本発明は、細胞においてパーフォリンの発現を駆動できるレトロウイルスベクター、および、細胞において組換えパーフォリンを発現する方法に関する。本発明はまた、組換えパーフォリンポリペプチドおよびそれから得られる核酸分子並びにその使用にも関する。また、このような組換えパーフォリン分子を使用するスクリーニングアッセイ、該スクリーニングアッセイにより同定された化合物、およびその使用も包含される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現を駆動できるレトロウイルスベクターでトランスフェクトされた宿主細胞において、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現を駆動できる前記レトロウイルスベクター。
【請求項２】
パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種をコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項３】
モロニーネズミ白血病ウイルス、ネズミ幹細胞ウイルス、脾臓壊死ウイルス、ラウス肉腫ウイルス、ハーベイ肉腫ウイルス、トリ白血病ウイルス、テナガザル白血病ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、アデノウイルス、骨髄増殖性肉腫ウイルス、および乳癌ウイルスを含む群に由来する、請求項１または２に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項４】
ネズミ幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）に由来する、請求項３に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項５】
ｐＬＸＳＮである、請求項４に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項６】
前記パーフォリン分子が、天然パーフォリン分子である、請求項１〜５のいずれか１項に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項７】
前記変種が、核酸の欠失、挿入および／または置換を含むポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項１〜６のいずれか１項に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項８】
前記変種が、血球貪食リンパ組織球症（ＨＬＨ）および／または家族性血球貪食リンパ組織球症（ＦＨＬ）に罹患した個体において同定されるポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項７に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項９】
前記変種が、ＦＨＬに罹患した個体において同定されるポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項８に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１０】
前記変種は、
【表１】


を含む群から選択される変異を含むポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項７に記載のレトロウイルスベクター。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のレトロウイルスベクターを含むパッケージング細胞。
【請求項１２】
ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＴＥ６７１、ＨＴ１０８０、ＰＧ１３（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１０６８６）、ＰＧ１３／ＬＮｃ８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１０６８５）、ＰＡ３１７（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−９０７８）、米国特許第５，２７８，０５６号に記載の細胞株、ＧＰ＋Ｅ−８６（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−９６４２）、ＧＰ＋ｅｎｖＡｍ−１２（ＡＴＣＣ ＣＲＬ−９６４１）、２９３Ｔ、ＰＥ５０１、ＰＡ３１７．psi．−２、．psi．−ＡＭ、ＰＡ１２、Ｔ１９−１４Ｘ、ＶＴ−１９−１７−Ｈ２、．psi．ＣＲＥ、．psi．ＣＲＩＰ、ＧＰ＋Ｅ−８６、およびＧＰ＋ｅｎｖＡｍ１２を含む群より選択される、請求項１１に記載のパッケージング細胞。
【請求項１３】
ＨＥＫ２９３細胞である、請求項１２に記載のパッケージング細胞。
【請求項１４】
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞である、請求項１３に記載のパッケージング細胞。
【請求項１５】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のレトロウイルスベクターを含むレトロウイルス粒子。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれか１項に記載のレトロウイルスベクターでトランスフェクトされた細胞。
【請求項１７】
胚幹細胞、胚癌細胞、造血幹細胞、肝細胞、線維芽細胞、筋芽細胞、ケラチン生成細胞、内皮細胞、気管支上皮細胞、および免疫細胞を含む群より選択される、原核細胞または真核細胞である、請求項１６に記載の細胞。
【請求項１８】
前記免疫細胞は、好塩基球、好酸球、リンパ球、好中球、単球、およびナチュラルキラー細胞を含む群より選択される、請求項１５に記載の細胞。
【請求項１９】
好塩基球である、請求項１８に記載の細胞。
【請求項２０】
ラット好塩基性白血病（ＲＢＬ）細胞である、請求項１９に記載の細胞。
【請求項２１】
パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種を発現させる方法であって、前記方法は、細胞を、請求項１〜１０のいずれか１項に記載のレトロウイルスベクターでトランスフェクトすることを含む、前記方法。
【請求項２２】
パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種を発現させる方法であって、前記方法は、細胞を、請求項１５に記載のレトロウイルス粒子にさらすことを含む、前記方法。
【請求項２３】
前記パーフォリン分子が、天然パーフォリン分子である、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記変種が、核酸の欠失、挿入および／または置換を含むポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記変種が、血球貪食リンパ組織球増多症（ＨＬＨ）および／または家族性血球貪食リンパ組織球増多症（ＦＨＬ）に罹患した個体において同定されるポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記変種が、ＦＨＬに罹患した個体において同定されるポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記変種が、
【表２】


を含む群より選択される変異を含むポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
前記細胞が、胚幹細胞、胚癌細胞、造血幹細胞、肝細胞、線維芽細胞、筋芽細胞、ケラチン生成細胞、内皮細胞、気管支上皮細胞、および免疫細胞を含む群より選択される、原核細胞または真核細胞である、請求項２１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記免疫細胞が、好塩基球、好酸球、リンパ球、好中球、単球、およびナチュラルキラー細胞を含む群より選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記細胞が、好塩基球である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞が、ラット好塩基性白血病（ＲＢＬ）細胞である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
発現されたパーフォリン分子またはその断片もしくはその変種を単離するステップをさらに含む、請求項２１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法により産生される単離パーフォリン分子またはその単離断片もしくはその単離変種。
【請求項３４】
天然パーフォリン分子である、請求項３３に記載の単離パーフォリン分子。
【請求項３５】
前記変種が、核酸の欠失、挿入、および／または置換を含むポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項３３に記載の単離パーフォリン分子。
【請求項３６】
血球貪食リンパ組織球増多症（ＨＬＨ）および／または家族性血球貪食リンパ組織球増多症（ＦＨＬ）に罹患した個体において同定されるポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項３５に記載の単離変種パーフォリン分子。
【請求項３７】
ＦＨＬに罹患した個体において同定されるポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項３６に記載の単離変種パーフォリン分子。
【請求項３８】
【表３】


を含む群より選択される変異を含むポリヌクレオチド配列によりコードされる変異パーフォリン分子である、請求項３５に記載の単離変種パーフォリン分子。
【請求項３９】
パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現をモデュレートする化合物を同定する方法であって、前記方法は、
請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の細胞を得；
前記細胞を試験化合物にさらし；そして
前記試験化合物が、細胞において、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現をモデュレートするかどうかを決定する
ステップを含む、前記方法。
【請求項４０】
前記試験化合物が、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現をモデュレートするかどうかの決定は、前記細胞におけるパーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現を、前記試験化合物にさらしていない細胞におけるパーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現と比較するステップを含む、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性をモデュレートする化合物を同定する方法であって、前記方法は、
請求項３３〜３８のいずれか１項に記載の、単離パーフォリン分子またはその単離断片もしくはその単離変種を得；
前記単離パーフォリン分子またはその単離断片もしくはその単離変種を、試験化合物および標的細胞にさらし；そして
前記試験化合物が、標的細胞に対する、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性をモデュレートするかどうかを決定する
ステップを含む、前記方法。
【請求項４２】
パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性をモデュレートする化合物を同定する方法であって、前記方法は、
パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種を発現する、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の細胞を得；
前記細胞を、試験化合物および標的細胞にさらし；そして
前記試験化合物が、標的細胞に対する、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性をモデュレートするかどうかを決定する
ステップを含む、前記方法。
【請求項４３】
前記試験化合物が、標的細胞に対する、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性をモデュレートするかどうかを決定するステップが、標的細胞に対するパーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性を、前記試験化合物にさらさらない場合の標的細胞に対するパーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性と比較するステップを含む、請求項４１または４２に記載の方法。
【請求項４４】
標的細胞に対する、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性が、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種が標的細胞を溶解する能力として同定される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
請求項３９〜４４のいずれか１項に記載の方法により同定される化合物。
【請求項４６】
前記化合物が、細胞においてパーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現を阻害できる、請求項３９または４０に記載の方法により同定される化合物。
【請求項４７】
前記化合物が、細胞においてパーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現を増加させることができる、請求項３９または４０に記載の方法により同定される化合物。
【請求項４８】
前記化合物が、細胞に対する、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性を阻害することができる、請求項４１〜４４のいずれか１項に記載の方法により同定される化合物。
【請求項４９】
前記化合物が、細胞に対する、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性を増強することができる、請求項４１〜４４のいずれか１項に記載の方法により同定される化合物。
【請求項５０】
細胞においてパーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現を阻害する方法であって、前記方法は、前記細胞を、請求項４６に記載の化合物にさらすことを含む、前記方法。
【請求項５１】
細胞において、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の発現を増加させる方法であって、前記方法は、前記細胞を、請求項４７に記載の化合物にさらすことを含む、前記方法。
【請求項５２】
細胞に対する、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性を阻害する方法であって、前記方法は、前記細胞を、請求項４８に記載の化合物にさらすことを含む、前記方法。
【請求項５３】
細胞に対する、パーフォリン分子またはその断片もしくはその変種の活性を増強する方法であって、前記方法は、前記細胞を、請求項４９に記載の化合物にさらすことを含む、前記方法。
【請求項５４】
請求項３３〜３８のいずれか１項に記載のパーフォリン分子またはその断片もしくはその変種と、薬学的に許容されうる担体、賦形剤、希釈剤、および／または補助剤とを含む、医薬組成物。
【請求項５５】
請求項４６に記載の化合物と、薬学的に許容されうる担体、賦形剤、希釈剤、および／または補助剤とを含む、医薬組成物。
【請求項５６】
請求項４７に記載の化合物と、薬学的に許容されうる担体、賦形剤、希釈剤、および／または補助剤とを含む、医薬組成物。
【請求項５７】
請求項４８に記載の化合物と、薬学的に許容されうる担体、賦形剤、希釈剤、および／または補助剤とを含む、医薬組成物。
【請求項５８】
請求項４９に記載の化合物と、薬学的に許容されうる担体、賦形剤、希釈剤、および／または補助剤とを含む、医薬組成物。
【請求項５９】
パーフォリンの望ましくない発現および／または活性を伴う疾患のリスクがあるか、あるいは前記疾患に感受性があるか、あるいは前記疾患を有する被験者を予防的または治療的に処置する方法であって、前記方法は、前記被験者に、治療有効量の請求項４６または４８に記載の化合物を投与するステップを含む、前記方法。
【請求項６０】
パーフォリンの望ましくない発現および／または活性を伴う疾患のリスクがあるか、あるいは前記疾患に感受性があるか、あるいは前記疾患を有する被験者を予防的または治療的に処置する方法であって、前記方法は、前記被験者に、治療有効量の請求項４７または４９に記載の医薬組成物を投与するステップを含む、前記方法。
【請求項６１】
前記疾患が、若年性糖尿病（１型又はインスリン依存性）、移植片対宿主疾患、慢性または急性の同種移植片拒絶、および細胞傷害性Ｔリンパ球により仲介される免疫病態に関連した疾患を含む群より選択される、請求項５９に記載の予防法または治療法。
【請求項６２】
前記疾患が、ウイルス感染（例えばヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）およびＣ型肝炎）、癌（例えばリンパ腫）、結核、およびパーフォリン欠損症を伴う容態（例えばＨＬＨおよびＦＬＨ）を含む群より選択される、請求項６０に記載の予防法または治療法。

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９Ａ】

【図２９Ｂ】

【図２９Ｃ】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【公表番号】特表２００７−５２６７７４（Ｐ２００７−５２６７７４Ａ）
【公表日】平成１９年９月２０日（２００７．９．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５０１０５７（Ｐ２００７−５０１０５７）
【出願日】平成１７年３月１日（２００５．３．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２００５／０００２９１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０８３０９８
【国際公開日】平成１７年９月９日（２００５．９．９）
【出願人】（５０４０５８５７０）ピーター・マッカラム・キャンサー・インスティテュート (2)
【氏名又は名称原語表記】ＰＥＴＥＲ　ＭＡＣＣＡＬＬＵＭ　ＣＡＮＣＥＲ　ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ
【Ｆターム（参考）】