石灰化減少方法
本発明は、カルシウム擬似薬を用いて対象の血管石灰化を治療する方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に医療分野に関し、より具体的には石灰化を抑制、治療または予防する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
よく知られおよび慢性腎疾患（ＣＫＤ）の一般の合併症である血管石灰化は、心血管疾患の罹患率および死亡率のリスクを増大させる（Ｇｉａｃｈｅｌｌｉ， Ｃ． Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １５： ２９５９−６４， ２００４； Ｒａｇｇｉ， Ｐ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ３９： ６９５−７０１， ２００２）。ＣＫＤにおける血管石灰化の原因は未だ明らかにされていないが、関連する危険因子は、年齢、性別、高血圧、透析期間、糖尿病およびグルコース不耐症、肥満ならびにタバコの喫煙を含む（Ｚｏｃｃａｌｉ Ｃ． Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １５： ４５４−７， ２０００）。しかしながら、これらの通常の危険因子は、その患者集団における心血管系に起因する高い死亡率を、十分に説明していない。他の要因のうちで、最近の観察研究は、血清中のカルシウムリン生成物（ＣａｘＰ）の増加をもたらす、カルシウムおよびリン代謝における特定の病変が、末期の腎疾患患者の動脈石灰化、およびおそらくは心血管疾患の発症に寄与することを、示唆している（Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｗ． ｅｔ ａｌ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４２： １４７８−８３， ２０００； Ｇｕｅｒｉｎ， Ａ． ｅｔ ａｌ． Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １５：１０１４−２１， ２０００； Ｖａｔｔｉｋｕｔｉ， Ｒ． ＆ Ｔｏｗｌｅｒ， Ｄ． Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ， ２８６： Ｅ６８６−９６， ２００４）。
【０００３】
進行ＣＫＤの他の顕著な特徴は、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）レベルの上昇およびミネラル代謝異常を特徴とする、二次性副甲状腺機能亢進症（ＨＰＴ）である。二次性ＨＰＴ患者において観察される、カルシウム、リン、およびＣａｘＰにおける上昇は、血管石灰化のリスク増加と関連付けられている（Ｃｈｅｒｔｏｗ， Ｇ． ｅｔ ａｌ Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ６２： ２４５−５２， ２００２； Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｗ． ｅｔ ａｌ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４２： １４７８−８３， ２０００； Ｒａｇｇｉ， Ｐ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ３９： ６９５−７０１， ２００２）。カルシウム性リン酸塩結合剤および活性ビタミンＤステロール投与などの、二次性ＨＰＴに対し一般的に用いられる治療介入は、高カルシウム血症および高リン血症をもたらす可能性があり（Ｃｈｅｒｔｏｗ， Ｇ． ｅｔ ａｌ． Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ６２： ２４５−５２， ２００２； Ｔａｎ， Ａ． ｅｔ ａｌ． Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ５１： ３１７−２３， １９９７； Ｇａｌｌｉｅｎｉ， Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ４２： １１９１−８， １９９２）、これらは、血管石灰化の発症または増悪と関連している。
【０００４】
血管石灰化は、重要および重篤となる可能性のある慢性腎不全の合併症である。２つの異なる血管石灰化のパターンが特定されており（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ， Ｄ ＆ Ｓｈａｎａｈａｎ， Ｃ． Ｈｅｒｚ ２６： ２４５−５１， ２００１）、尿毒症患者において両方の種類が存在することが一般的である（Ｃｈｅｎ， Ｎ． ＆ Ｍｏｅ， Ｓ． Ｓｅｍｉｎ Ｎｅｐｈｒｏｌ ２４： ６１−８， ２００４）。まず、中膜石灰化は、平滑筋細胞の骨芽細胞様細胞への形質転換に伴い血管の中膜で生じ、他方、アテローム発生は、泡沫化マクロファージおよび内膜過形成と関連している。
【０００５】
中膜壁石灰化は、慢性腎不全のある比較的若年者において発症する可能性があり、および糖尿病患者においては、腎疾患が存在しない場合においても普通に見られる。動脈の中膜壁におけるカルシウムの存在により、この種類の血管石灰化は、アテローム性動脈硬化症に関連する血管石灰化から区別される（Ｓｃｈｉｎｋｅ Ｔ． ＆ Ｋａｒｓｅｎｔｙ Ｇ． Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １５： １２７２−４， ２０００）。アテローム硬化性血管石灰化は、動脈の内膜層に沿ったアテローム斑で生じる（Ｆａｒｚａｎｅｈ−Ｆａｒ Ａ． ＪＡＭＡ ２８４： １５１５−６， ２０００）。石灰化は通常、大きな、進行した病変において最も顕著であり、および年齢と共に増大する（Ｗｅｘｌｅｒ Ｌ． ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９４： １１７５−９２， １９９６； Ｒｕｍｂｅｒｇｅｒ Ｊ． ｅｔ ａｌ． Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎ Ｐｒｏｃ １９９９； ７４： ２４３−５２．）。アテローム性動脈硬化症のある患者における動脈石灰化の範囲は、一般に疾患の重篤度に対応する。中膜壁石灰化と異なり、アテローム性血管病変は、カルシウムを含有するか否かにかかわらず、動脈内腔を侵害し、血流に障害を生じさせる。アテローム斑へのカルシウムの局所沈着は、酸化脂質および他の酸化ストレスによる炎症ならびに単球およびマクロファージによる浸潤が原因で生じる可能性がある（Ｂｅｒｌｉｎｅｒ Ｊ． ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９１ ： ２４８８−９６， １９９５）。
【０００６】
末期の腎疾患患者の一部は、カルシフィラキシー形成または尿毒症性動脈石灰化と呼ばれる重篤な閉塞性動脈疾患を発症する。この症候群は、小動脈における多数のカルシウム沈着を特徴とする（Ｇｉｐｓｔｅｉｎ Ｒ． ｅｔ ａｌ． Ａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ １３６： １２７３−８０， １９７６； Ｒｉｃｈｅｎｓ Ｇ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ａｃａｄ Ｄｅｒｍａｔｏｌ． ６： ５３７−９， １９８２）。この疾患のある患者において、動脈石灰化および血管閉塞は、組織の虚血および壊死をもたらす。末梢血管の関与は、下肢の皮膚の潰瘍または足もしくは手の指の壊疽をひきおこし得る。腹壁、大腿部および／または臀部の皮膚および皮下脂肪組織の虚血および壊死は、尿毒症性動脈石灰化の近位部の特徴である（Ｂｕｄｉｓａｖｌｊｅｖｉｃ Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ． ７： ９７８−８２， １９９６； Ｒｕｇｇｉａｎ Ｊ． ｅｔ ａｌ Ａｍ Ｊ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ ２８： ４０９−１４， １９９６）。この症候群は、肥満個体においてより頻繁に生じ、および明確でない理由によって、女性のほうが男性よりもより多く冒される（Ｇｏｏｄｍａｎ Ｗ． Ｊ． Ｎｅｐｈｒｏｌ． １５（６）： Ｓ８２−Ｓ８５， ２００２）。
【０００７】
血清ミネラルレベルを正常化する最新治療、または血管組織もしくはインプラントの石灰化を抑制、阻害もしくは予防する最新治療は、限られた効力のものであり、許容しがたい副作用をひきおこす。従って、血管石灰化を阻害および予防する効果的な方法の必要性が、存在する。
【発明の開示】
【０００８】
（発明の概要）
本発明は、対象にカルシウム擬似化合物の治療的有効量を投与することを含む、対象における血管石灰化を阻害、抑制または予防する方法を提供する。一態様において、血管石灰化は、アテローム性硬化性石灰化であり得る。もう１つの態様において、血管石灰化は中膜石灰化であり得る。
【０００９】
一態様において、対象は、慢性腎不全対象または末期の腎疾患に罹患していることがある。もう１つ態様において、対象は、透析前であり得る。更なる態様において、対象は尿毒症に罹患していることがある。もう１つの態様において、対象は、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病に罹患していることがある。もう１つの対象において、対象は、心血管疾患に罹患していることがある。一態様において、対象はヒトであり得る。
【００１０】
一態様において、カルシウム擬似化合物は、式Ｉの化合物：
【００１１】
【化３】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は同一であっても異なっていてもよく、それぞれは、ＣＨ３、ＣＨ３Ｏ、ＣＨ３ＣＨ２Ｏ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＦ３Ｏ、ＣＨ３Ｓ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＨ３ＣＨ２、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、アセトキシおよびアセチル基から選択される基であり、または２つのＸ１が、一緒になって、縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、または２つのＸ２が、一緒になって、縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、ただしＸ２は、３−ｔ−ブチル基でなく；
ｎは、０から５の範囲であり；
ｍは、１から５の範囲であり；ならびに
アルキル基は、飽和および不飽和の直鎖、分枝鎖および環状Ｃ１〜Ｃ９アルキル基、ジヒドロインドリルおよびチオジヒドロインドリル基、ならびに２−、３−、および４−ピペリジニル基から選択される少なくとも１つの基で場合により置換されていてよいＣ１〜Ｃ３アルキル基から選択される。］
またはこの薬学的に許容できる塩であることができる。
【００１２】
一態様において、本発明の方法に使用されるカルシウム擬似化合物は、Ｎ−（３−［２−クロロフェニル］−プロピル）−Ｒ−α−メチル−３−メトキシベンジルアミンまたはその薬学的に許容できる塩であることができる。
【００１３】
もう１つの態様において、カルシウム擬似化合物は、式ＩＩの化合物：
【００１４】
【化４】
［式中、
Ｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
Ｒ２は、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
記載されている各Ｒ５は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＲｄ、−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＮＲｄＲｄ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＮＲｄＲｄまたは−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒｄからなる群から独立して選択され；
Ｒ６は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
各Ｒａは、独立して、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
各Ｒｂは、独立して、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、このそれぞれは、非置換であるか、またはアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノおよびニトロからなる群から選択される３までの置換基により置換されていてよく；
各Ｒｃは、独立して、アルキル、ハロアルキル、フェニルまたはベンジルであり、そのそれぞれは非置換であるかまたは置換されていてよく；
各Ｒｄは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、ここで、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキルは、アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノ、ニトロ、Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｎＲｃおよび−Ｓ（＝Ｏ）ｎＮＲａＲａから選択される０、１、２、３または４置換基により置換されており；
ｍは、１または２であり；
ｎは、０、１または２であり；ならびに
ｐは、０、１、２、３または４である；
ただし、Ｒ２がメチルであり、ｐが０であり、Ｒ６が非置換フェニルである場合、Ｒ１は、２，４−ジハロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，４−ジエチルフェニル、２，４，６−トリハロフェニルまたは２，３，４−トリハロフェニルでない。］
またはこの薬学的に許容できる塩であることができる。
【００１５】
一態様において、本発明の方法において使用されるカルシウム擬似化合物は、Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン、またはこの薬学的に許容できる塩であることができる。
【００１６】
一態様において、カルシウム擬似化合物は、シナカルセットＨＣｌであることができる。
【００１７】
一態様において、本発明は、対象にビタミンＤステロールが前もって投与されている、血管石灰化の阻害、抑制、または予防方法を提供する。
【００１８】
一態様において、ビタミンＤステロールは、カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトールまたはパリカルシトールであることができる。一態様において、カルシウム擬似化合物は、ビタミンＤステロールの投与の前または後に投与され得る。一態様において、カルシウム擬似化合物は、ビタミンＤステロールと組み合わせて投与され得る。
【００１９】
一態様において、カルシウム擬似化合物は、ＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）と組み合わせて投与され得る。
【００２０】
本発明はさらに、対象にカルシウム擬似化合物の治療的有効量を投与することを含む、対象における血清クレアチニンレベルを低下させる方法を提供する。一態様において、対象は、ビタミンＤステロールの投与により上昇した血清クレアチニンレベルを被ることがある。
【００２１】
（発明の詳細な説明）
Ｉ．概要
本発明は、血管石灰化を抑制、阻害、または予防する方法に関する。
【００２２】
ＩＩ．定義
本明細書において、「血管石灰化」は、血管における細胞外マトリックスハイドロキシアパタイト（リン酸カルシウム）の結晶沈着の生成、成長または沈着を意味する。血管石灰化は、冠動脈、心臓弁膜、大動脈、および他の血管の石灰化を含む。この用語は、アテローム性硬化性石灰化および中膜壁石灰化を含む。
【００２３】
「アテローム性硬化性石灰化」は、動脈の内膜層に沿ったアテローム斑に生じる血管石灰化を意味する。
【００２４】
「中膜石灰化」、「中膜壁石灰化」、または「メンケベルグ硬化症」は、本明細書において、動脈の中膜壁におけるカルシウムの存在を特徴とする石灰化を意味する。
【００２５】
用語「治療」または「治療すること」は、必要とする患者に、病的血管石灰化状態の発生を阻害、抑制または後退させるカルシウム擬似化合物の量の投与を含む。血管石灰化を阻害することに関連する「阻害すること」は、細胞外マトリックスハイドロキシアパタイトの結晶沈着の生成、成長または沈着を予防、遅延、または後退させることを意味する。本明細書において、疾病および疾患の治療は、本発明の化合物（またはその医薬塩、誘導体もしくはプロドラッグ）または前記化合物を含有する医薬組成物の、例えば、疼痛、炎症などの予防処置が必要と考えられる対象（すなわち、動物、例えばヒトなどの哺乳動物）への治療的投与もまた含むことを、意図する。治療はまた、必要であると診断されていない対象に、化合物または医薬組成物を投与すること、すなわち対象への予防的投与も含む。一般に、対象は、最初に医師免許を有する医師および／または認可された医師により診断を受け、本発明の化合物（単数または複数）または組成物の投与による予防処置および／または治療処置の計画が示唆、推奨または処方される。
【００２６】
用語「治療的有効量」は、疾患の重症度および発生頻度における改善の目標を達成するカルシウム擬似化合物の量を意味する。疾患の重症度における改善は、血管石灰化を後退させること、並びに血管石灰化の進行を遅延させることを含む。一態様において、「治療的有効量」は、血清クレアチニンレベルを低下させるかまたは血清クレアチニンレベルにおける上昇を抑制するカルシウム擬似化合物の量を意味する。
【００２７】
用語本明細書において、「対象」は、石灰化を発症もしくはこのリスクを有する、ヒトまたは他の哺乳動物を意味することを意図する。このような個体は、例えば、アテローム性動脈硬化症などの状態を伴う血管石灰化、狭窄、再狭窄、腎不全、糖尿病、補装具埋め込み、組織損傷または加齢に伴う血管疾患を発症しているか、またはそのリスクを有する。これらの予後および臨床適応は、当分野で公知である。本発明の方法により治療をうける個体は、例えば、糖尿病、慢性腎疾患、腎不全、腎臓移植または腎透析に付随する全身性のミネラル不均衡を有することがある。
【００２８】
血管石灰化に関連するヒトアテローム性動脈硬化症、腎不全、高リン血症、糖尿病、加齢に伴う血管石灰化および他の状態の信頼できる指標となる動物モデルは、当分野で公知である。例えば、血管壁の石灰化の実験モデルは、Ｙａｍａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ， Ｅｘｐ． Ｐａｔｈ． ２５： １８５−１９０， １９８４に記載されている。
【００２９】
ＩＩＩ．カルシウム擬似化合物およびこれを含む医薬組成物、投与ならびに投与量
本明細書において、「カルシウム擬似化合物」という用語は、カルシウム感受性受容体に結合し、および内因性リガンドＣａ２＋によるカルシウム感受性受容体活性化に対する閾値を低下させるコンフォメーション変化を引き起こし、それにより副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の分泌を抑える化合物を指す。これらのカルシウム擬似化合物は、カルシウム受容体のアロステリックモジュレーターとみなすこともできる。
【００３０】
本発明に有用なカルシウム擬似化合物は、例えば、ヨーロッパ特許第９３３３５４号および第１２３５７９７号；国際公開番号ＷＯ０１／３４５６２号、ＷＯ９３／０４３７３号、ＷＯ９４／１８９５９号、ＷＯ９５／１１２２１号、ＷＯ９６／１２６９７号、ＷＯ９７／４１０９０号；米国特許第５，６８８，９３８号、第５，７６３，５６９号、第５，９６２，３１４号、第５，９８１，５９９号、第６，００１，８８４号、第６，０１１，０６８号、第６，０３１，００３号、第６，１７２，０９１号、第６，２１１，２４４号、第６，３１３，１４６号、第６，３４２，５３２号、第６，３６２，２３１号、第６，４３２，６５６号、第６，７１０，０８８号、第６，９０８，９３５号ならびに米国特許出願公開第２００２／０１０７４０６号に開示されているものを含む。
【００３１】
特定の実施形態において、カルシウム擬似化合物は、式Ｉの化合物およびこの薬学的に許容できる塩：
【００３２】
【化５】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は同一であっても異なっていてもよく、それぞれは、ＣＨ３、ＣＨ３Ｏ、ＣＨ３ＣＨ２Ｏ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＦ３Ｏ、ＣＨ３Ｓ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＨ３ＣＨ２、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、アセトキシおよびアセチル基から選択される基であり、または２つのＸ１が、一緒になって縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、または２つのＸ２が、一緒になって、縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、ただしＸ２は３−ｔ−ブチル基でなく；
ｎは０から５の範囲であり；
ｍは１から５の範囲であり；ならびに
アルキル基は、飽和および不飽和の直鎖、分枝鎖および環状Ｃ１〜Ｃ９アルキル基、ジヒドロインドリルおよびチオジヒドロインドリル基、ならびに２−、３−、および４−ピペリジ（ニ）ル基から選択される少なくとも１つの基で場合により置換されていてよいＣ１〜Ｃ３アルキル基から選択される。］
から選択される。
【００３３】
カルシウム擬似化合物はまた、式ＩＩの化合物：
【００３４】
【化６】
［式中、
Ｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
Ｒ２は、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
記載されている各Ｒ５は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＲｄ、−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＮＲｄＲｄ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＮＲｄＲｄまたは−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒｄからなる群から独立して選択され；
Ｒ６は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
各Ｒａは、独立して、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
各Ｒｂは、独立して、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、このそれぞれは、非置換であるか、またはアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノおよびニトロからなる群から選択される３までの置換基により置換されていてよく；
各Ｒｃは、独立して、アルキル、ハロアルキル、フェニルまたはベンジルであり、そのそれぞれは、置換されているかまたは非置換であってよく；
各Ｒｄは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、ここで、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキルは、アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノ、ニトロ、Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｎＲｃおよび−Ｓ（＝Ｏ）ｎＮＲａＲａから選択される０、１、２、３または４置換基により置換されており；
ｍは、１または２であり；
ｎは、０、１または２であり；ならびに
ｐは、０、１、２、３または４である；
ただし、Ｒ２がメチルであり、ｐが０であり、Ｒ６が非置換フェニルである場合、Ｒ１は、２，４−ジハロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，４−ジエチルフェニル、２，４，６−トリハロフェニルまたは２，３，４−トリハロフェニルでない。］
およびこの薬学的に許容できる塩から選択されることもできる。これらの化合物は、米国特許出願第２００４００８２６２５号に詳細に記載されており、これは、本明細書に、参照として組み込まれる。
【００３５】
本発明の一態様において、式ＩＩの化合物は、式：
【００３６】
【化７】
を有することができる。
【００３７】
本発明の特定の実施形態において、カルシウム擬似化合物は、式ＩＩＩの化合物：
【００３８】
【化８】
［式中、
【００３９】
【化９】
は、二重結合または単結合を表し；
Ｒ１は、Ｒｂであり；
Ｒ２は、Ｃ１−８アルキルまたはＣ１−４ハロアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−８アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ５は、独立して、それぞれの場合、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、ハロゲン、−ＯＣ１−６アルキル、−ＮＲａＲｄまたはＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒｄであり；
Ｘは、−ＣＲｄ＝Ｎ−、−Ｎ＝ＣＲｄ−、Ｏ、Ｓまたは−ＮＲｄ−であり；
【００４０】
【化１０】
が二重結合の場合、Ｙは＝ＣＲ６−または＝Ｎ−であり、およびＺは−ＣＲ７＝または−Ｎ＝であり；および
【００４１】
【化１１】
が単結合の場合、Ｙは−ＣＲａＲ６−または−ＮＲｄ−であり、およびＺは−ＣＲａＲ７−または−ＮＲｄ−であり；および
Ｒ６は、Ｒｄ、Ｃ１−４ハロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＣ１−６アルキル、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、シアノ、ニトロ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｍＲｃまたは−Ｓ（＝Ｏ）ｍＮＲａＲａであり；
Ｒ７は、Ｒｄ、Ｃ１−４ハロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＣ１−６アルキル、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、シアノ、ニトロ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｍＲｃまたは−Ｓ（＝Ｏ）ｍＮＲａＲａであり；またはＲ６およびＲ７は一緒になって、０、１、２または３Ｎ原子ならびにＳおよびＯから選択される０、１または２原子を含有する３から６原子の飽和または不飽和の架橋を形成し、ここで該架橋は、Ｒ５から選択される０、１または２置換基により置換されており；ここでＲ６およびＲ７が、ベンゾ架橋を形成する場合、ベンゾ架橋は、ＮおよびＯから選択される１または２原子を含有する３または４原子架橋によりさらに置換されていてよく、ここで該架橋は、Ｃ１−４アルキルから選択される０または１置換基により置換されており；
Ｒａは、独立して、それぞれの場合、Ｈ、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒｂは、独立して、それぞれの場合、フェニル、ベンジル、ナフチル、またはＮ、ＯおよびＳから選択され、２以下の原子がＯおよびＳから選択される１、２または３原子を含有する飽和または不飽和の５または６員環複素環であり、ここでフェニル、ベンジルまたは複素環は、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、Ｃ１−４ハロアルキル、−ＯＣ１−６アルキル、シアノおよびニトロから選択される０、１、２または３置換基により置換されており；
Ｒｃは、独立して、それぞれの場合、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、フェニルまたはベンジルであり；
Ｒｄは、独立して、それぞれの場合、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、フェニル、ベンジルまたはＮ、ＯおよびＳから選択され、２以下の原子が、ＯおよびＳから選択される１、２または３原子を含有する飽和または不飽和の５から６員環複素環であり、ここでＣ１−６アルキル、フェニル、ベンジル、ナフチルおよび複素環は、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、Ｃ１−４ハロアルキル、−ＯＣ１−６アルキル、シアノおよびニトロ、Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｍＲｃおよび−Ｓ（＝Ｏ）ｍＮＲａＲａから選択される０、１、２、３または４置換基により置換されており；ならびに
ｍは、１または２である。］
およびこの薬学的に許容できる塩から選択され得る。
【００４２】
式ＩＩＩの化合物は、米国特許出願第２００４００７７６１９号に詳しく記載されている（これは、参照により本明細書に組み込まれる。）。
【００４３】
一態様において、カルシウム擬似化合物は、Ｎ−（３−［２−クロロフェニル］−プロピル）−Ｒ−α−メチル−３−メトキシベンジルアミン・ＨＣｌ（化合物Ａ）である。もう１つの態様において、カルシウム擬似化合物は、Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン（化合物Ｂ）である。
【００４４】
本発明の方法において有用なカルシウム擬似化合物は、前述のカルシウム擬似化合物、並びにこの立体異性体、鏡像異性体、多型体、水和物および前述のいずれかの薬学的に許容できる塩を含む。
【００４５】
本発明において有用なカルシウム擬似化合物は、無機酸または有機酸から誘導される薬学的に許容できる塩の形態において使用され得る。これらの塩は、限定するものではないが、以下：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、２−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラート、メシレートおよびウンデカン酸塩を含む。本発明の化合物がカルボキシ基などの酸性官能基を含む場合、カルボキシ基の薬学的に許容できる適した塩は当業者に公知であり、例えば、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、第四級アンモニウムカチオンなどを含む。「薬理学的に許容できる塩」のさらなる例については、下記およびＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． ６６： １、１９７７ を参照されたい。本発明のある実施形態において、塩酸塩およびメタンスルホン酸の塩が、使用され得る。
【００４６】
本発明のいくつかの態様において、カルシウム受容体活性化合物は、シナカルセット（すなわち、Ｎ−（１−（Ｒ）−（１−ナフチル）エチル）−３−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１−アミノプロパン）、シナカルセットＨＣｌ、およびメタンスルホン酸シナカルセットから選択され得る。シナカルセットＨＣｌおよびメタンスルホン酸シナカルセットなどのカルシウム擬似化合物は、非晶質粉末、結晶性粉末、およびこれらの混合物などの種々の形態であることができる。結晶性粉末は、多型体、擬多形体、晶癖、粉体組成物、および粒子形態を含む形態であることができる。
【００４７】
投与のために、本発明の化合物は、指示された投与経路に適した１以上のアジュバントと通常組み合わされる。本化合物は、通常の投与のために、ラクトース、ショ糖、デンプン粉、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムならびにカルシウム塩、アカシアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリジン、および／またはポリビニルアルコールと混合され、および錠剤化またはカプセル化され得る。或いは、本発明の化合物は、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、コーン油、落花生油、綿実油、ゴマ油、トラガントゴム、および／または種々の緩衝液に溶解され得る。他のアジュバントおよび投与方法は、医薬品業界において公知である。担体または希釈剤は、単独のまたはワックスと混合したモノステアリン酸グリセリルもしくはジステアリン酸グリセリル、または当業界に公知の他の原料などの時間遅延物質を含むことができる。
【００４８】
本医薬組成物は、固体形態（顆粒、粉末剤または座剤を含む）または液体形態（例えば、溶液、懸濁液またはエマルジョン）で製造することができる。本医薬組成物は、滅菌などの通常の製剤操作に供することができ、および／または防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝液などの通常のアジュバントを含有することができる。
【００４９】
経口投与用固体剤形は、カプセル、錠剤、丸薬、粉末剤および顆粒を含むことができる。このような固体剤形において、活性化合物は、ショ糖、ラクトースまたはデンプンなどの少なくとも１つの不活性希釈剤と混合され得る。このような剤形はまた、通常の慣行に従って、例えばステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤などの不活性希釈剤以外の他の追加物質を含むことができる。カプセル、錠剤および丸薬の場合において、剤形は、緩衝化剤を含むこともできる。錠剤および丸薬は、腸溶性コーティングを用いてさらに調製され得る。
【００５０】
経口投与用液体剤形は、水などの当分野で一般的に用いられる不活性希釈剤を含有する薬学的に許容できるエマルジョン、溶液、サスペンジョン、シロップおよびエリキシル剤を含むことができる。このような組成物は、湿潤剤、甘味剤、風味剤および香料などのアジュバントを含むこともできる。
【００５１】
本明細書に開示されている組成物におけるカルシウム受容体活性化合物の治療的有効量は、対象あたりカルシウム擬似化合物の約１ｍｇから約３６０ｍｇ、例えば約５ｍｇから約２４０ｍｇ、または約２０ｍｇから約１００ｍｇの範囲である。いくつかの態様において、組成物におけるシナカルセットＨＣｌまたは他のカルシウム擬似化合物の治療的有効量は、約５ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約９０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約３００ｍｇまたは約３６０ｍｇから選択することができる。
【００５２】
カルシウム擬似化合物を単独で対象に投与することは可能であり得るが、本化合物は、通常、医薬組成物中の活性成分として存在している。従って、本発明の医薬組成物は、少なくとも１つのカルシウム擬似化合物の治療的有効量、または少なくとも１つのカルシウム擬似化合物の有効投与量を含むことができる。
【００５３】
本明細書において、「有効投与量」は、単回投与、複数回投与または部分投与として提供される場合、カルシウム擬似化合物の治療的有効量を提供する量である。従って、例えば、化合物の有効量を投与するために錠剤、カプセルにおけるの２以上の単位投与量が必要とされる医薬組成物、または代替的に、カルシウム擬似化合物の有効量が組成物の一部を投与することにより投与される粉末剤、液体などの複数回投与医薬組成物などの本発明のカルシウム擬似化合物の有効投与量は、化合物の有効量よりも少ない、と等しい、またはよりも多い量を含む。
【００５４】
或いは、カルシウム擬似化合物の有効量を投与するために錠剤、カプセルにおけるの２以上の単位投与量が必要とされる医薬組成物は、例えば個々の対象についての有効量を確実にするために、潜在的な副作用に対する個々の対象の感受性を減ずるために、または個々の対象に投与された-１以上の他の治療剤の再調整または減少する有効投与を可能にするなどのために、１以上の期間（例えば、１日１回投与、および１日２回投与）について有効量以下で投与することが可能である。
【００５５】
本明細書に記載の医薬組成物の有効投与量は、単位剤形中の約１ｍｇから約３６０ｍｇの範囲であり、例えば単位剤形中の約５ｍｇ、約１５ｍｇ、約３０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約９０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約３００ｍｇまたは約３６０ｍｇである。
【００５６】
本発明のいくつかの態様において、本明細書に開示されている組成物は、血管石灰化の治療または予防のためのカルシウム擬似化合物の治療的有効量を含む。例えば、ある実施形態において、シナカルセットＨＣｌなどのカルシウム擬似化合物は、組成物の全重量に対し重量比で約１％から約７０％（約５％から約４０％、約１０％から約３０％または約１５％から約２０％など）の範囲の量で存在し得る。
【００５７】
本発明の組成物は、カルシウム擬似化合物に加えて１以上の活性成分を含有することができる。追加の活性成分は、他のカルシウム擬似化合物であってよく、または異なる治療活性を有する活性成分であってよい。このような追加の活性成分の例は、例えば、ビタミンＤおよびその類似体（この類似体は、カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトールおよびパリカルシトールなどのビタミンＤステロールを含む。）などのビタミンおよびその類似体、抗生物質、炭酸ランタン、ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）などの脂質低下薬、降圧薬、抗炎症薬（ステロイド系および非ステロイド系）、炎症性サイトカインの阻害剤（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）、ＫＩＮＥＲＥＴ（登録商標））、および循環器薬を含む。組み合わせで投与する場合、治療剤を、同時もしくは異なる時間に投与される別々の組成物として製剤化でき、または治療剤を、単一の組成物として投与できる。
【００５８】
組み合わせ療法の一態様において、本発明の組成物は、ビタミンＤステロールおよび／またはＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）と共に使用され得る。一態様において、本発明の組成物は、ビタミンＤステロールおよび／またはＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）の投与の前に投与され得る。もう１つの態様において、本発明の組成物は、ビタミンＤステロールおよび／またはＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）と同時に投与され得る。更なる態様において、本発明の組成物は、ビタミンＤステロールおよび／またはＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）の投与の後に投与され得る。本発明の組み合わせ療法を用いる病状の治療のための投与計画は、患者の種類、年齢、体重、性別および病状、疾患の重篤度、投与経路および用いられる特定の化合物を含む種々の因子に従い選択され、従って大きく変化し得る。
【００５９】
ＩＶ．血管石灰化の評価
血管石灰化を検出し測定する方法は、当業界において公知である。一態様において、石灰化を測定する方法は、血管におけるカルシウム−リン沈着の範囲を直接検出および測定する方法を含む。
【００６０】
一態様において、血管石灰化を直接測定する方法は、単純Ｘ線フィルム撮影、冠動脈造影法などのインビボ画像法；デジタル差分Ｘ線透視を含むＸ線透視；シネ蛍光写真法；通常の、ヘリカルおよび電子ビームコンピュータ断層撮影法；血管内超音波（ＩＶＵＳ）；磁気共鳴画像法；ならびに経胸腔および経食道心エコー検査を含む。Ｘ線透視およびＥＢＣＴは、非侵襲的に石灰化を検出するために最も一般に用いられ、一方、シネ蛍光写真法およびＩＶＵＳは、血管形成術の前に、特定の病変における石灰化を評価するために冠動脈インターベンショナリストにより使用される。
【００６１】
一態様において、血管石灰化は、単純Ｘ線フィルム撮影により検出され得る。この方法の利点は、フィルムの利用が可能であることおよびこの方法のコストの低さであるが、不利な点はその感度の低さである（Ｋｅｌｌｅｙ Ｍ． ＆ Ｎｅｗｅｌｌ Ｊ． Ｃａｒｄｉｏｌ Ｃｌｉｎ． １： ５７５−５９５， １９８３）。
【００６２】
もう１つの態様において、Ｘ線透視は冠動脈における石灰化を検出するために使用できる。Ｘ線透視により、中程度から大きい石灰化を検出できるが、小さな石灰化沈着物を検出する能力は低い（Ｌｏｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ． １９： １１６７−１１７２， １９９２）。Ｘ線透視は、入院患者および外来患者環境の両方において広く利用可能であり、比較的安価であるが、いくつかの不都合な点を有する。低度から中程度までのみの感度に加えて、Ｘ線透視によるカルシウムの検出は、技師の技術および経験、並びに検査する撮影数に依存する。他の重要な要素は、透視装置のばらつき、患者の体型、椎骨および弁輪などの構造における、表面を覆う解剖構造および表面を覆う石灰化を含む。Ｘ線透視を用いてでは、カルシウムの透視の定量化が可能でなく、およびフィルムの文書化は、通常得られない。
【００６３】
さらにもう１つの態様において、血管検出は、通常のＸ線コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）により検出され得る。カルシウムは、Ｘ線ビームを減衰するので、Ｘ線コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）は、血管石灰化を検出することにおいてきわめて感度がよい。通常のＣＴは、冠動脈石灰化の検出のために、Ｘ線透視よりも優れた性能があると考えられるが、その限界は、モーションアーチファクト、体積平均、呼吸によるミスレジストレーションおよびプラーク量の定量の不能をもたらす遅いスキャン時間である（Ｗｅｘｌｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９４： １１７５− １１９２， １９９６）。
【００６４】
更なる態様において、石灰化は、ヘリカルまたはスパイラルコンピュータ断層撮影により検出され得、これは、通常のＣＴよりもかなり速いスキャン時間を有する。重複スライスも、カルシウムの検出を改善する。Ｓｈｅｍｅｓｈらは、冠動脈造影上有意な冠動脈閉塞性疾患と比較する場合、９１％の感度および５２％の特異度を有するヘリカルＣＴによる冠動脈カルシウム画像を報告した（Ｓｈｅｍｅｓｈ ｅｔ ａｌ． Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９７： ７７９−７８３、１９９５）。ただし、他の予備的データは、これらの加速されたスキャン時間でも、および特にシングルヘリカルＣＴを用いても、石灰化沈着物が心拍動のために不鮮明になり、小さな石灰化は見えなくなり得ることを示している（Ｂａｓｋｉｎ ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９２（ｓｕｐｐｌ Ｉ）： Ｉ−６５１、１９９５）。従って、ヘリカルＣＴは、石灰化の検出においてＸ線透視および通常のＣＴよりも依然として優れている。ダブルへリックスＣＴスキャナーは、冠動脈石灰化の検出において、そのより高い解像度およびそのより薄いスライス機能により、シングルへリックススキャナーよりもより感度が高いと考えられる（Ｗｅｘｌｅｒ ｅｔ ａｌ、上記を参照）。
【００６５】
もう１つの態様において、血管石灰化の検出のために電子ビームコンピュータ断層撮影法（ＥＢＣＴ）が、使用され得る。ＥＢＣＴは、Ｘ線を発生させるために標準のＸ線管でなく電子銃および静止したタングステン「標的」を使用し、大変速いスキャン時間を可能にする。当初はシネまたは超高速ＣＴと呼ばれたが、最新のスパイラルスキャナーもまたサブセカンドスキャン時間を達成しているので、現在は標準ＣＴスキャンと区別するためにＥＢＣＴという用語が使用されている。冠動脈カルシウムを検出するために、ＥＢＣＴ画像は、３ｍｍのスキャンスライス厚を用い、１００ｍｓで測定される。テーブル増分により３０から４０の隣接するアキシャルスキャンが得られる。スキャンは、通常１回か２回の異なる息止めシーケンスの間に取得されるが、心拍動の影響を最小限にするために、拡張末期付近および心房収縮前に８０％のＲＲインターバルの心電図信号により行う。速い画像収集時間は、心収縮に関連するモーションアーチファクトを実質的に除く。冠動脈において、動脈周囲脂肪より低いＣＴ密度が、血液に対して著しい対照を成すため、混濁していない冠動脈はＥＢＣＴにより容易に特定され、一方、壁在性カルシウムは、血液に対して高いＣＴ密度を有するため、明白である。さらに、スキャナーソフトウェアによりカルシウム面積および密度の定量化が可能になる。Ｘ線減弱係数、またはハウンズフィールド単位で測定したＣＴ値、および石灰化沈着物の面積に基づく自由裁量による採点法が考案されている（Ａｇａｔｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ． １５：８２７−８３２， １９９０）。冠動脈カルシウムのスクリーニング検査は、１０分か１５分以内に終了され得、わずか数秒のスキャン時間を必要とするのみである。電子ビームＣＴスキャナーは、通常のＣＴスキャナーまたはスパイラルＣＴスキャナーよりも高価であり、比較的少数の施設において利用可能である。
【００６６】
一態様において、血管内超音波（ＩＶＵＳ）は、血管石灰化、特に、冠動脈アテローム性動脈硬化症の検出に使用され得る（Ｗａｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ８５： ２３０５−２３１０、１９９２）。カテーテルの先端に回転型反射器を搭載したトランスデューサーを使用することにより、心臓カテーテル法の最中に冠動脈の断面画像診断画像を得ることが可能である。ソノグラムは、動脈内腔についてのみでなく、動脈壁の厚さおよび組織性状についても情報を提供する。石灰化は陰影を伴う高エコー域に見られ、繊維性非石灰化プラークは陰影を伴わない高エコー域に見られる（Ｈｏｎｙｅ ｅｔ ａｌ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ． １： ３０５−３１１、１９９１）。ＩＶＵＳの使用における不都合は、他の画像モダリティと対照的に、侵襲性であり、現在のところ、選択的冠動脈造影と共にのみ作動し、および冠動脈枝の限定された部位のみ視覚化することである。侵襲性ではあるが、冠動脈造影検査において正常所見を示す患者におけるアテローム性病変の関与を示すことができ、およびバルーン血管形成術およびアテローム切除装置の選択の前に狭窄病変の形態学的性状を明らかにするのに役立つ（Ｔｕｚｃｕ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ． ２７： ８３２−８３８， １９９６）。
【００６７】
もう１つの態様において、血管石灰化は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）により測定され得る。しかしながら、および冠動脈石灰化を検出するＭＲＩの能力は、いくぶん限定されている。微小石灰化は、大量の軟組織を含有するボクセルの信号強度を実質的に変化させないので、このようなカルシウム蓄積における正味のコントラストは低い。従って、少量の石灰化のＭＲＩ検出は困難であり、冠動脈石灰化の検出におけるＭＲＩの報告または期待される役割はない（Ｗｅｘｌｅｒ ｅｔ ａｌ．、上記を参照）。
【００６８】
他の態様において、血管石灰化は、経胸壁（表面）心エコー検査により測定され得、これは、僧帽弁および大動脈心臓弁膜の石灰化の検出に対して特に感度が高い。しかしながら、利用制約された外部音響窓のため、冠動脈の透視の報告はほとんどない。近位冠動脈を可視化できることの多い経食道心エコー検査は、広く利用可能な方法である（Ｋｏｈ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ． ４３： ２０２−２０６， １９９４． Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ８８： ２５３２−２５４０， １９９３）。
【００６９】
もう１つの態様において、血管石灰化は、Ｖａｎ Ｋｏｓｓａの方法によりエクスビボで評価され得る。この方法は、銀イオンが、電気化学列におけるその相対的位置により炭酸イオンまたはリン酸イオンにより溶液から置換されうるという原理に基づく。嗜銀性反応は、本来、光化学反応であり、その活性化エネルギーは、強い可視光または紫外光から供給される。組織の炭酸イオンまたはリン酸イオンの実証される形態は、常にカルシウムイオンに付随しているので、この方法は、組織のカルシウム沈着部位を明らかにすると考えることができる。
【００７０】
石灰化を直接測定する他の方法は、限定するものではないが、蛍光抗体染色およびデンシトメトリーを含み得る。もう１つの態様において、血管石灰化を評価する方法は、血管石灰化の決定要因および／または危険因子を測定する方法を含む。このような因子は、限定するものではないが、リンの血清レベル、カルシウムおよびカルシウム×リン生成物、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、低密度リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ）、高密度リポタンパクコレステロール（ＨＤＬ）、トリグリセリド、ならびにクレアチニンを含む。これらの因子を測定する方法は、当業界において公知である。血管石灰化を評価する他の方法は、骨形成の因子を評価する方法を含む。このような因子は、骨特異性アルカリホスファターゼ（ＢＳＡＰ）、オステオカルシン（ＯＣ）、Ｉ型コラーゲンのＣ末端プロペプチド（ＰＩＣＰ）、およびＩ型コラーゲンのアミノ末端プロペプチド（ＰＩＮＰ）などの骨形成マーカー；Ｉ型コラーゲンの架橋Ｃ−テロペプチド（ＩＣＴＰ）、酒石酸抵抗性酸ホスファターゼ、ＴＲＡＣＰおよびＴＲＡＰ５Ｂ、コラーゲン架橋のＮ−テロペプチド（ＮＴｘ）およびコラーゲン架橋のＣ−テロペプチド（ＣＴｘ）などの血清骨吸収マーカー；ならびにヒドロキシプロリン、遊離および全ピリジノリン（Ｐｙｄ）、遊離および全デオキシピリジノリン（Ｄｐｄ）、コラーゲン架橋のＮ−テロペプチド（ＮＴｘ）、およびコラーゲン架橋のＣ−テロペプチド（ＣＴｘ）などの尿骨吸収マーカーを含む。
【００７１】
Ｖ．治療方法
一態様において、本発明は、個体における血管石灰化を阻害、抑制または予防する方法を提供する。本方法は、本発明のカルシウム擬似化合物の治療的有効量を個体に投与することを含む。一態様において、本発明の化合物の投与は、細胞外マトリックスハイドロキシアパタイトの結晶沈着の形成、成長または沈着を、遅延または後退させる。本発明のもう１つの態様において、本発明の化合物の投与は、細胞外マトリックスハイドロキシアパタイトの結晶沈着の生成、成長または沈着を予防する。
【００７２】
本発明の方法は、血管石灰化を特徴とするアテローム性硬化性石灰化および中膜石灰化ならびに他の状態を予防または治療するために使用され得る。一態様において、血管石灰化は、慢性腎不全または末期の腎疾患と関連付けられ得る。もう１つの態様において、血管石灰化は、透析前、透析後または尿毒症と関連付けられ得る。更なる態様において、血管石灰化は、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病と関連付けられ得る。さらにもう１つの態様において、血管石灰化は、心血管疾患と関連付けられ得る。
【００７３】
一態様において、カルシウム擬似薬の有効量の投与は、大動脈石灰化を引き起こすことなく血清ＰＴＨを低下させることができる。もう１つの態様において、カルシウム擬似薬の投与は、血清クレアチニンを低下させることができ、または血清クレアチニンレベルの上昇を予防することができる。もう１つの態様において、カルシウム擬似薬の投与は、副甲状腺（ＰＴ）過形成を抑制することができる。
【００７４】
カルシウム擬似薬は、単独で、またはビタミンＤステロールおよび／またはＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）などの血管石灰化を治療するための他の薬剤と組み合わせて投与され得る。ビタミンＤステロールは、カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトールまたはパリカルシトールを含むことができる。一態様において、カルシウム擬似化合物はビタミンＤステロールの投与の前後に投与され得る。もう１つの態様において、カルシウム擬似薬は、ビタミンＤステロールと同時投与され得る。本発明の方法は、血管組織に対するカルシトリオールのミネラル沈着促進効果を抑制するために実施され得る。一態様において、本発明の方法は、カルシウム、リンおよびＣａ×Ｐ生成物の血清レベルを上昇させるカルシトリオールの作用を後退させるために使用され得、それにより血管石灰化を予防または阻害され得る。もう１つの態様において、本発明の方法は、血清クレアチニンレベルを安定化または低下させるために使用され得る。一態様において、疾患によるクレアチニンレベル上昇に加え、カルシトリオールなどのビタミンＤステロールを用いる治療による、さらなるクレアチニンレベル上昇があり得る。
【００７５】
さらに、外科治療および非外科治療と共にカルシウム擬似薬が、投与され得る。一態様において、本発明の方法は、透析とともに実施できる。
【００７６】
以下の実施例は、本発明をさらに十分に説明するために提供するものであるが、その範囲を限定するものと解釈してはならない。
【実施例１】
【００７７】
本実施例は、カルシウム擬似化合物Ｎ−（３−［２−クロロフェニル］−プロピル）−Ｒ−α−メチル−３−メトキシベンジルアミン・ＨＣｌ（化合物Ａ）が、大動脈石灰化を引き起こすことなく、二次性副甲状腺機能亢進症（ＨＰＴ）を伴う尿毒症ラットにおける血清ＰＴＨを低下させ、および血管組織に対するカルシトリオールのミネラル化促進効果を抑制したことを示す。
【００７８】
動物
体重２５０ｇの雄Ｗｉｓｔａｒラットを、Ａｎｉｍａｌ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｆａｃｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｒｄｏｂａ（スペイン）から購入した。ラットを１２時間／１２時間の明暗サイクル下におき、通常の食餌（カルシウム＝０．９％、リン＝０．６％）を自由摂取させた。実験プロトコルの見直しを行い、Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ ｄｅ Ｃｏｒｄｏｂａ（スペイン）の承認を得、および全てのラットは、米国医学研究学会（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｓｅａｒｃｈ）により策定されたＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ、および米国科学アカデミー（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ）により作成された実験動物に関する指針（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）に従って人道的管理を受けた。
【００７９】
５／６腎摘出
これらの実験に用いたＣＫＤげっ歯類モデルを、元の機能しうる腎を６分の５（５／６）摘出する２段階手順である５／６腎摘出（５／６Ｎｘ）により作成した。第１段階において、キシラジン（５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）およびケタミン（８０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を用いてラットを麻酔し、腹部の左内外表面に５から８ｍｍの切開を入れ、左腎を露出した。左腎動脈を見えるようにし、３つの分枝のうち２つをきつく縛り、その後、腎臓を梗塞について検査し、腹腔内の解剖学的中間位に戻した。腹壁および皮膚の切開を縫合糸を用いて縫合し、ラットを元のケージに戻した。１週間回復させた後、ラットを再度麻酔し、腹部の右内外表面に５から８ｍｍの切開を入れた。右腎を露出して被包されていない状態にし、腎茎をクランプし縛って、腎臓を除去した。縛った腎茎を解剖学的中間位に戻し、腹部および皮膚の切開を縫合材料を用いて縫合した。ラットを元のケージで回復させた。擬似手術ラットに、腎手術以外、同じ手順を受けさせた。
【００８０】
実験スケジュールを図１に示す。２番目の手術以後、食餌を、カルシウム含有量を減らし（０．６％）、リン含有量を増やした（０．９％）ものに変えた。ラットを無作為に６実験群に分けた（ベースライン体重の正規分布に基づいて）：擬似手術群（ｎ＝１３）（対照として使用）、５／６Ｎｘ＋ビヒクル（生理食塩水）群（ｎ＝１０）、５／６Ｎｘ＋カルシトリオール８０ｎｇ／ｋｇ（Ｃａｌｃｉｊｅｘ，Ａｂｂｏｔ）（腹腔内、１日おき）群（ｎ＝１０）、５／６Ｎｘ＋化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇ／日（皮下）群（ｎ＝１０）（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ ＵＳＡ）、５／６Ｎｘ＋化合物Ａ３ｍｇ／ｋｇ／日（皮下）（ｎ＝１０）、または５／６Ｎｘ＋カルシトリオール８０ｎｇ／ｋｇおよび化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇの組み合わせ群（上述のように投与）（ｎ＝１０）。処置を、１４日間続けた。薬剤の最終投与の２４時間後に、全身麻酔（腹腔内チオペンタールナトリウム）下で大動脈穿刺および放血によりラットを屠殺した。
【００８１】
血液化学
処置期間の最後に、腹部大動脈から化学分析のための血液を採取した。イオン化カルシウムレベルの測定のための血液を、ヘパリン化シリンジで採取し、直ちにＣｉｂａ−Ｃｏｒｎｉｎｇ ６３４ ＩＳＥ Ｃａ＋＋／ｐＨ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｃｉｂａ−Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｅｓｓｅｘ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を用いて分析した。その後、遠心分離により血漿を分離し、アッセイに用いるまで−７０℃で保存した。ラットＰＴＨ（１−３４）免疫放射定量測定法アッセイキット（Ｉｍｍｕｎｏｔｏｐｉｃｓ，Ｓａｎ Ｃｌｅｍｅｎｔｅ，ＣＡ）を用い、発売元の使用説明書に従ってＰＴＨレベルを定量した。血清クレアチニン、リン、および総カルシウムを分光光度計（Ｓｉｇｍａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）により測定した。
【００８２】
血管石灰化のエクスビボ評価
屠殺後に腹部大動脈を切開し、２つの部分に分割した。１つの部分を、１０％緩衝化ホルマリンで固定し、ついでｖｏｎ Ｋｏｓｓａ法によりミネラル化について染色した。もう１つの部分を、１０％ギ酸でミネラルを除き、Ｐｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ ２０：３１７−２７， ２０００の方法に従って、上澄み中の動脈組織のカルシウムおよびリン含有量を測定した。
【００８３】
統計学
数値を、平均値±標準誤差（ＳＥ）で表した。２つの異なる群の平均値間の差異を、ｔ検定により測定し、３以上の群の平均値間の差異を、ＡＮＯＶＡで評価した。Ｐ＜０．０５を有意とみなした。
【００８４】
クレアチニン
擬似手術ラットにおける平均血清クレアチニン濃度は、０．５３±０．０２ｍｇ／ｄｌであった。予想されたように、全ての５／６Ｎｘラットは、いずれの薬剤処置の前にも有意（Ｐ＜０．０５）に高いクレアチニンレベル（０．８３±０．０４から０．８９±０．０３ｍｇ／ｄｌ）を示し、群間の差異はなかった。カルシトリオールでの処置は、他の５／６Ｎｘ群に関してさらに有意な（Ｐ＜０．０５）血清クレアチニンレベル（１．０５±０．０７ｍｇ／ｄｌ）の上昇をもたらした。カルシトリオールと化合物Ａの組み合わせは、化合物Ａまたはビヒクル処置５／６Ｎｘラットと比較する場合、クレアチニンレベル（０．９３±０．０５ｍｇ／ｄｌ）を有意に上昇させなかった。カルシトリオールと化合物Ａの包含は、カルシトリオール誘発血清クレアチニンレベル上昇を抑制した。
【００８５】
血清の生化学的パラメーター
イオン化カルシウム、リンおよびＰＴＨの血清レベルを、図２から４に示す。５／６Ｎｘおよび擬似手術群における血清イオン化カルシウムレベルは、類似していた（１．２１±０．０１ｍｍｏｌ／ｌに対して１．２３±０．０１ｍｍｏｌ／ｌ）。１．５（１．２０＋０．０２ｍｍｏｌ／ｌ）または３ｍｇ／ｋｇ（１．２２±０．０２ｍｍｏｌ／ｌ）の化合物Ａで処置したラットにおける血清イオン化カルシウムレベルは、５／６Ｎｘビヒクル処置群（１．２１±０．０１ｍｍｏｌ／ｌ）と相違しなかった。しかしながら、５／６Ｎｘビヒクル処置群または化合物Ａ単独処置群と比較する場合、カルシトリオール単独処置または化合物Ａと組み合わせた処置は、有意に（Ｐ＜０．０５）高い血清イオン化カルシウムレベル（それぞれ１．２８±０．０２ｍｍｏｌ／ｌ、および１．２６±０．０１ｍｍｏｌ／ｌ）をもたらした（図２）。
【００８６】
擬似手術群（６．９＋０．７ｍｇ／ｄｌ）と、ビヒクル（６．５±０．４ｍｇ／ｄｌ）または１．５（６．６±０．３ｍｇ／ｄｌ）もしくは３ｍｇ／ｋｇ（６．９±０．４ｍｇ／ｄｌ）の化合物Ａで処置した５／６Ｎｘラット群との間の血清リンレベル（図３）は、相違しなかった。カルシトリオール単独の処置を受けたラットは、ビヒクル処置５／６Ｎｘラットと比較する場合、有意に（Ｐ＜０．０５）上昇した血清リンレベル（１０．２±０．９ｍｇ／ｄｌ）を示した。化合物Ａとカルシトリオールの組み合わせは、血清リンレベル（８．７±０，７ｍｇ／ｄｌ）を低下させる傾向を示したが、それでもなお有意に（Ｐ＜０．０５）、ビヒクル処置５／６Ｎｘラットより高かった。
【００８７】
擬似手術ラット（３９．３±７．９ｐｇ／ｍｌ）と比較する場合、５／６Ｎｘラット（１１８．７±２７．７ｐｇ／ｍｌ）において、血清ＰＴＨ濃度は有意に（Ｐ＜０．０５）上昇していた。使用した全ての処置は、擬似手術ラットと有意差がないレベルまで血清ＰＴＨ濃度を下げた。しかしながら、カルシトリオールと化合物Ａの組み合わせは、化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇ（７３．５±１２．８ｐｇ／ｍｌ）単独より、有意に（Ｐ＜０．０５）効果的なＰＴＨ抑制（１３．８±２．６ｐｇ／ｍｌ）をもたらした（図４）。
【００８８】
大動脈のミネラル含有量
カルシトリオール投与で観察される上昇した血清ミネラルレベルと一致して、カルシトリオールを用いた５／６Ｎｘラット処置は、ビヒクル処置５／６Ｎｘラット（２．３±０．２ｍｇ／ｇ組織）と比較して有意に（Ｐ＝０．００９）上昇した大動脈カルシウム量（４．２±１．１ｍｇ／ｇ組織）をもたらした（図５）。しかしながら、化合物Ａを用いた処置は、ビヒクル処置５／６Ｎｘ（Ｐ＝０．８８２）または擬似手術ラット（Ｐ＝０．７７７）と同様の大動脈カルシウム含有量をもたらした（図５）。血清カルシウムレベルに対してカルシトリオールおよび化合物Ａが有意な効果を示さないことを考慮すれば、驚いたことに、カルシトリオール誘発大動脈カルシウム上昇は、化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇの同時処置により有意に（Ｐ＝０．００２）抑制された（図５）。
【００８９】
さらなる分析は、擬似手術ラットのリン含有量が、ビヒクル処置５／６Ｎｘラットのものと相違しないことを示した（図６）。カルシトリオールを用いた５／６Ｎｘラットの処置は、大動脈組織におけるリン（２．１±１ｍｇ／ｇ組織）含有量を、有意に（Ｐ＝０．０１）上昇させたが、一方、化合物Ａ（１．５または３ｍｇ／ｋｇ）では、有意に上昇させなかった（図６）。カルシトリオール誘発大動脈リン上昇は、化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇの同時処置により、有意に（Ｐ＝０．０１３）抑制された（図６）。
【００９０】
ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色法（図７）を用いてインサイチュ大動脈ミネラル化を検査した。擬似手術、ビヒクルまたは化合物Ａ処置５／６Ｎｘ群のいずれにおいても大動脈におけるミネラル沈着物は観察されなかった。しかしながら、カルシトリオール単独で処置された５／６Ｎｘラットの中膜において、著しいｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色が検出された（図７Ａ）。興味深いことに、カルシトリオール処置計画への化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇの付加は、大動脈石灰化の発生を予防した（図７Ｂ）。
【００９１】
血管石灰化退縮
ラットを既述のように５／６Ｎｘとし、高リン食餌（０．６％Ｃａ；１．２％Ｐ）で１４日間飼育した。ラットを４群（Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ、ｎ＝４から５ラット／群）に分割し、１つの群（Ａ）にビヒクル（生理食塩水０．２ｍｌ，腹腔内）を投与し、残りの３群（Ｂ、ＣおよびＤ）に試験期間（２８日）中、カルシトリオール（８０ｎｇ／ｋｇ，１日おき，腹腔内）を投与した。１４日目に、２群（ＣおよびＤ）を普通の食餌（Ｃａ０．９％；Ｐ０．６％）に変え、群Ｃに化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇ／日，経口）を投与し、一方、群Ｄにビヒクル（１０％ｃａｐｔｉｓｏｌ水溶液０．５ｍｌ／日）を投与した。残りの群（ＡおよびＢ）に、試験期間（２８日）中、高リン食餌を継続し、カルシトリオールまたはビヒクルのどちらかを投与した。２８日目に、ラットを屠殺（ＣＯ２）し、既述のように大動脈のＰおよびＣａ含有量（ｍｇ／ｇ組織）を測定するために大動脈を除去した。
【００９２】
全２８日間、高リン食餌で飼育しカルシトリオールを投与したラット（群Ｂ）を、高リン食餌で飼育しビヒクルを投与したラット（群Ａ）と比較した場合、大動脈のカルシウムおよびリン含有量の有意な（ｐ＜０．０５）上昇がみられた（図８参照）。これは、カルシトリオールが大動脈のカルシウムおよびリン含有量の上昇（血管石灰化）を仲介することを示している。
【００９３】
高リン食餌（群Ｂ）から普通のリン食餌への変換は、大動脈のカルシウムおよびリン含有量のそれほど有意でない減少をもたらした（群Ｄ）。このことは、低リン食餌が血管石灰化プロセスの進行を妨げるおよび／または後退させうることを示唆している（ＣＲＩおよびＥＳＲＤ患者は、低リン食を摂食するよう推奨される。）。高リン食餌から普通のリン食餌へ変換し、および化合物Ａ３ｍｇ／ｋｇを受けさせつつ、試験の最終時点までカルシトリオールを受けさせたラット（群Ｃ）は、群Ｄと比較した場合、大動脈リン含有量の有意な（ｐ＜０．０５）減少およびより低い大動脈カルシウム量を示した。このことは、形成された血管石灰化が、化合物Ａのようなカルシウム擬似薬により後退され得ることを示唆している。
【実施例２】
【００９４】
本実施例により、カルシウム擬似薬Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン（化合物Ｂ）が副甲状腺（ＰＴ）過形成を抑制し、血清ＰＴＨを低下させ、ＣＫＤラットモデルにおける大動脈血管石灰化を抑制することを示す。
【００９５】
これらの試験において、体重３００から３５０グラムの雄スプラーグ・ドーリー・ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いた。全てのラットに、試験の開始前、標準的実験用試料（Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を摂取させた。標準的実験用試料を、０．７５％アデニンを含有する標準的げっ歯類実験用試料に変えた。ラットには飼料および水を自由に摂取させた。このラットプロトコルは、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ａｍｇｅｎ Ｉｎｃ．（Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ）により承認された。
【００９６】
アデニンを含む飼料でラットを２１日間飼育し、およびアデニン食餌の開始前、イオン化カルシウム、ＰＴＨ、ＢＵＮおよびクレアチニンならびにリンレベルのベースライン測定のためにラットを前採血した（図９）。
【００９７】
ＰＴＨおよび血清化学プロフィールのための採血
ラットについて、アデニン食餌飼育または化合物Ｂもしくはビヒクルの投与の前に、血清のＰ、Ｃａ、ＢＵＮ、ＰＴＨおよびクレアチニンのベースライン測定を実施した。ラットが麻酔下（２％イソフルラン／Ｏ２）にある状態で眼窩静脈叢から血液を採取した。時間０での採血後、ラットをアデニン含有飼料で飼育し、および化合物Ｂ（３ｍｇ／ｋｇ 経口）またはビヒクル（１２％ｃａｐｔｉｓｏｌ水溶液）を２１日間連日投与した。試験終了日（２１日目）にラットを屠殺し、組織病理学的分析のために大動脈および副甲状腺を除去した。血液化学およびＰＴＨ測定のために血液を採取した。屠殺の前、血液のイオン化カルシウムレベルの測定のために、麻酔下（２％イソフルラン／Ｏ２）、腹部大動脈からヘパリン化毛細管で血液を採取し、Ｃｉｂａ−Ｃｏｒｎｉｎｇ ６３４ ＩＳＥ Ｃａ＋＋／ｐＨ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｃｉｂａ−Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ，Ｍｅｄｆｉｅｌｄ，ＭＡ）を用いて分析した。別に、ＰＴＨ、血液尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニンおよび血清リンレベルのために、ＳＳＴ（凝固活性剤）（商標）採血管（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）中に血液を採取し、凝固させた。血清を取り除き、アッセイに使用するまで−７０℃で保存した。ラットＰＴＨ（１−３４）免疫放射定量測定法アッセイキット（Ｉｍｍｕｎｏｔｏｐｉｃｓ，Ｓａｎ Ｃｌｅｍｅｎｔｅ，ＣＡ）を用い、ベンダーの使用説明書に従ってＰＴＨレベルを定量した。血液化学分析器（Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ ４００，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を用い、ＢＵＮ、クレアチニンおよびリンレベルを測定した。
【００９８】
ＰＣＮＡ免疫組織化学
副甲状腺重量および増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）免疫化学を用い、過形成を測定した。屠殺時に喉頭気管コンプレックスを取り除き、Ｚｎ緩衝化ホルマリン中で２から３日保存し、ついで７０％アルコールに移しトリミングした。トリミング時に、甲状腺から副甲状腺を切り離し、糸くずの出ないキムワイプ（Ｋｉｍｂｅｒｌｙ Ｃｌａｒｋ Ｃｏｒｐ．，Ｒｏｓｗｅｌｌ，ＧＡ）で拭き取って乾燥し、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＢＰ２１ ＩＤ天秤（Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で個別に重量を測定した。ついで副甲状腺をパラフィン包埋処理した。包埋後、５μｍの切片を切り出し、荷電スライド（ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ ＰＡ）上に置いた。この切片上で、ＰＣＮＡ染色キット（Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓ．Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を用い、ベンダーの使用説明書に従って免疫染色を行った。
【００９９】
副甲状腺切片の中央部を覆う一連の０．０１ｍｍ２グリッド（目盛り付きグラチクルを用いて最初に面積を測定する）を有する面積測定用グラチクルの使用にて副甲状腺の面積を測定した。各副甲状腺のおおよそ同じレベルから切片を作成した。組織サンプルを、Ｌｅｉｔｚ Ｌａｂｏｒｌｕｘ顕微鏡で１００ｘで視覚化し、副甲状腺組織を覆うグリッド数を数えた。このように、０．０１ｍｍにグリッド数をかけることにより副甲状腺の全面積を測定し、その後、グリッド化した断面積におけるＰＣＮＡ陽性細胞数を数え、ＰＣＮＡ陽性細胞数／ｍｍ２として表した。スライドをコード化し、処置群の帰属を知らされていない観測者が、副甲状腺増殖の定量化を行った。
【０１００】
大動脈血管石灰化に関する方法
試験の最終時点でラットを屠殺し（ＣＯ２）、大動脈を除去し、既述のようにＰ、Ｃａ、ＢＵＮおよびクレアチニン測定のために血液を採取した。大動脈を回収し、１０％中性緩衝化ホルマリン中で３から７日間固定し、ついで７０％エタノールに移した。Ｌｕｎａｒ ＰＩＸＩｍｕｓ ２デンシトメーター（Ｌｕｎａｒ ＰＩＸＩｍｕｓ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用い、以下のパラメーターを用い骨密度（ＢＭＤ；ｇ／ｃｍ２）分析を行った：実行時間４分。Ｌｕｎａｒ社製 ｐｉｘｉｍｕｓソフトウェアバージョン２．０を用い、結果を分析した。
【０１０１】
化合物Ｂの３週間投与は、ビヒクル処置ラットと比較して、ＰＣＮＡ陽性細胞数を有意に（ｐ＜０．０１）減少させた（図１１）。同様に、ビヒクル処置ラットと比較した場合、化合物Ｂ処置ラットにおける副甲状腺重量もまた有意に減少した（図１２）。
【０１０２】
図１３は、化合物Ｂの投与が、ビヒクル処置ラットと比較した場合、血清ＰＴＨレベルを著しく低下させた（ｐ＜０．０００１；ＡＮＯＶＡ／Ｆｉｓｈｅｒ制約付最小有意差検定、事後検定）ことを示している。
【０１０３】
図１４は、アデニン食餌で飼育されたラットへの化合物Ｂの投与が、同じ食餌で飼育されたビヒクル処置ラットと比較して、大動脈骨ミネラル密度が７５％減少させたことを示している。
【０１０４】
図１５は、血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルにおける、血液尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンに対する化合物Ｂの効果を示している。簡潔に言えば、ＢＵＮおよびクレアチニン両方のレベルは、処置前ビヒクル（ｎ＝４）と比較して、３週間のアデニン処置（後）、はいずれも有意に（ｐ＜０．０５）上昇した；化合物Ｂ（ｎ＝７）図１０。ビヒクル処置対照（ｎ＝４）と比較した場合、ＢＵＮに対する化合物Ｂ（ｎ＝７）の処置効果は有意でなかった（ｐ＞０．０５）。しかしながら、化合物Ｂ（ｎ＝７）は、ビヒクル（ｎ＝４）処置ラットと比較して、クレアチニンレベルの低下を仲介した（ｐ＜０．０５）。
【０１０５】
図１６は、血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤにおける、イオン化Ｃａに対する化合物Ｂの効果を示している。処置前（前）と比較して３週間アデニン処置（後）、血清イオン化カルシウム（ｉＣａ）は、有意に低下したｐ＜０．０５；ＡＮＯＶＡ；ビヒクル（ｎ＝４ 前；ｎ＝３ 後）；化合物Ｂ（ｎ＝８ 前；ｎ＝６ 後）。化合物Ｂ（ｎ＝６）処置は、ビヒクル処置と比較して、血清ｉＣａを著しく低下させた（ｐ＝０．００４；ｎ＝３）。
【０１０６】
図１７は、血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤにおける、血清リンに対する化合物Ｂの効果を示している。血清リン（Ｐ）は、処置前（前）と比較して３週間のアデニン処置（後）に有意に上昇したｐ＞０．０５；ＡＮＯＶＡ；ビヒクル（ｎ＝４）；化合物Ｂ（ｎ＝７）。ビヒクル処置ラットと比較した場合、血清Ｐレベルに対する化合物Ｂの処置効果は、有意でなかった（ｐ＞０．０５）。
【０１０７】
図１８は、血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤにおける、血清Ｃａに対する化合物Ｂの効果を示している。血清カルシウム（Ｃａ）は、処置前（前）と比較して、３週間のアデニン処置（後）、有意に低下したｐ＜０．０５；ＡＮＯＶＡ；ビヒクル（ｎ＝４）；化合物Ｂ（ｎ＝７）。化合物Ｂ処置は、ビヒクル処置と比較して、総血清カルシウムを有意に低下させた（ｐ＝０．０００１）ＡＮＯＶＡ；ビヒクル（ｎ＝４）；化合物Ｂ（ｎ＝７）。
【実施例３】
【０１０８】
本実施例は、カルシウム擬似薬Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン（化合物Ｂ）が、尿毒症ラット由来の大動脈組織のＣａおよびＰ含有量における、パリカルシトール仲介の上昇を有意に低下させることを示している。
【０１０９】
動物
０．６％Ｃａおよび１．２％Ｐ食餌で飼育したＷｉｓｔａｒラット（２００から２５０ｇ）に５／６腎摘出（５／６Ｎｘ）または擬似手術（ｓｈａｍ）を施した。ラットは、術後１日目から開始した以下の処置を受けた：Ｓｈａｍ＋ビヒクル、５／６Ｎｘ＋ビヒクル、５／６Ｎｘ＋パリカルシトール２４０ｎｇ／ｋｇ（４８時間毎、腹腔内）、５／６Ｎｘ＋パリカルシトール＋化合物Ｂ（１．５ｍｇ／ｋｇ、４８時間毎、皮下）または５／６Ｎｘ＋化合物Ｂ（１．５ｍｇ／ｋｇ、４８時間毎、皮下）。１４日後、ラットを麻酔し、屠殺した。胸部大動脈を除去し、ＣａおよびＰ含有量の測定のために処理した。血清ＰＴＨ、イオン化Ｃａ、Ｐおよびクレアチニンを測定するために、屠殺時に血液を採取した。結果を以下の表１にまとめる。
【０１１０】
【表１】
【０１１１】
５／６Ｎｘ＋ビヒクル
５／６Ｎｘの手順は、慢性腎不全と一致する血清クレアチニン上昇（ｐ＜０．０５）を仲介した。ｓｈａｍビヒクルラットと比較して５／６Ｎｘビヒクルラットにおいて観察される血清イオン化Ｃａの有意な低下（ｐ＜０．０５）ならびに血清ＰおよびＰＴＨの有意な上昇（ｐ＜０．０５）は、全て二次性副甲状腺機能亢進症の顕著な特徴である。
【０１１２】
５／６Ｎｘ＋パリカルシトール
５／６Ｎｘラットへのパリカルシトールの投与は、５／６Ｎｘ＋ビヒクルと比較して、血清ＰＴＨレベルを有意に（ｐ＜０．０５）低下させた。５／６Ｎｘ＋ビヒクルと比較して、血液イオン化カルシウム、クレアチニンまたは血清Ｐレベルの変化は無かった。パリカルシトールは、ビヒクル処置５／６Ｎｘラットと比較して、大動脈ＣａおよびＰ含有量を有意に（ｐ＜０．０５）上昇させた（表１）。
【０１１３】
５／６Ｎｘ＋化合物Ｂ
５／６Ｎｘラットへの化合物Ｂを投与は、ビヒクル処置５／６Ｎｘラットと比較して、血清ＰＴＨレベルを有意に（ｐ＜０．０５）低下させた。５／６Ｎｘ＋ビヒクルと比較して、血液イオン化カルシウム、クレアチニンまたは血清Ｐレベル変化は無かった。同様に、ビヒクル処置ｓｈａｍまたは５／６Ｎｘラットのどちらかと比較した場合でも、化合物Ｂの投与は、大動脈ＣａまたはＰ含有量を有意に変化させなかった（表１）。
【０１１４】
５／６Ｎｘ＋パリカルシトール＋化合物Ｂ
パリカルシトール処置５／６Ｎｘラットへの化合物Ｂを投与は、パリカルシトールを用いて処置された５／６Ｎｘラットと比較して、大動脈ＣａおよびＰ含有量を有意に（ｐ＜０．０５）減少させた。化合物Ｂの投与による大動脈ＣａおよびＰ含有量の減少は、ビヒクル処置されたｓｈａｍ対照（正常レベル）と有意に相違しなかった。パリカルシトールまたは化合物Ｂ処置５／６Ｎｘラット単独と比較した場合、パリカルシトールと化合物Ｂの組み合わせは、さらに有意に（ｐ＜０．０５）血清ＰＴＨレベルを低下させた。化合物Ｂとパリカルシトールの組み合わせで処置したラットは、５／６Ｎｘ＋ビヒクルと比較して、血液イオン化カルシウム、クレアチニンまたは血清Ｐレベルにおいて、変化を示さなかった（表１）。
【実施例４】
【０１１５】
本実施例は、カルシウム擬似薬Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン（化合物Ｂ）が、軟組織のパリカルシトールおよびカルシトリオール仲介ミネラル化を有意に抑制することを示している。
【０１１６】
動物
０．６％Ｃａおよび１．２％Ｐ食餌で飼育したＷｉｓｔａｒラット（２００から２５０ｇ）に５／６腎摘出（５／６Ｎｘ）を行った。ラットは、術後１日目から開始した以下の処置を受けた：５／６Ｎｘ＋ビヒクル、５／６Ｎｘ＋パリカルシトール（２４０ｎｇ／ｋｇ、４８時間毎）もしくはカルシトリオール（８０ｎｇ／ｋｇ、４８時間毎）（腹腔内）、５／６Ｎｘ＋パリカルシトールまたはカルシトリオール＋化合物Ｂ（１．５ｍｇ／ｋｇ、４８時間毎、皮下）または５／６Ｎｘ＋化合物Ｂ（１．５ｍｇ／ｋｇ、４８時間毎、皮下）。１４日後、ラットを麻酔し、屠殺して、組織を除去し、組織学的検査用に処理した（ミネラル化測定用Ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色およびＨ＆Ｅ染色）。
【０１１７】
図１９（上部パネル：Ａ、Ｂ、Ｃ）は、５／６Ｎｘラットへのカルシトリオールの投与が、組織の濃染により明らかなように、心臓（Ａ）、腎臓（Ｂ）、および肺（Ｃ）（これらの組織だけ検査した）におけるミネラル化を増大させたことを示している。
【０１１８】
図１９（下部パネル：Ｄ、Ｅ、Ｆ）は、組織の抑制された濃染により示されるように、カルシトリオール処置５／６Ｎｘラットへの化合物Ｂの投与が、心臓（Ｄ）、腎臓（Ｅ）、および肺（Ｆ）ミネラル化を減少させたことを示している。
【０１１９】
図２０（上部パネル：Ａ）は、組織の濃染から明らかなように、５／６Ｎｘラットへのパリカルシトールのを投与が、腎臓（Ａ）におけるミネラル化を増大させたことを示している。
【０１２０】
図２０（下部パネル：Ｂ）は、組織の濃染の減少から明らかなように、パリカルシトール処置５／６Ｎｘラットへの化合物Ｂの投与が、腎臓（Ｂ）ミネラル化を減少させたことを示している。
【０１２１】
本明細書に記載の全ての公報、特許および特許出願は、各公報または特許出願が個別におよび具体的に本明細書に参照によって取り込まれると記載されているように、参照により取り込まれる。理解の明確性のために例示として少し詳しく前述の発明を説明してきたが、付帯の特許請求の範囲の精神と範囲から逸脱することなく変更および改変をなしうることが、本発明の教示を考慮に入れれば当業者には直ちに明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１２２】
【図１】ラット処置の実験スケジュールを示す図である。
【図２】ＣＫＤラットモデルにおける、イオン化カルシウムの血清レベルを示す図である。
【図３】ＣＫＤラットモデルにおける、リンの血清レベルを示す図である。
【図４】ＣＫＤラットモデルにおける、副甲状腺ホルモンの血清レベルの概略図である。
【図５】ＣＫＤラットモデルにおける、大動脈のカルシウム量を示す図である。
【図６】ＣＫＤラットモデルにおける、大動脈のリン含有量を示す図である。
【図７】ＣＫＤラットモデルにおける、大動脈のＶｏｎ Ｋｏｓｓａ染色切片を示す図である。
【図８】ＣＫＤラットモデルにおける、大動脈のカルシウムおよびリン含有量を示す図である。
【図９】アデニン誘発血管石灰化モデルにおける、ラット処置の実験スケジュールの概略図である。
【図１０】アデニン誘発血管石灰化のスキームを示す図である。
【図１１】ＣＫＤラットモデルにおける、副甲状腺過形成抑制の概略図である。
【図１２】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルの副甲状腺重量変化の概略図である。
【図１３】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルの処置による、血清ＰＴＨ変化を示す図である。
【図１４】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルの処置による、大動脈骨ミネラル密度変化を示す図である。
【図１５】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルにおける、血液尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンに対する処置の効果を示す図である。
【図１６】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルにおける、イオン化カルシウムに対する処置の効果を示す図である。
【図１７】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤにおける、血清リンに対する処置の効果を示す図である。
【図１８】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤにおける、血清Ｃａに対する処置の効果を示す図である。
【図１９】カルシトリオール誘発石灰化を伴う組織に対する、化合物Ｂによる処置の効果を示す図である。
【図２０】パリカルシトール誘発石灰化を伴う組織に対する、化合物Ｂによる処置の効果を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に医療分野に関し、より具体的には石灰化を抑制、治療または予防する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
よく知られおよび慢性腎疾患（ＣＫＤ）の一般の合併症である血管石灰化は、心血管疾患の罹患率および死亡率のリスクを増大させる（Ｇｉａｃｈｅｌｌｉ， Ｃ． Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １５： ２９５９−６４， ２００４； Ｒａｇｇｉ， Ｐ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ３９： ６９５−７０１， ２００２）。ＣＫＤにおける血管石灰化の原因は未だ明らかにされていないが、関連する危険因子は、年齢、性別、高血圧、透析期間、糖尿病およびグルコース不耐症、肥満ならびにタバコの喫煙を含む（Ｚｏｃｃａｌｉ Ｃ． Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １５： ４５４−７， ２０００）。しかしながら、これらの通常の危険因子は、その患者集団における心血管系に起因する高い死亡率を、十分に説明していない。他の要因のうちで、最近の観察研究は、血清中のカルシウムリン生成物（ＣａｘＰ）の増加をもたらす、カルシウムおよびリン代謝における特定の病変が、末期の腎疾患患者の動脈石灰化、およびおそらくは心血管疾患の発症に寄与することを、示唆している（Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｗ． ｅｔ ａｌ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４２： １４７８−８３， ２０００； Ｇｕｅｒｉｎ， Ａ． ｅｔ ａｌ． Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １５：１０１４−２１， ２０００； Ｖａｔｔｉｋｕｔｉ， Ｒ． ＆ Ｔｏｗｌｅｒ， Ｄ． Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ， ２８６： Ｅ６８６−９６， ２００４）。
【０００３】
進行ＣＫＤの他の顕著な特徴は、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）レベルの上昇およびミネラル代謝異常を特徴とする、二次性副甲状腺機能亢進症（ＨＰＴ）である。二次性ＨＰＴ患者において観察される、カルシウム、リン、およびＣａｘＰにおける上昇は、血管石灰化のリスク増加と関連付けられている（Ｃｈｅｒｔｏｗ， Ｇ． ｅｔ ａｌ Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ６２： ２４５−５２， ２００２； Ｇｏｏｄｍａｎ， Ｗ． ｅｔ ａｌ． Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３４２： １４７８−８３， ２０００； Ｒａｇｇｉ， Ｐ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ ３９： ６９５−７０１， ２００２）。カルシウム性リン酸塩結合剤および活性ビタミンＤステロール投与などの、二次性ＨＰＴに対し一般的に用いられる治療介入は、高カルシウム血症および高リン血症をもたらす可能性があり（Ｃｈｅｒｔｏｗ， Ｇ． ｅｔ ａｌ． Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ６２： ２４５−５２， ２００２； Ｔａｎ， Ａ． ｅｔ ａｌ． Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ５１： ３１７−２３， １９９７； Ｇａｌｌｉｅｎｉ， Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ４２： １１９１−８， １９９２）、これらは、血管石灰化の発症または増悪と関連している。
【０００４】
血管石灰化は、重要および重篤となる可能性のある慢性腎不全の合併症である。２つの異なる血管石灰化のパターンが特定されており（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ， Ｄ ＆ Ｓｈａｎａｈａｎ， Ｃ． Ｈｅｒｚ ２６： ２４５−５１， ２００１）、尿毒症患者において両方の種類が存在することが一般的である（Ｃｈｅｎ， Ｎ． ＆ Ｍｏｅ， Ｓ． Ｓｅｍｉｎ Ｎｅｐｈｒｏｌ ２４： ６１−８， ２００４）。まず、中膜石灰化は、平滑筋細胞の骨芽細胞様細胞への形質転換に伴い血管の中膜で生じ、他方、アテローム発生は、泡沫化マクロファージおよび内膜過形成と関連している。
【０００５】
中膜壁石灰化は、慢性腎不全のある比較的若年者において発症する可能性があり、および糖尿病患者においては、腎疾患が存在しない場合においても普通に見られる。動脈の中膜壁におけるカルシウムの存在により、この種類の血管石灰化は、アテローム性動脈硬化症に関連する血管石灰化から区別される（Ｓｃｈｉｎｋｅ Ｔ． ＆ Ｋａｒｓｅｎｔｙ Ｇ． Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １５： １２７２−４， ２０００）。アテローム硬化性血管石灰化は、動脈の内膜層に沿ったアテローム斑で生じる（Ｆａｒｚａｎｅｈ−Ｆａｒ Ａ． ＪＡＭＡ ２８４： １５１５−６， ２０００）。石灰化は通常、大きな、進行した病変において最も顕著であり、および年齢と共に増大する（Ｗｅｘｌｅｒ Ｌ． ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９４： １１７５−９２， １９９６； Ｒｕｍｂｅｒｇｅｒ Ｊ． ｅｔ ａｌ． Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎ Ｐｒｏｃ １９９９； ７４： ２４３−５２．）。アテローム性動脈硬化症のある患者における動脈石灰化の範囲は、一般に疾患の重篤度に対応する。中膜壁石灰化と異なり、アテローム性血管病変は、カルシウムを含有するか否かにかかわらず、動脈内腔を侵害し、血流に障害を生じさせる。アテローム斑へのカルシウムの局所沈着は、酸化脂質および他の酸化ストレスによる炎症ならびに単球およびマクロファージによる浸潤が原因で生じる可能性がある（Ｂｅｒｌｉｎｅｒ Ｊ． ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９１ ： ２４８８−９６， １９９５）。
【０００６】
末期の腎疾患患者の一部は、カルシフィラキシー形成または尿毒症性動脈石灰化と呼ばれる重篤な閉塞性動脈疾患を発症する。この症候群は、小動脈における多数のカルシウム沈着を特徴とする（Ｇｉｐｓｔｅｉｎ Ｒ． ｅｔ ａｌ． Ａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ １３６： １２７３−８０， １９７６； Ｒｉｃｈｅｎｓ Ｇ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ａｃａｄ Ｄｅｒｍａｔｏｌ． ６： ５３７−９， １９８２）。この疾患のある患者において、動脈石灰化および血管閉塞は、組織の虚血および壊死をもたらす。末梢血管の関与は、下肢の皮膚の潰瘍または足もしくは手の指の壊疽をひきおこし得る。腹壁、大腿部および／または臀部の皮膚および皮下脂肪組織の虚血および壊死は、尿毒症性動脈石灰化の近位部の特徴である（Ｂｕｄｉｓａｖｌｊｅｖｉｃ Ｍ． ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ． ７： ９７８−８２， １９９６； Ｒｕｇｇｉａｎ Ｊ． ｅｔ ａｌ Ａｍ Ｊ Ｋｉｄｎｅｙ Ｄｉｓ ２８： ４０９−１４， １９９６）。この症候群は、肥満個体においてより頻繁に生じ、および明確でない理由によって、女性のほうが男性よりもより多く冒される（Ｇｏｏｄｍａｎ Ｗ． Ｊ． Ｎｅｐｈｒｏｌ． １５（６）： Ｓ８２−Ｓ８５， ２００２）。
【０００７】
血清ミネラルレベルを正常化する最新治療、または血管組織もしくはインプラントの石灰化を抑制、阻害もしくは予防する最新治療は、限られた効力のものであり、許容しがたい副作用をひきおこす。従って、血管石灰化を阻害および予防する効果的な方法の必要性が、存在する。
【発明の開示】
【０００８】
（発明の概要）
本発明は、対象にカルシウム擬似化合物の治療的有効量を投与することを含む、対象における血管石灰化を阻害、抑制または予防する方法を提供する。一態様において、血管石灰化は、アテローム性硬化性石灰化であり得る。もう１つの態様において、血管石灰化は中膜石灰化であり得る。
【０００９】
一態様において、対象は、慢性腎不全対象または末期の腎疾患に罹患していることがある。もう１つ態様において、対象は、透析前であり得る。更なる態様において、対象は尿毒症に罹患していることがある。もう１つの態様において、対象は、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病に罹患していることがある。もう１つの対象において、対象は、心血管疾患に罹患していることがある。一態様において、対象はヒトであり得る。
【００１０】
一態様において、カルシウム擬似化合物は、式Ｉの化合物：
【００１１】
【化３】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は同一であっても異なっていてもよく、それぞれは、ＣＨ３、ＣＨ３Ｏ、ＣＨ３ＣＨ２Ｏ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＦ３Ｏ、ＣＨ３Ｓ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＨ３ＣＨ２、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、アセトキシおよびアセチル基から選択される基であり、または２つのＸ１が、一緒になって、縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、または２つのＸ２が、一緒になって、縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、ただしＸ２は、３−ｔ−ブチル基でなく；
ｎは、０から５の範囲であり；
ｍは、１から５の範囲であり；ならびに
アルキル基は、飽和および不飽和の直鎖、分枝鎖および環状Ｃ１〜Ｃ９アルキル基、ジヒドロインドリルおよびチオジヒドロインドリル基、ならびに２−、３−、および４−ピペリジニル基から選択される少なくとも１つの基で場合により置換されていてよいＣ１〜Ｃ３アルキル基から選択される。］
またはこの薬学的に許容できる塩であることができる。
【００１２】
一態様において、本発明の方法に使用されるカルシウム擬似化合物は、Ｎ−（３−［２−クロロフェニル］−プロピル）−Ｒ−α−メチル−３−メトキシベンジルアミンまたはその薬学的に許容できる塩であることができる。
【００１３】
もう１つの態様において、カルシウム擬似化合物は、式ＩＩの化合物：
【００１４】
【化４】
［式中、
Ｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
Ｒ２は、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
記載されている各Ｒ５は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＲｄ、−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＮＲｄＲｄ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＮＲｄＲｄまたは−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒｄからなる群から独立して選択され；
Ｒ６は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
各Ｒａは、独立して、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
各Ｒｂは、独立して、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、このそれぞれは、非置換であるか、またはアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノおよびニトロからなる群から選択される３までの置換基により置換されていてよく；
各Ｒｃは、独立して、アルキル、ハロアルキル、フェニルまたはベンジルであり、そのそれぞれは非置換であるかまたは置換されていてよく；
各Ｒｄは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、ここで、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキルは、アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノ、ニトロ、Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｎＲｃおよび−Ｓ（＝Ｏ）ｎＮＲａＲａから選択される０、１、２、３または４置換基により置換されており；
ｍは、１または２であり；
ｎは、０、１または２であり；ならびに
ｐは、０、１、２、３または４である；
ただし、Ｒ２がメチルであり、ｐが０であり、Ｒ６が非置換フェニルである場合、Ｒ１は、２，４−ジハロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，４−ジエチルフェニル、２，４，６−トリハロフェニルまたは２，３，４−トリハロフェニルでない。］
またはこの薬学的に許容できる塩であることができる。
【００１５】
一態様において、本発明の方法において使用されるカルシウム擬似化合物は、Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン、またはこの薬学的に許容できる塩であることができる。
【００１６】
一態様において、カルシウム擬似化合物は、シナカルセットＨＣｌであることができる。
【００１７】
一態様において、本発明は、対象にビタミンＤステロールが前もって投与されている、血管石灰化の阻害、抑制、または予防方法を提供する。
【００１８】
一態様において、ビタミンＤステロールは、カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトールまたはパリカルシトールであることができる。一態様において、カルシウム擬似化合物は、ビタミンＤステロールの投与の前または後に投与され得る。一態様において、カルシウム擬似化合物は、ビタミンＤステロールと組み合わせて投与され得る。
【００１９】
一態様において、カルシウム擬似化合物は、ＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）と組み合わせて投与され得る。
【００２０】
本発明はさらに、対象にカルシウム擬似化合物の治療的有効量を投与することを含む、対象における血清クレアチニンレベルを低下させる方法を提供する。一態様において、対象は、ビタミンＤステロールの投与により上昇した血清クレアチニンレベルを被ることがある。
【００２１】
（発明の詳細な説明）
Ｉ．概要
本発明は、血管石灰化を抑制、阻害、または予防する方法に関する。
【００２２】
ＩＩ．定義
本明細書において、「血管石灰化」は、血管における細胞外マトリックスハイドロキシアパタイト（リン酸カルシウム）の結晶沈着の生成、成長または沈着を意味する。血管石灰化は、冠動脈、心臓弁膜、大動脈、および他の血管の石灰化を含む。この用語は、アテローム性硬化性石灰化および中膜壁石灰化を含む。
【００２３】
「アテローム性硬化性石灰化」は、動脈の内膜層に沿ったアテローム斑に生じる血管石灰化を意味する。
【００２４】
「中膜石灰化」、「中膜壁石灰化」、または「メンケベルグ硬化症」は、本明細書において、動脈の中膜壁におけるカルシウムの存在を特徴とする石灰化を意味する。
【００２５】
用語「治療」または「治療すること」は、必要とする患者に、病的血管石灰化状態の発生を阻害、抑制または後退させるカルシウム擬似化合物の量の投与を含む。血管石灰化を阻害することに関連する「阻害すること」は、細胞外マトリックスハイドロキシアパタイトの結晶沈着の生成、成長または沈着を予防、遅延、または後退させることを意味する。本明細書において、疾病および疾患の治療は、本発明の化合物（またはその医薬塩、誘導体もしくはプロドラッグ）または前記化合物を含有する医薬組成物の、例えば、疼痛、炎症などの予防処置が必要と考えられる対象（すなわち、動物、例えばヒトなどの哺乳動物）への治療的投与もまた含むことを、意図する。治療はまた、必要であると診断されていない対象に、化合物または医薬組成物を投与すること、すなわち対象への予防的投与も含む。一般に、対象は、最初に医師免許を有する医師および／または認可された医師により診断を受け、本発明の化合物（単数または複数）または組成物の投与による予防処置および／または治療処置の計画が示唆、推奨または処方される。
【００２６】
用語「治療的有効量」は、疾患の重症度および発生頻度における改善の目標を達成するカルシウム擬似化合物の量を意味する。疾患の重症度における改善は、血管石灰化を後退させること、並びに血管石灰化の進行を遅延させることを含む。一態様において、「治療的有効量」は、血清クレアチニンレベルを低下させるかまたは血清クレアチニンレベルにおける上昇を抑制するカルシウム擬似化合物の量を意味する。
【００２７】
用語本明細書において、「対象」は、石灰化を発症もしくはこのリスクを有する、ヒトまたは他の哺乳動物を意味することを意図する。このような個体は、例えば、アテローム性動脈硬化症などの状態を伴う血管石灰化、狭窄、再狭窄、腎不全、糖尿病、補装具埋め込み、組織損傷または加齢に伴う血管疾患を発症しているか、またはそのリスクを有する。これらの予後および臨床適応は、当分野で公知である。本発明の方法により治療をうける個体は、例えば、糖尿病、慢性腎疾患、腎不全、腎臓移植または腎透析に付随する全身性のミネラル不均衡を有することがある。
【００２８】
血管石灰化に関連するヒトアテローム性動脈硬化症、腎不全、高リン血症、糖尿病、加齢に伴う血管石灰化および他の状態の信頼できる指標となる動物モデルは、当分野で公知である。例えば、血管壁の石灰化の実験モデルは、Ｙａｍａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ， Ｅｘｐ． Ｐａｔｈ． ２５： １８５−１９０， １９８４に記載されている。
【００２９】
ＩＩＩ．カルシウム擬似化合物およびこれを含む医薬組成物、投与ならびに投与量
本明細書において、「カルシウム擬似化合物」という用語は、カルシウム感受性受容体に結合し、および内因性リガンドＣａ２＋によるカルシウム感受性受容体活性化に対する閾値を低下させるコンフォメーション変化を引き起こし、それにより副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）の分泌を抑える化合物を指す。これらのカルシウム擬似化合物は、カルシウム受容体のアロステリックモジュレーターとみなすこともできる。
【００３０】
本発明に有用なカルシウム擬似化合物は、例えば、ヨーロッパ特許第９３３３５４号および第１２３５７９７号；国際公開番号ＷＯ０１／３４５６２号、ＷＯ９３／０４３７３号、ＷＯ９４／１８９５９号、ＷＯ９５／１１２２１号、ＷＯ９６／１２６９７号、ＷＯ９７／４１０９０号；米国特許第５，６８８，９３８号、第５，７６３，５６９号、第５，９６２，３１４号、第５，９８１，５９９号、第６，００１，８８４号、第６，０１１，０６８号、第６，０３１，００３号、第６，１７２，０９１号、第６，２１１，２４４号、第６，３１３，１４６号、第６，３４２，５３２号、第６，３６２，２３１号、第６，４３２，６５６号、第６，７１０，０８８号、第６，９０８，９３５号ならびに米国特許出願公開第２００２／０１０７４０６号に開示されているものを含む。
【００３１】
特定の実施形態において、カルシウム擬似化合物は、式Ｉの化合物およびこの薬学的に許容できる塩：
【００３２】
【化５】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は同一であっても異なっていてもよく、それぞれは、ＣＨ３、ＣＨ３Ｏ、ＣＨ３ＣＨ２Ｏ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＦ３Ｏ、ＣＨ３Ｓ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＨ３ＣＨ２、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、アセトキシおよびアセチル基から選択される基であり、または２つのＸ１が、一緒になって縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、または２つのＸ２が、一緒になって、縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、ただしＸ２は３−ｔ−ブチル基でなく；
ｎは０から５の範囲であり；
ｍは１から５の範囲であり；ならびに
アルキル基は、飽和および不飽和の直鎖、分枝鎖および環状Ｃ１〜Ｃ９アルキル基、ジヒドロインドリルおよびチオジヒドロインドリル基、ならびに２−、３−、および４−ピペリジ（ニ）ル基から選択される少なくとも１つの基で場合により置換されていてよいＣ１〜Ｃ３アルキル基から選択される。］
から選択される。
【００３３】
カルシウム擬似化合物はまた、式ＩＩの化合物：
【００３４】
【化６】
［式中、
Ｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
Ｒ２は、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
記載されている各Ｒ５は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＲｄ、−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＮＲｄＲｄ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＮＲｄＲｄまたは−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒｄからなる群から独立して選択され；
Ｒ６は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
各Ｒａは、独立して、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
各Ｒｂは、独立して、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、このそれぞれは、非置換であるか、またはアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノおよびニトロからなる群から選択される３までの置換基により置換されていてよく；
各Ｒｃは、独立して、アルキル、ハロアルキル、フェニルまたはベンジルであり、そのそれぞれは、置換されているかまたは非置換であってよく；
各Ｒｄは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、ここで、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキルは、アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノ、ニトロ、Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｎＲｃおよび−Ｓ（＝Ｏ）ｎＮＲａＲａから選択される０、１、２、３または４置換基により置換されており；
ｍは、１または２であり；
ｎは、０、１または２であり；ならびに
ｐは、０、１、２、３または４である；
ただし、Ｒ２がメチルであり、ｐが０であり、Ｒ６が非置換フェニルである場合、Ｒ１は、２，４−ジハロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，４−ジエチルフェニル、２，４，６−トリハロフェニルまたは２，３，４−トリハロフェニルでない。］
およびこの薬学的に許容できる塩から選択されることもできる。これらの化合物は、米国特許出願第２００４００８２６２５号に詳細に記載されており、これは、本明細書に、参照として組み込まれる。
【００３５】
本発明の一態様において、式ＩＩの化合物は、式：
【００３６】
【化７】
を有することができる。
【００３７】
本発明の特定の実施形態において、カルシウム擬似化合物は、式ＩＩＩの化合物：
【００３８】
【化８】
［式中、
【００３９】
【化９】
は、二重結合または単結合を表し；
Ｒ１は、Ｒｂであり；
Ｒ２は、Ｃ１−８アルキルまたはＣ１−４ハロアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−８アルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−４アルキルであり；
Ｒ５は、独立して、それぞれの場合、Ｈ、Ｃ１−８アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、ハロゲン、−ＯＣ１−６アルキル、−ＮＲａＲｄまたはＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒｄであり；
Ｘは、−ＣＲｄ＝Ｎ−、−Ｎ＝ＣＲｄ−、Ｏ、Ｓまたは−ＮＲｄ−であり；
【００４０】
【化１０】
が二重結合の場合、Ｙは＝ＣＲ６−または＝Ｎ−であり、およびＺは−ＣＲ７＝または−Ｎ＝であり；および
【００４１】
【化１１】
が単結合の場合、Ｙは−ＣＲａＲ６−または−ＮＲｄ−であり、およびＺは−ＣＲａＲ７−または−ＮＲｄ−であり；および
Ｒ６は、Ｒｄ、Ｃ１−４ハロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＣ１−６アルキル、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、シアノ、ニトロ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｍＲｃまたは−Ｓ（＝Ｏ）ｍＮＲａＲａであり；
Ｒ７は、Ｒｄ、Ｃ１−４ハロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＣ１−６アルキル、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、シアノ、ニトロ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｍＲｃまたは−Ｓ（＝Ｏ）ｍＮＲａＲａであり；またはＲ６およびＲ７は一緒になって、０、１、２または３Ｎ原子ならびにＳおよびＯから選択される０、１または２原子を含有する３から６原子の飽和または不飽和の架橋を形成し、ここで該架橋は、Ｒ５から選択される０、１または２置換基により置換されており；ここでＲ６およびＲ７が、ベンゾ架橋を形成する場合、ベンゾ架橋は、ＮおよびＯから選択される１または２原子を含有する３または４原子架橋によりさらに置換されていてよく、ここで該架橋は、Ｃ１−４アルキルから選択される０または１置換基により置換されており；
Ｒａは、独立して、それぞれの場合、Ｈ、Ｃ１−４ハロアルキルまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒｂは、独立して、それぞれの場合、フェニル、ベンジル、ナフチル、またはＮ、ＯおよびＳから選択され、２以下の原子がＯおよびＳから選択される１、２または３原子を含有する飽和または不飽和の５または６員環複素環であり、ここでフェニル、ベンジルまたは複素環は、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、Ｃ１−４ハロアルキル、−ＯＣ１−６アルキル、シアノおよびニトロから選択される０、１、２または３置換基により置換されており；
Ｒｃは、独立して、それぞれの場合、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−４ハロアルキル、フェニルまたはベンジルであり；
Ｒｄは、独立して、それぞれの場合、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、フェニル、ベンジルまたはＮ、ＯおよびＳから選択され、２以下の原子が、ＯおよびＳから選択される１、２または３原子を含有する飽和または不飽和の５から６員環複素環であり、ここでＣ１−６アルキル、フェニル、ベンジル、ナフチルおよび複素環は、Ｃ１−６アルキル、ハロゲン、Ｃ１−４ハロアルキル、−ＯＣ１−６アルキル、シアノおよびニトロ、Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｍＲｃおよび−Ｓ（＝Ｏ）ｍＮＲａＲａから選択される０、１、２、３または４置換基により置換されており；ならびに
ｍは、１または２である。］
およびこの薬学的に許容できる塩から選択され得る。
【００４２】
式ＩＩＩの化合物は、米国特許出願第２００４００７７６１９号に詳しく記載されている（これは、参照により本明細書に組み込まれる。）。
【００４３】
一態様において、カルシウム擬似化合物は、Ｎ−（３−［２−クロロフェニル］−プロピル）−Ｒ−α−メチル−３−メトキシベンジルアミン・ＨＣｌ（化合物Ａ）である。もう１つの態様において、カルシウム擬似化合物は、Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン（化合物Ｂ）である。
【００４４】
本発明の方法において有用なカルシウム擬似化合物は、前述のカルシウム擬似化合物、並びにこの立体異性体、鏡像異性体、多型体、水和物および前述のいずれかの薬学的に許容できる塩を含む。
【００４５】
本発明において有用なカルシウム擬似化合物は、無機酸または有機酸から誘導される薬学的に許容できる塩の形態において使用され得る。これらの塩は、限定するものではないが、以下：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、２−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラート、メシレートおよびウンデカン酸塩を含む。本発明の化合物がカルボキシ基などの酸性官能基を含む場合、カルボキシ基の薬学的に許容できる適した塩は当業者に公知であり、例えば、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、第四級アンモニウムカチオンなどを含む。「薬理学的に許容できる塩」のさらなる例については、下記およびＢｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃｉ． ６６： １、１９７７ を参照されたい。本発明のある実施形態において、塩酸塩およびメタンスルホン酸の塩が、使用され得る。
【００４６】
本発明のいくつかの態様において、カルシウム受容体活性化合物は、シナカルセット（すなわち、Ｎ−（１−（Ｒ）−（１−ナフチル）エチル）−３−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−１−アミノプロパン）、シナカルセットＨＣｌ、およびメタンスルホン酸シナカルセットから選択され得る。シナカルセットＨＣｌおよびメタンスルホン酸シナカルセットなどのカルシウム擬似化合物は、非晶質粉末、結晶性粉末、およびこれらの混合物などの種々の形態であることができる。結晶性粉末は、多型体、擬多形体、晶癖、粉体組成物、および粒子形態を含む形態であることができる。
【００４７】
投与のために、本発明の化合物は、指示された投与経路に適した１以上のアジュバントと通常組み合わされる。本化合物は、通常の投与のために、ラクトース、ショ糖、デンプン粉、アルカン酸のセルロースエステル、ステアリン酸、タルク、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸および硫酸のナトリウムならびにカルシウム塩、アカシアゴム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリジン、および／またはポリビニルアルコールと混合され、および錠剤化またはカプセル化され得る。或いは、本発明の化合物は、生理食塩水、水、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、エタノール、コーン油、落花生油、綿実油、ゴマ油、トラガントゴム、および／または種々の緩衝液に溶解され得る。他のアジュバントおよび投与方法は、医薬品業界において公知である。担体または希釈剤は、単独のまたはワックスと混合したモノステアリン酸グリセリルもしくはジステアリン酸グリセリル、または当業界に公知の他の原料などの時間遅延物質を含むことができる。
【００４８】
本医薬組成物は、固体形態（顆粒、粉末剤または座剤を含む）または液体形態（例えば、溶液、懸濁液またはエマルジョン）で製造することができる。本医薬組成物は、滅菌などの通常の製剤操作に供することができ、および／または防腐剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝液などの通常のアジュバントを含有することができる。
【００４９】
経口投与用固体剤形は、カプセル、錠剤、丸薬、粉末剤および顆粒を含むことができる。このような固体剤形において、活性化合物は、ショ糖、ラクトースまたはデンプンなどの少なくとも１つの不活性希釈剤と混合され得る。このような剤形はまた、通常の慣行に従って、例えばステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤などの不活性希釈剤以外の他の追加物質を含むことができる。カプセル、錠剤および丸薬の場合において、剤形は、緩衝化剤を含むこともできる。錠剤および丸薬は、腸溶性コーティングを用いてさらに調製され得る。
【００５０】
経口投与用液体剤形は、水などの当分野で一般的に用いられる不活性希釈剤を含有する薬学的に許容できるエマルジョン、溶液、サスペンジョン、シロップおよびエリキシル剤を含むことができる。このような組成物は、湿潤剤、甘味剤、風味剤および香料などのアジュバントを含むこともできる。
【００５１】
本明細書に開示されている組成物におけるカルシウム受容体活性化合物の治療的有効量は、対象あたりカルシウム擬似化合物の約１ｍｇから約３６０ｍｇ、例えば約５ｍｇから約２４０ｍｇ、または約２０ｍｇから約１００ｍｇの範囲である。いくつかの態様において、組成物におけるシナカルセットＨＣｌまたは他のカルシウム擬似化合物の治療的有効量は、約５ｍｇ、約１５ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約９０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約３００ｍｇまたは約３６０ｍｇから選択することができる。
【００５２】
カルシウム擬似化合物を単独で対象に投与することは可能であり得るが、本化合物は、通常、医薬組成物中の活性成分として存在している。従って、本発明の医薬組成物は、少なくとも１つのカルシウム擬似化合物の治療的有効量、または少なくとも１つのカルシウム擬似化合物の有効投与量を含むことができる。
【００５３】
本明細書において、「有効投与量」は、単回投与、複数回投与または部分投与として提供される場合、カルシウム擬似化合物の治療的有効量を提供する量である。従って、例えば、化合物の有効量を投与するために錠剤、カプセルにおけるの２以上の単位投与量が必要とされる医薬組成物、または代替的に、カルシウム擬似化合物の有効量が組成物の一部を投与することにより投与される粉末剤、液体などの複数回投与医薬組成物などの本発明のカルシウム擬似化合物の有効投与量は、化合物の有効量よりも少ない、と等しい、またはよりも多い量を含む。
【００５４】
或いは、カルシウム擬似化合物の有効量を投与するために錠剤、カプセルにおけるの２以上の単位投与量が必要とされる医薬組成物は、例えば個々の対象についての有効量を確実にするために、潜在的な副作用に対する個々の対象の感受性を減ずるために、または個々の対象に投与された-１以上の他の治療剤の再調整または減少する有効投与を可能にするなどのために、１以上の期間（例えば、１日１回投与、および１日２回投与）について有効量以下で投与することが可能である。
【００５５】
本明細書に記載の医薬組成物の有効投与量は、単位剤形中の約１ｍｇから約３６０ｍｇの範囲であり、例えば単位剤形中の約５ｍｇ、約１５ｍｇ、約３０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７５ｍｇ、約９０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約３００ｍｇまたは約３６０ｍｇである。
【００５６】
本発明のいくつかの態様において、本明細書に開示されている組成物は、血管石灰化の治療または予防のためのカルシウム擬似化合物の治療的有効量を含む。例えば、ある実施形態において、シナカルセットＨＣｌなどのカルシウム擬似化合物は、組成物の全重量に対し重量比で約１％から約７０％（約５％から約４０％、約１０％から約３０％または約１５％から約２０％など）の範囲の量で存在し得る。
【００５７】
本発明の組成物は、カルシウム擬似化合物に加えて１以上の活性成分を含有することができる。追加の活性成分は、他のカルシウム擬似化合物であってよく、または異なる治療活性を有する活性成分であってよい。このような追加の活性成分の例は、例えば、ビタミンＤおよびその類似体（この類似体は、カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトールおよびパリカルシトールなどのビタミンＤステロールを含む。）などのビタミンおよびその類似体、抗生物質、炭酸ランタン、ＬＩＰＩＴＯＲ（登録商標）などの脂質低下薬、降圧薬、抗炎症薬（ステロイド系および非ステロイド系）、炎症性サイトカインの阻害剤（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）、ＫＩＮＥＲＥＴ（登録商標））、および循環器薬を含む。組み合わせで投与する場合、治療剤を、同時もしくは異なる時間に投与される別々の組成物として製剤化でき、または治療剤を、単一の組成物として投与できる。
【００５８】
組み合わせ療法の一態様において、本発明の組成物は、ビタミンＤステロールおよび／またはＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）と共に使用され得る。一態様において、本発明の組成物は、ビタミンＤステロールおよび／またはＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）の投与の前に投与され得る。もう１つの態様において、本発明の組成物は、ビタミンＤステロールおよび／またはＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）と同時に投与され得る。更なる態様において、本発明の組成物は、ビタミンＤステロールおよび／またはＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）の投与の後に投与され得る。本発明の組み合わせ療法を用いる病状の治療のための投与計画は、患者の種類、年齢、体重、性別および病状、疾患の重篤度、投与経路および用いられる特定の化合物を含む種々の因子に従い選択され、従って大きく変化し得る。
【００５９】
ＩＶ．血管石灰化の評価
血管石灰化を検出し測定する方法は、当業界において公知である。一態様において、石灰化を測定する方法は、血管におけるカルシウム−リン沈着の範囲を直接検出および測定する方法を含む。
【００６０】
一態様において、血管石灰化を直接測定する方法は、単純Ｘ線フィルム撮影、冠動脈造影法などのインビボ画像法；デジタル差分Ｘ線透視を含むＸ線透視；シネ蛍光写真法；通常の、ヘリカルおよび電子ビームコンピュータ断層撮影法；血管内超音波（ＩＶＵＳ）；磁気共鳴画像法；ならびに経胸腔および経食道心エコー検査を含む。Ｘ線透視およびＥＢＣＴは、非侵襲的に石灰化を検出するために最も一般に用いられ、一方、シネ蛍光写真法およびＩＶＵＳは、血管形成術の前に、特定の病変における石灰化を評価するために冠動脈インターベンショナリストにより使用される。
【００６１】
一態様において、血管石灰化は、単純Ｘ線フィルム撮影により検出され得る。この方法の利点は、フィルムの利用が可能であることおよびこの方法のコストの低さであるが、不利な点はその感度の低さである（Ｋｅｌｌｅｙ Ｍ． ＆ Ｎｅｗｅｌｌ Ｊ． Ｃａｒｄｉｏｌ Ｃｌｉｎ． １： ５７５−５９５， １９８３）。
【００６２】
もう１つの態様において、Ｘ線透視は冠動脈における石灰化を検出するために使用できる。Ｘ線透視により、中程度から大きい石灰化を検出できるが、小さな石灰化沈着物を検出する能力は低い（Ｌｏｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ． １９： １１６７−１１７２， １９９２）。Ｘ線透視は、入院患者および外来患者環境の両方において広く利用可能であり、比較的安価であるが、いくつかの不都合な点を有する。低度から中程度までのみの感度に加えて、Ｘ線透視によるカルシウムの検出は、技師の技術および経験、並びに検査する撮影数に依存する。他の重要な要素は、透視装置のばらつき、患者の体型、椎骨および弁輪などの構造における、表面を覆う解剖構造および表面を覆う石灰化を含む。Ｘ線透視を用いてでは、カルシウムの透視の定量化が可能でなく、およびフィルムの文書化は、通常得られない。
【００６３】
さらにもう１つの態様において、血管検出は、通常のＸ線コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）により検出され得る。カルシウムは、Ｘ線ビームを減衰するので、Ｘ線コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）は、血管石灰化を検出することにおいてきわめて感度がよい。通常のＣＴは、冠動脈石灰化の検出のために、Ｘ線透視よりも優れた性能があると考えられるが、その限界は、モーションアーチファクト、体積平均、呼吸によるミスレジストレーションおよびプラーク量の定量の不能をもたらす遅いスキャン時間である（Ｗｅｘｌｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９４： １１７５− １１９２， １９９６）。
【００６４】
更なる態様において、石灰化は、ヘリカルまたはスパイラルコンピュータ断層撮影により検出され得、これは、通常のＣＴよりもかなり速いスキャン時間を有する。重複スライスも、カルシウムの検出を改善する。Ｓｈｅｍｅｓｈらは、冠動脈造影上有意な冠動脈閉塞性疾患と比較する場合、９１％の感度および５２％の特異度を有するヘリカルＣＴによる冠動脈カルシウム画像を報告した（Ｓｈｅｍｅｓｈ ｅｔ ａｌ． Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ １９７： ７７９−７８３、１９９５）。ただし、他の予備的データは、これらの加速されたスキャン時間でも、および特にシングルヘリカルＣＴを用いても、石灰化沈着物が心拍動のために不鮮明になり、小さな石灰化は見えなくなり得ることを示している（Ｂａｓｋｉｎ ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９２（ｓｕｐｐｌ Ｉ）： Ｉ−６５１、１９９５）。従って、ヘリカルＣＴは、石灰化の検出においてＸ線透視および通常のＣＴよりも依然として優れている。ダブルへリックスＣＴスキャナーは、冠動脈石灰化の検出において、そのより高い解像度およびそのより薄いスライス機能により、シングルへリックススキャナーよりもより感度が高いと考えられる（Ｗｅｘｌｅｒ ｅｔ ａｌ、上記を参照）。
【００６５】
もう１つの態様において、血管石灰化の検出のために電子ビームコンピュータ断層撮影法（ＥＢＣＴ）が、使用され得る。ＥＢＣＴは、Ｘ線を発生させるために標準のＸ線管でなく電子銃および静止したタングステン「標的」を使用し、大変速いスキャン時間を可能にする。当初はシネまたは超高速ＣＴと呼ばれたが、最新のスパイラルスキャナーもまたサブセカンドスキャン時間を達成しているので、現在は標準ＣＴスキャンと区別するためにＥＢＣＴという用語が使用されている。冠動脈カルシウムを検出するために、ＥＢＣＴ画像は、３ｍｍのスキャンスライス厚を用い、１００ｍｓで測定される。テーブル増分により３０から４０の隣接するアキシャルスキャンが得られる。スキャンは、通常１回か２回の異なる息止めシーケンスの間に取得されるが、心拍動の影響を最小限にするために、拡張末期付近および心房収縮前に８０％のＲＲインターバルの心電図信号により行う。速い画像収集時間は、心収縮に関連するモーションアーチファクトを実質的に除く。冠動脈において、動脈周囲脂肪より低いＣＴ密度が、血液に対して著しい対照を成すため、混濁していない冠動脈はＥＢＣＴにより容易に特定され、一方、壁在性カルシウムは、血液に対して高いＣＴ密度を有するため、明白である。さらに、スキャナーソフトウェアによりカルシウム面積および密度の定量化が可能になる。Ｘ線減弱係数、またはハウンズフィールド単位で測定したＣＴ値、および石灰化沈着物の面積に基づく自由裁量による採点法が考案されている（Ａｇａｔｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ． １５：８２７−８３２， １９９０）。冠動脈カルシウムのスクリーニング検査は、１０分か１５分以内に終了され得、わずか数秒のスキャン時間を必要とするのみである。電子ビームＣＴスキャナーは、通常のＣＴスキャナーまたはスパイラルＣＴスキャナーよりも高価であり、比較的少数の施設において利用可能である。
【００６６】
一態様において、血管内超音波（ＩＶＵＳ）は、血管石灰化、特に、冠動脈アテローム性動脈硬化症の検出に使用され得る（Ｗａｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ８５： ２３０５−２３１０、１９９２）。カテーテルの先端に回転型反射器を搭載したトランスデューサーを使用することにより、心臓カテーテル法の最中に冠動脈の断面画像診断画像を得ることが可能である。ソノグラムは、動脈内腔についてのみでなく、動脈壁の厚さおよび組織性状についても情報を提供する。石灰化は陰影を伴う高エコー域に見られ、繊維性非石灰化プラークは陰影を伴わない高エコー域に見られる（Ｈｏｎｙｅ ｅｔ ａｌ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｍｅｄ． １： ３０５−３１１、１９９１）。ＩＶＵＳの使用における不都合は、他の画像モダリティと対照的に、侵襲性であり、現在のところ、選択的冠動脈造影と共にのみ作動し、および冠動脈枝の限定された部位のみ視覚化することである。侵襲性ではあるが、冠動脈造影検査において正常所見を示す患者におけるアテローム性病変の関与を示すことができ、およびバルーン血管形成術およびアテローム切除装置の選択の前に狭窄病変の形態学的性状を明らかにするのに役立つ（Ｔｕｚｃｕ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｍ Ｃｏｌｌ Ｃａｒｄｉｏｌ． ２７： ８３２−８３８， １９９６）。
【００６７】
もう１つの態様において、血管石灰化は、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）により測定され得る。しかしながら、および冠動脈石灰化を検出するＭＲＩの能力は、いくぶん限定されている。微小石灰化は、大量の軟組織を含有するボクセルの信号強度を実質的に変化させないので、このようなカルシウム蓄積における正味のコントラストは低い。従って、少量の石灰化のＭＲＩ検出は困難であり、冠動脈石灰化の検出におけるＭＲＩの報告または期待される役割はない（Ｗｅｘｌｅｒ ｅｔ ａｌ．、上記を参照）。
【００６８】
他の態様において、血管石灰化は、経胸壁（表面）心エコー検査により測定され得、これは、僧帽弁および大動脈心臓弁膜の石灰化の検出に対して特に感度が高い。しかしながら、利用制約された外部音響窓のため、冠動脈の透視の報告はほとんどない。近位冠動脈を可視化できることの多い経食道心エコー検査は、広く利用可能な方法である（Ｋｏｈ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ． ４３： ２０２−２０６， １９９４． Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ ｅｔ ａｌ． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ８８： ２５３２−２５４０， １９９３）。
【００６９】
もう１つの態様において、血管石灰化は、Ｖａｎ Ｋｏｓｓａの方法によりエクスビボで評価され得る。この方法は、銀イオンが、電気化学列におけるその相対的位置により炭酸イオンまたはリン酸イオンにより溶液から置換されうるという原理に基づく。嗜銀性反応は、本来、光化学反応であり、その活性化エネルギーは、強い可視光または紫外光から供給される。組織の炭酸イオンまたはリン酸イオンの実証される形態は、常にカルシウムイオンに付随しているので、この方法は、組織のカルシウム沈着部位を明らかにすると考えることができる。
【００７０】
石灰化を直接測定する他の方法は、限定するものではないが、蛍光抗体染色およびデンシトメトリーを含み得る。もう１つの態様において、血管石灰化を評価する方法は、血管石灰化の決定要因および／または危険因子を測定する方法を含む。このような因子は、限定するものではないが、リンの血清レベル、カルシウムおよびカルシウム×リン生成物、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、低密度リポタンパクコレステロール（ＬＤＬ）、高密度リポタンパクコレステロール（ＨＤＬ）、トリグリセリド、ならびにクレアチニンを含む。これらの因子を測定する方法は、当業界において公知である。血管石灰化を評価する他の方法は、骨形成の因子を評価する方法を含む。このような因子は、骨特異性アルカリホスファターゼ（ＢＳＡＰ）、オステオカルシン（ＯＣ）、Ｉ型コラーゲンのＣ末端プロペプチド（ＰＩＣＰ）、およびＩ型コラーゲンのアミノ末端プロペプチド（ＰＩＮＰ）などの骨形成マーカー；Ｉ型コラーゲンの架橋Ｃ−テロペプチド（ＩＣＴＰ）、酒石酸抵抗性酸ホスファターゼ、ＴＲＡＣＰおよびＴＲＡＰ５Ｂ、コラーゲン架橋のＮ−テロペプチド（ＮＴｘ）およびコラーゲン架橋のＣ−テロペプチド（ＣＴｘ）などの血清骨吸収マーカー；ならびにヒドロキシプロリン、遊離および全ピリジノリン（Ｐｙｄ）、遊離および全デオキシピリジノリン（Ｄｐｄ）、コラーゲン架橋のＮ−テロペプチド（ＮＴｘ）、およびコラーゲン架橋のＣ−テロペプチド（ＣＴｘ）などの尿骨吸収マーカーを含む。
【００７１】
Ｖ．治療方法
一態様において、本発明は、個体における血管石灰化を阻害、抑制または予防する方法を提供する。本方法は、本発明のカルシウム擬似化合物の治療的有効量を個体に投与することを含む。一態様において、本発明の化合物の投与は、細胞外マトリックスハイドロキシアパタイトの結晶沈着の形成、成長または沈着を、遅延または後退させる。本発明のもう１つの態様において、本発明の化合物の投与は、細胞外マトリックスハイドロキシアパタイトの結晶沈着の生成、成長または沈着を予防する。
【００７２】
本発明の方法は、血管石灰化を特徴とするアテローム性硬化性石灰化および中膜石灰化ならびに他の状態を予防または治療するために使用され得る。一態様において、血管石灰化は、慢性腎不全または末期の腎疾患と関連付けられ得る。もう１つの態様において、血管石灰化は、透析前、透析後または尿毒症と関連付けられ得る。更なる態様において、血管石灰化は、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病と関連付けられ得る。さらにもう１つの態様において、血管石灰化は、心血管疾患と関連付けられ得る。
【００７３】
一態様において、カルシウム擬似薬の有効量の投与は、大動脈石灰化を引き起こすことなく血清ＰＴＨを低下させることができる。もう１つの態様において、カルシウム擬似薬の投与は、血清クレアチニンを低下させることができ、または血清クレアチニンレベルの上昇を予防することができる。もう１つの態様において、カルシウム擬似薬の投与は、副甲状腺（ＰＴ）過形成を抑制することができる。
【００７４】
カルシウム擬似薬は、単独で、またはビタミンＤステロールおよび／またはＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）などの血管石灰化を治療するための他の薬剤と組み合わせて投与され得る。ビタミンＤステロールは、カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトールまたはパリカルシトールを含むことができる。一態様において、カルシウム擬似化合物はビタミンＤステロールの投与の前後に投与され得る。もう１つの態様において、カルシウム擬似薬は、ビタミンＤステロールと同時投与され得る。本発明の方法は、血管組織に対するカルシトリオールのミネラル沈着促進効果を抑制するために実施され得る。一態様において、本発明の方法は、カルシウム、リンおよびＣａ×Ｐ生成物の血清レベルを上昇させるカルシトリオールの作用を後退させるために使用され得、それにより血管石灰化を予防または阻害され得る。もう１つの態様において、本発明の方法は、血清クレアチニンレベルを安定化または低下させるために使用され得る。一態様において、疾患によるクレアチニンレベル上昇に加え、カルシトリオールなどのビタミンＤステロールを用いる治療による、さらなるクレアチニンレベル上昇があり得る。
【００７５】
さらに、外科治療および非外科治療と共にカルシウム擬似薬が、投与され得る。一態様において、本発明の方法は、透析とともに実施できる。
【００７６】
以下の実施例は、本発明をさらに十分に説明するために提供するものであるが、その範囲を限定するものと解釈してはならない。
【実施例１】
【００７７】
本実施例は、カルシウム擬似化合物Ｎ−（３−［２−クロロフェニル］−プロピル）−Ｒ−α−メチル−３−メトキシベンジルアミン・ＨＣｌ（化合物Ａ）が、大動脈石灰化を引き起こすことなく、二次性副甲状腺機能亢進症（ＨＰＴ）を伴う尿毒症ラットにおける血清ＰＴＨを低下させ、および血管組織に対するカルシトリオールのミネラル化促進効果を抑制したことを示す。
【００７８】
動物
体重２５０ｇの雄Ｗｉｓｔａｒラットを、Ａｎｉｍａｌ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｆａｃｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｏｒｄｏｂａ（スペイン）から購入した。ラットを１２時間／１２時間の明暗サイクル下におき、通常の食餌（カルシウム＝０．９％、リン＝０．６％）を自由摂取させた。実験プロトコルの見直しを行い、Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｆｏｒ Ａｎｉｍａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ ｄｅ Ｃｏｒｄｏｂａ（スペイン）の承認を得、および全てのラットは、米国医学研究学会（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｓｅａｒｃｈ）により策定されたＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ、および米国科学アカデミー（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ）により作成された実験動物に関する指針（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）に従って人道的管理を受けた。
【００７９】
５／６腎摘出
これらの実験に用いたＣＫＤげっ歯類モデルを、元の機能しうる腎を６分の５（５／６）摘出する２段階手順である５／６腎摘出（５／６Ｎｘ）により作成した。第１段階において、キシラジン（５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）およびケタミン（８０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）を用いてラットを麻酔し、腹部の左内外表面に５から８ｍｍの切開を入れ、左腎を露出した。左腎動脈を見えるようにし、３つの分枝のうち２つをきつく縛り、その後、腎臓を梗塞について検査し、腹腔内の解剖学的中間位に戻した。腹壁および皮膚の切開を縫合糸を用いて縫合し、ラットを元のケージに戻した。１週間回復させた後、ラットを再度麻酔し、腹部の右内外表面に５から８ｍｍの切開を入れた。右腎を露出して被包されていない状態にし、腎茎をクランプし縛って、腎臓を除去した。縛った腎茎を解剖学的中間位に戻し、腹部および皮膚の切開を縫合材料を用いて縫合した。ラットを元のケージで回復させた。擬似手術ラットに、腎手術以外、同じ手順を受けさせた。
【００８０】
実験スケジュールを図１に示す。２番目の手術以後、食餌を、カルシウム含有量を減らし（０．６％）、リン含有量を増やした（０．９％）ものに変えた。ラットを無作為に６実験群に分けた（ベースライン体重の正規分布に基づいて）：擬似手術群（ｎ＝１３）（対照として使用）、５／６Ｎｘ＋ビヒクル（生理食塩水）群（ｎ＝１０）、５／６Ｎｘ＋カルシトリオール８０ｎｇ／ｋｇ（Ｃａｌｃｉｊｅｘ，Ａｂｂｏｔ）（腹腔内、１日おき）群（ｎ＝１０）、５／６Ｎｘ＋化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇ／日（皮下）群（ｎ＝１０）（Ａｍｇｅｎ，Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ ＵＳＡ）、５／６Ｎｘ＋化合物Ａ３ｍｇ／ｋｇ／日（皮下）（ｎ＝１０）、または５／６Ｎｘ＋カルシトリオール８０ｎｇ／ｋｇおよび化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇの組み合わせ群（上述のように投与）（ｎ＝１０）。処置を、１４日間続けた。薬剤の最終投与の２４時間後に、全身麻酔（腹腔内チオペンタールナトリウム）下で大動脈穿刺および放血によりラットを屠殺した。
【００８１】
血液化学
処置期間の最後に、腹部大動脈から化学分析のための血液を採取した。イオン化カルシウムレベルの測定のための血液を、ヘパリン化シリンジで採取し、直ちにＣｉｂａ−Ｃｏｒｎｉｎｇ ６３４ ＩＳＥ Ｃａ＋＋／ｐＨ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｃｉｂａ−Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｅｓｓｅｘ，Ｅｎｇｌａｎｄ）を用いて分析した。その後、遠心分離により血漿を分離し、アッセイに用いるまで−７０℃で保存した。ラットＰＴＨ（１−３４）免疫放射定量測定法アッセイキット（Ｉｍｍｕｎｏｔｏｐｉｃｓ，Ｓａｎ Ｃｌｅｍｅｎｔｅ，ＣＡ）を用い、発売元の使用説明書に従ってＰＴＨレベルを定量した。血清クレアチニン、リン、および総カルシウムを分光光度計（Ｓｉｇｍａ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｓｔ． Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）により測定した。
【００８２】
血管石灰化のエクスビボ評価
屠殺後に腹部大動脈を切開し、２つの部分に分割した。１つの部分を、１０％緩衝化ホルマリンで固定し、ついでｖｏｎ Ｋｏｓｓａ法によりミネラル化について染色した。もう１つの部分を、１０％ギ酸でミネラルを除き、Ｐｒｉｃｅ ｅｔ ａｌ Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ ２０：３１７−２７， ２０００の方法に従って、上澄み中の動脈組織のカルシウムおよびリン含有量を測定した。
【００８３】
統計学
数値を、平均値±標準誤差（ＳＥ）で表した。２つの異なる群の平均値間の差異を、ｔ検定により測定し、３以上の群の平均値間の差異を、ＡＮＯＶＡで評価した。Ｐ＜０．０５を有意とみなした。
【００８４】
クレアチニン
擬似手術ラットにおける平均血清クレアチニン濃度は、０．５３±０．０２ｍｇ／ｄｌであった。予想されたように、全ての５／６Ｎｘラットは、いずれの薬剤処置の前にも有意（Ｐ＜０．０５）に高いクレアチニンレベル（０．８３±０．０４から０．８９±０．０３ｍｇ／ｄｌ）を示し、群間の差異はなかった。カルシトリオールでの処置は、他の５／６Ｎｘ群に関してさらに有意な（Ｐ＜０．０５）血清クレアチニンレベル（１．０５±０．０７ｍｇ／ｄｌ）の上昇をもたらした。カルシトリオールと化合物Ａの組み合わせは、化合物Ａまたはビヒクル処置５／６Ｎｘラットと比較する場合、クレアチニンレベル（０．９３±０．０５ｍｇ／ｄｌ）を有意に上昇させなかった。カルシトリオールと化合物Ａの包含は、カルシトリオール誘発血清クレアチニンレベル上昇を抑制した。
【００８５】
血清の生化学的パラメーター
イオン化カルシウム、リンおよびＰＴＨの血清レベルを、図２から４に示す。５／６Ｎｘおよび擬似手術群における血清イオン化カルシウムレベルは、類似していた（１．２１±０．０１ｍｍｏｌ／ｌに対して１．２３±０．０１ｍｍｏｌ／ｌ）。１．５（１．２０＋０．０２ｍｍｏｌ／ｌ）または３ｍｇ／ｋｇ（１．２２±０．０２ｍｍｏｌ／ｌ）の化合物Ａで処置したラットにおける血清イオン化カルシウムレベルは、５／６Ｎｘビヒクル処置群（１．２１±０．０１ｍｍｏｌ／ｌ）と相違しなかった。しかしながら、５／６Ｎｘビヒクル処置群または化合物Ａ単独処置群と比較する場合、カルシトリオール単独処置または化合物Ａと組み合わせた処置は、有意に（Ｐ＜０．０５）高い血清イオン化カルシウムレベル（それぞれ１．２８±０．０２ｍｍｏｌ／ｌ、および１．２６±０．０１ｍｍｏｌ／ｌ）をもたらした（図２）。
【００８６】
擬似手術群（６．９＋０．７ｍｇ／ｄｌ）と、ビヒクル（６．５±０．４ｍｇ／ｄｌ）または１．５（６．６±０．３ｍｇ／ｄｌ）もしくは３ｍｇ／ｋｇ（６．９±０．４ｍｇ／ｄｌ）の化合物Ａで処置した５／６Ｎｘラット群との間の血清リンレベル（図３）は、相違しなかった。カルシトリオール単独の処置を受けたラットは、ビヒクル処置５／６Ｎｘラットと比較する場合、有意に（Ｐ＜０．０５）上昇した血清リンレベル（１０．２±０．９ｍｇ／ｄｌ）を示した。化合物Ａとカルシトリオールの組み合わせは、血清リンレベル（８．７±０，７ｍｇ／ｄｌ）を低下させる傾向を示したが、それでもなお有意に（Ｐ＜０．０５）、ビヒクル処置５／６Ｎｘラットより高かった。
【００８７】
擬似手術ラット（３９．３±７．９ｐｇ／ｍｌ）と比較する場合、５／６Ｎｘラット（１１８．７±２７．７ｐｇ／ｍｌ）において、血清ＰＴＨ濃度は有意に（Ｐ＜０．０５）上昇していた。使用した全ての処置は、擬似手術ラットと有意差がないレベルまで血清ＰＴＨ濃度を下げた。しかしながら、カルシトリオールと化合物Ａの組み合わせは、化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇ（７３．５±１２．８ｐｇ／ｍｌ）単独より、有意に（Ｐ＜０．０５）効果的なＰＴＨ抑制（１３．８±２．６ｐｇ／ｍｌ）をもたらした（図４）。
【００８８】
大動脈のミネラル含有量
カルシトリオール投与で観察される上昇した血清ミネラルレベルと一致して、カルシトリオールを用いた５／６Ｎｘラット処置は、ビヒクル処置５／６Ｎｘラット（２．３±０．２ｍｇ／ｇ組織）と比較して有意に（Ｐ＝０．００９）上昇した大動脈カルシウム量（４．２±１．１ｍｇ／ｇ組織）をもたらした（図５）。しかしながら、化合物Ａを用いた処置は、ビヒクル処置５／６Ｎｘ（Ｐ＝０．８８２）または擬似手術ラット（Ｐ＝０．７７７）と同様の大動脈カルシウム含有量をもたらした（図５）。血清カルシウムレベルに対してカルシトリオールおよび化合物Ａが有意な効果を示さないことを考慮すれば、驚いたことに、カルシトリオール誘発大動脈カルシウム上昇は、化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇの同時処置により有意に（Ｐ＝０．００２）抑制された（図５）。
【００８９】
さらなる分析は、擬似手術ラットのリン含有量が、ビヒクル処置５／６Ｎｘラットのものと相違しないことを示した（図６）。カルシトリオールを用いた５／６Ｎｘラットの処置は、大動脈組織におけるリン（２．１±１ｍｇ／ｇ組織）含有量を、有意に（Ｐ＝０．０１）上昇させたが、一方、化合物Ａ（１．５または３ｍｇ／ｋｇ）では、有意に上昇させなかった（図６）。カルシトリオール誘発大動脈リン上昇は、化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇの同時処置により、有意に（Ｐ＝０．０１３）抑制された（図６）。
【００９０】
ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色法（図７）を用いてインサイチュ大動脈ミネラル化を検査した。擬似手術、ビヒクルまたは化合物Ａ処置５／６Ｎｘ群のいずれにおいても大動脈におけるミネラル沈着物は観察されなかった。しかしながら、カルシトリオール単独で処置された５／６Ｎｘラットの中膜において、著しいｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色が検出された（図７Ａ）。興味深いことに、カルシトリオール処置計画への化合物Ａ１．５ｍｇ／ｋｇの付加は、大動脈石灰化の発生を予防した（図７Ｂ）。
【００９１】
血管石灰化退縮
ラットを既述のように５／６Ｎｘとし、高リン食餌（０．６％Ｃａ；１．２％Ｐ）で１４日間飼育した。ラットを４群（Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ、ｎ＝４から５ラット／群）に分割し、１つの群（Ａ）にビヒクル（生理食塩水０．２ｍｌ，腹腔内）を投与し、残りの３群（Ｂ、ＣおよびＤ）に試験期間（２８日）中、カルシトリオール（８０ｎｇ／ｋｇ，１日おき，腹腔内）を投与した。１４日目に、２群（ＣおよびＤ）を普通の食餌（Ｃａ０．９％；Ｐ０．６％）に変え、群Ｃに化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇ／日，経口）を投与し、一方、群Ｄにビヒクル（１０％ｃａｐｔｉｓｏｌ水溶液０．５ｍｌ／日）を投与した。残りの群（ＡおよびＢ）に、試験期間（２８日）中、高リン食餌を継続し、カルシトリオールまたはビヒクルのどちらかを投与した。２８日目に、ラットを屠殺（ＣＯ２）し、既述のように大動脈のＰおよびＣａ含有量（ｍｇ／ｇ組織）を測定するために大動脈を除去した。
【００９２】
全２８日間、高リン食餌で飼育しカルシトリオールを投与したラット（群Ｂ）を、高リン食餌で飼育しビヒクルを投与したラット（群Ａ）と比較した場合、大動脈のカルシウムおよびリン含有量の有意な（ｐ＜０．０５）上昇がみられた（図８参照）。これは、カルシトリオールが大動脈のカルシウムおよびリン含有量の上昇（血管石灰化）を仲介することを示している。
【００９３】
高リン食餌（群Ｂ）から普通のリン食餌への変換は、大動脈のカルシウムおよびリン含有量のそれほど有意でない減少をもたらした（群Ｄ）。このことは、低リン食餌が血管石灰化プロセスの進行を妨げるおよび／または後退させうることを示唆している（ＣＲＩおよびＥＳＲＤ患者は、低リン食を摂食するよう推奨される。）。高リン食餌から普通のリン食餌へ変換し、および化合物Ａ３ｍｇ／ｋｇを受けさせつつ、試験の最終時点までカルシトリオールを受けさせたラット（群Ｃ）は、群Ｄと比較した場合、大動脈リン含有量の有意な（ｐ＜０．０５）減少およびより低い大動脈カルシウム量を示した。このことは、形成された血管石灰化が、化合物Ａのようなカルシウム擬似薬により後退され得ることを示唆している。
【実施例２】
【００９４】
本実施例により、カルシウム擬似薬Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン（化合物Ｂ）が副甲状腺（ＰＴ）過形成を抑制し、血清ＰＴＨを低下させ、ＣＫＤラットモデルにおける大動脈血管石灰化を抑制することを示す。
【００９５】
これらの試験において、体重３００から３５０グラムの雄スプラーグ・ドーリー・ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を用いた。全てのラットに、試験の開始前、標準的実験用試料（Ｈａｒｌａｎ Ｔｅｋｌａｄ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を摂取させた。標準的実験用試料を、０．７５％アデニンを含有する標準的げっ歯類実験用試料に変えた。ラットには飼料および水を自由に摂取させた。このラットプロトコルは、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ Ａｍｇｅｎ Ｉｎｃ．（Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ，ＣＡ）により承認された。
【００９６】
アデニンを含む飼料でラットを２１日間飼育し、およびアデニン食餌の開始前、イオン化カルシウム、ＰＴＨ、ＢＵＮおよびクレアチニンならびにリンレベルのベースライン測定のためにラットを前採血した（図９）。
【００９７】
ＰＴＨおよび血清化学プロフィールのための採血
ラットについて、アデニン食餌飼育または化合物Ｂもしくはビヒクルの投与の前に、血清のＰ、Ｃａ、ＢＵＮ、ＰＴＨおよびクレアチニンのベースライン測定を実施した。ラットが麻酔下（２％イソフルラン／Ｏ２）にある状態で眼窩静脈叢から血液を採取した。時間０での採血後、ラットをアデニン含有飼料で飼育し、および化合物Ｂ（３ｍｇ／ｋｇ 経口）またはビヒクル（１２％ｃａｐｔｉｓｏｌ水溶液）を２１日間連日投与した。試験終了日（２１日目）にラットを屠殺し、組織病理学的分析のために大動脈および副甲状腺を除去した。血液化学およびＰＴＨ測定のために血液を採取した。屠殺の前、血液のイオン化カルシウムレベルの測定のために、麻酔下（２％イソフルラン／Ｏ２）、腹部大動脈からヘパリン化毛細管で血液を採取し、Ｃｉｂａ−Ｃｏｒｎｉｎｇ ６３４ ＩＳＥ Ｃａ＋＋／ｐＨ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｃｉｂａ−Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ，Ｍｅｄｆｉｅｌｄ，ＭＡ）を用いて分析した。別に、ＰＴＨ、血液尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニンおよび血清リンレベルのために、ＳＳＴ（凝固活性剤）（商標）採血管（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）中に血液を採取し、凝固させた。血清を取り除き、アッセイに使用するまで−７０℃で保存した。ラットＰＴＨ（１−３４）免疫放射定量測定法アッセイキット（Ｉｍｍｕｎｏｔｏｐｉｃｓ，Ｓａｎ Ｃｌｅｍｅｎｔｅ，ＣＡ）を用い、ベンダーの使用説明書に従ってＰＴＨレベルを定量した。血液化学分析器（Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ ４００，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ）を用い、ＢＵＮ、クレアチニンおよびリンレベルを測定した。
【００９８】
ＰＣＮＡ免疫組織化学
副甲状腺重量および増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）免疫化学を用い、過形成を測定した。屠殺時に喉頭気管コンプレックスを取り除き、Ｚｎ緩衝化ホルマリン中で２から３日保存し、ついで７０％アルコールに移しトリミングした。トリミング時に、甲状腺から副甲状腺を切り離し、糸くずの出ないキムワイプ（Ｋｉｍｂｅｒｌｙ Ｃｌａｒｋ Ｃｏｒｐ．，Ｒｏｓｗｅｌｌ，ＧＡ）で拭き取って乾燥し、Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＢＰ２１ ＩＤ天秤（Ｇｏｅｔｔｉｎｇｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で個別に重量を測定した。ついで副甲状腺をパラフィン包埋処理した。包埋後、５μｍの切片を切り出し、荷電スライド（ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗｅｓｔ Ｃｈｅｓｔｅｒ ＰＡ）上に置いた。この切片上で、ＰＣＮＡ染色キット（Ｚｙｍｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓ．Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）を用い、ベンダーの使用説明書に従って免疫染色を行った。
【００９９】
副甲状腺切片の中央部を覆う一連の０．０１ｍｍ２グリッド（目盛り付きグラチクルを用いて最初に面積を測定する）を有する面積測定用グラチクルの使用にて副甲状腺の面積を測定した。各副甲状腺のおおよそ同じレベルから切片を作成した。組織サンプルを、Ｌｅｉｔｚ Ｌａｂｏｒｌｕｘ顕微鏡で１００ｘで視覚化し、副甲状腺組織を覆うグリッド数を数えた。このように、０．０１ｍｍにグリッド数をかけることにより副甲状腺の全面積を測定し、その後、グリッド化した断面積におけるＰＣＮＡ陽性細胞数を数え、ＰＣＮＡ陽性細胞数／ｍｍ２として表した。スライドをコード化し、処置群の帰属を知らされていない観測者が、副甲状腺増殖の定量化を行った。
【０１００】
大動脈血管石灰化に関する方法
試験の最終時点でラットを屠殺し（ＣＯ２）、大動脈を除去し、既述のようにＰ、Ｃａ、ＢＵＮおよびクレアチニン測定のために血液を採取した。大動脈を回収し、１０％中性緩衝化ホルマリン中で３から７日間固定し、ついで７０％エタノールに移した。Ｌｕｎａｒ ＰＩＸＩｍｕｓ ２デンシトメーター（Ｌｕｎａｒ ＰＩＸＩｍｕｓ；Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用い、以下のパラメーターを用い骨密度（ＢＭＤ；ｇ／ｃｍ２）分析を行った：実行時間４分。Ｌｕｎａｒ社製 ｐｉｘｉｍｕｓソフトウェアバージョン２．０を用い、結果を分析した。
【０１０１】
化合物Ｂの３週間投与は、ビヒクル処置ラットと比較して、ＰＣＮＡ陽性細胞数を有意に（ｐ＜０．０１）減少させた（図１１）。同様に、ビヒクル処置ラットと比較した場合、化合物Ｂ処置ラットにおける副甲状腺重量もまた有意に減少した（図１２）。
【０１０２】
図１３は、化合物Ｂの投与が、ビヒクル処置ラットと比較した場合、血清ＰＴＨレベルを著しく低下させた（ｐ＜０．０００１；ＡＮＯＶＡ／Ｆｉｓｈｅｒ制約付最小有意差検定、事後検定）ことを示している。
【０１０３】
図１４は、アデニン食餌で飼育されたラットへの化合物Ｂの投与が、同じ食餌で飼育されたビヒクル処置ラットと比較して、大動脈骨ミネラル密度が７５％減少させたことを示している。
【０１０４】
図１５は、血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルにおける、血液尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンに対する化合物Ｂの効果を示している。簡潔に言えば、ＢＵＮおよびクレアチニン両方のレベルは、処置前ビヒクル（ｎ＝４）と比較して、３週間のアデニン処置（後）、はいずれも有意に（ｐ＜０．０５）上昇した；化合物Ｂ（ｎ＝７）図１０。ビヒクル処置対照（ｎ＝４）と比較した場合、ＢＵＮに対する化合物Ｂ（ｎ＝７）の処置効果は有意でなかった（ｐ＞０．０５）。しかしながら、化合物Ｂ（ｎ＝７）は、ビヒクル（ｎ＝４）処置ラットと比較して、クレアチニンレベルの低下を仲介した（ｐ＜０．０５）。
【０１０５】
図１６は、血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤにおける、イオン化Ｃａに対する化合物Ｂの効果を示している。処置前（前）と比較して３週間アデニン処置（後）、血清イオン化カルシウム（ｉＣａ）は、有意に低下したｐ＜０．０５；ＡＮＯＶＡ；ビヒクル（ｎ＝４ 前；ｎ＝３ 後）；化合物Ｂ（ｎ＝８ 前；ｎ＝６ 後）。化合物Ｂ（ｎ＝６）処置は、ビヒクル処置と比較して、血清ｉＣａを著しく低下させた（ｐ＝０．００４；ｎ＝３）。
【０１０６】
図１７は、血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤにおける、血清リンに対する化合物Ｂの効果を示している。血清リン（Ｐ）は、処置前（前）と比較して３週間のアデニン処置（後）に有意に上昇したｐ＞０．０５；ＡＮＯＶＡ；ビヒクル（ｎ＝４）；化合物Ｂ（ｎ＝７）。ビヒクル処置ラットと比較した場合、血清Ｐレベルに対する化合物Ｂの処置効果は、有意でなかった（ｐ＞０．０５）。
【０１０７】
図１８は、血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤにおける、血清Ｃａに対する化合物Ｂの効果を示している。血清カルシウム（Ｃａ）は、処置前（前）と比較して、３週間のアデニン処置（後）、有意に低下したｐ＜０．０５；ＡＮＯＶＡ；ビヒクル（ｎ＝４）；化合物Ｂ（ｎ＝７）。化合物Ｂ処置は、ビヒクル処置と比較して、総血清カルシウムを有意に低下させた（ｐ＝０．０００１）ＡＮＯＶＡ；ビヒクル（ｎ＝４）；化合物Ｂ（ｎ＝７）。
【実施例３】
【０１０８】
本実施例は、カルシウム擬似薬Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン（化合物Ｂ）が、尿毒症ラット由来の大動脈組織のＣａおよびＰ含有量における、パリカルシトール仲介の上昇を有意に低下させることを示している。
【０１０９】
動物
０．６％Ｃａおよび１．２％Ｐ食餌で飼育したＷｉｓｔａｒラット（２００から２５０ｇ）に５／６腎摘出（５／６Ｎｘ）または擬似手術（ｓｈａｍ）を施した。ラットは、術後１日目から開始した以下の処置を受けた：Ｓｈａｍ＋ビヒクル、５／６Ｎｘ＋ビヒクル、５／６Ｎｘ＋パリカルシトール２４０ｎｇ／ｋｇ（４８時間毎、腹腔内）、５／６Ｎｘ＋パリカルシトール＋化合物Ｂ（１．５ｍｇ／ｋｇ、４８時間毎、皮下）または５／６Ｎｘ＋化合物Ｂ（１．５ｍｇ／ｋｇ、４８時間毎、皮下）。１４日後、ラットを麻酔し、屠殺した。胸部大動脈を除去し、ＣａおよびＰ含有量の測定のために処理した。血清ＰＴＨ、イオン化Ｃａ、Ｐおよびクレアチニンを測定するために、屠殺時に血液を採取した。結果を以下の表１にまとめる。
【０１１０】
【表１】
【０１１１】
５／６Ｎｘ＋ビヒクル
５／６Ｎｘの手順は、慢性腎不全と一致する血清クレアチニン上昇（ｐ＜０．０５）を仲介した。ｓｈａｍビヒクルラットと比較して５／６Ｎｘビヒクルラットにおいて観察される血清イオン化Ｃａの有意な低下（ｐ＜０．０５）ならびに血清ＰおよびＰＴＨの有意な上昇（ｐ＜０．０５）は、全て二次性副甲状腺機能亢進症の顕著な特徴である。
【０１１２】
５／６Ｎｘ＋パリカルシトール
５／６Ｎｘラットへのパリカルシトールの投与は、５／６Ｎｘ＋ビヒクルと比較して、血清ＰＴＨレベルを有意に（ｐ＜０．０５）低下させた。５／６Ｎｘ＋ビヒクルと比較して、血液イオン化カルシウム、クレアチニンまたは血清Ｐレベルの変化は無かった。パリカルシトールは、ビヒクル処置５／６Ｎｘラットと比較して、大動脈ＣａおよびＰ含有量を有意に（ｐ＜０．０５）上昇させた（表１）。
【０１１３】
５／６Ｎｘ＋化合物Ｂ
５／６Ｎｘラットへの化合物Ｂを投与は、ビヒクル処置５／６Ｎｘラットと比較して、血清ＰＴＨレベルを有意に（ｐ＜０．０５）低下させた。５／６Ｎｘ＋ビヒクルと比較して、血液イオン化カルシウム、クレアチニンまたは血清Ｐレベル変化は無かった。同様に、ビヒクル処置ｓｈａｍまたは５／６Ｎｘラットのどちらかと比較した場合でも、化合物Ｂの投与は、大動脈ＣａまたはＰ含有量を有意に変化させなかった（表１）。
【０１１４】
５／６Ｎｘ＋パリカルシトール＋化合物Ｂ
パリカルシトール処置５／６Ｎｘラットへの化合物Ｂを投与は、パリカルシトールを用いて処置された５／６Ｎｘラットと比較して、大動脈ＣａおよびＰ含有量を有意に（ｐ＜０．０５）減少させた。化合物Ｂの投与による大動脈ＣａおよびＰ含有量の減少は、ビヒクル処置されたｓｈａｍ対照（正常レベル）と有意に相違しなかった。パリカルシトールまたは化合物Ｂ処置５／６Ｎｘラット単独と比較した場合、パリカルシトールと化合物Ｂの組み合わせは、さらに有意に（ｐ＜０．０５）血清ＰＴＨレベルを低下させた。化合物Ｂとパリカルシトールの組み合わせで処置したラットは、５／６Ｎｘ＋ビヒクルと比較して、血液イオン化カルシウム、クレアチニンまたは血清Ｐレベルにおいて、変化を示さなかった（表１）。
【実施例４】
【０１１５】
本実施例は、カルシウム擬似薬Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミン（化合物Ｂ）が、軟組織のパリカルシトールおよびカルシトリオール仲介ミネラル化を有意に抑制することを示している。
【０１１６】
動物
０．６％Ｃａおよび１．２％Ｐ食餌で飼育したＷｉｓｔａｒラット（２００から２５０ｇ）に５／６腎摘出（５／６Ｎｘ）を行った。ラットは、術後１日目から開始した以下の処置を受けた：５／６Ｎｘ＋ビヒクル、５／６Ｎｘ＋パリカルシトール（２４０ｎｇ／ｋｇ、４８時間毎）もしくはカルシトリオール（８０ｎｇ／ｋｇ、４８時間毎）（腹腔内）、５／６Ｎｘ＋パリカルシトールまたはカルシトリオール＋化合物Ｂ（１．５ｍｇ／ｋｇ、４８時間毎、皮下）または５／６Ｎｘ＋化合物Ｂ（１．５ｍｇ／ｋｇ、４８時間毎、皮下）。１４日後、ラットを麻酔し、屠殺して、組織を除去し、組織学的検査用に処理した（ミネラル化測定用Ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色およびＨ＆Ｅ染色）。
【０１１７】
図１９（上部パネル：Ａ、Ｂ、Ｃ）は、５／６Ｎｘラットへのカルシトリオールの投与が、組織の濃染により明らかなように、心臓（Ａ）、腎臓（Ｂ）、および肺（Ｃ）（これらの組織だけ検査した）におけるミネラル化を増大させたことを示している。
【０１１８】
図１９（下部パネル：Ｄ、Ｅ、Ｆ）は、組織の抑制された濃染により示されるように、カルシトリオール処置５／６Ｎｘラットへの化合物Ｂの投与が、心臓（Ｄ）、腎臓（Ｅ）、および肺（Ｆ）ミネラル化を減少させたことを示している。
【０１１９】
図２０（上部パネル：Ａ）は、組織の濃染から明らかなように、５／６Ｎｘラットへのパリカルシトールのを投与が、腎臓（Ａ）におけるミネラル化を増大させたことを示している。
【０１２０】
図２０（下部パネル：Ｂ）は、組織の濃染の減少から明らかなように、パリカルシトール処置５／６Ｎｘラットへの化合物Ｂの投与が、腎臓（Ｂ）ミネラル化を減少させたことを示している。
【０１２１】
本明細書に記載の全ての公報、特許および特許出願は、各公報または特許出願が個別におよび具体的に本明細書に参照によって取り込まれると記載されているように、参照により取り込まれる。理解の明確性のために例示として少し詳しく前述の発明を説明してきたが、付帯の特許請求の範囲の精神と範囲から逸脱することなく変更および改変をなしうることが、本発明の教示を考慮に入れれば当業者には直ちに明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１２２】
【図１】ラット処置の実験スケジュールを示す図である。
【図２】ＣＫＤラットモデルにおける、イオン化カルシウムの血清レベルを示す図である。
【図３】ＣＫＤラットモデルにおける、リンの血清レベルを示す図である。
【図４】ＣＫＤラットモデルにおける、副甲状腺ホルモンの血清レベルの概略図である。
【図５】ＣＫＤラットモデルにおける、大動脈のカルシウム量を示す図である。
【図６】ＣＫＤラットモデルにおける、大動脈のリン含有量を示す図である。
【図７】ＣＫＤラットモデルにおける、大動脈のＶｏｎ Ｋｏｓｓａ染色切片を示す図である。
【図８】ＣＫＤラットモデルにおける、大動脈のカルシウムおよびリン含有量を示す図である。
【図９】アデニン誘発血管石灰化モデルにおける、ラット処置の実験スケジュールの概略図である。
【図１０】アデニン誘発血管石灰化のスキームを示す図である。
【図１１】ＣＫＤラットモデルにおける、副甲状腺過形成抑制の概略図である。
【図１２】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルの副甲状腺重量変化の概略図である。
【図１３】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルの処置による、血清ＰＴＨ変化を示す図である。
【図１４】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルの処置による、大動脈骨ミネラル密度変化を示す図である。
【図１５】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルにおける、血液尿素窒素（ＢＵＮ）およびクレアチニンに対する処置の効果を示す図である。
【図１６】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤモデルにおける、イオン化カルシウムに対する処置の効果を示す図である。
【図１７】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤにおける、血清リンに対する処置の効果を示す図である。
【図１８】血管石灰化を伴うアデニン誘発ＣＫＤにおける、血清Ｃａに対する処置の効果を示す図である。
【図１９】カルシトリオール誘発石灰化を伴う組織に対する、化合物Ｂによる処置の効果を示す図である。
【図２０】パリカルシトール誘発石灰化を伴う組織に対する、化合物Ｂによる処置の効果を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
対象にカルシウム擬似化合物の治療的有効量を投与することを含む、対象における血管石灰化を治療する方法。
【請求項２】
血管石灰化がアテローム硬化性石灰化である、請求項１の方法。
【請求項３】
血管石灰化が中膜石灰化である、請求項１の方法。
【請求項４】
対象が慢性腎不全に罹患している、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項５】
対象が末期の腎疾患に罹患している、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項６】
対象が透析前である、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項７】
対象が尿毒症に罹患している、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項８】
対象がＩ型またはＩＩ型糖尿病に罹患している、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項９】
対象が心血管疾患に罹患している、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項１０】
対象がヒトである、請求項１から９のいずれかの方法。
【請求項１１】
カルシウム擬似化合物が、式Ｉの化合物：
【化１】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は同一であっても異なっていてもよく、それぞれは、ＣＨ３、ＣＨ３Ｏ、ＣＨ３ＣＨ２Ｏ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＦ３Ｏ、ＣＨ３Ｓ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＨ３ＣＨ２、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、アセトキシおよびアセチル基から選択される基であり、または２つのＸ１が、一緒になって、縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、または２つのＸ２が、一緒になって、縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、ただしＸ２は、３−ｔ−ブチル基でなく；
ｎは、０から５の範囲であり；
ｍは、１から５の範囲であり；ならびに
アルキル基は、飽和および不飽和の直鎖、分枝鎖および環状Ｃ１〜Ｃ９アルキル基、ジヒドロインドリルおよびチオジヒドロインドリル基、ならびに２−、３−、および４−ピペリジニル基から選択される少なくとも１つの基で場合により置換されていてよいＣ１〜Ｃ３アルキル基から選択される。］
またはこの薬学的に許容できる塩である、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項１２】
カルシウム擬似化合物が、Ｎ−（３−［２−クロロフェニル］−プロピル）−Ｒ−α−メチル−３−メトキシベンジルアミンまたはその薬学的に許容できる塩である、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項１３】
カルシウム擬似化合物が、式ＩＩの化合物：
【化２】
［式中、
Ｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
Ｒ２は、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
記載されている各Ｒ５は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＲｄ、−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＮＲｄＲｄ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＮＲｄＲｄまたは−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒｄからなる群から独立して選択され；
Ｒ６は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
各Ｒａは、独立して、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
各Ｒｂは、独立して、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、このそれぞれは、非置換であるか、またはアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノおよびニトロからなる群から選択される３までの置換基により置換されていてよく；
各Ｒｃは、独立して、アルキル、ハロアルキル、フェニルまたはベンジルであり、このそれぞれは置換されているかまたは非置換であってよく；
各Ｒｄは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、ここで、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキルは、アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノ、ニトロ、Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｎＲｃおよび−Ｓ（＝Ｏ）ｎＮＲａＲａから選択される０、１、２、３または４置換基により置換されており；
ｍは、１または２であり；
ｎは、０、１または２であり；ならびに
ｐは、０、１、２、３または４である；
ただし、Ｒ２がメチルであり、ｐが０であり、ならびにＲ６が非置換フェニルである場合、Ｒ１は、２，４−ジハロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，４−ジエチルフェニル、２，４，６−トリハロフェニルまたは２，３，４−トリハロフェニルでない。］
またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項１４】
カルシウム擬似化合物が、Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミンまたはその薬学的に許容できる塩である、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項１５】
カルシウム擬似化合物がシナカルセットＨＣｌである、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項１６】
ビタミンＤステロールが前もって対象に投与されている、請求項１の方法。
【請求項１７】
ビタミンＤステロールが、カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトールまたはパリカルシトールである、請求項１６の方法。
【請求項１８】
ビタミンＤステロールが、カルシトリオールである、請求項１６の方法。
【請求項１９】
ビタミンＤステロールが、パリカルシトールである、請求項１６の方法。
【請求項２０】
ビタミンＤステロール投与の前または後にカルシウム擬似化合物が投与される、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項２１】
カルシウム擬似化合物がビタミンＤステロールと組み合わせて投与される、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項２２】
カルシウム擬似化合物がＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）と組み合わせて投与される、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項２３】
対象にカルシウム擬似化合物の治療的有効量を投与することを含む、対象における血清クレアチニンレベルを低下させる方法。
【請求項２４】
対象に対するビタミンＤステロールを投与により、対象が、上昇した血清クレアチニンレベルを被っている、請求項２３の方法。
【請求項１】
対象にカルシウム擬似化合物の治療的有効量を投与することを含む、対象における血管石灰化を治療する方法。
【請求項２】
血管石灰化がアテローム硬化性石灰化である、請求項１の方法。
【請求項３】
血管石灰化が中膜石灰化である、請求項１の方法。
【請求項４】
対象が慢性腎不全に罹患している、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項５】
対象が末期の腎疾患に罹患している、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項６】
対象が透析前である、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項７】
対象が尿毒症に罹患している、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項８】
対象がＩ型またはＩＩ型糖尿病に罹患している、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項９】
対象が心血管疾患に罹患している、請求項１から３のいずれかの方法。
【請求項１０】
対象がヒトである、請求項１から９のいずれかの方法。
【請求項１１】
カルシウム擬似化合物が、式Ｉの化合物：
【化１】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は同一であっても異なっていてもよく、それぞれは、ＣＨ３、ＣＨ３Ｏ、ＣＨ３ＣＨ２Ｏ、Ｂｒ、Ｃｌ、Ｆ、ＣＦ３、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＦ３Ｏ、ＣＨ３Ｓ、ＯＨ、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＮ、ＮＯ２、ＣＨ３ＣＨ２、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、アセトキシおよびアセチル基から選択される基であり、または２つのＸ１が、一緒になって、縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、または２つのＸ２が、一緒になって、縮合脂環式環、縮合芳香環、およびメチレンジオキシ基から選択される構造を形成でき、ただしＸ２は、３−ｔ−ブチル基でなく；
ｎは、０から５の範囲であり；
ｍは、１から５の範囲であり；ならびに
アルキル基は、飽和および不飽和の直鎖、分枝鎖および環状Ｃ１〜Ｃ９アルキル基、ジヒドロインドリルおよびチオジヒドロインドリル基、ならびに２−、３−、および４−ピペリジニル基から選択される少なくとも１つの基で場合により置換されていてよいＣ１〜Ｃ３アルキル基から選択される。］
またはこの薬学的に許容できる塩である、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項１２】
カルシウム擬似化合物が、Ｎ−（３−［２−クロロフェニル］−プロピル）−Ｒ−α−メチル−３−メトキシベンジルアミンまたはその薬学的に許容できる塩である、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項１３】
カルシウム擬似化合物が、式ＩＩの化合物：
【化２】
［式中、
Ｒ１は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
Ｒ２は、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ３は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
記載されている各Ｒ５は、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、ハロゲン、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＲｄ、−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）ＮＲｄＲｄ、−ＮＲｄＳ（＝Ｏ）ｍＮＲｄＲｄまたは−ＮＲｄＣ（＝Ｏ）Ｒｄからなる群から独立して選択され；
Ｒ６は、アリール、置換アリール、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり；
各Ｒａは、独立して、Ｈ、アルキルまたはハロアルキルであり；
各Ｒｂは、独立して、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、このそれぞれは、非置換であるか、またはアルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノおよびニトロからなる群から選択される３までの置換基により置換されていてよく；
各Ｒｃは、独立して、アルキル、ハロアルキル、フェニルまたはベンジルであり、このそれぞれは置換されているかまたは非置換であってよく；
各Ｒｄは、独立して、Ｈ、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクリルアルキルであり、ここで、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルおよびヘテロシクリルアルキルは、アルキル、ハロゲン、ハロアルキル、アルコキシ、シアノ、ニトロ、Ｒｂ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＯＲｂ、−ＮＲａＲａ、−ＮＲａＲｂ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｃ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲａ、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｃ、−ＮＲａＳ（＝Ｏ）ｎＲｃおよび−Ｓ（＝Ｏ）ｎＮＲａＲａから選択される０、１、２、３または４置換基により置換されており；
ｍは、１または２であり；
ｎは、０、１または２であり；ならびに
ｐは、０、１、２、３または４である；
ただし、Ｒ２がメチルであり、ｐが０であり、ならびにＲ６が非置換フェニルである場合、Ｒ１は、２，４−ジハロフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，４−ジエチルフェニル、２，４，６−トリハロフェニルまたは２，３，４−トリハロフェニルでない。］
またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項１４】
カルシウム擬似化合物が、Ｎ−（（６−（メチルオキシ）−４’−（トリフルオロメチル）−１，１’−ビフェニル−３−イル）メチル）−１−フェニルエタンアミンまたはその薬学的に許容できる塩である、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項１５】
カルシウム擬似化合物がシナカルセットＨＣｌである、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項１６】
ビタミンＤステロールが前もって対象に投与されている、請求項１の方法。
【請求項１７】
ビタミンＤステロールが、カルシトリオール、アルファカルシドール、ドキセルカルシフェロール、マキサカルシトールまたはパリカルシトールである、請求項１６の方法。
【請求項１８】
ビタミンＤステロールが、カルシトリオールである、請求項１６の方法。
【請求項１９】
ビタミンＤステロールが、パリカルシトールである、請求項１６の方法。
【請求項２０】
ビタミンＤステロール投与の前または後にカルシウム擬似化合物が投与される、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項２１】
カルシウム擬似化合物がビタミンＤステロールと組み合わせて投与される、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項２２】
カルシウム擬似化合物がＲＥＮＡＧＥＬ（登録商標）と組み合わせて投与される、請求項１から１０のいずれかの方法。
【請求項２３】
対象にカルシウム擬似化合物の治療的有効量を投与することを含む、対象における血清クレアチニンレベルを低下させる方法。
【請求項２４】
対象に対するビタミンＤステロールを投与により、対象が、上昇した血清クレアチニンレベルを被っている、請求項２３の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【公表番号】特表２００８−５３３１７０（Ｐ２００８−５３３１７０Ａ）
【公表日】平成２０年８月２１日（２００８．８．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５０２０８８（Ｐ２００８−５０２０８８）
【出願日】平成１８年３月１７日（２００６．３．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００９６８３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１０２０６１
【国際公開日】平成１８年９月２８日（２００６．９．２８）
【出願人】（５０００４９７１６）アムジエン・インコーポレーテツド (242)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年８月２１日（２００８．８．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年３月１７日（２００６．３．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００９６８３
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１０２０６１
【国際公開日】平成１８年９月２８日（２００６．９．２８）
【出願人】（５０００４９７１６）アムジエン・インコーポレーテツド (242)
【Ｆターム（参考）】
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