抗腫瘍活性を有するポリケチド化合物
【課題】本発明は、優れた抗腫瘍活性を有する新規なポリケチド化合物と、当該ポリケチド化合物を有効成分とする抗腫瘍剤を提供することを目的とする。
【解決手段】本発明に係るポリケチド化合物は、渦鞭毛藻であるＡｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ ｓｐ．ＨＹＡ０２４株から単離された新規なものであり、優れた抗腫瘍活性を有する。
【解決手段】本発明に係るポリケチド化合物は、渦鞭毛藻であるＡｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ ｓｐ．ＨＹＡ０２４株から単離された新規なものであり、優れた抗腫瘍活性を有する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なポリケチド化合物、および当該ポリケチド化合物を有効成分とする抗腫瘍剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
抗腫瘍剤と称される化合物は、その由来や化学構造を含め、極めて多岐にわたって多数開発されている。これは、副作用、長期使用による薬剤耐性腫瘍細胞の発生、腫瘍の種類による薬効の相違などの理由から、常に新たな抗腫瘍剤の開発が望まれているからである。
【０００３】
抗腫瘍剤やその候補化合物を提供し得る天然資源としては、従来、細胞毒性を示す化合物を産生する植物や放線菌などが利用されてきた。例えば、イチイの樹皮から得られるタキソールは、乳がんの治療などに用いられている。
【０００４】
また、ポリケチドと呼ばれる化合物の中には細胞毒性を示すものがあり、抗生物質や抗腫瘍剤としての開発が進められている。ポリケチド化合物は、アセチルＣｏＡを出発物質とするポリケトン化合物から生合成されるものであり、大環状構造など特異な化学構造を有することから新たな作用機序による薬剤として期待されている。このようなポリケチド化合物としては、例えば、放線菌から単離精製されるエリスロマイシン、モネンシン、アンフォテリシンなど、既に抗生物質や抗腫瘍剤などとして使用されているものがある。
【０００５】
近年、天然資源として藻類が注目を集めている。藻類は、地球上に多量に存在する淡水や海水中に存在するため、その種類や量は放線菌などと比べても莫大であり、新たな有用化合物の発見が期待でき、また、有用化合物の生産源として有望である。
【０００６】
藻類からは、既に有用化合物が見出されている。例えば、非特許文献１には、渦鞭毛藻類であるＡｍｐｈｉｓｃｏｌｏｐｓ ｓｐ．から単離されたアンフィジノライドと総称されるポリケチド化合物が開示されている。
【０００７】
また、本件発明者らも、渦鞭毛藻類であるＡｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ ｓｐ．Ｙ−４２株、ＨＹＡ００２株またはＨＹＡ０２４株からアンフィジノライドを単離し、その一部については抗腫瘍活性を確認している（特許文献１〜２、非特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００９−５１７４５号公報
【特許文献２】国際公開第２００８／０８１５６８号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】J．Kobayashiら，Tetrahedron Lett．（テトラヘドロン・レター），第２７巻，第５７５５頁（１９８６年）
【非特許文献２】Masashi．Tsudaら，Journal of Organic Chemistry（ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー），第６８巻，第５３３９−５３４５頁（２００３年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上述したように、藻類からも抗腫瘍活性を示すポリケチドが既に見出されている。しかし、新たな抗腫瘍化合物は常に求められている。
【００１１】
そこで本発明は、優れた抗腫瘍活性を有する新規なポリケチド化合物と、当該ポリケチド化合物を有効成分とする抗腫瘍剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた。その結果、本発明者らが見出した渦鞭毛藻類の産生する特定のポリケチド化合物が極めて優れた抗腫瘍活性を有することを見出して、本発明を完成した。
【００１３】
本発明に係るポリケチド化合物は、下記一般式（１）で表される化合物またはその塩；
【００１４】
【化１】
【００１５】
［式中、Ｒ1は水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ6-12アリール−Ｃ1-2アルキル基またはフタリジル基を示し；Ｒ2〜Ｒ5はそれぞれ独立して水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ2-7アルカノイル基、Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、または２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基を示す］
および、下記一般式（２）で表される化合物である。
【００１６】
【化２】
［式中、Ｒ6〜Ｒ9はそれぞれ独立して水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ2-7アルカノイル基、Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、または２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基を示す］
【００１７】
本発明において「Ｃ1-6アルキル基」は、炭素数１〜６の直鎖状または分枝鎖状の脂肪族炭化水素基をいう。例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基等である。好ましくはＣ1-4アルキル基であり、より好ましくはＣ1-2アルキル基であり、最も好ましくはメチルである。
【００１８】
「Ｃ1-6アルコキシ基」は、炭素数１〜６の直鎖状または分枝鎖状のアルキルオキシ基を意味する。また、「Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、Ｃ1-6アルコキシ−メチル基および１−（Ｃ1-6アルコキシ）エチル基が好ましい。よって、「Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、メトキシメチル基、エトキシメチル基、イソプロポキシメチル基、ｔ−ブチルメチル基、ネオペントキシメチル基、１−メトキシエチル基、１−エトキシエチル基、１−イソプロポキシエチル基、１−（ｔ−ブチル）エチル基、１−ネオペントキシエチル基を挙げることができる。好ましくはＣ1-4アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基であり、より好ましくはＣ1-2アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基であり、最も好ましくはメトキシメチル基または１−メトキシエチル基である。
【００１９】
「Ｃ6-12アリール基」とは、炭素数６〜１２の芳香族炭化水素環基をいう。例えば、フェニル基、インデニル基、ナフチル基、ジフェニル基を挙げることができる。また、「Ｃ6-12アリール−Ｃ1-2アルキル基」としては、Ｃ6-12アリール−メチル基および１−（Ｃ6-12アリール）エチル基が好ましい。よって、「Ｃ6-12アリール−Ｃ1-2アルキル基」としては、ベンジル基、ナフチルメチル基、ジフェニルメチル基、１−フェニルエチル基、１−ナフチルエチル基、１−（ジフェニル）エチル基を挙げることができる。好ましくはベンジル基または１−フェニルエチル基である。
【００２０】
「Ｃ6-12アリール基」は、一般的な置換基を有していてもよい。置換基としては、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ基、アミノ基、Ｃ1-6アルキルアミノ基、ジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基、カルバモイル基、Ｃ1-6アルカノイル基、シアノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基およびハロゲン原子からなる群より選択される１種または２種以上を挙げることができる。なお、２種以上の置換基により置換されている場合には、それら置換基は互いに同一であっても異なっていてもよい。
【００２１】
「Ｃ1-7アルカノイル基」は、ホルミルおよび（Ｃ1-6アルキル）カルボニル基を意味する。例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、ペンタノイル基、ピバロイル基、バレリル基、イソバレリル基を挙げることができる。好ましくはＣ1-4アルカノイル基であり、より好ましくはＣ1-2アルカノイル基であり、最も好ましくはアセチルである。
【００２２】
「Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、Ｃ1-7アルカノイルオキシメチル基および１−（Ｃ1-7アルカノイルオキシ）エチル基が好ましい。よって、「Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、ピバロイルオキシメチル基、イソブチリルオキシメチル基、１−（イソブチリルオキシ）エチル基、アセトキシメチル基、１−（アセトキシ）エチル基を挙げることができる。
【００２３】
「Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシメチル基および１−（Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ）エチル基が好ましい。よって、「Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、ｔ−ブトキシカルボニルオキシメチル基、１−（メトキシカルボニルオキシ）エチル基、１−（エトキシカルボニルオキシ）エチル基、１−（イソプロポキシカルボニルオキシ）エチル基、１−（ｔ−ブトキシカルボニルオキシ）エチル基、１−（３−ペンチルオキシカルボニルオキシ）エチル基を挙げることができる。
【００２４】
「２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基」には、５位の水素原子がＣ1-6アルコキシ基に置換されている基も含まれるものとする。
【００２５】
本発明に係るポリケチド化合物の用途としては、抗腫瘍用途が考えられる。よって、本発明に係るポリケチド化合物の塩としては、医薬上許容される塩が好ましい。かかる塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩；カルシウム塩やマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニウム塩、ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、プロカイン塩、クロロプロカイン塩、ジエタノールアミン塩、ピペラジン塩などのアミン塩を挙げることができる。
【００２６】
本発明の抗腫瘍剤は、上記ポリケチド化合物を有効成分とすることを特徴とする。
【発明の効果】
【００２７】
本発明に係る新規なポリケチド化合物は、ヒトを含む動物の腫瘍細胞に対して優れた増殖抑制効果を有し、新規な抗腫瘍剤として利用可能である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明のポリケチド化合物は、渦鞭毛藻Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ ｓｐ．ＨＹＡ０２４株（以下、単に「ＨＹＡ０２４株」という）から単離精製することにより得られる。
【００２９】
本発明に係るＨＹＡ０２４株は、本発明者らが西表島の近海から見出した新規なものである。具体的には、ＨＹＡ０２４株は、西表島の海底泥、海藻および／または海草を採取し、目開き：２００μｍの篩上で海水を用いて洗浄し、得られた洗浄海水を光照射下で数日から数ヶ月にわたりインキュベートする。得られた培養液中に存在する微生物を、顕微鏡観察下、ガラスキャピラリーを用いて渦鞭毛藻を単離し、さらに後述する形態的特徴を有するＨＹＡ０２４株を単離することができる。なお、ＨＹＡ０２４株は、高知大学海洋コア総合研究センターに保管されている。
【００３０】
ＨＹＡ０２４株の形態的特徴は、以下のとおりである。
大きさ： 縦２０〜３５μｍ，横１０〜２５μｍ
色： 茶褐色〜黄緑色
形状： 上錐と下錐の長さの比率が１：３〜１：１０
殻： 無殻
ピレノイド： 有
鞭毛： ２本有
運動性： 遊泳性有
【００３１】
本発明化合物を効率的に得るために、ＨＹＡ０２４株を事前に培養しておくことが好ましい。
【００３２】
培養のための培地は適宜選択すればよいが、ＨＹＡ０２４株は海産渦鞭毛藻であることから、海水をベースとした培地を用いることができる。より具体的には、加熱や濾過などの常法により海水を殺菌または滅菌した後、炭素源、窒素源、ビタミン類などの微量栄養素、金属類など、ＨＹＡ０２４株の生育に適した成分を添加すればよい。必要であれば、炭酸水素ナトリウムや塩酸などを用い、ｐＨを７．０以上、９．０以下程度に調整してもよい。
【００３３】
培養温度は適宜調整すればよく、通常、２０℃以上、３５℃以下程度とすればよい。また、培養時間はＨＹＡ０２４株が十分に増殖するまでとすればよいが、通常、１０日以上、２０日以下程度とすることができる。
【００３４】
ＨＹＡ０２４株は光合成を行うので、培養中には光を照射することが好ましい。光量は適宜調整すればよいが、１５００ルクス以上、５０００ルクス以下程度とすることができる。但し、休眠時間を設けることが好ましい。よって好適には、例えば、５時間以上、１０時間以下程度の暗期と、１０時間以上、２０時間以下程度の明期の明暗サイクルを設定する。
【００３５】
ＨＹＡ０２４株を十分に培養した後、ＨＹＡ０２４株から本発明に係るポリケチド化合物を抽出する。
【００３６】
本発明のポリケチド化合物は、水に不溶であることから、抽出溶媒としては有機溶媒を用いる。具体的には、メタノールやエタノールなどのアルコール類；ジクロロメタンやクロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類；ベンゼンやトルエンなどの芳香族炭化水素類；酢酸エチルなどのエステル類；アセトンなどのケトン類；およびこれら２種以上の混合有機溶媒を用いることができる。
【００３７】
上記のとおり、本発明のポリケチド化合物は、水に不溶である。よって、抽出を行う前には、遠心分離や濾過などによりＨＹＡ０２４株を培地から分離しておくことが好ましい。また、抽出効率を高めるために、ＨＹＡ０２４株をホモジェナイズしてもよいし、ＨＹＡ０２４株に抽出溶媒を添加した後に攪拌してもよい。勿論、抽出は２回以上行うことが好ましい。さらに、水溶性成分を除去するために、水や食塩水などを添加してもよい。
【００３８】
得られた抽出液は、好適には無水硫酸ナトリウムや無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮する。
【００３９】
次に、抽出液を濃縮することにより得られた残渣から、本発明のポリケチド化合物を単離精製する。
【００４０】
精製手段は特に制限されず、常法を適宜組合わせればよい。精製手段としては、例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィや、長鎖脂肪族炭化水素基が結合したシリカゲル、ポリビニル樹脂、ポリスチレン樹脂などを充填剤とするカラムを用いたカラムクロマトグラフィなどを挙げることができる。
【００４１】
精製により単離された各化合物の特定は、既知のクロマトグラフィチャートと照らし合わせたり、或いはマススペクトルやＮＭＲなどにより行うことができる。例えば、本発明のポリケチド化合物（１）の［Ｍ＋Ｎａ］+の分子質量は５１７、ポリケチド化合物（１）の［Ｍ＋Ｎａ］+の分子質量は７７３であるので、単離精製した化合物をマススペクトルにより分析し、［Ｍ＋Ｎａ］+の分子質量をこれら値と比較することにより化合物を特定することができる。
【００４２】
本発明のポリケチド化合物（１）〜（２）は、優れた抗腫瘍活性を有するので、抗腫瘍剤として用いることができる。
【００４３】
本発明のポリケチド化合物（１）〜（２）は単独で用いてもよいし、或いは一般的に製剤上許容される無機または有機の成分と共に製剤化してもよい。添加成分としては、ビヒクル；担体；カオリン、炭酸カルシウム、微晶性セルロースなどの賦形剤；デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどの崩壊剤；コーンスターチ、ゼラチン、デキストリンなどの結合剤；タルクなどの光沢剤；防腐剤；安定剤；湿潤剤；プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、オレイン酸エチル、レシチンなどの懸濁補助剤；乳糖やショ糖などの甘味剤；芳香剤；着色剤などを挙げることができる。また、液剤に用いられる希釈剤としては、水や植物油などの不活性なものを用いることができる。
【００４４】
本発明製剤の剤形は、投与経路や投与計画などに応じて適宜決定すればよい。投与形態としては、経口投与、経腸投与、局所投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与などが挙げられる。剤形としては、注射剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、溶液剤などを挙げることができる。
【００４５】
本発明製剤の投与量は、患者の年齢、病状、重篤度、他の薬剤との併用の有無などにより適宜調整すればよいが、例えば傾向投与の場合には、成人に対して１回当たり０．１ｍｇ以上、１００ｍｇ以下程度とすることができ、より好ましくは１ｍｇ以上、１０ｍｇ以下とすることができる。
【実施例】
【００４６】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。
【００４７】
実施例１ 本発明に係る化合物の単離精製
オートクレーブを用い、海水を１２０℃で２０分間滅菌した。得られた海水に、表１に示す組成を有する海水補強栄養剤を１％の濃度で添加した。
【００４８】
【表１】
【００４９】
さらに３ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてｐＨを７．３〜８．５に調製した後、孔径０．２２μｍのフィルターを用いて濾過滅菌することにより、培養液を得た。
【００５０】
上記培養液へ、渦鞭毛藻Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ ｓｐ．ＨＹＡ０２４株を接種し、２５℃で１４日間静置培養した。培養期間中、明暗サイクルを明期１６時間、暗期８時間とし、明期には３０００ルクスの光を照射した。
【００５１】
培養後、遠心分離により渦鞭毛藻を回収した。得られた渦鞭毛藻（６０．５ｇ）にメタノール／トルエン＝３／１の混合溶媒（２００ｍＬ）を加えて攪拌した後、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を加え、トルエン（１００ｍＬ）で３回抽出した。トルエン抽出液を減圧乾燥し、得られた残渣（７３０ｍｇ）を下記カラムクロマトグラフィにより順次精製することにより、ポリケチド化合物であると推定される化合物２種を分離回収した。
シリカゲルカラム（溶出液：クロロホルム／メタノール）
固相抽出カートリッジ（ウォーターズ社製，Ｓｅｐ−Ｐａｋ Ｃ１８，溶出液：メタノール／水＝８：２）
ＯＤＳカラム（ＹＭＣ社製，ＹＭＣ Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８，溶出液：アセトニトリル／水＝７５：２５，流速：３ｍＬ／分，検出光：ＵＶ２１０ｎｍ）
【００５２】
得られた２種の化合物を高分解能エレクトロスプレー質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ）とＮＭＲにより分析し、化学構造を決定した。各化学構造式と分析値、物性などを以下に示す。なお、以下では、各化合物をそれぞれアンフィリオニン−１とイリオモテオリド−８ａという。
【００５３】
アンフィリオニン−１
【００５４】
【化３】
【００５５】
マススペクトル：m/z 517（[M+Na]+）
ＮＭＲスペクトル：
1H-NMR（600MHz，CDCl3）δ0.90（3H，d，6.9 Hz，H3-28），1.19（3H，d，6.6 Hz，H3-26），1.19（3H，d，7.4 Hz，H3-25），1.25（1H，m，H-14），1.30（1H，m，H-3），1.32（1H，m，H-14），1.33（1H，m，H-13），1.46（1H，m，H-13），1.52（1H，m，H-3），1.67（3H，brs，H3-27），1.67（1H，m，H-18），1.70（1H，m，H-12），1.73（3H，brd，8.1 Hz，H3-24），1.74（1H，m，H-18），1.88（1H，m，H-3），1.90（2H，m，H2-10），1.98（1H，m，H-3），2.58（1H，m，H-2），2.76（1H，br，15-OH），2.88（1H，m，H-4），3.62（1H，brs，17-OH），3.67（1H，m，H-11），3.69（1H，br，17-OH），3.84（1H，m，H-15），4.18（1H，m，H-17），4.46（1H，brd，6.4 Hz，H-16），4.50（1H，m，H-19），4.61（1H，m，H-9），5.22（1H，brd，9.8 Hz，H-5），5.57（1H，dd，6.4，15.3 Hz，H-20），5.65（1H，d，3.8，15.5 Hz，H-8），5.70（1H，dq，14.5，8.1 Hz，H-23），6.01（1H，brdd，11.6，14.5 Hz，H-22），6.18（1H，d，15.5 Hz，H-7），6.19（1H，dd，11.6，15.3 Hz，H-21）
13C-NMRスペクトル（150MHz，CDCl3）δ12.7（CH3，C-27），13.5（CH3，C-28），18.1（CH3，C-24），19.7（CH3，C-25），21.5（CH3，C-26），29.6（CH，C-4），29.7（CH2，C-13），31.3（CH2，C-14），36.4（CH，C-2），37.0（CH，C-12），39.1（CH2，H-18），39.5（CH2，C-3），40.4（CH2，C-10），68.9（CH，C-9），70.1（CH，C-19），70.2（CH，C-11），70.4（CH，C-17），71.5（CH，C-15），76.8（CH，C-16），128.5（CH，C-8），130.5（CH，C-23），130.6（CH，C-22），131.1（CH，C-21），131.8（CH，C-20），132.4（CH，C-7），135.9（CH，C-5），142.0（C，C-6），184.5（C，C-1）
形状：無色油状
溶解性：アルコール、クロロホルム、酢酸エチル、アセトンに可溶、ヘキサン、水に不溶。
【００５６】
イリオモテオリド−８ａ
【００５７】
【化４】
【００５８】
マススペクトル：m/z 773（[M+Na]+）
ＮＭＲスペクトル：
1H-NMR（500MHz，CD3OD）δ0.89（3H，d，6.9 Hz，H3-40），0.94（3H，d，6.9 Hz，H3-39），1.05（3H，d，7.1 Hz，H3-41），1.08（3H，d，6.7Hz，H3-38），1.13（3H，d，6.7Hz，H3-42），1.20（2H，m，H-10 and H-30），1.26（2H，m H2-7），1.28（3H，d，5.2 Hz，H3-37），1.43（2H，m，H-11 and H-32），1.44（1H，m，H-32），1.46（1H，m，H-11），1.48（1H，m，H-12），1.49（2H，m，H-30 and H-33），1.53（1H，m，H-12），1.54（1H，m，H-33），1.55（1H，m，H-25），1.56（1H，m，H-10），1.61（2H，m，H-19 and H-20），1.67（1H，m，H-9），1.70（1H，m，H-15），1.72（1H，m，H-26），1.74（1H，m，H-29），1.78（1H，m，H-25），1.84（1H，m，H-17），1.90（1H，brdd，5.5，14.0 Hz，H-15），2.01（2H，m，H-19 and H-20），2.07（1H，m，H-29），2.12（1H，dd，11.1，14.1 Hz，H-12），2.33（1H，m，H-6），2.54（1H，dd，3.5，14.1 Hz，H-2），2.65（1H，dd，2.3，5.9 Hz，H-35），2.70（1H，m，H-3），2.78（1H，dq，9.3，7.1 Hz，H-22），2.94（1H，dq，2.3，5.2 Hz，H-36），3.33（1H，m，H-34），3.65（1H，m，H-13），3.66（1H，m，H-8），3.75（1H，m，H-31），3.86（1H，m，H-18），3.91（1H，m，H-21），3.96（1H，m，H-14），3.97（1H，m，H-27），4.08（1H，brd，5.9 Hz，H-28），4.11（1H，m，H-16），5.09（1H，dd，1.5，10.3 Hz，H-24），5.33（1H，dd，7.1，15.5 Hz，H-5），5.40（1H，dd，7.1，15.5 Hz，H-4）
13C-NMR（125MHz，CD3OD）δ15.2（CH3，C-40），15.8（CH3，C-40），17.8（CH3，C-42），18.1（CH3，C-37），22.0(CH3，C-38），24.0（CH3，C-37），27.0（CH2，C-32），27.5（CH2，C-11），30.5（CH2，C-20），32.26（CH2，C-10），32.32（CH2，C-19），33.6（CH2，C-25），34.1（CH，C-6），35.0（CH2，C-30），35.5（CH2，C-33），35.6（CH，C-3），35.9（CH2，C-12），38.8（CH2，C-7），39.7（CH，C-26），40.0（CH2，C-29），40.3（CH，C-9），42.2（CH2，C-15），43.7（CH2，C-17），44.8（CH2，C-2），50.3（CH，C-22），54.1（CH，C-36），64.8（CH，C-35），72.4（CH，C-8），73.2（CH，C-34），77.3（CH，C-16），77.5（CH，C-14），78.1（CH，C-24），78.2（CH，C-28），78.6（CH，C-18），82.7（CH，C-21），84.5（CH，C-27），88.1（CH，C-13），89.2（CH，C-31），135.2（CH，C-4），138.0（CH，C-5），173.7（C，C-1），211.8（C，C-23）
形状：無色油状
溶解性：アルコール、クロロホルム、酢酸エチル、アセトンに可溶、ヘキサン、水に不溶。
【００５９】
試験例１ 抗腫瘍活性試験
１０％仔牛血清（Ｍｏｒｅｇａｔｅ社）と１０％牛胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ社)を含むＲＰＭＩ−１６４０培地(Ｓｉｇｍａ社)に、ヒトＢｕｒｋｉｔｔ’ｓリンパ腫細胞株（ＤＧ−７５，ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−２６７５）を１×１０5／ｍＬとなるように懸濁した。この細胞懸濁液（５０μＬ）を９６ウェルマイクロプレートに添加した後、上記培養液（４９μＬ）を添加して全量を９９μＬとした。別途、本発明に係るポリケチド化合物であるアンフィリオニン−１もしくはイリオモテオリド−８ａ、または５−ＦＵ（Ｗａｋｏ社）をジメチルスルホキシドに溶解して０．００１〜１０μｇ／ｍＬ溶液とし、各ウェルに１μＬ添加した。次いで、二酸化炭素濃度：５％、３７℃の条件で７２時間培養した。
【００６０】
培養後、各ウェルにＷａｋｏ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８（Ｗａｋｏ社）を１０μＬ添加し、二酸化炭素インキュベータ内で呈色反応を３時間行った。マイクロプレートリーダーを用いて波長４５０ｎｍ（参照波長６２０ｎｍ）の吸光度を測定した。測定値からリンパ腫細胞の増殖阻害率を次式より算出し、増殖阻害率が５０％となる培養液中の化合物濃度をＩＣ50値として算出した。
増殖阻害率（％）＝［１−（サンプル値／ブランク値）］×１００
【００６１】
結果を表２に示す。
【００６２】
【表２】
【００６３】
上記結果のとおり、本発明に係る化合物は、既存の抗腫瘍剤である５−ＦＵと同等かそれ以上の抗腫瘍活性を示す優れた抗がん剤であることが実証された。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規なポリケチド化合物、および当該ポリケチド化合物を有効成分とする抗腫瘍剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
抗腫瘍剤と称される化合物は、その由来や化学構造を含め、極めて多岐にわたって多数開発されている。これは、副作用、長期使用による薬剤耐性腫瘍細胞の発生、腫瘍の種類による薬効の相違などの理由から、常に新たな抗腫瘍剤の開発が望まれているからである。
【０００３】
抗腫瘍剤やその候補化合物を提供し得る天然資源としては、従来、細胞毒性を示す化合物を産生する植物や放線菌などが利用されてきた。例えば、イチイの樹皮から得られるタキソールは、乳がんの治療などに用いられている。
【０００４】
また、ポリケチドと呼ばれる化合物の中には細胞毒性を示すものがあり、抗生物質や抗腫瘍剤としての開発が進められている。ポリケチド化合物は、アセチルＣｏＡを出発物質とするポリケトン化合物から生合成されるものであり、大環状構造など特異な化学構造を有することから新たな作用機序による薬剤として期待されている。このようなポリケチド化合物としては、例えば、放線菌から単離精製されるエリスロマイシン、モネンシン、アンフォテリシンなど、既に抗生物質や抗腫瘍剤などとして使用されているものがある。
【０００５】
近年、天然資源として藻類が注目を集めている。藻類は、地球上に多量に存在する淡水や海水中に存在するため、その種類や量は放線菌などと比べても莫大であり、新たな有用化合物の発見が期待でき、また、有用化合物の生産源として有望である。
【０００６】
藻類からは、既に有用化合物が見出されている。例えば、非特許文献１には、渦鞭毛藻類であるＡｍｐｈｉｓｃｏｌｏｐｓ ｓｐ．から単離されたアンフィジノライドと総称されるポリケチド化合物が開示されている。
【０００７】
また、本件発明者らも、渦鞭毛藻類であるＡｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ ｓｐ．Ｙ−４２株、ＨＹＡ００２株またはＨＹＡ０２４株からアンフィジノライドを単離し、その一部については抗腫瘍活性を確認している（特許文献１〜２、非特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００９−５１７４５号公報
【特許文献２】国際公開第２００８／０８１５６８号パンフレット
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】J．Kobayashiら，Tetrahedron Lett．（テトラヘドロン・レター），第２７巻，第５７５５頁（１９８６年）
【非特許文献２】Masashi．Tsudaら，Journal of Organic Chemistry（ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー），第６８巻，第５３３９−５３４５頁（２００３年）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上述したように、藻類からも抗腫瘍活性を示すポリケチドが既に見出されている。しかし、新たな抗腫瘍化合物は常に求められている。
【００１１】
そこで本発明は、優れた抗腫瘍活性を有する新規なポリケチド化合物と、当該ポリケチド化合物を有効成分とする抗腫瘍剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた。その結果、本発明者らが見出した渦鞭毛藻類の産生する特定のポリケチド化合物が極めて優れた抗腫瘍活性を有することを見出して、本発明を完成した。
【００１３】
本発明に係るポリケチド化合物は、下記一般式（１）で表される化合物またはその塩；
【００１４】
【化１】
【００１５】
［式中、Ｒ1は水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ6-12アリール−Ｃ1-2アルキル基またはフタリジル基を示し；Ｒ2〜Ｒ5はそれぞれ独立して水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ2-7アルカノイル基、Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、または２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基を示す］
および、下記一般式（２）で表される化合物である。
【００１６】
【化２】
［式中、Ｒ6〜Ｒ9はそれぞれ独立して水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ2-7アルカノイル基、Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、または２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基を示す］
【００１７】
本発明において「Ｃ1-6アルキル基」は、炭素数１〜６の直鎖状または分枝鎖状の脂肪族炭化水素基をいう。例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基等である。好ましくはＣ1-4アルキル基であり、より好ましくはＣ1-2アルキル基であり、最も好ましくはメチルである。
【００１８】
「Ｃ1-6アルコキシ基」は、炭素数１〜６の直鎖状または分枝鎖状のアルキルオキシ基を意味する。また、「Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、Ｃ1-6アルコキシ−メチル基および１−（Ｃ1-6アルコキシ）エチル基が好ましい。よって、「Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、メトキシメチル基、エトキシメチル基、イソプロポキシメチル基、ｔ−ブチルメチル基、ネオペントキシメチル基、１−メトキシエチル基、１−エトキシエチル基、１−イソプロポキシエチル基、１−（ｔ−ブチル）エチル基、１−ネオペントキシエチル基を挙げることができる。好ましくはＣ1-4アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基であり、より好ましくはＣ1-2アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基であり、最も好ましくはメトキシメチル基または１−メトキシエチル基である。
【００１９】
「Ｃ6-12アリール基」とは、炭素数６〜１２の芳香族炭化水素環基をいう。例えば、フェニル基、インデニル基、ナフチル基、ジフェニル基を挙げることができる。また、「Ｃ6-12アリール−Ｃ1-2アルキル基」としては、Ｃ6-12アリール−メチル基および１−（Ｃ6-12アリール）エチル基が好ましい。よって、「Ｃ6-12アリール−Ｃ1-2アルキル基」としては、ベンジル基、ナフチルメチル基、ジフェニルメチル基、１−フェニルエチル基、１−ナフチルエチル基、１−（ジフェニル）エチル基を挙げることができる。好ましくはベンジル基または１−フェニルエチル基である。
【００２０】
「Ｃ6-12アリール基」は、一般的な置換基を有していてもよい。置換基としては、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ基、アミノ基、Ｃ1-6アルキルアミノ基、ジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基、カルバモイル基、Ｃ1-6アルカノイル基、シアノ基、カルボキシ基、ヒドロキシ基およびハロゲン原子からなる群より選択される１種または２種以上を挙げることができる。なお、２種以上の置換基により置換されている場合には、それら置換基は互いに同一であっても異なっていてもよい。
【００２１】
「Ｃ1-7アルカノイル基」は、ホルミルおよび（Ｃ1-6アルキル）カルボニル基を意味する。例えば、ホルミル基、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、ペンタノイル基、ピバロイル基、バレリル基、イソバレリル基を挙げることができる。好ましくはＣ1-4アルカノイル基であり、より好ましくはＣ1-2アルカノイル基であり、最も好ましくはアセチルである。
【００２２】
「Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、Ｃ1-7アルカノイルオキシメチル基および１−（Ｃ1-7アルカノイルオキシ）エチル基が好ましい。よって、「Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、ピバロイルオキシメチル基、イソブチリルオキシメチル基、１−（イソブチリルオキシ）エチル基、アセトキシメチル基、１−（アセトキシ）エチル基を挙げることができる。
【００２３】
「Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシメチル基および１−（Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ）エチル基が好ましい。よって、「Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基」としては、ｔ−ブトキシカルボニルオキシメチル基、１−（メトキシカルボニルオキシ）エチル基、１−（エトキシカルボニルオキシ）エチル基、１−（イソプロポキシカルボニルオキシ）エチル基、１−（ｔ−ブトキシカルボニルオキシ）エチル基、１−（３−ペンチルオキシカルボニルオキシ）エチル基を挙げることができる。
【００２４】
「２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基」には、５位の水素原子がＣ1-6アルコキシ基に置換されている基も含まれるものとする。
【００２５】
本発明に係るポリケチド化合物の用途としては、抗腫瘍用途が考えられる。よって、本発明に係るポリケチド化合物の塩としては、医薬上許容される塩が好ましい。かかる塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩；カルシウム塩やマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニウム塩、ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、プロカイン塩、クロロプロカイン塩、ジエタノールアミン塩、ピペラジン塩などのアミン塩を挙げることができる。
【００２６】
本発明の抗腫瘍剤は、上記ポリケチド化合物を有効成分とすることを特徴とする。
【発明の効果】
【００２７】
本発明に係る新規なポリケチド化合物は、ヒトを含む動物の腫瘍細胞に対して優れた増殖抑制効果を有し、新規な抗腫瘍剤として利用可能である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
本発明のポリケチド化合物は、渦鞭毛藻Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ ｓｐ．ＨＹＡ０２４株（以下、単に「ＨＹＡ０２４株」という）から単離精製することにより得られる。
【００２９】
本発明に係るＨＹＡ０２４株は、本発明者らが西表島の近海から見出した新規なものである。具体的には、ＨＹＡ０２４株は、西表島の海底泥、海藻および／または海草を採取し、目開き：２００μｍの篩上で海水を用いて洗浄し、得られた洗浄海水を光照射下で数日から数ヶ月にわたりインキュベートする。得られた培養液中に存在する微生物を、顕微鏡観察下、ガラスキャピラリーを用いて渦鞭毛藻を単離し、さらに後述する形態的特徴を有するＨＹＡ０２４株を単離することができる。なお、ＨＹＡ０２４株は、高知大学海洋コア総合研究センターに保管されている。
【００３０】
ＨＹＡ０２４株の形態的特徴は、以下のとおりである。
大きさ： 縦２０〜３５μｍ，横１０〜２５μｍ
色： 茶褐色〜黄緑色
形状： 上錐と下錐の長さの比率が１：３〜１：１０
殻： 無殻
ピレノイド： 有
鞭毛： ２本有
運動性： 遊泳性有
【００３１】
本発明化合物を効率的に得るために、ＨＹＡ０２４株を事前に培養しておくことが好ましい。
【００３２】
培養のための培地は適宜選択すればよいが、ＨＹＡ０２４株は海産渦鞭毛藻であることから、海水をベースとした培地を用いることができる。より具体的には、加熱や濾過などの常法により海水を殺菌または滅菌した後、炭素源、窒素源、ビタミン類などの微量栄養素、金属類など、ＨＹＡ０２４株の生育に適した成分を添加すればよい。必要であれば、炭酸水素ナトリウムや塩酸などを用い、ｐＨを７．０以上、９．０以下程度に調整してもよい。
【００３３】
培養温度は適宜調整すればよく、通常、２０℃以上、３５℃以下程度とすればよい。また、培養時間はＨＹＡ０２４株が十分に増殖するまでとすればよいが、通常、１０日以上、２０日以下程度とすることができる。
【００３４】
ＨＹＡ０２４株は光合成を行うので、培養中には光を照射することが好ましい。光量は適宜調整すればよいが、１５００ルクス以上、５０００ルクス以下程度とすることができる。但し、休眠時間を設けることが好ましい。よって好適には、例えば、５時間以上、１０時間以下程度の暗期と、１０時間以上、２０時間以下程度の明期の明暗サイクルを設定する。
【００３５】
ＨＹＡ０２４株を十分に培養した後、ＨＹＡ０２４株から本発明に係るポリケチド化合物を抽出する。
【００３６】
本発明のポリケチド化合物は、水に不溶であることから、抽出溶媒としては有機溶媒を用いる。具体的には、メタノールやエタノールなどのアルコール類；ジクロロメタンやクロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類；ベンゼンやトルエンなどの芳香族炭化水素類；酢酸エチルなどのエステル類；アセトンなどのケトン類；およびこれら２種以上の混合有機溶媒を用いることができる。
【００３７】
上記のとおり、本発明のポリケチド化合物は、水に不溶である。よって、抽出を行う前には、遠心分離や濾過などによりＨＹＡ０２４株を培地から分離しておくことが好ましい。また、抽出効率を高めるために、ＨＹＡ０２４株をホモジェナイズしてもよいし、ＨＹＡ０２４株に抽出溶媒を添加した後に攪拌してもよい。勿論、抽出は２回以上行うことが好ましい。さらに、水溶性成分を除去するために、水や食塩水などを添加してもよい。
【００３８】
得られた抽出液は、好適には無水硫酸ナトリウムや無水硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮する。
【００３９】
次に、抽出液を濃縮することにより得られた残渣から、本発明のポリケチド化合物を単離精製する。
【００４０】
精製手段は特に制限されず、常法を適宜組合わせればよい。精製手段としては、例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィや、長鎖脂肪族炭化水素基が結合したシリカゲル、ポリビニル樹脂、ポリスチレン樹脂などを充填剤とするカラムを用いたカラムクロマトグラフィなどを挙げることができる。
【００４１】
精製により単離された各化合物の特定は、既知のクロマトグラフィチャートと照らし合わせたり、或いはマススペクトルやＮＭＲなどにより行うことができる。例えば、本発明のポリケチド化合物（１）の［Ｍ＋Ｎａ］+の分子質量は５１７、ポリケチド化合物（１）の［Ｍ＋Ｎａ］+の分子質量は７７３であるので、単離精製した化合物をマススペクトルにより分析し、［Ｍ＋Ｎａ］+の分子質量をこれら値と比較することにより化合物を特定することができる。
【００４２】
本発明のポリケチド化合物（１）〜（２）は、優れた抗腫瘍活性を有するので、抗腫瘍剤として用いることができる。
【００４３】
本発明のポリケチド化合物（１）〜（２）は単独で用いてもよいし、或いは一般的に製剤上許容される無機または有機の成分と共に製剤化してもよい。添加成分としては、ビヒクル；担体；カオリン、炭酸カルシウム、微晶性セルロースなどの賦形剤；デンプン、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどの崩壊剤；コーンスターチ、ゼラチン、デキストリンなどの結合剤；タルクなどの光沢剤；防腐剤；安定剤；湿潤剤；プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ベンジルアルコール、オレイン酸エチル、レシチンなどの懸濁補助剤；乳糖やショ糖などの甘味剤；芳香剤；着色剤などを挙げることができる。また、液剤に用いられる希釈剤としては、水や植物油などの不活性なものを用いることができる。
【００４４】
本発明製剤の剤形は、投与経路や投与計画などに応じて適宜決定すればよい。投与形態としては、経口投与、経腸投与、局所投与、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与などが挙げられる。剤形としては、注射剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、溶液剤などを挙げることができる。
【００４５】
本発明製剤の投与量は、患者の年齢、病状、重篤度、他の薬剤との併用の有無などにより適宜調整すればよいが、例えば傾向投与の場合には、成人に対して１回当たり０．１ｍｇ以上、１００ｍｇ以下程度とすることができ、より好ましくは１ｍｇ以上、１０ｍｇ以下とすることができる。
【実施例】
【００４６】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。
【００４７】
実施例１ 本発明に係る化合物の単離精製
オートクレーブを用い、海水を１２０℃で２０分間滅菌した。得られた海水に、表１に示す組成を有する海水補強栄養剤を１％の濃度で添加した。
【００４８】
【表１】
【００４９】
さらに３ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてｐＨを７．３〜８．５に調製した後、孔径０．２２μｍのフィルターを用いて濾過滅菌することにより、培養液を得た。
【００５０】
上記培養液へ、渦鞭毛藻Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ ｓｐ．ＨＹＡ０２４株を接種し、２５℃で１４日間静置培養した。培養期間中、明暗サイクルを明期１６時間、暗期８時間とし、明期には３０００ルクスの光を照射した。
【００５１】
培養後、遠心分離により渦鞭毛藻を回収した。得られた渦鞭毛藻（６０．５ｇ）にメタノール／トルエン＝３／１の混合溶媒（２００ｍＬ）を加えて攪拌した後、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を加え、トルエン（１００ｍＬ）で３回抽出した。トルエン抽出液を減圧乾燥し、得られた残渣（７３０ｍｇ）を下記カラムクロマトグラフィにより順次精製することにより、ポリケチド化合物であると推定される化合物２種を分離回収した。
シリカゲルカラム（溶出液：クロロホルム／メタノール）
固相抽出カートリッジ（ウォーターズ社製，Ｓｅｐ−Ｐａｋ Ｃ１８，溶出液：メタノール／水＝８：２）
ＯＤＳカラム（ＹＭＣ社製，ＹＭＣ Ｐａｃｋ Ｐｒｏ Ｃ１８，溶出液：アセトニトリル／水＝７５：２５，流速：３ｍＬ／分，検出光：ＵＶ２１０ｎｍ）
【００５２】
得られた２種の化合物を高分解能エレクトロスプレー質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ）とＮＭＲにより分析し、化学構造を決定した。各化学構造式と分析値、物性などを以下に示す。なお、以下では、各化合物をそれぞれアンフィリオニン−１とイリオモテオリド−８ａという。
【００５３】
アンフィリオニン−１
【００５４】
【化３】
【００５５】
マススペクトル：m/z 517（[M+Na]+）
ＮＭＲスペクトル：
1H-NMR（600MHz，CDCl3）δ0.90（3H，d，6.9 Hz，H3-28），1.19（3H，d，6.6 Hz，H3-26），1.19（3H，d，7.4 Hz，H3-25），1.25（1H，m，H-14），1.30（1H，m，H-3），1.32（1H，m，H-14），1.33（1H，m，H-13），1.46（1H，m，H-13），1.52（1H，m，H-3），1.67（3H，brs，H3-27），1.67（1H，m，H-18），1.70（1H，m，H-12），1.73（3H，brd，8.1 Hz，H3-24），1.74（1H，m，H-18），1.88（1H，m，H-3），1.90（2H，m，H2-10），1.98（1H，m，H-3），2.58（1H，m，H-2），2.76（1H，br，15-OH），2.88（1H，m，H-4），3.62（1H，brs，17-OH），3.67（1H，m，H-11），3.69（1H，br，17-OH），3.84（1H，m，H-15），4.18（1H，m，H-17），4.46（1H，brd，6.4 Hz，H-16），4.50（1H，m，H-19），4.61（1H，m，H-9），5.22（1H，brd，9.8 Hz，H-5），5.57（1H，dd，6.4，15.3 Hz，H-20），5.65（1H，d，3.8，15.5 Hz，H-8），5.70（1H，dq，14.5，8.1 Hz，H-23），6.01（1H，brdd，11.6，14.5 Hz，H-22），6.18（1H，d，15.5 Hz，H-7），6.19（1H，dd，11.6，15.3 Hz，H-21）
13C-NMRスペクトル（150MHz，CDCl3）δ12.7（CH3，C-27），13.5（CH3，C-28），18.1（CH3，C-24），19.7（CH3，C-25），21.5（CH3，C-26），29.6（CH，C-4），29.7（CH2，C-13），31.3（CH2，C-14），36.4（CH，C-2），37.0（CH，C-12），39.1（CH2，H-18），39.5（CH2，C-3），40.4（CH2，C-10），68.9（CH，C-9），70.1（CH，C-19），70.2（CH，C-11），70.4（CH，C-17），71.5（CH，C-15），76.8（CH，C-16），128.5（CH，C-8），130.5（CH，C-23），130.6（CH，C-22），131.1（CH，C-21），131.8（CH，C-20），132.4（CH，C-7），135.9（CH，C-5），142.0（C，C-6），184.5（C，C-1）
形状：無色油状
溶解性：アルコール、クロロホルム、酢酸エチル、アセトンに可溶、ヘキサン、水に不溶。
【００５６】
イリオモテオリド−８ａ
【００５７】
【化４】
【００５８】
マススペクトル：m/z 773（[M+Na]+）
ＮＭＲスペクトル：
1H-NMR（500MHz，CD3OD）δ0.89（3H，d，6.9 Hz，H3-40），0.94（3H，d，6.9 Hz，H3-39），1.05（3H，d，7.1 Hz，H3-41），1.08（3H，d，6.7Hz，H3-38），1.13（3H，d，6.7Hz，H3-42），1.20（2H，m，H-10 and H-30），1.26（2H，m H2-7），1.28（3H，d，5.2 Hz，H3-37），1.43（2H，m，H-11 and H-32），1.44（1H，m，H-32），1.46（1H，m，H-11），1.48（1H，m，H-12），1.49（2H，m，H-30 and H-33），1.53（1H，m，H-12），1.54（1H，m，H-33），1.55（1H，m，H-25），1.56（1H，m，H-10），1.61（2H，m，H-19 and H-20），1.67（1H，m，H-9），1.70（1H，m，H-15），1.72（1H，m，H-26），1.74（1H，m，H-29），1.78（1H，m，H-25），1.84（1H，m，H-17），1.90（1H，brdd，5.5，14.0 Hz，H-15），2.01（2H，m，H-19 and H-20），2.07（1H，m，H-29），2.12（1H，dd，11.1，14.1 Hz，H-12），2.33（1H，m，H-6），2.54（1H，dd，3.5，14.1 Hz，H-2），2.65（1H，dd，2.3，5.9 Hz，H-35），2.70（1H，m，H-3），2.78（1H，dq，9.3，7.1 Hz，H-22），2.94（1H，dq，2.3，5.2 Hz，H-36），3.33（1H，m，H-34），3.65（1H，m，H-13），3.66（1H，m，H-8），3.75（1H，m，H-31），3.86（1H，m，H-18），3.91（1H，m，H-21），3.96（1H，m，H-14），3.97（1H，m，H-27），4.08（1H，brd，5.9 Hz，H-28），4.11（1H，m，H-16），5.09（1H，dd，1.5，10.3 Hz，H-24），5.33（1H，dd，7.1，15.5 Hz，H-5），5.40（1H，dd，7.1，15.5 Hz，H-4）
13C-NMR（125MHz，CD3OD）δ15.2（CH3，C-40），15.8（CH3，C-40），17.8（CH3，C-42），18.1（CH3，C-37），22.0(CH3，C-38），24.0（CH3，C-37），27.0（CH2，C-32），27.5（CH2，C-11），30.5（CH2，C-20），32.26（CH2，C-10），32.32（CH2，C-19），33.6（CH2，C-25），34.1（CH，C-6），35.0（CH2，C-30），35.5（CH2，C-33），35.6（CH，C-3），35.9（CH2，C-12），38.8（CH2，C-7），39.7（CH，C-26），40.0（CH2，C-29），40.3（CH，C-9），42.2（CH2，C-15），43.7（CH2，C-17），44.8（CH2，C-2），50.3（CH，C-22），54.1（CH，C-36），64.8（CH，C-35），72.4（CH，C-8），73.2（CH，C-34），77.3（CH，C-16），77.5（CH，C-14），78.1（CH，C-24），78.2（CH，C-28），78.6（CH，C-18），82.7（CH，C-21），84.5（CH，C-27），88.1（CH，C-13），89.2（CH，C-31），135.2（CH，C-4），138.0（CH，C-5），173.7（C，C-1），211.8（C，C-23）
形状：無色油状
溶解性：アルコール、クロロホルム、酢酸エチル、アセトンに可溶、ヘキサン、水に不溶。
【００５９】
試験例１ 抗腫瘍活性試験
１０％仔牛血清（Ｍｏｒｅｇａｔｅ社）と１０％牛胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ社)を含むＲＰＭＩ−１６４０培地(Ｓｉｇｍａ社)に、ヒトＢｕｒｋｉｔｔ’ｓリンパ腫細胞株（ＤＧ−７５，ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＲＬ−２６７５）を１×１０5／ｍＬとなるように懸濁した。この細胞懸濁液（５０μＬ）を９６ウェルマイクロプレートに添加した後、上記培養液（４９μＬ）を添加して全量を９９μＬとした。別途、本発明に係るポリケチド化合物であるアンフィリオニン−１もしくはイリオモテオリド−８ａ、または５−ＦＵ（Ｗａｋｏ社）をジメチルスルホキシドに溶解して０．００１〜１０μｇ／ｍＬ溶液とし、各ウェルに１μＬ添加した。次いで、二酸化炭素濃度：５％、３７℃の条件で７２時間培養した。
【００６０】
培養後、各ウェルにＷａｋｏ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８（Ｗａｋｏ社）を１０μＬ添加し、二酸化炭素インキュベータ内で呈色反応を３時間行った。マイクロプレートリーダーを用いて波長４５０ｎｍ（参照波長６２０ｎｍ）の吸光度を測定した。測定値からリンパ腫細胞の増殖阻害率を次式より算出し、増殖阻害率が５０％となる培養液中の化合物濃度をＩＣ50値として算出した。
増殖阻害率（％）＝［１−（サンプル値／ブランク値）］×１００
【００６１】
結果を表２に示す。
【００６２】
【表２】
【００６３】
上記結果のとおり、本発明に係る化合物は、既存の抗腫瘍剤である５−ＦＵと同等かそれ以上の抗腫瘍活性を示す優れた抗がん剤であることが実証された。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表されるポリケチド化合物またはその塩。
【化１】
［式中、Ｒ1は水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ6-12アリール−Ｃ1-2アルキル基またはフタリジル基を示し；Ｒ2〜Ｒ5はそれぞれ独立して水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ2-7アルカノイル基、Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、または２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基を示す］
【請求項２】
下記一般式（２）で表されるポリケチド化合物。
【化２】
［式中、Ｒ6〜Ｒ9はそれぞれ独立して水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ2-7アルカノイル基、Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、または２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基を示す］
【請求項３】
請求項１または２に記載のポリケチド化合物を有効成分とすることを特徴とする抗腫瘍剤。
【請求項１】
下記一般式（１）で表されるポリケチド化合物またはその塩。
【化１】
［式中、Ｒ1は水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ6-12アリール−Ｃ1-2アルキル基またはフタリジル基を示し；Ｒ2〜Ｒ5はそれぞれ独立して水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ2-7アルカノイル基、Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、または２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基を示す］
【請求項２】
下記一般式（２）で表されるポリケチド化合物。
【化２】
［式中、Ｒ6〜Ｒ9はそれぞれ独立して水素原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ2-7アルカノイル基、Ｃ1-7アルカノイルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ−カルボニルオキシ−Ｃ1-2アルキル基、または２−オキソ−１，３−ジオキソレン−４−イルメチル基を示す］
【請求項３】
請求項１または２に記載のポリケチド化合物を有効成分とすることを特徴とする抗腫瘍剤。
【公開番号】特開２０１１−１６７６２（Ｐ２０１１−１６７６２Ａ）
【公開日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−１６２９７７（Ｐ２００９−１６２９７７）
【出願日】平成２１年７月９日（２００９．７．９）
【出願人】（５０４１７４１８０）国立大学法人高知大学 (174)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年７月９日（２００９．７．９）
【出願人】（５０４１７４１８０）国立大学法人高知大学 (174)
【Ｆターム（参考）】
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