前立腺癌免疫療法のための方法および組成物
本発明は、癌（例えば前立腺癌）の治療における免疫応答をもたらすための方法および組成物（例えば、免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド）、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）を特徴とする。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
一般に、本発明は、癌（例えば前立腺癌）を治療するための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
治験における前立腺癌を治療するための免疫療法の失敗は、部分的には、かかる治療における原因腫瘍遺伝子の抗原標的の欠如に基づく。しかし、標的化癌細胞内で特異的に発現される癌特異的抗原の同定は、癌免疫療法にとって合理的な標的を提供する。例えば、前立腺癌のための既存のワクチンは、個別の抗原もまたは同定された抗原も有しない細胞系を用いる。いくつかの例では、これらのワクチンは、標的化癌細胞に対して特異的でない抗原タンパク質、免疫原性を示さない抗原タンパク質、または腫瘍細胞の表面上で十分な量で発現されない抗原タンパク質を含み、それ故、これらのワクチンの有効性が低下し、潜在的に望ましくない副作用がもたらされる。したがって、当該技術分野において、癌、例えば前立腺癌を治療するための有効でより特異的な免疫療法に対する需要が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、癌（例えば前立腺癌）を治療するための免疫応答をもたらすための方法および組成物（例えば、免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド）、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）を特徴とする。
【０００４】
第１の態様では、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＥＲＧ２）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５（ＳＩＭ２）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１（ＡＭＡＣＲ）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２（ＢＩＣＤ１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３（Ｃ１０ｏｒｆ１３７）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４（ＣＤＣＬ６）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５（ＩＣＡ１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６（ＫＩＡＡ１６６１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７（ＭＡＰ７）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８（ＭＹＯ６）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９（ＯＲ５１Ｅ２）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０（ＰＡＩＣＳ）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１（ＰＣＳＫ６）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２（ＰＶＴ１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３（ＲＧＳ１０）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４（ＳＧＥＦ）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５（ＳＭＡＲＣＡ４／／／ＭＲＰＬ４３）、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６（ＳＳ１８）で示される隣接アミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％の配列同一性）を有する免疫応答刺激ペプチドを特徴とし、ここでペプチドは、少なくとも７個であるが５０個未満のアミノ酸残基（例えば、７個〜３０、２５、２０、１５、１４、１３、１２、１１、もしくは１０個の間のアミノ酸残基、好ましくは８、９、もしくは１０個のアミノ酸残基、最も好ましくは９個のアミノ酸残基）を有し、抗原提示分子に結合された場合、哺乳類宿主内で免疫細胞を活性化することができる。別の実施形態では、免疫応答刺激ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、３、４、６、７、８、９、または１０で示されるアミノ酸配列セットを有する。
【０００５】
第２の態様では、本発明は、本発明の第１の態様の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合における、ペプチドに対して特異的に結合可能な活性化免疫細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球）を特徴とする。
【０００６】
第３の態様では、本発明は、抗原提示細胞の抗原提示分子に対して結合される本発明の第１の態様のペプチドを表面上に有する抗原提示細胞を特徴とする。
【０００７】
第４の態様では、本発明は、本発明の第１の態様のペプチドが抗原提示分子に結合された場合における、ペプチドに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。
【０００８】
第５の態様では、本発明は、対象（例えば哺乳動物、例えばヒト）における癌（例えば前立腺癌）を、癌を治療するのに十分な量で本発明の第１、第２、第３、および第４の態様のそれぞれの、ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、または抗体もしくはその抗原結合断片を含有する組成物を投与することによって治療する方法を特徴とする。本方法は、アジュバント、サイトカイン、またはホルモン療法（例えばアンドロゲンの除去）を施すことを含んでもよい。対象（例えばヒト）に投与される組成物は、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、または担体を含んでもよく、かつ当該技術分野で既知の任意の手段（例えば注射）によって投与してもよい。
【０００９】
第６の態様では、本発明は、対象（例えば哺乳動物、例えばヒト）を癌（例えば、前立腺癌）を有するものとして、対象由来の試料中のＥＲＧ（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２、３、もしくは４）またはＳＩＭ２ポリペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、６、７、８、９、もしくは１０）、またはその断片のレベルを測定し、それを参照と比較することによって診断する方法を特徴とし、ここでＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの、参照と比較したレベルの変化（例えば上昇）は、癌（例えば前立腺癌）の診断指標である。試料は、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドが通常的に検出可能な、対象由来の体液（例えば、尿、血液、血清、血漿、および脳脊髄液）、細胞、または組織試料であってもよい。
【００１０】
本発明のすべての態様の他の実施形態では、本発明の免疫細胞は、例えばＴ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球）を含み、抗原提示分子は、例えば、細胞、例えば前立腺癌細胞の表面上に提示されうる組織適合性分子（例えばＨＬＡ分子（例えばＨＬＡクラスＩ分子））である。本発明によって検討される抗原提示細胞は、例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、単球、線維芽細胞、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、および血管内皮細胞を含む。本発明で記載される作用剤のいずれか（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）は、異種化合物、例えば治療剤または細胞毒性剤に結合してもよい。さらに他の実施形態では、本発明の組成物は、ワクチンとして投与されてもよく、例えば追加的な治療剤（例えば化学療法剤）またはアジュバントを含んでもよい。
【００１１】
「免疫細胞の活性化」は、本明細書で使用される場合、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球）、Ｂ細胞、マクロファージ、およびＮＫ細胞）機能における増強、例えば、１つ以上の刺激分子による刺激後のサイトカイン、抗体の放出、および／またはアポトーシスの誘導を意味する。
【００１２】
「アジュバント」は、抗原特異的な免疫応答を、例えば抗原提示細胞の活性化を通じて特異的または非特異的に増強するために使用される任意の物質を意味する。典型的なアジュバントは、オイルエマルジョン（例えば完全または不完全フロインドアジュバント）、ケモカイン、サイトカイン、またはＡＤＰリボシル化外毒素（ｂΛＲＥ））を含む。アジュバントは、抗原とともに投与してもよく、または単独で投与してもよい。単一の分子は、アジュバントおよび抗原特性の双方を有してもよい。
【００１３】
「投与する」は、本明細書で使用される場合、本発明の組成物の用量を、それを必要とする対象に与える方法を意味する。本明細書中に記載の組成物は、例えば、非経口、皮膚、経皮、経眼、吸入、口腔、舌下、舌周囲、経鼻、直腸、局所、および経口投与を含む、当該技術分野で既知の任意の許容可能な経路によって投与してもよい。非経口投与は、動脈内、静脈内、腹腔内、皮下、および筋肉内投与を含む。投与の好ましい方法は、さまざまな要素（例えば、投与されている組成物の成分、治療されている条件およびその重症度、ならびに患者の年齢、体重、および健康）に応じて変化してもよい。
【００１４】
「治療するのに十分な量」は、対象の症状またはその徴候を臨床的に意義のある方法で改善、阻害、または緩和する（例えば、前立腺癌またはその徴候を改善、阻害、予防、または緩和する）ために投与される本発明の組成物の量を意味する。対象におけるなんらかの改善は、治療を行うのに十分であると考えられる。好ましくは、治療するのに十分な量は、例えば癌（例えば前立腺癌）の１つ以上の徴候の発生を低減、阻害、または予防する量であるか、あるいは対象が癌の１つ以上の徴候を罹っているその重症度を低下させるかまたはその期間を短縮する量（例えば、本発明の組成物で治療されない対照対象に対して、少なくとも１０％、２０％、もしくは３０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、もしくは７０％、および最も好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、９９％以上）である。本明細書中に記載の方法を実施するのに使用される組成物の十分な量は、投与の方法と、治療されている対象の年齢、体重、および全体的健康に応じて変化する。医師または研究者は、適切な量および投与計画を決定することができる。
【００１５】
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、全抗体または免疫グロブリンおよび任意の抗原結合断片またはその一本鎖を含む。抗体は、本明細書で使用される場合、哺乳類（例えばヒトまたはマウス）、ヒト化、キメラ、組換えであり、合成により産生され、または天然に単離されうる。本発明の抗体は、抗体のあらゆる既知の形態および抗体様の特性を有する他のタンパク質骨格を含む。例えば、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、または抗体様の特性を有するタンパク質骨格、例えばフィブロネクチンまたはアンキリンリピートであってもよい。抗体はまた、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、ダイアボディ、ナノボディ、アプタマー、またはドメイン抗体であってもよい。抗体は、次のアイソタイプ、すなわちＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、およびＩｇＡｓｅｃ）、ＩｇＤ、またはＩｇＥのいずれかを有してもよい。
【００１６】
用語「抗原結合断片」は、本明細書で使用される場合、癌特異的抗原（例えば前立腺癌特異的抗原（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２））に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を示す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって行われうる。抗体の用語「抗原結合断片」内に包含される結合断片の例として、限定はされないが、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ部位でジスルフィド橋によって連結される２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨおよびＶＬドメインを含むｄＡｂ；（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６頁（１９８９年））；（ｖｉｉ）ＶＨまたはＶＬドメインからなるｄＡｂ；（ｖｉｉｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）；ならびに（ｉｘ）場合によって合成リンカーによって連結可能な２つ以上の単離ＣＤＲの組み合わせが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインのＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、組換え方法を用いて、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖としての作成を可能にする合成リンカーによって連結されうる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として既知；例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６頁（１９８８年）およびＨｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３頁（１９８８年））。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来の技術を用いて得られ、断片は、無傷抗体と同じ方法で、有用性についてスクリーニングされる。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術あるいは無傷免疫グロブリンの酵素的または化学的切断によって生成することが可能である。
【００１７】
「抗原提示細胞」は、表面上で主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子と複合された抗原（例えば癌特異的抗原、例えば前立腺癌特異的抗原）を提示する細胞を意味する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、抗原（例えばナイーブＴ細胞）に暴露されていない免疫細胞（例えばＴ細胞）を活性化することが可能である。これらの抗原提示細胞は、抗原を（例えば、貪食または受容体媒介エンドサイトーシスにより）内在化し、細胞表面上のＭＨＣ分子に結合された抗原の断片を提示する。免疫細胞（例えばＴ細胞）は、抗原提示細胞の表面上のＭＨＣ分子複合体を認識し、それと相互作用する。次いで、追加的な共刺激シグナルが抗原提示細胞によって生成され、Ｔ細胞の活性化がもたらされる。抗原提示細胞は、例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、単球、線維芽細胞、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、および血管内皮細胞を含む。抗原提示細胞は、種々の生物学的な体液、組織、および器官（例えば、末梢血、骨髄、腫瘍浸潤細胞、腫瘍周辺組織、浸潤細胞、リンパ節、脾臓、皮膚、および臍帯血）のいずれかから単離されうる。
【００１８】
「抗原提示分子」は、本明細書で使用される場合、クラスＩまたはクラスＩＩ主要組織適合性（ＭＨＣ）分子（例えばヒト白血球抗原（ＨＬＡ）分子）、あるいは、抗原に結合し、抗原と抗原提示分子の複合体として免疫細胞（例えばナイーブＴ細胞）によって認識されうるように、抗原を細胞の表面上に提示し、それによって例えば免疫細胞の活性化をもたらすことが可能な任意の他の分子を示す。
【００１９】
用語「細胞毒性剤」は、本明細書で使用される場合、細胞の１つ以上の機能（例えば、細胞の複製、分裂、またはタンパク質の分泌）を阻害または阻止するか、あるいは細胞のアポトーシスまたは壊死を引き起こす物質を示す。同用語は、放射性同位体（例えば、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、およびＲｅ１８６）、化学療法剤、および毒素、例えば細菌、真菌、植物または動物に由来する酵素的活性毒素、あるいはこれらの断片を含むように意図される。さらなる細胞毒性剤は、限定はされないが、アルキル化剤、抗生物質、代謝拮抗薬、チューブリン阻害剤、トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤、ホルモンアゴニストまたはアンタゴニスト、あるいは免疫調節剤を含む。細胞毒性剤は、光または赤外線によって活性化された場合に細胞毒性を示しうるか（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ，ＩＲ ｄｙｅｓ；Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９（４）：３２７−３３１頁（２００１年））、他の機械学的経路（ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｐａｔｈｗａｙｓ）を通じて作用しうるか、または補助増強剤（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）でありうる。
【００２０】
用語「免疫細胞」は、本明細書で使用される場合、後天性または先天性免疫系の生成、調節、または効果に関与する任意の細胞を示す。免疫細胞は、例えばＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞またはＣＤ８＋細胞）、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球および樹状細胞、ならびに好中球を含む。
【００２１】
「免疫応答刺激ペプチド」は、例えば、樹状細胞、マクロファージ、単球、およびＢ細胞において発現される抗原提示細胞組織適合性分子（例えば主要組織適合性複合体分子（ＭＨＣ）、例えばＨＬＡクラスＩ分子）によって提示される腫瘍特異的抗原、例えば前立腺癌特異的抗原であるペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２のペプチド）を意味し、ナイーブ免疫細胞（例えばＴ細胞）のペプチド／組織適合性分子複合体に対する結合は、腫瘍特異的抗原に対して免疫細胞を活性化する。かかる免疫応答刺激ペプチドは、一般に、少なくとも７個のアミノ酸残基を含むが、最大で５０個のアミノ酸残基を含みうる。免疫応答刺激ペプチドは、一般に、例えばペプチドの抗原特異的な抗体、抗血清、またはＴ細胞系またはクローンと反応する能力についてのスクリーニングを含む周知の技術を用いて同定されうる。免疫応答刺激ペプチドに対するＴ細胞応答は、当該技術分野で既知のように、例えば、サイトカインの放出、Ｔ細胞増殖の増大、または細胞内カルシウム濃度の変化を含みうる。
【００２２】
「薬学的に許容できる担体」は、共に投与される組成物の治療的特性を保持しながら対象に対して生理学的に許容できる希釈剤、賦形剤、またはアジュバントを意味する。１つの典型的な薬学的に許容できる担体は、生理食塩水である。他の生理学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントおよびそれらの調合物は、当業者にとって既知である。
【００２３】
「増殖性疾患」または「癌」は、異常または制御不能な細胞成長によって特徴づけられた任意の症状を意味する。増殖性疾患の例は、例えば前立腺癌である。他の典型的な癌は、肉腫（例えば明細胞肉腫）、癌（例えば腎細胞癌）、およびリンパ腫；乳腺、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆汁性嚢胞（ｂｉｌｅｃｙｓｔ）、胆管、小腸、泌尿器系（腎臓、膀胱、および尿路の上皮を含む）、女性器系（子宮頸、子宮、卵巣、絨毛腫、および妊娠栄養膜（ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ）を含む）、男性器系（精嚢および睾丸を含む）、内分泌腺（甲状腺腺、副腎、および下垂体を含む）、皮膚（血管腫、黒色腫、骨または軟組織に由来する肉腫、およびカポジ肉腫を含む）、脳および髄膜（星状細胞腫、神経星状膠腫、海綿芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、神経鞘腫および神経芽細胞腫を含む）、神経、目、造血系（緑色白血病、形質細胞腫および皮膚Ｔリンパ腫／白血病を含む）、ならびに免疫系（リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含む）の腫瘍などの固形腫瘍を含む。非固形腫瘍増殖性疾患の例は、白血病（例えば、急性リンパ性白血病）である。
【００２４】
「タンパク質」、「ポリペプチド」または「ペプチド」は、翻訳後修飾（例えばグリコシル化またはリン酸化）とは無関係に、天然ポリペプチドまたはペプチドの全部もしくは一部を構成するかまたは非天然ポリペプチドまたはペプチドを構成する２個より多いアミノ酸の任意の鎖を意味する。ポリペプチドまたはペプチドは、物理的、機械的、または化学的方法を用いて、ポリペプチドが細胞成分から除去されている場合、「単離された」または「実質的に純粋な」といわれることがある。「単離ポリペプチドまたはペプチド」、「実質的に純粋なポリペプチドまたはペプチド」、または「実質的に純粋な単離ポリペプチドまたはペプチド」は、典型的には、細胞成分から除去されたものと考えられ、天然に会合する相手のタンパク質および天然有機分子を少なくとも６０重量％含まない場合、実質的に純粋である。好ましくは、ポリペプチドまたはペプチドは、少なくとも７５重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％、および最も好ましくは少なくとも９９重量％純粋である。実質的に純粋なポリペプチドまたはペプチドは、標準的技術、例えば天然供給源（例えば細胞系）からの抽出、ポリペプチドをコードする組換え核酸の発現、あるいはポリペプチドまたはペプチドの化学的合成によって得ることが可能である。純度は、任意の適切な方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析によって測定することが可能である。あるいは、ポリペプチドまたはペプチドは、それがヒトの介入によって改変され、その天然部位でない位置に配置されている場合、またはそれが１つ以上の細胞に導入されている場合、単離されているものと考えられる。
【００２５】
「特異的に結合する」は、結合部分（例えば、抗体、組織適合性分子、抗原結合断片、受容体、リガンド、小分子、または細胞（例えば免疫細胞））が、標的分子が欠如している非標的細胞または組織ではなく、標的分子（例えば抗原（またはその断片）、サイトカイン、ケモカイン、ホルモン、受容体、抗原／ＭＨＣ複合体、またはリガンド）あるいは標的分子（例えば、細胞表面抗原、受容体、およびリガンド）を担持する細胞または組織と優先的に会合することを意味する。抗原／ＭＨＣ複合体との関連での用語「特異的に結合する」は、例えば、抗原／ＭＨＣ複合体とナイーブ免疫細胞、例えばＴ細胞上の受容体（例えばＴ細胞受容体）との優先的会合に適用される。ある程度の非特異的相互作用が、結合部分と非標的分子（単独でまたは細胞もしくは組織と併せて存在する）の間で生じうることは理解されている。それに対し、特異的結合は、標的分子または複合体の特異的認識を通じて媒介されるものとして識別されうる。特異的結合の結果、結合部分（例えば抗体または抗原結合断片）と例えば標的分子（例えば抗原または抗原／ＭＨＣ複合体）を担持する細胞との間の会合が、結合部分（例えば抗体または免疫細胞）と例えば標的分子が欠如した細胞との間の場合よりもはるかに強力になる。典型的には、特異的結合の結果、例えば標的分子を担持する細胞または組織に結合される結合部分の量（単位時間当たり）が、その標的分子が欠如した細胞または組織の場合よりも２倍、好ましくは５倍超、より好ましくは１０倍超および最も好ましくは１００倍超増加する。結合部分は、例えば、１０−６Ｍ未満、より好ましくは１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、もしくは１０−１２Ｍ未満、および最も好ましくは１０−１３Ｍ、１０−１４Ｍ、もしくは１０−１５Ｍ未満の解離定数で標的分子に結合する。かかる条件下での標的分子、例えばタンパク質またはペプチド（例えば抗原）に対する特異的結合は、その特定の標的分子に対するその特異性について選択される結合部分を必要とする。種々のアッセイ形式は、特定の標的分子（例えば抗原または抗原／ＭＨＣ複合体）に特異的に結合可能な結合部分（例えば抗体または免疫細胞）の選択に適し、かつその逆もいえる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、通常、タンパク質と特異的免疫応答性があるモノクローナル抗体を選択するのに使用される。特異的免疫応答性の判定に使用可能なイムノアッセイの形式および条件の記述については、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８年）を参照のこと。
【００２６】
「対象」は、任意の動物、例えば哺乳動物（例えばヒト）を意味する。本明細書中に記載の方法に従って治療されるべき対象（例えば、癌（例えば前立腺癌）であると診断された対象）は、医療施術者により、かかる症状を有すると診断されている者または症状（例えば癌（例えば前立腺癌））を発症するリスクがある者でありうる。診断は任意の好適な手段によって行われうる。当業者は、本発明によって治療されるべき対象が、標準の試験を受けているか、または、検査なしに、１つ以上のリスク因子（例えば、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）の上昇または癌の病歴）の存在による高リスクの者として同定されている場合があることを理解するであろう。
【００２７】
用語「実質的同一性」または「実質的に同一の」は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列を参照配列と比較する状況で使用される場合、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、参照配列と同じであるか、あるいは２つの配列が最適に整列される場合、ヌクレオチドまたはアミノ酸残基の、参照配列内の対応する位置で同じである特定の百分率を有することを意味する。例えば、参照配列に対して「実質的に同一の」アミノ酸配列は、デフォルトパラメータを伴うＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズムを使用する測定により、またはマニュアルアラインメントおよび目視検査（例えばＮＣＢＩウェブサイトを参照）により、参照配列の完全長全体にわたる最大の一致についての比較および整列がなされる場合、参照配列（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１または１２でそれぞれ示されるＥＲＧまたはＳＩＭ２の完全長アミノ酸配列またはその断片）に対して、少なくとも約６０％の同一性、好ましくは６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれより高い百分率の同一性（最大１００％）を有する。
【００２８】
用語「ワクチン」は、本明細書で使用される場合、組成物の対象への投与後、少なくとも短時間、免疫応答を提供し、免疫を付与するのに使用される組成物として定義される。
【００２９】
本発明の他の特徴および利点は、詳細な説明および特許請求の範囲から自明であろう。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明者らのデータセットおよびＳｔａｎｆｏｒｄデータセットにおける前立腺癌において過剰発現される遺伝子およびＮｏｖａｒｔｉｓ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓから推定されるヒト成人男性の前立腺外の組織において過少発現される遺伝子を再現するベン図である。
【図２】個別の遺伝子（ＡＭＡＣＲ、ＢＩＣＤ１、Ｃ１０ｏｒｆ１３７、ＣＤＣ２Ｌ６、ＩＣＡ１、ＫＩＡＡ１６６１、ＭＡＰ７、ＭＹＯ６、ＯＲ５１Ｅ２、ＰＡＩＣＳ、ＰＣＳＫ６、ＰＶＴ１、ＲＧＳ１０、ＳＧＥＦ、およびＳＩＭ２）のｍＲＮＡ発現レベルのｑＲＴ−ＰＣＲの検証を示す一連のグラフである。ｑＲＴ−ＰＣＲの検証は、ＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを使用して行われた。８つの正常前立腺標本に対して、７つの前立腺癌標本において有意に過剰発現された１５の遺伝子のみ（Ｐ＜．０５）がここで示される。
【図３】ＥＲＧエピトープがヒトＨＬＡ−Ａ２．１に結合し、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を誘発することを示すグラフである。ＨＬＡ−Ａ２．１に対する予測ペプチドの結合が、Ｔ２細胞に対するアセンブリアッセイを用いて評価された（図３Ａ）。試験された１２のうち８つのペプチドが、非結合ペプチド（Ｃｔｒｌ）に対して高い結合能を示した。ＨＬＡ−Ａ２．１からのペプチドの解離の速度が、バインダーペプチドとのインキュベーション後、経時的にＨＬＡ−Ａ２．１の発現の低下を監視することによって判定された。８つのペプチドでのＨＨＤマウスの免疫化によって３つの免疫原性ＥＲＧペプチドが示され、そのうち２つが図３Ｂに示される。
【図４】核酸プログラム型タンパク質アレイ（ＮＡＰＰＡ）を使用するマイクロアレイ実験の方法および結果を示す。図４Ａは、ＮＡＰＰＡの略図である。図４Ｂは、８００の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する１つの前立腺癌血清のスクリーニングによる、ＡＣＰＰ、ＡＭＡＣＲ、ＢＲＤ２、ＥＲＧ、およびＥＴＶ１に対する自己抗体のマイクロアレイデータを示す。
【図５】ＳＩＭ２が前立腺癌患者において自発的な液性応答を引き起こすことを示す棒グラフである。前立腺癌患者９名および健常ドナー５名に由来する血清に、インビトロでの無細胞タンパク質発現に基づくＥＬＩＳＡが施され、ＳＩＭ２に対する自己抗体が検出された。ＳＩＭ２はＧＳＴタグ付きタンパク質として発現され、かつ抗ＧＳＴでコーティングされたプレートがアッセイに使用された。固定化ＳＩＭ２に結合する血清抗体が、標識抗ヒト抗体を使用して検出された。各アッセイにおいては、ＧＳＴ発現ベクターを有するウェルが陰性対照として使用された。ＧＳＴウェルから得られるシグナルは、ＧＳＴ−ＳＩＭ２を有するウェルから得られるものから差し引かれた。３回の実験が、３つ組のウェル（各血清試料／実験に対する）を使用して行われた。３つ組の平均および標準偏差に対して統計を行い、抗体量が、ＧＳＴ−ＳＩＭ２およびＧＳＴ単独によって生成される光学密度（ＯＤ）シグナルの差異としてプロットされた。
【図６Ａ】ＳＩＭ２がＨＬＡ−Ａ２．１拘束性免疫原性エピトープを有することを示すグラフを示す。ＨＬＡ−Ａ２．１に対する結合およびＨＬＡ−Ａ２．１からのペプチドの解離の速度が、バインダーペプチドとのインキュベーション後、経時的にＨＬＡ−Ａ２．１の発現の低下を監視することによって判定された。
【図６Ｂ】ＳＩＭ２がＨＬＡ−Ａ２．１拘束性免疫原性エピトープを有することを示すグラフを示す。９つの結合ペプチドでのＡ２．１トランスジェニックＨＨＤマウスの免疫化は、ＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって示されるように、５つの免疫原性ＳＩＭ２ペプチドを示した。
【図７】アンドロゲン抑制が前立腺に特異的な寛容を弱めることを示す棒グラフである。ハイブリッドＡ２．１／ＰＳＡ（雄、去勢した雄、または雌）トランスジェニックおよびＡ２．１マウスに、ｖａｃ−前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）が免疫され、脾細胞が、ＰＳＡタンパク質が負荷された樹状細胞で再刺激され、ＥＬＩＳＰＯＴ（図７Ａ）またはＰＳＡ−四量体（図７Ｂ）によって試験された。
【図８】アンドロゲンの用量の増加を伴う、それぞれＶｃａｐ細胞系（図８Ａ）およびＬＮＣａｐ細胞系（図８Ｂ）におけるＥＲＧおよびＳＩＭ２のｑＲＴ−ＰＣＲ定量を示す棒グラフである。
【図９】前立腺癌を有するマウスにおける調節性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ）の生成の増加および抗Ｔｉｍ−１アゴニスト抗体の効果を示す棒グラフである。図９Ａおよび図９Ｂは、ＴＧＦ−βの存在下で抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体とともに培養されたＴＲＡＭＰおよび対照マウスの脾細胞に由来する分類されたナイーブＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞について記載する。新規に分化したＴｒｅｇの百分率は、培養の３日後におけるフローサイトメトリーによって判定された。図９Ｃおよび図９Ｄは、免疫化の際の抗Ｔｉｍ−１アゴニスト抗体による治療が、Ｔａｇに特異的なＣＴＬの数の増加からも明らかなように、Ｂ６マウスにおけるＴａｇ抗原に対するＣＴＬ応答を促進することを示す。
【図１０】抗Ｔｉｍ−１抗体による治療が、ＴＲＡＭＰマウスにおけるＴａｇに対するＣＴＬ応答の促進を引き起こすことを示す棒グラフである（Ｐ＜．０１対アイソタイプ対照）。
【図１１】ＡＭＡＣＲアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）である。
【図１２】ＢＩＣＤ１アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）である。
【図１３】Ｃ１０ｏｒｆｌ３７アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）である。
【図１４】ＣＤＣ２Ｌ６アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）である。
【図１５】ＩＣＡ１アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）である。
【図１６】ＫＩＡＡ１６６１アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）である。
【図１７】ＭＡＰ７アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）である。
【図１８】ＭＹＯ６アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）である。
【図１９】ＯＲ５１Ｅ２アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）である。
【図２０】ＰＡＩＣＳアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）である。
【図２１】ＰＣＳＫ６アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）である。
【図２２】ＰＶＴ１核酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）である。
【図２３】ＲＧＳ１０アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）である。
【図２４】ＳＧＥＦアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）である。
【図２５】ＳＭＡＲＣＡ４／／／ＭＲＰＬ４３核酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）である。
【図２６】ＳＳ１８アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）である。
【図２７】ＥＲＧアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）である。
【図２８】ＳＩＭ２アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
詳細な説明
最近、ＥＲＧ転写因子が前立腺癌細胞内で過剰発現され、かつ非癌性前立腺細胞内で発現されないことが発見された。本発明者らは、正常組織がＥＲＧを発現しないことから、ＥＲＧに対する免疫寛容が克服可能であり、かつ免疫応答がＥＲＧに対してもたらされうることを仮定した。本発明者らは、ヒト免疫細胞（例えばナイーブＴ細胞）に対して、例えば大部分のヒトにおけるすべての細胞の表面上に見出されるヒトＨＬＡ−Ａ２．１抗原提示分子を介して提示されうるＥＲＧ由来の免疫応答刺激ペプチドを同定した。さらに、本発明者らは、前立腺癌に対する免疫療法としての役割を果たしうる、前立腺癌細胞内で過剰発現され、かつ非癌性前立腺細胞内で発現されない別のタンパク質であるタンパク質ＳＩＭ２に由来する免疫応答刺激ペプチドを同定した。また、本発明者らの試験では、前立腺癌細胞内で過剰発現される１６のさらなるタンパク質（そのペプチドもまた免疫療法において使用可能である）が同定されている。
【００３２】
したがって、本発明は、癌（例えば前立腺癌）の治療における免疫応答をもたらすための方法および組成物（例えば、免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド）、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）を特徴とする。
【００３３】
ＥＲＧ、ＳＩＭ２、および他の前立腺腫瘍関連抗原
例えば、樹状細胞、マクロファージ、単球、およびＢ細胞において発現される抗原提示細胞の組織適合性分子（例えば主要組織適合性複合体分子（ＭＨＣ）、例えばＨＬＡクラスＩ）によって提示される腫瘍特異的抗原、例えば前立腺癌特異的抗原（例えば、ＥＲＧまたはＳＩＭ２のペプチド）である免疫応答刺激ペプチド。ペプチド／組織適合性分子複合体に対するナイーブ免疫細胞（例えばＴ細胞）の結合は、腫瘍特異的抗原に対して免疫細胞を活性化する。かかる免疫応答刺激ペプチドは、一般に、少なくとも７個のアミノ酸残基であるが５０個未満のアミノ酸残基を有する。例えば、免疫応答刺激ペプチドは、例えば、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、もしくは４９個のアミノ酸残基を含みうる。前立腺癌の治療において使用される免疫応答刺激ペプチドの非限定例が、表１に記載される。
【００３４】
【表１】
【００３５】
免疫応答刺激ペプチドは、周知の技術、例えばＰａｕｌ Ｗ．Ｅ．（編）、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３版、２４３−２４７頁（Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、１９９３年）（参照により本明細書中に援用される）に記載のものを用いて同定してもよい。かかる技術は、例えば、ポリペプチドを、抗原特異的抗体、抗血清、ＭＨＣ分子（例えばＨＬＡクラスＩ分子）、および／またはＴ細胞系またはクローンと反応する能力についてスクリーニングすることを含む。免疫応答刺激ペプチドに対するＴ細胞応答は、例えば、当該技術分野で既知の、サイトカインの放出、Ｔ細胞増殖の増大、または細胞内カルシウム濃度の変化を含みうる。ここで活性化Ｔ細胞は、ペプチドを発現する細胞を標的化し、例えばサイトカインの発現における変化により、アポトーシスまたは壊死を引き起こしうる。
【００３６】
本明細書中に記載の免疫応答刺激ペプチドは、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相合成、溶液相合成、または双方の組み合わせを用いる化学合成によって生成してもよい（例えば、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、１９８４年、Ｔｈｅ Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ（参照により本明細書中に援用される）に記載の方法を参照）。次いで、免疫応答刺激ペプチドは、標準のペプチドアセンブリー化学によって濃縮してもよい。本発明のペプチドはまた、生物学的または遺伝子工学プロセス（例えば、細菌、哺乳類細胞、例えばＣＨＯ細胞、またはトランスジェニック動物における組換え生成）によって得てもよい。例えば、目的のペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む当業者に既知の発現ベクターを使用してもよく、発現ベクターは細胞に取り込まれ、それによってコードされるペプチドは細胞内で発現しうる。
【００３７】
所望される活性を有するペプチドは、必要に応じて修飾して、特定の所望される属性、例えば改善された薬理学的特性を提供することができる一方、未修飾ペプチドの実質的にすべての生物学的活性を増大させるかまたは少なくとも保持して、所望される抗原提示分子に結合させ、かつ適切な免疫細胞を活性化させることができる。例えば、免疫応答刺激ペプチドは、例えば、（保存的または非保存的のいずれかの）置換、欠失、または挿入などのさまざまな変化を受けてもよく、かかる変化であれば、その使用における特定の利点（例えば抗原提示分子に対する改善された結合性）を提供しうる。保存的置換は、例えば、あるアミノ酸残基を生物学的および／または化学的に類似する別の残基に（例えば、１つの疎水性残基を別の残基に、または１つの極性残基を別の残基に）置換することを含みうる。置換は、Ｇｌｙ、Ａｌａ；Ｖａｌ、Ｉｌｅ；Ｌｅｕ、Ｍｅｔ；Ａｓｐ、Ｇｌｕ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ；およびＰｈｅ、Ｔｙｒなどの組み合わせを含む。単一のアミノ酸置換の効果はまた、Ｄ−アミノ酸を用いてプローブしてもよい。かかる修飾は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３４１−３４７頁（１９８６年）、Ｂａｒａｎｙ ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ」，Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、１９７９年、１−２８４頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載のような周知のペプチド合成方法を用いて行ってもよい。
【００３８】
免疫応答刺激ペプチドはまた、例えばアミノ酸の付加または欠失によるペプチドのアミノ酸配列の延長または短縮によって修飾してもよい。ペプチドはまた、特定の残基の順序または組成を改変することによって修飾してもよいが、生物学的活性にとって必須である特定のアミノ酸残基、例えば重要な接触部位の残基または保存された残基は、一般に、生物学的活性に対して悪影響を及ぼすことなく改変することはできない。必須でないアミノ酸は、タンパク質において天然のもの、例えばＬ−α−アミノ酸（またはそのＤ−異性体）に限定される必要はなく、同様に非天然アミノ酸、例えばβ−γ−δ−アミノ酸、ならびにＬ−α−アミノ酸の多数の誘導体を含みうる。
【００３９】
さまざまなアミノ酸残基の模倣体または非天然アミノ酸での免疫応答刺激ペプチドの修飾は、インビボでのペプチドの安定性を高めるのに特に有用である。
【００４０】
本発明の免疫応答刺激ペプチドは、修飾され、インビボでの半減期の改善以外の所望される属性を提供しうる。例えば、ペプチドの免疫細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球）の活性に対する誘導能は、例えばＴヘルパー細胞応答を誘発可能な少なくとも１つのエピトープを有する配列に対する連結によって促進されうる。典型的なエピトープは、インフルエンザウイルス、ＮＳ１（ヘマグルチニン）および破傷風トキソイドに由来する非構造タンパク質を含む。あるいは、エピトープは、ペプチドの溶解度を高めるかまたはペプチドの所望される細胞内区画への標的化を可能にするように選択してもよい。ペプチドはまた、疾患（例えば前立腺癌）を治療、阻害、低減、または緩和することで知られる任意の既知の細胞毒性部分または治療部分に複合してもよい。
【００４１】
一実施形態では、本発明の免疫応答刺激ペプチドは、抗原提示分子に結合された場合、対象における免疫細胞を活性化する。抗原提示分子は、クラスＩもしくはクラスＩＩ主要組織適合性（ＭＨＣ）分子（例えばヒト白血球抗原（ＨＬＡ）分子）、または細胞の表面上の抗原を提示し、かつ抗原と抗原提示分子の複合体として免疫系の細胞によって認識される、抗原に結合可能な任意の他の分子である。典型的なＨＬＡ分子は、限定はされないが、
を含む。ヒトクラスＩＩ ＨＬＡ対立遺伝子は、限定はされないが、ＨＬＡ−ＤＡα１−４（ｐＤＡα１−４）；ＨＬＡ−ＤＡα１−５（ｐＤＡα１−５）；ＨＬＡ−ＤＡβ５（ｐＤＡβ５）；ＨＬＡ−ＤＣα１０７（ｐＤＣα１０７）；ＨＬＡ−ＤＯα２０（ｐＤＯα２０）；ＨＬＡ−ＤＱβｌ５５（ｐＤＱβｌ５５）；ＨＬＡ−ＤＲα１１（ｐＤＲα１１）；ＨＬＡ−ＤＲβ１３４（ｐＤＲβ１３４）；ＨＬＡ−ＤＲβ５（ＴＯＫ Ｈ５ ＤＲβ）；ＨＬＡ−ＤＲβ４（ＹＴ１５８）；ＨＬＡ−ＤＱＡ１（ｐｇＤＱ４Ａ）；ＨＬＡ−ＤＱＢ１（ｐｇＤＱｌＢ）；ＨＬＡ−ＤＱＢ１（ｐｇＤＱ１ＢＳ）；ＨＬＡ−ＤＲＡ（ＤＲＡ２ＥＨ）；ＨＬＡ−ＤＰＡ１（ＤＰＡ０２０２２）；ＨＬＡ−ＤＰＢ１（ＤＰＢ０２０２）；ＨＬＡ−ＤＲＢ１（ＫｂＤＲＢ１０８０３）；ＨＬＡ−ＤＲＢ１（ＫｂＤＲＢ１１２０１）；ＨＬＡ−ＤＲＢ１（ＫｂＤＲＢ１１３０２）；ＨＬＡ−ＤＲＢ３（ＤＲＢ３０３０１ＥＭＪ−４）；ＨＬＡ−ＤＱＡ１（ＤＱＡ１０５０１ＡＭＡＬＡ−４）；ＨＬＡ−ＤＱＢ１（ＤＱＢ１０３０１ＡＭＡＬＡ−４）；ＨＬＡ−ＤＱＡｌ（ＤＱＡ１０１０１ＫＡＳ１１６３−６）；およびＨＬＡ−ＤＱＢ１（ＤＱＢ１０５０３ＥＫ２−４）を含む。
【００４２】
活性化免疫細胞
本発明は、免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子（例えばＭＨＣ分子（例えばＨＬＡクラスＩ分子））に結合された場合における、ペプチドに特異的に結合可能な活性化免疫細胞を特徴とする。一実施形態では、活性化免疫細胞（例えば細胞傷害性Ｔ細胞）は、例えば米国特許第６，１３０，０８７号明細書（参照により本明細書中に援用される）に記載の方法に従い、インビトロで生成してもよい。免疫細胞（例えばＴ細胞）は、例えば、組織適合性分子と複合された免疫応答刺激ペプチドを提示する抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、単球、およびＢ細胞）とともに培養してもよく、それにより免疫細胞が活性化され、ここで活性化された免疫細胞は、組織適合性分子（例えばＨＬＡクラスＩ分子）との複合体において表面上に免疫応答刺激ペプチドを提示する細胞を標的化する。免疫細胞を活性化するための他の方法は、米国特許第５，９２８，６４３号明細書、米国特許第６，０７４，６３５号明細書、および米国特許第６，２１０，８７３号明細書（参照により本明細書中に援用される）において記載されている。
【００４３】
抗原提示細胞
本発明は、表面上に、抗原提示分子と本明細書中に記載の免疫応答刺激ペプチドのいずれか１つとの複合体を含む抗原提示細胞を特徴とする。抗原提示細胞は、例えば、抗原提示能を有する細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、単球、線維芽細胞、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、または血管内皮細胞）を本明細書中に記載の免疫応答刺激ペプチドのいずれか１つと接触させることによって調製してもよい。かかる細胞は、種々の体液、組織、および器官（例えば、末梢血、骨髄、腫瘍浸潤細胞、腫瘍周辺組織、浸潤細胞、リンパ節、脾臓、皮膚、または臍帯血）のいずれかから単離してもよい。
【００４４】
抗原提示細胞を調製するための方法は、例えば米国特許第６，７８７，１６４号明細書（参照により本明細書中に援用される）中に記載されている。つまり、抗原提示細胞は、ペプチドがレシピエント宿主細胞内で有効量で発現されるような（例えば免疫応答刺激ペプチドをコードする１つ以上の組換えまたは合成核酸配列の挿入による）遺伝子導入法技術を用いて改変してもよい。「有効量」は、レシピエント細胞がインビボで所望される免疫応答を惹起できるのに十分な発現であることを意味する。選択された分子を発現するための細胞への遺伝子導入については、核酸は、例えば、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションにより、カルシウム−リン酸−ＤＮＡゲルとして、ＤＥＡＥデキストランを伴い、「裸」核酸の形態で、またはカプセル化形態で（例えばリポソームなどの小胞中で）、または適切なウイルスベクターで、生体外で直接導入してもよい。目的の組換え遺伝子の抗原提示細胞への導入後における発現は、例えばタンパク質産物の機能活性についてのイムノアッセイまたは生物学的アッセイによって確認される。例えば、細胞に導入された分子の発現は、（免疫応答刺激ペプチドに特異的な）標識抗体の抗原提示細胞への結合を、例えばＦＡＣＳまたはＥＬＩＳＡなどのアッセイを用いて検出することによって確認してもよい。改変細胞の生物学的活性は、例えばインビトロアッセイおよびヒトで試験する前の動物モデル（例えば、マウスまたは非ヒト霊長類）において検証してもよい。本発明の改変細胞の、所望されるように機能する、例えば、免疫応答を活性化するために抗原を処理し、提示する能力は、インビトロまたはインビボアッセイを用いて試験してもよい。免疫細胞活性化（例えばＴ細胞活性化）は、免疫細胞の増殖における変化の測定、標的細胞の殺滅、および特定の調節因子（例えばリンホカイン）の分泌、特定の免疫調節分子のｍＲＮＡの発現、またはこれらの事象の組み合わせを含むさまざまな既知の方法によって検出してもよい。
【００４５】
遺伝子導入の代わりとして、本明細書中に記載の免疫応答刺激ペプチドは、培養物中の抗原提示細胞に付加し、分子を例えばＴ細胞に提示するため、抗原提示細胞上に「負荷する」ことが可能である（例えば、Ｔｙｋｏｃｉｎｓｋｉら、Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４８：１−１６頁、１９９６年（参照により本明細書中に援用される）を参照）。ペプチドまたはタンパク質のパルシング（例えば共培養）を使用することも可能である（Ｉｎａｂａら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：６３１−６４０頁、１９９０年）。あるいは、ペプチドは、選択される免疫応答刺激ペプチドを担持するリポソームとの融合を介して細胞表面に導入してもよい（Ｃｏｅｓｈｏｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：１３４３−１３４８頁、１９８５年）。
【００４６】
抗原提示細胞は、細胞用培地、生理食塩水、またはリン酸塩緩衝化生理食塩水などの任意の既知の生理学的に適合可能な薬学的担体中に懸濁し、生理学的に許容できる水性薬学的組成物を形成してもよい。非経口媒体は、例えば、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、または乳酸加リンガーを含む。抗原提示細胞は、複数の投与方法の１つを用いることにより、試験されるべき対象に導入してもよい。例えば、抗原提示細胞は、（アジュバントの存在下または不在下で）摂取により非経口的に（例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、および皮下を含む）接種するかまたは粘膜表面に適用してもよい。あるいは、本発明の抗原提示細胞は、例えば癌病変または感染組織への直接注射により、局所的に投与してもよい。
【００４７】
本発明の抗原提示細胞は、少なくとも１回の投与で、免疫系の免疫細胞を活性化し、例えば癌抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分な数の抗原提示細胞で、それを必要とする対象（例えば前立腺癌患者）に導入される。細胞は、例えば少なくとも１０６〜１０１２個の細胞を有する、単回注入、または同数の細胞を有する複数回連続注入で投与してもよい。
【００４８】
抗体または抗原結合断片
本発明の抗体または抗原結合断片は、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥアイソタイプを含む。本発明の抗体または抗体断片は、本明細書で使用される場合、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）または結合ペプチドを有し、それは標的タンパク質（例えば腫瘍特異的タンパク質、例えば前立腺腫瘍特異的タンパク質（例えばＥＲＧおよびＳＩＭ２）または免疫応答刺激ペプチド）に結合する。一部の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、免疫応答刺激ペプチド抗原提示分子（例えばＨＬＡクラスＩ分子）に結合された場合、ペプチドに特異的に結合する。
【００４９】
本明細書中に記載の抗体またはその断片の多くは、結合特異性またはエフェクター機能の低下、または結合親和性の許容されない低下（例えば約１０−７Ｍ未満）を伴うことなく、可変および定常領域の双方における非必須アミノ酸の置換、付加または欠失を受けうる。通常、かかる改変を取り込む抗体または抗体断片は、その元となる参照抗体または抗体断片に対して実質的な配列同一性を示す。場合により、その元となる参照抗体または抗体断片に対して同じ特異性および増大した親和性を有する突然変異抗体または抗体断片が選択されうる。ファージディスプレイ技術は、かかる抗体を選択するための強力な技術を提供する。例えば、Ｄｏｗｅｒら、国際公開第９１／１７２７１号パンフレット；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；およびＨｕｓｅ、国際公開第９２／０６２０４号パンフレット（参照により本明細書中に援用される）を参照のこと。
【００５０】
抗体断片は、別々の可変重鎖、可変軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、およびｓｃＦｖを含む。断片は、無傷免疫グロブリンの酵素的または化学的分離によって生成してもよい。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、例えばＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｓ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８８年に記載の標準的方法を用いて、ｐＨ３．０〜３．５、ペプシンでのタンパク質分解消化により、ＩｇＧ分子から得てもよい。Ｆａｂ断片は、制限された還元（ｌｉｍｉｔｅｄ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）によってＦ（ａｂ’）２断片から、または、還元剤の存在下でのパパインによる消化によって全抗体から得てもよい。断片はまた、組換えＤＮＡ技術によって生成してもよい。選択される断片をコードする核酸のセグメントは、制限酵素による完全長コード配列の消化またはデノボ合成によって生成される。断片は、ファージコート融合タンパク質の形態で発現される場合が多い。この発現方法は、抗体の親和性強化（ｓｈａｒｐｅｎｉｎｇ）において有利である。
【００５１】
キメラ抗体およびヒト化抗体ならびに抗体断片を調製する方法は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書；米国特許第５，５３０，１０１号明細書；米国特許第５，６２２，７０１号明細書；米国特許第５，８００，８１５号明細書；米国特許第５，８７４，５４０号明細書；米国特許第５，９１４，１１０号明細書；米国特許第５，９２８，９０４号明細書；米国特許第６，２１０，６７０号明細書；米国特許第６，６７７，４３６号明細書；および米国特許第７，０６７，３１３号明細書ならびに米国特許出願第２００２／００３１５０８号明細書；米国特許出願第２００４／０２６５３１１号明細書；および米国特許出願第２００５／０２２６８７６号明細書において記載されている。抗体またはその抗原結合断片の調製については、例えば、米国特許第６，３３１，４１５号明細書；米国特許第６，８１８，２１６号明細書；および米国特許第７，０６７，３１３号明細書においてさらに記載されている。
【００５２】
アジュバント
本発明の組成物に適したアジュバントは、本発明のペプチド（例えば免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド））、抗体またはその抗原結合断片、活性化免疫細胞、および抗原提示細胞に対する免疫応答を促進可能なアジュバントを含む。アジュバントは、当該技術分野で周知である（例えば、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ−Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ、１９９５年、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第６巻、ＰｏｗｅｌｌおよびＮｅｗｍａｎ編、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ ＹｏｒｋおよびＬｏｎｄｏｎ（参照により本明細書中に援用される）に記載）。
【００５３】
本発明の組成物にとって好ましいアジュバントは、アルミニウムまたはカルシウム塩（例えば水酸化物またはリン酸塩）を含む。望ましいアジュバントは、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（商標）などの水酸化アルミニウムゲルである。水酸化アルミニウムゲル（ａｌｕｍ）においては、ペプチド（例えば免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド））、抗体またはその抗原結合断片、活性化免疫細胞、および抗原提示細胞は、アルミニウムが１用量あたり５０〜８００μｇ存在する、好ましくは４００〜６００μｇ存在するようにアジュバントと混和される。
【００５４】
本発明の組成物において使用される別のアジュバントは、エマルジョンである。エマルジョンは、水中油エマルジョンまたは油中水エマルジョンであってもよい。ペプチド、抗体またはその抗原結合断片、活性化免疫細胞、および抗原提示細胞に加え、かかるエマルジョンは、例えばスクアレンまたはスクアランの油相、および分散剤を含む。非イオン性分散剤（例えば、ソルビタンおよびマンニド（ｍａｎｎｉｄｅ）のモノ−およびジ−Ｃ１２−Ｃ２４−脂肪酸エステル、例えばソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、およびマンニドモノオレエート）もまた使用してもよい。
【００５５】
油中水エマルジョンは、本発明の組成物中で乳化される、スクアレンおよびマンニドモノオレエート（Ａｒｌａｃｅｌ（商標）Ａ）、場合によってスクアランを含みうる。かかるエマルジョンの周知の例として、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ−７２０およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ−７０３（Ｓｅｐｐｉｃ（Ｃａｓｔｒｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ））が挙げられ、その各々はスクアレンとスクアランの双方を含有し、各々においてスクアレンが主成分であるが、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ−７０３における程度はより少ないことが理解されている。Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ−７２０はまた、油対水比が７：３（ｗ／ｗ）で使用してもよい。他の水中油エマルジョンアジュバントは、国際公開第９５／１７２１０号パンフレットおよび欧州特許第０３９９８４２号明細書（参照により本明細書中に援用される）に開示されるものを含む。
【００５６】
小分子アジュバントの使用もまた、本明細書中で検討される。小分子アジュバントは、米国特許第４，５３９，２０５号明細書；米国特許第４，６４３，９９２号明細書；米国特許第５，０１１，８２８号明細書；および米国特許第５，０９３，３１８号明細書（参照により本明細書中に援用される）中に記載の７−置換−８−オキソ−または８−スルホ−グアノシン誘導体（例えば７−アリル−８−オキソグアノシン（ロキソリビン））を含む。
【００５７】
追加的なアジュバントは、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）（Ｃｏｒｉｘａ Ｃｏｒｐ．から入手可能（米国特許第４，９８７，２３７号明細書を参照））、Ｃｏｌｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐから入手可能のＣＰＧ、ＱＳ２１（Ａｑｕｉｌａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から入手可能）、ＳＢＡＳ２（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍから入手可能）、米国特許第４，７６７，８４２号明細書中に記載のムラミルジペプチド類似体、およびＭＦ５９（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ．から入手可能（米国特許第５，７０９，８７９号明細書および米国特許第６，０８６，９０１号明細書を参照））を含む。他のアジュバントは、南アメリカの樹木キラジャ・サポナリア・モリナ（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）の樹皮由来の活性サポニン画分（例えばＱｕｉｌ（商標）Ａ）を含む。Ｑｕｉｌ（商標）Ａの誘導体、例えばＱＳ２１（Ｑｕｉｌ（商標）ＡのＨＰＬＣ精製画分誘導体）、およびその生成方法は、米国特許第５，０５７，５４０号明細書に開示されている。ＱＳ２１（ＱＡ２１として公知）に加え、ＱＡ１７などの他の画分もまた開示されている。
【００５８】
３−Ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａは、Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍによって製造される周知のアジュバントである。アジュバントは、細菌から抽出される３つの成分、すなわち、２％スクアレン／Ｔｗｅｅｎ（商標）８０エマルジョン中での、モノホスホリル脂質（ＭＰＬ）Ａ、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）を含有する。このアジュバントは、英国特許第２１２２２０４Ｂ号明細書中に教示される方法によって調製してもよい。３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい形態は、直径が０．２μｍ未満の小さい粒子サイズを有するエマルジョンの形態である（欧州特許第０６８９４５４Ｂｌ号明細書）。
【００５９】
ムラミルジペプチドアジュバントは、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ；米国特許第４，６０６，９１８号明細書）、Ｎ−アセチル−ｎｏｒ−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ＣＧＰ１１６３７，ｎｏｒ−ＭＤＰと称される）、およびＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’，２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ（ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｏｘｙ））−エチルアミン（ＣＧＰ）１９８３Ａ（ＭＴＰ−ＰＥと称される）を含む。
【００６０】
アジュバント混合物は、例えば、３Ｄ−ＭＰＬとＱＳ２１の混合物（例えば欧州特許第０６７１９４８Ｂｌ号明細書を参照）、３Ｄ−ＭＰＬおよびＱＳ２１を含む水中油エマルジョン（例えば、国際公開第９５／１７２１０号パンフレットおよび国際出願ＰＣＴ／ＥＰ９８／０５７１４号明細書を参照）、他の担体と調合された３Ｄ−ＭＰＬ（例えば欧州特許第０６８９４５４Ｂｌ号明細書を参照）、コレステロール含有リポソーム中で調合されたＱＳ２１（例えば国際公開第９６／３３７３９号パンフレットを参照）、または免疫刺激オリゴヌクレオチド（例えば国際公開第９６／０２５５５号パンフレットを参照）を含む。他のアジュバントは、例えば国際公開第９９／５２５４９号パンフレットに記載のものと、ポリオキシエチレンエーテルの非微粒子懸濁液（ｎｏｎ−ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）（例えば英国特許出願第９８０７８０５．８号明細書を参照）を含む。
【００６１】
アジュバントは、さまざまな量で使用され、それは、アジュバント、対象、投与されている組成物（例えば、ペプチド（例えば免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド））、抗体またはその抗原結合断片、活性化免疫細胞、および抗原提示細胞を含む組成物）の成分によって変化しうる。典型的な量は、約１μｇ〜約５０ｍｇ／用量で変化しうる。当業者は、適切な濃度または量が容易に決定できることを理解している。
【００６２】
細胞毒性剤および他の治療剤に対する複合
本発明の作用剤（例えば、免疫応答刺激ペプチドおよびこれらのペプチドに対する抗体またはその抗原結合断片）は、それぞれ、任意の既知の細胞毒性部分または治療的部分と結合させるかまたはそれとともに投与して、本発明の作用剤または組成物を形成してもよく、それを投与し、疾患（例えば前立腺癌）または疾患の１つ以上の徴候を治療、阻害、低減、または緩和することが可能である。例として、限定はされないが、アシビシン；アクラルビシン；塩酸アコダゾール；アクロニン；アドゼレシン；アドリアマイシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン（Ａｍｂｏｍｙｃｉｎ）；酢酸アメタントロン；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；塩酸ビサントレン；ビスナフィドジメシレート；ビセレシン；硫酸ブレオマイシン；ブレキナールナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カンプトセシン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；塩酸カルビシン；カルゼルシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；コンブレタスタチンＡ−４；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ＤＡＣＡ（Ｎ−［２−（ジメチル−アミノ）エチル］アクリジン−４−カルボキサミド）；ダクチノマイシン；塩酸ダウノルビシン；ダウノマイシン；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニン；デザグアニンメシレート；ジアジクオン；ドセタキセル；ドラスタチン；ドキソルビシン；塩酸ドキソルビシン；ドロロキシフェン；クエン酸ドロロキシフェン；プロピオン酸ドロモスタノロン（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）；デュアゾマイシン；エダトレキセート；塩酸エフロールニチン；エリプチシン；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロマート；エピプロピジン；塩酸エピルビシン；エルブロゾール；塩酸エソルビシン；エストラムスチン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；ヨード化ケシ油Ｉ−１３１；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；塩酸ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；リン酸フルダラビン；フルオロウラシル；５−ＦｄＵＭＰ；フルロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；塩酸ゲムシタビン；金Ａｕ１９８；ホモカンプトセシン；ヒドロキシウレア；塩酸イダルビシン；イホスファミド；イルモフォシン；インターフェロンα−２ａ；インターフェロンα−２ｂ；インターフェロンα−ｎ１；インターフェロンα−ｎ３；インターフェロンβ−Ｉａ；インターフェロンγ−Ｉｂ；イプロプラチン；塩酸イリノテカン；酢酸ランレオチド；レトロゾール；酢酸ロイプロリド；塩酸リアロゾール；ロメテレキソールナトリウム；ロムスチン；塩酸ロソキサントロン；マソプロコール；メイタンシン；塩酸メクロレタミン；酢酸メゲストロール；酢酸メレンゲストロール；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；Ｍｅｔｕｒｅｄｅｐａ（メトウレデパ）；ミチンドミド；マイトカルシン；マイトクロミン；ミトギリン；マイトマルシン；マイトマイシン；マイトスパー；ミトタン；塩酸ミトキサントロン；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキシスラン；パクリタキセル；ペガスパルガーゼ；ペリオマイシン（Ｐｅｌｉｏｍｙｃｉｎ）；ペンタムスチン（Ｐｅｎｔａｍｕｓｔｉｎｅ）；硫酸ペプロマイシン；ペルホスファミド（Ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；ピポブロマン；ピポスルファン；塩酸ピロキサントロン；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；塩酸プロカルバジン；ピューロマイシン；塩酸ピューロマイシン；ピラゾフリン；リゾキシン；リゾキシンＤ；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；塩酸サフィンゴール；セムスチン；シムトラゼン；スパルホサートナトリウム；スパルソマイシン；塩酸スピロゲルマニウム；スピロムスチン；スピロプラスチン（Ｓｐｉｒｏｐｌａｔｉｎ）；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；塩化ストロンチウムＳｒ８９；スロフェヌル；タリソマイシン；タキサン；タキソイド；テコガランナトリウム；テガフール；塩酸テロキサントロン；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チミタック（Ｔｈｙｍｉｔａｑ）；チアゾフリン；チラパザミン；トムデックス（Ｔｏｍｕｄｅｘ）；ＴＯＰ５３；塩酸トポテカン；クエン酸トレミフェン；酢酸トレストロン；リン酸トリシリビン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；塩酸ツブロゾール；ウラシルマスタード；ウレデパ（Ｕｒｅｄｅｐａ）；バプレオチド；ベルテポルフィン；ビンブラスチン；硫酸ビンブラスチン；ビンクリスチン；硫酸ビンクリスチン；ビンデシン；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン；硫酸ビングリシネート；硫酸ビンレウロシン；酒石酸ビノレルビン；硫酸ビンロシジン；硫酸ビンゾリジン；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；塩酸ゾルビシン；２−クロロデオキシアデノシン；２’デオキシホルマイシン；９−アミノカンプトセシン；ラルチトレキセド；Ｎ−プロパギル−５，８−ジデアザ葉酸；２−クロロ−２’−アラビノ−フルオロ−２’−デオキシアデノシン；２−クロロ−２’−デオキシアデノシン；アニソマイシン；トリコスタチンＡ；ｈＰＲＬ−Ｇ１２９Ｒ；ＣＥＰ−７５１；リノマイド；硫黄マスタード；窒素マスタード（メクロレタミン）；シクロホスファミド；メルファラン；クロラムブシル；イホスファミド；ブスルファン；Ｎ−メチル−ニトロソウレア（ＭＮＵ）；Ｎ，Ｎ’−ビス（２−クロロエチル）−Ｎ−ニトロソウレア（ＢＣＮＵ）；Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’シクロヘキシル−Ｎ−ニトロソウレア（ＣＣＮＵ）；Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’−（トランス−４−メチルシクロヘキシル−Ｎ−ニトロソウレア（ＭｅＣＣＮＵ）；Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’−エチルホスホン酸（ジエチル）−Ｎ−ニトロソウレア（ホテムスチン）；ストレプトゾトシン；ジアカルバジン（ｄｉａｃａｒｂａｚｉｎｅ）（ＤＴＩＣ）；ミトゾロミド（ｍｉｔｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）；テモゾロマイド；チオテパ；マイトマイシンＣ；ＡＺＱ；アドゼレシン；シスプラチン；カルボプラチン；オルマプラチン；オキサリプラチン；Ｃ１−９７３；ＤＷＡ２１１４Ｒ；ＪＭ２１６；ＪＭ３３５；ビス（白金）；トムデックス（ｔｏｍｕｄｅｘ）；アザシチジン；シタラビン；ゲムシタビン；６−メルカプトプリン；６−チオグアニン；ヒポキサンチン；テニポシド９−アミノカンプトセシン；トポテカン；ＣＰＴ−１１；ドキソルビシン；ダウノマイシン；エピルビシン；ダルビシン（ｄａｒｕｂｉｃｉｎ）；ミトキサントロン；ロソキサントロン；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）；アムサクリン；ピラゾロアクリジン；オールトランスレチノール；１４−ヒドロキシ−レトロ−レチノール；オールトランスレチノイン酸；Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチナミド；１３−シスレチノイン酸；３−メチルＴＴＮＥＢ；９−シスレチノイン酸；フルダラビン（２−Ｆ−ａｒａ−ＡＭＰ）；または２−クロロデオキシアデノシン（２−Ｃｄａ）などの抗新生物剤が挙げられる。
【００６３】
他の治療化合物として、限定はされないが、２０−ｐｉ−ｌ、２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；オールＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アンバムスチン；アミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリックス（ａｎｔａｒｅｌｉｘ）；抗背側化形態形成タンパク質１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ−１）；抗アンドロゲン、前立腺癌；抗エストロゲン；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリングリシネート；アポトーシス遺伝子調節剤；アポトーシス調節因子；アブリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ（ａｒｇｉｎｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ）；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン；ベンゾイルスタウロスポリン；βラクタム誘導体；β−アレチン；βクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビスアジリジニルスペルミン；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビセレシン；ブレフレート；ブレオマイシンＡ２；ブレオマイシンＢ２；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトセシン誘導体（例えば１０−ヒドロキシ−カンプトセシン）；カナリアポックスＩＬ−２；カペシタビン；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ Ｍ３；ＣＡＲＮ７００；軟骨由来阻害剤；カルゼルシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリクス；クロリン；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；シス−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン；クラムベシジン８１６；クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタンスレキノン（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ）；シクロプラタム；サイペマイシン；シタラビンオクホスファート；細胞溶解因子；シトスタチン；ダクリキシマブ（ｄａｃｌｉｘｉｍａｂ）；デシタビン；デヒドロジデムニンＢ；２’デオキシコホルマイシン（ＤＣＦ）；デスロレリン；デキシフォスファミド；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンＢ；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；ジヒドロタキソール，９−；ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ディスコデルモライド；ドコサノール；ダンセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルホシン；エドレコロマブ；エフロールニチン；エレメン；エミテフル；エピルビシン；エポチロン（Ａ、Ｒ＝Ｈ；Ｂ，Ｒ＝Ｍｅ）；エピチロン；エピリステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；エトポシド；エトポシド４’−リン酸（エトポフォス（ｅｔｏｐｏｆｏｓ））；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン；塩酸フルオロダウノルビシン；ホルフェニメックス；フォルメスタン；ホストリエシン；ホテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリクス；ゲラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ホモハリントニン（ＨＨＴ）；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモフォシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン；イミキモド；免疫賦活剤ペプチド；インスリン様成長因子−１受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；ヨーベングアン（ｉｏｂｅｎｇｕａｎｅ）；ヨードドキソルビシン；イポメアノール，４−；イリノテカン；イロプラクト；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；三酢酸ラメラリン−Ｎ；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病阻害因子；白血球αインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；レバミゾール；リアロゾール；線状ポリアミン類似体；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物；リッソクリナミド７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメテレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ルートテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；溶解ペプチド；メイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリライシン阻害剤；マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；イフェプリストン（ｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ）；ミルテホシン；ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；ミトラシン；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシン類似体；ミトナフィド、ミトトキシン線維芽細胞成長因子−サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン；モノホスホリル脂質Ａ＋ミオバクテリウム細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；多発性腫瘍抑制因子１ベースの治療薬；マスタード抗癌剤；マイカペルオキシドＢ；マイコバクテリウム細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ−置換ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスチップ；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素調節物質；ニトロキシド抗酸化剤；ニトルリン；０６−ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘導物質；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキザウノマイシン；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペガスパルガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリサルフェートナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール；ペルフルブロン；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニル酢酸；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；塩酸ピロカルピン；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤；白金錯体；白金化合物；白金−トリアミン錯体；ポドフィロトキシン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡベースの免疫調節因子；プロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤、微細藻類；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレン複合体；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン；エチドロン酸レニウムＲｅ１８６；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチナミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメクス；ルビギノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ１模倣体；セムスチン；老化由来阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達調節因子；一本鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン；ソブゾキサン；ボロカプタートナトリウム；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルホス酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンジスタチン１；スクアラミン；幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、ストロメライシン阻害剤、スルフィノシン、超活性血管作用性腸管ペプチドアンタゴニスト、スラディスタ（ｓｕｒａｄｉｓｔａ）、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリムスチン、タモキシフェンメチオダイド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、テモポルフィン、テモゾロマイド、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、サリブラスチン、サリドマイド、チオコラリン、トロンボポエチン；トロンボポエチン模倣体；サイマルファシン；サイモポエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；スズエチルエチオプルプリン；チラパザミン；チタノセンジクロリド；トポテカン；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；トリホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来増殖阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリン（ｖａｒｉｏｌｉｎ）Ｂ；ベクター系；赤血球遺伝子治療薬；ベラレソール；ベラミン；ベルディンス（ｖｅｒｄｉｎｓ）；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン；バイタクシン；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；およびジノスタチンスチマラマーが挙げられる。
【００６４】
本発明の作用剤（例えば免疫応答刺激ペプチドまたは抗体もしくはその抗原結合断片）はまた、部位特異的に複合された分子および部分を含んでもよい。部位特異的複合は、本発明の作用剤の特定の残基に対する細胞毒性剤または治療剤の制御された化学量論的結合（ｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｉｃ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）を可能にする。
【００６５】
本発明の作用剤（例えば免疫応答刺激ペプチドおよび抗体またはその抗原結合断片）、あるいはそれに複合される任意の分子または部分はまた、溶解ペプチドと結合していてもよい。かかる溶解ペプチドは、細胞死を誘発し、限定はされないが、ストレプトリシンＯ；ハタゴイソギンチャク（ｓｔｏｉｃｈａｃｔｉｓ）毒；ファロリシン；ブドウ球菌α毒素；ホロスリンＡ；ジギトニン；メリチン；リゾレシチン；心臓毒；およびセレブラトゥルス（ｃｅｒｅｂｒａｔｕｌｕｓ）Ａ毒素を含む（Ｋｅｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３（１６）：５７５２−５７５７頁、１９７８年）。本発明の作用剤はまた、天然ペプチドリシンのいずれかといくらかの配列相同性または化学特性を共有する合成ペプチドに複合可能であり、かかる特性は、限定はされないが、線状、正電荷、両親媒性、および疎水性環境下でのα−ヘリカル構造の形成を含む（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒら、Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ７３：８６０−８６５頁、２００５年）。本発明の作用剤（例えば免疫応答刺激ペプチドおよび抗体またはその抗原結合断片）はまた、例えば免疫グロブリンＦｃサブユニットなど、補体媒介性細胞溶解を含む作用剤と結合していてもよい。本発明の作用剤（例えば免疫応答刺激ペプチドおよび抗体またはその抗原結合断片）はまた、（ホスホリパーゼＡ、ホスホリパーゼＢ、ホスホリパーゼＣ、またはホスホリパーゼＤを含む）酵素のホスホリパーゼファミリーの任意のメンバーまたはその触媒活性サブユニットと結合していてもよい。
【００６６】
本発明の作用剤はまた、放射活性物質と結合させ、検出または治療用途において使用可能な作用剤を形成してもよい。使用可能な放射活性物質は、限定はされないが、フィブリノーゲン１２５Ｉ；フルデオキシグルコース１８Ｆ；フルオロドーパ１８Ｆ；インスリン１２５Ｉ；インスリン１３１Ｉ；ヨーベングアン１２３Ｉ；ヨージパミドナトリウム１３１Ｉ；ヨードアンチピリン１３１Ｉ；ヨードコレステロール１３１Ｉ；ヨード馬尿酸ナトリウム１２３Ｉ；ヨード馬尿酸ナトリウム１２５Ｉ；ヨード馬尿酸ナトリウム１３１Ｉ；ヨードピラセト１２５Ｉ；ヨードピラセト１３１Ｉ；塩酸イオフェタミン１２３Ｉ；ヨーメチン１２５Ｉ；ヨーメチン１３１Ｉ；イオタラム酸ナトリウム１２５Ｉ；イオタラム酸ナトリウム１３１Ｉ；チロシン１３１Ｉ；リオチロニン１２５Ｉ；リオチロニン１３１Ｉ；酢酸メリソプロール１９７Ｈｇ；酢酸メリソプロール２０３Ｈｇ；メリソプロール１９７Ｈｇ；セレノメチオニン７５Ｓｅ；テクネチウム９９ｍＴｃ三硫化二アンチモンコロイド；テクネチウム９９ｍＴｃビシセート；テクネチウム９９ｍＴｃジソフェニン；テクネチウム９９ｍＴｃエチドロネート；テクネチウム９９ｍＴｃエキサメタジム；テクネチウム９９ｍＴｃフリホスミン；テクネチウム９９ｍＴｃグルセプテート；テクネチウム９９ｍＴｃリドフェニン；テクネチウム９９ｍＴｃメブロフェニン；テクネチウム９９ｍＴｃメドロネート；テクネチウム９９ｍＴｃメドロネート二ナトリウム；テクネチウム９９ｍＴｃメルチアチド；テクネチウム９９ｍＴｃオキシドロネート；テクネチウム９９ｍＴｃペンテテート；テクネチウム９９ｍＴｃペンテテートカルシウム三ナトリウム；テクネチウム９９ｍＴｃセスタミビ；テクネチウム９９ｍＴｃシボロキシム；テクネチウム９９ｍＴｃ；スクシメル；テクネチウム９９ｍＴｃ硫黄コロイド；テクネチウム９９ｍＴｃテボロキシム；テクネチウム９９ｍＴｃテトロホスミン；テクネチウム９９ｍＴｃチアタイド（Ｔｉａｔｉｄｅ）；チロキシン１２５Ｉ；チロキシン１３１Ｉ；トルポビドン１３１Ｉ；トリオレイン１２５Ｉ；またはトリオレイン１３１Ｉを含む。
【００６７】
さらに、放射性同位体であれば、ＨＳＡリンカーまたはＨＳＡリンカー複合体に部位特異的に結合しうる。使用可能な反応基を使用すると、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、７７Ａｓ、７２Ａｓ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、または２２５Ａｃを含む放射性同位体を標識するための部位特異的な二官能性キレート剤に複合可能である。
【００６８】
本発明の作用剤はまた、他の、必ずしも治療的である必要はないが、例えば安定性または局在化を促進することを目的とした部分に複合してもよい。
【００６９】
治療剤をタンパク質、特に抗体に複合させるための技術は周知である（例えば、Ａｒｎｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、１９８５年）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、第２版、１９８７年）；Ｔｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｐｉｎｃｈｅｒａら編、１９８５年）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｂａｌｄｗｉｎら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８５年）；Ｔｈｏｒｐｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８頁（１９８２年）；およびＤｏｒｏｎｉｎａら、「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１：（７）７７８−７８４頁（２００３年））。また、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第８９／１２６２４号パンフレットを参照のこと。
【００７０】
さらなる治療法
本発明の作用剤（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）は、単独でまたは癌（例えば前立腺癌）を治療するための他の既知の治療薬と併用して投与してもよい。例えば前立腺癌のためのかかる治療法は、例えば、ホルモン療法（例えばアンドロゲン除去（例えば、黄体化ホルモン放出ホルモンアゴニスト（例えば、ロイプロリド、ゴセレリン、またはブセレリン）、抗アンドロゲン（例えば、フルタミドまたはニルタミド）、副腎阻害剤（例えば、ケトコナゾールまたはアミノグルテチミド）の投与、またはエストロゲンの投与））、化学療法、放射線療法、超音波療法、または手術（例えば、骨盤内リンパ節郭清術、経尿道的前立腺摘除術、前立腺全摘除術、恥骨後式前立腺摘除術、または会陰式前立腺摘除術）を含む。かかる治療は、例えば、米国特許第６，１８４，２４９号明細書；米国特許第６，２４５，８０７号明細書；米国特許第６，４７２，４１５号明細書；および米国特許第６，５３７，９８８号明細書（参照により本明細書中に援用される）に記載されている。
【００７１】
投与および用量
治療有効量の本発明の作用剤（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）、またはそれらの薬学的に許容できる塩の医薬調合物は、投与経路に適合した薬学的に許容できる担体と混合した状態で、経口的、非経口的（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、または皮下注射、吸入、皮内、オプティカルドロップ（ｏｐｔｉｃａｌ ｄｒｏｐ）、またはインプラント）、経鼻的、経膣的、経直腸的、舌下的、または局所的に投与してもよい。
【００７２】
調合物を作製する当該技術分野で周知の方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版）、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９９０年、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて見出される。経口使用を意図した組成物は、薬学的組成物の作製における技術分野で公知の任意の方法に従い、固体または液体形態で調製してもよい。組成物は、より口に合う調製物を提供するため、場合によって甘味料、香味料、着色剤、香料、および／または保存料を含有してもよい。経口投与における固体剤形は、カプセル、錠剤、ピル、粉末、および顆粒を含む。かかる固体形態では、活性化合物は、少なくとも１つの薬学的に許容できる不活性担体または賦形剤と混合される。これらは、例えば、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、デンプン、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム、またはカオリンを含んでもよい。また、結合剤、緩衝剤、および／または潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム）を使用してもよい。錠剤およびピルは、さらに腸溶コーティングを用いて調製してもよい。
【００７３】
経口投与における液体剤形は、薬学的に許容できるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、および軟質ゼラチンカプセルを含む。これらの形態は、当該技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば水性または油性培地を含有する。かかる不活性希釈剤以外に、組成物はまた、アジュバント、例えば浸潤剤、乳化剤、および懸濁剤を含んでもよい。
【００７４】
非経口投与における調合物は、無菌の水性または非水性溶液、懸濁液、またはエマルジョンを含む。適切な媒体の例として、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、ゼラチン、水素化ナフタレン、および注射可能有機エステル、例えばオレイン酸エチルが挙げられる。かかる調合物はまた、アジュバント、例えば保存料、湿潤剤、乳化剤、および分散剤を含有してもよい。生体適合性の生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリド共重合体、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体を使用し、化合物の放出を制御してもよい。本発明の作用剤の他の潜在的に有用な非経口送達系は、エチレン−酢酸ビニル共重合体粒子、浸透圧ポンプ、移植可能な注入系、およびリポソームを含む。
【００７５】
液体調合物は、例えば細菌保持フィルタを通す濾過により、滅菌剤を組成物に取り込ませることにより、または組成物に放射線を照射しするかまたはそれを加熱することによって殺菌してもよい。あるいはまた、それを無菌の固体組成物の形態で作製し、使用直前に滅菌水またはいくつかの他の無菌の注射可能培地に溶解してもよい。
【００７６】
直腸または膣内投与における組成物は、好ましくは坐剤であり、それは、活性物質に加え、ココアバターまたは坐剤ワックスなどの賦形剤を含有してもよい。経鼻または舌下投与における組成物はまた、当該技術分野で既知の標準の賦形剤を用いて調製される。吸入における調合物は、賦形剤、例えばラクトースを含有してもよく、または例えば、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココール酸塩およびデオキシコール酸塩を含有する水溶液であってもよく、あるいは点鼻剤またはスプレーの形態でのまたはゲルとしての投与における油性溶液であってもよい。
【００７７】
本発明の組成物中の活性成分（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、または抗体もしくはその抗原結合断片）の量は、変更してもよい。当業者は、正確な個別の用量が、投与されている成分、投与の時間、投与の経路、調合物の性質、排泄の速度、対象の症状の性質、ならびに患者の年齢、体重、健康、および性別を含む種々の要素にやや依存して調節可能であることを理解するであろう。さらに、本発明の作用剤によって標的化される症状の重症度はまた、用量レベルに対して効果を有することになる。一般に、体重の０．１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの間の本発明の作用剤の用量レベルが、単回投与として毎日投与されるか、または複数回用量に分割される。好ましくは、一般的用量範囲は、１日あたり体重の２５０μｇ／ｋｇ〜５．０ｍｇ／ｋｇの間である。必要とされる用量の大幅な変動は、さまざまな投与経路の異なる効率性を考慮して想定されるべきである。例えば、経口投与であれば、一般に、静脈内注射による投与より高い用量レベルが必要であることが想定されることになる。これらの用量レベルの変動は、当該技術分野で周知の、最適化のための標準の経験的ルーチンを用いて調節してもよい。一般に、正確な治療有効用量は、上で特定された要素を考慮して、担当医によって決定されることになる。
【００７８】
本発明の作用剤（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、または抗体もしくはその抗原結合断片）は、例えば、米国特許第５，６７２，６５９号明細書および米国特許第５，５９５，７６０号明細書（参照により本明細書中に援用される）中に記載される場合などの持続型放出組成物で投与してもよい。即時または持続型放出組成物の使用は、治療されている症状のタイプに依存する。症状が急性または超急性（ｏｖｅｒ−ａｃｕｔｅ）障害からなる場合、即時放出形態による治療が持続型放出組成物の場合より好ましいことになる。あるいは、予防または長期治療においては、持続型放出組成物が一般に好ましいことになる。
【００７９】
本発明の作用剤（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、または抗体もしくはその抗原結合断片）は、任意の好適な方法で調製してもよい。作用剤は、天然供給源から単離し、組換えにより生成し、または合成により生成し、ライブラリーから同定し、またはこれらの方法の組み合わせによって生成してもよい。短いペプチドの合成は、当該技術分野で周知である。先に記載のように、本発明の作用剤のいずれかのペプチド部分は、当該技術分野で既知の標準のペプチド合成方法に従って合成してもよい。
【００８０】
ペプチドを対象に投与するための方法は、例えば、米国特許第５，８３０，８５１号明細書；米国特許第５，５５８，０８５号明細書；米国特許第５，９１６，５８２号明細書；米国特許第５，９６０，７９２号明細書；および米国特許第６，７２０，４０７号明細書（参照により本明細書中に援用される）において記載されている。
【００８１】
治療法の評価
本明細書中に記載の本発明の組成物を用いる治療的治療後、治療の有効性は、複数の方法、例えばＴ細胞の増殖、Ｔ細胞の細胞傷害性、抗体産生、抗原−陽性細胞もしくは組織の数の減少、または臨床的応答を測定するアッセイにより、評価してもよい。選択される抗原（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２抗原）を認識する抗体または免疫細胞の産生の増大は、免疫応答の促進を示すことになる。同様に、対象の免疫細胞による特定の溶解活性または特定のサイトカイン産生の増大あるいは腫瘍退行は、有効性を示すことになる。有効性はまた、望ましくない免疫応答の低下または消失に関連した疾患（例えば前立腺癌）における改善またはその寛解あるいは望ましくない免疫応答に関連した疾患（例えば前立腺癌）における改善またはその寛解によって示されうる。
【００８２】
診断
本発明者らは、前立腺癌細胞内で過剰発現され、かつ非癌性前立腺細胞内で発現されないＥＲＧおよびＳ１Ｍ２について示している。したがって、ＥＲＧおよびＳＩＭ２レベルの測定は、対象における前立腺癌を診断するための手段として用いてもよい。
【００８３】
本発明は、癌（例えば前立腺癌）の治療における免疫応答をもたらすための方法および組成物（例えば、免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド）、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）を特徴とする。方法および組成物は、例えば、別の分子、または任意の断片もしくはその誘導体を含まないかまたはそれに結合されたＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの測定を含んでもよい。本方法は、ＥＲＧまたはＳＩＭ２の絶対レベルまたは正常参照に対する相対レベルの測定を含んでもよい。例えば、５ｎｇ／ｍｌ、４ｎｇ／ｍｌ、３ｎｇ／ｍｌ、２ｎｇ／ｍｌ未満もしくは１ｎｇ／ｍｌ未満の、体液中のＥＲＧまたはＳＩＭ２のレベルは、前立腺癌の低リスクまたは前立腺癌であると診断された患者における良好な転帰を予測するものと考えられる。５ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、２０ｎｇ／ｍｌ、３０ｎｇ／ｍｌ、４０ｎｇ／ｍｌ、もしくは５０ｎｇ／ｍｌを超える、体液中のＥＲＧまたはＳＩＭ２のレベルは、前立腺癌の診断または既に前立腺癌であると診断された対象における不良の転帰と考えられる。ＥＲＧまたはＳＩＭ２の相対レベルに基づく診断においては、前立腺癌を有する対象は、正常参照試料またはレベルに対する、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチド（またはその断片）の発現における変化（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくはそれを超える）を示すことになる。正常参照試料は、例えば、前立腺癌または前立腺癌を示唆する徴候の発症前に同じ対象から採取された試料、前立腺癌を有しない対象由来の試料、または既知の正常濃度での精製された参照ポリペプチドの試料（すなわち前立腺癌を示唆しない）であってもよい。「参照標準またはレベル」は、参照試料に由来する値または数字を意味する。正常参照標準またはレベルは、正常な対象に由来する値または数字であってもよい。
【００８４】
ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの量の測定を含む診断アッセイにおいては、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドは、完全長ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチド、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの分解産物、またはスプライシングを受けたアイソフォーム、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの酵素切断産物などを含んでもよい。一例では、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体は、前立腺癌の診断において使用される。
【００８５】
標準的方法を用い、任意の細胞、組織、または限定はされないが、尿、血液、血清、血漿、唾液、もしくは脳脊髄液を含む体液におけるＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドのレベルを測定してもよい。かかる方法は、イムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング（ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体を使用するを使用）、および定量酵素イムノアッセイ技術を含む。正常対照に対するＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドのレベルの上昇は、前立腺癌の陽性指標と考えられる。
【００８６】
ＥＲＧまたはＳＩＭ２核酸分子、またはその実質的に同一の断片、またはＥＲＧもしくはＳＩＭ２に高ストリンジェンシーでハイブリダイズするＥＲＧもしくはＳＩＭ２の断片もしくはオリゴヌクレオチドは、本発明の診断方法でのＥＲＧまたはＳ１Ｍ２核酸分子の発現を監視するためのプローブとして使用してもよい。正常対照に対するＥＲＧまたはＳＩＭ２核酸分子のレベルの上昇は、前立腺癌の陽性指標と考えられる。
【００８７】
本明細書中に記載の診断方法は、個別に使用するか、または前立腺癌の存在のより正確な診断を意図した任意の他の診断方法と併用してもよい。前立腺癌を診断するための追加的な方法の例として、例えば、前立腺細胞内の前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の検出、デジタル直腸検査、経直腸超音波、または生検（例えば針生検）が挙げられる。
【００８８】
本発明はまた、診断試験キットを提供する。例えば、診断試験キットは、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体と、抗体とＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの間の結合を検出し、評価するための構成要素とを含んでもよい。検出においては、抗体またはＥＲＧもしくはＳＩＭ２ポリペプチドのいずれかが標識され、また抗体またはＥＲＧもしくはＳ１Ｍ２ポリペプチドのいずれかが基質に結合され、それにより、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチド−抗体の相互作用が、抗体とＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの間の結合後に基質に結合される標識の量を測定することによって確定できる。ＥＬＩＳＡは、抗体−基質相互作用を検出するための一般的な当該技術分野で既知の方法であり、本発明のキットで提供してもよい。ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドは、事実上、任意の体液、例えば、尿、血漿、血液、血液血清、精液、または脳脊髄液などの中で検出されうる。参照に対する、例えば正常対照中に存在するレベルに対するＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドのレベルにおける変化を測定するキットは、本発明の方法における診断キットとして有用である。キットはまた、標準曲線または参照レベルまたは正常な範囲内に該当するＥＲＧもしくはＳＩＭ２のレベルおよび場合によって前立腺癌と診断されると考えられることになるレベルを示す試料を含んでもよい。望ましくは、キットは、キットを使用する上での使用説明書を含むことになる。一例では、キットは、前立腺癌の診断を意図するキットを使用する上での使用説明書を含む。さらに別の例では、キットは、治療的処置または投与計画を監視するためのキットを使用する上での使用説明書を含む。キットはまた、前立腺癌の診断に有用な他の診断法を含んでもよく、または既知の前立腺癌の診断手段と併用してもよい。
【実施例】
【００８９】
実施例１ 前立腺癌免疫療法のための推定腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の同定
正常前立腺または正常非前立腺組織よりも前立腺癌に対して発現特異性を有する新規な推定前立腺癌腫瘍関連抗原を同定するため、本発明者らの研究室において作成した前立腺癌および正常前立腺のマイクロアレイのゲノムワイドな遺伝子発現分析を行い、外部の公開された前立腺癌組織アレイデータセットにおける候補ＴＡＡを検証し、非前立腺の成人組織における検出可能な発現を有するものを除外した。
【００９０】
まず、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｕ１３３アレイを使用し、本発明者らの組織保存所（Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）からの癌および新鮮凍結正常前立腺組織標本における遺伝子発現を評価した。組織標本由来の２５０ｎｇの全ＲＮＡを、Ａｍｂｉｏｎ’ｓ ＭｅｓｓａｇｅＡｍｐ ＩＩ ｍＲＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎキットを使用して増幅した。ビオチン−ＵＴＰを、製造業者のプロトコルに従い、一晩のインビトロ転写ステップの間に取り込ませた。遺伝子発現を、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）のＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｕ１３３アレイ（Ｐｌｕｓ２．０チップ）（全ヒトゲノム転写産物を示すアレイ）を使用して評価した。１５μｇのｃＲＮＡを、断片化し、製造業者のプロトコルに従い、アレイにハイブリダイズした。走査したアレイの画質は、ＢｉｏＣｏｎｄｕｃｔｏｒ Ｒパッケージを使用し、バックグラウンド値、存在コール（ｐｒｅｓｅｎｔ ｃａｌｌｓ）のパーセント、倍率、ならびにβ−アクチンおよびＧＡＰＤＨの３’−５’比に基づいて決定した。各転写産物におけるシグナル値を、ｄｃｈｉｐに記述される完全一致（ｐｅｒｆｅｃｔ ｍａｔｃｈｅｄ）（ＰＭ）のみに基づくシグナルモデリングアルゴリズムを使用してまとめた。ＰＭのみに基づくシグナル伝達モデリングアルゴリズムは、ＰＭ−ＭＭ（不一致）モデルより少ない偽陽性を生成する。したがって、シグナル値は転写産物の発現の絶対レベルに対応する。各転写産物におけるこれらのモデル化された正規化シグナル値を、さらに高レベルのバイオインフォマティクス分析のために使用した。モデルベースの発現シグナル値の計算の間、アレイおよびプローブ異常値の問い合わせを行い、画像のスパイクをシグナル異常値として処理した。異常値検出を、ｄｃｈｉｐ異常値検出アルゴリズムを使用して行った。プローブ（単一）またはアレイ異常値の百分率が５％のデフォルト閾値を超える場合、チップは異常値であると考えられた。所与の表現型に富む遺伝子を同定するために２群の試料を比較する場合、２群間の倍率変化（ＦＣ）の９０％の信頼下限（ＬＣＢ）が１．２を超える場合、対応する遺伝子は差次的に発現されたものと考えられた。ＬＣＢはＦＣのストリンジェントな推定値（ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ ｅｓｔｉｍａｔｅ）であり、より優れたランキング統計値（ｒａｎｋｉｎｇ ｓｔａｔｉｓｔｉｃ）であることが示されている。１．２を超えるＬＣＢを有する遺伝子を選択する基準が、遺伝子発現において少なくとも２の「実」倍率変化を有する遺伝子に対応する可能性が最も高いことが示唆されている。
【００９１】
Ｌａｐｏｉｎｔｅら（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０１：８１１−８１６頁（２００４年））で公表された６２の前立腺癌および４１の正常前立腺標本に由来する生の遺伝子発現データを、ＢＲＢアレイのアーカイブされたデータセットから得た。前処理データを、Ｚ変換を用いて正規化した。差次的に発現された遺伝子を、倍率変化（＞０．５）およびＱ値＜０．０５に基づいて同定した。分析により、５１０個の差次的に発現された遺伝子が同定された。
【００９２】
バイオマーカーおよび免疫療法標的の優先度を判定する（ｐｒｉｏｒｉｔｉｚｅ）ため、すべての正常組織内で偏在的に発現されるわけではない遺伝子を同定する必要があった。さまざまなヒト正常組織における遺伝子発現データを、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓ（ｈｔｔｐ：／／ｓｙｍａｔｌａｓ．ｇｎｆ．ｏｒｇ）から得た。このデータベースを使用し、ＭＡＳ５正規化発現データを（各転写産物における存在コール、不在コール、およびマージナル（ｍａｒｇｉｎａｌ）コールとともに）得た。各転写産物における存在コールおよび不在コールに基づき、優先値を計算した。すべての組織内に不在の遺伝子は最高の優先度を示し、すべての組織内に存在する遺伝子は最低の優先度を示した。遺伝子のリストをさらに拡張するため、Ｎｏｖａｒｔｉｓの遺伝子発現データ（Ｄｈａｎａｓｅｋａｒａｎら、Ｎａｔｕｒｅ ４１２：８２２−８２６頁（２００１年））を分析することによって前立腺特異的遺伝子のリストも得た。前立腺以外のすべての正常組織において、ＭＡＳ５コールに基づいて不在であると注釈を付けられた遺伝子は、前立腺特異的遺伝子であると考えられた。
【００９３】
上記のゲノムワイドな遺伝子発現分析により、正常前立腺に対して前立腺癌において過剰発現される１０６３個の遺伝子が同定された。発現分析において同定された上位１００の遺伝子の例として、ＡＭＡＣＲ、ＥＲＧ、ＭＭＰ２６、ＴＨＢＳ４、およびＦＯＸＤ１が挙げられる。次いで、４１の正常前立腺組織および６２の腫瘍性前立腺組織を含む先行的に公開されたデータセット（Ｌａｐｏｉｎｔｅら、上記）からのマイクロアレイデータの包括的分析を行うことにより、１０６３個の推定ＴＡＡを検証した。前立腺癌試料中で有意に過剰発現される遺伝子を、免疫療法におけるバイオマーカーまたは標的として使用されるその可能性について検討した。４２６個の上方制御された前立腺癌遺伝子のリストを、前処理後の倍率変化（＞０．５）およびＦＤＲ値＜０．０５および正規化データ（Ｚ変換）に基づいて得た。本発明者らのデータセットにおける、Ｓｔａｎｆｏｒｄ前立腺癌アレイデータセットに対して前立腺癌において過剰発現された遺伝子の検証は、アレイデータセット間で一致した過剰発現を伴う１４５の転写産物に関与した。
【００９４】
次いで、前立腺癌に対する最高の特異性を有する前立腺癌ＴＡＡを同定するため、インシリコ分析により、ヒト成人男性の非前立腺正常組織において検出可能な遺伝子を除外することを探索した。この目的のため、さまざまなヒト組織における遺伝子発現データを、Ｓｕら（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０１：６０６２−６０６７頁（２００４年））およびＧｅら（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８６：１２７−１４１頁（２００５年））によって行われた２つの研究から得た。前立腺以外のすべての正常組織内のＭＡＳ５コールに基づいて不在であると注釈を付けられた遺伝子は、前立腺特異的遺伝子であると考えられた。包括的分析により、前立腺癌試料中で過剰発現され、かつ組織による大きな制限を受ける２６の転写産物が同定された（図１）。これらの転写産物は、ＥＲＧおよびＳＩＭ２を含む２３の遺伝子に対応する。また、分析により、前立腺癌試料中に存在し、かつ正常組織内に不在の１７のさらなる遺伝子が同定された。
【００９５】
次いで、２３の候補抗原の各々を標的化する定量ｑＲＴ−ＰＣＲを行った。（Ａｇｉｌｅｎｔ＞６．０による）５０ｎｇの高品質ＲＮＡ試料を逆転写し、ｃＤＮＡを得て、１μｌのｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲ反応物の各ウェルに対して使用した。試料は３つ組で実施した。ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ））を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７９００ＨＴ Ｐｒｉｓｍ機器上での２ステップリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析のために使用した。ＳＩＭ２およびＧＡＰＤＨにおけるＰＣＲプライマーを、ＳＩＭ２−Ｆ（５’−ＣＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＡＣＴＣＴＣＡＣＧ−３’）、ＳＩＭ２−Ｒ（５’−ＡＧＧＣＴＧＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧＴＧＴＴ−３’）、ＧＡＰＤＨ−Ｆ（５’−ＴＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＴＧＣＴＴＡＧＣ−３’）、およびＧＡＰＤＨ−Ｒ（５’−ＧＧＣＡＴＧＧＡＣＴＧＴＧＧＴＣＡＴＧＡＧ−３’）として設計した。所与の試料中のＳＩＭ２の発現値を、ＧＡＰＤＨの対応する発現に正規化した。２−ΔΔＣｔ法を用い、ＳＩＭ２の相対発現を計算した（Ｈａｒａｍら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ ６８：１５１７−１５３０頁（２００８年）およびＬｉｖａｋら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５：４０２−４０８頁（２００１年））。
【００９６】
１５の候補抗原（ＡＭＡＣＲ、ＢＩＣＤ１、Ｃ１０ｏｒｆｌ３７、ＣＤＣ２Ｌ６、ＩＣＡ１、ＫＩＡＡ１６６１、ＭＡＰ７、ＭＹＯ６、ＯＲ５１Ｅ２、ＰＡＩＣＳ、ＰＣＳＫ６、ＰＶＴ１、ＲＧＳ１０、ＳＧＥＦ、およびＳＩＭ２）が前立腺癌において過剰発現されることを確認した（図２）。これらの抗原に対する前立腺癌における過剰発現の頻度は、５７％〜８６％の範囲であった。ｑＲＴ−ＰＣＲによって検証したこれらの１５の前立腺癌特異的抗原の中から、正常前立腺において最も一貫して不在でありかつ前立腺癌において最高の発現頻度を有する遺伝子（図２）は、単一目的の（ｓｉｎｇｌｅ−ｍｉｎｄｅｄ）相同遺伝子（ＳＩＭ２）であった。ＳＩＭ２は、試験した７つのうち６つの癌において過剰発現されたが、良性前立腺組織においてはされなかった。
【００９７】
実施例２ 前立腺癌の免疫療法のための標的としてのＥＲＧ
標的治療用抗原の選択は、腫瘍ワクチン（例えば前立腺癌ワクチン）の設計にとって極めて重要である。最近の試験は、３’ＥＲＧとインフレームで融合する５’ＴＭＰＲＳＳ２遺伝子内の前立腺に特異的なプロモーター領域の染色体内再編成（ｉｎｔｒａｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）（ＥＲＧの過剰発現をもたらす）が、ヒト前立腺切除標本の４０〜６０％中に存在することを示している。ＥＲＧは、通常、ヒト前立腺において発現されず、ＥＲＧの発現については、成人の正常組織内で豊富なレベルで検出されないが、培養された内皮または発達細胞に限って報告されている。さらに、発現が成人期を通してさまざまな組織内で維持される他のＥＴＳ因子と異なり、ＥＲＧの発現は組織による大きな制限を受ける。
【００９８】
ＭＨＣクラスＩ拘束性エピトープを予測する異なるアルゴリズムを使用するＥＲＧアミノ酸配列のインシリコ分析によって、５０を超える有望なバインダーが同定され、そこでヒトＨＬＡ−Ａ２．１に対する高親和性結合を有することが予測される１２の推定９−ｍｅｒペプチドを選択した。これらの９−ｍｅｒＥＲＧペプチドのうち３つは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、３、および４によって記載される。すべてのエピトープが、大部分のＴＭＰＲＳＳ２：ＥＲＧ融合産物において検出されない転座のＮ末端に由来し、かつエピトープ配列は、その対応するマウスオーソログに対して１００％相同であった。次いで、これらのペプチドをＨＬＡ−Ａ２．１に対する結合についてスクリーニングし、有意な結合親和性を有する８つを見出した（図３Ａ）。次いで、本発明者らのインシリコ分析により、ヒト成人正常組織内のインサイチューでのＥＲＧ発現が少ないことが同定されたことから、Ｔ細胞のＥＲＧに対する寛容が他の自己抗原の場合より容易に克服可能であると仮定した（データは示さず）。したがって、本発明者らは、免疫化試験を用いて、これらのペプチドが、ヒト化ＨＨＤマウス（すなわちヒトＨＬＡ−Ａ２．１クラスＩ ＭＨＣのみを有するマウス）におけるＥＲＧエピトープに特異的なＨＬＡ−Ａ２．１拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の誘導により測定した場合にＥＲＧに対する寛容を破壊できるか否かを評価し、ＥＬＩＳＰＯＴにより測定した場合に、ＥＲＧに特異的なＣＴＬの誘導を観察した（図３Ｂ）。
【００９９】
インビトロ試験では、前立腺癌患者において抗ＥＲＧ自己抗体が検出されている。これは、推定の標的前立腺ＴＡＡの同定、主に前立腺癌患者の血清中でのＴＡＡに対する自己抗体の検出を目的として、遺伝子発現のプロファイリングに対する代替アプローチを用いて行った。血清、血漿、および軟膜を提供する対象の承諾を得た１０００の症例対照コホートを集めた。このコホートは、３５％の前立腺癌症例（原発性および転移性）、５５％の対照症例、および１０％の不確定または前癌所見を伴う症例（例えば、異型、ＨＧＰＩＮ、またはＡＳＡＰ）を含む。このコホート由来の血清に、高密度核酸プログラム型タンパク質アレイ（ＮＡＰＰＡ）を使用する初期スクリーニングを施し、発生率が高い自己抗体を用いて抗原を同定した（図４Ａ）。いくつかの候補を、ＥＲＧを含む、この最初のスクリーニングから得られる上位１００の抗原から選択し、ＮＡＰＰＡデータを、ＥＬＩＳＡプラットフォームを使用して検証した。この方法を用いて、試験した１２％の前立腺癌患者に由来する血清中の抗ＥＲＧ自己抗体の存在（ＥＲＧおよび他のＴＡＡにおけるデータを図４Ｂに図示する）を確認し、それは前立腺癌患者におけるＥＲＧの免疫原性についての証拠を提供した。
【０１００】
実施例３ 前立腺癌の免疫療法における標的としてのＳＩＭ２
健常個体および前立腺癌患者に由来する血清がＳＩＭ２に対する抗体を有するか否かを試験するため、捕捉用のインビトロで発現されるＧＳＴタグ付きＳＩＭ２を伴うＥＬＩＳＡシステムを使用した。血清試料は、Ｈａｒｖａｒｄ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙおよびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｃｈｉｇａｎの患者の発生部位（ａｃｃｒｕａｌ ｓｉｔｅｓ）で収集した。書面によるインフォームドコンセントは、各患者から得られ、両施設の治験審査委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄ）によって承認された。すべての患者は、４０歳超であり、２．５ｎｇ／ｍｌを超えるＰＳＡ値、異常なデジタル直腸検査（ＤＲＥ）、ＰＳＡの上昇、またはＰＳＡの低下（家族歴などのリスク因子を伴う）が原因で往診していた。試験はまた、過去に生検を受けたことがあり、試験で癌で陽性を示していない男性を含んだ。登録と採血の後、すべての患者が前立腺生検を受け、癌の有無について判定された。
【０１０１】
ヒト完全長ＳＩＭ２ ｃＤＮＡを有するｐＣＲ−ＢＬＵＮＴ２−ｔｏｐｏプラスミドを、Ｏｐｅｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）から購入した。ＳＩＭ２ ｃＤＮＡを有するプラスミド（１０ｐｇ〜２００ｎｇ）は、２つの異なるＰＣＲステップを経た。第１のＰＣＲステップは、２２．５μｌのＡｃｃｕＰｒｉｍｅ Ｐｆｘ Ｓｕｐｅｒ Ｍｉｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および２００ｎＭの各プライマーを含んだ。すべての遺伝子におけるフォワードプライマーが、５’末端に共有配列（ＡＡＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＡＣＣ）を有したが、３’末端に各ｃＤＮＡに特異的な２２〜２５ヌクレオチドを有した。リバースプライマーもまた、５’末端に配列を共有したが（ＡＡＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＡＣＣ）、各プライマーの３’末端（２１〜２７ヌクレオチド）は各ｃＤＮＡに特異的であった。第２のＰＣＲステップは、２２．５μｌのＡｃｃｕＰｒｉｍｅ Ｐｆｘ Ｓｕｐｅｒ Ｍｉｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、第１のステップからの６．６ｍｌのＰＣＲ産物、ならびに２００ｎＭのａｔｔＦおよびａｔｔＲプライマーを含んだ。２つのＰＣＲステップにおけるサイクル条件は、第１のＰＣＲステップが３５サイクルで実行される一方、第２のＰＣＲステップが５サイクルで実行される以外では同じであった。延長ステップは、１分／ｋｂ ｃＤＮＡで設定した。ＰＣＲ産物を、１％アガロースゲル中を走らせ、ゲル精製し、ｐＤＯＮＲプラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローン化し、各ｃＤＮＡのエントリークローンを生成した。エントリークローン（１３０ｎｇ）を使用し、１０μｌの全容量に対して、ｐＣＩＴＥ−ＧＳＴ発現ベクター（１３０ｎｇ）、ＬＲクロナーゼＩＩ酵素ミックス（２μｌ）、およびＴＥ緩衝液を使用して発現クローンを生成した。反応産物（１μｌ）を、製造業者の使用説明書に従い、５０μｌのＯｎｅ Ｓｈｏｔ ＯｍｎｉＭａｘ（商標）２Ｔ１ Ｐｈａｇｅ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｃｅｌｌｓに形質転換した。ＴＡＡのすべては、Ｃ末端にＧＳＴを有するＧＳＴ組換えタンパク質として生成された。血清抗体結合における陰性対照として、ＧＳＴ対照ベクターはまた、ＧＳＴのみが発現されることになるｐＤＥＳＴ１５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して生成された。Ｋｏｚａｋ配列は、哺乳類無細胞系において使用できるように、ＧＳＴの元のｐＤＥＳＴ１５ ５’に導入された。
【０１０２】
このＥＬＩＳＡ法は、捕捉抗体と結合されたｃＤＮＡベクターを利用し、タンパク質が精製される必要がないことから従来のタンパク質アレイより有利でありうる核酸プログラム型タンパク質アレイ（ＮＡＰＰＡ）への単一抗原の適応である（図４Ａ）。ＧＳＴで予備コーティングされたＧＳＴ−ＥＬＩＳＡプレートを、ＧＥ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。プレートを、ＰＢＳ、５％ミルク、および０．２％Ｔｗｅｅｎ−２０で、４℃で一晩ブロッキングした。異なるＴＡＡ−ＧＳＴ組換えタンパク質を、製造業者の使用説明書に従い、微量遠心管内、３０℃で１．５時間、ウサギ網状赤血球溶解液無細胞発現系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現させた。発現されたタンパク質を、ＥＬＩＳＡプレートに移し、４℃で一晩結合させた。プレートを洗浄し、ブロッキング緩衝液中で１：３００に希釈した血清とともに１時間インキュベートし、次いで西洋わさびペルオキシダーゼに連結された抗ヒト抗体とともに１時間インキュベートした。洗浄後、１００μｌの基質（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ ＥＬＩＳＡ Ｆｅｍｔｏ Ｍａｘｉｍｕｍ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ；Ｐｉｅｒｃｅ）を各ウェルに添加し、発光シグナルを、Ｖｉｃｔｏｒ３ ＥＬＩＳＡリーダー（フィルタなし）を使用して読み取った。各血清を２つ組でスクリーニングした。プレートはまた、二次抗体陰性対照およびＧＳＴ対照を含んだ。
【０１０３】
ＳＩＭ２に対する特異的結合を有する患者血清由来の自己抗体の有意なレベル（Ｐ＜０．０１）を、５つのうち２つの評価した前立腺癌試料中で検出した（図５）。それに対し、ＳＩＭ２に対する自己抗体は、９つのうちいくつかの対照患者の血清中で検出できなかった（図５）。
【０１０４】
実施例４ ＥＲＧ標的化およびＳＩＭ２標的化前立腺癌免疫療法におけるツールとしてのヒト化マウスモデル
ＥＲＧ標的免疫療法プロトコルを試験するため、ＨＨＤマウス（ＨＬＡ−Ａ＊０２０１トランスジェニックマウス）、Ｐｂ−ＥＲＧマウス（プロバシン−ＥＲＧトランスジェニックマウス）、およびＰｂ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−マウスを使用した。ＨＨＤマウスは、ヒトＨＬＡ−Ａ２．１を発現するが、マウスＭＨＣ Ｉが欠如している。Ｐｂ−ＥＲＧトランスジェニックマウスは、前立腺限定的ＥＲＧ発現を示し、１２〜１４週齢になるまで、前立腺癌の前駆病変であるマウス前立腺上皮内新形成（ｍＰＩＮ）を発生させた。Ｐｂ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−マウスは、過剰発現されたＥＲＧと低下したＰｔｅｎレベルの組み合わせが、６カ月齢までに完全浸透度を伴う多発性前立腺腺癌の原因であることを示した。
【０１０５】
また、ＥＲＧに基づく免疫療法のＣＴＬ養子移植段階において、異種移植片モデルが抗腫瘍効果の滴定および評価のための高速なシステムを提供することから、それを用いる。このモデルは、ＨＬＡ−Ａ２．１（＋）ヒトＬＮＣａｐ細胞系を使用して開発されており、ヒトＥＲＧを安定的に発現する。トランスジェニックマウスが使用できない場合、同様の方法をＥＲＧ以外のＴＡＡにおいて採用する。
【０１０６】
ＳＩＭ２標的化免疫療法においては、ＴＲＡＭＰ−ＨＨＤハイブリッドマウスを使用する。ＴＲＡＭＰマウスは、前立腺癌の十分に特徴づけられたモデルであり、それは前立腺癌のゲノミクスおよび免疫に関するいくつかの試験におけるモデルとして過去に使用している。さらに、マイクロアレイデータは、ＴＲＡＭＰ前立腺腫瘍におけるＳＩＭ２のレベルの上昇を示した。
【０１０７】
実施例５ Ａ２．１拘束性ＣＴＬによって媒介される免疫療法にとって好適な標的であるＥＲＧのヒトＨＬＡ−Ａ２．１拘束性エピトープの特徴づけ
ＥＲＧに特異的なＣＴＬの寛容に対する前立腺癌発症の影響を、前立腺新生物の形質転換が生じる前後に、（同齢の）ＨＨＤマウスにおけるＥＲＧに特異的なＣＴＬの応答性をＦ１ Ｐｂ−ＥＲＧ−ＨＨＤまたはＰｂ−ＥＲＧ／ＰＴＥＮ＋／−−ＨＨＤハイブリッドマウスの場合と比較することによって判定する。マウスおよびヒトＥＲＧ遺伝子の間での著しい相同性のため、同定した３つのエピトープのアミノ酸配列は、マウスＥＲＧエピトープに対して１００％相同である。
【０１０８】
予備データにおいては、ヒト化マウスにおけるＥＲＧに特異的なＡ２．１拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球の誘導からも明らかなように、免疫化後にＥＲＧに特異的なＴ細胞寛容を破壊できる、ヒトＨＬＡ−Ａ２．１によって提示されるヒトＥＲＧの３つの免疫優性エピトープが同定された。これら３つの免疫優性ヒトＥＲＧエピトープの各々に対して誘導される免疫応答の抗腫瘍有効性を比較し、ＥＲＧに対するＴ細胞寛容が、アンドロゲン抑制を介してまたはＴｉｍ−１の標的化による抑制性ＣＤ４／ＣＤ２５調節性Ｔ細胞の阻害により、さらに弱まるか否かを判定する。これらの前臨床試験は、Ｐｂ−ＥＲＧマウスおよびＰＢ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−マウスとともに飼育したヒト化ＨＨＤマウスのＦ１ハイブリッド子孫を使用して実施する。これらのモデルは、次のように相互に相補的である。すなわち、Ｐｂ−ＥＲＧトランスジェニックマウスは、前立腺限定的ＥＲＧ発現を示し、かつこれらのマウスは、進行癌を発症しないにもかかわらず、ＥＲＧに特異的なＴ細胞応答を促進するため、アンドロゲン調節をいかに最適に利用するかについての試験を可能にする。それに対し、ＰＢ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−マウスは、６カ月齢までに完全浸透度を伴う多発性前立腺腺癌を呈し、それから３つの免疫優性ＥＲＧエピトープのうちいずれがインビボで前立腺癌を根絶させる最高の能力を有するかが判定可能になる。
【０１０９】
３つの優性エピトープのＥＲＧ誘発性前立腺癌に対する除去能の直接比較を、受動免疫化および能動免疫化によって行う。発明者らは、過去に、前立腺腫瘍遺伝子モデルに特異的なＣＴＬ（例えばＴＲＡＭＰマウスにおけるＳＶ４０Ｔａｇ）の養子移植が、確立された前立腺癌を有効に治療可能であることを示している。この実験は、本発明者らのＰＢ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−ｘＨＨＤマウスにおけるヒトＡ２．１拘束性ＥＲＧ特異的ＣＴＬの養子移植によって行う。ＥＲＧの３つの免疫優性ヒトＡ２．１拘束性ペプチドに対するＣＴＬの有効性を比較する。最も有効なエピトープを、第１相治験ＩＮＤにおいて選択する。能動免疫化試験を実施し、前臨床のハイブリッドなヒト化ＥＲＧ／Ａ２．１トランスジェニックモデルにおいて、養子移植の不在下で、インサイチューでの抗腫瘍応答性を最適化するための手段を模索した。本発明者らの能動免疫化試験は、アンドロゲン抑制を用いるかまたは調節性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ）を標的化し、ＥＲＧ寛容を弱め、インビボでの抗腫瘍有効性を改善することに注目する。すべての免疫化法において、所与のペプチド抗原に対するＣＴＬ応答は、ペプチド免疫化マウス由来の脾細胞の、ＩＦＮ−γを分泌し（ＥＬＩＳＰＯＴにより測定）、グランザイムＢおよびパーフォリンを生成し、細胞毒性アッセイにおいてペプチドが負荷されたＨＬＡ−Ａ２．１発現細胞を溶解し、さらにペプチド−四量体複合体に特異的に結合する能力によって規定される。抗腫瘍効果は、（Ｐｂ−ＥＲＧマウスにおける）組織構造および（ＰＢ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−マウスにおける）前立腺腫瘍サイズによって監視する。
【０１１０】
実施例６ Ａ２．１拘束性ＣＴＬによって媒介される免疫療法に適した標的であるヒトＨＬＡ−Ａ２．１拘束性ＳＩＭ２エピトープの同定および特徴づけ
正常（４１の試料）および新生物（６２の試料）の前立腺組織由来のマイクロアレイデータの本発明者らの包括的分析においては、前立腺癌において有意に過剰発現される遺伝子を、それが免疫療法におけるバイオマーカーまたは標的として使用される可能性について検討した。３４３の特有の、前立腺癌で下方制御される遺伝子のリストを、前処理後の倍率変化（＞０．５）およびＦＤＲ値＜０．０５および正規化データ（Ｚ変換）に基づいて得た。本試験の目的のため、発現が非前立腺正常ヒト組織内で全く認められない場合の遺伝子のみを、さらなる検討のために保持した。さまざまなヒト組織における遺伝子発現データを、ＮｏｖａｒｔｉｓおよびＳｔａｎｆｏｒｄによって実施された２つの試験から得た。各転写産物における存在コール、不在コール、およびマージナルコールとともに、正規化された発現データＭＡＳ５を得た。各転写産物における存在コールおよび不在コールに基づき、優先値を計算した。すべての組織内に不在の遺伝子を、最高の優先度で得た。遺伝子のリストをさらに拡張するため、前立腺特異的遺伝子を、Ｓｔａｎｆｏｒｄ遺伝子発現データを分析することによって同定した。前立腺を除くすべての正常組織内でのＭＡＳ５コールに基づき、不在であると注釈を付けられた遺伝子は、前立腺特異的遺伝子であると考えられた。この包括的多段階分析によって５７の遺伝子リストが得られ、それらはＥＲＧを含んだ。転写因子ＳＩＭ２を、分析した大部分の前立腺癌生検物におけるその過剰発現（図６）と正常組織内での発現の不在について、本発明者らの第２の標的として選択した。ＥＲＧおよびＳＩＭ２の同時過剰発現が、分析した前立腺癌生検物の画分中にのみ認められた。
【０１１１】
考えられるＨＬＡ−Ａ＊０２０１結合エピトープを予測するために、候補標的ＴＡＡタンパク質配列を、さまざまなマトリックスパターンに対してスクリーニングし、そこでＨＬＡ−Ａ＊０２０１モチーフに適合する八量体、九量体または十量体ペプチド内部のすべてのアミノ酸を評価する。本発明者らの予測を行うため、汎用アルゴリズムＳＹＦＰＥＩＴＨＩ、ＢＩＭＡＳ、ＭＨＣＰｒｅｄ、およびＲａｎｋＰｅｐに加え、ＮｅｔＣＴＬ、ＰＲＥＤＥＰ、ＰｒｏＰｒｅｄ−Ｉ、ＭＡＰＰＰ、ＪｅｎＰｅｐ、ＮｅｔＭＨＣ、およびｎＨＬＡｐｒｅｄも利用した。
【０１１２】
エピトープ候補のＨＬＡ−Ａ２．１に対する結合について、ＭＨＣ安定化アッセイを用いて評価した。アッセイは、好適なペプチドの、Ｔ２細胞系由来のＭＨＣクラスＩ分子に対する安定化能に基づく。Ｔ２細胞は、抗原提示関連機能トランスポーター（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）（ＴＡＰ）が欠如し、その結果、空の不安定なクラスＩ分子が細胞表面上に蓄積する。細胞表面上のこれらの分子は、適切な結合ペプチドの付加によって安定化されない限り、迅速に解離する。このアッセイでは、インフルエンザＭ１ ＨＬＡ−Ａ＊０２０１結合ペプチドを参照として使用した。
【０１１３】
つまり、Ｔ２細胞を、５０μｇ／２５０×１０３個の細胞／ｍｌの濃度での候補ペプチドの添加前、無血清ＩＭＤＭ（ＡＴＣＣ）中で６時間培養し、３７℃で一晩インキュベートした。細胞を洗浄し、表面ＨＬＡ−Ａ２．１分子を、ＦＩＴＣマウス抗ヒトＨＬＡ−Ａ２ ｍＡｂ（クローンＢＢ７．２、マウスＩｇＧ２ｂκ、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で、４℃で１時間かけて染色した。次いで、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、フローサイトメトリーによって分析した。陰性対照ペプチド（ＮＥＧ、図６Ａを参照）およびインフルエンザマトリックスペプチドＭ１バインダーペプチド（Ｍ１、図６Ａを参照）は、対照としての役割を果たした。所与のペプチドの相対結合親和性を、ＭＦＩ（ペプチド）／ＭＦＩ（陰性ペプチド）として計算した。さらなる試験のため、１．５以上の相対結合親和性のみを考慮した。
【０１１４】
Ｔ２細胞を、無血清イスコフ修飾ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）中で、５０μｇ／ｍｌの各候補ペプチドとともに、３７℃で一晩インキュベートした。次いで、細胞を、１０μｇ／ｍｌでのＢｒｅｆｅｌｄｉｎ Ａ（Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））とともに１時間インキュベートし、洗浄し、Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ Ａ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下、３７℃で０、２、４または６時間インキュベートした。次いで、細胞をＢＢ７．２ ｍＡｂで染色した。各時点においては、ペプチド誘発性のＨＬＡ−Ａ２．１の発現は、ペプチドが負荷されたＴ２細胞の平均蛍光と陰性ペプチドが負荷されたＴ２細胞の平均蛍光との差異として計算した。解離の速度は、経時的にＡ２．１発現の低下による影響を受ける。
【０１１５】
このＭＨＣ安定化アッセイは、ＨＬＡ−Ａ２．１分子を安定化可能な９つのＳＩＭ２ペプチドを示し、結果的に特異的なモノクローナル抗体による表面Ａ２．１分子の検出の増大がもたらされた（図６Ａ）。ペプチド−ＨＬＡ解離速度は時間と相関し、それにより弱い安定化エピトープ（エピトープ８４、１９９、２３７および４３０）および強い安定化エピトープ（エピトープ８７、２０５、２４１および２４４）が同定された。しかし、高い解離速度（弱い安定化因子）を伴うエピトープは、インキュベーションの８時間後であっても非結合対照エピトープを超える弱い結合をさらに示した。
【０１１６】
次いで、これらの９つのＳＩＭ２ペプチドを、トランスジェニックＨＨＤマウスにおけるインビボＣＴＬ応答に対するその誘発能について試験した。１０〜１２週齢の雄ＨＨＤマウスに対し、１５０μｇのＩ−Ａｂ拘束性ＨＢＶｃｏｒｅ１２８−１４０Ｔヘルパーエピトープ（ＴＰＰＡＹＲＰＰＮＡＰＩＬ）の存在下で、５０μｌの不完全フロインドアジュバント（ＩＦＡ）および５０μｌのＰＢＳの中に乳化された１００μｇの各候補ペプチドを、尾の基部に皮下注射した。免疫化の１０〜１２日後、脾臓を回収し、脾細胞を、ＥＬＩＳＰＯＴにより、ペプチド誘発性のＩＦＮ−γの特異的放出について試験した。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを実施するため、９６ウェルのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ ＩＰプレートを、ＰＢＳ中、１０μｇ／ｍｌの濃度の１００μｌ／ウェルのマウスＩＦＮ−γに特異的な捕捉ｍＡｂ（ＡＮｌ８、Ｍａｂｔｅｃｈ Ｉｎｃ．（Ｍａｒｉｅｍｏｎｔ，ＯＨ））で、４℃で一晩かけてコーティングした。ウェルをＰＢＳで洗浄し、ＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳで、３７℃で１時間かけて飽和させた。２．５×１０５個の脾細胞全体を、４つの各複製ウェル内に播種し、５０μｇ／ｍｌのマイトマイシンＣで１時間前処理した、５×１０４個のペプチドが負荷された（ペプチド１０μｇ／ｍｌ、３７℃で２時間）脾細胞を各ウェルに加えた。プレートを、５％ＣＯ２下、３７℃で１〜２日間インキュベートし、ＰＢＳで５回洗浄し、次いで１μｇ／ｍｌのビオチン化ラット抗マウスＩＦＮ−γ ｍＡｂ（Ｒ４−６Ａ２，Ｍａｂｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）とともに、４℃で２４時間または室温で２時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、１００μｌの希釈アルカリホスファターゼ−複合ストレプトアビジンとともに、室温で１時間インキュベートした。スポットを、ペルオキシダーゼ基質（５−ブロモ−４，３−インドリルリン酸およびニトロブルーテトラゾリウム）を付加することによって展開し、ＥＬＲ０４ ＡＩＤ ＥＬＩＳＰＯＴ Ｒｅａｄｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋａ ＧｍｂＨ（Ｓｔｒａβｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ））を使用してカウントした。
【０１１７】
インビトロでのＳＩＭ２（８７）（ＴＬＤＧＦＶＦＶＶ）、ＳＩＭ２（２０５）（ＹＱＩＶＧＬＶＡＶ）、ＳＩＭ２（２３７）（ＳＬＤＬＫＬＩＦＬ）、ＳＩＭ２（２４１）（ＫＬＩＦＬＤＳＲＶ）、およびＳＩＭ２（２４４）（ＦＬＤＳＲＶＴＥＶ）による再刺激が、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイにおけるペプチドに特異的な方法で、有意により多数の脾細胞における（ＳＩＭ２（８７）につきＰ＜．０１および他のエピトープにつきＰ＜．００１）ＩＦＮ−γの放出を誘発することを見出した（図６Ｂ）。これは、ＳＩＭ２（およびＳＩＭ１）がマウスにおける他の非前立腺組織内でも発現されることから、ＳＩＭ２に対する寛容がこれらのエピトープに対するマウスの免疫化を通して回避されるという証拠を提供する。ＳＩＭ２（２５）およびＳＩＭ２（１９９）は、Ａ２．１に強く結合するその能力に反して、免疫原性を示さなかった。
【０１１８】
ヒトＨＬＡ−Ａ２．１拘束性ＳＩＭ２特異的な免疫が、インビボでの前立腺癌発症に影響を与える可能性は、ＴＲＡＭＰ−ＨＨＤハイブリッドマウスにおいて評価されることになる。ＴＲＡＭＰマウスは、前立腺癌の十分に特徴づけられたモデルであり、本発明者らは過去に、それを前立腺癌のゲノミクスおよび免疫についてのいくつかの試験におけるモデルとして利用している。ゲノムワイドな分析では、最近、ＳＩＭ２遺伝子がＴＲＡＭＰ前立腺腫瘍において過剰発現されることを示している。さらに、ＬＮＣａｐ細胞内でのＳＩＭ２の発現がアンドロゲンによって抑制され、これはアンドロゲンの操作とこのモデルにおけるＳＩＭ２標的化免疫療法とを組み合わせる可能性を提供することを示している。
【０１１９】
実施例７ 前立腺ＴＡＡに特異的な免疫寛容を克服するためのアンドロゲン除去の利用
アンドロゲンのシグナル伝達経路は、前立腺癌の発症および進行にとって重要である。アンドロゲン除去は、前立腺癌における従来の治療であり、免疫療法と組み合わされた場合に腫瘍抗原に対する免疫を促進するものと多くには考えられている。マウスにおけるアンドロゲン除去が寛容を弱め、前立腺腫瘍抗原モデルとして、インフルエンザペプチドに対するＣＤ４ Ｔ細胞の応答を高めることが示されている。本発明者らの試験では、プロバシン−ＰＳＡトランスジェニックマウスにおけるＰＳＡに対するＡ２．１拘束性ＣＴＬ応答に対するこの観察を示している。例えば、ハイブリッドＡ２．１／ＰＳＡ（雄、去勢した雄、または雌）トランスジェニックおよびＡ２．１マウスをｖａｃ−前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）で免疫し、脾細胞をＰＳＡタンパク質が負荷された樹状細胞で再刺激し、ＥＬＩＳＰＯＴ（図７Ａ）またはＰＳＡ−四量体（図７Ｂ）によって試験し、アンドロゲン抑制が前立腺に特異的な寛容を弱めることが示された。さらに、雄におけるアンドロゲン除去療法は、良性および悪性前立腺組織へのＴ細胞浸潤の促進をもたらすことが示されている。ここでは、ＥＲＧ−およびＳＩＭ２に特異的な免疫寛容を弱める、ＴＭＰＲＳＳ２−ＥＲＧ融合体およびＳＩＭ２遺伝子のアンドロゲン応答性（図８）を利用する。
【０１２０】
本発明者らの予備データ（図８Ａ）は、ＥＲＧ発現とアンドロゲンの十分に確立された正の相関に合致する。３つの免疫優性ＥＲＧペプチドを、Ｐｂ−ＥＲＧ−ＨＨＤにおけるＥＲＧに特異的なＣＴＬを誘発し、ＰＢ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−−ＨＨＤマウスにおける腫瘍成長を低下させる能力について比較する、能動免疫化の結果に対する去勢の効果を評価する。
【０１２１】
ＥＲＧのように、ＳＩＭ２発現は、アンドロゲンに依存し（図８Ｂ）、これは染色体２１に対するアンドロゲン調節因子に富む領域内のＳＩＭ２遺伝子の位置に基づく可能性が高い。本発明者らのマイクロアレイデータは、ＴＲＡＭＰマウス由来の前立腺腫瘍におけるＳＩＭ２発現の発現増大を示した。雄ＴＲＡＭＰ−ＨＨＤハイブリッドマウスの去勢によるＳＩＭ２への免疫寛容および前立腺腫瘍成長に対するアンドロゲン除去の効果、次いで免疫原性Ａ２．１拘束性ＳＩＭ２ペプチドでの能動免疫化について試験する。
【０１２２】
実施例８ 前立腺ＴＡＡに特異的な免疫寛容を克服するためのＴ細胞免疫グロブリン−ムチン−１（Ｔｉｍ−１）経路の操作
調節性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ）は、さまざまな癌における抗腫瘍免疫応答を著しく妨げる。Ｔｉｍ−１受容体を介してＴ細胞を刺激し、Ｔｒｅｇ細胞の生成およびＴＡＡに対する免疫寛容の発現に干渉する能力を検討するため、ＴＲＡＭＰマウスをＧＦＰ−Ｆｏｘｐ３−ＫＩマウスと交配させた。ＴＲＡＭＰ−ＧＦＰ−Ｆｏｘｐ３ハイブリッドマウスの前立腺−流入リンパ節に由来するナイーブＣＤ４ ＴおよびＣＤ８ Ｔ細胞が、抗ＣＤ３／ＣＤ２８＋ＴＧＦ−βでの治療後にＴｒｅｇ細胞への変換速度の増加を示すことを見出した（図９Ａおよび９Ｂ）。ＴＧＦ−β誘発性分化に対するこの感受性の増大は、高齢マウスにおいて促進される。この新規な観察によると、前立腺癌の発症が腫瘍および末梢血の双方におけるＴｒｅｇの増加と並行する理由が説明できる。癌ワクチンの投与前のＴｒｅｇの減少は、非前立腺モデルにおける腫瘍免疫を強化する。Ｔｉｍ４−Ｉｇ融合タンパク質である作動性抗Ｔｉｍ１抗体（Ａｂ）によるＴ細胞免疫グロブリン−ムチン−１（Ｔｉｍ−１）の刺激またはＴｉｍ−４＋ＤＣによる活性化は、Ｔ細胞をＴＨ１およびＴＨ１７優性表現型に二分させ（ｐｏｌａｒｉｚｅ）、かつ寛容およびＴｒｅｇを破壊することが可能である。まず、Ｂ６マウスを組換え体のＴａｇ発現ワクチニアで免疫し、免疫化の際に異なる用量の抗体を提供することによる抗Ｔｉｍ−１ Ａｂの能力について試験した。Ｔａｇ−四量体の特異性およびＣＤ８細胞によるＩＦＮ−γの生成によって判断すると、アゴニスト抗Ｔｉｍ−１ ＡｂがＴａｇに特異的なＣＴＬにおける有意な増大を誘発したことを見出している（図９Ｃおよび９Ｄ）。この成果は、アゴニスト抗Ｔｉｍ−１抗体が、不活性化インフルエンザウイルスで免疫されたマウスにおいて、抗原特異的な細胞増殖およびＩＦＮ−γの生成を促進したという前報に合致している。次いで、同じ方法を用いて、成体ＴＲＡＭＰ−ＧＦＰ−Ｆｏｘｐ３マウスにおける抗体のＣＴＬ促進能を評価しようとした。同様に、抗体治療の結果、脾臓および前立腺−流入リンパ節の双方においてＴａｇ特異的ＣＴＬが増大した（図１０）。併せて、本発明者らの成果は、抗体または融合タンパク質によるＴｉｍ−１／Ｔｉｍ−４相互作用との干渉がＥＲＧまたはＳＩＭ２での能動免疫化に対する応答性を高めることになるという本発明者らの仮説を支持している。さまざまな前立腺癌のマウスモデルにおけるＴｉｍ−１操作の効果は、能動および受動免疫療法レジメン下で、またアンドロゲン除去と組み合わせて、アゴニスト抗Ｔｉｍ−１モノクローナル抗体を抗原と並行投与することによって試験する。
【０１２３】
他の実施形態
上記の内容から、本明細書中に記載の本発明に対する変形および改良を行い、それをさまざまな用途および条件に導入できることは自明であろう。かかる実施形態はまた、次の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。
【０１２４】
本願中に記載されるすべての出版物、特許出願、および特許は、各々の独立した出版物、特許出願、または特許が、参照により援用されるように、あくまで具体的かつ個別に示される場合と同程度に、参照により本明細書中に援用される。
【０１２５】
上記の内容から、当業者は、本発明の本質的特性を容易に確認でき、本発明のさまざまな変更および改良を行い、それをさまざまな用途および条件に導入できる。したがって、他の実施形態もまた特許請求の範囲の範囲内に含まれる。
【技術分野】
【０００１】
一般に、本発明は、癌（例えば前立腺癌）を治療するための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
治験における前立腺癌を治療するための免疫療法の失敗は、部分的には、かかる治療における原因腫瘍遺伝子の抗原標的の欠如に基づく。しかし、標的化癌細胞内で特異的に発現される癌特異的抗原の同定は、癌免疫療法にとって合理的な標的を提供する。例えば、前立腺癌のための既存のワクチンは、個別の抗原もまたは同定された抗原も有しない細胞系を用いる。いくつかの例では、これらのワクチンは、標的化癌細胞に対して特異的でない抗原タンパク質、免疫原性を示さない抗原タンパク質、または腫瘍細胞の表面上で十分な量で発現されない抗原タンパク質を含み、それ故、これらのワクチンの有効性が低下し、潜在的に望ましくない副作用がもたらされる。したがって、当該技術分野において、癌、例えば前立腺癌を治療するための有効でより特異的な免疫療法に対する需要が存在する。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、癌（例えば前立腺癌）を治療するための免疫応答をもたらすための方法および組成物（例えば、免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド）、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）を特徴とする。
【０００４】
第１の態様では、本発明は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１（ＥＲＧ２）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５（ＳＩＭ２）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１（ＡＭＡＣＲ）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２（ＢＩＣＤ１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３（Ｃ１０ｏｒｆ１３７）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４（ＣＤＣＬ６）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５（ＩＣＡ１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６（ＫＩＡＡ１６６１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７（ＭＡＰ７）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８（ＭＹＯ６）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９（ＯＲ５１Ｅ２）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０（ＰＡＩＣＳ）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１（ＰＣＳＫ６）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２（ＰＶＴ１）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３（ＲＧＳ１０）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４（ＳＧＥＦ）、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５（ＳＭＡＲＣＡ４／／／ＭＲＰＬ４３）、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６（ＳＳ１８）で示される隣接アミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性（例えば、９５、９６、９７、９８、もしくは９９％の配列同一性）を有する免疫応答刺激ペプチドを特徴とし、ここでペプチドは、少なくとも７個であるが５０個未満のアミノ酸残基（例えば、７個〜３０、２５、２０、１５、１４、１３、１２、１１、もしくは１０個の間のアミノ酸残基、好ましくは８、９、もしくは１０個のアミノ酸残基、最も好ましくは９個のアミノ酸残基）を有し、抗原提示分子に結合された場合、哺乳類宿主内で免疫細胞を活性化することができる。別の実施形態では、免疫応答刺激ペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、３、４、６、７、８、９、または１０で示されるアミノ酸配列セットを有する。
【０００５】
第２の態様では、本発明は、本発明の第１の態様の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合における、ペプチドに対して特異的に結合可能な活性化免疫細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球）を特徴とする。
【０００６】
第３の態様では、本発明は、抗原提示細胞の抗原提示分子に対して結合される本発明の第１の態様のペプチドを表面上に有する抗原提示細胞を特徴とする。
【０００７】
第４の態様では、本発明は、本発明の第１の態様のペプチドが抗原提示分子に結合された場合における、ペプチドに対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を特徴とする。
【０００８】
第５の態様では、本発明は、対象（例えば哺乳動物、例えばヒト）における癌（例えば前立腺癌）を、癌を治療するのに十分な量で本発明の第１、第２、第３、および第４の態様のそれぞれの、ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、または抗体もしくはその抗原結合断片を含有する組成物を投与することによって治療する方法を特徴とする。本方法は、アジュバント、サイトカイン、またはホルモン療法（例えばアンドロゲンの除去）を施すことを含んでもよい。対象（例えばヒト）に投与される組成物は、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、または担体を含んでもよく、かつ当該技術分野で既知の任意の手段（例えば注射）によって投与してもよい。
【０００９】
第６の態様では、本発明は、対象（例えば哺乳動物、例えばヒト）を癌（例えば、前立腺癌）を有するものとして、対象由来の試料中のＥＲＧ（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２、３、もしくは４）またはＳＩＭ２ポリペプチド（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、６、７、８、９、もしくは１０）、またはその断片のレベルを測定し、それを参照と比較することによって診断する方法を特徴とし、ここでＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの、参照と比較したレベルの変化（例えば上昇）は、癌（例えば前立腺癌）の診断指標である。試料は、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドが通常的に検出可能な、対象由来の体液（例えば、尿、血液、血清、血漿、および脳脊髄液）、細胞、または組織試料であってもよい。
【００１０】
本発明のすべての態様の他の実施形態では、本発明の免疫細胞は、例えばＴ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球）を含み、抗原提示分子は、例えば、細胞、例えば前立腺癌細胞の表面上に提示されうる組織適合性分子（例えばＨＬＡ分子（例えばＨＬＡクラスＩ分子））である。本発明によって検討される抗原提示細胞は、例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、単球、線維芽細胞、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、および血管内皮細胞を含む。本発明で記載される作用剤のいずれか（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）は、異種化合物、例えば治療剤または細胞毒性剤に結合してもよい。さらに他の実施形態では、本発明の組成物は、ワクチンとして投与されてもよく、例えば追加的な治療剤（例えば化学療法剤）またはアジュバントを含んでもよい。
【００１１】
「免疫細胞の活性化」は、本明細書で使用される場合、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球）、Ｂ細胞、マクロファージ、およびＮＫ細胞）機能における増強、例えば、１つ以上の刺激分子による刺激後のサイトカイン、抗体の放出、および／またはアポトーシスの誘導を意味する。
【００１２】
「アジュバント」は、抗原特異的な免疫応答を、例えば抗原提示細胞の活性化を通じて特異的または非特異的に増強するために使用される任意の物質を意味する。典型的なアジュバントは、オイルエマルジョン（例えば完全または不完全フロインドアジュバント）、ケモカイン、サイトカイン、またはＡＤＰリボシル化外毒素（ｂΛＲＥ））を含む。アジュバントは、抗原とともに投与してもよく、または単独で投与してもよい。単一の分子は、アジュバントおよび抗原特性の双方を有してもよい。
【００１３】
「投与する」は、本明細書で使用される場合、本発明の組成物の用量を、それを必要とする対象に与える方法を意味する。本明細書中に記載の組成物は、例えば、非経口、皮膚、経皮、経眼、吸入、口腔、舌下、舌周囲、経鼻、直腸、局所、および経口投与を含む、当該技術分野で既知の任意の許容可能な経路によって投与してもよい。非経口投与は、動脈内、静脈内、腹腔内、皮下、および筋肉内投与を含む。投与の好ましい方法は、さまざまな要素（例えば、投与されている組成物の成分、治療されている条件およびその重症度、ならびに患者の年齢、体重、および健康）に応じて変化してもよい。
【００１４】
「治療するのに十分な量」は、対象の症状またはその徴候を臨床的に意義のある方法で改善、阻害、または緩和する（例えば、前立腺癌またはその徴候を改善、阻害、予防、または緩和する）ために投与される本発明の組成物の量を意味する。対象におけるなんらかの改善は、治療を行うのに十分であると考えられる。好ましくは、治療するのに十分な量は、例えば癌（例えば前立腺癌）の１つ以上の徴候の発生を低減、阻害、または予防する量であるか、あるいは対象が癌の１つ以上の徴候を罹っているその重症度を低下させるかまたはその期間を短縮する量（例えば、本発明の組成物で治療されない対照対象に対して、少なくとも１０％、２０％、もしくは３０％、より好ましくは少なくとも５０％、６０％、もしくは７０％、および最も好ましくは少なくとも８０％、９０％、９５％、９９％以上）である。本明細書中に記載の方法を実施するのに使用される組成物の十分な量は、投与の方法と、治療されている対象の年齢、体重、および全体的健康に応じて変化する。医師または研究者は、適切な量および投与計画を決定することができる。
【００１５】
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、全抗体または免疫グロブリンおよび任意の抗原結合断片またはその一本鎖を含む。抗体は、本明細書で使用される場合、哺乳類（例えばヒトまたはマウス）、ヒト化、キメラ、組換えであり、合成により産生され、または天然に単離されうる。本発明の抗体は、抗体のあらゆる既知の形態および抗体様の特性を有する他のタンパク質骨格を含む。例えば、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、キメラ抗体、または抗体様の特性を有するタンパク質骨格、例えばフィブロネクチンまたはアンキリンリピートであってもよい。抗体はまた、Ｆａｂ、Ｆａｂ’２、ｓｃＦｖ、ＳＭＩＰ、ダイアボディ、ナノボディ、アプタマー、またはドメイン抗体であってもよい。抗体は、次のアイソタイプ、すなわちＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ（例えば、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、およびＩｇＡｓｅｃ）、ＩｇＤ、またはＩｇＥのいずれかを有してもよい。
【００１６】
用語「抗原結合断片」は、本明細書で使用される場合、癌特異的抗原（例えば前立腺癌特異的抗原（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２））に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を示す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって行われうる。抗体の用語「抗原結合断片」内に包含される結合断片の例として、限定はされないが、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなる一価断片であるＦａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ部位でジスルフィド橋によって連結される２つのＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨおよびＶＬドメインを含むｄＡｂ；（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６頁（１９８９年））；（ｖｉｉ）ＶＨまたはＶＬドメインからなるｄＡｂ；（ｖｉｉｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）；ならびに（ｉｘ）場合によって合成リンカーによって連結可能な２つ以上の単離ＣＤＲの組み合わせが挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインのＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされるが、組換え方法を用いて、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖としての作成を可能にする合成リンカーによって連結されうる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として既知；例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６頁（１９８８年）およびＨｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３頁（１９８８年））。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来の技術を用いて得られ、断片は、無傷抗体と同じ方法で、有用性についてスクリーニングされる。抗原結合断片は、組換えＤＮＡ技術あるいは無傷免疫グロブリンの酵素的または化学的切断によって生成することが可能である。
【００１７】
「抗原提示細胞」は、表面上で主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子と複合された抗原（例えば癌特異的抗原、例えば前立腺癌特異的抗原）を提示する細胞を意味する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、抗原（例えばナイーブＴ細胞）に暴露されていない免疫細胞（例えばＴ細胞）を活性化することが可能である。これらの抗原提示細胞は、抗原を（例えば、貪食または受容体媒介エンドサイトーシスにより）内在化し、細胞表面上のＭＨＣ分子に結合された抗原の断片を提示する。免疫細胞（例えばＴ細胞）は、抗原提示細胞の表面上のＭＨＣ分子複合体を認識し、それと相互作用する。次いで、追加的な共刺激シグナルが抗原提示細胞によって生成され、Ｔ細胞の活性化がもたらされる。抗原提示細胞は、例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、単球、線維芽細胞、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、および血管内皮細胞を含む。抗原提示細胞は、種々の生物学的な体液、組織、および器官（例えば、末梢血、骨髄、腫瘍浸潤細胞、腫瘍周辺組織、浸潤細胞、リンパ節、脾臓、皮膚、および臍帯血）のいずれかから単離されうる。
【００１８】
「抗原提示分子」は、本明細書で使用される場合、クラスＩまたはクラスＩＩ主要組織適合性（ＭＨＣ）分子（例えばヒト白血球抗原（ＨＬＡ）分子）、あるいは、抗原に結合し、抗原と抗原提示分子の複合体として免疫細胞（例えばナイーブＴ細胞）によって認識されうるように、抗原を細胞の表面上に提示し、それによって例えば免疫細胞の活性化をもたらすことが可能な任意の他の分子を示す。
【００１９】
用語「細胞毒性剤」は、本明細書で使用される場合、細胞の１つ以上の機能（例えば、細胞の複製、分裂、またはタンパク質の分泌）を阻害または阻止するか、あるいは細胞のアポトーシスまたは壊死を引き起こす物質を示す。同用語は、放射性同位体（例えば、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、およびＲｅ１８６）、化学療法剤、および毒素、例えば細菌、真菌、植物または動物に由来する酵素的活性毒素、あるいはこれらの断片を含むように意図される。さらなる細胞毒性剤は、限定はされないが、アルキル化剤、抗生物質、代謝拮抗薬、チューブリン阻害剤、トポイソメラーゼＩおよびＩＩ阻害剤、ホルモンアゴニストまたはアンタゴニスト、あるいは免疫調節剤を含む。細胞毒性剤は、光または赤外線によって活性化された場合に細胞毒性を示しうるか（Ｐｈｏｔｏｆｒｉｎ，ＩＲ ｄｙｅｓ；Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９（４）：３２７−３３１頁（２００１年））、他の機械学的経路（ｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃ ｐａｔｈｗａｙｓ）を通じて作用しうるか、または補助増強剤（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）でありうる。
【００２０】
用語「免疫細胞」は、本明細書で使用される場合、後天性または先天性免疫系の生成、調節、または効果に関与する任意の細胞を示す。免疫細胞は、例えばＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋細胞またはＣＤ８＋細胞）、Ｂ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球および樹状細胞、ならびに好中球を含む。
【００２１】
「免疫応答刺激ペプチド」は、例えば、樹状細胞、マクロファージ、単球、およびＢ細胞において発現される抗原提示細胞組織適合性分子（例えば主要組織適合性複合体分子（ＭＨＣ）、例えばＨＬＡクラスＩ分子）によって提示される腫瘍特異的抗原、例えば前立腺癌特異的抗原であるペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２のペプチド）を意味し、ナイーブ免疫細胞（例えばＴ細胞）のペプチド／組織適合性分子複合体に対する結合は、腫瘍特異的抗原に対して免疫細胞を活性化する。かかる免疫応答刺激ペプチドは、一般に、少なくとも７個のアミノ酸残基を含むが、最大で５０個のアミノ酸残基を含みうる。免疫応答刺激ペプチドは、一般に、例えばペプチドの抗原特異的な抗体、抗血清、またはＴ細胞系またはクローンと反応する能力についてのスクリーニングを含む周知の技術を用いて同定されうる。免疫応答刺激ペプチドに対するＴ細胞応答は、当該技術分野で既知のように、例えば、サイトカインの放出、Ｔ細胞増殖の増大、または細胞内カルシウム濃度の変化を含みうる。
【００２２】
「薬学的に許容できる担体」は、共に投与される組成物の治療的特性を保持しながら対象に対して生理学的に許容できる希釈剤、賦形剤、またはアジュバントを意味する。１つの典型的な薬学的に許容できる担体は、生理食塩水である。他の生理学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントおよびそれらの調合物は、当業者にとって既知である。
【００２３】
「増殖性疾患」または「癌」は、異常または制御不能な細胞成長によって特徴づけられた任意の症状を意味する。増殖性疾患の例は、例えば前立腺癌である。他の典型的な癌は、肉腫（例えば明細胞肉腫）、癌（例えば腎細胞癌）、およびリンパ腫；乳腺、結腸、直腸、肺、中咽頭、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆汁性嚢胞（ｂｉｌｅｃｙｓｔ）、胆管、小腸、泌尿器系（腎臓、膀胱、および尿路の上皮を含む）、女性器系（子宮頸、子宮、卵巣、絨毛腫、および妊娠栄養膜（ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ）を含む）、男性器系（精嚢および睾丸を含む）、内分泌腺（甲状腺腺、副腎、および下垂体を含む）、皮膚（血管腫、黒色腫、骨または軟組織に由来する肉腫、およびカポジ肉腫を含む）、脳および髄膜（星状細胞腫、神経星状膠腫、海綿芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、神経鞘腫および神経芽細胞腫を含む）、神経、目、造血系（緑色白血病、形質細胞腫および皮膚Ｔリンパ腫／白血病を含む）、ならびに免疫系（リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含む）の腫瘍などの固形腫瘍を含む。非固形腫瘍増殖性疾患の例は、白血病（例えば、急性リンパ性白血病）である。
【００２４】
「タンパク質」、「ポリペプチド」または「ペプチド」は、翻訳後修飾（例えばグリコシル化またはリン酸化）とは無関係に、天然ポリペプチドまたはペプチドの全部もしくは一部を構成するかまたは非天然ポリペプチドまたはペプチドを構成する２個より多いアミノ酸の任意の鎖を意味する。ポリペプチドまたはペプチドは、物理的、機械的、または化学的方法を用いて、ポリペプチドが細胞成分から除去されている場合、「単離された」または「実質的に純粋な」といわれることがある。「単離ポリペプチドまたはペプチド」、「実質的に純粋なポリペプチドまたはペプチド」、または「実質的に純粋な単離ポリペプチドまたはペプチド」は、典型的には、細胞成分から除去されたものと考えられ、天然に会合する相手のタンパク質および天然有機分子を少なくとも６０重量％含まない場合、実質的に純粋である。好ましくは、ポリペプチドまたはペプチドは、少なくとも７５重量％、より好ましくは少なくとも９０重量％、および最も好ましくは少なくとも９９重量％純粋である。実質的に純粋なポリペプチドまたはペプチドは、標準的技術、例えば天然供給源（例えば細胞系）からの抽出、ポリペプチドをコードする組換え核酸の発現、あるいはポリペプチドまたはペプチドの化学的合成によって得ることが可能である。純度は、任意の適切な方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析によって測定することが可能である。あるいは、ポリペプチドまたはペプチドは、それがヒトの介入によって改変され、その天然部位でない位置に配置されている場合、またはそれが１つ以上の細胞に導入されている場合、単離されているものと考えられる。
【００２５】
「特異的に結合する」は、結合部分（例えば、抗体、組織適合性分子、抗原結合断片、受容体、リガンド、小分子、または細胞（例えば免疫細胞））が、標的分子が欠如している非標的細胞または組織ではなく、標的分子（例えば抗原（またはその断片）、サイトカイン、ケモカイン、ホルモン、受容体、抗原／ＭＨＣ複合体、またはリガンド）あるいは標的分子（例えば、細胞表面抗原、受容体、およびリガンド）を担持する細胞または組織と優先的に会合することを意味する。抗原／ＭＨＣ複合体との関連での用語「特異的に結合する」は、例えば、抗原／ＭＨＣ複合体とナイーブ免疫細胞、例えばＴ細胞上の受容体（例えばＴ細胞受容体）との優先的会合に適用される。ある程度の非特異的相互作用が、結合部分と非標的分子（単独でまたは細胞もしくは組織と併せて存在する）の間で生じうることは理解されている。それに対し、特異的結合は、標的分子または複合体の特異的認識を通じて媒介されるものとして識別されうる。特異的結合の結果、結合部分（例えば抗体または抗原結合断片）と例えば標的分子（例えば抗原または抗原／ＭＨＣ複合体）を担持する細胞との間の会合が、結合部分（例えば抗体または免疫細胞）と例えば標的分子が欠如した細胞との間の場合よりもはるかに強力になる。典型的には、特異的結合の結果、例えば標的分子を担持する細胞または組織に結合される結合部分の量（単位時間当たり）が、その標的分子が欠如した細胞または組織の場合よりも２倍、好ましくは５倍超、より好ましくは１０倍超および最も好ましくは１００倍超増加する。結合部分は、例えば、１０−６Ｍ未満、より好ましくは１０−７Ｍ、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、もしくは１０−１２Ｍ未満、および最も好ましくは１０−１３Ｍ、１０−１４Ｍ、もしくは１０−１５Ｍ未満の解離定数で標的分子に結合する。かかる条件下での標的分子、例えばタンパク質またはペプチド（例えば抗原）に対する特異的結合は、その特定の標的分子に対するその特異性について選択される結合部分を必要とする。種々のアッセイ形式は、特定の標的分子（例えば抗原または抗原／ＭＨＣ複合体）に特異的に結合可能な結合部分（例えば抗体または免疫細胞）の選択に適し、かつその逆もいえる。例えば、固相ＥＬＩＳＡイムノアッセイは、通常、タンパク質と特異的免疫応答性があるモノクローナル抗体を選択するのに使用される。特異的免疫応答性の判定に使用可能なイムノアッセイの形式および条件の記述については、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８年）を参照のこと。
【００２６】
「対象」は、任意の動物、例えば哺乳動物（例えばヒト）を意味する。本明細書中に記載の方法に従って治療されるべき対象（例えば、癌（例えば前立腺癌）であると診断された対象）は、医療施術者により、かかる症状を有すると診断されている者または症状（例えば癌（例えば前立腺癌））を発症するリスクがある者でありうる。診断は任意の好適な手段によって行われうる。当業者は、本発明によって治療されるべき対象が、標準の試験を受けているか、または、検査なしに、１つ以上のリスク因子（例えば、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）の上昇または癌の病歴）の存在による高リスクの者として同定されている場合があることを理解するであろう。
【００２７】
用語「実質的同一性」または「実質的に同一の」は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列を参照配列と比較する状況で使用される場合、ポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列は、参照配列と同じであるか、あるいは２つの配列が最適に整列される場合、ヌクレオチドまたはアミノ酸残基の、参照配列内の対応する位置で同じである特定の百分率を有することを意味する。例えば、参照配列に対して「実質的に同一の」アミノ酸配列は、デフォルトパラメータを伴うＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズムを使用する測定により、またはマニュアルアラインメントおよび目視検査（例えばＮＣＢＩウェブサイトを参照）により、参照配列の完全長全体にわたる最大の一致についての比較および整列がなされる場合、参照配列（例えば、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１または１２でそれぞれ示されるＥＲＧまたはＳＩＭ２の完全長アミノ酸配列またはその断片）に対して、少なくとも約６０％の同一性、好ましくは６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれより高い百分率の同一性（最大１００％）を有する。
【００２８】
用語「ワクチン」は、本明細書で使用される場合、組成物の対象への投与後、少なくとも短時間、免疫応答を提供し、免疫を付与するのに使用される組成物として定義される。
【００２９】
本発明の他の特徴および利点は、詳細な説明および特許請求の範囲から自明であろう。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明者らのデータセットおよびＳｔａｎｆｏｒｄデータセットにおける前立腺癌において過剰発現される遺伝子およびＮｏｖａｒｔｉｓ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓから推定されるヒト成人男性の前立腺外の組織において過少発現される遺伝子を再現するベン図である。
【図２】個別の遺伝子（ＡＭＡＣＲ、ＢＩＣＤ１、Ｃ１０ｏｒｆ１３７、ＣＤＣ２Ｌ６、ＩＣＡ１、ＫＩＡＡ１６６１、ＭＡＰ７、ＭＹＯ６、ＯＲ５１Ｅ２、ＰＡＩＣＳ、ＰＣＳＫ６、ＰＶＴ１、ＲＧＳ１０、ＳＧＥＦ、およびＳＩＭ２）のｍＲＮＡ発現レベルのｑＲＴ−ＰＣＲの検証を示す一連のグラフである。ｑＲＴ−ＰＣＲの検証は、ＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを使用して行われた。８つの正常前立腺標本に対して、７つの前立腺癌標本において有意に過剰発現された１５の遺伝子のみ（Ｐ＜．０５）がここで示される。
【図３】ＥＲＧエピトープがヒトＨＬＡ−Ａ２．１に結合し、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を誘発することを示すグラフである。ＨＬＡ−Ａ２．１に対する予測ペプチドの結合が、Ｔ２細胞に対するアセンブリアッセイを用いて評価された（図３Ａ）。試験された１２のうち８つのペプチドが、非結合ペプチド（Ｃｔｒｌ）に対して高い結合能を示した。ＨＬＡ−Ａ２．１からのペプチドの解離の速度が、バインダーペプチドとのインキュベーション後、経時的にＨＬＡ−Ａ２．１の発現の低下を監視することによって判定された。８つのペプチドでのＨＨＤマウスの免疫化によって３つの免疫原性ＥＲＧペプチドが示され、そのうち２つが図３Ｂに示される。
【図４】核酸プログラム型タンパク質アレイ（ＮＡＰＰＡ）を使用するマイクロアレイ実験の方法および結果を示す。図４Ａは、ＮＡＰＰＡの略図である。図４Ｂは、８００の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に対する１つの前立腺癌血清のスクリーニングによる、ＡＣＰＰ、ＡＭＡＣＲ、ＢＲＤ２、ＥＲＧ、およびＥＴＶ１に対する自己抗体のマイクロアレイデータを示す。
【図５】ＳＩＭ２が前立腺癌患者において自発的な液性応答を引き起こすことを示す棒グラフである。前立腺癌患者９名および健常ドナー５名に由来する血清に、インビトロでの無細胞タンパク質発現に基づくＥＬＩＳＡが施され、ＳＩＭ２に対する自己抗体が検出された。ＳＩＭ２はＧＳＴタグ付きタンパク質として発現され、かつ抗ＧＳＴでコーティングされたプレートがアッセイに使用された。固定化ＳＩＭ２に結合する血清抗体が、標識抗ヒト抗体を使用して検出された。各アッセイにおいては、ＧＳＴ発現ベクターを有するウェルが陰性対照として使用された。ＧＳＴウェルから得られるシグナルは、ＧＳＴ−ＳＩＭ２を有するウェルから得られるものから差し引かれた。３回の実験が、３つ組のウェル（各血清試料／実験に対する）を使用して行われた。３つ組の平均および標準偏差に対して統計を行い、抗体量が、ＧＳＴ−ＳＩＭ２およびＧＳＴ単独によって生成される光学密度（ＯＤ）シグナルの差異としてプロットされた。
【図６Ａ】ＳＩＭ２がＨＬＡ−Ａ２．１拘束性免疫原性エピトープを有することを示すグラフを示す。ＨＬＡ−Ａ２．１に対する結合およびＨＬＡ−Ａ２．１からのペプチドの解離の速度が、バインダーペプチドとのインキュベーション後、経時的にＨＬＡ−Ａ２．１の発現の低下を監視することによって判定された。
【図６Ｂ】ＳＩＭ２がＨＬＡ−Ａ２．１拘束性免疫原性エピトープを有することを示すグラフを示す。９つの結合ペプチドでのＡ２．１トランスジェニックＨＨＤマウスの免疫化は、ＩＦＮ−γＥＬＩＳＰＯＴアッセイによって示されるように、５つの免疫原性ＳＩＭ２ペプチドを示した。
【図７】アンドロゲン抑制が前立腺に特異的な寛容を弱めることを示す棒グラフである。ハイブリッドＡ２．１／ＰＳＡ（雄、去勢した雄、または雌）トランスジェニックおよびＡ２．１マウスに、ｖａｃ−前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）が免疫され、脾細胞が、ＰＳＡタンパク質が負荷された樹状細胞で再刺激され、ＥＬＩＳＰＯＴ（図７Ａ）またはＰＳＡ−四量体（図７Ｂ）によって試験された。
【図８】アンドロゲンの用量の増加を伴う、それぞれＶｃａｐ細胞系（図８Ａ）およびＬＮＣａｐ細胞系（図８Ｂ）におけるＥＲＧおよびＳＩＭ２のｑＲＴ−ＰＣＲ定量を示す棒グラフである。
【図９】前立腺癌を有するマウスにおける調節性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ）の生成の増加および抗Ｔｉｍ−１アゴニスト抗体の効果を示す棒グラフである。図９Ａおよび図９Ｂは、ＴＧＦ−βの存在下で抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８抗体とともに培養されたＴＲＡＭＰおよび対照マウスの脾細胞に由来する分類されたナイーブＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞について記載する。新規に分化したＴｒｅｇの百分率は、培養の３日後におけるフローサイトメトリーによって判定された。図９Ｃおよび図９Ｄは、免疫化の際の抗Ｔｉｍ−１アゴニスト抗体による治療が、Ｔａｇに特異的なＣＴＬの数の増加からも明らかなように、Ｂ６マウスにおけるＴａｇ抗原に対するＣＴＬ応答を促進することを示す。
【図１０】抗Ｔｉｍ−１抗体による治療が、ＴＲＡＭＰマウスにおけるＴａｇに対するＣＴＬ応答の促進を引き起こすことを示す棒グラフである（Ｐ＜．０１対アイソタイプ対照）。
【図１１】ＡＭＡＣＲアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）である。
【図１２】ＢＩＣＤ１アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）である。
【図１３】Ｃ１０ｏｒｆｌ３７アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）である。
【図１４】ＣＤＣ２Ｌ６アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）である。
【図１５】ＩＣＡ１アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）である。
【図１６】ＫＩＡＡ１６６１アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）である。
【図１７】ＭＡＰ７アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）である。
【図１８】ＭＹＯ６アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）である。
【図１９】ＯＲ５１Ｅ２アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）である。
【図２０】ＰＡＩＣＳアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）である。
【図２１】ＰＣＳＫ６アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）である。
【図２２】ＰＶＴ１核酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）である。
【図２３】ＲＧＳ１０アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）である。
【図２４】ＳＧＥＦアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）である。
【図２５】ＳＭＡＲＣＡ４／／／ＭＲＰＬ４３核酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）である。
【図２６】ＳＳ１８アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）である。
【図２７】ＥＲＧアミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）である。
【図２８】ＳＩＭ２アミノ酸配列（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）である。
【発明を実施するための形態】
【００３１】
詳細な説明
最近、ＥＲＧ転写因子が前立腺癌細胞内で過剰発現され、かつ非癌性前立腺細胞内で発現されないことが発見された。本発明者らは、正常組織がＥＲＧを発現しないことから、ＥＲＧに対する免疫寛容が克服可能であり、かつ免疫応答がＥＲＧに対してもたらされうることを仮定した。本発明者らは、ヒト免疫細胞（例えばナイーブＴ細胞）に対して、例えば大部分のヒトにおけるすべての細胞の表面上に見出されるヒトＨＬＡ−Ａ２．１抗原提示分子を介して提示されうるＥＲＧ由来の免疫応答刺激ペプチドを同定した。さらに、本発明者らは、前立腺癌に対する免疫療法としての役割を果たしうる、前立腺癌細胞内で過剰発現され、かつ非癌性前立腺細胞内で発現されない別のタンパク質であるタンパク質ＳＩＭ２に由来する免疫応答刺激ペプチドを同定した。また、本発明者らの試験では、前立腺癌細胞内で過剰発現される１６のさらなるタンパク質（そのペプチドもまた免疫療法において使用可能である）が同定されている。
【００３２】
したがって、本発明は、癌（例えば前立腺癌）の治療における免疫応答をもたらすための方法および組成物（例えば、免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド）、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）を特徴とする。
【００３３】
ＥＲＧ、ＳＩＭ２、および他の前立腺腫瘍関連抗原
例えば、樹状細胞、マクロファージ、単球、およびＢ細胞において発現される抗原提示細胞の組織適合性分子（例えば主要組織適合性複合体分子（ＭＨＣ）、例えばＨＬＡクラスＩ）によって提示される腫瘍特異的抗原、例えば前立腺癌特異的抗原（例えば、ＥＲＧまたはＳＩＭ２のペプチド）である免疫応答刺激ペプチド。ペプチド／組織適合性分子複合体に対するナイーブ免疫細胞（例えばＴ細胞）の結合は、腫瘍特異的抗原に対して免疫細胞を活性化する。かかる免疫応答刺激ペプチドは、一般に、少なくとも７個のアミノ酸残基であるが５０個未満のアミノ酸残基を有する。例えば、免疫応答刺激ペプチドは、例えば、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０、３５、４０、４５、もしくは４９個のアミノ酸残基を含みうる。前立腺癌の治療において使用される免疫応答刺激ペプチドの非限定例が、表１に記載される。
【００３４】
【表１】
【００３５】
免疫応答刺激ペプチドは、周知の技術、例えばＰａｕｌ Ｗ．Ｅ．（編）、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第３版、２４３−２４７頁（Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、１９９３年）（参照により本明細書中に援用される）に記載のものを用いて同定してもよい。かかる技術は、例えば、ポリペプチドを、抗原特異的抗体、抗血清、ＭＨＣ分子（例えばＨＬＡクラスＩ分子）、および／またはＴ細胞系またはクローンと反応する能力についてスクリーニングすることを含む。免疫応答刺激ペプチドに対するＴ細胞応答は、例えば、当該技術分野で既知の、サイトカインの放出、Ｔ細胞増殖の増大、または細胞内カルシウム濃度の変化を含みうる。ここで活性化Ｔ細胞は、ペプチドを発現する細胞を標的化し、例えばサイトカインの発現における変化により、アポトーシスまたは壊死を引き起こしうる。
【００３６】
本明細書中に記載の免疫応答刺激ペプチドは、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相合成、溶液相合成、または双方の組み合わせを用いる化学合成によって生成してもよい（例えば、Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、１９８４年、Ｔｈｅ Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ（参照により本明細書中に援用される）に記載の方法を参照）。次いで、免疫応答刺激ペプチドは、標準のペプチドアセンブリー化学によって濃縮してもよい。本発明のペプチドはまた、生物学的または遺伝子工学プロセス（例えば、細菌、哺乳類細胞、例えばＣＨＯ細胞、またはトランスジェニック動物における組換え生成）によって得てもよい。例えば、目的のペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む当業者に既知の発現ベクターを使用してもよく、発現ベクターは細胞に取り込まれ、それによってコードされるペプチドは細胞内で発現しうる。
【００３７】
所望される活性を有するペプチドは、必要に応じて修飾して、特定の所望される属性、例えば改善された薬理学的特性を提供することができる一方、未修飾ペプチドの実質的にすべての生物学的活性を増大させるかまたは少なくとも保持して、所望される抗原提示分子に結合させ、かつ適切な免疫細胞を活性化させることができる。例えば、免疫応答刺激ペプチドは、例えば、（保存的または非保存的のいずれかの）置換、欠失、または挿入などのさまざまな変化を受けてもよく、かかる変化であれば、その使用における特定の利点（例えば抗原提示分子に対する改善された結合性）を提供しうる。保存的置換は、例えば、あるアミノ酸残基を生物学的および／または化学的に類似する別の残基に（例えば、１つの疎水性残基を別の残基に、または１つの極性残基を別の残基に）置換することを含みうる。置換は、Ｇｌｙ、Ａｌａ；Ｖａｌ、Ｉｌｅ；Ｌｅｕ、Ｍｅｔ；Ａｓｐ、Ｇｌｕ；Ａｓｎ、Ｇｌｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ；およびＰｈｅ、Ｔｙｒなどの組み合わせを含む。単一のアミノ酸置換の効果はまた、Ｄ−アミノ酸を用いてプローブしてもよい。かかる修飾は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３４１−３４７頁（１９８６年）、Ｂａｒａｎｙ ａｎｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ」，Ｇｒｏｓｓ ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ編、１９７９年、１−２８４頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載のような周知のペプチド合成方法を用いて行ってもよい。
【００３８】
免疫応答刺激ペプチドはまた、例えばアミノ酸の付加または欠失によるペプチドのアミノ酸配列の延長または短縮によって修飾してもよい。ペプチドはまた、特定の残基の順序または組成を改変することによって修飾してもよいが、生物学的活性にとって必須である特定のアミノ酸残基、例えば重要な接触部位の残基または保存された残基は、一般に、生物学的活性に対して悪影響を及ぼすことなく改変することはできない。必須でないアミノ酸は、タンパク質において天然のもの、例えばＬ−α−アミノ酸（またはそのＤ−異性体）に限定される必要はなく、同様に非天然アミノ酸、例えばβ−γ−δ−アミノ酸、ならびにＬ−α−アミノ酸の多数の誘導体を含みうる。
【００３９】
さまざまなアミノ酸残基の模倣体または非天然アミノ酸での免疫応答刺激ペプチドの修飾は、インビボでのペプチドの安定性を高めるのに特に有用である。
【００４０】
本発明の免疫応答刺激ペプチドは、修飾され、インビボでの半減期の改善以外の所望される属性を提供しうる。例えば、ペプチドの免疫細胞（例えば細胞傷害性Ｔリンパ球）の活性に対する誘導能は、例えばＴヘルパー細胞応答を誘発可能な少なくとも１つのエピトープを有する配列に対する連結によって促進されうる。典型的なエピトープは、インフルエンザウイルス、ＮＳ１（ヘマグルチニン）および破傷風トキソイドに由来する非構造タンパク質を含む。あるいは、エピトープは、ペプチドの溶解度を高めるかまたはペプチドの所望される細胞内区画への標的化を可能にするように選択してもよい。ペプチドはまた、疾患（例えば前立腺癌）を治療、阻害、低減、または緩和することで知られる任意の既知の細胞毒性部分または治療部分に複合してもよい。
【００４１】
一実施形態では、本発明の免疫応答刺激ペプチドは、抗原提示分子に結合された場合、対象における免疫細胞を活性化する。抗原提示分子は、クラスＩもしくはクラスＩＩ主要組織適合性（ＭＨＣ）分子（例えばヒト白血球抗原（ＨＬＡ）分子）、または細胞の表面上の抗原を提示し、かつ抗原と抗原提示分子の複合体として免疫系の細胞によって認識される、抗原に結合可能な任意の他の分子である。典型的なＨＬＡ分子は、限定はされないが、
を含む。ヒトクラスＩＩ ＨＬＡ対立遺伝子は、限定はされないが、ＨＬＡ−ＤＡα１−４（ｐＤＡα１−４）；ＨＬＡ−ＤＡα１−５（ｐＤＡα１−５）；ＨＬＡ−ＤＡβ５（ｐＤＡβ５）；ＨＬＡ−ＤＣα１０７（ｐＤＣα１０７）；ＨＬＡ−ＤＯα２０（ｐＤＯα２０）；ＨＬＡ−ＤＱβｌ５５（ｐＤＱβｌ５５）；ＨＬＡ−ＤＲα１１（ｐＤＲα１１）；ＨＬＡ−ＤＲβ１３４（ｐＤＲβ１３４）；ＨＬＡ−ＤＲβ５（ＴＯＫ Ｈ５ ＤＲβ）；ＨＬＡ−ＤＲβ４（ＹＴ１５８）；ＨＬＡ−ＤＱＡ１（ｐｇＤＱ４Ａ）；ＨＬＡ−ＤＱＢ１（ｐｇＤＱｌＢ）；ＨＬＡ−ＤＱＢ１（ｐｇＤＱ１ＢＳ）；ＨＬＡ−ＤＲＡ（ＤＲＡ２ＥＨ）；ＨＬＡ−ＤＰＡ１（ＤＰＡ０２０２２）；ＨＬＡ−ＤＰＢ１（ＤＰＢ０２０２）；ＨＬＡ−ＤＲＢ１（ＫｂＤＲＢ１０８０３）；ＨＬＡ−ＤＲＢ１（ＫｂＤＲＢ１１２０１）；ＨＬＡ−ＤＲＢ１（ＫｂＤＲＢ１１３０２）；ＨＬＡ−ＤＲＢ３（ＤＲＢ３０３０１ＥＭＪ−４）；ＨＬＡ−ＤＱＡ１（ＤＱＡ１０５０１ＡＭＡＬＡ−４）；ＨＬＡ−ＤＱＢ１（ＤＱＢ１０３０１ＡＭＡＬＡ−４）；ＨＬＡ−ＤＱＡｌ（ＤＱＡ１０１０１ＫＡＳ１１６３−６）；およびＨＬＡ−ＤＱＢ１（ＤＱＢ１０５０３ＥＫ２−４）を含む。
【００４２】
活性化免疫細胞
本発明は、免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子（例えばＭＨＣ分子（例えばＨＬＡクラスＩ分子））に結合された場合における、ペプチドに特異的に結合可能な活性化免疫細胞を特徴とする。一実施形態では、活性化免疫細胞（例えば細胞傷害性Ｔ細胞）は、例えば米国特許第６，１３０，０８７号明細書（参照により本明細書中に援用される）に記載の方法に従い、インビトロで生成してもよい。免疫細胞（例えばＴ細胞）は、例えば、組織適合性分子と複合された免疫応答刺激ペプチドを提示する抗原提示細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、単球、およびＢ細胞）とともに培養してもよく、それにより免疫細胞が活性化され、ここで活性化された免疫細胞は、組織適合性分子（例えばＨＬＡクラスＩ分子）との複合体において表面上に免疫応答刺激ペプチドを提示する細胞を標的化する。免疫細胞を活性化するための他の方法は、米国特許第５，９２８，６４３号明細書、米国特許第６，０７４，６３５号明細書、および米国特許第６，２１０，８７３号明細書（参照により本明細書中に援用される）において記載されている。
【００４３】
抗原提示細胞
本発明は、表面上に、抗原提示分子と本明細書中に記載の免疫応答刺激ペプチドのいずれか１つとの複合体を含む抗原提示細胞を特徴とする。抗原提示細胞は、例えば、抗原提示能を有する細胞（例えば、樹状細胞、マクロファージ、Ｂ細胞、単球、線維芽細胞、胸腺上皮細胞、甲状腺上皮細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、または血管内皮細胞）を本明細書中に記載の免疫応答刺激ペプチドのいずれか１つと接触させることによって調製してもよい。かかる細胞は、種々の体液、組織、および器官（例えば、末梢血、骨髄、腫瘍浸潤細胞、腫瘍周辺組織、浸潤細胞、リンパ節、脾臓、皮膚、または臍帯血）のいずれかから単離してもよい。
【００４４】
抗原提示細胞を調製するための方法は、例えば米国特許第６，７８７，１６４号明細書（参照により本明細書中に援用される）中に記載されている。つまり、抗原提示細胞は、ペプチドがレシピエント宿主細胞内で有効量で発現されるような（例えば免疫応答刺激ペプチドをコードする１つ以上の組換えまたは合成核酸配列の挿入による）遺伝子導入法技術を用いて改変してもよい。「有効量」は、レシピエント細胞がインビボで所望される免疫応答を惹起できるのに十分な発現であることを意味する。選択された分子を発現するための細胞への遺伝子導入については、核酸は、例えば、マイクロインジェクション、エレクトロポレーションにより、カルシウム−リン酸−ＤＮＡゲルとして、ＤＥＡＥデキストランを伴い、「裸」核酸の形態で、またはカプセル化形態で（例えばリポソームなどの小胞中で）、または適切なウイルスベクターで、生体外で直接導入してもよい。目的の組換え遺伝子の抗原提示細胞への導入後における発現は、例えばタンパク質産物の機能活性についてのイムノアッセイまたは生物学的アッセイによって確認される。例えば、細胞に導入された分子の発現は、（免疫応答刺激ペプチドに特異的な）標識抗体の抗原提示細胞への結合を、例えばＦＡＣＳまたはＥＬＩＳＡなどのアッセイを用いて検出することによって確認してもよい。改変細胞の生物学的活性は、例えばインビトロアッセイおよびヒトで試験する前の動物モデル（例えば、マウスまたは非ヒト霊長類）において検証してもよい。本発明の改変細胞の、所望されるように機能する、例えば、免疫応答を活性化するために抗原を処理し、提示する能力は、インビトロまたはインビボアッセイを用いて試験してもよい。免疫細胞活性化（例えばＴ細胞活性化）は、免疫細胞の増殖における変化の測定、標的細胞の殺滅、および特定の調節因子（例えばリンホカイン）の分泌、特定の免疫調節分子のｍＲＮＡの発現、またはこれらの事象の組み合わせを含むさまざまな既知の方法によって検出してもよい。
【００４５】
遺伝子導入の代わりとして、本明細書中に記載の免疫応答刺激ペプチドは、培養物中の抗原提示細胞に付加し、分子を例えばＴ細胞に提示するため、抗原提示細胞上に「負荷する」ことが可能である（例えば、Ｔｙｋｏｃｉｎｓｋｉら、Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４８：１−１６頁、１９９６年（参照により本明細書中に援用される）を参照）。ペプチドまたはタンパク質のパルシング（例えば共培養）を使用することも可能である（Ｉｎａｂａら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：６３１−６４０頁、１９９０年）。あるいは、ペプチドは、選択される免疫応答刺激ペプチドを担持するリポソームとの融合を介して細胞表面に導入してもよい（Ｃｏｅｓｈｏｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：１３４３−１３４８頁、１９８５年）。
【００４６】
抗原提示細胞は、細胞用培地、生理食塩水、またはリン酸塩緩衝化生理食塩水などの任意の既知の生理学的に適合可能な薬学的担体中に懸濁し、生理学的に許容できる水性薬学的組成物を形成してもよい。非経口媒体は、例えば、塩化ナトリウム溶液、リンガーデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、または乳酸加リンガーを含む。抗原提示細胞は、複数の投与方法の１つを用いることにより、試験されるべき対象に導入してもよい。例えば、抗原提示細胞は、（アジュバントの存在下または不在下で）摂取により非経口的に（例えば、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮内、および皮下を含む）接種するかまたは粘膜表面に適用してもよい。あるいは、本発明の抗原提示細胞は、例えば癌病変または感染組織への直接注射により、局所的に投与してもよい。
【００４７】
本発明の抗原提示細胞は、少なくとも１回の投与で、免疫系の免疫細胞を活性化し、例えば癌抗原に対する免疫応答を誘発するのに十分な数の抗原提示細胞で、それを必要とする対象（例えば前立腺癌患者）に導入される。細胞は、例えば少なくとも１０６〜１０１２個の細胞を有する、単回注入、または同数の細胞を有する複数回連続注入で投与してもよい。
【００４８】
抗体または抗原結合断片
本発明の抗体または抗原結合断片は、例えばＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、およびＩｇＥアイソタイプを含む。本発明の抗体または抗体断片は、本明細書で使用される場合、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）または結合ペプチドを有し、それは標的タンパク質（例えば腫瘍特異的タンパク質、例えば前立腺腫瘍特異的タンパク質（例えばＥＲＧおよびＳＩＭ２）または免疫応答刺激ペプチド）に結合する。一部の実施形態では、抗体または抗原結合断片は、免疫応答刺激ペプチド抗原提示分子（例えばＨＬＡクラスＩ分子）に結合された場合、ペプチドに特異的に結合する。
【００４９】
本明細書中に記載の抗体またはその断片の多くは、結合特異性またはエフェクター機能の低下、または結合親和性の許容されない低下（例えば約１０−７Ｍ未満）を伴うことなく、可変および定常領域の双方における非必須アミノ酸の置換、付加または欠失を受けうる。通常、かかる改変を取り込む抗体または抗体断片は、その元となる参照抗体または抗体断片に対して実質的な配列同一性を示す。場合により、その元となる参照抗体または抗体断片に対して同じ特異性および増大した親和性を有する突然変異抗体または抗体断片が選択されうる。ファージディスプレイ技術は、かかる抗体を選択するための強力な技術を提供する。例えば、Ｄｏｗｅｒら、国際公開第９１／１７２７１号パンフレット；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；およびＨｕｓｅ、国際公開第９２／０６２０４号パンフレット（参照により本明細書中に援用される）を参照のこと。
【００５０】
抗体断片は、別々の可変重鎖、可変軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、およびｓｃＦｖを含む。断片は、無傷免疫グロブリンの酵素的または化学的分離によって生成してもよい。例えば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、例えばＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕｂｓ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８８年に記載の標準的方法を用いて、ｐＨ３．０〜３．５、ペプシンでのタンパク質分解消化により、ＩｇＧ分子から得てもよい。Ｆａｂ断片は、制限された還元（ｌｉｍｉｔｅｄ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）によってＦ（ａｂ’）２断片から、または、還元剤の存在下でのパパインによる消化によって全抗体から得てもよい。断片はまた、組換えＤＮＡ技術によって生成してもよい。選択される断片をコードする核酸のセグメントは、制限酵素による完全長コード配列の消化またはデノボ合成によって生成される。断片は、ファージコート融合タンパク質の形態で発現される場合が多い。この発現方法は、抗体の親和性強化（ｓｈａｒｐｅｎｉｎｇ）において有利である。
【００５１】
キメラ抗体およびヒト化抗体ならびに抗体断片を調製する方法は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書；米国特許第５，５３０，１０１号明細書；米国特許第５，６２２，７０１号明細書；米国特許第５，８００，８１５号明細書；米国特許第５，８７４，５４０号明細書；米国特許第５，９１４，１１０号明細書；米国特許第５，９２８，９０４号明細書；米国特許第６，２１０，６７０号明細書；米国特許第６，６７７，４３６号明細書；および米国特許第７，０６７，３１３号明細書ならびに米国特許出願第２００２／００３１５０８号明細書；米国特許出願第２００４／０２６５３１１号明細書；および米国特許出願第２００５／０２２６８７６号明細書において記載されている。抗体またはその抗原結合断片の調製については、例えば、米国特許第６，３３１，４１５号明細書；米国特許第６，８１８，２１６号明細書；および米国特許第７，０６７，３１３号明細書においてさらに記載されている。
【００５２】
アジュバント
本発明の組成物に適したアジュバントは、本発明のペプチド（例えば免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド））、抗体またはその抗原結合断片、活性化免疫細胞、および抗原提示細胞に対する免疫応答を促進可能なアジュバントを含む。アジュバントは、当該技術分野で周知である（例えば、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ−Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ、１９９５年、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第６巻、ＰｏｗｅｌｌおよびＮｅｗｍａｎ編、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ ＹｏｒｋおよびＬｏｎｄｏｎ（参照により本明細書中に援用される）に記載）。
【００５３】
本発明の組成物にとって好ましいアジュバントは、アルミニウムまたはカルシウム塩（例えば水酸化物またはリン酸塩）を含む。望ましいアジュバントは、Ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ（商標）などの水酸化アルミニウムゲルである。水酸化アルミニウムゲル（ａｌｕｍ）においては、ペプチド（例えば免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド））、抗体またはその抗原結合断片、活性化免疫細胞、および抗原提示細胞は、アルミニウムが１用量あたり５０〜８００μｇ存在する、好ましくは４００〜６００μｇ存在するようにアジュバントと混和される。
【００５４】
本発明の組成物において使用される別のアジュバントは、エマルジョンである。エマルジョンは、水中油エマルジョンまたは油中水エマルジョンであってもよい。ペプチド、抗体またはその抗原結合断片、活性化免疫細胞、および抗原提示細胞に加え、かかるエマルジョンは、例えばスクアレンまたはスクアランの油相、および分散剤を含む。非イオン性分散剤（例えば、ソルビタンおよびマンニド（ｍａｎｎｉｄｅ）のモノ−およびジ−Ｃ１２−Ｃ２４−脂肪酸エステル、例えばソルビタンモノステアレート、ソルビタンモノオレエート、およびマンニドモノオレエート）もまた使用してもよい。
【００５５】
油中水エマルジョンは、本発明の組成物中で乳化される、スクアレンおよびマンニドモノオレエート（Ａｒｌａｃｅｌ（商標）Ａ）、場合によってスクアランを含みうる。かかるエマルジョンの周知の例として、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ−７２０およびＭｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ−７０３（Ｓｅｐｐｉｃ（Ｃａｓｔｒｅｓ，Ｆｒａｎｃｅ））が挙げられ、その各々はスクアレンとスクアランの双方を含有し、各々においてスクアレンが主成分であるが、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ−７０３における程度はより少ないことが理解されている。Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ（商標）ＩＳＡ−７２０はまた、油対水比が７：３（ｗ／ｗ）で使用してもよい。他の水中油エマルジョンアジュバントは、国際公開第９５／１７２１０号パンフレットおよび欧州特許第０３９９８４２号明細書（参照により本明細書中に援用される）に開示されるものを含む。
【００５６】
小分子アジュバントの使用もまた、本明細書中で検討される。小分子アジュバントは、米国特許第４，５３９，２０５号明細書；米国特許第４，６４３，９９２号明細書；米国特許第５，０１１，８２８号明細書；および米国特許第５，０９３，３１８号明細書（参照により本明細書中に援用される）中に記載の７−置換−８−オキソ−または８−スルホ−グアノシン誘導体（例えば７−アリル−８−オキソグアノシン（ロキソリビン））を含む。
【００５７】
追加的なアジュバントは、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）（Ｃｏｒｉｘａ Ｃｏｒｐ．から入手可能（米国特許第４，９８７，２３７号明細書を参照））、Ｃｏｌｅｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｇｒｏｕｐから入手可能のＣＰＧ、ＱＳ２１（Ａｑｕｉｌａ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から入手可能）、ＳＢＡＳ２（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍから入手可能）、米国特許第４，７６７，８４２号明細書中に記載のムラミルジペプチド類似体、およびＭＦ５９（Ｃｈｉｒｏｎ Ｃｏｒｐ．から入手可能（米国特許第５，７０９，８７９号明細書および米国特許第６，０８６，９０１号明細書を参照））を含む。他のアジュバントは、南アメリカの樹木キラジャ・サポナリア・モリナ（Ｑｕｉｌｌａｊａ Ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａ）の樹皮由来の活性サポニン画分（例えばＱｕｉｌ（商標）Ａ）を含む。Ｑｕｉｌ（商標）Ａの誘導体、例えばＱＳ２１（Ｑｕｉｌ（商標）ＡのＨＰＬＣ精製画分誘導体）、およびその生成方法は、米国特許第５，０５７，５４０号明細書に開示されている。ＱＳ２１（ＱＡ２１として公知）に加え、ＱＡ１７などの他の画分もまた開示されている。
【００５８】
３−Ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａは、Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍによって製造される周知のアジュバントである。アジュバントは、細菌から抽出される３つの成分、すなわち、２％スクアレン／Ｔｗｅｅｎ（商標）８０エマルジョン中での、モノホスホリル脂質（ＭＰＬ）Ａ、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）を含有する。このアジュバントは、英国特許第２１２２２０４Ｂ号明細書中に教示される方法によって調製してもよい。３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい形態は、直径が０．２μｍ未満の小さい粒子サイズを有するエマルジョンの形態である（欧州特許第０６８９４５４Ｂｌ号明細書）。
【００５９】
ムラミルジペプチドアジュバントは、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−スレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ；米国特許第４，６０６，９１８号明細書）、Ｎ−アセチル−ｎｏｒ−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン（ＣＧＰ１１６３７，ｎｏｒ−ＭＤＰと称される）、およびＮ−アセチル−ムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’，２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ（ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｏｘｙ））−エチルアミン（ＣＧＰ）１９８３Ａ（ＭＴＰ−ＰＥと称される）を含む。
【００６０】
アジュバント混合物は、例えば、３Ｄ−ＭＰＬとＱＳ２１の混合物（例えば欧州特許第０６７１９４８Ｂｌ号明細書を参照）、３Ｄ−ＭＰＬおよびＱＳ２１を含む水中油エマルジョン（例えば、国際公開第９５／１７２１０号パンフレットおよび国際出願ＰＣＴ／ＥＰ９８／０５７１４号明細書を参照）、他の担体と調合された３Ｄ−ＭＰＬ（例えば欧州特許第０６８９４５４Ｂｌ号明細書を参照）、コレステロール含有リポソーム中で調合されたＱＳ２１（例えば国際公開第９６／３３７３９号パンフレットを参照）、または免疫刺激オリゴヌクレオチド（例えば国際公開第９６／０２５５５号パンフレットを参照）を含む。他のアジュバントは、例えば国際公開第９９／５２５４９号パンフレットに記載のものと、ポリオキシエチレンエーテルの非微粒子懸濁液（ｎｏｎ−ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ）（例えば英国特許出願第９８０７８０５．８号明細書を参照）を含む。
【００６１】
アジュバントは、さまざまな量で使用され、それは、アジュバント、対象、投与されている組成物（例えば、ペプチド（例えば免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド））、抗体またはその抗原結合断片、活性化免疫細胞、および抗原提示細胞を含む組成物）の成分によって変化しうる。典型的な量は、約１μｇ〜約５０ｍｇ／用量で変化しうる。当業者は、適切な濃度または量が容易に決定できることを理解している。
【００６２】
細胞毒性剤および他の治療剤に対する複合
本発明の作用剤（例えば、免疫応答刺激ペプチドおよびこれらのペプチドに対する抗体またはその抗原結合断片）は、それぞれ、任意の既知の細胞毒性部分または治療的部分と結合させるかまたはそれとともに投与して、本発明の作用剤または組成物を形成してもよく、それを投与し、疾患（例えば前立腺癌）または疾患の１つ以上の徴候を治療、阻害、低減、または緩和することが可能である。例として、限定はされないが、アシビシン；アクラルビシン；塩酸アコダゾール；アクロニン；アドゼレシン；アドリアマイシン；アルデスロイキン；アルトレタミン；アンボマイシン（Ａｍｂｏｍｙｃｉｎ）；酢酸アメタントロン；アミノグルテチミド；アムサクリン；アナストロゾール；アントラマイシン；アスパラギナーゼ；アスペルリン；アザシチジン；アゼテパ；アゾトマイシン；バチマスタット；ベンゾデパ；ビカルタミド；塩酸ビサントレン；ビスナフィドジメシレート；ビセレシン；硫酸ブレオマイシン；ブレキナールナトリウム；ブロピリミン；ブスルファン；カクチノマイシン；カルステロン；カンプトセシン；カラセミド；カルベチマー；カルボプラチン；カルムスチン；塩酸カルビシン；カルゼルシン；セデフィンゴール；クロラムブシル；シロレマイシン；シスプラチン；クラドリビン；コンブレタスタチンＡ−４；メシル酸クリスナトール；シクロホスファミド；シタラビン；ダカルバジン；ＤＡＣＡ（Ｎ−［２−（ジメチル−アミノ）エチル］アクリジン−４−カルボキサミド）；ダクチノマイシン；塩酸ダウノルビシン；ダウノマイシン；デシタビン；デキソルマプラチン；デザグアニン；デザグアニンメシレート；ジアジクオン；ドセタキセル；ドラスタチン；ドキソルビシン；塩酸ドキソルビシン；ドロロキシフェン；クエン酸ドロロキシフェン；プロピオン酸ドロモスタノロン（Ｄｒｏｍｏｓｔａｎｏｌｏｎｅ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）；デュアゾマイシン；エダトレキセート；塩酸エフロールニチン；エリプチシン；エルサミトルシン；エンロプラチン；エンプロマート；エピプロピジン；塩酸エピルビシン；エルブロゾール；塩酸エソルビシン；エストラムスチン；リン酸エストラムスチンナトリウム；エタニダゾール；ヨード化ケシ油Ｉ−１３１；エトポシド；リン酸エトポシド；エトプリン；塩酸ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フロクスウリジン；リン酸フルダラビン；フルオロウラシル；５−ＦｄＵＭＰ；フルロシタビン；ホスキドン；ホストリエシンナトリウム；ゲムシタビン；塩酸ゲムシタビン；金Ａｕ１９８；ホモカンプトセシン；ヒドロキシウレア；塩酸イダルビシン；イホスファミド；イルモフォシン；インターフェロンα−２ａ；インターフェロンα−２ｂ；インターフェロンα−ｎ１；インターフェロンα−ｎ３；インターフェロンβ−Ｉａ；インターフェロンγ−Ｉｂ；イプロプラチン；塩酸イリノテカン；酢酸ランレオチド；レトロゾール；酢酸ロイプロリド；塩酸リアロゾール；ロメテレキソールナトリウム；ロムスチン；塩酸ロソキサントロン；マソプロコール；メイタンシン；塩酸メクロレタミン；酢酸メゲストロール；酢酸メレンゲストロール；メルファラン；メノガリル；メルカプトプリン；メトトレキサート；メトトレキサートナトリウム；メトプリン；Ｍｅｔｕｒｅｄｅｐａ（メトウレデパ）；ミチンドミド；マイトカルシン；マイトクロミン；ミトギリン；マイトマルシン；マイトマイシン；マイトスパー；ミトタン；塩酸ミトキサントロン；ミコフェノール酸；ノコダゾール；ノガラマイシン；オルマプラチン；オキシスラン；パクリタキセル；ペガスパルガーゼ；ペリオマイシン（Ｐｅｌｉｏｍｙｃｉｎ）；ペンタムスチン（Ｐｅｎｔａｍｕｓｔｉｎｅ）；硫酸ペプロマイシン；ペルホスファミド（Ｐｅｒｆｏｓｆａｍｉｄｅ）；ピポブロマン；ピポスルファン；塩酸ピロキサントロン；プリカマイシン；プロメスタン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プレドニムスチン；塩酸プロカルバジン；ピューロマイシン；塩酸ピューロマイシン；ピラゾフリン；リゾキシン；リゾキシンＤ；リボプリン；ログレチミド；サフィンゴール；塩酸サフィンゴール；セムスチン；シムトラゼン；スパルホサートナトリウム；スパルソマイシン；塩酸スピロゲルマニウム；スピロムスチン；スピロプラスチン（Ｓｐｉｒｏｐｌａｔｉｎ）；ストレプトニグリン；ストレプトゾシン；塩化ストロンチウムＳｒ８９；スロフェヌル；タリソマイシン；タキサン；タキソイド；テコガランナトリウム；テガフール；塩酸テロキサントロン；テモポルフィン；テニポシド；テロキシロン；テストラクトン；チアミプリン；チオグアニン；チオテパ；チミタック（Ｔｈｙｍｉｔａｑ）；チアゾフリン；チラパザミン；トムデックス（Ｔｏｍｕｄｅｘ）；ＴＯＰ５３；塩酸トポテカン；クエン酸トレミフェン；酢酸トレストロン；リン酸トリシリビン；トリメトレキサート；グルクロン酸トリメトレキサート；トリプトレリン；塩酸ツブロゾール；ウラシルマスタード；ウレデパ（Ｕｒｅｄｅｐａ）；バプレオチド；ベルテポルフィン；ビンブラスチン；硫酸ビンブラスチン；ビンクリスチン；硫酸ビンクリスチン；ビンデシン；硫酸ビンデシン；硫酸ビネピジン；硫酸ビングリシネート；硫酸ビンレウロシン；酒石酸ビノレルビン；硫酸ビンロシジン；硫酸ビンゾリジン；ボロゾール；ゼニプラチン；ジノスタチン；塩酸ゾルビシン；２−クロロデオキシアデノシン；２’デオキシホルマイシン；９−アミノカンプトセシン；ラルチトレキセド；Ｎ−プロパギル−５，８−ジデアザ葉酸；２−クロロ−２’−アラビノ−フルオロ−２’−デオキシアデノシン；２−クロロ−２’−デオキシアデノシン；アニソマイシン；トリコスタチンＡ；ｈＰＲＬ−Ｇ１２９Ｒ；ＣＥＰ−７５１；リノマイド；硫黄マスタード；窒素マスタード（メクロレタミン）；シクロホスファミド；メルファラン；クロラムブシル；イホスファミド；ブスルファン；Ｎ−メチル−ニトロソウレア（ＭＮＵ）；Ｎ，Ｎ’−ビス（２−クロロエチル）−Ｎ−ニトロソウレア（ＢＣＮＵ）；Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’シクロヘキシル−Ｎ−ニトロソウレア（ＣＣＮＵ）；Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’−（トランス−４−メチルシクロヘキシル−Ｎ−ニトロソウレア（ＭｅＣＣＮＵ）；Ｎ−（２−クロロエチル）−Ｎ’−エチルホスホン酸（ジエチル）−Ｎ−ニトロソウレア（ホテムスチン）；ストレプトゾトシン；ジアカルバジン（ｄｉａｃａｒｂａｚｉｎｅ）（ＤＴＩＣ）；ミトゾロミド（ｍｉｔｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）；テモゾロマイド；チオテパ；マイトマイシンＣ；ＡＺＱ；アドゼレシン；シスプラチン；カルボプラチン；オルマプラチン；オキサリプラチン；Ｃ１−９７３；ＤＷＡ２１１４Ｒ；ＪＭ２１６；ＪＭ３３５；ビス（白金）；トムデックス（ｔｏｍｕｄｅｘ）；アザシチジン；シタラビン；ゲムシタビン；６−メルカプトプリン；６−チオグアニン；ヒポキサンチン；テニポシド９−アミノカンプトセシン；トポテカン；ＣＰＴ−１１；ドキソルビシン；ダウノマイシン；エピルビシン；ダルビシン（ｄａｒｕｂｉｃｉｎ）；ミトキサントロン；ロソキサントロン；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）；アムサクリン；ピラゾロアクリジン；オールトランスレチノール；１４−ヒドロキシ−レトロ−レチノール；オールトランスレチノイン酸；Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）レチナミド；１３−シスレチノイン酸；３−メチルＴＴＮＥＢ；９−シスレチノイン酸；フルダラビン（２−Ｆ−ａｒａ−ＡＭＰ）；または２−クロロデオキシアデノシン（２−Ｃｄａ）などの抗新生物剤が挙げられる。
【００６３】
他の治療化合物として、限定はされないが、２０−ｐｉ−ｌ、２５ジヒドロキシビタミンＤ３；５−エチニルウラシル；アビラテロン；アクラルビシン；アシルフルベン；アデシペノール；アドゼレシン；アルデスロイキン；オールＴＫアンタゴニスト；アルトレタミン；アンバムスチン；アミドックス；アミホスチン；アミノレブリン酸；アムルビシン；アムサクリン；アナグレリド；アナストロゾール；アンドログラホリド；血管新生阻害剤；アンタゴニストＤ；アンタゴニストＧ；アンタレリックス（ａｎｔａｒｅｌｉｘ）；抗背側化形態形成タンパク質１（ａｎｔｉ−ｄｏｒｓａｌｉｚｉｎｇ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ−１）；抗アンドロゲン、前立腺癌；抗エストロゲン；アンチネオプラストン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アフィジコリングリシネート；アポトーシス遺伝子調節剤；アポトーシス調節因子；アブリン酸；ａｒａ−ＣＤＰ−ＤＬ−ＰＴＢＡ；アルギニンデアミナーゼ（ａｒｇｉｎｉｎｅｄｅａｍｉｎａｓｅ）；アスラクリン；アタメスタン；アトリムスチン；アキシナスタチン１；アキシナスタチン２；アキシナスタチン３；アザセトロン；アザトキシン；アザチロシン；バッカチンＩＩＩ誘導体；バラノール；バチマスタット；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベンゾクロリン；ベンゾイルスタウロスポリン；βラクタム誘導体；β−アレチン；βクラマイシンＢ；ベツリン酸；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；ビサントレン；ビスアジリジニルスペルミン；ビスナフィド；ビストラテンＡ；ビセレシン；ブレフレート；ブレオマイシンＡ２；ブレオマイシンＢ２；ブロピリミン；ブドチタン；ブチオニンスルホキシミン；カルシポトリオール；カルホスチンＣ；カンプトセシン誘導体（例えば１０−ヒドロキシ−カンプトセシン）；カナリアポックスＩＬ−２；カペシタビン；カルボキサミド−アミノ−トリアゾール；カルボキシアミドトリアゾール；ＣａＲｅｓｔ Ｍ３；ＣＡＲＮ７００；軟骨由来阻害剤；カルゼルシン；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；カスタノスペルミン；セクロピンＢ；セトロレリクス；クロリン；クロロキノキサリンスルホンアミド；シカプロスト；シス−ポルフィリン；クラドリビン；クロミフェン類似体；クロトリマゾール；コリスマイシンＡ；コリスマイシンＢ；コンブレタスタチンＡ４；コンブレタスタチン類似体；コナゲニン；クラムベシジン８１６；クリスナトール；クリプトフィシン８；クリプトフィシンＡ誘導体；クラシンＡ；シクロペンタンスレキノン（ｃｙｃｌｏｐｅｎｔａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ）；シクロプラタム；サイペマイシン；シタラビンオクホスファート；細胞溶解因子；シトスタチン；ダクリキシマブ（ｄａｃｌｉｘｉｍａｂ）；デシタビン；デヒドロジデムニンＢ；２’デオキシコホルマイシン（ＤＣＦ）；デスロレリン；デキシフォスファミド；デクスラゾキサン；デクスベラパミル；ジアジクオン；ジデムニンＢ；ジドックス；ジエチルノルスペルミン；ジヒドロ−５−アザシチジン；ジヒドロタキソール，９−；ジオキサマイシン；ジフェニルスピロムスチン；ディスコデルモライド；ドコサノール；ダンセトロン；ドキシフルリジン；ドロロキシフェン；ドロナビノール；デュオカルマイシンＳＡ；エブセレン；エコムスチン；エデルホシン；エドレコロマブ；エフロールニチン；エレメン；エミテフル；エピルビシン；エポチロン（Ａ、Ｒ＝Ｈ；Ｂ，Ｒ＝Ｍｅ）；エピチロン；エピリステリド；エストラムスチン類似体；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；エトポシド；エトポシド４’−リン酸（エトポフォス（ｅｔｏｐｏｆｏｓ））；エキセメスタン；ファドロゾール；ファザラビン；フェンレチニド；フィルグラスチム；フィナステリド；フラボピリドール；フレゼラスチン；フルアステロン；フルダラビン；塩酸フルオロダウノルビシン；ホルフェニメックス；フォルメスタン；ホストリエシン；ホテムスチン；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ガロシタビン；ガニレリクス；ゲラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；ヘレグリン；ヘキサメチレンビスアセトアミド；ホモハリントニン（ＨＨＴ）；ヒペリシン；イバンドロン酸；イダルビシン；イドキシフェン；イドラマントン；イルモフォシン；イロマスタット；イミダゾアクリドン；イミキモド；免疫賦活剤ペプチド；インスリン様成長因子−１受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；ヨーベングアン（ｉｏｂｅｎｇｕａｎｅ）；ヨードドキソルビシン；イポメアノール，４−；イリノテカン；イロプラクト；イルソグラジン；イソベンガゾール；イソホモハリコンドリンＢ；イタセトロン；ジャスプラキノリド；カハラリドＦ；三酢酸ラメラリン−Ｎ；ランレオチド；レイナマイシン；レノグラスチム；硫酸レンチナン；レプトルスタチン；レトロゾール；白血病阻害因子；白血球αインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；レバミゾール；リアロゾール；線状ポリアミン類似体；親油性二糖ペプチド；親油性白金化合物；リッソクリナミド７；ロバプラチン；ロンブリシン；ロメテレキソール；ロニダミン；ロソキサントロン；ロバスタチン；ロキソリビン；ルートテカン（ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ）；ルテチウムテキサフィリン；リソフィリン；溶解ペプチド；メイタンシン；マンノスタチンＡ；マリマスタット；マソプロコール；マスピン；マトリライシン阻害剤；マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤；メノガリル；メルバロン；メテレリン；メチオニナーゼ；メトクロプラミド；ＭＩＦ阻害剤；イフェプリストン（ｉｆｅｐｒｉｓｔｏｎｅ）；ミルテホシン；ミリモスチム；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；ミトラシン；ミトグアゾン；ミトラクトール；マイトマイシン類似体；ミトナフィド、ミトトキシン線維芽細胞成長因子−サポリン；ミトキサントロン；モファロテン；モルグラモスチム；モノクローナル抗体、ヒト絨毛性ゴナドトロピン；モノホスホリル脂質Ａ＋ミオバクテリウム細胞壁ｓｋ；モピダモール；多剤耐性遺伝子阻害剤；多発性腫瘍抑制因子１ベースの治療薬；マスタード抗癌剤；マイカペルオキシドＢ；マイコバクテリウム細胞壁抽出物；ミリアポロン；Ｎ−アセチルジナリン；Ｎ−置換ベンズアミド；ナファレリン；ナグレスチップ；ナロキソン＋ペンタゾシン；ナパビン；ナフテルピン；ナルトグラスチム；ネダプラチン；ネモルビシン；ネリドロン酸；中性エンドペプチダーゼ；ニルタミド；ニサマイシン；一酸化窒素調節物質；ニトロキシド抗酸化剤；ニトルリン；０６−ベンジルグアニン；オクトレオチド；オキセノン；オリゴヌクレオチド；オナプリストン；オンダンセトロン；オンダンセトロン；オラシン；経口サイトカイン誘導物質；オルマプラチン；オサテロン；オキサリプラチン；オキザウノマイシン；パクリタキセル類似体；パクリタキセル誘導体；パラウアミン；パルミトイルリゾキシン；パミドロン酸；パナキシトリオール；パノミフェン；パラバクチン；パゼリプチン；ペガスパルガーゼ；ペルデシン；ペントサンポリサルフェートナトリウム；ペントスタチン；ペントロゾール；ペルフルブロン；ペルホスファミド；ペリリルアルコール；フェナジノマイシン；フェニル酢酸；ホスファターゼ阻害剤；ピシバニール；塩酸ピロカルピン；ピラルビシン；ピリトレキシム；プラセチンＡ；プラセチンＢ；プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤；白金錯体；白金化合物；白金−トリアミン錯体；ポドフィロトキシン；ポルフィマーナトリウム；ポルフィロマイシン；プロピルビス−アクリドン；プロスタグランジンＪ２；プロテアソーム阻害剤；プロテインＡベースの免疫調節因子；プロテインキナーゼＣ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤、微細藻類；プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；プルプリン；ピラゾロアクリジン；ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレン複合体；ｒａｆアンタゴニスト；ラルチトレキセド；ラモセトロン；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ−ＧＡＰ阻害剤；脱メチル化レテリプチン；エチドロン酸レニウムＲｅ１８６；リゾキシン；リボザイム；ＲＩＩレチナミド；ログレチミド；ロヒツキン；ロムルチド；ロキニメクス；ルビギノンＢ１；ルボキシル；サフィンゴール；サイントピン；ＳａｒＣＮＵ；サルコフィトールＡ；サルグラモスチム；Ｓｄｉ１模倣体；セムスチン；老化由来阻害剤１；センスオリゴヌクレオチド；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達調節因子；一本鎖抗原結合タンパク質；シゾフィラン；ソブゾキサン；ボロカプタートナトリウム；フェニル酢酸ナトリウム；ソルベロール；ソマトメジン結合タンパク質；ソネルミン；スパルホス酸；スピカマイシンＤ；スピロムスチン；スプレノペンチン；スポンジスタチン１；スクアラミン；幹細胞阻害剤、幹細胞分裂阻害剤、スチピアミド、ストロメライシン阻害剤、スルフィノシン、超活性血管作用性腸管ペプチドアンタゴニスト、スラディスタ（ｓｕｒａｄｉｓｔａ）、スラミン、スワインソニン、合成グリコサミノグリカン、タリムスチン、タモキシフェンメチオダイド、タウロムスチン、タザロテン、テコガランナトリウム、テガフール、テルラピリリウム、テロメラーゼ阻害剤、テモポルフィン、テモゾロマイド、テニポシド、テトラクロロデカオキシド、テトラゾミン、サリブラスチン、サリドマイド、チオコラリン、トロンボポエチン；トロンボポエチン模倣体；サイマルファシン；サイモポエチン受容体アゴニスト；チモトリナン；甲状腺刺激ホルモン；スズエチルエチオプルプリン；チラパザミン；チタノセンジクロリド；トポテカン；トプセンチン；トレミフェン；全能性幹細胞因子；翻訳阻害剤；トレチノイン；トリアセチルウリジン；トリシリビン；トリメトレキサート；トリプトレリン；トロピセトロン；ツロステリド；チロシンキナーゼ阻害剤；トリホスチン（ｔｙｒｐｈｏｓｔｉｎ）；ＵＢＣ阻害剤；ウベニメクス；尿生殖洞由来増殖阻害因子；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；バプレオチド；バリオリン（ｖａｒｉｏｌｉｎ）Ｂ；ベクター系；赤血球遺伝子治療薬；ベラレソール；ベラミン；ベルディンス（ｖｅｒｄｉｎｓ）；ベルテポルフィン；ビノレルビン；ビンキサルチン；バイタクシン；ボロゾール；ザノテロン；ゼニプラチン；ジラスコルブ；およびジノスタチンスチマラマーが挙げられる。
【００６４】
本発明の作用剤（例えば免疫応答刺激ペプチドまたは抗体もしくはその抗原結合断片）はまた、部位特異的に複合された分子および部分を含んでもよい。部位特異的複合は、本発明の作用剤の特定の残基に対する細胞毒性剤または治療剤の制御された化学量論的結合（ｓｔｏｉｃｈｉｏｍｅｔｒｉｃ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ）を可能にする。
【００６５】
本発明の作用剤（例えば免疫応答刺激ペプチドおよび抗体またはその抗原結合断片）、あるいはそれに複合される任意の分子または部分はまた、溶解ペプチドと結合していてもよい。かかる溶解ペプチドは、細胞死を誘発し、限定はされないが、ストレプトリシンＯ；ハタゴイソギンチャク（ｓｔｏｉｃｈａｃｔｉｓ）毒；ファロリシン；ブドウ球菌α毒素；ホロスリンＡ；ジギトニン；メリチン；リゾレシチン；心臓毒；およびセレブラトゥルス（ｃｅｒｅｂｒａｔｕｌｕｓ）Ａ毒素を含む（Ｋｅｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５３（１６）：５７５２−５７５７頁、１９７８年）。本発明の作用剤はまた、天然ペプチドリシンのいずれかといくらかの配列相同性または化学特性を共有する合成ペプチドに複合可能であり、かかる特性は、限定はされないが、線状、正電荷、両親媒性、および疎水性環境下でのα−ヘリカル構造の形成を含む（Ｌｅｕｓｃｈｎｅｒら、Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ７３：８６０−８６５頁、２００５年）。本発明の作用剤（例えば免疫応答刺激ペプチドおよび抗体またはその抗原結合断片）はまた、例えば免疫グロブリンＦｃサブユニットなど、補体媒介性細胞溶解を含む作用剤と結合していてもよい。本発明の作用剤（例えば免疫応答刺激ペプチドおよび抗体またはその抗原結合断片）はまた、（ホスホリパーゼＡ、ホスホリパーゼＢ、ホスホリパーゼＣ、またはホスホリパーゼＤを含む）酵素のホスホリパーゼファミリーの任意のメンバーまたはその触媒活性サブユニットと結合していてもよい。
【００６６】
本発明の作用剤はまた、放射活性物質と結合させ、検出または治療用途において使用可能な作用剤を形成してもよい。使用可能な放射活性物質は、限定はされないが、フィブリノーゲン１２５Ｉ；フルデオキシグルコース１８Ｆ；フルオロドーパ１８Ｆ；インスリン１２５Ｉ；インスリン１３１Ｉ；ヨーベングアン１２３Ｉ；ヨージパミドナトリウム１３１Ｉ；ヨードアンチピリン１３１Ｉ；ヨードコレステロール１３１Ｉ；ヨード馬尿酸ナトリウム１２３Ｉ；ヨード馬尿酸ナトリウム１２５Ｉ；ヨード馬尿酸ナトリウム１３１Ｉ；ヨードピラセト１２５Ｉ；ヨードピラセト１３１Ｉ；塩酸イオフェタミン１２３Ｉ；ヨーメチン１２５Ｉ；ヨーメチン１３１Ｉ；イオタラム酸ナトリウム１２５Ｉ；イオタラム酸ナトリウム１３１Ｉ；チロシン１３１Ｉ；リオチロニン１２５Ｉ；リオチロニン１３１Ｉ；酢酸メリソプロール１９７Ｈｇ；酢酸メリソプロール２０３Ｈｇ；メリソプロール１９７Ｈｇ；セレノメチオニン７５Ｓｅ；テクネチウム９９ｍＴｃ三硫化二アンチモンコロイド；テクネチウム９９ｍＴｃビシセート；テクネチウム９９ｍＴｃジソフェニン；テクネチウム９９ｍＴｃエチドロネート；テクネチウム９９ｍＴｃエキサメタジム；テクネチウム９９ｍＴｃフリホスミン；テクネチウム９９ｍＴｃグルセプテート；テクネチウム９９ｍＴｃリドフェニン；テクネチウム９９ｍＴｃメブロフェニン；テクネチウム９９ｍＴｃメドロネート；テクネチウム９９ｍＴｃメドロネート二ナトリウム；テクネチウム９９ｍＴｃメルチアチド；テクネチウム９９ｍＴｃオキシドロネート；テクネチウム９９ｍＴｃペンテテート；テクネチウム９９ｍＴｃペンテテートカルシウム三ナトリウム；テクネチウム９９ｍＴｃセスタミビ；テクネチウム９９ｍＴｃシボロキシム；テクネチウム９９ｍＴｃ；スクシメル；テクネチウム９９ｍＴｃ硫黄コロイド；テクネチウム９９ｍＴｃテボロキシム；テクネチウム９９ｍＴｃテトロホスミン；テクネチウム９９ｍＴｃチアタイド（Ｔｉａｔｉｄｅ）；チロキシン１２５Ｉ；チロキシン１３１Ｉ；トルポビドン１３１Ｉ；トリオレイン１２５Ｉ；またはトリオレイン１３１Ｉを含む。
【００６７】
さらに、放射性同位体であれば、ＨＳＡリンカーまたはＨＳＡリンカー複合体に部位特異的に結合しうる。使用可能な反応基を使用すると、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１７７Ｌｕ、９０Ｙ、７７Ａｓ、７２Ａｓ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、２１１Ａｔ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、または２２５Ａｃを含む放射性同位体を標識するための部位特異的な二官能性キレート剤に複合可能である。
【００６８】
本発明の作用剤はまた、他の、必ずしも治療的である必要はないが、例えば安定性または局在化を促進することを目的とした部分に複合してもよい。
【００６９】
治療剤をタンパク質、特に抗体に複合させるための技術は周知である（例えば、Ａｒｎｏｎら、「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｏｆ Ｄｒｕｇｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｒｅｉｓｆｅｌｄら編、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、１９８５年）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、第２版、１９８７年）；Ｔｈｏｒｐｅ，「Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ Ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ’８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｐｉｎｃｈｅｒａら編、１９８５年）；「Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ（Ｂａｌｄｗｉｎら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９８５年）；Ｔｈｏｒｐｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９−５８頁（１９８２年）；およびＤｏｒｏｎｉｎａら、「Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ」、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１：（７）７７８−７８４頁（２００３年））。また、例えば、ＰＣＴ公開の国際公開第８９／１２６２４号パンフレットを参照のこと。
【００７０】
さらなる治療法
本発明の作用剤（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）は、単独でまたは癌（例えば前立腺癌）を治療するための他の既知の治療薬と併用して投与してもよい。例えば前立腺癌のためのかかる治療法は、例えば、ホルモン療法（例えばアンドロゲン除去（例えば、黄体化ホルモン放出ホルモンアゴニスト（例えば、ロイプロリド、ゴセレリン、またはブセレリン）、抗アンドロゲン（例えば、フルタミドまたはニルタミド）、副腎阻害剤（例えば、ケトコナゾールまたはアミノグルテチミド）の投与、またはエストロゲンの投与））、化学療法、放射線療法、超音波療法、または手術（例えば、骨盤内リンパ節郭清術、経尿道的前立腺摘除術、前立腺全摘除術、恥骨後式前立腺摘除術、または会陰式前立腺摘除術）を含む。かかる治療は、例えば、米国特許第６，１８４，２４９号明細書；米国特許第６，２４５，８０７号明細書；米国特許第６，４７２，４１５号明細書；および米国特許第６，５３７，９８８号明細書（参照により本明細書中に援用される）に記載されている。
【００７１】
投与および用量
治療有効量の本発明の作用剤（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）、またはそれらの薬学的に許容できる塩の医薬調合物は、投与経路に適合した薬学的に許容できる担体と混合した状態で、経口的、非経口的（例えば、筋肉内、腹腔内、静脈内、または皮下注射、吸入、皮内、オプティカルドロップ（ｏｐｔｉｃａｌ ｄｒｏｐ）、またはインプラント）、経鼻的、経膣的、経直腸的、舌下的、または局所的に投与してもよい。
【００７２】
調合物を作製する当該技術分野で周知の方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版）、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、１９９０年、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡにおいて見出される。経口使用を意図した組成物は、薬学的組成物の作製における技術分野で公知の任意の方法に従い、固体または液体形態で調製してもよい。組成物は、より口に合う調製物を提供するため、場合によって甘味料、香味料、着色剤、香料、および／または保存料を含有してもよい。経口投与における固体剤形は、カプセル、錠剤、ピル、粉末、および顆粒を含む。かかる固体形態では、活性化合物は、少なくとも１つの薬学的に許容できる不活性担体または賦形剤と混合される。これらは、例えば、不活性希釈剤、例えば炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、スクロース、デンプン、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム、またはカオリンを含んでもよい。また、結合剤、緩衝剤、および／または潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム）を使用してもよい。錠剤およびピルは、さらに腸溶コーティングを用いて調製してもよい。
【００７３】
経口投与における液体剤形は、薬学的に許容できるエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ、および軟質ゼラチンカプセルを含む。これらの形態は、当該技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば水性または油性培地を含有する。かかる不活性希釈剤以外に、組成物はまた、アジュバント、例えば浸潤剤、乳化剤、および懸濁剤を含んでもよい。
【００７４】
非経口投与における調合物は、無菌の水性または非水性溶液、懸濁液、またはエマルジョンを含む。適切な媒体の例として、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、ゼラチン、水素化ナフタレン、および注射可能有機エステル、例えばオレイン酸エチルが挙げられる。かかる調合物はまた、アジュバント、例えば保存料、湿潤剤、乳化剤、および分散剤を含有してもよい。生体適合性の生分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリド共重合体、またはポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重合体を使用し、化合物の放出を制御してもよい。本発明の作用剤の他の潜在的に有用な非経口送達系は、エチレン−酢酸ビニル共重合体粒子、浸透圧ポンプ、移植可能な注入系、およびリポソームを含む。
【００７５】
液体調合物は、例えば細菌保持フィルタを通す濾過により、滅菌剤を組成物に取り込ませることにより、または組成物に放射線を照射しするかまたはそれを加熱することによって殺菌してもよい。あるいはまた、それを無菌の固体組成物の形態で作製し、使用直前に滅菌水またはいくつかの他の無菌の注射可能培地に溶解してもよい。
【００７６】
直腸または膣内投与における組成物は、好ましくは坐剤であり、それは、活性物質に加え、ココアバターまたは坐剤ワックスなどの賦形剤を含有してもよい。経鼻または舌下投与における組成物はまた、当該技術分野で既知の標準の賦形剤を用いて調製される。吸入における調合物は、賦形剤、例えばラクトースを含有してもよく、または例えば、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココール酸塩およびデオキシコール酸塩を含有する水溶液であってもよく、あるいは点鼻剤またはスプレーの形態でのまたはゲルとしての投与における油性溶液であってもよい。
【００７７】
本発明の組成物中の活性成分（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、または抗体もしくはその抗原結合断片）の量は、変更してもよい。当業者は、正確な個別の用量が、投与されている成分、投与の時間、投与の経路、調合物の性質、排泄の速度、対象の症状の性質、ならびに患者の年齢、体重、健康、および性別を含む種々の要素にやや依存して調節可能であることを理解するであろう。さらに、本発明の作用剤によって標的化される症状の重症度はまた、用量レベルに対して効果を有することになる。一般に、体重の０．１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇの間の本発明の作用剤の用量レベルが、単回投与として毎日投与されるか、または複数回用量に分割される。好ましくは、一般的用量範囲は、１日あたり体重の２５０μｇ／ｋｇ〜５．０ｍｇ／ｋｇの間である。必要とされる用量の大幅な変動は、さまざまな投与経路の異なる効率性を考慮して想定されるべきである。例えば、経口投与であれば、一般に、静脈内注射による投与より高い用量レベルが必要であることが想定されることになる。これらの用量レベルの変動は、当該技術分野で周知の、最適化のための標準の経験的ルーチンを用いて調節してもよい。一般に、正確な治療有効用量は、上で特定された要素を考慮して、担当医によって決定されることになる。
【００７８】
本発明の作用剤（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、または抗体もしくはその抗原結合断片）は、例えば、米国特許第５，６７２，６５９号明細書および米国特許第５，５９５，７６０号明細書（参照により本明細書中に援用される）中に記載される場合などの持続型放出組成物で投与してもよい。即時または持続型放出組成物の使用は、治療されている症状のタイプに依存する。症状が急性または超急性（ｏｖｅｒ−ａｃｕｔｅ）障害からなる場合、即時放出形態による治療が持続型放出組成物の場合より好ましいことになる。あるいは、予防または長期治療においては、持続型放出組成物が一般に好ましいことになる。
【００７９】
本発明の作用剤（例えば、免疫応答刺激ペプチド、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、または抗体もしくはその抗原結合断片）は、任意の好適な方法で調製してもよい。作用剤は、天然供給源から単離し、組換えにより生成し、または合成により生成し、ライブラリーから同定し、またはこれらの方法の組み合わせによって生成してもよい。短いペプチドの合成は、当該技術分野で周知である。先に記載のように、本発明の作用剤のいずれかのペプチド部分は、当該技術分野で既知の標準のペプチド合成方法に従って合成してもよい。
【００８０】
ペプチドを対象に投与するための方法は、例えば、米国特許第５，８３０，８５１号明細書；米国特許第５，５５８，０８５号明細書；米国特許第５，９１６，５８２号明細書；米国特許第５，９６０，７９２号明細書；および米国特許第６，７２０，４０７号明細書（参照により本明細書中に援用される）において記載されている。
【００８１】
治療法の評価
本明細書中に記載の本発明の組成物を用いる治療的治療後、治療の有効性は、複数の方法、例えばＴ細胞の増殖、Ｔ細胞の細胞傷害性、抗体産生、抗原−陽性細胞もしくは組織の数の減少、または臨床的応答を測定するアッセイにより、評価してもよい。選択される抗原（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２抗原）を認識する抗体または免疫細胞の産生の増大は、免疫応答の促進を示すことになる。同様に、対象の免疫細胞による特定の溶解活性または特定のサイトカイン産生の増大あるいは腫瘍退行は、有効性を示すことになる。有効性はまた、望ましくない免疫応答の低下または消失に関連した疾患（例えば前立腺癌）における改善またはその寛解あるいは望ましくない免疫応答に関連した疾患（例えば前立腺癌）における改善またはその寛解によって示されうる。
【００８２】
診断
本発明者らは、前立腺癌細胞内で過剰発現され、かつ非癌性前立腺細胞内で発現されないＥＲＧおよびＳ１Ｍ２について示している。したがって、ＥＲＧおよびＳＩＭ２レベルの測定は、対象における前立腺癌を診断するための手段として用いてもよい。
【００８３】
本発明は、癌（例えば前立腺癌）の治療における免疫応答をもたらすための方法および組成物（例えば、免疫応答刺激ペプチド（例えばＥＲＧまたはＳＩＭ２ペプチド）、活性化免疫細胞、抗原提示細胞、および抗体またはその抗原結合断片）を特徴とする。方法および組成物は、例えば、別の分子、または任意の断片もしくはその誘導体を含まないかまたはそれに結合されたＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの測定を含んでもよい。本方法は、ＥＲＧまたはＳＩＭ２の絶対レベルまたは正常参照に対する相対レベルの測定を含んでもよい。例えば、５ｎｇ／ｍｌ、４ｎｇ／ｍｌ、３ｎｇ／ｍｌ、２ｎｇ／ｍｌ未満もしくは１ｎｇ／ｍｌ未満の、体液中のＥＲＧまたはＳＩＭ２のレベルは、前立腺癌の低リスクまたは前立腺癌であると診断された患者における良好な転帰を予測するものと考えられる。５ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌ、２０ｎｇ／ｍｌ、３０ｎｇ／ｍｌ、４０ｎｇ／ｍｌ、もしくは５０ｎｇ／ｍｌを超える、体液中のＥＲＧまたはＳＩＭ２のレベルは、前立腺癌の診断または既に前立腺癌であると診断された対象における不良の転帰と考えられる。ＥＲＧまたはＳＩＭ２の相対レベルに基づく診断においては、前立腺癌を有する対象は、正常参照試料またはレベルに対する、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチド（またはその断片）の発現における変化（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、もしくはそれを超える）を示すことになる。正常参照試料は、例えば、前立腺癌または前立腺癌を示唆する徴候の発症前に同じ対象から採取された試料、前立腺癌を有しない対象由来の試料、または既知の正常濃度での精製された参照ポリペプチドの試料（すなわち前立腺癌を示唆しない）であってもよい。「参照標準またはレベル」は、参照試料に由来する値または数字を意味する。正常参照標準またはレベルは、正常な対象に由来する値または数字であってもよい。
【００８４】
ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの量の測定を含む診断アッセイにおいては、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドは、完全長ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチド、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの分解産物、またはスプライシングを受けたアイソフォーム、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの酵素切断産物などを含んでもよい。一例では、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体は、前立腺癌の診断において使用される。
【００８５】
標準的方法を用い、任意の細胞、組織、または限定はされないが、尿、血液、血清、血漿、唾液、もしくは脳脊髄液を含む体液におけるＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドのレベルを測定してもよい。かかる方法は、イムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング（ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体を使用するを使用）、および定量酵素イムノアッセイ技術を含む。正常対照に対するＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドのレベルの上昇は、前立腺癌の陽性指標と考えられる。
【００８６】
ＥＲＧまたはＳＩＭ２核酸分子、またはその実質的に同一の断片、またはＥＲＧもしくはＳＩＭ２に高ストリンジェンシーでハイブリダイズするＥＲＧもしくはＳＩＭ２の断片もしくはオリゴヌクレオチドは、本発明の診断方法でのＥＲＧまたはＳ１Ｍ２核酸分子の発現を監視するためのプローブとして使用してもよい。正常対照に対するＥＲＧまたはＳＩＭ２核酸分子のレベルの上昇は、前立腺癌の陽性指標と考えられる。
【００８７】
本明細書中に記載の診断方法は、個別に使用するか、または前立腺癌の存在のより正確な診断を意図した任意の他の診断方法と併用してもよい。前立腺癌を診断するための追加的な方法の例として、例えば、前立腺細胞内の前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の検出、デジタル直腸検査、経直腸超音波、または生検（例えば針生検）が挙げられる。
【００８８】
本発明はまた、診断試験キットを提供する。例えば、診断試験キットは、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドに特異的に結合する抗体と、抗体とＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの間の結合を検出し、評価するための構成要素とを含んでもよい。検出においては、抗体またはＥＲＧもしくはＳＩＭ２ポリペプチドのいずれかが標識され、また抗体またはＥＲＧもしくはＳ１Ｍ２ポリペプチドのいずれかが基質に結合され、それにより、ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチド−抗体の相互作用が、抗体とＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドの間の結合後に基質に結合される標識の量を測定することによって確定できる。ＥＬＩＳＡは、抗体−基質相互作用を検出するための一般的な当該技術分野で既知の方法であり、本発明のキットで提供してもよい。ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドは、事実上、任意の体液、例えば、尿、血漿、血液、血液血清、精液、または脳脊髄液などの中で検出されうる。参照に対する、例えば正常対照中に存在するレベルに対するＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドのレベルにおける変化を測定するキットは、本発明の方法における診断キットとして有用である。キットはまた、標準曲線または参照レベルまたは正常な範囲内に該当するＥＲＧもしくはＳＩＭ２のレベルおよび場合によって前立腺癌と診断されると考えられることになるレベルを示す試料を含んでもよい。望ましくは、キットは、キットを使用する上での使用説明書を含むことになる。一例では、キットは、前立腺癌の診断を意図するキットを使用する上での使用説明書を含む。さらに別の例では、キットは、治療的処置または投与計画を監視するためのキットを使用する上での使用説明書を含む。キットはまた、前立腺癌の診断に有用な他の診断法を含んでもよく、または既知の前立腺癌の診断手段と併用してもよい。
【実施例】
【００８９】
実施例１ 前立腺癌免疫療法のための推定腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の同定
正常前立腺または正常非前立腺組織よりも前立腺癌に対して発現特異性を有する新規な推定前立腺癌腫瘍関連抗原を同定するため、本発明者らの研究室において作成した前立腺癌および正常前立腺のマイクロアレイのゲノムワイドな遺伝子発現分析を行い、外部の公開された前立腺癌組織アレイデータセットにおける候補ＴＡＡを検証し、非前立腺の成人組織における検出可能な発現を有するものを除外した。
【００９０】
まず、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ Ｕ１３３アレイを使用し、本発明者らの組織保存所（Ｔｉｓｓｕｅ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）からの癌および新鮮凍結正常前立腺組織標本における遺伝子発現を評価した。組織標本由来の２５０ｎｇの全ＲＮＡを、Ａｍｂｉｏｎ’ｓ ＭｅｓｓａｇｅＡｍｐ ＩＩ ｍＲＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎキットを使用して増幅した。ビオチン−ＵＴＰを、製造業者のプロトコルに従い、一晩のインビトロ転写ステップの間に取り込ませた。遺伝子発現を、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）のＧｅｎｅＣｈｉｐ Ｕ１３３アレイ（Ｐｌｕｓ２．０チップ）（全ヒトゲノム転写産物を示すアレイ）を使用して評価した。１５μｇのｃＲＮＡを、断片化し、製造業者のプロトコルに従い、アレイにハイブリダイズした。走査したアレイの画質は、ＢｉｏＣｏｎｄｕｃｔｏｒ Ｒパッケージを使用し、バックグラウンド値、存在コール（ｐｒｅｓｅｎｔ ｃａｌｌｓ）のパーセント、倍率、ならびにβ−アクチンおよびＧＡＰＤＨの３’−５’比に基づいて決定した。各転写産物におけるシグナル値を、ｄｃｈｉｐに記述される完全一致（ｐｅｒｆｅｃｔ ｍａｔｃｈｅｄ）（ＰＭ）のみに基づくシグナルモデリングアルゴリズムを使用してまとめた。ＰＭのみに基づくシグナル伝達モデリングアルゴリズムは、ＰＭ−ＭＭ（不一致）モデルより少ない偽陽性を生成する。したがって、シグナル値は転写産物の発現の絶対レベルに対応する。各転写産物におけるこれらのモデル化された正規化シグナル値を、さらに高レベルのバイオインフォマティクス分析のために使用した。モデルベースの発現シグナル値の計算の間、アレイおよびプローブ異常値の問い合わせを行い、画像のスパイクをシグナル異常値として処理した。異常値検出を、ｄｃｈｉｐ異常値検出アルゴリズムを使用して行った。プローブ（単一）またはアレイ異常値の百分率が５％のデフォルト閾値を超える場合、チップは異常値であると考えられた。所与の表現型に富む遺伝子を同定するために２群の試料を比較する場合、２群間の倍率変化（ＦＣ）の９０％の信頼下限（ＬＣＢ）が１．２を超える場合、対応する遺伝子は差次的に発現されたものと考えられた。ＬＣＢはＦＣのストリンジェントな推定値（ｓｔｒｉｎｇｅｎｔ ｅｓｔｉｍａｔｅ）であり、より優れたランキング統計値（ｒａｎｋｉｎｇ ｓｔａｔｉｓｔｉｃ）であることが示されている。１．２を超えるＬＣＢを有する遺伝子を選択する基準が、遺伝子発現において少なくとも２の「実」倍率変化を有する遺伝子に対応する可能性が最も高いことが示唆されている。
【００９１】
Ｌａｐｏｉｎｔｅら（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０１：８１１−８１６頁（２００４年））で公表された６２の前立腺癌および４１の正常前立腺標本に由来する生の遺伝子発現データを、ＢＲＢアレイのアーカイブされたデータセットから得た。前処理データを、Ｚ変換を用いて正規化した。差次的に発現された遺伝子を、倍率変化（＞０．５）およびＱ値＜０．０５に基づいて同定した。分析により、５１０個の差次的に発現された遺伝子が同定された。
【００９２】
バイオマーカーおよび免疫療法標的の優先度を判定する（ｐｒｉｏｒｉｔｉｚｅ）ため、すべての正常組織内で偏在的に発現されるわけではない遺伝子を同定する必要があった。さまざまなヒト正常組織における遺伝子発現データを、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｏｖａｒｔｉｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＦｏｕｎｄａｔｉｏｎのＧｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｔｌａｓ（ｈｔｔｐ：／／ｓｙｍａｔｌａｓ．ｇｎｆ．ｏｒｇ）から得た。このデータベースを使用し、ＭＡＳ５正規化発現データを（各転写産物における存在コール、不在コール、およびマージナル（ｍａｒｇｉｎａｌ）コールとともに）得た。各転写産物における存在コールおよび不在コールに基づき、優先値を計算した。すべての組織内に不在の遺伝子は最高の優先度を示し、すべての組織内に存在する遺伝子は最低の優先度を示した。遺伝子のリストをさらに拡張するため、Ｎｏｖａｒｔｉｓの遺伝子発現データ（Ｄｈａｎａｓｅｋａｒａｎら、Ｎａｔｕｒｅ ４１２：８２２−８２６頁（２００１年））を分析することによって前立腺特異的遺伝子のリストも得た。前立腺以外のすべての正常組織において、ＭＡＳ５コールに基づいて不在であると注釈を付けられた遺伝子は、前立腺特異的遺伝子であると考えられた。
【００９３】
上記のゲノムワイドな遺伝子発現分析により、正常前立腺に対して前立腺癌において過剰発現される１０６３個の遺伝子が同定された。発現分析において同定された上位１００の遺伝子の例として、ＡＭＡＣＲ、ＥＲＧ、ＭＭＰ２６、ＴＨＢＳ４、およびＦＯＸＤ１が挙げられる。次いで、４１の正常前立腺組織および６２の腫瘍性前立腺組織を含む先行的に公開されたデータセット（Ｌａｐｏｉｎｔｅら、上記）からのマイクロアレイデータの包括的分析を行うことにより、１０６３個の推定ＴＡＡを検証した。前立腺癌試料中で有意に過剰発現される遺伝子を、免疫療法におけるバイオマーカーまたは標的として使用されるその可能性について検討した。４２６個の上方制御された前立腺癌遺伝子のリストを、前処理後の倍率変化（＞０．５）およびＦＤＲ値＜０．０５および正規化データ（Ｚ変換）に基づいて得た。本発明者らのデータセットにおける、Ｓｔａｎｆｏｒｄ前立腺癌アレイデータセットに対して前立腺癌において過剰発現された遺伝子の検証は、アレイデータセット間で一致した過剰発現を伴う１４５の転写産物に関与した。
【００９４】
次いで、前立腺癌に対する最高の特異性を有する前立腺癌ＴＡＡを同定するため、インシリコ分析により、ヒト成人男性の非前立腺正常組織において検出可能な遺伝子を除外することを探索した。この目的のため、さまざまなヒト組織における遺伝子発現データを、Ｓｕら（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０１：６０６２−６０６７頁（２００４年））およびＧｅら（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８６：１２７−１４１頁（２００５年））によって行われた２つの研究から得た。前立腺以外のすべての正常組織内のＭＡＳ５コールに基づいて不在であると注釈を付けられた遺伝子は、前立腺特異的遺伝子であると考えられた。包括的分析により、前立腺癌試料中で過剰発現され、かつ組織による大きな制限を受ける２６の転写産物が同定された（図１）。これらの転写産物は、ＥＲＧおよびＳＩＭ２を含む２３の遺伝子に対応する。また、分析により、前立腺癌試料中に存在し、かつ正常組織内に不在の１７のさらなる遺伝子が同定された。
【００９５】
次いで、２３の候補抗原の各々を標的化する定量ｑＲＴ−ＰＣＲを行った。（Ａｇｉｌｅｎｔ＞６．０による）５０ｎｇの高品質ＲＮＡ試料を逆転写し、ｃＤＮＡを得て、１μｌのｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲ反応物の各ウェルに対して使用した。試料は３つ組で実施した。ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ））を、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７９００ＨＴ Ｐｒｉｓｍ機器上での２ステップリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析のために使用した。ＳＩＭ２およびＧＡＰＤＨにおけるＰＣＲプライマーを、ＳＩＭ２−Ｆ（５’−ＣＴＴＣＣＣＴＣＴＧＧＡＣＴＣＴＣＡＣＧ−３’）、ＳＩＭ２−Ｒ（５’−ＡＧＧＣＴＧＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧＴＧＴＴ−３’）、ＧＡＰＤＨ−Ｆ（５’−ＴＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＴＧＣＴＴＡＧＣ−３’）、およびＧＡＰＤＨ−Ｒ（５’−ＧＧＣＡＴＧＧＡＣＴＧＴＧＧＴＣＡＴＧＡＧ−３’）として設計した。所与の試料中のＳＩＭ２の発現値を、ＧＡＰＤＨの対応する発現に正規化した。２−ΔΔＣｔ法を用い、ＳＩＭ２の相対発現を計算した（Ｈａｒａｍら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ ６８：１５１７−１５３０頁（２００８年）およびＬｉｖａｋら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５：４０２−４０８頁（２００１年））。
【００９６】
１５の候補抗原（ＡＭＡＣＲ、ＢＩＣＤ１、Ｃ１０ｏｒｆｌ３７、ＣＤＣ２Ｌ６、ＩＣＡ１、ＫＩＡＡ１６６１、ＭＡＰ７、ＭＹＯ６、ＯＲ５１Ｅ２、ＰＡＩＣＳ、ＰＣＳＫ６、ＰＶＴ１、ＲＧＳ１０、ＳＧＥＦ、およびＳＩＭ２）が前立腺癌において過剰発現されることを確認した（図２）。これらの抗原に対する前立腺癌における過剰発現の頻度は、５７％〜８６％の範囲であった。ｑＲＴ−ＰＣＲによって検証したこれらの１５の前立腺癌特異的抗原の中から、正常前立腺において最も一貫して不在でありかつ前立腺癌において最高の発現頻度を有する遺伝子（図２）は、単一目的の（ｓｉｎｇｌｅ−ｍｉｎｄｅｄ）相同遺伝子（ＳＩＭ２）であった。ＳＩＭ２は、試験した７つのうち６つの癌において過剰発現されたが、良性前立腺組織においてはされなかった。
【００９７】
実施例２ 前立腺癌の免疫療法のための標的としてのＥＲＧ
標的治療用抗原の選択は、腫瘍ワクチン（例えば前立腺癌ワクチン）の設計にとって極めて重要である。最近の試験は、３’ＥＲＧとインフレームで融合する５’ＴＭＰＲＳＳ２遺伝子内の前立腺に特異的なプロモーター領域の染色体内再編成（ｉｎｔｒａｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）（ＥＲＧの過剰発現をもたらす）が、ヒト前立腺切除標本の４０〜６０％中に存在することを示している。ＥＲＧは、通常、ヒト前立腺において発現されず、ＥＲＧの発現については、成人の正常組織内で豊富なレベルで検出されないが、培養された内皮または発達細胞に限って報告されている。さらに、発現が成人期を通してさまざまな組織内で維持される他のＥＴＳ因子と異なり、ＥＲＧの発現は組織による大きな制限を受ける。
【００９８】
ＭＨＣクラスＩ拘束性エピトープを予測する異なるアルゴリズムを使用するＥＲＧアミノ酸配列のインシリコ分析によって、５０を超える有望なバインダーが同定され、そこでヒトＨＬＡ−Ａ２．１に対する高親和性結合を有することが予測される１２の推定９−ｍｅｒペプチドを選択した。これらの９−ｍｅｒＥＲＧペプチドのうち３つは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、３、および４によって記載される。すべてのエピトープが、大部分のＴＭＰＲＳＳ２：ＥＲＧ融合産物において検出されない転座のＮ末端に由来し、かつエピトープ配列は、その対応するマウスオーソログに対して１００％相同であった。次いで、これらのペプチドをＨＬＡ−Ａ２．１に対する結合についてスクリーニングし、有意な結合親和性を有する８つを見出した（図３Ａ）。次いで、本発明者らのインシリコ分析により、ヒト成人正常組織内のインサイチューでのＥＲＧ発現が少ないことが同定されたことから、Ｔ細胞のＥＲＧに対する寛容が他の自己抗原の場合より容易に克服可能であると仮定した（データは示さず）。したがって、本発明者らは、免疫化試験を用いて、これらのペプチドが、ヒト化ＨＨＤマウス（すなわちヒトＨＬＡ−Ａ２．１クラスＩ ＭＨＣのみを有するマウス）におけるＥＲＧエピトープに特異的なＨＬＡ−Ａ２．１拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の誘導により測定した場合にＥＲＧに対する寛容を破壊できるか否かを評価し、ＥＬＩＳＰＯＴにより測定した場合に、ＥＲＧに特異的なＣＴＬの誘導を観察した（図３Ｂ）。
【００９９】
インビトロ試験では、前立腺癌患者において抗ＥＲＧ自己抗体が検出されている。これは、推定の標的前立腺ＴＡＡの同定、主に前立腺癌患者の血清中でのＴＡＡに対する自己抗体の検出を目的として、遺伝子発現のプロファイリングに対する代替アプローチを用いて行った。血清、血漿、および軟膜を提供する対象の承諾を得た１０００の症例対照コホートを集めた。このコホートは、３５％の前立腺癌症例（原発性および転移性）、５５％の対照症例、および１０％の不確定または前癌所見を伴う症例（例えば、異型、ＨＧＰＩＮ、またはＡＳＡＰ）を含む。このコホート由来の血清に、高密度核酸プログラム型タンパク質アレイ（ＮＡＰＰＡ）を使用する初期スクリーニングを施し、発生率が高い自己抗体を用いて抗原を同定した（図４Ａ）。いくつかの候補を、ＥＲＧを含む、この最初のスクリーニングから得られる上位１００の抗原から選択し、ＮＡＰＰＡデータを、ＥＬＩＳＡプラットフォームを使用して検証した。この方法を用いて、試験した１２％の前立腺癌患者に由来する血清中の抗ＥＲＧ自己抗体の存在（ＥＲＧおよび他のＴＡＡにおけるデータを図４Ｂに図示する）を確認し、それは前立腺癌患者におけるＥＲＧの免疫原性についての証拠を提供した。
【０１００】
実施例３ 前立腺癌の免疫療法における標的としてのＳＩＭ２
健常個体および前立腺癌患者に由来する血清がＳＩＭ２に対する抗体を有するか否かを試験するため、捕捉用のインビトロで発現されるＧＳＴタグ付きＳＩＭ２を伴うＥＬＩＳＡシステムを使用した。血清試料は、Ｈａｒｖａｒｄ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙおよびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｍｉｃｈｉｇａｎの患者の発生部位（ａｃｃｒｕａｌ ｓｉｔｅｓ）で収集した。書面によるインフォームドコンセントは、各患者から得られ、両施設の治験審査委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄ）によって承認された。すべての患者は、４０歳超であり、２．５ｎｇ／ｍｌを超えるＰＳＡ値、異常なデジタル直腸検査（ＤＲＥ）、ＰＳＡの上昇、またはＰＳＡの低下（家族歴などのリスク因子を伴う）が原因で往診していた。試験はまた、過去に生検を受けたことがあり、試験で癌で陽性を示していない男性を含んだ。登録と採血の後、すべての患者が前立腺生検を受け、癌の有無について判定された。
【０１０１】
ヒト完全長ＳＩＭ２ ｃＤＮＡを有するｐＣＲ−ＢＬＵＮＴ２−ｔｏｐｏプラスミドを、Ｏｐｅｎ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，ＡＬ）から購入した。ＳＩＭ２ ｃＤＮＡを有するプラスミド（１０ｐｇ〜２００ｎｇ）は、２つの異なるＰＣＲステップを経た。第１のＰＣＲステップは、２２．５μｌのＡｃｃｕＰｒｉｍｅ Ｐｆｘ Ｓｕｐｅｒ Ｍｉｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）および２００ｎＭの各プライマーを含んだ。すべての遺伝子におけるフォワードプライマーが、５’末端に共有配列（ＡＡＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＡＣＣ）を有したが、３’末端に各ｃＤＮＡに特異的な２２〜２５ヌクレオチドを有した。リバースプライマーもまた、５’末端に配列を共有したが（ＡＡＡＧＣＡＧＧＣＴＣＣＡＣＣ）、各プライマーの３’末端（２１〜２７ヌクレオチド）は各ｃＤＮＡに特異的であった。第２のＰＣＲステップは、２２．５μｌのＡｃｃｕＰｒｉｍｅ Ｐｆｘ Ｓｕｐｅｒ Ｍｉｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、第１のステップからの６．６ｍｌのＰＣＲ産物、ならびに２００ｎＭのａｔｔＦおよびａｔｔＲプライマーを含んだ。２つのＰＣＲステップにおけるサイクル条件は、第１のＰＣＲステップが３５サイクルで実行される一方、第２のＰＣＲステップが５サイクルで実行される以外では同じであった。延長ステップは、１分／ｋｂ ｃＤＮＡで設定した。ＰＣＲ産物を、１％アガロースゲル中を走らせ、ゲル精製し、ｐＤＯＮＲプラスミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にクローン化し、各ｃＤＮＡのエントリークローンを生成した。エントリークローン（１３０ｎｇ）を使用し、１０μｌの全容量に対して、ｐＣＩＴＥ−ＧＳＴ発現ベクター（１３０ｎｇ）、ＬＲクロナーゼＩＩ酵素ミックス（２μｌ）、およびＴＥ緩衝液を使用して発現クローンを生成した。反応産物（１μｌ）を、製造業者の使用説明書に従い、５０μｌのＯｎｅ Ｓｈｏｔ ＯｍｎｉＭａｘ（商標）２Ｔ１ Ｐｈａｇｅ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｃｅｌｌｓに形質転換した。ＴＡＡのすべては、Ｃ末端にＧＳＴを有するＧＳＴ組換えタンパク質として生成された。血清抗体結合における陰性対照として、ＧＳＴ対照ベクターはまた、ＧＳＴのみが発現されることになるｐＤＥＳＴ１５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して生成された。Ｋｏｚａｋ配列は、哺乳類無細胞系において使用できるように、ＧＳＴの元のｐＤＥＳＴ１５ ５’に導入された。
【０１０２】
このＥＬＩＳＡ法は、捕捉抗体と結合されたｃＤＮＡベクターを利用し、タンパク質が精製される必要がないことから従来のタンパク質アレイより有利でありうる核酸プログラム型タンパク質アレイ（ＮＡＰＰＡ）への単一抗原の適応である（図４Ａ）。ＧＳＴで予備コーティングされたＧＳＴ−ＥＬＩＳＡプレートを、ＧＥ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。プレートを、ＰＢＳ、５％ミルク、および０．２％Ｔｗｅｅｎ−２０で、４℃で一晩ブロッキングした。異なるＴＡＡ−ＧＳＴ組換えタンパク質を、製造業者の使用説明書に従い、微量遠心管内、３０℃で１．５時間、ウサギ網状赤血球溶解液無細胞発現系（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発現させた。発現されたタンパク質を、ＥＬＩＳＡプレートに移し、４℃で一晩結合させた。プレートを洗浄し、ブロッキング緩衝液中で１：３００に希釈した血清とともに１時間インキュベートし、次いで西洋わさびペルオキシダーゼに連結された抗ヒト抗体とともに１時間インキュベートした。洗浄後、１００μｌの基質（ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ ＥＬＩＳＡ Ｆｅｍｔｏ Ｍａｘｉｍｕｍ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ；Ｐｉｅｒｃｅ）を各ウェルに添加し、発光シグナルを、Ｖｉｃｔｏｒ３ ＥＬＩＳＡリーダー（フィルタなし）を使用して読み取った。各血清を２つ組でスクリーニングした。プレートはまた、二次抗体陰性対照およびＧＳＴ対照を含んだ。
【０１０３】
ＳＩＭ２に対する特異的結合を有する患者血清由来の自己抗体の有意なレベル（Ｐ＜０．０１）を、５つのうち２つの評価した前立腺癌試料中で検出した（図５）。それに対し、ＳＩＭ２に対する自己抗体は、９つのうちいくつかの対照患者の血清中で検出できなかった（図５）。
【０１０４】
実施例４ ＥＲＧ標的化およびＳＩＭ２標的化前立腺癌免疫療法におけるツールとしてのヒト化マウスモデル
ＥＲＧ標的免疫療法プロトコルを試験するため、ＨＨＤマウス（ＨＬＡ−Ａ＊０２０１トランスジェニックマウス）、Ｐｂ−ＥＲＧマウス（プロバシン−ＥＲＧトランスジェニックマウス）、およびＰｂ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−マウスを使用した。ＨＨＤマウスは、ヒトＨＬＡ−Ａ２．１を発現するが、マウスＭＨＣ Ｉが欠如している。Ｐｂ−ＥＲＧトランスジェニックマウスは、前立腺限定的ＥＲＧ発現を示し、１２〜１４週齢になるまで、前立腺癌の前駆病変であるマウス前立腺上皮内新形成（ｍＰＩＮ）を発生させた。Ｐｂ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−マウスは、過剰発現されたＥＲＧと低下したＰｔｅｎレベルの組み合わせが、６カ月齢までに完全浸透度を伴う多発性前立腺腺癌の原因であることを示した。
【０１０５】
また、ＥＲＧに基づく免疫療法のＣＴＬ養子移植段階において、異種移植片モデルが抗腫瘍効果の滴定および評価のための高速なシステムを提供することから、それを用いる。このモデルは、ＨＬＡ−Ａ２．１（＋）ヒトＬＮＣａｐ細胞系を使用して開発されており、ヒトＥＲＧを安定的に発現する。トランスジェニックマウスが使用できない場合、同様の方法をＥＲＧ以外のＴＡＡにおいて採用する。
【０１０６】
ＳＩＭ２標的化免疫療法においては、ＴＲＡＭＰ−ＨＨＤハイブリッドマウスを使用する。ＴＲＡＭＰマウスは、前立腺癌の十分に特徴づけられたモデルであり、それは前立腺癌のゲノミクスおよび免疫に関するいくつかの試験におけるモデルとして過去に使用している。さらに、マイクロアレイデータは、ＴＲＡＭＰ前立腺腫瘍におけるＳＩＭ２のレベルの上昇を示した。
【０１０７】
実施例５ Ａ２．１拘束性ＣＴＬによって媒介される免疫療法にとって好適な標的であるＥＲＧのヒトＨＬＡ−Ａ２．１拘束性エピトープの特徴づけ
ＥＲＧに特異的なＣＴＬの寛容に対する前立腺癌発症の影響を、前立腺新生物の形質転換が生じる前後に、（同齢の）ＨＨＤマウスにおけるＥＲＧに特異的なＣＴＬの応答性をＦ１ Ｐｂ−ＥＲＧ−ＨＨＤまたはＰｂ−ＥＲＧ／ＰＴＥＮ＋／−−ＨＨＤハイブリッドマウスの場合と比較することによって判定する。マウスおよびヒトＥＲＧ遺伝子の間での著しい相同性のため、同定した３つのエピトープのアミノ酸配列は、マウスＥＲＧエピトープに対して１００％相同である。
【０１０８】
予備データにおいては、ヒト化マウスにおけるＥＲＧに特異的なＡ２．１拘束性細胞傷害性Ｔリンパ球の誘導からも明らかなように、免疫化後にＥＲＧに特異的なＴ細胞寛容を破壊できる、ヒトＨＬＡ−Ａ２．１によって提示されるヒトＥＲＧの３つの免疫優性エピトープが同定された。これら３つの免疫優性ヒトＥＲＧエピトープの各々に対して誘導される免疫応答の抗腫瘍有効性を比較し、ＥＲＧに対するＴ細胞寛容が、アンドロゲン抑制を介してまたはＴｉｍ−１の標的化による抑制性ＣＤ４／ＣＤ２５調節性Ｔ細胞の阻害により、さらに弱まるか否かを判定する。これらの前臨床試験は、Ｐｂ−ＥＲＧマウスおよびＰＢ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−マウスとともに飼育したヒト化ＨＨＤマウスのＦ１ハイブリッド子孫を使用して実施する。これらのモデルは、次のように相互に相補的である。すなわち、Ｐｂ−ＥＲＧトランスジェニックマウスは、前立腺限定的ＥＲＧ発現を示し、かつこれらのマウスは、進行癌を発症しないにもかかわらず、ＥＲＧに特異的なＴ細胞応答を促進するため、アンドロゲン調節をいかに最適に利用するかについての試験を可能にする。それに対し、ＰＢ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−マウスは、６カ月齢までに完全浸透度を伴う多発性前立腺腺癌を呈し、それから３つの免疫優性ＥＲＧエピトープのうちいずれがインビボで前立腺癌を根絶させる最高の能力を有するかが判定可能になる。
【０１０９】
３つの優性エピトープのＥＲＧ誘発性前立腺癌に対する除去能の直接比較を、受動免疫化および能動免疫化によって行う。発明者らは、過去に、前立腺腫瘍遺伝子モデルに特異的なＣＴＬ（例えばＴＲＡＭＰマウスにおけるＳＶ４０Ｔａｇ）の養子移植が、確立された前立腺癌を有効に治療可能であることを示している。この実験は、本発明者らのＰＢ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−ｘＨＨＤマウスにおけるヒトＡ２．１拘束性ＥＲＧ特異的ＣＴＬの養子移植によって行う。ＥＲＧの３つの免疫優性ヒトＡ２．１拘束性ペプチドに対するＣＴＬの有効性を比較する。最も有効なエピトープを、第１相治験ＩＮＤにおいて選択する。能動免疫化試験を実施し、前臨床のハイブリッドなヒト化ＥＲＧ／Ａ２．１トランスジェニックモデルにおいて、養子移植の不在下で、インサイチューでの抗腫瘍応答性を最適化するための手段を模索した。本発明者らの能動免疫化試験は、アンドロゲン抑制を用いるかまたは調節性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ）を標的化し、ＥＲＧ寛容を弱め、インビボでの抗腫瘍有効性を改善することに注目する。すべての免疫化法において、所与のペプチド抗原に対するＣＴＬ応答は、ペプチド免疫化マウス由来の脾細胞の、ＩＦＮ−γを分泌し（ＥＬＩＳＰＯＴにより測定）、グランザイムＢおよびパーフォリンを生成し、細胞毒性アッセイにおいてペプチドが負荷されたＨＬＡ−Ａ２．１発現細胞を溶解し、さらにペプチド−四量体複合体に特異的に結合する能力によって規定される。抗腫瘍効果は、（Ｐｂ−ＥＲＧマウスにおける）組織構造および（ＰＢ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−マウスにおける）前立腺腫瘍サイズによって監視する。
【０１１０】
実施例６ Ａ２．１拘束性ＣＴＬによって媒介される免疫療法に適した標的であるヒトＨＬＡ−Ａ２．１拘束性ＳＩＭ２エピトープの同定および特徴づけ
正常（４１の試料）および新生物（６２の試料）の前立腺組織由来のマイクロアレイデータの本発明者らの包括的分析においては、前立腺癌において有意に過剰発現される遺伝子を、それが免疫療法におけるバイオマーカーまたは標的として使用される可能性について検討した。３４３の特有の、前立腺癌で下方制御される遺伝子のリストを、前処理後の倍率変化（＞０．５）およびＦＤＲ値＜０．０５および正規化データ（Ｚ変換）に基づいて得た。本試験の目的のため、発現が非前立腺正常ヒト組織内で全く認められない場合の遺伝子のみを、さらなる検討のために保持した。さまざまなヒト組織における遺伝子発現データを、ＮｏｖａｒｔｉｓおよびＳｔａｎｆｏｒｄによって実施された２つの試験から得た。各転写産物における存在コール、不在コール、およびマージナルコールとともに、正規化された発現データＭＡＳ５を得た。各転写産物における存在コールおよび不在コールに基づき、優先値を計算した。すべての組織内に不在の遺伝子を、最高の優先度で得た。遺伝子のリストをさらに拡張するため、前立腺特異的遺伝子を、Ｓｔａｎｆｏｒｄ遺伝子発現データを分析することによって同定した。前立腺を除くすべての正常組織内でのＭＡＳ５コールに基づき、不在であると注釈を付けられた遺伝子は、前立腺特異的遺伝子であると考えられた。この包括的多段階分析によって５７の遺伝子リストが得られ、それらはＥＲＧを含んだ。転写因子ＳＩＭ２を、分析した大部分の前立腺癌生検物におけるその過剰発現（図６）と正常組織内での発現の不在について、本発明者らの第２の標的として選択した。ＥＲＧおよびＳＩＭ２の同時過剰発現が、分析した前立腺癌生検物の画分中にのみ認められた。
【０１１１】
考えられるＨＬＡ−Ａ＊０２０１結合エピトープを予測するために、候補標的ＴＡＡタンパク質配列を、さまざまなマトリックスパターンに対してスクリーニングし、そこでＨＬＡ−Ａ＊０２０１モチーフに適合する八量体、九量体または十量体ペプチド内部のすべてのアミノ酸を評価する。本発明者らの予測を行うため、汎用アルゴリズムＳＹＦＰＥＩＴＨＩ、ＢＩＭＡＳ、ＭＨＣＰｒｅｄ、およびＲａｎｋＰｅｐに加え、ＮｅｔＣＴＬ、ＰＲＥＤＥＰ、ＰｒｏＰｒｅｄ−Ｉ、ＭＡＰＰＰ、ＪｅｎＰｅｐ、ＮｅｔＭＨＣ、およびｎＨＬＡｐｒｅｄも利用した。
【０１１２】
エピトープ候補のＨＬＡ−Ａ２．１に対する結合について、ＭＨＣ安定化アッセイを用いて評価した。アッセイは、好適なペプチドの、Ｔ２細胞系由来のＭＨＣクラスＩ分子に対する安定化能に基づく。Ｔ２細胞は、抗原提示関連機能トランスポーター（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）（ＴＡＰ）が欠如し、その結果、空の不安定なクラスＩ分子が細胞表面上に蓄積する。細胞表面上のこれらの分子は、適切な結合ペプチドの付加によって安定化されない限り、迅速に解離する。このアッセイでは、インフルエンザＭ１ ＨＬＡ−Ａ＊０２０１結合ペプチドを参照として使用した。
【０１１３】
つまり、Ｔ２細胞を、５０μｇ／２５０×１０３個の細胞／ｍｌの濃度での候補ペプチドの添加前、無血清ＩＭＤＭ（ＡＴＣＣ）中で６時間培養し、３７℃で一晩インキュベートした。細胞を洗浄し、表面ＨＬＡ−Ａ２．１分子を、ＦＩＴＣマウス抗ヒトＨＬＡ−Ａ２ ｍＡｂ（クローンＢＢ７．２、マウスＩｇＧ２ｂκ、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で、４℃で１時間かけて染色した。次いで、細胞をＰＢＳで３回洗浄し、フローサイトメトリーによって分析した。陰性対照ペプチド（ＮＥＧ、図６Ａを参照）およびインフルエンザマトリックスペプチドＭ１バインダーペプチド（Ｍ１、図６Ａを参照）は、対照としての役割を果たした。所与のペプチドの相対結合親和性を、ＭＦＩ（ペプチド）／ＭＦＩ（陰性ペプチド）として計算した。さらなる試験のため、１．５以上の相対結合親和性のみを考慮した。
【０１１４】
Ｔ２細胞を、無血清イスコフ修飾ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）中で、５０μｇ／ｍｌの各候補ペプチドとともに、３７℃で一晩インキュベートした。次いで、細胞を、１０μｇ／ｍｌでのＢｒｅｆｅｌｄｉｎ Ａ（Ｓｉｇｍａ（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））とともに１時間インキュベートし、洗浄し、Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ Ａ（５０ｎｇ／ｍｌ）の存在下、３７℃で０、２、４または６時間インキュベートした。次いで、細胞をＢＢ７．２ ｍＡｂで染色した。各時点においては、ペプチド誘発性のＨＬＡ−Ａ２．１の発現は、ペプチドが負荷されたＴ２細胞の平均蛍光と陰性ペプチドが負荷されたＴ２細胞の平均蛍光との差異として計算した。解離の速度は、経時的にＡ２．１発現の低下による影響を受ける。
【０１１５】
このＭＨＣ安定化アッセイは、ＨＬＡ−Ａ２．１分子を安定化可能な９つのＳＩＭ２ペプチドを示し、結果的に特異的なモノクローナル抗体による表面Ａ２．１分子の検出の増大がもたらされた（図６Ａ）。ペプチド−ＨＬＡ解離速度は時間と相関し、それにより弱い安定化エピトープ（エピトープ８４、１９９、２３７および４３０）および強い安定化エピトープ（エピトープ８７、２０５、２４１および２４４）が同定された。しかし、高い解離速度（弱い安定化因子）を伴うエピトープは、インキュベーションの８時間後であっても非結合対照エピトープを超える弱い結合をさらに示した。
【０１１６】
次いで、これらの９つのＳＩＭ２ペプチドを、トランスジェニックＨＨＤマウスにおけるインビボＣＴＬ応答に対するその誘発能について試験した。１０〜１２週齢の雄ＨＨＤマウスに対し、１５０μｇのＩ−Ａｂ拘束性ＨＢＶｃｏｒｅ１２８−１４０Ｔヘルパーエピトープ（ＴＰＰＡＹＲＰＰＮＡＰＩＬ）の存在下で、５０μｌの不完全フロインドアジュバント（ＩＦＡ）および５０μｌのＰＢＳの中に乳化された１００μｇの各候補ペプチドを、尾の基部に皮下注射した。免疫化の１０〜１２日後、脾臓を回収し、脾細胞を、ＥＬＩＳＰＯＴにより、ペプチド誘発性のＩＦＮ−γの特異的放出について試験した。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイを実施するため、９６ウェルのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ ＩＰプレートを、ＰＢＳ中、１０μｇ／ｍｌの濃度の１００μｌ／ウェルのマウスＩＦＮ−γに特異的な捕捉ｍＡｂ（ＡＮｌ８、Ｍａｂｔｅｃｈ Ｉｎｃ．（Ｍａｒｉｅｍｏｎｔ，ＯＨ））で、４℃で一晩かけてコーティングした。ウェルをＰＢＳで洗浄し、ＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳで、３７℃で１時間かけて飽和させた。２．５×１０５個の脾細胞全体を、４つの各複製ウェル内に播種し、５０μｇ／ｍｌのマイトマイシンＣで１時間前処理した、５×１０４個のペプチドが負荷された（ペプチド１０μｇ／ｍｌ、３７℃で２時間）脾細胞を各ウェルに加えた。プレートを、５％ＣＯ２下、３７℃で１〜２日間インキュベートし、ＰＢＳで５回洗浄し、次いで１μｇ／ｍｌのビオチン化ラット抗マウスＩＦＮ−γ ｍＡｂ（Ｒ４−６Ａ２，Ｍａｂｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）とともに、４℃で２４時間または室温で２時間インキュベートした。ウェルを洗浄し、１００μｌの希釈アルカリホスファターゼ−複合ストレプトアビジンとともに、室温で１時間インキュベートした。スポットを、ペルオキシダーゼ基質（５−ブロモ−４，３−インドリルリン酸およびニトロブルーテトラゾリウム）を付加することによって展開し、ＥＬＲ０４ ＡＩＤ ＥＬＩＳＰＯＴ Ｒｅａｄｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋａ ＧｍｂＨ（Ｓｔｒａβｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ））を使用してカウントした。
【０１１７】
インビトロでのＳＩＭ２（８７）（ＴＬＤＧＦＶＦＶＶ）、ＳＩＭ２（２０５）（ＹＱＩＶＧＬＶＡＶ）、ＳＩＭ２（２３７）（ＳＬＤＬＫＬＩＦＬ）、ＳＩＭ２（２４１）（ＫＬＩＦＬＤＳＲＶ）、およびＳＩＭ２（２４４）（ＦＬＤＳＲＶＴＥＶ）による再刺激が、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイにおけるペプチドに特異的な方法で、有意により多数の脾細胞における（ＳＩＭ２（８７）につきＰ＜．０１および他のエピトープにつきＰ＜．００１）ＩＦＮ−γの放出を誘発することを見出した（図６Ｂ）。これは、ＳＩＭ２（およびＳＩＭ１）がマウスにおける他の非前立腺組織内でも発現されることから、ＳＩＭ２に対する寛容がこれらのエピトープに対するマウスの免疫化を通して回避されるという証拠を提供する。ＳＩＭ２（２５）およびＳＩＭ２（１９９）は、Ａ２．１に強く結合するその能力に反して、免疫原性を示さなかった。
【０１１８】
ヒトＨＬＡ−Ａ２．１拘束性ＳＩＭ２特異的な免疫が、インビボでの前立腺癌発症に影響を与える可能性は、ＴＲＡＭＰ−ＨＨＤハイブリッドマウスにおいて評価されることになる。ＴＲＡＭＰマウスは、前立腺癌の十分に特徴づけられたモデルであり、本発明者らは過去に、それを前立腺癌のゲノミクスおよび免疫についてのいくつかの試験におけるモデルとして利用している。ゲノムワイドな分析では、最近、ＳＩＭ２遺伝子がＴＲＡＭＰ前立腺腫瘍において過剰発現されることを示している。さらに、ＬＮＣａｐ細胞内でのＳＩＭ２の発現がアンドロゲンによって抑制され、これはアンドロゲンの操作とこのモデルにおけるＳＩＭ２標的化免疫療法とを組み合わせる可能性を提供することを示している。
【０１１９】
実施例７ 前立腺ＴＡＡに特異的な免疫寛容を克服するためのアンドロゲン除去の利用
アンドロゲンのシグナル伝達経路は、前立腺癌の発症および進行にとって重要である。アンドロゲン除去は、前立腺癌における従来の治療であり、免疫療法と組み合わされた場合に腫瘍抗原に対する免疫を促進するものと多くには考えられている。マウスにおけるアンドロゲン除去が寛容を弱め、前立腺腫瘍抗原モデルとして、インフルエンザペプチドに対するＣＤ４ Ｔ細胞の応答を高めることが示されている。本発明者らの試験では、プロバシン−ＰＳＡトランスジェニックマウスにおけるＰＳＡに対するＡ２．１拘束性ＣＴＬ応答に対するこの観察を示している。例えば、ハイブリッドＡ２．１／ＰＳＡ（雄、去勢した雄、または雌）トランスジェニックおよびＡ２．１マウスをｖａｃ−前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）で免疫し、脾細胞をＰＳＡタンパク質が負荷された樹状細胞で再刺激し、ＥＬＩＳＰＯＴ（図７Ａ）またはＰＳＡ−四量体（図７Ｂ）によって試験し、アンドロゲン抑制が前立腺に特異的な寛容を弱めることが示された。さらに、雄におけるアンドロゲン除去療法は、良性および悪性前立腺組織へのＴ細胞浸潤の促進をもたらすことが示されている。ここでは、ＥＲＧ−およびＳＩＭ２に特異的な免疫寛容を弱める、ＴＭＰＲＳＳ２−ＥＲＧ融合体およびＳＩＭ２遺伝子のアンドロゲン応答性（図８）を利用する。
【０１２０】
本発明者らの予備データ（図８Ａ）は、ＥＲＧ発現とアンドロゲンの十分に確立された正の相関に合致する。３つの免疫優性ＥＲＧペプチドを、Ｐｂ−ＥＲＧ−ＨＨＤにおけるＥＲＧに特異的なＣＴＬを誘発し、ＰＢ−ＥＲＧ／Ｐｔｅｎ＋／−−ＨＨＤマウスにおける腫瘍成長を低下させる能力について比較する、能動免疫化の結果に対する去勢の効果を評価する。
【０１２１】
ＥＲＧのように、ＳＩＭ２発現は、アンドロゲンに依存し（図８Ｂ）、これは染色体２１に対するアンドロゲン調節因子に富む領域内のＳＩＭ２遺伝子の位置に基づく可能性が高い。本発明者らのマイクロアレイデータは、ＴＲＡＭＰマウス由来の前立腺腫瘍におけるＳＩＭ２発現の発現増大を示した。雄ＴＲＡＭＰ−ＨＨＤハイブリッドマウスの去勢によるＳＩＭ２への免疫寛容および前立腺腫瘍成長に対するアンドロゲン除去の効果、次いで免疫原性Ａ２．１拘束性ＳＩＭ２ペプチドでの能動免疫化について試験する。
【０１２２】
実施例８ 前立腺ＴＡＡに特異的な免疫寛容を克服するためのＴ細胞免疫グロブリン−ムチン−１（Ｔｉｍ−１）経路の操作
調節性Ｔリンパ球（Ｔｒｅｇ）は、さまざまな癌における抗腫瘍免疫応答を著しく妨げる。Ｔｉｍ−１受容体を介してＴ細胞を刺激し、Ｔｒｅｇ細胞の生成およびＴＡＡに対する免疫寛容の発現に干渉する能力を検討するため、ＴＲＡＭＰマウスをＧＦＰ−Ｆｏｘｐ３−ＫＩマウスと交配させた。ＴＲＡＭＰ−ＧＦＰ−Ｆｏｘｐ３ハイブリッドマウスの前立腺−流入リンパ節に由来するナイーブＣＤ４ ＴおよびＣＤ８ Ｔ細胞が、抗ＣＤ３／ＣＤ２８＋ＴＧＦ−βでの治療後にＴｒｅｇ細胞への変換速度の増加を示すことを見出した（図９Ａおよび９Ｂ）。ＴＧＦ−β誘発性分化に対するこの感受性の増大は、高齢マウスにおいて促進される。この新規な観察によると、前立腺癌の発症が腫瘍および末梢血の双方におけるＴｒｅｇの増加と並行する理由が説明できる。癌ワクチンの投与前のＴｒｅｇの減少は、非前立腺モデルにおける腫瘍免疫を強化する。Ｔｉｍ４−Ｉｇ融合タンパク質である作動性抗Ｔｉｍ１抗体（Ａｂ）によるＴ細胞免疫グロブリン−ムチン−１（Ｔｉｍ−１）の刺激またはＴｉｍ−４＋ＤＣによる活性化は、Ｔ細胞をＴＨ１およびＴＨ１７優性表現型に二分させ（ｐｏｌａｒｉｚｅ）、かつ寛容およびＴｒｅｇを破壊することが可能である。まず、Ｂ６マウスを組換え体のＴａｇ発現ワクチニアで免疫し、免疫化の際に異なる用量の抗体を提供することによる抗Ｔｉｍ−１ Ａｂの能力について試験した。Ｔａｇ−四量体の特異性およびＣＤ８細胞によるＩＦＮ−γの生成によって判断すると、アゴニスト抗Ｔｉｍ−１ ＡｂがＴａｇに特異的なＣＴＬにおける有意な増大を誘発したことを見出している（図９Ｃおよび９Ｄ）。この成果は、アゴニスト抗Ｔｉｍ−１抗体が、不活性化インフルエンザウイルスで免疫されたマウスにおいて、抗原特異的な細胞増殖およびＩＦＮ−γの生成を促進したという前報に合致している。次いで、同じ方法を用いて、成体ＴＲＡＭＰ−ＧＦＰ−Ｆｏｘｐ３マウスにおける抗体のＣＴＬ促進能を評価しようとした。同様に、抗体治療の結果、脾臓および前立腺−流入リンパ節の双方においてＴａｇ特異的ＣＴＬが増大した（図１０）。併せて、本発明者らの成果は、抗体または融合タンパク質によるＴｉｍ−１／Ｔｉｍ−４相互作用との干渉がＥＲＧまたはＳＩＭ２での能動免疫化に対する応答性を高めることになるという本発明者らの仮説を支持している。さまざまな前立腺癌のマウスモデルにおけるＴｉｍ−１操作の効果は、能動および受動免疫療法レジメン下で、またアンドロゲン除去と組み合わせて、アゴニスト抗Ｔｉｍ−１モノクローナル抗体を抗原と並行投与することによって試験する。
【０１２３】
他の実施形態
上記の内容から、本明細書中に記載の本発明に対する変形および改良を行い、それをさまざまな用途および条件に導入できることは自明であろう。かかる実施形態はまた、次の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。
【０１２４】
本願中に記載されるすべての出版物、特許出願、および特許は、各々の独立した出版物、特許出願、または特許が、参照により援用されるように、あくまで具体的かつ個別に示される場合と同程度に、参照により本明細書中に援用される。
【０１２５】
上記の内容から、当業者は、本発明の本質的特性を容易に確認でき、本発明のさまざまな変更および改良を行い、それをさまざまな用途および条件に導入できる。したがって、他の実施形態もまた特許請求の範囲の範囲内に含まれる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１で示される隣接アミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する単離された免疫応答刺激ペプチドであって、少なくとも７個であるが５０個未満のアミノ酸残基を有し、かつ、抗原提示分子に結合された場合、哺乳類宿主内で免疫細胞を活性化することができる、単離された免疫応答刺激ペプチド。
【請求項２】
前記配列同一性が、９５、９６、９７、９８、または９９％である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜３０個のアミノ酸残基を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２５個のアミノ酸残基を有する、請求項３に記載のペプチド。
【請求項５】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２０個のアミノ酸残基を有する、請求項４に記載のペプチド。
【請求項６】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１５個のアミノ酸残基を有する、請求項５に記載のペプチド。
【請求項７】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１４個のアミノ酸残基を有する、請求項６に記載のペプチド。
【請求項８】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１３個のアミノ酸残基を有する、請求項７に記載のペプチド。
【請求項９】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１２個のアミノ酸残基を有する、請求項８に記載のペプチド。
【請求項１０】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１１個のアミノ酸残基を有する、請求項９に記載のペプチド。
【請求項１１】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１０個のアミノ酸残基を有する、請求項１０に記載のペプチド。
【請求項１２】
前記免疫応答刺激ペプチドが、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する、請求項１１に記載のペプチド。
【請求項１３】
前記免疫応答刺激ペプチドが、９個のアミノ酸残基を有する、請求項１２に記載のペプチド。
【請求項１４】
前記免疫応答刺激ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１５】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１６】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１７】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項１６に記載のペプチド。
【請求項１８】
異種化合物に結合した請求項１に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項２０】
ワクチンである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
アジュバントをさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合可能な、活性化免疫細胞。
【請求項２４】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項２３に記載の活性化免疫細胞。
【請求項２５】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項２３に記載の活性化免疫細胞。
【請求項２６】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項２５に記載の活性化免疫細胞。
【請求項２７】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項２３に記載の活性化免疫細胞。
【請求項２８】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項２７に記載の活性化免疫細胞。
【請求項２９】
請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の活性化免疫細胞を含む組成物。
【請求項３０】
ワクチンである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
アジュバントをさらに含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３３】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドを表面上に含む抗原提示細胞であって、前記ペプチドが前記抗原提示細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、抗原提示細胞。
【請求項３４】
樹状細胞またはマクロファージである、請求項３３に記載の抗原提示細胞。
【請求項３５】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項３３に記載の抗原提示細胞。
【請求項３６】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項３３に記載の抗原提示細胞。
【請求項３７】
請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の抗原提示細胞を含む組成物。
【請求項３８】
ワクチンである、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
アジュバントをさらに含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４１】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４２】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項４１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４３】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項４１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４４】
細胞毒性剤に結合される、請求項４１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４５】
前記細胞毒性剤が、次の化合物およびそれらの誘導体からなる群から選択される、請求項４４に記載の抗体またはその抗原結合断片：
リシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、カンプトセシン、ホモカンプトセシン、チオコルヒチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンＡ−４、ポドフィロトキシン、リゾキシン、リゾキシン−ｄ、ドラスタチン、パクリタキセル、ＣＣ１０６５、アンサマイトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）ｐ３、マイタンシノイド、ストレプトリシンＯ、ハタゴイソギンチャク（ｓｔｏｉｃｈａｃｔｉｓ）毒、ファロリシン、ブドウ球菌α毒素、ホロスリンＡ、ジギトニン、メリチン、リゾレシチン、心臓毒、およびセレブラトゥルス（ｃｅｒｅｂｒａｔｕｌｕｓ）Ａ毒素。
【請求項４６】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項４１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４７】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項４２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４８】
請求項４２〜４７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物。
【請求項４９】
ワクチンである、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
アジュバントをさらに含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５１】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５２】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５で示される隣接アミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する単離された免疫応答刺激ペプチドであって、少なくとも７個であるが５０個未満のアミノ酸残基を有し、かつ、抗原提示分子に結合された場合に哺乳類宿主における免疫細胞を活性化することができる、単離された免疫応答刺激ペプチド。
【請求項５３】
前記配列同一性が、９５、９６、９７、９８、または９９％である、請求項５２に記載のペプチド。
【請求項５４】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜３０個のアミノ酸残基を有する、請求項５２に記載のペプチド。
【請求項５５】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２５個のアミノ酸残基を有する、請求項５４に記載のペプチド。
【請求項５６】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２０個のアミノ酸残基を有する、請求項５５に記載のペプチド。
【請求項５７】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１５個のアミノ酸残基を有する、請求項５６に記載のペプチド。
【請求項５８】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１４個のアミノ酸残基を有する、請求項５７に記載のペプチド。
【請求項５９】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１３個のアミノ酸残基を有する、請求項５８に記載のペプチド。
【請求項６０】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１２個のアミノ酸残基を有する、請求項５９に記載のペプチド。
【請求項６１】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１１個のアミノ酸残基を有する、請求項６０に記載のペプチド。
【請求項６２】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１０個のアミノ酸残基を有する、請求項６１に記載のペプチド。
【請求項６３】
前記免疫応答刺激ペプチドが、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する、請求項６２に記載のペプチド。
【請求項６４】
前記免疫応答刺激ペプチドが、９個のアミノ酸残基を有する、請求項６３に記載のペプチド。
【請求項６５】
前記免疫応答刺激ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を有する、請求項５２に記載のペプチド。
【請求項６６】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項５２に記載のペプチド。
【請求項６７】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項５２に記載のペプチド。
【請求項６８】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項６７に記載のペプチド。
【請求項６９】
異種化合物に結合した請求項５２に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項７０】
請求項５２〜６９のいずれか一項に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項７１】
ワクチンである、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
アジュバントをさらに含む、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７３】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７４】
請求項５２〜６９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合可能な、活性化免疫細胞。
【請求項７５】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項７４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項７６】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項７４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項７７】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項７６に記載の活性化免疫細胞。
【請求項７８】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項７４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項７９】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項７８に記載の活性化免疫細胞。
【請求項８０】
請求項７４〜７９のいずれか一項に記載の活性化免疫細胞を含む組成物。
【請求項８１】
ワクチンである、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
アジュバントをさらに含む、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８３】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８４】
請求項５２〜６９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドを表面上に含む抗原提示細胞であって、前記ペプチドが前記抗原提示細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、抗原提示細胞。
【請求項８５】
樹状細胞またはマクロファージである、請求項８４に記載の抗原提示細胞。
【請求項８６】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項８４に記載の抗原提示細胞。
【請求項８７】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項８４に記載の抗原提示細胞。
【請求項８８】
請求項８４〜８７のいずれか一項に記載の抗原提示細胞を含む組成物。
【請求項８９】
ワクチンである、請求項８８に記載の組成物。
【請求項９０】
アジュバントをさらに含む、請求項８８に記載の組成物。
【請求項９１】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項８８に記載の組成物。
【請求項９２】
請求項５２〜６９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９３】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項９２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９４】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項９２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９５】
細胞毒性剤に結合される、請求項９２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９６】
前記細胞毒性剤が、次の化合物およびそれらの誘導体からなる群から選択される、請求項９５に記載の抗体またはその抗原結合断片：
リシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、カンプトセシン、ホモカンプトセシン、チオコルヒチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンＡ−４、ポドフィロトキシン、リゾキシン、リゾキシン−ｄ、ドリスタチン、パクリタキセル、ＣＣ１０６５、アンサマイトシンｐ３、マイタンシノイド、ストレプトリシンＯ、ハタゴイソギンチャク（ｓｔｏｉｃｈａｃｔｉｓ）毒、ファロリシン、ブドウ球菌α毒素、ホロスリンＡ、ジギトニン、メリチン、リゾレシチン、心臓毒、およびセレブラトゥルス（ｃｅｒｅｂｒａｔｕｌｕｓ）Ａ毒素。
【請求項９７】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項９２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９８】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項９２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９９】
請求項９２〜９８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物。
【請求項１００】
ワクチンである、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０１】
アジュバントをさらに含む、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０２】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０３】
次の配列、すなわち、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のいずれか１つで示される隣接アミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する単離された免疫応答刺激ペプチドであって、少なくとも７個であるが５０個未満のアミノ酸残基を有し、かつ、抗原提示分子に結合された場合に哺乳類宿主内で免疫細胞を活性化することができる、単離された免疫応答刺激ペプチド。
【請求項１０４】
前記配列同一性が、９５、９６、９７、９８、または９９％である、請求項１０３に記載のペプチド。
【請求項１０５】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜３０個のアミノ酸残基を有する、請求項１０３に記載のペプチド。
【請求項１０６】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２５個のアミノ酸残基を有する、請求項１０５に記載のペプチド。
【請求項１０７】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２０個のアミノ酸残基を有する、請求項１０６に記載のペプチド。
【請求項１０８】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１５個のアミノ酸残基を有する、請求項１０７に記載のペプチド。
【請求項１０９】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１４個のアミノ酸残基を有する、請求項１０８に記載のペプチド。
【請求項１１０】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１３個のアミノ酸残基を有する、請求項１０９に記載のペプチド。
【請求項１１１】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１２個のアミノ酸残基を有する、請求項１１０に記載のペプチド。
【請求項１１２】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１１個のアミノ酸残基を有する、請求項１１１に記載のペプチド。
【請求項１１３】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１０個のアミノ酸残基を有する、請求項１１２に記載のペプチド。
【請求項１１４】
前記免疫応答刺激ペプチドが、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する、請求項１１３に記載のペプチド。
【請求項１１５】
前記免疫応答刺激ペプチドが、９個のアミノ酸残基を有する、請求項１１４に記載のペプチド。
【請求項１１６】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項１０３に記載のペプチド。
【請求項１１７】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項１０３に記載のペプチド。
【請求項１１８】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項１１７に記載のペプチド。
【請求項１１９】
異種化合物に結合された請求項１０３に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項１２０】
請求項１０３〜１１９のいずれか一項に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項１２１】
ワクチンである、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項１２２】
アジュバントをさらに含む、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項１２３】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項１２４】
請求項１０３〜１１９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合可能な、活性化免疫細胞。
【請求項１２５】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項１２４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項１２６】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項１２４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項１２７】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項１２６に記載の活性化免疫細胞。
【請求項１２８】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項１２４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項１２９】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項１２８に記載の活性化免疫細胞。
【請求項１３０】
請求項１２４〜１２９のいずれか一項に記載の活性化免疫細胞を含む組成物。
【請求項１３１】
ワクチンである、請求項１３０に記載の組成物。
【請求項１３２】
アジュバントをさらに含む、請求項１３０に記載の組成物。
【請求項１３３】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項１３０に記載の組成物。
【請求項１３４】
請求項１０３〜１１９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドを表面上に含む抗原提示細胞であって、前記ペプチドが前記抗原提示細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、抗原提示細胞。
【請求項１３５】
樹状細胞またはマクロファージである、請求項１３４に記載の抗原提示細胞。
【請求項１３６】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項１３４に記載の抗原提示細胞。
【請求項１３７】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項１３６に記載の抗原提示細胞。
【請求項１３８】
請求項１３４〜１３７のいずれか一項に記載の抗原提示細胞を含む組成物。
【請求項１３９】
ワクチンである、請求項１３８に記載の組成物。
【請求項１４０】
アジュバントをさらに含む、請求項１３８に記載の組成物。
【請求項１４１】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項１３８に記載の組成物。
【請求項１４２】
請求項１０３〜１１９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４３】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項１４２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４４】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項１４３に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４５】
細胞毒性剤に結合される、請求項１４２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４６】
前記細胞毒性剤が、次の化合物およびそれらの誘導体からなる群から選択される請求項１４５に記載の抗体またはその抗原結合断片：
リシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、カンプトテシン、ホモカンプトテシン、チオコルヒチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンＡ−４、ポドフィロトキシン、リゾキシン、リゾキシン−ｄ、ドリスタチン、パクリタキセル、ＣＣ１０６５、アンサマイトシンｐ３、マイタンシノイド、ストレプトリシンＯ、ハタゴイソギンチャク（ｓｔｏｉｃｈａｃｔｉｓ）毒、ファロリシン、ブドウ球菌α毒素、ホロスリンＡ、ジギトニン、メリチン、リゾレシチン、心臓毒、およびセレブラトゥルス（ｃｅｒｅｂｒａｔｕｌｕｓ）Ａ毒素。
【請求項１４７】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項１４２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４８】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項１４７に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４９】
請求項１４２〜１４８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物。
【請求項１５０】
ワクチンである、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項１５１】
アジュバントをさらに含む、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項１５２】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項１５３】
対象における前立腺癌を治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜１８、５２〜６９、または１０３〜１１９のいずれか一項に記載のペプチドを含む組成物を、前記前立腺癌を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項１５４】
アジュバントを投与するステップをさらに含む、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５５】
サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５６】
ホルモン療法を施すステップをさらに含む、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５７】
前記ホルモン療法が、アンドロゲン除去である、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５８】
前記組成物が、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを含む、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５９】
前記組成物が、ヒトへの投与に適する、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１６０】
前記組成物が、注射によって投与される、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１６１】
対象における前立腺癌を治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜１８、５２〜６９、または１０３〜１１９のいずれか一項に記載の免疫細胞を含む組成物を、前記前立腺癌を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項１６２】
アジュバントを投与するステップをさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６４】
ホルモン療法を施すステップをさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６５】
前記ホルモン療法が、アンドロゲン除去である、請求項１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記組成物が、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６７】
前記組成物が、ヒトへの投与に適する、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６８】
前記組成物が、注射によって投与される、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６９】
対象における前立腺癌を治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜１８、５２〜６９、または１０３〜１１９のいずれか一項に記載の抗原提示細胞を含む組成物を、前記前立腺癌を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項１７０】
アジュバントを投与するステップをさらに含む、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７２】
ホルモン療法を施すステップをさらに含む、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７３】
前記ホルモン療法が、アンドロゲン除去である、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
前記組成物が、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを含む、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７５】
前記組成物が、ヒトへの投与に適する、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７６】
前記組成物が、注射によって投与される、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７７】
対象における前立腺癌を治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜１８、５２〜６９、または１０３〜１１９のいずれか一項に記載の抗原提示細胞を含む組成物を、前記前立腺癌を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項１７８】
アジュバントを投与するステップをさらに含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１７９】
サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８０】
ホルモン療法を施すステップをさらに含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８１】
前記ホルモン療法が、アンドロゲン除去である、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１８２】
前記組成物が、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８３】
前記組成物が、ヒトへの投与に適する、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８４】
前記組成物が、注射によって投与される、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８５】
対象における前立腺癌を治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜１８、５２〜６９、または１０３〜１１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を、前記前立腺癌を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項１８６】
アジュバントを投与するステップをさらに含む、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１８７】
サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１８８】
ホルモン療法を施すステップをさらに含む、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１８９】
前記ホルモン療法が、アンドロゲン除去である、請求項１８８に記載の方法。
【請求項１９０】
前記組成物が、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを含む、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１９１】
前記組成物が、ヒトへの投与に適する、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１９２】
前記組成物が、注射によって投与される、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１９３】
前記異種化合物が、治療剤または細胞毒性剤である、請求項１８に記載のペプチド。
【請求項１９４】
前記異種化合物が、治療剤または細胞毒性剤である、請求項６９に記載のペプチド。
【請求項１９５】
前記異種化合物が、治療剤または細胞毒性剤である、請求項１１９に記載のペプチド。
【請求項１９６】
対象を前立腺癌を有するものと診断する方法であって、前記対象由来の試料中のＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドまたはその断片のレベルを測定するステップと、それを参照と比較するステップとを含み、ここで参照と比較した前記レベルにおける変化が前立腺癌の診断指標である、方法。
【請求項１９７】
前記ＥＲＧポリペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２、３、または４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９８】
前記ＳＩＭ２ポリペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、６、７、８、９、または１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９９】
前記レベルにおける前記変化が増加である、請求項１９６に記載の方法。
【請求項２００】
前記測定するステップが、２回以上にわたり行われ、かつ、測定値間の前記レベルの増加が、前記前立腺癌の診断指標である、請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０１】
前記試料が、前記対象に由来する体液、細胞、または組織試料であり、ここで前記ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドが、正常に検出可能である、請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０２】
前記体液が、尿、血液、血清、血漿、および脳脊髄液からなる群から選択される、請求項２０１に記載の方法。
【請求項２０３】
前記対象が、ヒトである、請求項１９６に記載の方法。
【請求項１】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１で示される隣接アミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する単離された免疫応答刺激ペプチドであって、少なくとも７個であるが５０個未満のアミノ酸残基を有し、かつ、抗原提示分子に結合された場合、哺乳類宿主内で免疫細胞を活性化することができる、単離された免疫応答刺激ペプチド。
【請求項２】
前記配列同一性が、９５、９６、９７、９８、または９９％である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜３０個のアミノ酸残基を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２５個のアミノ酸残基を有する、請求項３に記載のペプチド。
【請求項５】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２０個のアミノ酸残基を有する、請求項４に記載のペプチド。
【請求項６】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１５個のアミノ酸残基を有する、請求項５に記載のペプチド。
【請求項７】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１４個のアミノ酸残基を有する、請求項６に記載のペプチド。
【請求項８】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１３個のアミノ酸残基を有する、請求項７に記載のペプチド。
【請求項９】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１２個のアミノ酸残基を有する、請求項８に記載のペプチド。
【請求項１０】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１１個のアミノ酸残基を有する、請求項９に記載のペプチド。
【請求項１１】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１０個のアミノ酸残基を有する、請求項１０に記載のペプチド。
【請求項１２】
前記免疫応答刺激ペプチドが、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する、請求項１１に記載のペプチド。
【請求項１３】
前記免疫応答刺激ペプチドが、９個のアミノ酸残基を有する、請求項１２に記載のペプチド。
【請求項１４】
前記免疫応答刺激ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１５】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１６】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項１に記載のペプチド。
【請求項１７】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項１６に記載のペプチド。
【請求項１８】
異種化合物に結合した請求項１に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項２０】
ワクチンである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
アジュバントをさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合可能な、活性化免疫細胞。
【請求項２４】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項２３に記載の活性化免疫細胞。
【請求項２５】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項２３に記載の活性化免疫細胞。
【請求項２６】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項２５に記載の活性化免疫細胞。
【請求項２７】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項２３に記載の活性化免疫細胞。
【請求項２８】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項２７に記載の活性化免疫細胞。
【請求項２９】
請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の活性化免疫細胞を含む組成物。
【請求項３０】
ワクチンである、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
アジュバントをさらに含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３３】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドを表面上に含む抗原提示細胞であって、前記ペプチドが前記抗原提示細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、抗原提示細胞。
【請求項３４】
樹状細胞またはマクロファージである、請求項３３に記載の抗原提示細胞。
【請求項３５】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項３３に記載の抗原提示細胞。
【請求項３６】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項３３に記載の抗原提示細胞。
【請求項３７】
請求項３３〜３６のいずれか一項に記載の抗原提示細胞を含む組成物。
【請求項３８】
ワクチンである、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
アジュバントをさらに含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４１】
請求項１〜１８のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４２】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項４１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４３】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項４１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４４】
細胞毒性剤に結合される、請求項４１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４５】
前記細胞毒性剤が、次の化合物およびそれらの誘導体からなる群から選択される、請求項４４に記載の抗体またはその抗原結合断片：
リシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、カンプトセシン、ホモカンプトセシン、チオコルヒチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンＡ−４、ポドフィロトキシン、リゾキシン、リゾキシン−ｄ、ドラスタチン、パクリタキセル、ＣＣ１０６５、アンサマイトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎ）ｐ３、マイタンシノイド、ストレプトリシンＯ、ハタゴイソギンチャク（ｓｔｏｉｃｈａｃｔｉｓ）毒、ファロリシン、ブドウ球菌α毒素、ホロスリンＡ、ジギトニン、メリチン、リゾレシチン、心臓毒、およびセレブラトゥルス（ｃｅｒｅｂｒａｔｕｌｕｓ）Ａ毒素。
【請求項４６】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項４１に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４７】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項４２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項４８】
請求項４２〜４７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物。
【請求項４９】
ワクチンである、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
アジュバントをさらに含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５１】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５２】
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５で示される隣接アミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する単離された免疫応答刺激ペプチドであって、少なくとも７個であるが５０個未満のアミノ酸残基を有し、かつ、抗原提示分子に結合された場合に哺乳類宿主における免疫細胞を活性化することができる、単離された免疫応答刺激ペプチド。
【請求項５３】
前記配列同一性が、９５、９６、９７、９８、または９９％である、請求項５２に記載のペプチド。
【請求項５４】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜３０個のアミノ酸残基を有する、請求項５２に記載のペプチド。
【請求項５５】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２５個のアミノ酸残基を有する、請求項５４に記載のペプチド。
【請求項５６】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２０個のアミノ酸残基を有する、請求項５５に記載のペプチド。
【請求項５７】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１５個のアミノ酸残基を有する、請求項５６に記載のペプチド。
【請求項５８】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１４個のアミノ酸残基を有する、請求項５７に記載のペプチド。
【請求項５９】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１３個のアミノ酸残基を有する、請求項５８に記載のペプチド。
【請求項６０】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１２個のアミノ酸残基を有する、請求項５９に記載のペプチド。
【請求項６１】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１１個のアミノ酸残基を有する、請求項６０に記載のペプチド。
【請求項６２】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１０個のアミノ酸残基を有する、請求項６１に記載のペプチド。
【請求項６３】
前記免疫応答刺激ペプチドが、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する、請求項６２に記載のペプチド。
【請求項６４】
前記免疫応答刺激ペプチドが、９個のアミノ酸残基を有する、請求項６３に記載のペプチド。
【請求項６５】
前記免疫応答刺激ペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０のアミノ酸配列を有する、請求項５２に記載のペプチド。
【請求項６６】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項５２に記載のペプチド。
【請求項６７】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項５２に記載のペプチド。
【請求項６８】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項６７に記載のペプチド。
【請求項６９】
異種化合物に結合した請求項５２に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項７０】
請求項５２〜６９のいずれか一項に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項７１】
ワクチンである、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
アジュバントをさらに含む、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７３】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７４】
請求項５２〜６９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合可能な、活性化免疫細胞。
【請求項７５】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項７４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項７６】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項７４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項７７】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項７６に記載の活性化免疫細胞。
【請求項７８】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項７４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項７９】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項７８に記載の活性化免疫細胞。
【請求項８０】
請求項７４〜７９のいずれか一項に記載の活性化免疫細胞を含む組成物。
【請求項８１】
ワクチンである、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
アジュバントをさらに含む、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８３】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８４】
請求項５２〜６９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドを表面上に含む抗原提示細胞であって、前記ペプチドが前記抗原提示細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、抗原提示細胞。
【請求項８５】
樹状細胞またはマクロファージである、請求項８４に記載の抗原提示細胞。
【請求項８６】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項８４に記載の抗原提示細胞。
【請求項８７】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項８４に記載の抗原提示細胞。
【請求項８８】
請求項８４〜８７のいずれか一項に記載の抗原提示細胞を含む組成物。
【請求項８９】
ワクチンである、請求項８８に記載の組成物。
【請求項９０】
アジュバントをさらに含む、請求項８８に記載の組成物。
【請求項９１】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項８８に記載の組成物。
【請求項９２】
請求項５２〜６９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９３】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項９２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９４】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項９２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９５】
細胞毒性剤に結合される、請求項９２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９６】
前記細胞毒性剤が、次の化合物およびそれらの誘導体からなる群から選択される、請求項９５に記載の抗体またはその抗原結合断片：
リシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、カンプトセシン、ホモカンプトセシン、チオコルヒチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンＡ−４、ポドフィロトキシン、リゾキシン、リゾキシン−ｄ、ドリスタチン、パクリタキセル、ＣＣ１０６５、アンサマイトシンｐ３、マイタンシノイド、ストレプトリシンＯ、ハタゴイソギンチャク（ｓｔｏｉｃｈａｃｔｉｓ）毒、ファロリシン、ブドウ球菌α毒素、ホロスリンＡ、ジギトニン、メリチン、リゾレシチン、心臓毒、およびセレブラトゥルス（ｃｅｒｅｂｒａｔｕｌｕｓ）Ａ毒素。
【請求項９７】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項９２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９８】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項９２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項９９】
請求項９２〜９８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物。
【請求項１００】
ワクチンである、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０１】
アジュバントをさらに含む、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０２】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項９９に記載の組成物。
【請求項１０３】
次の配列、すなわち、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６のいずれか１つで示される隣接アミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有する単離された免疫応答刺激ペプチドであって、少なくとも７個であるが５０個未満のアミノ酸残基を有し、かつ、抗原提示分子に結合された場合に哺乳類宿主内で免疫細胞を活性化することができる、単離された免疫応答刺激ペプチド。
【請求項１０４】
前記配列同一性が、９５、９６、９７、９８、または９９％である、請求項１０３に記載のペプチド。
【請求項１０５】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜３０個のアミノ酸残基を有する、請求項１０３に記載のペプチド。
【請求項１０６】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２５個のアミノ酸残基を有する、請求項１０５に記載のペプチド。
【請求項１０７】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜２０個のアミノ酸残基を有する、請求項１０６に記載のペプチド。
【請求項１０８】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１５個のアミノ酸残基を有する、請求項１０７に記載のペプチド。
【請求項１０９】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１４個のアミノ酸残基を有する、請求項１０８に記載のペプチド。
【請求項１１０】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１３個のアミノ酸残基を有する、請求項１０９に記載のペプチド。
【請求項１１１】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１２個のアミノ酸残基を有する、請求項１１０に記載のペプチド。
【請求項１１２】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１１個のアミノ酸残基を有する、請求項１１１に記載のペプチド。
【請求項１１３】
前記免疫応答刺激ペプチドが、７〜１０個のアミノ酸残基を有する、請求項１１２に記載のペプチド。
【請求項１１４】
前記免疫応答刺激ペプチドが、８、９、または１０個のアミノ酸残基を有する、請求項１１３に記載のペプチド。
【請求項１１５】
前記免疫応答刺激ペプチドが、９個のアミノ酸残基を有する、請求項１１４に記載のペプチド。
【請求項１１６】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項１０３に記載のペプチド。
【請求項１１７】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項１０３に記載のペプチド。
【請求項１１８】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項１１７に記載のペプチド。
【請求項１１９】
異種化合物に結合された請求項１０３に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項１２０】
請求項１０３〜１１９のいずれか一項に記載のペプチドを含む組成物。
【請求項１２１】
ワクチンである、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項１２２】
アジュバントをさらに含む、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項１２３】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項１２０に記載の組成物。
【請求項１２４】
請求項１０３〜１１９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合可能な、活性化免疫細胞。
【請求項１２５】
前記免疫細胞が、細胞傷害性Ｔリンパ球である、請求項１２４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項１２６】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項１２４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項１２７】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項１２６に記載の活性化免疫細胞。
【請求項１２８】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項１２４に記載の活性化免疫細胞。
【請求項１２９】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項１２８に記載の活性化免疫細胞。
【請求項１３０】
請求項１２４〜１２９のいずれか一項に記載の活性化免疫細胞を含む組成物。
【請求項１３１】
ワクチンである、請求項１３０に記載の組成物。
【請求項１３２】
アジュバントをさらに含む、請求項１３０に記載の組成物。
【請求項１３３】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項１３０に記載の組成物。
【請求項１３４】
請求項１０３〜１１９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドを表面上に含む抗原提示細胞であって、前記ペプチドが前記抗原提示細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、抗原提示細胞。
【請求項１３５】
樹状細胞またはマクロファージである、請求項１３４に記載の抗原提示細胞。
【請求項１３６】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項１３４に記載の抗原提示細胞。
【請求項１３７】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項１３６に記載の抗原提示細胞。
【請求項１３８】
請求項１３４〜１３７のいずれか一項に記載の抗原提示細胞を含む組成物。
【請求項１３９】
ワクチンである、請求項１３８に記載の組成物。
【請求項１４０】
アジュバントをさらに含む、請求項１３８に記載の組成物。
【請求項１４１】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項１３８に記載の組成物。
【請求項１４２】
請求項１０３〜１１９のいずれか一項に記載の免疫応答刺激ペプチドが抗原提示分子に結合された場合に前記ペプチドに特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４３】
前記抗原提示分子が、ＨＬＡ分子である、請求項１４２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４４】
前記ＨＬＡ分子が、ＨＬＡクラスＩ分子である、請求項１４３に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４５】
細胞毒性剤に結合される、請求項１４２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４６】
前記細胞毒性剤が、次の化合物およびそれらの誘導体からなる群から選択される請求項１４５に記載の抗体またはその抗原結合断片：
リシン、ドキソルビシン、メトトレキサート、カンプトテシン、ホモカンプトテシン、チオコルヒチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンＡ−４、ポドフィロトキシン、リゾキシン、リゾキシン−ｄ、ドリスタチン、パクリタキセル、ＣＣ１０６５、アンサマイトシンｐ３、マイタンシノイド、ストレプトリシンＯ、ハタゴイソギンチャク（ｓｔｏｉｃｈａｃｔｉｓ）毒、ファロリシン、ブドウ球菌α毒素、ホロスリンＡ、ジギトニン、メリチン、リゾレシチン、心臓毒、およびセレブラトゥルス（ｃｅｒｅｂｒａｔｕｌｕｓ）Ａ毒素。
【請求項１４７】
前記ペプチドが、細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項１４２に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４８】
前記ペプチドが、前立腺癌細胞の表面上の抗原提示分子に結合される、請求項１４７に記載の抗体またはその抗原結合断片。
【請求項１４９】
請求項１４２〜１４８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物。
【請求項１５０】
ワクチンである、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項１５１】
アジュバントをさらに含む、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項１５２】
追加的な治療剤をさらに含む、請求項１４９に記載の組成物。
【請求項１５３】
対象における前立腺癌を治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜１８、５２〜６９、または１０３〜１１９のいずれか一項に記載のペプチドを含む組成物を、前記前立腺癌を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項１５４】
アジュバントを投与するステップをさらに含む、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５５】
サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５６】
ホルモン療法を施すステップをさらに含む、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５７】
前記ホルモン療法が、アンドロゲン除去である、請求項１５６に記載の方法。
【請求項１５８】
前記組成物が、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを含む、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１５９】
前記組成物が、ヒトへの投与に適する、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１６０】
前記組成物が、注射によって投与される、請求項１５３に記載の方法。
【請求項１６１】
対象における前立腺癌を治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜１８、５２〜６９、または１０３〜１１９のいずれか一項に記載の免疫細胞を含む組成物を、前記前立腺癌を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項１６２】
アジュバントを投与するステップをさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６３】
サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６４】
ホルモン療法を施すステップをさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６５】
前記ホルモン療法が、アンドロゲン除去である、請求項１６４に記載の方法。
【請求項１６６】
前記組成物が、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを含む、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６７】
前記組成物が、ヒトへの投与に適する、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６８】
前記組成物が、注射によって投与される、請求項１６１に記載の方法。
【請求項１６９】
対象における前立腺癌を治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜１８、５２〜６９、または１０３〜１１９のいずれか一項に記載の抗原提示細胞を含む組成物を、前記前立腺癌を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項１７０】
アジュバントを投与するステップをさらに含む、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７１】
サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７２】
ホルモン療法を施すステップをさらに含む、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７３】
前記ホルモン療法が、アンドロゲン除去である、請求項１７２に記載の方法。
【請求項１７４】
前記組成物が、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを含む、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７５】
前記組成物が、ヒトへの投与に適する、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７６】
前記組成物が、注射によって投与される、請求項１６９に記載の方法。
【請求項１７７】
対象における前立腺癌を治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜１８、５２〜６９、または１０３〜１１９のいずれか一項に記載の抗原提示細胞を含む組成物を、前記前立腺癌を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項１７８】
アジュバントを投与するステップをさらに含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１７９】
サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８０】
ホルモン療法を施すステップをさらに含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８１】
前記ホルモン療法が、アンドロゲン除去である、請求項１８０に記載の方法。
【請求項１８２】
前記組成物が、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを含む、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８３】
前記組成物が、ヒトへの投与に適する、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８４】
前記組成物が、注射によって投与される、請求項１７７に記載の方法。
【請求項１８５】
対象における前立腺癌を治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜１８、５２〜６９、または１０３〜１１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む組成物を、前記前立腺癌を治療するのに十分な量で投与するステップを含む、方法。
【請求項１８６】
アジュバントを投与するステップをさらに含む、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１８７】
サイトカインを投与するステップをさらに含む、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１８８】
ホルモン療法を施すステップをさらに含む、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１８９】
前記ホルモン療法が、アンドロゲン除去である、請求項１８８に記載の方法。
【請求項１９０】
前記組成物が、薬学的に許容できる希釈剤、賦形剤、担体、またはアジュバントを含む、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１９１】
前記組成物が、ヒトへの投与に適する、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１９２】
前記組成物が、注射によって投与される、請求項１８５に記載の方法。
【請求項１９３】
前記異種化合物が、治療剤または細胞毒性剤である、請求項１８に記載のペプチド。
【請求項１９４】
前記異種化合物が、治療剤または細胞毒性剤である、請求項６９に記載のペプチド。
【請求項１９５】
前記異種化合物が、治療剤または細胞毒性剤である、請求項１１９に記載のペプチド。
【請求項１９６】
対象を前立腺癌を有するものと診断する方法であって、前記対象由来の試料中のＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドまたはその断片のレベルを測定するステップと、それを参照と比較するステップとを含み、ここで参照と比較した前記レベルにおける変化が前立腺癌の診断指標である、方法。
【請求項１９７】
前記ＥＲＧポリペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、２、３、または４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９８】
前記ＳＩＭ２ポリペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、６、７、８、９、または１０のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１９６に記載の方法。
【請求項１９９】
前記レベルにおける前記変化が増加である、請求項１９６に記載の方法。
【請求項２００】
前記測定するステップが、２回以上にわたり行われ、かつ、測定値間の前記レベルの増加が、前記前立腺癌の診断指標である、請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０１】
前記試料が、前記対象に由来する体液、細胞、または組織試料であり、ここで前記ＥＲＧまたはＳＩＭ２ポリペプチドが、正常に検出可能である、請求項１９６に記載の方法。
【請求項２０２】
前記体液が、尿、血液、血清、血漿、および脳脊髄液からなる群から選択される、請求項２０１に記載の方法。
【請求項２０３】
前記対象が、ヒトである、請求項１９６に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【公表番号】特表２０１１−５１９８６６（Ｐ２０１１−５１９８６６Ａ）
【公表日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０７６５２（Ｐ２０１１−５０７６５２）
【出願日】平成２１年４月３０日（２００９．４．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４２３３８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３５０１９
【国際公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【出願人】（５０７３１６４１３）ベス イスラエル デアコネス メディカル センター (4)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年７月１４日（２０１１．７．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年４月３０日（２００９．４．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４２３３８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３５０１９
【国際公開日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【出願人】（５０７３１６４１３）ベス イスラエル デアコネス メディカル センター (4)
【Ｆターム（参考）】
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