疎水性防腐剤を内包する物質内包性無機粒子複合体及びその製造方法
【課題】 分散安定性及び透明性を有し且つ抗菌持続性に優れた物質内包性無機粒子複合体を提供する。
【解決手段】 物質内包性無機粒子と下記（１）式で表される重合体とからなる複合体であって、前記物質内包性無機粒子に疎水性高分子と共に疎水性防腐剤を担持してなる物質内包性無機粒子複合体とする。
【化１】
（式中、ｍは１〜２０００までの整数、ｎは２〜２００００までの整数を表す。）
【解決手段】 物質内包性無機粒子と下記（１）式で表される重合体とからなる複合体であって、前記物質内包性無機粒子に疎水性高分子と共に疎水性防腐剤を担持してなる物質内包性無機粒子複合体とする。
【化１】
（式中、ｍは１〜２０００までの整数、ｎは２〜２００００までの整数を表す。）
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本発明は疎水性防腐剤を担持した物質内包性無機粒子複合体に関する。
【０００２】
シリカやクレイなどの物質内包性無機粒子は様々な化合物を担持することが可能であり、吸着剤などに応用されてきている。さらに最近では、生理活性物質を物質内包性無機粒子に担持させ薬物徐放システムとしての利用も検討されている（特許文献１〜２及び非特許文献１〜１０）。しかしながら、担持させた機能性物質を水などの液体中で利用する場合、多孔体微粒子の分散安定性が悪いという問題があった。一方、防腐剤には長期に亘って抗菌性を維持することが求められており、また、塗料や紙パルプのコーティング剤等に使用する場合は透明性も必要である。
【０００３】
【特許文献１】米国出願公開第２００３／００３１６９４号
【特許文献２】国際公開第０３／０２４４２９号パンフレット
【非特許文献１】Fujii,T.;Ishii,A.;Takusagawa,N.;Anpo,M. Fluorescence spectra and chemical species of fluorescein molecules adsorbed on a calcinated porous Vycor glass. Research on Chemical Intermediates(1992),17(1),1-14
【非特許文献２】Krysztafkiewicz,Andrzej;Binkowski,Slawomir;Jesionowski,Teofil.Adsorption of dyes on a silica surface. Applied Surface Science(2002),199(1-4),31-39
【非特許文献３】Fang,Ming;Grant,Patrick S.;McShane,Michael J.;Sukhorukov,Gleb B.;Golub,Vlandimir O.;Lvov,Yuri M. Magnetic bio/nanoreactor with multilayer shells of glucose oxidase and inorganic nanoparticles. Langmuir(2002), 18(16),6338-6344
【非特許文献４】Cherkaoui,I.;Monticone,V.;Vaution,C.;Treiner,C. Surface modification of silica particles by a cationic surfactant:adsolubilization of steroids from aqueous solutions. International Journal of Pharmaceutics(1998),176(1),111-120
【非特許文献５】Goto,H.;Isobe,T.;Senna,M. Controlled dissolution of phenytoin by hybridizing with silica nanoparticles. Journal of Nanoparticle Research (1999),1(2),205-213
【非特許文献６】Lech, Stanley. Chewable soft gelatin-encapsulated pharmaceutical adsorbates. U.S.(2000), 5pp. CODEN:USXXAM US 6027746 A 20000222 CAN 132:156874
【非特許文献７】Canefe, Kandemir;Bayel,Demet;Unver,E.Levent. In vitro adsorption study of drugs by various excipients. Acta Pharmaceutica Turcica(1998), 40(3), 103-119
【非特許文献８】Malmsten, Martin. Ellipsometry and TIRF studies of adsorption processes in parenteral drug delivery. Interface Science(1997),5(2/3),159-167
【非特許文献９】Rupprecht,H.;Biersack,M.J. Effect of pore structure of silica on the availability of drugs. Pharmazeutische Industrie(1974),36(4),260-3
【非特許文献１０】Levy H;Dasgupta A;Lin A;Blackwell W;Mosley A M;Okarma T Adsorption of charged non-albumin bound drugs by amorphous silica. JOURNAL OF TOXICOLOGY.CLINICAL TOXICOLOGY(1995),33(5),457-62
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明はこのような事情に鑑み、分散安定性及び透明性を有し且つ抗菌持続性に優れた物質内包性無機粒子を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、重合体を多孔質粒子に結合等させることにより、高い分散安定性及び透明性を付与した多孔体微粒子を出願したが（特願２００３−２９３９４２号）、さらに詳細に検討したところ、（１）式で表される重合体と疎水性高分子と疎水性防腐剤とを物質内包性無機粒子に担持させることにより、様々な媒体中で優れた分散安定性及び透明性を有し、さらに疎水性防腐剤を徐放することができるため抗菌持続性を有することを知見して、本発明を完成させた。
【０００６】
かかる本発明の第１の態様は、物質内包性無機粒子と下記（１）式で表される重合体とからなる複合体であって、前記物質内包性無機粒子に疎水性高分子と共に疎水性防腐剤を担持してなることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体にある。
【０００７】
【化１】
【０００８】
（式中、ｍは１〜２０００までの整数、ｎは２〜２００００までの整数を表す。）
【０００９】
本発明の第２の態様は、第１の態様において、前記疎水性防腐剤が１，２−ビス（ブロモアセトキシ）エタン（ＢＢＡＥ）であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体にある。
【００１０】
本発明の第３の態様は、第１または２の態様において、前記物質内包性無機粒子が無機層状物質であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体にある。
【００１１】
本発明の第４の態様は、第３の態様において、前記無機層状物質がクレイであることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体にある。
【００１２】
本発明の第５の態様は、第１〜４の何れかの態様において、前記疎水性高分子が、ポリ乳酸、ポリメチルメタクリレート及びポリ（α−メチルスチレン）から選択される少なくとも一種であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体にある。
【００１３】
本発明の第６の態様は、物質内包性無機粒子と下記（１）式で表される重合体と疎水性防腐剤と疎水性高分子とを溶媒中で混合した後、粉末状の物質内包性無機粒子複合体を得ることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【００１４】
【化２】
【００１５】
（式中、ｍは１〜２０００までの整数、ｎは２〜２００００までの整数を表す。）
【００１６】
本発明の第７の態様は、第６の態様において、前記物質内包性無機粒子と前記疎水性防腐剤と前記疎水性高分子とを溶媒中で混合して物質内包性無機粒子に疎水性防腐剤と疎水性高分子を担持させた後に、前記（１）式で表される重合体を混合することを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【００１７】
本発明の第８の態様は、第６又は７の態様において、前記疎水性防腐剤が１，２−ビス（ブロモアセトキシ）エタン（ＢＢＡＥ）であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【００１８】
本発明の第９の態様は、第６〜８の何れかの態様において、前記物質内包性無機粒子が無機層状物質であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【００１９】
本発明の第１０の態様は、第９の態様において、前記無機層状物質がクレイであることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【００２０】
本発明の第１１の態様は、第６〜１０の何れかの態様において、前記疎水性高分子が、ポリ乳酸、ポリメチルメタクリレート及びポリ（α−メチルスチレン）から選択される少なくとも一種であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【発明の効果】
【００２１】
物質内包性無機粒子と上記（１）式で表される重合体からなり、物質内包性無機粒子に疎水性高分子と疎水性防腐剤とを担持した物質内包性無機粒子複合体とすると、分散安定性及び透明性を有し且つ抗菌持続性に優れる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００２３】
本発明の物質内包性無機粒子複合体は、物質内包性無機粒子と上記（１）式で表される重合体とからなる複合体であって、物質内包性無機粒子に疎水性高分子と共に疎水性防腐剤が担持されている。
【００２４】
物質内包性無機粒子とは、物質を粒子内に担持することができる無機粒子であり、無機層状物質や多孔質粒子等が挙げられる。
【００２５】
無機層状物質とは、層状構造を有する無機粒子である。この層間距離を変化させながら層間に疎水性物質を担持する。ここで、層状構造とは、原子が共有結合などによって強く結合して密に配列した面がファン・デル・ワールス力など弱い結合力によって平行に積み重なった構造である。無機層状物質としては、層状ケイ酸塩であるクレイ（粘土鉱物）、層状水酸化物、遷移金属酸化物、遷移金属ジカルコゲナイド、グラファイト、リン酸塩、金属リン化合物等が挙げられる。クレイは、天然物でも合成物でもよく、例えば、モンモリロナイト、カオリナイト、サポナイト、ヘクトライト、ベントナイト等が使用できる。無機層状物質を溶媒に分散させると膨潤して層間距離が広がるため、疎水性防腐剤をこの層間に取り込むことができる。
【００２６】
多孔質粒子とは、細孔構造を有する無機粒子である。多孔質粒子は、無機層状物質とは異なり非膨潤型の物質内包性無機粒子であり、細孔内に疎水性防腐剤を担持する。多孔質粒子としては、シリカ、ゼオライト等を挙げることができる。
【００２７】
物質内包性無機粒子の平均粒子径は特に限定されないが、好ましくは０．１ｎｍ〜１０μｍ、さらに好ましくは０．５ｎｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１ｎｍ〜３μｍである。
【００２８】
この物質内包性無機粒子の層間又は細孔内に疎水性防腐剤が担持されている。疎水性防腐剤は特に限定されないが、例えば、１，２−ビス（ブロモアセトキシ）エタン（ＢＢＡＥ）、２−（４−チアゾリル）−ベンズイミダゾール（ＴＢＺ）等が挙げられる。疎水性防腐剤の量は、無機層状物質に対して１／１０〜１０倍量が好ましい。
【００２９】
さらに、物質内包性無機粒子には、疎水性高分子も担持されている。疎水性高分子を担持させることにより、形成された物質内包性無機粒子複合体を水、アルコール等の溶媒に分散させたときに、物質内包性無機粒子の層間又は細孔内に担持させた疎水性防腐剤を徐放する性質を示すようになる。このように疎水性防腐剤を徐々に放出するため、本発明の物質内包性無機粒子複合体は、抗菌性が長期間持続する。また、疎水性高分子を担持させることにより、疎水性防腐剤の導入率を向上させることができる。この疎水性高分子の種類も特に限定されないが、例えば、ポリ乳酸、ポリメチルメタクリレート、ポリ（α―メチルスチレン）、ポリスチレン、ポリイオンコンプレックス等を挙げることができる。これらの疎水性高分子は単独で用いても、数種を併用して用いてもよい。疎水性高分子の量は、疎水性防腐剤の１／１０〜２倍量が好ましい。
【００３０】
また、上記（１）式で表される重合体も物質内包性無機粒子に担持されている。（１）式で表される重合体の側鎖末端のジメチルアミノ基を、物質内包性無機粒子表面に共有結合、イオン結合又は水素結合などの相互作用によって吸着させることにより、（１）式のポリエチレングリコール（以下「ＰＥＧ」ともいう）セグメントが物質内包性無機粒子表層にブラシ状に担持されているものと推測される。これにより、ＰＥＧセグメントが物質内包性無機粒子表面上に十分な親媒性を付与し、物質内包性無機粒子表面への非特異吸着や凝集沈殿を回避できるように作用するため、形成された物質内包性無機粒子複合体に高分散性を付与することができる。したがって、例えば、高イオン強度（強酸性）など通常分散し難い条件下でも、高い分散安定性を維持することができる。（１）式で表される重合体の量は特に限定されないが、物質内包性無機粒子に対して５〜３０倍量が好ましい。
【００３１】
本発明の物質内包性無機粒子複合体を水、アルコール等の溶媒に分散させた場合、透明性が高いため、透明性が求められる防腐剤、例えば塗料、紙パルプのコーティング剤等の防腐剤として、好適に使用することができる。
【００３２】
本発明の物質内包性無機粒子複合体の製造方法は特に限定されないが、例えば、物質内包性無機粒子と（１）式で表される重合体と疎水性防腐剤と疎水性高分子とを溶媒中で混合した後、粉末状とすることにより製造できる。
【００３３】
物質内包性無機粒子、（１）式で表される重合体、疎水性防腐剤、疎水性高分子の各成分を混合する際に用いる溶媒としては、例えば、水、テトラヒドロフラン、アセトン、エチレングリコール、低級アルコール、超臨界二酸化炭素、芳香族炭化水素等を挙げることができる。これらの溶媒は、単独で用いても混合して用いてもよい。各成分をそれぞれ溶媒に溶解又は分散したものを混合してもよい。また、成分の一部、例えば、物質内包性無機粒子、疎水性防腐剤及び疎水性高分子を溶媒中で混合した後乾燥して溶媒を留去して乾燥物とし、これを溶媒に溶解又は分散したものと、他の成分、すなわち（１）式で表される重合体を溶媒に溶解したものとを混合してもよい。
【００３４】
各成分を混合する順序に特に制限は無いが、物質内包性無機粒子、疎水性防腐剤及び疎水性高分子を溶媒中で混合して物質内包性無機粒子に疎水性防腐剤と疎水性高分子を担持させた後に、（１）式で表される重合体を混合することが好ましい。形成された物質内包性無機粒子複合体の分散安定性が向上するからである。また、物質内包性無機粒子、疎水性防腐剤及び疎水性高分子を混合する際には、物質内包性無機粒子に疎水性防腐剤と疎水性高分子とを同時に混合することが好ましいが、疎水性防腐剤を物質内包性無機粒子に担持させた後に疎水性高分子を混合する方法でもよい。
【００３５】
各成分を溶媒中で混合した後、粉末状にすることにより本発明の物質内包性無機粒子複合体となる。粉末状にする方法としては、凍結乾燥や減圧乾燥等で溶媒を除去する方法が挙げられる。
【実施例】
【００３６】
（実施例１）
クレイ０．０２２ｇをジクロロメタン８ｍＬ中に混合した分散液に、防腐剤ＢＢＡＥ０．０２４ｇと分子量２００００のポリ乳酸０．０２０ｇとをジクロロメタン２ｍＬ中に溶解させた溶液を加えて室温下で２時間撹拌後、エバポレートにより溶媒を除去した。乾燥物にｐＨ７．０緩衝液２５ｍＬを加えて分散させた後、この分散液にポリエチレングリコール／ポリメタクリル酸（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル）ブロック共重合体（ｎ＝６３、ｍ＝４８の（１）式で表される重合体；（株）トランスパレント製、以下「ＰＥＧ−ｂ−ＰＡＭＡ」と記載）０．２５０ｇをｐＨ７．０緩衝液５ｍＬに溶解させた溶液を混合し、室温下で３０分間撹拌した。この後、遠心分離、凍結乾燥を経て白色粉体（物質内包性無機粒子複合体）０．０３４ｇを回収した。防腐剤導入量については、洗浄後の上澄みについて液体クロマトグラフィー測定（検出波長２２０ｎｍ）を行い、上澄みに含有される防腐剤全量をクレイに吸着していない防腐剤として防腐剤導入率（％）を算出した。結果を表１に示す。
【００３７】
（実施例２）
クレイ０．０２１ｇをジクロロメタン８ｍＬ中に混合した分散液に、防腐剤ＢＢＡＥ０．０２ｇをジクロロメタン１ｍＬ中に溶解させた溶液を加えて室温下で２時間撹拌後、分子量２００００ポリ乳酸０．０２ｇをジクロロメタン１ｍＬ中に溶解させた溶液を加えてさらに室温下で１時間撹拌後、エバポレートにより溶媒を除去した。乾燥物にｐＨ７．０緩衝液２５ｍＬを加えて分散させた後、この分散液に実施例１と同じＰＥＧ−ｂ−ＰＡＭＡをｐＨ７．０緩衝液５ｍＬに溶解させた溶液を混合し、室温下で３０分間撹拌した。この後、遠心分離、凍結乾燥を経て白色粉体０．０４４ｇを回収した。また、実施例１と同様に防腐剤導入率（％）を算出した。
【００３８】
（実施例３）
分子量２００００のポリ乳酸のかわりに、分子量１５０００のポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）０．０２３ｇを用いた以外は実施例１と同様にして、白色粉体０．０４７ｇを得、防腐剤導入率も測定した。
【００３９】
（実施例４）
分子量２００００のポリ乳酸のかわりに、分子量１００００のポリ（α−メチルスチレン）（ＰαＭＳｔ）０．０２２ｇを用いた以外は実施例１と同様にして、白色粉体０．０５２ｇを得、防腐剤導入率も測定した。
【００４０】
（比較例１）
クレイ０．０２３ｇをジクロロメタン８ｍＬ中に混合した分散液に、防腐剤ＢＢＡＥ０．０２５ｇをジクロロメタン２ｍＬ中に溶解させた溶液を加えて室温下で２時間撹拌後、エバポレートにより溶媒を除去した。乾燥物にｐＨ７．０緩衝液２５ｍＬを加えて分散させた後、この分散液に実施例１と同じＰＥＧ−ｂ−ＰＡＭＡをｐＨ７．０緩衝液５ｍＬに溶解させた溶液を混合し、室温下で３０分間撹拌した。この後、遠心分離、凍結乾燥を経て白色粉体０．０３１ｇを回収した。実施例１と同様に防腐剤導入率（％）を算出した。
【００４１】
【表１】
【００４２】
疎水性高分子を担持させた実施例１〜４で得られた物質内包性無機粒子複合体は、防腐剤導入率が５０％程度以上であった。疎水性高分子の存在によりクレイ層表面の吸着状態に変化が生じたものと推測される。ＢＢＡＥとの疎水性相互作用も考えられる。また、クレイにＢＢＡＥとポリ乳酸とを同時混合した実施例１のほうが、クレイにＢＢＡＥを担持させた後にポリ乳酸を混合した実施例２よりも防腐剤導入率は高かった。一方、疎水性高分子を添加しない比較例１では、防腐剤導入率は３０％程度であり、疎水性高分子の添加により、疎水性防腐剤の導入率が大幅に向上することが分かった。
【００４３】
（試験例１） 防腐剤のリリース試験
実施例１〜４及び比較例１の各物質内包性無機粒子複合体をｐＨ７．０緩衝液（組成：０．１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４）中で分散させ、室温下で撹拌した。各時間経過後、分散液全量を遠心分離（１０．２×１０４Ｇ（４５０００ｒ．ｐ．ｍ．）×３０ｍｉｎ．，２５℃）した後、上澄みを回収し、沈殿物には、新たに緩衝液を加えて再分散させ、引き続き撹拌を継続した。各時間経過後に回収した上澄みについて液体クロマトグラフィー測定（検出波長２２０ｎｍ）でＢＢＡＥ量を定量し、ＢＢＡＥの積算溶出量（％）を求めた。また、実験開始約５００時間以降は、分散媒をメタノールやアセトン等の有機溶媒に変更してリリース実験を継続した。結果を表２及び図１に示す。
【００４４】
【表２】
【００４５】
表２及び図１に示すように、疎水性高分子を添加しない比較例１の物質内包性無機粒子複合体を用いた場合に比べて、疎水性高分子を添加した実施例１〜４の物質内包性無機粒子複合体は微量ずつＢＢＡＥを放出しており、ＢＢＡＥの徐放性を示した。ＢＢＡＥを単独でクレイに担持させると、クレイとＢＢＡＥ間で疎水性相互作用が強く働くのに対して、ポリ乳酸等の疎水性物質を混合することにより、この疎水性相互作用が弱まり、その結果、クレイ層間から溶出しやすくなるものと思われる。さらに、特にポリ乳酸を混合した実施例１及び２の物質内包性無機粒子複合体は、ＰＭＭＡを添加した実施例３の物質内包性無機粒子複合体やＰαＭＳｔを添加した実施例４の物質内包性無機粒子複合体と比較して、溶出量が若干多かった。また、実施例１〜４の物質内包性無機粒子複合体はＢＢＡＥを徐放する性質を有しているため、本発明の物質内包性無機粒子複合体は抗菌持続性を示すものと推測される。なお、実施例１〜４及び比較例１は、共に８１６時間の試験中沈殿物や凝集物はみられず、分散安定性は良好だった。
【００４６】
（試験例２）透過率の測定
実施例１〜４及び比較例１の各物質内包性無機粒子複合体を、濃度２００ｐｐｍ（０．２ｍｇ／ｍＬ）、４００ｐｐｍ（０．４ｍｇ／ｍＬ）、８００ｐｐｍ（０．８ｍｇ／ｍＬ）となるように、ｐＨ７．０緩衝液（組成：０．１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４）中で分散させ、紫外可視分光光度計を用いて波長５５０ｎｍにおける透過率（％）を測定した。また、クレイのみを各濃度に調整したものを比較例２として、同様の測定をした。結果を表３に示す。
【００４７】
【表３】
【００４８】
表３に示すように、疎水性高分子を添加した実施例１〜４は、疎水性高分子を添加しない比較例１に比べて透過率は低下するものの、粒子濃度２００ｐｐｍ程度では７０％以上の高い透過率を示した。また、クレイ単独の比較例２と比較して、ＢＢＡＥを添加した比較例１は透過率は低下するものの、粒子濃度２００ｐｐｍ程度では８０％以上の透過率を示すことも確認された。
【００４９】
（参考例１）
防腐剤１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン（ＢＩＴ）０．４０６ｇをｐＨ７．０緩衝液（組成：０．１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４）２５ｍＬ中に混合した分散液に、クレイ０．０４３ｇを加えて室温下で２時間撹拌した。このクレイ分散液に、ＰＥＧ−ｂ−ＰＡＭＡ ０．４８４ｇをｐＨ７．０緩衝液５ｍＬに溶解させた溶液を混合し、室温下で３０分間撹拌した後、遠心分離、洗浄、凍結乾燥を経て白色粉体（物質内包性無機粒子複合体）０．２２４ｇを回収した。
【００５０】
この白色粉体０．０２ｇに、パラフィン（融点６８〜７０℃）のヘキサン溶液（パラフィン／防腐剤内包クレイ粒子＝０．５（重量比）となるように調製）５ｍＬを加えて室温下で１時間撹拌後減圧乾燥を経て、ＢＩＴ及びＰＥＧ−ｂ−ＰＡＭＡを担持し且つパラフィンでコーティングされた物質内包性無機粒子複合体を調製した。
【００５１】
（参考比較例１）
パラフィンでコーティングしない以外は、参考例１と同様にして、多孔質粒子複合体を得た。
【００５２】
（参考試験例１） 防腐剤のリリース試験
参考例１及び参考比較例１の物質内包性無機粒子複合体をｐＨ１１．８緩衝液（組成：０．２Ｍ ＫＣｌ／０．２Ｍ ＮａＯＨ）中で分散させ、室温下で撹拌した。各時間経過後、分散液全量を遠心分離（１０．２×１０４Ｇ（４５０００ｒ．ｐ．ｍ．）×３０ｍｉｎ．，２５℃）した後、上澄みを回収し、沈殿物には、新たに緩衝液を加えて再分散させ、引き続き撹拌を継続した。各時間経過後に回収した上澄みについて、紫外・可視吸収スペクトルを測定（測定波長３１８ｎｍ）してＢＩＴ量を定量し、ＢＩＴの積算溶出量を求めた。結果を表４及び図２に示す。
【００５３】
【表４】
【００５４】
表４及び図２に示すように、パラフィンコーティングした参考例１では、パラフィンコーティングしなかった参考比較例１と比べてＢＩＴの初期溶出量が低下し、また、参考例１及び参考比較例１とも、ＢＩＴは初期（経過時間１日程度）に溶出された後は、溶液中のＢＩＴ濃度は変化せず、積算溶出量はほぼ一定となった。また、参考例１及び参考比較例１では、本発明の物質内包性無機粒子複合体である実施例１〜４が示したような内包物（ＢＩＴ）の徐放性は示さなかった。
【００５５】
（参考試験例２） 抗菌性試験
（１） 物質内包性無機粒子複合体に含有される防腐剤ＢＩＴ濃度が試験溶液中で５ｐｐｍになるように秤量した参考例１の物質内包性無機粒子複合体、０．０２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４＋０．０１Ｍ ＫＣｌ／０．１Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７．０３）２０ｍＬ、２．５ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ７．０３緩衝溶液２０ｍＬ、腐敗溶液（１ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ６．９７緩衝溶液を３５℃の恒温器に１０日間静置したもの、生菌数５．８×１０４個／ｍＬ）５ｍＬを混合して試験溶液を調製した。
（２） 試験溶液を１．５ｍＬ採取（これを試験開始時(０ｄａｙ)とした）後、２５℃の恒温振とう槽中で振とうした。所定時間ごとに試験溶液を１．５ｍＬ採取し、ＫＨ２ＰＯ４／ＮａＯＨ緩衝液(ｐＨ７．０２)を用いて希釈溶液を調製した。希釈した溶液１ｍＬをペトリフィルム培地に滴下して３５℃の恒温器中で４８時間培養した後、ペトリフィルム培地上にできた赤い斑点を生菌としてカウントし、希釈倍率を乗じて試験溶液１ｍＬ中の生菌数を計測した。測定結果を表５及び図３の対数グラフに示す。
（３） 参考例１の物質内包性無機粒子複合体を参考比較例１の物質内包性無機粒子複合体にかえた以外は、同様の操作を行った。測定結果を表５及び図３の対数グラフに示す。
（４） 比較として、ＢＩＴ濃度が試験溶液中で５ｐｐｍになるように秤量したＢＩＴ粉末、０．０２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４＋０．０１Ｍ ＫＣｌ／０．１Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７．０３）２５ｍＬ、２．５ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ７．０３緩衝溶液２０ｍＬ、腐敗溶液（１ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ７．０３緩衝溶液を３５℃の恒温器に１０日間静置したもの）５ｍＬを混合したものを試験溶液とし、参考試験例２の（２）と同様の操作を行った。測定結果を表５及び図３の対数グラフに示す。
（５） リファレンスとして、０．０２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４＋０．０１Ｍ ＫＣｌ／０．１Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７．０３）２５ｍＬ、２．５ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ７．０３緩衝溶液２０ｍＬ、腐敗溶液（１ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ７．０３緩衝溶液を３５℃の恒温器に１０日間静置したもの）５ｍＬを混合したものを試験溶液とし、参考試験例２の（２）と同様の操作を行った。測定結果を表５及び図３の対数グラフに示す。
【００５６】
【表５】
【００５７】
表５及び図３に示すように、ＢＩＴ単独で使用するよりも、ＢＩＴを物質内包性無機粒子に含有させた参考例１及び参考比較例１のほうが、抗菌持続性は高かった。また、参考例１は、生菌数の増加は試験開始３５日後以降となり、試験開始７日後から生菌数の増加が見られた参考比較例１よりも抗菌持続性が高かった。
【００５８】
このように、徐放性を示さない上記参考例１の物質内包性無機粒子でも抗菌持続性を示したことから、疎水性防腐剤の徐放性を示す本発明の物質内包性無機粒子では、さらに抗菌持続性を示すことが推測できる。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】試験例１の結果を示す図である。
【図２】参考試験例１の結果を示す図である。
【図３】参考試験例２の結果を示す図である。
【背景技術】
【０００１】
本発明は疎水性防腐剤を担持した物質内包性無機粒子複合体に関する。
【０００２】
シリカやクレイなどの物質内包性無機粒子は様々な化合物を担持することが可能であり、吸着剤などに応用されてきている。さらに最近では、生理活性物質を物質内包性無機粒子に担持させ薬物徐放システムとしての利用も検討されている（特許文献１〜２及び非特許文献１〜１０）。しかしながら、担持させた機能性物質を水などの液体中で利用する場合、多孔体微粒子の分散安定性が悪いという問題があった。一方、防腐剤には長期に亘って抗菌性を維持することが求められており、また、塗料や紙パルプのコーティング剤等に使用する場合は透明性も必要である。
【０００３】
【特許文献１】米国出願公開第２００３／００３１６９４号
【特許文献２】国際公開第０３／０２４４２９号パンフレット
【非特許文献１】Fujii,T.;Ishii,A.;Takusagawa,N.;Anpo,M. Fluorescence spectra and chemical species of fluorescein molecules adsorbed on a calcinated porous Vycor glass. Research on Chemical Intermediates(1992),17(1),1-14
【非特許文献２】Krysztafkiewicz,Andrzej;Binkowski,Slawomir;Jesionowski,Teofil.Adsorption of dyes on a silica surface. Applied Surface Science(2002),199(1-4),31-39
【非特許文献３】Fang,Ming;Grant,Patrick S.;McShane,Michael J.;Sukhorukov,Gleb B.;Golub,Vlandimir O.;Lvov,Yuri M. Magnetic bio/nanoreactor with multilayer shells of glucose oxidase and inorganic nanoparticles. Langmuir(2002), 18(16),6338-6344
【非特許文献４】Cherkaoui,I.;Monticone,V.;Vaution,C.;Treiner,C. Surface modification of silica particles by a cationic surfactant:adsolubilization of steroids from aqueous solutions. International Journal of Pharmaceutics(1998),176(1),111-120
【非特許文献５】Goto,H.;Isobe,T.;Senna,M. Controlled dissolution of phenytoin by hybridizing with silica nanoparticles. Journal of Nanoparticle Research (1999),1(2),205-213
【非特許文献６】Lech, Stanley. Chewable soft gelatin-encapsulated pharmaceutical adsorbates. U.S.(2000), 5pp. CODEN:USXXAM US 6027746 A 20000222 CAN 132:156874
【非特許文献７】Canefe, Kandemir;Bayel,Demet;Unver,E.Levent. In vitro adsorption study of drugs by various excipients. Acta Pharmaceutica Turcica(1998), 40(3), 103-119
【非特許文献８】Malmsten, Martin. Ellipsometry and TIRF studies of adsorption processes in parenteral drug delivery. Interface Science(1997),5(2/3),159-167
【非特許文献９】Rupprecht,H.;Biersack,M.J. Effect of pore structure of silica on the availability of drugs. Pharmazeutische Industrie(1974),36(4),260-3
【非特許文献１０】Levy H;Dasgupta A;Lin A;Blackwell W;Mosley A M;Okarma T Adsorption of charged non-albumin bound drugs by amorphous silica. JOURNAL OF TOXICOLOGY.CLINICAL TOXICOLOGY(1995),33(5),457-62
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明はこのような事情に鑑み、分散安定性及び透明性を有し且つ抗菌持続性に優れた物質内包性無機粒子を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、重合体を多孔質粒子に結合等させることにより、高い分散安定性及び透明性を付与した多孔体微粒子を出願したが（特願２００３−２９３９４２号）、さらに詳細に検討したところ、（１）式で表される重合体と疎水性高分子と疎水性防腐剤とを物質内包性無機粒子に担持させることにより、様々な媒体中で優れた分散安定性及び透明性を有し、さらに疎水性防腐剤を徐放することができるため抗菌持続性を有することを知見して、本発明を完成させた。
【０００６】
かかる本発明の第１の態様は、物質内包性無機粒子と下記（１）式で表される重合体とからなる複合体であって、前記物質内包性無機粒子に疎水性高分子と共に疎水性防腐剤を担持してなることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体にある。
【０００７】
【化１】
【０００８】
（式中、ｍは１〜２０００までの整数、ｎは２〜２００００までの整数を表す。）
【０００９】
本発明の第２の態様は、第１の態様において、前記疎水性防腐剤が１，２−ビス（ブロモアセトキシ）エタン（ＢＢＡＥ）であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体にある。
【００１０】
本発明の第３の態様は、第１または２の態様において、前記物質内包性無機粒子が無機層状物質であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体にある。
【００１１】
本発明の第４の態様は、第３の態様において、前記無機層状物質がクレイであることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体にある。
【００１２】
本発明の第５の態様は、第１〜４の何れかの態様において、前記疎水性高分子が、ポリ乳酸、ポリメチルメタクリレート及びポリ（α−メチルスチレン）から選択される少なくとも一種であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体にある。
【００１３】
本発明の第６の態様は、物質内包性無機粒子と下記（１）式で表される重合体と疎水性防腐剤と疎水性高分子とを溶媒中で混合した後、粉末状の物質内包性無機粒子複合体を得ることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【００１４】
【化２】
【００１５】
（式中、ｍは１〜２０００までの整数、ｎは２〜２００００までの整数を表す。）
【００１６】
本発明の第７の態様は、第６の態様において、前記物質内包性無機粒子と前記疎水性防腐剤と前記疎水性高分子とを溶媒中で混合して物質内包性無機粒子に疎水性防腐剤と疎水性高分子を担持させた後に、前記（１）式で表される重合体を混合することを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【００１７】
本発明の第８の態様は、第６又は７の態様において、前記疎水性防腐剤が１，２−ビス（ブロモアセトキシ）エタン（ＢＢＡＥ）であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【００１８】
本発明の第９の態様は、第６〜８の何れかの態様において、前記物質内包性無機粒子が無機層状物質であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【００１９】
本発明の第１０の態様は、第９の態様において、前記無機層状物質がクレイであることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【００２０】
本発明の第１１の態様は、第６〜１０の何れかの態様において、前記疎水性高分子が、ポリ乳酸、ポリメチルメタクリレート及びポリ（α−メチルスチレン）から選択される少なくとも一種であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法にある。
【発明の効果】
【００２１】
物質内包性無機粒子と上記（１）式で表される重合体からなり、物質内包性無機粒子に疎水性高分子と疎水性防腐剤とを担持した物質内包性無機粒子複合体とすると、分散安定性及び透明性を有し且つ抗菌持続性に優れる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下、本発明をさらに詳細に説明する。
【００２３】
本発明の物質内包性無機粒子複合体は、物質内包性無機粒子と上記（１）式で表される重合体とからなる複合体であって、物質内包性無機粒子に疎水性高分子と共に疎水性防腐剤が担持されている。
【００２４】
物質内包性無機粒子とは、物質を粒子内に担持することができる無機粒子であり、無機層状物質や多孔質粒子等が挙げられる。
【００２５】
無機層状物質とは、層状構造を有する無機粒子である。この層間距離を変化させながら層間に疎水性物質を担持する。ここで、層状構造とは、原子が共有結合などによって強く結合して密に配列した面がファン・デル・ワールス力など弱い結合力によって平行に積み重なった構造である。無機層状物質としては、層状ケイ酸塩であるクレイ（粘土鉱物）、層状水酸化物、遷移金属酸化物、遷移金属ジカルコゲナイド、グラファイト、リン酸塩、金属リン化合物等が挙げられる。クレイは、天然物でも合成物でもよく、例えば、モンモリロナイト、カオリナイト、サポナイト、ヘクトライト、ベントナイト等が使用できる。無機層状物質を溶媒に分散させると膨潤して層間距離が広がるため、疎水性防腐剤をこの層間に取り込むことができる。
【００２６】
多孔質粒子とは、細孔構造を有する無機粒子である。多孔質粒子は、無機層状物質とは異なり非膨潤型の物質内包性無機粒子であり、細孔内に疎水性防腐剤を担持する。多孔質粒子としては、シリカ、ゼオライト等を挙げることができる。
【００２７】
物質内包性無機粒子の平均粒子径は特に限定されないが、好ましくは０．１ｎｍ〜１０μｍ、さらに好ましくは０．５ｎｍ〜１０μｍ、最も好ましくは１ｎｍ〜３μｍである。
【００２８】
この物質内包性無機粒子の層間又は細孔内に疎水性防腐剤が担持されている。疎水性防腐剤は特に限定されないが、例えば、１，２−ビス（ブロモアセトキシ）エタン（ＢＢＡＥ）、２−（４−チアゾリル）−ベンズイミダゾール（ＴＢＺ）等が挙げられる。疎水性防腐剤の量は、無機層状物質に対して１／１０〜１０倍量が好ましい。
【００２９】
さらに、物質内包性無機粒子には、疎水性高分子も担持されている。疎水性高分子を担持させることにより、形成された物質内包性無機粒子複合体を水、アルコール等の溶媒に分散させたときに、物質内包性無機粒子の層間又は細孔内に担持させた疎水性防腐剤を徐放する性質を示すようになる。このように疎水性防腐剤を徐々に放出するため、本発明の物質内包性無機粒子複合体は、抗菌性が長期間持続する。また、疎水性高分子を担持させることにより、疎水性防腐剤の導入率を向上させることができる。この疎水性高分子の種類も特に限定されないが、例えば、ポリ乳酸、ポリメチルメタクリレート、ポリ（α―メチルスチレン）、ポリスチレン、ポリイオンコンプレックス等を挙げることができる。これらの疎水性高分子は単独で用いても、数種を併用して用いてもよい。疎水性高分子の量は、疎水性防腐剤の１／１０〜２倍量が好ましい。
【００３０】
また、上記（１）式で表される重合体も物質内包性無機粒子に担持されている。（１）式で表される重合体の側鎖末端のジメチルアミノ基を、物質内包性無機粒子表面に共有結合、イオン結合又は水素結合などの相互作用によって吸着させることにより、（１）式のポリエチレングリコール（以下「ＰＥＧ」ともいう）セグメントが物質内包性無機粒子表層にブラシ状に担持されているものと推測される。これにより、ＰＥＧセグメントが物質内包性無機粒子表面上に十分な親媒性を付与し、物質内包性無機粒子表面への非特異吸着や凝集沈殿を回避できるように作用するため、形成された物質内包性無機粒子複合体に高分散性を付与することができる。したがって、例えば、高イオン強度（強酸性）など通常分散し難い条件下でも、高い分散安定性を維持することができる。（１）式で表される重合体の量は特に限定されないが、物質内包性無機粒子に対して５〜３０倍量が好ましい。
【００３１】
本発明の物質内包性無機粒子複合体を水、アルコール等の溶媒に分散させた場合、透明性が高いため、透明性が求められる防腐剤、例えば塗料、紙パルプのコーティング剤等の防腐剤として、好適に使用することができる。
【００３２】
本発明の物質内包性無機粒子複合体の製造方法は特に限定されないが、例えば、物質内包性無機粒子と（１）式で表される重合体と疎水性防腐剤と疎水性高分子とを溶媒中で混合した後、粉末状とすることにより製造できる。
【００３３】
物質内包性無機粒子、（１）式で表される重合体、疎水性防腐剤、疎水性高分子の各成分を混合する際に用いる溶媒としては、例えば、水、テトラヒドロフラン、アセトン、エチレングリコール、低級アルコール、超臨界二酸化炭素、芳香族炭化水素等を挙げることができる。これらの溶媒は、単独で用いても混合して用いてもよい。各成分をそれぞれ溶媒に溶解又は分散したものを混合してもよい。また、成分の一部、例えば、物質内包性無機粒子、疎水性防腐剤及び疎水性高分子を溶媒中で混合した後乾燥して溶媒を留去して乾燥物とし、これを溶媒に溶解又は分散したものと、他の成分、すなわち（１）式で表される重合体を溶媒に溶解したものとを混合してもよい。
【００３４】
各成分を混合する順序に特に制限は無いが、物質内包性無機粒子、疎水性防腐剤及び疎水性高分子を溶媒中で混合して物質内包性無機粒子に疎水性防腐剤と疎水性高分子を担持させた後に、（１）式で表される重合体を混合することが好ましい。形成された物質内包性無機粒子複合体の分散安定性が向上するからである。また、物質内包性無機粒子、疎水性防腐剤及び疎水性高分子を混合する際には、物質内包性無機粒子に疎水性防腐剤と疎水性高分子とを同時に混合することが好ましいが、疎水性防腐剤を物質内包性無機粒子に担持させた後に疎水性高分子を混合する方法でもよい。
【００３５】
各成分を溶媒中で混合した後、粉末状にすることにより本発明の物質内包性無機粒子複合体となる。粉末状にする方法としては、凍結乾燥や減圧乾燥等で溶媒を除去する方法が挙げられる。
【実施例】
【００３６】
（実施例１）
クレイ０．０２２ｇをジクロロメタン８ｍＬ中に混合した分散液に、防腐剤ＢＢＡＥ０．０２４ｇと分子量２００００のポリ乳酸０．０２０ｇとをジクロロメタン２ｍＬ中に溶解させた溶液を加えて室温下で２時間撹拌後、エバポレートにより溶媒を除去した。乾燥物にｐＨ７．０緩衝液２５ｍＬを加えて分散させた後、この分散液にポリエチレングリコール／ポリメタクリル酸（２−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチル）ブロック共重合体（ｎ＝６３、ｍ＝４８の（１）式で表される重合体；（株）トランスパレント製、以下「ＰＥＧ−ｂ−ＰＡＭＡ」と記載）０．２５０ｇをｐＨ７．０緩衝液５ｍＬに溶解させた溶液を混合し、室温下で３０分間撹拌した。この後、遠心分離、凍結乾燥を経て白色粉体（物質内包性無機粒子複合体）０．０３４ｇを回収した。防腐剤導入量については、洗浄後の上澄みについて液体クロマトグラフィー測定（検出波長２２０ｎｍ）を行い、上澄みに含有される防腐剤全量をクレイに吸着していない防腐剤として防腐剤導入率（％）を算出した。結果を表１に示す。
【００３７】
（実施例２）
クレイ０．０２１ｇをジクロロメタン８ｍＬ中に混合した分散液に、防腐剤ＢＢＡＥ０．０２ｇをジクロロメタン１ｍＬ中に溶解させた溶液を加えて室温下で２時間撹拌後、分子量２００００ポリ乳酸０．０２ｇをジクロロメタン１ｍＬ中に溶解させた溶液を加えてさらに室温下で１時間撹拌後、エバポレートにより溶媒を除去した。乾燥物にｐＨ７．０緩衝液２５ｍＬを加えて分散させた後、この分散液に実施例１と同じＰＥＧ−ｂ−ＰＡＭＡをｐＨ７．０緩衝液５ｍＬに溶解させた溶液を混合し、室温下で３０分間撹拌した。この後、遠心分離、凍結乾燥を経て白色粉体０．０４４ｇを回収した。また、実施例１と同様に防腐剤導入率（％）を算出した。
【００３８】
（実施例３）
分子量２００００のポリ乳酸のかわりに、分子量１５０００のポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）０．０２３ｇを用いた以外は実施例１と同様にして、白色粉体０．０４７ｇを得、防腐剤導入率も測定した。
【００３９】
（実施例４）
分子量２００００のポリ乳酸のかわりに、分子量１００００のポリ（α−メチルスチレン）（ＰαＭＳｔ）０．０２２ｇを用いた以外は実施例１と同様にして、白色粉体０．０５２ｇを得、防腐剤導入率も測定した。
【００４０】
（比較例１）
クレイ０．０２３ｇをジクロロメタン８ｍＬ中に混合した分散液に、防腐剤ＢＢＡＥ０．０２５ｇをジクロロメタン２ｍＬ中に溶解させた溶液を加えて室温下で２時間撹拌後、エバポレートにより溶媒を除去した。乾燥物にｐＨ７．０緩衝液２５ｍＬを加えて分散させた後、この分散液に実施例１と同じＰＥＧ−ｂ−ＰＡＭＡをｐＨ７．０緩衝液５ｍＬに溶解させた溶液を混合し、室温下で３０分間撹拌した。この後、遠心分離、凍結乾燥を経て白色粉体０．０３１ｇを回収した。実施例１と同様に防腐剤導入率（％）を算出した。
【００４１】
【表１】
【００４２】
疎水性高分子を担持させた実施例１〜４で得られた物質内包性無機粒子複合体は、防腐剤導入率が５０％程度以上であった。疎水性高分子の存在によりクレイ層表面の吸着状態に変化が生じたものと推測される。ＢＢＡＥとの疎水性相互作用も考えられる。また、クレイにＢＢＡＥとポリ乳酸とを同時混合した実施例１のほうが、クレイにＢＢＡＥを担持させた後にポリ乳酸を混合した実施例２よりも防腐剤導入率は高かった。一方、疎水性高分子を添加しない比較例１では、防腐剤導入率は３０％程度であり、疎水性高分子の添加により、疎水性防腐剤の導入率が大幅に向上することが分かった。
【００４３】
（試験例１） 防腐剤のリリース試験
実施例１〜４及び比較例１の各物質内包性無機粒子複合体をｐＨ７．０緩衝液（組成：０．１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４）中で分散させ、室温下で撹拌した。各時間経過後、分散液全量を遠心分離（１０．２×１０４Ｇ（４５０００ｒ．ｐ．ｍ．）×３０ｍｉｎ．，２５℃）した後、上澄みを回収し、沈殿物には、新たに緩衝液を加えて再分散させ、引き続き撹拌を継続した。各時間経過後に回収した上澄みについて液体クロマトグラフィー測定（検出波長２２０ｎｍ）でＢＢＡＥ量を定量し、ＢＢＡＥの積算溶出量（％）を求めた。また、実験開始約５００時間以降は、分散媒をメタノールやアセトン等の有機溶媒に変更してリリース実験を継続した。結果を表２及び図１に示す。
【００４４】
【表２】
【００４５】
表２及び図１に示すように、疎水性高分子を添加しない比較例１の物質内包性無機粒子複合体を用いた場合に比べて、疎水性高分子を添加した実施例１〜４の物質内包性無機粒子複合体は微量ずつＢＢＡＥを放出しており、ＢＢＡＥの徐放性を示した。ＢＢＡＥを単独でクレイに担持させると、クレイとＢＢＡＥ間で疎水性相互作用が強く働くのに対して、ポリ乳酸等の疎水性物質を混合することにより、この疎水性相互作用が弱まり、その結果、クレイ層間から溶出しやすくなるものと思われる。さらに、特にポリ乳酸を混合した実施例１及び２の物質内包性無機粒子複合体は、ＰＭＭＡを添加した実施例３の物質内包性無機粒子複合体やＰαＭＳｔを添加した実施例４の物質内包性無機粒子複合体と比較して、溶出量が若干多かった。また、実施例１〜４の物質内包性無機粒子複合体はＢＢＡＥを徐放する性質を有しているため、本発明の物質内包性無機粒子複合体は抗菌持続性を示すものと推測される。なお、実施例１〜４及び比較例１は、共に８１６時間の試験中沈殿物や凝集物はみられず、分散安定性は良好だった。
【００４６】
（試験例２）透過率の測定
実施例１〜４及び比較例１の各物質内包性無機粒子複合体を、濃度２００ｐｐｍ（０．２ｍｇ／ｍＬ）、４００ｐｐｍ（０．４ｍｇ／ｍＬ）、８００ｐｐｍ（０．８ｍｇ／ｍＬ）となるように、ｐＨ７．０緩衝液（組成：０．１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４）中で分散させ、紫外可視分光光度計を用いて波長５５０ｎｍにおける透過率（％）を測定した。また、クレイのみを各濃度に調整したものを比較例２として、同様の測定をした。結果を表３に示す。
【００４７】
【表３】
【００４８】
表３に示すように、疎水性高分子を添加した実施例１〜４は、疎水性高分子を添加しない比較例１に比べて透過率は低下するものの、粒子濃度２００ｐｐｍ程度では７０％以上の高い透過率を示した。また、クレイ単独の比較例２と比較して、ＢＢＡＥを添加した比較例１は透過率は低下するものの、粒子濃度２００ｐｐｍ程度では８０％以上の透過率を示すことも確認された。
【００４９】
（参考例１）
防腐剤１，２−ベンズイソチアゾリン−３−オン（ＢＩＴ）０．４０６ｇをｐＨ７．０緩衝液（組成：０．１Ｍ ＮａＨ２ＰＯ４／Ｎａ２ＨＰＯ４）２５ｍＬ中に混合した分散液に、クレイ０．０４３ｇを加えて室温下で２時間撹拌した。このクレイ分散液に、ＰＥＧ−ｂ−ＰＡＭＡ ０．４８４ｇをｐＨ７．０緩衝液５ｍＬに溶解させた溶液を混合し、室温下で３０分間撹拌した後、遠心分離、洗浄、凍結乾燥を経て白色粉体（物質内包性無機粒子複合体）０．２２４ｇを回収した。
【００５０】
この白色粉体０．０２ｇに、パラフィン（融点６８〜７０℃）のヘキサン溶液（パラフィン／防腐剤内包クレイ粒子＝０．５（重量比）となるように調製）５ｍＬを加えて室温下で１時間撹拌後減圧乾燥を経て、ＢＩＴ及びＰＥＧ−ｂ−ＰＡＭＡを担持し且つパラフィンでコーティングされた物質内包性無機粒子複合体を調製した。
【００５１】
（参考比較例１）
パラフィンでコーティングしない以外は、参考例１と同様にして、多孔質粒子複合体を得た。
【００５２】
（参考試験例１） 防腐剤のリリース試験
参考例１及び参考比較例１の物質内包性無機粒子複合体をｐＨ１１．８緩衝液（組成：０．２Ｍ ＫＣｌ／０．２Ｍ ＮａＯＨ）中で分散させ、室温下で撹拌した。各時間経過後、分散液全量を遠心分離（１０．２×１０４Ｇ（４５０００ｒ．ｐ．ｍ．）×３０ｍｉｎ．，２５℃）した後、上澄みを回収し、沈殿物には、新たに緩衝液を加えて再分散させ、引き続き撹拌を継続した。各時間経過後に回収した上澄みについて、紫外・可視吸収スペクトルを測定（測定波長３１８ｎｍ）してＢＩＴ量を定量し、ＢＩＴの積算溶出量を求めた。結果を表４及び図２に示す。
【００５３】
【表４】
【００５４】
表４及び図２に示すように、パラフィンコーティングした参考例１では、パラフィンコーティングしなかった参考比較例１と比べてＢＩＴの初期溶出量が低下し、また、参考例１及び参考比較例１とも、ＢＩＴは初期（経過時間１日程度）に溶出された後は、溶液中のＢＩＴ濃度は変化せず、積算溶出量はほぼ一定となった。また、参考例１及び参考比較例１では、本発明の物質内包性無機粒子複合体である実施例１〜４が示したような内包物（ＢＩＴ）の徐放性は示さなかった。
【００５５】
（参考試験例２） 抗菌性試験
（１） 物質内包性無機粒子複合体に含有される防腐剤ＢＩＴ濃度が試験溶液中で５ｐｐｍになるように秤量した参考例１の物質内包性無機粒子複合体、０．０２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４＋０．０１Ｍ ＫＣｌ／０．１Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７．０３）２０ｍＬ、２．５ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ７．０３緩衝溶液２０ｍＬ、腐敗溶液（１ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ６．９７緩衝溶液を３５℃の恒温器に１０日間静置したもの、生菌数５．８×１０４個／ｍＬ）５ｍＬを混合して試験溶液を調製した。
（２） 試験溶液を１．５ｍＬ採取（これを試験開始時(０ｄａｙ)とした）後、２５℃の恒温振とう槽中で振とうした。所定時間ごとに試験溶液を１．５ｍＬ採取し、ＫＨ２ＰＯ４／ＮａＯＨ緩衝液(ｐＨ７．０２)を用いて希釈溶液を調製した。希釈した溶液１ｍＬをペトリフィルム培地に滴下して３５℃の恒温器中で４８時間培養した後、ペトリフィルム培地上にできた赤い斑点を生菌としてカウントし、希釈倍率を乗じて試験溶液１ｍＬ中の生菌数を計測した。測定結果を表５及び図３の対数グラフに示す。
（３） 参考例１の物質内包性無機粒子複合体を参考比較例１の物質内包性無機粒子複合体にかえた以外は、同様の操作を行った。測定結果を表５及び図３の対数グラフに示す。
（４） 比較として、ＢＩＴ濃度が試験溶液中で５ｐｐｍになるように秤量したＢＩＴ粉末、０．０２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４＋０．０１Ｍ ＫＣｌ／０．１Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７．０３）２５ｍＬ、２．５ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ７．０３緩衝溶液２０ｍＬ、腐敗溶液（１ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ７．０３緩衝溶液を３５℃の恒温器に１０日間静置したもの）５ｍＬを混合したものを試験溶液とし、参考試験例２の（２）と同様の操作を行った。測定結果を表５及び図３の対数グラフに示す。
（５） リファレンスとして、０．０２Ｍ ＫＨ２ＰＯ４＋０．０１Ｍ ＫＣｌ／０．１Ｍ Ｎａ２ＨＰＯ４緩衝液（ｐＨ７．０３）２５ｍＬ、２．５ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ７．０３緩衝溶液２０ｍＬ、腐敗溶液（１ｗｔ％ゼラチン／ｐＨ７．０３緩衝溶液を３５℃の恒温器に１０日間静置したもの）５ｍＬを混合したものを試験溶液とし、参考試験例２の（２）と同様の操作を行った。測定結果を表５及び図３の対数グラフに示す。
【００５６】
【表５】
【００５７】
表５及び図３に示すように、ＢＩＴ単独で使用するよりも、ＢＩＴを物質内包性無機粒子に含有させた参考例１及び参考比較例１のほうが、抗菌持続性は高かった。また、参考例１は、生菌数の増加は試験開始３５日後以降となり、試験開始７日後から生菌数の増加が見られた参考比較例１よりも抗菌持続性が高かった。
【００５８】
このように、徐放性を示さない上記参考例１の物質内包性無機粒子でも抗菌持続性を示したことから、疎水性防腐剤の徐放性を示す本発明の物質内包性無機粒子では、さらに抗菌持続性を示すことが推測できる。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】試験例１の結果を示す図である。
【図２】参考試験例１の結果を示す図である。
【図３】参考試験例２の結果を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
物質内包性無機粒子と下記（１）式で表される重合体とからなる複合体であって、前記物質内包性無機粒子に疎水性高分子と共に疎水性防腐剤を担持してなることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体。
【化１】
（式中、ｍは１〜２０００までの整数、ｎは２〜２００００までの整数を表す。）
【請求項２】
請求項１において、前記疎水性防腐剤が１，２−ビス（ブロモアセトキシ）エタン（ＢＢＡＥ）であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体。
【請求項３】
請求項１または２において、前記物質内包性無機粒子が無機層状物質であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体。
【請求項４】
請求項３において、前記無機層状物質がクレイであることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体。
【請求項５】
請求項１〜４の何れかにおいて、前記疎水性高分子が、ポリ乳酸、ポリメチルメタクリレート及びポリ（α−メチルスチレン）から選択される少なくとも一種であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体。
【請求項６】
物質内包性無機粒子と下記（１）式で表される重合体と疎水性防腐剤と疎水性高分子とを溶媒中で混合した後、粉末状の物質内包性無機粒子複合体を得ることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【化２】
（式中、ｍは１〜２０００までの整数、ｎは２〜２００００までの整数を表す。）
【請求項７】
請求項６において、前記物質内包性無機粒子と前記疎水性防腐剤と前記疎水性高分子とを溶媒中で混合して物質内包性無機粒子に疎水性防腐剤と疎水性高分子を担持させた後に、前記（１）式で表される重合体を混合することを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【請求項８】
請求項６又は７において、前記疎水性防腐剤が１，２−ビス（ブロモアセトキシ）エタン（ＢＢＡＥ）であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【請求項９】
請求項６〜８の何れかにおいて、前記物質内包性無機粒子が無機層状物質であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【請求項１０】
請求項９において、前記無機層状物質がクレイであることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【請求項１１】
請求項６〜１０の何れかにおいて、前記疎水性高分子が、ポリ乳酸、ポリメチルメタクリレート及びポリ（α−メチルスチレン）から選択される少なくとも一種であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【請求項１】
物質内包性無機粒子と下記（１）式で表される重合体とからなる複合体であって、前記物質内包性無機粒子に疎水性高分子と共に疎水性防腐剤を担持してなることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体。
【化１】
（式中、ｍは１〜２０００までの整数、ｎは２〜２００００までの整数を表す。）
【請求項２】
請求項１において、前記疎水性防腐剤が１，２−ビス（ブロモアセトキシ）エタン（ＢＢＡＥ）であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体。
【請求項３】
請求項１または２において、前記物質内包性無機粒子が無機層状物質であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体。
【請求項４】
請求項３において、前記無機層状物質がクレイであることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体。
【請求項５】
請求項１〜４の何れかにおいて、前記疎水性高分子が、ポリ乳酸、ポリメチルメタクリレート及びポリ（α−メチルスチレン）から選択される少なくとも一種であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体。
【請求項６】
物質内包性無機粒子と下記（１）式で表される重合体と疎水性防腐剤と疎水性高分子とを溶媒中で混合した後、粉末状の物質内包性無機粒子複合体を得ることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【化２】
（式中、ｍは１〜２０００までの整数、ｎは２〜２００００までの整数を表す。）
【請求項７】
請求項６において、前記物質内包性無機粒子と前記疎水性防腐剤と前記疎水性高分子とを溶媒中で混合して物質内包性無機粒子に疎水性防腐剤と疎水性高分子を担持させた後に、前記（１）式で表される重合体を混合することを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【請求項８】
請求項６又は７において、前記疎水性防腐剤が１，２−ビス（ブロモアセトキシ）エタン（ＢＢＡＥ）であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【請求項９】
請求項６〜８の何れかにおいて、前記物質内包性無機粒子が無機層状物質であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【請求項１０】
請求項９において、前記無機層状物質がクレイであることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【請求項１１】
請求項６〜１０の何れかにおいて、前記疎水性高分子が、ポリ乳酸、ポリメチルメタクリレート及びポリ（α−メチルスチレン）から選択される少なくとも一種であることを特徴とする物質内包性無機粒子複合体の製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００６−１８２６５６（Ｐ２００６−１８２６５６Ａ）
【公開日】平成１８年７月１３日（２００６．７．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−３７４７５５（Ｐ２００４−３７４７５５）
【出願日】平成１６年１２月２４日（２００４．１２．２４）
【出願人】（０００２４２４２６）北辰工業株式会社 (55)
【出願人】（３０４０６３９１２）株式会社トランスパレント (7)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年７月１３日（２００６．７．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１２月２４日（２００４．１２．２４）
【出願人】（０００２４２４２６）北辰工業株式会社 (55)
【出願人】（３０４０６３９１２）株式会社トランスパレント (7)
【Ｆターム（参考）】
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