化膿連鎖球菌のための免疫原性組成物および治療組成物
１つまたは複数の活性剤を含む、化膿連鎖球菌感染を防止および／または治療するための組成物。活性剤は、ＳＬＯ抗原、ＳＬＯ抗原をコードする核酸分子、および／またはＳＬＯ抗原に選択的に結合する抗体である。本発明の有用なＳＬＯ抗原には、本質的に以下からなるアミノ酸配列も含まれる：（１）配列番号１、（２）配列番号１のアミノ酸配列に共有結合したグリシン残基、（３）グリシンに共有結合した配列番号２のアミノ酸配列、および（４）配列番号２のアミノ酸配列に共有結合した配列番号３のアミノ酸配列。さらに他の有用なＳＬＯ抗原には、本質的に、配列番号８、配列番号１０、配列番号１０のアミノ酸２〜８２、配列番号１２、配列番号１２のアミノ酸４〜１５６、配列番号１４、配列番号１６、および配列番号１８からなるＳＬＯ抗原が含まれる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００６年１０月３０日に出願された、仮出願第６０／８５５，１１４号への優先権を主張し、それを参考として援用する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、免疫学およびワクチン学分野にある。特に、本発明は、化膿連鎖球菌由来の抗原およびその免疫化での使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）は、化膿連鎖球菌によって産生される外毒素であり、酸素によって不活化される（それ故に、その名称中に「Ｏ」が付いている）。ＳＬＯは、酸素不安定性を示し、チオール活性化細胞溶解素（ＴＡＣＹｓ）として公知の主要な細菌毒素ファミリーのプロトタイプである。非特許文献１。
【０００４】
チオール活性化細胞溶解素は、種々のグラム陽性細菌によって産生される毒素である。これらの毒素は、酸化によって可逆的に不活化される。これらの毒素は、コレステロール含有膜への結合によってコレステロールに結合し、コレステロール含有膜の溶解を促進し、それによって重合して孔を形成する能力によって特徴づけられる。チオール活性化細胞溶解素は、２０種を超えるグラム陽性細菌で見出されており、アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（ＰＬＯ、すなわち、溶血毒素（ｐｙｏｌｙｓｉｎ）をコードする）、ウエルシュ菌（ＰＦＯ、すなわち、パーフリンゴリシンをコードする）、リステリア菌（ＬＬＯ、すなわち、リステリオリシンをコードする）、および肺炎連鎖球菌（ＰＬＹまたはＰＬＮ、すなわち、ニューモリシンをコードする）などの種による感染の病理発生と密接に関連する。
【０００５】
異なる微生物におけるこれらの毒素の配列は、公知である（例えば、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）由来のアルベオリシン（Ａｌｖｅｏｌｙｓｉｎ）（遺伝子ａｌｖ）；リステリア・イバノビイ由来のイバノリシン（Ｉｖａｎｏｌｙｓｉｎ）（遺伝子ｉｌｏ）；リステリア菌由来のリステリオリシンＯ（遺伝子ｈｌｙＡ）；ウエルシュ菌由来のパーフリンゴリシンＯ（θ−毒素）（遺伝子ｐｆｏ）；肺炎連鎖球菌由来のニューモリシン（遺伝子ｐｌｙ）；リステリア・シリゲリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）由来のシリゲリオリシン（Ｓｅｅｌｉｇｅｒｉｏｌｙｓｉｎ）（遺伝子ｌｓｏ）；および化膿連鎖球菌由来のストレプトリシンＯ（遺伝子ｓｌｏ）。全てのこれらのタンパク質は、１つのシステイン残基を含み、この残基はそのＣ末端区分に存在し、コレステロールへの結合に不可欠である。このシステインは、高度に保存された領域に存在し、シグネチャパターンとして使用することができる。
【０００６】
化膿連鎖球菌がＳＬＯを使用して宿主細胞中でエフェクタタンパク質（例えば、ＮＡＤ−グリコヒドロラーゼ）を転位置し、それにより、細胞傷害性を誘発すると考えられる。この細胞溶解素媒介性転位置（ＣＭＴ）は、グラム陰性病原体で認められるＩＩＩ型分泌のグラム陽性等価物であり得る（Ｃｅｌｌ ２００１ １０４：１４３−５２）。
【０００７】
多数のＧＡＳ病原性因子と異なり、ＳＬＯは、ほとんどのＧＡＳ単離物によって発現され、ＧＡＳの異なるＭ血清型の間で高度に保存されるようである配列によってコードされる。ストレプトリシンＯは、免疫原性が高く、このタンパク質に対して生じる抗体応答（ＡＳＯ力価）の決定は、しばしば、最近の感染の血清診断で有用である。ＳＬＯに対する強い抗体応答は、急性リウマチ熱および急性連鎖球菌感染後糸球体腎炎の発症と相関することが示されている。ＳＬＯは、防御的先天性免疫応答を誘発し、ＴＮＦαおよびＩＬ−１βの強力な誘導因子である（Ｂｒｉｃｋｅｒら、２００５を参照のこと）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｂｉｌｌｉｎｇｔｏｎら、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０００）１８：１９７−２０５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
免疫特性のために、ＳＬＯは、診断用および治療用の化膿連鎖球菌組成物で有用であり得る。不運なことに、ＳＬＯは広範な種々の細胞型（心筋層が含まれる）に有毒である。したがって、有毒でないＳＬＯ抗原が当該分野で必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、化膿連鎖球菌感染を防止および／または治療するための組成物を提供する。これらの組成物は、１つまたは複数の活性剤を含み、該活性剤は、ＳＬＯ抗原、ＳＬＯ抗原をコードする核酸分子、および／またはＳＬＯ抗原に特異的に結合する抗体である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ウエルシュ菌由来のパーフリンゴリシンＯ単量体の三次元結晶構造。
【図２】ウエルシュ菌由来のパーフリンゴリシンＯ（配列番号６）とのＧＡＳ２５相同性を示すＢＬＡＳＴアラインメント。ＧＡＳ２５（配列番号５）はクエリー配列である。
【図３】ウエルシュ菌パーフリンゴリシンＯとのタンパク質配列相同性に基づいたＳＬＯ（配列番号５）中のドメインの予想。「ｐｅｐ１」は配列番号１であり、「ｐｅｐ２」は配列番号２であり、「ｐｅｐ３」は配列番号３である。
【図４】ペプチド２および３を含む融合ポリペプチドの構造。
【図５−１】−ＨＩＳ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現。
【図５−２】−ＨＩＳ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現。
【図６−１】−ＧＳＴ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現。
【図６−２】−ＧＳＴ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現。
【図６−３】−ＧＳＴ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現。
【図７】抗ＧＡＳ２５マウス免疫血清を使用した全細菌抽出物および精製ＧＳＴ融合タンパク質のウェスタンブロット。
【図８】抗ＧＡＳ２５マウス免疫血清を使用した全細菌抽出物および精製Ｈｉｓ融合タンパク質のウェスタンブロット。
【図９】抗ＧＳＴマウス免疫血清を使用した精製ＧＳＴ融合タンパク質のウェスタンブロット。
【図１０】市販の抗６Ｘｈｉｓモノクローナル抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用した精製Ｈｉｓ融合タンパク質のウェスタンブロット。
【図１１】異なるヒト血清を使用した精製ＧＳＴ融合タンパク質によるウェスタンブロット。
【図１２】ＧＡＳの健康な成人由来の異なる血清を使用した精製ＧＳＴ融合タンパク質によるドットブロット（Ａ：ボイル済、Ｂ：ボイルなし）。
【図１３】ＧＡＳ感染児童由来の異なる血清を使用した精製ＧＳＴ融合タンパク質によるウェスタンブロット。
【図１４】ＧＡＳ感染児童由来の異なる血清を使用したボイル済（＋）およびボイルなし（−）の精製ＧＳＴ融合タンパク質によるドットブロット。
【図１５】３つのＧＡＳ ＳＬＯフラグメントの６ｘＨＩＳ融合物のＰＡＧＥ分析。
【図１６】溶液中のペプチド１のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析。
【図１７】溶液中のペプチド２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析。
【図１８】トリプシンで消化したペプチド２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析。
【図１９】溶液中のペプチド１＋２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析。
【図２０】トリプシンで消化したペプチド１＋２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
ＳＬＯ抗原
本発明の「ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）抗原」は、免疫原性を示すが、非毒性である。本明細書中で使用される場合、「非毒性」は、ＳＬＯ抗原がコレステロールに結合することができず、それにより、コレステロール含有膜の溶解を促進しないことを意味する。ＳＬＯタンパク質を、例えば、ＳＬＯのＣ末端部にある高度に保存された領域中に存在する少なくとも１つのシステイン残基の欠失によって非毒性にすることができ、該システインは、チオール活性化細胞溶解素のシグネチャパターンとして使用することができる。
【００１３】
いくつかの実施形態では、化膿連鎖球菌のストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）抗原は、本質的に、配列番号１のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＳＬＯ抗原は、本質的に、Ｎ末端からＣ末端方向に、配列番号２のアミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列に共有結合した配列番号３のアミノ酸配列からなる。本明細書中で使用される場合、「共有結合した」には、直接共有結合および１つまたは複数のさらなるアミノ酸を介した結合が含まれる。他の実施形態では、ＳＬＯ抗原は、本質的に、Ｎ末端からＣ末端方向に、配列番号１のアミノ酸配列、配列番号１のアミノ酸配列に共有結合したグリシン残基、グリシンに共有結合した配列番号２のアミノ酸配列、および配列番号２のアミノ酸配列に共有結合した配列番号３のアミノ酸配列からなる。
【００１４】
本発明の有用なＳＬＯ抗原には、本質的に以下からなるアミノ酸配列も含まれる：（１）配列番号１、（２）配列番号１のアミノ酸配列に共有結合したグリシン残基、（３）グリシンに共有結合した配列番号２のアミノ酸配列、および（４）配列番号２のアミノ酸配列に共有結合した配列番号３のアミノ酸配列。さらに他の有用なＳＬＯ抗原には、本質的に、配列番号８、配列番号１０、配列番号１０のアミノ酸２〜８２、配列番号１２、配列番号１２のアミノ酸４〜１５６、配列番号１４、配列番号１６、および配列番号１８からなるＳＬＯ抗原が含まれる。いくつかの実施形態では、ＳＬＯ抗原は、単量体である。
【００１５】
ＧＡＳ Ｍ型とＧＡＳ分離株との間のＳＬＯ抗原が一致しない場合、本発明のＧＡＳアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列は、好ましくは、これらと配列が同一なアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列をいう。好ましいアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列は、５０％以上の配列が同一である（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える）。同様に、本発明のＳＬＯアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列は、好ましくは、ＳＬＯ抗原の免疫学的性質を保持またはコードする配列のフラグメントをいう。好ましいアミノ酸フラグメントには、少なくともｎ個の連続アミノ酸が含まれ、ｎは７以上である（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、またはそれを超える）。
【００１６】
融合タンパク質
本発明で使用されるＳＬＯ抗原は、個別のポリペプチド（「ペプチド１」、「ペプチド２」、「ペプチド３」、「ペプチド１＋２＋３」、「ペプチド２＋３」）として組成物中に存在することができるが、少なくとも２個（すなわち、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）の抗原が１つのポリペプチド鎖（「融合タンパク質」または「ハイブリッドポリペプチド」）として発現する実施形態も存在する。ハイブリッドポリペプチドは、２つの主な利点を付与する。第１に、単独で不安定であり得るか十分に発現し得ないポリペプチドを、適切なハイブリッドパートナーの付加によって補助して問題を克服することができる。第２に、共に抗原的に有用な２つのポリペプチドを産生するために１つだけ発現および精製を使用する必要があるように商業的製造を簡略化する。
【００１７】
ハイブリッドポリペプチドは、２つまたはそれを超えるポリペプチド配列を含むことができる。したがって、本発明は、第１および第２のアミノ酸配列がＳＬＯ抗原またはそのフラグメントから選択される、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を含む組成物が含まれる。好ましくは、ハイブリッドポリペプチド中の第１および第２のアミノ酸配列は、異なるエピトープを含む。他の実施形態では、ハイブリッドポリペプチドは、第１のアミノ酸配列がＳＬＯ抗原またはそのフラグメントから選択され、第２のアミノ酸配列がＳＬＯ抗原もしくはそのフラグメントまたは別のＧＡＳ抗原から選択される、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を含む。好ましくは、ハイブリッドポリペプチド中の第１および第２のアミノ酸配列は、異なるエピトープを含む。
【００１８】
２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＧＡＳ抗原由来のアミノ酸配列からなるハイブリッドを構築することができる。異なるハイブリッドポリペプチドを、共に１つの処方物に混合することができる。かかる組み合わせのうち、ＳＬＯ抗原は、１つを超えるハイブリッドポリペプチド中に存在することができ、そして／または非ハイブリッドポリペプチドとして存在することができる。いくつかの実施形態では、抗原は、ハイブリッドまたは非ハイブリッドとして存在するが、両方は存在しない。
【００１９】
ハイブリッドポリペプチドを、式ＮＨ２Ａ−｛−Ｘ−Ｌ｝ｎＢ−ＣＯＯＨ（式中、Ｘは、第１の抗原群または第２の抗原群由来のＧＡＳ抗原のアミノ酸配列またはそのフラグメントであり、Ｌは任意選択的なリンカーアミノ酸配列であり、Ａは任意選択的なＮ末端アミノ酸配列であり、Ｂは任意選択的なＣ末端アミノ酸配列であり、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５である）で示すことができる。
【００２０】
−Ｘ−部分は、その野生型のリーダーペプチド配列を有する場合、ハイブリッドタンパク質中に含まれてよく、または省略されてよい。いくつかの実施形態では、ハイブリッドタンパク質のＮ末端に存在する−Ｘ−部分のリーダーペプチド以外のリーダーペプチドを欠失するであろう（すなわち、Ｘ１のリーダーペプチドは保持されるが、Ｘ２．．．Ｘｎのリーダーペプチドは省略されるであろう）。これは、全てのリーダーペプチドの欠失および−Ａ−部分としてのＸ１のリーダーペプチドの使用と等価である。
【００２１】
｛−Ｘ−Ｌ−｝の各ｎについて、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は存在しても存在しなくてもよい。例えば、ｎ＝２の場合、ハイブリッドはＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨなどであり得る。リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、典型的には、短い（例えば、２０個以下のアミノ酸（すなわち、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１））。例は、クローニングを容易にする短いペプチド配列であるポリグリシンリンカー（すなわち、Ｇｌｙｎ（式中、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える）を含む）およびヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える））を含む。他の適切なリンカーアミノ酸配列は、当業者に明らかである。有用なリンカーはＧＳＧＧＧＧであり、Ｇｌｙ−ＳｅｒジペプチドはＢａｍＨＩ制限部位から形成されているので、クローニングおよび操作を補助し、（Ｇｌｙ）４テトラペプチドは典型的なポリグリシンリンカーである。
【００２２】
−Ａ−は任意選択的なＮ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には、短いであろう（例えば、４０個以下のアミノ酸（すなわち、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１））。例には、タンパク質輸送を指示するためのリーダー配列またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超える）））が含まれる。他の適切なＮ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかである。Ｘ１がそれ自体のＮ末端メチオニンを各場合、−Ａ−は、好ましくは、Ｎ末端メチオニンを提供するオリゴペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸）である。
【００２３】
−Ｂ−は任意選択的なＣ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には、短いであろう（例えば、４０個以下のアミノ酸（すなわち、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１））。例には、タンパク質輸送を指示するための配列またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超える））を含む）、またはタンパク質安定性を向上する配列が含まれる。他の適切なＣ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかであろう。
【００２４】
最も好ましくは、ｎは２または３である。
【００２５】
本発明の融合構築物には、２つ以上のＳＬＯ抗原の組み合わせが含まれ得る。好ましい組み合わせには、ＧＡＳ４０抗原またはＧＡＳ５７抗原との融合物が含まれる。
【００２６】
ＧＡＳ４０
ＧＡＳ４０タンパク質が多数のＭ型およびこれらのＭ型の複数の株の両方で高度に保存されているので、ＧＡＳ４０抗原は本発明の組成物で特に有用である（ＷＯ２００６／０４２０２７号を参照のこと）。ＧＡＳ４０タンパク質は、ＷＯ２００５／０３２５８２号に詳述されている。ＧＡＳ４０は、全身免疫および攻撃誘発ならびに細菌抗体誘導の動物モデルを一貫して防御する。ＧＡＳ４０は、非常に高度に保存されたタンパク質であり、ほとんどのＭ血清型の表面に露呈しているようである（これまで認められている唯一の例外はＭ３血清型である）。
【００２７】
種々のＭ株由来の多数のＧＡＳ４０タンパク質のアミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋに含まれ、受託番号ＧＩ：１３６２１５４５およびＧＩ：１５６７４４４９（Ｍ１）；受託番号ＧＩ：２１９０９７３３（Ｍ３）、および受託番号ＧＩ：１９７４５４０２（Ｍ１８）である。ＧＡＳ４０タンパク質は、「Ｓｐｙ０２６９」（Ｍ１）、「ＳｐｙＭ３＿０１９７」（Ｍ３）、「ＳｐｙＭ１８＿０２５６」（Ｍ１８）、および「ｐｒｇＡ」としても公知である。
【００２８】
ＧＡＳ４０タンパク質は、典型的には、リーダーペプチド配列（例えば、配列番号１９のアミノ酸１〜２６）、第１のコイルドコイル領域（例えば、配列番号１９のアミノ酸５８〜２６１）、第２のコイルドコイル領域（例えば、配列番号１９のアミノ酸５５６〜７３３）、ロイシンジッパー領域（例えば、配列番号１９のアミノ酸６７３〜７０１）、および膜貫通領域（例えば、配列番号１９のアミノ酸８５５〜８６６）を含む。
【００２９】
本発明と共に使用するのに好ましいＧＡＳ４０タンパク質は、（ａ）配列番号１９と５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える）の同一性を有し；および／または（ｂ）配列番号１９の少なくともｎ個の連続アミノ酸のフラグメントであるアミノ酸配列（ｎは７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、またはそれを超える）である）を含む。これらのＧＡＳ４０タンパク質には、配列番号１９の変形体（例えば、対立遺伝子多型、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）が含まれる。ＧＡＳ４０タンパク質の好ましいフラグメントは、ＧＡＳ４０タンパク質のＣ末端由来の１つまたは複数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）および／またはＮ末端由来の１つまたは複数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）を欠く。１つの実施形態では、リーダー配列を除去する。別の実施形態では、膜貫通領域を除去する。他のフラグメントは、ＧＡＳ４０タンパク質の１つまたは複数のドメインを省略することができる。
【００３０】
ＧＡＳ４０のコイルドコイル領域は、二量体または三量体などのオリゴマーの形成に関与する可能性が高い。かかるオリゴマーは、ホモマー（互いにオリゴマー化した２個以上のＧＡＳ４０タンパク質を含む）またはヘテロマー（ＧＡＳ４０とオリゴマー化した１つまたは複数のさらなるＧＡＳタンパク質を含む）であり得る。あるいは、２つのコイルドコイル領域は、ＧＡＳ４０タンパク質内で相互作用して、第１のコイルドコイル領域と第２のコイルドコイル領域との間にオリゴマー反応物を形成することができる。したがって、いくつかの実施形態では、ＧＡＳ４０抗原はオリゴマーの形態である。いくつかのオリゴマーは、２個以上のＧＡＳ４０抗原を含む。他のオリゴマーは、第２のＧＡＳ抗原とオリゴマー化したＧＡＳ４０抗原を含む。
【００３１】
ＧＡＳ５７
ＧＡＳ５７は、Ｍ１ ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：１３６２１６５５およびＧＩ：１５６７４５４９、Ｍ３ ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：２１９０９８３４、Ｍ１８ ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：１９７４５５６０に対応し、「Ｓｐｙ０４１６」（Ｍ１）、「ＳｐｙＭ３＿０２９８」（Ｍ３）、「ＳｐｙＭ１８＿０４６４」（Ｍ１８）、および「ｐｒｔＳ」ともいう。ＧＡＳ５７はまた、推定細胞エンベローププロテイナーゼとしても同定されている。Ｍ１株のＧＡＳ５７のアミノ酸配列は、配列表中に配列番号２０として記載されている。
【００３２】
本発明と共に使用するのに好ましいＧＡＳ５７タンパク質は、（ａ）配列番号２０と５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える）の同一性を有し；および／または（ｂ）配列番号２０の少なくともｎ個の連続アミノ酸のフラグメントであるアミノ酸配列（ｎは７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、またはそれを超える）である）を含む。これらのＧＡＳ５７タンパク質には、配列番号２０の変形体（例えば、対立遺伝子多型、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）が含まれる。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２０のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号２０のＣ末端由来の１つまたは複数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）および／またはＮ末端由来の１つまたは複数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）を欠く。例えば、１つの実施形態では、アミノ酸１〜３３を除去する。別の例では、アミノ酸１６１４〜１６４７または配列番号２０を除去する。他のフラグメントは、タンパク質の１つまたは複数のドメインを省略する（例えば、シグナルペプチド、細胞質ドメイン、膜貫通ドメイン、または細胞外ドメインの省略）。
【００３３】
核酸分子
本発明は、ＳＬＯ抗原をコードする核酸分子を含む。本発明はまた、かかる分子と少なくとも５０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む。特定の配列に依存して、配列同一性の程度は、好ましくは、５０％を超える（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超える）。ヌクレオチド配列間の同一性は、好ましくは、以下のパラメータ：ギャップオープンペナルティ＝１２およびギャップ伸長ペナルティ＝１を使用したアフィンギャップ検索を使用したＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）で実行されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。
【００３４】
本発明はまた、これらの分子とハイブリッド形成することができる核酸分子を提供する。ハイブリッド形成反応を、異なる「ストリンジェンシー」条件下で行うことができる。ハイブリッド形成反応のストリンジェンシーを増加させる条件は、広く知られており、当該分野で公開されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋらの７．５２ページ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１９８９を参照のこと。関連条件の例には、以下が含まれる（ストリンジェンシーが増加する順）：２５℃、３７℃、５０℃、５５℃、および６８℃でのインキュベーション；１０×ＳＳＣ、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、および０．１×ＳＳＣの緩衝剤濃度（ＳＳＣは０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸緩衝剤である）ならびに他の緩衝系を使用したその等価物；０％、２５％、５０％、および７５％のホルムアルデヒド濃度；５分間〜２４時間のインキュベーション時間；１回、２回、またはそれを超える洗浄工程；１、２、または１５分間の洗浄インキュベーション時間；ならびに６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄液。ハイブリッド形成技術およびその至適化は、当該分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９；Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，１９９９；米国特許第５，７０７，８２９号；Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ３０，１９８７を参照のこと。
【００３５】
いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子は、低ストリンジェンシー条件下で標的とハイブリッド形成し、他の実施形態では、本発明の核酸分子は中ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成し、好ましい実施形態では、本発明の核酸分子は高ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成する。低ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、５０℃および１０×ＳＳＣである。中ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、５５℃および１×ＳＳＣである。高ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、６８℃および０．１×ＳＳＣである。
【００３６】
これらの配列のフラグメントを含む核酸分子も本発明に含まれる。これらは、これらの配列の少なくともｎ個の連続するヌクレオチドを含み、特定の配列に依存して、ｎは１０個以上（例えば、１２、１４、１５、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、またはそれを超える）である。
【００３７】
本発明の核酸（およびポリペプチド）は：
（ａ）配列表に開示の配列と同一（すなわち、１００％同一）であり；
（ｂ）配列表に開示の配列と配列同一性を共有し；
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の配列と比較した場合に個別の位置に存在することができるか、連続し得る、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の単一のヌクレオチドまたはアミノ酸の変更（欠失、挿入、置換）を有し；
ｄ）ｐ単量体（ｐ＞ｘの場合）に伸長するアラインメントについてｐ−ｘ＋１が存在するようにペアワイズアラインメントアルゴリズム（開始（Ｎ末端または５’）から終了（Ｃ末端または３’）に移動するｘ単量体（アミノ酸またはヌクレオチド）の移動ウィンドウ（ｍｏｖｉｎｇ ｗｉｎｄｏｗ））を使用して配列表由来の特定の配列とアラインメントした場合、かかるウィンドウは、少なくともｘ・ｙ個の同一のアラインメントした単量体を有し、ここで、ｘは２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００から選択され、ｙは、０．５０、０．６０、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９から選択され、ｘ・ｙが整数でない場合、近似する整数に切り上げる；
配列を含む。好ましいペアワイズアラインメントアルゴリズムは、デフォルトパラメータ（例えば、Ｇａｐオープニングペナルティ＝１０．０およびＧａｐ伸長ペナルティ＝０．５、ＥＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列を使用）を使用したＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈ大域的アラインメントアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３−４５３）である。このアルゴリズムは、ＥＭＢＯＳＳパッケージ中のニードルツールで都合良く実行される（Ｒｉｃｅら（２０００）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６−２７７）。
【００３８】
本発明の核酸およびポリペプチドは、さらに、これらの配列（ａ）〜（ｄ）のＮ末端／５’および／またはＣ末端／３’に対するさらなる配列を有することができる。
【００３９】
抗体
本発明のＳＬＯ抗原に特異的に結合するための抗体を生成することができる。用語「抗体」には、インタクトな免疫グロブリン分子、および抗原に結合することができるそのフラグメントが含まれる。これらには、ハイブリッド（キメラ）抗体分子（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９，２９３−９９，１９９１；米国特許第４，８１６，５６７号）；Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦ（ａｂ）フラグメントならびにＦｖ分子；非共有結合性ヘテロ二量体（例えば、Ｉｎｂａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．６９，２６５９−６２，１９７２；Ｅｈｒｌｉｃｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ １９，４０９１−９６，１９８０）；単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）（例えば、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５，５８９７−８３，１９８８）；二量体および三量体抗体フラグメント構築物；ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）（例えば、Ｐａｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ ３１，１５７９−８４，１９９２；Ｃｕｍｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４９Ｂ，１２０−２６，１９９２）；ヒト化抗体分子（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２，３２３−２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９，１５３４−３６，１９８８；および１９９４年９月２１日公開の英国特許出願番号ＧＢ２，２７６，１６９号）；およびかかる分子から得た任意の機能的フラグメントならびにファージディスプレイなどの従来にない過程によって得た抗体が含まれる。好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体を得る方法は、当該分野で周知である。
【００４０】
典型的には、エピトープを形成するのに少なくとも６、７、８、１０、または１２個の連続するアミノ酸が必要である。しかし、不連続アミノ酸を含むエピトープは、より多数（例えば、少なくとも１５、２５、または５０個のアミノ酸）を必要とし得る。種々の免疫アッセイ（例えば、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、放射免疫アッセイ、免疫組織化学アッセイ、免疫沈降、または当該分野で公知の他の免疫化学アッセイ）を使用して、所望の特異性を有する抗体を同定することができる。競合結合または免疫放射線測定法についての多数のプロトコールが当該分野で周知である。かかる免疫アッセイは、典型的には、免疫原と免疫原に特異的に結合する抗体との間の複合体形成の測定を含む。特定の抗原に特異的に結合する抗体の調製から、典型的には、免疫化学アッセイで使用した場合に他のタンパク質を使用して得られる検出シグナルの少なくとも５倍、１０倍、または２０倍の検出シグナルが得られる。好ましくは、抗体は、免疫化学アッセイにおいて他のタンパク質を検出せず、溶液由来の特定の抗原を免疫沈降することができる。
【００４１】
抗体の生成
ＳＬＯ抗原または非ＳＬＯポリペプチド抗原（下記）を使用して哺乳動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、またはヒトなど）を免疫化して、ポリクローナル抗体を産生することができる。必要に応じて、抗原を、担体タンパク質（ウシ血清アルブミン、サイログロブリン、およびキーホールリンペットヘモシアニンなど）に接合することができる。宿主の種に応じて、種々のアジュバントを使用して、免疫学的応答を増大させることができる。かかるアジュバントには、フロイントアジュバント、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、および界面活性剤（例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油性乳濁液、キーホールリンペットヘモシアニン、およびジニトロフェノール）が含まれるが、これらに限定されない。ヒトで使用されるアジュバントのうち、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびコリネバクテリウム・パルバムが特に有用である。
【００４２】
抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を、連続継代細胞株の培養によって抗体分子を産生する任意の技術を使用して調製することができる。これらの技術には、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術、およびＥＢＶハイブリドーマ技術が含まれるが、これらに限定されない（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５ ４９７，１９８５；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ８１，３１ ４２，１９８５；Ｃｏｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８０，２０２６ ２０３０，１９８３；Ｃｏｌｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６２，１０９ １２０，１９８４）。
【００４３】
さらに、「キメラ抗体」の産生のために開発された技術（マウス抗体遺伝子をヒト抗体遺伝子にスプライシングして適切な抗原特異性および生物活性を有する分子を得る技術）を使用することができる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１，６８５１ ６８５５，１９８４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２，６０４ ６０８，１９８４；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４，４５２ ４５４，１９８５）。モノクローナル抗体および他の抗体を「ヒト化」して、治療で使用する場合に抗体に対する患者の免疫応答の開始を防止することもできる。かかる抗体は、療法で直接使用するのに配列が十分にヒト抗体と類似し得るか、少数の重要な残基を変化させる必要があり得る。げっ歯類抗体配列とヒト抗体配列との間の相違を、各残基の部位特異的変異誘発または相補性決定領域全体のグラフティング（ｇｒａｔｉｎｇ）によるヒト配列中の残基と異なる残基の置換によって最小にすることができる。
【００４４】
あるいは、下記の組換え方法を使用してヒト化抗体を産生することができる。米国特許第５，５６５，３３２号に開示のように、特定の抗原に特異的に結合する抗体は、部分的または完全にヒト化された抗原結合部位を含むことができる。
【００４５】
あるいは、単鎖抗体の産生について記載した技術を、当該分野公知の方法を使用して適合させて、特定の抗原に特異的に結合する単鎖抗体を産生することができる。関連する特異性を有するが、異なるイディオタイプ組成の抗体を、ランダム組み合わせ免疫グロブリンライブラリー由来のチェーンシャフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）によって生成することができる（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８，１１１２０ ２３，１９９１）。
【００４６】
単鎖抗体を、テンプレートとしてハイブリドーマｃＤＮＡを使用したＤＮＡ増幅方法（ＰＣＲなど）を使用して構築することができる（Ｔｈｉｒｉｏｎら、１９９６，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ．５，５０７−１１）。単鎖抗体は、単一特異性または二重特異性であり得、２価または４価であり得る。４価の二重特異性単鎖抗体の構築は、例えば、Ｃｏｌｏｍａ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５，１５９−６３に教示されている。２価の二重特異性単鎖抗体は、Ｍａｌｌｅｎｄｅｒ ＆ Ｖｏｓｓ，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９，１９９−２０６に教示されている。
【００４７】
下記のように、単鎖抗体をコードするヌクレオチド配列を、手作業または自動化されたヌクレオチド合成によって構築し、標準的な組換えＤＮＡ法を使用して発現構築物にクローン化し、細胞に導入してコード配列を発現させることができる。あるいは、単鎖抗体を、例えば、繊維状ファージテクノロジーを使用して直接産生することができる（Ｖｅｒｈａａｒら、１９９５，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６１，４９７−５０１；Ｎｉｃｈｏｌｌｓら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６５，８１−９１）。
【００４８】
特定の抗原に特異的に結合する抗体を、文献に開示のリンパ球集団におけるインビボ産生の誘導または免疫グロブリンライブラリーもしくは高度に特異的な結合試薬のパネルのスクリーニングによって産生することもできる（Ｏｒｌａｎｄｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６，３８３３ ３８３７，１９８９；Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９，２９３ ２９９，１９９１）。
【００４９】
キメラ抗体を、ＷＯ９３／０３１５１号に開示のように構築することができる。免疫グロブリンに由来し、多価または多重特異性の結合タンパク質（ＷＯ９４／１３８０４号に記載の「二特異性抗体」など）を調製することもできる。
【００５０】
抗体を、当該分野で周知の方法によって精製することができる。例えば、抗体を、関連抗原が結合するカラムの通過によってアフィニティ精製することができる。次いで、結合した抗体を、高塩濃度の緩衝剤を使用して、カラムから溶離することができる。
【００５１】
ポリペプチド抗原の産生
ポリペプチドの組換え産生
特定の抗原をコードする任意のヌクレオチド配列を使用して、抗原を組換え的に産生することができる。所望により、一旦そのアミノ酸配列が分かると、抗体を組換え的に産生することができる。
【００５２】
本発明のＳＬＯ抗原を産生するために使用することができる配列の例を、図５および６に示す。ＳＬＯをコードする核酸分子を、標準的な核酸精製技術を使用して適切な化膿連鎖球菌から単離することができ、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの増幅技術の使用、もしくは自動合成機の使用によって合成することができる。核酸の単離方法は日常的方法であり、当該分野で公知である。任意のかかる核酸分子取得技術を使用して、特定の抗原をコードする核酸分子を得ることができる。特定の抗原または抗体をコードする配列を、当該分野で周知の化学的方法を使用して完全または部分的に合成することができる（Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２１５ ２２３，１９８０；Ｈｏｒｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２２５ ２３２，１９８０を参照のこと）。
【００５３】
ｃＤＮＡ分子を、テンプレートとしてｍＲＮＡを使用した標準的な分子生物学技術を使用して作製することができる。その後、ｃＤＮＡ分子を、当該分野で周知の分子生物学技術を使用して複製することができる。テンプレートとしてゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡのいずれかを使用したＰＣＲなどの増幅技術を使用して、本発明のポリヌクレオチドの更なる複製を得ることができる。
【００５４】
所望により、当該分野で一般的に知られている方法を使用してヌクレオチド配列を操作して、種々の理由で抗原コード配列を変化させることができる（ポリペプチドまたはｍＲＮＡ産物のクローニング、プロセシング、および／または発現を修飾する変更が含まれるが、これらに限定されない）。遺伝子フラグメントおよび合成オリゴヌクレオチドのランダム断片化およびＰＣＲアセンブリによるＤＮＡシャフリングを使用して、ヌクレオチド配列を操作することができる。例えば、部位特異的変異誘発を使用して、新規の制限部位の挿入、グリコシル化パターンの変更、コドン選択の変化、スプライスバリアントの産生、および変異の導入などを行うことができる。
【００５５】
配列修飾（精製タグ配列の付加またはコドン至適化など）を使用して、発現を容易にすることができる。例えば、Ｎ末端リーダー配列を、タグタンパク質（ポリヒスチジン（「ＨＩＳ」）またはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（「ＧＳＴ」）など）をコードする配列と置換することができる。かかるタグタンパク質を使用して、発現タンパク質の精製、検出、および安定性を促進することができる。特定の原核生物宿主または真核生物宿主に好まれるコドンを選択して、タンパク質発現率を増大させ、または所望の性質（天然に存在する配列から生成した転写物よりも長い半減期など）を有するＲＮＡ転写物を産生することができる。これらの方法は当該分野で周知であり、ＷＯ０５／０３２５８２号にさらに記載されている。
【００５６】
発現ベクター
抗原または抗体をコードする核酸分子を、挿入するコード配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含む発現ベクターに挿入することができる。当業者に周知の方法を使用して、コード配列ならびに適切な転写調節エレメントおよび翻訳調節エレメントを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えが含まれる。
【００５７】
宿主細胞
異種宿主は、原核生物または真核生物であり得る。大腸菌は好ましい宿主細胞であるが、他の適切な宿主には、ラクトコッカス・ラクティス、ラクトコッカス・クレモリス、枯草菌、コレラ菌、チフス菌、ネズミチフス菌、ナイセリア・ラクタミカ、ナイセリア・シネレア、マイコバクテリア属（例えば、結核菌）、酵母などが含まれる。
【００５８】
宿主細胞株を、所望の様式で挿入配列の発現を調整する、または発現ポリペプチドをプロセシングする能力について選択することができる。かかるポリペプチド修飾には、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、およびアセチル化が含まれるが、これらに限定されない。ポリペプチドの「プレプロ」形態を切断する翻訳後プロセシングを使用して、正確な挿入、折り畳み、および／または機能を促進することもできる。翻訳後活性のための特定の細胞機能および特徴的な機能を有する異なる宿主細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０−２２０９）から利用可能であり、外来タンパク質の正確な修飾およびプロセシングが確実になるように選択することができる。ＷＯ０１／９８３４０号を参照のこと。
【００５９】
十分に確立された技術（トランスフェリン−ポリカチオン媒介ＤＮＡ移入、裸またはカプセル化した核酸でのトランスフェクション、リポソーム媒介細胞融合、ＤＮＡコーティングラテックスビーズの細胞内輸送、プロトプラスト融合、ウイルス感染、エレクトロポレーション、「遺伝子銃」法、およびＤＥＡＥまたはリン酸カルシウム媒介トランスフェクションが含まれるが、これらに限定されない）を使用して、発現構築物を宿主細胞に導入することができる。
【００６０】
発現ベクターを使用して形質転換された宿主細胞を、細胞培養物からのタンパク質の発現および回収に適切な条件下で培養することができる。形質転換された細胞によって産生されたタンパク質を、使用したヌクレオチド配列および／または発現ベクターに応じて分泌し、または細胞内に含めることができる。当業者は、原核細胞膜または真核細胞膜を介した可溶性抗原の分泌を指示するシグナル配列を含むように発現ベクターをデザインすることができることを理解している。
【００６１】
精製
本発明で使用される抗原を、適切な化膿連鎖球菌または操作した宿主細胞から単離することができる。精製ポリペプチド抗原を、当該分野で周知の方法を使用して、細胞中の他の成分（タンパク質、炭水化物、または脂質など）から分離する。かかる方法には、サイズ排除クロマトグラフィ、硫酸アンモニウム分画、イオン交換クロマトグラフィ、アフィニティクロマトグラフィ、および分取ゲル電気泳動が含まれるが、これらに限定されない。精製ポリペプチド抗原の調製物の純度は少なくとも８０％であり、好ましくは、調製物の純度は、９０％、９５％、または９９％である。調製物の純度を、当該分野で公知の任意の手段（ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動など）によって評価することができる。適切な場合には、ポリペプチド抗原を、例えば、尿素を使用して可溶化することができる。
【００６２】
化学合成
本発明の組成物中で使用されるＳＬＯ抗原および他の抗原を、例えば、固相技術を使用して合成することができる。例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９ ５４，１９６３；Ｒｏｂｅｒｇｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９，２０２ ０４，１９９５を参照のこと。手動技術の使用または自動化によりタンパク質合成を行うことができる。例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３１Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、自動化された合成を行うことができる。任意選択的に、ＳＬＯ抗原のフラグメントを個別に合成し、化学的方法を使用して合わせて全長分子を産生することができる。
【００６３】
抗体またはポリペプチド抗原をコードする核酸分子を、従来の方法（リン酸トリエステル法（Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ，Ｍ．ら（１９８４），Ｎａｔｕｒｅ ３１０：１０５−１１１）または核酸の化学合成（Ｇｒａｎｔｈａｍ，Ｒ．ら（１９８１），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．９：ｒ４３−ｒ７４）など）によって合成することができる。
【００６４】
免疫学的組成物、診断組成物、および治療組成物
本発明はまた、宿主被験体におけるＧＡＳ感染の検出のための薬物（例えば、免疫学的組成物またはワクチン）または診断試薬として使用するための組成物を提供する。本発明はまた、（ｉ）ＧＡＳ細菌の感染の治療または防止のための薬物、（ｉｉ）ＧＡＳ細菌またはＧＡＳ細菌に対して惹起された抗体の存在の検出のための診断試薬、および／または（ｉｉｉ）ＧＡＳ細菌に対する抗体を惹起することができる試薬の製造における組成物の使用を提供する。
【００６５】
例えば、ＳＬＯ抗原またはこの抗原をコードする核酸を、ＧＡＳ感染の存在の検出もしくはＧＡＳ細菌に対して惹起される抗体の検出のための診断試薬の製造またはＧＡＳ細菌に対する抗体を惹起することができる試薬の製造で使用することができる。ＳＬＯ抗原をコードする核酸を、当該分野で公知のようにハイブリッド形成条件下で生体サンプルと核酸プローブを接触させることによって二重鎖を形成し、二重鎖を検出することによって検出することができる。ＳＬＯ抗原を、ＳＬＯ抗原に特異的に結合する抗体を使用して検出することができる。同様に、ＳＬＯ抗原に対する抗体を使用して、抗体−抗原複合体の形成に適切な条件下で生体サンプルを接触させ、形成された任意の複合体を検出することによってＳＬＯ抗原を検出することができる。本発明はまた、これらの方法の使用に適切な試薬を含むキットを提供する。
【００６６】
治療組成物
本発明の組成物は、化膿連鎖球菌感染の防止および／または治療に有用である。ＳＬＯ抗原を含む組成物は、好ましくは、免疫原性組成物であり、より好ましくは、ワクチン組成物である。かかる組成物のｐＨは、好ましくは、ｐＨ６とｐＨ８との間、好ましくは、約ｐＨ７である。ｐＨを緩衝剤の使用によって維持することができる。組成物は、無菌および／または無発熱物質であり得る。組成物は、ヒトに関して等張であり得る。
【００６７】
本発明のワクチンを、予防的または治療的に使用することができるが、典型的には、予防的であろう。したがって、本発明は、化膿連鎖球菌感染の治療的または予防的処置のための方法を含む。動物は、好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。方法は、治療量または予防量の本発明の免疫原性組成物を動物に投与する工程を含む。
【００６８】
いくつかの本発明の組成物は、本明細書に記載のポリペプチドＳＬＯ抗原を含む。他の本発明の組成物は、ＳＬＯ抗原、任意選択的に、組成物中に含めることができる他の抗原をコードする核酸分子を含む（以下を参照のこと）。例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｔｏｒｒｅｓ（１９９７）Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９：２７１−２８３；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（１９９７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５：６１７−６４８；Ｓｃｏｔｔ−Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ（２０００）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ ９：４７１−４８０；Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓ ＆ Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ（２０００）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２：４４１−４４７；Ｉｌａｎ（１９９９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １：１１６−１２０；Ｄｕｂｅｎｓｋｙら（２０００）Ｍｏｌ Ｍｅｄ ６：７２３−７３２；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｐｅｒｔｍｅｒ（２０００）Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ ５５：１−７４；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（２０００）Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １６２（４ Ｐｔ ２）：Ｓ１９０−１９３；Ｄａｖｉｓ（１９９９）Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ Ｊ．Ｍｅｄ．６６：８４−９０を参照のこと。典型的には、核酸分子は、例えば、プラスミド形態のＤＮＡ分子である。
【００６９】
化膿連鎖球菌感染の治療用組成物は、ＳＬＯ抗原に特異的に結合する少なくとも１つの抗体および、任意選択的に、非ＳＬＯ抗原に特異的に結合する抗体を含む。いくつかの本発明の組成物は、免疫原性であり、１つまたは複数のポリペプチド抗原を含む一方で、他の免疫原性組成物は、１つまたは複数の抗原をコードする核酸分子を含む。例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｔｏｒｒｅｓ（１９９７）Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９：２７１−２８３；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（１９９７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５：６１７−６４８；Ｓｃｏｔｔ−Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ（２０００）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ ９：４７１−４８０；Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓ ＆ Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ（２０００）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２：４４１−４４７；Ｉｌａｎ（１９９９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １：１１６−１２０；Ｄｕｂｅｎｓｋｙら（２０００）Ｍｏｌ Ｍｅｄ ６：７２３−７３２；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｐｅｒｔｍｅｒ（２０００）Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ ５５：１−７４；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（２０００）Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １６２（４ Ｐｔ ２）：Ｓ１９０−１９３Ｄａｖｉｓ（１９９９）Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ Ｊ．Ｍｅｄ．６６：８４−９０を参照のこと。典型的には、核酸分子は、例えば、プラスミド形態のＤＮＡ分子である。
【００７０】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、１つまたは複数のさらなる活性剤を含むことができる。かかる活性剤には、（ａ）本発明の別のＳＬＯ抗原、（ｂ）小児ワクチンで有用なポリペプチド抗原、（ｃ）高齢者または免疫無防備状態の個体のためのワクチンで有用なポリペプチド抗原、（ｄ）（ａ）〜（ｃ）および（ａ）〜（ｃ）に特異的に結合する抗体をコードする核酸分子が含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
さらなる抗原
本発明の組成物を、本発明の治療方法、予防方法、または診断方法で使用するための１つまたは複数の抗原と組み合わせて投与することができる。好ましい抗原には、以下に列挙した抗原が含まれる。さらに、本発明の組成物を使用して、任意の以下に列挙の病原体に起因する感染を治療または防止することができる。下記の抗原との組み合わせに加えて、本発明の組成物を、本明細書中に記載のアジュバントと組み合わせることもできる。
【００７２】
本発明と共に使用するための抗原には、下記の１つまたは複数の抗原または下記の１つまたは複数の病原体由来の抗原が含まれるが、これらに限定されない。
【００７３】
Ａ．細菌抗原
本発明での使用に適切な細菌抗原には、細菌から単離、精製、または由来することができるタンパク質、多糖類、リポ多糖類、外膜小胞が含まれる。さらに、細菌抗原には、細菌溶解物および不活化細菌処方物が含まれ得る。細菌抗原を、組換え発現によって産生することができる。細菌抗原には、好ましくは、その生活環の少なくとも１段階に細菌表面に曝露されるエピトープが含まれる。細菌抗原は、好ましくは、複数の血清型で保存される。細菌抗原には、下記の１つまたは複数の細菌由来の抗原および以下で同定した特定の抗原例が含まれる。
【００７４】
ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）：メニンギティディス抗原には、Ｎ．メニンギティディス血清群（Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ、および／またはＢなど）から精製または由来したタンパク質（引例１〜７で同定されたタンパク質など）、糖類（多糖類、オリゴ糖、またはリポ多糖類が含まれる）、または外膜小胞（引例８、９、１０、１１）が含まれ得る。メニンギティディスタンパク質抗原を、接着剤、オートトランスポータ、毒素、Ｆｅ獲得タンパク質、および膜結合タンパク質（好ましくは、外膜内在性タンパク質（ｉｎｔｅｇｒａｌ ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ））から選択することができる。
【００７５】
肺炎連鎖球菌：肺炎連鎖球菌抗原には、肺炎連鎖球菌由来の糖類（多糖類またはオリゴ糖が含まれる）および／またはタンパク質が含まれ得る。糖類抗原を、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択することができる。タンパク質抗原を、ＷＯ９８／１８９３１号、ＷＯ９８／１８９３０号、米国特許第６，６９９，７０３号、米国特許第６，８００，７４４号、ＷＯ９７／４３３０３号、およびＷＯ９７／３７０２６号で同定されたタンパク質から選択することができる。肺炎連鎖球菌タンパク質を、ポリヒスチジントリアドファミリー（ＰｈｔＸ）、コリン結合タンパク質ファミリー（ＣｂｐＸ）、ＣｂｐＸ短縮物、ＬｙｔＸファミリー、ＬｙｔＸ短縮物、ＣｂｐＸ短縮物−ＬｙｔＸ短縮物キメラタンパク質、ニューモリシン（Ｐｌｙ）、ＰｓｐＡ、ＰｓａＡ、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１３０、Ｓｐ１２５、またはＳｐ１３３から選択することができる。
【００７６】
化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）：Ａ群連鎖球菌抗原には、ＷＯ０２／３４７７１号またはＷＯ２００５／０３２５８２号で同定されたタンパク質（ＧＡＳ４０が含まれる）、ＧＡＳ Ｍタンパク質のフラグメントの融合物（ＷＯ０２／０９４８５１号およびＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９９）１７：１９３−２００およびＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ １４（１０）：９４４−９４８に記載のものが含まれる）、フィブロネクチン結合タンパク質（Ｓｆｂ１）、連鎖球菌ヘム結合タンパク質（Ｓｈｐ）、およびストレプトリシンＳ（ＳａｇＡ）が含まれ得る。
【００７７】
カタル球菌：モラクセラ抗原には、ＷＯ０２／１８５９５号およびＷＯ９９／５８５６２号で同定された抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ−ＯＭＰ）、Ｃ抗原、および／またはＬＰＳが含まれる。
【００７８】
百日咳菌：百日咳抗原には、百日咳ホロトキシン（ｐｅｔｕｓｓｉｓ ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）（ＰＴ）および百日咳菌由来の繊維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）が含まれ、任意選択的に、パータクチンおよび／または凝集原２および３抗原との組み合わせも含まれる。
【００７９】
黄色ブドウ球菌：黄色ブドウ球菌抗原には、非毒性組換え緑膿菌外毒素Ａと任意選択的に接合した黄色ブドウ球菌５型および８型莢膜多糖類（ＳｔａｐｈＶＡＸ（商標）など）または表面タンパク質由来の抗原、インベイシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、食細胞の貪食を阻害する表面因子（莢膜、プロテインＡ）、カロテノイド、カタラーゼ産物、プロテインＡ、凝固酵素、凝固因子、および／または真核生物細胞膜を溶解する膜損傷毒素（任意選択的に解毒した）（ヘモリシン、ロイコトキシン、ロイコシジン）が含まれる。
【００８０】
表皮ブドウ球菌：表皮ブドウ球菌抗原には、粘液結合抗原（ＳＡＡ）が含まれる。
【００８１】
破傷風菌（破傷風）：破傷風抗原には、本発明の組成物と接合した担体タンパク質として使用されることが好ましい破傷風トキソイド（ＴＴ）が含まれる。
【００８２】
ジフテリア菌（Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（ジフテリア）：ジフテリア抗原には、好ましくは解毒されたジフテリア毒素（ＣＲＭ１９７など）が含まれる。さらに、ＡＤＰリボシル化を調整するか、阻害するか、これに関連することができる抗原は、本発明の組成物との組み合わせ／同時投与／接合が意図される。担体タンパク質としてジフテリアトキソイドを使用することができる。
【００８３】
インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原には、Ｈｉｂ糖類抗原が含まれる。
【００８４】
緑膿菌：シュードモナス抗原には、内毒素Ａ、Ｗｚｚタンパク質、緑膿菌ＬＰＳ、より詳細にはＰＡＯ１から単離したＬＰＳ（Ｏ５血清型）、および／または外膜タンパク質（外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）が含まれる）（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００１ Ｍａｙ；６９（５）：３５１０−３５１５）が含まれる。
【００８５】
レジオネラ・ニューモフィラ。細菌毒素は、レジオネラ・ニューモフィラに由来し得る。
【００８６】
ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）：Ｂ群連鎖球菌抗原には、ＷＯ０２／３４７７１号、ＷＯ０３／０９３３０６号、ＷＯ０４／０４１１５７号、またはＷＯ２００５／００２６１９号で同定されたタンパク質抗原または糖類抗原（タンパク質ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６、およびＧＢＳ３２２、ならびに血清型Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、およびＶＩＩＩ由来の糖類抗原が含まれる）が含まれる。
【００８７】
淋菌（Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）：ゴノレー抗原には、Ｐｏｒ（すなわち、ポリン）タンパク質（ＰｏｒＢ（Ｚｈｕら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００４）２２：６６０-６６９を参照のこと）など）、トランスフェリン結合タンパク質（ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢ（Ｐｒｉｃｅら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００４）７１（１）：２７７-２８３を参照のこと）など）、混濁タンパク質（ｏｐａｃｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｏｐａなど）、還元修飾性タンパク質（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ−ｍｏｄｉｆｉａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｒｍｐ）、および外膜小胞（ＯＭＶ）調製物（Ｐｌａｎｔｅら、Ｊ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（２０００）１８２：８４８-８５５を参照のこと、例えば、ＷＯ９９／２４５７８、ＷＯ９９／３６５４４、ＷＯ９９／５７２８０、ＷＯ０２／０７９２４３も参照のこと）が含まれる。
【００８８】
トラコーマクラミジア：トラコーマクラミジア抗原には、血清型Ａ、Ｂ、Ｂａ、およびＣ由来の抗原（トラコーマの作用因子、盲目の原因）、血清型Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３由来の抗原（性病性リンパ肉芽腫症に関連）、および血清型ＤからＫ由来の抗原が含まれる。トラコーマクラミジア抗原には、ＷＯ００／３７４９４号、ＷＯ０３／０４９７６２号、ＷＯ０３／０６８８１１号、またはＷＯ０５／００２６１９号で同定された抗原（ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８、ＯｍｐＨ−ｌｉｋｅ（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４）、ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）、およびＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）が含まれる）も含まれ得る。
【００８９】
梅毒トレポネーマ（梅毒）：梅毒抗原には、ＴｍｐＡ抗原が含まれる。
【００９０】
軟性下疳菌（軟性下疳の原因菌）：デュクレイ抗原には、外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）が含まれる。
【００９１】
フェカリス菌またはフェシウム菌：抗原には、米国特許第６，７５６，３６１号に記載の三糖類反復または他の腸球菌由来の抗原が含まれる。
【００９２】
ピロリ菌：ピロリ菌抗原には、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹ、および／またはウレアーゼ抗原が含まれる。
【００９３】
腐性ブドウ球菌：抗原には、腐性ブドウ球菌抗原の１６０ｋＤａ血球凝集素が含まれる。
【００９４】
エンテロコリチカ菌抗原には、ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００２ Ａｕｇｕｓｔ；７０（８）：４４１４）が含まれる。
【００９５】
大腸菌：大腸菌抗原は、毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、凝集付着性大腸菌（ＥＡｇｇＥＣ）、びまん付着性大腸菌（ＤＡＥＣ）、腸管病原性大腸菌（ＥＰＥＣ）、および／または腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）に由来し得る。
【００９６】
炭疽菌（炭疽病）：炭疽菌抗原は任意選択的に解毒されており、Ａ成分（致死因子（ＬＦ）および浮腫因子（ＥＦ））から選択することができ、その両方が、防御抗原（ＰＡ）として公知のＢ成分を共有することができる。
【００９７】
ペスト菌（ペスト）：ペスト抗原には、Ｆ１莢膜抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００３ Ｊａｎ；７１（１））：３７４−３８３，ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．１９９９ Ｏｃｔ；６７（１０）：５３９５）、ペスト菌Ｖ抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．１９９７ Ｎｏｖ；６５（１１）：４４７６−４４８２）が含まれる。
【００９８】
結核菌：結核抗原には、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、抗原８５Ｂの融合タンパク質（Ａｇ８５Ｂ）および／または任意選択的にカチオン性脂質小胞中に配合されたＥＳＡＴ−６（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００４ Ｏｃｔｏｂｅｒ；７２（１０）：６１４８）、結核菌（Ｍｔｂ）イソクエン酸デヒドロゲナーゼ関連抗原（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００４ Ａｕｇ ２４；１０１（３４）：１２６５２）、および／またはＭＰＴ５１抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００４ Ｊｕｌｙ；７２（７）：３８２９）が含まれる。
【００９９】
リケッチア属：抗原には、外膜タンパク質（外膜プロテインＡおよび／またはＢ（ＯｍｐＢ）が含まれる）（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．２００４ Ｎｏｖ １；１７０２（２）：１４５）、ＬＰＳ、および表面タンパク質抗原（ＳＰＡ）（Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．１９８９ Ｊｕｎ；２ Ｓｕｐｐｌ：８１）が含まれる。
【０１００】
リステリア菌。細菌抗原は、リステリア菌に由来し得る。
【０１０１】
クラミジア・ニューモニエ：抗原には、ＷＯ０２／０２６０６号で同定された抗原が含まれる。
【０１０２】
コレラ菌：抗原には、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ（特に、コレラ菌ＩＩのリポ多糖類）、Ｏ１ Ｉｎａｂａ Ｏ−特異的多糖類、コレラ菌Ｏ１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００３ Ｏｃｔ；７１（１０）：５４９８−５０４）、および／または閉鎖帯毒素（Ｚｏｔ）が含まれる。
【０１０３】
チフス菌（チフス熱）：抗原には、莢膜多糖類、好ましくは抱合体（Ｖｉ、すなわち、ｖａｘ−ＴｙＶｉ）が含まれる。
【０１０４】
ライム病ボレリア（ライム病）：抗原には、リポタンパク質（ＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ、ＯｓｐＣ、およびＯｓｐＤなど）、他の表面タンパク質（ＯｓｐＥ関連タンパク質（Ｅｒｐｓ）など）、デコリン結合タンパク質（ＤｂｐＡなど）、および抗原多様性ＶＩタンパク質（Ｐ３９およびＰ１３に結合するタンパク質）（膜内在性タンパク質、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００１ Ｍａｙ；６９（５）：３３２３−３３３４）、ＶｌｓＥ抗原変異タンパク質（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９９ Ｄｅｃ；３７（１２）：３９９７）など）が含まれる。
【０１０５】
ジンジバリス菌：抗原には、ジンジバリス菌外膜タンパク質（ＯＭＰ）が含まれる。
【０１０６】
クレブシエラ属：抗原には、ＯＭＰ（ＯＭＰ Ａが含まれる）または破傷風トキソイド任意選択的に接合した多糖類が含まれる。
【０１０７】
さらなる本発明の細菌抗原は、上記のいずれかの莢膜抗原、多糖類抗原、またはタンパク質抗原であり得る。さらなる細菌抗原には、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物も含まれ得る。さらに、抗原には、上記細菌のいずれかの生きたバージョン、弱毒化バージョン、および／または精製バージョンが含まれる。本発明の抗原は、グラム陰性細菌またはグラム陽性細菌に由来し得る。本発明の抗原は、好気性菌または嫌気性菌に由来し得る。
【０１０８】
さらに、上記細菌由来糖類のいずれか（多糖類、ＬＰＳ、ＬＯＳ、またはオリゴ糖）を、別の作用因子または抗原（担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７など））と接合することができる。かかる接合は、米国特許第５，３６０，８９７号およびＣａｎ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９８４ Ｍａｙ；６２（５）：２７０−５に記載のタンパク質上のアミノ基への糖類上のカルボニル部分の還元的アミド化によって生じる直接的接合であり得る。あるいは、糖類を、リンカーを介して、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９６およびＣＲＣ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，１９９３に記載のスクシンアミドまたは他の結合などを介して接合することができる。
【０１０９】
Ｂ．ウイルス抗原
本発明での使用に適切なウイルス抗原には、不活化（または死滅）ウイルス、弱毒化ウイルス、スプリットウイルス処方物、精製サブユニット処方物、ウイルスから単離、精製、または由来することができるウイルスタンパク質、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）が含まれる。ウイルス抗原は、細胞培養物または他の基質上に増殖したウイルスに由来し得る。あるいは、ウイルス抗原を、組換え的に発現することができる。ウイルス抗原には、好ましくは、その生活環の少なくとも１段階に細菌表面に曝露されるエピトープが含まれる。細菌抗原は、好ましくは、複数の血清型または分離株で保存される。細菌抗原には、下記の１つまたは複数の細菌由来の抗原および以下で同定した特定の抗原例が含まれる。
【０１１０】
オルソミクソウイルス：ウイルス抗原は、オルソミクソウイルス（インフルエンザＡ型、Ｂ型、およびＣ型など）に由来し得る。オルソミクソウイルス抗原を、１つまたは複数のウイルスタンパク質（血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、基質タンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）、１つまたは複数の転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２、およびＰＡ）が含まれる）から選択することができる。好ましい抗原には、ＨＡおよびＮＡが含まれる。
【０１１１】
インフルエンザ抗原は、世界的流行間期の（年間流行性）インフルエンザ株に由来し得る。あるいは、インフルエンザ抗原は、世界的流行およびその発生を引き起こす可能性のある株（すなわち、現在広まっている株における赤血球凝集素と比較して新規の赤血球凝集素を有するインフルエンザ株、トリ被験体中で病原性を示し、且つヒト集団において水平伝播する可能性があるインフルエンザ株、またはヒトに病原性を示すインフルエンザ株）に由来し得る。
【０１１２】
パラミクソウイルス科のウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス科のウイルス（ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、およびモルビリウイルス（麻疹）など）に由来し得る。
【０１１３】
ニューモウイルス：ウイルス抗原は、ニューモウイルス（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、マウス肺炎ウイルス、およびシチメンチョウ鼻気管炎ウイルスなど）に由来し得る。好ましくは、ニューモウイルスはＲＳＶである。ニューモウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質（表面タンパク質（融合物（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）、および小疎水性タンパク質（ＳＨ））、基質タンパク質ＭおよびＭ２、ヌクレオカプシドタンパク質Ｎ、Ｐ、およびＬならびに非構造タンパク質ＮＳ１およびＮＳ２が含まれる）から選択することができる。好ましいニューモウイルス抗原には、Ｆ、Ｇ、およびＭが含まれる。例えば、Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．２００４ Ｎｏｖ；８５（Ｐｔ１１）：３２２９）を参照のこと。ニューモウイルス抗原を、キメラウイルス中に配合するか、これに由来することができる。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含むことができる。
【０１１４】
パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス（パラインフルエンザウイルス１型〜４型（ＰＩＶ）、ムンプス、センダイウイルス、サルウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルス、およびニューカッスル病ウイルスなど）に由来し得る。好ましくは、パラミクソウイルスはＰＩＶまたはムンプスである。パラミクソウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質から選択することができる：血球凝集素−ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質Ｆ１およびＦ２、核タンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、巨大タンパク質（Ｌ）、および基質タンパク質（Ｍ）。好ましいパラミクソウイルスタンパク質には、ＨＮ、Ｆ１、およびＦ２が含まれる。パラミクソウイルス抗原を、キメラウイルス中に配合するか、これに由来することができる。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含むことができる。市販のムンプスワクチンには、１価の形態または麻疹ワクチンおよび風疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせた弱毒化生ムンプスウイルスが含まれる。
【０１１５】
モルビリウイルス：ウイルス抗原は、モルビリウイルス（麻疹ウイルスなど）に由来し得る。モルビリウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質から選択することができる：血球凝集素（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合因子（Ｆ）、巨大タンパク質（Ｌ）、核タンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼリンタンパク質（Ｐ）、および基質（Ｍ）。市販の麻疹ワクチンには、典型的にはムンプスおよび風疹（ＭＭＲ）と組み合わせた弱毒化生麻疹ウイルスが含まれる。
【０１１６】
ピコルナウイルス：ウイルス抗原は、ピコルナウイルス（エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス、カルジオウイルス、およびアフトウイルスなど）に由来し得る。エンテロウイルス（ポリオウイルスなど）由来の抗原が好ましい。
【０１１７】
エンテロウイルス：ウイルス抗原は、エンテロウイルス（ポリオウイルス１型１、２型、または３型）、コクサッキーＡウイルス１〜２２型および２４型、コクサッキーＢウイルス１〜６型、エコーウイルス（ＥＣＨＯ）１〜９型、１１〜２７型、および２９〜３４型、ならびにエンテロウイルス６８〜７１など）に由来し得る。好ましくは、エンテロウイルスはポリオウイルスである。エンテロウイルス抗原は、好ましくは、１つまたは複数の以下のキャプシドタンパク質から選択される：ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、およびＶＰ４。市販のポリオワクチンには、不活化ポリオワクチン（ＩＰＶ）および経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ）が含まれる。
【０１１８】
ヘパルナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパルナウイルス（Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）など）に由来し得る。市販のＨＡＶワクチンには、不活化ＨＡＶワクチンが含まれる。
【０１１９】
トガウイルス：ウイルス抗原は、トガウイルス（ルビウイルス、アルファウイルス、またはアルテリウイルスなど）に由来し得る。ルビウイルス（風疹ウイルスなど）由来の抗原が好ましい。トガウイルス抗原を、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ−１、ＮＳＰＯ−２、ＮＳＰ−３、またはＮＳＰ−４から選択することができる。トガウイルス抗原を、好ましくは、Ｅ１、Ｅ２、またはＥ３から選択する。市販の風疹ワクチンには、典型的にはムンプスワクチンおよび麻疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせた低温適応の生きたウイルスが含まれる。
【０１２０】
フラビウイルス：ウイルス抗原は、フラビウイルス（ダニ媒介性脳炎（ＴＢＥ）、デング熱（１、２、３、または４型）、黄熱病、日本脳炎、ウエストナイル脳炎、セントルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポワッサン脳炎など）に由来し得る。フラビウイルス抗原を、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ−１、ＮＳ−２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、およびＮＳ５から選択することができる。フラビウイルス抗原を、好ましくは、ＰｒＭ、Ｍ、およびＥから選択する。市販のＴＢＥワクチンには、不活化ウイルスワクチンが含まれる。
【０１２１】
ペスチウイルス：ウイルス抗原は、ペスチウイルス（ウシウイルス性下痢（ＢＶＤＶ）、ブタコレラ（ＣＳＦＶ）、またはボーダー病（ＢＤＶ）など）に由来し得る。
【０１２２】
ヘパドナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパドナウイルス（Ｂ型肝炎ウイルスなど）に由来し得る。ヘパドナウイルス抗原を、表面抗原（Ｌ、Ｍ、およびＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択することができる。市販のＨＢＶワクチンには、表面抗原Ｓタンパク質を含むサブユニットワクチンが含まれる。
【０１２３】
Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に由来し得る。ＨＣＶ抗原を、１つまたは複数のＥ１、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリタンパク質、ＮＳ３４５−コアポリタンパク質、コア、および／または非構造領域由来のペプチド（Ｈｏｕｇｈｔｏｎら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１）から選択することができる。
【０１２４】
ラブドウイルス：ウイルス抗原は、ラブドウイルス（リッサウイルス（狂犬病ウイルス）およびベシクロウイルス（ＶＳＶ）など）に由来し得る。ラブドウイルス抗原を、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、巨大タンパク質（Ｌ）、非構造タンパク質（ＮＳ）から選択することができる。市販の狂犬病ウイルスワクチンは、ヒト二倍体細胞またはアカゲザル胎児肺細胞で成長した死滅ウイルスを含む。
【０１２５】
カリシウイルス科；ウイルス抗原は、カルシウイルス科（ノーウォークウイルスおよびノーウォーク様ウイルス（ハワイウイルスおよびスノーマウンテンウイルスなど）など）に由来し得る。
【０１２６】
コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、トリ伝染性気管支炎（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）、およびブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）に由来し得る。コロナウイルス抗原を、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、基質（Ｍ）、ヌクレオカプシド（Ｎ）、および血球凝集素−エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択することができる。好ましくは、コロナウイルス抗原は、ＳＡＲＳウイルスに由来する。ＳＡＲＳウイルス抗原は、ＷＯ０４／９２３６０号に記載されている。
【０１２７】
レトロウイルス：ウイルス抗原は、レトロウイルス（オンコウイルス、レンチウイルス、またはスプーマウイルスなど）に由来し得る。オンコウイルス抗原は、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２、またはＨＴＬＶ−５に由来し得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に由来し得る。レトロウイルス抗原を、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕ、およびｖｐｒから選択することができる。ＨＩＶ抗原を、ｇａｇ（ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（ｇｐ１６０およびｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ ｖｐｕ、ミニタンパク質（好ましくは、ｐ５５ ｇａｇおよびｇｐ１４０ｖ欠失）から選択することができる。ＨＩＶ抗原は、１つまたは複数の以下の株に由来し得る：ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４。
【０１２８】
レオウイルス：ウイルス抗原は、レオウイルス（オルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルス、またはコルティウイルスなど）に由来し得る。レオウイルス抗原を、構造タンパク質λ１、λ２、λ３、μ１、μ２、σ１、σ２、もしくはσ３、または非構造タンパク質σＮＳ、μＮＳ、もしくはσ１ｓから選択することができる。好ましいレオウイルス抗原は、ロタウイルスに由来し得る。ロタウイルス抗原を、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４、またはＮＳＰ５から選択することができる。好ましいロタウイルス抗原には、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、およびＶＰ７が含まれる。
【０１２９】
パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルス（パルボウイルスＢ１９など）に由来し得る。パルボウイルス抗原を、ＶＰ−１、ＶＰ−２、ＶＰ−３、ＮＳ−１、およびＮＳ−２から選択することができる。好ましくは、パルボウイルス抗原は、キャプシドタンパク質ＶＰ−２である。
【０１３０】
デルタ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ、特に、ＨＤＶ由来のδ−抗原（例えば、米国特許第５，３７８，８１４号を参照のこと）に由来し得る。
【０１３１】
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原は、ＨＥＶに由来し得る。
【０１３２】
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原は、ＨＧＶに由来し得る。
【０１３３】
ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、ヒトヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、およびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）など）に由来し得る。ヒトヘルペスウイルス抗原を、最初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）、および後期タンパク質（γ）から選択することができる。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ−１株またはＨＳＶ−２株に由来し得る。ＨＳＶ抗原を、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）、または免疫回避タンパク質（ｇＣ、ｇＥ、またはｇＩ）から選択することができる。ＶＺＶ抗原を、コアタンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質、テグメントタンパク質、またはエンベロープタンパク質から選択することができる。弱毒化生ＶＺＶワクチンは市販されている。ＥＢＶ抗原を、初期抗原（ＥＡ）タンパク質、ウイルスキャプシド抗原（ＶＣＡ）、および膜抗原（ＭＡ）の糖タンパク質から選択することができる。ＣＭＶ抗原を、キャプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質（ｇＢおよびｇＨなど）、およびテグメントタンパク質から選択することができる。
【０１３４】
パポーバウイルス：抗原は、パポーバウイルス（パピローマウイルスおよびポリオーマウイルスなど）に由来し得る。パピローマウイルスには、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３、および６５が含まれる。好ましくは、ＨＰＶ抗原は、血清型６、１１、１６、または１８に由来する。ＨＰＶ抗原を、キャプシドタンパク質（Ｌ１）および（Ｌ２）またはＥ１〜Ｅ７、またはその融合物から選択することができる。ＨＰＶ抗原を、好ましくは、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）に配合する。ポリオーマウイルス（Ｐｏｌｙｏｍｙａｖｉｒｕｓ）には、ＢＫウイルスおよびＪＫウイルスが含まれる。ポリオーマウイルス抗原を、ＶＰ１、ＶＰ２、またはＶＰ３から選択することができる。
【０１３５】
Ｖａｃｃｉｎｅｓ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｌｏｔｋｉｎ ａｎｄ Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ ｅｄ．２００４）；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｕｒｒａｙら、ｅｄ．２００２）；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ ｅｄ．１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ ａｎｄ Ｄ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ，ｅｄｓ．１９９１）（本発明の組成物と併せて意図される）に含まれる抗原、組成物、方法、および微生物がさらに提供される。
【０１３６】
Ｃ．真菌抗原
本発明で用いる真菌抗原は、１つまたは複数の下記の真菌に由来し得る。
【０１３７】
真菌抗原は、皮膚糸状菌（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｒｅｓ）（エピデルモフィトン・フロッコーサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｕｓｕｍ）、ミクロスポルム・オドウィニ（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ａｕｄｏｕｉｎｉ）、ミクロスポルム・カニス（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｃａｎｉｓ）、ミクロスポルム・ディストルツム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｄｉｓｔｏｒｔｕｍ）、ミクロスポルム・エクイヌム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｅｑｕｉｎｕｍ）、ミクロスポルム・ジプスム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｇｙｐｓｕｍ）、ミクロスポルム・ナヌム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｎｕｍ）、トリコフィトン・コンセントリクム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃｕｍ）、トリコフィトン・エクイヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｅｑｕｉｎｕｍ）、トリコフィトン・ガリネ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇａｌｌｉｎａｅ）、トリコフィトン・ジプセウム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇｙｐｓｅｕｍ）、トリコフィトン・メグニニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｇｎｉｎｉ）、トリコフィトン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィトン・キンケアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｑｕｉｎｃｋｅａｎｕｍ）、トリコフィトン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ）、トリコフィトン・シェーンレイニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎｉ）、トリコフィトン・トンスランス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｔｏｎｓｕｒａｎｓ）、トリコフィトン・ベルコスム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ）、Ｔ．ベルコスム・アルブム変種（Ｔ．ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ ｖａｒ．ａｌｂｕｍ）、ジスコイデス変種（ｖａｒ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｓ）、オクラセイム変種（ｖａｒ．ｏｃｈｒａｃｅｕｍ）、トリコフィトン・ビオラセウム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）、および／またはトリコフィトン・ファビホルメ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｆａｖｉｆｏｒｍｅ）が含まれる）に由来し得る。
【０１３８】
真菌病原体は、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、クロコウジカビ、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）、アスペルギルス・シドウィ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉ）、アスペルギルス・フラバタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖａｔｕｓ）、アスペルギルス・グラウクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ）、ブラストシゾマイセス・カピタタス（Ｂｌａｓｔｏｓｃｈｉｚｏｍｙｃｅｓ ｃａｐｉｔａｔｕｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・エノラーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ ｅｎｏｌａｓｅ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・パラプシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・ステラトイデア（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ）、カンジダ・クセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｕｓｅｉ）、カンジダ・パラクエセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｋｗｓｅｉ）、カンジダ・ルシタニエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）、カンジダ・シュードトロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・グイリエルモンジ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉ）、クラドスポリム・カリオニイ（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃａｒｒｉｏｎｉｉ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、ブラストミセス・デルマチディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ゲオトリクム・クラバタム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｌａｖａｔｕｍ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、肺炎桿菌、南アメリカ分芽菌、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、ピシウムン・インシジオスム（Ｐｙｔｈｉｕｍｎ ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ）、ピチロスポルム・オバール（Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｖａｌｅ）、酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、サッカロマイセス・ブラウディ、サッカロミセス・ポンベ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）、スケドスポリウム・アピオスペルム（Ｓｃｅｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｐｉｏｓｐｅｒｕｍ）、スポロトリクス・シェンキ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、トリコスポロン・ベイゲリ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ペニシリウム・マルネフェイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）、マラセジア（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ）属菌種、フォンセケア（Ｆｏｎｓｅｃａｅａ）属菌種、ワンギエラ（Ｗａｎｇｉｅｌｌａ）属菌種、スポロトリクス（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）属菌種、バシジオボラス（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属菌種、コニディオボラス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属菌種、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属菌種、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属菌種、アブシディア（Ａｂｓｉｄｉａ）属菌種、モルチエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属菌種、クニンガメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ）属菌種、サクセネア（Ｓａｋｓｅｎａｅａ）属菌種、アルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）属菌種、カーブラリア（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ）属菌種、ヘルミントスポリウム（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）属菌種、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属菌種、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属菌種、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属菌種、アモノリニア（Ｍｏｎｏｌｉｎｉａ）属菌種、リゾクトニア（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）属菌種、ペシロマイセス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）属菌種、ピトマイセス（Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ）属菌種、およびクラドスポリウム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）属菌種に由来し得る。
【０１３９】
真菌抗原の産生プロセスは、当該分野で周知である（米国特許第６，３３３，１６４号を参照のこと）。好ましい方法では、その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞から得ることができる不溶性画分から抽出および分離した可溶化画分を、プロセスが、生きた真菌細胞を得る工程；その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞を得る工程；その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞を破裂させる工程；不溶性画分を得る工程；ならびに不溶性画分から可溶化画分を抽出および分離する工程を含むという点で特徴づけた。
【０１４０】
Ｄ．ＳＴＤ抗原
本発明の組成物は、１つまたは複数の性感染症（ＳＴＤ）由来の抗原を含むことができる。かかる抗原は、ＳＴＤ（クラミジア、陰部ヘルペス、肝炎（ＨＣＶなど）、陰部疣贅、淋病、梅毒、および／または軟性下疳など）を予防または治療することができる（ＷＯ００／１５２５５号を参照のこと）。抗原は、１つまたは複数のウイルスまたは細菌のＳＴＤに由来し得る。本発明で用いるウイルスＳＴＤ抗原は、例えば、ＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、および肝炎（ＨＣＶ）に由来し得る。本発明で用いる細菌ＳＴＤ抗原は、例えば、淋菌、トラコーマクラミジア、梅毒トレポネーマ、軟性下疳菌、大腸菌、およびストレプトコッカス・アガラクチアに由来し得る。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１４１】
Ｅ．呼吸器抗原
本発明の組成物は、呼吸器疾患を引き起こす病原体由来の１つまたは複数の抗原を含むことができる。例えば、呼吸器抗原は、呼吸器ウイルス（オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶ、およびコロナウイルス（ＳＡＲＳ）など）に由来し得る。呼吸器抗原は、呼吸器疾患を引き起こす細菌（肺炎連鎖球菌、緑膿菌、百日咳菌、結核菌、肺炎マイコプラズマ、クラミジア・ニューモニエ、炭疽菌、およびカタル球菌など）に由来し得る。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１４２】
Ｆ．小児ワクチン抗原
本発明の組成物は、小児被験体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。小児被験体は、典型的には、約３歳未満、約２歳未満、または約１歳未満である。小児抗原を、６ヶ月、１年、２年、または３年にわたって複数回投与することができる。小児抗原は、小児集団を標的することができるウイルスおよび／または小児集団が感染に感受性を示すウイルスに由来し得る。小児ウイルス抗原には、１つまたは複数のオルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、および水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）由来の抗原が含まれる。小児細菌抗原には、１つまたは複数の肺炎連鎖球菌、ナイセリア・メニンギティディス、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、カタル球菌、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）、緑膿菌、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）、および大腸菌由来の抗原が含まれる。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１４３】
Ｇ．高齢者または免疫無防備状態の個体での使用に適切な抗原
本発明の組成物は、高齢者または免疫無防備状態の個体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。かかる個体に、より頻繁に、標的化抗原に対するその免疫応答を改良するためにより高い用量またはアジュバント化（ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ）処方物でワクチン接種することが必要であり得る。高齢者または免疫無防備状態の個体での使用のために標的化することができる抗原には、１つまたは複数の以下の病原体由来の抗原が含まれる：ナイセリア・メニンギティディス、肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、カタル球菌、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）、緑膿菌、レジオネラ・ニューモフィラ、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）、フェカリス菌、ピロリ菌、肺炎クラミジア（Ｃｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１４４】
Ｈ．青年期ワクチンでの使用に適切な抗原
本発明の組成物は、青年期被験体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。青年期は、以前に投与した小児ワクチンの追加免疫が必要であり得る。青年期での使用に適切であり得る小児抗原は、上に記載されている。さらに、性行為の開始前に防御免疫または治療的免疫を確実にするために、ＳＴＤ病原体由来の抗原を投与するために青年期を標的化することができる。青年期での使用に適切であり得るＳＴＤ抗原は、上に記載されている。
【０１４５】
Ｉ．抗原処方物
本発明の他の態様では、吸着抗原を有する微粒子の生成方法を提供する。本方法は、（ａ）（ｉ）水、（ｉｉ）界面活性剤、（ｉｉｉ）有機溶媒、および（ｉｖ）ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、およびポリシアノアクリラートからなる群から選択される生分解性ポリマーを含む混合物の分散によって乳濁液を準備する工程を含む。ポリマーは、典型的には、有機溶媒と比較して約１％〜約３％の濃度の混合物で存在する一方で、界面活性剤は、典型的には、約０．００００１：１〜約０．１：１（より典型的には、約０．０００１：１〜約０．１：１、約０．００１：１〜約０．１：１、または約０．００５：１〜約０．１：１）の水：水、界面活性剤：ポリマー比で混合物中に存在する、準備する工程、（ｂ）乳濁液から有機溶媒を除去する工程、および（ｃ）微粒子表面上に抗原を吸着させる工程を含む。一定の実施形態では、生分解性ポリマーは、有機溶媒と比較して約３％〜約１０％の濃度で存在する。
【０１４６】
本明細書中で使用するための微粒子を、滅菌可能で、非毒性を示し、生分解性を示す材料から形成するであろう。かかる材料には、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、ＰＡＣＡ、およびポリシアノアクリラートが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、本発明と共に使用するための微粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、特に、ポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）またはＤ，Ｌ−ラクチドとグリコリドまたはグリコール酸とのコポリマー（ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリドなど）（「ＰＬＧ」または「ＰＬＧＡ」）、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンとのコポリマーに由来する。微粒子は、種々の分子量、ＰＬＧなどのコポリマーの場合、種々のラクチド：グリコリド比を有する任意の種々の重合開始材料に由来し得、その選択は、同時投与される高分子に一部依存して、多くの選択肢があるであろう。これらのパラメータは、以下により完全に考察されている。
【０１４７】
さらなる抗原には、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物も含まれ得る。
【０１４８】
さらなる処方方法および抗原（特に、腫瘍抗原）は、米国特許出願番号０９／５８１，７７２号に記載されている。
【０１４９】
Ｊ．抗原についての引例
以下の引例は、本発明の組成物と併せて有用な抗原を含む。
【０１５０】
【化１】
【０１５１】
【化２】
上記で引用した全ての特許、特許出願、および学術論文の内容は、本明細書中で完全に記載されているかのように参考として援用される。
【０１５２】
糖類抗原または炭水化物抗原を使用する場合、好ましくは、この抗原を担体タンパク質と接合して免疫原性を増強する。Ｒａｍｓａｙら（２００１）Ｌａｎｃｅｔ３５７（９２５１）：１９５−１９６；Ｌｉｎｄｂｅｒｇ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ２８−３６；Ｂｕｔｔｅｒｙ ＆ Ｍｏｘｏｎ（２０００）Ｊ Ｒ Ｃｏｌｌ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｌｏｎｄ ３４：１６３−１６８；Ａｈｍａｄ ＆ Ｃｈａｐｎｉｃｋ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １３：１１３−１３３，ｖｉｉ；Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４７：５６３−５６７；欧州特許第０４７７５０８号；米国特許第５，３０６，４９２号；ＷＯ９８／４２７２１号；Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ（ｅｄｓ．Ｃｒｕｓｅら）ＩＳＢＮ ３８０５５４９３２６、特に、ｖｏｌ．１０：４８−１１４；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ＩＳＢＮ：０１２３４２３３６８ ｏｒ ０１２３４２３３５Ｘを参照のこと。好ましい担体タンパク質は、細菌毒素またはトキソイド（ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドなど）である。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドが特に好ましい。
【０１５３】
他の担体ポリペプチドには、髄膜炎菌外膜タンパク質（ＥＰ−Ａ−０３７２５０１号）、合成ペプチド（ＥＰ−Ａ−０３７８８８１号およびＥＰ−Ａ０４２７３４７号）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２号およびＷＯ９４／０３２０８号）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８号およびＥＰ Ａ ０４７１１７７号）、インフルエンザ菌由来のタンパク質Ｄ（ＷＯ００／５６３６０号）、サイトカイン（ＷＯ９１／０１１４６号）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１号）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７号）などが含まれる。混合物がセリグラフ（ｓｅｒｉｇｒａｐｈ）ＡおよびＣの両方由来の莢膜糖類を含む場合、ＭｅｎＡ糖類：ＭｅｎＣ糖類の比（ｗ／ｗ）は１を超える（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１、またはそれを超える）ことが好ましい場合がある。異なる糖類を、同型または異なる型の担体タンパク質に接合することができる。必要に応じて任意の適切なリンカーを使用した任意の適切な接合反応を使用することができる。
【０１５４】
必要に応じて、有毒タンパク質抗原を解毒することができる（例えば、化学的手段および／または遺伝子手段による百日咳毒素の解毒）。
【０１５５】
薬学的に許容可能な担体
本発明の組成物は、典型的には、上記成分に加えて、１つまたは複数の「薬学的に許容可能な担体」を含むであろう。これらには、担体自体が組成物を投与される個体に有害な抗体の産生を誘導しない任意の担体が含まれる。適切な担体は、典型的には、巨大でゆっくり代謝される高分子（タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質凝集体（油滴またはリポソームなど）など）である。かかる担体は、当業者に周知である。組成物はまた、希釈剤（水、生理食塩水、グリセロールなど）を含むことができる。さらに、補助剤（湿潤剤または乳化剤およびｐＨ緩衝物質など）が存在し得る。薬学的に許容可能な成分の徹底的な考察は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．２０ｔｈ ｅｄ．，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２で得られる。
【０１５６】
免疫調節薬
アジュバント
本発明のワクチンを、他の免疫調節薬と併せて投与することができる。特に、組成物は、通常、アジュバントを含むであろう。本発明と共に使用するためのアジュバントには、１つまたは複数の下記のアジュバントが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５７】
Ａ．ミネラル含有組成物
本発明でのアジュバンとしての使用に適切なミネラル含有組成物は、ミネラル塩（アルミニウム塩およびカルシウム塩など）を含む。本発明は、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシホスフェート、オルトホスフェート）、硫酸塩などのミネラル塩（例えば、ｃｈａｐｔｅｒｓ８ ＆ ９ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ…（１９９５）ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ．ＩＳＢＮ：０３０６４４８６７Ｘ．Ｐｌｅｎｕｍ．）または異なるミネラル化合物の混合物（例えば、リン酸塩アジュバントと水酸化物アジュバントとの混合物（任意選択的にリン酸塩が過剰））を含み、この化合物は任意の適切な形態（例えば、ゲル、血漿、無定形など）をとり、塩に吸着していることが好ましい。ミネラル含有組成物を、金属塩の粒子として処方することもできる（ＷＯ００／２３１０５号）。
【０１５８】
アルミニウム塩を、Ａｌ３＋の用量が０．２ｍｇ／用量と１．０ｍｇ／用量との間であるように本発明のワクチン中に含めることができる。
【０１５９】
１つの実施形態では、本発明で用いるアルミニウムベースのアジュバントは、ミョウバン（硫酸アルミニウムカリウム（ＡｌＫ（ＳＯ４）２））またはミョウバン誘導体（リン酸緩衝剤中で抗原とミョウバンとを混合し、その後に滴定し、水酸化アンモニウムまたは水酸化ナトリウムなどの塩基で沈殿させることによってインサイチュで形成したミョウバン誘導体など）である。
【０１６０】
本発明のワクチン処方で用いる別のアルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）３）または結晶オキシ水素化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）（優れた吸着剤であり、表面積が約５００ｍ２／ｇである）である。あるいは、リン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ４）またはヒドロキシリン酸アルミニウム（水酸化アルミニウムアジュバントのいくつかまたは全てのヒドロキシル基の代わりにリン酸基を含む）を提供する。本明細書中で提供する好ましいリン酸アルミニウムアジュバントは無定形であり、酸性、塩基性、および中性の媒質中に可溶である。
【０１６１】
別の実施形態では、本発明のアジュバントは、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムの両方を含む。そのより特定の実施形態では、アジュバントは、水酸化アルミニウムよりも大量のリン酸アルミニウムを有する（２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または９：１超などのリン酸アルミニウム：水酸化アルミニウムの重量比）。さらにより詳細には、ワクチン中のアルミニウム塩は、０．４〜１．０ｍｇ／ワクチン用量、０．４〜０．８ｍｇ／ワクチン用量、０．５〜０．７ｍｇ／ワクチン用量、または約０．６ｍｇ／ワクチン用量で存在する。
【０１６２】
一般に、好ましいアルミニウムベースのアジュバントまたは複数のアルミニウムベースのアジュバントの比率（リン酸アルミニウム：水酸化アルミニウムなど）を、抗原が所望のｐＨでアジュバントとして逆の電荷を有するように分子間の静電気引力を至適化することによって選択する。例えば、リン酸アルミニウムアジュバント（等電点＝４）はリゾチームを吸着するが、ｐＨ７．４でアルブミンを吸着しない。アルブミンが標的である場合、水酸化アルミニウムアジュバントを選択するであろう（ｉｅｐ １１．４）。あるいは、リン酸塩での水酸化アルミニウムの前処理によってその等電点が低下し、より塩基性の高い抗原に好ましいアジュバントとなる。
【０１６３】
Ｂ．油性乳濁液
本発明でのアジュバントとしての使用に適切な油性乳濁液組成物には、スクアレン−水乳濁液（ＭＦ５９（ミクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を使用して、５％スクアレン、０．５％ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．５％Ｓｐａｎ８５をサブミクロン粒子に処方したもの）など）が含まれる。ＷＯ９０／１４８３７号を参照のこと。Ｐｏｄｄａ，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２６７３−２６８０；Ｆｒｅｙら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：４２３４−４２３７も参照のこと。ＭＦ５９を、ＦＬＵＡＤ（商標）インフルエンザウイルス３価サブユニットワクチンにおけるアジュバントとして使用する。
【０１６４】
組成物中での使用に特に好ましいアジュバントは、サブミクロン水中油型乳濁液である。本明細書中での使用に好ましいサブミクロン水中油型乳濁液は、種々の量のＭＴＰ−ＰＥを任意選択的に含むスクアレン／水乳濁液（４〜５％ ｗ／ｖ スクアレン、０．２５〜１．０％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０□（ポリオキシエチレンソルビタン（ｐｏｌｙｏｘｙｅｌｔｈｙｌｅｎｅｓｏｒｂｉｔａｎ）モノオレアート、および／または０．２５〜１．０％ ＳＰＡＮ ８５（商標）（ソルビタントリオレアート）、および任意選択的にＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−ヒドロキシホスホホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含むサブミクロン水中油型乳濁液（例えば、「ＭＦ５９」として公知のサブミクロン水中油型乳濁液（国際公開番号ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号、およびＯｔｔら、ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．ｅｄｓ．）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５，ｐｐ．２７７−２９６））など）である。ＭＦ５９は、４〜５％ ｗ／ｖ スクアレン（例えば、４．３％）、０．２５〜０．５％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．５％ ｗ／ｖ ＳＰＡＮ ８５（商標）を含み、任意選択的に種々の量のＭＴＰ−ＰＥを含み、これがＭｏｄｅｌ １１０Ｙミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｎｅｗｔｏｎ、ＭＡ）などのミクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子に処方されている。例えば、ＭＴＰ−ＰＥは、約０〜５００μｇ／用量、より好ましくは０〜２５０μｇ／用量、最も好ましくは０〜１００μｇ／用量で存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「ＭＦ５９−０」は、ＭＴＰ−ＰＥを欠く上記サブミクロン水中油型乳濁液いう一方で、用語「ＭＦ５９−ＭＴＰ」は、ＭＴＰ−ＰＥを含む処方物を示す。例えば、「ＭＦ５９−１００」は、１００μｇ ＭＴＰ−ＰＥ／用量などを含む。ＭＦ６９（本明細書中で用いる別のサブミクロン水中油型乳濁液）は、４．３％ ｗ／ｖ スクアレン、０．２５％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．７５％ ｗ／ｖ ＳＰＡＮ ８５（商標）、および任意選択的にＭＴＰ−ＰＥを含む。さらに別のサブミクロン水中油型乳濁液は、ＳＡＦとしても公知のＭＦ７５であり、これは１０％スクアレン、０．４％ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、５％プルロニックブロック重合体Ｌ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロン乳濁液にミクロ流体化もされている。ＭＦ７５−ＭＴＰは、ＭＴＰ（１００〜４００μｇ ＭＴＰ−ＰＥ／用量など）を含むＭＦ７５処方物を示す。
【０１６５】
組成物で用いるサブミクロン水中油型乳濁液、その作製方法、および免疫賦活剤（ムラミルペプチドなど）は、ＷＯ９０／１４８３７号および米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号に詳述されている。
【０１６６】
フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。
【０１６７】
Ｃ．サポニン処方物
サポニン処方物を、本発明でアジュバンとして使用することもできる。サポニンは、ステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種群であり、広範な植物種の樹皮、葉、幹、根、さらに花弁中で見出される。バラ科キラヤの幹から単離したサポニンは、アジュバンとして広く研究されている。スミラックス・オルナタ（Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ）（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、シュッコンカスミソウ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）（ブライドベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））、およびサボンソウ（ソープルート（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））由来のサポニンを購入することもできる。サポニンアジュバント処方物には、精製処方物（ＱＳ２１など）および脂質処方物（ＩＳＣＯＭなど）が含まれる。
【０１６８】
サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィ（ＨＰ−ＴＬＣ）および逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用して精製されている。これらの技術を使用した特定の精製画分（ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−Ｂ、およびＱＨ−Ｃが含まれる）が同定されている。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の生成方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン処方物はまた、コレステロールなどのステロールを含むこともできる（ＷＯ９６／３３７３９号を参照のこと）。
【０１６９】
サポニンとコレステロールとの組み合わせを使用して、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる固有の粒子を形成することができる。ＩＳＣＯＭは、典型的には、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質も含む。任意の公知のサポニンを、ＩＳＣＯＭで使用することができる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、１つまたは複数のＱｕｉｌ Ａ、ＱＨＡ、およびＱＨＣを含む。ＩＳＣＯＭは、ＥＰ０１０９９４２号、ＷＯ９６／１１７１１号、およびＷＯ９６／３３７３９号にさらに記載されている。任意選択的に、ＩＳＣＯＭＳは、さらなる界面活性剤を欠いていてもよい。ＷＯ００／０７６２１号を参照のこと。
【０１７０】
サポニンベースのアジュバント開発の概説を、Ｂａｒｒ，ら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：２４７−２７１に見出すことができる。Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，ら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：３２１−３３８も参照のこと。
【０１７１】
Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。これらの構造物は、一般に、任意選択的にリン脂質と組み合わせた、またはこれを用いて処方したウイルス由来の１つまたは複数のタンパク質を含む。これらは、一般に、非病原性で複製せず、一般に、任意の未変性のウイルスゲノムを含まない。ウイルスタンパク質を、組換え的に産生し、または全ウイルスから単離することができる。ビロソームまたはＶＬＰでの使用に適切なこれらのウイルスタンパク質には、インフルエンザウイルス（ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス（コアタンパク質またはキャプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビス・ウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡ−ファージ、Ｑβ−ファージ（コートタンパク質など）、ＧＡ−ファージ、ｆｒ−ファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１など）由来のタンパク質が含まれる。ＶＬＰは、ＷＯ０３／０２４４８０号、ＷＯ０３／０２４４８１号、Ｎｉｉｋｕｒａら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００２）２９３：２７３−２８０；Ｌｅｎｚら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１）５２４６−５３５５；Ｐｉｎｔｏ，ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００３）１８８：３２７−３３８；およびＧｅｒｂｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００１）７５（１０）：４７５２−４７６０でさらに考察されている。ビロソームは、例えば、Ｇｌｕｃｋら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００２）２０：Ｂ１０−Ｂ１６でさらに考察されている。免疫増強する再構築されたインフルエンザビロソーム（ＩＲＩＶ）を、鼻腔内３価ＩＮＦＬＥＸＡＬ（商標）製品（Ｍｉｓｃｈｌｅｒ ＆ Ｍｅｔｃａｌｆｅ（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ ２０ Ｓｕｐｐｌ ５：Ｂ１７−２３）およびＩＮＦＬＵＶＡＣ ＰＬＵＳ（商標）製品におけるサブユニット抗原送達系として使用する。
【０１７２】
Ｅ．細菌または微生物誘導体
本発明での使用に適切なアジュバントには、以下などの細菌または微生物誘導体が含まれる。
【０１７３】
（１）腸内細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）の非毒性誘導体
かかる誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が含まれる。３ｄＭＰＬは、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａと４、５、または６アシル化鎖との混合物である。３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「小粒子」形態は、ＥＰ０６８９４５４号に開示されている。かかる３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２ミクロン膜で濾過滅菌するのに十分に小さい（ＥＰ０６８９４５４号）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ模倣物（アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ５２９）など）が含まれる。Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ９：２２７３−２２７８を参照のこと。
【０１７４】
（２）脂質Ａ誘導体
脂質Ａ誘導体には、大腸菌（ＯＭ−１７４）由来の脂質Ａ誘導体が含まれる。ＯＭ−１７４は、例えば、Ｍｅｒａｌｄｉら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：２４８５−２４９１およびＰａｊａｋ，ら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：８３６−８４２に記載されている。
【０１７５】
（３）免疫刺激性オリゴヌクレオチド
本発明でのアジュバントとしての使用に適切な免疫刺激性オリゴヌクレオチドには、ＣｐＧモチーフ（非メチル化シトシンの後にグアノシンを含み、リン酸結合によって結合した配列）を含むヌクレオチド配列が含まれる。回分配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む細菌二本鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドも免疫刺激性を示すことが示されている。
【０１７６】
ＣｐＧは、ホスホロチオアート修飾物などのヌクレオチド修飾物／アナログが含まれ得、二本鎖または一本鎖であり得る。任意選択的に、グアノシンを、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンなどのアナログと置換することができる。可能なアナログ置換の例については、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）３１（９）：２３９３−２４００；ＷＯ０２／２６７５７号およびＷＯ９９／６２９２３号を参照のこと。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、Ｋｒｉｅｇ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００３）９（７）：８３１−８３５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ，ら、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）３２：１７９−１８５；ＷＯ９８／４０１００号；米国特許第６，２０７，６４６号；米国特許第６，２３９，１１６号および米国特許第６，４２９，１９９号でさらに考察されている。
【０１７７】
ＣｐＧ配列を、ＴＬＲ９（モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなど）に指向することができる。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（ｐａｒｔ ３）：６５４−６５８を参照のこと。ＣｐＧ配列は、Ｔｈ１免疫応答の誘導に特異的であり得るか（ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮなど）、Ｂ細胞応答の誘導により特異的であり得る（ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮなど）。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１７０（８）：４０６１−４０６８；Ｋｒｉｅｇ，ＴＲＥＮＤＳ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００２）２３（２）：６４−６５およびＷＯ０１／９５９３５号で考察されている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【０１７８】
好ましくは、５’末端が受容体認識のために接近することができるようにＣｐＧオリゴヌクレオチドを構築する。任意選択的に、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列をその３’末端で結合して、「イムノマー」を形成することができる。例えば、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、ＢＢＲＣ（２００３）３０６：９４８−９５３；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（ｐａｒｔ ３）：６６４−６５８；Ｂｈａｇａｔら、ＢＢＲＣ（２００３）３００：８５３−８６１、およびＷＯ０３／０３５８３６号を参照のこと。
【０１７９】
（４）ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体
細菌ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体を、本発明でアジュバントとして使用することができる。好ましくは、タンパク質は、大腸菌（すなわち、大腸菌熱不安定性エンテロトキシン（「ＬＴ」）、コレラ菌（「ＣＴ」）、または百日咳菌（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての解毒ＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は、ＷＯ９５／１７２１１号に記載されており、非経口アジュバントとしてはＷＯ９８／４２３７５号に記載されている。好ましくは、アジュバントは、解毒ＬＴ変異体（ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴＲ１９２Ｇなど）である。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）のアジュバントとしての使用を、以下の参考文献で見出すことができる：Ｂｅｉｇｎｏｎ，ら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）７０（６）：３０１２−３０１９；Ｐｉｚｚａ，ら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２５３４−２５４１；Ｐｉｚｚａ，ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（２０００）２９０（４−５）：４５５−４６１；Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０００）６８（９）：５３０６−５３１３；Ｒｙａｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９９）６７（１２）：６２７０−６２８０；Ｐａｒｔｉｄｏｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．（１９９９）６７（３）：２０９−２１６；Ｐｅｐｐｏｌｏｎｉら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２００３）２（２）：２８５−２９３；およびＰｉｎｅら、（２００２）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ（２００２）８５（１−３）：２６３−２７０。アミノ酸置換についての数値の基準は、好ましくは、Ｄｏｍｅｎｉｇｈｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（１９９５）１５（６）：１１６５−１１６７に記載のＡＤＰ−リボシル化毒素のＡおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０１８０】
Ｆ．生体接着剤および粘膜接着剤
生体接着剤および粘膜接着剤を、本発明でアジュバンとして使用することもできる。適切な生体接着剤には、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフィア（Ｓｉｎｇｈら（２００１）Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌｅ．７０：２６７−２７６）または粘膜接着剤（ポリアクリル酸の架橋誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖類、およびカルボキシメチルセルロースなど）が含まれる。キトサンおよびその誘導体を、本発明でアジュバンとして使用することもできる。ＷＯ９９／２７９６０を参照のこと。
【０１８１】
Ｇ．微粒子
微粒子を、本発明でアジュバンとして使用することもできる。微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）を、生分解性且つ非毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトンなど）（ポリ（ラクチドコグリコリド）が好ましい）から形成し、任意選択的に、負電荷の表面（例えば、ＳＤＳ）または正電荷の表面（例えば、ＣＴＡＢなどの陽イオン性界面活性剤）を有するように処理する。
【０１８２】
Ｈ．リポソーム
アジュバンとしての使用に適切なリポソーム処方物の例は、米国特許第６，０９０，４０６号、米国特許第５，９１６，５８８号、および欧州特許第０６２６１６９号に記載されている。
【０１８３】
Ｉ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物
本発明での使用に適切なアジュバントには、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが含まれる。ＷＯ９９／５２５４９号。かかる処方物には、さらに、オクトキシノール（ＷＯ０１／２１２０７）と組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤および少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（オクトキシノールなど）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（ＷＯ０１／２１１５２号）が含まれる。
【０１８４】
好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０１８５】
Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、Ａｎｄｒｉａｎｏｖら、“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｌ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ｂｙ ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａｑｕｅｏｕｓ ｐｏｌｙｐｈｏｐｈａｚｅｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（１９９８）１９（１−３）：１０９−１１５ ａｎｄ Ｐａｙｎｅら、“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ Ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ Ｍａｔｒｉｃｅｓ”，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗ（１９９８）３１（３）：１８５−１９６に記載されている。
【０１８６】
Ｋ．ムラミルペプチド
本発明でのアジュバンとしての使用に適切なムラミルペプチドの例には、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮアセチルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミニル−ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が含まれる。
【０１８７】
Ｌ．イミダゾキノリン化合物
本発明でのアジュバンとしての使用に適切なイミダゾキノリン化合物の例には、イミキモドおよびそのアナログが含まれ、Ｓｔａｎｌｅｙ，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２００２）２７（７）：５７１−５７７；Ｊｏｎｅｓ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ（２００３）４（２）：２１４−２１８；米国特許第４，６８９，３３８号、同第５，３８９，６４０号、同第５，２６８，３７６号、同第４，９２９，６２４号、同第５，２６６，５７５号、同第５，３５２，７８４号、同第５，４９４，９１６号、同第５，４８２，９３６号、同第５，３４６，９０５号、同第５，３９５，９３７号、同第５，２３８，９４４号、および同第５，５２５，６１２号にさらに記載されている。
【０１８８】
Ｍ．チオセミカルバゾン化合物
チオセミカルバゾン化合物、ならびに本発明でのアジュバンとしての使用に適切な全ての化合物の処方、製造、およびスクリーニング方法の例には、ＷＯ０４／６０３０８号に記載のものが含まれる。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核球の刺激で特に有効である。
【０１８９】
Ｎ．トリプタントリン化合物
トリプタントリン化合物、ならびに本発明でのアジュバンとしての使用に適切な全ての化合物の処方、製造、およびスクリーニング方法の例には、ＷＯ０４／６４７５９号に記載のものが含まれる。トリプタントリン化合物は、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核球の刺激で特に有効である。
【０１９０】
本発明はまた、上記で同定した１つまたは複数のアジュバントの態様の組み合わせを含むこともできる。例えば、以下のアジュバント組成物を、本発明で使用することができる。
【０１９１】
（１）サポニンおよび水中油型乳濁液（ＷＯ９９／１１２４１号）；
（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（ＷＯ９４／００１５３号を参照のこと）；
（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；
（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ１２（任意選択的に、＋ステロール）（ＷＯ９８／５７６５９号）；
（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型乳濁液との組み合わせ（欧州特許出願第０８３５３１８号、０７３５８９８号、および０７６１２３１号を参照のこと）；
（６）１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０、５％プロニック−ブロック重合体Ｌ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロン乳濁液にミクロ流体化されているか、ボルテックスしてより大きな粒子サイズの乳濁液を生成したＳＡＦ。
【０１９２】
（７）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））からなる群から選択される１つまたは複数の細菌細胞壁成分を含むＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）；および
（８）１つまたは複数のミネラル塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（３ｄＰＭＬなど）。
【０１９３】
（９）１つまたは複数のミネラル塩（アルミニウム塩など）＋免疫刺激性オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列など）。
【０１９４】
Ｏ．ヒト免疫調節薬
本発明でアジュバントとしての使用に適切なヒト免疫調節薬には、サイトカイン（インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子など）が含まれる。
【０１９５】
アルミニウム塩およびＭＦ５９は、注射用インフルエンザワクチンとの使用に好ましいアジュバントである。細菌毒素および生体接着剤は、粘膜由来ワクチン（経鼻用ワクチンなど）との使用に好ましいアジュバントである。
【０１９６】
上記で引用した全ての特許、特許出願、および学術論文の内容は、本明細書中で完全に記載されているかのように参考により組み込まれる。
【０１９７】
治療方法
本発明は、上記組成物を使用してＳＬＯ抗原に対する免疫応答を誘導または増大させる方法を提供する。免疫応答は、好ましくは防御的であり、抗体および／または細胞−媒介性免疫（全身免疫および粘膜免疫が含まれる）が含まれ得る。免疫応答には、ブースター免疫が含まれる。抗体を含む組成物を使用して、化膿連鎖球菌感染を治療することができる。
【０１９８】
十代および小児（よちよち歩きの子どもおよび乳児が含まれる）に、予防的用途でワクチンを投与することができ、治療用ワクチンを、典型的には、十代または成人に投与する。小児使用を意図するワクチンを、例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価する目的で成人に投与することもできる。
【０１９９】
本発明によって防止または治療することができる化膿連鎖球菌に起因する疾患には、咽頭炎（連鎖球菌性咽喉痛など）、猩紅熱、膿痂疹、丹毒、蜂巣炎、敗血、中毒性ショック症候群、壊死性筋膜炎、および後遺症（リウマチ熱および急性糸球体腎炎など）が含まれるが、これらに限定されない。組成物は、他の連鎖球菌（例えば、ＧＢＳ）に対しても有効であり得る。
【０２００】
免疫応答の有効性を決定する試験
治療上の処置の有効性を評価する１つの方法は、本発明の組成物の投与後にＧＡＳ感染をモニタリングすることを含む。予防的治療の有効性を評価する１つの方法は、組成物の投与後に本発明の組成物におけるＳＬＯ抗原に対する免疫応答をモニタリングすることを含む。
【０２０１】
本発明の免疫原性組成物の成分タンパク質の免疫原性を評価する別の方法は、組換え的にタンパク質を発現し、免疫ブロットによって患者の血清または粘膜分泌物をスクリーニングすることである。タンパク質と患者の血清との間の陽性反応は、患者が問題のタンパク質に対する免疫応答を事前に開始していることを示す（すなわち、タンパク質が免疫原である）。この方法を使用して、免疫優性タンパク質および／またはエピトープを同定することもできる。
【０２０２】
治療上の処置の有効性の別のチェック方法は、本発明の組成物の投与後のＧＡＳ感染のモニタリングを含む。予防的治療の有効性の１つのチェック方法は、組成物の投与後に本発明の組成物におけるＳＬＯ抗原に対する全身（ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ産生レベルのモニタリングなど）および粘膜（ＩｇＡ産生レベルのモニタリングなど）の両方の免疫応答をモニタリングすることを含む。典型的には、血清特異的抗体応答を免疫化後であるが攻撃誘発前に決定するのに対して、粘膜特異的抗体応答を免疫後且つ攻撃誘発後に決定する。
【０２０３】
本発明のワクチン組成物を、宿主（例えば、ヒト）投与前にインビトロおよびインビボ動物モデルで評価することができる。特に有用なマウスモデルには、腹腔内免疫化後に腹腔内攻撃誘発または鼻腔内攻撃誘発を行うマウスモデルが含まれる。
【０２０４】
本発明の免疫原性組成物の有効性を、ＧＡＳ感染の動物モデル（例えば、モルモットまたはマウス）を免疫原性組成物で攻撃誘発することによってインビボで決定することもできる。免疫原性組成物は、攻撃誘発血清型と同一の血清型に由来しても由来しなくても良い。好ましくは、免疫原性組成物は、攻撃誘発血清型と同一の血清型に由来する。より好ましくは、免疫原性組成物および／または攻撃誘発血清型は、Ｍ１、Ｍ３、Ｍ２３、および／またはその組み合わせからなるＧＡＳ血清型群に由来する。
【０２０５】
インビボ有効性モデルには、以下が含まれるが、これらに限定されない：（ｉ）ヒトＧＡＳ血清型を使用したマウス感染モデル、（ｉｉ）マウス適合ＧＡＳ株（特にマウスに病原性を示すＭ２３株など）を使用したマウスモデルであるマウス疾患モデル、および（ｉｉｉ）ヒトＧＡＳ分離株を使用した霊長類モデル。
【０２０６】
免疫応答は、ＴＨ１免疫応答およびＴＨ２免疫応答の一方または両方であり得る。免疫応答は、免疫応答の改良、増強、または変化であり得る。免疫応答は、全身免疫応答および粘膜免疫応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答は、全身および／または粘膜の応答の増強である。
【０２０７】
全身免疫および／または粘膜免疫の増強は、ＴＨ１免疫応答および／またはＴＨ２免疫応答の増強を反映している。好ましくは、免疫応答の増強には、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０２０８】
好ましくは、粘膜免疫応答はＴＨ２免疫応答である。好ましくは、粘膜免疫応答には、ＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０２０９】
活性化ＴＨ２細胞は抗体産生を増強し、それにより、細胞外感染に対する応答で有益である。活性化ＴＨ２細胞は、１つまたは複数のＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０を分泌することができる。ＴＨ２免疫応答により、さらなる防御のためにＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞を産生することができる。
【０２１０】
ＴＨ２免疫応答には、ＴＨ２免疫応答に関連する１つまたは複数のサイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０など）の増加またはＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞産生の増加の１つまたは複数が含まれ得る。好ましくは、ＴＨ２免疫応答の増強には、ＩｇＧ１産生の増加が含まれるであろう。
【０２１１】
ＴＨ１免疫応答には、ＣＴＬｌの増加、ＴＨ１免疫応答に関連する１つまたは複数のサイトカイン（ＩＬ−２、ＩＦＮγ、およびＴＮＦβなど）の増加、活性化マクロファージの増加、ＮＫ活性の増加、またはＩｇＧ２ａ産生の増加の１つまたは複数が含まれ得る。好ましくは、ＴＨ１免疫応答の増強には、ＩｇＧ２ａ産生の増加が含まれるであろう。
【０２１２】
本発明の免疫原性組成物、特に、１つまたは複数の本発明のＳＬＯ抗原を含む免疫原性組成物を、任意選択的にＴｈ１および／またはＴｈ２応答を誘発することができる免疫調節薬と共に、単独または他のＧＡＳ抗原と組み合わせて使用することができる。
【０２１３】
本発明はまた、１つまたは複数の免疫調節薬（ミネラル塩（アルミニウム塩など）など）およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む免疫原性組成物を含む。最も好ましくは、免疫原性組成物には、アルミニウム塩およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドの両方を含む。あるいは、免疫原性組成物は、ＡＤＰリボシル化毒素（解毒ＡＤＰリボシル化毒素など）およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む。好ましくは、１つまたは複数の免疫調節薬は、アジュバントを含む。アジュバントを、以下にさらに考察されたＴＨ１アジュバントおよびＴＨ２アジュバントからなる群の１つまたは複数から選択することができる。
【０２１４】
本発明の組成物は、好ましくは、ＧＡＳ感染に有効に対処するために、細胞媒介性免疫および体液性免疫応答の両方を誘発するであろう。この免疫応答は、好ましくは、長期継続（例えば、中和）抗体および１つまたは複数のＧＡＳ抗原に曝露した場合に迅速に応答することができる細胞媒介性免疫を惹起するであろう。
【０２１５】
１つの特に好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、中和抗体応答を誘発する１つまたは複数のＳＬＯ抗原および細胞媒介性免疫応答を誘発する１つまたは複数のＳＬＯ抗原を含む。このようにして、中和抗体応答は、最初のＧＡＳ感染を防止または阻害する一方で、増強されたＴｈ１細胞応答を誘発することができる細胞媒介性免疫応答はＧＡＳ感染のさらなる拡大を防止する。
【０２１６】
本発明の組成物を、一般に、患者に直接投与するであろう。本発明の組成物を、種々の異なる経路を介して単独または組成物の一部として投与することができる。一定の組成物は、より有効な免疫応答、好ましくはＣＭＩ応答が得られるか、副作用を誘導する可能性が低いか、投与がより容易になるように一定の経路を好み得る。
【０２１７】
送達方法には、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または間質注射）、直腸、経口（例えば、錠剤、スプレー）、膣、局所、経皮（例えば、ＷＯ９９／２７９６１号を参照のこと）、経皮（例えば、ＷＯ０２／０７４２４４号およびＷＯ０２／０６４１６２号を参照のこと）、鼻腔内（例えば、ＷＯ０３／０２８７６０号を参照のこと）、眼球、耳、および肺、または他の粘膜投与が含まれる。
【０２１８】
一例として、本発明の組成物を、全身経路、粘膜経路、または経皮経路を開始して投与することができるか、特定の組織に直接投与することができる。本明細書中で使用される場合、用語「全身投与」には、任意の非経口投与経路が含まれるが、これらに限定されない。特に、非経口投与には、皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、または胸骨内注射、静脈内、動脈内、または腎臓透析注入技術が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、全身非経口投与は筋肉内注射である。本明細書中で使用される場合、用語「粘膜投与」には、経口、鼻腔内、膣内、直腸内、気管内、腸、および眼投与が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１９】
投薬治療は、単回投与計画または複数回投与計画であり得る。複数回投与を、初回免疫計画および／または追加免疫計画で使用することができる。複数回投与計画では、同一または異なる経路（例えば、非経口初回刺激および粘膜追加免疫、粘膜初回刺激および非経口追加免疫など）によって種々の回収で投与することができる。
【０２２０】
本発明の組成物を、種々の形態で調製することができる。例えば、組成物を、溶液または懸濁液のいずれかとして注射可能な組成物として調製することができる。注射前に溶液、懸濁液、または液体ビヒクルにするのに適切な固体形態（例えば、凍結乾燥組成物）を調製することもできる。経口投与のための組成物（錠剤もしくはカプセル、スプレーとして、またはシロップ（任意選択的に、風味づけする）としてなど）を調製することができる。肺投与のための組成物を、例えば、微粉またはスプレーを使用した吸入器として調製することができる。組成物を、座剤またはペッサリーとして調製することができる。鼻、耳、または眼への投与のための組成物を、例えば、点滴薬として調製することができる。組成物は、患者への投与直前に組み合わせた組成物を再構成するようにデザインされたキット形態であり得る。かかるキットは、液体形態の１つまたは複数のＳＬＯまたは他の抗原および１つまたは複数の凍結乾燥抗原を含むことができる。
【０２２１】
ワクチンとして使用した免疫原性組成物は、免疫学的有効量のＳＬＯまたは他の抗原（または抗原をコードする核酸分子）または抗体、ならびに、必要に応じて、抗生物質などの任意の他の成分を含む。「免疫学的有効量」は、単回用量または一連の投与の一部として個体に投与した場合に測定可能な免疫応答を増加させるか臨床症状を防止または減少させる量である。
【０２２２】
本発明の免疫原性組成物を、抗生物質治療計画と組み合わせて投与することができる。１つの実施形態では、抗生物質を、本発明の抗原または１つまたは複数の本発明のＳＬＯ抗原を含む組成物の投与前に投与する。
【０２２３】
別の実施形態では、抗生物質を、１つまたは複数の本発明の表面曝露および／または表面結合ＳＬＯ抗原または１つまたは複数の本発明の表面曝露および／または表面結合ＳＬＯ抗原を含む組成物の投与後に投与する。ＧＡＳ感染治療での使用に適切な抗生物質の例には、ペニシリンもしくはその誘導体またはクリンダマイシン、セファロスポリン、糖ペプチド（例えば、バンコマイシン）、およびシクロセリンが含まれるが、これらに限定されない。
【０２２４】
しかし、組成物中の活性剤の量は、治療を受ける個体の健康状態および生理的状態、年齢、治療を受ける個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望の防御の程度、ワクチンの処方、治療を行う医師の医学的状況の評価、および他の関連要因に応じて変化する。この量は比較的広範であり、日常的試験によって決定することができる。
キット
本発明はまた、本発明の１つまたは複数の容器を含むキットを提供する。組成物は、個別の抗原と同様に、液体形態であり得るか凍結乾燥させることができる。組成物に適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が含まれる。容器を、種々の材料（ガラスまたはプラスチックが含まれる）から形成することができる。容器は、滅菌アクセスポートを有することができる（例えば、容器は、静脈内注射用溶液のバッグまたは皮下注射針によって突き刺すことができるストッパを有するバイアルであり得る）。
【０２２５】
キットは、さらに、薬学的に許容可能な緩衝剤（リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル液、またはデキストロース溶液など）を含む第２の容器を含む。キットはまた、末端利用者に有用な他の材料（他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジが含まれる）を含むことができる。キットはまた、別の活性剤（例えば、抗生物質）を含む第２または第３の容器を含むことができる。
【０２２６】
キットはまた、化膿連鎖球菌に対する免疫の誘導方法または化膿連鎖球菌感染の治療方法についての書面での指示を含む添付文書を含むことができる。添付文書は、未承認の添付文書であり得るか、食品医薬品局（ＦＤＡ）または他の規制機関によって承認された添付文書であり得る。
【０２２７】
本開示で引用した全ての特許、特許出願、および引例は、特に、本明細書中で参考として援用される。上記開示は、一般に、本発明を説明する。以下の特定の実施例を参照して、本発明をより完全に理解することができる。これらの実施例は、例示のみを目的とし、本発明の範囲を制限することを意図しない。
【実施例】
【０２２８】
（実施例１）
ウエルシュ菌由来のパーフリンゴリシンＯ単量体の三次元結晶構造は、Ｘ線結晶学を使用して、４つのＬシートリッチドメインから構成される細長い分子として最近記載されている。そのうちのたった１つ（Ｃ末端ドメイン４）は、アミノ酸一次配列内で近接している（図１を参照のこと）。図２に示すように、ＧＡＳ２５は、このタンパク質と相同である。
【０２２９】
ウエルシュ菌パーフリンゴリシンＯとのタンパク質配列相同性に基づいて、ＳＬＯ中の４つのドメインを予想することができ、これらのドメインは、図３に示すスキームに示す一次配列にそって分布している。
【０２３０】
「ペプチド１」（３６−ＱＮＴＡＳＴＥＴＴＴＴＮＥＱＰＫＰＥＳＳＥＬＴＴＥＫ−６１；配列番号１）、「ペプチド２」（１５５−ＮＩＮＴＴＰＶＤＩＳＩＩＤＳＶＴＤＲ−１７２；配列番号４）、および「ペプチド３」（４５０−ＴＥＹＶＥＴＴＳＴＥＹ−４６０；配列番号３）を、ＳＦ３７０−Ｍ１（ｐｅｐ１およびｐｅｐ２）株および３６５０−Ｍ６（ｐｅｐ３）株におけるｓｕｒｆｏｍｅ分析によって同定した。図３でペプチドに黒色の下線を引いている。
【０２３１】
（実施例２）
異なるタンパク質領域のクローニングおよび発現
ペプチド１は、１００個のアミノ酸−非構造化アミノ末端タンパク質領域中に存在するようである一方で、ペプチド２およびペプチド３はほとんど完全に不連続ドメイン２中に含まれる。この構造予測に基づいて、異なるタンパク質のクローニングおよび発現を計画した。１つのタンパク質領域にペプチド１のみを含めた。別のタンパク質領域に、ペプチド２およびペプチド３の両方（「ペプチド２＋３」）を含めた。これらは一次構造中で連続しないタンパク質ストレッチの連結が必要である。後者の融合を、２つのペプチドを含めるドメインの構造をできるだけ保存することができる方法で計画した（図４を参照のこと）。この結果を得る可能性を高めるために、イソロイシン１６５をプロリン残基と置換し、これにより、構造の曲がりを好むことが予想される一方で、天然に存在するグリシン４４５残基は、２つの融合領域の間のリンカーとして機能すると予想された。第３のタンパク質領域に、ペプチド１、ペプチド２、およびペプチド３を含めた（「ペプチド１＋２＋３」）。この場合、グリシン残基をペプチド１とペプチド２および３との間に「ｅｘ ｎｏｖｏで」挿入した。ペプチド２中のＩ１６５Ｐ置換を維持した。
【０２３２】
（実施例３）
ＨｉｓまたはＧＳＴ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現
図５に示すように、ＳＬＯタンパク質フラグメントを、Ｈｉｓ融合物として発現した。図６に示すように、ＳＬＯタンパク質フラグメントをＧＳＴ融合物として発現した。
【０２３３】
（実施例４）
ＧＡＳ２５ ６ＸｈｉｓフラグメントのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析
３つのＧＡＳ ＳＬＯフラグメントの６ｘｈｉｓ融合物のＰＡＧＥ分析により、推定分子量の組換えポリペプチドと実際の分子量の組換えポリペプチドとの間の矛盾が証明された（図１５）。推定分子量（ＭＷ）が９，３００．１ダルトンであるペプチド１の実際のＭＷは約２５，０００ダルトンである。ペプチド２＋３の推定ＭＷは１０，２７７ダルトンであるが、実際のＭＷは１５，０００〜１６，０００ダルトンである。ペプチド１＋２＋３の推定ＭＷは１８，３７０ダルトンであり、実際のＭＷは約３０，０００ダルトンである。したがって、３つのポリペプチドを、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析に供し、推定分子量を確認した。結果を図１６〜２０に示す。
【０２３４】
図１６は、溶液中のペプチド１のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を示す。９１７０，２２６のピークは、Ｍｅｔ残基を含まないペプチドに相当する（９３００ダルトン-１３１ダルトンのＭｅｔ＝９１７０ダルトン）。他のピークは、装置の較正のために使用したマーカーに相当する。第２のアミノ酸が小さく且つ疎水性を示す場合、大腸菌中に発現したタンパク質のＮ末端のＭｅｔ残基の除去は非常に一般的である。
【０２３５】
図１７は、溶液中のペプチド２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を示す。１００９７，５２３のピークは、Ｍｅｔ残基を含まないペプチド２＋３に相当する（１０，２２７ダルトン−１３１ダルトンのＭｅｔ＝１０，０９６ダルトン）。他のピークは、装置の較正のために使用したマーカーに相当する。
【０２３６】
図１８は、トリプシンで消化したペプチド２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を示す。トリプシンで消化したタンパク質は、各ペプチドに特徴的なピークプロフィールを示す（フィンガープリンティング）。各ピークは、消化タンパク質のフラグメントに相当する。トリプシンで消化したペプチド２＋３は、以下の特徴的なピークを示す。
【０２３７】
・１，０９０．５４９ ａａ ２２〜３０
・１，２１８．６３７ ａａ ２２〜３１およびａａ ２１〜３０
・１，６５９．８４７ ａａ ６〜２０
・２，０２５．９６８ ａａ ３４〜５２
・２，１５４．１２９ ａａ ３３〜５２
・２，２８２．２２９ ａａ ３５〜５２
・２，７７０．４４８ ａａ ６８〜９０
図１９は、溶液中のペプチド１＋２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を示す。１８，２３６．９９８のピークは、Ｍｅｔ残基を含まないペプチド１＋２＋３ペプチドに相当する。（１８，３７０ダルトン−１３１ダルトンのＭｅｔ＝１８，２３９ダルトン）。他のピークは、分解産物または大腸菌夾雑物のいずれかである。
【０２３８】
図２０は、トリプシンで消化したペプチド１＋２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を示す。フィンガープリンティング技術により、以下のペプチド１＋２＋３に属する多数のピークが明らかとなった。
【０２３９】
・１０９０．５４２ ａａ ９６〜１０４
・１２４７．５５０ ａａ ８０〜９０
・１６９５．６４１ ａａ １２７〜１４１
・１９３２，８３０ ａａ ７３〜９０
・２０２５．８５９ ａａ １０８〜１２６
・２１５３．９２４ ａａ １０７〜１２６
・２８５２．１２１ ａａ ８〜３３ 。
【０２４０】
（実施例５）
インビボ防御実験
マウスを、異なるＳＬＯフラグメントで免疫化し、ＧＡＳのＭ１株で攻撃誘発した。０、２１、および３５日目に、１０〜２０匹のマウス群を２０ｍｇの組換えタンパク質で免疫化した。ネガティブコントロール群のマウスを、使用したＧＡＳ組換えタンパク質のバージョンに応じて、ＧＳＴのみまたは大腸菌夾雑物のいずれかで免疫化した。第３の免疫化から２週間後に血液サンプルを採取した。その数日後、免疫化したマウスを、１０８ｃｆｕ（５０ｍｌ）のＭ１ ＧＡＳ株（３３４８株）で鼻腔内に攻撃誘発した。マウスの生存を、１０〜１４日間モニタリングし、ネガティブコントロール群の生存と比較した。異なる群から得た免疫血清を、全ＳＬＯ組換えタンパク質を使用して免疫原性について試験した（ウェスタンブロット分析）。
【０２４１】
結果を、表１に示す。これらの結果は、ＳＬＯフラグメントを免疫原として使用した場合、ＧＡＳ感染から防御することを示す。
【０２４２】
表１
【０２４３】
【表１】
＊２５＿１ ｈｉｓ（配列番号８）；２５＿２ ｈｉｓ（配列番号１０）；２５＿ｔｏｔ ｈｉｓ（配列番号１２）；２５＿１ ＧＳＴ（配列番号１４）；２５＿２ ＧＳＴ（配列番号１６）；および２５＿ｔｏｔ（配列番号１８）。
【技術分野】
【０００１】
この出願は、２００６年１０月３０日に出願された、仮出願第６０／８５５，１１４号への優先権を主張し、それを参考として援用する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、免疫学およびワクチン学分野にある。特に、本発明は、化膿連鎖球菌由来の抗原およびその免疫化での使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）は、化膿連鎖球菌によって産生される外毒素であり、酸素によって不活化される（それ故に、その名称中に「Ｏ」が付いている）。ＳＬＯは、酸素不安定性を示し、チオール活性化細胞溶解素（ＴＡＣＹｓ）として公知の主要な細菌毒素ファミリーのプロトタイプである。非特許文献１。
【０００４】
チオール活性化細胞溶解素は、種々のグラム陽性細菌によって産生される毒素である。これらの毒素は、酸化によって可逆的に不活化される。これらの毒素は、コレステロール含有膜への結合によってコレステロールに結合し、コレステロール含有膜の溶解を促進し、それによって重合して孔を形成する能力によって特徴づけられる。チオール活性化細胞溶解素は、２０種を超えるグラム陽性細菌で見出されており、アルカノバクテリウム・ピオゲネス（Ａｒｃａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（ＰＬＯ、すなわち、溶血毒素（ｐｙｏｌｙｓｉｎ）をコードする）、ウエルシュ菌（ＰＦＯ、すなわち、パーフリンゴリシンをコードする）、リステリア菌（ＬＬＯ、すなわち、リステリオリシンをコードする）、および肺炎連鎖球菌（ＰＬＹまたはＰＬＮ、すなわち、ニューモリシンをコードする）などの種による感染の病理発生と密接に関連する。
【０００５】
異なる微生物におけるこれらの毒素の配列は、公知である（例えば、バチルス・アルベイ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｌｖｅｉ）由来のアルベオリシン（Ａｌｖｅｏｌｙｓｉｎ）（遺伝子ａｌｖ）；リステリア・イバノビイ由来のイバノリシン（Ｉｖａｎｏｌｙｓｉｎ）（遺伝子ｉｌｏ）；リステリア菌由来のリステリオリシンＯ（遺伝子ｈｌｙＡ）；ウエルシュ菌由来のパーフリンゴリシンＯ（θ−毒素）（遺伝子ｐｆｏ）；肺炎連鎖球菌由来のニューモリシン（遺伝子ｐｌｙ）；リステリア・シリゲリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｓｅｅｌｉｇｅｒｉ）由来のシリゲリオリシン（Ｓｅｅｌｉｇｅｒｉｏｌｙｓｉｎ）（遺伝子ｌｓｏ）；および化膿連鎖球菌由来のストレプトリシンＯ（遺伝子ｓｌｏ）。全てのこれらのタンパク質は、１つのシステイン残基を含み、この残基はそのＣ末端区分に存在し、コレステロールへの結合に不可欠である。このシステインは、高度に保存された領域に存在し、シグネチャパターンとして使用することができる。
【０００６】
化膿連鎖球菌がＳＬＯを使用して宿主細胞中でエフェクタタンパク質（例えば、ＮＡＤ−グリコヒドロラーゼ）を転位置し、それにより、細胞傷害性を誘発すると考えられる。この細胞溶解素媒介性転位置（ＣＭＴ）は、グラム陰性病原体で認められるＩＩＩ型分泌のグラム陽性等価物であり得る（Ｃｅｌｌ ２００１ １０４：１４３−５２）。
【０００７】
多数のＧＡＳ病原性因子と異なり、ＳＬＯは、ほとんどのＧＡＳ単離物によって発現され、ＧＡＳの異なるＭ血清型の間で高度に保存されるようである配列によってコードされる。ストレプトリシンＯは、免疫原性が高く、このタンパク質に対して生じる抗体応答（ＡＳＯ力価）の決定は、しばしば、最近の感染の血清診断で有用である。ＳＬＯに対する強い抗体応答は、急性リウマチ熱および急性連鎖球菌感染後糸球体腎炎の発症と相関することが示されている。ＳＬＯは、防御的先天性免疫応答を誘発し、ＴＮＦαおよびＩＬ−１βの強力な誘導因子である（Ｂｒｉｃｋｅｒら、２００５を参照のこと）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｂｉｌｌｉｎｇｔｏｎら、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ（２０００）１８：１９７−２０５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
免疫特性のために、ＳＬＯは、診断用および治療用の化膿連鎖球菌組成物で有用であり得る。不運なことに、ＳＬＯは広範な種々の細胞型（心筋層が含まれる）に有毒である。したがって、有毒でないＳＬＯ抗原が当該分野で必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、化膿連鎖球菌感染を防止および／または治療するための組成物を提供する。これらの組成物は、１つまたは複数の活性剤を含み、該活性剤は、ＳＬＯ抗原、ＳＬＯ抗原をコードする核酸分子、および／またはＳＬＯ抗原に特異的に結合する抗体である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ウエルシュ菌由来のパーフリンゴリシンＯ単量体の三次元結晶構造。
【図２】ウエルシュ菌由来のパーフリンゴリシンＯ（配列番号６）とのＧＡＳ２５相同性を示すＢＬＡＳＴアラインメント。ＧＡＳ２５（配列番号５）はクエリー配列である。
【図３】ウエルシュ菌パーフリンゴリシンＯとのタンパク質配列相同性に基づいたＳＬＯ（配列番号５）中のドメインの予想。「ｐｅｐ１」は配列番号１であり、「ｐｅｐ２」は配列番号２であり、「ｐｅｐ３」は配列番号３である。
【図４】ペプチド２および３を含む融合ポリペプチドの構造。
【図５−１】−ＨＩＳ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現。
【図５−２】−ＨＩＳ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現。
【図６−１】−ＧＳＴ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現。
【図６−２】−ＧＳＴ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現。
【図６−３】−ＧＳＴ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現。
【図７】抗ＧＡＳ２５マウス免疫血清を使用した全細菌抽出物および精製ＧＳＴ融合タンパク質のウェスタンブロット。
【図８】抗ＧＡＳ２５マウス免疫血清を使用した全細菌抽出物および精製Ｈｉｓ融合タンパク質のウェスタンブロット。
【図９】抗ＧＳＴマウス免疫血清を使用した精製ＧＳＴ融合タンパク質のウェスタンブロット。
【図１０】市販の抗６Ｘｈｉｓモノクローナル抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用した精製Ｈｉｓ融合タンパク質のウェスタンブロット。
【図１１】異なるヒト血清を使用した精製ＧＳＴ融合タンパク質によるウェスタンブロット。
【図１２】ＧＡＳの健康な成人由来の異なる血清を使用した精製ＧＳＴ融合タンパク質によるドットブロット（Ａ：ボイル済、Ｂ：ボイルなし）。
【図１３】ＧＡＳ感染児童由来の異なる血清を使用した精製ＧＳＴ融合タンパク質によるウェスタンブロット。
【図１４】ＧＡＳ感染児童由来の異なる血清を使用したボイル済（＋）およびボイルなし（−）の精製ＧＳＴ融合タンパク質によるドットブロット。
【図１５】３つのＧＡＳ ＳＬＯフラグメントの６ｘＨＩＳ融合物のＰＡＧＥ分析。
【図１６】溶液中のペプチド１のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析。
【図１７】溶液中のペプチド２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析。
【図１８】トリプシンで消化したペプチド２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析。
【図１９】溶液中のペプチド１＋２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析。
【図２０】トリプシンで消化したペプチド１＋２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
ＳＬＯ抗原
本発明の「ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）抗原」は、免疫原性を示すが、非毒性である。本明細書中で使用される場合、「非毒性」は、ＳＬＯ抗原がコレステロールに結合することができず、それにより、コレステロール含有膜の溶解を促進しないことを意味する。ＳＬＯタンパク質を、例えば、ＳＬＯのＣ末端部にある高度に保存された領域中に存在する少なくとも１つのシステイン残基の欠失によって非毒性にすることができ、該システインは、チオール活性化細胞溶解素のシグネチャパターンとして使用することができる。
【００１３】
いくつかの実施形態では、化膿連鎖球菌のストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）抗原は、本質的に、配列番号１のアミノ酸配列からなる。いくつかの実施形態では、ＳＬＯ抗原は、本質的に、Ｎ末端からＣ末端方向に、配列番号２のアミノ酸配列および配列番号２のアミノ酸配列に共有結合した配列番号３のアミノ酸配列からなる。本明細書中で使用される場合、「共有結合した」には、直接共有結合および１つまたは複数のさらなるアミノ酸を介した結合が含まれる。他の実施形態では、ＳＬＯ抗原は、本質的に、Ｎ末端からＣ末端方向に、配列番号１のアミノ酸配列、配列番号１のアミノ酸配列に共有結合したグリシン残基、グリシンに共有結合した配列番号２のアミノ酸配列、および配列番号２のアミノ酸配列に共有結合した配列番号３のアミノ酸配列からなる。
【００１４】
本発明の有用なＳＬＯ抗原には、本質的に以下からなるアミノ酸配列も含まれる：（１）配列番号１、（２）配列番号１のアミノ酸配列に共有結合したグリシン残基、（３）グリシンに共有結合した配列番号２のアミノ酸配列、および（４）配列番号２のアミノ酸配列に共有結合した配列番号３のアミノ酸配列。さらに他の有用なＳＬＯ抗原には、本質的に、配列番号８、配列番号１０、配列番号１０のアミノ酸２〜８２、配列番号１２、配列番号１２のアミノ酸４〜１５６、配列番号１４、配列番号１６、および配列番号１８からなるＳＬＯ抗原が含まれる。いくつかの実施形態では、ＳＬＯ抗原は、単量体である。
【００１５】
ＧＡＳ Ｍ型とＧＡＳ分離株との間のＳＬＯ抗原が一致しない場合、本発明のＧＡＳアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列は、好ましくは、これらと配列が同一なアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列をいう。好ましいアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列は、５０％以上の配列が同一である（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える）。同様に、本発明のＳＬＯアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列は、好ましくは、ＳＬＯ抗原の免疫学的性質を保持またはコードする配列のフラグメントをいう。好ましいアミノ酸フラグメントには、少なくともｎ個の連続アミノ酸が含まれ、ｎは７以上である（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、またはそれを超える）。
【００１６】
融合タンパク質
本発明で使用されるＳＬＯ抗原は、個別のポリペプチド（「ペプチド１」、「ペプチド２」、「ペプチド３」、「ペプチド１＋２＋３」、「ペプチド２＋３」）として組成物中に存在することができるが、少なくとも２個（すなわち、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０）の抗原が１つのポリペプチド鎖（「融合タンパク質」または「ハイブリッドポリペプチド」）として発現する実施形態も存在する。ハイブリッドポリペプチドは、２つの主な利点を付与する。第１に、単独で不安定であり得るか十分に発現し得ないポリペプチドを、適切なハイブリッドパートナーの付加によって補助して問題を克服することができる。第２に、共に抗原的に有用な２つのポリペプチドを産生するために１つだけ発現および精製を使用する必要があるように商業的製造を簡略化する。
【００１７】
ハイブリッドポリペプチドは、２つまたはそれを超えるポリペプチド配列を含むことができる。したがって、本発明は、第１および第２のアミノ酸配列がＳＬＯ抗原またはそのフラグメントから選択される、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を含む組成物が含まれる。好ましくは、ハイブリッドポリペプチド中の第１および第２のアミノ酸配列は、異なるエピトープを含む。他の実施形態では、ハイブリッドポリペプチドは、第１のアミノ酸配列がＳＬＯ抗原またはそのフラグメントから選択され、第２のアミノ酸配列がＳＬＯ抗原もしくはそのフラグメントまたは別のＧＡＳ抗原から選択される、第１のアミノ酸配列および第２のアミノ酸配列を含む。好ましくは、ハイブリッドポリペプチド中の第１および第２のアミノ酸配列は、異なるエピトープを含む。
【００１８】
２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個のＧＡＳ抗原由来のアミノ酸配列からなるハイブリッドを構築することができる。異なるハイブリッドポリペプチドを、共に１つの処方物に混合することができる。かかる組み合わせのうち、ＳＬＯ抗原は、１つを超えるハイブリッドポリペプチド中に存在することができ、そして／または非ハイブリッドポリペプチドとして存在することができる。いくつかの実施形態では、抗原は、ハイブリッドまたは非ハイブリッドとして存在するが、両方は存在しない。
【００１９】
ハイブリッドポリペプチドを、式ＮＨ２Ａ−｛−Ｘ−Ｌ｝ｎＢ−ＣＯＯＨ（式中、Ｘは、第１の抗原群または第２の抗原群由来のＧＡＳ抗原のアミノ酸配列またはそのフラグメントであり、Ｌは任意選択的なリンカーアミノ酸配列であり、Ａは任意選択的なＮ末端アミノ酸配列であり、Ｂは任意選択的なＣ末端アミノ酸配列であり、ｎは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５である）で示すことができる。
【００２０】
−Ｘ−部分は、その野生型のリーダーペプチド配列を有する場合、ハイブリッドタンパク質中に含まれてよく、または省略されてよい。いくつかの実施形態では、ハイブリッドタンパク質のＮ末端に存在する−Ｘ−部分のリーダーペプチド以外のリーダーペプチドを欠失するであろう（すなわち、Ｘ１のリーダーペプチドは保持されるが、Ｘ２．．．Ｘｎのリーダーペプチドは省略されるであろう）。これは、全てのリーダーペプチドの欠失および−Ａ−部分としてのＸ１のリーダーペプチドの使用と等価である。
【００２１】
｛−Ｘ−Ｌ−｝の各ｎについて、リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は存在しても存在しなくてもよい。例えば、ｎ＝２の場合、ハイブリッドはＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｌ１−Ｘ２−ＣＯＯＨ、ＮＨ２−Ｘ１−Ｘ２−Ｌ２−ＣＯＯＨなどであり得る。リンカーアミノ酸配列−Ｌ−は、典型的には、短い（例えば、２０個以下のアミノ酸（すなわち、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１））。例は、クローニングを容易にする短いペプチド配列であるポリグリシンリンカー（すなわち、Ｇｌｙｎ（式中、ｎ＝２、３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える）を含む）およびヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０、またはそれを超える））を含む。他の適切なリンカーアミノ酸配列は、当業者に明らかである。有用なリンカーはＧＳＧＧＧＧであり、Ｇｌｙ−ＳｅｒジペプチドはＢａｍＨＩ制限部位から形成されているので、クローニングおよび操作を補助し、（Ｇｌｙ）４テトラペプチドは典型的なポリグリシンリンカーである。
【００２２】
−Ａ−は任意選択的なＮ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には、短いであろう（例えば、４０個以下のアミノ酸（すなわち、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１））。例には、タンパク質輸送を指示するためのリーダー配列またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超える）））が含まれる。他の適切なＮ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかである。Ｘ１がそれ自体のＮ末端メチオニンを各場合、−Ａ−は、好ましくは、Ｎ末端メチオニンを提供するオリゴペプチド（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８個のアミノ酸）である。
【００２３】
−Ｂ−は任意選択的なＣ末端アミノ酸配列である。これは、典型的には、短いであろう（例えば、４０個以下のアミノ酸（すなわち、３９、３８、３７、３６、３５、３４、３３、３２、３１、３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、１））。例には、タンパク質輸送を指示するための配列またはクローニングもしくは精製を容易にする短いペプチド配列（例えば、ヒスチジンタグ（すなわち、Ｈｉｓｎ（式中、ｎ＝３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれを超える））を含む）、またはタンパク質安定性を向上する配列が含まれる。他の適切なＣ末端アミノ酸配列は、当業者に明らかであろう。
【００２４】
最も好ましくは、ｎは２または３である。
【００２５】
本発明の融合構築物には、２つ以上のＳＬＯ抗原の組み合わせが含まれ得る。好ましい組み合わせには、ＧＡＳ４０抗原またはＧＡＳ５７抗原との融合物が含まれる。
【００２６】
ＧＡＳ４０
ＧＡＳ４０タンパク質が多数のＭ型およびこれらのＭ型の複数の株の両方で高度に保存されているので、ＧＡＳ４０抗原は本発明の組成物で特に有用である（ＷＯ２００６／０４２０２７号を参照のこと）。ＧＡＳ４０タンパク質は、ＷＯ２００５／０３２５８２号に詳述されている。ＧＡＳ４０は、全身免疫および攻撃誘発ならびに細菌抗体誘導の動物モデルを一貫して防御する。ＧＡＳ４０は、非常に高度に保存されたタンパク質であり、ほとんどのＭ血清型の表面に露呈しているようである（これまで認められている唯一の例外はＭ３血清型である）。
【００２７】
種々のＭ株由来の多数のＧＡＳ４０タンパク質のアミノ酸配列はＧｅｎＢａｎｋに含まれ、受託番号ＧＩ：１３６２１５４５およびＧＩ：１５６７４４４９（Ｍ１）；受託番号ＧＩ：２１９０９７３３（Ｍ３）、および受託番号ＧＩ：１９７４５４０２（Ｍ１８）である。ＧＡＳ４０タンパク質は、「Ｓｐｙ０２６９」（Ｍ１）、「ＳｐｙＭ３＿０１９７」（Ｍ３）、「ＳｐｙＭ１８＿０２５６」（Ｍ１８）、および「ｐｒｇＡ」としても公知である。
【００２８】
ＧＡＳ４０タンパク質は、典型的には、リーダーペプチド配列（例えば、配列番号１９のアミノ酸１〜２６）、第１のコイルドコイル領域（例えば、配列番号１９のアミノ酸５８〜２６１）、第２のコイルドコイル領域（例えば、配列番号１９のアミノ酸５５６〜７３３）、ロイシンジッパー領域（例えば、配列番号１９のアミノ酸６７３〜７０１）、および膜貫通領域（例えば、配列番号１９のアミノ酸８５５〜８６６）を含む。
【００２９】
本発明と共に使用するのに好ましいＧＡＳ４０タンパク質は、（ａ）配列番号１９と５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える）の同一性を有し；および／または（ｂ）配列番号１９の少なくともｎ個の連続アミノ酸のフラグメントであるアミノ酸配列（ｎは７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、またはそれを超える）である）を含む。これらのＧＡＳ４０タンパク質には、配列番号１９の変形体（例えば、対立遺伝子多型、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）が含まれる。ＧＡＳ４０タンパク質の好ましいフラグメントは、ＧＡＳ４０タンパク質のＣ末端由来の１つまたは複数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）および／またはＮ末端由来の１つまたは複数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）を欠く。１つの実施形態では、リーダー配列を除去する。別の実施形態では、膜貫通領域を除去する。他のフラグメントは、ＧＡＳ４０タンパク質の１つまたは複数のドメインを省略することができる。
【００３０】
ＧＡＳ４０のコイルドコイル領域は、二量体または三量体などのオリゴマーの形成に関与する可能性が高い。かかるオリゴマーは、ホモマー（互いにオリゴマー化した２個以上のＧＡＳ４０タンパク質を含む）またはヘテロマー（ＧＡＳ４０とオリゴマー化した１つまたは複数のさらなるＧＡＳタンパク質を含む）であり得る。あるいは、２つのコイルドコイル領域は、ＧＡＳ４０タンパク質内で相互作用して、第１のコイルドコイル領域と第２のコイルドコイル領域との間にオリゴマー反応物を形成することができる。したがって、いくつかの実施形態では、ＧＡＳ４０抗原はオリゴマーの形態である。いくつかのオリゴマーは、２個以上のＧＡＳ４０抗原を含む。他のオリゴマーは、第２のＧＡＳ抗原とオリゴマー化したＧＡＳ４０抗原を含む。
【００３１】
ＧＡＳ５７
ＧＡＳ５７は、Ｍ１ ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：１３６２１６５５およびＧＩ：１５６７４５４９、Ｍ３ ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：２１９０９８３４、Ｍ１８ ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：１９７４５５６０に対応し、「Ｓｐｙ０４１６」（Ｍ１）、「ＳｐｙＭ３＿０２９８」（Ｍ３）、「ＳｐｙＭ１８＿０４６４」（Ｍ１８）、および「ｐｒｔＳ」ともいう。ＧＡＳ５７はまた、推定細胞エンベローププロテイナーゼとしても同定されている。Ｍ１株のＧＡＳ５７のアミノ酸配列は、配列表中に配列番号２０として記載されている。
【００３２】
本発明と共に使用するのに好ましいＧＡＳ５７タンパク質は、（ａ）配列番号２０と５０％以上（例えば、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、またはそれを超える）の同一性を有し；および／または（ｂ）配列番号２０の少なくともｎ個の連続アミノ酸のフラグメントであるアミノ酸配列（ｎは７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、またはそれを超える）である）を含む。これらのＧＡＳ５７タンパク質には、配列番号２０の変形体（例えば、対立遺伝子多型、ホモログ、オルソログ、パラログ、変異体など）が含まれる。（ｂ）の好ましいフラグメントは、配列番号２０のエピトープを含む。他の好ましいフラグメントは、配列番号２０のＣ末端由来の１つまたは複数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）および／またはＮ末端由来の１つまたは複数のアミノ酸（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、またはそれを超える）を欠く。例えば、１つの実施形態では、アミノ酸１〜３３を除去する。別の例では、アミノ酸１６１４〜１６４７または配列番号２０を除去する。他のフラグメントは、タンパク質の１つまたは複数のドメインを省略する（例えば、シグナルペプチド、細胞質ドメイン、膜貫通ドメイン、または細胞外ドメインの省略）。
【００３３】
核酸分子
本発明は、ＳＬＯ抗原をコードする核酸分子を含む。本発明はまた、かかる分子と少なくとも５０％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む。特定の配列に依存して、配列同一性の程度は、好ましくは、５０％を超える（例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれを超える）。ヌクレオチド配列間の同一性は、好ましくは、以下のパラメータ：ギャップオープンペナルティ＝１２およびギャップ伸長ペナルティ＝１を使用したアフィンギャップ検索を使用したＭＰＳＲＣＨプログラム（Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ）で実行されるＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムによって決定される。
【００３４】
本発明はまた、これらの分子とハイブリッド形成することができる核酸分子を提供する。ハイブリッド形成反応を、異なる「ストリンジェンシー」条件下で行うことができる。ハイブリッド形成反応のストリンジェンシーを増加させる条件は、広く知られており、当該分野で公開されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋらの７．５２ページ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１９８９を参照のこと。関連条件の例には、以下が含まれる（ストリンジェンシーが増加する順）：２５℃、３７℃、５０℃、５５℃、および６８℃でのインキュベーション；１０×ＳＳＣ、６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、および０．１×ＳＳＣの緩衝剤濃度（ＳＳＣは０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１５ｍＭクエン酸緩衝剤である）ならびに他の緩衝系を使用したその等価物；０％、２５％、５０％、および７５％のホルムアルデヒド濃度；５分間〜２４時間のインキュベーション時間；１回、２回、またはそれを超える洗浄工程；１、２、または１５分間の洗浄インキュベーション時間；ならびに６×ＳＳＣ、１×ＳＳＣ、０．１×ＳＳＣ、または脱イオン水の洗浄液。ハイブリッド形成技術およびその至適化は、当該分野で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，１９８９；Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，１９９９；米国特許第５，７０７，８２９号；Ａｕｓｕｂｅｌら、ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ３０，１９８７を参照のこと。
【００３５】
いくつかの実施形態では、本発明の核酸分子は、低ストリンジェンシー条件下で標的とハイブリッド形成し、他の実施形態では、本発明の核酸分子は中ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成し、好ましい実施形態では、本発明の核酸分子は高ストリンジェンシー条件下でハイブリッド形成する。低ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、５０℃および１０×ＳＳＣである。中ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、５５℃および１×ＳＳＣである。高ストリンジェンシーハイブリッド形成条件の例は、６８℃および０．１×ＳＳＣである。
【００３６】
これらの配列のフラグメントを含む核酸分子も本発明に含まれる。これらは、これらの配列の少なくともｎ個の連続するヌクレオチドを含み、特定の配列に依存して、ｎは１０個以上（例えば、１２、１４、１５、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、またはそれを超える）である。
【００３７】
本発明の核酸（およびポリペプチド）は：
（ａ）配列表に開示の配列と同一（すなわち、１００％同一）であり；
（ｂ）配列表に開示の配列と配列同一性を共有し；
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の配列と比較した場合に個別の位置に存在することができるか、連続し得る、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の単一のヌクレオチドまたはアミノ酸の変更（欠失、挿入、置換）を有し；
ｄ）ｐ単量体（ｐ＞ｘの場合）に伸長するアラインメントについてｐ−ｘ＋１が存在するようにペアワイズアラインメントアルゴリズム（開始（Ｎ末端または５’）から終了（Ｃ末端または３’）に移動するｘ単量体（アミノ酸またはヌクレオチド）の移動ウィンドウ（ｍｏｖｉｎｇ ｗｉｎｄｏｗ））を使用して配列表由来の特定の配列とアラインメントした場合、かかるウィンドウは、少なくともｘ・ｙ個の同一のアラインメントした単量体を有し、ここで、ｘは２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００から選択され、ｙは、０．５０、０．６０、０．７０、０．７５、０．８０、０．８５、０．９０、０．９１、０．９２、０．９３、０．９４、０．９５、０．９６、０．９７、０．９８、０．９９から選択され、ｘ・ｙが整数でない場合、近似する整数に切り上げる；
配列を含む。好ましいペアワイズアラインメントアルゴリズムは、デフォルトパラメータ（例えば、Ｇａｐオープニングペナルティ＝１０．０およびＧａｐ伸長ペナルティ＝０．５、ＥＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列を使用）を使用したＮｅｅｄｌｅｍａｎ−Ｗｕｎｓｃｈ大域的アラインメントアルゴリズム（Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８，４４３−４５３）である。このアルゴリズムは、ＥＭＢＯＳＳパッケージ中のニードルツールで都合良く実行される（Ｒｉｃｅら（２０００）Ｔｒｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１６：２７６−２７７）。
【００３８】
本発明の核酸およびポリペプチドは、さらに、これらの配列（ａ）〜（ｄ）のＮ末端／５’および／またはＣ末端／３’に対するさらなる配列を有することができる。
【００３９】
抗体
本発明のＳＬＯ抗原に特異的に結合するための抗体を生成することができる。用語「抗体」には、インタクトな免疫グロブリン分子、および抗原に結合することができるそのフラグメントが含まれる。これらには、ハイブリッド（キメラ）抗体分子（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９，２９３−９９，１９９１；米国特許第４，８１６，５６７号）；Ｆ（ａｂ’）２フラグメントおよびＦ（ａｂ）フラグメントならびにＦｖ分子；非共有結合性ヘテロ二量体（例えば、Ｉｎｂａｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．６９，２６５９−６２，１９７２；Ｅｈｒｌｉｃｈら、Ｂｉｏｃｈｅｍ １９，４０９１−９６，１９８０）；単鎖Ｆｖ分子（ｓＦｖ）（例えば、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５，５８９７−８３，１９８８）；二量体および三量体抗体フラグメント構築物；ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）（例えば、Ｐａｃｋら、Ｂｉｏｃｈｅｍ ３１，１５７９−８４，１９９２；Ｃｕｍｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４９Ｂ，１２０−２６，１９９２）；ヒト化抗体分子（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２，３２３−２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９，１５３４−３６，１９８８；および１９９４年９月２１日公開の英国特許出願番号ＧＢ２，２７６，１６９号）；およびかかる分子から得た任意の機能的フラグメントならびにファージディスプレイなどの従来にない過程によって得た抗体が含まれる。好ましくは、抗体はモノクローナル抗体である。モノクローナル抗体を得る方法は、当該分野で周知である。
【００４０】
典型的には、エピトープを形成するのに少なくとも６、７、８、１０、または１２個の連続するアミノ酸が必要である。しかし、不連続アミノ酸を含むエピトープは、より多数（例えば、少なくとも１５、２５、または５０個のアミノ酸）を必要とし得る。種々の免疫アッセイ（例えば、ウェスタンブロット、ＥＬＩＳＡ、放射免疫アッセイ、免疫組織化学アッセイ、免疫沈降、または当該分野で公知の他の免疫化学アッセイ）を使用して、所望の特異性を有する抗体を同定することができる。競合結合または免疫放射線測定法についての多数のプロトコールが当該分野で周知である。かかる免疫アッセイは、典型的には、免疫原と免疫原に特異的に結合する抗体との間の複合体形成の測定を含む。特定の抗原に特異的に結合する抗体の調製から、典型的には、免疫化学アッセイで使用した場合に他のタンパク質を使用して得られる検出シグナルの少なくとも５倍、１０倍、または２０倍の検出シグナルが得られる。好ましくは、抗体は、免疫化学アッセイにおいて他のタンパク質を検出せず、溶液由来の特定の抗原を免疫沈降することができる。
【００４１】
抗体の生成
ＳＬＯ抗原または非ＳＬＯポリペプチド抗原（下記）を使用して哺乳動物（マウス、ラット、ウサギ、モルモット、サル、またはヒトなど）を免疫化して、ポリクローナル抗体を産生することができる。必要に応じて、抗原を、担体タンパク質（ウシ血清アルブミン、サイログロブリン、およびキーホールリンペットヘモシアニンなど）に接合することができる。宿主の種に応じて、種々のアジュバントを使用して、免疫学的応答を増大させることができる。かかるアジュバントには、フロイントアジュバント、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、および界面活性剤（例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油性乳濁液、キーホールリンペットヘモシアニン、およびジニトロフェノール）が含まれるが、これらに限定されない。ヒトで使用されるアジュバントのうち、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびコリネバクテリウム・パルバムが特に有用である。
【００４２】
抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を、連続継代細胞株の培養によって抗体分子を産生する任意の技術を使用して調製することができる。これらの技術には、ハイブリドーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術、およびＥＢＶハイブリドーマ技術が含まれるが、これらに限定されない（Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９５ ４９７，１９８５；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ８１，３１ ４２，１９８５；Ｃｏｔｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８０，２０２６ ２０３０，１９８３；Ｃｏｌｅら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．６２，１０９ １２０，１９８４）。
【００４３】
さらに、「キメラ抗体」の産生のために開発された技術（マウス抗体遺伝子をヒト抗体遺伝子にスプライシングして適切な抗原特異性および生物活性を有する分子を得る技術）を使用することができる（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１，６８５１ ６８５５，１９８４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２，６０４ ６０８，１９８４；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ ３１４，４５２ ４５４，１９８５）。モノクローナル抗体および他の抗体を「ヒト化」して、治療で使用する場合に抗体に対する患者の免疫応答の開始を防止することもできる。かかる抗体は、療法で直接使用するのに配列が十分にヒト抗体と類似し得るか、少数の重要な残基を変化させる必要があり得る。げっ歯類抗体配列とヒト抗体配列との間の相違を、各残基の部位特異的変異誘発または相補性決定領域全体のグラフティング（ｇｒａｔｉｎｇ）によるヒト配列中の残基と異なる残基の置換によって最小にすることができる。
【００４４】
あるいは、下記の組換え方法を使用してヒト化抗体を産生することができる。米国特許第５，５６５，３３２号に開示のように、特定の抗原に特異的に結合する抗体は、部分的または完全にヒト化された抗原結合部位を含むことができる。
【００４５】
あるいは、単鎖抗体の産生について記載した技術を、当該分野公知の方法を使用して適合させて、特定の抗原に特異的に結合する単鎖抗体を産生することができる。関連する特異性を有するが、異なるイディオタイプ組成の抗体を、ランダム組み合わせ免疫グロブリンライブラリー由来のチェーンシャフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）によって生成することができる（Ｂｕｒｔｏｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８８，１１１２０ ２３，１９９１）。
【００４６】
単鎖抗体を、テンプレートとしてハイブリドーマｃＤＮＡを使用したＤＮＡ増幅方法（ＰＣＲなど）を使用して構築することができる（Ｔｈｉｒｉｏｎら、１９９６，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｐｒｅｖ．５，５０７−１１）。単鎖抗体は、単一特異性または二重特異性であり得、２価または４価であり得る。４価の二重特異性単鎖抗体の構築は、例えば、Ｃｏｌｏｍａ ＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５，１５９−６３に教示されている。２価の二重特異性単鎖抗体は、Ｍａｌｌｅｎｄｅｒ ＆ Ｖｏｓｓ，１９９４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９，１９９−２０６に教示されている。
【００４７】
下記のように、単鎖抗体をコードするヌクレオチド配列を、手作業または自動化されたヌクレオチド合成によって構築し、標準的な組換えＤＮＡ法を使用して発現構築物にクローン化し、細胞に導入してコード配列を発現させることができる。あるいは、単鎖抗体を、例えば、繊維状ファージテクノロジーを使用して直接産生することができる（Ｖｅｒｈａａｒら、１９９５，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６１，４９７−５０１；Ｎｉｃｈｏｌｌｓら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６５，８１−９１）。
【００４８】
特定の抗原に特異的に結合する抗体を、文献に開示のリンパ球集団におけるインビボ産生の誘導または免疫グロブリンライブラリーもしくは高度に特異的な結合試薬のパネルのスクリーニングによって産生することもできる（Ｏｒｌａｎｄｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８６，３８３３ ３８３７，１９８９；Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３４９，２９３ ２９９，１９９１）。
【００４９】
キメラ抗体を、ＷＯ９３／０３１５１号に開示のように構築することができる。免疫グロブリンに由来し、多価または多重特異性の結合タンパク質（ＷＯ９４／１３８０４号に記載の「二特異性抗体」など）を調製することもできる。
【００５０】
抗体を、当該分野で周知の方法によって精製することができる。例えば、抗体を、関連抗原が結合するカラムの通過によってアフィニティ精製することができる。次いで、結合した抗体を、高塩濃度の緩衝剤を使用して、カラムから溶離することができる。
【００５１】
ポリペプチド抗原の産生
ポリペプチドの組換え産生
特定の抗原をコードする任意のヌクレオチド配列を使用して、抗原を組換え的に産生することができる。所望により、一旦そのアミノ酸配列が分かると、抗体を組換え的に産生することができる。
【００５２】
本発明のＳＬＯ抗原を産生するために使用することができる配列の例を、図５および６に示す。ＳＬＯをコードする核酸分子を、標準的な核酸精製技術を使用して適切な化膿連鎖球菌から単離することができ、またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの増幅技術の使用、もしくは自動合成機の使用によって合成することができる。核酸の単離方法は日常的方法であり、当該分野で公知である。任意のかかる核酸分子取得技術を使用して、特定の抗原をコードする核酸分子を得ることができる。特定の抗原または抗体をコードする配列を、当該分野で周知の化学的方法を使用して完全または部分的に合成することができる（Ｃａｒｕｔｈｅｒｓら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２１５ ２２３，１９８０；Ｈｏｒｎら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．Ｓｙｍｐ．Ｓｅｒ．２２５ ２３２，１９８０を参照のこと）。
【００５３】
ｃＤＮＡ分子を、テンプレートとしてｍＲＮＡを使用した標準的な分子生物学技術を使用して作製することができる。その後、ｃＤＮＡ分子を、当該分野で周知の分子生物学技術を使用して複製することができる。テンプレートとしてゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡのいずれかを使用したＰＣＲなどの増幅技術を使用して、本発明のポリヌクレオチドの更なる複製を得ることができる。
【００５４】
所望により、当該分野で一般的に知られている方法を使用してヌクレオチド配列を操作して、種々の理由で抗原コード配列を変化させることができる（ポリペプチドまたはｍＲＮＡ産物のクローニング、プロセシング、および／または発現を修飾する変更が含まれるが、これらに限定されない）。遺伝子フラグメントおよび合成オリゴヌクレオチドのランダム断片化およびＰＣＲアセンブリによるＤＮＡシャフリングを使用して、ヌクレオチド配列を操作することができる。例えば、部位特異的変異誘発を使用して、新規の制限部位の挿入、グリコシル化パターンの変更、コドン選択の変化、スプライスバリアントの産生、および変異の導入などを行うことができる。
【００５５】
配列修飾（精製タグ配列の付加またはコドン至適化など）を使用して、発現を容易にすることができる。例えば、Ｎ末端リーダー配列を、タグタンパク質（ポリヒスチジン（「ＨＩＳ」）またはグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（「ＧＳＴ」）など）をコードする配列と置換することができる。かかるタグタンパク質を使用して、発現タンパク質の精製、検出、および安定性を促進することができる。特定の原核生物宿主または真核生物宿主に好まれるコドンを選択して、タンパク質発現率を増大させ、または所望の性質（天然に存在する配列から生成した転写物よりも長い半減期など）を有するＲＮＡ転写物を産生することができる。これらの方法は当該分野で周知であり、ＷＯ０５／０３２５８２号にさらに記載されている。
【００５６】
発現ベクター
抗原または抗体をコードする核酸分子を、挿入するコード配列の転写および翻訳に必要なエレメントを含む発現ベクターに挿入することができる。当業者に周知の方法を使用して、コード配列ならびに適切な転写調節エレメントおよび翻訳調節エレメントを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法には、インビトロ組換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組換えが含まれる。
【００５７】
宿主細胞
異種宿主は、原核生物または真核生物であり得る。大腸菌は好ましい宿主細胞であるが、他の適切な宿主には、ラクトコッカス・ラクティス、ラクトコッカス・クレモリス、枯草菌、コレラ菌、チフス菌、ネズミチフス菌、ナイセリア・ラクタミカ、ナイセリア・シネレア、マイコバクテリア属（例えば、結核菌）、酵母などが含まれる。
【００５８】
宿主細胞株を、所望の様式で挿入配列の発現を調整する、または発現ポリペプチドをプロセシングする能力について選択することができる。かかるポリペプチド修飾には、アセチル化、カルボキシル化、グリコシル化、リン酸化、脂質化、およびアセチル化が含まれるが、これらに限定されない。ポリペプチドの「プレプロ」形態を切断する翻訳後プロセシングを使用して、正確な挿入、折り畳み、および／または機能を促進することもできる。翻訳後活性のための特定の細胞機能および特徴的な機能を有する異なる宿主細胞は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；１０８０１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ ２０１１０−２２０９）から利用可能であり、外来タンパク質の正確な修飾およびプロセシングが確実になるように選択することができる。ＷＯ０１／９８３４０号を参照のこと。
【００５９】
十分に確立された技術（トランスフェリン−ポリカチオン媒介ＤＮＡ移入、裸またはカプセル化した核酸でのトランスフェクション、リポソーム媒介細胞融合、ＤＮＡコーティングラテックスビーズの細胞内輸送、プロトプラスト融合、ウイルス感染、エレクトロポレーション、「遺伝子銃」法、およびＤＥＡＥまたはリン酸カルシウム媒介トランスフェクションが含まれるが、これらに限定されない）を使用して、発現構築物を宿主細胞に導入することができる。
【００６０】
発現ベクターを使用して形質転換された宿主細胞を、細胞培養物からのタンパク質の発現および回収に適切な条件下で培養することができる。形質転換された細胞によって産生されたタンパク質を、使用したヌクレオチド配列および／または発現ベクターに応じて分泌し、または細胞内に含めることができる。当業者は、原核細胞膜または真核細胞膜を介した可溶性抗原の分泌を指示するシグナル配列を含むように発現ベクターをデザインすることができることを理解している。
【００６１】
精製
本発明で使用される抗原を、適切な化膿連鎖球菌または操作した宿主細胞から単離することができる。精製ポリペプチド抗原を、当該分野で周知の方法を使用して、細胞中の他の成分（タンパク質、炭水化物、または脂質など）から分離する。かかる方法には、サイズ排除クロマトグラフィ、硫酸アンモニウム分画、イオン交換クロマトグラフィ、アフィニティクロマトグラフィ、および分取ゲル電気泳動が含まれるが、これらに限定されない。精製ポリペプチド抗原の調製物の純度は少なくとも８０％であり、好ましくは、調製物の純度は、９０％、９５％、または９９％である。調製物の純度を、当該分野で公知の任意の手段（ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動など）によって評価することができる。適切な場合には、ポリペプチド抗原を、例えば、尿素を使用して可溶化することができる。
【００６２】
化学合成
本発明の組成物中で使用されるＳＬＯ抗原および他の抗原を、例えば、固相技術を使用して合成することができる。例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９ ５４，１９６３；Ｒｏｂｅｒｇｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９，２０２ ０４，１９９５を参照のこと。手動技術の使用または自動化によりタンパク質合成を行うことができる。例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ４３１Ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、自動化された合成を行うことができる。任意選択的に、ＳＬＯ抗原のフラグメントを個別に合成し、化学的方法を使用して合わせて全長分子を産生することができる。
【００６３】
抗体またはポリペプチド抗原をコードする核酸分子を、従来の方法（リン酸トリエステル法（Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ，Ｍ．ら（１９８４），Ｎａｔｕｒｅ ３１０：１０５−１１１）または核酸の化学合成（Ｇｒａｎｔｈａｍ，Ｒ．ら（１９８１），Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．９：ｒ４３−ｒ７４）など）によって合成することができる。
【００６４】
免疫学的組成物、診断組成物、および治療組成物
本発明はまた、宿主被験体におけるＧＡＳ感染の検出のための薬物（例えば、免疫学的組成物またはワクチン）または診断試薬として使用するための組成物を提供する。本発明はまた、（ｉ）ＧＡＳ細菌の感染の治療または防止のための薬物、（ｉｉ）ＧＡＳ細菌またはＧＡＳ細菌に対して惹起された抗体の存在の検出のための診断試薬、および／または（ｉｉｉ）ＧＡＳ細菌に対する抗体を惹起することができる試薬の製造における組成物の使用を提供する。
【００６５】
例えば、ＳＬＯ抗原またはこの抗原をコードする核酸を、ＧＡＳ感染の存在の検出もしくはＧＡＳ細菌に対して惹起される抗体の検出のための診断試薬の製造またはＧＡＳ細菌に対する抗体を惹起することができる試薬の製造で使用することができる。ＳＬＯ抗原をコードする核酸を、当該分野で公知のようにハイブリッド形成条件下で生体サンプルと核酸プローブを接触させることによって二重鎖を形成し、二重鎖を検出することによって検出することができる。ＳＬＯ抗原を、ＳＬＯ抗原に特異的に結合する抗体を使用して検出することができる。同様に、ＳＬＯ抗原に対する抗体を使用して、抗体−抗原複合体の形成に適切な条件下で生体サンプルを接触させ、形成された任意の複合体を検出することによってＳＬＯ抗原を検出することができる。本発明はまた、これらの方法の使用に適切な試薬を含むキットを提供する。
【００６６】
治療組成物
本発明の組成物は、化膿連鎖球菌感染の防止および／または治療に有用である。ＳＬＯ抗原を含む組成物は、好ましくは、免疫原性組成物であり、より好ましくは、ワクチン組成物である。かかる組成物のｐＨは、好ましくは、ｐＨ６とｐＨ８との間、好ましくは、約ｐＨ７である。ｐＨを緩衝剤の使用によって維持することができる。組成物は、無菌および／または無発熱物質であり得る。組成物は、ヒトに関して等張であり得る。
【００６７】
本発明のワクチンを、予防的または治療的に使用することができるが、典型的には、予防的であろう。したがって、本発明は、化膿連鎖球菌感染の治療的または予防的処置のための方法を含む。動物は、好ましくは哺乳動物であり、最も好ましくはヒトである。方法は、治療量または予防量の本発明の免疫原性組成物を動物に投与する工程を含む。
【００６８】
いくつかの本発明の組成物は、本明細書に記載のポリペプチドＳＬＯ抗原を含む。他の本発明の組成物は、ＳＬＯ抗原、任意選択的に、組成物中に含めることができる他の抗原をコードする核酸分子を含む（以下を参照のこと）。例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｔｏｒｒｅｓ（１９９７）Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９：２７１−２８３；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（１９９７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５：６１７−６４８；Ｓｃｏｔｔ−Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ（２０００）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ ９：４７１−４８０；Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓ ＆ Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ（２０００）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２：４４１−４４７；Ｉｌａｎ（１９９９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １：１１６−１２０；Ｄｕｂｅｎｓｋｙら（２０００）Ｍｏｌ Ｍｅｄ ６：７２３−７３２；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｐｅｒｔｍｅｒ（２０００）Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ ５５：１−７４；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（２０００）Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １６２（４ Ｐｔ ２）：Ｓ１９０−１９３；Ｄａｖｉｓ（１９９９）Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ Ｊ．Ｍｅｄ．６６：８４−９０を参照のこと。典型的には、核酸分子は、例えば、プラスミド形態のＤＮＡ分子である。
【００６９】
化膿連鎖球菌感染の治療用組成物は、ＳＬＯ抗原に特異的に結合する少なくとも１つの抗体および、任意選択的に、非ＳＬＯ抗原に特異的に結合する抗体を含む。いくつかの本発明の組成物は、免疫原性であり、１つまたは複数のポリペプチド抗原を含む一方で、他の免疫原性組成物は、１つまたは複数の抗原をコードする核酸分子を含む。例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｔｏｒｒｅｓ（１９９７）Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９：２７１−２８３；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（１９９７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５：６１７−６４８；Ｓｃｏｔｔ−Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｄａｌｇｌｅｉｓｈ（２０００）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ ９：４７１−４８０；Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓ ＆ Ｐｌｅｂａｎｓｋｉ（２０００）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ ２：４４１−４４７；Ｉｌａｎ（１９９９）Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ １：１１６−１２０；Ｄｕｂｅｎｓｋｙら（２０００）Ｍｏｌ Ｍｅｄ ６：７２３−７３２；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＆ Ｐｅｒｔｍｅｒ（２０００）Ａｄｖ Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ ５５：１−７４；Ｄｏｎｎｅｌｌｙら（２０００）Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １６２（４ Ｐｔ ２）：Ｓ１９０−１９３Ｄａｖｉｓ（１９９９）Ｍｔ．Ｓｉｎａｉ Ｊ．Ｍｅｄ．６６：８４−９０を参照のこと。典型的には、核酸分子は、例えば、プラスミド形態のＤＮＡ分子である。
【００７０】
いくつかの実施形態では、本発明の組成物は、１つまたは複数のさらなる活性剤を含むことができる。かかる活性剤には、（ａ）本発明の別のＳＬＯ抗原、（ｂ）小児ワクチンで有用なポリペプチド抗原、（ｃ）高齢者または免疫無防備状態の個体のためのワクチンで有用なポリペプチド抗原、（ｄ）（ａ）〜（ｃ）および（ａ）〜（ｃ）に特異的に結合する抗体をコードする核酸分子が含まれるが、これらに限定されない。
【００７１】
さらなる抗原
本発明の組成物を、本発明の治療方法、予防方法、または診断方法で使用するための１つまたは複数の抗原と組み合わせて投与することができる。好ましい抗原には、以下に列挙した抗原が含まれる。さらに、本発明の組成物を使用して、任意の以下に列挙の病原体に起因する感染を治療または防止することができる。下記の抗原との組み合わせに加えて、本発明の組成物を、本明細書中に記載のアジュバントと組み合わせることもできる。
【００７２】
本発明と共に使用するための抗原には、下記の１つまたは複数の抗原または下記の１つまたは複数の病原体由来の抗原が含まれるが、これらに限定されない。
【００７３】
Ａ．細菌抗原
本発明での使用に適切な細菌抗原には、細菌から単離、精製、または由来することができるタンパク質、多糖類、リポ多糖類、外膜小胞が含まれる。さらに、細菌抗原には、細菌溶解物および不活化細菌処方物が含まれ得る。細菌抗原を、組換え発現によって産生することができる。細菌抗原には、好ましくは、その生活環の少なくとも１段階に細菌表面に曝露されるエピトープが含まれる。細菌抗原は、好ましくは、複数の血清型で保存される。細菌抗原には、下記の１つまたは複数の細菌由来の抗原および以下で同定した特定の抗原例が含まれる。
【００７４】
ナイセリア・メニンギティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ）：メニンギティディス抗原には、Ｎ．メニンギティディス血清群（Ａ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ、および／またはＢなど）から精製または由来したタンパク質（引例１〜７で同定されたタンパク質など）、糖類（多糖類、オリゴ糖、またはリポ多糖類が含まれる）、または外膜小胞（引例８、９、１０、１１）が含まれ得る。メニンギティディスタンパク質抗原を、接着剤、オートトランスポータ、毒素、Ｆｅ獲得タンパク質、および膜結合タンパク質（好ましくは、外膜内在性タンパク質（ｉｎｔｅｇｒａｌ ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ））から選択することができる。
【００７５】
肺炎連鎖球菌：肺炎連鎖球菌抗原には、肺炎連鎖球菌由来の糖類（多糖類またはオリゴ糖が含まれる）および／またはタンパク質が含まれ得る。糖類抗原を、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択することができる。タンパク質抗原を、ＷＯ９８／１８９３１号、ＷＯ９８／１８９３０号、米国特許第６，６９９，７０３号、米国特許第６，８００，７４４号、ＷＯ９７／４３３０３号、およびＷＯ９７／３７０２６号で同定されたタンパク質から選択することができる。肺炎連鎖球菌タンパク質を、ポリヒスチジントリアドファミリー（ＰｈｔＸ）、コリン結合タンパク質ファミリー（ＣｂｐＸ）、ＣｂｐＸ短縮物、ＬｙｔＸファミリー、ＬｙｔＸ短縮物、ＣｂｐＸ短縮物−ＬｙｔＸ短縮物キメラタンパク質、ニューモリシン（Ｐｌｙ）、ＰｓｐＡ、ＰｓａＡ、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１３０、Ｓｐ１２５、またはＳｐ１３３から選択することができる。
【００７６】
化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）：Ａ群連鎖球菌抗原には、ＷＯ０２／３４７７１号またはＷＯ２００５／０３２５８２号で同定されたタンパク質（ＧＡＳ４０が含まれる）、ＧＡＳ Ｍタンパク質のフラグメントの融合物（ＷＯ０２／０９４８５１号およびＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９９）１７：１９３−２００およびＤａｌｅ，Ｖａｃｃｉｎｅ １４（１０）：９４４−９４８に記載のものが含まれる）、フィブロネクチン結合タンパク質（Ｓｆｂ１）、連鎖球菌ヘム結合タンパク質（Ｓｈｐ）、およびストレプトリシンＳ（ＳａｇＡ）が含まれ得る。
【００７７】
カタル球菌：モラクセラ抗原には、ＷＯ０２／１８５９５号およびＷＯ９９／５８５６２号で同定された抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ−ＯＭＰ）、Ｃ抗原、および／またはＬＰＳが含まれる。
【００７８】
百日咳菌：百日咳抗原には、百日咳ホロトキシン（ｐｅｔｕｓｓｉｓ ｈｏｌｏｔｏｘｉｎ）（ＰＴ）および百日咳菌由来の繊維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）が含まれ、任意選択的に、パータクチンおよび／または凝集原２および３抗原との組み合わせも含まれる。
【００７９】
黄色ブドウ球菌：黄色ブドウ球菌抗原には、非毒性組換え緑膿菌外毒素Ａと任意選択的に接合した黄色ブドウ球菌５型および８型莢膜多糖類（ＳｔａｐｈＶＡＸ（商標）など）または表面タンパク質由来の抗原、インベイシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、食細胞の貪食を阻害する表面因子（莢膜、プロテインＡ）、カロテノイド、カタラーゼ産物、プロテインＡ、凝固酵素、凝固因子、および／または真核生物細胞膜を溶解する膜損傷毒素（任意選択的に解毒した）（ヘモリシン、ロイコトキシン、ロイコシジン）が含まれる。
【００８０】
表皮ブドウ球菌：表皮ブドウ球菌抗原には、粘液結合抗原（ＳＡＡ）が含まれる。
【００８１】
破傷風菌（破傷風）：破傷風抗原には、本発明の組成物と接合した担体タンパク質として使用されることが好ましい破傷風トキソイド（ＴＴ）が含まれる。
【００８２】
ジフテリア菌（Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）（ジフテリア）：ジフテリア抗原には、好ましくは解毒されたジフテリア毒素（ＣＲＭ１９７など）が含まれる。さらに、ＡＤＰリボシル化を調整するか、阻害するか、これに関連することができる抗原は、本発明の組成物との組み合わせ／同時投与／接合が意図される。担体タンパク質としてジフテリアトキソイドを使用することができる。
【００８３】
インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原には、Ｈｉｂ糖類抗原が含まれる。
【００８４】
緑膿菌：シュードモナス抗原には、内毒素Ａ、Ｗｚｚタンパク質、緑膿菌ＬＰＳ、より詳細にはＰＡＯ１から単離したＬＰＳ（Ｏ５血清型）、および／または外膜タンパク質（外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）が含まれる）（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００１ Ｍａｙ；６９（５）：３５１０−３５１５）が含まれる。
【００８５】
レジオネラ・ニューモフィラ。細菌毒素は、レジオネラ・ニューモフィラに由来し得る。
【００８６】
ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）：Ｂ群連鎖球菌抗原には、ＷＯ０２／３４７７１号、ＷＯ０３／０９３３０６号、ＷＯ０４／０４１１５７号、またはＷＯ２００５／００２６１９号で同定されたタンパク質抗原または糖類抗原（タンパク質ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６、およびＧＢＳ３２２、ならびに血清型Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩ、およびＶＩＩＩ由来の糖類抗原が含まれる）が含まれる。
【００８７】
淋菌（Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）：ゴノレー抗原には、Ｐｏｒ（すなわち、ポリン）タンパク質（ＰｏｒＢ（Ｚｈｕら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００４）２２：６６０-６６９を参照のこと）など）、トランスフェリン結合タンパク質（ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢ（Ｐｒｉｃｅら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００４）７１（１）：２７７-２８３を参照のこと）など）、混濁タンパク質（ｏｐａｃｉｔｙ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｏｐａなど）、還元修飾性タンパク質（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ−ｍｏｄｉｆｉａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｒｍｐ）、および外膜小胞（ＯＭＶ）調製物（Ｐｌａｎｔｅら、Ｊ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（２０００）１８２：８４８-８５５を参照のこと、例えば、ＷＯ９９／２４５７８、ＷＯ９９／３６５４４、ＷＯ９９／５７２８０、ＷＯ０２／０７９２４３も参照のこと）が含まれる。
【００８８】
トラコーマクラミジア：トラコーマクラミジア抗原には、血清型Ａ、Ｂ、Ｂａ、およびＣ由来の抗原（トラコーマの作用因子、盲目の原因）、血清型Ｌ１、Ｌ２、およびＬ３由来の抗原（性病性リンパ肉芽腫症に関連）、および血清型ＤからＫ由来の抗原が含まれる。トラコーマクラミジア抗原には、ＷＯ００／３７４９４号、ＷＯ０３／０４９７６２号、ＷＯ０３／０６８８１１号、またはＷＯ０５／００２６１９号で同定された抗原（ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８、ＯｍｐＨ−ｌｉｋｅ（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４）、ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）、およびＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）が含まれる）も含まれ得る。
【００８９】
梅毒トレポネーマ（梅毒）：梅毒抗原には、ＴｍｐＡ抗原が含まれる。
【００９０】
軟性下疳菌（軟性下疳の原因菌）：デュクレイ抗原には、外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）が含まれる。
【００９１】
フェカリス菌またはフェシウム菌：抗原には、米国特許第６，７５６，３６１号に記載の三糖類反復または他の腸球菌由来の抗原が含まれる。
【００９２】
ピロリ菌：ピロリ菌抗原には、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹ、および／またはウレアーゼ抗原が含まれる。
【００９３】
腐性ブドウ球菌：抗原には、腐性ブドウ球菌抗原の１６０ｋＤａ血球凝集素が含まれる。
【００９４】
エンテロコリチカ菌抗原には、ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００２ Ａｕｇｕｓｔ；７０（８）：４４１４）が含まれる。
【００９５】
大腸菌：大腸菌抗原は、毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、凝集付着性大腸菌（ＥＡｇｇＥＣ）、びまん付着性大腸菌（ＤＡＥＣ）、腸管病原性大腸菌（ＥＰＥＣ）、および／または腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）に由来し得る。
【００９６】
炭疽菌（炭疽病）：炭疽菌抗原は任意選択的に解毒されており、Ａ成分（致死因子（ＬＦ）および浮腫因子（ＥＦ））から選択することができ、その両方が、防御抗原（ＰＡ）として公知のＢ成分を共有することができる。
【００９７】
ペスト菌（ペスト）：ペスト抗原には、Ｆ１莢膜抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００３ Ｊａｎ；７１（１））：３７４−３８３，ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．１９９９ Ｏｃｔ；６７（１０）：５３９５）、ペスト菌Ｖ抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．１９９７ Ｎｏｖ；６５（１１）：４４７６−４４８２）が含まれる。
【００９８】
結核菌：結核抗原には、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、抗原８５Ｂの融合タンパク質（Ａｇ８５Ｂ）および／または任意選択的にカチオン性脂質小胞中に配合されたＥＳＡＴ−６（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００４ Ｏｃｔｏｂｅｒ；７２（１０）：６１４８）、結核菌（Ｍｔｂ）イソクエン酸デヒドロゲナーゼ関連抗原（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００４ Ａｕｇ ２４；１０１（３４）：１２６５２）、および／またはＭＰＴ５１抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００４ Ｊｕｌｙ；７２（７）：３８２９）が含まれる。
【００９９】
リケッチア属：抗原には、外膜タンパク質（外膜プロテインＡおよび／またはＢ（ＯｍｐＢ）が含まれる）（Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ．２００４ Ｎｏｖ １；１７０２（２）：１４５）、ＬＰＳ、および表面タンパク質抗原（ＳＰＡ）（Ｊ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．１９８９ Ｊｕｎ；２ Ｓｕｐｐｌ：８１）が含まれる。
【０１００】
リステリア菌。細菌抗原は、リステリア菌に由来し得る。
【０１０１】
クラミジア・ニューモニエ：抗原には、ＷＯ０２／０２６０６号で同定された抗原が含まれる。
【０１０２】
コレラ菌：抗原には、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ（特に、コレラ菌ＩＩのリポ多糖類）、Ｏ１ Ｉｎａｂａ Ｏ−特異的多糖類、コレラ菌Ｏ１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００３ Ｏｃｔ；７１（１０）：５４９８−５０４）、および／または閉鎖帯毒素（Ｚｏｔ）が含まれる。
【０１０３】
チフス菌（チフス熱）：抗原には、莢膜多糖類、好ましくは抱合体（Ｖｉ、すなわち、ｖａｘ−ＴｙＶｉ）が含まれる。
【０１０４】
ライム病ボレリア（ライム病）：抗原には、リポタンパク質（ＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ、ＯｓｐＣ、およびＯｓｐＤなど）、他の表面タンパク質（ＯｓｐＥ関連タンパク質（Ｅｒｐｓ）など）、デコリン結合タンパク質（ＤｂｐＡなど）、および抗原多様性ＶＩタンパク質（Ｐ３９およびＰ１３に結合するタンパク質）（膜内在性タンパク質、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００１ Ｍａｙ；６９（５）：３３２３−３３３４）、ＶｌｓＥ抗原変異タンパク質（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９９ Ｄｅｃ；３７（１２）：３９９７）など）が含まれる。
【０１０５】
ジンジバリス菌：抗原には、ジンジバリス菌外膜タンパク質（ＯＭＰ）が含まれる。
【０１０６】
クレブシエラ属：抗原には、ＯＭＰ（ＯＭＰ Ａが含まれる）または破傷風トキソイド任意選択的に接合した多糖類が含まれる。
【０１０７】
さらなる本発明の細菌抗原は、上記のいずれかの莢膜抗原、多糖類抗原、またはタンパク質抗原であり得る。さらなる細菌抗原には、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物も含まれ得る。さらに、抗原には、上記細菌のいずれかの生きたバージョン、弱毒化バージョン、および／または精製バージョンが含まれる。本発明の抗原は、グラム陰性細菌またはグラム陽性細菌に由来し得る。本発明の抗原は、好気性菌または嫌気性菌に由来し得る。
【０１０８】
さらに、上記細菌由来糖類のいずれか（多糖類、ＬＰＳ、ＬＯＳ、またはオリゴ糖）を、別の作用因子または抗原（担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７など））と接合することができる。かかる接合は、米国特許第５，３６０，８９７号およびＣａｎ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１９８４ Ｍａｙ；６２（５）：２７０−５に記載のタンパク質上のアミノ基への糖類上のカルボニル部分の還元的アミド化によって生じる直接的接合であり得る。あるいは、糖類を、リンカーを介して、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１９９６およびＣＲＣ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，１９９３に記載のスクシンアミドまたは他の結合などを介して接合することができる。
【０１０９】
Ｂ．ウイルス抗原
本発明での使用に適切なウイルス抗原には、不活化（または死滅）ウイルス、弱毒化ウイルス、スプリットウイルス処方物、精製サブユニット処方物、ウイルスから単離、精製、または由来することができるウイルスタンパク質、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）が含まれる。ウイルス抗原は、細胞培養物または他の基質上に増殖したウイルスに由来し得る。あるいは、ウイルス抗原を、組換え的に発現することができる。ウイルス抗原には、好ましくは、その生活環の少なくとも１段階に細菌表面に曝露されるエピトープが含まれる。細菌抗原は、好ましくは、複数の血清型または分離株で保存される。細菌抗原には、下記の１つまたは複数の細菌由来の抗原および以下で同定した特定の抗原例が含まれる。
【０１１０】
オルソミクソウイルス：ウイルス抗原は、オルソミクソウイルス（インフルエンザＡ型、Ｂ型、およびＣ型など）に由来し得る。オルソミクソウイルス抗原を、１つまたは複数のウイルスタンパク質（血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、基質タンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）、１つまたは複数の転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２、およびＰＡ）が含まれる）から選択することができる。好ましい抗原には、ＨＡおよびＮＡが含まれる。
【０１１１】
インフルエンザ抗原は、世界的流行間期の（年間流行性）インフルエンザ株に由来し得る。あるいは、インフルエンザ抗原は、世界的流行およびその発生を引き起こす可能性のある株（すなわち、現在広まっている株における赤血球凝集素と比較して新規の赤血球凝集素を有するインフルエンザ株、トリ被験体中で病原性を示し、且つヒト集団において水平伝播する可能性があるインフルエンザ株、またはヒトに病原性を示すインフルエンザ株）に由来し得る。
【０１１２】
パラミクソウイルス科のウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス科のウイルス（ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、およびモルビリウイルス（麻疹）など）に由来し得る。
【０１１３】
ニューモウイルス：ウイルス抗原は、ニューモウイルス（呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、マウス肺炎ウイルス、およびシチメンチョウ鼻気管炎ウイルスなど）に由来し得る。好ましくは、ニューモウイルスはＲＳＶである。ニューモウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質（表面タンパク質（融合物（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）、および小疎水性タンパク質（ＳＨ））、基質タンパク質ＭおよびＭ２、ヌクレオカプシドタンパク質Ｎ、Ｐ、およびＬならびに非構造タンパク質ＮＳ１およびＮＳ２が含まれる）から選択することができる。好ましいニューモウイルス抗原には、Ｆ、Ｇ、およびＭが含まれる。例えば、Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．２００４ Ｎｏｖ；８５（Ｐｔ１１）：３２２９）を参照のこと。ニューモウイルス抗原を、キメラウイルス中に配合するか、これに由来することができる。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含むことができる。
【０１１４】
パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス（パラインフルエンザウイルス１型〜４型（ＰＩＶ）、ムンプス、センダイウイルス、サルウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルス、およびニューカッスル病ウイルスなど）に由来し得る。好ましくは、パラミクソウイルスはＰＩＶまたはムンプスである。パラミクソウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質から選択することができる：血球凝集素−ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質Ｆ１およびＦ２、核タンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、巨大タンパク質（Ｌ）、および基質タンパク質（Ｍ）。好ましいパラミクソウイルスタンパク質には、ＨＮ、Ｆ１、およびＦ２が含まれる。パラミクソウイルス抗原を、キメラウイルス中に配合するか、これに由来することができる。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含むことができる。市販のムンプスワクチンには、１価の形態または麻疹ワクチンおよび風疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせた弱毒化生ムンプスウイルスが含まれる。
【０１１５】
モルビリウイルス：ウイルス抗原は、モルビリウイルス（麻疹ウイルスなど）に由来し得る。モルビリウイルス抗原を、１つまたは複数の以下のタンパク質から選択することができる：血球凝集素（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合因子（Ｆ）、巨大タンパク質（Ｌ）、核タンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼリンタンパク質（Ｐ）、および基質（Ｍ）。市販の麻疹ワクチンには、典型的にはムンプスおよび風疹（ＭＭＲ）と組み合わせた弱毒化生麻疹ウイルスが含まれる。
【０１１６】
ピコルナウイルス：ウイルス抗原は、ピコルナウイルス（エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス、カルジオウイルス、およびアフトウイルスなど）に由来し得る。エンテロウイルス（ポリオウイルスなど）由来の抗原が好ましい。
【０１１７】
エンテロウイルス：ウイルス抗原は、エンテロウイルス（ポリオウイルス１型１、２型、または３型）、コクサッキーＡウイルス１〜２２型および２４型、コクサッキーＢウイルス１〜６型、エコーウイルス（ＥＣＨＯ）１〜９型、１１〜２７型、および２９〜３４型、ならびにエンテロウイルス６８〜７１など）に由来し得る。好ましくは、エンテロウイルスはポリオウイルスである。エンテロウイルス抗原は、好ましくは、１つまたは複数の以下のキャプシドタンパク質から選択される：ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、およびＶＰ４。市販のポリオワクチンには、不活化ポリオワクチン（ＩＰＶ）および経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ）が含まれる。
【０１１８】
ヘパルナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパルナウイルス（Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）など）に由来し得る。市販のＨＡＶワクチンには、不活化ＨＡＶワクチンが含まれる。
【０１１９】
トガウイルス：ウイルス抗原は、トガウイルス（ルビウイルス、アルファウイルス、またはアルテリウイルスなど）に由来し得る。ルビウイルス（風疹ウイルスなど）由来の抗原が好ましい。トガウイルス抗原を、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ−１、ＮＳＰＯ−２、ＮＳＰ−３、またはＮＳＰ−４から選択することができる。トガウイルス抗原を、好ましくは、Ｅ１、Ｅ２、またはＥ３から選択する。市販の風疹ワクチンには、典型的にはムンプスワクチンおよび麻疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせた低温適応の生きたウイルスが含まれる。
【０１２０】
フラビウイルス：ウイルス抗原は、フラビウイルス（ダニ媒介性脳炎（ＴＢＥ）、デング熱（１、２、３、または４型）、黄熱病、日本脳炎、ウエストナイル脳炎、セントルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポワッサン脳炎など）に由来し得る。フラビウイルス抗原を、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ−１、ＮＳ−２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、およびＮＳ５から選択することができる。フラビウイルス抗原を、好ましくは、ＰｒＭ、Ｍ、およびＥから選択する。市販のＴＢＥワクチンには、不活化ウイルスワクチンが含まれる。
【０１２１】
ペスチウイルス：ウイルス抗原は、ペスチウイルス（ウシウイルス性下痢（ＢＶＤＶ）、ブタコレラ（ＣＳＦＶ）、またはボーダー病（ＢＤＶ）など）に由来し得る。
【０１２２】
ヘパドナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパドナウイルス（Ｂ型肝炎ウイルスなど）に由来し得る。ヘパドナウイルス抗原を、表面抗原（Ｌ、Ｍ、およびＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択することができる。市販のＨＢＶワクチンには、表面抗原Ｓタンパク質を含むサブユニットワクチンが含まれる。
【０１２３】
Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に由来し得る。ＨＣＶ抗原を、１つまたは複数のＥ１、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリタンパク質、ＮＳ３４５−コアポリタンパク質、コア、および／または非構造領域由来のペプチド（Ｈｏｕｇｈｔｏｎら、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１）から選択することができる。
【０１２４】
ラブドウイルス：ウイルス抗原は、ラブドウイルス（リッサウイルス（狂犬病ウイルス）およびベシクロウイルス（ＶＳＶ）など）に由来し得る。ラブドウイルス抗原を、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、巨大タンパク質（Ｌ）、非構造タンパク質（ＮＳ）から選択することができる。市販の狂犬病ウイルスワクチンは、ヒト二倍体細胞またはアカゲザル胎児肺細胞で成長した死滅ウイルスを含む。
【０１２５】
カリシウイルス科；ウイルス抗原は、カルシウイルス科（ノーウォークウイルスおよびノーウォーク様ウイルス（ハワイウイルスおよびスノーマウンテンウイルスなど）など）に由来し得る。
【０１２６】
コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、トリ伝染性気管支炎（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）、およびブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）に由来し得る。コロナウイルス抗原を、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、基質（Ｍ）、ヌクレオカプシド（Ｎ）、および血球凝集素−エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択することができる。好ましくは、コロナウイルス抗原は、ＳＡＲＳウイルスに由来する。ＳＡＲＳウイルス抗原は、ＷＯ０４／９２３６０号に記載されている。
【０１２７】
レトロウイルス：ウイルス抗原は、レトロウイルス（オンコウイルス、レンチウイルス、またはスプーマウイルスなど）に由来し得る。オンコウイルス抗原は、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２、またはＨＴＬＶ−５に由来し得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に由来し得る。レトロウイルス抗原を、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕ、およびｖｐｒから選択することができる。ＨＩＶ抗原を、ｇａｇ（ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（ｇｐ１６０およびｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ ｖｐｕ、ミニタンパク質（好ましくは、ｐ５５ ｇａｇおよびｇｐ１４０ｖ欠失）から選択することができる。ＨＩＶ抗原は、１つまたは複数の以下の株に由来し得る：ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４。
【０１２８】
レオウイルス：ウイルス抗原は、レオウイルス（オルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルス、またはコルティウイルスなど）に由来し得る。レオウイルス抗原を、構造タンパク質λ１、λ２、λ３、μ１、μ２、σ１、σ２、もしくはσ３、または非構造タンパク質σＮＳ、μＮＳ、もしくはσ１ｓから選択することができる。好ましいレオウイルス抗原は、ロタウイルスに由来し得る。ロタウイルス抗原を、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４、またはＮＳＰ５から選択することができる。好ましいロタウイルス抗原には、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、およびＶＰ７が含まれる。
【０１２９】
パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルス（パルボウイルスＢ１９など）に由来し得る。パルボウイルス抗原を、ＶＰ−１、ＶＰ−２、ＶＰ−３、ＮＳ−１、およびＮＳ−２から選択することができる。好ましくは、パルボウイルス抗原は、キャプシドタンパク質ＶＰ−２である。
【０１３０】
デルタ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ、特に、ＨＤＶ由来のδ−抗原（例えば、米国特許第５，３７８，８１４号を参照のこと）に由来し得る。
【０１３１】
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原は、ＨＥＶに由来し得る。
【０１３２】
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原は、ＨＧＶに由来し得る。
【０１３３】
ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、ヒトヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、およびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）など）に由来し得る。ヒトヘルペスウイルス抗原を、最初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）、および後期タンパク質（γ）から選択することができる。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ−１株またはＨＳＶ−２株に由来し得る。ＨＳＶ抗原を、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤ、およびｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）、または免疫回避タンパク質（ｇＣ、ｇＥ、またはｇＩ）から選択することができる。ＶＺＶ抗原を、コアタンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質、テグメントタンパク質、またはエンベロープタンパク質から選択することができる。弱毒化生ＶＺＶワクチンは市販されている。ＥＢＶ抗原を、初期抗原（ＥＡ）タンパク質、ウイルスキャプシド抗原（ＶＣＡ）、および膜抗原（ＭＡ）の糖タンパク質から選択することができる。ＣＭＶ抗原を、キャプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質（ｇＢおよびｇＨなど）、およびテグメントタンパク質から選択することができる。
【０１３４】
パポーバウイルス：抗原は、パポーバウイルス（パピローマウイルスおよびポリオーマウイルスなど）に由来し得る。パピローマウイルスには、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３、および６５が含まれる。好ましくは、ＨＰＶ抗原は、血清型６、１１、１６、または１８に由来する。ＨＰＶ抗原を、キャプシドタンパク質（Ｌ１）および（Ｌ２）またはＥ１〜Ｅ７、またはその融合物から選択することができる。ＨＰＶ抗原を、好ましくは、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）に配合する。ポリオーマウイルス（Ｐｏｌｙｏｍｙａｖｉｒｕｓ）には、ＢＫウイルスおよびＪＫウイルスが含まれる。ポリオーマウイルス抗原を、ＶＰ１、ＶＰ２、またはＶＰ３から選択することができる。
【０１３５】
Ｖａｃｃｉｎｅｓ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｐｌｏｔｋｉｎ ａｎｄ Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ ｅｄ．２００４）；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｕｒｒａｙら、ｅｄ．２００２）；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ ｅｄ．１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｂ．Ｎ．Ｆｉｅｌｄｓ ａｎｄ Ｄ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ，ｅｄｓ．１９９１）（本発明の組成物と併せて意図される）に含まれる抗原、組成物、方法、および微生物がさらに提供される。
【０１３６】
Ｃ．真菌抗原
本発明で用いる真菌抗原は、１つまたは複数の下記の真菌に由来し得る。
【０１３７】
真菌抗原は、皮膚糸状菌（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｒｅｓ）（エピデルモフィトン・フロッコーサム（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｌｏｃｃｕｓｕｍ）、ミクロスポルム・オドウィニ（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ａｕｄｏｕｉｎｉ）、ミクロスポルム・カニス（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｃａｎｉｓ）、ミクロスポルム・ディストルツム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｄｉｓｔｏｒｔｕｍ）、ミクロスポルム・エクイヌム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｅｑｕｉｎｕｍ）、ミクロスポルム・ジプスム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｇｙｐｓｕｍ）、ミクロスポルム・ナヌム（Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｎｕｍ）、トリコフィトン・コンセントリクム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃｕｍ）、トリコフィトン・エクイヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｅｑｕｉｎｕｍ）、トリコフィトン・ガリネ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇａｌｌｉｎａｅ）、トリコフィトン・ジプセウム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇｙｐｓｅｕｍ）、トリコフィトン・メグニニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｇｎｉｎｉ）、トリコフィトン・メンタグロフィテス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ）、トリコフィトン・キンケアヌム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｑｕｉｎｃｋｅａｎｕｍ）、トリコフィトン・ルブルム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ）、トリコフィトン・シェーンレイニ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎｉ）、トリコフィトン・トンスランス（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｔｏｎｓｕｒａｎｓ）、トリコフィトン・ベルコスム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ）、Ｔ．ベルコスム・アルブム変種（Ｔ．ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ ｖａｒ．ａｌｂｕｍ）、ジスコイデス変種（ｖａｒ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｓ）、オクラセイム変種（ｖａｒ．ｏｃｈｒａｃｅｕｍ）、トリコフィトン・ビオラセウム（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｉｏｌａｃｅｕｍ）、および／またはトリコフィトン・ファビホルメ（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｆａｖｉｆｏｒｍｅ）が含まれる）に由来し得る。
【０１３８】
真菌病原体は、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）、アスペルギルス・フラバス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ）、クロコウジカビ、アスペルギルス・ニデュランス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ）、アスペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）、アスペルギルス・シドウィ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉ）、アスペルギルス・フラバタス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖａｔｕｓ）、アスペルギルス・グラウクス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ）、ブラストシゾマイセス・カピタタス（Ｂｌａｓｔｏｓｃｈｉｚｏｍｙｃｅｓ ｃａｐｉｔａｔｕｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）、カンジダ・エノラーゼ（Ｃａｎｄｉｄａ ｅｎｏｌａｓｅ）、カンジダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・グラブラタ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ）、カンジダ・クルセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ）、カンジダ・パラプシローシス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）、カンジダ・ステラトイデア（Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ）、カンジダ・クセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｋｕｓｅｉ）、カンジダ・パラクエセイ（Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｋｗｓｅｉ）、カンジダ・ルシタニエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ）、カンジダ・シュードトロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、カンジダ・グイリエルモンジ（Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉ）、クラドスポリム・カリオニイ（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃａｒｒｉｏｎｉｉ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、ブラストミセス・デルマチディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ゲオトリクム・クラバタム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｌａｖａｔｕｍ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、肺炎桿菌、南アメリカ分芽菌、ニューモシスチス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、ピシウムン・インシジオスム（Ｐｙｔｈｉｕｍｎ ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ）、ピチロスポルム・オバール（Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｖａｌｅ）、酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓａｅ）、サッカロマイセス・ブラウディ、サッカロミセス・ポンベ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）、スケドスポリウム・アピオスペルム（Ｓｃｅｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｐｉｏｓｐｅｒｕｍ）、スポロトリクス・シェンキ（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ）、トリコスポロン・ベイゲリ（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｂｅｉｇｅｌｉｉ）、トキソプラズマ・ゴンディ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ペニシリウム・マルネフェイ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ）、マラセジア（Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ）属菌種、フォンセケア（Ｆｏｎｓｅｃａｅａ）属菌種、ワンギエラ（Ｗａｎｇｉｅｌｌａ）属菌種、スポロトリクス（Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ）属菌種、バシジオボラス（Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属菌種、コニディオボラス（Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ）属菌種、リゾプス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ）属菌種、ムコール（Ｍｕｃｏｒ）属菌種、アブシディア（Ａｂｓｉｄｉａ）属菌種、モルチエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属菌種、クニンガメラ（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ）属菌種、サクセネア（Ｓａｋｓｅｎａｅａ）属菌種、アルテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）属菌種、カーブラリア（Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ）属菌種、ヘルミントスポリウム（Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ）属菌種、フザリウム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ）属菌種、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属菌種、ペニシリウム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）属菌種、アモノリニア（Ｍｏｎｏｌｉｎｉａ）属菌種、リゾクトニア（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）属菌種、ペシロマイセス（Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ）属菌種、ピトマイセス（Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ）属菌種、およびクラドスポリウム（Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ）属菌種に由来し得る。
【０１３９】
真菌抗原の産生プロセスは、当該分野で周知である（米国特許第６，３３３，１６４号を参照のこと）。好ましい方法では、その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞から得ることができる不溶性画分から抽出および分離した可溶化画分を、プロセスが、生きた真菌細胞を得る工程；その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞を得る工程；その細胞壁が実質的に除去されているか少なくとも部分的に除去された真菌細胞を破裂させる工程；不溶性画分を得る工程；ならびに不溶性画分から可溶化画分を抽出および分離する工程を含むという点で特徴づけた。
【０１４０】
Ｄ．ＳＴＤ抗原
本発明の組成物は、１つまたは複数の性感染症（ＳＴＤ）由来の抗原を含むことができる。かかる抗原は、ＳＴＤ（クラミジア、陰部ヘルペス、肝炎（ＨＣＶなど）、陰部疣贅、淋病、梅毒、および／または軟性下疳など）を予防または治療することができる（ＷＯ００／１５２５５号を参照のこと）。抗原は、１つまたは複数のウイルスまたは細菌のＳＴＤに由来し得る。本発明で用いるウイルスＳＴＤ抗原は、例えば、ＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、および肝炎（ＨＣＶ）に由来し得る。本発明で用いる細菌ＳＴＤ抗原は、例えば、淋菌、トラコーマクラミジア、梅毒トレポネーマ、軟性下疳菌、大腸菌、およびストレプトコッカス・アガラクチアに由来し得る。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１４１】
Ｅ．呼吸器抗原
本発明の組成物は、呼吸器疾患を引き起こす病原体由来の１つまたは複数の抗原を含むことができる。例えば、呼吸器抗原は、呼吸器ウイルス（オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶ、およびコロナウイルス（ＳＡＲＳ）など）に由来し得る。呼吸器抗原は、呼吸器疾患を引き起こす細菌（肺炎連鎖球菌、緑膿菌、百日咳菌、結核菌、肺炎マイコプラズマ、クラミジア・ニューモニエ、炭疽菌、およびカタル球菌など）に由来し得る。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１４２】
Ｆ．小児ワクチン抗原
本発明の組成物は、小児被験体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。小児被験体は、典型的には、約３歳未満、約２歳未満、または約１歳未満である。小児抗原を、６ヶ月、１年、２年、または３年にわたって複数回投与することができる。小児抗原は、小児集団を標的することができるウイルスおよび／または小児集団が感染に感受性を示すウイルスに由来し得る。小児ウイルス抗原には、１つまたは複数のオルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、および水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）由来の抗原が含まれる。小児細菌抗原には、１つまたは複数の肺炎連鎖球菌、ナイセリア・メニンギティディス、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、カタル球菌、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）、緑膿菌、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）、および大腸菌由来の抗原が含まれる。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１４３】
Ｇ．高齢者または免疫無防備状態の個体での使用に適切な抗原
本発明の組成物は、高齢者または免疫無防備状態の個体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。かかる個体に、より頻繁に、標的化抗原に対するその免疫応答を改良するためにより高い用量またはアジュバント化（ａｄｊｕｖａｎｔｅｄ）処方物でワクチン接種することが必要であり得る。高齢者または免疫無防備状態の個体での使用のために標的化することができる抗原には、１つまたは複数の以下の病原体由来の抗原が含まれる：ナイセリア・メニンギティディス、肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、カタル球菌、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ（Ｈｉｂ）、緑膿菌、レジオネラ・ニューモフィラ、ストレプトコッカス・アガラクチア（Ｂ群連鎖球菌）、フェカリス菌、ピロリ菌、肺炎クラミジア（Ｃｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、オルソミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびムンプス）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水痘帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）。これらの病原体由来の特異的抗原の例は、上に記載している。
【０１４４】
Ｈ．青年期ワクチンでの使用に適切な抗原
本発明の組成物は、青年期被験体での使用に適切な１つまたは複数の抗原を含むことができる。青年期は、以前に投与した小児ワクチンの追加免疫が必要であり得る。青年期での使用に適切であり得る小児抗原は、上に記載されている。さらに、性行為の開始前に防御免疫または治療的免疫を確実にするために、ＳＴＤ病原体由来の抗原を投与するために青年期を標的化することができる。青年期での使用に適切であり得るＳＴＤ抗原は、上に記載されている。
【０１４５】
Ｉ．抗原処方物
本発明の他の態様では、吸着抗原を有する微粒子の生成方法を提供する。本方法は、（ａ）（ｉ）水、（ｉｉ）界面活性剤、（ｉｉｉ）有機溶媒、および（ｉｖ）ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、およびポリシアノアクリラートからなる群から選択される生分解性ポリマーを含む混合物の分散によって乳濁液を準備する工程を含む。ポリマーは、典型的には、有機溶媒と比較して約１％〜約３％の濃度の混合物で存在する一方で、界面活性剤は、典型的には、約０．００００１：１〜約０．１：１（より典型的には、約０．０００１：１〜約０．１：１、約０．００１：１〜約０．１：１、または約０．００５：１〜約０．１：１）の水：水、界面活性剤：ポリマー比で混合物中に存在する、準備する工程、（ｂ）乳濁液から有機溶媒を除去する工程、および（ｃ）微粒子表面上に抗原を吸着させる工程を含む。一定の実施形態では、生分解性ポリマーは、有機溶媒と比較して約３％〜約１０％の濃度で存在する。
【０１４６】
本明細書中で使用するための微粒子を、滅菌可能で、非毒性を示し、生分解性を示す材料から形成するであろう。かかる材料には、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、ＰＡＣＡ、およびポリシアノアクリラートが含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、本発明と共に使用するための微粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、特に、ポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）またはＤ，Ｌ−ラクチドとグリコリドまたはグリコール酸とのコポリマー（ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリドなど）（「ＰＬＧ」または「ＰＬＧＡ」）、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンとのコポリマーに由来する。微粒子は、種々の分子量、ＰＬＧなどのコポリマーの場合、種々のラクチド：グリコリド比を有する任意の種々の重合開始材料に由来し得、その選択は、同時投与される高分子に一部依存して、多くの選択肢があるであろう。これらのパラメータは、以下により完全に考察されている。
【０１４７】
さらなる抗原には、外膜小胞（ＯＭＶ）調製物も含まれ得る。
【０１４８】
さらなる処方方法および抗原（特に、腫瘍抗原）は、米国特許出願番号０９／５８１，７７２号に記載されている。
【０１４９】
Ｊ．抗原についての引例
以下の引例は、本発明の組成物と併せて有用な抗原を含む。
【０１５０】
【化１】
【０１５１】
【化２】
上記で引用した全ての特許、特許出願、および学術論文の内容は、本明細書中で完全に記載されているかのように参考として援用される。
【０１５２】
糖類抗原または炭水化物抗原を使用する場合、好ましくは、この抗原を担体タンパク質と接合して免疫原性を増強する。Ｒａｍｓａｙら（２００１）Ｌａｎｃｅｔ３５７（９２５１）：１９５−１９６；Ｌｉｎｄｂｅｒｇ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ２８−３６；Ｂｕｔｔｅｒｙ ＆ Ｍｏｘｏｎ（２０００）Ｊ Ｒ Ｃｏｌｌ Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｌｏｎｄ ３４：１６３−１６８；Ａｈｍａｄ ＆ Ｃｈａｐｎｉｃｋ（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｃｌｉｎ Ｎｏｒｔｈ Ａｍ １３：１１３−１３３，ｖｉｉ；Ｇｏｌｄｂｌａｔｔ（１９９８）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４７：５６３−５６７；欧州特許第０４７７５０８号；米国特許第５，３０６，４９２号；ＷＯ９８／４２７２１号；Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ（ｅｄｓ．Ｃｒｕｓｅら）ＩＳＢＮ ３８０５５４９３２６、特に、ｖｏｌ．１０：４８−１１４；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ＩＳＢＮ：０１２３４２３３６８ ｏｒ ０１２３４２３３５Ｘを参照のこと。好ましい担体タンパク質は、細菌毒素またはトキソイド（ジフテリアトキソイドまたは破傷風トキソイドなど）である。ＣＲＭ１９７ジフテリアトキソイドが特に好ましい。
【０１５３】
他の担体ポリペプチドには、髄膜炎菌外膜タンパク質（ＥＰ−Ａ−０３７２５０１号）、合成ペプチド（ＥＰ−Ａ−０３７８８８１号およびＥＰ−Ａ０４２７３４７号）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２号およびＷＯ９４／０３２０８号）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８号およびＥＰ Ａ ０４７１１７７号）、インフルエンザ菌由来のタンパク質Ｄ（ＷＯ００／５６３６０号）、サイトカイン（ＷＯ９１／０１１４６号）、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１号）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７号）などが含まれる。混合物がセリグラフ（ｓｅｒｉｇｒａｐｈ）ＡおよびＣの両方由来の莢膜糖類を含む場合、ＭｅｎＡ糖類：ＭｅｎＣ糖類の比（ｗ／ｗ）は１を超える（例えば、２：１、３：１、４：１、５：１、１０：１、またはそれを超える）ことが好ましい場合がある。異なる糖類を、同型または異なる型の担体タンパク質に接合することができる。必要に応じて任意の適切なリンカーを使用した任意の適切な接合反応を使用することができる。
【０１５４】
必要に応じて、有毒タンパク質抗原を解毒することができる（例えば、化学的手段および／または遺伝子手段による百日咳毒素の解毒）。
【０１５５】
薬学的に許容可能な担体
本発明の組成物は、典型的には、上記成分に加えて、１つまたは複数の「薬学的に許容可能な担体」を含むであろう。これらには、担体自体が組成物を投与される個体に有害な抗体の産生を誘導しない任意の担体が含まれる。適切な担体は、典型的には、巨大でゆっくり代謝される高分子（タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質凝集体（油滴またはリポソームなど）など）である。かかる担体は、当業者に周知である。組成物はまた、希釈剤（水、生理食塩水、グリセロールなど）を含むことができる。さらに、補助剤（湿潤剤または乳化剤およびｐＨ緩衝物質など）が存在し得る。薬学的に許容可能な成分の徹底的な考察は、Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ．２０ｔｈ ｅｄ．，ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２で得られる。
【０１５６】
免疫調節薬
アジュバント
本発明のワクチンを、他の免疫調節薬と併せて投与することができる。特に、組成物は、通常、アジュバントを含むであろう。本発明と共に使用するためのアジュバントには、１つまたは複数の下記のアジュバントが含まれるが、これらに限定されない。
【０１５７】
Ａ．ミネラル含有組成物
本発明でのアジュバンとしての使用に適切なミネラル含有組成物は、ミネラル塩（アルミニウム塩およびカルシウム塩など）を含む。本発明は、水酸化物（例えば、オキシヒドロキシド）、リン酸塩（例えば、ヒドロキシホスフェート、オルトホスフェート）、硫酸塩などのミネラル塩（例えば、ｃｈａｐｔｅｒｓ８ ＆ ９ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ…（１９９５）ｅｄｓ．Ｐｏｗｅｌｌ ＆ Ｎｅｗｍａｎ．ＩＳＢＮ：０３０６４４８６７Ｘ．Ｐｌｅｎｕｍ．）または異なるミネラル化合物の混合物（例えば、リン酸塩アジュバントと水酸化物アジュバントとの混合物（任意選択的にリン酸塩が過剰））を含み、この化合物は任意の適切な形態（例えば、ゲル、血漿、無定形など）をとり、塩に吸着していることが好ましい。ミネラル含有組成物を、金属塩の粒子として処方することもできる（ＷＯ００／２３１０５号）。
【０１５８】
アルミニウム塩を、Ａｌ３＋の用量が０．２ｍｇ／用量と１．０ｍｇ／用量との間であるように本発明のワクチン中に含めることができる。
【０１５９】
１つの実施形態では、本発明で用いるアルミニウムベースのアジュバントは、ミョウバン（硫酸アルミニウムカリウム（ＡｌＫ（ＳＯ４）２））またはミョウバン誘導体（リン酸緩衝剤中で抗原とミョウバンとを混合し、その後に滴定し、水酸化アンモニウムまたは水酸化ナトリウムなどの塩基で沈殿させることによってインサイチュで形成したミョウバン誘導体など）である。
【０１６０】
本発明のワクチン処方で用いる別のアルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）３）または結晶オキシ水素化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）（優れた吸着剤であり、表面積が約５００ｍ２／ｇである）である。あるいは、リン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ４）またはヒドロキシリン酸アルミニウム（水酸化アルミニウムアジュバントのいくつかまたは全てのヒドロキシル基の代わりにリン酸基を含む）を提供する。本明細書中で提供する好ましいリン酸アルミニウムアジュバントは無定形であり、酸性、塩基性、および中性の媒質中に可溶である。
【０１６１】
別の実施形態では、本発明のアジュバントは、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムの両方を含む。そのより特定の実施形態では、アジュバントは、水酸化アルミニウムよりも大量のリン酸アルミニウムを有する（２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、または９：１超などのリン酸アルミニウム：水酸化アルミニウムの重量比）。さらにより詳細には、ワクチン中のアルミニウム塩は、０．４〜１．０ｍｇ／ワクチン用量、０．４〜０．８ｍｇ／ワクチン用量、０．５〜０．７ｍｇ／ワクチン用量、または約０．６ｍｇ／ワクチン用量で存在する。
【０１６２】
一般に、好ましいアルミニウムベースのアジュバントまたは複数のアルミニウムベースのアジュバントの比率（リン酸アルミニウム：水酸化アルミニウムなど）を、抗原が所望のｐＨでアジュバントとして逆の電荷を有するように分子間の静電気引力を至適化することによって選択する。例えば、リン酸アルミニウムアジュバント（等電点＝４）はリゾチームを吸着するが、ｐＨ７．４でアルブミンを吸着しない。アルブミンが標的である場合、水酸化アルミニウムアジュバントを選択するであろう（ｉｅｐ １１．４）。あるいは、リン酸塩での水酸化アルミニウムの前処理によってその等電点が低下し、より塩基性の高い抗原に好ましいアジュバントとなる。
【０１６３】
Ｂ．油性乳濁液
本発明でのアジュバントとしての使用に適切な油性乳濁液組成物には、スクアレン−水乳濁液（ＭＦ５９（ミクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）を使用して、５％スクアレン、０．５％ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．５％Ｓｐａｎ８５をサブミクロン粒子に処方したもの）など）が含まれる。ＷＯ９０／１４８３７号を参照のこと。Ｐｏｄｄａ，Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２６７３−２６８０；Ｆｒｅｙら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：４２３４−４２３７も参照のこと。ＭＦ５９を、ＦＬＵＡＤ（商標）インフルエンザウイルス３価サブユニットワクチンにおけるアジュバントとして使用する。
【０１６４】
組成物中での使用に特に好ましいアジュバントは、サブミクロン水中油型乳濁液である。本明細書中での使用に好ましいサブミクロン水中油型乳濁液は、種々の量のＭＴＰ−ＰＥを任意選択的に含むスクアレン／水乳濁液（４〜５％ ｗ／ｖ スクアレン、０．２５〜１．０％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０□（ポリオキシエチレンソルビタン（ｐｏｌｙｏｘｙｅｌｔｈｙｌｅｎｅｓｏｒｂｉｔａｎ）モノオレアート、および／または０．２５〜１．０％ ＳＰＡＮ ８５（商標）（ソルビタントリオレアート）、および任意選択的にＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−ヒドロキシホスホホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含むサブミクロン水中油型乳濁液（例えば、「ＭＦ５９」として公知のサブミクロン水中油型乳濁液（国際公開番号ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号、およびＯｔｔら、ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．ａｎｄ Ｎｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．ｅｄｓ．）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５，ｐｐ．２７７−２９６））など）である。ＭＦ５９は、４〜５％ ｗ／ｖ スクアレン（例えば、４．３％）、０．２５〜０．５％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．５％ ｗ／ｖ ＳＰＡＮ ８５（商標）を含み、任意選択的に種々の量のＭＴＰ−ＰＥを含み、これがＭｏｄｅｌ １１０Ｙミクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、Ｎｅｗｔｏｎ、ＭＡ）などのミクロフルイダイザーを使用してサブミクロン粒子に処方されている。例えば、ＭＴＰ−ＰＥは、約０〜５００μｇ／用量、より好ましくは０〜２５０μｇ／用量、最も好ましくは０〜１００μｇ／用量で存在し得る。本明細書中で使用される場合、用語「ＭＦ５９−０」は、ＭＴＰ−ＰＥを欠く上記サブミクロン水中油型乳濁液いう一方で、用語「ＭＦ５９−ＭＴＰ」は、ＭＴＰ−ＰＥを含む処方物を示す。例えば、「ＭＦ５９−１００」は、１００μｇ ＭＴＰ−ＰＥ／用量などを含む。ＭＦ６９（本明細書中で用いる別のサブミクロン水中油型乳濁液）は、４．３％ ｗ／ｖ スクアレン、０．２５％ ｗ／ｖ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、および０．７５％ ｗ／ｖ ＳＰＡＮ ８５（商標）、および任意選択的にＭＴＰ−ＰＥを含む。さらに別のサブミクロン水中油型乳濁液は、ＳＡＦとしても公知のＭＦ７５であり、これは１０％スクアレン、０．４％ ＴＷＥＥＮ（商標）８０、５％プルロニックブロック重合体Ｌ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロン乳濁液にミクロ流体化もされている。ＭＦ７５−ＭＴＰは、ＭＴＰ（１００〜４００μｇ ＭＴＰ−ＰＥ／用量など）を含むＭＦ７５処方物を示す。
【０１６５】
組成物で用いるサブミクロン水中油型乳濁液、その作製方法、および免疫賦活剤（ムラミルペプチドなど）は、ＷＯ９０／１４８３７号および米国特許第６，２９９，８８４号および同第６，４５１，３２５号に詳述されている。
【０１６６】
フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。
【０１６７】
Ｃ．サポニン処方物
サポニン処方物を、本発明でアジュバンとして使用することもできる。サポニンは、ステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種群であり、広範な植物種の樹皮、葉、幹、根、さらに花弁中で見出される。バラ科キラヤの幹から単離したサポニンは、アジュバンとして広く研究されている。スミラックス・オルナタ（Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ）（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、シュッコンカスミソウ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）（ブライドベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））、およびサボンソウ（ソープルート（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））由来のサポニンを購入することもできる。サポニンアジュバント処方物には、精製処方物（ＱＳ２１など）および脂質処方物（ＩＳＣＯＭなど）が含まれる。
【０１６８】
サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィ（ＨＰ−ＴＬＣ）および逆相高速液体クロマトグラフィ（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を使用して精製されている。これらの技術を使用した特定の精製画分（ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−Ｂ、およびＱＨ−Ｃが含まれる）が同定されている。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の生成方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン処方物はまた、コレステロールなどのステロールを含むこともできる（ＷＯ９６／３３７３９号を参照のこと）。
【０１６９】
サポニンとコレステロールとの組み合わせを使用して、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる固有の粒子を形成することができる。ＩＳＣＯＭは、典型的には、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質も含む。任意の公知のサポニンを、ＩＳＣＯＭで使用することができる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、１つまたは複数のＱｕｉｌ Ａ、ＱＨＡ、およびＱＨＣを含む。ＩＳＣＯＭは、ＥＰ０１０９９４２号、ＷＯ９６／１１７１１号、およびＷＯ９６／３３７３９号にさらに記載されている。任意選択的に、ＩＳＣＯＭＳは、さらなる界面活性剤を欠いていてもよい。ＷＯ００／０７６２１号を参照のこと。
【０１７０】
サポニンベースのアジュバント開発の概説を、Ｂａｒｒ，ら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：２４７−２７１に見出すことができる。Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，ら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（１９９８）３２：３２１−３３８も参照のこと。
【０１７１】
Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）を、本発明でアジュバントとして使用することもできる。これらの構造物は、一般に、任意選択的にリン脂質と組み合わせた、またはこれを用いて処方したウイルス由来の１つまたは複数のタンパク質を含む。これらは、一般に、非病原性で複製せず、一般に、任意の未変性のウイルスゲノムを含まない。ウイルスタンパク質を、組換え的に産生し、または全ウイルスから単離することができる。ビロソームまたはＶＬＰでの使用に適切なこれらのウイルスタンパク質には、インフルエンザウイルス（ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス（コアタンパク質またはキャプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビス・ウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒト乳頭腫ウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡ−ファージ、Ｑβ−ファージ（コートタンパク質など）、ＧＡ−ファージ、ｆｒ−ファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１など）由来のタンパク質が含まれる。ＶＬＰは、ＷＯ０３／０２４４８０号、ＷＯ０３／０２４４８１号、Ｎｉｉｋｕｒａら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００２）２９３：２７３−２８０；Ｌｅｎｚら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００１）５２４６−５３５５；Ｐｉｎｔｏ，ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００３）１８８：３２７−３３８；およびＧｅｒｂｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２００１）７５（１０）：４７５２−４７６０でさらに考察されている。ビロソームは、例えば、Ｇｌｕｃｋら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００２）２０：Ｂ１０−Ｂ１６でさらに考察されている。免疫増強する再構築されたインフルエンザビロソーム（ＩＲＩＶ）を、鼻腔内３価ＩＮＦＬＥＸＡＬ（商標）製品（Ｍｉｓｃｈｌｅｒ ＆ Ｍｅｔｃａｌｆｅ（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ ２０ Ｓｕｐｐｌ ５：Ｂ１７−２３）およびＩＮＦＬＵＶＡＣ ＰＬＵＳ（商標）製品におけるサブユニット抗原送達系として使用する。
【０１７２】
Ｅ．細菌または微生物誘導体
本発明での使用に適切なアジュバントには、以下などの細菌または微生物誘導体が含まれる。
【０１７３】
（１）腸内細菌リポ多糖類（ＬＰＳ）の非毒性誘導体
かかる誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が含まれる。３ｄＭＰＬは、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａと４、５、または６アシル化鎖との混合物である。３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「小粒子」形態は、ＥＰ０６８９４５４号に開示されている。かかる３ｄＭＰＬの「小粒子」は、０．２２ミクロン膜で濾過滅菌するのに十分に小さい（ＥＰ０６８９４５４号）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ模倣物（アミノアルキルグルコサミニドホスフェート誘導体（例えば、ＲＣ５２９）など）が含まれる。Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ ９：２２７３−２２７８を参照のこと。
【０１７４】
（２）脂質Ａ誘導体
脂質Ａ誘導体には、大腸菌（ＯＭ−１７４）由来の脂質Ａ誘導体が含まれる。ＯＭ−１７４は、例えば、Ｍｅｒａｌｄｉら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：２４８５−２４９１およびＰａｊａｋ，ら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００３）２１：８３６−８４２に記載されている。
【０１７５】
（３）免疫刺激性オリゴヌクレオチド
本発明でのアジュバントとしての使用に適切な免疫刺激性オリゴヌクレオチドには、ＣｐＧモチーフ（非メチル化シトシンの後にグアノシンを含み、リン酸結合によって結合した配列）を含むヌクレオチド配列が含まれる。回分配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む細菌二本鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドも免疫刺激性を示すことが示されている。
【０１７６】
ＣｐＧは、ホスホロチオアート修飾物などのヌクレオチド修飾物／アナログが含まれ得、二本鎖または一本鎖であり得る。任意選択的に、グアノシンを、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンなどのアナログと置換することができる。可能なアナログ置換の例については、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００３）３１（９）：２３９３−２４００；ＷＯ０２／２６７５７号およびＷＯ９９／６２９２３号を参照のこと。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、Ｋｒｉｅｇ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（２００３）９（７）：８３１−８３５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅ，ら、ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ（２００２）３２：１７９−１８５；ＷＯ９８／４０１００号；米国特許第６，２０７，６４６号；米国特許第６，２３９，１１６号および米国特許第６，４２９，１９９号でさらに考察されている。
【０１７７】
ＣｐＧ配列を、ＴＬＲ９（モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなど）に指向することができる。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（ｐａｒｔ ３）：６５４−６５８を参照のこと。ＣｐＧ配列は、Ｔｈ１免疫応答の誘導に特異的であり得るか（ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮなど）、Ｂ細胞応答の誘導により特異的であり得る（ＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮなど）。ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３）１７０（８）：４０６１−４０６８；Ｋｒｉｅｇ，ＴＲＥＮＤＳ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（２００２）２３（２）：６４−６５およびＷＯ０１／９５９３５号で考察されている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
【０１７８】
好ましくは、５’末端が受容体認識のために接近することができるようにＣｐＧオリゴヌクレオチドを構築する。任意選択的に、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列をその３’末端で結合して、「イムノマー」を形成することができる。例えば、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、ＢＢＲＣ（２００３）３０６：９４８−９５３；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａ，ら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ（２００３）３１（ｐａｒｔ ３）：６６４−６５８；Ｂｈａｇａｔら、ＢＢＲＣ（２００３）３００：８５３−８６１、およびＷＯ０３／０３５８３６号を参照のこと。
【０１７９】
（４）ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体
細菌ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体を、本発明でアジュバントとして使用することができる。好ましくは、タンパク質は、大腸菌（すなわち、大腸菌熱不安定性エンテロトキシン（「ＬＴ」）、コレラ菌（「ＣＴ」）、または百日咳菌（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての解毒ＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は、ＷＯ９５／１７２１１号に記載されており、非経口アジュバントとしてはＷＯ９８／４２３７５号に記載されている。好ましくは、アジュバントは、解毒ＬＴ変異体（ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴＲ１９２Ｇなど）である。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその解毒誘導体（特に、ＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２）のアジュバントとしての使用を、以下の参考文献で見出すことができる：Ｂｅｉｇｎｏｎ，ら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）７０（６）：３０１２−３０１９；Ｐｉｚｚａ，ら、Ｖａｃｃｉｎｅ（２００１）１９：２５３４−２５４１；Ｐｉｚｚａ，ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（２０００）２９０（４−５）：４５５−４６１；Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２０００）６８（９）：５３０６−５３１３；Ｒｙａｎら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９９）６７（１２）：６２７０−６２８０；Ｐａｒｔｉｄｏｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．（１９９９）６７（３）：２０９−２１６；Ｐｅｐｐｏｌｏｎｉら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ（２００３）２（２）：２８５−２９３；およびＰｉｎｅら、（２００２）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ（２００２）８５（１−３）：２６３−２７０。アミノ酸置換についての数値の基準は、好ましくは、Ｄｏｍｅｎｉｇｈｉｎｉら、Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ（１９９５）１５（６）：１１６５−１１６７に記載のＡＤＰ−リボシル化毒素のＡおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０１８０】
Ｆ．生体接着剤および粘膜接着剤
生体接着剤および粘膜接着剤を、本発明でアジュバンとして使用することもできる。適切な生体接着剤には、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフィア（Ｓｉｎｇｈら（２００１）Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌｅ．７０：２６７−２７６）または粘膜接着剤（ポリアクリル酸の架橋誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖類、およびカルボキシメチルセルロースなど）が含まれる。キトサンおよびその誘導体を、本発明でアジュバンとして使用することもできる。ＷＯ９９／２７９６０を参照のこと。
【０１８１】
Ｇ．微粒子
微粒子を、本発明でアジュバンとして使用することもできる。微粒子（すなわち、直径約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは直径約２００ｎｍ〜約３０μｍ、最も好ましくは直径約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）を、生分解性且つ非毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルソエステル、ポリ酸無水物、ポリカプロラクトンなど）（ポリ（ラクチドコグリコリド）が好ましい）から形成し、任意選択的に、負電荷の表面（例えば、ＳＤＳ）または正電荷の表面（例えば、ＣＴＡＢなどの陽イオン性界面活性剤）を有するように処理する。
【０１８２】
Ｈ．リポソーム
アジュバンとしての使用に適切なリポソーム処方物の例は、米国特許第６，０９０，４０６号、米国特許第５，９１６，５８８号、および欧州特許第０６２６１６９号に記載されている。
【０１８３】
Ｉ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル処方物
本発明での使用に適切なアジュバントには、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが含まれる。ＷＯ９９／５２５４９号。かかる処方物には、さらに、オクトキシノール（ＷＯ０１／２１２０７）と組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤および少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤（オクトキシノールなど）と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（ＷＯ０１／２１１５２号）が含まれる。
【０１８４】
好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
【０１８５】
Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）
ＰＣＰＰ処方物は、例えば、Ａｎｄｒｉａｎｏｖら、“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｄｒｏｇｅｌ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ｂｙ ｃｏａｃｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａｑｕｅｏｕｓ ｐｏｌｙｐｈｏｐｈａｚｅｎｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ”，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（１９９８）１９（１−３）：１０９−１１５ ａｎｄ Ｐａｙｎｅら、“Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ Ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ Ｍａｔｒｉｃｅｓ”，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗ（１９９８）３１（３）：１８５−１９６に記載されている。
【０１８６】
Ｋ．ムラミルペプチド
本発明でのアジュバンとしての使用に適切なムラミルペプチドの例には、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮアセチルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミニル−ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が含まれる。
【０１８７】
Ｌ．イミダゾキノリン化合物
本発明でのアジュバンとしての使用に適切なイミダゾキノリン化合物の例には、イミキモドおよびそのアナログが含まれ、Ｓｔａｎｌｅｙ，Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｄｅｒｍａｔｏｌ（２００２）２７（７）：５７１−５７７；Ｊｏｎｅｓ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ（２００３）４（２）：２１４−２１８；米国特許第４，６８９，３３８号、同第５，３８９，６４０号、同第５，２６８，３７６号、同第４，９２９，６２４号、同第５，２６６，５７５号、同第５，３５２，７８４号、同第５，４９４，９１６号、同第５，４８２，９３６号、同第５，３４６，９０５号、同第５，３９５，９３７号、同第５，２３８，９４４号、および同第５，５２５，６１２号にさらに記載されている。
【０１８８】
Ｍ．チオセミカルバゾン化合物
チオセミカルバゾン化合物、ならびに本発明でのアジュバンとしての使用に適切な全ての化合物の処方、製造、およびスクリーニング方法の例には、ＷＯ０４／６０３０８号に記載のものが含まれる。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核球の刺激で特に有効である。
【０１８９】
Ｎ．トリプタントリン化合物
トリプタントリン化合物、ならびに本発明でのアジュバンとしての使用に適切な全ての化合物の処方、製造、およびスクリーニング方法の例には、ＷＯ０４／６４７５９号に記載のものが含まれる。トリプタントリン化合物は、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの産生のためのヒト末梢血単核球の刺激で特に有効である。
【０１９０】
本発明はまた、上記で同定した１つまたは複数のアジュバントの態様の組み合わせを含むこともできる。例えば、以下のアジュバント組成物を、本発明で使用することができる。
【０１９１】
（１）サポニンおよび水中油型乳濁液（ＷＯ９９／１１２４１号）；
（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（ＷＯ９４／００１５３号を参照のこと）；
（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；
（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ１２（任意選択的に、＋ステロール）（ＷＯ９８／５７６５９号）；
（５）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油型乳濁液との組み合わせ（欧州特許出願第０８３５３１８号、０７３５８９８号、および０７６１２３１号を参照のこと）；
（６）１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ８０、５％プロニック−ブロック重合体Ｌ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含み、サブミクロン乳濁液にミクロ流体化されているか、ボルテックスしてより大きな粒子サイズの乳濁液を生成したＳＡＦ。
【０１９２】
（７）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコラート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）（好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））からなる群から選択される１つまたは複数の細菌細胞壁成分を含むＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ）；および
（８）１つまたは複数のミネラル塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（３ｄＰＭＬなど）。
【０１９３】
（９）１つまたは複数のミネラル塩（アルミニウム塩など）＋免疫刺激性オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列など）。
【０１９４】
Ｏ．ヒト免疫調節薬
本発明でアジュバントとしての使用に適切なヒト免疫調節薬には、サイトカイン（インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子、および腫瘍壊死因子など）が含まれる。
【０１９５】
アルミニウム塩およびＭＦ５９は、注射用インフルエンザワクチンとの使用に好ましいアジュバントである。細菌毒素および生体接着剤は、粘膜由来ワクチン（経鼻用ワクチンなど）との使用に好ましいアジュバントである。
【０１９６】
上記で引用した全ての特許、特許出願、および学術論文の内容は、本明細書中で完全に記載されているかのように参考により組み込まれる。
【０１９７】
治療方法
本発明は、上記組成物を使用してＳＬＯ抗原に対する免疫応答を誘導または増大させる方法を提供する。免疫応答は、好ましくは防御的であり、抗体および／または細胞−媒介性免疫（全身免疫および粘膜免疫が含まれる）が含まれ得る。免疫応答には、ブースター免疫が含まれる。抗体を含む組成物を使用して、化膿連鎖球菌感染を治療することができる。
【０１９８】
十代および小児（よちよち歩きの子どもおよび乳児が含まれる）に、予防的用途でワクチンを投与することができ、治療用ワクチンを、典型的には、十代または成人に投与する。小児使用を意図するワクチンを、例えば、安全性、投薬量、免疫原性などを評価する目的で成人に投与することもできる。
【０１９９】
本発明によって防止または治療することができる化膿連鎖球菌に起因する疾患には、咽頭炎（連鎖球菌性咽喉痛など）、猩紅熱、膿痂疹、丹毒、蜂巣炎、敗血、中毒性ショック症候群、壊死性筋膜炎、および後遺症（リウマチ熱および急性糸球体腎炎など）が含まれるが、これらに限定されない。組成物は、他の連鎖球菌（例えば、ＧＢＳ）に対しても有効であり得る。
【０２００】
免疫応答の有効性を決定する試験
治療上の処置の有効性を評価する１つの方法は、本発明の組成物の投与後にＧＡＳ感染をモニタリングすることを含む。予防的治療の有効性を評価する１つの方法は、組成物の投与後に本発明の組成物におけるＳＬＯ抗原に対する免疫応答をモニタリングすることを含む。
【０２０１】
本発明の免疫原性組成物の成分タンパク質の免疫原性を評価する別の方法は、組換え的にタンパク質を発現し、免疫ブロットによって患者の血清または粘膜分泌物をスクリーニングすることである。タンパク質と患者の血清との間の陽性反応は、患者が問題のタンパク質に対する免疫応答を事前に開始していることを示す（すなわち、タンパク質が免疫原である）。この方法を使用して、免疫優性タンパク質および／またはエピトープを同定することもできる。
【０２０２】
治療上の処置の有効性の別のチェック方法は、本発明の組成物の投与後のＧＡＳ感染のモニタリングを含む。予防的治療の有効性の１つのチェック方法は、組成物の投与後に本発明の組成物におけるＳＬＯ抗原に対する全身（ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａ産生レベルのモニタリングなど）および粘膜（ＩｇＡ産生レベルのモニタリングなど）の両方の免疫応答をモニタリングすることを含む。典型的には、血清特異的抗体応答を免疫化後であるが攻撃誘発前に決定するのに対して、粘膜特異的抗体応答を免疫後且つ攻撃誘発後に決定する。
【０２０３】
本発明のワクチン組成物を、宿主（例えば、ヒト）投与前にインビトロおよびインビボ動物モデルで評価することができる。特に有用なマウスモデルには、腹腔内免疫化後に腹腔内攻撃誘発または鼻腔内攻撃誘発を行うマウスモデルが含まれる。
【０２０４】
本発明の免疫原性組成物の有効性を、ＧＡＳ感染の動物モデル（例えば、モルモットまたはマウス）を免疫原性組成物で攻撃誘発することによってインビボで決定することもできる。免疫原性組成物は、攻撃誘発血清型と同一の血清型に由来しても由来しなくても良い。好ましくは、免疫原性組成物は、攻撃誘発血清型と同一の血清型に由来する。より好ましくは、免疫原性組成物および／または攻撃誘発血清型は、Ｍ１、Ｍ３、Ｍ２３、および／またはその組み合わせからなるＧＡＳ血清型群に由来する。
【０２０５】
インビボ有効性モデルには、以下が含まれるが、これらに限定されない：（ｉ）ヒトＧＡＳ血清型を使用したマウス感染モデル、（ｉｉ）マウス適合ＧＡＳ株（特にマウスに病原性を示すＭ２３株など）を使用したマウスモデルであるマウス疾患モデル、および（ｉｉｉ）ヒトＧＡＳ分離株を使用した霊長類モデル。
【０２０６】
免疫応答は、ＴＨ１免疫応答およびＴＨ２免疫応答の一方または両方であり得る。免疫応答は、免疫応答の改良、増強、または変化であり得る。免疫応答は、全身免疫応答および粘膜免疫応答の一方または両方であり得る。好ましくは、免疫応答は、全身および／または粘膜の応答の増強である。
【０２０７】
全身免疫および／または粘膜免疫の増強は、ＴＨ１免疫応答および／またはＴＨ２免疫応答の増強を反映している。好ましくは、免疫応答の増強には、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ２ａおよび／またはＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０２０８】
好ましくは、粘膜免疫応答はＴＨ２免疫応答である。好ましくは、粘膜免疫応答には、ＩｇＡ産生の増加が含まれる。
【０２０９】
活性化ＴＨ２細胞は抗体産生を増強し、それにより、細胞外感染に対する応答で有益である。活性化ＴＨ２細胞は、１つまたは複数のＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０を分泌することができる。ＴＨ２免疫応答により、さらなる防御のためにＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞を産生することができる。
【０２１０】
ＴＨ２免疫応答には、ＴＨ２免疫応答に関連する１つまたは複数のサイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、およびＩＬ−１０など）の増加またはＩｇＧ１、ＩｇＥ、ＩｇＡ、および記憶Ｂ細胞産生の増加の１つまたは複数が含まれ得る。好ましくは、ＴＨ２免疫応答の増強には、ＩｇＧ１産生の増加が含まれるであろう。
【０２１１】
ＴＨ１免疫応答には、ＣＴＬｌの増加、ＴＨ１免疫応答に関連する１つまたは複数のサイトカイン（ＩＬ−２、ＩＦＮγ、およびＴＮＦβなど）の増加、活性化マクロファージの増加、ＮＫ活性の増加、またはＩｇＧ２ａ産生の増加の１つまたは複数が含まれ得る。好ましくは、ＴＨ１免疫応答の増強には、ＩｇＧ２ａ産生の増加が含まれるであろう。
【０２１２】
本発明の免疫原性組成物、特に、１つまたは複数の本発明のＳＬＯ抗原を含む免疫原性組成物を、任意選択的にＴｈ１および／またはＴｈ２応答を誘発することができる免疫調節薬と共に、単独または他のＧＡＳ抗原と組み合わせて使用することができる。
【０２１３】
本発明はまた、１つまたは複数の免疫調節薬（ミネラル塩（アルミニウム塩など）など）およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む免疫原性組成物を含む。最も好ましくは、免疫原性組成物には、アルミニウム塩およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドの両方を含む。あるいは、免疫原性組成物は、ＡＤＰリボシル化毒素（解毒ＡＤＰリボシル化毒素など）およびＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む。好ましくは、１つまたは複数の免疫調節薬は、アジュバントを含む。アジュバントを、以下にさらに考察されたＴＨ１アジュバントおよびＴＨ２アジュバントからなる群の１つまたは複数から選択することができる。
【０２１４】
本発明の組成物は、好ましくは、ＧＡＳ感染に有効に対処するために、細胞媒介性免疫および体液性免疫応答の両方を誘発するであろう。この免疫応答は、好ましくは、長期継続（例えば、中和）抗体および１つまたは複数のＧＡＳ抗原に曝露した場合に迅速に応答することができる細胞媒介性免疫を惹起するであろう。
【０２１５】
１つの特に好ましい実施形態では、免疫原性組成物は、中和抗体応答を誘発する１つまたは複数のＳＬＯ抗原および細胞媒介性免疫応答を誘発する１つまたは複数のＳＬＯ抗原を含む。このようにして、中和抗体応答は、最初のＧＡＳ感染を防止または阻害する一方で、増強されたＴｈ１細胞応答を誘発することができる細胞媒介性免疫応答はＧＡＳ感染のさらなる拡大を防止する。
【０２１６】
本発明の組成物を、一般に、患者に直接投与するであろう。本発明の組成物を、種々の異なる経路を介して単独または組成物の一部として投与することができる。一定の組成物は、より有効な免疫応答、好ましくはＣＭＩ応答が得られるか、副作用を誘導する可能性が低いか、投与がより容易になるように一定の経路を好み得る。
【０２１７】
送達方法には、非経口注射（例えば、皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、または間質注射）、直腸、経口（例えば、錠剤、スプレー）、膣、局所、経皮（例えば、ＷＯ９９／２７９６１号を参照のこと）、経皮（例えば、ＷＯ０２／０７４２４４号およびＷＯ０２／０６４１６２号を参照のこと）、鼻腔内（例えば、ＷＯ０３／０２８７６０号を参照のこと）、眼球、耳、および肺、または他の粘膜投与が含まれる。
【０２１８】
一例として、本発明の組成物を、全身経路、粘膜経路、または経皮経路を開始して投与することができるか、特定の組織に直接投与することができる。本明細書中で使用される場合、用語「全身投与」には、任意の非経口投与経路が含まれるが、これらに限定されない。特に、非経口投与には、皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、筋肉内、または胸骨内注射、静脈内、動脈内、または腎臓透析注入技術が含まれるが、これらに限定されない。好ましくは、全身非経口投与は筋肉内注射である。本明細書中で使用される場合、用語「粘膜投与」には、経口、鼻腔内、膣内、直腸内、気管内、腸、および眼投与が含まれるが、これらに限定されない。
【０２１９】
投薬治療は、単回投与計画または複数回投与計画であり得る。複数回投与を、初回免疫計画および／または追加免疫計画で使用することができる。複数回投与計画では、同一または異なる経路（例えば、非経口初回刺激および粘膜追加免疫、粘膜初回刺激および非経口追加免疫など）によって種々の回収で投与することができる。
【０２２０】
本発明の組成物を、種々の形態で調製することができる。例えば、組成物を、溶液または懸濁液のいずれかとして注射可能な組成物として調製することができる。注射前に溶液、懸濁液、または液体ビヒクルにするのに適切な固体形態（例えば、凍結乾燥組成物）を調製することもできる。経口投与のための組成物（錠剤もしくはカプセル、スプレーとして、またはシロップ（任意選択的に、風味づけする）としてなど）を調製することができる。肺投与のための組成物を、例えば、微粉またはスプレーを使用した吸入器として調製することができる。組成物を、座剤またはペッサリーとして調製することができる。鼻、耳、または眼への投与のための組成物を、例えば、点滴薬として調製することができる。組成物は、患者への投与直前に組み合わせた組成物を再構成するようにデザインされたキット形態であり得る。かかるキットは、液体形態の１つまたは複数のＳＬＯまたは他の抗原および１つまたは複数の凍結乾燥抗原を含むことができる。
【０２２１】
ワクチンとして使用した免疫原性組成物は、免疫学的有効量のＳＬＯまたは他の抗原（または抗原をコードする核酸分子）または抗体、ならびに、必要に応じて、抗生物質などの任意の他の成分を含む。「免疫学的有効量」は、単回用量または一連の投与の一部として個体に投与した場合に測定可能な免疫応答を増加させるか臨床症状を防止または減少させる量である。
【０２２２】
本発明の免疫原性組成物を、抗生物質治療計画と組み合わせて投与することができる。１つの実施形態では、抗生物質を、本発明の抗原または１つまたは複数の本発明のＳＬＯ抗原を含む組成物の投与前に投与する。
【０２２３】
別の実施形態では、抗生物質を、１つまたは複数の本発明の表面曝露および／または表面結合ＳＬＯ抗原または１つまたは複数の本発明の表面曝露および／または表面結合ＳＬＯ抗原を含む組成物の投与後に投与する。ＧＡＳ感染治療での使用に適切な抗生物質の例には、ペニシリンもしくはその誘導体またはクリンダマイシン、セファロスポリン、糖ペプチド（例えば、バンコマイシン）、およびシクロセリンが含まれるが、これらに限定されない。
【０２２４】
しかし、組成物中の活性剤の量は、治療を受ける個体の健康状態および生理的状態、年齢、治療を受ける個体の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、個体の免疫系が抗体を合成する能力、所望の防御の程度、ワクチンの処方、治療を行う医師の医学的状況の評価、および他の関連要因に応じて変化する。この量は比較的広範であり、日常的試験によって決定することができる。
キット
本発明はまた、本発明の１つまたは複数の容器を含むキットを提供する。組成物は、個別の抗原と同様に、液体形態であり得るか凍結乾燥させることができる。組成物に適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、および試験管が含まれる。容器を、種々の材料（ガラスまたはプラスチックが含まれる）から形成することができる。容器は、滅菌アクセスポートを有することができる（例えば、容器は、静脈内注射用溶液のバッグまたは皮下注射針によって突き刺すことができるストッパを有するバイアルであり得る）。
【０２２５】
キットは、さらに、薬学的に許容可能な緩衝剤（リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル液、またはデキストロース溶液など）を含む第２の容器を含む。キットはまた、末端利用者に有用な他の材料（他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、およびシリンジが含まれる）を含むことができる。キットはまた、別の活性剤（例えば、抗生物質）を含む第２または第３の容器を含むことができる。
【０２２６】
キットはまた、化膿連鎖球菌に対する免疫の誘導方法または化膿連鎖球菌感染の治療方法についての書面での指示を含む添付文書を含むことができる。添付文書は、未承認の添付文書であり得るか、食品医薬品局（ＦＤＡ）または他の規制機関によって承認された添付文書であり得る。
【０２２７】
本開示で引用した全ての特許、特許出願、および引例は、特に、本明細書中で参考として援用される。上記開示は、一般に、本発明を説明する。以下の特定の実施例を参照して、本発明をより完全に理解することができる。これらの実施例は、例示のみを目的とし、本発明の範囲を制限することを意図しない。
【実施例】
【０２２８】
（実施例１）
ウエルシュ菌由来のパーフリンゴリシンＯ単量体の三次元結晶構造は、Ｘ線結晶学を使用して、４つのＬシートリッチドメインから構成される細長い分子として最近記載されている。そのうちのたった１つ（Ｃ末端ドメイン４）は、アミノ酸一次配列内で近接している（図１を参照のこと）。図２に示すように、ＧＡＳ２５は、このタンパク質と相同である。
【０２２９】
ウエルシュ菌パーフリンゴリシンＯとのタンパク質配列相同性に基づいて、ＳＬＯ中の４つのドメインを予想することができ、これらのドメインは、図３に示すスキームに示す一次配列にそって分布している。
【０２３０】
「ペプチド１」（３６−ＱＮＴＡＳＴＥＴＴＴＴＮＥＱＰＫＰＥＳＳＥＬＴＴＥＫ−６１；配列番号１）、「ペプチド２」（１５５−ＮＩＮＴＴＰＶＤＩＳＩＩＤＳＶＴＤＲ−１７２；配列番号４）、および「ペプチド３」（４５０−ＴＥＹＶＥＴＴＳＴＥＹ−４６０；配列番号３）を、ＳＦ３７０−Ｍ１（ｐｅｐ１およびｐｅｐ２）株および３６５０−Ｍ６（ｐｅｐ３）株におけるｓｕｒｆｏｍｅ分析によって同定した。図３でペプチドに黒色の下線を引いている。
【０２３１】
（実施例２）
異なるタンパク質領域のクローニングおよび発現
ペプチド１は、１００個のアミノ酸−非構造化アミノ末端タンパク質領域中に存在するようである一方で、ペプチド２およびペプチド３はほとんど完全に不連続ドメイン２中に含まれる。この構造予測に基づいて、異なるタンパク質のクローニングおよび発現を計画した。１つのタンパク質領域にペプチド１のみを含めた。別のタンパク質領域に、ペプチド２およびペプチド３の両方（「ペプチド２＋３」）を含めた。これらは一次構造中で連続しないタンパク質ストレッチの連結が必要である。後者の融合を、２つのペプチドを含めるドメインの構造をできるだけ保存することができる方法で計画した（図４を参照のこと）。この結果を得る可能性を高めるために、イソロイシン１６５をプロリン残基と置換し、これにより、構造の曲がりを好むことが予想される一方で、天然に存在するグリシン４４５残基は、２つの融合領域の間のリンカーとして機能すると予想された。第３のタンパク質領域に、ペプチド１、ペプチド２、およびペプチド３を含めた（「ペプチド１＋２＋３」）。この場合、グリシン残基をペプチド１とペプチド２および３との間に「ｅｘ ｎｏｖｏで」挿入した。ペプチド２中のＩ１６５Ｐ置換を維持した。
【０２３２】
（実施例３）
ＨｉｓまたはＧＳＴ融合物としてのＳＬＯタンパク質フラグメントのクローニングおよび発現
図５に示すように、ＳＬＯタンパク質フラグメントを、Ｈｉｓ融合物として発現した。図６に示すように、ＳＬＯタンパク質フラグメントをＧＳＴ融合物として発現した。
【０２３３】
（実施例４）
ＧＡＳ２５ ６ＸｈｉｓフラグメントのＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析
３つのＧＡＳ ＳＬＯフラグメントの６ｘｈｉｓ融合物のＰＡＧＥ分析により、推定分子量の組換えポリペプチドと実際の分子量の組換えポリペプチドとの間の矛盾が証明された（図１５）。推定分子量（ＭＷ）が９，３００．１ダルトンであるペプチド１の実際のＭＷは約２５，０００ダルトンである。ペプチド２＋３の推定ＭＷは１０，２７７ダルトンであるが、実際のＭＷは１５，０００〜１６，０００ダルトンである。ペプチド１＋２＋３の推定ＭＷは１８，３７０ダルトンであり、実際のＭＷは約３０，０００ダルトンである。したがって、３つのポリペプチドを、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析に供し、推定分子量を確認した。結果を図１６〜２０に示す。
【０２３４】
図１６は、溶液中のペプチド１のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を示す。９１７０，２２６のピークは、Ｍｅｔ残基を含まないペプチドに相当する（９３００ダルトン-１３１ダルトンのＭｅｔ＝９１７０ダルトン）。他のピークは、装置の較正のために使用したマーカーに相当する。第２のアミノ酸が小さく且つ疎水性を示す場合、大腸菌中に発現したタンパク質のＮ末端のＭｅｔ残基の除去は非常に一般的である。
【０２３５】
図１７は、溶液中のペプチド２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を示す。１００９７，５２３のピークは、Ｍｅｔ残基を含まないペプチド２＋３に相当する（１０，２２７ダルトン−１３１ダルトンのＭｅｔ＝１０，０９６ダルトン）。他のピークは、装置の較正のために使用したマーカーに相当する。
【０２３６】
図１８は、トリプシンで消化したペプチド２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を示す。トリプシンで消化したタンパク質は、各ペプチドに特徴的なピークプロフィールを示す（フィンガープリンティング）。各ピークは、消化タンパク質のフラグメントに相当する。トリプシンで消化したペプチド２＋３は、以下の特徴的なピークを示す。
【０２３７】
・１，０９０．５４９ ａａ ２２〜３０
・１，２１８．６３７ ａａ ２２〜３１およびａａ ２１〜３０
・１，６５９．８４７ ａａ ６〜２０
・２，０２５．９６８ ａａ ３４〜５２
・２，１５４．１２９ ａａ ３３〜５２
・２，２８２．２２９ ａａ ３５〜５２
・２，７７０．４４８ ａａ ６８〜９０
図１９は、溶液中のペプチド１＋２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を示す。１８，２３６．９９８のピークは、Ｍｅｔ残基を含まないペプチド１＋２＋３ペプチドに相当する。（１８，３７０ダルトン−１３１ダルトンのＭｅｔ＝１８，２３９ダルトン）。他のピークは、分解産物または大腸菌夾雑物のいずれかである。
【０２３８】
図２０は、トリプシンで消化したペプチド１＋２＋３のＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ分析を示す。フィンガープリンティング技術により、以下のペプチド１＋２＋３に属する多数のピークが明らかとなった。
【０２３９】
・１０９０．５４２ ａａ ９６〜１０４
・１２４７．５５０ ａａ ８０〜９０
・１６９５．６４１ ａａ １２７〜１４１
・１９３２，８３０ ａａ ７３〜９０
・２０２５．８５９ ａａ １０８〜１２６
・２１５３．９２４ ａａ １０７〜１２６
・２８５２．１２１ ａａ ８〜３３ 。
【０２４０】
（実施例５）
インビボ防御実験
マウスを、異なるＳＬＯフラグメントで免疫化し、ＧＡＳのＭ１株で攻撃誘発した。０、２１、および３５日目に、１０〜２０匹のマウス群を２０ｍｇの組換えタンパク質で免疫化した。ネガティブコントロール群のマウスを、使用したＧＡＳ組換えタンパク質のバージョンに応じて、ＧＳＴのみまたは大腸菌夾雑物のいずれかで免疫化した。第３の免疫化から２週間後に血液サンプルを採取した。その数日後、免疫化したマウスを、１０８ｃｆｕ（５０ｍｌ）のＭ１ ＧＡＳ株（３３４８株）で鼻腔内に攻撃誘発した。マウスの生存を、１０〜１４日間モニタリングし、ネガティブコントロール群の生存と比較した。異なる群から得た免疫血清を、全ＳＬＯ組換えタンパク質を使用して免疫原性について試験した（ウェスタンブロット分析）。
【０２４１】
結果を、表１に示す。これらの結果は、ＳＬＯフラグメントを免疫原として使用した場合、ＧＡＳ感染から防御することを示す。
【０２４２】
表１
【０２４３】
【表１】
＊２５＿１ ｈｉｓ（配列番号８）；２５＿２ ｈｉｓ（配列番号１０）；２５＿ｔｏｔ ｈｉｓ（配列番号１２）；２５＿１ ＧＳＴ（配列番号１４）；２５＿２ ＧＳＴ（配列番号１６）；および２５＿ｔｏｔ（配列番号１８）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）以下：
（ｉ）配列番号１；
（ｉｉ）配列番号２；
（ｉｉｉ）配列番号３；
（ｉｖ）配列番号３に共有結合した配列番号２；
（ｖ）（１）配列番号１；（２）配列番号１のアミノ酸配列に共有結合したグリシン残基；（３）該グリシンに共有結合した配列番号２のアミノ酸配列；および（４）配列番号２のアミノ酸配列に共有結合した配列番号３のアミノ酸配列から本質的になるアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号８；
（ｖｉｉ）配列番号１０；
（ｖｉｉ）配列番号１０のアミノ酸２〜８２；
（ｖｉｉｉ）配列番号１２；
（ｉｘ）配列番号１２のアミノ酸４〜１５６；
（ｘ）配列番号１４；
（ｘｉ）配列番号１６；および
（ｘｉｉ）配列番号１８；
からなる群から選択されるアミノ酸配列から本質的になる、非毒性である化膿連鎖球菌ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）抗原；
（ｂ）該ＳＬＯ抗原をコードする核酸分子；ならびに
（ｃ）該ＳＬＯ抗原に特異的に結合する抗体
からなる群から選択される活性剤を含む組成物。
【請求項２】
前記活性剤が前記ＳＬＯ抗原であり、該ＳＬＯ抗原が単量体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ＧＡＳ４０抗原をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ＧＡＳ５７抗原をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
小児ワクチンで有用な抗原をさらに含む、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
高齢者または免疫無防備状態の個体のためのワクチンで有用な抗原をさらに含む、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記活性剤が前記ＳＬＯ抗原であり、該ＳＬＯ抗原が担体タンパク質にカップリングされている、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記担体タンパク質が、細菌毒素、細菌トキソイド、髄膜炎菌外膜タンパク質、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、インフルエンザ菌タンパク質Ｄ、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ａ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ｂ、および鉄取り込みタンパク質からなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の活性剤を薬学的に許容可能な担体と組み合わせる工程を含む、化膿連鎖球菌に対する免疫を惹起するためのワクチンの作製方法であって、活性剤がＳＬＯ抗原または核酸分子である、方法。
【請求項１１】
前記活性剤が前記ＳＬＯ抗原であり、該ＳＬＯ抗原を：
（ａ）該ＳＬＯ抗原をコードする発現ベクターを含む宿主細胞を培養する工程；および
（ｂ）該ＳＬＯ抗原を回収する工程
を含む方法によって作製する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
活性剤がＳＬＯ抗原または核酸分子である、有効量の請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の組成物を個体に投与する工程を含む、化膿連鎖球菌に対する免疫を惹起する方法。
【請求項１３】
活性剤が抗体である、有効量の請求項１、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、または請求項７のいずれか１項に記載の組成物を個体に投与する工程を含む、化膿連鎖球菌感染の治療方法。
【請求項１４】
活性剤がＳＬＯ抗原または核酸分子である、化膿連鎖球菌感染に対する免疫を惹起するための薬物の製造における請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の活性剤の使用。
【請求項１５】
活性剤が抗体である、化膿連鎖球菌感染を治療する薬物の製造における請求項１、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、または請求項７のいずれか１項に記載の活性剤の使用。
【請求項１】
（ａ）以下：
（ｉ）配列番号１；
（ｉｉ）配列番号２；
（ｉｉｉ）配列番号３；
（ｉｖ）配列番号３に共有結合した配列番号２；
（ｖ）（１）配列番号１；（２）配列番号１のアミノ酸配列に共有結合したグリシン残基；（３）該グリシンに共有結合した配列番号２のアミノ酸配列；および（４）配列番号２のアミノ酸配列に共有結合した配列番号３のアミノ酸配列から本質的になるアミノ酸配列；
（ｖｉ）配列番号８；
（ｖｉｉ）配列番号１０；
（ｖｉｉ）配列番号１０のアミノ酸２〜８２；
（ｖｉｉｉ）配列番号１２；
（ｉｘ）配列番号１２のアミノ酸４〜１５６；
（ｘ）配列番号１４；
（ｘｉ）配列番号１６；および
（ｘｉｉ）配列番号１８；
からなる群から選択されるアミノ酸配列から本質的になる、非毒性である化膿連鎖球菌ストレプトリシンＯ（ＳＬＯ）抗原；
（ｂ）該ＳＬＯ抗原をコードする核酸分子；ならびに
（ｃ）該ＳＬＯ抗原に特異的に結合する抗体
からなる群から選択される活性剤を含む組成物。
【請求項２】
前記活性剤が前記ＳＬＯ抗原であり、該ＳＬＯ抗原が単量体である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ＧＡＳ４０抗原をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ＧＡＳ５７抗原をさらに含む、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
小児ワクチンで有用な抗原をさらに含む、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
高齢者または免疫無防備状態の個体のためのワクチンで有用な抗原をさらに含む、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
アジュバントをさらに含む、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記活性剤が前記ＳＬＯ抗原であり、該ＳＬＯ抗原が担体タンパク質にカップリングされている、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記担体タンパク質が、細菌毒素、細菌トキソイド、髄膜炎菌外膜タンパク質、熱ショックタンパク質、百日咳タンパク質、インフルエンザ菌タンパク質Ｄ、サイトカイン、リンホカイン、ホルモン、成長因子、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ａ、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ｂ、および鉄取り込みタンパク質からなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の活性剤を薬学的に許容可能な担体と組み合わせる工程を含む、化膿連鎖球菌に対する免疫を惹起するためのワクチンの作製方法であって、活性剤がＳＬＯ抗原または核酸分子である、方法。
【請求項１１】
前記活性剤が前記ＳＬＯ抗原であり、該ＳＬＯ抗原を：
（ａ）該ＳＬＯ抗原をコードする発現ベクターを含む宿主細胞を培養する工程；および
（ｂ）該ＳＬＯ抗原を回収する工程
を含む方法によって作製する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
活性剤がＳＬＯ抗原または核酸分子である、有効量の請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の組成物を個体に投与する工程を含む、化膿連鎖球菌に対する免疫を惹起する方法。
【請求項１３】
活性剤が抗体である、有効量の請求項１、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、または請求項７のいずれか１項に記載の組成物を個体に投与する工程を含む、化膿連鎖球菌感染の治療方法。
【請求項１４】
活性剤がＳＬＯ抗原または核酸分子である、化膿連鎖球菌感染に対する免疫を惹起するための薬物の製造における請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載の活性剤の使用。
【請求項１５】
活性剤が抗体である、化膿連鎖球菌感染を治療する薬物の製造における請求項１、請求項３、請求項４、請求項５、請求項６、または請求項７のいずれか１項に記載の活性剤の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５−１】
【図５−２】
【図６−１】
【図６−２】
【図６−３】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５−１】
【図５−２】
【図６−１】
【図６−２】
【図６−３】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【公表番号】特表２０１０−５０８２７６（Ｐ２０１０−５０８２７６Ａ）
【公表日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３４６９４（Ｐ２００９−５３４６９４）
【出願日】平成１９年１０月３０日（２００７．１０．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２２８３８
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０８８３０
【国際公開日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（５０９１２２４１８）ノバルティス アーゲー (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月３０日（２００７．１０．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２２８３８
【国際公開番号】ＷＯ２００８／１０８８３０
【国際公開日】平成２０年９月１２日（２００８．９．１２）
【出願人】（５０９１２２４１８）ノバルティス アーゲー (1)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]