改変された性質を有するアルファ−アミラーゼ
親ＡｍｙＳ様アルファ−アミラーゼのアミノ酸配列に対し相同性が少なくとも９５％のアミノ酸配列を有するとともに、参照アルファ−アミラーゼの位置２４２に対応するアミノ酸位置に置換を有する、親ＡｍｙＳ様アルファ−アミラーゼに対し改変された特性を備える、アルファ−アミラーゼ変異体を含む組成物に関する。この組成物にはフィターゼ等の他の酵素も含まれる。また、この組成物を使用する方法、及びこの組成物によるキットに関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
親ＡｍｙＳ様アルファ−アミラーゼのアミノ酸配列に対し相同性が少なくとも９５％のアミノ酸配列を有し、参照アルファ−アミラーゼの位置２４２に対応するアミノ酸位置に置換を有し、さらにそのアミノ酸配列中に、以下の内の１以上を有するアルファ−アミラーゼ変異体。
ａ） 次に挙げる位置における１以上の置換：アミノ酸位置３４９のシステイン、アミノ酸位置４２８ のシステイン、アミノ酸位置９７のグルタミン酸、アミノ酸位置９７のアルギニン、アミノ酸位置３１９のグルタミン酸、アミノ酸位置３１９のアルギニン、アミノ酸位置３５８のグルタミン酸、アミノ酸位置３５８のアルギニン、アミノ酸位置４４３のグルタミン酸、アミノ酸位置４４３のアルギニン；
ｂ） アミノ酸位置９７, ３１９, ３４９, ３５８, ４２８, または４４３に対応するアミノ酸位置の１以上におけるその他の配列修飾；
ｃ） アミノ酸位置Ｆ１７８，Ｒ１７９，Ｇ１８０，Ｉ１８１，Ｇ１８２，またはＫ１８３，またはこれらのペアの１以上における欠失；
ｄ） アミノ酸位置７８，１７９，１８０，１８１，１８２，または１８３の内の１以上におけるその他の配列修飾；
ｅ） Ｎ１９３Ｆ置換またはＶ４１６Ｇ置換、または両置換；
ｆ） アミノ酸位置１９３または ４１６、または両者におけるその他の配列修飾；
ｇ） 修飾されたアルファ−アミラーゼ変異体の一部に存在するプロリン残基の内の１以上におけるアラニン、グリシン、セリン、スレオニン、バリンまたはロイシン残基による置換；
ｈ） 修飾されたアルファ−アミラーゼ変異体の一部に存在するプロリン残基の内の１以上における別の天然由来アミノ酸残基による置換；
ｉ） 親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼ中に存在するシステイン残基の内の１以上におけるセリン、アラニン、スレオニン、グリシン、バリンまたはロイシン残基による置換；
ｊ） 親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼ中に存在するシステイン残基の内の１以上における別の天然由来アミノ酸残基による置換；
ｋ） ここで、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を番号付与の参照アミラーゼとして、次の突然変異Ｍ１５Ｔ，Ｌ， Ｍ１５Ｘ，Ｖ１２８Ｅ，Ｖ１２８Ｘ，Ｈ１３３Ｙ，Ｈ１３３Ｘ，Ｎ１８８Ｓ，Ｔ，Ｐ，Ｎ１８８Ｘ，Ｍ１９７Ｔ，Ｌ，Ｍ１９７Ｘ，Ａ２０９Ｖ，Ａ２０９Ｘ，Ｍ１９７Ｔ／Ｗ１３８Ｆ，Ｍ１９７Ｔ／１３８Ｙ，Ｍ１５Ｔ／Ｈ１３３Ｙ／Ｎ１８８Ｓ，Ｍ１５Ｎ１２８Ｅ／Ｈ１３３Ｙ／Ｎ１８８Ｓ，Ｅ１１９Ｃ／Ｓ１３０Ｃ，Ｄ１２４Ｃ／Ｒ１２７Ｃ，Ｈ１３３Ｙ／Ｔ１４９Ｉ，Ｇ４７５Ｒ，Ｈ１３３Ｙ／Ｓ１８７Ｄ，または Ｈ１３３Ｙ／Ａ２０９Ｖ；
ｌ） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を参照アミラーゼとして、位置Ｍ１５，Ｖ１２８，Ａ１１１，Ｈ１３３，Ｗ１３８，Ｔ１４９，Ｍ１９７，Ｎ１８８，Ａ２０９，Ａ２１０，Ｈ４０５，Ｔ４１２の１以上におけるその他の修飾；
ｍ） 親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を含み、１以上のシステイン残基（Ｃ３６３）の欠失または置換、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２が参照アミラーゼのとき、位置Ｍ８，Ｍ９，Ｍ９６，Ｍ２００，Ｍ２０６，Ｍ２８４，Ｍ３０７，Ｍ３１１，Ｍ３１６、及び Ｍ４３８にあるメチオニン残基の欠失または置換；
ｎ） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１または２が参照アミラーゼのとき、Ｐ１７，Ｄ１９，Ｔ２１，Ｎ２８，Ｓ５１，Ｇ７２，Ｖ７４，Ａ８２，Ｑ８６，Ｑ８９，Ａ９３，Ｇ９５，Ｑ９７，Ｗｌ１５，Ｄ１１７，Ｐ１２３，Ｓ１２４，Ｄ１２５，Ｎ１２７，Ｉ１３０，Ｇ１３２，Ｑ１３５，Ｐ１４５，Ｇ１４６，Ｇ１４８，Ｓ１５３，Ｙ１５９，Ｗ１６６，Ｓ１６９，Ｋ１７１，Ｒ１７９，Ｇ１８０，Ｉ１８１，Ｇ１８２，Ｋ１８３，Ｗｌ８７，Ｐ２０９，Ｎ２２４，Ｓ２４２，Ｐ２４５，Ｇ２５６，Ｄ２６９，Ｎ２７１，Ｔ２７８，Ｎ２８１，Ｇ３０２，Ａ３０４，Ｒ３０８，Ｔ３２１，Ｑ３５８，Ｐ３７８，Ｓ３８２，Ｋ３８３，Ｔ３９８，Ｈ４０５，Ｔ４１７，Ｅ４１８，Ｐ４２０，Ｇ４２１，Ｐ４３２，Ｗ４３７，Ｇ４４６，Ｇ４５４，Ｓ４５７，Ｔ４５９，Ｔ４６１，Ｓ４６４，Ｇ４７４、または Ｒ４８３に対応するアミノ酸残基の１以上における修飾；または
ｏ） 次のいずれかの置換の集合；ａ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３１９Ｅ，Ｑ３５８Ｅ，Ｑ４４３Ｅ； ｂ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３５８Ｅ，Ｑ４４３Ｒ； ｃ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３５８Ｅ； ｄ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ４４３Ｅ； ｅ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ４４３Ｒ； ｆ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３５８Ｒ； ｇ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ４４３Ｅ； ｈ）Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３５８Ｅ，Ｑ４４３Ｅ； またはｉ）Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３５８Ｒ，Ｑ４４３Ｅ。
【請求項２】
アルファ−アミラーゼ変異体が、Ｓ２４２Ａ，Ｓ２４２Ｄ，Ｓ２４２Ｅ，Ｓ２４２Ｆ，Ｓ２４２Ｇ，Ｓ２４２Ｈ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｍ，Ｓ２４２Ｎ，Ｓ２４２Ｑ，またはＳ２４２Ｔアルファ−アミラーゼ変異体である、請求項1に記載のアルファ−アミラーゼ変異体。
【請求項３】
検出可能なアルファ−アミラーゼ活性を備え、親ＡｍｙＳ様アルファ−アミラーゼと比較して、（ａ）正味電荷、（ｂ）基質特異性、（ｃ）基質分解性、（ｄ）基質結合性、（ｅ）熱安定性、（ｆ）１以上のｐＨ域における活性、（ｇ）１以上のｐＨ域における安定性、（ｈ）酸化環境下での安定性、（ｉ）Ｃａ２＋要求性、（ｊ）比活性度、（ｋ）触媒反応速度、（ｌ）触媒効率、（ｍ）フィチン酸塩存在下での活性、（ｎ）フィチン酸塩存在下での熱またはｐＨ安定性、（ｏ）液状化テストにおけるピーク粘度に対する影響力、（ｐ）液状化テストにおける最終粘度に対する影響力、（ｑ）キレート剤存在下での活性、（ｒ）キレート剤存在下での熱またはｐＨ安定性、（ｓ）デサイジングまたは洗浄プロセスでの有用性、または（ｔ）タンパク質発現系での発現量の内の１以上が改変されている、請求項１に記載のアルファ−アミラーゼ変異体。
【請求項４】
親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１,２,６,７,８,９,１０,１１,１２,１５,または１６のいずれかを含む、請求項１に記載のアルファ−アミラーゼ変異体。
【請求項５】
アミノ酸残基の番号付与に用いられる参照アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１または２である、請求項１に記載のアルファ−アミラーゼ変異体。
【請求項６】
アミノ酸配列が親ＡｍｙＳ-様アルファ−アミラーゼに対し少なくとも９８％の同一性を有する、請求項１に記載のアルファ−アミラーゼ変異体。
【請求項７】
単離されたポリヌクレオチドであって、
ａ）請求項１に記載のアルファ−アミラーゼ変異体のアミノ酸配列、及び
ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３，４，１６，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，または３０のいずれかをコードするコード配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項９】
請求項７または８に記載の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１０】
請求項７または８に記載の単離されたポリヌクレオチド、または請求項９に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
【請求項１１】
バシラス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂ.リケニホルミス（ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、Ｂ.レンタス（ｌｅｎｔｕｓ）、Ｂ.ブレビス(ｂｒｅｖｉｓ)、Ｂ.ステアロテルモフィラス（ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｂ.アルカロフィラス(ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ)、Ｂ.アミロリケファシンス(ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ)、Ｂ.コーギュランス(ｃｏａｇｕｌａｎｓ)、Ｂ.サーキュランス(ｃｉｒｃｕｌａｎｓ)、Ｂ.ロータス(ｌａｕｔｕｓ)、Ｂ.チューリンゲンシス(ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ)、スプレプトマイセス・リビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｖｉｄａｎｓ）、Ｓ.ムリヌス(ｍｕｒｉｎｕｓ）、大腸菌、またはシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種のいずれかである、請求項１０に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
ａ）請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体と、
ｂ）少なくとも１の追加の酵素とを含む組成物。
【請求項１３】
追加の酵素がフィターゼである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
アルファ−アミラーゼ変異体が、Ｓ２４２Ａ，Ｓ２４２Ｄ，Ｓ２４２Ｅ，Ｓ２４２Ｆ，Ｓ２４２Ｇ，Ｓ２４２Ｈ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｍ，Ｓ２４２Ｎ，Ｓ２４２Ｑ，またはＳ２４２Ｔアルファ−アミラーゼ変異体である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
アルファ−アミラーゼ変異体がさらに、参照アルファ−アミラーゼのアミノ酸位置９７，１７９，１８０，１９３，３１９，３４９，３５８，４１６，４２８，または４４３に対応する１以上のアミノ酸位置に配列修飾を有する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
アルファ−アミラーゼ変異体が次の位置の置換を１以上有する請求項１２に記載の組成物：位置３４９のシステイン、位置４２８のステイン、位置９７のグルタミン酸、位置９７のアルギニン、位置３１９のグルタミン酸、位置３１９のアルギニン、位置３５８のグルタミン酸、位置３５８のアルギニン、位置４４３のグルタミン酸、位置４４３のアルギニン。
【請求項１７】
アルファ−アミラーゼ変異体がＮ１９３置換またはＶ４１６置換、またはこの両置換を有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１８】
アルファ−アミラーゼ変異体がＮ１９３Ｆ置換またはＶ４１６Ｇ置換、またはこの両置換を有する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
アルファ−アミラーゼ変異体がアミノ酸位置１７９及び１８０に欠失を有する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２０】
アルファ−アミラーゼ変異体がＳＥＱ IＤ ＮＯ：２に対し少なくとも９５％の相同性を有し、ＳＥＱ IＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を含む参照アルファ−アミラーゼの位置番号に対応するアミノ酸位置２４２に置換を有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項２１】
親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１，２，６，７，８，９，１０，１１，１２，１５，または１６のいずれかを含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項２２】
アルファ−アミラーゼ変異体とフィターゼが、ＡＡＵ：ＦＴＵの比率が約１：１５から約１５：１となる量で存在する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２３】
アルファ−アミラーゼ変異体とフィターゼが、ＡＡＵ：ＦＴＵの比率が約１：４から約３：１となる量で存在する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２４】
フィターゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１の配列を有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２５】
澱粉スラリーを処理する方法であって、
ａ）澱粉スラリーに少なくとも１のフィターゼと、請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体の少なくとも１種類とを添加する工程であって、フィターゼとアルファ−アミラーゼとを同時またはほぼ同時に添加し、または任意の順序で別々に添加する工程と、
ｂ）フィターゼとアルファ−アミラーゼ変異体が活性化される条件下で澱粉スラリーをインキュベートする工程とを含む、澱粉スラリーを処理する方法。
【請求項２６】
アルファ−アミラーゼ変異体が親ＡｍｙＳ様アルファ−アミラーゼまたは参照アルファ−アミラーゼと比較して、（ａ）正味電荷、（ｂ）基質特異性、（ｃ）基質分解性、（ｄ）基質結合性、（ｅ）熱安定性、（ｆ）１以上のｐＨ域における活性、（ｇ）１以上のｐＨ域における安定性、（ｈ）酸化環境下での安定性、（ｉ）Ｃａ２＋要求性、（ｊ）比活性度、（ｋ）触媒反応速度、（ｌ）触媒効率、（ｍ）フィチン酸塩存在下での活性、（ｎ）フィチン酸塩存在下での熱またはｐＨ安定性、（ｏ）液状化テストにおけるピーク粘度に対する影響力、または（ｐ）液状化テストにおける最終粘度に対する影響力の内の1以上の性質が改変されている、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
参照アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１または２である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
アルファ−アミラーゼ変異体が、Ｓ２４２Ａ，Ｓ２４２Ｄ，Ｓ２４２Ｅ，Ｓ２４２Ｆ，Ｓ２４２Ｇ，Ｓ２４２Ｈ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｍ，Ｓ２４２Ｎ，Ｓ２４２Ｑ，またはＳ２４２Ｔアルファ−アミラーゼ変異体である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
アルファ−アミラーゼ変異体がさらに、参照アルファ−アミラーゼのアミノ酸位置９７，１７９，１８０，１９３，３１９，３４９，３５８，４１６，４２８，または４４３に対応する１以上のアミノ酸位置に配列修飾を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
アルファ−アミラーゼ変異体が次の位置の置換を１以上有する請求項２８に記載の方法：位置３４９のシステイン、位置４２８のステイン、位置９７のグルタミン酸、位置９７のアルギニン、位置３１９のグルタミン酸、位置３１９のアルギニン、位置３５８のグルタミン酸、位置３５８のアルギニン、位置４４３のグルタミン酸、位置４４３のアルギニン。
【請求項３１】
アルファ−アミラーゼ変異体がＮ１９３置換またはＶ４１６置換、またはこの両置換を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
アルファ−アミラーゼ変異体がＮ１９３Ｆ置換またはＶ４１６Ｇ置換、またはこの両置換を有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
アルファ−アミラーゼ変異体がアミノ酸位置１７９及び１８０に欠失を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１，２，６，７，８，９，１０，１１，１２，１５，または１６のいずれかを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３５】
アルファ−アミラーゼ変異体を添加する前にフィターゼを添加する、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
フィターゼを添加した後、アルファ−アミラーゼ変異体を添加する前に、澱粉スラリーを予備インキュベートする、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
フィターゼの使用により、澱粉スラリーをフィターゼと接触させない方法と比較して、アルファ−アミラーゼ変異体の熱安定性が増加する、請求項２５に記載の方法。
【請求項３８】
澱粉スラリーに添加される前のフィターゼ及びアルファ−アミラーゼ変異体が単一のブレンド物中に含まれている、請求項２５に記載の方法。
【請求項３９】
フィターゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を有する請求項２５に記載の方法。
【請求項４０】
粉砕された穀物を含む澱粉含有スラリーから発酵性基質を製造する方法であって、
ａ）澱粉含有スラリーと、この澱粉から発酵性基質を生成させるために十分な量の少なくとも１のフィターゼ、及び少なくとも１の請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体を接触させる工程であって、フィターゼとアルファ−アミラーゼを同時、ほぼ同時または任意の順序で別々に接触させる工程と、
ｂ）フィターゼとアルファ−アミラーゼ変異体が活性化される条件下で、発酵性基質を生成させるために必要な時間澱粉スラリーをインキュベートする工程であって、アミラーゼより先にフィターゼを接触させる場合、アミラーゼとスラリーとを接触させる前に、澱粉スラリーを糊化温度より約０から３０℃低い温度でインキュベートし、次いで澱粉を加水分解するために必要な時間、温度を糊化温度以上に保つ工程とを含む方法。
【請求項４１】
参照アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１または２であり、アルファ−アミラーゼ変異体が、Ｓ２４２Ａ，Ｓ２４２Ｄ，Ｓ２４２Ｅ，Ｓ２４２Ｆ，Ｓ２４２Ｇ，Ｓ２４２Ｈ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｍ，Ｓ２４２Ｎ，Ｓ２４２Ｑ，またはＳ２４２Ｔアルファ−アミラーゼ変異体である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
澱粉含有材料または澱粉を処理する方法であって、澱粉含有材料または澱粉と、請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体を少なくとも１種類含む組成物とを、アルファ−アミラーゼ変異体が検出可能な活性を生じる条件下で接触させる工程を含み、澱粉含有材料または澱粉の少なくとも一部がアルファ−アミラーゼ変異体によって分解される方法。
【請求項４３】
参照アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１または２であり、親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１，２，６，７，８，９，１０，１１，１２，１５，または１６のいずれかを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
アルファ−アミラーゼ変異体が、Ｓ２４２Ａ，Ｓ２４２Ｄ，Ｓ２４２Ｅ，Ｓ２４２Ｆ，Ｓ２４２Ｇ，Ｓ２４２Ｈ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｍ，Ｓ２４２Ｎ，Ｓ２４２Ｑ，またはＳ２４２Ｔアルファ−アミラーゼ変異体である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
さらに、フィターゼ、セルラーゼ、プロテアーゼ、アミノペプチダーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングルカノトランスファラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、α−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、インバターゼ、イソメラーゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、ペクチナーゼ、ペプチドグルタミナーゼ、ペルオキシダーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、ヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、プルラナーゼ、イソアミラーゼ、カラギナーゼ、またはこれらの組み合わせから選択される、少なくとも１の別の酵素を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
澱粉分解、液状化、発酵、アルコール製造、甘味料製造、発酵性基質製造、洗浄、洗濯、製パン、または汚染除去プロセスの一部である、請求項４２から４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
ｉ）請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体の少なくとも１種と、
ｉｉ）少なくとも１の追加の酵素とを１つの単位とする１以上のパッケージから成るキット。
【請求項４８】
さらに、前記アルファ−アミラーゼ変異体を使用するための取扱説明書と、澱粉分子の酵素による切断を含むプロセスにおいて有用な少なくとも１の追加の酵素とが含まれる請求項４７に記載のキット。
【請求項４９】
追加の酵素がフィターゼである、請求項４７に記載のキット。
【請求項１】
親ＡｍｙＳ様アルファ−アミラーゼのアミノ酸配列に対し相同性が少なくとも９５％のアミノ酸配列を有し、参照アルファ−アミラーゼの位置２４２に対応するアミノ酸位置に置換を有し、さらにそのアミノ酸配列中に、以下の内の１以上を有するアルファ−アミラーゼ変異体。
ａ） 次に挙げる位置における１以上の置換：アミノ酸位置３４９のシステイン、アミノ酸位置４２８ のシステイン、アミノ酸位置９７のグルタミン酸、アミノ酸位置９７のアルギニン、アミノ酸位置３１９のグルタミン酸、アミノ酸位置３１９のアルギニン、アミノ酸位置３５８のグルタミン酸、アミノ酸位置３５８のアルギニン、アミノ酸位置４４３のグルタミン酸、アミノ酸位置４４３のアルギニン；
ｂ） アミノ酸位置９７, ３１９, ３４９, ３５８, ４２８, または４４３に対応するアミノ酸位置の１以上におけるその他の配列修飾；
ｃ） アミノ酸位置Ｆ１７８，Ｒ１７９，Ｇ１８０，Ｉ１８１，Ｇ１８２，またはＫ１８３，またはこれらのペアの１以上における欠失；
ｄ） アミノ酸位置７８，１７９，１８０，１８１，１８２，または１８３の内の１以上におけるその他の配列修飾；
ｅ） Ｎ１９３Ｆ置換またはＶ４１６Ｇ置換、または両置換；
ｆ） アミノ酸位置１９３または ４１６、または両者におけるその他の配列修飾；
ｇ） 修飾されたアルファ−アミラーゼ変異体の一部に存在するプロリン残基の内の１以上におけるアラニン、グリシン、セリン、スレオニン、バリンまたはロイシン残基による置換；
ｈ） 修飾されたアルファ−アミラーゼ変異体の一部に存在するプロリン残基の内の１以上における別の天然由来アミノ酸残基による置換；
ｉ） 親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼ中に存在するシステイン残基の内の１以上におけるセリン、アラニン、スレオニン、グリシン、バリンまたはロイシン残基による置換；
ｊ） 親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼ中に存在するシステイン残基の内の１以上における別の天然由来アミノ酸残基による置換；
ｋ） ここで、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を番号付与の参照アミラーゼとして、次の突然変異Ｍ１５Ｔ，Ｌ， Ｍ１５Ｘ，Ｖ１２８Ｅ，Ｖ１２８Ｘ，Ｈ１３３Ｙ，Ｈ１３３Ｘ，Ｎ１８８Ｓ，Ｔ，Ｐ，Ｎ１８８Ｘ，Ｍ１９７Ｔ，Ｌ，Ｍ１９７Ｘ，Ａ２０９Ｖ，Ａ２０９Ｘ，Ｍ１９７Ｔ／Ｗ１３８Ｆ，Ｍ１９７Ｔ／１３８Ｙ，Ｍ１５Ｔ／Ｈ１３３Ｙ／Ｎ１８８Ｓ，Ｍ１５Ｎ１２８Ｅ／Ｈ１３３Ｙ／Ｎ１８８Ｓ，Ｅ１１９Ｃ／Ｓ１３０Ｃ，Ｄ１２４Ｃ／Ｒ１２７Ｃ，Ｈ１３３Ｙ／Ｔ１４９Ｉ，Ｇ４７５Ｒ，Ｈ１３３Ｙ／Ｓ１８７Ｄ，または Ｈ１３３Ｙ／Ａ２０９Ｖ；
ｌ） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を参照アミラーゼとして、位置Ｍ１５，Ｖ１２８，Ａ１１１，Ｈ１３３，Ｗ１３８，Ｔ１４９，Ｍ１９７，Ｎ１８８，Ａ２０９，Ａ２１０，Ｈ４０５，Ｔ４１２の１以上におけるその他の修飾；
ｍ） 親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７を含み、１以上のシステイン残基（Ｃ３６３）の欠失または置換、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２が参照アミラーゼのとき、位置Ｍ８，Ｍ９，Ｍ９６，Ｍ２００，Ｍ２０６，Ｍ２８４，Ｍ３０７，Ｍ３１１，Ｍ３１６、及び Ｍ４３８にあるメチオニン残基の欠失または置換；
ｎ） ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１または２が参照アミラーゼのとき、Ｐ１７，Ｄ１９，Ｔ２１，Ｎ２８，Ｓ５１，Ｇ７２，Ｖ７４，Ａ８２，Ｑ８６，Ｑ８９，Ａ９３，Ｇ９５，Ｑ９７，Ｗｌ１５，Ｄ１１７，Ｐ１２３，Ｓ１２４，Ｄ１２５，Ｎ１２７，Ｉ１３０，Ｇ１３２，Ｑ１３５，Ｐ１４５，Ｇ１４６，Ｇ１４８，Ｓ１５３，Ｙ１５９，Ｗ１６６，Ｓ１６９，Ｋ１７１，Ｒ１７９，Ｇ１８０，Ｉ１８１，Ｇ１８２，Ｋ１８３，Ｗｌ８７，Ｐ２０９，Ｎ２２４，Ｓ２４２，Ｐ２４５，Ｇ２５６，Ｄ２６９，Ｎ２７１，Ｔ２７８，Ｎ２８１，Ｇ３０２，Ａ３０４，Ｒ３０８，Ｔ３２１，Ｑ３５８，Ｐ３７８，Ｓ３８２，Ｋ３８３，Ｔ３９８，Ｈ４０５，Ｔ４１７，Ｅ４１８，Ｐ４２０，Ｇ４２１，Ｐ４３２，Ｗ４３７，Ｇ４４６，Ｇ４５４，Ｓ４５７，Ｔ４５９，Ｔ４６１，Ｓ４６４，Ｇ４７４、または Ｒ４８３に対応するアミノ酸残基の１以上における修飾；または
ｏ） 次のいずれかの置換の集合；ａ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３１９Ｅ，Ｑ３５８Ｅ，Ｑ４４３Ｅ； ｂ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３５８Ｅ，Ｑ４４３Ｒ； ｃ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３５８Ｅ； ｄ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ４４３Ｅ； ｅ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３１９Ｒ，Ｑ４４３Ｒ； ｆ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ３５８Ｒ； ｇ）Ｑ９７Ｅ，Ｑ４４３Ｅ； ｈ）Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３５８Ｅ，Ｑ４４３Ｅ； またはｉ）Ｑ３１９Ｒ，Ｑ３５８Ｒ，Ｑ４４３Ｅ。
【請求項２】
アルファ−アミラーゼ変異体が、Ｓ２４２Ａ，Ｓ２４２Ｄ，Ｓ２４２Ｅ，Ｓ２４２Ｆ，Ｓ２４２Ｇ，Ｓ２４２Ｈ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｍ，Ｓ２４２Ｎ，Ｓ２４２Ｑ，またはＳ２４２Ｔアルファ−アミラーゼ変異体である、請求項1に記載のアルファ−アミラーゼ変異体。
【請求項３】
検出可能なアルファ−アミラーゼ活性を備え、親ＡｍｙＳ様アルファ−アミラーゼと比較して、（ａ）正味電荷、（ｂ）基質特異性、（ｃ）基質分解性、（ｄ）基質結合性、（ｅ）熱安定性、（ｆ）１以上のｐＨ域における活性、（ｇ）１以上のｐＨ域における安定性、（ｈ）酸化環境下での安定性、（ｉ）Ｃａ２＋要求性、（ｊ）比活性度、（ｋ）触媒反応速度、（ｌ）触媒効率、（ｍ）フィチン酸塩存在下での活性、（ｎ）フィチン酸塩存在下での熱またはｐＨ安定性、（ｏ）液状化テストにおけるピーク粘度に対する影響力、（ｐ）液状化テストにおける最終粘度に対する影響力、（ｑ）キレート剤存在下での活性、（ｒ）キレート剤存在下での熱またはｐＨ安定性、（ｓ）デサイジングまたは洗浄プロセスでの有用性、または（ｔ）タンパク質発現系での発現量の内の１以上が改変されている、請求項１に記載のアルファ−アミラーゼ変異体。
【請求項４】
親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１,２,６,７,８,９,１０,１１,１２,１５,または１６のいずれかを含む、請求項１に記載のアルファ−アミラーゼ変異体。
【請求項５】
アミノ酸残基の番号付与に用いられる参照アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１または２である、請求項１に記載のアルファ−アミラーゼ変異体。
【請求項６】
アミノ酸配列が親ＡｍｙＳ-様アルファ−アミラーゼに対し少なくとも９８％の同一性を有する、請求項１に記載のアルファ−アミラーゼ変異体。
【請求項７】
単離されたポリヌクレオチドであって、
ａ）請求項１に記載のアルファ−アミラーゼ変異体のアミノ酸配列、及び
ｂ）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３，４，１６，２２，２３，２４，２５，２６，２７，２８，２９，または３０のいずれかをコードするコード配列を含むポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項９】
請求項７または８に記載の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項１０】
請求項７または８に記載の単離されたポリヌクレオチド、または請求項９に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
【請求項１１】
バシラス・スブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｂ.リケニホルミス（ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、Ｂ.レンタス（ｌｅｎｔｕｓ）、Ｂ.ブレビス(ｂｒｅｖｉｓ)、Ｂ.ステアロテルモフィラス（ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｂ.アルカロフィラス(ａｌｋａｌｏｐｈｉｌｕｓ)、Ｂ.アミロリケファシンス(ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ)、Ｂ.コーギュランス(ｃｏａｇｕｌａｎｓ)、Ｂ.サーキュランス(ｃｉｒｃｕｌａｎｓ)、Ｂ.ロータス(ｌａｕｔｕｓ)、Ｂ.チューリンゲンシス(ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ)、スプレプトマイセス・リビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌｉｖｉｄａｎｓ）、Ｓ.ムリヌス(ｍｕｒｉｎｕｓ）、大腸菌、またはシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種のいずれかである、請求項１０に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
ａ）請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体と、
ｂ）少なくとも１の追加の酵素とを含む組成物。
【請求項１３】
追加の酵素がフィターゼである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
アルファ−アミラーゼ変異体が、Ｓ２４２Ａ，Ｓ２４２Ｄ，Ｓ２４２Ｅ，Ｓ２４２Ｆ，Ｓ２４２Ｇ，Ｓ２４２Ｈ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｍ，Ｓ２４２Ｎ，Ｓ２４２Ｑ，またはＳ２４２Ｔアルファ−アミラーゼ変異体である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
アルファ−アミラーゼ変異体がさらに、参照アルファ−アミラーゼのアミノ酸位置９７，１７９，１８０，１９３，３１９，３４９，３５８，４１６，４２８，または４４３に対応する１以上のアミノ酸位置に配列修飾を有する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
アルファ−アミラーゼ変異体が次の位置の置換を１以上有する請求項１２に記載の組成物：位置３４９のシステイン、位置４２８のステイン、位置９７のグルタミン酸、位置９７のアルギニン、位置３１９のグルタミン酸、位置３１９のアルギニン、位置３５８のグルタミン酸、位置３５８のアルギニン、位置４４３のグルタミン酸、位置４４３のアルギニン。
【請求項１７】
アルファ−アミラーゼ変異体がＮ１９３置換またはＶ４１６置換、またはこの両置換を有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１８】
アルファ−アミラーゼ変異体がＮ１９３Ｆ置換またはＶ４１６Ｇ置換、またはこの両置換を有する、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
アルファ−アミラーゼ変異体がアミノ酸位置１７９及び１８０に欠失を有する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項２０】
アルファ−アミラーゼ変異体がＳＥＱ IＤ ＮＯ：２に対し少なくとも９５％の相同性を有し、ＳＥＱ IＤ ＮＯ：１のアミノ酸配列を含む参照アルファ−アミラーゼの位置番号に対応するアミノ酸位置２４２に置換を有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項２１】
親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１，２，６，７，８，９，１０，１１，１２，１５，または１６のいずれかを含む、請求項１２に記載の組成物。
【請求項２２】
アルファ−アミラーゼ変異体とフィターゼが、ＡＡＵ：ＦＴＵの比率が約１：１５から約１５：１となる量で存在する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２３】
アルファ−アミラーゼ変異体とフィターゼが、ＡＡＵ：ＦＴＵの比率が約１：４から約３：１となる量で存在する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２４】
フィターゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１の配列を有する、請求項１３に記載の組成物。
【請求項２５】
澱粉スラリーを処理する方法であって、
ａ）澱粉スラリーに少なくとも１のフィターゼと、請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体の少なくとも１種類とを添加する工程であって、フィターゼとアルファ−アミラーゼとを同時またはほぼ同時に添加し、または任意の順序で別々に添加する工程と、
ｂ）フィターゼとアルファ−アミラーゼ変異体が活性化される条件下で澱粉スラリーをインキュベートする工程とを含む、澱粉スラリーを処理する方法。
【請求項２６】
アルファ−アミラーゼ変異体が親ＡｍｙＳ様アルファ−アミラーゼまたは参照アルファ−アミラーゼと比較して、（ａ）正味電荷、（ｂ）基質特異性、（ｃ）基質分解性、（ｄ）基質結合性、（ｅ）熱安定性、（ｆ）１以上のｐＨ域における活性、（ｇ）１以上のｐＨ域における安定性、（ｈ）酸化環境下での安定性、（ｉ）Ｃａ２＋要求性、（ｊ）比活性度、（ｋ）触媒反応速度、（ｌ）触媒効率、（ｍ）フィチン酸塩存在下での活性、（ｎ）フィチン酸塩存在下での熱またはｐＨ安定性、（ｏ）液状化テストにおけるピーク粘度に対する影響力、または（ｐ）液状化テストにおける最終粘度に対する影響力の内の1以上の性質が改変されている、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
参照アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１または２である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
アルファ−アミラーゼ変異体が、Ｓ２４２Ａ，Ｓ２４２Ｄ，Ｓ２４２Ｅ，Ｓ２４２Ｆ，Ｓ２４２Ｇ，Ｓ２４２Ｈ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｍ，Ｓ２４２Ｎ，Ｓ２４２Ｑ，またはＳ２４２Ｔアルファ−アミラーゼ変異体である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
アルファ−アミラーゼ変異体がさらに、参照アルファ−アミラーゼのアミノ酸位置９７，１７９，１８０，１９３，３１９，３４９，３５８，４１６，４２８，または４４３に対応する１以上のアミノ酸位置に配列修飾を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
アルファ−アミラーゼ変異体が次の位置の置換を１以上有する請求項２８に記載の方法：位置３４９のシステイン、位置４２８のステイン、位置９７のグルタミン酸、位置９７のアルギニン、位置３１９のグルタミン酸、位置３１９のアルギニン、位置３５８のグルタミン酸、位置３５８のアルギニン、位置４４３のグルタミン酸、位置４４３のアルギニン。
【請求項３１】
アルファ−アミラーゼ変異体がＮ１９３置換またはＶ４１６置換、またはこの両置換を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
アルファ−アミラーゼ変異体がＮ１９３Ｆ置換またはＶ４１６Ｇ置換、またはこの両置換を有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
アルファ−アミラーゼ変異体がアミノ酸位置１７９及び１８０に欠失を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３４】
親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１，２，６，７，８，９，１０，１１，１２，１５，または１６のいずれかを含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項３５】
アルファ−アミラーゼ変異体を添加する前にフィターゼを添加する、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
フィターゼを添加した後、アルファ−アミラーゼ変異体を添加する前に、澱粉スラリーを予備インキュベートする、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
フィターゼの使用により、澱粉スラリーをフィターゼと接触させない方法と比較して、アルファ−アミラーゼ変異体の熱安定性が増加する、請求項２５に記載の方法。
【請求項３８】
澱粉スラリーに添加される前のフィターゼ及びアルファ−アミラーゼ変異体が単一のブレンド物中に含まれている、請求項２５に記載の方法。
【請求項３９】
フィターゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１のアミノ酸配列を有する請求項２５に記載の方法。
【請求項４０】
粉砕された穀物を含む澱粉含有スラリーから発酵性基質を製造する方法であって、
ａ）澱粉含有スラリーと、この澱粉から発酵性基質を生成させるために十分な量の少なくとも１のフィターゼ、及び少なくとも１の請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体を接触させる工程であって、フィターゼとアルファ−アミラーゼを同時、ほぼ同時または任意の順序で別々に接触させる工程と、
ｂ）フィターゼとアルファ−アミラーゼ変異体が活性化される条件下で、発酵性基質を生成させるために必要な時間澱粉スラリーをインキュベートする工程であって、アミラーゼより先にフィターゼを接触させる場合、アミラーゼとスラリーとを接触させる前に、澱粉スラリーを糊化温度より約０から３０℃低い温度でインキュベートし、次いで澱粉を加水分解するために必要な時間、温度を糊化温度以上に保つ工程とを含む方法。
【請求項４１】
参照アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１または２であり、アルファ−アミラーゼ変異体が、Ｓ２４２Ａ，Ｓ２４２Ｄ，Ｓ２４２Ｅ，Ｓ２４２Ｆ，Ｓ２４２Ｇ，Ｓ２４２Ｈ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｍ，Ｓ２４２Ｎ，Ｓ２４２Ｑ，またはＳ２４２Ｔアルファ−アミラーゼ変異体である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
澱粉含有材料または澱粉を処理する方法であって、澱粉含有材料または澱粉と、請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体を少なくとも１種類含む組成物とを、アルファ−アミラーゼ変異体が検出可能な活性を生じる条件下で接触させる工程を含み、澱粉含有材料または澱粉の少なくとも一部がアルファ−アミラーゼ変異体によって分解される方法。
【請求項４３】
参照アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１または２であり、親ＡｍｙＳ−様アルファ−アミラーゼがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ:１，２，６，７，８，９，１０，１１，１２，１５，または１６のいずれかを含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
アルファ−アミラーゼ変異体が、Ｓ２４２Ａ，Ｓ２４２Ｄ，Ｓ２４２Ｅ，Ｓ２４２Ｆ，Ｓ２４２Ｇ，Ｓ２４２Ｈ，Ｓ２４２Ｌ，Ｓ２４２Ｍ，Ｓ２４２Ｎ，Ｓ２４２Ｑ，またはＳ２４２Ｔアルファ−アミラーゼ変異体である、請求項４２に記載の方法。
【請求項４５】
さらに、フィターゼ、セルラーゼ、プロテアーゼ、アミノペプチダーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、カルボキシペプチダーゼ、カタラーゼ、キチナーゼ、クチナーゼ、シクロデキストリングルカノトランスファラーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、エステラーゼ、α−ガラクトシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、α−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、インバターゼ、イソメラーゼ、ラッカーゼ、リパーゼ、マンノシダーゼ、オキシダーゼ、ペクチナーゼ、ペプチドグルタミナーゼ、ペルオキシダーゼ、ポリフェノールオキシダーゼ、ヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼ、トランスグルタミナーゼ、キシラナーゼ、プルラナーゼ、イソアミラーゼ、カラギナーゼ、またはこれらの組み合わせから選択される、少なくとも１の別の酵素を含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４６】
澱粉分解、液状化、発酵、アルコール製造、甘味料製造、発酵性基質製造、洗浄、洗濯、製パン、または汚染除去プロセスの一部である、請求項４２から４５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
ｉ）請求項１から６のいずれか１項に記載のアルファ−アミラーゼ変異体の少なくとも１種と、
ｉｉ）少なくとも１の追加の酵素とを１つの単位とする１以上のパッケージから成るキット。
【請求項４８】
さらに、前記アルファ−アミラーゼ変異体を使用するための取扱説明書と、澱粉分子の酵素による切断を含むプロセスにおいて有用な少なくとも１の追加の酵素とが含まれる請求項４７に記載のキット。
【請求項４９】
追加の酵素がフィターゼである、請求項４７に記載のキット。
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図４Ｅ】
【図４Ｆ】
【図４Ｇ】
【図４Ｈ】
【図４Ｉ】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５Ａ】
【図２５Ｂ】
【図２６Ａ】
【図２６Ｂ】
【図２７Ａ】
【図２７Ｂ】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図４Ｅ】
【図４Ｆ】
【図４Ｇ】
【図４Ｈ】
【図４Ｉ】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５Ａ】
【図２５Ｂ】
【図２６Ａ】
【図２６Ｂ】
【図２７Ａ】
【図２７Ｂ】
【公表番号】特表２０１１−５０２５０８（Ｐ２０１１−５０２５０８Ａ）
【公表日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３３０８１（Ｐ２０１０−５３３０８１）
【出願日】平成２０年１１月３日（２００８．１１．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０１２４１３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６１３８１
【国際公開日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年１月２７日（２０１１．１．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１１月３日（２００８．１１．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０１２４１３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０６１３８１
【国際公開日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】
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