合物（Ｉ）の（Ｓ，Ｓ）エナンチオマーであり、実質的にアシル化されたエナンチオマーは化合物（Ｉ）の（Ｒ，Ｒ）エナンチオマーである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
アシル化剤が、酸成分がカルボニル炭素原子に対してα、β又はγ位に酸素−、窒素−、フッ素−又は硫黄−含有基を有しているエステルから選択される請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
アシル化剤が、ステップ（ａ）において、アシル化しようとするエナンチオマーのモル量に基づき１．０〜１．５当量の量で用いられる請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
加水分解酵素が、バークホルデリア（Burkholderia）属又はシュードモナス（Pseudomonas）属の細菌、あるいはカンジダ（Candida）属の酵母に由来するリパーゼから選択される請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
リパーゼが、カンジダ・アンタルクティカ（Candida antarctica）由来のＬｉｐａｓｅＢである請求項７に記載の方法。
【請求項９】
アシル化剤との反応が、溶媒を添加することなく加水分解酵素の存在下で実施される請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
アシル化剤との反応が、非水性反応媒体中で加水分解酵素の存在下で実施される請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
以下のステップ：
（ｄ）ステップ（ｂ）又は（ｃ）で得た式（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）で表される光学活性化合物を、酸性塩形成剤を添加することによりそのアンモニウム塩に変換するステップ；
（ｅ）アンモニウム塩を単離するステップ；及び
（ｆ）アンモニウム塩から式（（Ｒ，Ｒ）−Ｉ）又は（（Ｓ，Ｓ）−Ｉ）の遊離塩基を遊離させるステップ；
をさらに含む請求項３〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
酸性塩形成剤を水溶液の形態で添加する請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
水溶液を添加後、水を反応溶液から少なくとも一部除去する請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
酸性塩形成剤が、プロトン酸及びそのアルカリ金属塩から選択される請求項１１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体を、
（ｉ）シクロヘキセンオキシドをアンモニアと反応させて、式（ＩＩ）：
【化３】
で表される化合物を得、次いで
（ｉｉ）式（ＩＩ）で表される化合物のトランス立体異性体を、適当なベンジル化合物と反応させて、請求項１に記載の式（Ｉ）で表される化合物のトランス立体異性体を得；又は
（ｉｉｉ）式（ＩＩ）で表される化合物のシス及びトランス異性体の混合物を、適当なベンジル化合物と反応させ、対応するシス−及びトランス−ベンジルエーテルの混合物を形成し、この混合物からトランス立体異性体を単離する；
ことにより得る、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【公表番号】特表２０１０−５０３３９３（Ｐ２０１０−５０３３９３Ａ）
【公表日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５２７８２０（Ｐ２００９−５２７８２０）
【出願日】平成１９年９月１２日（２００７．９．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５９５９４
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０３１８５２
【国際公開日】平成２０年３月２０日（２００８．３．２０）
【出願人】（５０８０２０１５５）ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア (2,842)
【氏名又は名称原語表記】ＢＡＳＦ ＳＥ
【住所又は居所原語表記】Ｄ−６７０５６ Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年２月４日（２０１０．２．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年９月１２日（２００７．９．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５９５９４
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０３１８５２
【国際公開日】平成２０年３月２０日（２００８．３．２０）
【出願人】（５０８０２０１５５）ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア (2,842)
【氏名又は名称原語表記】ＢＡＳＦ ＳＥ
【住所又は居所原語表記】Ｄ−６７０５６ Ｌｕｄｗｉｇｓｈａｆｅｎ， Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
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