神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または治療するためのエクオルの使用
本発明は、被験体における神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させる方法に関する。該方法は、神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させるのに十分な量でエクオルを含む組成物を投与することを包含する。エクオルはＲ−エクオルとＳ−エクオルとのラセミ混合物であってもよい。エクオルは、Ｒ−エクオルで鏡像異性的に富化されていても、またはＳ−エクオルで鏡像異性的に富化されていてもよい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（政府支援の研究または開発）
本発明は、Ｕ．Ｓ Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ（ＵＳＤＡ）により授与された助成金番号ＮＲＩ ２００２−００７９８および助成金番号ＮＲＩ ２００４−０１８１１の下、政府支援により行われた。
【０００２】
政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
（背景）
（１．技術分野）
本発明は、エクオル、ならびにアンドロゲンによって媒介される生理学的および病態生理学的な状態を処置および予防するための治療化合物としてのその使用に関する。詳細には、本発明は、神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または治療するためのエクオルの使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
（２．背景の情報）
近年では、植物エストロゲンは、加齢性疾患（例えば、心血管疾患および骨粗しょう症）、およびホルモン依存性の癌（すなわち、乳癌および前立腺癌）に対するその潜在的な保護効果に起因して調査に関して注目が増大している。植物エストロゲンには３つの主な分類がある：１）イソフラボン（主に大豆由来）、２）リグナン（亜麻仁で大量に見出される）、および３）クメスタント（ｃｏｕｍｅｓｔａｎｔｓ）（アルファルファのような発芽植物由来）。これらの主な３つの分類のうち、イソフラボンのヒトでの消費は、大豆を含む食品におけるその利用度および多様さに起因して最大の影響を有する。イソフラボンのうちでも、ゲニステインおよびダイゼインは最も強力なエストロゲンホルモン活性を発揮すると考えられ、したがってこれらの分子に最も注意が向けられている（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。しかし、これらのイソフラボン分子は、大豆食品中でその生物学的に活性な形態では高レベルで存在することはなく、前駆体型で大量である。例えば、ゲニステインの前駆体であるゲニスチンは、分子の炭水化物部分を含むグリコシド型である。さらに、マロニルグルコシドおよびアセチルグルコシド型も見出される。これらの結合体は、腸内細菌によってＧＩ管で代謝され、これは炭水化物成分を生物学的に活性な植物エストロゲンであるゲニステインに加水分解する。同じ代謝工程が、グリコシド型ダイゼインから変換されるアグリコンダイゼインについて生じる。次いで、ダイゼインはさらに、「エクオル産生（ｅｑｕｏｌ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ）」哺乳動物においてエクオルに代謝される。その後、エクオルは、極めて高濃度で血流中において循環する。エクオルは、大豆が消費されない限りほとんどの健常な成体の尿には通常は存在しない。インビボでのエクオルの形成は、ｇｅｒｍ−Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ動物がエクオルを排泄しないという知見、ならびに腸内フローラが新生児ではまだ発達してないという事実のせいで、出生から排他的に大豆食を供給された新生または４ヶ月齢の新生児の血漿および尿ではエクオルが見いだされないという知見から証明されるとおり、腸内ミクロフローラに排他的に依存する。非特許文献４を参照のこと。
【０００５】
イソフラボンのフェノール環構造によって、これらの化合物は、エストロゲン受容体（ＥＲ）に結合してエストロゲンを模倣することが可能である。ゲニステインおよびダイゼインは、ＥＲに結合するが、それはエストラジオールに比較して低い親和性であり、ＥＲαに対してよりもＥＲβに対して親和性が大きい。さらに、植物エストロゲンは、身体全体を通じて種々の組織部位で天然の選択性エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）のように作用することが報告されている。いくつかの組織では、植物エストロゲンはエストロゲンアゴニストとして作用するという証拠があるが、他方ではそれらは、タモキシフェンまたはラロキシフェンの特徴に匹敵するアンタゴニスト様の特徴を示す（ＳＥＲＭ活性が性ホルモンおよび性別依存性と考えられる）。
【０００６】
科学論文の大部分がダイズまたはクローバーの天然のイゾフラボンに集中しているが、その腸内由来の代謝物の作用または影響について報告しているものもわずかにある。
【０００７】
エクオル（７−ヒドロキシ−３（４’ヒドロキシフェニル）−クロマン）は、植物エストロゲンダイゼインの主要な代謝物であって、ダイズおよびダイズ食品において豊富に見出される主要なイソフラボンの１つである。しかし、エクオルは、植物エストロゲンではない。なぜなら、植物の天然の成分ではないからである。エクオルは、どの植物ベースの生成物にも天然には存在しない。むしろ、これは、非ステロイド性のイソフラボンであって、排他的に、腸内細菌代謝物の生成物である（比較的少ない個体では、約３０〜４００％が、ダイズイソフラボンをエクオルに変換するのに必要なミクロフローラを有する）。エクオルでの以前の研究では、エクオルがある程度弱いエストロゲン特性を有し、性ホルモン結合グロブリンに結合し、α−フェトプロテインに結合し、抗酸化活性を有することが確認されている。しかし、エクオルは、植物由来のイソフラボンのなかでも、不斉中心を有し、従って、２つの別個の鏡像異性型、すなわちＲ鏡像異性およびＳ鏡像異性体として存在するという点で特有である。本発明者らは、エクオルのＳ鏡像異性体が、ダイズを消費する「エクオル産生（ｅｑｕｏｌ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ）」哺乳動物の尿および血漿中で見出される排他的なエクオルの形態であり、ヒト腸内細菌によって作成される唯一のエクオルの鏡像異性体であるということを示している。エクオルに関する全ての以前の研究は、エクオルのラセミ型で行われていると考えられる。一般には、２つの形態のエクオルが存在するという認識が欠如しており、個々の鏡像異性体の特異的な作用または活性に対する以前の研究というのは本発明者らの知見の前には報告されていない。Ｒ鏡像異性体およびＳ鏡像異性体は、立体配置的に異なり、結果としてその生物学的な活性に影響する。例えば、Ｓ鏡像異性体のエクオルのみが十分な親和性でエストロゲン受容体（ＥＲ）に結合し、これによってヒトで報告される循環エクオルレベルで結合するようになる。１７βエストラジオールに比較して、ＥＲαに対するＲおよびＳエクオルの鏡像異性体の相対的な結合親和性は、それぞれ２１０．６および４９．２倍である。しかし、Ｓ−エクオル鏡像異性体は、ＥＲβ選択性であって、ＥＲβに比較的高い親和性を有するとみなされる。鏡像異性体Ｓ−エクオルは、１７βエストラジオールの約２０％でＥＲβに結合する［エクオル、Ｋｄ＝０．７ｎＭ対１７β−エストラジオール、Ｋｄ＝０．１５ｎＭ］が、Ｒエクオル鏡像異性体は、約１００分の１で結合する。Ｒ−エクオルは、天然には存在しないが、身体でのアンドロゲン媒介性のプロセスを調節する能力のせいでかなり重要なものである。
【０００８】
前立腺は、その発生および成長に関してアンドロゲンホルモン作用に依存し、ヒトの前立腺過形成（ＢＰＨ）の発達には明らかに、加齢の間の精巣のアンドロゲンの組み合わせを要する。しかし、テストステロンは、前立腺の成長を担う主要なアンドロゲンではない。主要な前立腺のアンドロゲンは、前立腺癌の現在の治療が５αリダクターゼ阻害剤による５αＤＨＴ減少に向かっていることによって証明されるとおり、５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）である。ヒトＢＰＨでは上昇されないが、前立腺の５α−ＤＨＴのレベルは、血漿のテストステロンの減少にかかわらず、加齢でも正常なレベルで残る。テストステロンは、前立腺の間質および基底細胞において５αリダクターゼによって５α−ＤＨＴに変換される。５α−ＤＨＴは主に、前立腺の発達およびＢＰＨの病因を担う。５αリダクターゼの阻害剤は、前立腺のサイズを２０％〜３０％減少させる。この腺組織における減少は、アポトーシスの誘発によって達成され、これは管萎縮によって組織学的に明らかになる。５αリダクターゼは、２つのアイソフォーム、１型および２型として存在し、前立腺は、優先的に２型のアイソフォームを発現し、肝臓および皮膚は主に１型のアイソフォームを発現している。患者は、１型ではなく、２型の５αリダクターゼにおける相違で特定されている。２型５αリダクターゼヌル変異を有するノックアウトマウスは、５αリダクターゼの欠損のあるヒトでみられる表現型と類似の表現型を示す。１型の５αリダクターゼノックアウトの雄性マウスは、生殖機能に関して表現型は正常である。５αリダクターゼまたは免疫組織化学検出についての酵素活性は、他の尿生殖器組織、例えば、精巣上体、精巣、グベマキュラム（ｇｕｂｅｍａｃｕｌｕｍ）およびｃｏｒｐｏｒａｌ ｃａｖｅｍｏｓａｌ組織において注目されている。
【０００９】
定量的に、女性は、エストロゲンよりも大量のアンドロゲンを分泌する。主要な循環ステロイドは一般に、アンドロゲンとして分類され、これには、血清濃度の降順で、デヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡＳ）、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、アンドロステンジオン（Ａ）、テストステロン（Ｔ）、および５α−ＤＨＴが挙げられるが、終わりの２つだけが、有意な程度までアンドロゲン受容体に結合する。他の３つのステロイドは、プロアンドロゲンとしてさらに優れているとみなされる。５α−ＤＨＴは主にテストステロン代謝の末端産物である。テストステロンは両方、その遊離型で循環し、アルブミンおよび性ステロイドホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）を含むタンパク質（そのレベルは、遊離のテストステロン濃度の重要な決定因子である）に結合する。閉経後の卵巣は、アンドロゲン分泌器官であって、テストステロンのレベルは、閉経移行期または閉経期の出現によっては直接影響されない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｋｎｉｇｈｔ Ｄ．Ｃ．ら、Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏ，１８７：８９７〜９０４、（１９９６）
【非特許文献２】Ｓｅｔｃｈｅｌｌ，Ｋ．Ｄ．Ｒ．Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ，１２９：１３３３Ｓ〜１３４６Ｓ（１９９８）
【非特許文献３】Ｋｕｒｚｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｎｕｔｒ，１７：３５３〜３８１（１９９７）
【非特許文献４】Ｓｅｔｃｈｅｌｌ Ｋ．Ｄ．Ｒ．ら、Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ １９９７；３５０：２３〜２７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
いくつかの研究の取り組みは、以下のようなアンドロゲン依存性の疾患の処置のためのステロイド性の化合物の開発に集中していた：（男性型）多毛症、アンドロゲン脱毛症、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、および前立腺癌。５α−ＤＨＴは、主にステロイド５αリダクターゼ酵素を遺伝的に欠く男性の臨床評価を主に通じて、これらの疾患の進行における原因因子とみなされている。このような研究の結果として、この酵素の阻害は、新規な抗アンドロゲン薬物の設計および合成の薬理学的ストラテジーになっている。しかし、５αリダクターゼの阻害が、５αリダクターゼ阻害剤を用いる従来の治療の報告された副作用から生じる禁忌によって証明されるとおり、この系に有害な影響を有するか否かは明らかではない。５α−ＤＨＴの阻害を標的する異なるストラテジーの開発は、アンドロゲン媒介性の状態の治療における主な進歩である。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（要旨）
本発明は、被験体における神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させる方法である。本発明は、この神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させるのに十分な量でエクオルを含む組成物を投与することを包含する。
【００１３】
このエクオルは、Ｒ−エクオルとＳ−エクオルとのラセミ混合物であってもよい。好ましくは、このエクオルは、Ｒ−エクオルで鏡像異性的に富化される。あるいは、このエクオルはＳ−エクオルで鏡像異性的に富化されてもよい。
【００１４】
神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害は、抑うつ、不安、双極性障害、強迫性障害、多動性障害、体重増加、または肥満であってもよい。神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害は、アルツハイマー病またはパーキンソン病であってもよい。神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害は、閉経周辺期または閉経後症状であってもよい。
【００１５】
組成物はさらに、賦形剤を含んでもよい。好ましくは、組成物は、錠剤、カプセル、粉末、トローチ、バッカル錠および舌下錠からなる群より選択される経口処方物中にある。組成物は、少なくとも約０．２５ｍｇのエクオルを含む経口処方物であってもよい。組成物は、食物および飲料であってもよい。組成物は、遅延性の処方物であってもまたは徐放性の処方物であってもよい。
【００１６】
好ましくは、エクオルは、遊離の５α−ジヒドロテストステロンを結合し、かつアンドロゲン受容体とのその結合を阻害するのに十分な量である。好ましくは、エクオルは、遊離の５α−ジヒドロテストステロンを結合し、かつアンドロゲン受容体とのその結合を阻害するのに十分であって、エストロゲン受容体サブタイプを結合するのに十分な量である。
【００１７】
別の実施形態では、本発明は、被験体における肥満を軽減する方法である。該方法は、治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する。
【００１８】
別の実施形態では、本発明は、被験体における抑うつを軽減する方法である。該方法は、治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する。
【００１９】
さらに別の実施形態では、本発明は、被験体における不安を軽減する方法である。該方法は、治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する。
【００２０】
さらなる実施形態では、本発明は、被験体における神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害の個人的な処置を提供する方法である。該方法は、患者の情緒的健康、精神的健康または内分泌の健康を評価する工程と；患者のエクオルプロデューサ状態を評価する工程と；ａ）投与方式、ｂ）投与量、およびｃ）投与間隔からなる群より選択される、治療の最適に有益な経過を決定する工程と；を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、Ｓ−エクオルおよびＲ−エクオル鏡像異性体の化学構造を示す。
【図２Ａ】図２Ａは健常な成人に対するＲ−エクオルの経口投与後の血漿中のＲ−エクオルの出現／消失を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは健常なヒト成人におけるＳ−エクオルまたはＲ−エクオルの経口投与後の血漿におけるＳ−エクオルまたはＲ−エクオルの出現／消失のプロット（平均レベル）を示す（Ｋ．Ｄ．Ｓｅｔｃｈｅｌｌら、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．，８１：１０７２〜１０９１，２００５より）。
【図３】図３は、光学的二色性によって特徴づけられた純粋な鏡像異性体標準に比較して、成人の消費する大豆食品由来の尿のサンプル由来のエクオルの鏡像異性体の溶出のマスクロマトグラムを示す。
【図４】図４は、合成された食品のトリメチルシリルエーテル誘導体のＧＣ−ＭＳ分析を示す。
【図５】図５は、ラセミ混合物由来のＳ−エクオルおよびＲ−エクオルのキラル分離のマスクロマトグラムを示す。
【図６Ａ】図６Ａは、ＤＭＳＯまたはエクオルを皮下注射された無傷の（インタクトな）雄性ラットの前立腺の重量を示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ＤＭＳＯまたはエクオルを皮下注射された無傷の雄性ラットの黄体形成ホルモン（ＬＨ）を示す。
【図７】図７は、［３Ｈ］ＤＨＴ＋エクオルにおける（ただし［３Ｈ］ＤＨＴ単独ではない）別個のピークを示す。
【図８Ａ】図８Ａは、前立腺（Ａ）とともにインキュベートした［３Ｈ］−ＤＨＴ＋エクオルにおける２つの別個のピークを示しており、一方、
【図８Ｂ】図８Ｂは、前立腺（Ｂ）とともにインキュベートした［３Ｈ］−ＤＨＴには単一のピークしか存在しないことを示す。
【図９】図９は、［３Ｈ］−ＤＨＴに対するエクオルの特異的な結合を示す。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ＤＭＳＯ、５α−ＤＨＴ、エクオルまたは５α−ＤＨＴおよびエクオルの両方をｓｃ注射した性腺摘出（ＧＤＸ）雄性ラットにおける前立腺重量を示す。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ＤＭＳＯ、５α−ＤＨＴ、エクオルまたは５α−ＤＨＴおよびエクオルの両方をｓｃ注射した性腺摘出（ＧＤＸ）雄性ラットにおける血漿ＬＨを示す。
【図１１】図１１は、ＤＭＳＯ、ＤＨＴＰ、エクオルまたはＤＨＴＰおよびエクオルの両方で処置したラットにおける血漿の５α−ＤＨＴの値を示す。
【図１２】図１２は、Ｔｒｅｎｔ：ＤＭＳＯ（Ａ＆Ｅ）、エクオル（Ｂ＆Ｆ）、ＤＨＴ（Ｃ）、またはＤＨＴに加えてエクオル（Ｄ）のいずれかで処置したＧＤＸ（Ａ−Ｄ）および無傷の（Ｅ＆Ｆ）ラットの前立腺におけるエクオルの組織学的効果を示す。
【図１３】図１３は、ＤＭＳＯ（Ａ）またはエクオル（Ｂ）で処置した無傷のラットの精巣上体に対するエクオルの組織学的影響を示す。
【図１４】図１４は、イソフラボン−リッチ（Ｐｈｙｔｏ−６００）または植物エストロゲンなし（Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ）食餌のいずれかを供給された雄性ラットにおける体重を示す。
【図１５】図１５は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ（植物エストロゲンなし）の食餌のいずれかを供給された雄性ラットにおける白色脂肪組織質量を示す。
【図１６】図１６Ａおよび図１６Ｂは、それぞれＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給された雄性ラットにおける食物および水の摂取を示す。
【図１７】図１７Ａおよび図１７Ｂは、それぞれＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給された雄性ラットにおける血漿のレプチンおよびインスリンの値を示す。
【図１８】図１８は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ（植物エストロゲンなし）の食餌のいずれかを供給された雄性ラット（絶食でない）由来の血清グルコース値を示す。
【図１９】図１９は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雄性ラットにおける甲状腺（Ｔ３）血清レベルを示す。
【図２０】図２０は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラットの体重を示す。
【図２１】図２１は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラット由来の白色脂肪組織の質量を示す。
【図２２】図２２は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラット由来の血中グルコース値を示す。
【図２３】図２３は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラット由来の血中Ｔ３値を示す。
【図２４】図２４は、５０日齢後にＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラットの体重を示す。
【図２５】図２５は、５０日齢後にＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラットの白色脂肪組織の質量を示す。
【図２６】図２６は、５０日齢後にＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラットの血清レプチン値を示す。
【図２７】図２７は、５０日齢後にＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラットの血清インスリン値を示す。
【図２８】図２８は、行動的発情期誘導レジメンの後、およびそこにおかれたＰｈｙｔｏ−６００（黒のバー）またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ（白のバー）食餌のいずれかを供給されたＯＶＸラットの体重を示す。
【図２９】図２９は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給されたＯＶＸラットの白色脂肪組織の質量を示す。
【図３０】図３０は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給されたＯＶＸラットの血清レプチンの値を示す。
【図３１】図３１は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１１２日齢の雄性ラットの体重を示す。
【図３２】図３２は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された２７９日齢の雄性ラットの体重を示す。
【図３３】図３３は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された３５０日齢の雄性ラットの体重を示す。
【図３４】図３４は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された３５０日齢の雄性ラットの脂肪組織質量を示す。
【図３５】図３５は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された３５０日齢の雄性ラットにおける血中インスリン値を示す。
【図３６】図３６は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された３５０日齢の雄性ラットの血中レプチン値を示す。
【図３７】図３７は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１１２日齢の雌性ラットの体重を示す。
【図３８】図３８は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された２７９日齢の雌性ラットの体重を示す。
【図３９】図３９は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１４５日齢の雄性のＮｏｂｌｅラットの体重を示す。
【図４０】図４０は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１４５日齢の雄性のＮｏｂｌｅラット由来の白色脂肪組織質量を示す。
【図４１】図４１は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１４５日齢の雌性のＮｏｂｌｅラットの体重を示す。
【図４２】図４２は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１４５日齢の雌性のＮｏｂｌｅラット由来の白色脂肪組織質量を示す。
【図４３】図４３は、エクオル注射を受ける前のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラットのベースラインの体重を示す。
【図４４】図４４は、エクオルまたはビヒクルの注射を受ける前のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する２１日後の３つの群のラットの体重を示す。
【図４５】図４５は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた７日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラットの体重を示す。
【図４６】図４６は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた１５日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラットの体重を示す。
【図４７】図４７は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた２２日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラットの体重を示す。
【図４８】図４８は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた２８日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラットの体重を示す。
【図４９】図４９は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた２８日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラット由来の脂肪組織質量を示す。
【図５０】図５０は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた２８日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラット由来の精巣の重量を示す。
【図５１】図５１は、４つの異なる食餌を供給された３００日齢の雄性ラットの高架式十字迷路不安関連行動（ｅｌｅｖａｔｅｄ−ｐｌｕｓ ｍａｚｅ ａｎｘｉｅｔｙ−ｒｅｌａｔｅｄ ｂｅｈａｖｉｏｒ）の回数（オープン・アームに進入）を示す。
【図５２】図５２は、４つの異なる食餌を供給された３００日齢の雄性ラットの高架式十字迷路不安関連行動（オープン・アームにおける時間）を示す。
【図５３】図５３は、４つの異なる食餌を供給された３３０日齢の雌性ラットの高架式十字迷路不安関連行動（オープン・アームに進入）を示す。
【図５４】図５４は、４つの異なる食餌を供給された３３０日齢の雌性ラットの高架式十字迷路不安関連行動（オープン・アームの時間）を示す。
【図５５】図５５は、４つの異なる食餌を供給された３３０日齢の雄性ラットにおける血清イソフラボン値を示す。
【図５６】図５６は、４つの異なる食餌を供給された３３０日齢の雌性ラットにおける血清イソフラボン値を示す。
【図５７】図５７は、イソフラボンを含む食餌に密接であるという５週後の個体についてのＢＭＩで観察された変化を示す。
【図５８】図５８は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の総移動距離（メートル）のグラフである。
【図５９】図５９は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の全平均速度（１秒あたりのメートル）のグラフである。
【図６０】図６０は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の総移動時間（秒）のグラフである。
【図６１】図６１は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の潜水の総回数のグラフである。
【図６２】図６２は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の総移動時間（秒）のグラフである。
【図６３】図６３は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の排泄されたボリ（ｂｏｌｉ）の総数のグラフである。
【図６４】図６４は、Ｐｈｙｔｏ−（Ｆｒｅｅ）給餌したコントロールの動物に比較したエクオル処置した成体雄性ラットにおける体重減少のグラフである（１処置群あたりｎ＝８）。
【図６５】図６５は、高架式十字迷路（ＥＰＭ）のオープン・アームへの進入回数のグラフである。
【図６６】図６６は、ＥＰＭのオープン・アームにおいて経過した時間のグラフである。
【図６７】図６７は、２５連続日の間エクオルで処置された後の成体雄性ラットにおける脳のホルモン感受性の視床下部領域の図示である。
【図６８】図６８は、ＥＰＭのオープン・アームへの進入回数のグラフである。
【図６９】図６９は、ゲニステインまたはコントロールの動物に比較したエクオルを用いて、出生前および出生後早期の発達の間処置した雄性ラットのＥＰＭのオープン・アームでの経過時間の別のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
（図面および本発明の好ましい実施形態の詳細な説明）
エクオルがエストロゲンの作用に関するという薬理学の理解における近年の進歩にかかわらず、本研究者らは、エクオルの強力な抗エンドロゲン作用が特有かつ新規であることを示しており、アンドロゲン関連状態を予防または治療するための新規なアプローチを公開する。５α−ＤＨＴを結合または隔離することによって、５α−ＤＨＴ感受性の組織に対するその効果を阻害する手段が得られる。５α−ＤＨＴに特異的である公知のリガンドはないが、このような薬剤は、アンドロゲン受容体を直接標的する無差別な化合物またはアンドロゲン合成に関与する酵素を上回る別個の利点を有する。
【００２３】
本発明は、エクオルが、神経精神医学的障害、例えば、抑うつ、不安；および神経変性障害、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、または軽度痴呆を予防および／または処置するのに用いられ得るという本発明者らによる予期せぬ発見に基づく。本発明者らはさらに、エクオルが、給餌の調節および体重管理の動機付けに影響し得るということに注目した。
【００２４】
これらの知見は、健康および疾患における重要な分岐であって、アンドロゲン媒介性の病理の処置におけるエクオルの潜在的な広範かつ重要な用途を示す。特定の機構に限定されないが、エクオルは、抗アンドロゲンとして作用し得ると考えられる。エクオルの抗アンドロゲン特性は、エクオルがアンドロゲン受容体（ＡＲ）に結合しないが、５αジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）には高い親和性で特異的に結合し、それによって５α−ＤＨＴをＡＲ結合から妨げるという点で特有である。さらに、エクオルのＲ鏡像異性体およびＳ鏡像異性体は特異的に５α−ＤＨＴを結合し、ＡＲから５α−ＤＨＴを隔離し、生理学的プロセスにおける５α−ＤＨＴの作用をインビボでブロックし得る。ラセミのエクオルは、Ｒ−エクオルおよびＳ−エクオルならびにＲ−エクオルまたはＳ−エクオルの単独を構成し、選択的に５α−ＤＨＴを結合する。
【００２５】
哺乳動物では、２つの主要なアンドロゲン、テストステロンおよびその５α−還元代謝物である５α−ＤＨＴがある。５α−ＤＨＴは、哺乳動物の身体で最も強力なアンドロゲンとして認識されている。ＡＲは、ヒトのＸ染色体に位置する単一コピーの遺伝子でコードされており、アンドロゲンの作用を特異的に媒介する。テストステロンおよび５α−ＤＨＴの両方がＡＲに結合するが、テストステロンによってごくわずかに影響される特定の組織（すなわち、前立腺、毛包など）は５α−ＤＨＴによって大きく影響される。さらに、５α−ＤＨＴは、多数の疾患および障害に関与している。なぜなら、上述のとおり、エクオルは、５α−ＤＨＴに特異的に結合してその作用を妨げるので、アンドロゲン媒介性の病理の治療におけるエクオルの広範かつ重要な用途についての効能があるからである。詳細には、本発明者らは、エクオルが神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または処置するために用いられ得るということを発見した。
【００２６】
エクオルは、ステロイド性のエストロゲンエストラジオールと類似の構造を有する。エクオルは、不斉中心を有し、それ自体が２つの別個の鏡像異性体型、Ｒ鏡像異性体およびＳ鏡像異性体として存在するという点でイソフラボンの中でも特有である。エクオルに対する以前の全ての研究は、エクオルのラセミ型で行われていると考えられる。２つの型のエクオルが存在するという認識は一般にはなく、個々の鏡像異性体Ｒ−エクオルおよびＳ−エクオルが５α−ＤＨＴに特異的に結合するという特異的な作用または活性に対する以前の研究というのは本発明者らの知見の前には報告されていない。エクオルのラセミであるＲ−エクオルまたはＳ−エクオルは、アンドロゲン受容体には結合しない。Ｒ−エクオルは、エストロゲン受容体系には結合しない。Ｓ−エクオルのみがＥＲβに結合する（１７β−エストラジオールよりも約５分の一の親和性）。従って、Ｒ−エクオルおよびＳ−エクオルは、ＳＥＲＭ様の特性を有し、さらに最も強力な循環アンドロゲンである５α−ＤＨＴに選択的に結合する能力を有している。
【００２７】
ダイズおよびその成分のイソフラボンで最も重要なゲニステインおよびそれより程度として劣るダイゼインは、そのエストロゲン作用に、または非ホルモン作用、例えば、酵素、成長因子もしくはサイトカインに対するその作用、またはそれらの抗酸化作用に集中していた。イソフラボンの潜在的な抗アンドロゲン作用の考察は以前には決してなく、エクオルの鏡像異性型が言及されているだけである。本発明は、エクオルの鏡像異性型の影響、詳細には、ダイゼインの天然の代謝物であるＳ−エクオルおよびＲ−エクオル（強力なアンドロゲンジヒドロテストステロン５α−ＤＨＴの作用を拮抗する）の両方の能力に取り組む。また、特定の理論で拘束されることは望まないが、エクオルは、エストロゲン受容体サブタイプを介してエストロゲン様分子として作用する正の役割を果たすと現在考えられている。このような効果によって、５α−ＤＨＴが有害な役割を果たす疾患の予防および処置に対する食餌性、栄養補給および薬理学的なアプローチの新規な可能性が切り開かれる。これには、前立腺癌、皮膚疾患、脱毛、神経精神医学的な疾患または障害、および神経変性疾患が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、Ｓ−エクオルのエストロゲン作用はまた、前立腺癌を処置または予防するのに有益であり得る。なぜなら、エクオルの併用の作用は、エストロゲン受容体レベルで、かつ抗アンドロゲンとして作用するからである。
【００２８】
エクオルは５α−ＤＨＴと結合する
エクオル（７−ヒドロキシ−３（４’ヒドロキシフェニル）−クロマン）は、ダイズおよびダイズ食品で豊富に見出されるイソフラボンである、植物エストロゲンダイジン（ｄａｉｄｚｉｎ）およびダイゼイン（ｄａｉｄｚｅｉｎ）の主要な代謝物であり、重要な生物学的に活性な分子である。植物エストロゲンの豊富な食餌を供給された動物では、主要な循環イソフラボンはエクオルであり、これは、総循環イソフラボンレベルの７０〜９０％を占める。本発明は、エクオルの生物学的特性の新規なレベルを開示する。結合研究では、エクオルの鏡像異性体は、５α−ＤＨＴに特異的に結合するが、テストステロン、ＤＨＥＡまたはエストロゲンには結合しない。そのように結合することによって、エクオルは、アンドロゲン受容体自体に直接結合することなくアンドロゲン受容体から５α−ＤＨＴを隔離する。インビボの研究では、無傷（インタクト）な雄性ラットにおけるエクオルの治療は、前立腺および精巣上体の重量を有意に減少させたが、精巣の重量は減少させなかったことが示されている。エクオル投与後の５α−ＤＨＴで処置した去勢雄性ラットでは、エクオルは、前立腺に対する５α―ＤＨＴ栄養作用をブロックし、その負のフィードバックが血漿黄体形成ホルモン（ＬＡ）レベルに影響する。
【００２９】
特定の理論の作用機序に拘束されることは望まないが、エクオルは、特異的に５α−ＤＨＴを結合すること、およびアンドロゲン受容体（ＡＲ）に対してそれ自体結合することなく５α−ＤＨＴがＡＲに結合することを予防することによって抗アンドロゲンとして作用し得ると現在考えられている。ＡＲにすでに結合している５α−ＤＨＴは、鏡像異性体のエクオルによって競合的に結合しないことも示されている。従って、本発明の一実施形態は、ＤＨＴ−ＡＲ結合が生じる前に５α−ＤＨＴとエクオルとを接触させることによって、５α−ＤＨＴがＡＲに結合することを予防する方法である。この鏡像異性体のエクオルは、インビトロまたはインビボにおいて５α−ＤＨＴと接触させられ得る。５α−ＤＨＴがインビボで接触させられる場合、エクオルは、血流へのエクオルの吸収を可能にする任意の経路で投与されてもよい。生物学的に利用可能な５α−ＤＨＴは、遊離であって、エクオルとの結合前はいかなる天然のリガンドにも結合されない。
【００３０】
生殖器官、例えば、前立腺および精巣上体は、アンドロゲン制御下であることが公知である。例えば、思春期前には、循環中のアンドロゲンレベルが極めて低い場合、高レベルのダイズ由来イソフラボンを含む食餌を供給されたラットの前立腺重量は、この食餌の消費によって変更されない。しかし、思春期後には、アンドロゲンレベルが増大する場合、前立腺重量は、植物エストロゲンなしの食餌を供給された動物に比較して植物エストロゲンの豊富な食餌を供給されたラットでは有意に低下する。本明細書に示されるとおり、エクオル処置された無傷のラットは、前立腺および精巣上体の重量の有意な低下を示す（短期間の研究の間は精巣または下垂体重量における変化なし）。著しいことに、前立腺および精巣上体の値が体重に対して標準化される場合（１００グラムあたり）、その比はエクオル処置とコントロールの値との間でやはり有意に異なる。エクオルはまた、テストステロンレベルを有意に変化させることなく、前立腺および精巣上体に対する５α−ＤＨＴのアンドロゲン栄養性の影響をブロックした。
【００３１】
５α−ＤＨＴは、黄体形成ホルモン（ＬＨ）の循環血漿値に負のフィードバック効果を有する。エクオルは５α−ＤＨＴに結合すること、およびこのフィードバック効果を妨げることによってＬＨレベルを有意に増大すると考えられる。例えば、エクオルは、性腺摘出（ＧＤＸ）雄性においてＬＨレベルに対する５α−ＤＨＴの阻害作用を完全に逆転するが、５α−ＤＨＴに加えてエクオルで処置した雄性ラットは、コントロールの値と類似のＬＨ値を示す。これらのデータによってさらに、エクオルが、おそらく血液循環系において、５α−ＤＨＴに結合する特異的な能力を有し、ＬＨ産生または分泌を抑制するのにおいて５α−ＤＨＴのホルモン作用をブロックし得ることが示唆される。従って、本発明の実施形態は、個体の５α−ＤＨＴと鏡像異性のエクオルとの接触によって個体のＬＨ値を調節する方法である。エクオルはエクオルの血流への吸収を可能にする任意の経路で、処置される病気の性質および個体の大きさに従って投与される量で投与されてもよい。
【００３２】
エクオルの構造
エクオルは、複素環における二重結合の欠失に起因して不斉中心を有するという点でほとんどのイソフラボンとは異なる。ダイズ由来（ダイゼイン、グリシテインおよびゲニステイン）、クローバー由来（ホルモノネチンおよびビオチャニンＡ）、およびくず由来（ピューラリン（ｐｅｕｒａｒｉｎ））の植物エストロゲンイソフラボンは、不斉中心を有さない。図１は、Ｒ−エクオルおよびＳ−エクオルの化学構造を示す。
【００３３】
Ｒ鏡像異性体およびＳ鏡像異性体は立体配置的に異なり、かつこれはエクオル鏡像異性体がどのように二量体化ＥＲ複合体の腔における結合部位に適合するか、およびそれが５α−ＤＨＴにどのように結合するかに影響すると予想される。
【００３４】
エクオルのうち約５０％が、ヒトにおいて遊離型または未結合型で循環し、これは血漿中の遊離のダイゼイン（１８．７％）またはエストラジオール（４．６％）の割合よりもかなり大きい。これは、受容体占有について、おそらくは５α−ＤＨＴ結合について利用可能な未結合の画分であるので、これは、エクオルの全体的な力価を増強するのに有効に寄与する。
【００３５】
エクオルを含有する組成物
本発明は、遊離の５α−ＤＨＴ（ただしテストステロンでもＤＨＥＡでもない）に結合して隔離することができるエクオルの少なくとも生理学的な受容できる量を有しており、それによって個体に対する投与後にそれがアンドロゲン受容体に結合することを妨げ、それによって健康および疾患の重要な分岐を、並びにアンドロゲン媒介性病理の処置における広範かつ重要な用途を有する組成物を包含する。詳細には、エクオルを含む組成物は、神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または処置するために用いられ得る。
【００３６】
好ましくは、エクオル（Ｓ−エクオル、Ｒ−エクオル、ラセミのエクオル混合物、または非ラセミのエクオル混合物であってもよい）を含有する組成物が、経口の消費のために作成される。
【００３７】
好ましくは、エクオルは、本発明の方法によって疾患または障害を予防または処置するのに十分な量である。好ましくは、治療有効量のエクオルが本発明の方法で用いられる。「治療有効量」という用語は、エクオル（Ｓ−エクオル、Ｒ−エクオル、ラセミのエクオル混合物、または非ラセミのエクオル混合物）の量であって、必要または所望の予防的または治療的な応答を惹起するのに十分な量、あるいは言い換えれば、被験体に投与された場合相当の生物学的応答を誘発するのに十分な量をいう。例えば、治療有効量のエクオルは、被験体における不安または抑うつを減じ得る。
【００３８】
組成物または該組成物を含有する製品は、市販のまたは施設の食品、医薬品（すなわち、薬物）および店頭販売の（ＯＴＣ）医薬品（一般用医薬品）（すなわち、栄養補給食品）であってもよい。
【００３９】
好ましくは、食品組成物は、１回あたり、少なくとも約０．２５ｍｇを含み、より好ましくは、食品組成物は、約１ｍｇ、好ましくは最大約２００ｍｇまでの鏡像異性体のエクオルまたはエクオル混合物を含む。食品組成物中のエクオルの他の量も考慮される。
【００４０】
好ましくは、経口投与医薬は、１用量あたり、少なくとも約０．２５ｍｇ、より好ましくは約１ｍｇ、好ましくは最大約２００ｍｇまでの鏡像異性体のエクオルまたはエクオル混合物を含む。医薬組成物中のエクオルの他の量も考慮される。
【００４１】
好ましくは、局所適用のための製品は、少なくとも約０．１重量％、最大約１０重量％のＳ−エクオルもしくはＲ−エクオル、または鏡像異性体混合物を含んでもよい。他の濃度のエクオルもエクオルを含む局所製品について考慮される。
【００４２】
本発明の組成物はまた、他の化粧品および医薬品の活性成分および賦形剤を含んでもよい。このような適切な化粧品および医薬品としては、限定はしないが、抗真菌剤、ビタミン、抗炎症剤、抗菌剤、鎮痛薬、一酸化窒素シンターゼ阻害剤、防虫剤、セルフ・タンニング剤、界面活性剤、保湿剤、安定化剤、防腐剤、消毒剤、増粘剤、潤滑剤、保湿剤、キレート剤、皮膚浸透増強剤、エモリエント、芳香剤、および着色剤が挙げられる。
【００４３】
鏡像異性体のエクオルはまた、グルクロニド、硫酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、グルコシド、アセチル−グルコシド、マロニル−グルコシドおよびそれらの混合物からなる群より選択される結合体とＣ−４’またはＣ−７位置で結合体化された、鏡像異性のエクオル結合体であってもよい。
【００４４】
アンドロゲン関連の疾患およびそれに関連する状態の処置および／または予防のために被験体に投与するため、あるいはその素因を減少させるための、鏡像異性のエクオルまたはエクオルの混合物を含む組成物または調製物はまた、１つ以上の薬学的に受容可能なアジュバント、担体および／または賦形剤を含んでもよい。薬学的に受容可能なアジュバント、担体および／または賦形剤は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，第二版、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，１９９４（参照によって本明細書に組み込まれる）に例えば記載されるように当該分野で周知である。
【００４５】
一実施形態では、本発明の組成物は、０％より多くかつ９０％未満のＳ−エクオルについてのＥＥを有する、Ｓ−エクオルおよびＲ−エクオルの非ラセミ混合物を含む。０％のＥＥを有する組成物は、２つの鏡像異性体の５０：５０のラセミ混合物である。この組成物は、ラセミ混合物からＲ−エクオルまたはＳ−エクオル鏡像異性体のいずれかを完全に分離および除去することによって、ラセミ混合物から直接作成され得る。この組成物はまた、エクオルの混合物（非ラセミまたはラセミ混合物のいずれか）を含む第１のエクオル成分と、Ｓ−エクオルまたはＲ−エクオルから本質的になる組成物を含む第２の成分とを合わせることによって作成され得る。これは、過剰のＳ−エクオルまたはＲ−エクオルを有する非ラセミ組成物を生成する。組成物中のＲ−エクオル成分およびＳ−エクオル成分についての特異的な利点または指示に依存して、Ｓ−エクオルおよびＲ−エクオルを、Ｒ−エクオルに対するＳ−エクオルの比で、好ましくは約５０：５０〜約９９．５：１、さらに好ましくは約５１：４９〜約９９：１、好ましくは約５０：５０〜約１：９９．５未満、さらに好ましくは約４９：５１〜約１：９９で含む組成物が調製され得る。
【００４６】
この組成物は、錠剤、カプセル、再構成用の粉末、シロップ、食品（例えば、食品バー、ビスケット、スナック食品、当該分野で周知の他の標準的な食品）の形態で、または飲用の処方物で投与されてもよい。飲料は、香味料、緩衝液などを含んでもよい。
【００４７】
経口投与に適切な組成物は、別個の単位、例えば、カプセル、カシェ剤、口内錠、トローチ剤（ｔｒｏｕｃｈｅ）、錠剤、バッカル錠、舌下錠（この各々が所定の量の抽出物を含む）で存在してもよく；粉末または顆粒として；水溶液または非水溶液中の溶液または懸濁液として；あるいは水中油型または油中水型のエマルジョンとして存在してもよい。
【００４８】
この組成物は代表的には、有意な量の任意の他のアンドロゲン受容体結合化合物を含まない。
【００４９】
エクオルのプロデューサおよびノン・エクオルプロデューサを特定する
エクオルは、ダイズ由来のダイゼイン、およびメトキシル化イソフラボンホルモノネチン（ｆｏｒｍｏｎｏｎｅｔｉｎ）のグリコシド結合体、またはクローバーで見いだされるそのグリコシド結合体の加水分解後に形成される。一旦形成されれば、エクオルは、代謝的に不活性であると考えられ、さらなる生体内変換は受けず、肝臓での第二相代謝またはわずかな程度のさらなるヒドロキシル化を省く。ダイゼインおよびゲニステインと同様に、優勢な第二相反応は、グルクロン酸化であり、硫酸化はそれより少ない程度である。尿中のエクオルの存在が、大豆食品摂取の働きであるというオリジナルの発見に従い、成体集団の約５０〜７０％は、未解明の理由で、大豆食品を毎日与えられた場合でもエクオルを尿に排泄しなかったことが観察された。さらに、純粋なイソフラボン化合物が投与され、それによって食品の母体の影響が除かれた場合でも、多くの人はダイゼインをエクオルに変換しないことが示されている。この現象は、これらの２つの別個の集団を述べるために「エクオルプロデューサ」または「ノン・エクオルプロデューサ」（または「プア・エクオルプロデューサ」）という人の用語をもたらしている。
【００５０】
カットオフ値は、経験的に得られており、これによってこれらのカテゴリーのいずれかに個体を割り当てることが可能になる。１０ｎｇ／ｍＬ未満（４０ｎｍｏｌ／Ｌ）の血漿エクオル濃度を有する人は、「ノン・エクオルプロデューサ」に分類されてもよく、レベルが１０ｎｇ／ｍＬを超えれば（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）これは「エクオルプロデューサ」と定義する。この定義はまた、尿中のレベルに由来してもよく、エクオルプロデューサとは、１０００ｎｍｏｌ／Ｌより多く排泄するヒトである。エクオルの排泄は個体間で大きく変動し得るが、この反応を触媒する酵素の反応速度論における前駆体−産物の関係に一致して、エクオルを産生できるものと産生できないものとの間には大きな境界がある。結果として、尿のダイゼインとエクオルの値との間には反比例関係があり、いままでのところ有意な性差は明確になっていない。
【００５１】
エクオルの鏡像異性体の調製および単離
鏡像異性のエクオルは、そのままでも、またはラセミ混合物として調製されてもよい。化学合成経路を用いて、ラセミ混合物を良好な収率で産生してもよい。代表的な合成プロセスでは、標準的な化学処理を用いて、複素環の二重結合を水素化し、Ｃ−３位置でカルボニルを除去する。代表的な出発材料は、イソフラボン、例えば、ダイゼイン、ゲニステイン、グリシテイン、プエラリン、ホルモノネチンおよびビオチャニン（ｂｉｏｃｈａｎｉｎ）Ａおよびそれらのグルコシド結合体である。任意の結合体型が、加水分解によってそのアグリコンに還元される。反応に適切な溶媒としては、有機の酸、例えば、氷酢酸、低級アルコール、例えば、イソプロパノールおよびそれらの混合物が挙げられる。代表的に使用される還元触媒としては、パラジウム、例えば、チャコール上の１０％Ｐｄが挙げられる。反応は、大気温度から６０℃の温度で行われ得、ここで圧力は大気圧をわずかに上回り、最大２００ｐｓｉｇ（１４気圧、ゲージ）で、反応時間は最大３０時間以上である。
【００５２】
反応終了後、触媒を除去して、濾液を蒸発させる。その粗残渣を、代表的にはシリカゲルカラムを使用するクロマトグラフィによって精製し、溶出液はＣ２−Ｃ４アルコール、Ｃ３−Ｃ７アルカンおよびそれらの混合物を含む。精製された残渣は、ｎ−ヘキサンから結晶化して（±）エクオルを、代表的には少なくとも９９％、代表的には少なくとも７５％の収率で、純粋な産物として生成してもよい。エクオル結晶化生成物は無色で、吸湿性ではなく、空気中で安定であって、最終の濾過手順の間に分解されない。
【００５３】
ラセミのエクオルからの個々のＲ−鏡像異性体およびＳ−鏡像異性体の単離のための方法
エクオルのラセミ混合物は、Ｃ４−Ｃ８アルキルおよびＣ２−Ｃ４アルコールを含む移動相を有するキラル相カラムを用いて２つの別個の鏡像異性体に分離され得る。キラル相カラムの代表的な例は、ダイセル化学工業株式会社から販売されている、Ｃｈｉｒａｌ ＯＤカラムまたはＯＪカラムである。移動相の好ましい例は、７０％ヘキサンおよび３０％エタノールを含む。ラセミ混合物が入口へ通過する第１の時間後、その時間間隔は、カラムのタイプ、溶出剤のタイプ、溶出剤の流速、温度、およびラセミ混合物の質量に依存して、第１の流出剤が、ＨＰＬＣカラムの出口から回収される。第１の溶出剤は代表的にはＳ−エクオルである。ラセミ混合物が入口へ通過する第２の時間後、第２の溶出剤Ｒ−エクオルが得られる。このカラムからのエクオル鏡像異性体の溶出は、２６０〜２８０ｎｍでのＵＶ吸収によって、または質量分析計などのさらに特異的な検出システムおよびエクオルに特異的なイオンのモニタリングによって検出されてもよい。
【００５４】
Ｓ−エクオルの生物学的な生成
Ｓ−エクオルは、従来の食品技術を用いてバルクで生物学的に産生されてもよい。ダイゼインまたはダイゼインが誘導され得る別の関連のイソフラボンを含む、ベースの溶液媒体、食物または植物抽出物が提供され得る。ダイゼインまたは他のイソフラボンを、標準的な細菌または酵素のファーメンテーションプロセスによってＳ−エクオルに変換して、Ｓ−エクオルを含むバルク溶液、食物または植物抽出物を得てもよい。
【００５５】
エクオルへのダイゼインの変換は、３つの主要な工程を包含する：１）任意のグルコシド結合基の加水分解、２）イソフラボンアグリコンのジヒドロ中間体への変換、および３）ジヒドロ中間体のエクオルへの変換。必要な３つの工程の各々についての代謝経路および酵素は、必ずしも１つの細菌に存在する必要はない。ヒトの研究に由来する逸話的な証拠によって、これらの反応を行うことに関連して作用する１つ以上の細菌が存在してもよいことが示唆され、これは、しばしばジヒドロダイゼインが、血漿および尿中に有意な量で存在し得るが、エクオルは、低いかまたはほとんど検出され得ないという事実から証明される。エクオルは、単一生物体によってダイゼインから産生され得るが、おのおのがそれ自身の代謝プロフィールを有する細菌種の混合物を用いる場合、より優れたまたは効率的な変換が達成され得ると考えられる。Ｓ−エクオルへの有効な変換のための重要な条件としては、細菌生物体または生物体の混合物の選択、培養温度、および生物体に利用可能な酸素の量が挙げられる。これらの条件は、当業者に周知である技術によって最適化され得る。この変化を達成するために用いられる生物体は、食品産業で用いられる標準的技術によって不活性化されてもよいし、または生成物中で活性な状態で残されてもよい。
【００５６】
代表的には、ダイゼイン（または他の関連のイソフラボン）を中間生成物を通じてＳ−エクオルに変換するために１つ以上の細菌株が必要であり、これは一般に３つの主要な反応のうちの１つ以上に関与する：イソフラボングリコンのアグリコンイソフラボンへの変換；アグリコンイソフラボンのジヒドロイソフラボンへの変換；およびジヒドロイソフラボンの生成物エクオルへの変換。例えば、ウマの糞便から単離された生物体の混合培養物、または「エクオルプロデューサ」であることが知られた人の胃腸管由来の生物体の混合培養物は、それらがインビボで変換するように、グリコンダイゼインを最終産物Ｓ−エクオルに変換できる。
【００５７】
グリコンをアグリコンに（例えば、ダイゼインからダイゼイン）変換し得る代表的な細菌株としては、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、リステリア・ウエルシュメリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｗｅｌｓｈｉｍｅｒｉ）、「エクオル産生」哺乳動物の腸管から単離された生物体の混合培養物、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉａ ｌｉｍｏｓｕｍ、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｏｕｓ）、ラクトバチルス・デルブリッキ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｒｉｏｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）およびサッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、ならびにそれらの混合物が挙げられる。
【００５８】
アグリコンをエクオルに（例えば、ダイゼインからＳ−エクオル）変換し得る代表的な細菌株としては、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ、以下を含む混合培養物：ビフィドバクテリウム・ラクティス、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ラクトバチルス・カゼイおよびラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）；ならびに「エクオル産生」哺乳動物の腸管から単離される生物体の混合培養物が挙げられる。
【００５９】
グリコシドのアグリコンへの細菌変換、またはアグリコンのエクオル生成物への細菌変換に必要な時間は、細菌関連因子、詳細には、濃度、酸素の利用度、ならびにインキュベートする系の温度およびｐＨに依存する。ほとんどの場合、２４時間内に実質的に完全な変換を達成することが可能である。
【００６０】
イソフラボングリコシドのアグリコンイソフラボンへの細菌変換のためのｐＨの範囲は、約３〜約９である。最適のｐＨは主に用いられる細菌のタイプに依存し、それに応じて選択される必要がある。
【００６１】
グリコシドからアグリコンへの、およびアグリコンからエクオル産物への酵素変換に必要な時間は、酵素関連因子、詳細には、この系の濃度、および温度およびｐＨに依存する。ほとんどの場合、２４時間内に、さらに好ましくは約２時間内、最も好ましくは１時間内に実質的に完全な変換を達成することが可能である。
【００６２】
バルクで産生されるＳ−エクオルは、Ｓ−エクオルの細菌産生の得られたバルク溶液から、結晶化、溶媒抽出、蒸留および沈澱／濾過を含む当該分野で周知の方法によって分離され得る。得られたバルク溶液は、未反応のダイゼインまたは用いられる他の関連のイソフラボン、副産物および任意の反応物を含んでもよい。このような方法は、逆相または順相の液体クロマトグラフィカラムの使用を包含し、これらはキラル相クロマトグラフィと組み合わされてもよい。
【００６３】
バルク溶液または固相からのＳ−エクオルの除去の代表的な方法は抽出による。抽出溶液は、Ｓ−エクオルを含有する溶液または固相に加えられる。代表的には、抽出剤は、低分子量アルコール、例えば、メタノール、エタノール、イソプロプルアルコール、もしくはプロピルアルコール、または３．５〜５．５の範囲のｐＨを有する水溶液である。代表的には、水性アルコール法が用いられている場合、十分なアルコールを添加して、アルコール／水の比を最小４０：６０と最大９５：５との間にさせる。さらに代表的には、この比は、少なくとも６０：４０であり、よりさらに代表的には、６５：３５〜９０：１０の間の比である。
【００６４】
水性酸抽出法が用いられる場合、酸の水溶液は、約３．５〜約５．５に調節されたｐＨ、より好ましくは約４．０〜約５．０のｐＨ範囲内で調製される。十分な水を添加して、希釈液が、十分に低い粘度で、遠心分離または濾過によって液体から固体を分離することを可能にする。
【００６５】
不溶性の固体物が除去されている液体を、液体を除くための従来の方法によって濃縮する。代表的に用いられる方法としては、限定されないが、好ましくは減圧下での蒸発による溶媒の除去が挙げられる。残りの液体を、少なくとも約１５％の固体、そして最大約５５％まで、さらに代表的には３０％〜５０％の固体まで濃縮する。次いでこの濃縮液を水で希釈して、固体含量を減じて、水対アルコールの比を増大する。添加された水の量は、広範に変化し得るが、最終の固体含量は６％〜１５％、さらに代表的には約１３％が好ましい。混合物のｐＨは約ｐＨ３．０と約ｐＨ６．５との間で調節し、約ｐＨ４．０〜約ｐＨ５．０の値が好ましい。代表的には、温度は約２０℃〜約１０℃であり、さらに代表的には約５℃〜７℃である。
【００６６】
次いで固体物質を液体から、標準的な分離技術（遠心分離または濾過）によって分離して、エクオルに富んだ固体物質を得る。
【００６７】
エクオルに富んだ物質は、必要に応じて、代表的には、シリカゲルカラムを使用するクロマトグラフィによって精製されてもよく、Ｃ２−Ｃ４アルコール、Ｃ３−Ｃ７アルカンおよびそれらの混合物を含む溶出剤を用いる。精製された残渣をｎ−ヘキサンから結晶化して、代表的には少なくとも９９％で、代表的には少なくとも７５％の収率で、純粋な生成物としてＳ−エクオルを生成してもよい。エクオル結晶化産物は無色、非吸湿性であり、空気中で安定であって、最終の濾過手順の間に分解されない。
【００６８】
Ｓ−エクオル産物は、標準のエクオルのトリメチルシリル（ＴＭＳ）エーテル誘導体の公開された電子イオン化スペクトルと一致する単一の純粋なピークおよび質量スペクトルとして、トリメチルシリルエーテルもしくはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテル誘導体、または合成された産物のいくつかの他の適切な揮発性誘導体のＧＣ−ＭＳ分析によって確証され得る。生成物の確証はまた、ＨＰＬＣキラル相カラムを介する装置へサンプルを導入した後エレクトロスプレーイオン化を用いる直接質量分析によって達成されてもよい。
【００６９】
Ｓ−エクオル、Ｅ−エクオルおよび混合物を投与することによる疾患の処置
本発明は、インビボでエクオルを生成できないという問題を克服するための、あるいはＲ−エクオルを、詳細には、エクオルの鏡像異性体、Ｓ−エクオルもしくはＲ−エクオル、またはＳ−エクオルおよびＲ−エクオルの非ラセミ混合物の送達を直接供給して、その産生のための腸内細菌の必要性またはエクオルの前駆体イソフラボンを有する大豆食品を消費する必要性を回避するための方法を個々の被験体に提供する。Ｓ−エクオルの送達はまた、「エクオルプロデューサ」における、および「ノン・エクオルプロデューサ」におけるＳ−エクオルのインビボ産生を補完し得る。
【００７０】
エクオルの鏡像異性体または混合物でエクオルプロデューサの食餌を補完すれば、エクオルプロデューサによって産生されたＳ−エクオルの通常のレベルが不適切である場合、以下の理由で利点が提供され得る：１）エクオルを産生するためのイソフラボンの不十分な消費、２）前駆体イソフラボンからエクオルを作成するための腸内細菌の活性を除去する抗生物質の使用、または３）エクオル産生のレベルに影響する他の健康上の要因、例えば、短腸症候群または回腸造瘻術などの腸内ストーマの外科的構築。さらに、補充レベルのエクオルは、ヒトの健康および福祉に対する影響を向上させると考えられる。
【００７１】
本発明は、アンドロゲン関連疾患およびそれに関連する状態に対する健康上の利点を有するのに十分な量で、Ｓ−エクオル、Ｒ−エクオル、ラセミのエクオル、またはエクオルの非ラセミ混合物を送達するための方法を提供する。エクオルの抗アンドロゲン活性は、身体中におよぶ多数の組織に影響し得る。詳細には、５α−ＤＨＴのアンドロゲン活性のブロックは、（Ａ）加齢による前立腺の成長、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、および前立腺癌、（Ｂ）女性型および男性型の禿頭、（Ｃ）顔の毛および体毛の増殖（多毛症）、皮膚の健康（座瘡、老化防止（アンチエイジング）および光老化予防）、皮膚の完全性（コラーゲンおよびエラスチンの頑健性）；（Ｄ）体重増加（および減少）、脂肪組織蓄積および脂質の代謝の減少、ならびに、一般的な調節性の行動および効果、例えば、食物および水の摂取、血圧変化、甲状腺、グルコース、レプチン、インスリンおよび免疫系に対する影響；ならびに（Ｅ）アルツハイマー病および情動、精神衛生の問題、例えば、気分、抑うつ、不安および学習および記憶の処置および予防にとって、上記の脳の特徴の全てに影響する脳におけるＧＡＢＡＡ受容体の強力なモジュレータである５α−ステロイド代謝物（アンドロゲンおよびプロゲステロンをカバーする）を減少させることによって、有益であり得る。
【００７２】
代表的には、エクオルを含む組成物の量は、１ミリリットルあたり少なくとも５ナノグラム（ｎｇ／ｍＬ）、さらに代表的には少なくとも１０ｎｇ／ｍＬ以上、または１０００ｎｍｏｌ／Ｌを超えるという一過性のレベルの尿中の鏡像異性エクオルという、一過性の値の鏡像異性体エクオルを哺乳動物の血漿中で生じるのに十分な量で投与される。好ましくは、組成物は、鏡像異性エクオルの少なくとも約０．２５ｍｇ、より好ましくは約１ｍｇ、さらに好ましくは少なくとも約５ｍｇ、および最大約２００ｍｇまで、さらに好ましくは最大約５０ｍｇまでの投与量で経口投与される。健康な成体に対する２０ｍｇのＲ−エクオル鏡像異性体の経口投与後の血漿中のＲ−エクオルのバイオアベイラビリティの代表的な値を、図２Ａおよび図２ＢのＲ−エクオルの出現／消失のプロットで示す。
【００７３】
Ｒ−エクオルおよび／またはＳ−エクオルを十分な量で送達する能力によって、エクオルのラセミ混合物の送達を上回るいくつかの利点が得られると考えられる。第一に、Ｒ−エクオルまたはＳ−エクオルの単独の力価は代表的には、ラセミ混合物の少なくとも２倍である。第二に、ヒトの身体のみがＳ−エクオルを産生し、従って、Ｓ−エクオルのみを含む組成物は、身体がなじんでいる成分Ｓ−エクオルを有する「天然の」製品に相当する。第三に、Ｒ−エクオル鏡像異性体は固有の特性を有するので、Ｒ鏡像異性体のみ、または実質的にＲ鏡像異性体のみを含む処理組成物は、有益および／または治療的な効果を生じ得る。第四に、Ｒ−エクオルの投与は、任意の内因性のＳ−エクオルが存在することを補助して、身体中でエストロゲン作用および抗エストロゲン作用が生じることを可能にする。
【００７４】
本発明は、男性型および女性型の禿頭に関連する疾患および状態を処置および予防するための鏡像異性エクオルの使用を包含する。５α−ＤＨＴは、頭髪の脱毛原因として公知である。アンドロゲン、詳細には、主な循環のアンドロゲンであるテストステロンは、さらに強力なアンドロゲンである５α−ＤＨＴに変換され（毛包中で）、頭髪の毛包に対する５α−ＤＨＴのホルモン作用が脱毛を生じる。従って、５α−ＤＨＴのホルモン作用が、循環（血管内）および毛包内で５α−ＤＨＴに結合する本発明のエクオルにおける使用などによってブロックされ得るならば、頭髪の脱毛は、軽減されるかまたは予防され得る。
【００７５】
本発明は、顔および身体の毛に関連する疾患および状態を処置および予防するために鏡像異性エクオルの使用を包含する。顔面および身体の毛は、アンドロゲンによって調節されるが、頭髪の調節とは反対である。詳細には、さらに強力なアンドロゲン５α−ＤＨＴは、顔および身体の毛を増大する。５α−ＤＨＴはまた、皮脂腺由来の皮脂（油脂）の産生を増大し、これが座瘡の増大に寄与し得る。従って、エクオルによる５α−ＤＨＴの結合は、顔面および身体の毛の、および皮脂（油脂）の分泌の減少を、ならびに座瘡の減少または予防を生じ得る。
【００７６】
本発明は、皮膚の効果、皮膚の質および完全性、皮膚の老化、皮膚の光老化、ならびに皮膚の色素沈着および明化に関連する疾患および状態を処置および予防するための鏡像異性エクオルの使用を包含する。エストロゲンは、閉経期の前、特に後に、エラスチンおよびコラーゲンの含量を増大することによって皮膚の健康を改善して、皮膚の特徴または構造安定性を改善する。さらに、皮膚が座瘡または他の皮膚破壊（ひっかき、吹き出物のはじけまたは小さい切り傷など）によって損傷される場合、エストロゲンまたはエストロゲン様化合物、例えば、エクオルが存在するならば、修復機構は、より速く、皮膚の治癒は良好である。エクオル鏡像異性体混合物、および詳細にはＳ−エクオルは、エラスチンおよびコラーゲンの良好な刺激因子であり、また光老化に対して防御し得ると考えられる。５α−ＤＨＴのホルモン作用をエクオルがブロックすることは、皮脂腺からの皮脂産生を減少し得、これが座瘡を減少または除去し得る。Ｓ−エクオル（ただしＲ−エクオルではない）はエストロゲン受容体（単数または複数）（主にＥＲβ）に結合するので、このエストロゲン様分子の防御効果は、皮膚におけるエラスチンおよびコラーゲンを刺激する。さらに、エクオルは強力な抗酸化剤であるので、エクオルは光老化を含む加齢（老化）から皮膚を防御し得る。
【００７７】
本発明は、前立腺の健康状態の改善に関する疾患および状態を処置および予防するために鏡像異性エクオルの使用を包含する。テストステロンをさらに強力なアンドロゲン５α−ＤＨＴに変換することは、前立腺内の酵素５α−リダクターゼの作用の結果である。５α−ＤＨＴは良性前立腺過形成（ＢＰＨ）を生じ、前立腺重量を増大し、これらの状態を処置するための前立腺切除術および放射線療法の必要性を生じ得る。最終的に、大豆食品の消費は、前立腺癌および乳癌などのホルモン依存性癌を軽減するという「健康上の利点」に起因する注意が増大している。従って、エクオルによる５α−ＤＨＴのブロックは、動物モデルで前立腺重量を減少し、おそらくＢＰＨをブロックして前立腺癌を予防する。
【００７８】
本発明は、神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または治療するのに十分な量でエクオルを投与することによって、この神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させる方法を包含する。
【００７９】
しばしば加齢に伴う、神経変性障害、例えば、アルツハイマー病および小うつ病、ならびにパーキンソン病は、一般的な集団で蔓延しており、処置するには費用がかさむ。Ｌａｓｋｅｒ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎによれば、現在米国では４百万人が、アルツハイマー病を有しており、１年に一千億円を超える費用がかかっていると考えられる。６５歳を超えれば毎年アルツハイマー病を発症するリスクは倍になり、８５歳を超えればほぼ４０パーセントの人が疾患を有する（Ｊ．Ｍ．Ｌｙｎｅｓｓｒａ，ら、Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒ．Ｍｅｄ．，１４４：４９６〜５０４，２００６；およびＬｅｐｈａｒｔら、Ｃｕｒｒ ｎｅｕｒｏｖａｓ．Ｒｅｓ．，１：４５５〜４６４、２００４）。小うつ病は大うつ病よりも頻繁であって、より高齢者（６０歳以上）の群のうちほぼ５０％が小抑うつに関連する症状を示している（Ｊ．Ｍ．Ｌｙｎｅｓｓら，Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒ．Ｍｅｄ．，１４４：４９６〜５０４，２００６）。
【００８０】
一実施形態では、本発明は、脳の機能および精神衛生に関連する疾患および状態を処置および予防するための鏡像異性エクオルを含むエクオルの使用を包含し、この疾患および状態としては、脳の障害、例えば、パーキンソン病、アルツハイマー型の痴ほう、ならびに加齢および短期および長期記憶喪失に関連する他の低下または障害された認知機能が挙げられる。脳の機構は、さらに複雑であって、どの分子および要因が、気分、抑うつ不安などを調節、影響などするかを規定する試みは困難であり得る。しかし、エストロゲン、またはイソフラボンのようなエストロゲン様分子が、アルツハイマー病などの状態で認知機能を補助し得、かつ特に閉経後の女性におけるこのような障害の発現を妨げるために補助し得るという概念を支持するいくつかのデータがある。
【００８１】
神経精神医学的な障害が、世界中で有病率および夭折の２番目に大きい原因であるということは十分確認されている。Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎは、集団として、神経精神医学的障害は、全ての報告された疾患のうち１３％を含むと見積もっている。これらの障害としては、抑うつ、不安、統合失調症（精神分裂病）、双極性障害、強迫性障害、恐慌性障害、過食症、アルコールおよび薬物の乱用、過食および肥満、ならびに注意欠陥過活動性障害（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．ｗｏｒｌｄ ｈｅａｌｔｈ ｒｅｐｏｒｔ ２０００−ｈｅａｌｔｈ ｓｙｓｔｅｍｓ：ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．Ｇｅｎｅｖａ：ＷＨＯ ２０００）が挙げられる。アメリカ人５人のうちほぼ１人が精神医学的疾患のエピソード、例えば、抑うつまたは不安を、ある所定の年に経験する（Ｍｅｎｔａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｕ．Ｓ．Ｓｕｒｇｅｏｎ Ｇｅｎｅｒａｌ，１９９９）。とりわけ、アルコール依存症を有するほとんどの共通の併発精神医学的診断は、しばしば、薬物乱用関連障害、例えば、抑うつおよび不安の障害である（Ｒ．Ｈｉｔｚｅｍａｎｎ，Ａｌｃｈｏｌ Ｒｅｓ．＆ Ｈｅａｌｔｈ ２４：１４９〜１５８，２０００）。
【００８２】
抑うつは、印象的な障害、または気分の障害である。症状としては、不幸感、無力感、絶望および生命活動または全ての楽しみに対する関心の喪失が挙げられる。抑うつに罹患しているほとんどの個体はまた、精神遅滞、混乱、エネルギーの喪失、および決定または集中できないことを経験する。症状は、中度または軽度から重度におよび得、しばしば不安および／または不穏を伴う（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒｍ ＤＳＭ−ＩＶ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１９９４）。
【００８３】
抑うつは、精神疾患の「風邪（ｃｏｍｍｏｎ ｃｏｌｄ）」と呼ばれている。これは蔓延した障害であって、年あたりで米国の集団におけるほぼ１８００万の成人が罹患している（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｉｎｖｉｓｉｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍ．Ｄ．，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ０１−４５９１，２００１）。これは、能力障害の２番目に主要な原因とみなされており、これを上回るのは心疾患だけである（Ｃ．Ｊ．Ｍｕｒｒａｙ＆Ａ．Ｄ．Ｌｏｐｅｚ（編集）Ｔｈｅ Ｇｌｏｂａｌ Ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｈａｒｖａｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，１９９６）。世界中で、その罹患率は女性で２１％、男性で１３％である（Ｃ．Ｂ．ＮｅｍｅｒｏｆｆおよびＭ．Ｊ．Ｏｗｅｎｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，５：１０６８〜１０７０，２００２）。
【００８４】
抑うつの原因の背景に関する研究は続いているが、神経伝達物質のシナプス濃度の減少または神経伝達物質の作用の関連機構から障害が生じると一般に考えられている。抗うつ薬は、治療の現在の方式である。不幸にも、ほとんどの抗うつ薬は、その生化学的な作用はほぼ直ちに生じるという事実にもかかわらず、臨床効果が出現するまでに代表的には数週間の投与を要する。結局のところ、抗うつ薬の副作用、禁忌および安全性に関して懸念があり得る。
【００８５】
不安障害はしばしば、過度の心配、恐怖および不安によって特徴づけられ、高頻度に生じて、日課的な作業の有意な障害を生じる。症状としては、不穏、疲労、集中力欠如、興奮、筋緊張および睡眠障害を挙げることができる。一般的な集団における不安障害の生涯有病率はほぼ５〜６％である（Ｄ．Ｊ．Ｎｕｔｔら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ．，５：３１５〜３２５、２００２）。女性は、男性よりも頻繁に罹患し、３５歳を超える女性では１０％という有病率であり、不安の率は、中年およびより高齢の成人では増大する傾向であり（Ｈ．Ｗ．Ｗｉｔｔｃｈｅｎ，Ｄｅｐｒｅｓｓ．Ａｎｘｉｅｔｙ，１６：１６２〜１７１，２００２）、これは抑うつでみられる傾向と同様である。
【００８６】
不安の処置の現在の方法としては、ベンゾジアゼピン（例えば、ジアゼパム、バリウム（ｖａｌｉｕｍ））などの抗不安薬を含む化合物での薬理学的処置が挙げられる。ベンゾジアゼピンは、抗不安、鎮痛催眠、抗痙攣薬および筋弛緩特性を保有する。しかし、循環の血漿レベルが抗不安の範囲を超える場合、ベンゾジアゼピンは、精神および運動の機能の障害、錯乱（混乱）および健忘を生じ得る。ベンゾジアゼピンはまた、患者によっては用量の増大および乱用にかかりやすい場合がある。長期使用からの離脱は、不安、不眠、不穏および興奮を誘発し得る（Ｒ．Ｍ．Ｊｕｌｉｅｎ，Ｐｒｉｍｅｒ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ａｃｔｉｏｎ第７版、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５；ならびにＭ．Ｅ．ＬｉｋｅｙおよびＢ．Ｇｏｒｄｏｎ，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｅｎｔａｌ Ｉｌｌｎｅｓｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｂｏｓｔｏｎ，１９９１）。
【００８７】
気分、不安、抑うつおよび他の精神衛生状態に関して、２つの基礎的な視点がある。研究の１系統では、エストロゲンが（特に女性において）不安を調節し、不安レベルを減少するのを助けるという見解が支持される。エストラジオールおよびプロゲステロンの両方とも不安関連の行動、および精巣のアンドロゲンであるテストステロンを変化させる（Ｉｍｈｏｆ Ｊ．Ｔ．ら、Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，５６：１７７〜１８０（１９９３））。エクオルの抗アンドロゲン活性は、神経伝達物質を増強すること、およびシナプス密度を修復することによって脳中で作用する。特定の理論によって束縛はされないが、本発明者らは、Ｒ−エクオルおよび／またはＳ−エクオルが、脳において、同じ部位で、エストロゲンとして活性であり、エストロゲン応答を発揮すると考えている。
【００８８】
第二系統の研究は、さらに複雑であって、５α還元ステロイド、特にプロゲステロンは、脳においてＧＡＢＡＡ受容体に結合して沈静を生じる能力を有するという見解を支持する。ＧＡＢＡＡは脳における主要な阻害性の神経伝達物質であって、その受容体は、気分／感情を制御する脳領域で豊富である。沈静を生じることによって、個体は不安の表現が少なくなる。例えば、妊娠中のほとんどの女性は、ＯＫを感じることが報告されているが、彼女らは通常疲労感があるか、または眠い。これは、身体中において、ただし詳細には脳中において、５α−リダクターゼ酵素によって、プロゲステロンが５α−ジヒドロプロゲステロン（５α−ＤＨＰ）に変換されることに起因し、この分子のさらなる代謝が、ＧＡＢＡＡ受容体に結合してＧＡＢＡＡの作用を増強し得る最も強力な「神経ステロイド」を生じる。この５α−ジヒドロプロゲステロン分子（およびその代謝物）が脳活性を減少し得るという、さらなる支持的な証拠がてんかんの女性（てんかんを従っててんかん発作を経験する）で見られ、これらの個体は、プロゲステロンの高い循環レベルに起因して妊娠中にはてんかん発作をほぼ決して経験しない。５α還元アンドロゲン様５α−ＤＨＴはまた、ＧＡＢＡＡ受容体に同様の効果を有して、沈静を（男性で）生じるが、５α−ＤＨＰに比較してかなり低いレベルであるということが注目される必要がある。
【００８９】
これらの２つの見解をまとめると、エストロゲンは一方では不安を減じ、これによって活性を増大する。逆に、５α−ＤＨＰの作用をブロックすることでまた、活性が増大し、従って行動試験において、不安を軽減すると解釈される。例えば、妊娠ラットにおける５α−ＤＨＰへのプロゲステロンの変換がブロックされる場合、これは、それらの自発活性レベルで有意な増大を生じる。
【００９０】
エクオルに関してこれに同様の展望をとれば、エクオルは、５α−ＤＨＰ（主に女性でみられる）および５α―ＤＨＴ（主に男性でみられる）に結合する能力を有する。これは、ＧＡＢＡＡ受容体で強力な「神経ステロイド」効果を減じて、沈静を減少し、これによって活性を増大するか、または不安を軽減する。さらに、エストロゲン受容体（単数または複数）βに対してＳ−エクオルが結合する能力も、活性を増大する。最終的に、本発明者らの研究であって、雄性または雌性の若齢または中齢の成体ラット用いる研究によって、食餌性の植物性エストロゲン消費（Ｌｕｎｄ Ｔ．Ｄ．ら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，９１３：１８０〜１８４（２００１）；Ｌｅｐｈａｒｔ，Ｅ．Ｄ．ら、Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ Ｔｅｔｒａｔｏｌｏｇｙ，２４：１〜１２（２００２））、またはエクオルによる注射が、高架式十字迷路試験で表される不安レベルを有意に減少させることが示されている。
【００９１】
高架式十字迷路は、不安関連行動を定量して、抗不安薬を特定するために用いられる行動試験である（Ｐｅｌｌｏｗ Ｓら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１４：１４９〜１４７（１９８５）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７）８．３．１−８．３．１５，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ．ＮＹ，Ｎ．Ｙ．）。この試験は、新しい環境の探索とその嫌な特徴の回避との間の内因性の矛盾に依拠する。正常には動物は、迷路のクローズド・アームに比較して迷路のオープン・アームでは過ごす時間が短く、進入することが少ない（Ｉｍｈｏｆ Ｊ．Ｔ．ら、Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，５６：１７７〜１８０（１９９３）。しかし、抗不安薬、例えば、ベンゾジアゼピン（バリウム（ｖａｌｉｕｍ））で処置された動物は、オープン・アームでさらに長時間過ごし、オープン・アームへの進入の回数は、不安関連行動の減少を反映する（Ｐｅｌｌｏｗ Ｓ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１４：１４９〜１４７（１９８５）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７）８．３．１−８．３．１５，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ．ＮＹ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｈｏｐｉｎ Ｐ．ら、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ，１１０：４０９〜４１４（１９９３）。
【００９２】
本発明はまた、閉経周辺期または閉経後症状を処置または予防するためのエクオル（Ｒ−鏡像異性体およびＳ−鏡像異性体の混合物など）の使用を包含する。これらの症状としては、とりわけ気分変動、抑うつ、不安、疲労ならびに情動性および精神の衛生状態、体重増大および肥満、ならびに多嚢胞卵巣が挙げられる。
【００９３】
別の実施形態では、本発明は、抑うつ、不安および上述されるその他を含む、神経精神医学疾患を予防または処置するためのエクオルの使用の方法である。
【００９４】
本発明は、体重および体脂肪形成に関連する疾患および状態を処置および予防するための鏡像異性のエクオルの使用を包含する。体重増加および肥満は、米国および世界中の開発途上国における膨大な健康上の懸念に相当する。例えば、米国では、成人のうち約５５％が、国際標準では過体重であり、アメリカの大人の約２３％が、肥満とみなされる；アメリカ人の子供５人に一人が過体重とみなされる。米国での肥満は、１９９０年代後期には国家の保健医療予算のうち合衆国政府の１２％、すなわち１１８０億円がかかる（Ｗｏｒｌｄ Ｗａｔｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２０００年３月４日）。
【００９５】
エクオルを含む植物エストロゲンは、白色脂肪（ａｄｉｐｏｓｅ）（脂肪（ｆａｔ））組織の形成を減じ、白色脂肪組織の破壊を増大する能力を有し、これによって体重を減少させる。また、植物エストロゲン分子のエストロゲン様の性質は、ＬＤＬ（いわゆる、「悪玉」コレステロール）、血圧を下げて、インスリン耐性を妨げる（または言い換えれば、糖尿病状態に対する有益な影響をもたらす）。エクオルは、他の植物エストロゲンに比較してさらに強力なイソフラボン分子であるので、これはおそらく、健康上の利点を提供して、先に概説された状態を防御する。
【００９６】
エクオルは、５α−ＤＨＴに結合するので、エクオルはまた、体重増大を促進する５α−ＤＨＴの作用をブロックし得る。従って、エクオル、および詳細にはＳ−エクオルを、抗アンドロゲンと、ただし同時に、同じ分子（エクオル）由来のエストロゲンホルモン作用と組み合わせて、さらに、体重減少（および体重管理）という健康上の利点を改善し、ＬＤＬコレステロールを減少し、血圧を減少し、糖尿病の破壊的な効果を妨げることを補助する。
【００９７】
本発明は、体重の増大および肥満を妨げるまたは処置するエクオルの使用を包含する。「体重の増大」という用語は、被験体の年齢、性別および状態に依存する最適の健康値を上回る体重の任意の増大をいう。人は、その理想体重を約２０％超える場合、肥満とみなされる。その理想体重は、人の身長、年齢、性別および体形を考慮する必要がある。過体重または肥満は、また、例えば、肥満度指数（ボディ・マス・インデックス）を用いて規定されてもよい。成人については、過体重および肥満の範囲は、体重および身長を用いて「肥満度指数（ボディ・マス・インデックス）」（ＢＭＩ）と呼ばれる数値を計算することによって決定される。ＢＭＩは、ほとんどの人に用いられるので、体脂肪の量と相関する。約２５〜２９．９の間のＢＭＩを有する成人は、過体重とみなされる。約３０以上のＢＭＩを有する成人は、肥満とみなされる。過体重または肥満になることで、多くの疾患および健康状態のリスクが増大するが、これには以下が挙げられる：高血圧、異脂肪血症（例えば、高い総コレステロール、または高レベルのトリグリセリド）、２型糖尿病、冠状動脈性心疾患、卒中、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠時無呼吸および呼吸問題およびいくつかの癌（子宮内膜癌、乳癌および結腸癌）（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＣＤＣ）ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，２００６）。
【００９８】
本発明は、高コレステロール（高コレステロール血症）、脂質血症、脂肪血症および異脂肪血症（脂質の障害）などの脂質障害を処置および予防するための、エクオルの、鏡像異性エクオルまたはその混合物としての使用を包含する。血漿の総コレステロール濃度は、エクオルプロデューサでは、ベースライン値に比較して７．２％（ｐ＝０．０４）、およびノン・エクオルプロデューサでは３．０％（ｐ＝ＮＳ）減少したことが研究によって示されている。正常な血液コレステロール値を有する成人での有意なコレステロール低下効果を、ダイズタンパク質が有さないということは、２〜３の経験があり、おそらくこの理由は、ダイズイソフラボンの代謝に関する研究集団中の異質性、およびエクオル形成の関連性（特に、ノン・エクオルプロデューサにおける非形成）を認識できないということである。これらのデータによって、鏡像異性エクオルが有利な方式で脂質に影響するということ、およびこの効果がアンドロゲンによって媒介されるということが示唆される。エクオルを含む組成物は、血流中の脂質のレベルを低下するのに十分な量で投与される。
【００９９】
本発明はさらに、血圧中の正確な変化に応答して反応性または可塑性を増大すること、血流を改善すること、および血圧を低下させることによって、低下した血管の質を改善するためのＲ−エクオルおよび／またはＳ−エクオルの使用を包含する。本発明はまた、良性前立腺癌、前立腺癌および皮膚癌を含む癌を処置および予防するためのＲ−エクオルおよび／またはＳ−エクオルの使用を包含する。
【０１００】
本発明の別の実施形態は、肥大した前立腺または精巣上体を処置するためのエクオルの使用である。エクオルはまた、精巣、下垂体または体重の変化なしに、これらの病理の発達のリスクであると考えられる個体で、肥大した前立腺または精巣上体を妨げるために用いられ得る。エクオルは、血流へのエクオルの吸収を可能にする任意の経路によって投与され得る。
【０１０１】
ＤＨＴ−アンドロゲン受容体
本発明の他の実施形態は、エクオルの使用を、アンドロゲン関連障害およびエストロゲン／アンドロゲンのバランスにおける攪乱から生じる障害における診断剤として、包含する。これらの実施形態では、エクオルは、個体に投与されて５α−ＤＨＴに結合し、それによってアンドロゲン受容体に対する５α−ＤＨＴ結合を妨げる。次いで、エストロゲンのバランスにおけるこの変化を測定するか、またはアンドロゲン結合におけるこの変化を評価して、アンドロゲン関連の異常を診断するかまたはさらに解明する。
【０１０２】
５α−ＤＨＴに対する結合
該当の治療部分に関する５α−ＤＨＴの結合能力を評価するために、エクオルを投与して、他の治療部分より前に、またはそれとともに５α−ＤＨＴに結合させてもよい。また、アンドロゲン結合部分がアンドロゲン活性を修復する有効性、および５α−ＤＨＴ結合の不在下でのエストロゲン活性のバランスを評価するために、エクオルの投与後にアンドロゲン結合部分を投与してもよい。さらに、５α−ＤＨＴからこれらの天然に存在するかまたは生体異物の５α−ＤＨＴ結合部分を置き換えるために、５α−ＤＨＴ結合部分の存在下でエクオルを投与してもよい。
【０１０３】
エクオルの投与
本明細書に記載される本発明の各々の実施形態では、エクオルの投与が経口である必要がある場合、エクオルは、「エクオル産生（ｅｑｕｏｌ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ）」哺乳動物または「エクオル産生しない（ｎｏｎ−ｅｑｕｏｌ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ）」哺乳動物のいずれかに対してエクオルの経口剤形を、または「エクオル産生」哺乳動物に対してダイゼイン、ダイジイン、ダイゼインを含むイソフラボン混合物もしくはダイズタンパク質調製物を供給することによって投与されてもよく、この経口剤形の投与は、血流へのエクオルの有効な吸収を生じる。エクオルの投与は、必要に応じて、経口以外の経路によって行われ得る。例えば、直腸または尿道の投与を用いて、肥大した前立腺の処置のためにエクオルを投与しても、または前立腺肥大を予防してもよいと考えられる。さらに、エクオル分子の活性なリガンド結合部位を投与のために単離して合成してもよく、これによって完全なエクオル分子なしに５α−ＤＨＴ結合を得てもよいと考えられる。５α−ＤＨＴ結合能を有する、エクオル分子またはそのフラグメントの用量は、投与の経路および処置される条件に依存する。本発明者らのインビボ研究に基づいて、比較的低用量のエクオルがかなり高用量の５α−ＤＨＴを拮抗することが明らかであり、これは５α−ＤＨＴと比較して血清タンパク質に対するエクオルの結合における顕著な相違によって説明され得る。後者の循環はほとんどタンパク質に結合するが、エクオルは５０％が遊離である。一般には、レシピエントの体重１ｋｇあたり少なくとも約０．２ｍｇ、好ましくは少なくとも約０．５ｍｇ／ｋｇのエクオルというレシピエントの血流中のエクオルまたはその活性なフラグメントの濃度を生成するのに十分な用量。この用量は、有意な用量制限的な副作用を招くことなく、約１０ｍｇ／ｋｇよりも大きくまで劇的に増大され得る。経口投与は、医薬の遅延型または徐放型の放出をもたらし得るマイクロカプセル型で達成されてもよい。
【０１０４】
エクオルは、ローション、軟膏、泡状物（シェービングフォームを含む）、経鼻スプレー、皮膚パッチ（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，６１３，９５８号に記載のものなど）、マイクロポンプシステムを含む電気機械的デバイス（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，６９３，０１８号および米国特許第５，８４８，９９１号に記載のものなど）、および皮下インプラント（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，４６８，５０１号に記載のものなど）を含む種々の形態で局所的に、経皮的に、および皮下に投与されてもよい。
【０１０５】
実験
（ａ）「エクオル産生」成体におけるエクオル鏡像異性体の決定
「エクオルプロデューサ」であると以前に特定されている、ダイズ食品を消費する成人由来の尿サンプルを分析した。エクオルは、固相Ｂｏｎｄ Ｅｌｕｔ Ｃ１８カートリッジを通じたサンプルの通過によって尿（２５ｍＬ）から単離した。水でカートリッジを洗浄した後、メタノール（５ｍＬ）での溶出によってイソフラボンを回収して、メタノール相を採取して窒素流下で乾燥した。サンプルを、Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａｔｉａによる酵素的加水分解に供し、次いでＢｏｎｄ Ｅｌｕｔ Ｃ１８カートリッジで再抽出した。メタノール抽出物を採取して、窒素ガス下で乾燥させて、ＨＰＬＣ移動相（１００μＬ）に再溶解した。エクオル鏡像異性体を、本明細書において上記されるようなＣｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪキラル相カラムを用いてＨＰＬＣによって特定した。エクオルの検出は、エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）を選択イオンモニタリングすることによって達成した。Ｓ−エクオルの純粋な標準の、およびダイズ食品を消費する成人由来の尿のマスクロマトグラムを図３に示す。同様の結果によって、大豆由来のイソフラボンが、ラットにおいてエクオルに変換されることが示されており、同様に、これによってイソフラボン代謝のげっ歯類モデルが確認される。
【０１０６】
保持指数およびマスクロマトグラムによって、これが排他的に、ヒト尿に排出されるエクオルのＳ−鏡像異性体であることが確認される。なぜなら、エクオルの検出可能なＲ−鏡像異性体は見出されないからである。同じ「エクオルプロデューサ」由来の血漿の分析によってまた、エクオルのＳ−鏡像異性体のみが明らかになった。
【０１０７】
（ｂ）ラセミのエクオルの化学合成
ダイゼイン（２００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を、氷酢酸（２０ｍＬ）およびイソプロパノール（２０ｍＬ）の混合物に溶解し、１０％Ｐｄを用いて、チャコール（１５０ｍｇ）上で５５ｐ．ｓ．ｉ．ｇ．（３．７ａｔｍ、測定）で還元する。反応の終りの時点で（２時間、ＴＬＣ：イソプロパノール／ｎ−ヘキサン１／４）、触媒を濾過して除き、その濾液を蒸発させる。粗残渣を、イソプロパノールおよびｎ−ヘキサンの混合物（１：４ｖ／ｖ）を溶出剤として用いるシリカゲルカラムでのクロマトグラフィによって精製して、（±）エクオルを、ｎ−ヘキサンから結晶化された純粋な生成物（１６０ｍｇ、収率：８２％）として得る。生成物は無色結晶であり、吸湿性ではなく、空気中安定で、最終濾過手順の間、分解されない。この化学合成の生成物は、（±）エクオルの標準品サンプル（ラセミのエクオル）と全ての点で同一であった。図４は、標準品のエクオルのトリメチルシリル（ＴＭＳ）エーテル誘導体の公開された電子イオン化スペクトルと一致する単一の純粋なピークおよび質量スペクトルとして、合成された生成物のトリメチルシリルエーテル誘導体のＧＣ−ＭＳ分析を示す。予想される分子イオンはｍ／ｚ４７０で、ベースピークはｍ／ｚ２３４である。精製されたエクオル生成物は、ＨＰＬＣおよび質量分析計で確認されるとおり、９９％より大きい純度を有した。
【０１０８】
（ｃ）光学的二色性によるＳ−鏡像異性体およびＲ−鏡像異性体の溶出順序
Ｓ−エクオルおよびＲ−エクオルのラセミ混合物を、１．０ｍＬ／分の流速を用い、ヘキサンに含まれる１０％エタノールの最初の移動相およびヘキサンに含まれる９０％エタノールまでの増大から構成される勾配溶出を用いて、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ Ｃｏｌｕｍｎでのキラルクロマトグラフィによって、表１に示されるプログラムに従って１５分間にわたって分離した。
【０１０９】
【表１】
図５は、Ｓ−エクオルおよびＲ−エクオルのラセミ混合物のイオン記録（ｍ／ｚ２４１）のマスクロマトグラムを示す。
【０１１０】
最初に溶出する物質は、鏡像異性体−１と命名され、２番目に溶出する物質は、鏡像異性体−２と命名され、これらを別々に収集した。各々の鏡像異性体を秤量して、秤量したサンプルを１ｍＬの分光計等級のエタノールに溶解した。各々の鏡像異性体の旋光度の測定は、ナトリウムのラインＤの波長の光を用いて２００℃で行った。
【０１１１】
鏡像異性体−１物質（正確な重量１．６ｍｇ）は、第１測定値および第２測定値、−０．０２３および−０．０２２を有し、これによって、エクオルのＳ−鏡像異性体と対応する、−１４［−０．０２２５×１０００／１．６］の旋光度が生じた。鏡像異性体−２物質（正確な重量１．７ｍｇ）は、第１測定値および第２測定値、＋０．０２３および＋０．０２３を有し、これによって、エクオルのＲ−鏡像異性体と対応する、＋１３．５［＋０．０２３×１０００／１．７］の旋光度が生じた。
【０１１２】
ｄ）Ｓ−鏡像異性体およびＲ−鏡像異性体の受容体結合能力の決定
インビトロの結合研究を行って、エストロゲン受容体ＥＲαおよびＥＲβとのＳ−鏡像異性エクオルおよびＲ−鏡像異性エクオルの相対的親和性を検査した。
【０１１３】
ホルモン受容体タンパク質の合成：全長ラットＥＲα発現ベクター（ｐｃＤＮＡ−ＥＲα；ＲＨ Ｐｒｉｃｅ ＵＣＳＦ）およびＥＲβ発現ベクター（ｐｃＤＮＡ−ＥＲβ；Ｔ Ａ Ｂｒｏｗｎ、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｇｒｏｔｏｎ，Ｃｏｌｏ．）を用いて、インビトロでホルモン受容体を合成し、ここでは、３０℃で９０分の反応の間、Ｔ７−ＲＮＡポリメラーゼとともにＴｎＴ結合網状赤血球溶血液系（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）を用いた。翻訳反応混合物は、さらなる使用まで−８０℃で保管した。
【０１１４】
飽和異性体：ＥＲαおよびＥＲβについてのＳ−エクオルおよびＲ−エクオル鏡像異性体の結合親和性を算出および確立するために、網状赤血球溶血液上清の１００μＬのアリコートを、最適の時間および温度でインキュベートした；室温で９０分（ＥＲβ）および４℃で１８時間（ＥＲα）、［３Ｈ］１７β−エストラジオール（Ｅ２）の漸増濃度（０．０１〜１００ｎｍ）を用いた。これらの時間は、経験的に決定され、エストロゲンとの受容体の最適の結合に相当した。非特異的な結合を、平行管で、３００倍過剰のＥＲアゴニストジエチルスチルベステロールを用いて評価した。インキュベーション後、結合および未結合の［３Ｈ］Ｅ２を、１ｍＬの親油性Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．，Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ）カラムを通してインキュベーション反応物を通過させることによって分離した。カラムは、以前に公開されたプロトコール（Ｗａｎｄａら、１９８６；Ｏ’ＫｅｅｆｅおよびＨａｎｄａ，１９９０）に従って、ＴＥＧＭＤ（１０ｍｍ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、１．５ｍｍ ＥＤＴＡ、１０％グリセロール、２５ｍｍ モリブデン酸塩、および１ｍｍのジチオトレイトール、ｐＨ７．４）飽和Ｓｅｐｈａｄｅｘを用いて、使い捨てのピペットチップ（１ｍＬ；Ｌａｂｃｒａｆｔ，Ｃｕｒｔｉｎ Ｍａｔｈｅｓｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘ）をパッキングすることによって構築した。クロマトグラフィのために、ＴＥＧＭＤ（１００μＬ）を用いてカラムを再平衡し、インキュベーション反応物を各々のカラムに個々に添加して、さらに３０分間カラムにてインキュベートさせた。このインキュベーション後、６００μＬのＴＥＧＭＤを各々のカラムに添加して、貫流物を収集し、４ｍＬのシンチレーション液を添加して、サンプルを２９００ ＴＲ Ｐａｃｋａｒｄシンチレーションカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，Ｃｏｎｎ．）でカウントした（各５分）。
【０１１５】
競合結合研究を用いて、エクオルのＳ−エクオルおよびＲ−エクオルの鏡像異性体のエストロゲン特性を評価した。ＳおよびＲがＥＲ結合について［３Ｈ］Ｅ２と競合する能力に基づいて、インビトロ翻訳されたＥＲについての親和性は、２つの鏡像異性体について極めて異なることが示された。Ｓ−エクオル鏡像異性体は、ＥＲβに最大の親和性を示した［Ｋｄ（ｎｍ）＝０．７３±０．２］が、ＥＲαに対するその親和性は、比較すれば比較的低かった［Ｋｄ（ｎｍ）＝６．４１±１．０１。Ｒ−エクオル鏡像異性体は、ＥＲβ［Ｋｄ（ｎｍ）＝１５．４±１．３１］およびＥＲα［Ｋｄ（ｎｍ）＝２７．３８±３．８］の両方にかなり低い親和性を保有した。参照として、１７β−エストラジオールは、この系において、ＥＲαとはＫｄ（ｎｍ）＝０．１３で、ＥＲβとはＫｄ（ｒｕｍ）＝０．１５で結合する。
【０１１６】
この研究によって、Ｓ−エクオル鏡像異性体のみが、ＥＲに十分な親和性で結合し、ヒトで報告される循環エクオル値に対する潜在的関連性を有するということが示される。１７βエストラジオールと比較して、ＥＲαについてのＳ−エクオルおよびＲ−エクオル鏡像異性体の相対的結合親和性は、それぞれ４９分の１および２１１分の１であった。しかし、Ｓ−エクオル鏡像異性体は、ＥＲβに比較的高い親和性を有するかなりＥＲβ選択性であるとみられ、一方でＲ−エクオル鏡像異性体は、約１００分の１の親和性で結合する。別のかつ関連の決定は、排他的にＳ−エクオルがヒト血漿でみられ、尿が２つの鏡像異性体の結合において特異性の観点で有意であるということである。
【０１１７】
ｅ）Ｒ−エクオルのバイオアベイラビリティ
２０ｍｇの純粋なＲ−エクオルを、一晩絶食後の健常な成人に経口投与した。血液サンプルをその後２４時間にわたって一定間隔で収集し、エクオルの血漿濃度は、選択イオンモニタリングによる同位体希釈ガスクロマトグラフィ−質量分析によって決定した。エクオルの急速な出現が、血漿中で観察され、ピーク濃度は８時間後に観察された。Ｒ−エクオルの終末排泄半減期は約８時間であった。エレクトロスプレーイオン化質量分析によって、血漿中に存在するエクオルがＲ−エクオル鏡像異性体であることが確認され（データは示さないが、要求により入手可能である）、それによって、これが安定であり、腸でラセミ化もさらなる生体内変換も受けないことが確認された。図２Ａは、Ｒ−エクオルの出現／消失のプロットを示す。図２Ｂは、健常なヒト成人でのＳ−エクオルまたはＲ−エクオルの経口投与後の血漿中のＳ−エクオルおよびＲ−エクオルの出現／消失のプロット（平均値）を示す（Ｋ．Ｄ．Ｓｅｔｃｈｅｌｌら、Ａｍ Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．，８１：１０７２〜１０９１，２００５）。
【０１１８】
これらの結果によって、Ｒ−エクオルは、薬理学的調製物または栄養補給調製物として投与される場合、極めて生体利用可能性が高いことが確認される。
【実施例】
【０１１９】
必要に応じて、分散分析（ＡＮＯＶＡ）に続くＮｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ ｐｏｓｔ ｈｏｃ（事後的ノイマン−ケウルス）検定によってデータを分析した。有意差をｐ＜０．０５で設定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ３．０，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を用いてカーブフィッティング、科学的グラフ化および分析を完成した。
【０１２０】
（実施例１）
本実施例は、前立腺の大きさおよびホルモン分泌に対するエクオルのインビボの影響を示す。雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（４００〜５００ｇ）は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，ＵＳＡ）から入手した。ラットは、２対一組みでカゴに入れ、食品および水に自由にアクセスさせながら１２時間暗野１２時間明野のスケジュール（０７時に点灯）で飼育する。
【０１２１】
到着の１週後、動物にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（ビヒクルコントロール）またはラセミのエクオル（０．２５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかの皮下（ｓｃ）注射を与える（４日間１日１回）。最終の注射の１８時間後、動物を断頭して殺傷して、胴体の血液および前立腺を分析用に収集する。
【０１２２】
無傷のコントロールのオスに比較してエクオルを皮下注射した無傷のオスでは、前立腺重量の有意な減少が観察される。さらに、これらの同じ無傷のオスでの黄体形成ホルモン（ＬＨ）は、コントロール処置したオスに比較してエクオルでは有意に増大する。これらの知見を、それぞれ図６Ａおよび図６Ｂに示す。これらの効果は、５α−ＤＨＴに比較して比較的低レベルのエクオルで観察され、これは、エクオル（約５０％が遊離で循環する）および５α−ＤＨＴ（血清タンパク質に最も結合される）のタンパク質結合における顕著な相違によって説明され得る。
【０１２３】
（実施例２）
前立腺に対するエクオルの効果に加えてラセミのエクオルは、他の組織でＤＨＴの影響をブロックして、体重を減少させる。到着の１週後、無傷のオスにＤＭＳＯ（コントロール）またはエクオル（０．５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかの皮下注射を７日間にわたり１日１回与える。処置後、動物を秤量し、次いで断頭して殺傷し、組織を回収する（前立腺、精巣、精巣上体および下垂体）。
【０１２４】
５α−ＤＨＴ感受性の精巣上体における有意な重量減少が、コントロールに比較してラセミのエクオル処置オスで観察される。しかし、ラセミのエクオルは、精巣重量にも下垂体重量にも影響しなかった。この比較的短い処置期間の間の体重は、ラセミのエクオルとコントロールの処置との間で有意に異なることはない。これらの結果を表２に示す。
【０１２５】
【表２】
（実施例３）
成体の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、３群に無作為に割り当てて、ＤＭＳＯ、エクオルのラセミ混合物（０．２５０ｍｇ／ｋｇ／日）、Ｒ−エクオル（０．２５０ｍｇ／ｋｇ／日）、またはＳ−エクオル（０．２５０ｍｇ／ｋｇ／日）のいずれかを毎日注射する。各々の注射の総容積は０．３ｃｃであって、ラットの首の襟首にｓｃ投与する。連続７日の処置の後、ラットを殺傷して、注射期間の体重増加を決定する。Ｒ−エクオルを注射したラットは、表３に示されるように、コントロールのラットに比較して体重増大が有意に少ない。
【０１２６】
【表３】
精巣および脳下垂体の重量は、処置によって有意に変化しない（データ示さず）。エクオル実験からの体重のわずかな低下（ほぼ１０％）は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅの食餌（極めて低レベルの植物エストロゲンを含む食餌）対Ｐｈｙｔｏ−６００食餌（６００ｐｐｍのイソフラボンを含む植物エストロゲン豊富な食餌）を給餌された動物の間でみられたものと極めて類似している。ラセミのエクオルの注射（約３６％）での白色脂肪組織の有意な減少はまた、食餌処置研究由来のデータセットでみられたものに匹敵する。これらの知見によって、Ｒ−エクオルは、体重を調節して、白色脂肪の蓄積を有意に低下することが示唆される。
【０１２７】
（実施例４）
本実施例は、５α−ＤＨＴに対するエクオル結合を示す。ＡＲについてのエクオルの結合親和性を決定および確立するために行った最初の結合競合研究では、本発明者らは、［３Ｈ］ＤＨＴのみかけの結合がエクオルの不在下よりもエクオルの存在下で大きいということを繰り返し観察した。ＡＲがインキュベーション試験管から除かれた（［３Ｈ］ＤＨＴおよびエクオルのみが残っている）プロトコールでのわずかな改変によって、［３Ｈ］ＤＨＴ反応複合体を含む溶出剤への［３Ｈ］ＤＨＴの溶出が生じた。
【０１２８】
この現象をさらに検討するため、３０ｃｍ長のＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラムを用いて、溶出ピークを特定し、エクオルに対する［３Ｈ］ＤＨＴの結合を確認する。図７に示されるとおり、［３Ｈ］ＤＨＴのピークは、［３Ｈ］ＤＨＴ＋エクオルのカラムインキュベートが加えられる場合、５〜９ｍＬの間の溶出画分中で明らかである。このピークは、このカラムに［３Ｈ］ＤＨＴだけを加えるときは存在しない。さらに、５α−ＤＨＴまたは５α−ＤＨＴ＋エクオルを、前立腺の上清とインキュベートし、次いで３０ｃｍのカラムを通過させるとき（図８Ａ）、２つの別個の結合ピークが特定可能である。［３Ｈ］ＤＨＴの最初のピークは、それが前立腺中のＡＲに対して結合したことを示す。これは、４〜５ｍｌの溶出画分で見出される。さらに、エクオルに対する［３Ｈ］ＤＨＴの結合と一致して後ろのピークがある（５〜９ｍｌ）。しかし、［３Ｈ］ＤＨＴを、エクオルの導入前に前立腺上清と３６時間（平衡まで）インキュベートさせるとき、［３Ｈ］ＤＨＴの結合は明らかでない（図８Ｂ）。［３Ｈ］ＤＨＴおよび［３Ｈ］ＤＨＴ＋エクオル（３６時間後にエクオルを添加）の両方とも、４〜５ｍｌの溶出中で単一のピークを示し、このことは、エクオルがＡＲについて５α−ＤＨＴと競合せず、受容体に既に結合している［３Ｈ］ＤＨＴにも結合しないことを示唆している。さらに、５α−ＤＨＴに対するエクオルの結合は、特異的であるらしいことが注目されるべきである。なぜなら、同様の競合および結合の研究は、［３Ｈ］Ｅ２、［３Ｈ］Ｔ、［３Ｈ］ＤＨＥＡ、［３Ｈ］ＣＯＲＴおよび［３Ｈ］プロゲステロンを用いて行われており、エクオルに対する結合の出現がないからである（データ示さず）。［３Ｈ］ＤＨＴに対するエクオル結合の飽和分析によって、１．３２±０．４ｎＭで算出したみかけのＫｄが示される（図９）。
【０１２９】
（実施例５）
本実施例では、前立腺の大きさに対する５α−ＤＨＴの効果を調節することに加えて、エクオルがインビボで５α−ＤＨＴに結合し、ＬＨ分泌に対する負の効果をブロックすることが示される。５α−ＤＨＴの長時間作用性のアナログであるＤＨＴプロピオン酸塩（ＤＨＴＰ）で処置したＧＤＸのオスは、ビヒクル処置したＧＤＸコントロールラットに比較して前立腺重量の有意な増大を示す。エクオルでの同時処置（ＤＨＴＰ＋エクオル）は、ＤＨＴＰの効果をブロックするが、エクオルは、図１０Ａに示されるとおり前立腺に対して単独では効果を有さない。エクオルはまた、ＬＨに対する５α−ＤＨＴの負のフィードバック効果をブロックする。ＧＤＸオスでは、ＬＨは、ＤＭＳＯでの処置に比較してＤＨＴＰ処置によって有意に減少する。５α−ＤＨＴと組み合わせたエクオルでの処置によって、ＬＨ分泌に対するＤＨＴＰの負のフィードバック効果がブロックされる。エクオル単独では、ＬＨレベルに影響を有さない（図１０Ｂに示される）。
【０１３０】
（実施例６）
本実施例は、アンドロゲン感受性の組織に対するラセミのエクオルの効果を示す。到着の１週後、イソフルラン麻酔下で動物を性腺摘出（ＧＤＸ）して、７日間回復させる。回復後、動物を以下の群に割り当てる１）ＤＭＳＯ、２）ＤＨＴＰ（２ｍｇ／１ｋｇ）、３）ラセミのエクオル（０．２５ｍｇ／ｋｇ）、または４）ＤＨＴＰおよびラセミのエクオルの両方。注射は、４日間毎日皮下に与える。動物を断頭して殺傷し、胴体の血液および組織を分析用に収集する。血漿の５α−ＤＨＴを測定する（図１１に示す）。
【０１３１】
予想どおり、ＤＨＴＰ（ＧＤＸ＋ＤＨＴＰ、ＧＤＸ＋エクオル＋ＤＨＴＰの群）で処置した動物においては血漿５α−ＤＨＴの有意な上昇があった。血漿の５α−ＤＨＴはさらに上昇したが、エクオルでの同時処置によって、有意ではなかった。前立腺、精巣および精巣上体を含む組織を動物から取り出し、脂肪および結合組織を取り除いて、秤量し、４％パラホルムアルデヒド中での浸漬によって固定し、次いで、クリオスタットで１５μｍに切り出す。組織切片を、２３℃に予備加熱した充填スライド（Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ Ｐｌｕｓ，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）に装填し、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色して、上昇（漸増）アルコールで脱水して、キシレンで浄化する。組織学的切片を図１２および１３に示す。Ｈ＆Ｅ染色前立腺は、ＧＤＸおよび処置の両方に起因する変化を反映する。コントロール、エクオルおよびＤＨＴＰに加えてエクオル処置した群の前立腺は、同様の組織学を示す（図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｄ）。これらの動物では、前立腺は、ごく小さい萎縮性の腺（腺の管腔の容積が小さい）によって特徴付けられる。ＤＨＴＰ処置動物では（図１２）、腺は、細胞増殖の兆候を示す。管腔の大きさは、ＧＤＸ動物に比較して増大する；上皮組織は、長い円柱型のものである（図１２Ｃ）。無傷のコントロールの動物に比較して（図１２Ｅ）、エクオル処置オスの前立腺は、退縮を示し、さらに狭い空間の萎縮性の腺から構成される（図１２Ｆ）。コントロールのオスに比較して、エクオル処置した無傷のオスの表皮の組織学は、縮んだ管腔によって証明されるとおり全体的に小さい導管を示す（図１３）。
【０１３２】
（実施例７）
Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ雄性ラットを、食餌１ｇあたり６００μｇのイソフラボン、すなわち６００ｐｐｍのイソフラボンを含む植物エストロゲン豊富な食餌（本明細書において、以下、「Ｐｈｙｔｏ−６００」食餌と称する）、または極めて低レベルのイソフラボンを含む食餌（本明細書において、以下、「Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ」食餌と称する；約１０ｐｐｍのイソフラボンを含む）のいずれかで飼育する（受胎からサンプル収集の時間まで生涯）。
【０１３３】
図１４に示されるとおり、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給された雄性Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給された動物に比較して３３、５５または７５日齢で有意に低い体重を示す脂肪組織（腹骨盤腔において腎臓の直下から精巣のすぐ上を切り開く）を、５５日齢または７５日齢のオスで測定する。両方の年齢で、白色脂肪組織は、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌動物に比較してＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌オスでは有意に大きい（図１５）。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスの体重の低下は、約１０〜１５％で、わずかであるが、同じ動物からの白色脂肪組織の減少は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌オスに比較して約５０〜６０％であることが注目されるべきである。ダイズ給餌動物の体重に比較した白色脂肪組織における、このより大きい減少はまた、ダイズベースの食餌を消費するヒトで見られる一般的特徴である（Ｄ．Ｂ．Ａｌｌｉｓｏｎら、Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ，２００３，５７：５１４〜５２２）。この特定の結果は、年齢、性別、ラットの株または雌性ラットがその卵巣（ヒトでの閉経後状態を刺激する）を除去されているか否かにかかわらず、これらのデータセットに存在する種々の実験を通じて繰り返しみられる。
【０１３４】
食物および水を測定して、これらのパラメータが、身体および脂肪組織重量に影響し得るか否かを決定する場合、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌動物に比較してわずかだが有意に高い食物（図１６Ａ）および水（図１６Ｂ）の摂取を示す。従って、身体および脂肪組織重量の減少は、食餌の処置の間の食物／水の摂取での変化では説明できない。
【０１３５】
レプチンは、脂肪組織によって生成されるので（Ｄ．Ａ．Ｓａｎｄｏｖａｌら、Ｊ Ｄｉａｂｅｔｓ Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２００３，１７：１０８〜１１３）、血清レプチン値をインスリン値とともに測定して、これらの代謝ホルモン中の変化を決定する。図１７Ａに示されるとおり、レプチン値は３３日、５５日または７５日齢で、Ｐｈｙｔｏ６００給餌オス（これらの同じ動物から脂肪組織重量でみられる減少と対応して）では、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌のオスに比較して有意に低下する。またインスリン値は、２型糖尿病に関連するインスリン耐性に対して防御するという利点と一致して、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌のオスに対してＰｈｙｔｏ６００給餌オスでは有意に低下する（Ｖ．Ｊａｙａｇｏｐａｌら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ，２００２，２５：１７０９〜１７１４）。
【０１３６】
Ｐｈｙｔｏ６００給餌対Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌のオスおよびメスのラット（７５日齢）で循環イソフラボン値が異なることを示すために、本発明者らの研究室で以前に行ったとおりＧＣ／ＭＳによって、血清イソフラボン値を決定する（Ｋ．Ｄ．Ｒ．Ｓｅｔｃｈｅｌｌ，Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ １２９：１３３３Ｓ〜１３４６Ｓ，１９９８；およびＫ．Ｄ．Ｒ．Ｓｅｔｃｈｅｌｌら、Ｊ Ｎｕｔｒ １３２：３５７７〜３５８４，２００２の方法を参照のこと）。異なる分類のイソフラボンについての各々の場合、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌の値に比較して有意に高いイソフラボン値を示す（表４に示す）。さらに重要なことに、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌のラットのエクオル値は、総植物エストロゲン値の約７８％を占める。
【０１３７】
【表４−１】
【０１３８】
【表４−２】
他の代謝性ホルモンが食餌処理によって、または年齢によって変化されるか否かを決定するために、血清グルコースおよび甲状腺（Ｔ３）のレベルをアッセイする。グルコース値は、年齢および血液サンプルの供給源とは独立して、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌の値に比較してＰｈｙｔｏ６００給餌のオスではわずかに（ただし有意に）高い［動脈（ＡＲＴ）または静脈（ＴＲＵＮＫ）のいずれか］（図１８に示す）。しかし、Ｔ３値を定量するとき、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌動物に比較してＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された８０または１１０日齢の雄性Ｌｏｎｇ−ＥｖａｎｓラットでのＴ３血清値は有意に増大している（図１９に示す）。甲状腺のレベルが、その甲状腺医薬を減少させたかまたは、その食餌中のダイズベースの食物の消費で甲状腺処置を完全にやめた個体の事例証拠と一致して、ダイズ消費で甲状腺レベルが増強されるということが、これから示唆される。これはまた、ダイズ食品の消費後のヒトにおけるＴ３値の同様の増大という報告とも一致している（Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｓら、Ｂｉｏｆａｃｔｏｒｓ ２０００：１２（１４）：２３３４１）。
【０１３９】
（実施例８）
この実験では、雌性Ｌｏｎｇ−ＥｖａｎｓラットをＰｈｙｔｏ−６００食餌、またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかで飼育する（受胎からサンプル収集の時間まで生涯）。図２０に示されるとおり、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたラットは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給された動物に比較して、８０日齢で有意に低い体重を示し、これは、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌動物における体重の約１２％減少に相当する。
【０１４０】
以前に雄性Ｌｏｎｇ−ＥｖａｎｓのＰｈｙｔｏ−６００給餌ラットで示されたとおり、Ｐｈｙｔｏ−６００食事を給餌されたメスはまた、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食事を給餌されたメスに比較して脂肪組織重量の有意な減少を示した（約６８％まで）（図２１に示す）。
【０１４１】
雄性ラットでの結果と同様に、血清グルコース値は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌処置群での動物に比較してＰｈｙｔｏ−６００給餌の雌性ラットでは８０または１１０日齢でわずかに（ただし有意に）高い（図２２に示される）。しかし、Ｔ３値は、１１０日齢のＰｈｙｔｏ−Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌動物に比較してＰｈｙｔｏ−Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたメスでは有意に高い（図２３に示す）。メスで生じるＴ３およびグルコースの値は、同じ食餌処置にさらされた雄性ラットで得られた値と極めて類似であり、従って、両方の性について同様の健康上の利点を示唆する。１００日齢で収集したサンプルは、雌性Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットで同様の結果を生じる（すなわち、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌対Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌の消費で体重および脂肪組織重量の有意な減少）（データ示さず）。
【０１４２】
（実施例９）
成体雌性ラットを、５０〜２１５日齢でＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌処置においた。５０日齢前は、ほぼＰｈｙｔｏ−２００ｐｐｍのイソフラボンを含む食餌で、または動物の供給業者によって用いられるのと同様の食餌で飼育してもよい。２１５日齢では、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌メスは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌されたメスよりも有意に軽く、これは、体重で約７％の低下に相当する（図２４に示す）。２１５日齢のＰｈｙｔｏ−６００給餌メスでの白色脂肪組織は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食事を給餌されたメスの白色脂肪組織に比較して約３０％まで有意に減少される（図２５に示す）。対応して、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌のメスでの血清レプチンの値は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌の値よりも有意に低かった（図２６に示す）。インスリン値は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌のメスに対してＰｈｙｔｏ−６００給餌において、前に示されるのと同様の程度まで減少したが、統計学的に有意差には達しなかった（図２７に示す）。
【０１４３】
（実施例１０）
本実施例は、成体の卵巣摘出（ＯＶＸ）ラットに対するＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌の効果を示す。ＯＶＸラットは、閉経後ヒト女性の十分に確立された動物モデルである。さらに、ＯＶＸは、ラットにおける発情行動を刺激するエストロゲンおよびプロゲステロンの皮下注射を可能にして、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌の効果を決定する。成体の卵巣摘出ラットに、５０日齢まで約２００ｐｐｍのイソフラボンの植物エストロゲン（「Ｐｈｙｔｏ−２００」）を給餌する（全ての動物は、約４０日齢で卵巣摘出する）。この雌性ラットを、５０日齢で年齢および体重をマッチさせ、９４日齢まで２つの食餌処置とする：Ｐｈｙｔｏ−６００（黒のバー）またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ（白のバー）。ベースラインの体重を、５０日齢で量り、その後、その動物を食餌処置におき、再度、５８日（食餌処置の８日目）、９２日齢（エストラジオールの注射前）、および９４日齢（プロゲステロンの注射前、および９４日齢で６時間後（発情行動の化学的誘導後）に量る（図２８に示す）。
【０１４４】
８日間食餌を消費した後、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌ラットは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌に比較してわずかだが有意な体重の減少を示す（約７％）。体重のこの減少は、エストロゲンおよびプロゲステロン（ステロイド）注射による発情行動の化学的誘導の前および間に維持される。
【０１４５】
白色脂肪組織を、発情行動の化学的誘導後に９４日齢で測定して、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌ＯＶＸラットは、実施例９および１０の知見と一致して、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌ＰＶＸラットに比較してほぼ５０％少ない白色脂肪組織質量を有する（図２９に示す）。
【０１４６】
Ｐｈｙｔｏ−６００給餌ＯＶＸラットにおける血清レプチン値は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌ラットに比較してほぼ３０％まで減少し（図３０に示す）、これは白色脂肪組織質量の減少を反映している。
【０１４７】
（実施例１１）
雄性および雌性のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットは、５０日齢で供給業者から購入する。全ての動物をＰｈｙｔｏ−２００食餌で飼育する（受胎から５０日齢まで）。５０日齢で雄性および雌性のラットを、４つの食餌処置群のうちの１つに無作為に割り当てる：１）約５ｐｐｍ未満のイソフラボンを含むＡＩＮ−７６食餌、２）Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、３）Ｐｈｙｔｏ−２００、または４）Ｐｈｙｔｏ−６００食餌（前の実施例に記載される）。ＡＩＮ−７６食餌は、極めて低濃度のイソフラボンを含み、その処方物は他の３つの食餌と比較して全く異なる。例えば、スクロース含量は、極めて高く（総食餌処方物のほぼ５０％に達する）、ラットが通常の植物ベースの成分の食餌と同じように消費を楽しむことができない濃い白色の堅さを有する（すなわち、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌は、コーンおよびコムギを、極めて低レベルのイソフラボンを含むその処方物中で用いる）；Ｐｈｙｔｏ−２００またはＰｈｙｔｏ−６００食餌は、その処方物中に変動する量のダイズ粉を用いる。雄性ラットを、３５０日齢（ヒトでの中年に相当する）まで、その割り当てた食餌で飼育する。雌性ラットを、２７９日齢（ヒトの中年に達する）までこの食餌で飼育する。食物および水の摂取を測定して、体重変化に対するこれらのパラメータの潜在的な影響を決定する。いずれの場合にも、これらの要因は、イソフラボン含有食餌（すなわち、Ｐｈｙｔｏ−２００およびＰｈｙｔｏ−６００食餌；データ示さず）の消費での体重の減少には寄与しない。
【０１４８】
雄性（オス）
１１２日齢（約６２日間の食餌）で、体重を記録する（図３１に示す）。Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給されたオスは、最大の体重を有し、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌のオスは最低であったが、ＡＳ−７６およびＰｈｙｔｏ−２００食餌でのオスは、これらの２つの群の値の間におさまる。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌された体重は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌されたオスよりも約１４％まで有意に低い。
【０１４９】
対応して、２７９日齢および３５０日齢の雄性ラットは、１１２日齢で観察されたプロフィールと類似のプロフィールを有する（それぞれ、図３２および３３に示す）。Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給されたオスは、最重量の体重を示し、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたオスは、最低の体重を示したが、ＡＳ−７６およびＰｈｙｔｏ−２００食餌でのオスは、これらの２つの群の値の間におさまる。
【０１５０】
ＡＩＮ−７６給餌されたオスまたはＰｈｙｔｏ−Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌されたオスは、３５０日齢で測定して、最高の白色脂肪組織重量を示す。Ｐｈｙｔｏ−２００食餌でのオスは、ＡＩＮ−７６またはＰｈｙｔｏ−Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌ラットに比較して白色脂肪組織重量の１９％の有意でない減少を示す。Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたオスのラットは、ＡＩＮ−７６またはＰｈｙｔｏ−Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌ラットに比較して、有意に低い脂肪組織質量、約４０％の減少を有する（図３４に示す）。
【０１５１】
血清インスリンおよびレプチンのレベルは、それぞれ図３５および３６に示される、食餌処置におけるイソフラボンの漸増濃度の関数として有意に低下する。例えば、Ｐｈｙｔｏ−２００またはＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたオスは、ＡＩＢ−７６給餌オスに比較してインスリン値が有意に低下する。また、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌オスに比較してインスリン値の約５０％の低下を示し、血清レプチンプロフィールは、インスリンの結果と同様のパターンを示し、ここでＰｈｙｔｏ−２００またはＰｈｙｔｏ−６００給餌オスは、ＡＩＮ−７６またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌オスのいずれかに比較して血清インスリン値の有意な低下を有する。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスのインスリン値は、Ｐｈｙｔｏ−２００給餌オスに比較して４６％低い。しかし、これらの２つの食餌群の間の相違は、有意差には達しない（ｐ＜０．０６５）。
【０１５２】
雌性（メス）
雌性ラットにおける体重に対する４つの食餌処置の影響を決定するために、体重を１１２日齢および２７９日齢で測定する。１１２日齢では、Ｐｈｙｔｏ−ＦｒｅｅおよびＰｈｙｔｏ−２００食餌を供給されたメスは、最高の体重であって、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌されたメスは最低であったが、ＡＩＮ−７６食餌群は、図３７に示される、他の３群の値の間におさまる。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌群の体重は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌およびＰｈｙｔｏ−２００給餌雌性に比較して、約１０％有意に低い。
【０１５３】
２７９日齢で、雌性ラットは、食餌処置によって影響されるような体重の変化について年齢のマッチしたオスのプロフィールと類似のプロフィールを有する（図３８に示す）。Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたメスは、ＡＩＮ−７６またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌群に比較して最低の体重を示す。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌メスでの体重におけるこの有意な減少は、試験された食餌処置群の間でほぼ１５％である。
【０１５４】
（実施例１２）
Ｎｏｂｌｅラットを用いて、近交系のラットが、非近交系のラット（例えば、イソフラボン豊富な食餌を与えた場合のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ動物）のものと類似の体重および脂肪性組織の変化を有するか否かを決定した。近親交配に起因して、Ｎｏｂｌｅラットは、より脆弱な動物である。例えば、妊娠は、出産まで同腹仔を常に担持するわけではなく、同腹仔は高頻度に小さい。Ｎｏｂｌｅラットは、２０年を超えて用いられている。なぜなら、それらは、特に生殖器官のホルモン依存性器官において、加齢とともに自然に腫瘍を発生するからである。従って、癌の研究の領域でＮｏｂｌｅラットは広範に研究されている（例えば、Ｒ．Ｌ．Ｎｏｂｌｅ、「Ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｂ ｒａｔ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｈｏｒｍｏｎｅｓ」Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ，１９８２，２３：１１３〜１５９）。
【０１５５】
雄性および雌性のＮｏｂｌｅラットに、受胎から１４５日齢までＰｈｙｔｏ−ＦｒｅｅまたはＰｈｙｔｏ−６００食餌のいずれかを供給する。Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給された雄性ＮｏｂｌｅラットはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給された年齢のマッチしたオスに比較して１４５日齢で体重が有意に低い（図３９に示す）。Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットで以前に観察されたとおり、体重の有意な減少は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌オスに比較して約８％というわずかだが一貫した低下を示す。さらに、白色脂肪組織量は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌に比較してＰｈｙｔｏ−６００給餌オスでは有意に低い（図４０に示す）。
【０１５６】
Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給された雌性Ｎｏｂｌｅラットは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌されたメスに比較して体重の６％の減少がある（図４１に示す）。白色脂肪組織量は、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給された雌性Ｎｏｂｌｅラットで顕著に低下した（図４２に示す）。Ｐｈｙｔｏ−６００食餌群は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌ラットに比較して脂肪組織が６１％減少している。白色脂肪組織における低下は、Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットでみられた低下と同様である。
【０１５７】
（実施例１３）
Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌期間の開始前に、雄性Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットに、前の実施例に記載のとおりＰｈｙｔｏ−２００食餌を供給する。このラットを、約５２日齢までＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を含む食餌で飼い、無作為に３つの群に割り当てる。全てのラットについてのＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌での１４日後および２１日後のベースラインの体重は同様である（それぞれ図４３および図４４に示す）。７３日齢で開始して、ラットに毎日皮下注射の、０．１ｃｃビヒクル（ピーナツオイル）、ビククル中のエクオルの１ミリグラムのラセミ混合物（０．８３ｍｇ／体重１ｋｇ／１日）、またはビククル中のエクオルの５ミリグラムのラセミ混合物（４．２ｍｇ／体重１ｋｇ／１日）を３日ごとに１回与える。
【０１５８】
８０日齢および８８日齢では、コントロールに比較して両方のエクオル注射群でわずかな体重の減少および平均の体重の増大があるが、これらの値は、コントロールとは有意に異なることはない（それぞれ図４５および４６に示す）。
【０１５９】
動物が９５日齢および１０日齢になるまでに、体重はわずかに低下して、低下はエクオル処理群では５〜９％におよぶ（図４７および４８に示す）。しかし、９５日齢および１０１日齢の両方でエクオル注射動物における平均の体重増大は、コントロール値に比較して有意に低下する。体重の相違は有意ではなく、脂肪組織の蓄積は、エクオル処置群では顕著に低い。エクオルを注射された１０１日齢のラットにおける脂肪組織重量は、コントロールに比較して約３３％低下している（図４９に示す）。
【０１６０】
エクオル注射が雄性生殖器官に有害な影響を有するか否かを決定するために、精巣重量を、これらの動物で定量する。エクオル注射では精巣重量における有意な変化があり、精巣重量は、図５０に示される、注射処置群の間で本質的に同じである。
【０１６１】
（実施例１４）
５０日齢のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓのオスおよびメスを個々にカゴに入れ、１０時間暗野、１４時間明野のスケジュールで飼育する（１４００〜０４００が点灯）。動物を食餌群に無作為に割り当て、４つの食餌処置群の１つに自由にアクセスさせる：１）ＡＩＮ−７６、２）Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、３）Ｐｈｙｔｏ−２００、または４）Ｐｈｙｔｏ−６００の食餌。ラットを中年（オスではほぼ３００日齢、メスではほぼ３３０日齢）までこの食餌で維持し、このとき動物を高架式十字迷路で試験し、不安関連行動を定量する。その後、血清の植物エストロゲン値を、Ｃｏｗａｒｄ Ｌら、Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ、４１：１９６１〜１９６７に記載の方法に従ってＧＣ／ＭＳによって定量する。不安の行動パターンを性別による食餌処置群の循環イソフラボンレベルの血清プロフィールに比較する。
【０１６２】
オスでは、不安関連行動の用量依存性の発現があって、最高濃度のイソフラボンを給餌された動物が最低の不安パラメータを示す。対照的に、ＡＩＮ−７６を給餌された動物は、最高レベルの不安を示す（図５１に示される）。オープン・アームで費やされる時間の割合を分析する場合、同様のパターンがオープン・アームへの進入回数のパターンに対してみられる。とりわけ、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスは、オープン・アーム中で経過する時間の最高が割合を示し、一方、オープン・アーム中で経過する時間の最低の割合を示すのは、ＡＩＮ−７６食餌を供給された動物であり、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅおよびＰｈｙｔｏ−２００の値は、用量依存性の様式でこれらの最大応答の間におさまっている（図５２に示す）。
【０１６３】
高架式十字迷路での試験前に、メスを１２連続日膣スミアでモニタリングして、発情周期の影響を最小限にする周期はないことを確証する。雌性ラットは、雄性ラットで観察されるのと同様の不安関連行動のパターンを有する。しかし、食餌性イソフラボンの影響は、オスでみられる影響ほど堅固ではない。オープン・アームに入る回数（図５３）および経過する時間（図５４）の最高の割合は、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌メスでみられ、ここでは進入の最低の割合がＡＩＮ−７６給餌メスでみられるまで、減少するという階段状パターンである。
【０１６４】
挙動試験が完了するとき、血清植物エストロゲン値を決定して、不安関連の行動のパターンと比較する。オス（図５５）およびメス（図５６）の両方で、循環イソフラボン値は、不安関連の挙動の発現に対応しており、循環イソフラボン分子と不安との間の関連を示す。これらのデータは、食餌のイソフラボン含量が不安に有意な影響を有し得ることを示す。
【０１６５】
（実施例１５）
成体雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、ＤＭＳＯ、ラセミのエクオル（０．２５０ｍｇ／Ｋｇ／日）、Ｒ−エクオル（０．２５０ｍｇ／Ｋｇ／日）、またはＳ−エクオル（０．２５０ｍｇ／Ｋｇ／日）のいずれかの毎日の注射を、総容積０．３ｃｃのＤＭＳＯ中で、皮下注射によって与える。処置の７連続日の終りに、不安関連行動を定量するために、動物を高架式十字迷路中で試験する。下の表５に示すとおり、ラセミのエクオルまたはＲ−エクオルを注射したオスは、コントロールのラットに比較して不安のレベルで有意な減少を示す。
【０１６６】
【表５】
＊＝コントロール値に対する不安関連パラメータ（すなわち、迷路時間の中心領域またはオープン・アーム中で経過する時間またはオープン・アーム進入の回数）の有意な低下
＊＊＝コントロール値に対する不安関連行動（すなわち、オープン・アーム進入の回数）の有意な低下
ｎ＝８（１群あたりの動物）。
【０１６７】
これらの知見は、異なる濃度のイソフラボンを含む４つの異なる処置を利用して得られた知見と一致しており、エクオルは、不安、ならびに他の神経学的状態、例えば、広範な健康上の利点について明白な能力を有する気分および抑うつを調節するのにおいて主要な因子であることを示す。
【０１６８】
（実施例１６）
高コレステロール血症を有する２９例の成体に、５週間毎日３３ｍｇの総イソフラボンを含む食餌を供給する。図５７は、イソフラボンを含む食餌に厳密に隣接している５週後の２９例の個体の各々についてのＢＭＩで観察された変化を示す。この期間にわたるＢＭＩ中の平均の低下は小さいが、それにもかかわらず有意である（ｐ＝０．０１）。これらの結果によって、植物エストロゲン豊富な食餌は、ヒトでのウエイトコントロールに影響し得ることが示唆される。この研究は、ウエイトコントロールを担う成分またはその機序を特定しなかった。平均のベースラインのＢＭＩ（ｎ＝２９）は２６．６±０．８であり、平均のＢＭＩ（ｎ＝２９）は５週で２６．２±０．７である。
【０１６９】
本発明の種々の実施形態を詳細に記載してきたが、本発明のさらなる改変および適合が当業者に生じることが明らかである。このような改変および適合は、本発明の趣旨および範囲内であることが明らかに理解されるべきである。
【０１７０】
（実施例１７）
エクオルは中年齢の雌性ラットで抑うつおよび体重を低下させる。
【０１７１】
イソフラボンは、心血管およびホルモン依存性の疾患に有益な影響を有することが示されているが、脳および行動特に抑うつおよび絶望などの行動に対する影響についてはほとんど知られていない。この研究では、中年齢のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ雌性ラットをこの文脈で試験した。
【０１７２】
げっ歯類における年齢に関連する形態学的および生理学的変化は、以下の年齢範囲を用いてヒトに等価である：中年齢のラット（１０〜１２ヶ月の年齢）は、４５〜５５歳までのヒトにほぼ相当するが、高齢のラット（２１〜２３ヶ月齢）は、ほぼヒトの６５〜７５歳齢に相当する（Ｄ．Ｍｉｌｅｕｓｎｉｃら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ，２０：１９〜３５，１９９９）。さらに、中年齢のラット（１２ヶ月齢）は、約５５歳齢の閉経後の女性の年齢に相当する。米国における閉経の平均年齢は、ほぼ５１歳齢である（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，ＵＳＡ）。
【０１７３】
この研究での全ての雌性ラットを、発情周期の特徴のホルモンパターンについて検査した。この研究の全ての動物は、この加齢動物モデルを用いる科学的報告と一致して循環はしない（Ｃ．Ｒ．Ａｎｚａｌｏｎｅら、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ，６４：１０５６〜１０６２，２００１）。
【０１７４】
雌性ラットを、植物エストロゲン豊富（Ｐｈｙｔｏ−６００）または植物エストロゲンなし（Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅ）の食餌のいずれかに暴露した（受胎の時から）。
【０１７５】
１２ヶ月齢で、標準的な前臨床試験であるＰｏｒｓｏｌｔ強制水泳試験（抑うつの、および抗うつ剤の作用の神経生物学を検討するためヒトに対して適用）を用いて動物を分析した（Ｒ．Ｄ．Ｐｏｒｓｏｌｔ，Ｍ．ＰｉｃｈｏｎおよびＭ．Ｊａｌｆｒｅ，Ｎａｔｕｒｅ ２６６：７３０〜７３２，１９９７；およびＭ．Ａ．Ｇｅｙｅｒ＆Ａ．Ｍａｒｋｏｕ，ｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｆｏｕｒｔｈ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，第７８７〜７９８頁、１９９５）。
【０１７６】
試験は、ラットが活発に泳ぐように強制するように設計する。経時的に、いくつかの動物は不動になり得、これは行動上の絶望の状態とみなされる。動物が不動である総時間は、絶望または抑うつの指数である。他のパラメータとしては以下が挙げられる：ａ）移動の総距離、ｂ）移動総時間（不動指数の反対）、ｃ）逃避行動を示す動物の潜水企図の回数、およびｄ）情動的なレベルの指標である試験の間に排出された排便またはボリの数（Ｃ．Ｓ．Ｈａｌｌ，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｐｓｙｃｈ．，１８：３８５〜４０３，１９３４）、試験中のボリ数の増大は、情動的行動の強調を示す。これらのパラメータの全てを、この研究で記録し、ＡｎｙＭａｚｅ（登録商標）コンピュータソフトウェアによって定量し、Ｐｏｒｓｏｌｔ強制水泳試験の総時間は、４８０秒または８分であった。
【０１７７】
従って、総移動距離、移動時間ならびに不動および排出されるボリの数についての減少を伴う、潜水のレベルの増大を示す動物は、低レベルの絶望または抑うつを示す。上記パラメータに反対する行動を示す動物は、絶望または抑うつのレベルの増大を示す。
【０１７８】
動物を２回試験した。
【０１７９】
試験１は、図５８〜６９に示され、「エクオル注射前」と表示される、食餌暴露のみを比較した。
【０１８０】
試験の第二段階では、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅ給餌メスに、８日間にわたってエクオルを注射し（皮下投与によって、５ｍｇ／ｋｇまたは２．５ｍｇ／ｋｇで）、一方、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌メスには、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）ビヒクルコントロール注射を与えた。（ＤＭＳＯは、皮膚および他の膜を通じて、それらを損傷することなく深く浸透する能力、および循環中に化合物を担持する能力に起因して医薬において用いられている）。
【０１８１】
試験２は、図５８〜６９において示され、「エクオル注射後」と表示される、エクオル処置後の抑うつ行動を評価した。
【０１８２】
第１のＰｏｒｓｏｌｔ試験では−表示Ａ：Ｐｈｙｔｏ−６００給餌メスでは、以下が有意に大きいことが示された：ａ）移動距離（ｍ）、（図５８Ａを参照のこと）；ｂ）全体の平均速度（ｍ／秒）、（図５９Ａを参照のこと）；ｃ）総移動時間（秒）、図６０Ａを参照のこと；およびｄ）Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅのメスに比較した潜水回数（図６１Ａを参照のこと）。逆に、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅのメスでは、Ｐｈｙｔｏ−６００メスに比較して以下が有意に大きいことが示された：ａ）総移動時間（秒）（図６２Ａを参照のこと）、およびｂ）排泄ボリ（図６３Ａを参照のこと）。
【０１８３】
８日間のエクオル処置の後、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅのメスは、上記で試験された全てのパラメータについてＰｈｙｔｏ−６００メスによって示されるものと同様の値を示した。例えば、ａ）総移動距離が増大されコントロールの値と同様であった（図５８Ｂを参照のこと）；ｂ）平均速度の増大もコントロールと同様であった（図５９Ｂを参照のこと）；ｃ）ともなって、総移動時間の増大（図６０Ｂを参照のこと）（エクオル注射前値と比較してエクオル注射後のＰｈｙｔｏ−ｆｒｅｅラットで有意に増大した総移動時間（＊＊を参照のこと））；ｄ）潜水の回数は、有意に低下して、コントロールのレベルに匹敵した（図６１Ｂを参照のこと）。さらに、総移動時間は、有意に減少してコントロールと同様であった（図６２Ｂを参照のこと）。最終的に、図６３Ｂに図示されるとおり、ボリの数は、エクオル処置後に減少して、これはコントロールの値のものと本質的に同じであった。
【０１８４】
また、８日のエクオル処置の終りの平均体重低下（グラム数）によって、エクオルはコントロールに比較して有意に体重を減少させたことが明らかになり（表６を参照のこと）、これは、８日の処置間隔後のコントロールを超える体重の２．６倍の減少に相当している。
【０１８５】
（表６．エクオルで処置された中年齢の雌性Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットにおける体重減少）
【０１８６】
【表６】
＊＝エクオル処置した中年齢の雌性ラット対コントロールにおける体重の有意な減少値（ＳＥＭ＝平均の標準誤差）。
【０１８７】
これらのデータによって、エクオルに対する暴露（短期暴露を含む）は、中年齢の雌性ラットにおいて有益な抗うつ効果を有することが示唆される。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌動物でみられる正の抗不安パラメータは、イソフラボン（ダイズ）富化された食餌（次に、これらのラットにおいてエクオルに変換される）を消費することに起因すると考えられる。ラットがダイズ富化食餌（すなわち、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌）を供給された場合非常に高レベルのエクオルを生成するということ、および循環するイソフラボン／イソフラボン代謝物のレベルのほとんど（全体の７０〜９０％）が、エクオルによって示されるということは十分確証されている。注目すべきは、エクオルが、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅ食餌を供給された中年齢の雌性ラットに（短期間）投与された場合、全てのＰｏｒｓｏｌｔ試験抑うつパラメータ（図５８〜６３のＢに示す）は、逆転されて、Ｐｈｙ−６００群と同様であった。これらのデータセットは、Ｐｈｙｔｏ−６００およびＰｈｙｔｏ−ｆｒｅｅ動物が、それ自体コントロール（エクオル注射前および後）として役立つという事実によって強化される。従って、この研究の結果によって、エクオル単独が、抑うつ様の行動を有意に軽減するという正の効果の全てまたは少なくともほとんどを占めるということが示される。エクオルの使用は、それ自体で、潜在的な食物、栄養および薬学的適用によって気分、絶望および抑うつ関連行動を防ぐのにかなりの見込みがある。
【０１８８】
（実施例１８）
成体雄性ラットにおいてエクオルは不安関連の行動および体重を低下するが、ホルモン感受性の脳領域は変化させない
視床下部の構造、例えば、雌雄二形的核（ＳＤＮ）および前腹側周核（ａｎｔｅｒｉｏｖｅｎｔｒｏｐｅｒｉｖｅｎｔｉｃｕｌａｒ ｎｕｃｌｅｕｓ）（ＡＶＰＶ）は、ラットにおいて出生時およびその後の出生後の発達の間のステロイドホルモンの影響に感受性である生殖機能／調節性行動に関与する重要な領域である。ＳＤＮおよびＡＶＰＶの構造が、成体ラットにおけるイソフラボン影響に感受性であることが以前に示されており、一般には多くの報告が、植物エストロゲンが神経保護的であることを実証している（Ｅ．Ｄ．Ｌｅｐｈａｒｔら、Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，８５：２９９〜３０９，２００３；Ｅ．Ｄ．Ｌｅｐｈａｒｔら、Ｃｕｒｒ．Ｎｅｕｒｏｖａｓ．Ｒｅｓ．，１：４５５〜４６４，２００４；およびＬ．Ｂｕ＆Ｅ．Ｄ．Ｌｅｐｈａｒｔ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，３８５：１５３〜１５７，２００５）。しかし、げっ歯類（および多くの他の動物モデル）中の主なイソフラボン代謝物であるエクオルは、脳研究において検査されている。
【０１８９】
本研究では、不安関連行動を、エクオルに暴露された成体Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ雄性ラットにおけるホルモンレベルとともに検査した。ヒトでの精神医学的障害についての公知のかつ受容された動物の行動試験、例えば、高架式十字迷路（ＥＰＭ）をこの目的に用いた（Ｐ．Ｗｉｌｌｎｅｒ，ｉｎ Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ，Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，１９９１；Ｍ．Ａ．Ｇｅｙｅｒ＆Ａ．Ｍａｒｋｏｕ，ｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｆｏｕｒｔｈ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，７８７〜７９８，１９９５；およびＲ．Ｈｉｔｚｅｍａｎｎ，Ａｌｃｏｈｏｌ＆Ｒｅｓ．Ｈｅａｌｔｈ，２４：１４９〜１５８，２０００）。
【０１９０】
ＥＰＭ試験は、新規な環境の探索と、その嫌悪的な特徴の回避との間の固有の葛藤に依拠する。代表的には、動物は、迷路のクローズド・アーム（安全な環境）に比較してオープン・アーム（新しい環境）でわずかな時間を過ごし、かつそこへの進入は少ない。例えば、抗不安剤または薬物は、迷路のオープン・アームに入る回数および経過する総時間を増大する。
【０１９１】
５０日齢の雄性ラットに植物エストロゲンの少ない食餌を与え（１０ｐｐｍのイソフラボン）、２１５日齢までこの食餌のままとした。１５０日齢で、ラットの年齢および体重をマッチさせ、次いでコントロールまたはエクオル処置群に分けた。１９０日で開始して、雄性ラットには毎日皮下（０．１ｃｃ）注射のコントロールのビヒクル（ＤＭＳＯ）またはエクオル（２．５ｍｇ／Ｋｇ）を２５連続日与えた。
【０１９２】
処置の１５日後、動物をＥＰＭで試験し、ここでは３分間ビデオテープに撮って、ＡｎｙＭａｚｅ（登録商標）コンピュータソフトウェアを介して、オープン・アームへの進入の回数およびオープン・アーム上で経過する総時間の割合について後で記録した。
【０１９３】
２１５日齢で、動物を屠殺して、体重／前立腺重量、血清ホルモンおよびイソフラボンの値を決定し、それとともに、ホルモンに感受性である視床下部領域の容積を決定する。
【０１９４】
コントロール値に比較したエクオル処理雄性ラットにおける血清テストステロン、黄体形成ホルモン（ＬＨ）または１７β−エストラジオール値の変化をともなう、前立腺重量および５α−ＤＨＴにおける有意な減少が、米国特許公開番号２００５／０２４５４９２Ａ１（その内容がその全体が参照によって組み込まれる）において以前に報告された。
【０１９５】
脳を、標準的な染色を介して処理して、処置によって形態学的なＳＤＮおよびＡＶＰＶのパラメータについてＢｉｏｑｕａｎｔ（登録商標）を介して分析した。エクオル処置動物における血清エクオル値は、植物エストロゲン豊富なダイズ食餌を消費するのと等価であった。
【０１９６】
図６４に示されるとおり、体重はコントロールの動物に比較してエクオル処置オスでは有意に減少された。ＥＰＭでは、エクオル処置動物は、コントロールの値に比較して有意に低い不安関連行動を示した（すなわち、迷路のオープン・アームへの進入回数およびオープン・アームで経過する時間がコントロールに対して有意に大きかった）（それぞれ、図６５および図６６を参照のこと）。
【０１９７】
２５日連続のエクオルに対する暴露ではＳＤＮまたはＡＶＰＶの容積的形態計測的パラメータにおいて有意な変化は見られなかった（図６７および表７を参照のこと）。
【０１９８】
これらの結果によって、エクオルは、成体期の間のげっ歯類においてホルモン感受性の視床下部容積を変化させないということが示唆されており、これは、本発明者らの研究室で以前に報告された等価な暴露間隔の間の食餌経路を介するダイズ（植物エストロゲン）の消費とは反対である。このことはさらに、エクオルが、安全かつ非毒性の薬剤であり得、脳／行動の障害および男性／女性の健康問題に取り組む潜在的な神経の適用を有するということを示唆する。最終的に、これらのデータによって、栄養食品、栄養補助食品、または薬剤適用中のエクオルの存在が、ウエイトコントロールにおける有効な処置であって、不安を調節または軽減するということが示唆される。
【０１９９】
（表７：エクオルで処置した雄性ラットの視床下部構造−雌雄二形的核（ＳＤＮ）および前腹側周核（ＡＶＰＶ）の形態学的容積（ｍｍ３×１０−３で表現））
【０２００】
【表７】
局所の脳容積は、ｍｍ３×１０−３で表した。処置群の間にＳＤＮまたはＡＶＰＶにおいて有意な差はなかった（１群あたりｎ＝４）。
【０２０１】
（実施例１９）
エクオルは、成体として試験された雄性ラット子孫における閉経前および閉経後早期の処置を介した不安レベルの減少においてゲニステインに比較して強力である。
【０２０２】
近年では、イソフラボンは、癌（乳癌および前立腺癌）、心血管疾患、骨粗鬆症および閉経期に関連する症状に関して有益な健康上の利点を有すると報告されている。しかし、脳に対するイソフラボンの影響、特に不安などの行動についてはわずかな情報しか知られていない。この研究では、ゲニステインおよびエクオル（イソフラボン代謝物）の長期効果を、ＥＰＭにおいて成体として試験された雄性の子孫における不安関連の行動に影響する能力について検査した。
【０２０３】
妊娠Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットを、妊娠の１４日〜２０日、および出生後２〜２５日の授乳の間、毎日皮下注射を介して処置し、ここでは１）コントロール−ＤＭＳＯビヒクル、または２）ゲネステイン（３ｍｇ／日で）、または３）エクオル（処置群に応じて３ｍｇ／日で）であった。全ての動物にこれらの研究を通じて植物エストロゲンの低い食餌を供給した（１０ｐｐｍイソフラボン）。処置群の中で誕生の直前に母体の体重に有意な相違が無かった。出生時、体重は、コントロールに比較してゲニステイン処置およびエクオル処置動物においてわずかに高かった（ただし有意ではない）。母親のおよび雄性の子孫のゲニステインおよびエクオルのレベル（出生後２５日で）は、投与される処置のレベルに並行していた。
【０２０４】
約９０日齢の雄性子孫を、ＥＰＭ中での処置（コントロール、ゲニステインおよびエクオル）によって試験し、ここでは３分間ビデオテープに撮って、前に記載されたとおり、オープン・アームへの進入の回数およびオープン・アーム上で経過する総時間の割合について後で記録した。図６８に図示されるとおり、エクオル処置オスは、コントロールに比較してオープン・アームへの有意に大きい進入を示した。しかし、オープン・アームへの進入は、ゲニステインとコントロール群との間で有意に異なることはなかった。特に、図６９に示されるとおり、エクオル処置オスは、ゲニステイン処置動物またはコントロールに比較してオープン・アーム中で有意に大きい時間を示した。また、ゲニステイン処置オスは、コントロールに比較して有意に大きいオープン・アーム時間間隔を示した。エクオルの時間間隔は、ゲニステイン値よりも２倍大きく、かつゲニステイン値はコントロールよりも約９倍大きかった。
【０２０５】
これらのデータによって、以下が示唆される：１）エクオルは、ゲニステインに比較してさらに強力な抗不安剤である、そして２）イソフラボン代謝物であるエクオルは、出生前に処置された成体として試験された子孫の不安関連行動に対して、長期影響を有する。この実験の知見によって、ゲニステインではなく循環のエクオルの値におそらく起因している抑うつ関連行動を軽減するための上記の実施例１７でみられるエクオルの正の効果が確証される。この研究の結果は、種々の投与経路により食品、栄養および不安の医薬品調節に適用を有する。
【０２０６】
従って、前述の詳細な説明は、限定ではなく例示とみなされることを意図しており、これは本発明の趣旨および範囲を規定することを意図する、全ての等価物を含む、以下の特許請求の範囲であることが理解される。
【技術分野】
【０００１】
（政府支援の研究または開発）
本発明は、Ｕ．Ｓ Ｄｅｐｔ．ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ（ＵＳＤＡ）により授与された助成金番号ＮＲＩ ２００２−００７９８および助成金番号ＮＲＩ ２００４−０１８１１の下、政府支援により行われた。
【０００２】
政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００３】
（背景）
（１．技術分野）
本発明は、エクオル、ならびにアンドロゲンによって媒介される生理学的および病態生理学的な状態を処置および予防するための治療化合物としてのその使用に関する。詳細には、本発明は、神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または治療するためのエクオルの使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
（２．背景の情報）
近年では、植物エストロゲンは、加齢性疾患（例えば、心血管疾患および骨粗しょう症）、およびホルモン依存性の癌（すなわち、乳癌および前立腺癌）に対するその潜在的な保護効果に起因して調査に関して注目が増大している。植物エストロゲンには３つの主な分類がある：１）イソフラボン（主に大豆由来）、２）リグナン（亜麻仁で大量に見出される）、および３）クメスタント（ｃｏｕｍｅｓｔａｎｔｓ）（アルファルファのような発芽植物由来）。これらの主な３つの分類のうち、イソフラボンのヒトでの消費は、大豆を含む食品におけるその利用度および多様さに起因して最大の影響を有する。イソフラボンのうちでも、ゲニステインおよびダイゼインは最も強力なエストロゲンホルモン活性を発揮すると考えられ、したがってこれらの分子に最も注意が向けられている（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３）。しかし、これらのイソフラボン分子は、大豆食品中でその生物学的に活性な形態では高レベルで存在することはなく、前駆体型で大量である。例えば、ゲニステインの前駆体であるゲニスチンは、分子の炭水化物部分を含むグリコシド型である。さらに、マロニルグルコシドおよびアセチルグルコシド型も見出される。これらの結合体は、腸内細菌によってＧＩ管で代謝され、これは炭水化物成分を生物学的に活性な植物エストロゲンであるゲニステインに加水分解する。同じ代謝工程が、グリコシド型ダイゼインから変換されるアグリコンダイゼインについて生じる。次いで、ダイゼインはさらに、「エクオル産生（ｅｑｕｏｌ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ）」哺乳動物においてエクオルに代謝される。その後、エクオルは、極めて高濃度で血流中において循環する。エクオルは、大豆が消費されない限りほとんどの健常な成体の尿には通常は存在しない。インビボでのエクオルの形成は、ｇｅｒｍ−Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ動物がエクオルを排泄しないという知見、ならびに腸内フローラが新生児ではまだ発達してないという事実のせいで、出生から排他的に大豆食を供給された新生または４ヶ月齢の新生児の血漿および尿ではエクオルが見いだされないという知見から証明されるとおり、腸内ミクロフローラに排他的に依存する。非特許文献４を参照のこと。
【０００５】
イソフラボンのフェノール環構造によって、これらの化合物は、エストロゲン受容体（ＥＲ）に結合してエストロゲンを模倣することが可能である。ゲニステインおよびダイゼインは、ＥＲに結合するが、それはエストラジオールに比較して低い親和性であり、ＥＲαに対してよりもＥＲβに対して親和性が大きい。さらに、植物エストロゲンは、身体全体を通じて種々の組織部位で天然の選択性エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）のように作用することが報告されている。いくつかの組織では、植物エストロゲンはエストロゲンアゴニストとして作用するという証拠があるが、他方ではそれらは、タモキシフェンまたはラロキシフェンの特徴に匹敵するアンタゴニスト様の特徴を示す（ＳＥＲＭ活性が性ホルモンおよび性別依存性と考えられる）。
【０００６】
科学論文の大部分がダイズまたはクローバーの天然のイゾフラボンに集中しているが、その腸内由来の代謝物の作用または影響について報告しているものもわずかにある。
【０００７】
エクオル（７−ヒドロキシ−３（４’ヒドロキシフェニル）−クロマン）は、植物エストロゲンダイゼインの主要な代謝物であって、ダイズおよびダイズ食品において豊富に見出される主要なイソフラボンの１つである。しかし、エクオルは、植物エストロゲンではない。なぜなら、植物の天然の成分ではないからである。エクオルは、どの植物ベースの生成物にも天然には存在しない。むしろ、これは、非ステロイド性のイソフラボンであって、排他的に、腸内細菌代謝物の生成物である（比較的少ない個体では、約３０〜４００％が、ダイズイソフラボンをエクオルに変換するのに必要なミクロフローラを有する）。エクオルでの以前の研究では、エクオルがある程度弱いエストロゲン特性を有し、性ホルモン結合グロブリンに結合し、α−フェトプロテインに結合し、抗酸化活性を有することが確認されている。しかし、エクオルは、植物由来のイソフラボンのなかでも、不斉中心を有し、従って、２つの別個の鏡像異性型、すなわちＲ鏡像異性およびＳ鏡像異性体として存在するという点で特有である。本発明者らは、エクオルのＳ鏡像異性体が、ダイズを消費する「エクオル産生（ｅｑｕｏｌ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ）」哺乳動物の尿および血漿中で見出される排他的なエクオルの形態であり、ヒト腸内細菌によって作成される唯一のエクオルの鏡像異性体であるということを示している。エクオルに関する全ての以前の研究は、エクオルのラセミ型で行われていると考えられる。一般には、２つの形態のエクオルが存在するという認識が欠如しており、個々の鏡像異性体の特異的な作用または活性に対する以前の研究というのは本発明者らの知見の前には報告されていない。Ｒ鏡像異性体およびＳ鏡像異性体は、立体配置的に異なり、結果としてその生物学的な活性に影響する。例えば、Ｓ鏡像異性体のエクオルのみが十分な親和性でエストロゲン受容体（ＥＲ）に結合し、これによってヒトで報告される循環エクオルレベルで結合するようになる。１７βエストラジオールに比較して、ＥＲαに対するＲおよびＳエクオルの鏡像異性体の相対的な結合親和性は、それぞれ２１０．６および４９．２倍である。しかし、Ｓ−エクオル鏡像異性体は、ＥＲβ選択性であって、ＥＲβに比較的高い親和性を有するとみなされる。鏡像異性体Ｓ−エクオルは、１７βエストラジオールの約２０％でＥＲβに結合する［エクオル、Ｋｄ＝０．７ｎＭ対１７β−エストラジオール、Ｋｄ＝０．１５ｎＭ］が、Ｒエクオル鏡像異性体は、約１００分の１で結合する。Ｒ−エクオルは、天然には存在しないが、身体でのアンドロゲン媒介性のプロセスを調節する能力のせいでかなり重要なものである。
【０００８】
前立腺は、その発生および成長に関してアンドロゲンホルモン作用に依存し、ヒトの前立腺過形成（ＢＰＨ）の発達には明らかに、加齢の間の精巣のアンドロゲンの組み合わせを要する。しかし、テストステロンは、前立腺の成長を担う主要なアンドロゲンではない。主要な前立腺のアンドロゲンは、前立腺癌の現在の治療が５αリダクターゼ阻害剤による５αＤＨＴ減少に向かっていることによって証明されるとおり、５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）である。ヒトＢＰＨでは上昇されないが、前立腺の５α−ＤＨＴのレベルは、血漿のテストステロンの減少にかかわらず、加齢でも正常なレベルで残る。テストステロンは、前立腺の間質および基底細胞において５αリダクターゼによって５α−ＤＨＴに変換される。５α−ＤＨＴは主に、前立腺の発達およびＢＰＨの病因を担う。５αリダクターゼの阻害剤は、前立腺のサイズを２０％〜３０％減少させる。この腺組織における減少は、アポトーシスの誘発によって達成され、これは管萎縮によって組織学的に明らかになる。５αリダクターゼは、２つのアイソフォーム、１型および２型として存在し、前立腺は、優先的に２型のアイソフォームを発現し、肝臓および皮膚は主に１型のアイソフォームを発現している。患者は、１型ではなく、２型の５αリダクターゼにおける相違で特定されている。２型５αリダクターゼヌル変異を有するノックアウトマウスは、５αリダクターゼの欠損のあるヒトでみられる表現型と類似の表現型を示す。１型の５αリダクターゼノックアウトの雄性マウスは、生殖機能に関して表現型は正常である。５αリダクターゼまたは免疫組織化学検出についての酵素活性は、他の尿生殖器組織、例えば、精巣上体、精巣、グベマキュラム（ｇｕｂｅｍａｃｕｌｕｍ）およびｃｏｒｐｏｒａｌ ｃａｖｅｍｏｓａｌ組織において注目されている。
【０００９】
定量的に、女性は、エストロゲンよりも大量のアンドロゲンを分泌する。主要な循環ステロイドは一般に、アンドロゲンとして分類され、これには、血清濃度の降順で、デヒドロエピアンドロステロンサルフェート（ＤＨＥＡＳ）、デヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）、アンドロステンジオン（Ａ）、テストステロン（Ｔ）、および５α−ＤＨＴが挙げられるが、終わりの２つだけが、有意な程度までアンドロゲン受容体に結合する。他の３つのステロイドは、プロアンドロゲンとしてさらに優れているとみなされる。５α−ＤＨＴは主にテストステロン代謝の末端産物である。テストステロンは両方、その遊離型で循環し、アルブミンおよび性ステロイドホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）を含むタンパク質（そのレベルは、遊離のテストステロン濃度の重要な決定因子である）に結合する。閉経後の卵巣は、アンドロゲン分泌器官であって、テストステロンのレベルは、閉経移行期または閉経期の出現によっては直接影響されない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｋｎｉｇｈｔ Ｄ．Ｃ．ら、Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏ，１８７：８９７〜９０４、（１９９６）
【非特許文献２】Ｓｅｔｃｈｅｌｌ，Ｋ．Ｄ．Ｒ．Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ，１２９：１３３３Ｓ〜１３４６Ｓ（１９９８）
【非特許文献３】Ｋｕｒｚｅｒ，Ｍ．Ｓ．ら、Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｎｕｔｒ，１７：３５３〜３８１（１９９７）
【非特許文献４】Ｓｅｔｃｈｅｌｌ Ｋ．Ｄ．Ｒ．ら、Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ １９９７；３５０：２３〜２７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
いくつかの研究の取り組みは、以下のようなアンドロゲン依存性の疾患の処置のためのステロイド性の化合物の開発に集中していた：（男性型）多毛症、アンドロゲン脱毛症、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、および前立腺癌。５α−ＤＨＴは、主にステロイド５αリダクターゼ酵素を遺伝的に欠く男性の臨床評価を主に通じて、これらの疾患の進行における原因因子とみなされている。このような研究の結果として、この酵素の阻害は、新規な抗アンドロゲン薬物の設計および合成の薬理学的ストラテジーになっている。しかし、５αリダクターゼの阻害が、５αリダクターゼ阻害剤を用いる従来の治療の報告された副作用から生じる禁忌によって証明されるとおり、この系に有害な影響を有するか否かは明らかではない。５α−ＤＨＴの阻害を標的する異なるストラテジーの開発は、アンドロゲン媒介性の状態の治療における主な進歩である。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（要旨）
本発明は、被験体における神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させる方法である。本発明は、この神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させるのに十分な量でエクオルを含む組成物を投与することを包含する。
【００１３】
このエクオルは、Ｒ−エクオルとＳ−エクオルとのラセミ混合物であってもよい。好ましくは、このエクオルは、Ｒ−エクオルで鏡像異性的に富化される。あるいは、このエクオルはＳ−エクオルで鏡像異性的に富化されてもよい。
【００１４】
神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害は、抑うつ、不安、双極性障害、強迫性障害、多動性障害、体重増加、または肥満であってもよい。神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害は、アルツハイマー病またはパーキンソン病であってもよい。神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害は、閉経周辺期または閉経後症状であってもよい。
【００１５】
組成物はさらに、賦形剤を含んでもよい。好ましくは、組成物は、錠剤、カプセル、粉末、トローチ、バッカル錠および舌下錠からなる群より選択される経口処方物中にある。組成物は、少なくとも約０．２５ｍｇのエクオルを含む経口処方物であってもよい。組成物は、食物および飲料であってもよい。組成物は、遅延性の処方物であってもまたは徐放性の処方物であってもよい。
【００１６】
好ましくは、エクオルは、遊離の５α−ジヒドロテストステロンを結合し、かつアンドロゲン受容体とのその結合を阻害するのに十分な量である。好ましくは、エクオルは、遊離の５α−ジヒドロテストステロンを結合し、かつアンドロゲン受容体とのその結合を阻害するのに十分であって、エストロゲン受容体サブタイプを結合するのに十分な量である。
【００１７】
別の実施形態では、本発明は、被験体における肥満を軽減する方法である。該方法は、治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する。
【００１８】
別の実施形態では、本発明は、被験体における抑うつを軽減する方法である。該方法は、治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する。
【００１９】
さらに別の実施形態では、本発明は、被験体における不安を軽減する方法である。該方法は、治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する。
【００２０】
さらなる実施形態では、本発明は、被験体における神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害の個人的な処置を提供する方法である。該方法は、患者の情緒的健康、精神的健康または内分泌の健康を評価する工程と；患者のエクオルプロデューサ状態を評価する工程と；ａ）投与方式、ｂ）投与量、およびｃ）投与間隔からなる群より選択される、治療の最適に有益な経過を決定する工程と；を包含する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、Ｓ−エクオルおよびＲ−エクオル鏡像異性体の化学構造を示す。
【図２Ａ】図２Ａは健常な成人に対するＲ−エクオルの経口投与後の血漿中のＲ−エクオルの出現／消失を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは健常なヒト成人におけるＳ−エクオルまたはＲ−エクオルの経口投与後の血漿におけるＳ−エクオルまたはＲ−エクオルの出現／消失のプロット（平均レベル）を示す（Ｋ．Ｄ．Ｓｅｔｃｈｅｌｌら、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．，８１：１０７２〜１０９１，２００５より）。
【図３】図３は、光学的二色性によって特徴づけられた純粋な鏡像異性体標準に比較して、成人の消費する大豆食品由来の尿のサンプル由来のエクオルの鏡像異性体の溶出のマスクロマトグラムを示す。
【図４】図４は、合成された食品のトリメチルシリルエーテル誘導体のＧＣ−ＭＳ分析を示す。
【図５】図５は、ラセミ混合物由来のＳ−エクオルおよびＲ−エクオルのキラル分離のマスクロマトグラムを示す。
【図６Ａ】図６Ａは、ＤＭＳＯまたはエクオルを皮下注射された無傷の（インタクトな）雄性ラットの前立腺の重量を示す。
【図６Ｂ】図６Ｂは、ＤＭＳＯまたはエクオルを皮下注射された無傷の雄性ラットの黄体形成ホルモン（ＬＨ）を示す。
【図７】図７は、［３Ｈ］ＤＨＴ＋エクオルにおける（ただし［３Ｈ］ＤＨＴ単独ではない）別個のピークを示す。
【図８Ａ】図８Ａは、前立腺（Ａ）とともにインキュベートした［３Ｈ］−ＤＨＴ＋エクオルにおける２つの別個のピークを示しており、一方、
【図８Ｂ】図８Ｂは、前立腺（Ｂ）とともにインキュベートした［３Ｈ］−ＤＨＴには単一のピークしか存在しないことを示す。
【図９】図９は、［３Ｈ］−ＤＨＴに対するエクオルの特異的な結合を示す。
【図１０Ａ】図１０Ａは、ＤＭＳＯ、５α−ＤＨＴ、エクオルまたは５α−ＤＨＴおよびエクオルの両方をｓｃ注射した性腺摘出（ＧＤＸ）雄性ラットにおける前立腺重量を示す。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、ＤＭＳＯ、５α−ＤＨＴ、エクオルまたは５α−ＤＨＴおよびエクオルの両方をｓｃ注射した性腺摘出（ＧＤＸ）雄性ラットにおける血漿ＬＨを示す。
【図１１】図１１は、ＤＭＳＯ、ＤＨＴＰ、エクオルまたはＤＨＴＰおよびエクオルの両方で処置したラットにおける血漿の５α−ＤＨＴの値を示す。
【図１２】図１２は、Ｔｒｅｎｔ：ＤＭＳＯ（Ａ＆Ｅ）、エクオル（Ｂ＆Ｆ）、ＤＨＴ（Ｃ）、またはＤＨＴに加えてエクオル（Ｄ）のいずれかで処置したＧＤＸ（Ａ−Ｄ）および無傷の（Ｅ＆Ｆ）ラットの前立腺におけるエクオルの組織学的効果を示す。
【図１３】図１３は、ＤＭＳＯ（Ａ）またはエクオル（Ｂ）で処置した無傷のラットの精巣上体に対するエクオルの組織学的影響を示す。
【図１４】図１４は、イソフラボン−リッチ（Ｐｈｙｔｏ−６００）または植物エストロゲンなし（Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ）食餌のいずれかを供給された雄性ラットにおける体重を示す。
【図１５】図１５は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ（植物エストロゲンなし）の食餌のいずれかを供給された雄性ラットにおける白色脂肪組織質量を示す。
【図１６】図１６Ａおよび図１６Ｂは、それぞれＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給された雄性ラットにおける食物および水の摂取を示す。
【図１７】図１７Ａおよび図１７Ｂは、それぞれＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給された雄性ラットにおける血漿のレプチンおよびインスリンの値を示す。
【図１８】図１８は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ（植物エストロゲンなし）の食餌のいずれかを供給された雄性ラット（絶食でない）由来の血清グルコース値を示す。
【図１９】図１９は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雄性ラットにおける甲状腺（Ｔ３）血清レベルを示す。
【図２０】図２０は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラットの体重を示す。
【図２１】図２１は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラット由来の白色脂肪組織の質量を示す。
【図２２】図２２は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラット由来の血中グルコース値を示す。
【図２３】図２３は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラット由来の血中Ｔ３値を示す。
【図２４】図２４は、５０日齢後にＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラットの体重を示す。
【図２５】図２５は、５０日齢後にＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラットの白色脂肪組織の質量を示す。
【図２６】図２６は、５０日齢後にＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラットの血清レプチン値を示す。
【図２７】図２７は、５０日齢後にＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給された雌性ラットの血清インスリン値を示す。
【図２８】図２８は、行動的発情期誘導レジメンの後、およびそこにおかれたＰｈｙｔｏ−６００（黒のバー）またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ（白のバー）食餌のいずれかを供給されたＯＶＸラットの体重を示す。
【図２９】図２９は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給されたＯＶＸラットの白色脂肪組織の質量を示す。
【図３０】図３０は、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかを供給されたＯＶＸラットの血清レプチンの値を示す。
【図３１】図３１は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１１２日齢の雄性ラットの体重を示す。
【図３２】図３２は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された２７９日齢の雄性ラットの体重を示す。
【図３３】図３３は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された３５０日齢の雄性ラットの体重を示す。
【図３４】図３４は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された３５０日齢の雄性ラットの脂肪組織質量を示す。
【図３５】図３５は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された３５０日齢の雄性ラットにおける血中インスリン値を示す。
【図３６】図３６は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された３５０日齢の雄性ラットの血中レプチン値を示す。
【図３７】図３７は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１１２日齢の雌性ラットの体重を示す。
【図３８】図３８は、ＡＩＮ−７６、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、Ｐｈｙｔｏ−２００、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された２７９日齢の雌性ラットの体重を示す。
【図３９】図３９は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１４５日齢の雄性のＮｏｂｌｅラットの体重を示す。
【図４０】図４０は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１４５日齢の雄性のＮｏｂｌｅラット由来の白色脂肪組織質量を示す。
【図４１】図４１は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１４５日齢の雌性のＮｏｂｌｅラットの体重を示す。
【図４２】図４２は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、またはＰｈｙｔｏ−６００の食餌を供給された１４５日齢の雌性のＮｏｂｌｅラット由来の白色脂肪組織質量を示す。
【図４３】図４３は、エクオル注射を受ける前のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラットのベースラインの体重を示す。
【図４４】図４４は、エクオルまたはビヒクルの注射を受ける前のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する２１日後の３つの群のラットの体重を示す。
【図４５】図４５は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた７日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラットの体重を示す。
【図４６】図４６は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた１５日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラットの体重を示す。
【図４７】図４７は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた２２日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラットの体重を示す。
【図４８】図４８は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた２８日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラットの体重を示す。
【図４９】図４９は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた２８日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラット由来の脂肪組織質量を示す。
【図５０】図５０は、エクオルまたはビヒクルの注射を受けた２８日後のＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌に対する３つの群のラット由来の精巣の重量を示す。
【図５１】図５１は、４つの異なる食餌を供給された３００日齢の雄性ラットの高架式十字迷路不安関連行動（ｅｌｅｖａｔｅｄ−ｐｌｕｓ ｍａｚｅ ａｎｘｉｅｔｙ−ｒｅｌａｔｅｄ ｂｅｈａｖｉｏｒ）の回数（オープン・アームに進入）を示す。
【図５２】図５２は、４つの異なる食餌を供給された３００日齢の雄性ラットの高架式十字迷路不安関連行動（オープン・アームにおける時間）を示す。
【図５３】図５３は、４つの異なる食餌を供給された３３０日齢の雌性ラットの高架式十字迷路不安関連行動（オープン・アームに進入）を示す。
【図５４】図５４は、４つの異なる食餌を供給された３３０日齢の雌性ラットの高架式十字迷路不安関連行動（オープン・アームの時間）を示す。
【図５５】図５５は、４つの異なる食餌を供給された３３０日齢の雄性ラットにおける血清イソフラボン値を示す。
【図５６】図５６は、４つの異なる食餌を供給された３３０日齢の雌性ラットにおける血清イソフラボン値を示す。
【図５７】図５７は、イソフラボンを含む食餌に密接であるという５週後の個体についてのＢＭＩで観察された変化を示す。
【図５８】図５８は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の総移動距離（メートル）のグラフである。
【図５９】図５９は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の全平均速度（１秒あたりのメートル）のグラフである。
【図６０】図６０は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の総移動時間（秒）のグラフである。
【図６１】図６１は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の潜水の総回数のグラフである。
【図６２】図６２は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の総移動時間（秒）のグラフである。
【図６３】図６３は、Ｐｏｒｓｏｌｔ水泳試験におけるＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された動物に比較した、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅの給餌をされた中年齢の雌性ラットでのエクオル注射前（Ａ）およびエクオル注射後（Ｂ）の排泄されたボリ（ｂｏｌｉ）の総数のグラフである。
【図６４】図６４は、Ｐｈｙｔｏ−（Ｆｒｅｅ）給餌したコントロールの動物に比較したエクオル処置した成体雄性ラットにおける体重減少のグラフである（１処置群あたりｎ＝８）。
【図６５】図６５は、高架式十字迷路（ＥＰＭ）のオープン・アームへの進入回数のグラフである。
【図６６】図６６は、ＥＰＭのオープン・アームにおいて経過した時間のグラフである。
【図６７】図６７は、２５連続日の間エクオルで処置された後の成体雄性ラットにおける脳のホルモン感受性の視床下部領域の図示である。
【図６８】図６８は、ＥＰＭのオープン・アームへの進入回数のグラフである。
【図６９】図６９は、ゲニステインまたはコントロールの動物に比較したエクオルを用いて、出生前および出生後早期の発達の間処置した雄性ラットのＥＰＭのオープン・アームでの経過時間の別のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
（図面および本発明の好ましい実施形態の詳細な説明）
エクオルがエストロゲンの作用に関するという薬理学の理解における近年の進歩にかかわらず、本研究者らは、エクオルの強力な抗エンドロゲン作用が特有かつ新規であることを示しており、アンドロゲン関連状態を予防または治療するための新規なアプローチを公開する。５α−ＤＨＴを結合または隔離することによって、５α−ＤＨＴ感受性の組織に対するその効果を阻害する手段が得られる。５α−ＤＨＴに特異的である公知のリガンドはないが、このような薬剤は、アンドロゲン受容体を直接標的する無差別な化合物またはアンドロゲン合成に関与する酵素を上回る別個の利点を有する。
【００２３】
本発明は、エクオルが、神経精神医学的障害、例えば、抑うつ、不安；および神経変性障害、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、または軽度痴呆を予防および／または処置するのに用いられ得るという本発明者らによる予期せぬ発見に基づく。本発明者らはさらに、エクオルが、給餌の調節および体重管理の動機付けに影響し得るということに注目した。
【００２４】
これらの知見は、健康および疾患における重要な分岐であって、アンドロゲン媒介性の病理の処置におけるエクオルの潜在的な広範かつ重要な用途を示す。特定の機構に限定されないが、エクオルは、抗アンドロゲンとして作用し得ると考えられる。エクオルの抗アンドロゲン特性は、エクオルがアンドロゲン受容体（ＡＲ）に結合しないが、５αジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）には高い親和性で特異的に結合し、それによって５α−ＤＨＴをＡＲ結合から妨げるという点で特有である。さらに、エクオルのＲ鏡像異性体およびＳ鏡像異性体は特異的に５α−ＤＨＴを結合し、ＡＲから５α−ＤＨＴを隔離し、生理学的プロセスにおける５α−ＤＨＴの作用をインビボでブロックし得る。ラセミのエクオルは、Ｒ−エクオルおよびＳ−エクオルならびにＲ−エクオルまたはＳ−エクオルの単独を構成し、選択的に５α−ＤＨＴを結合する。
【００２５】
哺乳動物では、２つの主要なアンドロゲン、テストステロンおよびその５α−還元代謝物である５α−ＤＨＴがある。５α−ＤＨＴは、哺乳動物の身体で最も強力なアンドロゲンとして認識されている。ＡＲは、ヒトのＸ染色体に位置する単一コピーの遺伝子でコードされており、アンドロゲンの作用を特異的に媒介する。テストステロンおよび５α−ＤＨＴの両方がＡＲに結合するが、テストステロンによってごくわずかに影響される特定の組織（すなわち、前立腺、毛包など）は５α−ＤＨＴによって大きく影響される。さらに、５α−ＤＨＴは、多数の疾患および障害に関与している。なぜなら、上述のとおり、エクオルは、５α−ＤＨＴに特異的に結合してその作用を妨げるので、アンドロゲン媒介性の病理の治療におけるエクオルの広範かつ重要な用途についての効能があるからである。詳細には、本発明者らは、エクオルが神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または処置するために用いられ得るということを発見した。
【００２６】
エクオルは、ステロイド性のエストロゲンエストラジオールと類似の構造を有する。エクオルは、不斉中心を有し、それ自体が２つの別個の鏡像異性体型、Ｒ鏡像異性体およびＳ鏡像異性体として存在するという点でイソフラボンの中でも特有である。エクオルに対する以前の全ての研究は、エクオルのラセミ型で行われていると考えられる。２つの型のエクオルが存在するという認識は一般にはなく、個々の鏡像異性体Ｒ−エクオルおよびＳ−エクオルが５α−ＤＨＴに特異的に結合するという特異的な作用または活性に対する以前の研究というのは本発明者らの知見の前には報告されていない。エクオルのラセミであるＲ−エクオルまたはＳ−エクオルは、アンドロゲン受容体には結合しない。Ｒ−エクオルは、エストロゲン受容体系には結合しない。Ｓ−エクオルのみがＥＲβに結合する（１７β−エストラジオールよりも約５分の一の親和性）。従って、Ｒ−エクオルおよびＳ−エクオルは、ＳＥＲＭ様の特性を有し、さらに最も強力な循環アンドロゲンである５α−ＤＨＴに選択的に結合する能力を有している。
【００２７】
ダイズおよびその成分のイソフラボンで最も重要なゲニステインおよびそれより程度として劣るダイゼインは、そのエストロゲン作用に、または非ホルモン作用、例えば、酵素、成長因子もしくはサイトカインに対するその作用、またはそれらの抗酸化作用に集中していた。イソフラボンの潜在的な抗アンドロゲン作用の考察は以前には決してなく、エクオルの鏡像異性型が言及されているだけである。本発明は、エクオルの鏡像異性型の影響、詳細には、ダイゼインの天然の代謝物であるＳ−エクオルおよびＲ−エクオル（強力なアンドロゲンジヒドロテストステロン５α−ＤＨＴの作用を拮抗する）の両方の能力に取り組む。また、特定の理論で拘束されることは望まないが、エクオルは、エストロゲン受容体サブタイプを介してエストロゲン様分子として作用する正の役割を果たすと現在考えられている。このような効果によって、５α−ＤＨＴが有害な役割を果たす疾患の予防および処置に対する食餌性、栄養補給および薬理学的なアプローチの新規な可能性が切り開かれる。これには、前立腺癌、皮膚疾患、脱毛、神経精神医学的な疾患または障害、および神経変性疾患が挙げられるがこれらに限定されない。さらに、Ｓ−エクオルのエストロゲン作用はまた、前立腺癌を処置または予防するのに有益であり得る。なぜなら、エクオルの併用の作用は、エストロゲン受容体レベルで、かつ抗アンドロゲンとして作用するからである。
【００２８】
エクオルは５α−ＤＨＴと結合する
エクオル（７−ヒドロキシ−３（４’ヒドロキシフェニル）−クロマン）は、ダイズおよびダイズ食品で豊富に見出されるイソフラボンである、植物エストロゲンダイジン（ｄａｉｄｚｉｎ）およびダイゼイン（ｄａｉｄｚｅｉｎ）の主要な代謝物であり、重要な生物学的に活性な分子である。植物エストロゲンの豊富な食餌を供給された動物では、主要な循環イソフラボンはエクオルであり、これは、総循環イソフラボンレベルの７０〜９０％を占める。本発明は、エクオルの生物学的特性の新規なレベルを開示する。結合研究では、エクオルの鏡像異性体は、５α−ＤＨＴに特異的に結合するが、テストステロン、ＤＨＥＡまたはエストロゲンには結合しない。そのように結合することによって、エクオルは、アンドロゲン受容体自体に直接結合することなくアンドロゲン受容体から５α−ＤＨＴを隔離する。インビボの研究では、無傷（インタクト）な雄性ラットにおけるエクオルの治療は、前立腺および精巣上体の重量を有意に減少させたが、精巣の重量は減少させなかったことが示されている。エクオル投与後の５α−ＤＨＴで処置した去勢雄性ラットでは、エクオルは、前立腺に対する５α―ＤＨＴ栄養作用をブロックし、その負のフィードバックが血漿黄体形成ホルモン（ＬＡ）レベルに影響する。
【００２９】
特定の理論の作用機序に拘束されることは望まないが、エクオルは、特異的に５α−ＤＨＴを結合すること、およびアンドロゲン受容体（ＡＲ）に対してそれ自体結合することなく５α−ＤＨＴがＡＲに結合することを予防することによって抗アンドロゲンとして作用し得ると現在考えられている。ＡＲにすでに結合している５α−ＤＨＴは、鏡像異性体のエクオルによって競合的に結合しないことも示されている。従って、本発明の一実施形態は、ＤＨＴ−ＡＲ結合が生じる前に５α−ＤＨＴとエクオルとを接触させることによって、５α−ＤＨＴがＡＲに結合することを予防する方法である。この鏡像異性体のエクオルは、インビトロまたはインビボにおいて５α−ＤＨＴと接触させられ得る。５α−ＤＨＴがインビボで接触させられる場合、エクオルは、血流へのエクオルの吸収を可能にする任意の経路で投与されてもよい。生物学的に利用可能な５α−ＤＨＴは、遊離であって、エクオルとの結合前はいかなる天然のリガンドにも結合されない。
【００３０】
生殖器官、例えば、前立腺および精巣上体は、アンドロゲン制御下であることが公知である。例えば、思春期前には、循環中のアンドロゲンレベルが極めて低い場合、高レベルのダイズ由来イソフラボンを含む食餌を供給されたラットの前立腺重量は、この食餌の消費によって変更されない。しかし、思春期後には、アンドロゲンレベルが増大する場合、前立腺重量は、植物エストロゲンなしの食餌を供給された動物に比較して植物エストロゲンの豊富な食餌を供給されたラットでは有意に低下する。本明細書に示されるとおり、エクオル処置された無傷のラットは、前立腺および精巣上体の重量の有意な低下を示す（短期間の研究の間は精巣または下垂体重量における変化なし）。著しいことに、前立腺および精巣上体の値が体重に対して標準化される場合（１００グラムあたり）、その比はエクオル処置とコントロールの値との間でやはり有意に異なる。エクオルはまた、テストステロンレベルを有意に変化させることなく、前立腺および精巣上体に対する５α−ＤＨＴのアンドロゲン栄養性の影響をブロックした。
【００３１】
５α−ＤＨＴは、黄体形成ホルモン（ＬＨ）の循環血漿値に負のフィードバック効果を有する。エクオルは５α−ＤＨＴに結合すること、およびこのフィードバック効果を妨げることによってＬＨレベルを有意に増大すると考えられる。例えば、エクオルは、性腺摘出（ＧＤＸ）雄性においてＬＨレベルに対する５α−ＤＨＴの阻害作用を完全に逆転するが、５α−ＤＨＴに加えてエクオルで処置した雄性ラットは、コントロールの値と類似のＬＨ値を示す。これらのデータによってさらに、エクオルが、おそらく血液循環系において、５α−ＤＨＴに結合する特異的な能力を有し、ＬＨ産生または分泌を抑制するのにおいて５α−ＤＨＴのホルモン作用をブロックし得ることが示唆される。従って、本発明の実施形態は、個体の５α−ＤＨＴと鏡像異性のエクオルとの接触によって個体のＬＨ値を調節する方法である。エクオルはエクオルの血流への吸収を可能にする任意の経路で、処置される病気の性質および個体の大きさに従って投与される量で投与されてもよい。
【００３２】
エクオルの構造
エクオルは、複素環における二重結合の欠失に起因して不斉中心を有するという点でほとんどのイソフラボンとは異なる。ダイズ由来（ダイゼイン、グリシテインおよびゲニステイン）、クローバー由来（ホルモノネチンおよびビオチャニンＡ）、およびくず由来（ピューラリン（ｐｅｕｒａｒｉｎ））の植物エストロゲンイソフラボンは、不斉中心を有さない。図１は、Ｒ−エクオルおよびＳ−エクオルの化学構造を示す。
【００３３】
Ｒ鏡像異性体およびＳ鏡像異性体は立体配置的に異なり、かつこれはエクオル鏡像異性体がどのように二量体化ＥＲ複合体の腔における結合部位に適合するか、およびそれが５α−ＤＨＴにどのように結合するかに影響すると予想される。
【００３４】
エクオルのうち約５０％が、ヒトにおいて遊離型または未結合型で循環し、これは血漿中の遊離のダイゼイン（１８．７％）またはエストラジオール（４．６％）の割合よりもかなり大きい。これは、受容体占有について、おそらくは５α−ＤＨＴ結合について利用可能な未結合の画分であるので、これは、エクオルの全体的な力価を増強するのに有効に寄与する。
【００３５】
エクオルを含有する組成物
本発明は、遊離の５α−ＤＨＴ（ただしテストステロンでもＤＨＥＡでもない）に結合して隔離することができるエクオルの少なくとも生理学的な受容できる量を有しており、それによって個体に対する投与後にそれがアンドロゲン受容体に結合することを妨げ、それによって健康および疾患の重要な分岐を、並びにアンドロゲン媒介性病理の処置における広範かつ重要な用途を有する組成物を包含する。詳細には、エクオルを含む組成物は、神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または処置するために用いられ得る。
【００３６】
好ましくは、エクオル（Ｓ−エクオル、Ｒ−エクオル、ラセミのエクオル混合物、または非ラセミのエクオル混合物であってもよい）を含有する組成物が、経口の消費のために作成される。
【００３７】
好ましくは、エクオルは、本発明の方法によって疾患または障害を予防または処置するのに十分な量である。好ましくは、治療有効量のエクオルが本発明の方法で用いられる。「治療有効量」という用語は、エクオル（Ｓ−エクオル、Ｒ−エクオル、ラセミのエクオル混合物、または非ラセミのエクオル混合物）の量であって、必要または所望の予防的または治療的な応答を惹起するのに十分な量、あるいは言い換えれば、被験体に投与された場合相当の生物学的応答を誘発するのに十分な量をいう。例えば、治療有効量のエクオルは、被験体における不安または抑うつを減じ得る。
【００３８】
組成物または該組成物を含有する製品は、市販のまたは施設の食品、医薬品（すなわち、薬物）および店頭販売の（ＯＴＣ）医薬品（一般用医薬品）（すなわち、栄養補給食品）であってもよい。
【００３９】
好ましくは、食品組成物は、１回あたり、少なくとも約０．２５ｍｇを含み、より好ましくは、食品組成物は、約１ｍｇ、好ましくは最大約２００ｍｇまでの鏡像異性体のエクオルまたはエクオル混合物を含む。食品組成物中のエクオルの他の量も考慮される。
【００４０】
好ましくは、経口投与医薬は、１用量あたり、少なくとも約０．２５ｍｇ、より好ましくは約１ｍｇ、好ましくは最大約２００ｍｇまでの鏡像異性体のエクオルまたはエクオル混合物を含む。医薬組成物中のエクオルの他の量も考慮される。
【００４１】
好ましくは、局所適用のための製品は、少なくとも約０．１重量％、最大約１０重量％のＳ−エクオルもしくはＲ−エクオル、または鏡像異性体混合物を含んでもよい。他の濃度のエクオルもエクオルを含む局所製品について考慮される。
【００４２】
本発明の組成物はまた、他の化粧品および医薬品の活性成分および賦形剤を含んでもよい。このような適切な化粧品および医薬品としては、限定はしないが、抗真菌剤、ビタミン、抗炎症剤、抗菌剤、鎮痛薬、一酸化窒素シンターゼ阻害剤、防虫剤、セルフ・タンニング剤、界面活性剤、保湿剤、安定化剤、防腐剤、消毒剤、増粘剤、潤滑剤、保湿剤、キレート剤、皮膚浸透増強剤、エモリエント、芳香剤、および着色剤が挙げられる。
【００４３】
鏡像異性体のエクオルはまた、グルクロニド、硫酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、グルコシド、アセチル−グルコシド、マロニル−グルコシドおよびそれらの混合物からなる群より選択される結合体とＣ−４’またはＣ−７位置で結合体化された、鏡像異性のエクオル結合体であってもよい。
【００４４】
アンドロゲン関連の疾患およびそれに関連する状態の処置および／または予防のために被験体に投与するため、あるいはその素因を減少させるための、鏡像異性のエクオルまたはエクオルの混合物を含む組成物または調製物はまた、１つ以上の薬学的に受容可能なアジュバント、担体および／または賦形剤を含んでもよい。薬学的に受容可能なアジュバント、担体および／または賦形剤は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，第二版、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，１９９４（参照によって本明細書に組み込まれる）に例えば記載されるように当該分野で周知である。
【００４５】
一実施形態では、本発明の組成物は、０％より多くかつ９０％未満のＳ−エクオルについてのＥＥを有する、Ｓ−エクオルおよびＲ−エクオルの非ラセミ混合物を含む。０％のＥＥを有する組成物は、２つの鏡像異性体の５０：５０のラセミ混合物である。この組成物は、ラセミ混合物からＲ−エクオルまたはＳ−エクオル鏡像異性体のいずれかを完全に分離および除去することによって、ラセミ混合物から直接作成され得る。この組成物はまた、エクオルの混合物（非ラセミまたはラセミ混合物のいずれか）を含む第１のエクオル成分と、Ｓ−エクオルまたはＲ−エクオルから本質的になる組成物を含む第２の成分とを合わせることによって作成され得る。これは、過剰のＳ−エクオルまたはＲ−エクオルを有する非ラセミ組成物を生成する。組成物中のＲ−エクオル成分およびＳ−エクオル成分についての特異的な利点または指示に依存して、Ｓ−エクオルおよびＲ−エクオルを、Ｒ−エクオルに対するＳ−エクオルの比で、好ましくは約５０：５０〜約９９．５：１、さらに好ましくは約５１：４９〜約９９：１、好ましくは約５０：５０〜約１：９９．５未満、さらに好ましくは約４９：５１〜約１：９９で含む組成物が調製され得る。
【００４６】
この組成物は、錠剤、カプセル、再構成用の粉末、シロップ、食品（例えば、食品バー、ビスケット、スナック食品、当該分野で周知の他の標準的な食品）の形態で、または飲用の処方物で投与されてもよい。飲料は、香味料、緩衝液などを含んでもよい。
【００４７】
経口投与に適切な組成物は、別個の単位、例えば、カプセル、カシェ剤、口内錠、トローチ剤（ｔｒｏｕｃｈｅ）、錠剤、バッカル錠、舌下錠（この各々が所定の量の抽出物を含む）で存在してもよく；粉末または顆粒として；水溶液または非水溶液中の溶液または懸濁液として；あるいは水中油型または油中水型のエマルジョンとして存在してもよい。
【００４８】
この組成物は代表的には、有意な量の任意の他のアンドロゲン受容体結合化合物を含まない。
【００４９】
エクオルのプロデューサおよびノン・エクオルプロデューサを特定する
エクオルは、ダイズ由来のダイゼイン、およびメトキシル化イソフラボンホルモノネチン（ｆｏｒｍｏｎｏｎｅｔｉｎ）のグリコシド結合体、またはクローバーで見いだされるそのグリコシド結合体の加水分解後に形成される。一旦形成されれば、エクオルは、代謝的に不活性であると考えられ、さらなる生体内変換は受けず、肝臓での第二相代謝またはわずかな程度のさらなるヒドロキシル化を省く。ダイゼインおよびゲニステインと同様に、優勢な第二相反応は、グルクロン酸化であり、硫酸化はそれより少ない程度である。尿中のエクオルの存在が、大豆食品摂取の働きであるというオリジナルの発見に従い、成体集団の約５０〜７０％は、未解明の理由で、大豆食品を毎日与えられた場合でもエクオルを尿に排泄しなかったことが観察された。さらに、純粋なイソフラボン化合物が投与され、それによって食品の母体の影響が除かれた場合でも、多くの人はダイゼインをエクオルに変換しないことが示されている。この現象は、これらの２つの別個の集団を述べるために「エクオルプロデューサ」または「ノン・エクオルプロデューサ」（または「プア・エクオルプロデューサ」）という人の用語をもたらしている。
【００５０】
カットオフ値は、経験的に得られており、これによってこれらのカテゴリーのいずれかに個体を割り当てることが可能になる。１０ｎｇ／ｍＬ未満（４０ｎｍｏｌ／Ｌ）の血漿エクオル濃度を有する人は、「ノン・エクオルプロデューサ」に分類されてもよく、レベルが１０ｎｇ／ｍＬを超えれば（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）これは「エクオルプロデューサ」と定義する。この定義はまた、尿中のレベルに由来してもよく、エクオルプロデューサとは、１０００ｎｍｏｌ／Ｌより多く排泄するヒトである。エクオルの排泄は個体間で大きく変動し得るが、この反応を触媒する酵素の反応速度論における前駆体−産物の関係に一致して、エクオルを産生できるものと産生できないものとの間には大きな境界がある。結果として、尿のダイゼインとエクオルの値との間には反比例関係があり、いままでのところ有意な性差は明確になっていない。
【００５１】
エクオルの鏡像異性体の調製および単離
鏡像異性のエクオルは、そのままでも、またはラセミ混合物として調製されてもよい。化学合成経路を用いて、ラセミ混合物を良好な収率で産生してもよい。代表的な合成プロセスでは、標準的な化学処理を用いて、複素環の二重結合を水素化し、Ｃ−３位置でカルボニルを除去する。代表的な出発材料は、イソフラボン、例えば、ダイゼイン、ゲニステイン、グリシテイン、プエラリン、ホルモノネチンおよびビオチャニン（ｂｉｏｃｈａｎｉｎ）Ａおよびそれらのグルコシド結合体である。任意の結合体型が、加水分解によってそのアグリコンに還元される。反応に適切な溶媒としては、有機の酸、例えば、氷酢酸、低級アルコール、例えば、イソプロパノールおよびそれらの混合物が挙げられる。代表的に使用される還元触媒としては、パラジウム、例えば、チャコール上の１０％Ｐｄが挙げられる。反応は、大気温度から６０℃の温度で行われ得、ここで圧力は大気圧をわずかに上回り、最大２００ｐｓｉｇ（１４気圧、ゲージ）で、反応時間は最大３０時間以上である。
【００５２】
反応終了後、触媒を除去して、濾液を蒸発させる。その粗残渣を、代表的にはシリカゲルカラムを使用するクロマトグラフィによって精製し、溶出液はＣ２−Ｃ４アルコール、Ｃ３−Ｃ７アルカンおよびそれらの混合物を含む。精製された残渣は、ｎ−ヘキサンから結晶化して（±）エクオルを、代表的には少なくとも９９％、代表的には少なくとも７５％の収率で、純粋な産物として生成してもよい。エクオル結晶化生成物は無色で、吸湿性ではなく、空気中で安定であって、最終の濾過手順の間に分解されない。
【００５３】
ラセミのエクオルからの個々のＲ−鏡像異性体およびＳ−鏡像異性体の単離のための方法
エクオルのラセミ混合物は、Ｃ４−Ｃ８アルキルおよびＣ２−Ｃ４アルコールを含む移動相を有するキラル相カラムを用いて２つの別個の鏡像異性体に分離され得る。キラル相カラムの代表的な例は、ダイセル化学工業株式会社から販売されている、Ｃｈｉｒａｌ ＯＤカラムまたはＯＪカラムである。移動相の好ましい例は、７０％ヘキサンおよび３０％エタノールを含む。ラセミ混合物が入口へ通過する第１の時間後、その時間間隔は、カラムのタイプ、溶出剤のタイプ、溶出剤の流速、温度、およびラセミ混合物の質量に依存して、第１の流出剤が、ＨＰＬＣカラムの出口から回収される。第１の溶出剤は代表的にはＳ−エクオルである。ラセミ混合物が入口へ通過する第２の時間後、第２の溶出剤Ｒ−エクオルが得られる。このカラムからのエクオル鏡像異性体の溶出は、２６０〜２８０ｎｍでのＵＶ吸収によって、または質量分析計などのさらに特異的な検出システムおよびエクオルに特異的なイオンのモニタリングによって検出されてもよい。
【００５４】
Ｓ−エクオルの生物学的な生成
Ｓ−エクオルは、従来の食品技術を用いてバルクで生物学的に産生されてもよい。ダイゼインまたはダイゼインが誘導され得る別の関連のイソフラボンを含む、ベースの溶液媒体、食物または植物抽出物が提供され得る。ダイゼインまたは他のイソフラボンを、標準的な細菌または酵素のファーメンテーションプロセスによってＳ−エクオルに変換して、Ｓ−エクオルを含むバルク溶液、食物または植物抽出物を得てもよい。
【００５５】
エクオルへのダイゼインの変換は、３つの主要な工程を包含する：１）任意のグルコシド結合基の加水分解、２）イソフラボンアグリコンのジヒドロ中間体への変換、および３）ジヒドロ中間体のエクオルへの変換。必要な３つの工程の各々についての代謝経路および酵素は、必ずしも１つの細菌に存在する必要はない。ヒトの研究に由来する逸話的な証拠によって、これらの反応を行うことに関連して作用する１つ以上の細菌が存在してもよいことが示唆され、これは、しばしばジヒドロダイゼインが、血漿および尿中に有意な量で存在し得るが、エクオルは、低いかまたはほとんど検出され得ないという事実から証明される。エクオルは、単一生物体によってダイゼインから産生され得るが、おのおのがそれ自身の代謝プロフィールを有する細菌種の混合物を用いる場合、より優れたまたは効率的な変換が達成され得ると考えられる。Ｓ−エクオルへの有効な変換のための重要な条件としては、細菌生物体または生物体の混合物の選択、培養温度、および生物体に利用可能な酸素の量が挙げられる。これらの条件は、当業者に周知である技術によって最適化され得る。この変化を達成するために用いられる生物体は、食品産業で用いられる標準的技術によって不活性化されてもよいし、または生成物中で活性な状態で残されてもよい。
【００５６】
代表的には、ダイゼイン（または他の関連のイソフラボン）を中間生成物を通じてＳ−エクオルに変換するために１つ以上の細菌株が必要であり、これは一般に３つの主要な反応のうちの１つ以上に関与する：イソフラボングリコンのアグリコンイソフラボンへの変換；アグリコンイソフラボンのジヒドロイソフラボンへの変換；およびジヒドロイソフラボンの生成物エクオルへの変換。例えば、ウマの糞便から単離された生物体の混合培養物、または「エクオルプロデューサ」であることが知られた人の胃腸管由来の生物体の混合培養物は、それらがインビボで変換するように、グリコンダイゼインを最終産物Ｓ−エクオルに変換できる。
【００５７】
グリコンをアグリコンに（例えば、ダイゼインからダイゼイン）変換し得る代表的な細菌株としては、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、リステリア・ウエルシュメリ（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｗｅｌｓｈｉｍｅｒｉ）、「エクオル産生」哺乳動物の腸管から単離された生物体の混合培養物、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｉｓ）、Ｅｕｂａｃｔｅｒｉａ ｌｉｍｏｓｕｍ、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｏｕｓ）、ラクトバチルス・デルブリッキ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ミクロコッカス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｌｕｔｅｕｓ）、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ（Ｐｒｏｐｒｉｏｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ）およびサッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、ならびにそれらの混合物が挙げられる。
【００５８】
アグリコンをエクオルに（例えば、ダイゼインからＳ−エクオル）変換し得る代表的な細菌株としては、プロピオニバクテリウム・フロイデンライヒ、以下を含む混合培養物：ビフィドバクテリウム・ラクティス、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ラクトバチルス・カゼイおよびラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）；ならびに「エクオル産生」哺乳動物の腸管から単離される生物体の混合培養物が挙げられる。
【００５９】
グリコシドのアグリコンへの細菌変換、またはアグリコンのエクオル生成物への細菌変換に必要な時間は、細菌関連因子、詳細には、濃度、酸素の利用度、ならびにインキュベートする系の温度およびｐＨに依存する。ほとんどの場合、２４時間内に実質的に完全な変換を達成することが可能である。
【００６０】
イソフラボングリコシドのアグリコンイソフラボンへの細菌変換のためのｐＨの範囲は、約３〜約９である。最適のｐＨは主に用いられる細菌のタイプに依存し、それに応じて選択される必要がある。
【００６１】
グリコシドからアグリコンへの、およびアグリコンからエクオル産物への酵素変換に必要な時間は、酵素関連因子、詳細には、この系の濃度、および温度およびｐＨに依存する。ほとんどの場合、２４時間内に、さらに好ましくは約２時間内、最も好ましくは１時間内に実質的に完全な変換を達成することが可能である。
【００６２】
バルクで産生されるＳ−エクオルは、Ｓ−エクオルの細菌産生の得られたバルク溶液から、結晶化、溶媒抽出、蒸留および沈澱／濾過を含む当該分野で周知の方法によって分離され得る。得られたバルク溶液は、未反応のダイゼインまたは用いられる他の関連のイソフラボン、副産物および任意の反応物を含んでもよい。このような方法は、逆相または順相の液体クロマトグラフィカラムの使用を包含し、これらはキラル相クロマトグラフィと組み合わされてもよい。
【００６３】
バルク溶液または固相からのＳ−エクオルの除去の代表的な方法は抽出による。抽出溶液は、Ｓ−エクオルを含有する溶液または固相に加えられる。代表的には、抽出剤は、低分子量アルコール、例えば、メタノール、エタノール、イソプロプルアルコール、もしくはプロピルアルコール、または３．５〜５．５の範囲のｐＨを有する水溶液である。代表的には、水性アルコール法が用いられている場合、十分なアルコールを添加して、アルコール／水の比を最小４０：６０と最大９５：５との間にさせる。さらに代表的には、この比は、少なくとも６０：４０であり、よりさらに代表的には、６５：３５〜９０：１０の間の比である。
【００６４】
水性酸抽出法が用いられる場合、酸の水溶液は、約３．５〜約５．５に調節されたｐＨ、より好ましくは約４．０〜約５．０のｐＨ範囲内で調製される。十分な水を添加して、希釈液が、十分に低い粘度で、遠心分離または濾過によって液体から固体を分離することを可能にする。
【００６５】
不溶性の固体物が除去されている液体を、液体を除くための従来の方法によって濃縮する。代表的に用いられる方法としては、限定されないが、好ましくは減圧下での蒸発による溶媒の除去が挙げられる。残りの液体を、少なくとも約１５％の固体、そして最大約５５％まで、さらに代表的には３０％〜５０％の固体まで濃縮する。次いでこの濃縮液を水で希釈して、固体含量を減じて、水対アルコールの比を増大する。添加された水の量は、広範に変化し得るが、最終の固体含量は６％〜１５％、さらに代表的には約１３％が好ましい。混合物のｐＨは約ｐＨ３．０と約ｐＨ６．５との間で調節し、約ｐＨ４．０〜約ｐＨ５．０の値が好ましい。代表的には、温度は約２０℃〜約１０℃であり、さらに代表的には約５℃〜７℃である。
【００６６】
次いで固体物質を液体から、標準的な分離技術（遠心分離または濾過）によって分離して、エクオルに富んだ固体物質を得る。
【００６７】
エクオルに富んだ物質は、必要に応じて、代表的には、シリカゲルカラムを使用するクロマトグラフィによって精製されてもよく、Ｃ２−Ｃ４アルコール、Ｃ３−Ｃ７アルカンおよびそれらの混合物を含む溶出剤を用いる。精製された残渣をｎ−ヘキサンから結晶化して、代表的には少なくとも９９％で、代表的には少なくとも７５％の収率で、純粋な生成物としてＳ−エクオルを生成してもよい。エクオル結晶化産物は無色、非吸湿性であり、空気中で安定であって、最終の濾過手順の間に分解されない。
【００６８】
Ｓ−エクオル産物は、標準のエクオルのトリメチルシリル（ＴＭＳ）エーテル誘導体の公開された電子イオン化スペクトルと一致する単一の純粋なピークおよび質量スペクトルとして、トリメチルシリルエーテルもしくはｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルエーテル誘導体、または合成された産物のいくつかの他の適切な揮発性誘導体のＧＣ−ＭＳ分析によって確証され得る。生成物の確証はまた、ＨＰＬＣキラル相カラムを介する装置へサンプルを導入した後エレクトロスプレーイオン化を用いる直接質量分析によって達成されてもよい。
【００６９】
Ｓ−エクオル、Ｅ−エクオルおよび混合物を投与することによる疾患の処置
本発明は、インビボでエクオルを生成できないという問題を克服するための、あるいはＲ−エクオルを、詳細には、エクオルの鏡像異性体、Ｓ−エクオルもしくはＲ−エクオル、またはＳ−エクオルおよびＲ−エクオルの非ラセミ混合物の送達を直接供給して、その産生のための腸内細菌の必要性またはエクオルの前駆体イソフラボンを有する大豆食品を消費する必要性を回避するための方法を個々の被験体に提供する。Ｓ−エクオルの送達はまた、「エクオルプロデューサ」における、および「ノン・エクオルプロデューサ」におけるＳ−エクオルのインビボ産生を補完し得る。
【００７０】
エクオルの鏡像異性体または混合物でエクオルプロデューサの食餌を補完すれば、エクオルプロデューサによって産生されたＳ−エクオルの通常のレベルが不適切である場合、以下の理由で利点が提供され得る：１）エクオルを産生するためのイソフラボンの不十分な消費、２）前駆体イソフラボンからエクオルを作成するための腸内細菌の活性を除去する抗生物質の使用、または３）エクオル産生のレベルに影響する他の健康上の要因、例えば、短腸症候群または回腸造瘻術などの腸内ストーマの外科的構築。さらに、補充レベルのエクオルは、ヒトの健康および福祉に対する影響を向上させると考えられる。
【００７１】
本発明は、アンドロゲン関連疾患およびそれに関連する状態に対する健康上の利点を有するのに十分な量で、Ｓ−エクオル、Ｒ−エクオル、ラセミのエクオル、またはエクオルの非ラセミ混合物を送達するための方法を提供する。エクオルの抗アンドロゲン活性は、身体中におよぶ多数の組織に影響し得る。詳細には、５α−ＤＨＴのアンドロゲン活性のブロックは、（Ａ）加齢による前立腺の成長、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、および前立腺癌、（Ｂ）女性型および男性型の禿頭、（Ｃ）顔の毛および体毛の増殖（多毛症）、皮膚の健康（座瘡、老化防止（アンチエイジング）および光老化予防）、皮膚の完全性（コラーゲンおよびエラスチンの頑健性）；（Ｄ）体重増加（および減少）、脂肪組織蓄積および脂質の代謝の減少、ならびに、一般的な調節性の行動および効果、例えば、食物および水の摂取、血圧変化、甲状腺、グルコース、レプチン、インスリンおよび免疫系に対する影響；ならびに（Ｅ）アルツハイマー病および情動、精神衛生の問題、例えば、気分、抑うつ、不安および学習および記憶の処置および予防にとって、上記の脳の特徴の全てに影響する脳におけるＧＡＢＡＡ受容体の強力なモジュレータである５α−ステロイド代謝物（アンドロゲンおよびプロゲステロンをカバーする）を減少させることによって、有益であり得る。
【００７２】
代表的には、エクオルを含む組成物の量は、１ミリリットルあたり少なくとも５ナノグラム（ｎｇ／ｍＬ）、さらに代表的には少なくとも１０ｎｇ／ｍＬ以上、または１０００ｎｍｏｌ／Ｌを超えるという一過性のレベルの尿中の鏡像異性エクオルという、一過性の値の鏡像異性体エクオルを哺乳動物の血漿中で生じるのに十分な量で投与される。好ましくは、組成物は、鏡像異性エクオルの少なくとも約０．２５ｍｇ、より好ましくは約１ｍｇ、さらに好ましくは少なくとも約５ｍｇ、および最大約２００ｍｇまで、さらに好ましくは最大約５０ｍｇまでの投与量で経口投与される。健康な成体に対する２０ｍｇのＲ−エクオル鏡像異性体の経口投与後の血漿中のＲ−エクオルのバイオアベイラビリティの代表的な値を、図２Ａおよび図２ＢのＲ−エクオルの出現／消失のプロットで示す。
【００７３】
Ｒ−エクオルおよび／またはＳ−エクオルを十分な量で送達する能力によって、エクオルのラセミ混合物の送達を上回るいくつかの利点が得られると考えられる。第一に、Ｒ−エクオルまたはＳ−エクオルの単独の力価は代表的には、ラセミ混合物の少なくとも２倍である。第二に、ヒトの身体のみがＳ−エクオルを産生し、従って、Ｓ−エクオルのみを含む組成物は、身体がなじんでいる成分Ｓ−エクオルを有する「天然の」製品に相当する。第三に、Ｒ−エクオル鏡像異性体は固有の特性を有するので、Ｒ鏡像異性体のみ、または実質的にＲ鏡像異性体のみを含む処理組成物は、有益および／または治療的な効果を生じ得る。第四に、Ｒ−エクオルの投与は、任意の内因性のＳ−エクオルが存在することを補助して、身体中でエストロゲン作用および抗エストロゲン作用が生じることを可能にする。
【００７４】
本発明は、男性型および女性型の禿頭に関連する疾患および状態を処置および予防するための鏡像異性エクオルの使用を包含する。５α−ＤＨＴは、頭髪の脱毛原因として公知である。アンドロゲン、詳細には、主な循環のアンドロゲンであるテストステロンは、さらに強力なアンドロゲンである５α−ＤＨＴに変換され（毛包中で）、頭髪の毛包に対する５α−ＤＨＴのホルモン作用が脱毛を生じる。従って、５α−ＤＨＴのホルモン作用が、循環（血管内）および毛包内で５α−ＤＨＴに結合する本発明のエクオルにおける使用などによってブロックされ得るならば、頭髪の脱毛は、軽減されるかまたは予防され得る。
【００７５】
本発明は、顔および身体の毛に関連する疾患および状態を処置および予防するために鏡像異性エクオルの使用を包含する。顔面および身体の毛は、アンドロゲンによって調節されるが、頭髪の調節とは反対である。詳細には、さらに強力なアンドロゲン５α−ＤＨＴは、顔および身体の毛を増大する。５α−ＤＨＴはまた、皮脂腺由来の皮脂（油脂）の産生を増大し、これが座瘡の増大に寄与し得る。従って、エクオルによる５α−ＤＨＴの結合は、顔面および身体の毛の、および皮脂（油脂）の分泌の減少を、ならびに座瘡の減少または予防を生じ得る。
【００７６】
本発明は、皮膚の効果、皮膚の質および完全性、皮膚の老化、皮膚の光老化、ならびに皮膚の色素沈着および明化に関連する疾患および状態を処置および予防するための鏡像異性エクオルの使用を包含する。エストロゲンは、閉経期の前、特に後に、エラスチンおよびコラーゲンの含量を増大することによって皮膚の健康を改善して、皮膚の特徴または構造安定性を改善する。さらに、皮膚が座瘡または他の皮膚破壊（ひっかき、吹き出物のはじけまたは小さい切り傷など）によって損傷される場合、エストロゲンまたはエストロゲン様化合物、例えば、エクオルが存在するならば、修復機構は、より速く、皮膚の治癒は良好である。エクオル鏡像異性体混合物、および詳細にはＳ−エクオルは、エラスチンおよびコラーゲンの良好な刺激因子であり、また光老化に対して防御し得ると考えられる。５α−ＤＨＴのホルモン作用をエクオルがブロックすることは、皮脂腺からの皮脂産生を減少し得、これが座瘡を減少または除去し得る。Ｓ−エクオル（ただしＲ−エクオルではない）はエストロゲン受容体（単数または複数）（主にＥＲβ）に結合するので、このエストロゲン様分子の防御効果は、皮膚におけるエラスチンおよびコラーゲンを刺激する。さらに、エクオルは強力な抗酸化剤であるので、エクオルは光老化を含む加齢（老化）から皮膚を防御し得る。
【００７７】
本発明は、前立腺の健康状態の改善に関する疾患および状態を処置および予防するために鏡像異性エクオルの使用を包含する。テストステロンをさらに強力なアンドロゲン５α−ＤＨＴに変換することは、前立腺内の酵素５α−リダクターゼの作用の結果である。５α−ＤＨＴは良性前立腺過形成（ＢＰＨ）を生じ、前立腺重量を増大し、これらの状態を処置するための前立腺切除術および放射線療法の必要性を生じ得る。最終的に、大豆食品の消費は、前立腺癌および乳癌などのホルモン依存性癌を軽減するという「健康上の利点」に起因する注意が増大している。従って、エクオルによる５α−ＤＨＴのブロックは、動物モデルで前立腺重量を減少し、おそらくＢＰＨをブロックして前立腺癌を予防する。
【００７８】
本発明は、神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または治療するのに十分な量でエクオルを投与することによって、この神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させる方法を包含する。
【００７９】
しばしば加齢に伴う、神経変性障害、例えば、アルツハイマー病および小うつ病、ならびにパーキンソン病は、一般的な集団で蔓延しており、処置するには費用がかさむ。Ｌａｓｋｅｒ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎによれば、現在米国では４百万人が、アルツハイマー病を有しており、１年に一千億円を超える費用がかかっていると考えられる。６５歳を超えれば毎年アルツハイマー病を発症するリスクは倍になり、８５歳を超えればほぼ４０パーセントの人が疾患を有する（Ｊ．Ｍ．Ｌｙｎｅｓｓｒａ，ら、Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒ．Ｍｅｄ．，１４４：４９６〜５０４，２００６；およびＬｅｐｈａｒｔら、Ｃｕｒｒ ｎｅｕｒｏｖａｓ．Ｒｅｓ．，１：４５５〜４６４、２００４）。小うつ病は大うつ病よりも頻繁であって、より高齢者（６０歳以上）の群のうちほぼ５０％が小抑うつに関連する症状を示している（Ｊ．Ｍ．Ｌｙｎｅｓｓら，Ａｎｎ．Ｉｎｔｅｒ．Ｍｅｄ．，１４４：４９６〜５０４，２００６）。
【００８０】
一実施形態では、本発明は、脳の機能および精神衛生に関連する疾患および状態を処置および予防するための鏡像異性エクオルを含むエクオルの使用を包含し、この疾患および状態としては、脳の障害、例えば、パーキンソン病、アルツハイマー型の痴ほう、ならびに加齢および短期および長期記憶喪失に関連する他の低下または障害された認知機能が挙げられる。脳の機構は、さらに複雑であって、どの分子および要因が、気分、抑うつ不安などを調節、影響などするかを規定する試みは困難であり得る。しかし、エストロゲン、またはイソフラボンのようなエストロゲン様分子が、アルツハイマー病などの状態で認知機能を補助し得、かつ特に閉経後の女性におけるこのような障害の発現を妨げるために補助し得るという概念を支持するいくつかのデータがある。
【００８１】
神経精神医学的な障害が、世界中で有病率および夭折の２番目に大きい原因であるということは十分確認されている。Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎは、集団として、神経精神医学的障害は、全ての報告された疾患のうち１３％を含むと見積もっている。これらの障害としては、抑うつ、不安、統合失調症（精神分裂病）、双極性障害、強迫性障害、恐慌性障害、過食症、アルコールおよび薬物の乱用、過食および肥満、ならびに注意欠陥過活動性障害（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．ｗｏｒｌｄ ｈｅａｌｔｈ ｒｅｐｏｒｔ ２０００−ｈｅａｌｔｈ ｓｙｓｔｅｍｓ：ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．Ｇｅｎｅｖａ：ＷＨＯ ２０００）が挙げられる。アメリカ人５人のうちほぼ１人が精神医学的疾患のエピソード、例えば、抑うつまたは不安を、ある所定の年に経験する（Ｍｅｎｔａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｕ．Ｓ．Ｓｕｒｇｅｏｎ Ｇｅｎｅｒａｌ，１９９９）。とりわけ、アルコール依存症を有するほとんどの共通の併発精神医学的診断は、しばしば、薬物乱用関連障害、例えば、抑うつおよび不安の障害である（Ｒ．Ｈｉｔｚｅｍａｎｎ，Ａｌｃｈｏｌ Ｒｅｓ．＆ Ｈｅａｌｔｈ ２４：１４９〜１５８，２０００）。
【００８２】
抑うつは、印象的な障害、または気分の障害である。症状としては、不幸感、無力感、絶望および生命活動または全ての楽しみに対する関心の喪失が挙げられる。抑うつに罹患しているほとんどの個体はまた、精神遅滞、混乱、エネルギーの喪失、および決定または集中できないことを経験する。症状は、中度または軽度から重度におよび得、しばしば不安および／または不穏を伴う（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒｍ ＤＳＭ−ＩＶ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１９９４）。
【００８３】
抑うつは、精神疾患の「風邪（ｃｏｍｍｏｎ ｃｏｌｄ）」と呼ばれている。これは蔓延した障害であって、年あたりで米国の集団におけるほぼ１８００万の成人が罹患している（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｉｎｖｉｓｉｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍ．Ｄ．，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ０１−４５９１，２００１）。これは、能力障害の２番目に主要な原因とみなされており、これを上回るのは心疾患だけである（Ｃ．Ｊ．Ｍｕｒｒａｙ＆Ａ．Ｄ．Ｌｏｐｅｚ（編集）Ｔｈｅ Ｇｌｏｂａｌ Ｂｕｒｄｅｎ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｈａｒｖａｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，１９９６）。世界中で、その罹患率は女性で２１％、男性で１３％である（Ｃ．Ｂ．ＮｅｍｅｒｏｆｆおよびＭ．Ｊ．Ｏｗｅｎｓ，Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，５：１０６８〜１０７０，２００２）。
【００８４】
抑うつの原因の背景に関する研究は続いているが、神経伝達物質のシナプス濃度の減少または神経伝達物質の作用の関連機構から障害が生じると一般に考えられている。抗うつ薬は、治療の現在の方式である。不幸にも、ほとんどの抗うつ薬は、その生化学的な作用はほぼ直ちに生じるという事実にもかかわらず、臨床効果が出現するまでに代表的には数週間の投与を要する。結局のところ、抗うつ薬の副作用、禁忌および安全性に関して懸念があり得る。
【００８５】
不安障害はしばしば、過度の心配、恐怖および不安によって特徴づけられ、高頻度に生じて、日課的な作業の有意な障害を生じる。症状としては、不穏、疲労、集中力欠如、興奮、筋緊張および睡眠障害を挙げることができる。一般的な集団における不安障害の生涯有病率はほぼ５〜６％である（Ｄ．Ｊ．Ｎｕｔｔら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ．，５：３１５〜３２５、２００２）。女性は、男性よりも頻繁に罹患し、３５歳を超える女性では１０％という有病率であり、不安の率は、中年およびより高齢の成人では増大する傾向であり（Ｈ．Ｗ．Ｗｉｔｔｃｈｅｎ，Ｄｅｐｒｅｓｓ．Ａｎｘｉｅｔｙ，１６：１６２〜１７１，２００２）、これは抑うつでみられる傾向と同様である。
【００８６】
不安の処置の現在の方法としては、ベンゾジアゼピン（例えば、ジアゼパム、バリウム（ｖａｌｉｕｍ））などの抗不安薬を含む化合物での薬理学的処置が挙げられる。ベンゾジアゼピンは、抗不安、鎮痛催眠、抗痙攣薬および筋弛緩特性を保有する。しかし、循環の血漿レベルが抗不安の範囲を超える場合、ベンゾジアゼピンは、精神および運動の機能の障害、錯乱（混乱）および健忘を生じ得る。ベンゾジアゼピンはまた、患者によっては用量の増大および乱用にかかりやすい場合がある。長期使用からの離脱は、不安、不眠、不穏および興奮を誘発し得る（Ｒ．Ｍ．Ｊｕｌｉｅｎ，Ｐｒｉｍｅｒ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ａｃｔｉｏｎ第７版、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９５；ならびにＭ．Ｅ．ＬｉｋｅｙおよびＢ．Ｇｏｒｄｏｎ，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｍｅｎｔａｌ Ｉｌｌｎｅｓｓ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ Ｃｏ．，Ｂｏｓｔｏｎ，１９９１）。
【００８７】
気分、不安、抑うつおよび他の精神衛生状態に関して、２つの基礎的な視点がある。研究の１系統では、エストロゲンが（特に女性において）不安を調節し、不安レベルを減少するのを助けるという見解が支持される。エストラジオールおよびプロゲステロンの両方とも不安関連の行動、および精巣のアンドロゲンであるテストステロンを変化させる（Ｉｍｈｏｆ Ｊ．Ｔ．ら、Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，５６：１７７〜１８０（１９９３））。エクオルの抗アンドロゲン活性は、神経伝達物質を増強すること、およびシナプス密度を修復することによって脳中で作用する。特定の理論によって束縛はされないが、本発明者らは、Ｒ−エクオルおよび／またはＳ−エクオルが、脳において、同じ部位で、エストロゲンとして活性であり、エストロゲン応答を発揮すると考えている。
【００８８】
第二系統の研究は、さらに複雑であって、５α還元ステロイド、特にプロゲステロンは、脳においてＧＡＢＡＡ受容体に結合して沈静を生じる能力を有するという見解を支持する。ＧＡＢＡＡは脳における主要な阻害性の神経伝達物質であって、その受容体は、気分／感情を制御する脳領域で豊富である。沈静を生じることによって、個体は不安の表現が少なくなる。例えば、妊娠中のほとんどの女性は、ＯＫを感じることが報告されているが、彼女らは通常疲労感があるか、または眠い。これは、身体中において、ただし詳細には脳中において、５α−リダクターゼ酵素によって、プロゲステロンが５α−ジヒドロプロゲステロン（５α−ＤＨＰ）に変換されることに起因し、この分子のさらなる代謝が、ＧＡＢＡＡ受容体に結合してＧＡＢＡＡの作用を増強し得る最も強力な「神経ステロイド」を生じる。この５α−ジヒドロプロゲステロン分子（およびその代謝物）が脳活性を減少し得るという、さらなる支持的な証拠がてんかんの女性（てんかんを従っててんかん発作を経験する）で見られ、これらの個体は、プロゲステロンの高い循環レベルに起因して妊娠中にはてんかん発作をほぼ決して経験しない。５α還元アンドロゲン様５α−ＤＨＴはまた、ＧＡＢＡＡ受容体に同様の効果を有して、沈静を（男性で）生じるが、５α−ＤＨＰに比較してかなり低いレベルであるということが注目される必要がある。
【００８９】
これらの２つの見解をまとめると、エストロゲンは一方では不安を減じ、これによって活性を増大する。逆に、５α−ＤＨＰの作用をブロックすることでまた、活性が増大し、従って行動試験において、不安を軽減すると解釈される。例えば、妊娠ラットにおける５α−ＤＨＰへのプロゲステロンの変換がブロックされる場合、これは、それらの自発活性レベルで有意な増大を生じる。
【００９０】
エクオルに関してこれに同様の展望をとれば、エクオルは、５α−ＤＨＰ（主に女性でみられる）および５α―ＤＨＴ（主に男性でみられる）に結合する能力を有する。これは、ＧＡＢＡＡ受容体で強力な「神経ステロイド」効果を減じて、沈静を減少し、これによって活性を増大するか、または不安を軽減する。さらに、エストロゲン受容体（単数または複数）βに対してＳ−エクオルが結合する能力も、活性を増大する。最終的に、本発明者らの研究であって、雄性または雌性の若齢または中齢の成体ラット用いる研究によって、食餌性の植物性エストロゲン消費（Ｌｕｎｄ Ｔ．Ｄ．ら、Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，９１３：１８０〜１８４（２００１）；Ｌｅｐｈａｒｔ，Ｅ．Ｄ．ら、Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ Ｔｅｔｒａｔｏｌｏｇｙ，２４：１〜１２（２００２））、またはエクオルによる注射が、高架式十字迷路試験で表される不安レベルを有意に減少させることが示されている。
【００９１】
高架式十字迷路は、不安関連行動を定量して、抗不安薬を特定するために用いられる行動試験である（Ｐｅｌｌｏｗ Ｓら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１４：１４９〜１４７（１９８５）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７）８．３．１−８．３．１５，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ．ＮＹ，Ｎ．Ｙ．）。この試験は、新しい環境の探索とその嫌な特徴の回避との間の内因性の矛盾に依拠する。正常には動物は、迷路のクローズド・アームに比較して迷路のオープン・アームでは過ごす時間が短く、進入することが少ない（Ｉｍｈｏｆ Ｊ．Ｔ．ら、Ｂｅｈａｖ Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ，５６：１７７〜１８０（１９９３）。しかし、抗不安薬、例えば、ベンゾジアゼピン（バリウム（ｖａｌｉｕｍ））で処置された動物は、オープン・アームでさらに長時間過ごし、オープン・アームへの進入の回数は、不安関連行動の減少を反映する（Ｐｅｌｌｏｗ Ｓ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１４：１４９〜１４７（１９８５）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ（１９９７）８．３．１−８．３．１５，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ．ＮＹ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｈｏｐｉｎ Ｐ．ら、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍ，１１０：４０９〜４１４（１９９３）。
【００９２】
本発明はまた、閉経周辺期または閉経後症状を処置または予防するためのエクオル（Ｒ−鏡像異性体およびＳ−鏡像異性体の混合物など）の使用を包含する。これらの症状としては、とりわけ気分変動、抑うつ、不安、疲労ならびに情動性および精神の衛生状態、体重増大および肥満、ならびに多嚢胞卵巣が挙げられる。
【００９３】
別の実施形態では、本発明は、抑うつ、不安および上述されるその他を含む、神経精神医学疾患を予防または処置するためのエクオルの使用の方法である。
【００９４】
本発明は、体重および体脂肪形成に関連する疾患および状態を処置および予防するための鏡像異性のエクオルの使用を包含する。体重増加および肥満は、米国および世界中の開発途上国における膨大な健康上の懸念に相当する。例えば、米国では、成人のうち約５５％が、国際標準では過体重であり、アメリカの大人の約２３％が、肥満とみなされる；アメリカ人の子供５人に一人が過体重とみなされる。米国での肥満は、１９９０年代後期には国家の保健医療予算のうち合衆国政府の１２％、すなわち１１８０億円がかかる（Ｗｏｒｌｄ Ｗａｔｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，２０００年３月４日）。
【００９５】
エクオルを含む植物エストロゲンは、白色脂肪（ａｄｉｐｏｓｅ）（脂肪（ｆａｔ））組織の形成を減じ、白色脂肪組織の破壊を増大する能力を有し、これによって体重を減少させる。また、植物エストロゲン分子のエストロゲン様の性質は、ＬＤＬ（いわゆる、「悪玉」コレステロール）、血圧を下げて、インスリン耐性を妨げる（または言い換えれば、糖尿病状態に対する有益な影響をもたらす）。エクオルは、他の植物エストロゲンに比較してさらに強力なイソフラボン分子であるので、これはおそらく、健康上の利点を提供して、先に概説された状態を防御する。
【００９６】
エクオルは、５α−ＤＨＴに結合するので、エクオルはまた、体重増大を促進する５α−ＤＨＴの作用をブロックし得る。従って、エクオル、および詳細にはＳ−エクオルを、抗アンドロゲンと、ただし同時に、同じ分子（エクオル）由来のエストロゲンホルモン作用と組み合わせて、さらに、体重減少（および体重管理）という健康上の利点を改善し、ＬＤＬコレステロールを減少し、血圧を減少し、糖尿病の破壊的な効果を妨げることを補助する。
【００９７】
本発明は、体重の増大および肥満を妨げるまたは処置するエクオルの使用を包含する。「体重の増大」という用語は、被験体の年齢、性別および状態に依存する最適の健康値を上回る体重の任意の増大をいう。人は、その理想体重を約２０％超える場合、肥満とみなされる。その理想体重は、人の身長、年齢、性別および体形を考慮する必要がある。過体重または肥満は、また、例えば、肥満度指数（ボディ・マス・インデックス）を用いて規定されてもよい。成人については、過体重および肥満の範囲は、体重および身長を用いて「肥満度指数（ボディ・マス・インデックス）」（ＢＭＩ）と呼ばれる数値を計算することによって決定される。ＢＭＩは、ほとんどの人に用いられるので、体脂肪の量と相関する。約２５〜２９．９の間のＢＭＩを有する成人は、過体重とみなされる。約３０以上のＢＭＩを有する成人は、肥満とみなされる。過体重または肥満になることで、多くの疾患および健康状態のリスクが増大するが、これには以下が挙げられる：高血圧、異脂肪血症（例えば、高い総コレステロール、または高レベルのトリグリセリド）、２型糖尿病、冠状動脈性心疾患、卒中、胆嚢疾患、変形性関節症、睡眠時無呼吸および呼吸問題およびいくつかの癌（子宮内膜癌、乳癌および結腸癌）（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ（ＣＤＣ）ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，２００６）。
【００９８】
本発明は、高コレステロール（高コレステロール血症）、脂質血症、脂肪血症および異脂肪血症（脂質の障害）などの脂質障害を処置および予防するための、エクオルの、鏡像異性エクオルまたはその混合物としての使用を包含する。血漿の総コレステロール濃度は、エクオルプロデューサでは、ベースライン値に比較して７．２％（ｐ＝０．０４）、およびノン・エクオルプロデューサでは３．０％（ｐ＝ＮＳ）減少したことが研究によって示されている。正常な血液コレステロール値を有する成人での有意なコレステロール低下効果を、ダイズタンパク質が有さないということは、２〜３の経験があり、おそらくこの理由は、ダイズイソフラボンの代謝に関する研究集団中の異質性、およびエクオル形成の関連性（特に、ノン・エクオルプロデューサにおける非形成）を認識できないということである。これらのデータによって、鏡像異性エクオルが有利な方式で脂質に影響するということ、およびこの効果がアンドロゲンによって媒介されるということが示唆される。エクオルを含む組成物は、血流中の脂質のレベルを低下するのに十分な量で投与される。
【００９９】
本発明はさらに、血圧中の正確な変化に応答して反応性または可塑性を増大すること、血流を改善すること、および血圧を低下させることによって、低下した血管の質を改善するためのＲ−エクオルおよび／またはＳ−エクオルの使用を包含する。本発明はまた、良性前立腺癌、前立腺癌および皮膚癌を含む癌を処置および予防するためのＲ−エクオルおよび／またはＳ−エクオルの使用を包含する。
【０１００】
本発明の別の実施形態は、肥大した前立腺または精巣上体を処置するためのエクオルの使用である。エクオルはまた、精巣、下垂体または体重の変化なしに、これらの病理の発達のリスクであると考えられる個体で、肥大した前立腺または精巣上体を妨げるために用いられ得る。エクオルは、血流へのエクオルの吸収を可能にする任意の経路によって投与され得る。
【０１０１】
ＤＨＴ−アンドロゲン受容体
本発明の他の実施形態は、エクオルの使用を、アンドロゲン関連障害およびエストロゲン／アンドロゲンのバランスにおける攪乱から生じる障害における診断剤として、包含する。これらの実施形態では、エクオルは、個体に投与されて５α−ＤＨＴに結合し、それによってアンドロゲン受容体に対する５α−ＤＨＴ結合を妨げる。次いで、エストロゲンのバランスにおけるこの変化を測定するか、またはアンドロゲン結合におけるこの変化を評価して、アンドロゲン関連の異常を診断するかまたはさらに解明する。
【０１０２】
５α−ＤＨＴに対する結合
該当の治療部分に関する５α−ＤＨＴの結合能力を評価するために、エクオルを投与して、他の治療部分より前に、またはそれとともに５α−ＤＨＴに結合させてもよい。また、アンドロゲン結合部分がアンドロゲン活性を修復する有効性、および５α−ＤＨＴ結合の不在下でのエストロゲン活性のバランスを評価するために、エクオルの投与後にアンドロゲン結合部分を投与してもよい。さらに、５α−ＤＨＴからこれらの天然に存在するかまたは生体異物の５α−ＤＨＴ結合部分を置き換えるために、５α−ＤＨＴ結合部分の存在下でエクオルを投与してもよい。
【０１０３】
エクオルの投与
本明細書に記載される本発明の各々の実施形態では、エクオルの投与が経口である必要がある場合、エクオルは、「エクオル産生（ｅｑｕｏｌ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ）」哺乳動物または「エクオル産生しない（ｎｏｎ−ｅｑｕｏｌ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ）」哺乳動物のいずれかに対してエクオルの経口剤形を、または「エクオル産生」哺乳動物に対してダイゼイン、ダイジイン、ダイゼインを含むイソフラボン混合物もしくはダイズタンパク質調製物を供給することによって投与されてもよく、この経口剤形の投与は、血流へのエクオルの有効な吸収を生じる。エクオルの投与は、必要に応じて、経口以外の経路によって行われ得る。例えば、直腸または尿道の投与を用いて、肥大した前立腺の処置のためにエクオルを投与しても、または前立腺肥大を予防してもよいと考えられる。さらに、エクオル分子の活性なリガンド結合部位を投与のために単離して合成してもよく、これによって完全なエクオル分子なしに５α−ＤＨＴ結合を得てもよいと考えられる。５α−ＤＨＴ結合能を有する、エクオル分子またはそのフラグメントの用量は、投与の経路および処置される条件に依存する。本発明者らのインビボ研究に基づいて、比較的低用量のエクオルがかなり高用量の５α−ＤＨＴを拮抗することが明らかであり、これは５α−ＤＨＴと比較して血清タンパク質に対するエクオルの結合における顕著な相違によって説明され得る。後者の循環はほとんどタンパク質に結合するが、エクオルは５０％が遊離である。一般には、レシピエントの体重１ｋｇあたり少なくとも約０．２ｍｇ、好ましくは少なくとも約０．５ｍｇ／ｋｇのエクオルというレシピエントの血流中のエクオルまたはその活性なフラグメントの濃度を生成するのに十分な用量。この用量は、有意な用量制限的な副作用を招くことなく、約１０ｍｇ／ｋｇよりも大きくまで劇的に増大され得る。経口投与は、医薬の遅延型または徐放型の放出をもたらし得るマイクロカプセル型で達成されてもよい。
【０１０４】
エクオルは、ローション、軟膏、泡状物（シェービングフォームを含む）、経鼻スプレー、皮膚パッチ（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，６１３，９５８号に記載のものなど）、マイクロポンプシステムを含む電気機械的デバイス（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，６９３，０１８号および米国特許第５，８４８，９９１号に記載のものなど）、および皮下インプラント（その全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，４６８，５０１号に記載のものなど）を含む種々の形態で局所的に、経皮的に、および皮下に投与されてもよい。
【０１０５】
実験
（ａ）「エクオル産生」成体におけるエクオル鏡像異性体の決定
「エクオルプロデューサ」であると以前に特定されている、ダイズ食品を消費する成人由来の尿サンプルを分析した。エクオルは、固相Ｂｏｎｄ Ｅｌｕｔ Ｃ１８カートリッジを通じたサンプルの通過によって尿（２５ｍＬ）から単離した。水でカートリッジを洗浄した後、メタノール（５ｍＬ）での溶出によってイソフラボンを回収して、メタノール相を採取して窒素流下で乾燥した。サンプルを、Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａｔｉａによる酵素的加水分解に供し、次いでＢｏｎｄ Ｅｌｕｔ Ｃ１８カートリッジで再抽出した。メタノール抽出物を採取して、窒素ガス下で乾燥させて、ＨＰＬＣ移動相（１００μＬ）に再溶解した。エクオル鏡像異性体を、本明細書において上記されるようなＣｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪキラル相カラムを用いてＨＰＬＣによって特定した。エクオルの検出は、エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ−ＭＳ）を選択イオンモニタリングすることによって達成した。Ｓ−エクオルの純粋な標準の、およびダイズ食品を消費する成人由来の尿のマスクロマトグラムを図３に示す。同様の結果によって、大豆由来のイソフラボンが、ラットにおいてエクオルに変換されることが示されており、同様に、これによってイソフラボン代謝のげっ歯類モデルが確認される。
【０１０６】
保持指数およびマスクロマトグラムによって、これが排他的に、ヒト尿に排出されるエクオルのＳ−鏡像異性体であることが確認される。なぜなら、エクオルの検出可能なＲ−鏡像異性体は見出されないからである。同じ「エクオルプロデューサ」由来の血漿の分析によってまた、エクオルのＳ−鏡像異性体のみが明らかになった。
【０１０７】
（ｂ）ラセミのエクオルの化学合成
ダイゼイン（２００ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を、氷酢酸（２０ｍＬ）およびイソプロパノール（２０ｍＬ）の混合物に溶解し、１０％Ｐｄを用いて、チャコール（１５０ｍｇ）上で５５ｐ．ｓ．ｉ．ｇ．（３．７ａｔｍ、測定）で還元する。反応の終りの時点で（２時間、ＴＬＣ：イソプロパノール／ｎ−ヘキサン１／４）、触媒を濾過して除き、その濾液を蒸発させる。粗残渣を、イソプロパノールおよびｎ−ヘキサンの混合物（１：４ｖ／ｖ）を溶出剤として用いるシリカゲルカラムでのクロマトグラフィによって精製して、（±）エクオルを、ｎ−ヘキサンから結晶化された純粋な生成物（１６０ｍｇ、収率：８２％）として得る。生成物は無色結晶であり、吸湿性ではなく、空気中安定で、最終濾過手順の間、分解されない。この化学合成の生成物は、（±）エクオルの標準品サンプル（ラセミのエクオル）と全ての点で同一であった。図４は、標準品のエクオルのトリメチルシリル（ＴＭＳ）エーテル誘導体の公開された電子イオン化スペクトルと一致する単一の純粋なピークおよび質量スペクトルとして、合成された生成物のトリメチルシリルエーテル誘導体のＧＣ−ＭＳ分析を示す。予想される分子イオンはｍ／ｚ４７０で、ベースピークはｍ／ｚ２３４である。精製されたエクオル生成物は、ＨＰＬＣおよび質量分析計で確認されるとおり、９９％より大きい純度を有した。
【０１０８】
（ｃ）光学的二色性によるＳ−鏡像異性体およびＲ−鏡像異性体の溶出順序
Ｓ−エクオルおよびＲ−エクオルのラセミ混合物を、１．０ｍＬ／分の流速を用い、ヘキサンに含まれる１０％エタノールの最初の移動相およびヘキサンに含まれる９０％エタノールまでの増大から構成される勾配溶出を用いて、Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＪ Ｃｏｌｕｍｎでのキラルクロマトグラフィによって、表１に示されるプログラムに従って１５分間にわたって分離した。
【０１０９】
【表１】
図５は、Ｓ−エクオルおよびＲ−エクオルのラセミ混合物のイオン記録（ｍ／ｚ２４１）のマスクロマトグラムを示す。
【０１１０】
最初に溶出する物質は、鏡像異性体−１と命名され、２番目に溶出する物質は、鏡像異性体−２と命名され、これらを別々に収集した。各々の鏡像異性体を秤量して、秤量したサンプルを１ｍＬの分光計等級のエタノールに溶解した。各々の鏡像異性体の旋光度の測定は、ナトリウムのラインＤの波長の光を用いて２００℃で行った。
【０１１１】
鏡像異性体−１物質（正確な重量１．６ｍｇ）は、第１測定値および第２測定値、−０．０２３および−０．０２２を有し、これによって、エクオルのＳ−鏡像異性体と対応する、−１４［−０．０２２５×１０００／１．６］の旋光度が生じた。鏡像異性体−２物質（正確な重量１．７ｍｇ）は、第１測定値および第２測定値、＋０．０２３および＋０．０２３を有し、これによって、エクオルのＲ−鏡像異性体と対応する、＋１３．５［＋０．０２３×１０００／１．７］の旋光度が生じた。
【０１１２】
ｄ）Ｓ−鏡像異性体およびＲ−鏡像異性体の受容体結合能力の決定
インビトロの結合研究を行って、エストロゲン受容体ＥＲαおよびＥＲβとのＳ−鏡像異性エクオルおよびＲ−鏡像異性エクオルの相対的親和性を検査した。
【０１１３】
ホルモン受容体タンパク質の合成：全長ラットＥＲα発現ベクター（ｐｃＤＮＡ−ＥＲα；ＲＨ Ｐｒｉｃｅ ＵＣＳＦ）およびＥＲβ発現ベクター（ｐｃＤＮＡ−ＥＲβ；Ｔ Ａ Ｂｒｏｗｎ、Ｐｆｉｚｅｒ，Ｇｒｏｔｏｎ，Ｃｏｌｏ．）を用いて、インビトロでホルモン受容体を合成し、ここでは、３０℃で９０分の反応の間、Ｔ７−ＲＮＡポリメラーゼとともにＴｎＴ結合網状赤血球溶血液系（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．）を用いた。翻訳反応混合物は、さらなる使用まで−８０℃で保管した。
【０１１４】
飽和異性体：ＥＲαおよびＥＲβについてのＳ−エクオルおよびＲ−エクオル鏡像異性体の結合親和性を算出および確立するために、網状赤血球溶血液上清の１００μＬのアリコートを、最適の時間および温度でインキュベートした；室温で９０分（ＥＲβ）および４℃で１８時間（ＥＲα）、［３Ｈ］１７β−エストラジオール（Ｅ２）の漸増濃度（０．０１〜１００ｎｍ）を用いた。これらの時間は、経験的に決定され、エストロゲンとの受容体の最適の結合に相当した。非特異的な結合を、平行管で、３００倍過剰のＥＲアゴニストジエチルスチルベステロールを用いて評価した。インキュベーション後、結合および未結合の［３Ｈ］Ｅ２を、１ｍＬの親油性Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．，Ｓａｉｎｔ Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ）カラムを通してインキュベーション反応物を通過させることによって分離した。カラムは、以前に公開されたプロトコール（Ｗａｎｄａら、１９８６；Ｏ’ＫｅｅｆｅおよびＨａｎｄａ，１９９０）に従って、ＴＥＧＭＤ（１０ｍｍ Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、１．５ｍｍ ＥＤＴＡ、１０％グリセロール、２５ｍｍ モリブデン酸塩、および１ｍｍのジチオトレイトール、ｐＨ７．４）飽和Ｓｅｐｈａｄｅｘを用いて、使い捨てのピペットチップ（１ｍＬ；Ｌａｂｃｒａｆｔ，Ｃｕｒｔｉｎ Ｍａｔｈｅｓｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘ）をパッキングすることによって構築した。クロマトグラフィのために、ＴＥＧＭＤ（１００μＬ）を用いてカラムを再平衡し、インキュベーション反応物を各々のカラムに個々に添加して、さらに３０分間カラムにてインキュベートさせた。このインキュベーション後、６００μＬのＴＥＧＭＤを各々のカラムに添加して、貫流物を収集し、４ｍＬのシンチレーション液を添加して、サンプルを２９００ ＴＲ Ｐａｃｋａｒｄシンチレーションカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，Ｃｏｎｎ．）でカウントした（各５分）。
【０１１５】
競合結合研究を用いて、エクオルのＳ−エクオルおよびＲ−エクオルの鏡像異性体のエストロゲン特性を評価した。ＳおよびＲがＥＲ結合について［３Ｈ］Ｅ２と競合する能力に基づいて、インビトロ翻訳されたＥＲについての親和性は、２つの鏡像異性体について極めて異なることが示された。Ｓ−エクオル鏡像異性体は、ＥＲβに最大の親和性を示した［Ｋｄ（ｎｍ）＝０．７３±０．２］が、ＥＲαに対するその親和性は、比較すれば比較的低かった［Ｋｄ（ｎｍ）＝６．４１±１．０１。Ｒ−エクオル鏡像異性体は、ＥＲβ［Ｋｄ（ｎｍ）＝１５．４±１．３１］およびＥＲα［Ｋｄ（ｎｍ）＝２７．３８±３．８］の両方にかなり低い親和性を保有した。参照として、１７β−エストラジオールは、この系において、ＥＲαとはＫｄ（ｎｍ）＝０．１３で、ＥＲβとはＫｄ（ｒｕｍ）＝０．１５で結合する。
【０１１６】
この研究によって、Ｓ−エクオル鏡像異性体のみが、ＥＲに十分な親和性で結合し、ヒトで報告される循環エクオル値に対する潜在的関連性を有するということが示される。１７βエストラジオールと比較して、ＥＲαについてのＳ−エクオルおよびＲ−エクオル鏡像異性体の相対的結合親和性は、それぞれ４９分の１および２１１分の１であった。しかし、Ｓ−エクオル鏡像異性体は、ＥＲβに比較的高い親和性を有するかなりＥＲβ選択性であるとみられ、一方でＲ−エクオル鏡像異性体は、約１００分の１の親和性で結合する。別のかつ関連の決定は、排他的にＳ−エクオルがヒト血漿でみられ、尿が２つの鏡像異性体の結合において特異性の観点で有意であるということである。
【０１１７】
ｅ）Ｒ−エクオルのバイオアベイラビリティ
２０ｍｇの純粋なＲ−エクオルを、一晩絶食後の健常な成人に経口投与した。血液サンプルをその後２４時間にわたって一定間隔で収集し、エクオルの血漿濃度は、選択イオンモニタリングによる同位体希釈ガスクロマトグラフィ−質量分析によって決定した。エクオルの急速な出現が、血漿中で観察され、ピーク濃度は８時間後に観察された。Ｒ−エクオルの終末排泄半減期は約８時間であった。エレクトロスプレーイオン化質量分析によって、血漿中に存在するエクオルがＲ−エクオル鏡像異性体であることが確認され（データは示さないが、要求により入手可能である）、それによって、これが安定であり、腸でラセミ化もさらなる生体内変換も受けないことが確認された。図２Ａは、Ｒ−エクオルの出現／消失のプロットを示す。図２Ｂは、健常なヒト成人でのＳ−エクオルまたはＲ−エクオルの経口投与後の血漿中のＳ−エクオルおよびＲ−エクオルの出現／消失のプロット（平均値）を示す（Ｋ．Ｄ．Ｓｅｔｃｈｅｌｌら、Ａｍ Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．，８１：１０７２〜１０９１，２００５）。
【０１１８】
これらの結果によって、Ｒ−エクオルは、薬理学的調製物または栄養補給調製物として投与される場合、極めて生体利用可能性が高いことが確認される。
【実施例】
【０１１９】
必要に応じて、分散分析（ＡＮＯＶＡ）に続くＮｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ ｐｏｓｔ ｈｏｃ（事後的ノイマン−ケウルス）検定によってデータを分析した。有意差をｐ＜０．０５で設定した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ３．０，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．）を用いてカーブフィッティング、科学的グラフ化および分析を完成した。
【０１２０】
（実施例１）
本実施例は、前立腺の大きさおよびホルモン分泌に対するエクオルのインビボの影響を示す。雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（４００〜５００ｇ）は、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，ＵＳＡ）から入手した。ラットは、２対一組みでカゴに入れ、食品および水に自由にアクセスさせながら１２時間暗野１２時間明野のスケジュール（０７時に点灯）で飼育する。
【０１２１】
到着の１週後、動物にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（ビヒクルコントロール）またはラセミのエクオル（０．２５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかの皮下（ｓｃ）注射を与える（４日間１日１回）。最終の注射の１８時間後、動物を断頭して殺傷して、胴体の血液および前立腺を分析用に収集する。
【０１２２】
無傷のコントロールのオスに比較してエクオルを皮下注射した無傷のオスでは、前立腺重量の有意な減少が観察される。さらに、これらの同じ無傷のオスでの黄体形成ホルモン（ＬＨ）は、コントロール処置したオスに比較してエクオルでは有意に増大する。これらの知見を、それぞれ図６Ａおよび図６Ｂに示す。これらの効果は、５α−ＤＨＴに比較して比較的低レベルのエクオルで観察され、これは、エクオル（約５０％が遊離で循環する）および５α−ＤＨＴ（血清タンパク質に最も結合される）のタンパク質結合における顕著な相違によって説明され得る。
【０１２３】
（実施例２）
前立腺に対するエクオルの効果に加えてラセミのエクオルは、他の組織でＤＨＴの影響をブロックして、体重を減少させる。到着の１週後、無傷のオスにＤＭＳＯ（コントロール）またはエクオル（０．５ｍｇ／ｋｇ）のいずれかの皮下注射を７日間にわたり１日１回与える。処置後、動物を秤量し、次いで断頭して殺傷し、組織を回収する（前立腺、精巣、精巣上体および下垂体）。
【０１２４】
５α−ＤＨＴ感受性の精巣上体における有意な重量減少が、コントロールに比較してラセミのエクオル処置オスで観察される。しかし、ラセミのエクオルは、精巣重量にも下垂体重量にも影響しなかった。この比較的短い処置期間の間の体重は、ラセミのエクオルとコントロールの処置との間で有意に異なることはない。これらの結果を表２に示す。
【０１２５】
【表２】
（実施例３）
成体の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを、３群に無作為に割り当てて、ＤＭＳＯ、エクオルのラセミ混合物（０．２５０ｍｇ／ｋｇ／日）、Ｒ−エクオル（０．２５０ｍｇ／ｋｇ／日）、またはＳ−エクオル（０．２５０ｍｇ／ｋｇ／日）のいずれかを毎日注射する。各々の注射の総容積は０．３ｃｃであって、ラットの首の襟首にｓｃ投与する。連続７日の処置の後、ラットを殺傷して、注射期間の体重増加を決定する。Ｒ−エクオルを注射したラットは、表３に示されるように、コントロールのラットに比較して体重増大が有意に少ない。
【０１２６】
【表３】
精巣および脳下垂体の重量は、処置によって有意に変化しない（データ示さず）。エクオル実験からの体重のわずかな低下（ほぼ１０％）は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅの食餌（極めて低レベルの植物エストロゲンを含む食餌）対Ｐｈｙｔｏ−６００食餌（６００ｐｐｍのイソフラボンを含む植物エストロゲン豊富な食餌）を給餌された動物の間でみられたものと極めて類似している。ラセミのエクオルの注射（約３６％）での白色脂肪組織の有意な減少はまた、食餌処置研究由来のデータセットでみられたものに匹敵する。これらの知見によって、Ｒ−エクオルは、体重を調節して、白色脂肪の蓄積を有意に低下することが示唆される。
【０１２７】
（実施例４）
本実施例は、５α−ＤＨＴに対するエクオル結合を示す。ＡＲについてのエクオルの結合親和性を決定および確立するために行った最初の結合競合研究では、本発明者らは、［３Ｈ］ＤＨＴのみかけの結合がエクオルの不在下よりもエクオルの存在下で大きいということを繰り返し観察した。ＡＲがインキュベーション試験管から除かれた（［３Ｈ］ＤＨＴおよびエクオルのみが残っている）プロトコールでのわずかな改変によって、［３Ｈ］ＤＨＴ反応複合体を含む溶出剤への［３Ｈ］ＤＨＴの溶出が生じた。
【０１２８】
この現象をさらに検討するため、３０ｃｍ長のＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラムを用いて、溶出ピークを特定し、エクオルに対する［３Ｈ］ＤＨＴの結合を確認する。図７に示されるとおり、［３Ｈ］ＤＨＴのピークは、［３Ｈ］ＤＨＴ＋エクオルのカラムインキュベートが加えられる場合、５〜９ｍＬの間の溶出画分中で明らかである。このピークは、このカラムに［３Ｈ］ＤＨＴだけを加えるときは存在しない。さらに、５α−ＤＨＴまたは５α−ＤＨＴ＋エクオルを、前立腺の上清とインキュベートし、次いで３０ｃｍのカラムを通過させるとき（図８Ａ）、２つの別個の結合ピークが特定可能である。［３Ｈ］ＤＨＴの最初のピークは、それが前立腺中のＡＲに対して結合したことを示す。これは、４〜５ｍｌの溶出画分で見出される。さらに、エクオルに対する［３Ｈ］ＤＨＴの結合と一致して後ろのピークがある（５〜９ｍｌ）。しかし、［３Ｈ］ＤＨＴを、エクオルの導入前に前立腺上清と３６時間（平衡まで）インキュベートさせるとき、［３Ｈ］ＤＨＴの結合は明らかでない（図８Ｂ）。［３Ｈ］ＤＨＴおよび［３Ｈ］ＤＨＴ＋エクオル（３６時間後にエクオルを添加）の両方とも、４〜５ｍｌの溶出中で単一のピークを示し、このことは、エクオルがＡＲについて５α−ＤＨＴと競合せず、受容体に既に結合している［３Ｈ］ＤＨＴにも結合しないことを示唆している。さらに、５α−ＤＨＴに対するエクオルの結合は、特異的であるらしいことが注目されるべきである。なぜなら、同様の競合および結合の研究は、［３Ｈ］Ｅ２、［３Ｈ］Ｔ、［３Ｈ］ＤＨＥＡ、［３Ｈ］ＣＯＲＴおよび［３Ｈ］プロゲステロンを用いて行われており、エクオルに対する結合の出現がないからである（データ示さず）。［３Ｈ］ＤＨＴに対するエクオル結合の飽和分析によって、１．３２±０．４ｎＭで算出したみかけのＫｄが示される（図９）。
【０１２９】
（実施例５）
本実施例では、前立腺の大きさに対する５α−ＤＨＴの効果を調節することに加えて、エクオルがインビボで５α−ＤＨＴに結合し、ＬＨ分泌に対する負の効果をブロックすることが示される。５α−ＤＨＴの長時間作用性のアナログであるＤＨＴプロピオン酸塩（ＤＨＴＰ）で処置したＧＤＸのオスは、ビヒクル処置したＧＤＸコントロールラットに比較して前立腺重量の有意な増大を示す。エクオルでの同時処置（ＤＨＴＰ＋エクオル）は、ＤＨＴＰの効果をブロックするが、エクオルは、図１０Ａに示されるとおり前立腺に対して単独では効果を有さない。エクオルはまた、ＬＨに対する５α−ＤＨＴの負のフィードバック効果をブロックする。ＧＤＸオスでは、ＬＨは、ＤＭＳＯでの処置に比較してＤＨＴＰ処置によって有意に減少する。５α−ＤＨＴと組み合わせたエクオルでの処置によって、ＬＨ分泌に対するＤＨＴＰの負のフィードバック効果がブロックされる。エクオル単独では、ＬＨレベルに影響を有さない（図１０Ｂに示される）。
【０１３０】
（実施例６）
本実施例は、アンドロゲン感受性の組織に対するラセミのエクオルの効果を示す。到着の１週後、イソフルラン麻酔下で動物を性腺摘出（ＧＤＸ）して、７日間回復させる。回復後、動物を以下の群に割り当てる１）ＤＭＳＯ、２）ＤＨＴＰ（２ｍｇ／１ｋｇ）、３）ラセミのエクオル（０．２５ｍｇ／ｋｇ）、または４）ＤＨＴＰおよびラセミのエクオルの両方。注射は、４日間毎日皮下に与える。動物を断頭して殺傷し、胴体の血液および組織を分析用に収集する。血漿の５α−ＤＨＴを測定する（図１１に示す）。
【０１３１】
予想どおり、ＤＨＴＰ（ＧＤＸ＋ＤＨＴＰ、ＧＤＸ＋エクオル＋ＤＨＴＰの群）で処置した動物においては血漿５α−ＤＨＴの有意な上昇があった。血漿の５α−ＤＨＴはさらに上昇したが、エクオルでの同時処置によって、有意ではなかった。前立腺、精巣および精巣上体を含む組織を動物から取り出し、脂肪および結合組織を取り除いて、秤量し、４％パラホルムアルデヒド中での浸漬によって固定し、次いで、クリオスタットで１５μｍに切り出す。組織切片を、２３℃に予備加熱した充填スライド（Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ Ｐｌｕｓ，Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）に装填し、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色して、上昇（漸増）アルコールで脱水して、キシレンで浄化する。組織学的切片を図１２および１３に示す。Ｈ＆Ｅ染色前立腺は、ＧＤＸおよび処置の両方に起因する変化を反映する。コントロール、エクオルおよびＤＨＴＰに加えてエクオル処置した群の前立腺は、同様の組織学を示す（図１２Ａ、１２Ｂ、１２Ｄ）。これらの動物では、前立腺は、ごく小さい萎縮性の腺（腺の管腔の容積が小さい）によって特徴付けられる。ＤＨＴＰ処置動物では（図１２）、腺は、細胞増殖の兆候を示す。管腔の大きさは、ＧＤＸ動物に比較して増大する；上皮組織は、長い円柱型のものである（図１２Ｃ）。無傷のコントロールの動物に比較して（図１２Ｅ）、エクオル処置オスの前立腺は、退縮を示し、さらに狭い空間の萎縮性の腺から構成される（図１２Ｆ）。コントロールのオスに比較して、エクオル処置した無傷のオスの表皮の組織学は、縮んだ管腔によって証明されるとおり全体的に小さい導管を示す（図１３）。
【０１３２】
（実施例７）
Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ雄性ラットを、食餌１ｇあたり６００μｇのイソフラボン、すなわち６００ｐｐｍのイソフラボンを含む植物エストロゲン豊富な食餌（本明細書において、以下、「Ｐｈｙｔｏ−６００」食餌と称する）、または極めて低レベルのイソフラボンを含む食餌（本明細書において、以下、「Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ」食餌と称する；約１０ｐｐｍのイソフラボンを含む）のいずれかで飼育する（受胎からサンプル収集の時間まで生涯）。
【０１３３】
図１４に示されるとおり、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給された雄性Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給された動物に比較して３３、５５または７５日齢で有意に低い体重を示す脂肪組織（腹骨盤腔において腎臓の直下から精巣のすぐ上を切り開く）を、５５日齢または７５日齢のオスで測定する。両方の年齢で、白色脂肪組織は、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌動物に比較してＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌オスでは有意に大きい（図１５）。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスの体重の低下は、約１０〜１５％で、わずかであるが、同じ動物からの白色脂肪組織の減少は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌オスに比較して約５０〜６０％であることが注目されるべきである。ダイズ給餌動物の体重に比較した白色脂肪組織における、このより大きい減少はまた、ダイズベースの食餌を消費するヒトで見られる一般的特徴である（Ｄ．Ｂ．Ａｌｌｉｓｏｎら、Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ，２００３，５７：５１４〜５２２）。この特定の結果は、年齢、性別、ラットの株または雌性ラットがその卵巣（ヒトでの閉経後状態を刺激する）を除去されているか否かにかかわらず、これらのデータセットに存在する種々の実験を通じて繰り返しみられる。
【０１３４】
食物および水を測定して、これらのパラメータが、身体および脂肪組織重量に影響し得るか否かを決定する場合、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌動物に比較してわずかだが有意に高い食物（図１６Ａ）および水（図１６Ｂ）の摂取を示す。従って、身体および脂肪組織重量の減少は、食餌の処置の間の食物／水の摂取での変化では説明できない。
【０１３５】
レプチンは、脂肪組織によって生成されるので（Ｄ．Ａ．Ｓａｎｄｏｖａｌら、Ｊ Ｄｉａｂｅｔｓ Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，２００３，１７：１０８〜１１３）、血清レプチン値をインスリン値とともに測定して、これらの代謝ホルモン中の変化を決定する。図１７Ａに示されるとおり、レプチン値は３３日、５５日または７５日齢で、Ｐｈｙｔｏ６００給餌オス（これらの同じ動物から脂肪組織重量でみられる減少と対応して）では、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌のオスに比較して有意に低下する。またインスリン値は、２型糖尿病に関連するインスリン耐性に対して防御するという利点と一致して、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌のオスに対してＰｈｙｔｏ６００給餌オスでは有意に低下する（Ｖ．Ｊａｙａｇｏｐａｌら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ，２００２，２５：１７０９〜１７１４）。
【０１３６】
Ｐｈｙｔｏ６００給餌対Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌のオスおよびメスのラット（７５日齢）で循環イソフラボン値が異なることを示すために、本発明者らの研究室で以前に行ったとおりＧＣ／ＭＳによって、血清イソフラボン値を決定する（Ｋ．Ｄ．Ｒ．Ｓｅｔｃｈｅｌｌ，Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ １２９：１３３３Ｓ〜１３４６Ｓ，１９９８；およびＫ．Ｄ．Ｒ．Ｓｅｔｃｈｅｌｌら、Ｊ Ｎｕｔｒ １３２：３５７７〜３５８４，２００２の方法を参照のこと）。異なる分類のイソフラボンについての各々の場合、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌の値に比較して有意に高いイソフラボン値を示す（表４に示す）。さらに重要なことに、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌のラットのエクオル値は、総植物エストロゲン値の約７８％を占める。
【０１３７】
【表４−１】
【０１３８】
【表４−２】
他の代謝性ホルモンが食餌処理によって、または年齢によって変化されるか否かを決定するために、血清グルコースおよび甲状腺（Ｔ３）のレベルをアッセイする。グルコース値は、年齢および血液サンプルの供給源とは独立して、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌の値に比較してＰｈｙｔｏ６００給餌のオスではわずかに（ただし有意に）高い［動脈（ＡＲＴ）または静脈（ＴＲＵＮＫ）のいずれか］（図１８に示す）。しかし、Ｔ３値を定量するとき、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌動物に比較してＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給された８０または１１０日齢の雄性Ｌｏｎｇ−ＥｖａｎｓラットでのＴ３血清値は有意に増大している（図１９に示す）。甲状腺のレベルが、その甲状腺医薬を減少させたかまたは、その食餌中のダイズベースの食物の消費で甲状腺処置を完全にやめた個体の事例証拠と一致して、ダイズ消費で甲状腺レベルが増強されるということが、これから示唆される。これはまた、ダイズ食品の消費後のヒトにおけるＴ３値の同様の増大という報告とも一致している（Ｗａｔａｎａｂｅ，Ｓら、Ｂｉｏｆａｃｔｏｒｓ ２０００：１２（１４）：２３３４１）。
【０１３９】
（実施例８）
この実験では、雌性Ｌｏｎｇ−ＥｖａｎｓラットをＰｈｙｔｏ−６００食餌、またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌のいずれかで飼育する（受胎からサンプル収集の時間まで生涯）。図２０に示されるとおり、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたラットは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給された動物に比較して、８０日齢で有意に低い体重を示し、これは、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌動物における体重の約１２％減少に相当する。
【０１４０】
以前に雄性Ｌｏｎｇ−ＥｖａｎｓのＰｈｙｔｏ−６００給餌ラットで示されたとおり、Ｐｈｙｔｏ−６００食事を給餌されたメスはまた、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食事を給餌されたメスに比較して脂肪組織重量の有意な減少を示した（約６８％まで）（図２１に示す）。
【０１４１】
雄性ラットでの結果と同様に、血清グルコース値は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌処置群での動物に比較してＰｈｙｔｏ−６００給餌の雌性ラットでは８０または１１０日齢でわずかに（ただし有意に）高い（図２２に示される）。しかし、Ｔ３値は、１１０日齢のＰｈｙｔｏ−Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌動物に比較してＰｈｙｔｏ−Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたメスでは有意に高い（図２３に示す）。メスで生じるＴ３およびグルコースの値は、同じ食餌処置にさらされた雄性ラットで得られた値と極めて類似であり、従って、両方の性について同様の健康上の利点を示唆する。１００日齢で収集したサンプルは、雌性Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットで同様の結果を生じる（すなわち、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌対Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌の消費で体重および脂肪組織重量の有意な減少）（データ示さず）。
【０１４２】
（実施例９）
成体雌性ラットを、５０〜２１５日齢でＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌処置においた。５０日齢前は、ほぼＰｈｙｔｏ−２００ｐｐｍのイソフラボンを含む食餌で、または動物の供給業者によって用いられるのと同様の食餌で飼育してもよい。２１５日齢では、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌メスは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌されたメスよりも有意に軽く、これは、体重で約７％の低下に相当する（図２４に示す）。２１５日齢のＰｈｙｔｏ−６００給餌メスでの白色脂肪組織は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食事を給餌されたメスの白色脂肪組織に比較して約３０％まで有意に減少される（図２５に示す）。対応して、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌のメスでの血清レプチンの値は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌の値よりも有意に低かった（図２６に示す）。インスリン値は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌のメスに対してＰｈｙｔｏ−６００給餌において、前に示されるのと同様の程度まで減少したが、統計学的に有意差には達しなかった（図２７に示す）。
【０１４３】
（実施例１０）
本実施例は、成体の卵巣摘出（ＯＶＸ）ラットに対するＰｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌の効果を示す。ＯＶＸラットは、閉経後ヒト女性の十分に確立された動物モデルである。さらに、ＯＶＸは、ラットにおける発情行動を刺激するエストロゲンおよびプロゲステロンの皮下注射を可能にして、Ｐｈｙｔｏ−６００またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌の効果を決定する。成体の卵巣摘出ラットに、５０日齢まで約２００ｐｐｍのイソフラボンの植物エストロゲン（「Ｐｈｙｔｏ−２００」）を給餌する（全ての動物は、約４０日齢で卵巣摘出する）。この雌性ラットを、５０日齢で年齢および体重をマッチさせ、９４日齢まで２つの食餌処置とする：Ｐｈｙｔｏ−６００（黒のバー）またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ（白のバー）。ベースラインの体重を、５０日齢で量り、その後、その動物を食餌処置におき、再度、５８日（食餌処置の８日目）、９２日齢（エストラジオールの注射前）、および９４日齢（プロゲステロンの注射前、および９４日齢で６時間後（発情行動の化学的誘導後）に量る（図２８に示す）。
【０１４４】
８日間食餌を消費した後、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌ラットは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌に比較してわずかだが有意な体重の減少を示す（約７％）。体重のこの減少は、エストロゲンおよびプロゲステロン（ステロイド）注射による発情行動の化学的誘導の前および間に維持される。
【０１４５】
白色脂肪組織を、発情行動の化学的誘導後に９４日齢で測定して、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌ＯＶＸラットは、実施例９および１０の知見と一致して、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌ＰＶＸラットに比較してほぼ５０％少ない白色脂肪組織質量を有する（図２９に示す）。
【０１４６】
Ｐｈｙｔｏ−６００給餌ＯＶＸラットにおける血清レプチン値は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌ラットに比較してほぼ３０％まで減少し（図３０に示す）、これは白色脂肪組織質量の減少を反映している。
【０１４７】
（実施例１１）
雄性および雌性のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットは、５０日齢で供給業者から購入する。全ての動物をＰｈｙｔｏ−２００食餌で飼育する（受胎から５０日齢まで）。５０日齢で雄性および雌性のラットを、４つの食餌処置群のうちの１つに無作為に割り当てる：１）約５ｐｐｍ未満のイソフラボンを含むＡＩＮ−７６食餌、２）Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、３）Ｐｈｙｔｏ−２００、または４）Ｐｈｙｔｏ−６００食餌（前の実施例に記載される）。ＡＩＮ−７６食餌は、極めて低濃度のイソフラボンを含み、その処方物は他の３つの食餌と比較して全く異なる。例えば、スクロース含量は、極めて高く（総食餌処方物のほぼ５０％に達する）、ラットが通常の植物ベースの成分の食餌と同じように消費を楽しむことができない濃い白色の堅さを有する（すなわち、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌は、コーンおよびコムギを、極めて低レベルのイソフラボンを含むその処方物中で用いる）；Ｐｈｙｔｏ−２００またはＰｈｙｔｏ−６００食餌は、その処方物中に変動する量のダイズ粉を用いる。雄性ラットを、３５０日齢（ヒトでの中年に相当する）まで、その割り当てた食餌で飼育する。雌性ラットを、２７９日齢（ヒトの中年に達する）までこの食餌で飼育する。食物および水の摂取を測定して、体重変化に対するこれらのパラメータの潜在的な影響を決定する。いずれの場合にも、これらの要因は、イソフラボン含有食餌（すなわち、Ｐｈｙｔｏ−２００およびＰｈｙｔｏ−６００食餌；データ示さず）の消費での体重の減少には寄与しない。
【０１４８】
雄性（オス）
１１２日齢（約６２日間の食餌）で、体重を記録する（図３１に示す）。Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給されたオスは、最大の体重を有し、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌のオスは最低であったが、ＡＳ−７６およびＰｈｙｔｏ−２００食餌でのオスは、これらの２つの群の値の間におさまる。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌された体重は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌されたオスよりも約１４％まで有意に低い。
【０１４９】
対応して、２７９日齢および３５０日齢の雄性ラットは、１１２日齢で観察されたプロフィールと類似のプロフィールを有する（それぞれ、図３２および３３に示す）。Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給されたオスは、最重量の体重を示し、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたオスは、最低の体重を示したが、ＡＳ−７６およびＰｈｙｔｏ−２００食餌でのオスは、これらの２つの群の値の間におさまる。
【０１５０】
ＡＩＮ−７６給餌されたオスまたはＰｈｙｔｏ−Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌されたオスは、３５０日齢で測定して、最高の白色脂肪組織重量を示す。Ｐｈｙｔｏ−２００食餌でのオスは、ＡＩＮ−７６またはＰｈｙｔｏ−Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌ラットに比較して白色脂肪組織重量の１９％の有意でない減少を示す。Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたオスのラットは、ＡＩＮ−７６またはＰｈｙｔｏ−Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌ラットに比較して、有意に低い脂肪組織質量、約４０％の減少を有する（図３４に示す）。
【０１５１】
血清インスリンおよびレプチンのレベルは、それぞれ図３５および３６に示される、食餌処置におけるイソフラボンの漸増濃度の関数として有意に低下する。例えば、Ｐｈｙｔｏ−２００またはＰｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたオスは、ＡＩＢ−７６給餌オスに比較してインスリン値が有意に低下する。また、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌オスに比較してインスリン値の約５０％の低下を示し、血清レプチンプロフィールは、インスリンの結果と同様のパターンを示し、ここでＰｈｙｔｏ−２００またはＰｈｙｔｏ−６００給餌オスは、ＡＩＮ−７６またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌オスのいずれかに比較して血清インスリン値の有意な低下を有する。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスのインスリン値は、Ｐｈｙｔｏ−２００給餌オスに比較して４６％低い。しかし、これらの２つの食餌群の間の相違は、有意差には達しない（ｐ＜０．０６５）。
【０１５２】
雌性（メス）
雌性ラットにおける体重に対する４つの食餌処置の影響を決定するために、体重を１１２日齢および２７９日齢で測定する。１１２日齢では、Ｐｈｙｔｏ−ＦｒｅｅおよびＰｈｙｔｏ−２００食餌を供給されたメスは、最高の体重であって、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌されたメスは最低であったが、ＡＩＮ−７６食餌群は、図３７に示される、他の３群の値の間におさまる。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌群の体重は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌およびＰｈｙｔｏ−２００給餌雌性に比較して、約１０％有意に低い。
【０１５３】
２７９日齢で、雌性ラットは、食餌処置によって影響されるような体重の変化について年齢のマッチしたオスのプロフィールと類似のプロフィールを有する（図３８に示す）。Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給されたメスは、ＡＩＮ−７６またはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌群に比較して最低の体重を示す。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌メスでの体重におけるこの有意な減少は、試験された食餌処置群の間でほぼ１５％である。
【０１５４】
（実施例１２）
Ｎｏｂｌｅラットを用いて、近交系のラットが、非近交系のラット（例えば、イソフラボン豊富な食餌を与えた場合のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ動物）のものと類似の体重および脂肪性組織の変化を有するか否かを決定した。近親交配に起因して、Ｎｏｂｌｅラットは、より脆弱な動物である。例えば、妊娠は、出産まで同腹仔を常に担持するわけではなく、同腹仔は高頻度に小さい。Ｎｏｂｌｅラットは、２０年を超えて用いられている。なぜなら、それらは、特に生殖器官のホルモン依存性器官において、加齢とともに自然に腫瘍を発生するからである。従って、癌の研究の領域でＮｏｂｌｅラットは広範に研究されている（例えば、Ｒ．Ｌ．Ｎｏｂｌｅ、「Ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ Ｎｂ ｒａｔ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｈｏｒｍｏｎｅｓ」Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ，１９８２，２３：１１３〜１５９）。
【０１５５】
雄性および雌性のＮｏｂｌｅラットに、受胎から１４５日齢までＰｈｙｔｏ−ＦｒｅｅまたはＰｈｙｔｏ−６００食餌のいずれかを供給する。Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給された雄性ＮｏｂｌｅラットはＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を供給された年齢のマッチしたオスに比較して１４５日齢で体重が有意に低い（図３９に示す）。Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットで以前に観察されたとおり、体重の有意な減少は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌オスに比較して約８％というわずかだが一貫した低下を示す。さらに、白色脂肪組織量は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌に比較してＰｈｙｔｏ−６００給餌オスでは有意に低い（図４０に示す）。
【０１５６】
Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給された雌性Ｎｏｂｌｅラットは、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌されたメスに比較して体重の６％の減少がある（図４１に示す）。白色脂肪組織量は、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌を供給された雌性Ｎｏｂｌｅラットで顕著に低下した（図４２に示す）。Ｐｈｙｔｏ−６００食餌群は、Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ給餌ラットに比較して脂肪組織が６１％減少している。白色脂肪組織における低下は、Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットでみられた低下と同様である。
【０１５７】
（実施例１３）
Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌期間の開始前に、雄性Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットに、前の実施例に記載のとおりＰｈｙｔｏ−２００食餌を供給する。このラットを、約５２日齢までＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌を含む食餌で飼い、無作為に３つの群に割り当てる。全てのラットについてのＰｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ食餌での１４日後および２１日後のベースラインの体重は同様である（それぞれ図４３および図４４に示す）。７３日齢で開始して、ラットに毎日皮下注射の、０．１ｃｃビヒクル（ピーナツオイル）、ビククル中のエクオルの１ミリグラムのラセミ混合物（０．８３ｍｇ／体重１ｋｇ／１日）、またはビククル中のエクオルの５ミリグラムのラセミ混合物（４．２ｍｇ／体重１ｋｇ／１日）を３日ごとに１回与える。
【０１５８】
８０日齢および８８日齢では、コントロールに比較して両方のエクオル注射群でわずかな体重の減少および平均の体重の増大があるが、これらの値は、コントロールとは有意に異なることはない（それぞれ図４５および４６に示す）。
【０１５９】
動物が９５日齢および１０日齢になるまでに、体重はわずかに低下して、低下はエクオル処理群では５〜９％におよぶ（図４７および４８に示す）。しかし、９５日齢および１０１日齢の両方でエクオル注射動物における平均の体重増大は、コントロール値に比較して有意に低下する。体重の相違は有意ではなく、脂肪組織の蓄積は、エクオル処置群では顕著に低い。エクオルを注射された１０１日齢のラットにおける脂肪組織重量は、コントロールに比較して約３３％低下している（図４９に示す）。
【０１６０】
エクオル注射が雄性生殖器官に有害な影響を有するか否かを決定するために、精巣重量を、これらの動物で定量する。エクオル注射では精巣重量における有意な変化があり、精巣重量は、図５０に示される、注射処置群の間で本質的に同じである。
【０１６１】
（実施例１４）
５０日齢のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓのオスおよびメスを個々にカゴに入れ、１０時間暗野、１４時間明野のスケジュールで飼育する（１４００〜０４００が点灯）。動物を食餌群に無作為に割り当て、４つの食餌処置群の１つに自由にアクセスさせる：１）ＡＩＮ−７６、２）Ｐｈｙｔｏ−Ｆｒｅｅ、３）Ｐｈｙｔｏ−２００、または４）Ｐｈｙｔｏ−６００の食餌。ラットを中年（オスではほぼ３００日齢、メスではほぼ３３０日齢）までこの食餌で維持し、このとき動物を高架式十字迷路で試験し、不安関連行動を定量する。その後、血清の植物エストロゲン値を、Ｃｏｗａｒｄ Ｌら、Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ、４１：１９６１〜１９６７に記載の方法に従ってＧＣ／ＭＳによって定量する。不安の行動パターンを性別による食餌処置群の循環イソフラボンレベルの血清プロフィールに比較する。
【０１６２】
オスでは、不安関連行動の用量依存性の発現があって、最高濃度のイソフラボンを給餌された動物が最低の不安パラメータを示す。対照的に、ＡＩＮ−７６を給餌された動物は、最高レベルの不安を示す（図５１に示される）。オープン・アームで費やされる時間の割合を分析する場合、同様のパターンがオープン・アームへの進入回数のパターンに対してみられる。とりわけ、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌オスは、オープン・アーム中で経過する時間の最高が割合を示し、一方、オープン・アーム中で経過する時間の最低の割合を示すのは、ＡＩＮ−７６食餌を供給された動物であり、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅおよびＰｈｙｔｏ−２００の値は、用量依存性の様式でこれらの最大応答の間におさまっている（図５２に示す）。
【０１６３】
高架式十字迷路での試験前に、メスを１２連続日膣スミアでモニタリングして、発情周期の影響を最小限にする周期はないことを確証する。雌性ラットは、雄性ラットで観察されるのと同様の不安関連行動のパターンを有する。しかし、食餌性イソフラボンの影響は、オスでみられる影響ほど堅固ではない。オープン・アームに入る回数（図５３）および経過する時間（図５４）の最高の割合は、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌メスでみられ、ここでは進入の最低の割合がＡＩＮ−７６給餌メスでみられるまで、減少するという階段状パターンである。
【０１６４】
挙動試験が完了するとき、血清植物エストロゲン値を決定して、不安関連の行動のパターンと比較する。オス（図５５）およびメス（図５６）の両方で、循環イソフラボン値は、不安関連の挙動の発現に対応しており、循環イソフラボン分子と不安との間の関連を示す。これらのデータは、食餌のイソフラボン含量が不安に有意な影響を有し得ることを示す。
【０１６５】
（実施例１５）
成体雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットに、ＤＭＳＯ、ラセミのエクオル（０．２５０ｍｇ／Ｋｇ／日）、Ｒ−エクオル（０．２５０ｍｇ／Ｋｇ／日）、またはＳ−エクオル（０．２５０ｍｇ／Ｋｇ／日）のいずれかの毎日の注射を、総容積０．３ｃｃのＤＭＳＯ中で、皮下注射によって与える。処置の７連続日の終りに、不安関連行動を定量するために、動物を高架式十字迷路中で試験する。下の表５に示すとおり、ラセミのエクオルまたはＲ−エクオルを注射したオスは、コントロールのラットに比較して不安のレベルで有意な減少を示す。
【０１６６】
【表５】
＊＝コントロール値に対する不安関連パラメータ（すなわち、迷路時間の中心領域またはオープン・アーム中で経過する時間またはオープン・アーム進入の回数）の有意な低下
＊＊＝コントロール値に対する不安関連行動（すなわち、オープン・アーム進入の回数）の有意な低下
ｎ＝８（１群あたりの動物）。
【０１６７】
これらの知見は、異なる濃度のイソフラボンを含む４つの異なる処置を利用して得られた知見と一致しており、エクオルは、不安、ならびに他の神経学的状態、例えば、広範な健康上の利点について明白な能力を有する気分および抑うつを調節するのにおいて主要な因子であることを示す。
【０１６８】
（実施例１６）
高コレステロール血症を有する２９例の成体に、５週間毎日３３ｍｇの総イソフラボンを含む食餌を供給する。図５７は、イソフラボンを含む食餌に厳密に隣接している５週後の２９例の個体の各々についてのＢＭＩで観察された変化を示す。この期間にわたるＢＭＩ中の平均の低下は小さいが、それにもかかわらず有意である（ｐ＝０．０１）。これらの結果によって、植物エストロゲン豊富な食餌は、ヒトでのウエイトコントロールに影響し得ることが示唆される。この研究は、ウエイトコントロールを担う成分またはその機序を特定しなかった。平均のベースラインのＢＭＩ（ｎ＝２９）は２６．６±０．８であり、平均のＢＭＩ（ｎ＝２９）は５週で２６．２±０．７である。
【０１６９】
本発明の種々の実施形態を詳細に記載してきたが、本発明のさらなる改変および適合が当業者に生じることが明らかである。このような改変および適合は、本発明の趣旨および範囲内であることが明らかに理解されるべきである。
【０１７０】
（実施例１７）
エクオルは中年齢の雌性ラットで抑うつおよび体重を低下させる。
【０１７１】
イソフラボンは、心血管およびホルモン依存性の疾患に有益な影響を有することが示されているが、脳および行動特に抑うつおよび絶望などの行動に対する影響についてはほとんど知られていない。この研究では、中年齢のＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ雌性ラットをこの文脈で試験した。
【０１７２】
げっ歯類における年齢に関連する形態学的および生理学的変化は、以下の年齢範囲を用いてヒトに等価である：中年齢のラット（１０〜１２ヶ月の年齢）は、４５〜５５歳までのヒトにほぼ相当するが、高齢のラット（２１〜２３ヶ月齢）は、ほぼヒトの６５〜７５歳齢に相当する（Ｄ．Ｍｉｌｅｕｓｎｉｃら、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ，２０：１９〜３５，１９９９）。さらに、中年齢のラット（１２ヶ月齢）は、約５５歳齢の閉経後の女性の年齢に相当する。米国における閉経の平均年齢は、ほぼ５１歳齢である（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，ＵＳＡ）。
【０１７３】
この研究での全ての雌性ラットを、発情周期の特徴のホルモンパターンについて検査した。この研究の全ての動物は、この加齢動物モデルを用いる科学的報告と一致して循環はしない（Ｃ．Ｒ．Ａｎｚａｌｏｎｅら、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ，６４：１０５６〜１０６２，２００１）。
【０１７４】
雌性ラットを、植物エストロゲン豊富（Ｐｈｙｔｏ−６００）または植物エストロゲンなし（Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅ）の食餌のいずれかに暴露した（受胎の時から）。
【０１７５】
１２ヶ月齢で、標準的な前臨床試験であるＰｏｒｓｏｌｔ強制水泳試験（抑うつの、および抗うつ剤の作用の神経生物学を検討するためヒトに対して適用）を用いて動物を分析した（Ｒ．Ｄ．Ｐｏｒｓｏｌｔ，Ｍ．ＰｉｃｈｏｎおよびＭ．Ｊａｌｆｒｅ，Ｎａｔｕｒｅ ２６６：７３０〜７３２，１９９７；およびＭ．Ａ．Ｇｅｙｅｒ＆Ａ．Ｍａｒｋｏｕ，ｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｆｏｕｒｔｈ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，第７８７〜７９８頁、１９９５）。
【０１７６】
試験は、ラットが活発に泳ぐように強制するように設計する。経時的に、いくつかの動物は不動になり得、これは行動上の絶望の状態とみなされる。動物が不動である総時間は、絶望または抑うつの指数である。他のパラメータとしては以下が挙げられる：ａ）移動の総距離、ｂ）移動総時間（不動指数の反対）、ｃ）逃避行動を示す動物の潜水企図の回数、およびｄ）情動的なレベルの指標である試験の間に排出された排便またはボリの数（Ｃ．Ｓ．Ｈａｌｌ，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｐｓｙｃｈ．，１８：３８５〜４０３，１９３４）、試験中のボリ数の増大は、情動的行動の強調を示す。これらのパラメータの全てを、この研究で記録し、ＡｎｙＭａｚｅ（登録商標）コンピュータソフトウェアによって定量し、Ｐｏｒｓｏｌｔ強制水泳試験の総時間は、４８０秒または８分であった。
【０１７７】
従って、総移動距離、移動時間ならびに不動および排出されるボリの数についての減少を伴う、潜水のレベルの増大を示す動物は、低レベルの絶望または抑うつを示す。上記パラメータに反対する行動を示す動物は、絶望または抑うつのレベルの増大を示す。
【０１７８】
動物を２回試験した。
【０１７９】
試験１は、図５８〜６９に示され、「エクオル注射前」と表示される、食餌暴露のみを比較した。
【０１８０】
試験の第二段階では、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅ給餌メスに、８日間にわたってエクオルを注射し（皮下投与によって、５ｍｇ／ｋｇまたは２．５ｍｇ／ｋｇで）、一方、Ｐｈｙｔｏ−６００給餌メスには、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）ビヒクルコントロール注射を与えた。（ＤＭＳＯは、皮膚および他の膜を通じて、それらを損傷することなく深く浸透する能力、および循環中に化合物を担持する能力に起因して医薬において用いられている）。
【０１８１】
試験２は、図５８〜６９において示され、「エクオル注射後」と表示される、エクオル処置後の抑うつ行動を評価した。
【０１８２】
第１のＰｏｒｓｏｌｔ試験では−表示Ａ：Ｐｈｙｔｏ−６００給餌メスでは、以下が有意に大きいことが示された：ａ）移動距離（ｍ）、（図５８Ａを参照のこと）；ｂ）全体の平均速度（ｍ／秒）、（図５９Ａを参照のこと）；ｃ）総移動時間（秒）、図６０Ａを参照のこと；およびｄ）Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅのメスに比較した潜水回数（図６１Ａを参照のこと）。逆に、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅのメスでは、Ｐｈｙｔｏ−６００メスに比較して以下が有意に大きいことが示された：ａ）総移動時間（秒）（図６２Ａを参照のこと）、およびｂ）排泄ボリ（図６３Ａを参照のこと）。
【０１８３】
８日間のエクオル処置の後、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅのメスは、上記で試験された全てのパラメータについてＰｈｙｔｏ−６００メスによって示されるものと同様の値を示した。例えば、ａ）総移動距離が増大されコントロールの値と同様であった（図５８Ｂを参照のこと）；ｂ）平均速度の増大もコントロールと同様であった（図５９Ｂを参照のこと）；ｃ）ともなって、総移動時間の増大（図６０Ｂを参照のこと）（エクオル注射前値と比較してエクオル注射後のＰｈｙｔｏ−ｆｒｅｅラットで有意に増大した総移動時間（＊＊を参照のこと））；ｄ）潜水の回数は、有意に低下して、コントロールのレベルに匹敵した（図６１Ｂを参照のこと）。さらに、総移動時間は、有意に減少してコントロールと同様であった（図６２Ｂを参照のこと）。最終的に、図６３Ｂに図示されるとおり、ボリの数は、エクオル処置後に減少して、これはコントロールの値のものと本質的に同じであった。
【０１８４】
また、８日のエクオル処置の終りの平均体重低下（グラム数）によって、エクオルはコントロールに比較して有意に体重を減少させたことが明らかになり（表６を参照のこと）、これは、８日の処置間隔後のコントロールを超える体重の２．６倍の減少に相当している。
【０１８５】
（表６．エクオルで処置された中年齢の雌性Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットにおける体重減少）
【０１８６】
【表６】
＊＝エクオル処置した中年齢の雌性ラット対コントロールにおける体重の有意な減少値（ＳＥＭ＝平均の標準誤差）。
【０１８７】
これらのデータによって、エクオルに対する暴露（短期暴露を含む）は、中年齢の雌性ラットにおいて有益な抗うつ効果を有することが示唆される。Ｐｈｙｔｏ−６００給餌動物でみられる正の抗不安パラメータは、イソフラボン（ダイズ）富化された食餌（次に、これらのラットにおいてエクオルに変換される）を消費することに起因すると考えられる。ラットがダイズ富化食餌（すなわち、Ｐｈｙｔｏ−６００食餌）を供給された場合非常に高レベルのエクオルを生成するということ、および循環するイソフラボン／イソフラボン代謝物のレベルのほとんど（全体の７０〜９０％）が、エクオルによって示されるということは十分確証されている。注目すべきは、エクオルが、Ｐｈｙｔｏ−ｆｒｅｅ食餌を供給された中年齢の雌性ラットに（短期間）投与された場合、全てのＰｏｒｓｏｌｔ試験抑うつパラメータ（図５８〜６３のＢに示す）は、逆転されて、Ｐｈｙ−６００群と同様であった。これらのデータセットは、Ｐｈｙｔｏ−６００およびＰｈｙｔｏ−ｆｒｅｅ動物が、それ自体コントロール（エクオル注射前および後）として役立つという事実によって強化される。従って、この研究の結果によって、エクオル単独が、抑うつ様の行動を有意に軽減するという正の効果の全てまたは少なくともほとんどを占めるということが示される。エクオルの使用は、それ自体で、潜在的な食物、栄養および薬学的適用によって気分、絶望および抑うつ関連行動を防ぐのにかなりの見込みがある。
【０１８８】
（実施例１８）
成体雄性ラットにおいてエクオルは不安関連の行動および体重を低下するが、ホルモン感受性の脳領域は変化させない
視床下部の構造、例えば、雌雄二形的核（ＳＤＮ）および前腹側周核（ａｎｔｅｒｉｏｖｅｎｔｒｏｐｅｒｉｖｅｎｔｉｃｕｌａｒ ｎｕｃｌｅｕｓ）（ＡＶＰＶ）は、ラットにおいて出生時およびその後の出生後の発達の間のステロイドホルモンの影響に感受性である生殖機能／調節性行動に関与する重要な領域である。ＳＤＮおよびＡＶＰＶの構造が、成体ラットにおけるイソフラボン影響に感受性であることが以前に示されており、一般には多くの報告が、植物エストロゲンが神経保護的であることを実証している（Ｅ．Ｄ．Ｌｅｐｈａｒｔら、Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，８５：２９９〜３０９，２００３；Ｅ．Ｄ．Ｌｅｐｈａｒｔら、Ｃｕｒｒ．Ｎｅｕｒｏｖａｓ．Ｒｅｓ．，１：４５５〜４６４，２００４；およびＬ．Ｂｕ＆Ｅ．Ｄ．Ｌｅｐｈａｒｔ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，３８５：１５３〜１５７，２００５）。しかし、げっ歯類（および多くの他の動物モデル）中の主なイソフラボン代謝物であるエクオルは、脳研究において検査されている。
【０１８９】
本研究では、不安関連行動を、エクオルに暴露された成体Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓ雄性ラットにおけるホルモンレベルとともに検査した。ヒトでの精神医学的障害についての公知のかつ受容された動物の行動試験、例えば、高架式十字迷路（ＥＰＭ）をこの目的に用いた（Ｐ．Ｗｉｌｌｎｅｒ，ｉｎ Ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ，Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，１９９１；Ｍ．Ａ．Ｇｅｙｅｒ＆Ａ．Ｍａｒｋｏｕ，ｉｎ Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｆｏｕｒｔｈ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ，ＮＹ，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，７８７〜７９８，１９９５；およびＲ．Ｈｉｔｚｅｍａｎｎ，Ａｌｃｏｈｏｌ＆Ｒｅｓ．Ｈｅａｌｔｈ，２４：１４９〜１５８，２０００）。
【０１９０】
ＥＰＭ試験は、新規な環境の探索と、その嫌悪的な特徴の回避との間の固有の葛藤に依拠する。代表的には、動物は、迷路のクローズド・アーム（安全な環境）に比較してオープン・アーム（新しい環境）でわずかな時間を過ごし、かつそこへの進入は少ない。例えば、抗不安剤または薬物は、迷路のオープン・アームに入る回数および経過する総時間を増大する。
【０１９１】
５０日齢の雄性ラットに植物エストロゲンの少ない食餌を与え（１０ｐｐｍのイソフラボン）、２１５日齢までこの食餌のままとした。１５０日齢で、ラットの年齢および体重をマッチさせ、次いでコントロールまたはエクオル処置群に分けた。１９０日で開始して、雄性ラットには毎日皮下（０．１ｃｃ）注射のコントロールのビヒクル（ＤＭＳＯ）またはエクオル（２．５ｍｇ／Ｋｇ）を２５連続日与えた。
【０１９２】
処置の１５日後、動物をＥＰＭで試験し、ここでは３分間ビデオテープに撮って、ＡｎｙＭａｚｅ（登録商標）コンピュータソフトウェアを介して、オープン・アームへの進入の回数およびオープン・アーム上で経過する総時間の割合について後で記録した。
【０１９３】
２１５日齢で、動物を屠殺して、体重／前立腺重量、血清ホルモンおよびイソフラボンの値を決定し、それとともに、ホルモンに感受性である視床下部領域の容積を決定する。
【０１９４】
コントロール値に比較したエクオル処理雄性ラットにおける血清テストステロン、黄体形成ホルモン（ＬＨ）または１７β−エストラジオール値の変化をともなう、前立腺重量および５α−ＤＨＴにおける有意な減少が、米国特許公開番号２００５／０２４５４９２Ａ１（その内容がその全体が参照によって組み込まれる）において以前に報告された。
【０１９５】
脳を、標準的な染色を介して処理して、処置によって形態学的なＳＤＮおよびＡＶＰＶのパラメータについてＢｉｏｑｕａｎｔ（登録商標）を介して分析した。エクオル処置動物における血清エクオル値は、植物エストロゲン豊富なダイズ食餌を消費するのと等価であった。
【０１９６】
図６４に示されるとおり、体重はコントロールの動物に比較してエクオル処置オスでは有意に減少された。ＥＰＭでは、エクオル処置動物は、コントロールの値に比較して有意に低い不安関連行動を示した（すなわち、迷路のオープン・アームへの進入回数およびオープン・アームで経過する時間がコントロールに対して有意に大きかった）（それぞれ、図６５および図６６を参照のこと）。
【０１９７】
２５日連続のエクオルに対する暴露ではＳＤＮまたはＡＶＰＶの容積的形態計測的パラメータにおいて有意な変化は見られなかった（図６７および表７を参照のこと）。
【０１９８】
これらの結果によって、エクオルは、成体期の間のげっ歯類においてホルモン感受性の視床下部容積を変化させないということが示唆されており、これは、本発明者らの研究室で以前に報告された等価な暴露間隔の間の食餌経路を介するダイズ（植物エストロゲン）の消費とは反対である。このことはさらに、エクオルが、安全かつ非毒性の薬剤であり得、脳／行動の障害および男性／女性の健康問題に取り組む潜在的な神経の適用を有するということを示唆する。最終的に、これらのデータによって、栄養食品、栄養補助食品、または薬剤適用中のエクオルの存在が、ウエイトコントロールにおける有効な処置であって、不安を調節または軽減するということが示唆される。
【０１９９】
（表７：エクオルで処置した雄性ラットの視床下部構造−雌雄二形的核（ＳＤＮ）および前腹側周核（ＡＶＰＶ）の形態学的容積（ｍｍ３×１０−３で表現））
【０２００】
【表７】
局所の脳容積は、ｍｍ３×１０−３で表した。処置群の間にＳＤＮまたはＡＶＰＶにおいて有意な差はなかった（１群あたりｎ＝４）。
【０２０１】
（実施例１９）
エクオルは、成体として試験された雄性ラット子孫における閉経前および閉経後早期の処置を介した不安レベルの減少においてゲニステインに比較して強力である。
【０２０２】
近年では、イソフラボンは、癌（乳癌および前立腺癌）、心血管疾患、骨粗鬆症および閉経期に関連する症状に関して有益な健康上の利点を有すると報告されている。しかし、脳に対するイソフラボンの影響、特に不安などの行動についてはわずかな情報しか知られていない。この研究では、ゲニステインおよびエクオル（イソフラボン代謝物）の長期効果を、ＥＰＭにおいて成体として試験された雄性の子孫における不安関連の行動に影響する能力について検査した。
【０２０３】
妊娠Ｌｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラットを、妊娠の１４日〜２０日、および出生後２〜２５日の授乳の間、毎日皮下注射を介して処置し、ここでは１）コントロール−ＤＭＳＯビヒクル、または２）ゲネステイン（３ｍｇ／日で）、または３）エクオル（処置群に応じて３ｍｇ／日で）であった。全ての動物にこれらの研究を通じて植物エストロゲンの低い食餌を供給した（１０ｐｐｍイソフラボン）。処置群の中で誕生の直前に母体の体重に有意な相違が無かった。出生時、体重は、コントロールに比較してゲニステイン処置およびエクオル処置動物においてわずかに高かった（ただし有意ではない）。母親のおよび雄性の子孫のゲニステインおよびエクオルのレベル（出生後２５日で）は、投与される処置のレベルに並行していた。
【０２０４】
約９０日齢の雄性子孫を、ＥＰＭ中での処置（コントロール、ゲニステインおよびエクオル）によって試験し、ここでは３分間ビデオテープに撮って、前に記載されたとおり、オープン・アームへの進入の回数およびオープン・アーム上で経過する総時間の割合について後で記録した。図６８に図示されるとおり、エクオル処置オスは、コントロールに比較してオープン・アームへの有意に大きい進入を示した。しかし、オープン・アームへの進入は、ゲニステインとコントロール群との間で有意に異なることはなかった。特に、図６９に示されるとおり、エクオル処置オスは、ゲニステイン処置動物またはコントロールに比較してオープン・アーム中で有意に大きい時間を示した。また、ゲニステイン処置オスは、コントロールに比較して有意に大きいオープン・アーム時間間隔を示した。エクオルの時間間隔は、ゲニステイン値よりも２倍大きく、かつゲニステイン値はコントロールよりも約９倍大きかった。
【０２０５】
これらのデータによって、以下が示唆される：１）エクオルは、ゲニステインに比較してさらに強力な抗不安剤である、そして２）イソフラボン代謝物であるエクオルは、出生前に処置された成体として試験された子孫の不安関連行動に対して、長期影響を有する。この実験の知見によって、ゲニステインではなく循環のエクオルの値におそらく起因している抑うつ関連行動を軽減するための上記の実施例１７でみられるエクオルの正の効果が確証される。この研究の結果は、種々の投与経路により食品、栄養および不安の医薬品調節に適用を有する。
【０２０６】
従って、前述の詳細な説明は、限定ではなく例示とみなされることを意図しており、これは本発明の趣旨および範囲を規定することを意図する、全ての等価物を含む、以下の特許請求の範囲であることが理解される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験体における神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させる方法であって：
該神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させるのに十分な量でエクオルを含む組成物を投与すること
を包含する方法。
【請求項２】
前記エクオルがＲ−エクオルとＳ−エクオルとのラセミ混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記エクオルがＲ−エクオルで鏡像異性的に富化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記エクオルがＳ−エクオルで鏡像異性的に富化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害が、抑うつ、不安、双極性障害、強迫性障害、多動性障害、恐慌性障害、体重増加、肥満または過食症である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害が、アルツハイマー病またはパーキンソン病である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が、錠剤、カプセル、粉末、トローチ、バッカル錠および舌下錠からなる群より選択される経口処方物中にある、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が少なくとも約０．２５ｍｇのエクオルを含む経口処方物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物が食物および飲料からなる群より選択される請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物が遅延性または徐放性の処方物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害が、閉経周辺期または閉経後症状である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記閉経周辺期または閉経後症状が、抑うつ、不安、疲労、体重増加、肥満および多嚢胞卵巣疾患である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記エクオルが、遊離５α−ジヒドロテストステロンと結合し、そしてアンドロゲン受容体との結合を阻害するのに十分な量である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記エクオルが、遊離５α−ジヒドロテストステロンと結合し、アンドロゲン受容体との結合を阻害し、そしてエストロゲン受容体サブタイプと結合するのに十分な量である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する、被験体における肥満を軽減する方法。
【請求項１７】
治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する、被験体における抑うつを軽減する方法。
【請求項１８】
治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する、被験体における不安を軽減する方法。
【請求項１９】
被験体における神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害の個人的な処置を提供する方法であって：
患者の情動、精神または内分泌の健康状態を評価する工程と；
患者のエクオルプロデューサ状態を評価する工程と；
ａ）投与方式、ｂ）投与量、およびｃ）投与間隔からなる群より選択される、治療の最適に有益な経過を決定する工程と
を包含する方法。
【請求項１】
被験体における神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させる方法であって：
該神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害を予防または寛解させるのに十分な量でエクオルを含む組成物を投与すること
を包含する方法。
【請求項２】
前記エクオルがＲ−エクオルとＳ−エクオルとのラセミ混合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記エクオルがＲ−エクオルで鏡像異性的に富化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記エクオルがＳ−エクオルで鏡像異性的に富化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害が、抑うつ、不安、双極性障害、強迫性障害、多動性障害、恐慌性障害、体重増加、肥満または過食症である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害が、アルツハイマー病またはパーキンソン病である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物が、錠剤、カプセル、粉末、トローチ、バッカル錠および舌下錠からなる群より選択される経口処方物中にある、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物が少なくとも約０．２５ｍｇのエクオルを含む経口処方物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記組成物が食物および飲料からなる群より選択される請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物が遅延性または徐放性の処方物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害が、閉経周辺期または閉経後症状である、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記閉経周辺期または閉経後症状が、抑うつ、不安、疲労、体重増加、肥満および多嚢胞卵巣疾患である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記エクオルが、遊離５α−ジヒドロテストステロンと結合し、そしてアンドロゲン受容体との結合を阻害するのに十分な量である、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記エクオルが、遊離５α−ジヒドロテストステロンと結合し、アンドロゲン受容体との結合を阻害し、そしてエストロゲン受容体サブタイプと結合するのに十分な量である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する、被験体における肥満を軽減する方法。
【請求項１７】
治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する、被験体における抑うつを軽減する方法。
【請求項１８】
治療有効量のエクオルを含む組成物を投与することを包含する、被験体における不安を軽減する方法。
【請求項１９】
被験体における神経精神医学的または神経変性的な疾患または障害の個人的な処置を提供する方法であって：
患者の情動、精神または内分泌の健康状態を評価する工程と；
患者のエクオルプロデューサ状態を評価する工程と；
ａ）投与方式、ｂ）投与量、およびｃ）投与間隔からなる群より選択される、治療の最適に有益な経過を決定する工程と
を包含する方法。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１２Ｃ】
【図１２Ｄ】
【図１２Ｅ】
【図１２Ｆ】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６２】
【図６３】
【図６４】
【図６５】
【図６６】
【図６７】
【図６８】
【図６９】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６Ａ】
【図６Ｂ】
【図７】
【図８Ａ】
【図８Ｂ】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１２Ｃ】
【図１２Ｄ】
【図１２Ｅ】
【図１２Ｆ】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６２】
【図６３】
【図６４】
【図６５】
【図６６】
【図６７】
【図６８】
【図６９】
【公表番号】特表２０１０−５０１４８５（Ｐ２０１０−５０１４８５Ａ）
【公表日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５２４５８９（Ｐ２００９−５２４５８９）
【出願日】平成１８年８月１８日（２００６．８．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３２３８７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０２０８５３
【国際公開日】平成２０年２月２１日（２００８．２．２１）
【出願人】（５９２０８７６４７）ブリガム・ヤング・ユニバーシティ (34)
【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＧＨＡＭ ＹＯＵＮＧ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
【出願人】（５９２２４６５８７）コロラド ステート ユニバーシティー リサーチ ファウンデーション (17)
【出願人】（５００４６９２３５）チルドレンズ ホスピタル メディカル センター (40)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年８月１８日（２００６．８．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０３２３８７
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０２０８５３
【国際公開日】平成２０年２月２１日（２００８．２．２１）
【出願人】（５９２０８７６４７）ブリガム・ヤング・ユニバーシティ (34)
【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＧＨＡＭ ＹＯＵＮＧ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ
【出願人】（５９２２４６５８７）コロラド ステート ユニバーシティー リサーチ ファウンデーション (17)
【出願人】（５００４６９２３５）チルドレンズ ホスピタル メディカル センター (40)
【Ｆターム（参考）】
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