海松子抽出物を有効成分として含有する化粧料組成物
本発明は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する化粧料組成物に関する。より詳細には、本発明による化粧料組成物は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することによって、優れた角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果を示す。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する化粧料組成物に関する。より詳細には、本発明による化粧料組成物は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することによって、優れた角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果を示す。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、人体の一次防御膜であって、体内の諸器官を温度及び湿度変化と紫外線や公害物質など外部環境の刺激から保護し、体温調節などの生体恒常性維持に重要な役目をしている。しかし、紫外線、外部から受ける過度な物理的、化学的刺激及びストレス、栄養欠乏などは、皮膚の正常機能を低下させ、弾力損失、角質化、しわ生成などの皮膚老化現象を促進させるようになる。
【０００３】
特に、角質細胞が順々に続いて作られ、最外層の古い角質細胞が時々離脱されて行くので、表皮が一定の厚さを維持するようになる角化過程が順調でなければ、非正常的な角質細胞が生成され、皮膚表面に積もって角質層が厚くなり、これにより、皮膚が粗くなり、微細な小じわが生じるようになり、結局、皮膚老化が進行される。また、紫外線によって生成される活性酸素及び皮膚基質の分解に関連した紫外線によるＭＭＰ−１の生合成によるタイプ１プロコラーゲンの生合成減少も皮膚老化と関連がある。
【０００４】
したがって、このような現象を防止し、一層元気で且つ弾力ある皮膚を維持するために、従来、各種の動物、植物、微生物などから得た生理活性物質が強化された化粧品を使用することによって、皮膚の固有機能を維持させ、皮膚細胞を活性化させて、皮膚老化を効果的に抑制するための努力が行われて来た。しかし、既存の化粧品原料は、大部分効能が弱いか、皮膚副作用を誘発するなどさまざまな問題点を持っている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
これより、本発明者らは、天然物のうち皮膚副作用を誘発せずに、皮膚保湿効果及び皮膚老化防止効果を有する原料を捜すために努力した結果、海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する組成物が角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成を減少させてタイプ１プロコラーゲンの生合成を促進する効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果があることを知見し、本発明を完成した。
【０００６】
したがって、本発明の目的は、有効成分として海松子抽出物抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有し、角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果を有する化粧料組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するために、本発明による化粧料組成物は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする。前記本発明による化粧料組成物は、前記有効成分を含有することによって、優れた角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果を示すことを特徴とする。
【０００８】
以下、本発明による化粧料組成物の各有効成分を詳しく説明する。
海松子（Pinus koraiensis）は、マツ科に属する朝鮮松の熟した実を乾したもので、漢方では松の実を薬剤として称する言葉で、柏子、松子、実柏とも言う。これは、松かさのような毬果に入っており、種子は、三角卵状形である。昔から海松子は、滋養強壮剤として多く使用し、病後回復期に食べれば良いものと知られている。また、これは、脂肪及びタンパク質が豊かな高熱量食品であり、特にビタミンＢが豊かで、皮膚を柔らかくし、血圧を下げる作用をする。
【０００９】
梅子（Prunus mume）は、ローズ科に属する梅の実であって、主として「メシル」と呼ばれる。中国古書である新農本初耕によれば、梅子は、最も古い果物の木であって、薬用として使用されたという記録が残っており、東医宝監など各種医書にも、漢薬材として使用されたという記録が多い。漢方では、健胃、止血、下痢止め、去痰、酒毒排出、解毒などに効果を示す漢薬材として利用している。梅子は、アルカリ性食品であって、疲労回復によく、体質改善効果がある。特に、これは、解毒作用に優れていて、皮膚の美容にもよく、殺菌効果もある。最近では、抗癌食品として多くの研究が行われている。
【００１０】
赤小豆（Phaseolus angularis）は、マメ科の植物であって、アズキの生薬名として小豆とも言う。赤小豆の原産地は、中国一帯であると推定されており、東洋では、前々から栽培した作物である。漢方では、利水、散血,縮氣、行風、消腫、除濕、和血、解毒、排膿、健脾胃、開心竅、堅筋骨、瘟疫などに効果を示す漢薬材として利用している。
【００１１】
カリン（Chaenomeles sinensis）は、カリンの実であって、中国原産の栽培植物であり、真桑瓜のような形状をしているが、木にぶらさがっていて、木瓜とも呼ばれる。カリンの主要成分としては、サポニン、有機酸、フラボノイド、タンニンなどを含有している。漢方では、舒筋、活絡、平肝、和胃、去濕（removing wetness in the body）、止痛などに効果を示す漢薬材として利用している。
【００１２】
巨勝子（Sesamum indicum）は、晩成胃膓炎、神経炎、高血圧、便秘、強壮、貧血などに優れた効果を示し、本草学によれば、コレステロールを減少させ、血液循環を円滑にし、皮膚と髪の毛を潤沢にする作用があると記録されている。漢方では、潤五臟、補肝腎、烏須髮、明耳目、長飢肉、利大小腸（strengthening functions of the intestines）に効果を示す漢方薬で利用している。巨勝子のタンパク質は、主にグロブリンであり、抗酸化作用を助けるγ-トコフェロールが多く含有されていて、抗酸化作用によって皮膚老化を防止し、皮膚新陳代謝を活発にして、部分的に黒く変わった色素沈着現象にも役立つ。
【００１３】
本発明による化粧料組成物に含有される前記抽出物は、植物体から有効成分を抽出するために、通常使用され且つ当業者に周知の方法によって製造されたものである。例えば、生薬材の粉砕物に水、炭素数１〜３の無水または含水低級アルコール、アセトン、エチルアセテートまたはジエチルエーテルを粉砕物の乾燥重量に対して１〜１５体積倍の量で付加した後、冷却コンデンサーが付着された抽出器で５０〜１００℃温度で５〜２４時間加熱して抽出するか；前記粉砕物に水、炭素数１〜３の無水または含水低級アルコール、アセトン、エチルアセテートまたはジエチルエーテルを粉砕物の乾燥重量に対して１〜１５体積倍の量で付加した後、４〜２５℃温度で３〜２０日間沈積させて抽出物を得るか；無水または含水エチルアルコールまたはメタノール抽出物に適量の水を加えた後に生ずる沈殿物を濾過して除去し、これにエチルアセテート、ブタノールまたはジエチルエーテルを加えてよく混合した後、静置して層を分離し、上層を分離した後、冷却コンデンサーが付着された抽出器で抽出物を得る。上記した方法によって抽出した生薬材抽出物の抽出濾液を減圧濃縮し、乾燥した後、化粧料組成物に配合する。
【００１４】
本発明による抽出物は、各生薬材の別途の抽出物を混合して利用することもでき、生薬材を混合した後、一度に抽出して製造されたものを使用することもできる。
【００１５】
本発明による化粧料組成物は、全体組成物のうちすべての有効成分、すなわち海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有し、前記有効成分は、組成物の全体重量に対して０．０００１乃至２５重量%の濃度で含有することが好ましい。これは、有効成分が０．０００１重量%未満の場合には、その効果が弱く、２５重量%を超過する場合には、製品の使用感及び剤型の安定性に問題が発生するからである。
【００１６】
本発明による化粧料組成物は、優れた角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果を示す。
【００１７】
また、本発明による化粧料組成物は、上記した抽出物以外に本発明が目的とする主効果を損なわない範囲内で、好ましくは、主効果に相乗効果を与えることができる他の成分などを含有してもよく、本発明の抽出物以外に他の成分は、その他の化粧料の剤型または使用目的によって当業者が困難性なしに適宜選定して配合することができる。
【００１８】
例えば、前記化粧料組成物は、その効果を増加させるために皮膚吸収促進物質を含むことができる。また、本発明の化粧料組成物は、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質及び海草エキスよりなる群から選択された物質を含むことができる。
【００１９】
さらに、本発明の化粧料組成物は、前記必須成分とともに、必要に応じて通常化粧料に配合される他の成分を含むことができ、その例として、油脂成分、保湿剤、エモルリエント剤、界面活性剤、有機及び無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などが挙げられる。
【００２０】
本発明の化粧料組成物に含まれることができる配合成分は、これらに限定されるものではなく、また、前記成分の配合量は、本発明の目的及び効果を損傷させない範囲内で可能であるが、組成物の全体重量に対して、好ましくは、０．０１〜１０重量%、より好ましくは、０．０１〜５重量%配合される。
【００２１】
本発明による化粧料組成物は、その剤型において特に限定されず、例えば、乳液、クリーム、化粧水、エッセンス、パック、ジェル、パウダー、リップスティック、メーキャップベース、ファウンデーション、ローション、軟膏、ゲル、パッチ、美容液、クレンジングフォーム、クレンジングクリーム、クレンジングウォーター、せっけんまたは噴霧剤などのような剤型が挙げられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下、実施例及び試験例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明がこれら例に限定されるものではない。
【００２３】
［参考例１：生薬材抽出物の製造］
海松子、梅子、赤小豆、カリン、巨勝子（ゴンファ薬品（株））の各薬材を採取し
た後、品質に優れた薬材のみを選別し、水洗して不純物を除去した後、日陰で乾燥した。次に、海松子、梅子、赤小豆、カリン、巨勝子を各々１００g取って精製水２Ｌずつを添加した後、約９５〜１００℃還流装置下で１８時間沸かしながら抽出した。抽出完了後、続いて蒸溜濃縮して、全体重量が約５００gになるまで煎じた後、常温に冷却した。次に、濾過布に入れて圧搾し、固形粉を分離し除去した後、濾過し、粘性ある濃縮液を得た。濃縮液を８０℃減圧下で濃縮し、水を完全に除去した後、真空乾燥し、て粉末固体状態の抽出物（海松子５．０g、梅子１０g、赤小豆５．０g、カリン５．０g、巨勝子５．０g）を収得した。
【００２４】
［実施例１〜１５及び比較例１］
前記参考例１で得た各生薬材水抽出物を下記表１の組合せで混合して実施例１〜１５及び比較例１を製造し、実験に使用した。この時、各抽出物の混合割合は、同量にした。
【００２５】
【表１】
【００２６】
［試験例１：角質形成細胞の成長促進（MTT assay）効果］
前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物が角質形成細胞の成長能に及ぶ効果をＭＴＴ方法で測定した。以下、その方法を簡略に説明する。
【００２７】
まず、角質形成細胞を９６ウェルプレートにウェル(well)当り２００μL当り５×１０3個の濃度（5×103個／200μL／ウェル）で植えて２４時間培養した後、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物を用いて０．０００１%、０．００１%、０．０１%、０．１%の各濃度で処理して４８時間培養した後、培養液を吸入して除去した後、ＰＢＳで１回洗浄し、ＭＴＴ（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide, Sigma, USA）（0.5mg/ml）溶液を１００μLずつ細胞に添加し、４時間３７℃、５%ＣＯ2で培養した。その後、培養液を吸入して除去した後、ＤＭＳＯ（dimethylsulfoxide）溶液２００μLを添加し、シェーカーで１０分間揺れた後、ELISAリーダー（DI biotech, Korea）で５４０nmでの吸光度を読み取った。この時、対照群としては、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の無処理群を使用した。その結果を下記表２に示した。
【００２８】
【表２】
【００２９】
前記表２に示したように、すべての場合においてその効果が発現されることが分かり、一般的に、使用した抽出物の濃度が高いほど、角質形成細胞の成長促進効果も増加した。また、海松子抽出物のみを含む比較例１の組成物より海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する実施例１乃至１５の組成物がさらに効果的であり、海松子抽出物に付加される梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された抽出物の種類が多いほど、それに伴って角質形成細胞の成長促進効果も増加することが分かった。
【００３０】
［試験例２：活性酸素消去効果］
前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の紫外線によって生成される活性酸素生成抑制効果、すなわち活性酸素消去効果を調べるために蛍光物質を利用して下記のような実験を行った。
【００３１】
まず、実験に使用した細胞株は、ドイツ癌研究センターのフセニグ博士（Dr. Fusenig）から分譲された人間角質細胞HaCaT細胞株（Human keratinocytes HaCaT cell line）であって、これを蛍光測定用９６ウェルブラックプレートにウェル当り２．０×１０4個に分株し、ペニシリン／ストレプトマイシンが添加されたＤＭＥＭ（Dulbeccos Modification of Eagles Medium, FBS10%, Gibco, USA）培地を使用して３７℃、５%ＣＯ2条件で１日間培養した後、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物を用いて０．５%、０．２５%、０．１２５%、０．０６２５%、０．０３１２５%の各濃度で処理した。
【００３２】
次に、試験試料を入れて２４時間培養した後、ＨＣＳＳ（HEPES-buffered control salt solution, Gibco, USA）で洗浄し、残っている培地を除去し、ＨＣＳＳに２０μMで用意したＤＣＦＨ−ＤＡ（2',7'-dichlorodihydro-fluoresceindiacetate, Molecular Probes, USA)を１００μL加え、３７℃、５%ＣＯ2条件で２０分間培養し、ＨＣＳＳで洗浄した。その後、各試料濃度別に処理されたＨＣＳＳを１００μL加えた後、初期に活性酸素に酸化されたＤＣＦ（dichlorofluorescein）の蛍光度を蛍光プレートリーダー（Ex=485nm、Em=530nm）で測定した。その後、ＵＶＢ（30mJ/cm2）を照射し、処理直後（表３）及び処理３時間後（表４）の蛍光度を蛍光プレートリーダー（Ex=485nm、Em=530nm）で測定した。この時、対照群としては、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の無処理群を使用した。
【００３３】
【表３】
【００３４】
【表４】
【００３５】
前記表３及び表４に示されたように、すべての試験試料において活性酸素生成抑制効果が発現されることが分かり、一般的に、使用した抽出物の濃度が高いほど、活性酸素生成がさらに抑制されることが分かった。また、海松子抽出物のみを含む比較例１の組成物より海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する実施例１〜１５の組成物がさらに効果的であり、海松子抽出物に付加される梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された抽出物の種類が多いほど、それに伴って活性酸素生成もさらに抑制されることが分かった。また、処理直後より処理３時間後に効果がさらに高いことが分かった。
【００３６】
［試験例３：ＭＭＰ−１及びプロコラーゲン分析（procollagen assay）］
前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の皮膚基質の分解に関連された紫外線によるＭＭＰ−１の生合成を減少させて、タイプ１プロコラーゲンの生合成を促進させる効果を調べるために、ＭＭＰ−１及びプロコラーゲン分析を下記のような方法で行った。
【００３７】
まず、正常表皮の脂肪層を除去し、細く切って、コラゲナーゼで表皮と真皮を分離した後、表皮と真皮組職をそれぞれ０．２５%トリプシン溶液に入れて３７℃、５%ＣＯ2培養器で１０分間処理した。その後、ボルテックス（vortex）を施行し、角質形成細胞と繊維芽細胞をそれぞれ遊離させた。遊離された細胞を集めて洗浄した後、角質形成細胞は、ＫＧＭ（keratinocyte growth medium, Clonetics, USA）に１×１０4cells/cm2濃度で培養し、繊維芽細胞は、１０%牛胎児血清（FBS）が添加されたＤＭＥＭ培地で培養した。７０〜８０%程度成長すれば、１：３の割合で分株し、継代培養し、３〜４次継代培養した細胞を実験に利用した。
【００３８】
ＭＭＰ−１の量を測定する実験のために、繊維芽細胞を４８ウェルプレートに９０%以上培養した後、１日間飢餓（starvation）状態にした。その後、ＰＢＳで２回洗浄した後、ＰＢＳを１００μLずつ入れた状態でプレートの蓋を開いて紫外線Ａ（UVA filtersが装置されたDermlight cube 401, UVAtec, USA）を１５J/cm2で照射した。照射直後にさらにＰＢＳで１回洗浄し、前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物がそれぞれ０．００１%、０．０１%の割合で含まれた牛胎児血清を含まないＤＭＥＭを入れて３７℃、５%ＣＯ2培養器で４８時間培養した後、培地中に遊離されたＭＭＰ−１の量をＭＭＰ−１人間ＥＬＩＳＡシステム(RPN2610, Amersham Pharmacia Biothch, UK）を利用して測定し、繊維芽細胞の全体タンパク質の量で補正した（表５）。この時、対照群としては、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の無処理群を使用した。
【００３９】
一方、プロコラーゲンの量を測定するために、前記ＭＭＰ−１の量を測定する方法と同一の条件で飢餓状態で紫外線の照射なしに実施例１〜１５及び比較例１の抽出物をそれぞれ０．００１及び０．０１％の割合で加え、２４時間後に培地中に遊離されたプロコラーゲンの量をプロコラーゲンタイプ−１Ｃ−ペプチッドＥＩＡキット（MK101, Takara, Japan）を使用して測定した（表６）。対照群としては、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の無処理群を使用した。
【００４０】
【表５】
【００４１】
【表６】
【００４２】
前記表５のＭＭＰ−１抑制効果に示されたように、すべての試験試料においてＭＭＰ−１抑制効果が発現されることが分かり、一般的に、使用した抽出物の濃度が高いほど、生成されたＭＭＰ−１の量が減少することが分かった。また、海松子抽出物のみを含有する比較例１の組成物より海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含む実施例１〜１５の組成物がさらに効果的であり、海松子抽出物に付加される梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された抽出物の種類が多いほど、それに伴って生成されたＭＭＰ−１の量も減少することが分かった。
【００４３】
また、前記表６のタイプ１プロコラーゲンの生合成増加効果を示したように、すべての試験試料においてタイプ１プロコラーゲンの生合成増加効果が発現されることが分かり、一般的に、使用した抽出物の濃度が高いほど、生成されたプロコラーゲンの量が増加することが分かった。また、海松子抽出物のみを含有する比較例１の組成物より海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する実施例１〜１５の組成物がさらに効果的であり、海松子抽出物に付加される梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された抽出物の種類が多いほど、それに伴って生成されたプロコラーゲンの量も増加することが分かった。
【００４４】
［剤型例１〜１５及び比較剤型例１：化粧料組成物の製造］
下記表７の組成によって前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物を使用して剤型例１〜１５及び比較剤型例１の化粧料組成物を製造した。下記表７の組成によって成分１〜７の油相パートと成分８〜１５の水相パートをそれぞれ加熱して溶解した後、水相を撹拌しながら油相パートを水相に徐々に添加して乳化した。
前記剤型例１〜１５の化粧料組成物は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する組成物であるのに対し、比較剤型例１の化粧料組成物は、ただ海松子抽出物のみを含有するものである。前記組成物は、それぞれ油相と水相を６５〜７５℃で完全溶解させ、７，０００乃至８，０００rpmで５分間乳化させてクリーム剤型を製造した。
【００４５】
【表７】
【００４６】
［試験例４：しわ改善効果］
前記剤型例１５及び比較剤型例１のしわ改善効果を調べるために、下記のような方法を行った。
【００４７】
３０代女性１４０名をそれぞれ２０名ずつ７つのグループに分けて朝夕毎日２回ずつ８週間指定された目尻部位に剤型例１５及び比較剤型例１のクリームをそれぞれ塗布するようにした後、シリコーン材質のレプリカを製作し、指定部位のしわの状態を画像分析機であるビジオメータ（visiometer:SV60, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany）で測定した。対照群としては、剤型例１５及び比較剤型例１のクリームの無処理群を使用した。その結果を下記表８に示し、この結果は、８週後のそれぞれのパラメータ値から８週前のパラメータ値を差し引いた値の平均を示すものである。すなわち、この値が負の数が出るほどしわ改善効果が高いことを意味する。
【００４８】
【表８】
【００４９】
前記表８から分かるように、海松子抽出物のみを含有する比較剤型例１の組成物に比べて海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物をすべて含有する剤型例１５の組成物の皮膚しわ改善効果が大きく増進されたことを確認することができた。
【００５０】
［試験例５：角質形成細胞分化促進効果］
ヒト角質形成細胞を培養用フラスコに入れて培養し、約８０%程度に成長させた後、下記表９の試料をそれぞれ５ppm濃度で添加して４日間処理した。次に、尿素やＳＤＳ（sodiumdodecyl sulfate）のような変成剤及びβ-メルカプトエタノールのような還元剤を混合し、溶解されるタンパク質を除去した。その後、残った角質層を３１０nmでの吸光度を測定してペプチド濃度を分析し、陰性対照群である蒸留水を基準（０%）にして各試料による増加量を比較し、その結果を下記表９に示した。
【００５１】
【表９】
【００５２】
前記表９の結果から、本発明の実施例１〜１５の角質形成細胞分化促進効果に非常に優れていることを確認することができた。
【００５３】
［剤型例１６〜３０及び比較剤型例２：皮膚保湿用化粧料の製造］
下記表１０の組成によって前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物を使用して剤型例１６〜３０及び比較剤型例２の化粧料組成物を製造した。下記表１０の組成によって成分１〜５の水相パートと成分６〜９のアルコールパートをそれぞれ室温で溶解した後、水相を撹拌しながらアルコールパートを水相に徐々に添加して可溶化した。次に、アルコールパートの添加が完了した後、３〜５分間撹拌を続いた後、真空脱気し、化粧料の製造を完成した。
【００５４】
【表１０】
【００５５】
［試験例６：皮膚障壁機能回復効果］
前記剤型例１６〜３０及び比較剤型例２の皮膚障壁機能回復効果を測定するために、無毛マウスの皮膚にアセトンを繰り返し的に塗布し、障壁機能を損傷させた後、Servomed社（スウェーデン）製evaporimeter EP1で測定された表皮水分損失量（TEWL, transdermal water loss）が４．０g/m2/hに到逹したときに、前記剤型例１６〜３０及び比較剤型例２の試料を５cm2面積に塗布し、その後、表皮水分損失量を１時間、２時間、４時間、８時間経過後に測定し、減少する程度を評価することによって、障壁機能が回復される程度を評価した。この時、公知の脂質混合物（セラミド：コレステロール：脂肪酸の２：１：１混合物）を陽性対照群として使用した。その結果は、初期損傷された障壁状態での表皮水分損失量を基準（100%）にして時間による変化を比較し、下記表１１に示した。
【００５６】
【表１１】
【００５７】
前記表１１の結果から分かるように、海松子抽出物のみを含有する比較剤型例２の組成物より海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する剤型例１６〜３０の組成物がさらに効果的であり、海松子抽出物に付加される梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された抽出物の種類が多いほど、障壁機能回復効果がさらに高いことが分かった。
以下では、本発明による化粧料組成物の剤型例を説明するが、本発明は、これらを限定するものではなく、ただ具体的に説明するためのものである。
【００５８】
【表１２】
【００５９】
【表１３】
【００６０】
【表１４】
【００６１】
【表１５】
【００６２】
【表１６】
【産業上の利用可能性】
【００６３】
以上説明したように、本発明による化粧料組成物は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有し、優れた角質形成細胞の成長促進効果、紫外線によって生成される活性酸素消去効果、皮膚基質の分解に関連された紫外線によるＭＭＰ−１の生合成を減少させてタイプ１プロコラーゲンの生合成を促進させる効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果があるので、前記組成物は、角質形成細胞成長促進用組成物、活性酸素消去用組成物、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進用組成物、皮膚老化防止用組成物及び皮膚保湿用組成物として化粧品に有用に利用することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する化粧料組成物に関する。より詳細には、本発明による化粧料組成物は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することによって、優れた角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果を示す。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、人体の一次防御膜であって、体内の諸器官を温度及び湿度変化と紫外線や公害物質など外部環境の刺激から保護し、体温調節などの生体恒常性維持に重要な役目をしている。しかし、紫外線、外部から受ける過度な物理的、化学的刺激及びストレス、栄養欠乏などは、皮膚の正常機能を低下させ、弾力損失、角質化、しわ生成などの皮膚老化現象を促進させるようになる。
【０００３】
特に、角質細胞が順々に続いて作られ、最外層の古い角質細胞が時々離脱されて行くので、表皮が一定の厚さを維持するようになる角化過程が順調でなければ、非正常的な角質細胞が生成され、皮膚表面に積もって角質層が厚くなり、これにより、皮膚が粗くなり、微細な小じわが生じるようになり、結局、皮膚老化が進行される。また、紫外線によって生成される活性酸素及び皮膚基質の分解に関連した紫外線によるＭＭＰ−１の生合成によるタイプ１プロコラーゲンの生合成減少も皮膚老化と関連がある。
【０００４】
したがって、このような現象を防止し、一層元気で且つ弾力ある皮膚を維持するために、従来、各種の動物、植物、微生物などから得た生理活性物質が強化された化粧品を使用することによって、皮膚の固有機能を維持させ、皮膚細胞を活性化させて、皮膚老化を効果的に抑制するための努力が行われて来た。しかし、既存の化粧品原料は、大部分効能が弱いか、皮膚副作用を誘発するなどさまざまな問題点を持っている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
これより、本発明者らは、天然物のうち皮膚副作用を誘発せずに、皮膚保湿効果及び皮膚老化防止効果を有する原料を捜すために努力した結果、海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する組成物が角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成を減少させてタイプ１プロコラーゲンの生合成を促進する効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果があることを知見し、本発明を完成した。
【０００６】
したがって、本発明の目的は、有効成分として海松子抽出物抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有し、角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果を有する化粧料組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するために、本発明による化粧料組成物は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする。前記本発明による化粧料組成物は、前記有効成分を含有することによって、優れた角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果を示すことを特徴とする。
【０００８】
以下、本発明による化粧料組成物の各有効成分を詳しく説明する。
海松子（Pinus koraiensis）は、マツ科に属する朝鮮松の熟した実を乾したもので、漢方では松の実を薬剤として称する言葉で、柏子、松子、実柏とも言う。これは、松かさのような毬果に入っており、種子は、三角卵状形である。昔から海松子は、滋養強壮剤として多く使用し、病後回復期に食べれば良いものと知られている。また、これは、脂肪及びタンパク質が豊かな高熱量食品であり、特にビタミンＢが豊かで、皮膚を柔らかくし、血圧を下げる作用をする。
【０００９】
梅子（Prunus mume）は、ローズ科に属する梅の実であって、主として「メシル」と呼ばれる。中国古書である新農本初耕によれば、梅子は、最も古い果物の木であって、薬用として使用されたという記録が残っており、東医宝監など各種医書にも、漢薬材として使用されたという記録が多い。漢方では、健胃、止血、下痢止め、去痰、酒毒排出、解毒などに効果を示す漢薬材として利用している。梅子は、アルカリ性食品であって、疲労回復によく、体質改善効果がある。特に、これは、解毒作用に優れていて、皮膚の美容にもよく、殺菌効果もある。最近では、抗癌食品として多くの研究が行われている。
【００１０】
赤小豆（Phaseolus angularis）は、マメ科の植物であって、アズキの生薬名として小豆とも言う。赤小豆の原産地は、中国一帯であると推定されており、東洋では、前々から栽培した作物である。漢方では、利水、散血,縮氣、行風、消腫、除濕、和血、解毒、排膿、健脾胃、開心竅、堅筋骨、瘟疫などに効果を示す漢薬材として利用している。
【００１１】
カリン（Chaenomeles sinensis）は、カリンの実であって、中国原産の栽培植物であり、真桑瓜のような形状をしているが、木にぶらさがっていて、木瓜とも呼ばれる。カリンの主要成分としては、サポニン、有機酸、フラボノイド、タンニンなどを含有している。漢方では、舒筋、活絡、平肝、和胃、去濕（removing wetness in the body）、止痛などに効果を示す漢薬材として利用している。
【００１２】
巨勝子（Sesamum indicum）は、晩成胃膓炎、神経炎、高血圧、便秘、強壮、貧血などに優れた効果を示し、本草学によれば、コレステロールを減少させ、血液循環を円滑にし、皮膚と髪の毛を潤沢にする作用があると記録されている。漢方では、潤五臟、補肝腎、烏須髮、明耳目、長飢肉、利大小腸（strengthening functions of the intestines）に効果を示す漢方薬で利用している。巨勝子のタンパク質は、主にグロブリンであり、抗酸化作用を助けるγ-トコフェロールが多く含有されていて、抗酸化作用によって皮膚老化を防止し、皮膚新陳代謝を活発にして、部分的に黒く変わった色素沈着現象にも役立つ。
【００１３】
本発明による化粧料組成物に含有される前記抽出物は、植物体から有効成分を抽出するために、通常使用され且つ当業者に周知の方法によって製造されたものである。例えば、生薬材の粉砕物に水、炭素数１〜３の無水または含水低級アルコール、アセトン、エチルアセテートまたはジエチルエーテルを粉砕物の乾燥重量に対して１〜１５体積倍の量で付加した後、冷却コンデンサーが付着された抽出器で５０〜１００℃温度で５〜２４時間加熱して抽出するか；前記粉砕物に水、炭素数１〜３の無水または含水低級アルコール、アセトン、エチルアセテートまたはジエチルエーテルを粉砕物の乾燥重量に対して１〜１５体積倍の量で付加した後、４〜２５℃温度で３〜２０日間沈積させて抽出物を得るか；無水または含水エチルアルコールまたはメタノール抽出物に適量の水を加えた後に生ずる沈殿物を濾過して除去し、これにエチルアセテート、ブタノールまたはジエチルエーテルを加えてよく混合した後、静置して層を分離し、上層を分離した後、冷却コンデンサーが付着された抽出器で抽出物を得る。上記した方法によって抽出した生薬材抽出物の抽出濾液を減圧濃縮し、乾燥した後、化粧料組成物に配合する。
【００１４】
本発明による抽出物は、各生薬材の別途の抽出物を混合して利用することもでき、生薬材を混合した後、一度に抽出して製造されたものを使用することもできる。
【００１５】
本発明による化粧料組成物は、全体組成物のうちすべての有効成分、すなわち海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有し、前記有効成分は、組成物の全体重量に対して０．０００１乃至２５重量%の濃度で含有することが好ましい。これは、有効成分が０．０００１重量%未満の場合には、その効果が弱く、２５重量%を超過する場合には、製品の使用感及び剤型の安定性に問題が発生するからである。
【００１６】
本発明による化粧料組成物は、優れた角質形成細胞成長促進効果、活性酸素消去効果、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果を示す。
【００１７】
また、本発明による化粧料組成物は、上記した抽出物以外に本発明が目的とする主効果を損なわない範囲内で、好ましくは、主効果に相乗効果を与えることができる他の成分などを含有してもよく、本発明の抽出物以外に他の成分は、その他の化粧料の剤型または使用目的によって当業者が困難性なしに適宜選定して配合することができる。
【００１８】
例えば、前記化粧料組成物は、その効果を増加させるために皮膚吸収促進物質を含むことができる。また、本発明の化粧料組成物は、水溶性ビタミン、油溶性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質及び海草エキスよりなる群から選択された物質を含むことができる。
【００１９】
さらに、本発明の化粧料組成物は、前記必須成分とともに、必要に応じて通常化粧料に配合される他の成分を含むことができ、その例として、油脂成分、保湿剤、エモルリエント剤、界面活性剤、有機及び無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などが挙げられる。
【００２０】
本発明の化粧料組成物に含まれることができる配合成分は、これらに限定されるものではなく、また、前記成分の配合量は、本発明の目的及び効果を損傷させない範囲内で可能であるが、組成物の全体重量に対して、好ましくは、０．０１〜１０重量%、より好ましくは、０．０１〜５重量%配合される。
【００２１】
本発明による化粧料組成物は、その剤型において特に限定されず、例えば、乳液、クリーム、化粧水、エッセンス、パック、ジェル、パウダー、リップスティック、メーキャップベース、ファウンデーション、ローション、軟膏、ゲル、パッチ、美容液、クレンジングフォーム、クレンジングクリーム、クレンジングウォーター、せっけんまたは噴霧剤などのような剤型が挙げられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下、実施例及び試験例により本発明をさらに詳しく説明するが、本発明がこれら例に限定されるものではない。
【００２３】
［参考例１：生薬材抽出物の製造］
海松子、梅子、赤小豆、カリン、巨勝子（ゴンファ薬品（株））の各薬材を採取し
た後、品質に優れた薬材のみを選別し、水洗して不純物を除去した後、日陰で乾燥した。次に、海松子、梅子、赤小豆、カリン、巨勝子を各々１００g取って精製水２Ｌずつを添加した後、約９５〜１００℃還流装置下で１８時間沸かしながら抽出した。抽出完了後、続いて蒸溜濃縮して、全体重量が約５００gになるまで煎じた後、常温に冷却した。次に、濾過布に入れて圧搾し、固形粉を分離し除去した後、濾過し、粘性ある濃縮液を得た。濃縮液を８０℃減圧下で濃縮し、水を完全に除去した後、真空乾燥し、て粉末固体状態の抽出物（海松子５．０g、梅子１０g、赤小豆５．０g、カリン５．０g、巨勝子５．０g）を収得した。
【００２４】
［実施例１〜１５及び比較例１］
前記参考例１で得た各生薬材水抽出物を下記表１の組合せで混合して実施例１〜１５及び比較例１を製造し、実験に使用した。この時、各抽出物の混合割合は、同量にした。
【００２５】
【表１】
【００２６】
［試験例１：角質形成細胞の成長促進（MTT assay）効果］
前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物が角質形成細胞の成長能に及ぶ効果をＭＴＴ方法で測定した。以下、その方法を簡略に説明する。
【００２７】
まず、角質形成細胞を９６ウェルプレートにウェル(well)当り２００μL当り５×１０3個の濃度（5×103個／200μL／ウェル）で植えて２４時間培養した後、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物を用いて０．０００１%、０．００１%、０．０１%、０．１%の各濃度で処理して４８時間培養した後、培養液を吸入して除去した後、ＰＢＳで１回洗浄し、ＭＴＴ（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazoliumbromide, Sigma, USA）（0.5mg/ml）溶液を１００μLずつ細胞に添加し、４時間３７℃、５%ＣＯ2で培養した。その後、培養液を吸入して除去した後、ＤＭＳＯ（dimethylsulfoxide）溶液２００μLを添加し、シェーカーで１０分間揺れた後、ELISAリーダー（DI biotech, Korea）で５４０nmでの吸光度を読み取った。この時、対照群としては、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の無処理群を使用した。その結果を下記表２に示した。
【００２８】
【表２】
【００２９】
前記表２に示したように、すべての場合においてその効果が発現されることが分かり、一般的に、使用した抽出物の濃度が高いほど、角質形成細胞の成長促進効果も増加した。また、海松子抽出物のみを含む比較例１の組成物より海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する実施例１乃至１５の組成物がさらに効果的であり、海松子抽出物に付加される梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された抽出物の種類が多いほど、それに伴って角質形成細胞の成長促進効果も増加することが分かった。
【００３０】
［試験例２：活性酸素消去効果］
前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の紫外線によって生成される活性酸素生成抑制効果、すなわち活性酸素消去効果を調べるために蛍光物質を利用して下記のような実験を行った。
【００３１】
まず、実験に使用した細胞株は、ドイツ癌研究センターのフセニグ博士（Dr. Fusenig）から分譲された人間角質細胞HaCaT細胞株（Human keratinocytes HaCaT cell line）であって、これを蛍光測定用９６ウェルブラックプレートにウェル当り２．０×１０4個に分株し、ペニシリン／ストレプトマイシンが添加されたＤＭＥＭ（Dulbeccos Modification of Eagles Medium, FBS10%, Gibco, USA）培地を使用して３７℃、５%ＣＯ2条件で１日間培養した後、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物を用いて０．５%、０．２５%、０．１２５%、０．０６２５%、０．０３１２５%の各濃度で処理した。
【００３２】
次に、試験試料を入れて２４時間培養した後、ＨＣＳＳ（HEPES-buffered control salt solution, Gibco, USA）で洗浄し、残っている培地を除去し、ＨＣＳＳに２０μMで用意したＤＣＦＨ−ＤＡ（2',7'-dichlorodihydro-fluoresceindiacetate, Molecular Probes, USA)を１００μL加え、３７℃、５%ＣＯ2条件で２０分間培養し、ＨＣＳＳで洗浄した。その後、各試料濃度別に処理されたＨＣＳＳを１００μL加えた後、初期に活性酸素に酸化されたＤＣＦ（dichlorofluorescein）の蛍光度を蛍光プレートリーダー（Ex=485nm、Em=530nm）で測定した。その後、ＵＶＢ（30mJ/cm2）を照射し、処理直後（表３）及び処理３時間後（表４）の蛍光度を蛍光プレートリーダー（Ex=485nm、Em=530nm）で測定した。この時、対照群としては、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の無処理群を使用した。
【００３３】
【表３】
【００３４】
【表４】
【００３５】
前記表３及び表４に示されたように、すべての試験試料において活性酸素生成抑制効果が発現されることが分かり、一般的に、使用した抽出物の濃度が高いほど、活性酸素生成がさらに抑制されることが分かった。また、海松子抽出物のみを含む比較例１の組成物より海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する実施例１〜１５の組成物がさらに効果的であり、海松子抽出物に付加される梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された抽出物の種類が多いほど、それに伴って活性酸素生成もさらに抑制されることが分かった。また、処理直後より処理３時間後に効果がさらに高いことが分かった。
【００３６】
［試験例３：ＭＭＰ−１及びプロコラーゲン分析（procollagen assay）］
前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の皮膚基質の分解に関連された紫外線によるＭＭＰ−１の生合成を減少させて、タイプ１プロコラーゲンの生合成を促進させる効果を調べるために、ＭＭＰ−１及びプロコラーゲン分析を下記のような方法で行った。
【００３７】
まず、正常表皮の脂肪層を除去し、細く切って、コラゲナーゼで表皮と真皮を分離した後、表皮と真皮組職をそれぞれ０．２５%トリプシン溶液に入れて３７℃、５%ＣＯ2培養器で１０分間処理した。その後、ボルテックス（vortex）を施行し、角質形成細胞と繊維芽細胞をそれぞれ遊離させた。遊離された細胞を集めて洗浄した後、角質形成細胞は、ＫＧＭ（keratinocyte growth medium, Clonetics, USA）に１×１０4cells/cm2濃度で培養し、繊維芽細胞は、１０%牛胎児血清（FBS）が添加されたＤＭＥＭ培地で培養した。７０〜８０%程度成長すれば、１：３の割合で分株し、継代培養し、３〜４次継代培養した細胞を実験に利用した。
【００３８】
ＭＭＰ−１の量を測定する実験のために、繊維芽細胞を４８ウェルプレートに９０%以上培養した後、１日間飢餓（starvation）状態にした。その後、ＰＢＳで２回洗浄した後、ＰＢＳを１００μLずつ入れた状態でプレートの蓋を開いて紫外線Ａ（UVA filtersが装置されたDermlight cube 401, UVAtec, USA）を１５J/cm2で照射した。照射直後にさらにＰＢＳで１回洗浄し、前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物がそれぞれ０．００１%、０．０１%の割合で含まれた牛胎児血清を含まないＤＭＥＭを入れて３７℃、５%ＣＯ2培養器で４８時間培養した後、培地中に遊離されたＭＭＰ−１の量をＭＭＰ−１人間ＥＬＩＳＡシステム(RPN2610, Amersham Pharmacia Biothch, UK）を利用して測定し、繊維芽細胞の全体タンパク質の量で補正した（表５）。この時、対照群としては、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の無処理群を使用した。
【００３９】
一方、プロコラーゲンの量を測定するために、前記ＭＭＰ−１の量を測定する方法と同一の条件で飢餓状態で紫外線の照射なしに実施例１〜１５及び比較例１の抽出物をそれぞれ０．００１及び０．０１％の割合で加え、２４時間後に培地中に遊離されたプロコラーゲンの量をプロコラーゲンタイプ−１Ｃ−ペプチッドＥＩＡキット（MK101, Takara, Japan）を使用して測定した（表６）。対照群としては、実施例１〜１５及び比較例１の抽出物の無処理群を使用した。
【００４０】
【表５】
【００４１】
【表６】
【００４２】
前記表５のＭＭＰ−１抑制効果に示されたように、すべての試験試料においてＭＭＰ−１抑制効果が発現されることが分かり、一般的に、使用した抽出物の濃度が高いほど、生成されたＭＭＰ−１の量が減少することが分かった。また、海松子抽出物のみを含有する比較例１の組成物より海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含む実施例１〜１５の組成物がさらに効果的であり、海松子抽出物に付加される梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された抽出物の種類が多いほど、それに伴って生成されたＭＭＰ−１の量も減少することが分かった。
【００４３】
また、前記表６のタイプ１プロコラーゲンの生合成増加効果を示したように、すべての試験試料においてタイプ１プロコラーゲンの生合成増加効果が発現されることが分かり、一般的に、使用した抽出物の濃度が高いほど、生成されたプロコラーゲンの量が増加することが分かった。また、海松子抽出物のみを含有する比較例１の組成物より海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する実施例１〜１５の組成物がさらに効果的であり、海松子抽出物に付加される梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された抽出物の種類が多いほど、それに伴って生成されたプロコラーゲンの量も増加することが分かった。
【００４４】
［剤型例１〜１５及び比較剤型例１：化粧料組成物の製造］
下記表７の組成によって前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物を使用して剤型例１〜１５及び比較剤型例１の化粧料組成物を製造した。下記表７の組成によって成分１〜７の油相パートと成分８〜１５の水相パートをそれぞれ加熱して溶解した後、水相を撹拌しながら油相パートを水相に徐々に添加して乳化した。
前記剤型例１〜１５の化粧料組成物は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する組成物であるのに対し、比較剤型例１の化粧料組成物は、ただ海松子抽出物のみを含有するものである。前記組成物は、それぞれ油相と水相を６５〜７５℃で完全溶解させ、７，０００乃至８，０００rpmで５分間乳化させてクリーム剤型を製造した。
【００４５】
【表７】
【００４６】
［試験例４：しわ改善効果］
前記剤型例１５及び比較剤型例１のしわ改善効果を調べるために、下記のような方法を行った。
【００４７】
３０代女性１４０名をそれぞれ２０名ずつ７つのグループに分けて朝夕毎日２回ずつ８週間指定された目尻部位に剤型例１５及び比較剤型例１のクリームをそれぞれ塗布するようにした後、シリコーン材質のレプリカを製作し、指定部位のしわの状態を画像分析機であるビジオメータ（visiometer:SV60, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany）で測定した。対照群としては、剤型例１５及び比較剤型例１のクリームの無処理群を使用した。その結果を下記表８に示し、この結果は、８週後のそれぞれのパラメータ値から８週前のパラメータ値を差し引いた値の平均を示すものである。すなわち、この値が負の数が出るほどしわ改善効果が高いことを意味する。
【００４８】
【表８】
【００４９】
前記表８から分かるように、海松子抽出物のみを含有する比較剤型例１の組成物に比べて海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物をすべて含有する剤型例１５の組成物の皮膚しわ改善効果が大きく増進されたことを確認することができた。
【００５０】
［試験例５：角質形成細胞分化促進効果］
ヒト角質形成細胞を培養用フラスコに入れて培養し、約８０%程度に成長させた後、下記表９の試料をそれぞれ５ppm濃度で添加して４日間処理した。次に、尿素やＳＤＳ（sodiumdodecyl sulfate）のような変成剤及びβ-メルカプトエタノールのような還元剤を混合し、溶解されるタンパク質を除去した。その後、残った角質層を３１０nmでの吸光度を測定してペプチド濃度を分析し、陰性対照群である蒸留水を基準（０%）にして各試料による増加量を比較し、その結果を下記表９に示した。
【００５１】
【表９】
【００５２】
前記表９の結果から、本発明の実施例１〜１５の角質形成細胞分化促進効果に非常に優れていることを確認することができた。
【００５３】
［剤型例１６〜３０及び比較剤型例２：皮膚保湿用化粧料の製造］
下記表１０の組成によって前記実施例１〜１５及び比較例１の抽出物を使用して剤型例１６〜３０及び比較剤型例２の化粧料組成物を製造した。下記表１０の組成によって成分１〜５の水相パートと成分６〜９のアルコールパートをそれぞれ室温で溶解した後、水相を撹拌しながらアルコールパートを水相に徐々に添加して可溶化した。次に、アルコールパートの添加が完了した後、３〜５分間撹拌を続いた後、真空脱気し、化粧料の製造を完成した。
【００５４】
【表１０】
【００５５】
［試験例６：皮膚障壁機能回復効果］
前記剤型例１６〜３０及び比較剤型例２の皮膚障壁機能回復効果を測定するために、無毛マウスの皮膚にアセトンを繰り返し的に塗布し、障壁機能を損傷させた後、Servomed社（スウェーデン）製evaporimeter EP1で測定された表皮水分損失量（TEWL, transdermal water loss）が４．０g/m2/hに到逹したときに、前記剤型例１６〜３０及び比較剤型例２の試料を５cm2面積に塗布し、その後、表皮水分損失量を１時間、２時間、４時間、８時間経過後に測定し、減少する程度を評価することによって、障壁機能が回復される程度を評価した。この時、公知の脂質混合物（セラミド：コレステロール：脂肪酸の２：１：１混合物）を陽性対照群として使用した。その結果は、初期損傷された障壁状態での表皮水分損失量を基準（100%）にして時間による変化を比較し、下記表１１に示した。
【００５６】
【表１１】
【００５７】
前記表１１の結果から分かるように、海松子抽出物のみを含有する比較剤型例２の組成物より海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有する剤型例１６〜３０の組成物がさらに効果的であり、海松子抽出物に付加される梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物、巨勝子抽出物よりなる群から選択された抽出物の種類が多いほど、障壁機能回復効果がさらに高いことが分かった。
以下では、本発明による化粧料組成物の剤型例を説明するが、本発明は、これらを限定するものではなく、ただ具体的に説明するためのものである。
【００５８】
【表１２】
【００５９】
【表１３】
【００６０】
【表１４】
【００６１】
【表１５】
【００６２】
【表１６】
【産業上の利用可能性】
【００６３】
以上説明したように、本発明による化粧料組成物は、有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有し、優れた角質形成細胞の成長促進効果、紫外線によって生成される活性酸素消去効果、皮膚基質の分解に関連された紫外線によるＭＭＰ−１の生合成を減少させてタイプ１プロコラーゲンの生合成を促進させる効果、老化防止効果及び皮膚保湿効果があるので、前記組成物は、角質形成細胞成長促進用組成物、活性酸素消去用組成物、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進用組成物、皮膚老化防止用組成物及び皮膚保湿用組成物として化粧品に有用に利用することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする角質形成細胞成長促進用化粧料組成物。
【請求項２】
有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする活性酸素消去用化粧料組成物。
【請求項３】
有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進用化粧料組成物。
【請求項４】
有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする皮膚老化防止用化粧料組成物。
【請求項５】
有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする皮膚保湿用化粧料組成物。
【請求項６】
前記抽出物は、水を抽出溶媒として抽出したことを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載の化粧料組成物。
【請求項７】
前記組成物は、1,3-ブチレングリコールをさらに含むことを特徴とする請求項６に記載の化粧料組成物。
【請求項８】
前記抽出物は、組成物の全体重量に対して０．０００１乃至２５重量%含有することを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載の化粧料組成物。
【請求項１】
有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする角質形成細胞成長促進用化粧料組成物。
【請求項２】
有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする活性酸素消去用化粧料組成物。
【請求項３】
有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする、ＭＭＰ−１の生合成減少によるタイプ１プロコラーゲンの生合成促進用化粧料組成物。
【請求項４】
有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする皮膚老化防止用化粧料組成物。
【請求項５】
有効成分として海松子抽出物に梅子抽出物、赤小豆抽出物、カリン抽出物及び巨勝子抽出物よりなる群から選択された１つ以上をさらに含有することを特徴とする皮膚保湿用化粧料組成物。
【請求項６】
前記抽出物は、水を抽出溶媒として抽出したことを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載の化粧料組成物。
【請求項７】
前記組成物は、1,3-ブチレングリコールをさらに含むことを特徴とする請求項６に記載の化粧料組成物。
【請求項８】
前記抽出物は、組成物の全体重量に対して０．０００１乃至２５重量%含有することを特徴とする請求項１乃至５のいずれかに記載の化粧料組成物。
【公表番号】特表２００９−５２３７８５（Ｐ２００９−５２３７８５Ａ）
【公表日】平成２１年６月２５日（２００９．６．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５５１１６９（Ｐ２００８−５５１１６９）
【出願日】平成１８年６月３０日（２００６．６．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００６／００２５４９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０８３８６８
【国際公開日】平成１９年７月２６日（２００７．７．２６）
【出願人】（５０３３２７６９１）株式會社アモーレパシフィック (73)
【住所又は居所原語表記】１８１， Ｈａｎｋａｎｇ−ｒｏ ２−ｋａ， Ｙｏｎｇｓａｎ−ｋｕ， Ｓｅｏｕｌ １４０−７７７ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年６月２５日（２００９．６．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年６月３０日（２００６．６．３０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＫＲ２００６／００２５４９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０８３８６８
【国際公開日】平成１９年７月２６日（２００７．７．２６）
【出願人】（５０３３２７６９１）株式會社アモーレパシフィック (73)
【住所又は居所原語表記】１８１， Ｈａｎｋａｎｇ−ｒｏ ２−ｋａ， Ｙｏｎｇｓａｎ−ｋｕ， Ｓｅｏｕｌ １４０−７７７ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｋｏｒｅａ
【Ｆターム（参考）】
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