白金化合物のナノ粒子配合物
白金化合物の固体脂質ナノ粒子、特に、抗腫瘍性白金錯体が開示されている。本発明のナノ粒子は、ａ）溶融脂質、界面活性剤および場合により共界面活性剤、ならびに白金化合物水溶液を混合することにより第一のミクロエマルジョンを調製し；ｂ）界面活性剤および場合により共界面活性剤を水中で混合し、好ましくはａ）で使用した脂質と同じ溶融温度で、完全な溶液にまで加熱し、そして共界面活性剤を加えることにより、溶液を調製し；ｃ）ａ）で得たミクロエマルジョンをｂ）で得た溶液に分散してマルチプルミクロエマルジョンｃ）を得て；ｄ）ｃ）で得たミクロエマルジョンを０．５〜４℃の範囲の温度で、水性媒体に分散して固体脂質ミクロスフェアを得て；ｅ）ｄ）で得た脂質ミクロスフェアを限外濾過を通して水性媒体で洗浄し、そして場合により膨張性薬剤および凍結防止剤の存在下に、凍結乾燥することを含む方法により得られる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療関連の白金化合物の固体脂質ナノ粒子（Solid lipid nano particle）に関する。
【０００２】
発明の背景
固体脂質ナノ粒子もしくはミクロ粒子（ＳＬＮまたはＳＬＭ）またはナノスフェアは、１ミクロン未満の平均直径を有する、通常、数百〜数ナノメーターの範囲の脂質粒子であり、それらは、制御された薬物送達用の担体として徹底的に研究されている。ＳＬＮは、例えば高圧均質化（ＥＰ６０５４９７）およびミクロエマルジョン（ＵＳ５，２５０，２３６）を介するものを含む、いくつかの方法により、固体脂質から製造することができる。
【０００３】
ＳＬＮの製造および薬学的応用のレビューが、例えば、Eur. J. Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 50 (2000), 161-177およびPharm. Technol. Eur. 13 (2001) 32-42に報告されている。
【０００４】
薬物の非経口投与に適切なＳＬＭの形態の医薬組成物が、特に、ＥＰ９８８０３１に開示されている。その配合物は、脂肪酸、ＰＥＧ−ステアレート、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ等のような特定の化合物により特徴付けされ、それは食作用を回避してミクロ粒子を安定化する。
【０００５】
粘膜組織および血液脳関門を越えての薬物送達用に特に適したミクロ粒子は、ＷＯ９９／２７９１８およびＵＳ６，４１９，９４９に開示されている。異なる種類の抗生物質、ホルモンおよび抗腫瘍剤を含むいくつかの医薬が、具体的に記載されている。
【０００６】
白金化合物は、固形腫瘍を処置するために使用される最も有効な抗癌薬の一つである。静脈内投与の後、白金種は、時間依存的な動力学で血漿タンパク質に不可逆的に結合（共有結合）する傾向があり、投与から数時間以内には９０％超の薬物が結合する。さらに、いくつかの新規な白金錯体では、血漿水中で遊離し、血漿タンパク質に可逆的に結合する薬物の一部が、進行性で迅速な分解を受けて不活性な脱白金種を生成する。おそらく求核性チオール含有内因性分子（例えば、システイン残基、グルタチオン）との相互作用による、血漿中での白金化合物の化学的不安定さが原因で、これらの種は、発生すると思われる。ヒトにおける血漿タンパク質の高程度な結合が、おそらくは、そのような相互作用に有利に働く。血漿タンパク質への高度な不可逆的な結合およびヒト血漿中での速い分解の双方が、臨床試験における白金化合物の効能を阻害すると思われる。
発明の説明
【０００７】
抗腫瘍活性を有する白金化合物は、有利には、ＳＬＮまたはＳＬＭに配合することができ、驚くことに、その治療指数を改善する。
【０００８】
本発明によれば、好ましい白金化合物として、白金金属原子が適切な配位子、特にアニオン性配位子およびアミノ基含有配位子によりキレートされている白金錯体が挙げられる。
【０００９】
好ましい化合物は、ＵＳ６，０２２，８９２、ＵＳ６，０６０，６１６、ＵＳ５，７４４，４９７、ＵＳ６，０１１，１６６、およびＵＳ６，５９６，８８９に記載されている。
【００１０】
特に好ましい化合物は：
ＵＳ５，７４４，４９７の実施例６に記載の、式Ｉ：
【００１１】
【化６】
【００１２】
のトランス−｛ビス[トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）（μ−１，６−ヘキサンジアミン）]｝ジアミン白金四硝酸塩、
ＵＳ６，０２２，８９２の実施例１７、１５頁１５〜３１行に記載の、式II：
【００１３】
【化７】
【００１４】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−７，１０−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
ＵＳ６，０２２，８９２の実施例１７、１５頁３２〜３８行に記載の、式III
【００１５】
【化８】
【００１６】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−６，１１−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
ＵＳ６，５９６，８８９の実施例２に記載の、式IV：
【００１７】
【化９】
【００１８】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝−μ−（１，１２−ジアミノ−４，９−ジアザドデカン−Ｎ1，Ｎ12）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
ＵＳ６，５９６，８８９の実施例１に記載の、式Ｖ：
【００１９】
【化１０】
【００２０】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝−μ−（１，８−ジアミノ−４−アザオクタン−Ｎ1，Ｎ8）二硝酸塩．ＨＮＯ3である。
【００２１】
白金化合物の固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）の配合物は、固体脂質、界面活性剤、および共界面活性剤を賦形剤として使用し、ここに参照として取り込まれる、上記の特許文献中に開示されている方法のいずれを用いても得ることができる。
【００２２】
白金化合物のナノ粒子は、記載の技術（ＵＳ５，２５０，２３６）を用いて、温ミクロエマルジョンから得られる。ＳＬＮは、ミクロエマルジョンの内相中に溶解しうる親水性または疎水性白金化合物と共に入れられる。
【００２３】
より詳細には、本発明の白金錯体のナノ粒子は、
ａ）溶融脂質、界面活性剤および場合により共界面活性剤、ならびに白金化合物水溶液を混合することにより第一のミクロエマルジョンを調製し；
ｂ）界面活性剤および場合により共界面活性剤を水中で混合し、好ましくはａ）で使用した脂質と同じ溶融温度で、完全な溶液にまで加熱し、そして共界面活性剤を加えることにより、溶液を調製し；
ｃ）ａ）で得たミクロエマルジョンをｂ）で得た溶液に分散してマルチプルミクロエマルジョンｃ）を得て；
ｄ）ｃ）で得たミクロエマルジョンを０．５〜４℃の範囲の温度で、水性媒体に分散して固体脂質ミクロスフェアを得て；
ｅ）ｄ）で得た脂質ミクロスフェアを限外濾過を通して水性媒体で洗浄し、そして場合により膨張性薬剤および凍結防止剤の存在下に、凍結乾燥する；
ことを含む方法により得られる。
【００２４】
デキストラン等のような慣用の膨張性薬剤を、有利に使用しうる。
【００２５】
本発明によって使用される脂質成分は、例えばトリラウリン、トリパルミチンおよびトリステアリン等のようなトリグリセリド、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸およびステアリン酸のような脂肪酸、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコールのようなアルコールを含む群から選択される。界面活性剤は、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、グリコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、ビス（２−エチルヘキシル）スルホコハク酸ナトリウム、レシチンおよびリン脂質、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ４０、Ｔｗｅｅｎ８０）、ソルビタンエステル（Ｓｐａｎ２０、Ｓｐａｎ４０、Ｓｐａｎ６０、Ｓｐａｎ８０）、セラミド、シンゴミエリン、ガラクトセレブロシド、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレングリコール非イオン性ブロックコポリマーまたはスクロース脂肪酸エステルを含む群から選択される。共界面活性剤は、低分子量アルコールまたはグリコール、例えばイソプロパノール、ブタノール、ヘキサノール、ヘキサンジオール、プロピレングリコール、低分子量脂肪酸、例えば酪酸およびヘキサン酸、リン酸とベンジルアルコールのエステルを含む群から選択される。
【００２６】
ステアリン酸が、脂質物質として好ましい。
【００２７】
好ましい界面活性剤として、大豆ホスファチジルコリン、タウロコール酸ナトリウムおよびそれらの混合物が挙げられる。
【００２８】
好ましい共界面活性剤として、イソプロパノールが挙げられる。本発明に係るミクロスフェアの製造において、種々の物質が以下の比率で使用される：全体の４〜２５重量％、好ましくは４〜１２重量％の間の、薬物を含みうる脂質成分；
全体の４０〜７０重量％、好ましくは５５〜６５重量％の間の、水；
全体の８〜３０重量％、好ましくは１２〜２２重量％の間の、界面活性剤；
全体の０〜１５重量％、好ましくは６〜１２重量％の間の、共界面活性剤。
【００２９】
温ミクロエマルジョンを分散するための水の容積は、ミクロエマルジョンの容積に対して、５〜５０倍の容積、好ましくは５〜２０倍の容積の水である。
【００３０】
白金化合物−ＳＬＮは、平均直径が７０〜２００ｎｍである、球体形状のものであり、静脈内投与および経口投与に適切である。
【００３１】
白金化合物−ＳＬＮは、経口ルートで投与された場合、リンパを通して吸収される。静脈内に投与された場合、ＳＬＮは、溶液配合物の投与後に観察される白金化合物の薬物動態学を有意に変えることができる。また、ＳＬＮは、数分以内に腫瘍細胞中に入ることができ、ＵＳ６，２３８，６９４、ＵＳ６，４１９，９４９に記載されているように、生理学的障壁を乗り越えることができる。
【００３２】
ナノ粒子は、さらに精巧に作製されて、ステルスＳＬＮを得ることができ、ＵＳ６，４１９，９４９に記載されているように、網内系認識を回避することができる。
【００３３】
本発明に係る抗腫瘍治療における白金化合物−ＳＬＮの使用は、以下の長所をもたらす：
１．吸収の悪い白金化合物または腸ルーメン中で不安定な化合物の経口生体利用率の改善；
２．経口投与後の白金化合物と胃／腸粘膜の間の望ましくない相互作用の軽減、したがって局所毒性の最小化；
３．肝臓初回通過効果のない、リンパ系を介してのナノ粒子の吸収による経口生体利用率の最大化；
４．水溶性に乏しい白金化合物を非経口ルートによって投与できる可能性；
５．白金化合物−タンパク質結合の軽減および薬物分布の速度と程度の増大；
６．腫瘍対象物に到達する前に、化合物を分解／不活性化しうる血中の内因性分子からの白金化合物保護；
７．配合物からの薬物放出のペースを落とすことにより静脈内的に投与された白金化合物の薬物動態学的プロフィールを変えて、そのようにして、ピーク濃度を減少させ且つ体循環中での滞留時間を増加させること；
８．腫瘍細胞への治療指数の改善（向上した透過性および保持効果）および、より良い抗癌効能での細胞内への白金化合物の徐放；
９．血液脳関門の通過を含む、薬物分布パターンの改変。
【００３４】
本発明の白金化合物−ＳＬＮは、白金化合物に通常応答性の癌に冒された患者に投与することができ、好適には、経口投与および静脈内投与用の医薬配合物中に配合される。適当な投薬計画へのガイドラインは、白金化合物を開示している上記のＵＳ特許に見出しうる。
【００３５】
実施例
実施例１
ビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−７，１０−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3のＳＬＮ
式IIのビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−７，１０−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3（ＵＳ６，０２２，８９２の実施例１７、１５頁２５〜３１行に記載）は、種々の腫瘍細胞系において顕著な抗腫瘍活性を与える強力なビス白金錯体である。この化合物のナノ粒子は、レシチン、ステアリン酸、タウロコール酸塩、プロピオン酸、およびビス白金化合物の水溶液（０．０１Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍ ＨＣｌ）を用いて、上記（ＵＳ５，２５０，２３６）の手法で製造された。温ミクロエマルジョンは、冷水（１〜４℃）中に分散した。ナノ粒子分散液は、蒸留水で限外濾過（１００，０００Ｄａカットオフ）により繰り返し洗浄した。
【００３６】
得られたビス白金錯体−ＳＬＮのＨＰＬＣおよびＩＣＰ分析は、投入されたビス白金錯体の９０％超が、ナノ粒子に組み込まれたことを示した。ＳＬＮ平均直径は、Malvern Zetasizer 3000HSで測定して、１２０ｎｍであった。
【００３７】
白金化合物は、固体脂質ナノ粒子に組み込まれた場合、ヒト血漿中で安定であり、血漿タンパク質と相互作用しない。ビス白金化合物−ＳＬＮは、ＣＤ１マウスに投与された場合、十分に受容されるものであり、同じ化合物の水溶液と比較した場合に、改良された治療指数を示す。
【００３８】
実施例２
ステアリン酸０．４ｇを約７１℃で溶融し、大豆ホスファチジルコリン０．３２ｇを加えて、熱い透明溶液を得た。次いで、プロピオン酸２６０μｌおよび０．０１Ｎ ＨＣｌ水溶液中の式IIの化合物（９ｍｇ／ｍｌ）２００μｌを加えて、透明なミクロエマルジョン（ミクロ１）を得た。
別個に、水４ｍｌ中の大豆ホスファチジルコリン（０．５６ｇ）、タウロコール酸ナトリウム（０．６７ｇ）およびプロピオン酸（５６０μｌ）の溶液を調製し、７１℃にした（溶液２）。
次いで、ミクロ１を溶液２に注いで、７１℃で透明ミクロエマルジョンを得て、その後、それを、１℃でミクロエマルジョンの容積に対して８倍の容積の水に撹拌下に分散し、容積４６ｍｌの脂質ナノスフェアを得た。
最後に、分散液を、VIVAFLOW50 100kDaカットオフを用いて、毎回水４６ｍｌを加えて、タンジェンシャル・フロー濾過により３回洗浄した。
ナノスフェアは、Malvern Zetasizer 3000HSで測定して、平均直径１４１ｎｍを有しており、また、多分散指数は０．３６であった。
【００３９】
実施例３
ステアリン酸０．３６ｇ、パルミチン酸０．３６ｇおよび大豆ホスファチジルコリン０．２８ｇを約５２℃で溶融した。次いで、イソプロピルアルコール４００μｌおよびタウロコール酸ナトリウム０．１２ｇを加えた。次いで、０．０５ｍＭ Ｈ2ＳＯ4水溶液中の式IIの化合物の溶液（９ｍｇ／ｍｌ）４００μｌを加えて、透明なミクロエマルジョン（ミクロ１）を得た。
別個に、大豆ホスファチジルコリン（０．３５ｇ）、タウロコール酸ナトリウム（１．２ｇ）、イソプロピルアルコール（８００μｌ）および０．０５ｍＭ Ｈ2ＳＯ4水溶液８ｍｌの溶液を調製し、５２℃にした（溶液２）。
次いで、ミクロ１を溶液２に注いで、５２℃で透明ミクロエマルジョンを得て、その後、それを、１℃でミクロエマルジョンの容積に対して１０倍の容積の水に撹拌下に分散し、容積９６ｍｌの脂質ナノスフェアを得た。
最後に、分散液を、PALL MINIMATE TFFカプセル 100kDaカットオフを用いて、毎回０．０３２ｍＭ ＨＣｌ水溶液９６ｍｌを加えて、タンジェンシャル・フロー濾過により２回洗浄した。
デキストラン（分散液１００ｍｌに対して３ｇ）を添加後、分散液を凍結乾燥した。
凍結乾燥プロセス後に得られたナノスフェアは、Malvern Zetasizer 3000HSAで測定して、平均直径３２４ｎｍを有しており、また、多分散指数は０．５であった。
【００４０】
実施例４
ステアリン酸０．４ｇおよび大豆ホスファチジルコリン０．２８ｇを約７２℃で溶融した。次いで、イソプロピルアルコール２００μｌおよびタウロコール酸ナトリウム０．０６ｇを加えた。次いで、１０ｍＭ ＨＮＯ3水溶液中の式IIの化合物（９ｍｇ／ｍｌ）２００μｌを加えて、透明なミクロエマルジョン（ミクロ１）を得た。
別個に、１０ｍＭ ＨＮＯ3水溶液４ｍｌ中の大豆ホスファチジルコリン（０．３５ｇ）、タウロコール酸ナトリウム（０．６７ｇ）およびイソプロピルアルコール（４００μｌ）の溶液を調製し、７２℃にした（溶液２）。
次いで、ミクロ１を溶液２に注いで、７２℃で透明ミクロエマルジョンを得て、その後、それを、１℃でミクロエマルジョンの容積に対して６倍の容積の水に撹拌下に分散し、容積３２ｍｌの脂質ナノスフェアを得た。
最後に、分散液を、VIVAFLOW50 100kDaカットオフを用いて、毎回ＨＮＯ3（１ｍＭ）水溶液３２ｍｌを加えて、タンジェンシャル・フロー濾過により２回洗浄した。
ナノスフェアは、Malvern Zetasizer 3000HSAで測定して、平均直径１４０ｎｍを有しており、また、多分散指数は０．２６であった。
【００４１】
実施例５
ステアリン酸０．４ｇおよび大豆ホスファチジルコリン０．３２ｇを約７０℃で溶融した。次いで、オクタン酸２８０μｌおよびタウロコール酸ナトリウム０．０４ｇを加えた。次いで、０．０１Ｎ ＨＣｌ水溶液中の式IIの化合物（９ｍｇ／ｍｌ）２００μｌを加えて、透明なミクロエマルジョン（ミクロ１）を得た。
別個に、大豆ホスファチジルコリン（０．３２ｇ）、タウロコール酸ナトリウム（０．６６ｇ）、オクタン酸（４０μｌ）およびイソプロピルアルコール（４００μｌ）ならびに水４ｍｌの溶液を調製し、７０℃にした（溶液２）。
次いで、ミクロ１を溶液２に注いで、７０℃で透明ミクロエマルジョンを得て、その後、それを、１℃でミクロエマルジョンの容積に対して８倍の容積の水に撹拌下に分散し、容積４４ｍｌの脂質ナノスフェアを得た。
最後に、分散液を、毎回水４４ｍｌを加えて、100kDaカットオフでの限外濾過により、２回洗浄した。
ナノスフェアは、Malvern Zetasizer 3000HSAで測定して、平均直径２４２ｎｍを有しており、また、多分散指数は０．２０であった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療関連の白金化合物の固体脂質ナノ粒子（Solid lipid nano particle）に関する。
【０００２】
発明の背景
固体脂質ナノ粒子もしくはミクロ粒子（ＳＬＮまたはＳＬＭ）またはナノスフェアは、１ミクロン未満の平均直径を有する、通常、数百〜数ナノメーターの範囲の脂質粒子であり、それらは、制御された薬物送達用の担体として徹底的に研究されている。ＳＬＮは、例えば高圧均質化（ＥＰ６０５４９７）およびミクロエマルジョン（ＵＳ５，２５０，２３６）を介するものを含む、いくつかの方法により、固体脂質から製造することができる。
【０００３】
ＳＬＮの製造および薬学的応用のレビューが、例えば、Eur. J. Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 50 (2000), 161-177およびPharm. Technol. Eur. 13 (2001) 32-42に報告されている。
【０００４】
薬物の非経口投与に適切なＳＬＭの形態の医薬組成物が、特に、ＥＰ９８８０３１に開示されている。その配合物は、脂肪酸、ＰＥＧ−ステアレート、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ＰＥＧ等のような特定の化合物により特徴付けされ、それは食作用を回避してミクロ粒子を安定化する。
【０００５】
粘膜組織および血液脳関門を越えての薬物送達用に特に適したミクロ粒子は、ＷＯ９９／２７９１８およびＵＳ６，４１９，９４９に開示されている。異なる種類の抗生物質、ホルモンおよび抗腫瘍剤を含むいくつかの医薬が、具体的に記載されている。
【０００６】
白金化合物は、固形腫瘍を処置するために使用される最も有効な抗癌薬の一つである。静脈内投与の後、白金種は、時間依存的な動力学で血漿タンパク質に不可逆的に結合（共有結合）する傾向があり、投与から数時間以内には９０％超の薬物が結合する。さらに、いくつかの新規な白金錯体では、血漿水中で遊離し、血漿タンパク質に可逆的に結合する薬物の一部が、進行性で迅速な分解を受けて不活性な脱白金種を生成する。おそらく求核性チオール含有内因性分子（例えば、システイン残基、グルタチオン）との相互作用による、血漿中での白金化合物の化学的不安定さが原因で、これらの種は、発生すると思われる。ヒトにおける血漿タンパク質の高程度な結合が、おそらくは、そのような相互作用に有利に働く。血漿タンパク質への高度な不可逆的な結合およびヒト血漿中での速い分解の双方が、臨床試験における白金化合物の効能を阻害すると思われる。
発明の説明
【０００７】
抗腫瘍活性を有する白金化合物は、有利には、ＳＬＮまたはＳＬＭに配合することができ、驚くことに、その治療指数を改善する。
【０００８】
本発明によれば、好ましい白金化合物として、白金金属原子が適切な配位子、特にアニオン性配位子およびアミノ基含有配位子によりキレートされている白金錯体が挙げられる。
【０００９】
好ましい化合物は、ＵＳ６，０２２，８９２、ＵＳ６，０６０，６１６、ＵＳ５，７４４，４９７、ＵＳ６，０１１，１６６、およびＵＳ６，５９６，８８９に記載されている。
【００１０】
特に好ましい化合物は：
ＵＳ５，７４４，４９７の実施例６に記載の、式Ｉ：
【００１１】
【化６】
【００１２】
のトランス−｛ビス[トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）（μ−１，６−ヘキサンジアミン）]｝ジアミン白金四硝酸塩、
ＵＳ６，０２２，８９２の実施例１７、１５頁１５〜３１行に記載の、式II：
【００１３】
【化７】
【００１４】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−７，１０−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
ＵＳ６，０２２，８９２の実施例１７、１５頁３２〜３８行に記載の、式III
【００１５】
【化８】
【００１６】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−６，１１−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
ＵＳ６，５９６，８８９の実施例２に記載の、式IV：
【００１７】
【化９】
【００１８】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝−μ−（１，１２−ジアミノ−４，９−ジアザドデカン−Ｎ1，Ｎ12）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
ＵＳ６，５９６，８８９の実施例１に記載の、式Ｖ：
【００１９】
【化１０】
【００２０】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝−μ−（１，８−ジアミノ−４−アザオクタン−Ｎ1，Ｎ8）二硝酸塩．ＨＮＯ3である。
【００２１】
白金化合物の固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）の配合物は、固体脂質、界面活性剤、および共界面活性剤を賦形剤として使用し、ここに参照として取り込まれる、上記の特許文献中に開示されている方法のいずれを用いても得ることができる。
【００２２】
白金化合物のナノ粒子は、記載の技術（ＵＳ５，２５０，２３６）を用いて、温ミクロエマルジョンから得られる。ＳＬＮは、ミクロエマルジョンの内相中に溶解しうる親水性または疎水性白金化合物と共に入れられる。
【００２３】
より詳細には、本発明の白金錯体のナノ粒子は、
ａ）溶融脂質、界面活性剤および場合により共界面活性剤、ならびに白金化合物水溶液を混合することにより第一のミクロエマルジョンを調製し；
ｂ）界面活性剤および場合により共界面活性剤を水中で混合し、好ましくはａ）で使用した脂質と同じ溶融温度で、完全な溶液にまで加熱し、そして共界面活性剤を加えることにより、溶液を調製し；
ｃ）ａ）で得たミクロエマルジョンをｂ）で得た溶液に分散してマルチプルミクロエマルジョンｃ）を得て；
ｄ）ｃ）で得たミクロエマルジョンを０．５〜４℃の範囲の温度で、水性媒体に分散して固体脂質ミクロスフェアを得て；
ｅ）ｄ）で得た脂質ミクロスフェアを限外濾過を通して水性媒体で洗浄し、そして場合により膨張性薬剤および凍結防止剤の存在下に、凍結乾燥する；
ことを含む方法により得られる。
【００２４】
デキストラン等のような慣用の膨張性薬剤を、有利に使用しうる。
【００２５】
本発明によって使用される脂質成分は、例えばトリラウリン、トリパルミチンおよびトリステアリン等のようなトリグリセリド、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸およびステアリン酸のような脂肪酸、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコールのようなアルコールを含む群から選択される。界面活性剤は、コール酸ナトリウム、デオキシコール酸ナトリウム、グリコール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、ビス（２−エチルヘキシル）スルホコハク酸ナトリウム、レシチンおよびリン脂質、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ４０、Ｔｗｅｅｎ８０）、ソルビタンエステル（Ｓｐａｎ２０、Ｓｐａｎ４０、Ｓｐａｎ６０、Ｓｐａｎ８０）、セラミド、シンゴミエリン、ガラクトセレブロシド、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレングリコール非イオン性ブロックコポリマーまたはスクロース脂肪酸エステルを含む群から選択される。共界面活性剤は、低分子量アルコールまたはグリコール、例えばイソプロパノール、ブタノール、ヘキサノール、ヘキサンジオール、プロピレングリコール、低分子量脂肪酸、例えば酪酸およびヘキサン酸、リン酸とベンジルアルコールのエステルを含む群から選択される。
【００２６】
ステアリン酸が、脂質物質として好ましい。
【００２７】
好ましい界面活性剤として、大豆ホスファチジルコリン、タウロコール酸ナトリウムおよびそれらの混合物が挙げられる。
【００２８】
好ましい共界面活性剤として、イソプロパノールが挙げられる。本発明に係るミクロスフェアの製造において、種々の物質が以下の比率で使用される：全体の４〜２５重量％、好ましくは４〜１２重量％の間の、薬物を含みうる脂質成分；
全体の４０〜７０重量％、好ましくは５５〜６５重量％の間の、水；
全体の８〜３０重量％、好ましくは１２〜２２重量％の間の、界面活性剤；
全体の０〜１５重量％、好ましくは６〜１２重量％の間の、共界面活性剤。
【００２９】
温ミクロエマルジョンを分散するための水の容積は、ミクロエマルジョンの容積に対して、５〜５０倍の容積、好ましくは５〜２０倍の容積の水である。
【００３０】
白金化合物−ＳＬＮは、平均直径が７０〜２００ｎｍである、球体形状のものであり、静脈内投与および経口投与に適切である。
【００３１】
白金化合物−ＳＬＮは、経口ルートで投与された場合、リンパを通して吸収される。静脈内に投与された場合、ＳＬＮは、溶液配合物の投与後に観察される白金化合物の薬物動態学を有意に変えることができる。また、ＳＬＮは、数分以内に腫瘍細胞中に入ることができ、ＵＳ６，２３８，６９４、ＵＳ６，４１９，９４９に記載されているように、生理学的障壁を乗り越えることができる。
【００３２】
ナノ粒子は、さらに精巧に作製されて、ステルスＳＬＮを得ることができ、ＵＳ６，４１９，９４９に記載されているように、網内系認識を回避することができる。
【００３３】
本発明に係る抗腫瘍治療における白金化合物−ＳＬＮの使用は、以下の長所をもたらす：
１．吸収の悪い白金化合物または腸ルーメン中で不安定な化合物の経口生体利用率の改善；
２．経口投与後の白金化合物と胃／腸粘膜の間の望ましくない相互作用の軽減、したがって局所毒性の最小化；
３．肝臓初回通過効果のない、リンパ系を介してのナノ粒子の吸収による経口生体利用率の最大化；
４．水溶性に乏しい白金化合物を非経口ルートによって投与できる可能性；
５．白金化合物−タンパク質結合の軽減および薬物分布の速度と程度の増大；
６．腫瘍対象物に到達する前に、化合物を分解／不活性化しうる血中の内因性分子からの白金化合物保護；
７．配合物からの薬物放出のペースを落とすことにより静脈内的に投与された白金化合物の薬物動態学的プロフィールを変えて、そのようにして、ピーク濃度を減少させ且つ体循環中での滞留時間を増加させること；
８．腫瘍細胞への治療指数の改善（向上した透過性および保持効果）および、より良い抗癌効能での細胞内への白金化合物の徐放；
９．血液脳関門の通過を含む、薬物分布パターンの改変。
【００３４】
本発明の白金化合物−ＳＬＮは、白金化合物に通常応答性の癌に冒された患者に投与することができ、好適には、経口投与および静脈内投与用の医薬配合物中に配合される。適当な投薬計画へのガイドラインは、白金化合物を開示している上記のＵＳ特許に見出しうる。
【００３５】
実施例
実施例１
ビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−７，１０−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3のＳＬＮ
式IIのビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−７，１０−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3（ＵＳ６，０２２，８９２の実施例１７、１５頁２５〜３１行に記載）は、種々の腫瘍細胞系において顕著な抗腫瘍活性を与える強力なビス白金錯体である。この化合物のナノ粒子は、レシチン、ステアリン酸、タウロコール酸塩、プロピオン酸、およびビス白金化合物の水溶液（０．０１Ｍ ＮａＣｌ、０．０１Ｍ ＨＣｌ）を用いて、上記（ＵＳ５，２５０，２３６）の手法で製造された。温ミクロエマルジョンは、冷水（１〜４℃）中に分散した。ナノ粒子分散液は、蒸留水で限外濾過（１００，０００Ｄａカットオフ）により繰り返し洗浄した。
【００３６】
得られたビス白金錯体−ＳＬＮのＨＰＬＣおよびＩＣＰ分析は、投入されたビス白金錯体の９０％超が、ナノ粒子に組み込まれたことを示した。ＳＬＮ平均直径は、Malvern Zetasizer 3000HSで測定して、１２０ｎｍであった。
【００３７】
白金化合物は、固体脂質ナノ粒子に組み込まれた場合、ヒト血漿中で安定であり、血漿タンパク質と相互作用しない。ビス白金化合物−ＳＬＮは、ＣＤ１マウスに投与された場合、十分に受容されるものであり、同じ化合物の水溶液と比較した場合に、改良された治療指数を示す。
【００３８】
実施例２
ステアリン酸０．４ｇを約７１℃で溶融し、大豆ホスファチジルコリン０．３２ｇを加えて、熱い透明溶液を得た。次いで、プロピオン酸２６０μｌおよび０．０１Ｎ ＨＣｌ水溶液中の式IIの化合物（９ｍｇ／ｍｌ）２００μｌを加えて、透明なミクロエマルジョン（ミクロ１）を得た。
別個に、水４ｍｌ中の大豆ホスファチジルコリン（０．５６ｇ）、タウロコール酸ナトリウム（０．６７ｇ）およびプロピオン酸（５６０μｌ）の溶液を調製し、７１℃にした（溶液２）。
次いで、ミクロ１を溶液２に注いで、７１℃で透明ミクロエマルジョンを得て、その後、それを、１℃でミクロエマルジョンの容積に対して８倍の容積の水に撹拌下に分散し、容積４６ｍｌの脂質ナノスフェアを得た。
最後に、分散液を、VIVAFLOW50 100kDaカットオフを用いて、毎回水４６ｍｌを加えて、タンジェンシャル・フロー濾過により３回洗浄した。
ナノスフェアは、Malvern Zetasizer 3000HSで測定して、平均直径１４１ｎｍを有しており、また、多分散指数は０．３６であった。
【００３９】
実施例３
ステアリン酸０．３６ｇ、パルミチン酸０．３６ｇおよび大豆ホスファチジルコリン０．２８ｇを約５２℃で溶融した。次いで、イソプロピルアルコール４００μｌおよびタウロコール酸ナトリウム０．１２ｇを加えた。次いで、０．０５ｍＭ Ｈ2ＳＯ4水溶液中の式IIの化合物の溶液（９ｍｇ／ｍｌ）４００μｌを加えて、透明なミクロエマルジョン（ミクロ１）を得た。
別個に、大豆ホスファチジルコリン（０．３５ｇ）、タウロコール酸ナトリウム（１．２ｇ）、イソプロピルアルコール（８００μｌ）および０．０５ｍＭ Ｈ2ＳＯ4水溶液８ｍｌの溶液を調製し、５２℃にした（溶液２）。
次いで、ミクロ１を溶液２に注いで、５２℃で透明ミクロエマルジョンを得て、その後、それを、１℃でミクロエマルジョンの容積に対して１０倍の容積の水に撹拌下に分散し、容積９６ｍｌの脂質ナノスフェアを得た。
最後に、分散液を、PALL MINIMATE TFFカプセル 100kDaカットオフを用いて、毎回０．０３２ｍＭ ＨＣｌ水溶液９６ｍｌを加えて、タンジェンシャル・フロー濾過により２回洗浄した。
デキストラン（分散液１００ｍｌに対して３ｇ）を添加後、分散液を凍結乾燥した。
凍結乾燥プロセス後に得られたナノスフェアは、Malvern Zetasizer 3000HSAで測定して、平均直径３２４ｎｍを有しており、また、多分散指数は０．５であった。
【００４０】
実施例４
ステアリン酸０．４ｇおよび大豆ホスファチジルコリン０．２８ｇを約７２℃で溶融した。次いで、イソプロピルアルコール２００μｌおよびタウロコール酸ナトリウム０．０６ｇを加えた。次いで、１０ｍＭ ＨＮＯ3水溶液中の式IIの化合物（９ｍｇ／ｍｌ）２００μｌを加えて、透明なミクロエマルジョン（ミクロ１）を得た。
別個に、１０ｍＭ ＨＮＯ3水溶液４ｍｌ中の大豆ホスファチジルコリン（０．３５ｇ）、タウロコール酸ナトリウム（０．６７ｇ）およびイソプロピルアルコール（４００μｌ）の溶液を調製し、７２℃にした（溶液２）。
次いで、ミクロ１を溶液２に注いで、７２℃で透明ミクロエマルジョンを得て、その後、それを、１℃でミクロエマルジョンの容積に対して６倍の容積の水に撹拌下に分散し、容積３２ｍｌの脂質ナノスフェアを得た。
最後に、分散液を、VIVAFLOW50 100kDaカットオフを用いて、毎回ＨＮＯ3（１ｍＭ）水溶液３２ｍｌを加えて、タンジェンシャル・フロー濾過により２回洗浄した。
ナノスフェアは、Malvern Zetasizer 3000HSAで測定して、平均直径１４０ｎｍを有しており、また、多分散指数は０．２６であった。
【００４１】
実施例５
ステアリン酸０．４ｇおよび大豆ホスファチジルコリン０．３２ｇを約７０℃で溶融した。次いで、オクタン酸２８０μｌおよびタウロコール酸ナトリウム０．０４ｇを加えた。次いで、０．０１Ｎ ＨＣｌ水溶液中の式IIの化合物（９ｍｇ／ｍｌ）２００μｌを加えて、透明なミクロエマルジョン（ミクロ１）を得た。
別個に、大豆ホスファチジルコリン（０．３２ｇ）、タウロコール酸ナトリウム（０．６６ｇ）、オクタン酸（４０μｌ）およびイソプロピルアルコール（４００μｌ）ならびに水４ｍｌの溶液を調製し、７０℃にした（溶液２）。
次いで、ミクロ１を溶液２に注いで、７０℃で透明ミクロエマルジョンを得て、その後、それを、１℃でミクロエマルジョンの容積に対して８倍の容積の水に撹拌下に分散し、容積４４ｍｌの脂質ナノスフェアを得た。
最後に、分散液を、毎回水４４ｍｌを加えて、100kDaカットオフでの限外濾過により、２回洗浄した。
ナノスフェアは、Malvern Zetasizer 3000HSAで測定して、平均直径２４２ｎｍを有しており、また、多分散指数は０．２０であった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
白金化合物の固体脂質ナノ粒子。
【請求項２】
白金化合物が白金錯体である、請求項１に記載の固体脂質ナノ粒子。
【請求項３】
白金錯体が、式Ｉ：
【化１】
のトランス−｛ビス[トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）（μ−１，６−ヘキサンジアミン）]｝ジアミン白金四硝酸塩、
式II：
【化２】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−７，１０−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
式III：
【化３】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−６，１１−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
式IV：
【化４】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝−μ−（１，１２−ジアミノ−４，９−ジアザドデカン−Ｎ1，Ｎ12）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
式Ｖ：
【化５】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝−μ−（１，８−ジアミノ−４−アザオクタン−Ｎ1，Ｎ8）二硝酸塩．ＨＮＯ3から選択されるものである、請求項２に記載の固体脂質ナノ粒子。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項記載の固体脂質ナノ粒子の製造方法であって、
ａ）溶融脂質、界面活性剤および場合により共界面活性剤、ならびに白金化合物水溶液を混合することにより第一のミクロエマルジョンを調製し；
ｂ）界面活性剤および場合により共界面活性剤を水中で混合し、好ましくはａ）で使用した脂質と同じ溶融温度で、完全な溶液にまで加熱し、そして共界面活性剤を加えることにより、溶液を調製し；
ｃ）ａ）で得たミクロエマルジョンをｂ）で得た溶液に分散して、マルチプルミクロエマルジョンｃ）を得て；
ｄ）ｃ）で得たミクロエマルジョンを０．５〜４℃の範囲の温度で、水性媒体に分散して固体脂質ミクロスフェアを得て；
ｅ）ｄ）で得られた脂質ミクロスフェアを、限外濾過を通して水性媒体で洗浄し、そして場合により膨張性薬剤および凍結防止剤の存在下に、凍結乾燥する；
ことを含む方法。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項記載の固体脂質ナノ粒子を含む医薬組成物。
【請求項６】
白金錯体に感受性の癌に冒された患者の処置方法であって、その患者に治療上有効量の請求項１〜３のいずれか１項記載の固体脂質ナノ粒子を投与することを含む方法。
【請求項１】
白金化合物の固体脂質ナノ粒子。
【請求項２】
白金化合物が白金錯体である、請求項１に記載の固体脂質ナノ粒子。
【請求項３】
白金錯体が、式Ｉ：
【化１】
のトランス−｛ビス[トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）（μ−１，６−ヘキサンジアミン）]｝ジアミン白金四硝酸塩、
式II：
【化２】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−７，１０−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
式III：
【化３】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝μ−（１，１６−ジアミノ−６，１１−ジアザヘキサデカン−Ｎ1，Ｎ16）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
式IV：
【化４】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝−μ−（１，１２−ジアミノ−４，９−ジアザドデカン−Ｎ1，Ｎ12）二硝酸塩．２ＨＮＯ3、
式Ｖ：
【化５】
のビス｛トランス（ジアミン）（クロロ）白金（II）｝−μ−（１，８−ジアミノ−４−アザオクタン−Ｎ1，Ｎ8）二硝酸塩．ＨＮＯ3から選択されるものである、請求項２に記載の固体脂質ナノ粒子。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項記載の固体脂質ナノ粒子の製造方法であって、
ａ）溶融脂質、界面活性剤および場合により共界面活性剤、ならびに白金化合物水溶液を混合することにより第一のミクロエマルジョンを調製し；
ｂ）界面活性剤および場合により共界面活性剤を水中で混合し、好ましくはａ）で使用した脂質と同じ溶融温度で、完全な溶液にまで加熱し、そして共界面活性剤を加えることにより、溶液を調製し；
ｃ）ａ）で得たミクロエマルジョンをｂ）で得た溶液に分散して、マルチプルミクロエマルジョンｃ）を得て；
ｄ）ｃ）で得たミクロエマルジョンを０．５〜４℃の範囲の温度で、水性媒体に分散して固体脂質ミクロスフェアを得て；
ｅ）ｄ）で得られた脂質ミクロスフェアを、限外濾過を通して水性媒体で洗浄し、そして場合により膨張性薬剤および凍結防止剤の存在下に、凍結乾燥する；
ことを含む方法。
【請求項５】
請求項１〜３のいずれか１項記載の固体脂質ナノ粒子を含む医薬組成物。
【請求項６】
白金錯体に感受性の癌に冒された患者の処置方法であって、その患者に治療上有効量の請求項１〜３のいずれか１項記載の固体脂質ナノ粒子を投与することを含む方法。
【公表番号】特表２００７−５３０４９７（Ｐ２００７−５３０４９７Ａ）
【公表日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５０４３７２（Ｐ２００７−５０４３７２）
【出願日】平成１７年３月２４日（２００５．３．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００３１８６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０９２２９８
【国際公開日】平成１７年１０月６日（２００５．１０．６）
【出願人】（５０４４２１６９３）セル セラピューティクス ヨーロッパ エス．アール．エル． (1)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＬＬ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＥＵＲＯＰＥ Ｓ．ｒ．ｌ．
【出願人】（５０６３２２５６９）ナノベクター・ソシエタ・ア・レスポンサビリタ・リミタータ (1)
【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＯＶＥＣＴＯＲ ｓ．Ｒ．Ｌ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年３月２４日（２００５．３．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００３１８６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０９２２９８
【国際公開日】平成１７年１０月６日（２００５．１０．６）
【出願人】（５０４４２１６９３）セル セラピューティクス ヨーロッパ エス．アール．エル． (1)
【氏名又は名称原語表記】ＣＥＬＬ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ ＥＵＲＯＰＥ Ｓ．ｒ．ｌ．
【出願人】（５０６３２２５６９）ナノベクター・ソシエタ・ア・レスポンサビリタ・リミタータ (1)
【氏名又は名称原語表記】ＮＡＮＯＶＥＣＴＯＲ ｓ．Ｒ．Ｌ．
【Ｆターム（参考）】
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