皮膚代謝生理活性物質
本発明は、（ｉ）ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）の安定型の水溶液及び、任意成分として一種のＡＴＰ前駆体例えばＧｐ４Ｇ（ジグアノシン四リン酸）若しくはＡｐ４Ａ（ジアデノシン四リン酸）と、（ｉｉ）皮膚ポリペプチド若しくは皮膚タンパク質又は上記ポリペプチド若しくはタンパク質に関する阻害薬若しくは拮抗薬として作用する生体分子を模倣した、最大６個のアミノ酸を有する少なくとも一種の生体模倣ペプチドとを組合わせた生物活性系を有する化粧用組成物に関する。本発明に係る組成物は油中水型又は水中油型エマルジョンの形式を有し、その生物活性系は水相に含まれている。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧用組成物一般に関する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００２】
本発明の目的は、化粧品を媒介として、「代謝生理活性」と称される皮膚細胞の生存率および／または刺激に関する新規な思想を実施することである。より詳細には、本発明は皮膚の代謝生理活性物質に関する。
【０００３】
個人のライフスタイル、攻撃的環境および老化により、皮膚組織の生物学的機能および生体機能は時間の経過とともに弱くなる。従って皮膚細胞（ケラチノサイト、ランゲルハンス細胞、メラノサイト、線維芽細胞など）が環境との間で外来エネルギーおよび機能性情報をやり取りできるように、皮膚細胞を修復し正しい代謝および異化を維持することが不可欠と考えられる。
【０００４】
本発明の目的は、エネルギーの外部からの供給と細胞間メッセージの刺激とを組み合わせることにより皮膚の広範な能力を増大させ又は自然に修正することである。この供給と刺激の相乗作用は、皮膚（分子、細胞、組織機構）に元々存在する代謝メカニズムを活性化するとともに、場合によって皮膚のケアまたは治療で投与された化粧用活性剤と皮膚との間の相互作用をも最適化することにより、あらゆる攻撃または機能障害に対して皮膚を対応させる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
この目的のために、本発明は、第一に、ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）の安定型の水溶液、及び任意成分としてＡＴＰ前駆体例えばＧｐ４Ｇ（ジグアノシン四リン酸）またはＡｐ４Ａ（ジアデノシン四リン酸）と結合し、第二に、皮膚ポリペプチドまたは皮膚たんぱく質、あるいは前記ポリペプチドまたは前記たんぱく質について作動薬または拮抗薬である生体分子を模倣する最大６個のアミノ酸を含む少なくとも一種の生体模倣ペプチドを結合する生理活性系を含む化粧用組成物を提案している。
【０００６】
「化粧用組成物」という用語は、人体の表面部分、主として皮膚の外観を維持、修復または改善する機能を有する組成物を意味している。前記組成物の投与方法は、外部局所投与でも内部経口投与でもよい。
【０００７】
「ＡＴＰ前駆体」という用語は、ＡＴＰの新生（ｄｅ ｎｏｖｏ）生合成における中間体である任意の生化学化合物を意味しており、好適には、ＡＴＰ前駆体はＧｐ４Ｇ（ジグアノシン四リン酸）またはＡｐ４Ａ（ジアデノシン四リン酸）である。
【０００８】
「生体模倣ペプチド」という用語は、皮膚ポリペプチドまたは皮膚たんぱく質、または前記ポリペプチド若しくはたんぱく質について作動薬または拮抗薬である生体分子を模倣した最大６個のアミノ酸を含むペプチドを意味する。これらのペプチドまたはたんぱく質は、皮膚における生合成または皮膚情報の伝達の一部をなすか又はそのためにある役割を果たしている。
【０００９】
好適には、選択される生体模倣ペプチドは、皮膚の特性および免疫を調節するペプチドまたはたんぱく質を含む。
【００１０】
本発明に係る生理活性系に属するペプチドにより模倣される皮膚のペプチドまたはたんぱく質の例として、次のようなものが選択される。
【００１１】
１）カテコールアミン（ドーパミン、アドレナリン、ノルアドレナリン）、エンドルフィン（例えばベータ−エンドルフィン）およびエンケファリン（例えばメト−エンケファリン）を含む神経メディエーター。例として、次のようなものが選択される。
−ソマトスタチン、配列番号３を参照
−β−ＣＧＲＰペプチド、配列番号６参照
−β−エンドルフィン、配列番号９を参照
−ロイ−エンケファリン、配列番号１０を参照
−メト−エンケファリン、配列番号１１を参照
【００１２】
２）神経ペプチド、例えば、
−Ｐ物質、配列番号１を参照
−神経ペプチドＹ、配列番号２を参照
−ニューロテンシン、配列番号４を参照
−α−ＣＧＲＰペプチド（カルシトニン遺伝子関連ペプチド）、配列番号５を参照
−ニューロキニンＡおよびＢ、
−ＧＲＰペプチド（ガストリン放出ペプチド）、配列番号７を参照
−ブラジキニン、配列番号８を参照
【００１３】
神経ホルモン、例えば、
−α−ＭＳＨ（メラノサイト刺激ホルモン）ペプチド、配列番号１２を参照
−ＡＣＴＨ（副腎皮質刺激ホルモン）ペプチド、配列番号１３を参照
−「乳腺刺激ホルモン放出」ペプチド、配列番号１４を参照
【００１４】
一例として、本発明で用いる生体模倣ペプチドは、物質Ｐ拮抗薬またはＣＧＲＰペプチド拮抗薬であるペプチドを模倣する。
【００１５】
一例として、本発明で用いる生体模倣ペプチドは、ソマトスタチン作動薬であるペプチドを模倣する。
【００１６】
一例として、本発明で用いる生体模倣ペプチドは、神経ペプチドＹ拮抗薬または調節物質であるペプチドを模倣する。
【００１７】
一例として、本発明で用いる生体模倣ペプチドは、ブラジキニン受容体拮抗薬であるペプチドを模倣する。
【００１８】
一例として、本発明で用いる生体模倣ペプチドは、α−ＭＳＨ作動薬または拮抗薬であるペプチドを模倣する。
【００１９】
「模倣」または「模倣体」という用語は、考慮対象であるペプチドが、生体外、特に本発明に係る組成物中において、関連生体分子（例えば、ペプチドまたはたんぱく質）の生体内（例えば、皮膚中）での生物学的機能に類似または近接した生物学的効果を発揮する特性を意味している。
【００２０】
明細書本文および特許請求の範囲を通して、用語「ペプチド」は、置換されていない数個のアミノ酸の系列と、同一のアミノ酸の系列のうちいくつか、例えばＮ−末端アミノ酸および／またはＣ−末端アミノ酸が機能性又は非機能性の置換基で置換されたものとの両方を意味していると考えられるべきである。
【００２１】
これらのペプチドは、構成要素であるアミノ酸またはそれらの誘導体から、普通の化学合成（固体相または均一な液体相における）または酵素合成（クルマンら［Ｋｕｌｌｍａｎ ｅｔ ａｌ］、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．］、１９８０年、第２５５号、ｐ．８２３４）のいずれかにより得ることができる。
【００２２】
これらのペプチドは、遺伝子工学により修飾されたまたは修飾されていない菌株の発酵によって所望の配列またはそれらの配列の種々の断片を産生することでも得ることができる。
【００２３】
最後に、これらのペプチドは、動物または植物由来（好適には植物由来）のたんぱく質の抽出と、制御された加水分解による当該ペプチドの放出により得ることができる。多くの植物性たんぱく質が、それらの構造内に有利な配列を含むことが発見された。制御された加水分解によりこれらのペプチド断片を解離させることができる。
【００２４】
本発明の第一の変形形態によると、化粧用組成物において選択された生理活性系それ自体が、化粧用組成物の活性成分を構成する。
【００２５】
この場合、生体模倣ペプチドの選択により化粧用組成物を「機能化する」ことができる。例えば、
− α−ＭＳＨの模倣体を選択することにより色素化活性が得られ、逆に、α−ＭＳＨ拮抗薬の模倣体を選択することにより脱色素化活性が得られる。
− Ｐ物質拮抗薬であるペプチドの模倣体を選択することにより、鎮静効果が得られる。
− ＣＧＲＰペプチド拮抗薬であるペプチドの模倣体を選択することにより、神経原性の刺激を妨げる効果が得られる。
− ブラジキニン拮抗薬であるペプチドの模倣体を選択することにより、不耐性または感作を妨げる効果が得られる。
【００２６】
第二の変形形態によると、化粧用組成物において選択された生理活性系は、前記組成物に存在する一つ以上の活性成分の効能を高める。
【００２７】
本発明を特徴づける生理活性系は、表皮の正常な活性を回復しおよび／または維持することができる。この作用は特に、化粧用組成物が皮膚栄養素および／または皮膚細胞の生存率を保証する水相を含むならば確実となる。
【００２８】
本発明は下記実施形態も提供する。
− ＡＴＰの安定型はナトリウム塩、例えば、ＡＴＰのジナトリウム塩であり、
− 生体模倣ペプチドは、皮膚構成分子または皮膚上に存在する酵素の生合成において機能的に活性であり、
− 生体模倣ペプチドは、皮膚の情報伝達において機能的に活性であり、例えば、皮膚に存在するホルモンまたはサイトカインの生物学的に活性な画分であり、
− 生体模倣ペプチドは、次の要素
ヒスチジン−β−アラニル（スーパーオキシドジスムターゼ模倣体）、
ペプチドＲ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、
ペプチドＴｙｒ−Ａｒｇ、
ペプチドＲ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ、
Ｎ−アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｒ（エンドルフィン模倣体、Ｒはアミノ酸）、
ペプチドＬｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ、
ペプチドＡｌａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ（アルファ−ＭＳＨ模倣体）、ペプチドＧｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（エラフィン模倣体）からなる群から選択され、
− 生体模倣ペプチドは例えばジペプチドであり、このジペプチドは式Ａｒｇ−Ｒ若しくはＨｉｓ−Ｒ（Ｒはアミノ酸）に相当するか、又は式（Ｒ−Ｒ）ｎ（１＜ｎ＜３）、例えば式（Ａｒｇ−Ｌｙｓ）ｎ（１＜ｎ＜３）のオリゴマーの形式を有し、
− 生体模倣ペプチドは例えば式Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−ＰｒｏまたはＬｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌに相当するトリペプチドであり、
− 生体模倣ペプチドは例えば、式Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ、Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−ＲまたはＧｌｙ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｒ（Ｒはアミノ酸）に相当するテトラペプチドであり、
− 生体模倣ペプチドはペンタペプチド、例えばＶａｌ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｒ（Ｒはアミノ酸）であり、
− 生体模倣ペプチドはヘキサペプチド、例えば、Ａｌａ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｐｈｅ−Ｔｒｙ（Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はアミノ酸）であり、
− 化粧用組成物は生理活性系と共にアミノ酸を含み、前記アミノ酸は例えばクレアチン、デカルボキシカルノシン、およびグルタミン類例えばＮ−アセチルグルタミンからなる群から選択され、
− 本発明による化粧用組成物には、生理活性系と共に、例えば、スーパーオキシドジスムターゼ、エンドヌクレアーゼ、フォトリアーゼ、およびミルクからのサイトカイン類からなる群から選択されるたんぱく質が含まれ、
− 生理活性系は、前記組成物の１０重量％以下、好適には１重量％と１０−７重量％との間を占め、
− 本発明に係る化粧用組成物には、本発明の生理活性系により効能を高められた少なくとも一種の化粧用活性成分が含まれ、
− 化粧用組成物は通常油中水または水中油エマルジョンの状態にあるが、生理活性系は、例えばそのうちの水相に溶液として含まれており、
− 本発明に係る生理活性系において、ＡＴＰおよび任意成分であるＡＴＰ前駆体は最大１０重量％、好適には０．０１重量％と５重量％との間を占める。
【００２９】
本発明の組成物中に任意に存在する活性剤の有効量は、所望の結果を得るのに必要な量に相当し、本発明に係る組成物はまたそれらの組成物の用途にも左右される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
第一の部類には、皮膚の美感および快適さを改善するために健康な皮膚に適用される化粧用組成物がある。健康な皮膚は、完璧な状態にあるわけではないが、病理のない状態と定義することができる。皮膚は、乾燥現象、肌荒れ現象、時間的加齢または日射性加齢に関わるしわ、皮脂が過剰に分泌されている領域、または色素化の過小な領域や過大な領域を有することがある。さらに、健康な皮膚は、日光により良く耐えるため一時的または恒久的な光防御を必要とすることがある。
【００３１】
もう一つの部類には、予防措置または医療の一環として、疾患または投薬により傷つきやすくなっている皮膚に適用する組成物がある。
【００３２】
本発明の化粧用組成物には、酸化防止剤、フリーラジカル捕捉剤、α−ヒドロキシ酸、ビタミン、日焼け止め剤またはフィルター、昆虫忌避剤および抗炎症剤から選択された少なくとも一種の化粧用活性剤も含まれている。
【００３３】
もちろん当業者は、任意成分である活性剤の種類および／または分量の選択に際しては、予定する添加物により本発明の生理活性系の有益な特性が変えられないか、又は実質的に変えられないように注意すべきである。好ましくは本発明の生理活性系と考慮している活性剤の間の相乗作用を探求すべきである。
【００３４】
本発明の組成物の作成には当業者、特に水中油（Ｏ／Ｗ）または油中水（Ｗ／Ｏ）型エマルジョンの製造技術における当業者に公知の技法が用いられる。
【００３５】
これらの組成物は、特に、単純なエマルジョンまたは複雑なエマルジョン、例えば、クリーム、ミルク、ゲルまたはクリームゲルなどの二重（Ｏ／ＷまたはＷ／Ｏ）または三重（Ｗ／Ｏ／ＷまたはＯ／Ｗ／Ｏ）エマルジョンの形式、粉末または固体の形式、場合によってはエアロゾルとしてパッケージされたムースまたはスプレーの形式で提供できる。
【００３６】
本発明の化粧用組成物がヒトの表皮の保護若しくはケアのため、または抗日光組成物として使われる場合、この組成物は、懸濁液の形、溶媒若しくは脂肪物質中に分散した形、非イオン性小胞性分散体の形、エマルジョン（好適にはクリームやミルクなどの水中油型）の形、軟膏、ゲル、クリームゲル、固体チューブ、粉末、棒、エアロゾル・ムースまたはスプレーの形で提供することができる。
【００３７】
本発明の化粧用組成物を毛髪の保護に用いる場合は、この組成物はシャンプー、ローション、ゲル、エマルジョン、または非イオン性小胞性分散体の形にあり、さらに、例えば、シャンプーの前後、毛染めや漂白の前後、髪の毛にパーマネント・ウエーブをかけたり、髪の毛を真っ直ぐにする前後やその間に適用するすすぎ洗い用組成物を構成することができる。この組成物はまたスタイリングやトリートメント用ローションやゲル、ヘアドライヤーで整髪したりまたはヘアセットするローションやゲル、または髪の毛にパーマネント・ウエーブをかけたり、髪の毛を真っ直ぐにしたり、毛染めや漂白する組成物の形でも提供することができる。
【００３８】
この組成物は、爪、まつげ、まゆ毛または肌のメーキャップ製品、例えば表皮トリートメント・クリーム、ファンデーション、口紅のチューブ、アイシャドウ、ほお紅、マスカラまたはアイライナーなどとして使われ、この組成物は、固体またはペースト状、無水または水性の形態、例えば水中油または油中水エマルジョン、非イオン性小胞性分散体または懸濁液などの形で提供することができる。
【００３９】
本発明の組成物の場合、ｐＨは４と７との間の生理的な値になる。この組成物を局部的に適用する場合、少なくとも一種のＡＴＰおよび任意成分として少なくとも一種の生体模倣ペプチドに共役した前駆体を含む組成物は、顔，首、頭皮、粘膜、爪、体幹、胸部、足、脚、または身体のその他の部分に適用することができる。
【００４０】
本発明の組成物には公知の化粧品補助剤、特に脂肪性物質、本発明の文脈において特定目的に使われているものを除く有機溶媒、乳化剤、イオン性または非イオン性増粘剤、鎮静剤、乳白剤、安定剤、皮膚軟化剤、シリコーン、発泡防止剤、保湿剤、ビタミン、香料、保存剤、界面活性剤、充填材、ポリマー、噴射剤、アルカリ性化剤または酸性化剤、または染料または化粧品において通常使われているその他の成分、特にエマルジョンの形で組成物を製造するための成分から選ばれた物質を含むこともできる。例えば本発明の組成物には、屋外環境および太陽の下で使われる製品の場合、遮蔽剤または反射剤が含まれている。
【００４１】
脂肪物質は油またはワックスまたはそれらの混合物からなり、またこれらの物質には脂肪酸、脂肪族アルコールおよび脂肪酸エステルも含まれる。油は、動物系、植物系、鉱物系または合成系油類から選ばれ、特に液状石油ジェリー、パラフィン油、揮発性または非揮発性シリコーン油、イソパラフィン、ポリオレフィン、およびフルオロ油とパーフルオロ油から選ばれる。同様に、ワックスは、それら自体は公知である、動物系、化石系、植物系、鉱物系または合成系ワックスから選ばれる。
【００４２】
極性油の中では、「Ｆｉｎｓｏｌｖ ＴＮ」として知られる油、トリメリト酸トリデシル、イソノナン酸イソノニル、ミリスチン酸イソプロピル、炭酸デカプリリル、またはＧｕｅｒｂｅｔアルコール安息香酸およびヒドロキシ安息香酸、例えばＣＰ Ｈａｌｌ Ｃｏｍｐａｎｙの「ホールブライト（Ｈａｌｌｂｒｉｔｅ）ＢＨＢ」と呼ばれる製品などが特記される。
【００４３】
水中油エマルジョン型キャリアーを有する本発明による抗日光製剤の場合、目安として、水相（特に親水性遮蔽剤を含む）はほぼ全製剤の５０〜９５重量％、好適には７０〜９０重量％を占め、油相（特に親油性遮蔽剤を含む）は全製剤の５〜５０重量％、好適には１０〜３０重量％を占め、さらに、（共）乳化剤は全製剤の０．５〜２０重量％、好適には２〜１０重量％を占める。
【００４４】
特に、本発明の組成物は、透明性および半透明性を有する無水の組成物の形で得ることができ、これは注目に値する。
【００４５】
本発明の別の主題は、本発明に係る化粧用組成物を利用したスキンケア製品、肌、唇および／または外皮用メーキャップ製品、抗日光製品、およびスキンケアおよび／またはトリートメント用皮膚科学的組成物である。
【００４６】
本発明の組成物は、肌、唇および／または外皮などのケラチン物質のための着色された皮膚科学的組成物またはケア組成物の形、抗日光組成物や身体衛生用組成物、特に脱臭剤製品または棒状のメーキャップ除去製品の形を有する。この組成物は、特に、肌、外皮または唇のためのケアベース（寒冷や日光や風から唇を保護するリップクリーム、または肌、爪または髪をケアするクリーム）として使われる。
【００４７】
本発明の組成物はまた、肌の着色メーキャップ製品、特に選択的機能としてケアまたはトリートメント特性を有するファンデーション、ほお紅、化粧用ルージュ、アイシャドー、コンシーラー製品、アイライナー、身体化粧用製品、選択的機能としてケアまたはトリートメント特性を有するリップスティックなどの唇化粧用製品、爪またはまつげなどの外皮化粧用製品特にマスカラケーキ、またはペンシル状のまゆ毛および髪の毛用化粧用製品の形を有する。特に、本発明の組成物は、生理活性系の他に、化粧用および／または皮膚科学的活性剤を含む化粧製品である。
【００４８】
本発明の化粧用組成物には、真珠様光沢剤、色素、または被覆または非被覆の金属酸化物からなるナノ色素（一次粒子の平均サイズが、一般に、５ｎｍと１００ｎｍとの間、好適には１０ｎｍと５０ｎｍとの間にある）、例えば、酸化チタン（アモルファスまたはルチル型および／またはアナターゼ型の結晶）、酸化鉄、酸化亜鉛、酸化ジルコニウムまたは酸化セリウムおよびそれらの混合物のナノ色素を含む。これらは酸化物はすべて公知の紫外線光保護剤である。また、普通のコーティング剤はアルミナおよび／またはステアリン酸アルミニウムである。この種の被覆または非被覆金属酸化物ナノ色素は欧州特許出願公開第０５１８７７２号および欧州特許出願公開第０５１８７７３号で詳細に説明されている。
【００４９】
もちろん、本発明の組成物は、化粧品としてまたは皮膚科学的に許容される必要がある。すなわち、この組成物には、生理学的に許容される無毒の媒体が含まれるべきであり、人体の皮膚、外皮または唇に適用可能でなければならない。本発明では、「化粧品として許容できる」という用語は好ましい外観、においおよび感触を有する組成物を意味している。
【００５０】
試験
試験１
普通のヒトのケラチノサイトの細胞代謝に対する、ＡＴＰと結合または非結合のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニン（Ｌ−ｃｉｔｒｕｌｌｙｌ−Ｌ−Ａｒｇｉｎｉｎｅ）ペプチドのジナトリウム塩のバイオシミュレートリー（ｂｉｏｓｉｍｕｌａｔｏｒｙ）活性を評価した。
【００５１】
１．原理
血清欠乏性（２％）の培地において線維芽細胞の培養におけるＡＴＰの量を測定し、下記培地と比較した。
− 様々な濃度のシトルリル−アルギニンを添加した培地
− 様々な濃度のＡＴＰを添加した培地
− 様々な濃度のシトルリル−アルギニンおよびＡＴＰを添加した培地
【００５２】
この試験の狙いは、普通のヒトのケラチノサイトによるＡＴＰ合成に対する、ＡＴＰジナトリウム塩と結合または非結合の本混合物の活性化効果を評価することである。
【００５３】
２．方法
細胞培養
この試験は、６ウエルプレートにおいて「１０５細胞／ウエル」の密度で播種された普通のヒトのケラチノサイトの生体外培養に関して行われた。
【００５４】
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン
この試験において適用できる濃度を決めるために、前もって細胞生存率テストを普通のヒトのケラチノサイトについて行った。
【００５５】
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンを水に溶解し、最終濃度を０．１％に固定した。
【００５６】
１０−４％〜１０−２％のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンの６つの希釈物を、細胞と２４時間および４８時間接触させた。対照実験として「水」条件の培養を実施した。
【００５７】
試験では、Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンは、４８時間の接触後、細胞生存率を８０％より高い最高レベルに維持できた２つの濃度、すなわち、０．０００１％および０．０１％においてテストすることにした。
【００５８】
ＵＶＢ照射
６ウエルプレートにおいて「１０５細胞／ウエル」の密度で播種したケラチノサイトを標準培地（Ｅｐｉｌｉｆｅ Ｓｉｇｍａ）で４８時間培養した。照射前に培養培地を取り除き、細胞をＰＢＳ緩衝液ですすぎ、その１ｍｌは照射用細胞と接触したまま残された。このケラチノサイトに、２０ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢ照射（３１２ｎｍ）を実施した。並行実験として同一の非照射条件の培養を実施した。
【００５９】
照射（および非照射並行実験）後、ＰＢＳを除去し、細胞を下記のような種々の条件下に置いた。
培地中に水を用いた対照実験
培地中に０．００１％Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンを用いた条件
培地中に０．０１％Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンを用いた条件
【００６０】
各条件は３回ずつ実施された。
【００６１】
照射後細胞に２４時間または４８時間接触させた後、前記条件の培養上澄み液を回収した。１００μｌの上澄み液に含まれる、ケラチノサイトにより分泌されたエンドセリン−１の量を、ＥＬＩＳＡ技法（英国、アビングドンのＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）により測定した。エンドセリン−１のレベルは合成したヒトのエンドセリン−１を用いて作られた標準曲線により計算した。結果は、たんぱく質濃度当たりのエンドセリン−１の量をｐｇを単位として表示した（ｐｇ［エンドセリン−１］／ｍｇ［たんぱく質］）。
【００６２】
３．結果
テストした最低濃度（０．０００１％）のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンを２４時間適用した実験では、「水」対照条件と比べて、ケラチノサイト（非照射条件）によるエンドセリン−１の基礎的分泌量が２０％増加した。より高い濃度（０．０１％）では、この活性化効果は７０％とはるかに顕著であった。
【００６３】
ＵＶＢ照射により、「水」対照条件下でのケラチノサイトによるエンドセリン−１の分泌量が５０％増加する結果となった。０．０００１％のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンと２４時間接触させたものは、照射した「水」対照実験と比べてエンドセリン−１の分泌量が６％増加した。濃度０．００１％では、Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンの活性化効果は実に２８％増大した。
【００６４】
テストした最低濃度（０．０００１％）のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンを４８時間適用した実験では、「水」対照条件と比べて、ケラチノサイト（非照射条件）によるエンドセリン−１の基礎的分泌量が２６％増加した。より高い濃度（０．０１％）では、この活性化効果は８２％とはるかに顕著であった。
【００６５】
ＵＶＢ照射により、「水」対照条件下でのケラチノサイトによるエンドセリン−１の分泌量が４０％増加する結果となった。０．０００１％のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンと４８時間接触させた実験では、照射した「水」対照実験に比べてエンドセリン−１の分泌量が４％増加した。濃度０．０１％では、Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンの活性化効果は実に６３％増大した。
【００６６】
４．結論
上記の実験条件下で、選ばれた希釈物および培養時間について、次の事実が認められた。
【００６７】
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンは、０．０１％の濃度で、普通のヒトのケラチノサイトにおけるエンドセリン−１の分泌量に対してかなりの活性化効果があった。
【００６８】
０．０１％のＡＴＰが存在すると、活性化効果は２０％向上した。これは明らかにＡＴＰ分子とＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニン・ペプチドとの間の相乗効果と考えられる。
【００６９】
ＡＴＰ単独でも同じ試験を実施したが、エンドセリン−１の合成にいかなる効果もみられなかった。
【００７０】
試験Ｎｏ．２
普通のヒト線維芽細胞の成長に対するＡＴＰとジペプチドの併用効果を試験した。
【００７１】
試験した製品は下記の通りである。
ジナトリウム塩の形を有するＡＴＰ
β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン）
シトルリル−アルギニン（ｅｘｓｙ ａｌｇｉｎｅ）
【００７２】
１．本試験の目的
この試験の目的は、ヒト線維芽細胞の永久増殖系、ＨａＣａＴ細胞の成長に対する、培養培地に添加されたＡＴＰとペプチド類との併用効果を評価することである。
【００７３】
この試験では、二種のペプチド、すなわち、β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（Ｄｒａｇｏｃｏ）およびＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニン（Ｅｘｓｙｍｏｌ）をＡＴＰと同時に使用した。
【００７４】
この試験は、２または１０％のうし胎仔血清（ＳＶＦ）の存在下で、ＨａＣａＴ細胞の標準培養培地ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ社）における培養について行われた。
【００７５】
２．技法
ＨａＣａＴ細胞を標準培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＳＶＦ）で９６ウエルプレートに低密度で播種し、その後２４時間成長させた。
【００７６】
二日目に、これらの細胞を種々の条件下に置いた。
【００７７】
予備的な細胞毒性試験の後で、ＡＴＰ、β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン）、Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン（ｅｘｓｙ−ａｌｇｉｎｅ）に関するテスト濃度が決定された。
【００７８】
次のような条件が用意された。
・ 対照条件：培養培地単独＋ＳＶＦ
・ ０．５％のβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンのみからなる条件
・ ０．５％のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンからなる条件
・ １μｇ／ｍｌのＡＴＰのみからなる条件
・ ＡＴＰ（１μｇ／ｍｌ）＋β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（０．５％）からなる条件
・ ＡＴＰ（１μｇ／ｍｌ）＋Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン（０．５％）からなる条件
・ ＡＴＰ（１μｇ／ｍｌ）＋β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（０．５％）＋Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン（０．５％）からなる条件
【００７９】
これら種々の条件は、２％ＳＶＦを含むＤＭＥＭおよび１０％ＳＶＦを含むＤＭＥＭの両方において準備された。
【００８０】
各条件は３回ずつ実施された。これらの培地は、実験の途中で新しいものと入れ替えられることはない。
【００８１】
細胞密度は、細胞の播種２４時間後、細胞が種々の試験条件に接触する前に測定された（＝Ｔ０）。ＨａＣａＴ細胞の成長は、ＷＳＴ−１変換方法（４５０ｎｍで読み取る）により培養の２日目、５日目および７日目に測定された。
【００８２】
３．結果
細胞成長は、実験の各時点における細胞生存率の測定により検証された。実験結果からＴ０における初期細胞密度に対する細胞生存率を、Ｔ０での細胞密度を１００％として計算した。実験の各時点に関して、細胞成長に対する種々の生成物の作用を同じ時点における未処理対照実験との比較により分析した。
【００８３】
＞ 培養の２日後、対照実験において、Ｔ０対照値に対する細胞生存率の成長の持続が失われたことが観察された。これは成長因子枯渇培地（２％ＳＶＦ）への切り替えにより説明される。
【００８４】
・ ０．５％濃度のβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンのみを添加すると、細胞成長を大いに刺激した（未処理対照実験に比べて＋２２％）。濃度０．１％では成長に対する効果は認められなかった。
【００８５】
・ ＡＴＰのみの添加では、細胞生存率を実質的に低下させた。
【００８６】
・ テストした２つの濃度において、β−アラニル−Ｌ−ヒスチジンへＡＴＰを添加すると、細胞生存率に対するＡＴＰの妨害効果を打ち消し、β−アラニル−Ｌ−ヒスチジンのみを用いて得られたレベルを超えて細胞生存率を高めた。
【００８７】
・ 濃度０．１％および０．５％のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンのみを添加したものは、未処理対照実験に比べて細胞成長を高めなかった（＋５％）。
【００８８】
＞ 培養の５日後、培養が成長因子枯渇培地中で継続されているために、Ｔ０に対する細胞生存率がわずかに低下した。
【００８９】
・ 濃度０．５％のβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンの細胞成長に対する促進効果（＋１２％）が再度認められた。
【００９０】
・ ＡＴＰのみを添加すると細胞生存率を実質的に低下させたが、この効果は０．５％のβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンを添加すると消失した。
【００９１】
・ Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンのみでは、いかなる濃度で使用しても、細胞成長を高めることはなかった。
【００９２】
４．結論
上の実験条件下およびテストした濃度において、ＡＴＰのみの添加では、２〜５日接触後の普通のヒト線維芽細胞の生存率を実質的に低下させた（−５〜−１０％）ようである。
【００９３】
ＡＴＰとβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンとの併用は、細胞生存率に対するＡＴＰの妨害効果を打ち消し、０．５％の濃度で細胞成長に対して促進効果を発揮するβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンのみを用いて得られたレベルを超えて細胞生存率を高めた。
【００９４】
ＡＴＰとＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンとの併用は、いかなる濃度を用いても、細胞成長に対して促進効果を発揮しなかった。
【００９５】
試験Ｎｏ．３
１．細胞培養
普通のヒトのメラノサイト（ＭＨＮｓ）の培養物は、包茎を患っている幼児および新生児の包皮から作られた。皮膚断片から得られたメラノサイトは、ＭＣＤＢ１５３培地（米国ミズーリ州セントルイス、Ｓｉｇｍａ社）中に置かれ、３０μｇ／ｍｌのうし脳下垂体抽出物（ＢＰＥ）（英国、ペイズリー、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）、２％のうし胎仔血清（ＳＶＦ）（フランス、ブリュマット、Ｄｏｍｉｎｉｑｕｅ Ｄｕｔｓｃｈｅｒ社）、１６ｎＭのホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート（Ｓｉｇｍａ社）、５μｇ／ｍｌのインスリンおよび１．１μＭのヒドロコルチゾン（Ｓｉｇｍａ社）が補充された。培養物は、５％のＣＯ２を含む雰囲気中、３７℃で恒温器に置かれた。２〜３週後にメラノサイトの純粋培養物が得られた。
【００９６】
２．接触時間、細胞の照射およびスライドの作成
テストしたすべての組成物は、許容された最高濃度においてＤＭＳＯに可溶であった。ケラチノサイトのサブトキシック濃度を決めるために予備的試験を行った。ＤＭＳＯの最終濃度は常に２％未満であった。
【００９７】
メラノサイトを製品と３７℃で３０分間接触させ、次いでＵＶＡ放射線をこの細胞に照射した。ＵＶＡ放射線は、Ｂｉｏ−Ｓｕｎ ＵＶ照射装置（Ｖｉｌｂｅｒｔ Ｌｏｕｒｍａｔ社、マルヌ・ラ・バレ）により作られた。この装置は、３１２ｎｍおよび／または３６５ｎｍの波長を発する単色ランプを備えている。このランプの放出エネルギーは、ＲＭＮ−３６５／３１２放射線計により計算された。放出されたエネルギーは、ＵＶＡ領域について０．８Ｊ／ｃｍ２であった。露光後すぐに「コメット」検定が行われた。これらの実験には２つの型の対照実験が含まれている。
負の対照実験：処置されないがＵＶＡ放射線を照射されるメラノサイト、テストした組成物を用いて３０分間処置されるが照射されないメラノサイト。
正の対照実験：処置されないが照射されるメラノサイト。
【００９８】
トリプシン／ＥＤＴＡ混合物（０．０５％／０．０２％）を用いて２〜３分間処理後、培養物を遠心分離により回収し、Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋を含まないＰＢＳ緩衝液（Ｓｉｇｍａ社）に入れた。第２の遠心分離の後、細胞（４．５〜５．０×１０４細胞）を０．５％低融点（ＬＭＰ）アガロース（Ｓｉｇｍａ社）に懸濁させた。この混合物を、アガロース（１．６％）の予備層で被覆し、室温で一晩乾燥し、次いで、第２のアガロース（０．８％）層で予備被覆したばかりの顕微鏡スライドの上に直接付着させた。
【００９９】
３．コメット検定（乾燥スライド技法）および酵素処理
コメット検定の試験手順は、「乾燥スライド」技法［２］を組み込んだＤｅ Ｍｅｏ等［１］の方法によった。照射後、スライドを溶解槽（２．５ＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのＮａ２ＥＤＴＡ、１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ１０、１％のサルコシンＮａ、１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００および１０％のＤＭＳＯ）に入れた。細胞溶解は、４℃で６０分間行い、続いて強アルカリ性溶液（１ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡおよび３００ｍＭのＮａＯＨ、ｐＨ＞１３．０）中で室温で２０分間ＤＮＡを変性した。２０分間の電気泳動（２５Ｖ、３００ｍＡ）の後、これらのスライドをＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（０．４Ｍ、ｐＨ７．４）で中和し、無水エタノールまたはメタノール中で脱水した。
【０１００】
４．顕微鏡観察および画像解析
これらのスライドを臭化エチジウム溶液（２μｇ／ｍｌを７５μｌ）で染色し、２０ＢＧ−Ｗダイクロイックフィルター（励起：５１５−５６０ｎｍ；放射：５９０ｎｍ）およびＡｐｏ Ｄ−Ｐｌａｎ ２０ｘ対物レンズを備えたＢＨ２−ＲＦＬ蛍光顕微鏡（日本、オリンパス社）を用いて観察した。画像解析は、Ｍａｔｒｏｘ ＩＰ−８データ収集用ボードに接続した高感度単色ＣＣＤカメラ（Ｃｏｈｕ ４９１２−５０００）を用いて行った。組立体全体は、Ｆｅｎｅｓｔｒａ Ｋｏｍｅｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（英国、リバプール、Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ社、バージョン３．１）により制御した。
【０１０１】
一試料あたり全部で１００細胞（５０細胞／スライド）が解析された。用いたパラメータは、「コメット」の尾部に存在するＤＮＡの百分率として定義される「尾部ＤＮＡ」である。実験の各系列ごとに負の対照実験（非照射細胞）および正の対照実験（テストされた組成物で処理しない照射細胞）を行った。
【０１０２】
５．統計解析
χ２関数に基づく非線形回帰が、各試料のＴＭ（尾部モーメント）分布度数から直接計算される。具体的には、バウアー等［３］が、これらの分布はχ２関数に従うことを最近証明した。この方法は、χ２法則による分布の解析に基づいている。
【０１０３】
関数の自由度を表す因子ｎ（χ２ＴＭとも呼ばれる）は、損傷度（平均ＴＭ）と直接相関する。因子ｎは、２（無傷の細胞）から１５（極端に損傷した細胞、ガウス分布度数を有する）まで変わる。
【０１０４】
自由度（ｎ）は、ＤＮＡ損傷の指標として使うことができる。分布度数は、Ｅｘｃｅｌ９７作表ソフト（マイクロソフト社）を用いて計算され、非線形回帰はＴａｂｌｅ Ｃｕｒｖｅ ２Ｄソフトウエア（Ｊａｎｄｅｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、バージョン５．０）を用いて計算された。
【０１０５】
６．引用文献
【表１】
［１］ド・メオ Ｍ、ラゲット Ｍ、カステニャーロ Ｍ、デュメニル Ｇ、
「過マンガン酸カリウム酸性ナトリウムの遺伝毒性活性」
ムテーション・リサーチ（Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．）、１９９１年、２６０号、
ｐ．２９５−３０６
［２］クロード Ｍ、エリックソン Ｓ、ナイグレン Ｊ、アンストローム Ｇ、
「コメット検定：メカニズムおよび技術的考察」
ムテーション・リサーチ（Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．）、１９９６年、３６３号、
ｐ．８９−９６
［３］バウアー Ｅ、レックナーゲル ＲＤ、フィードラー Ｕ、ボルウエーバー Ｌ、
ボック Ｃ、グルーリッヒ Ｋ．Ｏ．
「単一細胞電気泳動における尾部モーメントの分布（コメット検定）は、ガウス分 布ではなくχ２に従う」
ムテーション・リサーチ（Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．）、１９９８年、３９８号、
ｐ．１０１−１１０
【０１０６】
７．テストされた組成物による保護度
下表のような結果が得られた。
組成物 ＯＴＭ−χ２ 保護度（％）
ＮＩ ２．０８±０．０２ −
ＮＩ＋ＡＴＰ（４ｍＭ） ２．０８±０．０２ −
ＮＩ＋Ｃｉｔｒｕ（４ｍＭ） ２．０６±０．０２ −
ＮＩ＋ＡＴＰ（４ｍＭ）＋Ｃｉｔｒｕ（４ｍＭ） ２．０７±０．０２ −
ＵＶＡ ９．１６±０．３２ ０．００％
ＵＶＡ＋ＡＴＰ（４ｍＭ） ６．３１±０．３８ １４．６％（ＮＳ）
ＵＶＡ＋Ｃｉｔｒｕ（４ｍＭ） ２．２２±０．２０ ６７．７％
ＵＶＡ＋ＡＴＰ（４ｍＭ）＋Ｃｉｔｒｕ（４ｍＭ） ２．１１±０．０４ ９９．６％
ＯＴＭ−χ２＝尾部モーメント、χ２：ＯＴＭの正規化された度数分布の非線形回帰により計算された関数の自由度。すべての場合におけるモデルの確率は、Ｐ＜０．００１である。
【０１０７】
ＮＩ：非照射メラノサイト。
ＮＩ＋ＡＴＰ：ＡＴＰ（４ｍＭ）で３０分間予備処理された非照射メラノサイト。
ＮＩ＋Ｃｉｔｒｕ：シトルリル−アルギニン（４ｍＭ）で３０分間予備処理された非照射メラノサイト。
ＵＶＡ：ＵＶＡ放射線（０．８Ｊ／ｃｍ２）で照射されたメラノサイト。
ＵＶＡ＋ＡＴＰ：ＵＶＡ放射線（０．８Ｊ／ｃｍ２）で照射され、ＡＴＰ（４ｍＭ）で３０分間予備処理されたメラノサイト。
ＵＶＡ＋Ｃｉｔｒｕ：ＵＶＡ放射線（０．８Ｊ／ｃｍ２）で照射され、シトルリル−アルギニン（４ｍＭ）で３０分間予備処理されたメラノサイト。
ＮＳ：ＵＶＡ＋ＣｉｔｒｕとＵＶＡ＋ＡＴＰとの間で有意の差はなかった。
【０１０８】
シトルリル−アルギニンによる保護度は、ＡＴＰによる保護度よりもはるかに大きかった。ＡＴＰ分子とペプチドとの間の相乗作用は非常に明確であった。
【０１０９】
以下の実施例は本発明を説明しており、本発明の範囲を制限するものではない。
【実施例】
【０１１０】
実施例１：しわ防止クリーム
ステアリン酸スクロース ０．５〜６％
ジステアリン酸スクロース ０．５〜６％
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル ３〜１５％
トリ（カプリル酸／カプリン酸／コハク酸）グリセリル ３〜１５％
セラミデス３ ０．０５〜１％
パルミチン酸アスコルビル ０．０１〜０．１％
酢酸トコフェリル ０．０５〜１％
尿素 ０．５〜２％
塩化カルシウム ０．０５〜０．５％
塩化マグネシウム ０．０５〜０．５％
β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．５〜１％
Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（ペプチド粉末） １０〜５ｐｐｍ
セリン ０．２〜２％
グリセロール ０．５〜３％
クエン酸 ０．１〜０．５％
クエン酸３ナトリウム ０．５〜１．５％
パルミチン酸ビタミンＡ ０．１〜０．５％
リン脂質 ０．１〜０．４％
スーパーオキシドジスムターゼ ０．５〜２％
ヒアルロン酸ナトリウム ０．５〜３％
ソルビン酸カリウム ０．２〜０．５％
スクレロチウムガム ０．１〜０．５％
キサンタンガム ０．１〜０．５％
水 全体で１００％
香料 適量
保存剤 適量
【０１１１】
実施例２：肌に潤いを与える乳剤
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
リン脂質 ３％
セラミド３ ０．１％
パルミチン酸ビタミンＡ ０．１５％
ステアレス−２０ ０．２％
ステアレス−２ １〜３％
メチルパラベン（パラオキシ安息香酸メチル） ０．２５％
塩化カルシウム ０．０１％
塩化マグネシウム ０．０１％
水 全体で１００％
セトステアリルアルコール ２〜４％
ミリスチン酸ミリスチル ２〜４％
ミリスチン酸イソプロピル ４％
グリセロール １％
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
ジメチコン ０．５％
ラノリン族アルコール ０．５％
プロピルパラベン ０．２５％
【０１１２】
実施例３：肌に潤いを与えるクリーム
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
オレイン酸ソルビタン ３．５％
ポリソルベート８０ ２〜４％
コムギの麦芽油 ３％
スイート・アーモンド油 ５％
ミリスチン酸イソプロピル １２％
リン脂質 ０．５％
セラミド３ ０．１％
ポリアクリルアミド＆Ｃ１４−１３イソパラフィン＆ ２〜３．５％
ラウレス−７
パルミチン酸ビタミンＡ ０．１％
トコフェロール ０．０５％
ナトリウムＰＣＡ ０．５％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
ヒアルロン酸ナトリウム ０．１％
水 全体で１００％
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
保存剤 適量
香料 適量
【０１１３】
実施例４：日焼け保護クリーム
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
メトキシ桂皮酸オクチル ６．００％
（Ｎｅｏ Ｈｅｌｉｏｐａｎ ＡＶ）
ブチルメトキシジベンゾイルメタン ３．００％
（Ｐａｒｓｏｌ １７８９）
オクチルトリアゾン ２．００％
（Ｕｖｉｎｕｌ Ｔ１５０）
酒石酸ジ（Ｃ１２−１３）アルキル ８．００％
（Ｃｏｓｍａｃｏｌ ＥＴＩ）
セチルアルコール ０．５０％
ジメチコン ０．５０％
ココ・カプリレート／カプレート ８．００％
ＰＶＰ／エイコセン・コポリマー ２．００％
セチルリン酸カリウム ２．００％
メチルおよびプロピル・パラベン ０．２５％
ＥＤＴＡ二ナトリウム ０．１０％
ＢＨＴ ０．０５％
カルボマー １０．００％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．８〜１％
プロピレングリコール ５．００％
水酸化カリウム ４．０５％
フェニルベンズイミダゾールスルホン酸 ２．００％
（Ｅｕｓｏｌｅｘ ２３２）
酢酸トコフェリル ２．５０％
パンテオール １．００％
ＭＳＨ（Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ） ０．０００１〜０．００００１％
フォトリアーゼ ０．１％
水 全体で１００％
香料 適量
【０１１４】
実施例５：光保護および回復サンクリーム
ＡＴＰ二ナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
エトキシジグリコールおよびキュウリ ８．００％
酒石酸ジ（Ｃ１２−１３）アルキル ５．００％
（Ｃｏｓｍａｃｏｌ ＥＴＩ）
メトキシ桂皮酸オクチル ５．００％
（Ｐａｒｓｏｌ ＭＣＸ）
ブチルメトキシジベンゾイルメタン ２．００％
（Ｐａｒｓｏｌ １７８９）
ジメチコン・トリメチルシロキシケイ酸 ３．００％
酢酸トコフェリル ０．２０％
ジステアリン酸スクロース ５．００％
ヘキシレングリコール ５．００％
ブチル、メチル、プロピル・パラベン＋ ０．４０％
フェノキシエタノール
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
水 全体で１００％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） １〜１．５％
ＭＳＨ（Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ） ０．０００１〜０．００００１％
エンドヌクレアーゼ ０．２％
アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．５〜１％
香料 適量
【０１１５】
実施例６：鎮静用光回復乳液
鉱油 ２．００％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
酒石酸ジ（Ｃ１２−１３）アルキル ４．００％
（Ｃｏｓｍａｃｏｌ ＥＴＩ）
ステアリン酸オクチル ３．００％
メトキシ桂皮酸オクチル ５．００％
（Ｐａｒｓｏｌ ＭＣＸ）
ブチルメトキシジベンゾイルメタン １．００％
（Ｐａｒｓｏｌ １７８９）
ジイソステアリン酸ポリグリセリル−３ ４．００％
ラウリン酸グリセリルＰＥＧ−２０ １．００％
カーボマー ０．４％
プロピレングリコール ２．００％
保存剤 ０．５０％
キサンタンガム ０．３０％
トリエタノールアミン ０．８５％
フェニルベンズイミダゾールスルホン酸 ２．５％
（Ｎｅｏ Ｈｅｌｉｏｐｅｎ Ｈｙｄｒｏ）
アセチルチロシン ２．００％
アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．５〜１％
Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（ペプチド粉末） １０〜５ｐｐｍ
水 全体で１００％
香料 適量
【０１１６】
実施例７：低感受性顔面クリーム
トリ（カプリル酸／カプリン酸／コハク酸）グリセリル １〜１０％
パルミチン酸アスコルビル ０．０１〜０．１％
ステアリン酸グリセリル １〜５％
ステアリン酸 １〜５％
酢酸トコフェロール ０．１〜１％
トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル １〜１５％
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
ピリドキシン ０．０１〜０．０５％
クエン酸 ０．１〜０．５％
グルコン酸亜鉛 ０．１〜１％
クエン酸三ナトリウム １〜２．５％
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
グリセロール １〜４％
パルミチン酸ビタミンＡ ０．０１〜１％
ｄ−パンテノール ０．１〜１％
ラムノース ０．１〜１％
Ｌ−フコース ０．０１〜１％
ラクトフェリン／ラクトパーオキシダーゼ ０．０１〜１％
スーパーオキシドジスムターゼ ０．０１〜１％
ポリアクリルアミド／Ｃ１３−１４イソパラフィン ０．２〜１％
／ラウレス−７
水 全体で１００％
【０１１７】
実施例８：鎮静用ボディ乳液
アクリル酸ポリマー ０．１〜１．５％
グリシルレチン酸 ０．１〜１％
トリエタノールアミン ０．１〜２％
ブチレングリコール ０．５〜４％
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
パルミチン酸アスコルビル ０．０１〜０．１％
酢酸トコフェロール ０．１〜１％
ピリドキシン ０．０１〜０．０５％
クエン酸 ０．１〜０．５％
グルコン酸亜鉛 ０．１〜１％
クエン酸三ナトリウム １〜２．５％
Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
パルミチン酸ビタミンＡ ０．０１〜１％
ｄ−パンテノール ０．１〜１％
Ｌ−フコース ０．１〜１％
ラクトフェリン／ラクトペルオキシダーゼ ０．０１〜１％
アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．５〜１％
Ｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ １５〜２０ｐｐｍ
スーパーオキシドジスムターゼ ０．０１〜１％
ソルビン酸カリウム ０．１〜０．６％
保存剤 適量
水 全体で１００％
【０１１８】
実施例９：脂ぎった皮膚を和らげるクリーム
プロピレングリコール １〜８％
モノラウリン酸ソルビタン ０．５〜５％
ジメチコンコポリオール ０．１〜５％
サリチル酸 ０．０１〜０．５％
ＥＤＴＡジナトリウム ０．０５〜０．５％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
グルコン酸亜鉛 ０．０１〜１％
パルミチン酸アスコルビル ０．０１〜０．１％
酢酸トコフェロール ０．１〜１％
ピリドキシン ０．０１〜０．０５％
クエン酸 ０．１〜０．５％
塩化ナトリウム ０．１〜１．５％
クエン酸三ナトリウム １〜２．５％
Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
パルミチン酸ビタミンＡ ０．０１〜１％
ｄ−パンテノール ０．１〜１％
ラムノース ０．１〜１％
Ｌ−フコース ０．０１〜１％
ラクトフェリン／ラクトパーオキシダーゼ ０．０１〜１％
Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（ペプチド粉末） １０〜５ｐｐｍ
スーパーオキシドジスムターゼ ０．０１〜１％
保存剤 適量
水 全体で１００％
【０１１９】
実施例１０：メーキャップ除去ローション
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） １〜２％
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．１〜０．５％
クエン酸三ナトリウム １〜２．５％
グリセロール ０．５〜３％
ヘキシレングリコール ４〜５％
ｄ−パンテノール ０．１〜１％
アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．５〜１％
保存剤（メチルパラベンおよびフェノキシ・エタノール） 適量
水 全体で１００％
【０１２０】
配列の記載
配列番号１ Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ2（１１Ａ）
配列番号２ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ2（３６ＡＡ）
配列番号３ Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−ＯＨ（１４ＡＡ）
配列番号４ ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−ＯＨ（１３ＡＡ）
配列番号５ Ｈ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（３７ＡＡ）
配列番号６ Ｈ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（３７ＡＡ）
配列番号７ Ｈ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ2（２７ＡＡ）
配列番号８ Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＯＨ（９ＡＡ）
配列番号９ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−ＯＨ（３１ＡＡ）
配列番号１０ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＯＨ（５ＡＡ）
配列番号１１ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−ＯＨ（５ＡＡ）
配列番号１２ Ａｃ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ2（１３ＡＡ）
配列番号１３ Ｈ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＯＨ（３９ＡＡ）
配列番号１４ Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（３１ＡＡ）
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧用組成物一般に関する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００２】
本発明の目的は、化粧品を媒介として、「代謝生理活性」と称される皮膚細胞の生存率および／または刺激に関する新規な思想を実施することである。より詳細には、本発明は皮膚の代謝生理活性物質に関する。
【０００３】
個人のライフスタイル、攻撃的環境および老化により、皮膚組織の生物学的機能および生体機能は時間の経過とともに弱くなる。従って皮膚細胞（ケラチノサイト、ランゲルハンス細胞、メラノサイト、線維芽細胞など）が環境との間で外来エネルギーおよび機能性情報をやり取りできるように、皮膚細胞を修復し正しい代謝および異化を維持することが不可欠と考えられる。
【０００４】
本発明の目的は、エネルギーの外部からの供給と細胞間メッセージの刺激とを組み合わせることにより皮膚の広範な能力を増大させ又は自然に修正することである。この供給と刺激の相乗作用は、皮膚（分子、細胞、組織機構）に元々存在する代謝メカニズムを活性化するとともに、場合によって皮膚のケアまたは治療で投与された化粧用活性剤と皮膚との間の相互作用をも最適化することにより、あらゆる攻撃または機能障害に対して皮膚を対応させる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
この目的のために、本発明は、第一に、ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）の安定型の水溶液、及び任意成分としてＡＴＰ前駆体例えばＧｐ４Ｇ（ジグアノシン四リン酸）またはＡｐ４Ａ（ジアデノシン四リン酸）と結合し、第二に、皮膚ポリペプチドまたは皮膚たんぱく質、あるいは前記ポリペプチドまたは前記たんぱく質について作動薬または拮抗薬である生体分子を模倣する最大６個のアミノ酸を含む少なくとも一種の生体模倣ペプチドを結合する生理活性系を含む化粧用組成物を提案している。
【０００６】
「化粧用組成物」という用語は、人体の表面部分、主として皮膚の外観を維持、修復または改善する機能を有する組成物を意味している。前記組成物の投与方法は、外部局所投与でも内部経口投与でもよい。
【０００７】
「ＡＴＰ前駆体」という用語は、ＡＴＰの新生（ｄｅ ｎｏｖｏ）生合成における中間体である任意の生化学化合物を意味しており、好適には、ＡＴＰ前駆体はＧｐ４Ｇ（ジグアノシン四リン酸）またはＡｐ４Ａ（ジアデノシン四リン酸）である。
【０００８】
「生体模倣ペプチド」という用語は、皮膚ポリペプチドまたは皮膚たんぱく質、または前記ポリペプチド若しくはたんぱく質について作動薬または拮抗薬である生体分子を模倣した最大６個のアミノ酸を含むペプチドを意味する。これらのペプチドまたはたんぱく質は、皮膚における生合成または皮膚情報の伝達の一部をなすか又はそのためにある役割を果たしている。
【０００９】
好適には、選択される生体模倣ペプチドは、皮膚の特性および免疫を調節するペプチドまたはたんぱく質を含む。
【００１０】
本発明に係る生理活性系に属するペプチドにより模倣される皮膚のペプチドまたはたんぱく質の例として、次のようなものが選択される。
【００１１】
１）カテコールアミン（ドーパミン、アドレナリン、ノルアドレナリン）、エンドルフィン（例えばベータ−エンドルフィン）およびエンケファリン（例えばメト−エンケファリン）を含む神経メディエーター。例として、次のようなものが選択される。
−ソマトスタチン、配列番号３を参照
−β−ＣＧＲＰペプチド、配列番号６参照
−β−エンドルフィン、配列番号９を参照
−ロイ−エンケファリン、配列番号１０を参照
−メト−エンケファリン、配列番号１１を参照
【００１２】
２）神経ペプチド、例えば、
−Ｐ物質、配列番号１を参照
−神経ペプチドＹ、配列番号２を参照
−ニューロテンシン、配列番号４を参照
−α−ＣＧＲＰペプチド（カルシトニン遺伝子関連ペプチド）、配列番号５を参照
−ニューロキニンＡおよびＢ、
−ＧＲＰペプチド（ガストリン放出ペプチド）、配列番号７を参照
−ブラジキニン、配列番号８を参照
【００１３】
神経ホルモン、例えば、
−α−ＭＳＨ（メラノサイト刺激ホルモン）ペプチド、配列番号１２を参照
−ＡＣＴＨ（副腎皮質刺激ホルモン）ペプチド、配列番号１３を参照
−「乳腺刺激ホルモン放出」ペプチド、配列番号１４を参照
【００１４】
一例として、本発明で用いる生体模倣ペプチドは、物質Ｐ拮抗薬またはＣＧＲＰペプチド拮抗薬であるペプチドを模倣する。
【００１５】
一例として、本発明で用いる生体模倣ペプチドは、ソマトスタチン作動薬であるペプチドを模倣する。
【００１６】
一例として、本発明で用いる生体模倣ペプチドは、神経ペプチドＹ拮抗薬または調節物質であるペプチドを模倣する。
【００１７】
一例として、本発明で用いる生体模倣ペプチドは、ブラジキニン受容体拮抗薬であるペプチドを模倣する。
【００１８】
一例として、本発明で用いる生体模倣ペプチドは、α−ＭＳＨ作動薬または拮抗薬であるペプチドを模倣する。
【００１９】
「模倣」または「模倣体」という用語は、考慮対象であるペプチドが、生体外、特に本発明に係る組成物中において、関連生体分子（例えば、ペプチドまたはたんぱく質）の生体内（例えば、皮膚中）での生物学的機能に類似または近接した生物学的効果を発揮する特性を意味している。
【００２０】
明細書本文および特許請求の範囲を通して、用語「ペプチド」は、置換されていない数個のアミノ酸の系列と、同一のアミノ酸の系列のうちいくつか、例えばＮ−末端アミノ酸および／またはＣ−末端アミノ酸が機能性又は非機能性の置換基で置換されたものとの両方を意味していると考えられるべきである。
【００２１】
これらのペプチドは、構成要素であるアミノ酸またはそれらの誘導体から、普通の化学合成（固体相または均一な液体相における）または酵素合成（クルマンら［Ｋｕｌｌｍａｎ ｅｔ ａｌ］、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー［Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．］、１９８０年、第２５５号、ｐ．８２３４）のいずれかにより得ることができる。
【００２２】
これらのペプチドは、遺伝子工学により修飾されたまたは修飾されていない菌株の発酵によって所望の配列またはそれらの配列の種々の断片を産生することでも得ることができる。
【００２３】
最後に、これらのペプチドは、動物または植物由来（好適には植物由来）のたんぱく質の抽出と、制御された加水分解による当該ペプチドの放出により得ることができる。多くの植物性たんぱく質が、それらの構造内に有利な配列を含むことが発見された。制御された加水分解によりこれらのペプチド断片を解離させることができる。
【００２４】
本発明の第一の変形形態によると、化粧用組成物において選択された生理活性系それ自体が、化粧用組成物の活性成分を構成する。
【００２５】
この場合、生体模倣ペプチドの選択により化粧用組成物を「機能化する」ことができる。例えば、
− α−ＭＳＨの模倣体を選択することにより色素化活性が得られ、逆に、α−ＭＳＨ拮抗薬の模倣体を選択することにより脱色素化活性が得られる。
− Ｐ物質拮抗薬であるペプチドの模倣体を選択することにより、鎮静効果が得られる。
− ＣＧＲＰペプチド拮抗薬であるペプチドの模倣体を選択することにより、神経原性の刺激を妨げる効果が得られる。
− ブラジキニン拮抗薬であるペプチドの模倣体を選択することにより、不耐性または感作を妨げる効果が得られる。
【００２６】
第二の変形形態によると、化粧用組成物において選択された生理活性系は、前記組成物に存在する一つ以上の活性成分の効能を高める。
【００２７】
本発明を特徴づける生理活性系は、表皮の正常な活性を回復しおよび／または維持することができる。この作用は特に、化粧用組成物が皮膚栄養素および／または皮膚細胞の生存率を保証する水相を含むならば確実となる。
【００２８】
本発明は下記実施形態も提供する。
− ＡＴＰの安定型はナトリウム塩、例えば、ＡＴＰのジナトリウム塩であり、
− 生体模倣ペプチドは、皮膚構成分子または皮膚上に存在する酵素の生合成において機能的に活性であり、
− 生体模倣ペプチドは、皮膚の情報伝達において機能的に活性であり、例えば、皮膚に存在するホルモンまたはサイトカインの生物学的に活性な画分であり、
− 生体模倣ペプチドは、次の要素
ヒスチジン−β−アラニル（スーパーオキシドジスムターゼ模倣体）、
ペプチドＲ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、
ペプチドＴｙｒ−Ａｒｇ、
ペプチドＲ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ、
Ｎ−アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｒ（エンドルフィン模倣体、Ｒはアミノ酸）、
ペプチドＬｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ、
ペプチドＡｌａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ（アルファ−ＭＳＨ模倣体）、ペプチドＧｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（エラフィン模倣体）からなる群から選択され、
− 生体模倣ペプチドは例えばジペプチドであり、このジペプチドは式Ａｒｇ−Ｒ若しくはＨｉｓ−Ｒ（Ｒはアミノ酸）に相当するか、又は式（Ｒ−Ｒ）ｎ（１＜ｎ＜３）、例えば式（Ａｒｇ−Ｌｙｓ）ｎ（１＜ｎ＜３）のオリゴマーの形式を有し、
− 生体模倣ペプチドは例えば式Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−ＰｒｏまたはＬｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌに相当するトリペプチドであり、
− 生体模倣ペプチドは例えば、式Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ、Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−ＲまたはＧｌｙ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｒ（Ｒはアミノ酸）に相当するテトラペプチドであり、
− 生体模倣ペプチドはペンタペプチド、例えばＶａｌ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｒ（Ｒはアミノ酸）であり、
− 生体模倣ペプチドはヘキサペプチド、例えば、Ａｌａ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｐｈｅ−Ｔｒｙ（Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はアミノ酸）であり、
− 化粧用組成物は生理活性系と共にアミノ酸を含み、前記アミノ酸は例えばクレアチン、デカルボキシカルノシン、およびグルタミン類例えばＮ−アセチルグルタミンからなる群から選択され、
− 本発明による化粧用組成物には、生理活性系と共に、例えば、スーパーオキシドジスムターゼ、エンドヌクレアーゼ、フォトリアーゼ、およびミルクからのサイトカイン類からなる群から選択されるたんぱく質が含まれ、
− 生理活性系は、前記組成物の１０重量％以下、好適には１重量％と１０−７重量％との間を占め、
− 本発明に係る化粧用組成物には、本発明の生理活性系により効能を高められた少なくとも一種の化粧用活性成分が含まれ、
− 化粧用組成物は通常油中水または水中油エマルジョンの状態にあるが、生理活性系は、例えばそのうちの水相に溶液として含まれており、
− 本発明に係る生理活性系において、ＡＴＰおよび任意成分であるＡＴＰ前駆体は最大１０重量％、好適には０．０１重量％と５重量％との間を占める。
【００２９】
本発明の組成物中に任意に存在する活性剤の有効量は、所望の結果を得るのに必要な量に相当し、本発明に係る組成物はまたそれらの組成物の用途にも左右される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３０】
第一の部類には、皮膚の美感および快適さを改善するために健康な皮膚に適用される化粧用組成物がある。健康な皮膚は、完璧な状態にあるわけではないが、病理のない状態と定義することができる。皮膚は、乾燥現象、肌荒れ現象、時間的加齢または日射性加齢に関わるしわ、皮脂が過剰に分泌されている領域、または色素化の過小な領域や過大な領域を有することがある。さらに、健康な皮膚は、日光により良く耐えるため一時的または恒久的な光防御を必要とすることがある。
【００３１】
もう一つの部類には、予防措置または医療の一環として、疾患または投薬により傷つきやすくなっている皮膚に適用する組成物がある。
【００３２】
本発明の化粧用組成物には、酸化防止剤、フリーラジカル捕捉剤、α−ヒドロキシ酸、ビタミン、日焼け止め剤またはフィルター、昆虫忌避剤および抗炎症剤から選択された少なくとも一種の化粧用活性剤も含まれている。
【００３３】
もちろん当業者は、任意成分である活性剤の種類および／または分量の選択に際しては、予定する添加物により本発明の生理活性系の有益な特性が変えられないか、又は実質的に変えられないように注意すべきである。好ましくは本発明の生理活性系と考慮している活性剤の間の相乗作用を探求すべきである。
【００３４】
本発明の組成物の作成には当業者、特に水中油（Ｏ／Ｗ）または油中水（Ｗ／Ｏ）型エマルジョンの製造技術における当業者に公知の技法が用いられる。
【００３５】
これらの組成物は、特に、単純なエマルジョンまたは複雑なエマルジョン、例えば、クリーム、ミルク、ゲルまたはクリームゲルなどの二重（Ｏ／ＷまたはＷ／Ｏ）または三重（Ｗ／Ｏ／ＷまたはＯ／Ｗ／Ｏ）エマルジョンの形式、粉末または固体の形式、場合によってはエアロゾルとしてパッケージされたムースまたはスプレーの形式で提供できる。
【００３６】
本発明の化粧用組成物がヒトの表皮の保護若しくはケアのため、または抗日光組成物として使われる場合、この組成物は、懸濁液の形、溶媒若しくは脂肪物質中に分散した形、非イオン性小胞性分散体の形、エマルジョン（好適にはクリームやミルクなどの水中油型）の形、軟膏、ゲル、クリームゲル、固体チューブ、粉末、棒、エアロゾル・ムースまたはスプレーの形で提供することができる。
【００３７】
本発明の化粧用組成物を毛髪の保護に用いる場合は、この組成物はシャンプー、ローション、ゲル、エマルジョン、または非イオン性小胞性分散体の形にあり、さらに、例えば、シャンプーの前後、毛染めや漂白の前後、髪の毛にパーマネント・ウエーブをかけたり、髪の毛を真っ直ぐにする前後やその間に適用するすすぎ洗い用組成物を構成することができる。この組成物はまたスタイリングやトリートメント用ローションやゲル、ヘアドライヤーで整髪したりまたはヘアセットするローションやゲル、または髪の毛にパーマネント・ウエーブをかけたり、髪の毛を真っ直ぐにしたり、毛染めや漂白する組成物の形でも提供することができる。
【００３８】
この組成物は、爪、まつげ、まゆ毛または肌のメーキャップ製品、例えば表皮トリートメント・クリーム、ファンデーション、口紅のチューブ、アイシャドウ、ほお紅、マスカラまたはアイライナーなどとして使われ、この組成物は、固体またはペースト状、無水または水性の形態、例えば水中油または油中水エマルジョン、非イオン性小胞性分散体または懸濁液などの形で提供することができる。
【００３９】
本発明の組成物の場合、ｐＨは４と７との間の生理的な値になる。この組成物を局部的に適用する場合、少なくとも一種のＡＴＰおよび任意成分として少なくとも一種の生体模倣ペプチドに共役した前駆体を含む組成物は、顔，首、頭皮、粘膜、爪、体幹、胸部、足、脚、または身体のその他の部分に適用することができる。
【００４０】
本発明の組成物には公知の化粧品補助剤、特に脂肪性物質、本発明の文脈において特定目的に使われているものを除く有機溶媒、乳化剤、イオン性または非イオン性増粘剤、鎮静剤、乳白剤、安定剤、皮膚軟化剤、シリコーン、発泡防止剤、保湿剤、ビタミン、香料、保存剤、界面活性剤、充填材、ポリマー、噴射剤、アルカリ性化剤または酸性化剤、または染料または化粧品において通常使われているその他の成分、特にエマルジョンの形で組成物を製造するための成分から選ばれた物質を含むこともできる。例えば本発明の組成物には、屋外環境および太陽の下で使われる製品の場合、遮蔽剤または反射剤が含まれている。
【００４１】
脂肪物質は油またはワックスまたはそれらの混合物からなり、またこれらの物質には脂肪酸、脂肪族アルコールおよび脂肪酸エステルも含まれる。油は、動物系、植物系、鉱物系または合成系油類から選ばれ、特に液状石油ジェリー、パラフィン油、揮発性または非揮発性シリコーン油、イソパラフィン、ポリオレフィン、およびフルオロ油とパーフルオロ油から選ばれる。同様に、ワックスは、それら自体は公知である、動物系、化石系、植物系、鉱物系または合成系ワックスから選ばれる。
【００４２】
極性油の中では、「Ｆｉｎｓｏｌｖ ＴＮ」として知られる油、トリメリト酸トリデシル、イソノナン酸イソノニル、ミリスチン酸イソプロピル、炭酸デカプリリル、またはＧｕｅｒｂｅｔアルコール安息香酸およびヒドロキシ安息香酸、例えばＣＰ Ｈａｌｌ Ｃｏｍｐａｎｙの「ホールブライト（Ｈａｌｌｂｒｉｔｅ）ＢＨＢ」と呼ばれる製品などが特記される。
【００４３】
水中油エマルジョン型キャリアーを有する本発明による抗日光製剤の場合、目安として、水相（特に親水性遮蔽剤を含む）はほぼ全製剤の５０〜９５重量％、好適には７０〜９０重量％を占め、油相（特に親油性遮蔽剤を含む）は全製剤の５〜５０重量％、好適には１０〜３０重量％を占め、さらに、（共）乳化剤は全製剤の０．５〜２０重量％、好適には２〜１０重量％を占める。
【００４４】
特に、本発明の組成物は、透明性および半透明性を有する無水の組成物の形で得ることができ、これは注目に値する。
【００４５】
本発明の別の主題は、本発明に係る化粧用組成物を利用したスキンケア製品、肌、唇および／または外皮用メーキャップ製品、抗日光製品、およびスキンケアおよび／またはトリートメント用皮膚科学的組成物である。
【００４６】
本発明の組成物は、肌、唇および／または外皮などのケラチン物質のための着色された皮膚科学的組成物またはケア組成物の形、抗日光組成物や身体衛生用組成物、特に脱臭剤製品または棒状のメーキャップ除去製品の形を有する。この組成物は、特に、肌、外皮または唇のためのケアベース（寒冷や日光や風から唇を保護するリップクリーム、または肌、爪または髪をケアするクリーム）として使われる。
【００４７】
本発明の組成物はまた、肌の着色メーキャップ製品、特に選択的機能としてケアまたはトリートメント特性を有するファンデーション、ほお紅、化粧用ルージュ、アイシャドー、コンシーラー製品、アイライナー、身体化粧用製品、選択的機能としてケアまたはトリートメント特性を有するリップスティックなどの唇化粧用製品、爪またはまつげなどの外皮化粧用製品特にマスカラケーキ、またはペンシル状のまゆ毛および髪の毛用化粧用製品の形を有する。特に、本発明の組成物は、生理活性系の他に、化粧用および／または皮膚科学的活性剤を含む化粧製品である。
【００４８】
本発明の化粧用組成物には、真珠様光沢剤、色素、または被覆または非被覆の金属酸化物からなるナノ色素（一次粒子の平均サイズが、一般に、５ｎｍと１００ｎｍとの間、好適には１０ｎｍと５０ｎｍとの間にある）、例えば、酸化チタン（アモルファスまたはルチル型および／またはアナターゼ型の結晶）、酸化鉄、酸化亜鉛、酸化ジルコニウムまたは酸化セリウムおよびそれらの混合物のナノ色素を含む。これらは酸化物はすべて公知の紫外線光保護剤である。また、普通のコーティング剤はアルミナおよび／またはステアリン酸アルミニウムである。この種の被覆または非被覆金属酸化物ナノ色素は欧州特許出願公開第０５１８７７２号および欧州特許出願公開第０５１８７７３号で詳細に説明されている。
【００４９】
もちろん、本発明の組成物は、化粧品としてまたは皮膚科学的に許容される必要がある。すなわち、この組成物には、生理学的に許容される無毒の媒体が含まれるべきであり、人体の皮膚、外皮または唇に適用可能でなければならない。本発明では、「化粧品として許容できる」という用語は好ましい外観、においおよび感触を有する組成物を意味している。
【００５０】
試験
試験１
普通のヒトのケラチノサイトの細胞代謝に対する、ＡＴＰと結合または非結合のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニン（Ｌ−ｃｉｔｒｕｌｌｙｌ−Ｌ−Ａｒｇｉｎｉｎｅ）ペプチドのジナトリウム塩のバイオシミュレートリー（ｂｉｏｓｉｍｕｌａｔｏｒｙ）活性を評価した。
【００５１】
１．原理
血清欠乏性（２％）の培地において線維芽細胞の培養におけるＡＴＰの量を測定し、下記培地と比較した。
− 様々な濃度のシトルリル−アルギニンを添加した培地
− 様々な濃度のＡＴＰを添加した培地
− 様々な濃度のシトルリル−アルギニンおよびＡＴＰを添加した培地
【００５２】
この試験の狙いは、普通のヒトのケラチノサイトによるＡＴＰ合成に対する、ＡＴＰジナトリウム塩と結合または非結合の本混合物の活性化効果を評価することである。
【００５３】
２．方法
細胞培養
この試験は、６ウエルプレートにおいて「１０５細胞／ウエル」の密度で播種された普通のヒトのケラチノサイトの生体外培養に関して行われた。
【００５４】
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン
この試験において適用できる濃度を決めるために、前もって細胞生存率テストを普通のヒトのケラチノサイトについて行った。
【００５５】
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンを水に溶解し、最終濃度を０．１％に固定した。
【００５６】
１０−４％〜１０−２％のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンの６つの希釈物を、細胞と２４時間および４８時間接触させた。対照実験として「水」条件の培養を実施した。
【００５７】
試験では、Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンは、４８時間の接触後、細胞生存率を８０％より高い最高レベルに維持できた２つの濃度、すなわち、０．０００１％および０．０１％においてテストすることにした。
【００５８】
ＵＶＢ照射
６ウエルプレートにおいて「１０５細胞／ウエル」の密度で播種したケラチノサイトを標準培地（Ｅｐｉｌｉｆｅ Ｓｉｇｍａ）で４８時間培養した。照射前に培養培地を取り除き、細胞をＰＢＳ緩衝液ですすぎ、その１ｍｌは照射用細胞と接触したまま残された。このケラチノサイトに、２０ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢ照射（３１２ｎｍ）を実施した。並行実験として同一の非照射条件の培養を実施した。
【００５９】
照射（および非照射並行実験）後、ＰＢＳを除去し、細胞を下記のような種々の条件下に置いた。
培地中に水を用いた対照実験
培地中に０．００１％Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンを用いた条件
培地中に０．０１％Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンを用いた条件
【００６０】
各条件は３回ずつ実施された。
【００６１】
照射後細胞に２４時間または４８時間接触させた後、前記条件の培養上澄み液を回収した。１００μｌの上澄み液に含まれる、ケラチノサイトにより分泌されたエンドセリン−１の量を、ＥＬＩＳＡ技法（英国、アビングドンのＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）により測定した。エンドセリン−１のレベルは合成したヒトのエンドセリン−１を用いて作られた標準曲線により計算した。結果は、たんぱく質濃度当たりのエンドセリン−１の量をｐｇを単位として表示した（ｐｇ［エンドセリン−１］／ｍｇ［たんぱく質］）。
【００６２】
３．結果
テストした最低濃度（０．０００１％）のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンを２４時間適用した実験では、「水」対照条件と比べて、ケラチノサイト（非照射条件）によるエンドセリン−１の基礎的分泌量が２０％増加した。より高い濃度（０．０１％）では、この活性化効果は７０％とはるかに顕著であった。
【００６３】
ＵＶＢ照射により、「水」対照条件下でのケラチノサイトによるエンドセリン−１の分泌量が５０％増加する結果となった。０．０００１％のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンと２４時間接触させたものは、照射した「水」対照実験と比べてエンドセリン−１の分泌量が６％増加した。濃度０．００１％では、Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンの活性化効果は実に２８％増大した。
【００６４】
テストした最低濃度（０．０００１％）のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンを４８時間適用した実験では、「水」対照条件と比べて、ケラチノサイト（非照射条件）によるエンドセリン−１の基礎的分泌量が２６％増加した。より高い濃度（０．０１％）では、この活性化効果は８２％とはるかに顕著であった。
【００６５】
ＵＶＢ照射により、「水」対照条件下でのケラチノサイトによるエンドセリン−１の分泌量が４０％増加する結果となった。０．０００１％のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンと４８時間接触させた実験では、照射した「水」対照実験に比べてエンドセリン−１の分泌量が４％増加した。濃度０．０１％では、Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンの活性化効果は実に６３％増大した。
【００６６】
４．結論
上記の実験条件下で、選ばれた希釈物および培養時間について、次の事実が認められた。
【００６７】
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンは、０．０１％の濃度で、普通のヒトのケラチノサイトにおけるエンドセリン−１の分泌量に対してかなりの活性化効果があった。
【００６８】
０．０１％のＡＴＰが存在すると、活性化効果は２０％向上した。これは明らかにＡＴＰ分子とＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニン・ペプチドとの間の相乗効果と考えられる。
【００６９】
ＡＴＰ単独でも同じ試験を実施したが、エンドセリン−１の合成にいかなる効果もみられなかった。
【００７０】
試験Ｎｏ．２
普通のヒト線維芽細胞の成長に対するＡＴＰとジペプチドの併用効果を試験した。
【００７１】
試験した製品は下記の通りである。
ジナトリウム塩の形を有するＡＴＰ
β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン）
シトルリル−アルギニン（ｅｘｓｙ ａｌｇｉｎｅ）
【００７２】
１．本試験の目的
この試験の目的は、ヒト線維芽細胞の永久増殖系、ＨａＣａＴ細胞の成長に対する、培養培地に添加されたＡＴＰとペプチド類との併用効果を評価することである。
【００７３】
この試験では、二種のペプチド、すなわち、β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（Ｄｒａｇｏｃｏ）およびＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニン（Ｅｘｓｙｍｏｌ）をＡＴＰと同時に使用した。
【００７４】
この試験は、２または１０％のうし胎仔血清（ＳＶＦ）の存在下で、ＨａＣａＴ細胞の標準培養培地ＤＭＥＭ（Ｓｉｇｍａ社）における培養について行われた。
【００７５】
２．技法
ＨａＣａＴ細胞を標準培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＳＶＦ）で９６ウエルプレートに低密度で播種し、その後２４時間成長させた。
【００７６】
二日目に、これらの細胞を種々の条件下に置いた。
【００７７】
予備的な細胞毒性試験の後で、ＡＴＰ、β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン）、Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン（ｅｘｓｙ−ａｌｇｉｎｅ）に関するテスト濃度が決定された。
【００７８】
次のような条件が用意された。
・ 対照条件：培養培地単独＋ＳＶＦ
・ ０．５％のβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンのみからなる条件
・ ０．５％のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンからなる条件
・ １μｇ／ｍｌのＡＴＰのみからなる条件
・ ＡＴＰ（１μｇ／ｍｌ）＋β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（０．５％）からなる条件
・ ＡＴＰ（１μｇ／ｍｌ）＋Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン（０．５％）からなる条件
・ ＡＴＰ（１μｇ／ｍｌ）＋β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（０．５％）＋Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン（０．５％）からなる条件
【００７９】
これら種々の条件は、２％ＳＶＦを含むＤＭＥＭおよび１０％ＳＶＦを含むＤＭＥＭの両方において準備された。
【００８０】
各条件は３回ずつ実施された。これらの培地は、実験の途中で新しいものと入れ替えられることはない。
【００８１】
細胞密度は、細胞の播種２４時間後、細胞が種々の試験条件に接触する前に測定された（＝Ｔ０）。ＨａＣａＴ細胞の成長は、ＷＳＴ−１変換方法（４５０ｎｍで読み取る）により培養の２日目、５日目および７日目に測定された。
【００８２】
３．結果
細胞成長は、実験の各時点における細胞生存率の測定により検証された。実験結果からＴ０における初期細胞密度に対する細胞生存率を、Ｔ０での細胞密度を１００％として計算した。実験の各時点に関して、細胞成長に対する種々の生成物の作用を同じ時点における未処理対照実験との比較により分析した。
【００８３】
＞ 培養の２日後、対照実験において、Ｔ０対照値に対する細胞生存率の成長の持続が失われたことが観察された。これは成長因子枯渇培地（２％ＳＶＦ）への切り替えにより説明される。
【００８４】
・ ０．５％濃度のβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンのみを添加すると、細胞成長を大いに刺激した（未処理対照実験に比べて＋２２％）。濃度０．１％では成長に対する効果は認められなかった。
【００８５】
・ ＡＴＰのみの添加では、細胞生存率を実質的に低下させた。
【００８６】
・ テストした２つの濃度において、β−アラニル−Ｌ−ヒスチジンへＡＴＰを添加すると、細胞生存率に対するＡＴＰの妨害効果を打ち消し、β−アラニル−Ｌ−ヒスチジンのみを用いて得られたレベルを超えて細胞生存率を高めた。
【００８７】
・ 濃度０．１％および０．５％のＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンのみを添加したものは、未処理対照実験に比べて細胞成長を高めなかった（＋５％）。
【００８８】
＞ 培養の５日後、培養が成長因子枯渇培地中で継続されているために、Ｔ０に対する細胞生存率がわずかに低下した。
【００８９】
・ 濃度０．５％のβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンの細胞成長に対する促進効果（＋１２％）が再度認められた。
【００９０】
・ ＡＴＰのみを添加すると細胞生存率を実質的に低下させたが、この効果は０．５％のβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンを添加すると消失した。
【００９１】
・ Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニンのみでは、いかなる濃度で使用しても、細胞成長を高めることはなかった。
【００９２】
４．結論
上の実験条件下およびテストした濃度において、ＡＴＰのみの添加では、２〜５日接触後の普通のヒト線維芽細胞の生存率を実質的に低下させた（−５〜−１０％）ようである。
【００９３】
ＡＴＰとβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンとの併用は、細胞生存率に対するＡＴＰの妨害効果を打ち消し、０．５％の濃度で細胞成長に対して促進効果を発揮するβ−アラニル−Ｌ−ヒスチジンのみを用いて得られたレベルを超えて細胞生存率を高めた。
【００９４】
ＡＴＰとＬ−シトルリル−Ｌ−アルギニンとの併用は、いかなる濃度を用いても、細胞成長に対して促進効果を発揮しなかった。
【００９５】
試験Ｎｏ．３
１．細胞培養
普通のヒトのメラノサイト（ＭＨＮｓ）の培養物は、包茎を患っている幼児および新生児の包皮から作られた。皮膚断片から得られたメラノサイトは、ＭＣＤＢ１５３培地（米国ミズーリ州セントルイス、Ｓｉｇｍａ社）中に置かれ、３０μｇ／ｍｌのうし脳下垂体抽出物（ＢＰＥ）（英国、ペイズリー、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）、２％のうし胎仔血清（ＳＶＦ）（フランス、ブリュマット、Ｄｏｍｉｎｉｑｕｅ Ｄｕｔｓｃｈｅｒ社）、１６ｎＭのホルボール−１２−ミリステート−１３−アセテート（Ｓｉｇｍａ社）、５μｇ／ｍｌのインスリンおよび１．１μＭのヒドロコルチゾン（Ｓｉｇｍａ社）が補充された。培養物は、５％のＣＯ２を含む雰囲気中、３７℃で恒温器に置かれた。２〜３週後にメラノサイトの純粋培養物が得られた。
【００９６】
２．接触時間、細胞の照射およびスライドの作成
テストしたすべての組成物は、許容された最高濃度においてＤＭＳＯに可溶であった。ケラチノサイトのサブトキシック濃度を決めるために予備的試験を行った。ＤＭＳＯの最終濃度は常に２％未満であった。
【００９７】
メラノサイトを製品と３７℃で３０分間接触させ、次いでＵＶＡ放射線をこの細胞に照射した。ＵＶＡ放射線は、Ｂｉｏ−Ｓｕｎ ＵＶ照射装置（Ｖｉｌｂｅｒｔ Ｌｏｕｒｍａｔ社、マルヌ・ラ・バレ）により作られた。この装置は、３１２ｎｍおよび／または３６５ｎｍの波長を発する単色ランプを備えている。このランプの放出エネルギーは、ＲＭＮ−３６５／３１２放射線計により計算された。放出されたエネルギーは、ＵＶＡ領域について０．８Ｊ／ｃｍ２であった。露光後すぐに「コメット」検定が行われた。これらの実験には２つの型の対照実験が含まれている。
負の対照実験：処置されないがＵＶＡ放射線を照射されるメラノサイト、テストした組成物を用いて３０分間処置されるが照射されないメラノサイト。
正の対照実験：処置されないが照射されるメラノサイト。
【００９８】
トリプシン／ＥＤＴＡ混合物（０．０５％／０．０２％）を用いて２〜３分間処理後、培養物を遠心分離により回収し、Ｃａ＋＋およびＭｇ＋＋を含まないＰＢＳ緩衝液（Ｓｉｇｍａ社）に入れた。第２の遠心分離の後、細胞（４．５〜５．０×１０４細胞）を０．５％低融点（ＬＭＰ）アガロース（Ｓｉｇｍａ社）に懸濁させた。この混合物を、アガロース（１．６％）の予備層で被覆し、室温で一晩乾燥し、次いで、第２のアガロース（０．８％）層で予備被覆したばかりの顕微鏡スライドの上に直接付着させた。
【００９９】
３．コメット検定（乾燥スライド技法）および酵素処理
コメット検定の試験手順は、「乾燥スライド」技法［２］を組み込んだＤｅ Ｍｅｏ等［１］の方法によった。照射後、スライドを溶解槽（２．５ＭのＮａＣｌ、１００ｍＭのＮａ２ＥＤＴＡ、１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ１０、１％のサルコシンＮａ、１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００および１０％のＤＭＳＯ）に入れた。細胞溶解は、４℃で６０分間行い、続いて強アルカリ性溶液（１ｍＭ Ｎａ２ＥＤＴＡおよび３００ｍＭのＮａＯＨ、ｐＨ＞１３．０）中で室温で２０分間ＤＮＡを変性した。２０分間の電気泳動（２５Ｖ、３００ｍＡ）の後、これらのスライドをＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（０．４Ｍ、ｐＨ７．４）で中和し、無水エタノールまたはメタノール中で脱水した。
【０１００】
４．顕微鏡観察および画像解析
これらのスライドを臭化エチジウム溶液（２μｇ／ｍｌを７５μｌ）で染色し、２０ＢＧ−Ｗダイクロイックフィルター（励起：５１５−５６０ｎｍ；放射：５９０ｎｍ）およびＡｐｏ Ｄ−Ｐｌａｎ ２０ｘ対物レンズを備えたＢＨ２−ＲＦＬ蛍光顕微鏡（日本、オリンパス社）を用いて観察した。画像解析は、Ｍａｔｒｏｘ ＩＰ−８データ収集用ボードに接続した高感度単色ＣＣＤカメラ（Ｃｏｈｕ ４９１２−５０００）を用いて行った。組立体全体は、Ｆｅｎｅｓｔｒａ Ｋｏｍｅｔ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（英国、リバプール、Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｉｍａｇｉｎｇ社、バージョン３．１）により制御した。
【０１０１】
一試料あたり全部で１００細胞（５０細胞／スライド）が解析された。用いたパラメータは、「コメット」の尾部に存在するＤＮＡの百分率として定義される「尾部ＤＮＡ」である。実験の各系列ごとに負の対照実験（非照射細胞）および正の対照実験（テストされた組成物で処理しない照射細胞）を行った。
【０１０２】
５．統計解析
χ２関数に基づく非線形回帰が、各試料のＴＭ（尾部モーメント）分布度数から直接計算される。具体的には、バウアー等［３］が、これらの分布はχ２関数に従うことを最近証明した。この方法は、χ２法則による分布の解析に基づいている。
【０１０３】
関数の自由度を表す因子ｎ（χ２ＴＭとも呼ばれる）は、損傷度（平均ＴＭ）と直接相関する。因子ｎは、２（無傷の細胞）から１５（極端に損傷した細胞、ガウス分布度数を有する）まで変わる。
【０１０４】
自由度（ｎ）は、ＤＮＡ損傷の指標として使うことができる。分布度数は、Ｅｘｃｅｌ９７作表ソフト（マイクロソフト社）を用いて計算され、非線形回帰はＴａｂｌｅ Ｃｕｒｖｅ ２Ｄソフトウエア（Ｊａｎｄｅｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社、バージョン５．０）を用いて計算された。
【０１０５】
６．引用文献
【表１】
［１］ド・メオ Ｍ、ラゲット Ｍ、カステニャーロ Ｍ、デュメニル Ｇ、
「過マンガン酸カリウム酸性ナトリウムの遺伝毒性活性」
ムテーション・リサーチ（Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．）、１９９１年、２６０号、
ｐ．２９５−３０６
［２］クロード Ｍ、エリックソン Ｓ、ナイグレン Ｊ、アンストローム Ｇ、
「コメット検定：メカニズムおよび技術的考察」
ムテーション・リサーチ（Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．）、１９９６年、３６３号、
ｐ．８９−９６
［３］バウアー Ｅ、レックナーゲル ＲＤ、フィードラー Ｕ、ボルウエーバー Ｌ、
ボック Ｃ、グルーリッヒ Ｋ．Ｏ．
「単一細胞電気泳動における尾部モーメントの分布（コメット検定）は、ガウス分 布ではなくχ２に従う」
ムテーション・リサーチ（Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｒｅｓ．）、１９９８年、３９８号、
ｐ．１０１−１１０
【０１０６】
７．テストされた組成物による保護度
下表のような結果が得られた。
組成物 ＯＴＭ−χ２ 保護度（％）
ＮＩ ２．０８±０．０２ −
ＮＩ＋ＡＴＰ（４ｍＭ） ２．０８±０．０２ −
ＮＩ＋Ｃｉｔｒｕ（４ｍＭ） ２．０６±０．０２ −
ＮＩ＋ＡＴＰ（４ｍＭ）＋Ｃｉｔｒｕ（４ｍＭ） ２．０７±０．０２ −
ＵＶＡ ９．１６±０．３２ ０．００％
ＵＶＡ＋ＡＴＰ（４ｍＭ） ６．３１±０．３８ １４．６％（ＮＳ）
ＵＶＡ＋Ｃｉｔｒｕ（４ｍＭ） ２．２２±０．２０ ６７．７％
ＵＶＡ＋ＡＴＰ（４ｍＭ）＋Ｃｉｔｒｕ（４ｍＭ） ２．１１±０．０４ ９９．６％
ＯＴＭ−χ２＝尾部モーメント、χ２：ＯＴＭの正規化された度数分布の非線形回帰により計算された関数の自由度。すべての場合におけるモデルの確率は、Ｐ＜０．００１である。
【０１０７】
ＮＩ：非照射メラノサイト。
ＮＩ＋ＡＴＰ：ＡＴＰ（４ｍＭ）で３０分間予備処理された非照射メラノサイト。
ＮＩ＋Ｃｉｔｒｕ：シトルリル−アルギニン（４ｍＭ）で３０分間予備処理された非照射メラノサイト。
ＵＶＡ：ＵＶＡ放射線（０．８Ｊ／ｃｍ２）で照射されたメラノサイト。
ＵＶＡ＋ＡＴＰ：ＵＶＡ放射線（０．８Ｊ／ｃｍ２）で照射され、ＡＴＰ（４ｍＭ）で３０分間予備処理されたメラノサイト。
ＵＶＡ＋Ｃｉｔｒｕ：ＵＶＡ放射線（０．８Ｊ／ｃｍ２）で照射され、シトルリル−アルギニン（４ｍＭ）で３０分間予備処理されたメラノサイト。
ＮＳ：ＵＶＡ＋ＣｉｔｒｕとＵＶＡ＋ＡＴＰとの間で有意の差はなかった。
【０１０８】
シトルリル−アルギニンによる保護度は、ＡＴＰによる保護度よりもはるかに大きかった。ＡＴＰ分子とペプチドとの間の相乗作用は非常に明確であった。
【０１０９】
以下の実施例は本発明を説明しており、本発明の範囲を制限するものではない。
【実施例】
【０１１０】
実施例１：しわ防止クリーム
ステアリン酸スクロース ０．５〜６％
ジステアリン酸スクロース ０．５〜６％
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル ３〜１５％
トリ（カプリル酸／カプリン酸／コハク酸）グリセリル ３〜１５％
セラミデス３ ０．０５〜１％
パルミチン酸アスコルビル ０．０１〜０．１％
酢酸トコフェリル ０．０５〜１％
尿素 ０．５〜２％
塩化カルシウム ０．０５〜０．５％
塩化マグネシウム ０．０５〜０．５％
β−アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．５〜１％
Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（ペプチド粉末） １０〜５ｐｐｍ
セリン ０．２〜２％
グリセロール ０．５〜３％
クエン酸 ０．１〜０．５％
クエン酸３ナトリウム ０．５〜１．５％
パルミチン酸ビタミンＡ ０．１〜０．５％
リン脂質 ０．１〜０．４％
スーパーオキシドジスムターゼ ０．５〜２％
ヒアルロン酸ナトリウム ０．５〜３％
ソルビン酸カリウム ０．２〜０．５％
スクレロチウムガム ０．１〜０．５％
キサンタンガム ０．１〜０．５％
水 全体で１００％
香料 適量
保存剤 適量
【０１１１】
実施例２：肌に潤いを与える乳剤
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
リン脂質 ３％
セラミド３ ０．１％
パルミチン酸ビタミンＡ ０．１５％
ステアレス−２０ ０．２％
ステアレス−２ １〜３％
メチルパラベン（パラオキシ安息香酸メチル） ０．２５％
塩化カルシウム ０．０１％
塩化マグネシウム ０．０１％
水 全体で１００％
セトステアリルアルコール ２〜４％
ミリスチン酸ミリスチル ２〜４％
ミリスチン酸イソプロピル ４％
グリセロール １％
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
ジメチコン ０．５％
ラノリン族アルコール ０．５％
プロピルパラベン ０．２５％
【０１１２】
実施例３：肌に潤いを与えるクリーム
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
オレイン酸ソルビタン ３．５％
ポリソルベート８０ ２〜４％
コムギの麦芽油 ３％
スイート・アーモンド油 ５％
ミリスチン酸イソプロピル １２％
リン脂質 ０．５％
セラミド３ ０．１％
ポリアクリルアミド＆Ｃ１４−１３イソパラフィン＆ ２〜３．５％
ラウレス−７
パルミチン酸ビタミンＡ ０．１％
トコフェロール ０．０５％
ナトリウムＰＣＡ ０．５％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
ヒアルロン酸ナトリウム ０．１％
水 全体で１００％
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
保存剤 適量
香料 適量
【０１１３】
実施例４：日焼け保護クリーム
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
メトキシ桂皮酸オクチル ６．００％
（Ｎｅｏ Ｈｅｌｉｏｐａｎ ＡＶ）
ブチルメトキシジベンゾイルメタン ３．００％
（Ｐａｒｓｏｌ １７８９）
オクチルトリアゾン ２．００％
（Ｕｖｉｎｕｌ Ｔ１５０）
酒石酸ジ（Ｃ１２−１３）アルキル ８．００％
（Ｃｏｓｍａｃｏｌ ＥＴＩ）
セチルアルコール ０．５０％
ジメチコン ０．５０％
ココ・カプリレート／カプレート ８．００％
ＰＶＰ／エイコセン・コポリマー ２．００％
セチルリン酸カリウム ２．００％
メチルおよびプロピル・パラベン ０．２５％
ＥＤＴＡ二ナトリウム ０．１０％
ＢＨＴ ０．０５％
カルボマー １０．００％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．８〜１％
プロピレングリコール ５．００％
水酸化カリウム ４．０５％
フェニルベンズイミダゾールスルホン酸 ２．００％
（Ｅｕｓｏｌｅｘ ２３２）
酢酸トコフェリル ２．５０％
パンテオール １．００％
ＭＳＨ（Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ） ０．０００１〜０．００００１％
フォトリアーゼ ０．１％
水 全体で１００％
香料 適量
【０１１４】
実施例５：光保護および回復サンクリーム
ＡＴＰ二ナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
エトキシジグリコールおよびキュウリ ８．００％
酒石酸ジ（Ｃ１２−１３）アルキル ５．００％
（Ｃｏｓｍａｃｏｌ ＥＴＩ）
メトキシ桂皮酸オクチル ５．００％
（Ｐａｒｓｏｌ ＭＣＸ）
ブチルメトキシジベンゾイルメタン ２．００％
（Ｐａｒｓｏｌ １７８９）
ジメチコン・トリメチルシロキシケイ酸 ３．００％
酢酸トコフェリル ０．２０％
ジステアリン酸スクロース ５．００％
ヘキシレングリコール ５．００％
ブチル、メチル、プロピル・パラベン＋ ０．４０％
フェノキシエタノール
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
水 全体で１００％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） １〜１．５％
ＭＳＨ（Ａｌａ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ） ０．０００１〜０．００００１％
エンドヌクレアーゼ ０．２％
アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．５〜１％
香料 適量
【０１１５】
実施例６：鎮静用光回復乳液
鉱油 ２．００％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
酒石酸ジ（Ｃ１２−１３）アルキル ４．００％
（Ｃｏｓｍａｃｏｌ ＥＴＩ）
ステアリン酸オクチル ３．００％
メトキシ桂皮酸オクチル ５．００％
（Ｐａｒｓｏｌ ＭＣＸ）
ブチルメトキシジベンゾイルメタン １．００％
（Ｐａｒｓｏｌ １７８９）
ジイソステアリン酸ポリグリセリル−３ ４．００％
ラウリン酸グリセリルＰＥＧ−２０ １．００％
カーボマー ０．４％
プロピレングリコール ２．００％
保存剤 ０．５０％
キサンタンガム ０．３０％
トリエタノールアミン ０．８５％
フェニルベンズイミダゾールスルホン酸 ２．５％
（Ｎｅｏ Ｈｅｌｉｏｐｅｎ Ｈｙｄｒｏ）
アセチルチロシン ２．００％
アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．５〜１％
Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（ペプチド粉末） １０〜５ｐｐｍ
水 全体で１００％
香料 適量
【０１１６】
実施例７：低感受性顔面クリーム
トリ（カプリル酸／カプリン酸／コハク酸）グリセリル １〜１０％
パルミチン酸アスコルビル ０．０１〜０．１％
ステアリン酸グリセリル １〜５％
ステアリン酸 １〜５％
酢酸トコフェロール ０．１〜１％
トリ（カプリル酸／カプリン酸）グリセリル １〜１５％
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
ピリドキシン ０．０１〜０．０５％
クエン酸 ０．１〜０．５％
グルコン酸亜鉛 ０．１〜１％
クエン酸三ナトリウム １〜２．５％
Ｌ−シトルリル−Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
グリセロール １〜４％
パルミチン酸ビタミンＡ ０．０１〜１％
ｄ−パンテノール ０．１〜１％
ラムノース ０．１〜１％
Ｌ−フコース ０．０１〜１％
ラクトフェリン／ラクトパーオキシダーゼ ０．０１〜１％
スーパーオキシドジスムターゼ ０．０１〜１％
ポリアクリルアミド／Ｃ１３−１４イソパラフィン ０．２〜１％
／ラウレス−７
水 全体で１００％
【０１１７】
実施例８：鎮静用ボディ乳液
アクリル酸ポリマー ０．１〜１．５％
グリシルレチン酸 ０．１〜１％
トリエタノールアミン ０．１〜２％
ブチレングリコール ０．５〜４％
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
パルミチン酸アスコルビル ０．０１〜０．１％
酢酸トコフェロール ０．１〜１％
ピリドキシン ０．０１〜０．０５％
クエン酸 ０．１〜０．５％
グルコン酸亜鉛 ０．１〜１％
クエン酸三ナトリウム １〜２．５％
Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
パルミチン酸ビタミンＡ ０．０１〜１％
ｄ−パンテノール ０．１〜１％
Ｌ−フコース ０．１〜１％
ラクトフェリン／ラクトペルオキシダーゼ ０．０１〜１％
アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．５〜１％
Ｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ １５〜２０ｐｐｍ
スーパーオキシドジスムターゼ ０．０１〜１％
ソルビン酸カリウム ０．１〜０．６％
保存剤 適量
水 全体で１００％
【０１１８】
実施例９：脂ぎった皮膚を和らげるクリーム
プロピレングリコール １〜８％
モノラウリン酸ソルビタン ０．５〜５％
ジメチコンコポリオール ０．１〜５％
サリチル酸 ０．０１〜０．５％
ＥＤＴＡジナトリウム ０．０５〜０．５％
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） ０．５〜１％
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．０１〜０．０５％
グルコン酸亜鉛 ０．０１〜１％
パルミチン酸アスコルビル ０．０１〜０．１％
酢酸トコフェロール ０．１〜１％
ピリドキシン ０．０１〜０．０５％
クエン酸 ０．１〜０．５％
塩化ナトリウム ０．１〜１．５％
クエン酸三ナトリウム １〜２．５％
Ｌ−アルギニン ０．１〜２％
パルミチン酸ビタミンＡ ０．０１〜１％
ｄ−パンテノール ０．１〜１％
ラムノース ０．１〜１％
Ｌ−フコース ０．０１〜１％
ラクトフェリン／ラクトパーオキシダーゼ ０．０１〜１％
Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ（ペプチド粉末） １０〜５ｐｐｍ
スーパーオキシドジスムターゼ ０．０１〜１％
保存剤 適量
水 全体で１００％
【０１１９】
実施例１０：メーキャップ除去ローション
ジグアノシン四リン酸（Ｇｐ４Ｇ） １〜２％
ＡＴＰジナトリウム塩 ０．１〜０．５％
クエン酸三ナトリウム １〜２．５％
グリセロール ０．５〜３％
ヘキシレングリコール ４〜５％
ｄ−パンテノール ０．１〜１％
アラニル−Ｌ−ヒスチジン（カルノシン） ０．５〜１％
保存剤（メチルパラベンおよびフェノキシ・エタノール） 適量
水 全体で１００％
【０１２０】
配列の記載
配列番号１ Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ2（１１Ａ）
配列番号２ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ2（３６ＡＡ）
配列番号３ Ｈ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｃｙｓ−ＯＨ（１４ＡＡ）
配列番号４ ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−ＯＨ（１３ＡＡ）
配列番号５ Ｈ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（３７ＡＡ）
配列番号６ Ｈ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（３７ＡＡ）
配列番号７ Ｈ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ａｌａ−ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｍｅｔ−ＮＨ2（２７ＡＡ）
配列番号８ Ｈ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＯＨ（９ＡＡ）
配列番号９ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ−ＯＨ（３１ＡＡ）
配列番号１０ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＯＨ（５ＡＡ）
配列番号１１ Ｈ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ−ＯＨ（５ＡＡ）
配列番号１２ Ａｃ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−ＮＨ2（１３ＡＡ）
配列番号１３ Ｈ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−ＯＨ（３９ＡＡ）
配列番号１４ Ｈ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＮＨ2（３１ＡＡ）
【特許請求の範囲】
【請求項１】
第一に、ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）の安定型の水溶液、及び任意成分としてＡＴＰ前駆体例えばＧｐ４Ｇ（ジグアノシン四リン酸）またはＡｐ４Ａ（ジアデノシン四リン酸）、また第二に、皮膚ポリペプチドまたは皮膚たんぱく質、あるいは前記ポリペプチドまたは前記たんぱく質について作動薬または拮抗薬である生体分子を模倣する最大６個のアミノ酸を含む少なくとも一種の生体模倣ペプチド、を組合わせてなる生理活性系を含む化粧用組成物。
【請求項２】
前記安定型がＡＴＰのナトリウム塩、例えばジナトリウム塩であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記生体模倣ペプチドが、皮膚を構成する分子または皮膚に存在する酵素の生合成において機能的に活性であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記生体模倣ペプチドが、皮膚における情報の伝達において機能的に活性であり、例えば、皮膚に存在するホルモンまたはサイトカインの生物活性画分であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記生体模倣ペプチドが、ヒスチジン−β−アラニル、ペプチドＲ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、ペプチドＴｙｒ−Ａｒｇ、ペプチドＲ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ、Ｎ−アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｒ、ペプチドＬｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ、ペプチドＡｌａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ（またはアルファ−ＭＳＨ）およびペプチドＧｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（またはｅｌａｆｉｎ）からなる群（Ｒは任意のアミノ酸）から選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項６】
前記生体模倣ペプチドがジペプチドであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記ジペプチドが式Ａｒｇ−ＲまたはＨｉｓ−Ｒ（Ｒは任意のアミノ酸）に相当することを特徴とする請求項６記載の組成物。
【請求項８】
前記ジペプチドが式（Ｒ−Ｒ）ｎのオリゴマーという形であり、前記ｎが１＜ｎ＜３であることを特徴とする請求項６記載の組成物。
【請求項９】
前記ジペプチドが式（Ａｒｇ−Ｌｙｓ）ｎに相当し、前記ｎが１＜ｎ＜３であることを特徴とする請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
前記生体模倣ペプチドがトリペプチドであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
前記トリペプチドがＧｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｙｓまたはＧｌｙ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏであることを特徴とする請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
前記生体模倣ペプチドがテトラペプチドであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
前記テトラペプチドがＬｅｕ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−ＶａｌまたはＬｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−ＲまたはＧｌｙ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｒ（Ｒは任意のアミノ酸）であることを特徴とする請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
前記生体模倣ペプチドがペンタペプチド、例えば、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｒ（Ｒは任意のアミノ酸）であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１５】
前記生体模倣ペプチドがヘキサペプチドであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１６】
前記生体模倣ペプチドがＡｌａ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｐｈｅ−Ｔｒｙ（Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ任意のアミノ酸）であることを特徴とする請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物に、例えば、クレアチン、デカルボキシカルノシン、およびグルタミン類、例えばＮ−アセチルグルタミンからなる群から選択されるアミノ酸が含まれていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物に、例えば、スーパーオキシドジスムターゼ、エンドヌクレアーゼ、フォトリアーゼおよびミルクからのサイトカイン類からなる群から選択されるたんぱく質が含まれていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１９】
前記生理活性系が前記組成物の多くても１０重量％、好適には１重量％と１０−７重量％の間を占めていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物に、前記生理活性系により作用を高められた少なくとも１つの化粧用活性成分が含まれていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が油中水型または水中油型エマルジョンの状態にあり、前記生理活性系が水相に含まれていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２２】
前記生理活性系、すなわち、前記ＡＴＰおよび任意成分であるＡＴＰ前駆体が多くても１０重量％、好適には０．０１重量％と５重量％の間を占めていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１】
第一に、ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）の安定型の水溶液、及び任意成分としてＡＴＰ前駆体例えばＧｐ４Ｇ（ジグアノシン四リン酸）またはＡｐ４Ａ（ジアデノシン四リン酸）、また第二に、皮膚ポリペプチドまたは皮膚たんぱく質、あるいは前記ポリペプチドまたは前記たんぱく質について作動薬または拮抗薬である生体分子を模倣する最大６個のアミノ酸を含む少なくとも一種の生体模倣ペプチド、を組合わせてなる生理活性系を含む化粧用組成物。
【請求項２】
前記安定型がＡＴＰのナトリウム塩、例えばジナトリウム塩であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記生体模倣ペプチドが、皮膚を構成する分子または皮膚に存在する酵素の生合成において機能的に活性であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記生体模倣ペプチドが、皮膚における情報の伝達において機能的に活性であり、例えば、皮膚に存在するホルモンまたはサイトカインの生物活性画分であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項５】
前記生体模倣ペプチドが、ヒスチジン−β−アラニル、ペプチドＲ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、ペプチドＴｙｒ−Ａｒｇ、ペプチドＲ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ、Ｎ−アセチル−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｒ、ペプチドＬｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｓｅｒ、ペプチドＡｌａ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ（またはアルファ−ＭＳＨ）およびペプチドＧｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ（またはｅｌａｆｉｎ）からなる群（Ｒは任意のアミノ酸）から選択されることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項６】
前記生体模倣ペプチドがジペプチドであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項７】
前記ジペプチドが式Ａｒｇ−ＲまたはＨｉｓ−Ｒ（Ｒは任意のアミノ酸）に相当することを特徴とする請求項６記載の組成物。
【請求項８】
前記ジペプチドが式（Ｒ−Ｒ）ｎのオリゴマーという形であり、前記ｎが１＜ｎ＜３であることを特徴とする請求項６記載の組成物。
【請求項９】
前記ジペプチドが式（Ａｒｇ−Ｌｙｓ）ｎに相当し、前記ｎが１＜ｎ＜３であることを特徴とする請求項８記載の組成物。
【請求項１０】
前記生体模倣ペプチドがトリペプチドであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
前記トリペプチドがＧｌｙ−Ｈｉｓ−ＬｙｓまたはＧｌｙ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏであることを特徴とする請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
前記生体模倣ペプチドがテトラペプチドであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
前記テトラペプチドがＬｅｕ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−ＶａｌまたはＬｙｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−ＲまたはＧｌｙ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｒ（Ｒは任意のアミノ酸）であることを特徴とする請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
前記生体模倣ペプチドがペンタペプチド、例えば、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｒ（Ｒは任意のアミノ酸）であることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１５】
前記生体模倣ペプチドがヘキサペプチドであることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１６】
前記生体模倣ペプチドがＡｌａ−Ｒ１−Ｒ２−Ｒ３−Ｐｈｅ−Ｔｒｙ（Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はそれぞれ任意のアミノ酸）であることを特徴とする請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物に、例えば、クレアチン、デカルボキシカルノシン、およびグルタミン類、例えばＮ−アセチルグルタミンからなる群から選択されるアミノ酸が含まれていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物に、例えば、スーパーオキシドジスムターゼ、エンドヌクレアーゼ、フォトリアーゼおよびミルクからのサイトカイン類からなる群から選択されるたんぱく質が含まれていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項１９】
前記生理活性系が前記組成物の多くても１０重量％、好適には１重量％と１０−７重量％の間を占めていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物に、前記生理活性系により作用を高められた少なくとも１つの化粧用活性成分が含まれていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が油中水型または水中油型エマルジョンの状態にあり、前記生理活性系が水相に含まれていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【請求項２２】
前記生理活性系、すなわち、前記ＡＴＰおよび任意成分であるＡＴＰ前駆体が多くても１０重量％、好適には０．０１重量％と５重量％の間を占めていることを特徴とする請求項１記載の組成物。
【公表番号】特表２００６−５１３２３１（Ｐ２００６−５１３２３１Ａ）
【公表日】平成１８年４月２０日（２００６．４．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５６４３０２（Ｐ２００４−５６４３０２）
【出願日】平成１５年１２月２３日（２００３．１２．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００３／００３８８３
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６０３９３
【国際公開日】平成１６年７月２２日（２００４．７．２２）
【出願人】（５０５２４７６２７）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年４月２０日（２００６．４．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１２月２３日（２００３．１２．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＦＲ２００３／００３８８３
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６０３９３
【国際公開日】平成１６年７月２２日（２００４．７．２２）
【出願人】（５０５２４７６２７）
【Ｆターム（参考）】
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