卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法
【課題】卵殻を環境を汚染することがなく、かつ、食品、飼料、化粧品等の原料として安全なアミノ酸卵殻カルシウムにする方法を提供する。
【解決手段】好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群をオカラに混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材を作り、該発酵補助資材と卵殻とを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群を混入し、更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させる。
【解決手段】好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群をオカラに混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材を作り、該発酵補助資材と卵殻とを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群を混入し、更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
卵殻は、日本全国で年間約２０万トン発生している。そのうち、何らかの用途にリサイクルされているのは、約１％の約２０００トンに留まり、残りの約９９％は廃棄処分されている。
【０００３】
卵殻は、腐敗が非常に早い上に腐敗臭がひどく、その処理には高価な処理機器が必要となるため、卵殻の大部分は廃棄処分場に搬入され、焼却処分されているのであるが、処分費用は高騰している。
【０００４】
卵殻の内膜を硫酸、塩酸等により溶かして卵殻よりカルシウムを得るという方法が知られている。
【０００５】
一方、本発明者は、特許第３７１０４２４号公報において、重金属、ダイオキシン類及び農薬を分解する方法を提供している。
【０００６】
この重金属、ダイオキシン類及び農薬を分解する方法は、配合株数の割合が好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群を有機廃棄物に混入して４０〜２００℃の温度にて一次発酵させ、更にこれに配合株数の割合が好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群を混入し、これを被処理物と共に１００〜２００℃の温度にて二次発酵させることにより、該被処理物に含まれる重金属、ダイオキシン類又は農薬を分解させるようにしたことを特徴とするものである。
【特許文献１】特許第３７１０４２４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
卵殻を焼却処分することにより生ずる焼却灰には重金属、ダイオキシン類、農薬等が残留する。けだし、養鶏の主たる飼料である穀物類が農薬と化学肥料とを用いて栽培される上、養鶏に対しても各種疾病の予防等のために抗生物質等の薬品が投与されるからである。
【０００８】
重金属、ダイオキシン類、農薬等が残留する焼却灰を埋立処分したときには、地下環境が汚染される。
【０００９】
また、卵殻の内膜を硫酸、塩酸等により溶かして卵殻よりカルシウムを得る場合には、硫酸、塩酸等の使用により、環境が汚染される。
【００１０】
以上の如き状況に鑑み、本発明は、卵殻を環境を汚染することがなく、かつ、食品、飼料、化粧品等の原料として安全なアミノ酸卵殻カルシウムにする方法を提供しようとしてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記課題を解決するために、本発明は、下記の卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法を提供する。
【００１２】
（１）好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群をオカラに混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材を作り、
該発酵補助資材と卵殻とを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群を混入し、
更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させることを特徴とする、卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法（請求項１）。
【００１３】
（２）前記発酵補助資材と前記卵殻とを混合する割合は、発酵補助資材３０〜４０重量部に対し卵殻を６０〜７０重量部とし、この混合物１００重量部に対し、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる前記有効微生物群を少なくとも２重量部混入する（請求項２）。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、廃棄処分により環境が汚染される卵殻を食品、飼料、化粧品等の安全な原料であるアミノ酸卵殻カルシウムに変えることができる。換言すれば、従来処理に窮していた卵殻の有効利用を図ることができるのである。
【００１５】
すなわち、好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群をオカラに混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材を作り、該発酵補助資材と卵殻とを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群を混入し、更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させることにより、卵殻に残留する重金属、ダイオキシン類及び農薬を分解し、食品、飼料、化粧品等の安全な原料であるアミノ酸卵殻カルシウムを得ることができるのである。
【００１６】
卵殻は高蛋白質の内膜を備えているのであるが、本発明によれば、この内膜が分解されてアミノ酸が作られ、一方、卵殻からはカルシウムが作られる。すなわち、本発明によりアミノ酸卵殻カルシウムが作られるのである。
【００１７】
また、二次発酵は６０〜８０℃の温度にて４８時間行われるため、得られたアミノ酸卵殻カルシウムには大腸菌群、サルモネラ、黄色ブドウ球菌等の食中毒菌類は検出されない。
【００１８】
本発明において原料として使用される卵殻とオカラは一般に廃棄されているものであるから、本発明により作られるアミノ酸卵殻カルシウムは極めて安価である。
【００１９】
以上述べたように、本発明によれば、一般に廃棄され、環境汚染の原因となっている卵殻を低コストで安全なアミノ酸卵殻カルシウムに変えることができるため、卵殻を資源として有効利用すると共に環境を保護するといういわば一石二鳥の効果が発揮される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群をオカラに混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材を作る。
【００２１】
有効微生物群は、一例として、オカラ１,０００ｋｇ（湿重量）に対し、１ｋｇ（湿重量）の割合で混合する。
【００２２】
該有効微生物群には次のものが含まれる。
酵母菌、セルロース分解菌、窒素固定菌、乳酸菌、糸状菌（芳香族化合物分解菌）、マンガン還元菌（クロカビ属群−原生担子菌類）、マンガン酸化菌（有機栄養菌）、アンモニア酸化菌（亜硝酸菌）、放線菌（キチン分解菌）、硝酸菌（硝化生成細菌）、硫黄細菌（硫化水素を水素供与体として利用する細菌群）、メタン酸化菌、セルロース放線菌、セルロース糸状菌、納豆菌、リグニン分解菌、鉄酸化菌、鉄還元菌、硫酸還元菌、酢酸菌、バチルス属（Bacillus sp.）、スポロサルシナ属（Sporosarcina sp.）、ペニバチルス属（Paenibacillus sp.）、オーシャノバチルス属（Oceanobacillus
sp.）。
【００２３】
上記発酵補助資材と卵殻とを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群を混入し、更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させる。
【００２４】
前記発酵補助資材と前記卵殻とを混合する割合は、好ましくは、発酵補助資材３０〜４０重量部に対し卵殻を６０〜７０重量部とする。
【００２５】
前記発酵補助資材と前記卵殻との混合物混合物１００重量部に対し、好ましくは、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる前記有効微生物群を少なくとも２重量部混入する。
【００２６】
なお、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes
sp.）タテヤマ女汝（ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０）と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣（ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１）と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２）と、好塩性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ浄土（ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３）と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王（ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４）は、それぞれ独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託されている。
【００２７】
好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ薬師と、好塩性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ浄土と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium
sp.）タテヤマ竜王とについて、同定を実施した。以下、同定方法及び微生物試験結果を示す。
【００２８】
細菌第一段階試験として、光学顕微鏡U-LH１,０００（オリンパス，日本）により、細胞形態、グラム染色性、胞子の有無及び鞭毛による運動性の有無を観察した。NUTRIENT AGAR （OXOID, HAMPSHIRE, ENGLAND）（以下「NT」という。）又はGAM寒天培地（ニッスイ, 東京）（以下「GAM」という。）でのコロニー形態を観察した。カタラーゼ反応、オキシダーゼ反応、グルコースからの酸／ガス産生及びブドウ糖の酸化／発酵（O／F）について試験を行った。
菌学的性状試験結果を表１に示す。
【００２９】
【表１】
【００３０】
次に１６S rDNA塩基配列の遺伝子解析を実施した。ゲノムDNAの抽出には、INSTAGENE MATRIX（BIO RAD, CA, USA）を使用した。抽出したゲノムＤＮＡを鋳型として、PCRにより全塩基配列約１,５００〜１,６００塩基対の領域を増幅した。その後、増幅された１６S rDNAをシーケンスし、塩基配列を得た。PCR産物の精製、サイクルシークエンスにはBIGDYE TERMINATOR V３.１ CYCLE SEQUENCING KIT（APPLIED BIOSYSTEMS,
CA, U.S.A.）を使用した。サーマルサイクラーにはPRIMESTAR HS DNA POLYMERASE（タカラバイオ, 滋賀）、DNAシーケンサーにはABI
PRISM ３１００ GENETIC ANALYZER SYSTEM（APPLIED BIOSYSTEMS, CA, U.S.A.）を使用した。なおプライマーは、文献「放線菌の同定と分類, p８８-１１７, 日本学会事務センター, ２００１.」に従った。
【００３１】
１６S rDNAの塩基配列の解析結果を、バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣については表２に、バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師については表３に、バチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土については表４に、アトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝については表５に、クロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王については表６に、それぞれ示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】
【表３】
【００３４】
【表４】
【００３５】
【表５】
【００３６】
【表６】
【００３７】
上記塩基配列をアポロンDB細菌基準株データベース（テクノスルガ, 静岡） を用いて相同性検索を行い、得られた１６S rDNAの塩基配列から検体と近縁と考えられる種の相同性検索を行い、上位５株を決定した。
相同性検索結果を、バチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ剣については表７に、バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師については表８に、バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ浄土については表９に、アトポスティペス属（Atopostipes
sp.）タテヤマ女汝については表１０に、クロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王については表１１に、それぞれ示す。
【００３８】
【表７】
【００３９】
【表８】
【００４０】
【表９】
【００４１】
【表１０】
【００４２】
【表１１】
【００４３】
これまで得られた情報をもとにCLUSTAL WとMEGA VER３.１を用いて、１６S rDNA塩基配列とこれに近縁と考えられる菌群の１６S rDNA塩基配列とを用いて分子系統樹を構築した。分子系統樹の推定には近隣結合法を用い、樹型の妥当性を示すブートストラップは１０００回発生させた。
なお、CLUSTAL Wは文献「Nucleic Acids Research, １９９４, ２２:４６７３-４６８０.」、MEGAは文献「Briefings in Bioinformatics, ２００４, ５, １５０-１６３.」に従った。
分子系統解析結果を、バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣とバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師とについては図１に、バチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土については図２に、アトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝については図３に、クロストリディウム属（Clostridium sp.）については図４に、それぞれ示す。
【実施例】
【００４４】
好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群１重量部をオカラ１０００重量部に混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材３０ｋｇを作り、該発酵補助資材３０ｋｇと卵殻７０ｋｇとを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群の培養物２ｋｇを混入し、更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させてアミノ酸卵殻カルシウムを得た。
【００４５】
この実施例により得られたアミノ酸卵殻カルシウムは、食品、飼料、化粧品等の原料として安全なものであった。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣とバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師の分子系統樹である。
【図２】バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ浄土の分子系統樹である。
【図３】アトポスティペス属（Atopostipessp.）タテヤマ女汝の分子系統樹である。
【図４】アトポスティペス属（Atopostipessp.）タテヤマ女汝の分子系統樹である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
卵殻は、日本全国で年間約２０万トン発生している。そのうち、何らかの用途にリサイクルされているのは、約１％の約２０００トンに留まり、残りの約９９％は廃棄処分されている。
【０００３】
卵殻は、腐敗が非常に早い上に腐敗臭がひどく、その処理には高価な処理機器が必要となるため、卵殻の大部分は廃棄処分場に搬入され、焼却処分されているのであるが、処分費用は高騰している。
【０００４】
卵殻の内膜を硫酸、塩酸等により溶かして卵殻よりカルシウムを得るという方法が知られている。
【０００５】
一方、本発明者は、特許第３７１０４２４号公報において、重金属、ダイオキシン類及び農薬を分解する方法を提供している。
【０００６】
この重金属、ダイオキシン類及び農薬を分解する方法は、配合株数の割合が好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群を有機廃棄物に混入して４０〜２００℃の温度にて一次発酵させ、更にこれに配合株数の割合が好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群を混入し、これを被処理物と共に１００〜２００℃の温度にて二次発酵させることにより、該被処理物に含まれる重金属、ダイオキシン類又は農薬を分解させるようにしたことを特徴とするものである。
【特許文献１】特許第３７１０４２４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
卵殻を焼却処分することにより生ずる焼却灰には重金属、ダイオキシン類、農薬等が残留する。けだし、養鶏の主たる飼料である穀物類が農薬と化学肥料とを用いて栽培される上、養鶏に対しても各種疾病の予防等のために抗生物質等の薬品が投与されるからである。
【０００８】
重金属、ダイオキシン類、農薬等が残留する焼却灰を埋立処分したときには、地下環境が汚染される。
【０００９】
また、卵殻の内膜を硫酸、塩酸等により溶かして卵殻よりカルシウムを得る場合には、硫酸、塩酸等の使用により、環境が汚染される。
【００１０】
以上の如き状況に鑑み、本発明は、卵殻を環境を汚染することがなく、かつ、食品、飼料、化粧品等の原料として安全なアミノ酸卵殻カルシウムにする方法を提供しようとしてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記課題を解決するために、本発明は、下記の卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法を提供する。
【００１２】
（１）好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群をオカラに混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材を作り、
該発酵補助資材と卵殻とを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群を混入し、
更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させることを特徴とする、卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法（請求項１）。
【００１３】
（２）前記発酵補助資材と前記卵殻とを混合する割合は、発酵補助資材３０〜４０重量部に対し卵殻を６０〜７０重量部とし、この混合物１００重量部に対し、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる前記有効微生物群を少なくとも２重量部混入する（請求項２）。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、廃棄処分により環境が汚染される卵殻を食品、飼料、化粧品等の安全な原料であるアミノ酸卵殻カルシウムに変えることができる。換言すれば、従来処理に窮していた卵殻の有効利用を図ることができるのである。
【００１５】
すなわち、好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群をオカラに混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材を作り、該発酵補助資材と卵殻とを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群を混入し、更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させることにより、卵殻に残留する重金属、ダイオキシン類及び農薬を分解し、食品、飼料、化粧品等の安全な原料であるアミノ酸卵殻カルシウムを得ることができるのである。
【００１６】
卵殻は高蛋白質の内膜を備えているのであるが、本発明によれば、この内膜が分解されてアミノ酸が作られ、一方、卵殻からはカルシウムが作られる。すなわち、本発明によりアミノ酸卵殻カルシウムが作られるのである。
【００１７】
また、二次発酵は６０〜８０℃の温度にて４８時間行われるため、得られたアミノ酸卵殻カルシウムには大腸菌群、サルモネラ、黄色ブドウ球菌等の食中毒菌類は検出されない。
【００１８】
本発明において原料として使用される卵殻とオカラは一般に廃棄されているものであるから、本発明により作られるアミノ酸卵殻カルシウムは極めて安価である。
【００１９】
以上述べたように、本発明によれば、一般に廃棄され、環境汚染の原因となっている卵殻を低コストで安全なアミノ酸卵殻カルシウムに変えることができるため、卵殻を資源として有効利用すると共に環境を保護するといういわば一石二鳥の効果が発揮される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群をオカラに混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材を作る。
【００２１】
有効微生物群は、一例として、オカラ１,０００ｋｇ（湿重量）に対し、１ｋｇ（湿重量）の割合で混合する。
【００２２】
該有効微生物群には次のものが含まれる。
酵母菌、セルロース分解菌、窒素固定菌、乳酸菌、糸状菌（芳香族化合物分解菌）、マンガン還元菌（クロカビ属群−原生担子菌類）、マンガン酸化菌（有機栄養菌）、アンモニア酸化菌（亜硝酸菌）、放線菌（キチン分解菌）、硝酸菌（硝化生成細菌）、硫黄細菌（硫化水素を水素供与体として利用する細菌群）、メタン酸化菌、セルロース放線菌、セルロース糸状菌、納豆菌、リグニン分解菌、鉄酸化菌、鉄還元菌、硫酸還元菌、酢酸菌、バチルス属（Bacillus sp.）、スポロサルシナ属（Sporosarcina sp.）、ペニバチルス属（Paenibacillus sp.）、オーシャノバチルス属（Oceanobacillus
sp.）。
【００２３】
上記発酵補助資材と卵殻とを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群を混入し、更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させる。
【００２４】
前記発酵補助資材と前記卵殻とを混合する割合は、好ましくは、発酵補助資材３０〜４０重量部に対し卵殻を６０〜７０重量部とする。
【００２５】
前記発酵補助資材と前記卵殻との混合物混合物１００重量部に対し、好ましくは、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる前記有効微生物群を少なくとも２重量部混入する。
【００２６】
なお、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes
sp.）タテヤマ女汝（ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０）と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣（ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１）と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２）と、好塩性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ浄土（ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３）と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王（ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４）は、それぞれ独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターに寄託されている。
【００２７】
好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ薬師と、好塩性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ浄土と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium
sp.）タテヤマ竜王とについて、同定を実施した。以下、同定方法及び微生物試験結果を示す。
【００２８】
細菌第一段階試験として、光学顕微鏡U-LH１,０００（オリンパス，日本）により、細胞形態、グラム染色性、胞子の有無及び鞭毛による運動性の有無を観察した。NUTRIENT AGAR （OXOID, HAMPSHIRE, ENGLAND）（以下「NT」という。）又はGAM寒天培地（ニッスイ, 東京）（以下「GAM」という。）でのコロニー形態を観察した。カタラーゼ反応、オキシダーゼ反応、グルコースからの酸／ガス産生及びブドウ糖の酸化／発酵（O／F）について試験を行った。
菌学的性状試験結果を表１に示す。
【００２９】
【表１】
【００３０】
次に１６S rDNA塩基配列の遺伝子解析を実施した。ゲノムDNAの抽出には、INSTAGENE MATRIX（BIO RAD, CA, USA）を使用した。抽出したゲノムＤＮＡを鋳型として、PCRにより全塩基配列約１,５００〜１,６００塩基対の領域を増幅した。その後、増幅された１６S rDNAをシーケンスし、塩基配列を得た。PCR産物の精製、サイクルシークエンスにはBIGDYE TERMINATOR V３.１ CYCLE SEQUENCING KIT（APPLIED BIOSYSTEMS,
CA, U.S.A.）を使用した。サーマルサイクラーにはPRIMESTAR HS DNA POLYMERASE（タカラバイオ, 滋賀）、DNAシーケンサーにはABI
PRISM ３１００ GENETIC ANALYZER SYSTEM（APPLIED BIOSYSTEMS, CA, U.S.A.）を使用した。なおプライマーは、文献「放線菌の同定と分類, p８８-１１７, 日本学会事務センター, ２００１.」に従った。
【００３１】
１６S rDNAの塩基配列の解析結果を、バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣については表２に、バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師については表３に、バチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土については表４に、アトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝については表５に、クロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王については表６に、それぞれ示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】
【表３】
【００３４】
【表４】
【００３５】
【表５】
【００３６】
【表６】
【００３７】
上記塩基配列をアポロンDB細菌基準株データベース（テクノスルガ, 静岡） を用いて相同性検索を行い、得られた１６S rDNAの塩基配列から検体と近縁と考えられる種の相同性検索を行い、上位５株を決定した。
相同性検索結果を、バチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ剣については表７に、バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師については表８に、バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ浄土については表９に、アトポスティペス属（Atopostipes
sp.）タテヤマ女汝については表１０に、クロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王については表１１に、それぞれ示す。
【００３８】
【表７】
【００３９】
【表８】
【００４０】
【表９】
【００４１】
【表１０】
【００４２】
【表１１】
【００４３】
これまで得られた情報をもとにCLUSTAL WとMEGA VER３.１を用いて、１６S rDNA塩基配列とこれに近縁と考えられる菌群の１６S rDNA塩基配列とを用いて分子系統樹を構築した。分子系統樹の推定には近隣結合法を用い、樹型の妥当性を示すブートストラップは１０００回発生させた。
なお、CLUSTAL Wは文献「Nucleic Acids Research, １９９４, ２２:４６７３-４６８０.」、MEGAは文献「Briefings in Bioinformatics, ２００４, ５, １５０-１６３.」に従った。
分子系統解析結果を、バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣とバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師とについては図１に、バチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土については図２に、アトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝については図３に、クロストリディウム属（Clostridium sp.）については図４に、それぞれ示す。
【実施例】
【００４４】
好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群１重量部をオカラ１０００重量部に混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材３０ｋｇを作り、該発酵補助資材３０ｋｇと卵殻７０ｋｇとを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群の培養物２ｋｇを混入し、更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させてアミノ酸卵殻カルシウムを得た。
【００４５】
この実施例により得られたアミノ酸卵殻カルシウムは、食品、飼料、化粧品等の原料として安全なものであった。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣とバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師の分子系統樹である。
【図２】バチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ浄土の分子系統樹である。
【図３】アトポスティペス属（Atopostipessp.）タテヤマ女汝の分子系統樹である。
【図４】アトポスティペス属（Atopostipessp.）タテヤマ女汝の分子系統樹である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群をオカラに混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材を作り、
該発酵補助資材と卵殻とを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群を混入し、
更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させることを特徴とする、卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法。
【請求項２】
前記発酵補助資材と前記卵殻とを混合する割合は、発酵補助資材３０〜４０重量部に対し卵殻を６０〜７０重量部とし、この混合物１００重量部に対し、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる前記有効微生物群を少なくとも２重量部混入することを特徴とする請求項１に記載の卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法。
【請求項１】
好気性菌群５５％と嫌気性菌群４５％とよりなる有効微生物群をオカラに混入し、４０〜２００℃の温度にて２４時間一次発酵させることにより発酵補助資材を作り、
該発酵補助資材と卵殻とを攪拌混合し、これに好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる有効微生物群を混入し、
更にこれを６０〜８０℃の温度にて４８時間二次発酵させることを特徴とする、卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法。
【請求項２】
前記発酵補助資材と前記卵殻とを混合する割合は、発酵補助資材３０〜４０重量部に対し卵殻を６０〜７０重量部とし、この混合物１００重量部に対し、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ剣ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９１と、好アルカリ性のバチルス属（Bacillus sp.）タテヤマ薬師ＦＥＲＭ ＢＰ−１０６９２と、好塩性のバチルス属（Bacillus
sp.）タテヤマ浄土ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９３と、嫌気性菌のアトポスティペス属（Atopostipes sp.）タテヤマ女汝ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９０と、嫌気性かつ好塩性のクロストリディウム属（Clostridium sp.）タテヤマ竜王ＦＥＲＭ ＢＰ-１０６９４とよりなる前記有効微生物群を少なくとも２重量部混入することを特徴とする請求項１に記載の卵殻をアミノ酸卵殻カルシウムにする方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２０１０−６８７５７（Ｐ２０１０−６８７５７Ａ）
【公開日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−２４０１０７（Ｐ２００８−２４０１０７）
【出願日】平成２０年９月１９日（２００８．９．１９）
【出願人】（５０２３０６４５３）株式会社スズキファーム (10)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年４月２日（２０１０．４．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月１９日（２００８．９．１９）
【出願人】（５０２３０６４５３）株式会社スズキファーム (10)
【Ｆターム（参考）】
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