新形成細胞の細胞消滅死を誘導する方法
【課題】新形成細胞の細胞消滅死を誘導するための方法を提供する。
【解決手段】アポトーシスを誘導する量のメチロール含有化合物に新形成細胞を接触させる、新形成細胞の細胞消滅死を誘導する方法。この方法は、原発性癌および転移性癌の両者を治療するのに有用である。好ましい実施例は、約２ｇから約６０ｇの１日の全用量で、哺乳動物にメチロール移動剤を投与する工程を含み、この投与は少なくとも２つの投薬サイクルを含み、各投薬サイクルは、約１から８日間の注入期と、約１から１４日間の非投与期とを含む。別の実施例は、肝脈管を介して肝臓にメチロール移動剤溶液を直接投与することによって肝癌を治療するステップを含む。
【解決手段】アポトーシスを誘導する量のメチロール含有化合物に新形成細胞を接触させる、新形成細胞の細胞消滅死を誘導する方法。この方法は、原発性癌および転移性癌の両者を治療するのに有用である。好ましい実施例は、約２ｇから約６０ｇの１日の全用量で、哺乳動物にメチロール移動剤を投与する工程を含み、この投与は少なくとも２つの投薬サイクルを含み、各投薬サイクルは、約１から８日間の注入期と、約１から１４日間の非投与期とを含む。別の実施例は、肝脈管を介して肝臓にメチロール移動剤溶液を直接投与することによって肝癌を治療するステップを含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、癌の治療のためのタウロリジン（taurolidine）およびタウルルタム（taurultam）等のメチロール含有化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗菌性および抗毒素薬タウロリジン、および関連の製品であるタウルルタム等のメチロール移動剤は、特に腫瘍の治療で用いられる腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の毒性に対する効果を改善することが示された。さらに、メチロール移動剤の作用は、通常の細胞株の成長を著しく抑制しない点において、選択的であることが示された。
【０００３】
タウロリジンは、作用の部位で３つのメチロール基を移動させることによって作用し、タウルルタムは、非常に高い耐性の化合物であるタウリナミド（taurinamide）を遊離させることによってそれ自身で単一のメチロール基を移動させる、中間代謝産物である。したがって、２つの化合物は本質的に同じメカニズムで作用する。メチロール移動は、多くの高毒性の抗腫瘍薬に特有であるメチル移動と対比されることに注目されたい。タウロリジンおよびタウルルタムは低毒性であり、通常の細胞に対しての毒性がない。
【０００４】
プログラムされた細胞死は、細胞の数の調整のために進化的に保存された生物学的原理である。感受性の細胞（sensitive cells）は、近隣の細胞から適切なリガンドが分泌されたときに活性化される死レセプタを含む。プログラムされた細胞死の顕著なシステムは、Ｆａｓリガンド媒介アポトーシスである。ＣＤ ９５／ＡＰＯ−１としても知られるＦａｓは、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）によるオリゴマー化時に感受性の細胞内でのアポトーシスを媒介する腫瘍壊死因子レセプタスーパーファミリーのメンバーおよび細胞表面レセプタである。
【発明の概要】
【０００５】
この発明に従って、アポトーシスを誘導する量のメチロール含有化合物に新形成細胞を接触させることによって新形成細胞の細胞消滅死を誘導する、癌を治療する方法が提供される。
【０００６】
ある実施例は、少なくとも２投薬サイクルでのメチロール移動剤の投与を含み、各サイクルは投与期と非投与（静止）期とを含む。投与期は、メチロール移動剤の１日の用量を約１から８日間毎日、好ましくは注入によって投与することを含み、メチロール移動剤が投与されない約１から１４日間の非投与（静止）期がその後に続く。
【０００７】
別の実施例では、肝臓の動脈、門脈等の肝脈管、または胃十二指腸動脈内へと取付けられたカテーテルを通しての直接投与によってメチロール移動剤含有溶液を静脈内注入することによって、肝臓癌が治療される。
【０００８】
別の実施例では、神経膠腫／神経膠芽腫等の中枢神経系の腫瘍が治療される。
好ましいメチロール移動剤は、タウロリジン、タウルルタム、およびそれらの混合物である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
この発明は、細胞毒性を誘導し、かつ併用療法においてＦａｓリガンド媒介アポトーシスを増強する、タウロリジン等のメチロール移動剤の能力に関する。タウロリジンおよびその同種であるタウルルタムの両者は、それ自体では細胞生存度に事実上影響を与えない
薬物濃度で癌細胞内のＦａｓリガンドのアポトーシス効果を増強する。ヒトの悪性細胞膠腫細胞株ＬＮ−２２９では、タウロリジンまたはタウルルタム単独によるインキュベーションの直後に細胞生存度が減じられた。この効果は、ＦａｓリガンドによるＬＮ−２２９細胞の破壊性を増強した。したがって、アポトーシス性細胞死（apoptotic cell death）を誘導するための、メチロール移動剤の使用によって、癌を治療するための手段が提供される。
【００１０】
２つの細胞株ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９は、Ｆａｓリガンドに対する異なった感受性によるアポトーシス性細胞死の有効なモデルシステムを示す。したがって、これらの細胞株を用いて、このような化合物の、アポトーシス経路との潜在的な相互作用がテストされた。ヒトの悪性神経膠腫細胞ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９の生存度は、タウルルタムおよびタウロリジンによって異なった影響を受ける。Ｆａｓリガンド誘導アポトーシスに対する感受性が非常に高いＬＮ−１８細胞は、テストされたすべての濃度（５、２０、１００μｇ／ｍｌ）においてタウルルタムによる影響を受けなかった（例６）。タウロリジンは、テストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）においてＬＮ−１８細胞の生存度をわずかにのみ減じることができた。したがって、ＬＮ−１８細胞を破壊するためのしきい値は０．０１％のタウロリジンである。対照的に、ＬＮ−２２９細胞はこれらの薬物に対してずっと高い感受性を示した。ＬＮ−１８細胞とは対照的に、タウルルタムおよびタウロリジンの両者それ自体（１００μｇ／ｍｌ）によって、ＬＮ−２２９細胞の生存度が大きく減じられた。タウロリジン（１００μｇ／ｍｌ）はＬＮ−２２９細胞を非常に効果的に死滅させ（７０％）、タウルルタム（１００μｇ／ｍｌ）はＬＮ−２２９細胞の生存度を３０％減じることができた。テストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）では、タウロリジン単独でも細胞死の誘導に関してＦａｓリガンドとほぼ同じぐらい効果的であった。したがって、タウロリジンおよびタウルルタムはヒトの悪性細胞を破壊する能力を有する。
【００１１】
方法は、アポトーシスによって新形成細胞の死滅を誘導するのに十分な用量で、活性メチロール含有化合物を含む組成物を癌に罹患している哺乳動物に投与することによって、行なわれる。「メチロール含有化合物」または「メチロール移動剤」とは、生理学的条件下でメチロール分子を含む、またはそれを生成することのできる化合物を意味する。メチロール含有化合物は、Ｒがアルキル基、アリール基、またはヘテロ基であるＲ−ＣＨ2−ＯＨ基を有することによって特徴付けられる。この発明はまた、Ｒ−ＣＨ2−ＯＨ構造を含む化合物を生成することのできる、またはそれへと変換可能な化合物の使用を含む。
【００１２】
メチロール移動剤は、タウロリジンおよびタウルルタム等のメチロール含有化合物と、それらの誘導体とを含む。化合物タウロリジンおよびタウルルタムは、米国特許第５，２１０，０８３号で開示されている。他の好適なメチロール含有化合物としてはタウリナミド誘導体および尿素誘導体が挙げられる。この発明において有用なタウロリジン、タウルルタム、タウリナミド、および尿素の誘導体の例は、ＷＯ ０１／３９７６３Ａ２に見い出され得る。この発明に従った使用で特に好ましいメチロール移動剤は、タウロリジン、タウルルタム、それらの生物学的に活性な誘導体、およびそれらの混合物である。
【００１３】
代替的には、化合物は、タウリナミド誘導体または尿素誘導体である。この発明において有用なタウロリジン、タウルルタム、タウリナミド、および尿素の誘導体の例は、ＷＯ
０１／３９７６３Ａ２に見い出され得る。
【００１４】
癌細胞の細胞消滅死を誘導するのに好適な他のメチロール含有化合物としては、１，３−ジメチロール−５,５−ジメチルヒダントイン、ヘキサメチレンテトラミン、またはノキシチオリンが挙げられるが、それらに限定されない。タウロリジン誘導体またはタウルルタム誘導体とは、タウロリジンまたはタウルルタムの新形成活性の少なくとも１０％を
それぞれ有するスルホンアミド化合物を意味する。スルホンアミド化合物はＲ2Ｎ−ＳＯ2Ｒ′式を有するものである。本明細書中で説明される化合物の誘導体は、たとえばタウロリジンまたはタウルルタムという参照化合物とは構造的に異なり得るが、好ましくは参照化合物の生物学的活性、たとえばアポトーシス性細胞死の誘導の少なくとも５０％を保持する。好ましくは、誘導体は参照化合物の生物学的活性の少なくとも７５％、８５％、９５％、９９％、または１００％を有する。いくつかの事例では、誘導体の生物学的活性が参照化合物の活性レベルを超える場合もある。誘導体はまた、参照化合物が有さない特性または活性を有する場合もある。たとえば、誘導体は、減じられた毒性、延長された臨床的半減期、または血液脳関門を越えるという改善された能力を有する場合もある。
【００１５】
自己腫瘍、たとえば中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍の治療は、哺乳動物、たとえばヒト患者にメチロール含有化合物を投与することによって行なわれる。化合物は全身に、たとえば経口的にまたは静脈内に投与されるか、あるいは腫瘍部位、たとえば脳または脳脊髄液に直接注入される。オブラートまたはスポンジ等の、侵食性または再吸収性の固体マトリックスが脳組織に直接インプラントされ得る。
【００１６】
この発明が適用可能であり得る癌としては、神経膠腫、神経芽腫、星状細胞腫、癌性髄膜炎、卵巣癌、前立腺癌、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、肺癌、胃癌、食道癌、膀胱癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、腎細胞癌およびそれらの転移が挙げられる。この発明の方法が効果的である他の癌としては、他の癌腫、肉腫またはリンパ腫、頭部および頸部の癌、肝臓癌、乳癌、および膵臓癌が挙げられる。
【００１７】
特に好ましい実施例は、神経膠腫、神経芽腫、星状細胞腫、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、および肝臓癌からなる群から選択される癌の治療と、それらの腫瘍転移の抑制とを含む。
【００１８】
癌細胞内でアポトーシスを誘導するのに十分な濃度でタウロリジンおよび／またはタウルルタムを使用して、特に腫瘍の外科的除去後の転移の広がりを予防することが特に有益である。哺乳動物の被験体は典型的にはヒトである。
【００１９】
この発明はまた、哺乳動物被験体の腫瘍の治療または予防のために、癌細胞内でアポトーシスを誘導するのに十分な濃度でのタウロリジンおよび／またはタウルルタムの使用を含む。
【００２０】
この発明はさらに、アポトーシスの誘導によって哺乳動物被験体の腫瘍を治療または予防するための薬学的組成物を調製するための、癌細胞内でアポトーシスを誘導するのに十分な濃度でのタウロリジンおよび／またはタウルルタムの使用を含む。
【００２１】
この発明に従ったメチロール移動剤の有効投薬量は、１日当り約０．１−１,０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１日当り１５０−４５０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは１日当り３００−４５０ｍｇ／ｋｇの範囲内の薬学的投薬単位を含み得る。代替的には、１日当りグラム単位での投薬が行なわれてもよく、約２−６０ｇ／日から投与され得る。好ましい用量は、タウロリジンで約２．５−３０ｇ／日、タウルルタムで４−６０ｇ／日の範囲であり得るか、またはそれらの混合であり得る。最も好ましい用量は、タウロリジンで約１０−２０ｇ／日、タウルルタムで２０−４０ｇ／日の範囲であるか、またはそれらの混合である。
【００２２】
注射または注入のための好ましい処方物は、タウロリジンまたはタウルルタム濃度が高い溶液を提供するために、１つまたはそれ以上の可溶化剤、たとえばグルコース等のポリオール含有の等張液を含み得る。このような溶液はＥＰ ２５３６６２Ｂ１に記載されている。このような溶液中のタウロリジンまたはタウルルタム濃度は、１−６０ｇ／リット
ルの範囲内にあり得る。メチロール移動剤は一般に水に溶解しにくい。したがって、タウロリジンまたはタウルルタム含有の、たとえば１０ｇから３０ｇのタウロリジンおよび／またはタウルルタム含有の、比較的大量の水溶液を投与することがしばしば必要となる。この発明に従った投与に好ましい溶液は、約０．５−２％のタウロリジンおよび／またはタウルルタムを含む。比較的大量であることを考慮に入れて、これらの化合物を注入によって、便宜的には１日を通して間隔をあけて投与することが便宜的であり得る。
【００２３】
好ましくは注入によって１日の全用量を投与することは、以下のように行われ得る。すなわち、２４時間にわたって一貫した速度で行われ得るか、または部分用量によるより速い注入スケジュールに従って、部分用量の各々を投与する合間に投薬中断時間をいくつか設けて行われ得る。たとえば、２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌ（５ｇ用量）を２時間かけて注入した後、４時間の短い投薬中断時間を設け、これを２４時間の注入期間クールにわたって繰返して１日の全用量である２０ｇを達成する。代替的には、２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌを１時間かけて注入し、部分用量の各々を投与する間に１時間の投薬中断時間を設けて、これを１日の用量が達成されるまで繰返すこともでき、これによって、１日の全用量が２４時間よりも短いクール（つまり、約半日）で提供されてその日の残りの時間は注入が行なわれないこととなる。
【００２４】
ある実施例に従うと、癌に罹患している患者の静脈内に、１分当り４０滴、６時間ごとに１ボトルの速度で、２％のタウロリジン溶液の４ボトル（各々は２５０ｍｌ）が投与される。療法サイクルは、１週間にわたって毎日注入が行なわれる投与期と、それに続く２週間の静止期とからなる。治療全体は、少なくとも２つのこのようなサイクルからなる。静脈内に投与される２％のタウロリジン溶液の有効性は、１サイクル当り２５−２８ボトルの２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌが点滴注入されるときに特に優れているということが認められた。
【００２５】
この発明の第２の実施例に従うと、投与期は、２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌが２時間クールで投与され、その後４時間の投薬中断時間が設けられ、これが２４時間繰返されて１日の全用量が達成される、１日のレジメンを含む。
【００２６】
この発明の第３の実施例に従うと、投与期は、２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌが１時間かけて注入され、その後１時間の投薬中断時間が設けられ、１日の用量が達成されるまでそれが繰り返される、１日のレジメンを含む。（たとえば）全用量が２０ｇである場合、このレジメンは、７時間スパンにわたって４ボトルの２％のタウロリジン２５０ｍｌが注入される１日の用量を提供する。その日の残りの時間には注入は行なわれない。患者の肝計数が上昇した場合、注入速度を（たとえば、９０分または１２０分間にわたって２５０ｍｌを注入するものへと）延ばすこともできる。
【００２７】
さらなる実施例では、鎮痙薬の付随投与および／または抗水腫(anti-oedema)療法および／または抗生物質療法および／または、流体および電解質置換が行なわれる。
【００２８】
１．鎮痙薬
好ましくは、治療中の合併症を避けるために、治療前に鎮痙薬薬物療法で患者を安定させる。不所望な薬物療法の際に緊急安定化(emergency stabilization)のいずれをも予防するために、これを便宜的にアウトペーシェントベーシスで（on an out-patient basis）一部分は投与することもできる。バルプロ酸（valproinic acid）が第１に選択される薬剤であり、その用量は血中濃度検査に従って決定されて２回投与で投与される。通常、１２００ｍｇから１５００ｍｇの用量が必要とされる。バルプロ酸による治療が十分でない場合、ラモトリジン（lamotrigin）との併用治療が可能である。アレルギーの場合、またはバルプロ酸の作用に耐えることができない場合には、ラモトリジンとともに主な安定
化(stabilization)が行なわれる。フェニトインおよびカルバマゼピン（carbamazepin）は配合禁忌である。
【００２９】
２．抗水腫療法
抗水腫療法も行われ得るが、これは絶対的に必要な場合にのみ行なわれ得る。なぜならば、それ以外の場合に行なうと病巣の（focal）神経学的症状が起こるかまたは強くなるおそれがあり、または大脳内の圧力が症状を引き起こすおそれがあるためである。デキサメタゾンがタウロリジン投与の前またはその後に与えられるべきである。抗水腫療法は、可能な限り低い用量で、デキサメタゾンを用いて行なわれるべきである。胃を保護するために、１ｘ１５０ｍｇ／日のラニチジンとの付随療法も行われ得る。この療法によって胃に異常がでた場合には、１−２ｘ２０ｍｇ／日のアントラ（antra）を用いての代替的な治療が行なわれるべきである。
【００３０】
大脳内の圧力が非常に高くなりかつデキサメタゾンの有効性が十分でない場合には、特に４ｘ２５０ｍｌ／日までの投薬で、マニトールを用いての療法が可能である。
【００３１】
３．抗生物質療法
感受性テストが行なわれるまで、以下に列挙される抗生物質のうちの１つを用いての計算された抗生物質治療が行なわれ得る。
＊尿路感染：
主な抗生物質：コトリモキサゾール
代替の抗生物質：ドキシサイクリン（Doxycyclin）
＊肺炎：
主な抗生物質：エリスロマイシン
代替の抗生物質：ドキシサイクリン
以下の抗生物質は、絶対的に必要な場合（症状が最も重く、致命的になり得る感染の場合）かつ感受性の状態がそれを必要とする場合にのみ、用いられるべきである：チノロン（Chino lone）、ペニシリン、セファロスポリン。
【００３２】
４．静脈内での２％のタウロリジン療法を伴っての流体および電解質置換
２５０ｍｌの量の完全に電解質の溶液(full electrolyte solution)が好ましくは、２％のタウロリジン２５０ｍｌを用いた注入と同時で、かつそれと同じ注入速度で与えられ得る。電解質および血球計数は１日に２回モニタされるべきであり、中心静脈圧力は毎日１回検査されるべきである。
【００３３】
高ナトリウム血症（hypernatraemia）が見られた場合には、まず、脱水症がその原因であるか否かを判断するべきである。流体が同時に置換される場合で、かつその理由として脱水症が除外された後にのみ、利尿剤が用いられるべきである。
【００３４】
メチロール含有化合物は単独で投与されるか、または１つまたはそれ以上の付加的な抗腫瘍薬(antineoplastic agents)と組み合わせて投与される。ある好ましい実施例では、補助的な薬剤はアポトーシス以外のメカニズムによって腫瘍細胞を死滅させる。たとえば、代謝拮抗物質、プリンまたはピリミジンアナログ、アルキル化剤、架橋剤（たとえば、白金化合物）、挿入剤、および／または抗生物質が併用療法レジメンで投与される。補助的な薬物は、メチロール含有薬剤の前に、その後に、またはそれと同時に、与えられる。たとえば、メチロール移動剤は、５−フルオロ−ウラシル（５−ＦＵ）等のフルオロ−ピリミジンと共投与され得る。フルオロ−ピリミジンの有効的な１日の投薬量は、薬学的投薬単位当り約０．１−１,０００ｍｇの範囲内にあり得る。５−ＦＵの有効投薬量はまた、約１００−５,０００ｍｇ／身体表面積１ｍ2、好ましくは約２００−１,０００ｍｇ／身体表面積１ｍ2、より好ましくは約５００−６００ｍｇ／身体表面積１ｍ2の範囲内にあ
り得る。５−ＦＵは典型的に、注射のための２５０ｍｇまたは５００ｍｇアンプル剤であるか、または経口投与のための２５０ｍｇカプセル剤で、提供される。
【００３５】
別の実施例では、メチロール移動剤のアポトーシス効果はＦａｓリガンドとの共投与によって増強され得る。Ｆａｓリガンドポリペプチドは、米国特許第５，８５８，９９０号に開示されている。Ｆａｓリガンドの治療有効量は一般に、約０．０１−１,０００ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、好ましくは約０．１−２００ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、最も好ましくは約０．２−２０ｍｇ／患者の体重１ｋｇの範囲内にある。治療有効量は、１日に１回の投薬で、または１日に複数回、すなわち１日に２回、３回、４回、またはそれ以上の回数で、投与され得る。
【００３６】
ＬＮ−１８細胞では、タウルルタム（１００μｇ／ｍｌ）によって、０．４または２．０ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドが誘導するアポトーシスが明らかに増強された（例１）。タウルルタムそれ自体はこの濃度では細胞生存度を損なわなかったため、これは注目に値することである。したがって、タウルルタムは、Ｆａｓリガンド誘導アポトーシス経路の有効性を増強することができる。同じことがタウロリジン（１００μｇ／ｍｌ）にも当てはまるが、タウロリジン単独でもこの濃度で細胞生存度を実際には減じることができた（例１）。これらの結果によって、タウルルタムおよびタウロリジンのアポトーシス効果はＦａｓリガンドによって増強されるという考えが支持される。濃度１００μｇ／ｍｌのタウルルタムまたはタウロリジンがＦａｓリガンドと組合わせられる場合、細胞消失(cell loss)のトータルは、Ｆａｓリガンドのそれと、タウロリジンまたはタウルルタム単独のそれとの和として示される。したがって、この濃度でのタウルルタムおよびタウロリジンの細胞毒性はＦａｓ媒介アポトーシスに対して付加的なものであると考えられる。より低い濃度では、タウロリジンおよびタウルルタムのアポトーシス効果は、Ｆａｓリガンドとの共投与によって、付加的な効果を越えて大きく増強される。
【００３７】
この発明はまた、哺乳動物にメチロール含有化合物を投与することによって、哺乳動物における薬物耐性腫瘍、たとえば多剤耐性（multiple drug resistant）（ＭＤＲ）腫瘍を治療することを含む。治療されるべき腫瘍は癌腫または肉腫である。薬物耐性腫瘍は、充実性腫瘍、非充実性腫瘍（non-solid tumor）、およびリンパ腫からなる群より選択される。たとえば、薬物耐性腫瘍は、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、膵臓癌、ＣＮＳ癌、肝臓癌、肺癌、膀胱癌、リンパ腫、白血病、または肉腫である。
【００３８】
別の実施例に従うと、タウロリジンおよび／またはタウルルタム含有溶液はさらに、約１−２０ｇ／ｌ、好ましくは約５ｇ／ｌの範囲内の量でタウリンを含む。
【００３９】
さらなる実施例は、メチロール移動剤含有溶液を肝脈管内に取付けられたカテーテルを通して肝臓に直接投与することによって、原発性肝臓腫瘍およびその転移の両者を治療するための方法を提供する。肝機能および非虚血性状態を維持する手助けをするメチロール移動剤を溶液で投与することによって、臓器を過剰なストレスに過度にさらすことなしに冒された臓器に療法が施される。
【００４０】
原発性肝臓腫瘍の治療のために、治療薬剤が最も効果的に臓器へと運ばれるように、メチロール移動剤溶液は肝動脈を通して投与され得る。代替的には、溶液は、肝動脈を通して肝臓に送られる代わりに胃十二指腸動脈を介して供給され得る。この実施例で用いられる好ましい溶液は、肝機能を維持する手助けをし、かつ大量のメチロール移動剤溶液の注入に関連した臓器へのストレスを最小にする手助けをするものである。この発明で用いられ得る溶液が例で示される。
【００４１】
例１：２％のタウロリジン含有等張液
静脈内への点滴注入のためのある好ましい組成が以下で示される。
等張無菌溶液、１００ｍｌ：
２．０ｇ タウロリジン
５．０ｇ ＰＶＰ １６ ＰＦ ＵＰ蒸留水(aqua dest.) １００ｍｌの溶液にする(ad solut. 100ml)
ＰＨ７．２−７．３
無菌フィルタリングおよび蒸気滅菌。
【００４２】
例２：タウリンおよび電解質を有する２％のタウロリジン含有等張タウロリン(Taurolin)（Ｒ）溶液
静脈内への点滴注入のための別の好ましい組成が以下で示される。
等張無菌溶液、１００ｍｌ：
２．０ｇ タウロリジン
５．０ｇ ＰＶＰ １７ ＰＦ ＵＰ
０．５ｇ タウリン
０．３ｇ 塩化ナトリウム
無菌フィルタリングおよび蒸気滅菌。
【００４３】
例３：タウリンおよび電解質を有する２％のタウロリジン含有等張タウロリン（Ｒ）リンゲル液
静脈内への点滴注入のための別の好ましい組成が以下で示される。
等張無菌溶液、１００ｍｌ：
２．０ｇ タウロリジン
５．０ｇ ＰＶＰ １７ ＰＦ ＵＰ
０．５ｇ タウリン
０．２６ｇ 塩化ナトリウム
０．００３３ｇ 塩化カリウム
０．００４ｇ 塩化カルシウム ２Ｈ2Ｏ
０．００３ｇ 炭酸水素ナトリウム
無菌フィルタリングおよび蒸気滅菌。
【００４４】
例４：タウリンおよび電解質を有する２％のタウロリジン含有タウロリン（Ｒ）リンゲル−乳酸塩
静脈内への点滴注入のための別の好ましい組成が以下で示される。
等張無菌溶液、１００ｍｌ：
２．０ｇ タウロリジン
５．０ｇ ＰＶＰ １７ ＰＦ ＵＰ
０．５ｇ タウリン
０．２０ｇ 塩化ナトリウム
０．０１３ｇ 塩化カリウム
０．００９ｇ 塩化カルシウム ２Ｈ2Ｏ
０．００３３ｇ 乳酸ナトリウム５０％溶液（ファーマコピア ヨーロピア（Pharmacopeia Europea））
無菌フィルタリングおよび蒸気滅菌。
【００４５】
例５：タウルルタム溶液
ある好ましい溶液は以下を含む：
ラクトビオン酸 ３５．８３０ｇ
アデノシン １．３４０ｇ
ラフィノース五水和水 １７．８３０ｇ
ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）ＰＬ４０／０．５ ５０．０００ｇ
グルタチオン ０．９２９ｇ
アロプリノール ０．１３６ｇ
タウルルタム １０．０００ｇ
Ｋｃｌ ５．２００ｇ
ＭｇＳＯ4 ７Ｈ2Ｏ １．２３０ｇ
ｐＨ７．８までの２５％のＮａＯＨのＧＶ
ＮａＯＨペレットメルク（Merck）６４８２
蒸留水 ９００ｍｌ
溶液は１２１℃で１６分間無菌処理された。無菌処理後のｐＨは７．２で、用いられる準備が整った溶液のｐＨは７．４７であった。
【００４６】
例６：アポトーシスの誘導
ヒトの悪性神経膠腫細胞株において単独で、Ｆａｓリガンドとともに、アポトーシスを増強するかまたは細胞死を誘導するという能力についてタウロリジンおよびタウルルタムがテストされた。２つの細胞株ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９は、Ｆａｓリガンドに対する異なった感受性でアポトーシス性細胞死の有効なモデルシステムを示す（シュラップバッハ（Schlappbach）とフォンタナ（Fontana）、１９９７年）。したがって、これらの細胞株を用いてアポトーシス経路とのタウルルタムまたはタウロリジンの潜在的な相互作用がテストされた。
【００４７】
１） 試薬
タウロリジン（Ｂａｔｃｈ Ｎｒ．４１６９２／７）およびタウルルタム（Ｂａｔｃｈ
Ｅ／３９０２４／４）は、スイス、ウォルフーゼン（Wolhusen）のガイストリッヒ ファーマＡＧ（Geistlich Pharma AG）によって提供された。ＤＭＥ培養培地およびウシ胎仔血清（ＦＢＳ）は、スイス、バーゼル（Basel）のギブコＢＲＬ（Gibco BRL）から購入された。細胞増殖アッセイＷＳＴ−１は、スイス、ロトクライツ（Rotkreuz）のロッシュ
ダイアグノスティックス（Roche Diagnostics）から購入された。Ｆａｓリガンド（過剰発現系（overexpression system）からの上清）およびヒトの神経膠腫細胞株ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９は、スイス、チューリッヒの大学病院、臨床免疫学研究所(Institute of Clinical Immunology)のＡ．フォンタナ（A. Fontana）教授によって快く提供された。
【００４８】
２） 細胞株
細胞株ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９は、５％ＦＢＳおよび２ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭ中で３７℃、５％ＣＯ2で培養された（１０ｃｍプレート ＮＵＮＣＬＯＮ １５０３５）。Ｆａｓリガンドがそれ自身によってテストされた実験（図１）では、１ウェルにつき約１ｘ１０4の細胞が９６ウェルプレート（ＮＵＮＣＬＯＮ １６７００Ｂ）で平板培養(plate)され（１７時間インキュベーション）、結果として次の日に約６０％のコンフルエンシーが得られた。他のすべての実験（図２−５）では、約１．５ｘ１０4の細胞が平板培養されて（１７時間インキュベーション）、結果として次の日に約９０％のコンフルエンシーが得られた。培養容量全体の容量％（ｖｏｌ％）として示される上清として、Ｆａｓリガンドが加えられた。
【００４９】
３） 細胞生存度テスト
Ｆａｓリガンド、タウルルタム、タウロリジンのいずれかの存在下またはそれらの不在下で、あるいはそれらをそれぞれ組合せた状況下で、ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９細胞を５０μｌ培地内でインキュベートした。１７時間のインキュベーションの後、二重に濃縮されたＷＳＴ−１試薬を含む５０μｌ培地を加えることによって、細胞生存度が判断された。ミトコンドリアコハク酸レダクターゼの活性により生じた着色が、ＥＬＩＳＡリー
ダ内でリファレンス波長６９０ｎｍを使用して４５０ｎｍで測定された。
【００５０】
ヒトの悪性神経膠腫細胞株ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９を用いて、細胞生存度に影響を及ぼし、かつ/またはＦａｓリガンド誘導アポトーシスを増強させるようなタウロリジンおよびタウルルタムの能力がテストされた。ヒトの２つの悪性神経膠腫細胞株の、ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９は、Ｆａｓリガンドのアポトーシス効果に対して異なった感受性を示すと以前に報告されていた（シュラップバッハとフォンタナ、１９９７年）。
【００５１】
１） Ｆａｓリガンドに対するＬＮ−１８およびＬＮ−２２９の感受性
第１の組の実験では、Ｆａｓリガンドに対するＬＮ−１８およびＬＮ−２２９の異なった感受性がこの実験条件下で再び現れるか否かが調べられた。徐々に増加するＦａｓリガンド濃度（３．１、６．２５、１２．５、２５．０、および５０ｖｏｌ．％）とともに１ウェル当り１ｘ１０4の細胞を含む９６ウェルプレート内で２つの細胞株を一晩中（１７時間）インキュベートした。Ｆａｓリガンドの不在下では、細胞は一晩のインキュベーションの後、約６０％のコンフルエンシーに達した。Ｆａｓリガンドの存在下ではＬＮ−１８は極めて感受性が高く、わずか６．２５ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドの存在下でも９０％を超える細胞生存度の減少が見られた。３．１％でも、細胞生存度の約８５％の減少が認められた。対照的に、ＬＮ−２２９細胞の生存度は６．２５ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドによっては大きな影響を受けず（約１０％の減少）、その生存度はより高い濃度でのみ減じられ、テストされた中で最も高いＦａｓリガンドの濃度（５０ｖｏｌ．％）で最大４０％の細胞消失が見られた。
【００５２】
２） ＬＮ−１８細胞内のＦａｓリガンド誘導アポトーシスへのタウルルタムの影響
２つの濃度のＦａｓリガンド（０．４ｖｏｌ．％と２．０ｖｏｌ．％）の存在下または不在下で、タウルルタムの徐々に増加する濃度（５、２０、１００μｇ／ｍｌ）とともにＬＮ−１８細胞を１７時間インキュベートした。タウルルタムそれ自体は、テストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）でも細胞生存度に影響を与えなかった（５μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌで約５％の減少が認められ、１００μｇ／ｍｌでは生存度は実際には増加するように思われた）。０．４ｖｏｌ．％のＦａｓリガンド単独の存在下では、細胞生存度は約１０％のみ減じられ、その効果は５μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌのタウルルタムの存在下でも変化しないままであった。しかし、０．４ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドが１００μｇ／ｍｌのタウルルタムとともに共インキュベートされると、細胞生存度が大きく減少した。Ｆａｓリガンドがより高い濃度（２．０ｖｏｌ．％）で加えられると、Ｆａｓリガンド単独によってアポトーシスが細胞の６０％において誘導された。この効果はさらに１００μｇ／ｍｌのタウルルタムによって増大されたが、５μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌのタウルルタムでは増大されなかった。したがって、タウルルタムは、それ自体では細胞生存度に影響を及ぼさなかった濃度（１００μｇ／ｍｌ）でＬＮ−１８細胞内でのＦａｓリガンドのアポトーシス効果を増強することができる。
【００５３】
３） ＬＮ−１８細胞内のＦａｓリガンド誘導アポトーシスに対するタウロリジンの影響
タウロリジンの徐々に増加する濃度（５、２０、１００μｇ／ｍｌ）の存在下または不在下で、０．４ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドまたは２．０ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドのいずれかとともにＬＮ−１８細胞を１７時間インキュベートした。タウロリジンそれ自体は、はっきりと認められるほどの影響を細胞生存度に及ぼさず、テストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）でわずか１０％の減少を生じさせた。Ｆａｓリガンド単独（０．４％または２．０％）の存在下では、細胞生存度は上述のものと同じ影響を受けた。細胞生存度はタウロリジンによってさらに減じられたが、それはテストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）においてのみ減じられた。したがって、タウロリジンは、それ自体では細胞生存度にはっきりと認められるほどの影響を及ぼさなかった濃度（１００
μｇ／ｍｌ）でＬＮ−１８細胞に対するＦａｓリガンドの効果を増強することができた。
【００５４】
４） ＬＮ−２２９細胞内のＦａｓリガンド誘導アポトーシスに対するタウルルタムの影響
タウルルタム単独を用いてＬＮ−２２９細胞を１７時間インキュベートすることは、５μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌでは効果をあげなかったが、１００μｇ／ｍｌでは細胞生存度を３５％減じた。Ｆａｓリガンド単独（１０％または５０％）を用いてＬＮ−２２９細胞をインキュベートすると、細胞生存度は、高濃度のＦａｓリガンド（５０ｖｏｌ．％）の存在下で約２０％だけ減じられた。それ自体では不活性であった濃度（５μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌ）でタウルルタムを加えても、Ｆａｓリガンド（１０ｖｏｌ．％または５０ｖｏｌ．％）の効果に変化は認められなかった。Ｆａｓリガンド誘導細胞消失がさらに増強されたのは、タウルルタムの最高濃度（１００μｇ／ｍｌ）においてでのみであった。したがって、ＬＮ−２２９に関してのこれらの結果によって、Ｆａｓリガンドの存在下で細胞の破壊性を増強するというタウルルタムの能力が示される。
【００５５】
５） ＬＮ−２２９細胞内のＦａｓリガンド誘導アポトーシスに対するタウロリジンの影響
タウロリジン単独にＬＮ−２２９細胞を１７時間曝すことによって、テストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）で細胞生存度が約７０％、大きく減じられた。このように、ＬＮ−２２９細胞は、タウロリジンに対してＬＮ−１８細胞よりもずっと感受性が高かった。Ｆａｓリガンド（１０ｖｏｌ．％）とともに共インキュベートすると、細胞破壊は１００μｇ／ｍｌのタウロリジンによって増強された。５０ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドを用いた時には、その効果は２０μｇ／ｍｌのタウロリジンでもより顕著でより明らかであった。
【００５６】
例７：中枢神経系腫瘍の処置および／または予防のためのタウロリジンおよび／またはタウルルタムの使用および適用
１．実験に用いられた腫瘍細胞
実験のために、Ｃ６グリア腫瘍(glial tumor)細胞、ＨＴ２２神経腫瘍細胞、Ｕ３７３ヒト神経膠腫／神経膠芽腫腫瘍細胞、および神経膠芽腫に罹患した患者由来の細胞が用いられた。
【００５７】
２．患者由来の腫瘍細胞の調製
神経膠芽腫に罹患している患者由来の腫瘍細胞を手術中に得た。ＦＣＳを有さないＲＰＭＩ１６４０培地に腫瘍組織を貯蔵した。次に、１５ｍｌファルコン（Falcon）フラスコ内で組織を継代培養し、ＰＢＳとともに０．０２５％のトリプシンを加え、続いて３７℃でインキュベートした。このあと、ＦＣＳを有するＲＰＭＩ１６４０が加えられ、遠心分離が行なわれた。次のステップは、ＤＮＡｓｅを用いてのインキュベーション、再懸濁(resuspension)、および解離であり、その後に培地内での洗浄ステップが続いてＤＮＡｓｅが除去された。次に、ファルコンフラスコ内で細胞を培養した。
【００５８】
３．タウロリジンおよび／または代謝産物の抗腫瘍作用(anti-neoplastic action)の方法
超微細構造上では、細胞質の収縮と、染色質の縮合および辺縁化（marginalization）とが認められ得る。これらの変化は、０．１μｇ／ｍｌのタウリンを用いたインキュベーションの３０分で既に明らかとなり、時間が経つにつれて、かつタウロリジンの濃度とともに著しく大きくなった。ミトコンドリアは超微細構造上では影響を及ぼされなかった。フローサイトメトリによって、３０分で始まるＳ期およびＧ０／Ｇ１ピーク値の最初の上昇が示された。これらの最初の変化に続いて、前方光および側方散乱光（side scatter）が減少した。加えて、ＤＮＡの濃度依存性断片化が６０分で始まった。２４時間後、ＤＮ
Ａの断片化はほぼ完了した。２．０μｇ／ｍｌ以上のタウロリジン濃度では、細胞の大きさの変化はほんのわずかであった。
【００５９】
ある特定の死滅法（ルーコスタット調製法（Leucostat preparation））の結果とあわせた上述の結果によって、腫瘍細胞死のアポトーシスメカニズムが示される。通常の脳細胞は、５日間まで、４μｇ／ｍｌまでの濃度のタウロリジンまたはタウルルタムを用いたインキュベーションによって影響を及ぼされることはなかった。
【００６０】
例８：静脈内への２％のタウロリジンを用いて癌に罹患している患者を治療するための２サイクル投薬スケジュール
癌に罹患している患者の静脈内に１分当り４０滴、６時間ごとに１ボトルの速度で、２％のタウロリジン溶液の４ボトル（各々は２５０ｍｌ）が投与される。投薬サイクルは１週間にわたって毎日注入が行なわれる投与期からなり、その後２週間の非投与期が続き、さらに、上述のような１日当り４ボトルという別の投与期が続く。静脈内に投与される２％のタウロリジン溶液の有効性は、１サイクル当り２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌの２５−２８ボトルが点滴注入されるとき、特に優れていることが認められた。
【００６１】
例９：静脈内への２％のタウロリジンを用いて悪性神経膠腫に罹患している患者を治療するための４サイクル投薬スケジュール
治療は最低で４サイクルを含む。各サイクルは７日間であり、以下のように構成される。
【００６２】
１．第１のサイクル
ａ．中心静脈カテーテルを介して６０分の注入時間で２％のタウロリジン２５０ｍｌと完全に電解質の溶液２５０ｍｌとを静脈内注入する。
【００６３】
ｂ．この療法によって肝計数が高くなった場合には、注入時間を９０分または１２０分に延ばす必要がある。
【００６４】
ｃ．６０分の投薬中断時間
ｄ．１日当り合計６回、ａまたはｂと、ｃとによる療法を繰返す。
【００６５】
ｅ．タウロリジン２５０ｍｌ当り６０分の注入時間では１日の注入プログラムの持続時間は１１時間であり、９０分の注入時間では１４時間であり、１２０分の注入時間では１７時間である。残りの時間には薬物は投与されない。
【００６６】
ｆ．静止期
２．後続のサイクル
ａ．中心静脈カテーテルを介して６０分の注入時間で２％のタウロリジン２５０ｍｌと完全に電解質の溶液２５０ｍｌとを静脈内注入する。
【００６７】
ｂ．この治療によって肝計数が上昇した場合には、注入時間を９０分または１２０分に延ばす必要がある。
【００６８】
ｃ．６０分の投薬中断時間
ｄ．１日当り合計４回、ａまたはｂと、ｃとによる療法を繰返す。
【００６９】
ｅ．タウロリジン２５０ｍｌあたり６０分の注入時間では１日の注入プログラムの持続時間は７時間であり、９０分の注入時間では９時間であり、１２０分の注入時間では１１時間である。残りの時間には薬物は投与されない。
【００７０】
例１０：タウロリジンによる神経膠芽腫の治療（単一症例観察）
以下は、単一の治療サイクルを用いての１個人の治療を含む事例である。
【００７１】
患者：「Ｆ．Ｄ．」、男性、５９歳
診断：脳梁の疾患を伴う、両前頭部(bifrontal)の大きな（８ｘ８ｘ８ｃｍ）悪性神経膠腫（「バタフライ神経膠腫」）。
【００７２】
タウロリジンによる治療の前の処置：患者はハイデルベルク(Heidelberg)およびビュルツブルグ(Wurzburg)の脳神経外科に差し向けられたが、手術は拒否され、放射線および化学療法は患者によって拒否された。
【００７３】
以前の治療：経口コルチコステロイド
計画された治療：静脈内タウロリジン
入院時の主訴：広汎性の頭痛（diffuse headache）、尿失禁、視力障害、運動性失語症、歩行障害、記憶障害
入院時の神経学的検査：覚醒傾眠（awake-somnolent）、警戒(alert)、視覚障害、ほぼ完全な運動性失語症、失行、歩行障害、尿失禁、重症の記憶力（mnesic）および集中力欠如(concentration deficits)
入院時のカルノフスキー（Karnofsky）指標：２０−３０
治療第１日目のＭＲＩ（前治療）：両前頭部空間を占有する病巣（約８ｘ８ｘ８ｃｍ）であって、不規則な形状を伴い、輪のようなコントラスト増強および脳梁の破壊的疾患が見られる。この示された空間を占有することが影響して、ほぼすべての残りの空間が消える。
【００７４】
治療
第１日目：インフォームドコンセント；血液標本；ＭＲＩ
第２日目：中心静脈ラインの挿入；胸部Ｘ線
第３日目から第８日目：２時間以内での２％のタウロリジン２５０ｍｌの静脈内投与を１日に４回行い、それに続いて４時間の休止期が設けられる；毎日２回の血液標本；電解質置換
第９日目：２時間以内での２％のタウロリジン２５０ｍｌの静脈内投与を１回；退院
治療の概略：
トータルで、２５回の２％のタウロリジン２５０ｍｌ（１２５ｇのタウロリジン）が副作用なしに投与された。血液標本の結果に従って、電解質および流体が置換された。
【００７５】
退院時の主訴：頭痛の改善、尿失禁なし、視力改善、歩行障害の改善、運動性失語症のわずかな改善、記憶障害
退院時の神経学的検査：覚醒、警戒、視力改善、運動性失語症のわずかな改善、歩行障害の改善、失行のわずかな改善、尿失禁なし、重症の記憶力および集中力欠如
退院時のカルノフスキー指標：４０−５０
単一治療サイクル後の患者の状態に認められる著しい改善を考慮に入れると、少なくとも２サイクルの注入レジメンによって所望の治療効果が提供されると考えられる。
【００７６】
例１１：重症の多形性神経膠芽腫グレードＩＶの治療
治療の前、患者は重症の多形性神経膠芽腫グレードＩＶを示し、左側頭葉が罹患していた。腫瘍は、治療の前、患者の頭蓋骨のコンピュータ断層撮影写真にはっきりと示されていた。患者の頭蓋骨は、造影剤の適用およびＭＲ分光線検査(spectroscopy)の後、軸方向の、矢状および冠状層配向においてはＴ２強調像シーケンス(T2-weighted picture sequence)によって画像処理され、同様にもともとの軸方向の層の配向および軸方向の、冠状お
よび矢状層配向においてはＴ１強調像シーケンスによって画像処理された。
【００７７】
患者は４治療サイクルで治療され、その各々は、１日の用量が２０ｇのタウロリジン（２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌを４回）である７日間の注入期と、２日間の静止期とからなる。４サイクルの後、患者はさらなる２日間の注入期を経験した。治療の間には、患者の頭蓋骨の通常のコンピュータ断層撮影画像がとられた。
【００７８】
第２の治療サイクル（２００ｇタウロリジン投与）の終了までに、認識できるほどまでに脳水腫が減じられた。第３の治療サイクル（３００ｇタウロリジン投与）の終了までに、腫瘍の成長が停止した。全治療クールの完了後（６００ｇタウロリジン投与）、腫瘍はコンピュータ断層撮影によってほぼ完全に崩壊した状態で示された。治療クール中、壊死はほとんど観察されないかまたは全く観察されず、腫瘍の減少はアポトーシスの結果であることが示された。
【００７９】
例１２：タウロリジン／タウルルタムの直接適用による脳腫瘍の治療
半透膜を備えるいくつかのセグメントからなるタウロリジン／タウルルタム含有チューブを用いて、メチロール移動剤を腫瘍腔(tumor cavity)に直接適用する。
【００８０】
腫瘍のすべてまたは一部を除去した後、特別なチューブの末端が帽状腱膜下に位置するように、このチューブを腫瘍腔にインプラントする。チューブは半透性材料の種々のセグメントを含み、これはタウロリジン／タウルルタムを含み、帽状腱膜下ポートを介して補充され得る。
【技術分野】
【０００１】
この発明は、癌の治療のためのタウロリジン（taurolidine）およびタウルルタム（taurultam）等のメチロール含有化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗菌性および抗毒素薬タウロリジン、および関連の製品であるタウルルタム等のメチロール移動剤は、特に腫瘍の治療で用いられる腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の毒性に対する効果を改善することが示された。さらに、メチロール移動剤の作用は、通常の細胞株の成長を著しく抑制しない点において、選択的であることが示された。
【０００３】
タウロリジンは、作用の部位で３つのメチロール基を移動させることによって作用し、タウルルタムは、非常に高い耐性の化合物であるタウリナミド（taurinamide）を遊離させることによってそれ自身で単一のメチロール基を移動させる、中間代謝産物である。したがって、２つの化合物は本質的に同じメカニズムで作用する。メチロール移動は、多くの高毒性の抗腫瘍薬に特有であるメチル移動と対比されることに注目されたい。タウロリジンおよびタウルルタムは低毒性であり、通常の細胞に対しての毒性がない。
【０００４】
プログラムされた細胞死は、細胞の数の調整のために進化的に保存された生物学的原理である。感受性の細胞（sensitive cells）は、近隣の細胞から適切なリガンドが分泌されたときに活性化される死レセプタを含む。プログラムされた細胞死の顕著なシステムは、Ｆａｓリガンド媒介アポトーシスである。ＣＤ ９５／ＡＰＯ−１としても知られるＦａｓは、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）によるオリゴマー化時に感受性の細胞内でのアポトーシスを媒介する腫瘍壊死因子レセプタスーパーファミリーのメンバーおよび細胞表面レセプタである。
【発明の概要】
【０００５】
この発明に従って、アポトーシスを誘導する量のメチロール含有化合物に新形成細胞を接触させることによって新形成細胞の細胞消滅死を誘導する、癌を治療する方法が提供される。
【０００６】
ある実施例は、少なくとも２投薬サイクルでのメチロール移動剤の投与を含み、各サイクルは投与期と非投与（静止）期とを含む。投与期は、メチロール移動剤の１日の用量を約１から８日間毎日、好ましくは注入によって投与することを含み、メチロール移動剤が投与されない約１から１４日間の非投与（静止）期がその後に続く。
【０００７】
別の実施例では、肝臓の動脈、門脈等の肝脈管、または胃十二指腸動脈内へと取付けられたカテーテルを通しての直接投与によってメチロール移動剤含有溶液を静脈内注入することによって、肝臓癌が治療される。
【０００８】
別の実施例では、神経膠腫／神経膠芽腫等の中枢神経系の腫瘍が治療される。
好ましいメチロール移動剤は、タウロリジン、タウルルタム、およびそれらの混合物である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
この発明は、細胞毒性を誘導し、かつ併用療法においてＦａｓリガンド媒介アポトーシスを増強する、タウロリジン等のメチロール移動剤の能力に関する。タウロリジンおよびその同種であるタウルルタムの両者は、それ自体では細胞生存度に事実上影響を与えない
薬物濃度で癌細胞内のＦａｓリガンドのアポトーシス効果を増強する。ヒトの悪性細胞膠腫細胞株ＬＮ−２２９では、タウロリジンまたはタウルルタム単独によるインキュベーションの直後に細胞生存度が減じられた。この効果は、ＦａｓリガンドによるＬＮ−２２９細胞の破壊性を増強した。したがって、アポトーシス性細胞死（apoptotic cell death）を誘導するための、メチロール移動剤の使用によって、癌を治療するための手段が提供される。
【００１０】
２つの細胞株ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９は、Ｆａｓリガンドに対する異なった感受性によるアポトーシス性細胞死の有効なモデルシステムを示す。したがって、これらの細胞株を用いて、このような化合物の、アポトーシス経路との潜在的な相互作用がテストされた。ヒトの悪性神経膠腫細胞ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９の生存度は、タウルルタムおよびタウロリジンによって異なった影響を受ける。Ｆａｓリガンド誘導アポトーシスに対する感受性が非常に高いＬＮ−１８細胞は、テストされたすべての濃度（５、２０、１００μｇ／ｍｌ）においてタウルルタムによる影響を受けなかった（例６）。タウロリジンは、テストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）においてＬＮ−１８細胞の生存度をわずかにのみ減じることができた。したがって、ＬＮ−１８細胞を破壊するためのしきい値は０．０１％のタウロリジンである。対照的に、ＬＮ−２２９細胞はこれらの薬物に対してずっと高い感受性を示した。ＬＮ−１８細胞とは対照的に、タウルルタムおよびタウロリジンの両者それ自体（１００μｇ／ｍｌ）によって、ＬＮ−２２９細胞の生存度が大きく減じられた。タウロリジン（１００μｇ／ｍｌ）はＬＮ−２２９細胞を非常に効果的に死滅させ（７０％）、タウルルタム（１００μｇ／ｍｌ）はＬＮ−２２９細胞の生存度を３０％減じることができた。テストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）では、タウロリジン単独でも細胞死の誘導に関してＦａｓリガンドとほぼ同じぐらい効果的であった。したがって、タウロリジンおよびタウルルタムはヒトの悪性細胞を破壊する能力を有する。
【００１１】
方法は、アポトーシスによって新形成細胞の死滅を誘導するのに十分な用量で、活性メチロール含有化合物を含む組成物を癌に罹患している哺乳動物に投与することによって、行なわれる。「メチロール含有化合物」または「メチロール移動剤」とは、生理学的条件下でメチロール分子を含む、またはそれを生成することのできる化合物を意味する。メチロール含有化合物は、Ｒがアルキル基、アリール基、またはヘテロ基であるＲ−ＣＨ2−ＯＨ基を有することによって特徴付けられる。この発明はまた、Ｒ−ＣＨ2−ＯＨ構造を含む化合物を生成することのできる、またはそれへと変換可能な化合物の使用を含む。
【００１２】
メチロール移動剤は、タウロリジンおよびタウルルタム等のメチロール含有化合物と、それらの誘導体とを含む。化合物タウロリジンおよびタウルルタムは、米国特許第５，２１０，０８３号で開示されている。他の好適なメチロール含有化合物としてはタウリナミド誘導体および尿素誘導体が挙げられる。この発明において有用なタウロリジン、タウルルタム、タウリナミド、および尿素の誘導体の例は、ＷＯ ０１／３９７６３Ａ２に見い出され得る。この発明に従った使用で特に好ましいメチロール移動剤は、タウロリジン、タウルルタム、それらの生物学的に活性な誘導体、およびそれらの混合物である。
【００１３】
代替的には、化合物は、タウリナミド誘導体または尿素誘導体である。この発明において有用なタウロリジン、タウルルタム、タウリナミド、および尿素の誘導体の例は、ＷＯ
０１／３９７６３Ａ２に見い出され得る。
【００１４】
癌細胞の細胞消滅死を誘導するのに好適な他のメチロール含有化合物としては、１，３−ジメチロール−５,５−ジメチルヒダントイン、ヘキサメチレンテトラミン、またはノキシチオリンが挙げられるが、それらに限定されない。タウロリジン誘導体またはタウルルタム誘導体とは、タウロリジンまたはタウルルタムの新形成活性の少なくとも１０％を
それぞれ有するスルホンアミド化合物を意味する。スルホンアミド化合物はＲ2Ｎ−ＳＯ2Ｒ′式を有するものである。本明細書中で説明される化合物の誘導体は、たとえばタウロリジンまたはタウルルタムという参照化合物とは構造的に異なり得るが、好ましくは参照化合物の生物学的活性、たとえばアポトーシス性細胞死の誘導の少なくとも５０％を保持する。好ましくは、誘導体は参照化合物の生物学的活性の少なくとも７５％、８５％、９５％、９９％、または１００％を有する。いくつかの事例では、誘導体の生物学的活性が参照化合物の活性レベルを超える場合もある。誘導体はまた、参照化合物が有さない特性または活性を有する場合もある。たとえば、誘導体は、減じられた毒性、延長された臨床的半減期、または血液脳関門を越えるという改善された能力を有する場合もある。
【００１５】
自己腫瘍、たとえば中枢神経系（ＣＮＳ）の腫瘍の治療は、哺乳動物、たとえばヒト患者にメチロール含有化合物を投与することによって行なわれる。化合物は全身に、たとえば経口的にまたは静脈内に投与されるか、あるいは腫瘍部位、たとえば脳または脳脊髄液に直接注入される。オブラートまたはスポンジ等の、侵食性または再吸収性の固体マトリックスが脳組織に直接インプラントされ得る。
【００１６】
この発明が適用可能であり得る癌としては、神経膠腫、神経芽腫、星状細胞腫、癌性髄膜炎、卵巣癌、前立腺癌、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、肺癌、胃癌、食道癌、膀胱癌、白血病、リンパ腫、黒色腫、腎細胞癌およびそれらの転移が挙げられる。この発明の方法が効果的である他の癌としては、他の癌腫、肉腫またはリンパ腫、頭部および頸部の癌、肝臓癌、乳癌、および膵臓癌が挙げられる。
【００１７】
特に好ましい実施例は、神経膠腫、神経芽腫、星状細胞腫、中枢神経系（ＣＮＳ）癌、および肝臓癌からなる群から選択される癌の治療と、それらの腫瘍転移の抑制とを含む。
【００１８】
癌細胞内でアポトーシスを誘導するのに十分な濃度でタウロリジンおよび／またはタウルルタムを使用して、特に腫瘍の外科的除去後の転移の広がりを予防することが特に有益である。哺乳動物の被験体は典型的にはヒトである。
【００１９】
この発明はまた、哺乳動物被験体の腫瘍の治療または予防のために、癌細胞内でアポトーシスを誘導するのに十分な濃度でのタウロリジンおよび／またはタウルルタムの使用を含む。
【００２０】
この発明はさらに、アポトーシスの誘導によって哺乳動物被験体の腫瘍を治療または予防するための薬学的組成物を調製するための、癌細胞内でアポトーシスを誘導するのに十分な濃度でのタウロリジンおよび／またはタウルルタムの使用を含む。
【００２１】
この発明に従ったメチロール移動剤の有効投薬量は、１日当り約０．１−１,０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１日当り１５０−４５０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは１日当り３００−４５０ｍｇ／ｋｇの範囲内の薬学的投薬単位を含み得る。代替的には、１日当りグラム単位での投薬が行なわれてもよく、約２−６０ｇ／日から投与され得る。好ましい用量は、タウロリジンで約２．５−３０ｇ／日、タウルルタムで４−６０ｇ／日の範囲であり得るか、またはそれらの混合であり得る。最も好ましい用量は、タウロリジンで約１０−２０ｇ／日、タウルルタムで２０−４０ｇ／日の範囲であるか、またはそれらの混合である。
【００２２】
注射または注入のための好ましい処方物は、タウロリジンまたはタウルルタム濃度が高い溶液を提供するために、１つまたはそれ以上の可溶化剤、たとえばグルコース等のポリオール含有の等張液を含み得る。このような溶液はＥＰ ２５３６６２Ｂ１に記載されている。このような溶液中のタウロリジンまたはタウルルタム濃度は、１−６０ｇ／リット
ルの範囲内にあり得る。メチロール移動剤は一般に水に溶解しにくい。したがって、タウロリジンまたはタウルルタム含有の、たとえば１０ｇから３０ｇのタウロリジンおよび／またはタウルルタム含有の、比較的大量の水溶液を投与することがしばしば必要となる。この発明に従った投与に好ましい溶液は、約０．５−２％のタウロリジンおよび／またはタウルルタムを含む。比較的大量であることを考慮に入れて、これらの化合物を注入によって、便宜的には１日を通して間隔をあけて投与することが便宜的であり得る。
【００２３】
好ましくは注入によって１日の全用量を投与することは、以下のように行われ得る。すなわち、２４時間にわたって一貫した速度で行われ得るか、または部分用量によるより速い注入スケジュールに従って、部分用量の各々を投与する合間に投薬中断時間をいくつか設けて行われ得る。たとえば、２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌ（５ｇ用量）を２時間かけて注入した後、４時間の短い投薬中断時間を設け、これを２４時間の注入期間クールにわたって繰返して１日の全用量である２０ｇを達成する。代替的には、２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌを１時間かけて注入し、部分用量の各々を投与する間に１時間の投薬中断時間を設けて、これを１日の用量が達成されるまで繰返すこともでき、これによって、１日の全用量が２４時間よりも短いクール（つまり、約半日）で提供されてその日の残りの時間は注入が行なわれないこととなる。
【００２４】
ある実施例に従うと、癌に罹患している患者の静脈内に、１分当り４０滴、６時間ごとに１ボトルの速度で、２％のタウロリジン溶液の４ボトル（各々は２５０ｍｌ）が投与される。療法サイクルは、１週間にわたって毎日注入が行なわれる投与期と、それに続く２週間の静止期とからなる。治療全体は、少なくとも２つのこのようなサイクルからなる。静脈内に投与される２％のタウロリジン溶液の有効性は、１サイクル当り２５−２８ボトルの２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌが点滴注入されるときに特に優れているということが認められた。
【００２５】
この発明の第２の実施例に従うと、投与期は、２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌが２時間クールで投与され、その後４時間の投薬中断時間が設けられ、これが２４時間繰返されて１日の全用量が達成される、１日のレジメンを含む。
【００２６】
この発明の第３の実施例に従うと、投与期は、２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌが１時間かけて注入され、その後１時間の投薬中断時間が設けられ、１日の用量が達成されるまでそれが繰り返される、１日のレジメンを含む。（たとえば）全用量が２０ｇである場合、このレジメンは、７時間スパンにわたって４ボトルの２％のタウロリジン２５０ｍｌが注入される１日の用量を提供する。その日の残りの時間には注入は行なわれない。患者の肝計数が上昇した場合、注入速度を（たとえば、９０分または１２０分間にわたって２５０ｍｌを注入するものへと）延ばすこともできる。
【００２７】
さらなる実施例では、鎮痙薬の付随投与および／または抗水腫(anti-oedema)療法および／または抗生物質療法および／または、流体および電解質置換が行なわれる。
【００２８】
１．鎮痙薬
好ましくは、治療中の合併症を避けるために、治療前に鎮痙薬薬物療法で患者を安定させる。不所望な薬物療法の際に緊急安定化(emergency stabilization)のいずれをも予防するために、これを便宜的にアウトペーシェントベーシスで（on an out-patient basis）一部分は投与することもできる。バルプロ酸（valproinic acid）が第１に選択される薬剤であり、その用量は血中濃度検査に従って決定されて２回投与で投与される。通常、１２００ｍｇから１５００ｍｇの用量が必要とされる。バルプロ酸による治療が十分でない場合、ラモトリジン（lamotrigin）との併用治療が可能である。アレルギーの場合、またはバルプロ酸の作用に耐えることができない場合には、ラモトリジンとともに主な安定
化(stabilization)が行なわれる。フェニトインおよびカルバマゼピン（carbamazepin）は配合禁忌である。
【００２９】
２．抗水腫療法
抗水腫療法も行われ得るが、これは絶対的に必要な場合にのみ行なわれ得る。なぜならば、それ以外の場合に行なうと病巣の（focal）神経学的症状が起こるかまたは強くなるおそれがあり、または大脳内の圧力が症状を引き起こすおそれがあるためである。デキサメタゾンがタウロリジン投与の前またはその後に与えられるべきである。抗水腫療法は、可能な限り低い用量で、デキサメタゾンを用いて行なわれるべきである。胃を保護するために、１ｘ１５０ｍｇ／日のラニチジンとの付随療法も行われ得る。この療法によって胃に異常がでた場合には、１−２ｘ２０ｍｇ／日のアントラ（antra）を用いての代替的な治療が行なわれるべきである。
【００３０】
大脳内の圧力が非常に高くなりかつデキサメタゾンの有効性が十分でない場合には、特に４ｘ２５０ｍｌ／日までの投薬で、マニトールを用いての療法が可能である。
【００３１】
３．抗生物質療法
感受性テストが行なわれるまで、以下に列挙される抗生物質のうちの１つを用いての計算された抗生物質治療が行なわれ得る。
＊尿路感染：
主な抗生物質：コトリモキサゾール
代替の抗生物質：ドキシサイクリン（Doxycyclin）
＊肺炎：
主な抗生物質：エリスロマイシン
代替の抗生物質：ドキシサイクリン
以下の抗生物質は、絶対的に必要な場合（症状が最も重く、致命的になり得る感染の場合）かつ感受性の状態がそれを必要とする場合にのみ、用いられるべきである：チノロン（Chino lone）、ペニシリン、セファロスポリン。
【００３２】
４．静脈内での２％のタウロリジン療法を伴っての流体および電解質置換
２５０ｍｌの量の完全に電解質の溶液(full electrolyte solution)が好ましくは、２％のタウロリジン２５０ｍｌを用いた注入と同時で、かつそれと同じ注入速度で与えられ得る。電解質および血球計数は１日に２回モニタされるべきであり、中心静脈圧力は毎日１回検査されるべきである。
【００３３】
高ナトリウム血症（hypernatraemia）が見られた場合には、まず、脱水症がその原因であるか否かを判断するべきである。流体が同時に置換される場合で、かつその理由として脱水症が除外された後にのみ、利尿剤が用いられるべきである。
【００３４】
メチロール含有化合物は単独で投与されるか、または１つまたはそれ以上の付加的な抗腫瘍薬(antineoplastic agents)と組み合わせて投与される。ある好ましい実施例では、補助的な薬剤はアポトーシス以外のメカニズムによって腫瘍細胞を死滅させる。たとえば、代謝拮抗物質、プリンまたはピリミジンアナログ、アルキル化剤、架橋剤（たとえば、白金化合物）、挿入剤、および／または抗生物質が併用療法レジメンで投与される。補助的な薬物は、メチロール含有薬剤の前に、その後に、またはそれと同時に、与えられる。たとえば、メチロール移動剤は、５−フルオロ−ウラシル（５−ＦＵ）等のフルオロ−ピリミジンと共投与され得る。フルオロ−ピリミジンの有効的な１日の投薬量は、薬学的投薬単位当り約０．１−１,０００ｍｇの範囲内にあり得る。５−ＦＵの有効投薬量はまた、約１００−５,０００ｍｇ／身体表面積１ｍ2、好ましくは約２００−１,０００ｍｇ／身体表面積１ｍ2、より好ましくは約５００−６００ｍｇ／身体表面積１ｍ2の範囲内にあ
り得る。５−ＦＵは典型的に、注射のための２５０ｍｇまたは５００ｍｇアンプル剤であるか、または経口投与のための２５０ｍｇカプセル剤で、提供される。
【００３５】
別の実施例では、メチロール移動剤のアポトーシス効果はＦａｓリガンドとの共投与によって増強され得る。Ｆａｓリガンドポリペプチドは、米国特許第５，８５８，９９０号に開示されている。Ｆａｓリガンドの治療有効量は一般に、約０．０１−１,０００ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、好ましくは約０．１−２００ｍｇ／患者の体重１ｋｇ、最も好ましくは約０．２−２０ｍｇ／患者の体重１ｋｇの範囲内にある。治療有効量は、１日に１回の投薬で、または１日に複数回、すなわち１日に２回、３回、４回、またはそれ以上の回数で、投与され得る。
【００３６】
ＬＮ−１８細胞では、タウルルタム（１００μｇ／ｍｌ）によって、０．４または２．０ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドが誘導するアポトーシスが明らかに増強された（例１）。タウルルタムそれ自体はこの濃度では細胞生存度を損なわなかったため、これは注目に値することである。したがって、タウルルタムは、Ｆａｓリガンド誘導アポトーシス経路の有効性を増強することができる。同じことがタウロリジン（１００μｇ／ｍｌ）にも当てはまるが、タウロリジン単独でもこの濃度で細胞生存度を実際には減じることができた（例１）。これらの結果によって、タウルルタムおよびタウロリジンのアポトーシス効果はＦａｓリガンドによって増強されるという考えが支持される。濃度１００μｇ／ｍｌのタウルルタムまたはタウロリジンがＦａｓリガンドと組合わせられる場合、細胞消失(cell loss)のトータルは、Ｆａｓリガンドのそれと、タウロリジンまたはタウルルタム単独のそれとの和として示される。したがって、この濃度でのタウルルタムおよびタウロリジンの細胞毒性はＦａｓ媒介アポトーシスに対して付加的なものであると考えられる。より低い濃度では、タウロリジンおよびタウルルタムのアポトーシス効果は、Ｆａｓリガンドとの共投与によって、付加的な効果を越えて大きく増強される。
【００３７】
この発明はまた、哺乳動物にメチロール含有化合物を投与することによって、哺乳動物における薬物耐性腫瘍、たとえば多剤耐性（multiple drug resistant）（ＭＤＲ）腫瘍を治療することを含む。治療されるべき腫瘍は癌腫または肉腫である。薬物耐性腫瘍は、充実性腫瘍、非充実性腫瘍（non-solid tumor）、およびリンパ腫からなる群より選択される。たとえば、薬物耐性腫瘍は、乳癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、膵臓癌、ＣＮＳ癌、肝臓癌、肺癌、膀胱癌、リンパ腫、白血病、または肉腫である。
【００３８】
別の実施例に従うと、タウロリジンおよび／またはタウルルタム含有溶液はさらに、約１−２０ｇ／ｌ、好ましくは約５ｇ／ｌの範囲内の量でタウリンを含む。
【００３９】
さらなる実施例は、メチロール移動剤含有溶液を肝脈管内に取付けられたカテーテルを通して肝臓に直接投与することによって、原発性肝臓腫瘍およびその転移の両者を治療するための方法を提供する。肝機能および非虚血性状態を維持する手助けをするメチロール移動剤を溶液で投与することによって、臓器を過剰なストレスに過度にさらすことなしに冒された臓器に療法が施される。
【００４０】
原発性肝臓腫瘍の治療のために、治療薬剤が最も効果的に臓器へと運ばれるように、メチロール移動剤溶液は肝動脈を通して投与され得る。代替的には、溶液は、肝動脈を通して肝臓に送られる代わりに胃十二指腸動脈を介して供給され得る。この実施例で用いられる好ましい溶液は、肝機能を維持する手助けをし、かつ大量のメチロール移動剤溶液の注入に関連した臓器へのストレスを最小にする手助けをするものである。この発明で用いられ得る溶液が例で示される。
【００４１】
例１：２％のタウロリジン含有等張液
静脈内への点滴注入のためのある好ましい組成が以下で示される。
等張無菌溶液、１００ｍｌ：
２．０ｇ タウロリジン
５．０ｇ ＰＶＰ １６ ＰＦ ＵＰ蒸留水(aqua dest.) １００ｍｌの溶液にする(ad solut. 100ml)
ＰＨ７．２−７．３
無菌フィルタリングおよび蒸気滅菌。
【００４２】
例２：タウリンおよび電解質を有する２％のタウロリジン含有等張タウロリン(Taurolin)（Ｒ）溶液
静脈内への点滴注入のための別の好ましい組成が以下で示される。
等張無菌溶液、１００ｍｌ：
２．０ｇ タウロリジン
５．０ｇ ＰＶＰ １７ ＰＦ ＵＰ
０．５ｇ タウリン
０．３ｇ 塩化ナトリウム
無菌フィルタリングおよび蒸気滅菌。
【００４３】
例３：タウリンおよび電解質を有する２％のタウロリジン含有等張タウロリン（Ｒ）リンゲル液
静脈内への点滴注入のための別の好ましい組成が以下で示される。
等張無菌溶液、１００ｍｌ：
２．０ｇ タウロリジン
５．０ｇ ＰＶＰ １７ ＰＦ ＵＰ
０．５ｇ タウリン
０．２６ｇ 塩化ナトリウム
０．００３３ｇ 塩化カリウム
０．００４ｇ 塩化カルシウム ２Ｈ2Ｏ
０．００３ｇ 炭酸水素ナトリウム
無菌フィルタリングおよび蒸気滅菌。
【００４４】
例４：タウリンおよび電解質を有する２％のタウロリジン含有タウロリン（Ｒ）リンゲル−乳酸塩
静脈内への点滴注入のための別の好ましい組成が以下で示される。
等張無菌溶液、１００ｍｌ：
２．０ｇ タウロリジン
５．０ｇ ＰＶＰ １７ ＰＦ ＵＰ
０．５ｇ タウリン
０．２０ｇ 塩化ナトリウム
０．０１３ｇ 塩化カリウム
０．００９ｇ 塩化カルシウム ２Ｈ2Ｏ
０．００３３ｇ 乳酸ナトリウム５０％溶液（ファーマコピア ヨーロピア（Pharmacopeia Europea））
無菌フィルタリングおよび蒸気滅菌。
【００４５】
例５：タウルルタム溶液
ある好ましい溶液は以下を含む：
ラクトビオン酸 ３５．８３０ｇ
アデノシン １．３４０ｇ
ラフィノース五水和水 １７．８３０ｇ
ヒドロキシエチルデンプン（ＨＥＳ）ＰＬ４０／０．５ ５０．０００ｇ
グルタチオン ０．９２９ｇ
アロプリノール ０．１３６ｇ
タウルルタム １０．０００ｇ
Ｋｃｌ ５．２００ｇ
ＭｇＳＯ4 ７Ｈ2Ｏ １．２３０ｇ
ｐＨ７．８までの２５％のＮａＯＨのＧＶ
ＮａＯＨペレットメルク（Merck）６４８２
蒸留水 ９００ｍｌ
溶液は１２１℃で１６分間無菌処理された。無菌処理後のｐＨは７．２で、用いられる準備が整った溶液のｐＨは７．４７であった。
【００４６】
例６：アポトーシスの誘導
ヒトの悪性神経膠腫細胞株において単独で、Ｆａｓリガンドとともに、アポトーシスを増強するかまたは細胞死を誘導するという能力についてタウロリジンおよびタウルルタムがテストされた。２つの細胞株ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９は、Ｆａｓリガンドに対する異なった感受性でアポトーシス性細胞死の有効なモデルシステムを示す（シュラップバッハ（Schlappbach）とフォンタナ（Fontana）、１９９７年）。したがって、これらの細胞株を用いてアポトーシス経路とのタウルルタムまたはタウロリジンの潜在的な相互作用がテストされた。
【００４７】
１） 試薬
タウロリジン（Ｂａｔｃｈ Ｎｒ．４１６９２／７）およびタウルルタム（Ｂａｔｃｈ
Ｅ／３９０２４／４）は、スイス、ウォルフーゼン（Wolhusen）のガイストリッヒ ファーマＡＧ（Geistlich Pharma AG）によって提供された。ＤＭＥ培養培地およびウシ胎仔血清（ＦＢＳ）は、スイス、バーゼル（Basel）のギブコＢＲＬ（Gibco BRL）から購入された。細胞増殖アッセイＷＳＴ−１は、スイス、ロトクライツ（Rotkreuz）のロッシュ
ダイアグノスティックス（Roche Diagnostics）から購入された。Ｆａｓリガンド（過剰発現系（overexpression system）からの上清）およびヒトの神経膠腫細胞株ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９は、スイス、チューリッヒの大学病院、臨床免疫学研究所(Institute of Clinical Immunology)のＡ．フォンタナ（A. Fontana）教授によって快く提供された。
【００４８】
２） 細胞株
細胞株ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９は、５％ＦＢＳおよび２ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭ中で３７℃、５％ＣＯ2で培養された（１０ｃｍプレート ＮＵＮＣＬＯＮ １５０３５）。Ｆａｓリガンドがそれ自身によってテストされた実験（図１）では、１ウェルにつき約１ｘ１０4の細胞が９６ウェルプレート（ＮＵＮＣＬＯＮ １６７００Ｂ）で平板培養(plate)され（１７時間インキュベーション）、結果として次の日に約６０％のコンフルエンシーが得られた。他のすべての実験（図２−５）では、約１．５ｘ１０4の細胞が平板培養されて（１７時間インキュベーション）、結果として次の日に約９０％のコンフルエンシーが得られた。培養容量全体の容量％（ｖｏｌ％）として示される上清として、Ｆａｓリガンドが加えられた。
【００４９】
３） 細胞生存度テスト
Ｆａｓリガンド、タウルルタム、タウロリジンのいずれかの存在下またはそれらの不在下で、あるいはそれらをそれぞれ組合せた状況下で、ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９細胞を５０μｌ培地内でインキュベートした。１７時間のインキュベーションの後、二重に濃縮されたＷＳＴ−１試薬を含む５０μｌ培地を加えることによって、細胞生存度が判断された。ミトコンドリアコハク酸レダクターゼの活性により生じた着色が、ＥＬＩＳＡリー
ダ内でリファレンス波長６９０ｎｍを使用して４５０ｎｍで測定された。
【００５０】
ヒトの悪性神経膠腫細胞株ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９を用いて、細胞生存度に影響を及ぼし、かつ/またはＦａｓリガンド誘導アポトーシスを増強させるようなタウロリジンおよびタウルルタムの能力がテストされた。ヒトの２つの悪性神経膠腫細胞株の、ＬＮ−１８およびＬＮ−２２９は、Ｆａｓリガンドのアポトーシス効果に対して異なった感受性を示すと以前に報告されていた（シュラップバッハとフォンタナ、１９９７年）。
【００５１】
１） Ｆａｓリガンドに対するＬＮ−１８およびＬＮ−２２９の感受性
第１の組の実験では、Ｆａｓリガンドに対するＬＮ−１８およびＬＮ−２２９の異なった感受性がこの実験条件下で再び現れるか否かが調べられた。徐々に増加するＦａｓリガンド濃度（３．１、６．２５、１２．５、２５．０、および５０ｖｏｌ．％）とともに１ウェル当り１ｘ１０4の細胞を含む９６ウェルプレート内で２つの細胞株を一晩中（１７時間）インキュベートした。Ｆａｓリガンドの不在下では、細胞は一晩のインキュベーションの後、約６０％のコンフルエンシーに達した。Ｆａｓリガンドの存在下ではＬＮ−１８は極めて感受性が高く、わずか６．２５ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドの存在下でも９０％を超える細胞生存度の減少が見られた。３．１％でも、細胞生存度の約８５％の減少が認められた。対照的に、ＬＮ−２２９細胞の生存度は６．２５ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドによっては大きな影響を受けず（約１０％の減少）、その生存度はより高い濃度でのみ減じられ、テストされた中で最も高いＦａｓリガンドの濃度（５０ｖｏｌ．％）で最大４０％の細胞消失が見られた。
【００５２】
２） ＬＮ−１８細胞内のＦａｓリガンド誘導アポトーシスへのタウルルタムの影響
２つの濃度のＦａｓリガンド（０．４ｖｏｌ．％と２．０ｖｏｌ．％）の存在下または不在下で、タウルルタムの徐々に増加する濃度（５、２０、１００μｇ／ｍｌ）とともにＬＮ−１８細胞を１７時間インキュベートした。タウルルタムそれ自体は、テストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）でも細胞生存度に影響を与えなかった（５μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌで約５％の減少が認められ、１００μｇ／ｍｌでは生存度は実際には増加するように思われた）。０．４ｖｏｌ．％のＦａｓリガンド単独の存在下では、細胞生存度は約１０％のみ減じられ、その効果は５μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌのタウルルタムの存在下でも変化しないままであった。しかし、０．４ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドが１００μｇ／ｍｌのタウルルタムとともに共インキュベートされると、細胞生存度が大きく減少した。Ｆａｓリガンドがより高い濃度（２．０ｖｏｌ．％）で加えられると、Ｆａｓリガンド単独によってアポトーシスが細胞の６０％において誘導された。この効果はさらに１００μｇ／ｍｌのタウルルタムによって増大されたが、５μｇ／ｍｌまたは２０μｇ／ｍｌのタウルルタムでは増大されなかった。したがって、タウルルタムは、それ自体では細胞生存度に影響を及ぼさなかった濃度（１００μｇ／ｍｌ）でＬＮ−１８細胞内でのＦａｓリガンドのアポトーシス効果を増強することができる。
【００５３】
３） ＬＮ−１８細胞内のＦａｓリガンド誘導アポトーシスに対するタウロリジンの影響
タウロリジンの徐々に増加する濃度（５、２０、１００μｇ／ｍｌ）の存在下または不在下で、０．４ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドまたは２．０ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドのいずれかとともにＬＮ−１８細胞を１７時間インキュベートした。タウロリジンそれ自体は、はっきりと認められるほどの影響を細胞生存度に及ぼさず、テストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）でわずか１０％の減少を生じさせた。Ｆａｓリガンド単独（０．４％または２．０％）の存在下では、細胞生存度は上述のものと同じ影響を受けた。細胞生存度はタウロリジンによってさらに減じられたが、それはテストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）においてのみ減じられた。したがって、タウロリジンは、それ自体では細胞生存度にはっきりと認められるほどの影響を及ぼさなかった濃度（１００
μｇ／ｍｌ）でＬＮ−１８細胞に対するＦａｓリガンドの効果を増強することができた。
【００５４】
４） ＬＮ−２２９細胞内のＦａｓリガンド誘導アポトーシスに対するタウルルタムの影響
タウルルタム単独を用いてＬＮ−２２９細胞を１７時間インキュベートすることは、５μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌでは効果をあげなかったが、１００μｇ／ｍｌでは細胞生存度を３５％減じた。Ｆａｓリガンド単独（１０％または５０％）を用いてＬＮ−２２９細胞をインキュベートすると、細胞生存度は、高濃度のＦａｓリガンド（５０ｖｏｌ．％）の存在下で約２０％だけ減じられた。それ自体では不活性であった濃度（５μｇ／ｍｌおよび２０μｇ／ｍｌ）でタウルルタムを加えても、Ｆａｓリガンド（１０ｖｏｌ．％または５０ｖｏｌ．％）の効果に変化は認められなかった。Ｆａｓリガンド誘導細胞消失がさらに増強されたのは、タウルルタムの最高濃度（１００μｇ／ｍｌ）においてでのみであった。したがって、ＬＮ−２２９に関してのこれらの結果によって、Ｆａｓリガンドの存在下で細胞の破壊性を増強するというタウルルタムの能力が示される。
【００５５】
５） ＬＮ−２２９細胞内のＦａｓリガンド誘導アポトーシスに対するタウロリジンの影響
タウロリジン単独にＬＮ−２２９細胞を１７時間曝すことによって、テストされた中で最も高い濃度（１００μｇ／ｍｌ）で細胞生存度が約７０％、大きく減じられた。このように、ＬＮ−２２９細胞は、タウロリジンに対してＬＮ−１８細胞よりもずっと感受性が高かった。Ｆａｓリガンド（１０ｖｏｌ．％）とともに共インキュベートすると、細胞破壊は１００μｇ／ｍｌのタウロリジンによって増強された。５０ｖｏｌ．％のＦａｓリガンドを用いた時には、その効果は２０μｇ／ｍｌのタウロリジンでもより顕著でより明らかであった。
【００５６】
例７：中枢神経系腫瘍の処置および／または予防のためのタウロリジンおよび／またはタウルルタムの使用および適用
１．実験に用いられた腫瘍細胞
実験のために、Ｃ６グリア腫瘍(glial tumor)細胞、ＨＴ２２神経腫瘍細胞、Ｕ３７３ヒト神経膠腫／神経膠芽腫腫瘍細胞、および神経膠芽腫に罹患した患者由来の細胞が用いられた。
【００５７】
２．患者由来の腫瘍細胞の調製
神経膠芽腫に罹患している患者由来の腫瘍細胞を手術中に得た。ＦＣＳを有さないＲＰＭＩ１６４０培地に腫瘍組織を貯蔵した。次に、１５ｍｌファルコン（Falcon）フラスコ内で組織を継代培養し、ＰＢＳとともに０．０２５％のトリプシンを加え、続いて３７℃でインキュベートした。このあと、ＦＣＳを有するＲＰＭＩ１６４０が加えられ、遠心分離が行なわれた。次のステップは、ＤＮＡｓｅを用いてのインキュベーション、再懸濁(resuspension)、および解離であり、その後に培地内での洗浄ステップが続いてＤＮＡｓｅが除去された。次に、ファルコンフラスコ内で細胞を培養した。
【００５８】
３．タウロリジンおよび／または代謝産物の抗腫瘍作用(anti-neoplastic action)の方法
超微細構造上では、細胞質の収縮と、染色質の縮合および辺縁化（marginalization）とが認められ得る。これらの変化は、０．１μｇ／ｍｌのタウリンを用いたインキュベーションの３０分で既に明らかとなり、時間が経つにつれて、かつタウロリジンの濃度とともに著しく大きくなった。ミトコンドリアは超微細構造上では影響を及ぼされなかった。フローサイトメトリによって、３０分で始まるＳ期およびＧ０／Ｇ１ピーク値の最初の上昇が示された。これらの最初の変化に続いて、前方光および側方散乱光（side scatter）が減少した。加えて、ＤＮＡの濃度依存性断片化が６０分で始まった。２４時間後、ＤＮ
Ａの断片化はほぼ完了した。２．０μｇ／ｍｌ以上のタウロリジン濃度では、細胞の大きさの変化はほんのわずかであった。
【００５９】
ある特定の死滅法（ルーコスタット調製法（Leucostat preparation））の結果とあわせた上述の結果によって、腫瘍細胞死のアポトーシスメカニズムが示される。通常の脳細胞は、５日間まで、４μｇ／ｍｌまでの濃度のタウロリジンまたはタウルルタムを用いたインキュベーションによって影響を及ぼされることはなかった。
【００６０】
例８：静脈内への２％のタウロリジンを用いて癌に罹患している患者を治療するための２サイクル投薬スケジュール
癌に罹患している患者の静脈内に１分当り４０滴、６時間ごとに１ボトルの速度で、２％のタウロリジン溶液の４ボトル（各々は２５０ｍｌ）が投与される。投薬サイクルは１週間にわたって毎日注入が行なわれる投与期からなり、その後２週間の非投与期が続き、さらに、上述のような１日当り４ボトルという別の投与期が続く。静脈内に投与される２％のタウロリジン溶液の有効性は、１サイクル当り２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌの２５−２８ボトルが点滴注入されるとき、特に優れていることが認められた。
【００６１】
例９：静脈内への２％のタウロリジンを用いて悪性神経膠腫に罹患している患者を治療するための４サイクル投薬スケジュール
治療は最低で４サイクルを含む。各サイクルは７日間であり、以下のように構成される。
【００６２】
１．第１のサイクル
ａ．中心静脈カテーテルを介して６０分の注入時間で２％のタウロリジン２５０ｍｌと完全に電解質の溶液２５０ｍｌとを静脈内注入する。
【００６３】
ｂ．この療法によって肝計数が高くなった場合には、注入時間を９０分または１２０分に延ばす必要がある。
【００６４】
ｃ．６０分の投薬中断時間
ｄ．１日当り合計６回、ａまたはｂと、ｃとによる療法を繰返す。
【００６５】
ｅ．タウロリジン２５０ｍｌ当り６０分の注入時間では１日の注入プログラムの持続時間は１１時間であり、９０分の注入時間では１４時間であり、１２０分の注入時間では１７時間である。残りの時間には薬物は投与されない。
【００６６】
ｆ．静止期
２．後続のサイクル
ａ．中心静脈カテーテルを介して６０分の注入時間で２％のタウロリジン２５０ｍｌと完全に電解質の溶液２５０ｍｌとを静脈内注入する。
【００６７】
ｂ．この治療によって肝計数が上昇した場合には、注入時間を９０分または１２０分に延ばす必要がある。
【００６８】
ｃ．６０分の投薬中断時間
ｄ．１日当り合計４回、ａまたはｂと、ｃとによる療法を繰返す。
【００６９】
ｅ．タウロリジン２５０ｍｌあたり６０分の注入時間では１日の注入プログラムの持続時間は７時間であり、９０分の注入時間では９時間であり、１２０分の注入時間では１１時間である。残りの時間には薬物は投与されない。
【００７０】
例１０：タウロリジンによる神経膠芽腫の治療（単一症例観察）
以下は、単一の治療サイクルを用いての１個人の治療を含む事例である。
【００７１】
患者：「Ｆ．Ｄ．」、男性、５９歳
診断：脳梁の疾患を伴う、両前頭部(bifrontal)の大きな（８ｘ８ｘ８ｃｍ）悪性神経膠腫（「バタフライ神経膠腫」）。
【００７２】
タウロリジンによる治療の前の処置：患者はハイデルベルク(Heidelberg)およびビュルツブルグ(Wurzburg)の脳神経外科に差し向けられたが、手術は拒否され、放射線および化学療法は患者によって拒否された。
【００７３】
以前の治療：経口コルチコステロイド
計画された治療：静脈内タウロリジン
入院時の主訴：広汎性の頭痛（diffuse headache）、尿失禁、視力障害、運動性失語症、歩行障害、記憶障害
入院時の神経学的検査：覚醒傾眠（awake-somnolent）、警戒(alert)、視覚障害、ほぼ完全な運動性失語症、失行、歩行障害、尿失禁、重症の記憶力（mnesic）および集中力欠如(concentration deficits)
入院時のカルノフスキー（Karnofsky）指標：２０−３０
治療第１日目のＭＲＩ（前治療）：両前頭部空間を占有する病巣（約８ｘ８ｘ８ｃｍ）であって、不規則な形状を伴い、輪のようなコントラスト増強および脳梁の破壊的疾患が見られる。この示された空間を占有することが影響して、ほぼすべての残りの空間が消える。
【００７４】
治療
第１日目：インフォームドコンセント；血液標本；ＭＲＩ
第２日目：中心静脈ラインの挿入；胸部Ｘ線
第３日目から第８日目：２時間以内での２％のタウロリジン２５０ｍｌの静脈内投与を１日に４回行い、それに続いて４時間の休止期が設けられる；毎日２回の血液標本；電解質置換
第９日目：２時間以内での２％のタウロリジン２５０ｍｌの静脈内投与を１回；退院
治療の概略：
トータルで、２５回の２％のタウロリジン２５０ｍｌ（１２５ｇのタウロリジン）が副作用なしに投与された。血液標本の結果に従って、電解質および流体が置換された。
【００７５】
退院時の主訴：頭痛の改善、尿失禁なし、視力改善、歩行障害の改善、運動性失語症のわずかな改善、記憶障害
退院時の神経学的検査：覚醒、警戒、視力改善、運動性失語症のわずかな改善、歩行障害の改善、失行のわずかな改善、尿失禁なし、重症の記憶力および集中力欠如
退院時のカルノフスキー指標：４０−５０
単一治療サイクル後の患者の状態に認められる著しい改善を考慮に入れると、少なくとも２サイクルの注入レジメンによって所望の治療効果が提供されると考えられる。
【００７６】
例１１：重症の多形性神経膠芽腫グレードＩＶの治療
治療の前、患者は重症の多形性神経膠芽腫グレードＩＶを示し、左側頭葉が罹患していた。腫瘍は、治療の前、患者の頭蓋骨のコンピュータ断層撮影写真にはっきりと示されていた。患者の頭蓋骨は、造影剤の適用およびＭＲ分光線検査(spectroscopy)の後、軸方向の、矢状および冠状層配向においてはＴ２強調像シーケンス(T2-weighted picture sequence)によって画像処理され、同様にもともとの軸方向の層の配向および軸方向の、冠状お
よび矢状層配向においてはＴ１強調像シーケンスによって画像処理された。
【００７７】
患者は４治療サイクルで治療され、その各々は、１日の用量が２０ｇのタウロリジン（２％のタウロリジン溶液２５０ｍｌを４回）である７日間の注入期と、２日間の静止期とからなる。４サイクルの後、患者はさらなる２日間の注入期を経験した。治療の間には、患者の頭蓋骨の通常のコンピュータ断層撮影画像がとられた。
【００７８】
第２の治療サイクル（２００ｇタウロリジン投与）の終了までに、認識できるほどまでに脳水腫が減じられた。第３の治療サイクル（３００ｇタウロリジン投与）の終了までに、腫瘍の成長が停止した。全治療クールの完了後（６００ｇタウロリジン投与）、腫瘍はコンピュータ断層撮影によってほぼ完全に崩壊した状態で示された。治療クール中、壊死はほとんど観察されないかまたは全く観察されず、腫瘍の減少はアポトーシスの結果であることが示された。
【００７９】
例１２：タウロリジン／タウルルタムの直接適用による脳腫瘍の治療
半透膜を備えるいくつかのセグメントからなるタウロリジン／タウルルタム含有チューブを用いて、メチロール移動剤を腫瘍腔(tumor cavity)に直接適用する。
【００８０】
腫瘍のすべてまたは一部を除去した後、特別なチューブの末端が帽状腱膜下に位置するように、このチューブを腫瘍腔にインプラントする。チューブは半透性材料の種々のセグメントを含み、これはタウロリジン／タウルルタムを含み、帽状腱膜下ポートを介して補充され得る。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
新形成細胞の細胞消滅死を誘導する方法であって、前記細胞をアポトーシスを誘導する量のメチロール含有化合物に接触させる工程を含む、新形成細胞の細胞消滅死を誘導する方法。
【請求項２】
メチロール含有化合物は、タウロリジン、タウルルタム、タウロリジン誘導体、タウルルタム誘導体、タウリナミド誘導体、および尿素誘導体からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
メチロール含有化合物は、タウロリジン、タウルルタム、タウロリジン誘導体、およびタウルルタム誘導体から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
メチロール含有化合物は、タウロリジン、タウルルタム、またはそれらの混合物である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
メチロール移動剤はタウロリジンである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
タウロリジンは約２ｇから約３０ｇの１日の用量で投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
メチロール移動剤はタウルルタムである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
タウルルタムは約４ｇから約６０ｇの１日の用量で投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
第２の抗腫瘍薬の共投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
第２の抗腫瘍薬は５−フルオロ−ウラシルである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｆａｓリガンドの共投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
メチロール含有化合物は１日当り約１５０から４５０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
メチロール含有化合物は１日当り約３００から４５０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
５−フルオロ−ウラシルは１日当り約１００から５,０００ｍｇ／身体表面積１ｍ2の量で投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
５−フルオロ−ウラシルは１日当り約２００から１,０００ｍｇ／身体表面積１ｍ2の量で投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
Ｆａｓリガンドは１日当り約０．０１−１,０００ｍｇ／身体表面積１ｍ2の範囲内の量で投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
溶液はさらにタウリンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記タウリンは前記溶液中に約１−１０ｇ／ｌの範囲内の濃度で存在する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
癌は肝癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
メチロール移動剤は肝脈管を介して肝臓に直接投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
癌は原発性腫瘍であり、投与は肝動脈または胃十二指腸動脈を介して行なわれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
癌は転移性癌であり、投与は門脈を介して行なわれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
メチロール移動剤は少なくとも２つの投薬サイクル中に投与され、各投薬サイクルは１から約８日間の投与期を含み、その投与期の間、前記メチロール移動剤は１日の全用量の約２ｇから６０ｇの前記メチロール移動剤でもって毎日投与され、各投薬サイクルはさらに、約１から１４日間の非投与期を含み、その間、前記メチロール移動剤は哺乳動物に投与されない、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
投与期は、２４時間にわたってメチロール移動剤の１日投薬量の、連続注入としての注入を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
投与期は部分用量で連続してメチロール移動剤の１日投薬量を注入することを含み、部分用量の１回分を注入した後に、注入が行なわれない投薬中断時間が
設けられる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
部分用量は２４時間クールにわたって注入される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
部分用量は２４時間より短いクールにわたって注入される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
部分用量の１回分は２時間クールにわたって注入され、それに続いて４時間の投薬中断時間が設けられる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
部分用量の１回分は１時間クールにわたって注入され、それに続いて１時間の投薬中断時間が設けられる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
鎮痙薬、抗水腫薬、抗生物質薬、および電解質溶液からなる群より選択される少なくとも１つの補助的な薬剤の共投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
補助的な薬剤は電解質溶液である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
２投薬サイクルを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
各投薬サイクルは、２４時間にわたる連続的な注入として２％のタウロリジン２５０ｍｌ用量を１日４回注入する７日間の注入期と、７日間の非投与期とを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
４投薬サイクルを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
各投薬サイクルは、２％のタウロリジン２５０ｍｌ用量を１日４回注入する７日間の注入期を含み、投薬量の１回分は約１から２時間クールで注入され、それに続いて約１時間の非投与投薬中断時間が設けられる、請求項３４に記載の方法。
【請求項１】
新形成細胞の細胞消滅死を誘導する方法であって、前記細胞をアポトーシスを誘導する量のメチロール含有化合物に接触させる工程を含む、新形成細胞の細胞消滅死を誘導する方法。
【請求項２】
メチロール含有化合物は、タウロリジン、タウルルタム、タウロリジン誘導体、タウルルタム誘導体、タウリナミド誘導体、および尿素誘導体からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
メチロール含有化合物は、タウロリジン、タウルルタム、タウロリジン誘導体、およびタウルルタム誘導体から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
メチロール含有化合物は、タウロリジン、タウルルタム、またはそれらの混合物である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
メチロール移動剤はタウロリジンである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
タウロリジンは約２ｇから約３０ｇの１日の用量で投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
メチロール移動剤はタウルルタムである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
タウルルタムは約４ｇから約６０ｇの１日の用量で投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
第２の抗腫瘍薬の共投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
第２の抗腫瘍薬は５−フルオロ−ウラシルである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ｆａｓリガンドの共投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
メチロール含有化合物は１日当り約１５０から４５０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
メチロール含有化合物は１日当り約３００から４５０ｍｇ／ｋｇの投薬量で投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
５−フルオロ−ウラシルは１日当り約１００から５,０００ｍｇ／身体表面積１ｍ2の量で投与される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
５−フルオロ−ウラシルは１日当り約２００から１,０００ｍｇ／身体表面積１ｍ2の量で投与される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
Ｆａｓリガンドは１日当り約０．０１−１,０００ｍｇ／身体表面積１ｍ2の範囲内の量で投与される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
溶液はさらにタウリンを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記タウリンは前記溶液中に約１−１０ｇ／ｌの範囲内の濃度で存在する、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
癌は肝癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
メチロール移動剤は肝脈管を介して肝臓に直接投与される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
癌は原発性腫瘍であり、投与は肝動脈または胃十二指腸動脈を介して行なわれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
癌は転移性癌であり、投与は門脈を介して行なわれる、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
メチロール移動剤は少なくとも２つの投薬サイクル中に投与され、各投薬サイクルは１から約８日間の投与期を含み、その投与期の間、前記メチロール移動剤は１日の全用量の約２ｇから６０ｇの前記メチロール移動剤でもって毎日投与され、各投薬サイクルはさらに、約１から１４日間の非投与期を含み、その間、前記メチロール移動剤は哺乳動物に投与されない、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
投与期は、２４時間にわたってメチロール移動剤の１日投薬量の、連続注入としての注入を含む、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
投与期は部分用量で連続してメチロール移動剤の１日投薬量を注入することを含み、部分用量の１回分を注入した後に、注入が行なわれない投薬中断時間が
設けられる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
部分用量は２４時間クールにわたって注入される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
部分用量は２４時間より短いクールにわたって注入される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
部分用量の１回分は２時間クールにわたって注入され、それに続いて４時間の投薬中断時間が設けられる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
部分用量の１回分は１時間クールにわたって注入され、それに続いて１時間の投薬中断時間が設けられる、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
鎮痙薬、抗水腫薬、抗生物質薬、および電解質溶液からなる群より選択される少なくとも１つの補助的な薬剤の共投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
補助的な薬剤は電解質溶液である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
２投薬サイクルを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
各投薬サイクルは、２４時間にわたる連続的な注入として２％のタウロリジン２５０ｍｌ用量を１日４回注入する７日間の注入期と、７日間の非投与期とを含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
４投薬サイクルを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
各投薬サイクルは、２％のタウロリジン２５０ｍｌ用量を１日４回注入する７日間の注入期を含み、投薬量の１回分は約１から２時間クールで注入され、それに続いて約１時間の非投与投薬中断時間が設けられる、請求項３４に記載の方法。
【公開番号】特開２００９−１３８００３（Ｐ２００９−１３８００３Ａ）
【公開日】平成２１年６月２５日（２００９．６．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２２８９２（Ｐ２００９−２２８９２）
【出願日】平成２１年２月３日（２００９．２．３）
【分割の表示】特願２００２−１００４０４（Ｐ２００２−１００４０４）の分割
【原出願日】平成１４年４月２日（２００２．４．２）
【出願人】（５０１２５７１７４）エー・デー・ガイストリヒ・ゾーネ・アクチェンゲゼルシャフト・フュール・ヒェーミシェ・インダストリー (4)
【氏名又は名称原語表記】ＥＤ． ＧＥＩＳＴＬＩＣＨ ＳＯＥＨＮＥ ＡＧ ＦＵＥＲ ＣＨＥＭＩＳＣＨＥ ＩＮＤＵＳＴＲＩＥ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年６月２５日（２００９．６．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年２月３日（２００９．２．３）
【分割の表示】特願２００２−１００４０４（Ｐ２００２−１００４０４）の分割
【原出願日】平成１４年４月２日（２００２．４．２）
【出願人】（５０１２５７１７４）エー・デー・ガイストリヒ・ゾーネ・アクチェンゲゼルシャフト・フュール・ヒェーミシェ・インダストリー (4)
【氏名又は名称原語表記】ＥＤ． ＧＥＩＳＴＬＩＣＨ ＳＯＥＨＮＥ ＡＧ ＦＵＥＲ ＣＨＥＭＩＳＣＨＥ ＩＮＤＵＳＴＲＩＥ
【Ｆターム（参考）】
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