新規ＮＳＡＩＤ潰瘍リスク判定方法
【課題】
本発明の目的は、簡便かつ迅速な、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法を提供することにある。
【解決手段】
本発明は、同位体で標識された非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を服用した被験者より単離されたサンプル中の、同位体標識代謝物と同位体標識されていない代謝物の濃度比を求める工程を含む、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法に関する。
本発明の目的は、簡便かつ迅速な、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法を提供することにある。
【解決手段】
本発明は、同位体で標識された非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を服用した被験者より単離されたサンプル中の、同位体標識代謝物と同位体標識されていない代謝物の濃度比を求める工程を含む、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被験者において、薬物の副作用のリスクを予測する方法に関する。詳しくは、同位体で標識された非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を服用した被験者より単離されたサンプル中の、同位体標識代謝物と同位体標識されていない代謝物の濃度比を求める工程を含む、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ；Ｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｒｕｇ）は、シクロオキシゲナーゼの活性を阻害してプロスタグランジンの産生を抑制することにより、抗炎症、鎮痛、解熱作用を現し、広く使用されている薬物である。しかし、上記の作用とともに、ＮＳＡＩＤを服用すると、プロスタグランジンの産生が抑制されて胃粘膜をはじめとした消化管粘膜の防御機構が傷害されるため、胃等の消化管粘膜が傷害をうける。このような症状は、ＮＳＡＩＤの有する副作用の一つであり、ＮＳＡＩＤ潰瘍やＮＳＡＩＤの消化管病変（以下、ＮＳＡＩＤ潰瘍で統一）とよばれる。
【０００３】
ＮＳＡＩＤ潰瘍を予防するため、抗潰瘍薬であるプロスタグランジン製剤、ヒスタミンＨ２受容体拮抗薬、プロトンポンプ阻害薬が用いられるが、ＮＳＡＩＤを内服した患者の全例に粘膜傷害が生じるわけではない。ＮＳＡＩＤを内服しても粘膜傷害が生じない、もしくは殆ど軽微である患者から重篤な粘膜傷害を生じる患者まで様々である。また、予防目的で内服する上記薬物にも副作用の出現する可能性があり、例えば、現在、ＮＳＡＩＤの長期服用による胃・十二指腸潰瘍に対して適応を有する抗潰瘍薬はプロスタグランジン製剤のミソプロストールのみであるが、かなり高率に消化器症状を起こすため、コンプライアンスの低下を招きやすい（医療情報サービスＭｉｎｄｓ）。また、プロトンポンプ阻害薬やヒスタミンＨ２受容体拮抗薬は高価な薬物であり、さらに長期投与に伴う副作用の報告も散見され、全く問題がないわけではない。従って、ＮＳＡＩＤ投与に際してのリスクに応じた予防薬の投与ができれば、安全性、医療経済的にも優れると考えられる。しかし、ＮＳＡＩＤの投与に際しての有効なリスクの予測マーカーが存在していない。
【０００４】
確かに、これまでに、ＮＳＡＩＤ潰瘍のリスクファクターとしては、高齢、複数のＮＳＡＩＤの使用、抗凝固薬の併用、潰瘍の既往等が挙げられているが、そのような判断基準では十分に個別のリスクを判断することが困難であるのが現状である。
【０００５】
一方、最近の研究では、ＣＹＰ２Ｃ９の遺伝子多型がＮＳＡＩＤの代謝に影響することが報告され（Ｋｉｒｃｈｈｅｉｎｅｒ Ｊ ｅｔ ａｌ、２００２）、さらにＣＹＰ２Ｃ９の遺伝子多型がＮＳＡＩＤ潰瘍リスクと関連することが報告された（Ｐｉｌｏｔｔｏ Ａ ｅｔ ａｌ，２００７）。ＣＹＰ２Ｃ９は、チトクロームＰ４５０（ＣＹＰ）のサブファミリーの１つで、抗てんかん薬のフェニトインや抗凝固薬のワルファリン、糖尿病治療薬のグリピジド等の代謝に関与する酵素である。これらの報告によると、ＮＳＡＩＤの代謝が遅く、血中に長くＮＳＡＩＤが遷延するタイプにおいて、潰瘍リスクが高い。しかし、ＮＳＡＩＤの代謝には複数の代謝酵素が関わっており、単一の代謝酵素の多型検査のみでは十分予測できない。特に、本邦におけるＣＹＰ２Ｃ９の変異遺伝子の頻度は非常に低く、この遺伝子の多型検査をもって本邦における個々のＮＳＡＩＤ潰瘍リスクを推し量ることは難しい。また、薬物の血中濃度を測定する薬物動態の検査は、当該薬物内服後の頻回に採血し、さらにそれを処理してから測定するものであり、簡便性、迅速性に欠け、日常臨床での応用は困難である。
【０００６】
以上の通り、ＮＳＡＩＤの服用により高率で発生するＮＳＡＩＤ潰瘍について、有効かつ効率的な予防法および治療法は確立されておらず、また、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症リスクを予測する、簡便かつ迅速な検査方法も確立されていない。一律に予防薬を投与するという非効率的な方法が行われつつある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２００８−５３８２７５
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】医療情報サービスＭｉｎｄｓ（http://minds.jcqhc.or.jp/stc/0009/1/0009_G0000138_0024.html）
【非特許文献２】Kirchheiner J, Meineke I, Freytag G, Meisel C, Roots I, Brockmoller J. Enantiospecific effects of cytochrome P450 2C9 amino acid variants on ibuprofen pharmacokinetics and on the inhibition of cyclooxygenases 1 and 2. Clin Pharmacol Ther 2002;72(1):62-75
【非特許文献３】Pilotto A, Seripa D, Franceschi M, Scarcelli C, Colaizzo D, Grandone E, et al. Genetic susceptibility to nonsteroidal anti-inflammatory drug-related gastroduodenal bleeding: role of cytochrome P450 2C9 polymorphisms. Gastroenterology 2007;133(2):465-471
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、簡便かつ迅速な、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記目的を達成するため、発明者らはＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性の評価をＮＳＡＩＤの代謝速度という観点から検討した。具体的には、発明者らは１３Ｃで標識したナプロキセンを被験者に投与して呼気中１３ＣＯ２濃度を測定し、１３ＣＯ２濃度が低い場合に胃粘膜傷害がひどく、１３ＣＯ２濃度が高い場合に胃粘膜傷害が軽度であることを見出し、かかる現象に基づき本発明を完成させた。
【００１１】
すなわち、本発明は、被験者において、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法であって、
（ａ）同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれらと同様な薬物動態を呈する物質を投与される前および投与された後の被験者から単離されたサンプル中に含まれる、同位体標識代謝物の濃度および標識されていない代謝物の濃度を測定する工程、
（ｂ）同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれらと同様な薬物動態を呈する物質の投与前後における、同位体標識代謝物の濃度の、標識されていない代謝物の濃度に対する割合を算定する工程、および
（ｃ）工程（ｂ）により算定された、同位体標識代謝物の濃度の、同位体標識されていない代謝物の濃度に対する割合の、投与前後の変化に基づいて、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を判定する工程
を含む、該方法に関する。
【００１２】
前記方法は、さらに、同位体で標識されたＮＳＡＩＤおよびそれらと同様な薬物動態を呈する物質を調製する工程を含んでもよい。
【００１３】
本発明において、前記同位体は、１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏ、Ｄ、１５Ｎ、３７Ｃｌ、３３Ｓ、３４Ｓ、および３６Ｓからなる群から選択することができる。
【００１４】
本発明において、前記同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれらと同様な薬物動態を呈する物質は、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｂ、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ２Ｃ８、ＵＧＴ１Ａ６、およびＵＧＴ１Ａ１からなる群から選択される代謝酵素により代謝される化合物とすることができる。
【００１５】
また、本発明において、前記同位体で標識されたＮＳＡＩＤは、アスピリン、サリチル酸、メフェナム酸、インドメタシン、ジクロフェナク、エトドラク、スリンダク、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン、カルプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、ピロキシカム、アンピロキシカム、メロキシカム、ロルノキシカム、セレコキシブ、フルニキシンおよびそれらの塩からなる群から選択することができる。
【００１６】
前記同位体で標識されたＮＳＡＩＤは、次の構造
【化１】
を有するナプロキセンとすることができ、本発明においてかかる化合物を使用すると、同位体標識代謝物として１３Ｃ標識ＣＯ２が生じる。
【００１７】
前記被験者から単離されたサンプルは、呼気、血液、尿、または唾液から選択することができる。サンプルを呼気とする場合、呼気試験により同位体標識代謝物の濃度および標識されていない代謝物の濃度を測定してもよい。
【００１８】
また、本発明は、同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質を含有し、被験者に投与した後に同位体標識代謝物を生成する能力を有する、被験者におけるＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するための医薬組成物を提供する。
【００１９】
本発明において、前記同位体は１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏ、Ｄ、１５Ｎ、３７Ｃｌ、３３Ｓ、３４Ｓ、および３６Ｓからなる群から選択することができる。
【００２０】
本発明において、前記同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｂ、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ２Ｃ８、ＵＧＴ１Ａ６、およびＵＧＴ１Ａ１からなる群から選択される代謝酵素により代謝される化合物とすることができる。
【００２１】
また、本発明において、同位体で標識されたＮＳＡＩＤは、アスピリン、サリチル酸、メフェナム酸、インドメタシン、ジクロフェナク、エトドラク、スリンダク、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン、カルプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、ピロキシカム、アンピロキシカム、メロキシカム、ロルノキシカム、セレコキシブ、フルニキシンおよびそれらの塩からなる群から選択することができる。
【００２２】
前記同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、次の構造
【化２】
を有するナプロキセンとすることができる。
【００２３】
さらに、本発明は、前記医薬組成物を含む、被験者においてＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するためのキットも提供する。
【発明の効果】
【００２４】
本発明により、個々の被験者について、簡便かつ迅速にＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測することが可能となった。本発明によって、医師は、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害を回避し、かつ薬効を上げるために、個々の患者に対して薬物、特にＮＳＡＩＤの選択とその投与量を決定することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】１３Ｃ−ナプロキセン内服後の呼気中１３ＣＯ２の推移を、ナプロキセン内服後の胃粘膜傷害の程度別に示す。
【図２】１３Ｃ−ナプロキセン内服後のＡＵＣ０−２ｈを、ナプロキセン内服後の胃粘膜傷害の程度別に示す。
【図３】胃粘膜傷害の程度を、１３Ｃ−ナプロキセン呼気試験の値別に示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明は、被験者において、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測する方法に関する。詳しくは、同位体で標識されたＮＳＡＩＤを服用した被験者より単離されたサンプル中の、同位体標識代謝物と同位体標識されていない代謝物の濃度比を求める工程を含む、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法に関する。
【００２７】
１．定義
「ＮＳＡＩＤ」は「Ｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｒｕｇ」の略であり、非ステロイド性抗炎症薬を指す。ＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼの活性を阻害してプロスタグランジンの産生を抑制することにより、抗炎症、鎮痛、解熱作用を現し、鎮痛薬、解熱薬、抗凝固薬、またはアポトーシス誘導薬等として、広く適用される薬物である。
【００２８】
ＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼの活性を阻害してプロスタグランジンの産生を抑制するため、潰瘍、嘔吐、食欲不振、および血便などの胃腸傷害、腎傷害、ならびに止血不全等の副作用を有する。「ＮＳＡＩＤ潰瘍」とは、そのような副作用の一つであり、ＮＳＡＩＤの服用により生じる消化性潰瘍を指す。ＮＳＡＩＤ潰瘍は服用初期に多く発生し、特に最初の１週間に高率で発生する。
【００２９】
本発明において、「消化管傷害」とは、胃粘膜病変（糜爛、出血、浮腫）、胃潰瘍、および胃部の近接部位である十二指腸を含む上部消化管や、小腸、大腸における粘膜傷害の総称である。
【００３０】
「同位体」とは、同じ原子番号において質量が異なる核種をいい、化学的には同じ性質を有する。陽子数および電子数は同じであるが、中性子数が異なる。同位体には、不安定で、放射壊変を起こす放射性同位体と、安定に存在する安定同位体がある。
【００３１】
本発明において、「被験者」とは、好ましくはヒトのような哺乳類である。ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ等の家畜や、サル、ラット、ネズミ等の実験動物でもよい。
【００３２】
チトクロームＰ４５０（ＣＹＰ）は、本来ステロイド、プロスタグランジン、脂肪酸などの内在性化合物の代謝を触媒する酵素であるが、薬物の第１相代謝に関与する最も重要な酵素でもある。分子多様性があり、多くのサブファミリー酵素が存在する。薬物に対する反応性の個人差は、ＣＹＰファミリー群の遺伝子多型が原因の一つであると考えられている。「ＣＹＰ２Ｃ９」、「ＣＹＰ３Ａ４」、「ＣＹＰ２Ｂ」、「ＣＹＰ２Ｅ１」、および「ＣＹＰ２Ｃ８」とは、それぞれこのようなＣＹＰのサブファミリー酵素の一つである。ＣＹＰ２Ｃ９は、抗てんかん薬のフェニトインや抗凝固薬のワルファリン、糖尿病治療薬のグリピジド等の代謝に関与しており、その遺伝的欠損者について、血中濃度時間曲線下面積の上昇、半減期の延長などが報告されている。ＣＹＰ３Ａ４は、免疫抑制剤のシクロスポリン等の代謝、ＣＹＰ２Ｂは、催眠薬のペントバルビタール等の代謝、ＣＹＰ２Ｅ１は喘息治療薬のテオフィリン等の代謝、ＣＹＰ２Ｃ８は抗悪性腫瘍薬のパクリタキセル等の代謝にも関与することが知られている。
【００３３】
ＵＤＰ−グルクロン酸転移酵素（ＵＧＴ）は、脂肪族、芳香族アルコールやカルボン酸などへのグルクロン酸付加を触媒してグルクロン酸抱合体を生成する酵素であり、薬物の第２相代謝に関与する。薬物はグルクロン酸抱合によって極性が高まるばかりでなく、胆汁や腎での有機アニオン輸送系も関係して排泄が促進される。ＵＧＴには遺伝子多型が存在し、それにより酵素活性が異なることが知られている。「ＵＧＴ１Ａ１」および「ＵＧＴ１Ａ６」は、ＵＧＴの一つであり、ＵＧＴ１Ａ１は抗悪性腫瘍薬のイリノテカン等の代謝に、ＵＧＴ１Ａ６は抗炎症薬のアスピリン等の代謝にも関与することが知られている。
【００３４】
２．ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測する方法
本発明は、被験者において、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測する方法に関する。
【００３５】
（１）調製工程
本発明では、ＮＳＡＩＤは、その代謝物、例えば二酸化炭素や水が同位体を含むように、同位体で標識される。
【００３６】
ＮＳＡＩＤを標識するため、炭素原子または酸素原子の同位体が用いられる。同位体は、１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏ、Ｄ、１５Ｎ、３７Ｃｌ、３３Ｓ、３４Ｓ、または３６Ｓ等を使用することができる。本発明においては、安定同位体が好ましく使用される。ここで、１３Ｃは商業的に販売されていて比較的安価に入手でき、安定同位体であるのに対し、１４Ｃは放射性同位体であるため、好ましくは１３Ｃが用いられる。他に一般的に使用される放射性同位体は、１８Ｏである。
【００３７】
本発明においては、任意のＮＳＡＩＤ、例えば、サリチル酸誘導体、ピラゾロン誘導体、パラアミノフェノール誘導体、インドール誘導体、フェンタメーツ、トルメチン、プロピオン酸誘導体、オキシカム誘導体、フェニル酢酸誘導体、サイトカイン阻害薬、シクロオキシゲナーゼ阻害薬および選択的シクロオキシゲナーゼ−１阻害薬ならびにシクロオキシゲナーゼ−２阻害薬等を使用することができる。ここで、サリチル酸誘導体はアセチルサリチル酸、ジフルニサル、サルサラト、サリチル酸ナトリウム、サリチルアミド、チオサリチル酸ナトリウム、サリチル酸コリン、サリチル酸マグネシウム、メサラミン、スルファサラジンおよびサリチル酸メチルよりなるグループから選択することができ、ピラゾロン誘導体はフェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、アンチピリン、アミノピリン、ジピロンおよびアパゾンよりなるグループから選択することができ、パラアミノフェノール誘導体はフェナセチンおよびアセタミノフェンよりなるグループから選択することができ、インドール誘導体はインドメタシンおよびスリンダクよりなるグループから選択することができ、フェナメートはメフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸およびエトフェナム酸ならびにそれらの薬理許容塩類よりなるグループから選択することができ、プロピオン酸誘導体はイブプロフェン、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フェンブフェン、ミロプロフェン、コルプロフェン、ピルプロフェン、オキサプロジン、インドプロフェンおよびチアプロフェン酸ならびにそれらの薬理許容塩類よりなるグループから選択することができ、オキシカム誘導体はピロキシカム、イソキシカム、アンピロキシカム、テノキシカムおよび関連化合物テニダップよりなるグループから選択することができ、フェニル酢酸誘導体はトルメチンあるいはジクロフェナクおよびそれらの薬理許容塩類から選択することができ、シクロオキシゲナーゼ阻害薬はエトドラクおよびナブメトンよりなるグループから選択することができ、選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬はＣＧＰ２８２３８（６−（２，４−ジフルオロフェノキシ）−５−メチル−スルホニルアミノ−１−インダノン）、ＳＣ−５８１２５（１−〔（４−メチルスルホニル）フェニル〕−３−トリフルオロメチル−５−（４−フルオロフェニル）ピラゾール）、ＮＳ−３９８（Ｎ−〔２−（シクロへキシルオキシ）−４−ニトロ−フェニル〕メタンスルホンアミド）、ＤｕＰ６９７（５−ブロモ−２−（フルオロフェニル）−３−（４−メチルスルホニルフェニル）チオフェン）、Ｌ−７４５，３３７（５−メタンスルホンアミダ−６−（２，４−ジフルオロチオフェニル）−１−インダノン）、１，２−置換ジアリルシクロペンテン類似体例えば１−〔２−（４−フルオロフェニル）シクロペンテン−１−イル〕−４−（メチルスルホニル）ベンゼン、およびキナゾリノン例えばプロカゾンよりなるグループから選択することができる。
【００３８】
本発明は、薬物の代謝に着目してなされた発明であるので、ＮＳＡＩＤと同様の薬物動態を呈する物質であれば、本発明において使用することができる。同じ薬物動態を示す薬物としては、例えば、ワルファリンとベンズブロマロンが挙げられる。
【００３９】
（２）投与工程
本発明においては、まず、同位体で標識されたＮＳＡＩＤが被験者に投与される。ＮＳＡＩＤは、静脈内、皮内、皮下、経口、経粘膜、および直腸投与など、当業者に周知の経路で投与することができる。
【００４０】
（３）単離工程
本発明においては、同位体標識ＮＳＡＩＤを投与される前および投与された後において、被験者よりサンプルを採取する。かかるサンプルは、被験者より通常採取されるサンプルであり、例えば、呼気、血液、尿、唾液、またはその他体液を用いることができる。特に、簡便で、頻回の測定も容易であることから、呼気が好ましく使用される。
【００４１】
（４）測定工程
本発明において、投与前後の各サンプルについて、同位体標識代謝物および標識されていない代謝物の濃度を測定し、同位体比を求める。
【００４２】
本発明の一の態様において、代謝物の同位体比を求めるために、分光学的な測定を行う。液体シンチレーションカウンティング、質量分析法、赤外分析法、発光分光分析法、核磁気共鳴法等の当業者に周知の方法を使用して測定することができるが、これらの分析法は、使用した同位体が安定同位体であるか放射性同位体であるかによって選択される。
【００４３】
別の態様においては、単離工程および測定工程において、呼気試験が好ましく用いられる。薬物の代謝により発生した二酸化炭素は、血液中から肺へ移行し、呼気中に炭酸ガスとして排泄されるため、同位体標識代謝物が１３ＣＯ２であるとき、薬物の代謝速度が速ければ呼気中の１３ＣＯ２が多く検出され、遅ければ１３ＣＯ２はあまり検出されない。よって、呼気試験では、被験者の呼気を採取し、呼気中に含まれる同位体標識されている二酸化炭素の濃度および同位体標識されていない二酸化炭素の濃度を測定する。このように、呼気試験は、非侵襲的で被験者への負担がなく、簡便であるため、薬物動態検査に必要な頻回の検査を容易に行うことができる。呼気試験は、公知の方法によって行うことができる（特表２００８−５３８２７５）。
【００４４】
（５）判定工程
発明者らは、１３Ｃで標識されたナプロキセン投与後の同位体標識代謝物の濃度が低いほど、胃粘膜傷害が重症化しているという相関関係を見出した。
【００４５】
この知見に基づき、本発明は、上記工程により得られた、被験者における代謝物の同位対比の経時変化、または該経時変化から得られる薬物動態パラメーターを求め、胃粘膜傷害非発症者（例えば、粘膜傷害を来さない人）における対応の代謝物の同位対比の経時変化または薬物動態パラメーターと比較して、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を判定する。すなわち、同位体標識代謝物の経時の排出量または排出速度の挙動、時間曲線下面積（ＡＵＣ：Ａｒｅａ Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ Ｃｕｒｖｅ）、代謝速度、特定の時点でのベースラインに対するデルタ（ＤＯＢ：Ｄｅｌｔａ−Ｏｖｅｒ−Ｂａｓｅｌｉｎｅ）を、対応する胃粘膜傷害非発症者のパラメーターと比較して有意に低値の場合に、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性が高いと判定する。例えば、胃粘膜傷害非発症者のパラメーターの平均値を基準値とし、かかる基準値よりも有意に低値の場合に、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性が高いと判定する。
【００４６】
一の実施態様において、ＮＳＡＩＤ投与後の時間に対して測定された同位体標識代謝物と同位体標識されていない代謝物の濃度比をプロットし、得られた曲線のＡＵＣを用いて判定を行う。
【００４７】
また、別の実施態様において、下記の式に従って特定の時点でのＤＯＢを求めて定量化し、判定を行う。
（式１）
【００４８】
３．ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するための医薬組成物
本発明の医薬組成物は、上記２．（１）に示した同位体標識されたＮＳＡＩＤを主成分として含む。該医薬組成物は、本発明の作用および効果を損なわない限り、薬学的に許容可能な担体、または剤型によって当該技術分野において一般的に使用される添加剤をさらに含んでもよい。添加剤として、例えば、着色剤、保存剤、風味剤、香り改善剤、呈味改善剤、甘味剤、または安定剤、その他薬学的に許容される添加剤を含有することができる。
【００４９】
一の実施態様において、同位体標識されたナプロキセンを主成分とする医薬組成物は、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測するために、同位体標識されたナプロキセンが５０〜１０００ｍｇ／日、好ましくは１５０〜８００ｍｇ／日、より好ましくは３００〜６００ｍｇ／日となるように、被験者に投与される。
【００５０】
４．ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するためのキット
本発明のキットは、上記２．欄で説明したＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するための方法を実施するためのものであればよく、これに含まれる具体的な構成、材料、機器などは特に限定されるものではない。
【００５１】
本発明のキットは、上記３．欄で説明したＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するための医薬組成物を含む。本発明の一の態様では、呼気試験を行うための呼気収集バックまたは呼気採取チューブ、および説明書を含んでもよい。
【００５２】
以下、実施例をもって本発明をさらに詳しく説明するが、これらの実施例は本発明を制限するものではない。
【実施例】
【００５３】
１３Ｃ−ナプロキセンを用いた、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法
ナプロキセンはＮＳＡＩＤの一つであり、ＣＹＰ２Ｃ９で代謝され、その際二酸化炭素を発生するので、１３Ｃで標識されたナプロキセン（１３Ｃ−ナプロキセン）を投与すると、下記のように代謝され、代謝物として１３ＣＯ２が発生する。
【００５４】
【化３】
【００５５】
従って、内服後に呼気中に排出される１３ＣＯ２を測定すると、それは、ナプロキセンの動態を反映すると考えられる。すなわち、呼気中で検出される１３ＣＯ２濃度が高ければ、代謝が進んでいることを示しており、ナプロキセンの血中からの消失が早いと考えられる。一方、呼気中の１３ＣＯ２濃度が低ければ、代謝が進んでいないことを示しており、従って、ナプロキセンは血中に長く遷延すると考えられる。ナプロキセンが長く血中に存在すれば、それだけ効果も期待できるが、副作用のリスクも高くなることとなる。
【００５６】
そこで、発明者らは、ナプロキセン内服によるＮＳＡＩＤ潰瘍の発症とナプロキセンの代謝速度との関係について、呼気試験により検討を行った。
【００５７】
１．実験方法
健常ボランティア１５名を被験者として、ナプロキセン６００ｍｇ／日を３日間経口投与し、投与前後において、胃カメラまたはカプセル内視鏡を用いて内視鏡検査を行い、胃粘膜傷害の程度を評価した。内視鏡所見の評価法として、ＬＡＮＺＡスコアを用いた。ＬＡＮＺＡスコアでは、健常な状態から潰瘍が形成されている状態までを０から４の５段階のグレードに分類して、胃粘膜傷害の程度を評価する。
【００５８】
また、同じ被験者に対し、１３Ｃ−ナプロキセン３００ｍｇを経口投与した後に頻回呼気を採取し、各時点における呼気中の１３Ｃで標識された二酸化炭素濃度の、標識されていない二酸化炭素の濃度に対する割合（１３ＣＯ２／ＣＯ２ （Δ１３ＣＯ２（‰）））を求めた。呼気試験の結果はＤＯＢおよびＡＵＣを用いて評価した。なお、胃粘膜傷害の程度別にＡＵＣを求めた実験においては、内服後０、０．５、１、１．５、２時間後に採取した呼気についてのデータを解析した。
【００５９】
上記の方法に従って得られた、呼気試験の結果と内視鏡所見との間に相関関係が存在するかどうか、検討を行った。
【００６０】
２．結果
ナプロキセン内服後の胃粘膜傷害の程度別に、１３Ｃ−ナプロキセン内服後の呼気中１３ＣＯ２の推移を示したところ、胃粘膜傷害が軽症な被験者群が最も１３ＣＯ２／ＣＯ２が高値で、胃粘膜傷害が重症な被験者群が最も１３ＣＯ２／ＣＯ２が低値であった（図１）。特に１３Ｃ−ナプロキセン内服後２時間程度までにおいて、かかる違いが明らかであった。
【００６１】
ナプロキセン内服後の胃粘膜傷害の程度別に、１３Ｃ−ナプロキセン内服後のＡＵＣ０−２ｈを示したところ、胃粘膜傷害が軽症な被験者群が最もＡＵＣ０−２ｈが高値で、胃粘膜傷害が重症な被験者群が最もＡＵＣ０−２ｈが低値であり、胃粘膜傷害が軽症な被験者群の値は重症な被験者群の値よりも有意に高かった（図２）。
【００６２】
１３Ｃ−ナプロキセン呼気試験の値を、５例ずつ順に低値、中間値、高値とし、各値群ごとに胃粘膜傷害の程度を示したところ、低値群の粘膜傷害は、高値群に比して有意に高かった（図３）。
【００６３】
以上より、１３Ｃ−ナプロキセン内服後の呼気中の１３ＣＯ２が低い場合に胃粘膜傷害がひどく、１３ＣＯ２が高ければ、胃粘膜傷害が軽度であることが明らかとなった。よって、１３Ｃ−ナプロキセン呼気試験は、ナプロキセンの副作用、特に胃粘膜傷害のリスクの予測マーカーになることが示された。
【００６４】
ナプロキセン以外のＮＳＡＩＤとして、ジクロフェナックナトリウム、インドメタシンを検討したところ、１３Ｃ−ナプロキセン呼気試験の結果は、これらＮＳＡＩＤによる胃粘膜傷害の結果と良く相関し、本検査方法は、ＮＳＡＩＤ全般の胃粘膜傷害の予測マーカーとなりうると考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００６５】
本発明により、個々の被験者について、遺伝子診断等を行わずとも、簡便かつ迅速にＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測することができる。本発明によって、医師は、ＮＳＡＩＤ潰瘍を回避し、かつ薬効を上げるために、個々の患者に対して薬物、特にＮＳＡＩＤの選択とその投与量を決定したり、予防薬の投与をすることが可能となるので、本発明は臨床的な有用性が高い。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、被験者において、薬物の副作用のリスクを予測する方法に関する。詳しくは、同位体で標識された非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）を服用した被験者より単離されたサンプル中の、同位体標識代謝物と同位体標識されていない代謝物の濃度比を求める工程を含む、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ；Ｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｒｕｇ）は、シクロオキシゲナーゼの活性を阻害してプロスタグランジンの産生を抑制することにより、抗炎症、鎮痛、解熱作用を現し、広く使用されている薬物である。しかし、上記の作用とともに、ＮＳＡＩＤを服用すると、プロスタグランジンの産生が抑制されて胃粘膜をはじめとした消化管粘膜の防御機構が傷害されるため、胃等の消化管粘膜が傷害をうける。このような症状は、ＮＳＡＩＤの有する副作用の一つであり、ＮＳＡＩＤ潰瘍やＮＳＡＩＤの消化管病変（以下、ＮＳＡＩＤ潰瘍で統一）とよばれる。
【０００３】
ＮＳＡＩＤ潰瘍を予防するため、抗潰瘍薬であるプロスタグランジン製剤、ヒスタミンＨ２受容体拮抗薬、プロトンポンプ阻害薬が用いられるが、ＮＳＡＩＤを内服した患者の全例に粘膜傷害が生じるわけではない。ＮＳＡＩＤを内服しても粘膜傷害が生じない、もしくは殆ど軽微である患者から重篤な粘膜傷害を生じる患者まで様々である。また、予防目的で内服する上記薬物にも副作用の出現する可能性があり、例えば、現在、ＮＳＡＩＤの長期服用による胃・十二指腸潰瘍に対して適応を有する抗潰瘍薬はプロスタグランジン製剤のミソプロストールのみであるが、かなり高率に消化器症状を起こすため、コンプライアンスの低下を招きやすい（医療情報サービスＭｉｎｄｓ）。また、プロトンポンプ阻害薬やヒスタミンＨ２受容体拮抗薬は高価な薬物であり、さらに長期投与に伴う副作用の報告も散見され、全く問題がないわけではない。従って、ＮＳＡＩＤ投与に際してのリスクに応じた予防薬の投与ができれば、安全性、医療経済的にも優れると考えられる。しかし、ＮＳＡＩＤの投与に際しての有効なリスクの予測マーカーが存在していない。
【０００４】
確かに、これまでに、ＮＳＡＩＤ潰瘍のリスクファクターとしては、高齢、複数のＮＳＡＩＤの使用、抗凝固薬の併用、潰瘍の既往等が挙げられているが、そのような判断基準では十分に個別のリスクを判断することが困難であるのが現状である。
【０００５】
一方、最近の研究では、ＣＹＰ２Ｃ９の遺伝子多型がＮＳＡＩＤの代謝に影響することが報告され（Ｋｉｒｃｈｈｅｉｎｅｒ Ｊ ｅｔ ａｌ、２００２）、さらにＣＹＰ２Ｃ９の遺伝子多型がＮＳＡＩＤ潰瘍リスクと関連することが報告された（Ｐｉｌｏｔｔｏ Ａ ｅｔ ａｌ，２００７）。ＣＹＰ２Ｃ９は、チトクロームＰ４５０（ＣＹＰ）のサブファミリーの１つで、抗てんかん薬のフェニトインや抗凝固薬のワルファリン、糖尿病治療薬のグリピジド等の代謝に関与する酵素である。これらの報告によると、ＮＳＡＩＤの代謝が遅く、血中に長くＮＳＡＩＤが遷延するタイプにおいて、潰瘍リスクが高い。しかし、ＮＳＡＩＤの代謝には複数の代謝酵素が関わっており、単一の代謝酵素の多型検査のみでは十分予測できない。特に、本邦におけるＣＹＰ２Ｃ９の変異遺伝子の頻度は非常に低く、この遺伝子の多型検査をもって本邦における個々のＮＳＡＩＤ潰瘍リスクを推し量ることは難しい。また、薬物の血中濃度を測定する薬物動態の検査は、当該薬物内服後の頻回に採血し、さらにそれを処理してから測定するものであり、簡便性、迅速性に欠け、日常臨床での応用は困難である。
【０００６】
以上の通り、ＮＳＡＩＤの服用により高率で発生するＮＳＡＩＤ潰瘍について、有効かつ効率的な予防法および治療法は確立されておらず、また、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症リスクを予測する、簡便かつ迅速な検査方法も確立されていない。一律に予防薬を投与するという非効率的な方法が行われつつある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２００８−５３８２７５
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】医療情報サービスＭｉｎｄｓ（http://minds.jcqhc.or.jp/stc/0009/1/0009_G0000138_0024.html）
【非特許文献２】Kirchheiner J, Meineke I, Freytag G, Meisel C, Roots I, Brockmoller J. Enantiospecific effects of cytochrome P450 2C9 amino acid variants on ibuprofen pharmacokinetics and on the inhibition of cyclooxygenases 1 and 2. Clin Pharmacol Ther 2002;72(1):62-75
【非特許文献３】Pilotto A, Seripa D, Franceschi M, Scarcelli C, Colaizzo D, Grandone E, et al. Genetic susceptibility to nonsteroidal anti-inflammatory drug-related gastroduodenal bleeding: role of cytochrome P450 2C9 polymorphisms. Gastroenterology 2007;133(2):465-471
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、簡便かつ迅速な、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
上記目的を達成するため、発明者らはＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性の評価をＮＳＡＩＤの代謝速度という観点から検討した。具体的には、発明者らは１３Ｃで標識したナプロキセンを被験者に投与して呼気中１３ＣＯ２濃度を測定し、１３ＣＯ２濃度が低い場合に胃粘膜傷害がひどく、１３ＣＯ２濃度が高い場合に胃粘膜傷害が軽度であることを見出し、かかる現象に基づき本発明を完成させた。
【００１１】
すなわち、本発明は、被験者において、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法であって、
（ａ）同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれらと同様な薬物動態を呈する物質を投与される前および投与された後の被験者から単離されたサンプル中に含まれる、同位体標識代謝物の濃度および標識されていない代謝物の濃度を測定する工程、
（ｂ）同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれらと同様な薬物動態を呈する物質の投与前後における、同位体標識代謝物の濃度の、標識されていない代謝物の濃度に対する割合を算定する工程、および
（ｃ）工程（ｂ）により算定された、同位体標識代謝物の濃度の、同位体標識されていない代謝物の濃度に対する割合の、投与前後の変化に基づいて、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を判定する工程
を含む、該方法に関する。
【００１２】
前記方法は、さらに、同位体で標識されたＮＳＡＩＤおよびそれらと同様な薬物動態を呈する物質を調製する工程を含んでもよい。
【００１３】
本発明において、前記同位体は、１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏ、Ｄ、１５Ｎ、３７Ｃｌ、３３Ｓ、３４Ｓ、および３６Ｓからなる群から選択することができる。
【００１４】
本発明において、前記同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれらと同様な薬物動態を呈する物質は、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｂ、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ２Ｃ８、ＵＧＴ１Ａ６、およびＵＧＴ１Ａ１からなる群から選択される代謝酵素により代謝される化合物とすることができる。
【００１５】
また、本発明において、前記同位体で標識されたＮＳＡＩＤは、アスピリン、サリチル酸、メフェナム酸、インドメタシン、ジクロフェナク、エトドラク、スリンダク、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン、カルプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、ピロキシカム、アンピロキシカム、メロキシカム、ロルノキシカム、セレコキシブ、フルニキシンおよびそれらの塩からなる群から選択することができる。
【００１６】
前記同位体で標識されたＮＳＡＩＤは、次の構造
【化１】
を有するナプロキセンとすることができ、本発明においてかかる化合物を使用すると、同位体標識代謝物として１３Ｃ標識ＣＯ２が生じる。
【００１７】
前記被験者から単離されたサンプルは、呼気、血液、尿、または唾液から選択することができる。サンプルを呼気とする場合、呼気試験により同位体標識代謝物の濃度および標識されていない代謝物の濃度を測定してもよい。
【００１８】
また、本発明は、同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質を含有し、被験者に投与した後に同位体標識代謝物を生成する能力を有する、被験者におけるＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するための医薬組成物を提供する。
【００１９】
本発明において、前記同位体は１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏ、Ｄ、１５Ｎ、３７Ｃｌ、３３Ｓ、３４Ｓ、および３６Ｓからなる群から選択することができる。
【００２０】
本発明において、前記同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｂ、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ２Ｃ８、ＵＧＴ１Ａ６、およびＵＧＴ１Ａ１からなる群から選択される代謝酵素により代謝される化合物とすることができる。
【００２１】
また、本発明において、同位体で標識されたＮＳＡＩＤは、アスピリン、サリチル酸、メフェナム酸、インドメタシン、ジクロフェナク、エトドラク、スリンダク、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン、カルプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、ピロキシカム、アンピロキシカム、メロキシカム、ロルノキシカム、セレコキシブ、フルニキシンおよびそれらの塩からなる群から選択することができる。
【００２２】
前記同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、次の構造
【化２】
を有するナプロキセンとすることができる。
【００２３】
さらに、本発明は、前記医薬組成物を含む、被験者においてＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するためのキットも提供する。
【発明の効果】
【００２４】
本発明により、個々の被験者について、簡便かつ迅速にＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測することが可能となった。本発明によって、医師は、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害を回避し、かつ薬効を上げるために、個々の患者に対して薬物、特にＮＳＡＩＤの選択とその投与量を決定することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】１３Ｃ−ナプロキセン内服後の呼気中１３ＣＯ２の推移を、ナプロキセン内服後の胃粘膜傷害の程度別に示す。
【図２】１３Ｃ−ナプロキセン内服後のＡＵＣ０−２ｈを、ナプロキセン内服後の胃粘膜傷害の程度別に示す。
【図３】胃粘膜傷害の程度を、１３Ｃ−ナプロキセン呼気試験の値別に示す。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
本発明は、被験者において、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測する方法に関する。詳しくは、同位体で標識されたＮＳＡＩＤを服用した被験者より単離されたサンプル中の、同位体標識代謝物と同位体標識されていない代謝物の濃度比を求める工程を含む、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法に関する。
【００２７】
１．定義
「ＮＳＡＩＤ」は「Ｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｒｕｇ」の略であり、非ステロイド性抗炎症薬を指す。ＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼの活性を阻害してプロスタグランジンの産生を抑制することにより、抗炎症、鎮痛、解熱作用を現し、鎮痛薬、解熱薬、抗凝固薬、またはアポトーシス誘導薬等として、広く適用される薬物である。
【００２８】
ＮＳＡＩＤは、シクロオキシゲナーゼの活性を阻害してプロスタグランジンの産生を抑制するため、潰瘍、嘔吐、食欲不振、および血便などの胃腸傷害、腎傷害、ならびに止血不全等の副作用を有する。「ＮＳＡＩＤ潰瘍」とは、そのような副作用の一つであり、ＮＳＡＩＤの服用により生じる消化性潰瘍を指す。ＮＳＡＩＤ潰瘍は服用初期に多く発生し、特に最初の１週間に高率で発生する。
【００２９】
本発明において、「消化管傷害」とは、胃粘膜病変（糜爛、出血、浮腫）、胃潰瘍、および胃部の近接部位である十二指腸を含む上部消化管や、小腸、大腸における粘膜傷害の総称である。
【００３０】
「同位体」とは、同じ原子番号において質量が異なる核種をいい、化学的には同じ性質を有する。陽子数および電子数は同じであるが、中性子数が異なる。同位体には、不安定で、放射壊変を起こす放射性同位体と、安定に存在する安定同位体がある。
【００３１】
本発明において、「被験者」とは、好ましくはヒトのような哺乳類である。ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ等の家畜や、サル、ラット、ネズミ等の実験動物でもよい。
【００３２】
チトクロームＰ４５０（ＣＹＰ）は、本来ステロイド、プロスタグランジン、脂肪酸などの内在性化合物の代謝を触媒する酵素であるが、薬物の第１相代謝に関与する最も重要な酵素でもある。分子多様性があり、多くのサブファミリー酵素が存在する。薬物に対する反応性の個人差は、ＣＹＰファミリー群の遺伝子多型が原因の一つであると考えられている。「ＣＹＰ２Ｃ９」、「ＣＹＰ３Ａ４」、「ＣＹＰ２Ｂ」、「ＣＹＰ２Ｅ１」、および「ＣＹＰ２Ｃ８」とは、それぞれこのようなＣＹＰのサブファミリー酵素の一つである。ＣＹＰ２Ｃ９は、抗てんかん薬のフェニトインや抗凝固薬のワルファリン、糖尿病治療薬のグリピジド等の代謝に関与しており、その遺伝的欠損者について、血中濃度時間曲線下面積の上昇、半減期の延長などが報告されている。ＣＹＰ３Ａ４は、免疫抑制剤のシクロスポリン等の代謝、ＣＹＰ２Ｂは、催眠薬のペントバルビタール等の代謝、ＣＹＰ２Ｅ１は喘息治療薬のテオフィリン等の代謝、ＣＹＰ２Ｃ８は抗悪性腫瘍薬のパクリタキセル等の代謝にも関与することが知られている。
【００３３】
ＵＤＰ−グルクロン酸転移酵素（ＵＧＴ）は、脂肪族、芳香族アルコールやカルボン酸などへのグルクロン酸付加を触媒してグルクロン酸抱合体を生成する酵素であり、薬物の第２相代謝に関与する。薬物はグルクロン酸抱合によって極性が高まるばかりでなく、胆汁や腎での有機アニオン輸送系も関係して排泄が促進される。ＵＧＴには遺伝子多型が存在し、それにより酵素活性が異なることが知られている。「ＵＧＴ１Ａ１」および「ＵＧＴ１Ａ６」は、ＵＧＴの一つであり、ＵＧＴ１Ａ１は抗悪性腫瘍薬のイリノテカン等の代謝に、ＵＧＴ１Ａ６は抗炎症薬のアスピリン等の代謝にも関与することが知られている。
【００３４】
２．ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測する方法
本発明は、被験者において、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測する方法に関する。
【００３５】
（１）調製工程
本発明では、ＮＳＡＩＤは、その代謝物、例えば二酸化炭素や水が同位体を含むように、同位体で標識される。
【００３６】
ＮＳＡＩＤを標識するため、炭素原子または酸素原子の同位体が用いられる。同位体は、１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏ、Ｄ、１５Ｎ、３７Ｃｌ、３３Ｓ、３４Ｓ、または３６Ｓ等を使用することができる。本発明においては、安定同位体が好ましく使用される。ここで、１３Ｃは商業的に販売されていて比較的安価に入手でき、安定同位体であるのに対し、１４Ｃは放射性同位体であるため、好ましくは１３Ｃが用いられる。他に一般的に使用される放射性同位体は、１８Ｏである。
【００３７】
本発明においては、任意のＮＳＡＩＤ、例えば、サリチル酸誘導体、ピラゾロン誘導体、パラアミノフェノール誘導体、インドール誘導体、フェンタメーツ、トルメチン、プロピオン酸誘導体、オキシカム誘導体、フェニル酢酸誘導体、サイトカイン阻害薬、シクロオキシゲナーゼ阻害薬および選択的シクロオキシゲナーゼ−１阻害薬ならびにシクロオキシゲナーゼ−２阻害薬等を使用することができる。ここで、サリチル酸誘導体はアセチルサリチル酸、ジフルニサル、サルサラト、サリチル酸ナトリウム、サリチルアミド、チオサリチル酸ナトリウム、サリチル酸コリン、サリチル酸マグネシウム、メサラミン、スルファサラジンおよびサリチル酸メチルよりなるグループから選択することができ、ピラゾロン誘導体はフェニルブタゾン、オキシフェンブタゾン、アンチピリン、アミノピリン、ジピロンおよびアパゾンよりなるグループから選択することができ、パラアミノフェノール誘導体はフェナセチンおよびアセタミノフェンよりなるグループから選択することができ、インドール誘導体はインドメタシンおよびスリンダクよりなるグループから選択することができ、フェナメートはメフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸およびエトフェナム酸ならびにそれらの薬理許容塩類よりなるグループから選択することができ、プロピオン酸誘導体はイブプロフェン、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フェンブフェン、ミロプロフェン、コルプロフェン、ピルプロフェン、オキサプロジン、インドプロフェンおよびチアプロフェン酸ならびにそれらの薬理許容塩類よりなるグループから選択することができ、オキシカム誘導体はピロキシカム、イソキシカム、アンピロキシカム、テノキシカムおよび関連化合物テニダップよりなるグループから選択することができ、フェニル酢酸誘導体はトルメチンあるいはジクロフェナクおよびそれらの薬理許容塩類から選択することができ、シクロオキシゲナーゼ阻害薬はエトドラクおよびナブメトンよりなるグループから選択することができ、選択的シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬はＣＧＰ２８２３８（６−（２，４−ジフルオロフェノキシ）−５−メチル−スルホニルアミノ−１−インダノン）、ＳＣ−５８１２５（１−〔（４−メチルスルホニル）フェニル〕−３−トリフルオロメチル−５−（４−フルオロフェニル）ピラゾール）、ＮＳ−３９８（Ｎ−〔２−（シクロへキシルオキシ）−４−ニトロ−フェニル〕メタンスルホンアミド）、ＤｕＰ６９７（５−ブロモ−２−（フルオロフェニル）−３−（４−メチルスルホニルフェニル）チオフェン）、Ｌ−７４５，３３７（５−メタンスルホンアミダ−６−（２，４−ジフルオロチオフェニル）−１−インダノン）、１，２−置換ジアリルシクロペンテン類似体例えば１−〔２−（４−フルオロフェニル）シクロペンテン−１−イル〕−４−（メチルスルホニル）ベンゼン、およびキナゾリノン例えばプロカゾンよりなるグループから選択することができる。
【００３８】
本発明は、薬物の代謝に着目してなされた発明であるので、ＮＳＡＩＤと同様の薬物動態を呈する物質であれば、本発明において使用することができる。同じ薬物動態を示す薬物としては、例えば、ワルファリンとベンズブロマロンが挙げられる。
【００３９】
（２）投与工程
本発明においては、まず、同位体で標識されたＮＳＡＩＤが被験者に投与される。ＮＳＡＩＤは、静脈内、皮内、皮下、経口、経粘膜、および直腸投与など、当業者に周知の経路で投与することができる。
【００４０】
（３）単離工程
本発明においては、同位体標識ＮＳＡＩＤを投与される前および投与された後において、被験者よりサンプルを採取する。かかるサンプルは、被験者より通常採取されるサンプルであり、例えば、呼気、血液、尿、唾液、またはその他体液を用いることができる。特に、簡便で、頻回の測定も容易であることから、呼気が好ましく使用される。
【００４１】
（４）測定工程
本発明において、投与前後の各サンプルについて、同位体標識代謝物および標識されていない代謝物の濃度を測定し、同位体比を求める。
【００４２】
本発明の一の態様において、代謝物の同位体比を求めるために、分光学的な測定を行う。液体シンチレーションカウンティング、質量分析法、赤外分析法、発光分光分析法、核磁気共鳴法等の当業者に周知の方法を使用して測定することができるが、これらの分析法は、使用した同位体が安定同位体であるか放射性同位体であるかによって選択される。
【００４３】
別の態様においては、単離工程および測定工程において、呼気試験が好ましく用いられる。薬物の代謝により発生した二酸化炭素は、血液中から肺へ移行し、呼気中に炭酸ガスとして排泄されるため、同位体標識代謝物が１３ＣＯ２であるとき、薬物の代謝速度が速ければ呼気中の１３ＣＯ２が多く検出され、遅ければ１３ＣＯ２はあまり検出されない。よって、呼気試験では、被験者の呼気を採取し、呼気中に含まれる同位体標識されている二酸化炭素の濃度および同位体標識されていない二酸化炭素の濃度を測定する。このように、呼気試験は、非侵襲的で被験者への負担がなく、簡便であるため、薬物動態検査に必要な頻回の検査を容易に行うことができる。呼気試験は、公知の方法によって行うことができる（特表２００８−５３８２７５）。
【００４４】
（５）判定工程
発明者らは、１３Ｃで標識されたナプロキセン投与後の同位体標識代謝物の濃度が低いほど、胃粘膜傷害が重症化しているという相関関係を見出した。
【００４５】
この知見に基づき、本発明は、上記工程により得られた、被験者における代謝物の同位対比の経時変化、または該経時変化から得られる薬物動態パラメーターを求め、胃粘膜傷害非発症者（例えば、粘膜傷害を来さない人）における対応の代謝物の同位対比の経時変化または薬物動態パラメーターと比較して、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を判定する。すなわち、同位体標識代謝物の経時の排出量または排出速度の挙動、時間曲線下面積（ＡＵＣ：Ａｒｅａ Ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ Ｃｕｒｖｅ）、代謝速度、特定の時点でのベースラインに対するデルタ（ＤＯＢ：Ｄｅｌｔａ−Ｏｖｅｒ−Ｂａｓｅｌｉｎｅ）を、対応する胃粘膜傷害非発症者のパラメーターと比較して有意に低値の場合に、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性が高いと判定する。例えば、胃粘膜傷害非発症者のパラメーターの平均値を基準値とし、かかる基準値よりも有意に低値の場合に、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性が高いと判定する。
【００４６】
一の実施態様において、ＮＳＡＩＤ投与後の時間に対して測定された同位体標識代謝物と同位体標識されていない代謝物の濃度比をプロットし、得られた曲線のＡＵＣを用いて判定を行う。
【００４７】
また、別の実施態様において、下記の式に従って特定の時点でのＤＯＢを求めて定量化し、判定を行う。
（式１）
【００４８】
３．ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するための医薬組成物
本発明の医薬組成物は、上記２．（１）に示した同位体標識されたＮＳＡＩＤを主成分として含む。該医薬組成物は、本発明の作用および効果を損なわない限り、薬学的に許容可能な担体、または剤型によって当該技術分野において一般的に使用される添加剤をさらに含んでもよい。添加剤として、例えば、着色剤、保存剤、風味剤、香り改善剤、呈味改善剤、甘味剤、または安定剤、その他薬学的に許容される添加剤を含有することができる。
【００４９】
一の実施態様において、同位体標識されたナプロキセンを主成分とする医薬組成物は、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測するために、同位体標識されたナプロキセンが５０〜１０００ｍｇ／日、好ましくは１５０〜８００ｍｇ／日、より好ましくは３００〜６００ｍｇ／日となるように、被験者に投与される。
【００５０】
４．ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するためのキット
本発明のキットは、上記２．欄で説明したＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するための方法を実施するためのものであればよく、これに含まれる具体的な構成、材料、機器などは特に限定されるものではない。
【００５１】
本発明のキットは、上記３．欄で説明したＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するための医薬組成物を含む。本発明の一の態様では、呼気試験を行うための呼気収集バックまたは呼気採取チューブ、および説明書を含んでもよい。
【００５２】
以下、実施例をもって本発明をさらに詳しく説明するが、これらの実施例は本発明を制限するものではない。
【実施例】
【００５３】
１３Ｃ−ナプロキセンを用いた、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測する方法
ナプロキセンはＮＳＡＩＤの一つであり、ＣＹＰ２Ｃ９で代謝され、その際二酸化炭素を発生するので、１３Ｃで標識されたナプロキセン（１３Ｃ−ナプロキセン）を投与すると、下記のように代謝され、代謝物として１３ＣＯ２が発生する。
【００５４】
【化３】
【００５５】
従って、内服後に呼気中に排出される１３ＣＯ２を測定すると、それは、ナプロキセンの動態を反映すると考えられる。すなわち、呼気中で検出される１３ＣＯ２濃度が高ければ、代謝が進んでいることを示しており、ナプロキセンの血中からの消失が早いと考えられる。一方、呼気中の１３ＣＯ２濃度が低ければ、代謝が進んでいないことを示しており、従って、ナプロキセンは血中に長く遷延すると考えられる。ナプロキセンが長く血中に存在すれば、それだけ効果も期待できるが、副作用のリスクも高くなることとなる。
【００５６】
そこで、発明者らは、ナプロキセン内服によるＮＳＡＩＤ潰瘍の発症とナプロキセンの代謝速度との関係について、呼気試験により検討を行った。
【００５７】
１．実験方法
健常ボランティア１５名を被験者として、ナプロキセン６００ｍｇ／日を３日間経口投与し、投与前後において、胃カメラまたはカプセル内視鏡を用いて内視鏡検査を行い、胃粘膜傷害の程度を評価した。内視鏡所見の評価法として、ＬＡＮＺＡスコアを用いた。ＬＡＮＺＡスコアでは、健常な状態から潰瘍が形成されている状態までを０から４の５段階のグレードに分類して、胃粘膜傷害の程度を評価する。
【００５８】
また、同じ被験者に対し、１３Ｃ−ナプロキセン３００ｍｇを経口投与した後に頻回呼気を採取し、各時点における呼気中の１３Ｃで標識された二酸化炭素濃度の、標識されていない二酸化炭素の濃度に対する割合（１３ＣＯ２／ＣＯ２ （Δ１３ＣＯ２（‰）））を求めた。呼気試験の結果はＤＯＢおよびＡＵＣを用いて評価した。なお、胃粘膜傷害の程度別にＡＵＣを求めた実験においては、内服後０、０．５、１、１．５、２時間後に採取した呼気についてのデータを解析した。
【００５９】
上記の方法に従って得られた、呼気試験の結果と内視鏡所見との間に相関関係が存在するかどうか、検討を行った。
【００６０】
２．結果
ナプロキセン内服後の胃粘膜傷害の程度別に、１３Ｃ−ナプロキセン内服後の呼気中１３ＣＯ２の推移を示したところ、胃粘膜傷害が軽症な被験者群が最も１３ＣＯ２／ＣＯ２が高値で、胃粘膜傷害が重症な被験者群が最も１３ＣＯ２／ＣＯ２が低値であった（図１）。特に１３Ｃ−ナプロキセン内服後２時間程度までにおいて、かかる違いが明らかであった。
【００６１】
ナプロキセン内服後の胃粘膜傷害の程度別に、１３Ｃ−ナプロキセン内服後のＡＵＣ０−２ｈを示したところ、胃粘膜傷害が軽症な被験者群が最もＡＵＣ０−２ｈが高値で、胃粘膜傷害が重症な被験者群が最もＡＵＣ０−２ｈが低値であり、胃粘膜傷害が軽症な被験者群の値は重症な被験者群の値よりも有意に高かった（図２）。
【００６２】
１３Ｃ−ナプロキセン呼気試験の値を、５例ずつ順に低値、中間値、高値とし、各値群ごとに胃粘膜傷害の程度を示したところ、低値群の粘膜傷害は、高値群に比して有意に高かった（図３）。
【００６３】
以上より、１３Ｃ−ナプロキセン内服後の呼気中の１３ＣＯ２が低い場合に胃粘膜傷害がひどく、１３ＣＯ２が高ければ、胃粘膜傷害が軽度であることが明らかとなった。よって、１３Ｃ−ナプロキセン呼気試験は、ナプロキセンの副作用、特に胃粘膜傷害のリスクの予測マーカーになることが示された。
【００６４】
ナプロキセン以外のＮＳＡＩＤとして、ジクロフェナックナトリウム、インドメタシンを検討したところ、１３Ｃ−ナプロキセン呼気試験の結果は、これらＮＳＡＩＤによる胃粘膜傷害の結果と良く相関し、本検査方法は、ＮＳＡＩＤ全般の胃粘膜傷害の予測マーカーとなりうると考えられる。
【産業上の利用可能性】
【００６５】
本発明により、個々の被験者について、遺伝子診断等を行わずとも、簡便かつ迅速にＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を予測することができる。本発明によって、医師は、ＮＳＡＩＤ潰瘍を回避し、かつ薬効を上げるために、個々の患者に対して薬物、特にＮＳＡＩＤの選択とその投与量を決定したり、予防薬の投与をすることが可能となるので、本発明は臨床的な有用性が高い。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者において、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測する方法であって、
（ａ）同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質を投与される前および投与された後の被験者から単離されたサンプル中に含まれる、同位体標識代謝物の濃度および標識されていない代謝物の濃度を測定する工程、
（ｂ）同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質の投与前後における、同位体標識代謝物の濃度の、標識されていない代謝物の濃度に対する割合を算定する工程、および
（ｃ）工程（ｂ）により算定された、同位体標識代謝物の濃度の、同位体標識されていない代謝物の濃度に対する割合の、投与前後の変化に基づいて、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を判定する工程
を含む、該方法。
【請求項２】
さらに、同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質を調製する工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
同位体が、１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏ、Ｄ、１５Ｎ、３７Ｃｌ、３３Ｓ、３４Ｓ、および３６Ｓからなる群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質が、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｂ、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ２Ｃ８、ＵＧＴ１Ａ６、およびＵＧＴ１Ａ１からなる群から選択される代謝酵素により代謝される化合物である、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、アスピリン、サリチル酸、メフェナム酸、インドメタシン、ジクロフェナク、エトドラク、スリンダク、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン、カルプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、ピロキシカム、アンピロキシカム、メロキシカム、ロルノキシカム、セレコキシブ、フルニキシンおよびそれらの塩からなる群から選択される化合物である、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、次の構造
【化１】
を有するナプロキセンであって、同位体標識代謝物が１３Ｃ標識ＣＯ２である、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
被験者から単離されたサンプルが、呼気、血液、尿、または唾液である、請求項１から６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
被験者から単離された呼気中に含まれる、同位体標識代謝物の濃度および標識されていない代謝物の濃度を測定するために呼気試験を行うことを特徴とする、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質を含有し、被験者に投与した後に同位体標識代謝物を生成する能力を有する、被験者におけるＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するための医薬組成物。
【請求項１０】
同位体が１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏ、Ｄ、１５Ｎ、３７Ｃｌ、３３Ｓ、３４Ｓ、および３６Ｓからなる群から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質が、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｂ、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ２Ｃ８、ＵＧＴ１Ａ６、およびＵＧＴ１Ａ１からなる群から選択される代謝酵素により代謝される化合物である、請求項９または１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、アスピリン、サリチル酸、メフェナム酸、インドメタシン、ジクロフェナク、エトドラク、スリンダク、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン、カルプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、ピロキシカム、アンピロキシカム、メロキシカム、ロルノキシカム、セレコキシブ、フルニキシンおよびそれらの塩からなる群から選択される化合物である、請求項９または１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、次の構造
【化２】
を有するナプロキセンである、請求項９または１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
請求項９から１３のいずれか１項に記載の医薬組成物を含む、被験者においてＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するためのキット。
【請求項１】
被験者において、ＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測する方法であって、
（ａ）同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質を投与される前および投与された後の被験者から単離されたサンプル中に含まれる、同位体標識代謝物の濃度および標識されていない代謝物の濃度を測定する工程、
（ｂ）同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質の投与前後における、同位体標識代謝物の濃度の、標識されていない代謝物の濃度に対する割合を算定する工程、および
（ｃ）工程（ｂ）により算定された、同位体標識代謝物の濃度の、同位体標識されていない代謝物の濃度に対する割合の、投与前後の変化に基づいて、ＮＳＡＩＤ潰瘍の発症可能性を判定する工程
を含む、該方法。
【請求項２】
さらに、同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質を調製する工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
同位体が、１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏ、Ｄ、１５Ｎ、３７Ｃｌ、３３Ｓ、３４Ｓ、および３６Ｓからなる群から選択される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質が、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｂ、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ２Ｃ８、ＵＧＴ１Ａ６、およびＵＧＴ１Ａ１からなる群から選択される代謝酵素により代謝される化合物である、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、アスピリン、サリチル酸、メフェナム酸、インドメタシン、ジクロフェナク、エトドラク、スリンダク、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン、カルプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、ピロキシカム、アンピロキシカム、メロキシカム、ロルノキシカム、セレコキシブ、フルニキシンおよびそれらの塩からなる群から選択される化合物である、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、次の構造
【化１】
を有するナプロキセンであって、同位体標識代謝物が１３Ｃ標識ＣＯ２である、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
被験者から単離されたサンプルが、呼気、血液、尿、または唾液である、請求項１から６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
被験者から単離された呼気中に含まれる、同位体標識代謝物の濃度および標識されていない代謝物の濃度を測定するために呼気試験を行うことを特徴とする、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質を含有し、被験者に投与した後に同位体標識代謝物を生成する能力を有する、被験者におけるＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するための医薬組成物。
【請求項１０】
同位体が１３Ｃ、１４Ｃ、１８Ｏ、Ｄ、１５Ｎ、３７Ｃｌ、３３Ｓ、３４Ｓ、および３６Ｓからなる群から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤまたはそれと同様の薬物動態を呈する物質が、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ３Ａ４、ＣＹＰ２Ｂ、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ２Ｃ８、ＵＧＴ１Ａ６、およびＵＧＴ１Ａ１からなる群から選択される代謝酵素により代謝される化合物である、請求項９または１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、アスピリン、サリチル酸、メフェナム酸、インドメタシン、ジクロフェナク、エトドラク、スリンダク、イブプロフェン、ナプロキセン、ケトプロフェン、カルプロフェン、プラノプロフェン、ロキソプロフェン、ピロキシカム、アンピロキシカム、メロキシカム、ロルノキシカム、セレコキシブ、フルニキシンおよびそれらの塩からなる群から選択される化合物である、請求項９または１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
同位体で標識されたＮＳＡＩＤが、次の構造
【化２】
を有するナプロキセンである、請求項９または１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
請求項９から１３のいずれか１項に記載の医薬組成物を含む、被験者においてＮＳＡＩＤ潰瘍または消化管粘膜傷害の発症可能性を予測するためのキット。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１１−１０６８４６（Ｐ２０１１−１０６８４６Ａ）
【公開日】平成２３年６月２日（２０１１．６．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２５９５７４（Ｐ２００９−２５９５７４）
【出願日】平成２１年１１月１３日（２００９．１１．１３）
【出願人】（５０４３００１８１）国立大学法人浜松医科大学 (96)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２３年６月２日（２０１１．６．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１１月１３日（２００９．１１．１３）
【出願人】（５０４３００１８１）国立大学法人浜松医科大学 (96)
【Ｆターム（参考）】
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