変化した特性を有するα−アミラーゼ変異体を含む組成物及び方法
対照α−アミラーゼと比較して変化した生化学的特性及び有利な性能特性を有する変異体α−アミラーゼに関する組成物及び方法を記載する。この変異体は、デンプン変換、エタノール生産、洗濯、食器洗浄、パルプ及び紙生産、繊維糊抜き、並びに／又は甘味料生産等の様々な工業的用途において使用するに適している。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、アミラーゼ活性を有するα−アミラーゼの成熟形態であり、かつ、１、２、３、４、５、７、１５、１６、１７、１８、１９、２２、２５、２６、２８、２９、３０、３２、３５、３６、３７、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５９、６０、７０、７１、７２、７３、７５、７８、８３、８７、９０、９１、９３、９４、９５、１０４、１０５、１０７、１０８、１１０、１１２、１１３、１１６、１１８、１２５、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３４、１３６、１３８、１４２、１４４、１４７、１４９、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６１、１６２、１６５、１６６、１６８、１６９、１７０、１７２、１７４、１７７、１７８、１８２、１８３、１８５、１８９、１９２、１９５、１９７、２０１、２０２、２０３、２０７、２１０、２１４、２１７、２２１、２２８、２３４、２３６、２３７、２４６、２５０、２５４、２５５、２５７、２６４、２６７、２６９、２７０、２７２、２７５、２７９、２８３、２８４、２９８、３０１、３０３、３０５、３０６、３１０、３１１、３１４、３１８、３１９、３２０、３２２、３２３、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４４、３５９、３７４、３７５、３７６、３７７、３７９、３８１、３８２、３９３、３９４、３９９、４０１、４０７、４０８、４１９、４３３、４３６、４３８、４４４、４４７、４４８、４５１、４５３、４５９、４６５、４７０、４７５、４７６、４８３、及び、４８４からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
前記位置は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列中のアミノ酸残基に対応するものであり、異なるアミノ酸残基による１つ又はそれ以上の位置における天然由来アミノ酸残基の前記置換は、安定性の尺度について１．０を超える性能指数を有し、かつ、活性の尺度について１．０を超える性能指数を有するα−アミラーゼ変異体を生じさせることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項２】
請求項１に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、７、２９、３５、５３、６０、７２、８７、１０８、１１６、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３４、１３６、１３８、１４２、１５６、１６１、１６５、１７８、１８２、１８５、１８９、１９２、１９５、１９７、２０２、２１０、２１４、２１７、２２１、２３４，２４６、２６９、３０３、３１０、３３７、３４０、３７４、４０１、及び、４３８からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
異なるアミノ酸残基による天然由来アミノ酸残基の前記置換は、活性の尺度について１．５を超える性能指数を有し、かつ、安定性の尺度について１．０を超える性能指数を有するα−アミラーゼ変異体を生じさせることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項３】
請求項１に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、２、７、２２、２５、２８、３０、３７、７０、７５、８３、８７、９１、９３、１０８、１２８、１６０、１６５、１７８、１８２、１８３、２１７、２６９、２７０、２７９、２８３、２９８、３０５、３０６、３１０、３２０、３７４、３７５、３７６、４０７、４１９、４７５、及び、４７６からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
異なるアミノ酸残基による天然由来アミノ酸残基の前記置換は、安定性の尺度について１．５を超える性能指数を有し、かつ、活性の尺度について１．０を超える性能指数を有するα−アミラーゼ変異体を生じさせることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項４】
請求項１に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
８３、１２５、１２８、１３１、１６０、１７８、１８２、１８３、１８５、１８９、２７９、３０５、３１９、３２０、３７９、４０７、４３３、４５３、４７５、４７６、及び、４８３からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項５】
単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、８３、１２５、１２８、１３１、１６０、１７８、１８２、１８３、１８５、１８９、２７９、３０５、３１９、３２０、３７９、４０７、４３３、４５３、４７５、４７６、及び、４８３からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
前記位置は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列中のアミノ酸残基に対応するものであり、
前記置換は、向上した洗浄性能、向上した洗剤安定性、向上した耐熱性、及び、向上したタンパク発現からなる群より選択される少なくとも１つの有益な効果を与えることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項６】
単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、アミラーゼ活性を有するα−アミラーゼの成熟形態であり、かつ、５、３２、８３、９５、１５４、２１４、２２１、２２８、３２２、４０１、４０７、４１９、４４４、４４７、４５９、４７０、４８３、及び、４８４からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
前記位置は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列中のアミノ酸残基に対応するものであり、
異なるアミノ酸残基による天然由来アミノ酸残基の前記置換は、ｐＨ８における活性、ｐＨ１０における活性、１６℃における活性、及び、３２℃における活性について０．５以上の性能指数値と、洗剤中の安定性及び耐熱性について０．５以上の性能指数値とを有するα−アミラーゼ変異体を生じさせることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記異なるアミノ酸残基は、前記異なるアミノ酸残基が天然由来アミノ酸残基とは異なるという条件で、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、及び、Ｙからなる群より選択されることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
配列番号２に記載されているアミノ酸配列に対応する位置２４３に置換をさらに含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
配列番号２に記載されているアミノ酸配列に対応する位置１８０及び／又は位置１８１に欠失を含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記α−アミラーゼ変異体は、配列番号２、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を有する親α−アミラーゼに由来するものであることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
配列番号２に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７５％の配列同一性を有することを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
配列番号２に記載されているアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有することを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
配列番号２に記載されているアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有することを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列に対応する位置１２８、１７８、１８２、１８５及び１８９からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
前記置換によって向上した洗浄性能又は向上した洗剤安定性が与えられたものであることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１５】
請求項１に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
前記α−アミラーゼ変異体は、
（ａ）位置１２５のアラニン、位置１２８のシステイン、位置１３１のイソロイシン、位置１６５のイソロイシン、位置１７８のロイシン、位置１８２のグリシン、位置２０２のチロシン、位置３０５のアルギニン、位置３１９のトレオニン、若しくは、位置４７５のアルギニン、
（ｂ）置換Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋと、Ｓ１２５Ａ、Ｔ１３１Ｉ、Ｔ１６５Ｉ、Ｆ２０２Ｙ、及び、Ｄ３１９Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなる置換、又は、
（ｃ）置換Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｆ２０２Ｙ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｄ３１９Ｔ＋Ｇ４７５Ｋ、置換Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ、又は、置換Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｔ１３１Ｉ＋Ｔ１６５Ｉ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋを含み、
前記変異体は、位置２４３の置換、並びに／又は、位置１８０及び／若しくは位置１８１の欠失を選択的にさらに含み、
前記位置は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列に対応することを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１６】
請求項１に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
位置４７５の置換を含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１７】
請求項１６に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
前記α−アミラーゼ変異体は位置４７５のアルギニンを含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１８】
請求項１６又は１７に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
位置２４３の置換、並びに／又は、位置１８０及び／又は位置１８１の欠失をさらに含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１９】
単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、アミラーゼ活性を有する成熟形態であり、かつ、１、２、３、４、５、７、１５、１６、１７、１８、１９、２２、２５、２６、２８、２９、３０、３２、３５、３６、３７、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５９、６０、７０、７１、７２、７３、７５、７８、８２、８３、８７、９０、９１、９３、９４、９５、１０３、１０４、１０５、１０７、１０８、１１０、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１８、１２１、１２３、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３４、１３５、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４７、１４９、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８２、１８３、１８５、１８６、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９５、１９７、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０７、２１０、２１４、２１７、２２１、２２８、２３４、２３７、２３８、２３９、２４０、２４６、２５０、２５４、２５５、２５７、２６４、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７３、２７５，２７９、２８３、２８４、２９８、３０１、３０３、３０５、３０６、３１０、３１１、３１４、３１８、３１９、３２０、３２２、３２３、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４４、３５９、３７４、３７５、３７６、３７７、３７９、３８１、３８２、３９３、３９４、３９９、４０１、４０７、４０８、４１９、４３３、４３６、４３８、４４４、４４７、４４８、４５１、４５３、４５９、４６５、４７９、４７５、４８３、及び、４８４からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
前記位置は、配列番号２として記載されている対照α−アミラーゼのアミノ酸配列との対応によって番号付けたものであることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項２０】
請求項１又は１９に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
前記１つ又はそれ以上の位置における置換は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の位置における置換であることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項２１】
請求項１又は１９に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
前記α−アミラーゼ変異体は、ＢＡＳＥ、ＡＣＥ、ＡＣＥ−Ｑ及びＡＣＥ−ＱＫからなる群より選択される親α−アミラーゼに由来するものであることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項２２】
請求項１９に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
前記α−アミラーゼ変異体は、配列番号２、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４からなる群より選択される１つに対して少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を有する親α−アミラーゼに由来するものであることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれかのα−アミラーゼ変異体をコードすることを特徴とする単離された核酸。
【請求項２４】
プロモータとの作用可能な組み合わせで請求項２３に記載の単離された核酸を含むことを特徴とする発現ベクター。
【請求項２５】
請求項２４に記載の発現ベクターを含むことを特徴とする宿主細胞。
【請求項２６】
請求項１〜２２のいずれかに記載のα−アミラーゼ変異体を含むことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項２７】
請求項２６に記載の洗浄組成物であって、
プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、ペルヒドロラーゼ、ペクチン酸リアーゼ、及び、ペルオキシダーゼからなる群より選択される少なくとも１つのさらなる酵素をさらに含むことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の洗浄組成物であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がプロテアーゼであることを特徴とする洗浄組成物。
【請求項２９】
請求項２８に記載の洗浄組成物であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がサブチリシンであることを特徴とする洗浄組成物。
【請求項３０】
請求項２９に記載の洗浄組成物であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がサブチリシンＢＰＮ′又はその変異体であることを特徴とする洗浄組成物。
【請求項３１】
請求項３０に記載の洗浄組成物であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がサブチリシンＢＰＮ′２１７Ｌ又はその変異体であることを特徴とする洗浄組成物。
【請求項３２】
布又は硬表面を洗浄する方法であって、
布又は硬表面を請求項２６に記載の洗浄組成物に接触させることを含むことを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法であって、
前記洗浄組成物が少なくとも１つの界面活性剤をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項３２又は３３に記載の方法であって、
前記洗浄組成物が、プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、ペルヒドロラーゼ、ペクチン酸リアーゼ、及び、ペルオキシダーゼからなる群より選択される少なくとも１つのさらなる酵素をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項３５】
請求項３４に記載の方法であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がプロテアーゼであることを特徴とする方法。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がサブチリシンであることを特徴とする方法。
【請求項３７】
請求項３６に記載の方法であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がＢＰＮ′Ｙ２１７Ｌサブチリシンであることを特徴とする方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の方法であって、
前記α−アミラーゼ変異体が、
置換Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｆ２０２Ｙ＋Ｓ２４３Ｑ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｄ３１９Ｔ＋Ｇ４７５Ｋ、
置換Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｓ２４３Ｑ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ、又は、
置換Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｔ１３１Ｉ＋Ｔ１６５Ｉ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｓ２４３Ｑ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋを含むことを特徴とする方法。
【請求項１】
単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、アミラーゼ活性を有するα−アミラーゼの成熟形態であり、かつ、１、２、３、４、５、７、１５、１６、１７、１８、１９、２２、２５、２６、２８、２９、３０、３２、３５、３６、３７、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５９、６０、７０、７１、７２、７３、７５、７８、８３、８７、９０、９１、９３、９４、９５、１０４、１０５、１０７、１０８、１１０、１１２、１１３、１１６、１１８、１２５、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３４、１３６、１３８、１４２、１４４、１４７、１４９、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６１、１６２、１６５、１６６、１６８、１６９、１７０、１７２、１７４、１７７、１７８、１８２、１８３、１８５、１８９、１９２、１９５、１９７、２０１、２０２、２０３、２０７、２１０、２１４、２１７、２２１、２２８、２３４、２３６、２３７、２４６、２５０、２５４、２５５、２５７、２６４、２６７、２６９、２７０、２７２、２７５、２７９、２８３、２８４、２９８、３０１、３０３、３０５、３０６、３１０、３１１、３１４、３１８、３１９、３２０、３２２、３２３、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４４、３５９、３７４、３７５、３７６、３７７、３７９、３８１、３８２、３９３、３９４、３９９、４０１、４０７、４０８、４１９、４３３、４３６、４３８、４４４、４４７、４４８、４５１、４５３、４５９、４６５、４７０、４７５、４７６、４８３、及び、４８４からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
前記位置は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列中のアミノ酸残基に対応するものであり、異なるアミノ酸残基による１つ又はそれ以上の位置における天然由来アミノ酸残基の前記置換は、安定性の尺度について１．０を超える性能指数を有し、かつ、活性の尺度について１．０を超える性能指数を有するα−アミラーゼ変異体を生じさせることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項２】
請求項１に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、７、２９、３５、５３、６０、７２、８７、１０８、１１６、１２６、１２８、１２９、１３０、１３１、１３４、１３６、１３８、１４２、１５６、１６１、１６５、１７８、１８２、１８５、１８９、１９２、１９５、１９７、２０２、２１０、２１４、２１７、２２１、２３４，２４６、２６９、３０３、３１０、３３７、３４０、３７４、４０１、及び、４３８からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
異なるアミノ酸残基による天然由来アミノ酸残基の前記置換は、活性の尺度について１．５を超える性能指数を有し、かつ、安定性の尺度について１．０を超える性能指数を有するα−アミラーゼ変異体を生じさせることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項３】
請求項１に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、２、７、２２、２５、２８、３０、３７、７０、７５、８３、８７、９１、９３、１０８、１２８、１６０、１６５、１７８、１８２、１８３、２１７、２６９、２７０、２７９、２８３、２９８、３０５、３０６、３１０、３２０、３７４、３７５、３７６、４０７、４１９、４７５、及び、４７６からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
異なるアミノ酸残基による天然由来アミノ酸残基の前記置換は、安定性の尺度について１．５を超える性能指数を有し、かつ、活性の尺度について１．０を超える性能指数を有するα−アミラーゼ変異体を生じさせることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項４】
請求項１に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
８３、１２５、１２８、１３１、１６０、１７８、１８２、１８３、１８５、１８９、２７９、３０５、３１９、３２０、３７９、４０７、４３３、４５３、４７５、４７６、及び、４８３からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項５】
単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、８３、１２５、１２８、１３１、１６０、１７８、１８２、１８３、１８５、１８９、２７９、３０５、３１９、３２０、３７９、４０７、４３３、４５３、４７５、４７６、及び、４８３からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
前記位置は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列中のアミノ酸残基に対応するものであり、
前記置換は、向上した洗浄性能、向上した洗剤安定性、向上した耐熱性、及び、向上したタンパク発現からなる群より選択される少なくとも１つの有益な効果を与えることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項６】
単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、アミラーゼ活性を有するα−アミラーゼの成熟形態であり、かつ、５、３２、８３、９５、１５４、２１４、２２１、２２８、３２２、４０１、４０７、４１９、４４４、４４７、４５９、４７０、４８３、及び、４８４からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
前記位置は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列中のアミノ酸残基に対応するものであり、
異なるアミノ酸残基による天然由来アミノ酸残基の前記置換は、ｐＨ８における活性、ｐＨ１０における活性、１６℃における活性、及び、３２℃における活性について０．５以上の性能指数値と、洗剤中の安定性及び耐熱性について０．５以上の性能指数値とを有するα−アミラーゼ変異体を生じさせることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記異なるアミノ酸残基は、前記異なるアミノ酸残基が天然由来アミノ酸残基とは異なるという条件で、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、及び、Ｙからなる群より選択されることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
配列番号２に記載されているアミノ酸配列に対応する位置２４３に置換をさらに含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
配列番号２に記載されているアミノ酸配列に対応する位置１８０及び／又は位置１８１に欠失を含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記α−アミラーゼ変異体は、配列番号２、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４からなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を有する親α−アミラーゼに由来するものであることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
配列番号２に記載されているアミノ酸配列と少なくとも７５％の配列同一性を有することを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
配列番号２に記載されているアミノ酸配列と少なくとも８０％の配列同一性を有することを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１３】
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
配列番号２に記載されているアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有することを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列に対応する位置１２８、１７８、１８２、１８５及び１８９からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
前記置換によって向上した洗浄性能又は向上した洗剤安定性が与えられたものであることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１５】
請求項１に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
前記α−アミラーゼ変異体は、
（ａ）位置１２５のアラニン、位置１２８のシステイン、位置１３１のイソロイシン、位置１６５のイソロイシン、位置１７８のロイシン、位置１８２のグリシン、位置２０２のチロシン、位置３０５のアルギニン、位置３１９のトレオニン、若しくは、位置４７５のアルギニン、
（ｂ）置換Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋと、Ｓ１２５Ａ、Ｔ１３１Ｉ、Ｔ１６５Ｉ、Ｆ２０２Ｙ、及び、Ｄ３１９Ｔからなる群より選択される少なくとも１つのさらなる置換、又は、
（ｃ）置換Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｆ２０２Ｙ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｄ３１９Ｔ＋Ｇ４７５Ｋ、置換Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ、又は、置換Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｔ１３１Ｉ＋Ｔ１６５Ｉ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋを含み、
前記変異体は、位置２４３の置換、並びに／又は、位置１８０及び／若しくは位置１８１の欠失を選択的にさらに含み、
前記位置は、配列番号２に記載されているアミノ酸配列に対応することを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１６】
請求項１に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
位置４７５の置換を含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１７】
請求項１６に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
前記α−アミラーゼ変異体は位置４７５のアルギニンを含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１８】
請求項１６又は１７に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
位置２４３の置換、並びに／又は、位置１８０及び／又は位置１８１の欠失をさらに含むことを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項１９】
単離されたα−アミラーゼ変異体であって、
前記変異体は、アミラーゼ活性を有する成熟形態であり、かつ、１、２、３、４、５、７、１５、１６、１７、１８、１９、２２、２５、２６、２８、２９、３０、３２、３５、３６、３７、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５９、６０、７０、７１、７２、７３、７５、７８、８２、８３、８７、９０、９１、９３、９４、９５、１０３、１０４、１０５、１０７、１０８、１１０、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１８、１２１、１２３、１２５、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、１３１、１３２、１３４、１３５、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４７、１４９、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７４、１７５、１７６、１７７、１７８、１７９、１８２、１８３、１８５、１８６、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９５、１９７、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０７、２１０、２１４、２１７、２２１、２２８、２３４、２３７、２３８、２３９、２４０、２４６、２５０、２５４、２５５、２５７、２６４、２６６、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７３、２７５，２７９、２８３、２８４、２９８、３０１、３０３、３０５、３０６、３１０、３１１、３１４、３１８、３１９、３２０、３２２、３２３、３３６、３３７、３３８、３３９、３４０、３４４、３５９、３７４、３７５、３７６、３７７、３７９、３８１、３８２、３９３、３９４、３９９、４０１、４０７、４０８、４１９、４３３、４３６、４３８、４４４、４４７、４４８、４５１、４５３、４５９、４６５、４７９、４７５、４８３、及び、４８４からなる群より選択される１つ又はそれ以上の位置における置換を含み、
前記位置は、配列番号２として記載されている対照α−アミラーゼのアミノ酸配列との対応によって番号付けたものであることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項２０】
請求項１又は１９に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
前記１つ又はそれ以上の位置における置換は、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０の位置における置換であることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項２１】
請求項１又は１９に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
前記α−アミラーゼ変異体は、ＢＡＳＥ、ＡＣＥ、ＡＣＥ−Ｑ及びＡＣＥ−ＱＫからなる群より選択される親α−アミラーゼに由来するものであることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項２２】
請求項１９に記載のα−アミラーゼ変異体であって、
前記α−アミラーゼ変異体は、配列番号２、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３及び配列番号１４からなる群より選択される１つに対して少なくとも７５％同一のアミノ酸配列を有する親α−アミラーゼに由来するものであることを特徴とする単離されたα−アミラーゼ変異体。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれかのα−アミラーゼ変異体をコードすることを特徴とする単離された核酸。
【請求項２４】
プロモータとの作用可能な組み合わせで請求項２３に記載の単離された核酸を含むことを特徴とする発現ベクター。
【請求項２５】
請求項２４に記載の発現ベクターを含むことを特徴とする宿主細胞。
【請求項２６】
請求項１〜２２のいずれかに記載のα−アミラーゼ変異体を含むことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項２７】
請求項２６に記載の洗浄組成物であって、
プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、ペルヒドロラーゼ、ペクチン酸リアーゼ、及び、ペルオキシダーゼからなる群より選択される少なくとも１つのさらなる酵素をさらに含むことを特徴とする洗浄組成物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の洗浄組成物であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がプロテアーゼであることを特徴とする洗浄組成物。
【請求項２９】
請求項２８に記載の洗浄組成物であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がサブチリシンであることを特徴とする洗浄組成物。
【請求項３０】
請求項２９に記載の洗浄組成物であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がサブチリシンＢＰＮ′又はその変異体であることを特徴とする洗浄組成物。
【請求項３１】
請求項３０に記載の洗浄組成物であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がサブチリシンＢＰＮ′２１７Ｌ又はその変異体であることを特徴とする洗浄組成物。
【請求項３２】
布又は硬表面を洗浄する方法であって、
布又は硬表面を請求項２６に記載の洗浄組成物に接触させることを含むことを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法であって、
前記洗浄組成物が少なくとも１つの界面活性剤をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項３２又は３３に記載の方法であって、
前記洗浄組成物が、プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、ペルヒドロラーゼ、ペクチン酸リアーゼ、及び、ペルオキシダーゼからなる群より選択される少なくとも１つのさらなる酵素をさらに含むことを特徴とする方法。
【請求項３５】
請求項３４に記載の方法であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がプロテアーゼであることを特徴とする方法。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がサブチリシンであることを特徴とする方法。
【請求項３７】
請求項３６に記載の方法であって、
前記少なくとも１つのさらなる酵素がＢＰＮ′Ｙ２１７Ｌサブチリシンであることを特徴とする方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の方法であって、
前記α−アミラーゼ変異体が、
置換Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｆ２０２Ｙ＋Ｓ２４３Ｑ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｄ３１９Ｔ＋Ｇ４７５Ｋ、
置換Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｓ２４３Ｑ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋ、又は、
置換Ｓ１２５Ａ＋Ｎ１２８Ｃ＋Ｔ１３１Ｉ＋Ｔ１６５Ｉ＋Ｋ１７８Ｌ＋Ｔ１８２Ｇ＋Ｓ２４３Ｑ＋Ｙ３０５Ｒ＋Ｇ４７５Ｋを含むことを特徴とする方法。
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２０１２−５２２５１４（Ｐ２０１２−５２２５１４Ａ）
【公表日】平成２４年９月２７日（２０１２．９．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５０３７０９（Ｐ２０１２−５０３７０９）
【出願日】平成２２年４月１日（２０１０．４．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２９６５９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１１５０２１
【国際公開日】平成２２年１０月７日（２０１０．１０．７）
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年９月２７日（２０１２．９．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年４月１日（２０１０．４．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０２９６５９
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１１５０２１
【国際公開日】平成２２年１０月７日（２０１０．１０．７）
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】
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