老化抑制剤
【課題】老化に伴って生じる持久力低下、疲労及びエネルギー代謝の低下等の抑制に有効な医薬品、医薬部外品及び飲食品を提供すること。
【解決手段】カテキン類を有効成分とする老化抑制剤。
【解決手段】カテキン類を有効成分とする老化抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトその他の動物の老化に伴って生じる、持久力低下、疲労等の抑制に有効な老化抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
老化は生理学的老化と病的老化に大別される。生理学的老化は加齢に伴い必然的に起こる老化であり、毛髪、皮膚、眼、骨、脳等の変化、運動能力やエネルギー代謝の低下が生じる。近年、老化によるエネルギー代謝の低下にはミトコンドリアＤＮＡの変異や損傷といったミトコンドリア機能の低下が関係していることが言われている（非特許文献１）。
【０００３】
老化は遺伝的要因や環境的要因により進行するが、食事・運動といった生活習慣を始めとする環境的要因を改善することで遅らせることは可能であると考えられている。老化に伴う運動能力低下を防ぐ手段としては、特に高齢者の場合では適度な運動等を実践する、あるいはリハビリテーションを実践する等が挙げられるが、モチベーションの維持の困難さや怪我の恐れもあることから、安全性が高く、より効果的な方法が望まれていた。
【０００４】
身体的変化の老化を抑制しうる成分の探索は行われており、皮膚の老化抑制成分として、生体コラーゲン合成促進剤と異常タンパク質除去剤を含有する抗老化用組成物（特許文献１）、ニンジン葉部からの抽出物を有効成分とする抗老化剤（特許文献２）、わさび抽出物とイグサ抽出物を必須成分とする老化防止用組成物（特許文献３）等が開示されている。
また、テロメア短縮抑制成分として、マンネンタケの溶媒抽出物による細胞老化抑制剤（特許文献４）、また脳の老化抑制剤として、ココア及び／又はカカオマス（特許文献５）、有機ゲルマニウム化合物（特許文献６）、Ｌ−アルギニン、フォスファチジルセリン、ドコサヘキサエン酸、イチョウ葉又はイチョウ葉エキス、及びトコフェロール（特許文献７）が開示されている。
また、ミトコンドリア機能異常に起因する疾患における臨床症状発現の予防・治療用組成物としてＬ−アルギニン（特許文献８）が開示されている。
【０００５】
一方、老化によって生じる筋力や持久力の低下は日常の生活能力を低下させる。また、エネルギー代謝やミトコンドリア機能の低下はエネルギー摂取とエネルギー消費のアンバランスを引き起こし、肥満や糖尿病等の生活習慣病の原因となり得る。これらを防止することはクオリティオブライフ（ＱＯＬ）の向上といった観点から先進諸国において重要な課題として位置づけられている。
【０００６】
したがって、ＱＯＬを充実して健康寿命を延伸するためには、加齢に伴い生じる生理機能の低下、いわゆる老化を抑制すること、特に持久力を保つこと、疲労を抑制すること及びエネルギー代謝を高く維持すること、またミトコンドリア機能を向上することが重要である。
【０００７】
一方、緑茶、紅茶、カカオ豆等に含まれているカテキン類には、コレステロール上昇抑制作用（特許文献９）、血糖上昇阻害作用（特許文献１０）、動脈硬化防止作用（特許文献１１）、持久力向上作用（特許文献１２）、筋ジストロフィ抑制作用（非特許文献２）等、生理的な有益性があると報告されている。しかしながら、カテキン類が老化やミトコンドリア機能に及ぼす作用、特に加齢に伴う、持久力やエネルギー代謝の低下、疲労、ミトコンドリア機能の低下に及ぼす作用についてはこれまで全く知られていない。
【特許文献１】特開２００４−１１５４３８号公報
【特許文献２】特開２００４−５１５８０号公報
【特許文献３】特開２００６−６３０３８号公報
【特許文献４】特開２００３−１２５３９号公報
【特許文献５】特開平１１−４３４３２号公報
【特許文献６】特開２００３−２６１４５６号公報
【特許文献７】特開昭６０−１５６６１４号公報
【特許文献８】特開２００４−１８２７０５号公報
【特許文献９】特開昭−１５６６１４号公報
【特許文献１０】特開平４−２５３９１８号公報
【特許文献１１】特開平４−３５２７２６号公報
【特許文献１２】特開２００５−８９３８４号公報
【非特許文献１】岩波講座 現代医学の基礎, vol.１２, No.2, pp５５-５８, １９９９
【非特許文献２】Dorchies OM et al, AJP-Cell Physiol, vol.290, No.2, pp616-25, 2006
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝の低下等の抑制に有効な医薬品、医薬部外品及び飲食品を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
そこで、本発明者らは、種々検討した結果、カテキン類が老化に伴って生じる、持久力の低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等の諸機能の低下を抑制する作用を有し、老化抑制及びミトコンドリア機能向上効果を発揮する飲食品又は医薬品等として有用であることを見出した。
【００１０】
すなわち、本発明は、カテキン類を有効成分とする老化抑制剤を提供するものである。
また、本発明は、カテキン類を含有する老化抑制用飲食品を提供するものである。
また、本発明は、カテキン類の老化抑制剤としての使用を提供するものである。
また、本発明は、老化抑制剤の製造のためのカテキン類の使用を提供するものである。
また、本発明は、カテキン類を有効成分とするミトコンドリア機能向上剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の老化防止剤及びミトコンドリア機能向上剤は、食経験が豊富で副作用が少なく、長期投与又は摂取しても安全性が高いカテキン類を有効成分とするものであり、老化抑制効果、特に老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等の諸機能の低下を抑制する効果を発揮する飲食品や医薬品等として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明において、「老化抑制」とは、老化に伴って生じる生理的変化を抑制することをいい、当該生理学的変化には、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等が含まれる。具体的には、加齢、例えば３０代以降の中高年においてみられる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等を抑制することが挙げられる。
【００１３】
本発明におけるカテキン類とは、カテキン、カテキンガレート、ガロカテキン及びガロカテキンガレート等の非エピ体カテキン類、並びにエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート及びエピガロカテキンガレート等のエピ体カテキン類の総称であり、これらの一種以上を含有するのが好ましい。また、カテキン類は、非重合体であるのが好ましい。
【００１４】
本発明に使用するカテキン類は、一般的には茶葉から直接抽出すること、又はその茶抽出物を濃縮若しくは精製することにより得ることができるが、他の原料由来のもの、カラム精製品及び化学合成品でもあってもよい。
【００１５】
当該茶葉抽出は、Ｃａｍｅｌｌｉａ属、例えばＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃ．ａｓｓａｍｉｃａ、またはそれらの雑種から得られる茶葉より製茶された茶葉に、水や熱水、場合によってはこれらに抽出助剤を添加して抽出することにより行うことができる。また、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法を併用してもよい。
当該製茶された茶葉には、（１）煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜煎り茶等の緑茶類；（２）総称して烏龍茶と呼ばれる鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶等の半発酵茶；（３）紅茶と呼ばれるダージリン、ウバ、キーマン等の発酵茶が含まれる。
抽出助剤としては、アスコルビン酸ナトリウム等の有機酸又はこれら有機酸塩類が挙げられる
【００１６】
当該茶抽出物の濃縮は、上記抽出物を濃縮することにより行うことができ、当該茶抽出物の精製は、溶剤やカラムを用いて精製することにより行うことができる。茶抽出物の濃縮物や精製物の形態としては、固体、水溶液、スラリー状等種々のものが挙げられる。
例えば、当該茶抽出物（茶カテキンともいう。）は、特開昭59-219384号、特開平4-20589号、特開平5-260907号、特開平5-306279号等に詳細に例示されている方法で調製することができる。また、市販品を用いることもでき、斯かる市販品としては、三井農林（株）「ポリフェノン」、（株）伊藤園「テアフラン」、太陽化学（株）「サンフェノン」、ＤＳＭニュートリショナル・プロダクツ「テアビゴ」、サントリー（株）「サンウーロン」等が挙げられる。
【００１７】
当該茶抽出物中のカテキン類は、非重合体で存在し、かつ液に溶解しているもの又は茶の微細粉末の懸濁物に吸着若しくは包含された固形状のものとして存在する。
また、当該抽出物中のカテキン類の含有量は、１０〜１００質量％、好ましくは３０〜９５質量％、特に好ましくは４０〜８０質量％である。また、当該茶抽出物に含まれる総ポリフェノール中のカテキン類の含有率は、製造直後でカテキン量が１０質量％以上で、好ましくは２０質量％以上である。
また、老化に伴い生じる持久力の低下、疲労、エネルギー代謝の低下、ミトコンドリア機能低下等の諸機能の低下をより効率よく抑制するため、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート及びエピガロカテキンガレートから選ばれる単独又は２種以上のものの含有率は、当該茶抽出物に含まれるカテキン類総量中４０％以上であるのが好ましく、６０％以上であるのがより好ましく、８０％以上であるのが特に好ましい。
【００１８】
また、茶葉中のカテキン類の大部分はエピ体カテキン類として存在しており、このエピ体カテキン類を用いて熱や酸やアルカリ等の処理により立体異性体である非エピ体に変化させることができる。従って、非エピ体カテキン類を使用する場合には、緑茶類、半発酵茶類又は発酵茶類からの抽出液や茶抽出液の濃縮物を水溶液にして、例えば４０〜１４０℃、０．１分〜１２０時間加熱処理して得ることができる。また非エピカテキン類含有量の高い茶抽出液の濃縮物を使用してもよい。それらは単独又は併用してもよい。
【００１９】
後記実施例に示されるように、茶抽出物を老化促進モデルマウス（ＳＡＭ−Ｐ１）に摂取させると、老化に伴う限界走行時間の低下、平均酸素消費量（エネルギー消費量）の低下及びミトコンドリア機能低下が抑制される。従って、カテキン類は、老化抑制作用、具体的には老化に伴って生じる持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等を抑制する作用を有する老化抑制剤及びミトコンドリア機能向上剤（以下、老化抑制剤等とする。）として使用することができ、また老化抑制剤等を製造するために使用することができる。そして、カテキン類を有効成分とする老化抑制剤等は、老化抑制、ミトコンドリア機能向上等の各効果を発揮する、ヒト若しくは動物用の医薬品や飲食品としての使用が可能である。また、飲食品として使用する場合は、老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等の諸機能の低下を抑制することをコンセプトとする飲食品、機能性食品、病者用食品及び特定保健用食品として応用することが可能である。当該老化抑制剤等は、特に、老化に伴う、持久力の低下、疲労の蓄積、エネルギー代謝の低下及びミトコンドリア機能低下が起こるベッドレスト者、高齢者及び運動不足者に対して有効である。
【００２０】
本発明の老化抑制剤等は、医薬品として用いる投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の固形剤、シロップ剤、エリキシル剤、経腸或いは経管栄養剤等の液剤による経口投与又は注射剤、座剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。これらの投与形態のうち、経口投与が好ましい。
【００２１】
また、このような種々の剤型の製薬製剤を調製するには、本発明のカテキン類を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
これら補助剤の具体例としては、例えば固形粉末状の担体、グルコース、ラクトース、サッカロース等の糖、グリシン等のアミノ酸、セルロース等が挙げられる。潤滑剤として二酸化珪素、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール等、結合剤としてデンプン、ゼラチン、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が例示できる。崩壊剤としてはデンプン、寒天等がある。
【００２２】
また、本発明の老化抑制剤等を飲食品として使用する場合は、例えば、チーズ（ナチュラル、プロセス）、アイスクリーム、ヨーグルト及びその他乳製品、ソース、スープ、ふりかけ、和菓子類（せんべい等）、洋菓子類（ポテトチップス、プリン、ゼリー、グミキャンディー、キャンディー、ドロップ、キャラメル、チョコレート、チューインガム等）、焼き菓子類（カステラ、ケーキ、ドーナッツ、ビスケット、クッキー、クラッカー等）、各種飲料等の形態とすることができる。
飲食品を製造する場合には、カテキン類に一般飲食品で用いられる種々の原料を配合し、通常の方法により加工製造することができる。
【００２３】
飲料として使用する場合には、炭酸系飲料（ソフトドリンク）、非炭酸系飲料（果汁飲料、ネクター飲料、野菜飲料等）、清涼飲料、スポーツ飲料、ニアウオーター、ダイエット飲料、茶、コーヒー、ココア及びアルコール飲料等のいずれでもよく、また、他の飲料成分と組み合わせることで、更に幅広い範囲の飲料を提供することが可能である。
例えば、長時間保存時に安定した色調と外観の透明性を呈する飲料に、消費者の嗜好にあわせて茶葉の微粉末のような不溶性化合物が含まれる粗抽出茶カテキンをあえて懸濁させた形態の飲料も可能である。
【００２４】
上記飲料は、容器に充填した容器詰飲料とするのが好ましく、容器詰飲料としては、例えば、特許公報３７４２０９４号公報記載の非茶系容器詰飲料、特開２００２−２７２３７３号公報記載の茶系容器詰飲料が例示できる。以下に配合組成の一例を示す。
【００２５】
容器詰飲料は、長期摂取できる味および安定性、並びに効果の点から、非重合体であって水に溶解状態にあるカテキン類（非エピ体カテキン及びエピ体カテキン）を、飲料５００ｍＬ当り合計量５０〜２５００ｍｇ含有するが、好ましくは２００〜２５００ｍｇ、より好ましくは３００〜１３００ｍｇ、更に好ましくは４００〜１０００ｍｇ含有するのが、味の点から好ましい。
飲料中で総ポリフェノール中のカテキン類の含有率としては、製造直後でカテキン量が１０重量％以上で、好ましくは２０重量％以上である。
また、カテキン類の含有量の３０〜９８重量％、好ましくは４０〜９０重量％が、エピガロカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキン、ガロカテキンから選ばれたものであると、飲料としての呈味が更に優れ、後を引くような収斂性も少なく好ましい。ここでエピガロカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキン、ガロカテキンは１種以上含有するが、通常は全て含有される。
飲料のｐＨは、２５℃で３〜７、好ましくは４〜７、特に５〜７とするのが、味及びカテキン類の化学的安定性の点で好ましい。
【００２６】
上記飲料には、カテキン類にあわせて、処方上添加して良い成分として、酸化防止剤、香料、各種エステル類、有機酸類、有機酸塩類、無機酸類、無機酸塩類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、ｐＨ調整剤、品質安定剤等の添加剤を単独、あるいは併用して配合しても良い。
【００２７】
使用される容器は、一般の飲料と同様にポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶等の通常の形態で提供することができる。ここでいう飲料とは希釈せずに飲用できるものをいう。
上記容器詰は、例えば、金属缶のように容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては食品衛生法に定められた殺菌条件で製造される。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器等で高温短時間殺菌後、一定の温度まで冷却して容器に充填する等の方法が採用される。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。更に、酸性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを中性に戻すことや、中性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを酸性に戻す等の操作も可能である。
【００２８】
病者用食品としては、適当量の栄養補給が困難な高齢者やベッドレスト状態の病者に投与される経腸栄養剤や濃厚流動食（食品）等が挙げられる。
経腸栄養剤や濃厚流動食は、カテキン類に栄養組成物の原料を配合し、通常の方法により製造することができる。具体的には、カテキン類及び種々の原料を適当な溶媒に溶解、混合した後、ホモジナイザー等で均質化し、レトルトやプラスチック等の各種容器に充填したのち公知の殺菌法により、液状、半個体状や固体状の製剤を得ることができる。また、上記のようにホモジナイザー等で均質化した後、公知の噴霧乾燥等により、粉末状の製剤も得ることができる。
【００２９】
栄養組成物の一例として、蛋白質、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン類、乳化剤、香料等が配合された栄養組成物が挙げられる。蛋白質源としては、アミノ酸バランスのとれた栄養価の高い乳蛋白質、大豆蛋白質、卵アルブミン等の蛋白質が挙げられるが、これらの分解物、卵白のオリゴペプチド、大豆加水分解物等の他、アミノ酸単体の混合物も使用してもよい。
本栄養組成物の投与（摂取）量は、栄養剤としてのカロリー換算で成人１日当たり１０〜５０kcal／体重kgが好ましい。
【００３０】
上記製剤中に含まれるカテキン類の配合量は、その使用形態により異なるが、飲食品やペットフード等の場合、通常０．０１〜５質量％、更に０．０５〜５質量％、特に０．１〜１質量％とするのが好ましい。上記以外の医薬品、例えば錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤等の場合、通常０．０１〜９５質量％、更に５〜９０質量％、特に１０〜８０質量％とするのが好ましい。
【００３１】
本発明の老化抑制剤等の投与量（有効摂取量）は、１００〜３０００mg／６０kg体重とするのが好ましく、特に２５０〜２０００mg／６０kg体重、更に２５０〜１０００mg／６０kg体重とするのが好ましい。投与量は、投与される患者の年齢、体重、症状の程度等によって異なることは明らかである。
【００３２】
以下、本発明を更に詳しく説明するため、本発明組成物につき行った試験例を挙げ、次いで本発明組成物の調製例を実施例として挙げる。
【実施例】
【００３３】
試験例１ カテキン類の老化抑制効果
本実施例において茶カテキンは、総カテキン量８１％の緑茶抽出物を用いた。
また、茶カテキン中のカテキン類の組成は、公知の方法により測定し（例えば、特開２００６−１２９７３８号公報）、ガロカテキン（７％）、ガロカテキンガレート（４％）、エピカテキン（９％）、エピガロカテキン（２３％）、エピカテキンガレート（１２％）、エピガロカテキンガレート（４１％）、その他（４％）である。
【００３４】
（１）各群マウスの調整
１３週齢のＳＡＭ−Ｐ１雄性マウス（老化促進モデルマウス）及びＳＡＭ−Ｒ１雄性マウス（通常老化マウス）を個別飼育にて５週間予備飼育した後、トレッドミル走行させ、馴化させた後、限界走行時間を測定した。
具体的には、マウスを停止したトレッドミル内で安静にし、環境に慣れさせた後、トレッドミルを一定速度で回転させ、トレッドミル回転開始時を走行開始の始点とし、ベルト速度（ｍ／ｍｉｎ）を一定間隔で変化させ、トレッドミル上でマウスが走れなくなった時点を走行終了の終点とした。この時間を限界走行時間とし、持久力を評価した。
マウスの限界走行時間の測定におけるベルト速度及び時間は、１０ｍ／ｍｉｎから始め、１０及び１５ｍ／ｍｉｎで各５分間、２０ｍ／ｍｉｎで６０分間、２２ｍ／ｍｉｎで６０分間、２４ｍ／ｍｉｎで６０分間、２６ｍ／ｍｉｎで６０分、以降は２８ｍ／ｍｉｎで行った。
ＳＡＭ−Ｒ１（通常老化マウス）対照群、ＳＡＭ−Ｐ１（老化促進モデルマウス）対照群、ＳＡＭ−Ｐ１カテキン群に群分けし、各系統の限界走行時間に差がないようにした（各群８匹）。
【００３５】
（２）老化促進モデルマウスにおける茶カテキンの効果
表１に示す配合で茶カテキンを添加していない対照飼料及び茶カテキンを添加したカテキン飼料を調製した。
対照飼料をＳＡＭ−Ｒ１対照群及びＳＡＭ−Ｐ１対照群に、カテキン飼料をＳＡＭ−Ｐ１カテキン群に食餌として用い、各群を１０週間飼育した。
尚、各マウス群には１５ｍ／ｍｉｎで３０分間の運動を週に３回負荷した。
【００３６】
【表１】
【００３７】
８週間飼育後に各群の限界走行時間を測定した。この時のマウス限界走行時間を表２に示す。
【００３８】
【表２】
【００３９】
また、９週間飼育後の各群の安静時における酸素消費量（エネルギー消費量）を呼気分析により測定した。分析にはＯｘｙｍａｘシステム（コロンバス社）の８連チャンバーを用いた。マウスをチャンバーに入れて６時間安静にした後、２４時間の平均酸素消費量（１ｍｉｎ当たりのマウス体重１ｋｇにおける酸素消費量ｍＬ（ｍＬ／ｋｇ／ｍｉｎ））を１８分毎に２分間ずつ連続測定した。２４時間の平均酸素消費量（ｍＬ／ｋｇ／ｍｉｎ）を表３に示す。
【００４０】
【表３】
【００４１】
表２の結果から、老化促進モデルマウスであるＳＡＭ−Ｐ１対照群の限界走行時間は通常老化マウスであるＳＡＭ−Ｒ１対照群に対して有意に短く、老化に伴い持久力は低下することがわかる。
一方、カテキン飼料を摂取したＳＡＭ−Ｐ１カテキン群の限界走行時間はＳＡＭ−Ｐ１対照群と比較して有意に長かった。このことから、茶カテキンを摂取すると、老化に伴う持久力低下が抑制されたことがわかる。また疲労しにくいことがわかる。
また、老化促進モデルマウスであるＳＡＭ−Ｐ１対照群の限界走行時間は試験前に比べ、８週後には約２０分低下した。
一方、カテキン飼料を摂取したＳＡＭ−Ｐ１カテキン群の限界走行時間は低下が認められなかった。このことから、茶カテキンを摂取すると、老化に伴う持久力の低下が抑制されることがわかる。
表３の結果から、老化促進モデルマウスであるＳＡＭ−Ｐ１対照群の酸素消費量（エネルギー消費量）は通常老化マウスであるＳＡＭ−Ｒ１対照群に対して有意に低値を示した。このことは、老化により、酸素消費量が減少し、エネルギー代謝が低下することを示している。
一方、カテキン飼料を摂取したマウスの酸素消費量はＳＡＭ−Ｐ１対照群に対して有意に高かった。このことから、茶カテキンは、老化に伴うエネルギー代謝の低下を抑制する作用を有することがわかる。
また、上記のように茶カテキン摂取により走行時間が延びることや酸素消費量が高まることは、疲労が抑えられることを意味している。
【００４２】
試験例２ カテキン類のミトコンドリア機能低下抑制効果
（１）各群マウスの調整
１３週齢のＳＡＭ−Ｐ１雄性マウス（老化促進モデルマウス）及びＳＡＭ−Ｒ１雄性マウス（通常老化マウス）を個別飼育にて５週間予備飼育した後、トレッドミル走行させ、馴化させた後、限界走行時間を測定した。
具体的には、マウスを停止したトレッドミル内で安静にし、環境に慣れさせた後、トレッドミルを一定速度で回転させ、トレッドミル回転開始時を走行開始の始点とし、ベルト速度（ｍ／ｍｉｎ）を一定間隔で変化させ、トレッドミル上でマウスが走れなくなった時点を走行終了の終点とした。この時間を限界走行時間とし、持久力を評価した。
マウスの限界走行時間の測定におけるベルト速度及び時間は、１０ｍ／ｍｉｎから始め、１０及び１５ｍ／ｍｉｎで各５分間、２０ｍ／ｍｉｎで６０分間、２２ｍ／ｍｉｎで６０分間、２４ｍ／ｍｉｎで６０分間、２６ｍ／ｍｉｎで６０分、以降は２８ｍ／ｍｉｎで行った。
ＳＡＭ−Ｒ１（通常老化マウス）対照群、ＳＡＭ−Ｐ１（老化促進モデルマウス）対照群、ＳＡＭ−Ｐ１カテキン群、ＳＡＭ−Ｐ１運動群、ＳＡＭ−Ｐ１カテキン／運動併用群に群分けし、各系統の限界走行時間に差がないようにした（各群８匹）。
【００４３】
（２）老化促進モデルマウスにおける茶カテキンの効果
表４に示す配合で茶カテキンを添加していない対照飼料及び茶カテキンを添加したカテキン飼料を調製した。
対照飼料をＳＡＭ−Ｒ１対照群、ＳＡＭ−Ｐ１対照群及びＳＡＭ−Ｐ１運動群に、カテキン飼料をＳＡＭ−Ｐ１カテキン群、ＳＡＭ−Ｐ１カテキン／運動併用群に食餌として用い、各群を１０週間飼育した。
尚、各マウス群には１５ｍ／ｍｉｎで３０分間の運動を週に３回負荷した。
【００４４】
【表４】
【００４５】
１０週間飼育後に各群のマウスの腓腹筋を採取し、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン）を用いて、ＲＮＡサンプルを得た。各ＲＮＡサンプルを定量し、１反応あたりのＲＮＡ量を５μｇとしてＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ＲＴ−ＰＣＲ（インビトロジェン）を用いて、逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを得た。反応条件は４２℃，５０分間，７０℃，１５分間とした。
【００４６】
得られたｃＤＮＡを未知サンプルの場合は４０倍希釈、スタンダード用サンプルの場合には１０倍希釈し、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（アプライドバイオシステムズ社）により定量的ＰＣＲを行った。３６Ｂ４ｍＲＮＡの発現量を基準として補正し、相対的ｍＲＮＡ発現量として表した。
プライマーとして、ＣＯＸ１はＧｅｎＢａｎｋ: Ｘ５７７８０、ｎｔ８７６−８９７、ｎｔ９５７−９７６を、ＣＯＸ２はＡＦ３７７８０、ｎｔ４８８−５０７、ｎｔ５６７−５８８を、ＣＯＸ３はＮＣ＿００５０８９、ｎｔ９１９６−９２１７、ｎｔ９３０８−９３２７を、ＣＯＸ４はＮＭ＿０５３０９１、ｎｔ２７６−２９５、ｎｔ３９６−４１５を、ｈｅａｔ ｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ７２（ＨＳＰ７２）はＮＭ＿０１０４７９、ｎｔ１８１５−１８３５、ｎｔ１９１６−１９３７を、ＰＧＣ−１αはＮＭ＿００８９０４、ｎｔ６４２−６６１、ｎｔ７５１−７７０を、ＰＧＣ−１βはＮＭ＿１３３２４９、ｎｔ２８６５−２８８５、ｎｔ２９４５−２９６５を用いた。
結果を表５に示した。
【００４７】
【表５】
【００４８】
表５の結果から、老化促進モデルマウスであるＳＡＭ−Ｐ１対照群の腓腹筋におけるＣＯＸ１〜４、ＨＳＰ７２、ＰＧＣ−１α、ＰＧＣ−１βの遺伝子発現は、通常老化マウスであるＳＡＭ−Ｒ１対照群に対して有意に低く、老化に伴い電子伝達系に関与する遺伝子やミトコンドリアの分化・増殖に関与する遺伝子の発現は低下することがわかる。
一方、カテキン飼料と運動を併用したＳＡＭ−Ｐ１カテキン群のＣＯＸ２〜４、ＨＳＰ７２遺伝子発現はＳＡＭ−Ｐ１対照群と比較して有意に高かった。このことから、茶カテキンを摂取すると、老化に伴う電子伝達系やミトコンドリアの分化・増殖に関与する遺伝子の発現の低下が抑制されたことがわかる。
また、上記のように茶カテキン摂取と運動の併用により電子伝達系遺伝子が抑えられることはミトコンドリア機能の機能が維持されていることを意味している。
【００４９】
以上のことから、カテキン類は、老化抑制、具体的には老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリアの機能低下等を抑制する作用を有し、老化抑制剤、ミトコンドリア機能向上剤として有用である。
【００５０】
以下に、本発明の老化抑制剤等の製剤例を示す。
製剤例１ 老化抑制用容器詰飲料
表６に示した配合および条件で、老化抑制用容器詰飲料を調製した。また、本容器詰飲料における茶抽出物（茶カテキン）の組成を表７に示す。本飲料の保存安定性および風味は良好であった。
【００５１】
【表６】
【００５２】
【表７】
【００５３】
製剤例２ 老化抑制用経腸栄養剤（濃厚流動食）
表８に示した配合で、本発明品を常法に従いレトルトに密封後、高圧蒸気滅菌し、調製した。ミネラル類は、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｐ、Ｃ１、Ｆｅ等の有機又は無機塩混合物、ビタミン類は、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、Ｃ、ナイアシン、パントテン酸等の混合物を、国民栄養所要量に合致した量用いた。
【００５４】
【表８】
【００５５】
製剤例３ 老化抑制用ゼリー食品
カラギーナンとローカストビーンガムの混合ゲル化剤０．６５％、グレープフルーツの５０％の濃縮果汁５．０％、クエン酸０．０５％、ビタミンＣ０．０５％、茶カテキン（テアビゴ（ＤＳＭニュートリショナル・プロダクツ））０．５４％、を混合し、これに水を加えて１００％に調整し、６５℃で溶解した。更に少量のグレープフルーツフレーバーを添加して８５℃で５分間保持して殺菌処理後、１００ｍｌの容器に分注した。８時間静置して徐冷しながら５℃に冷却して、カテキンを含有するゼリー食品を得た。
【００５６】
製造例４ 老化抑制用ビタミン内服液
タウリン８００ｍｇ、ショ糖２０００ｍｇ、カラメル５０ｍｇ、安息香酸ナトリウム３０ｍｇ、ビタミンＢ１硝酸塩５ｍｇ、ビタミンＢ２ ２０ｍｇ、ビタミンＢ6 ２０ｍｇ、ビタミンＣ ２０００ｍｇ、ビタミンＥ １００ｍｇ、ビタミンＤ3 ２０００ＩＵ、ニコチン酸アミド２０ｍｇ、茶カテキン（ポリフェノン７０Ｓ（三井農林））１００ｍｇを適量の精製水に加えて溶解し、リン酸水溶液でｐＨ３に調節した後、更に精製水を加えて全量を５０ｍｌとした。これを８０℃で３０分滅菌して、カテキンを含有するビタミン内服液を得た。
【００５７】
製剤例５ 老化抑制用チュアブル錠剤
アスコルビン酸１８０ｍｇ、クエン酸５０ｍｇ、アスパルテーム１２ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム２４ｍｇ、結晶セルロース１２０ｍｇ、乳糖２７４ｍｇ、茶カテキン（テアフラン９０Ｓ（伊藤園））５４０ｍｇなる処方で、日本薬局方（製剤総則「錠剤」）に準じて錠剤を製造し、カテキンを含有するチュアブル錠剤を得た。
【００５８】
製剤例６ 老化抑制用錠剤
下記処方に基づいて、常法によりカテキン類を含有する錠剤を調製した。成分配合量（重量％）：茶カテキン（ポリフェノン７０Ｓ（三井農林））２０、リンゴ酸ナトリウム２０、パラチノース２０、アスコルビン酸２０、ビタミンミックス（日本香料薬品社製）５、結晶セルロース５、ショ糖エステル４、二酸化ケイ素１、卵殻カルシウム５。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトその他の動物の老化に伴って生じる、持久力低下、疲労等の抑制に有効な老化抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
老化は生理学的老化と病的老化に大別される。生理学的老化は加齢に伴い必然的に起こる老化であり、毛髪、皮膚、眼、骨、脳等の変化、運動能力やエネルギー代謝の低下が生じる。近年、老化によるエネルギー代謝の低下にはミトコンドリアＤＮＡの変異や損傷といったミトコンドリア機能の低下が関係していることが言われている（非特許文献１）。
【０００３】
老化は遺伝的要因や環境的要因により進行するが、食事・運動といった生活習慣を始めとする環境的要因を改善することで遅らせることは可能であると考えられている。老化に伴う運動能力低下を防ぐ手段としては、特に高齢者の場合では適度な運動等を実践する、あるいはリハビリテーションを実践する等が挙げられるが、モチベーションの維持の困難さや怪我の恐れもあることから、安全性が高く、より効果的な方法が望まれていた。
【０００４】
身体的変化の老化を抑制しうる成分の探索は行われており、皮膚の老化抑制成分として、生体コラーゲン合成促進剤と異常タンパク質除去剤を含有する抗老化用組成物（特許文献１）、ニンジン葉部からの抽出物を有効成分とする抗老化剤（特許文献２）、わさび抽出物とイグサ抽出物を必須成分とする老化防止用組成物（特許文献３）等が開示されている。
また、テロメア短縮抑制成分として、マンネンタケの溶媒抽出物による細胞老化抑制剤（特許文献４）、また脳の老化抑制剤として、ココア及び／又はカカオマス（特許文献５）、有機ゲルマニウム化合物（特許文献６）、Ｌ−アルギニン、フォスファチジルセリン、ドコサヘキサエン酸、イチョウ葉又はイチョウ葉エキス、及びトコフェロール（特許文献７）が開示されている。
また、ミトコンドリア機能異常に起因する疾患における臨床症状発現の予防・治療用組成物としてＬ−アルギニン（特許文献８）が開示されている。
【０００５】
一方、老化によって生じる筋力や持久力の低下は日常の生活能力を低下させる。また、エネルギー代謝やミトコンドリア機能の低下はエネルギー摂取とエネルギー消費のアンバランスを引き起こし、肥満や糖尿病等の生活習慣病の原因となり得る。これらを防止することはクオリティオブライフ（ＱＯＬ）の向上といった観点から先進諸国において重要な課題として位置づけられている。
【０００６】
したがって、ＱＯＬを充実して健康寿命を延伸するためには、加齢に伴い生じる生理機能の低下、いわゆる老化を抑制すること、特に持久力を保つこと、疲労を抑制すること及びエネルギー代謝を高く維持すること、またミトコンドリア機能を向上することが重要である。
【０００７】
一方、緑茶、紅茶、カカオ豆等に含まれているカテキン類には、コレステロール上昇抑制作用（特許文献９）、血糖上昇阻害作用（特許文献１０）、動脈硬化防止作用（特許文献１１）、持久力向上作用（特許文献１２）、筋ジストロフィ抑制作用（非特許文献２）等、生理的な有益性があると報告されている。しかしながら、カテキン類が老化やミトコンドリア機能に及ぼす作用、特に加齢に伴う、持久力やエネルギー代謝の低下、疲労、ミトコンドリア機能の低下に及ぼす作用についてはこれまで全く知られていない。
【特許文献１】特開２００４−１１５４３８号公報
【特許文献２】特開２００４−５１５８０号公報
【特許文献３】特開２００６−６３０３８号公報
【特許文献４】特開２００３−１２５３９号公報
【特許文献５】特開平１１−４３４３２号公報
【特許文献６】特開２００３−２６１４５６号公報
【特許文献７】特開昭６０−１５６６１４号公報
【特許文献８】特開２００４−１８２７０５号公報
【特許文献９】特開昭−１５６６１４号公報
【特許文献１０】特開平４−２５３９１８号公報
【特許文献１１】特開平４−３５２７２６号公報
【特許文献１２】特開２００５−８９３８４号公報
【非特許文献１】岩波講座 現代医学の基礎, vol.１２, No.2, pp５５-５８, １９９９
【非特許文献２】Dorchies OM et al, AJP-Cell Physiol, vol.290, No.2, pp616-25, 2006
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝の低下等の抑制に有効な医薬品、医薬部外品及び飲食品を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
そこで、本発明者らは、種々検討した結果、カテキン類が老化に伴って生じる、持久力の低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等の諸機能の低下を抑制する作用を有し、老化抑制及びミトコンドリア機能向上効果を発揮する飲食品又は医薬品等として有用であることを見出した。
【００１０】
すなわち、本発明は、カテキン類を有効成分とする老化抑制剤を提供するものである。
また、本発明は、カテキン類を含有する老化抑制用飲食品を提供するものである。
また、本発明は、カテキン類の老化抑制剤としての使用を提供するものである。
また、本発明は、老化抑制剤の製造のためのカテキン類の使用を提供するものである。
また、本発明は、カテキン類を有効成分とするミトコンドリア機能向上剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の老化防止剤及びミトコンドリア機能向上剤は、食経験が豊富で副作用が少なく、長期投与又は摂取しても安全性が高いカテキン類を有効成分とするものであり、老化抑制効果、特に老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等の諸機能の低下を抑制する効果を発揮する飲食品や医薬品等として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明において、「老化抑制」とは、老化に伴って生じる生理的変化を抑制することをいい、当該生理学的変化には、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等が含まれる。具体的には、加齢、例えば３０代以降の中高年においてみられる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等を抑制することが挙げられる。
【００１３】
本発明におけるカテキン類とは、カテキン、カテキンガレート、ガロカテキン及びガロカテキンガレート等の非エピ体カテキン類、並びにエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート及びエピガロカテキンガレート等のエピ体カテキン類の総称であり、これらの一種以上を含有するのが好ましい。また、カテキン類は、非重合体であるのが好ましい。
【００１４】
本発明に使用するカテキン類は、一般的には茶葉から直接抽出すること、又はその茶抽出物を濃縮若しくは精製することにより得ることができるが、他の原料由来のもの、カラム精製品及び化学合成品でもあってもよい。
【００１５】
当該茶葉抽出は、Ｃａｍｅｌｌｉａ属、例えばＣ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ、Ｃ．ａｓｓａｍｉｃａ、またはそれらの雑種から得られる茶葉より製茶された茶葉に、水や熱水、場合によってはこれらに抽出助剤を添加して抽出することにより行うことができる。また、煮沸脱気や窒素ガス等の不活性ガスを通気して溶存酸素を除去しつつ、いわゆる非酸化的雰囲気下で抽出する方法を併用してもよい。
当該製茶された茶葉には、（１）煎茶、番茶、玉露、てん茶、釜煎り茶等の緑茶類；（２）総称して烏龍茶と呼ばれる鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶等の半発酵茶；（３）紅茶と呼ばれるダージリン、ウバ、キーマン等の発酵茶が含まれる。
抽出助剤としては、アスコルビン酸ナトリウム等の有機酸又はこれら有機酸塩類が挙げられる
【００１６】
当該茶抽出物の濃縮は、上記抽出物を濃縮することにより行うことができ、当該茶抽出物の精製は、溶剤やカラムを用いて精製することにより行うことができる。茶抽出物の濃縮物や精製物の形態としては、固体、水溶液、スラリー状等種々のものが挙げられる。
例えば、当該茶抽出物（茶カテキンともいう。）は、特開昭59-219384号、特開平4-20589号、特開平5-260907号、特開平5-306279号等に詳細に例示されている方法で調製することができる。また、市販品を用いることもでき、斯かる市販品としては、三井農林（株）「ポリフェノン」、（株）伊藤園「テアフラン」、太陽化学（株）「サンフェノン」、ＤＳＭニュートリショナル・プロダクツ「テアビゴ」、サントリー（株）「サンウーロン」等が挙げられる。
【００１７】
当該茶抽出物中のカテキン類は、非重合体で存在し、かつ液に溶解しているもの又は茶の微細粉末の懸濁物に吸着若しくは包含された固形状のものとして存在する。
また、当該抽出物中のカテキン類の含有量は、１０〜１００質量％、好ましくは３０〜９５質量％、特に好ましくは４０〜８０質量％である。また、当該茶抽出物に含まれる総ポリフェノール中のカテキン類の含有率は、製造直後でカテキン量が１０質量％以上で、好ましくは２０質量％以上である。
また、老化に伴い生じる持久力の低下、疲労、エネルギー代謝の低下、ミトコンドリア機能低下等の諸機能の低下をより効率よく抑制するため、ガロカテキン、エピガロカテキン、カテキンガレート、エピカテキンガレート、ガロカテキンガレート及びエピガロカテキンガレートから選ばれる単独又は２種以上のものの含有率は、当該茶抽出物に含まれるカテキン類総量中４０％以上であるのが好ましく、６０％以上であるのがより好ましく、８０％以上であるのが特に好ましい。
【００１８】
また、茶葉中のカテキン類の大部分はエピ体カテキン類として存在しており、このエピ体カテキン類を用いて熱や酸やアルカリ等の処理により立体異性体である非エピ体に変化させることができる。従って、非エピ体カテキン類を使用する場合には、緑茶類、半発酵茶類又は発酵茶類からの抽出液や茶抽出液の濃縮物を水溶液にして、例えば４０〜１４０℃、０．１分〜１２０時間加熱処理して得ることができる。また非エピカテキン類含有量の高い茶抽出液の濃縮物を使用してもよい。それらは単独又は併用してもよい。
【００１９】
後記実施例に示されるように、茶抽出物を老化促進モデルマウス（ＳＡＭ−Ｐ１）に摂取させると、老化に伴う限界走行時間の低下、平均酸素消費量（エネルギー消費量）の低下及びミトコンドリア機能低下が抑制される。従って、カテキン類は、老化抑制作用、具体的には老化に伴って生じる持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等を抑制する作用を有する老化抑制剤及びミトコンドリア機能向上剤（以下、老化抑制剤等とする。）として使用することができ、また老化抑制剤等を製造するために使用することができる。そして、カテキン類を有効成分とする老化抑制剤等は、老化抑制、ミトコンドリア機能向上等の各効果を発揮する、ヒト若しくは動物用の医薬品や飲食品としての使用が可能である。また、飲食品として使用する場合は、老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下等の諸機能の低下を抑制することをコンセプトとする飲食品、機能性食品、病者用食品及び特定保健用食品として応用することが可能である。当該老化抑制剤等は、特に、老化に伴う、持久力の低下、疲労の蓄積、エネルギー代謝の低下及びミトコンドリア機能低下が起こるベッドレスト者、高齢者及び運動不足者に対して有効である。
【００２０】
本発明の老化抑制剤等は、医薬品として用いる投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の固形剤、シロップ剤、エリキシル剤、経腸或いは経管栄養剤等の液剤による経口投与又は注射剤、座剤、吸入薬、経皮吸収剤、外用剤等による非経口投与が挙げられる。これらの投与形態のうち、経口投与が好ましい。
【００２１】
また、このような種々の剤型の製薬製剤を調製するには、本発明のカテキン類を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
これら補助剤の具体例としては、例えば固形粉末状の担体、グルコース、ラクトース、サッカロース等の糖、グリシン等のアミノ酸、セルロース等が挙げられる。潤滑剤として二酸化珪素、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール等、結合剤としてデンプン、ゼラチン、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等が例示できる。崩壊剤としてはデンプン、寒天等がある。
【００２２】
また、本発明の老化抑制剤等を飲食品として使用する場合は、例えば、チーズ（ナチュラル、プロセス）、アイスクリーム、ヨーグルト及びその他乳製品、ソース、スープ、ふりかけ、和菓子類（せんべい等）、洋菓子類（ポテトチップス、プリン、ゼリー、グミキャンディー、キャンディー、ドロップ、キャラメル、チョコレート、チューインガム等）、焼き菓子類（カステラ、ケーキ、ドーナッツ、ビスケット、クッキー、クラッカー等）、各種飲料等の形態とすることができる。
飲食品を製造する場合には、カテキン類に一般飲食品で用いられる種々の原料を配合し、通常の方法により加工製造することができる。
【００２３】
飲料として使用する場合には、炭酸系飲料（ソフトドリンク）、非炭酸系飲料（果汁飲料、ネクター飲料、野菜飲料等）、清涼飲料、スポーツ飲料、ニアウオーター、ダイエット飲料、茶、コーヒー、ココア及びアルコール飲料等のいずれでもよく、また、他の飲料成分と組み合わせることで、更に幅広い範囲の飲料を提供することが可能である。
例えば、長時間保存時に安定した色調と外観の透明性を呈する飲料に、消費者の嗜好にあわせて茶葉の微粉末のような不溶性化合物が含まれる粗抽出茶カテキンをあえて懸濁させた形態の飲料も可能である。
【００２４】
上記飲料は、容器に充填した容器詰飲料とするのが好ましく、容器詰飲料としては、例えば、特許公報３７４２０９４号公報記載の非茶系容器詰飲料、特開２００２−２７２３７３号公報記載の茶系容器詰飲料が例示できる。以下に配合組成の一例を示す。
【００２５】
容器詰飲料は、長期摂取できる味および安定性、並びに効果の点から、非重合体であって水に溶解状態にあるカテキン類（非エピ体カテキン及びエピ体カテキン）を、飲料５００ｍＬ当り合計量５０〜２５００ｍｇ含有するが、好ましくは２００〜２５００ｍｇ、より好ましくは３００〜１３００ｍｇ、更に好ましくは４００〜１０００ｍｇ含有するのが、味の点から好ましい。
飲料中で総ポリフェノール中のカテキン類の含有率としては、製造直後でカテキン量が１０重量％以上で、好ましくは２０重量％以上である。
また、カテキン類の含有量の３０〜９８重量％、好ましくは４０〜９０重量％が、エピガロカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキン、ガロカテキンから選ばれたものであると、飲料としての呈味が更に優れ、後を引くような収斂性も少なく好ましい。ここでエピガロカテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピガロカテキン、ガロカテキンは１種以上含有するが、通常は全て含有される。
飲料のｐＨは、２５℃で３〜７、好ましくは４〜７、特に５〜７とするのが、味及びカテキン類の化学的安定性の点で好ましい。
【００２６】
上記飲料には、カテキン類にあわせて、処方上添加して良い成分として、酸化防止剤、香料、各種エステル類、有機酸類、有機酸塩類、無機酸類、無機酸塩類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、ｐＨ調整剤、品質安定剤等の添加剤を単独、あるいは併用して配合しても良い。
【００２７】
使用される容器は、一般の飲料と同様にポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶等の通常の形態で提供することができる。ここでいう飲料とは希釈せずに飲用できるものをいう。
上記容器詰は、例えば、金属缶のように容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては食品衛生法に定められた殺菌条件で製造される。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器等で高温短時間殺菌後、一定の温度まで冷却して容器に充填する等の方法が採用される。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。更に、酸性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを中性に戻すことや、中性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを酸性に戻す等の操作も可能である。
【００２８】
病者用食品としては、適当量の栄養補給が困難な高齢者やベッドレスト状態の病者に投与される経腸栄養剤や濃厚流動食（食品）等が挙げられる。
経腸栄養剤や濃厚流動食は、カテキン類に栄養組成物の原料を配合し、通常の方法により製造することができる。具体的には、カテキン類及び種々の原料を適当な溶媒に溶解、混合した後、ホモジナイザー等で均質化し、レトルトやプラスチック等の各種容器に充填したのち公知の殺菌法により、液状、半個体状や固体状の製剤を得ることができる。また、上記のようにホモジナイザー等で均質化した後、公知の噴霧乾燥等により、粉末状の製剤も得ることができる。
【００２９】
栄養組成物の一例として、蛋白質、糖類、脂肪、微量元素、ビタミン類、乳化剤、香料等が配合された栄養組成物が挙げられる。蛋白質源としては、アミノ酸バランスのとれた栄養価の高い乳蛋白質、大豆蛋白質、卵アルブミン等の蛋白質が挙げられるが、これらの分解物、卵白のオリゴペプチド、大豆加水分解物等の他、アミノ酸単体の混合物も使用してもよい。
本栄養組成物の投与（摂取）量は、栄養剤としてのカロリー換算で成人１日当たり１０〜５０kcal／体重kgが好ましい。
【００３０】
上記製剤中に含まれるカテキン類の配合量は、その使用形態により異なるが、飲食品やペットフード等の場合、通常０．０１〜５質量％、更に０．０５〜５質量％、特に０．１〜１質量％とするのが好ましい。上記以外の医薬品、例えば錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤等の場合、通常０．０１〜９５質量％、更に５〜９０質量％、特に１０〜８０質量％とするのが好ましい。
【００３１】
本発明の老化抑制剤等の投与量（有効摂取量）は、１００〜３０００mg／６０kg体重とするのが好ましく、特に２５０〜２０００mg／６０kg体重、更に２５０〜１０００mg／６０kg体重とするのが好ましい。投与量は、投与される患者の年齢、体重、症状の程度等によって異なることは明らかである。
【００３２】
以下、本発明を更に詳しく説明するため、本発明組成物につき行った試験例を挙げ、次いで本発明組成物の調製例を実施例として挙げる。
【実施例】
【００３３】
試験例１ カテキン類の老化抑制効果
本実施例において茶カテキンは、総カテキン量８１％の緑茶抽出物を用いた。
また、茶カテキン中のカテキン類の組成は、公知の方法により測定し（例えば、特開２００６−１２９７３８号公報）、ガロカテキン（７％）、ガロカテキンガレート（４％）、エピカテキン（９％）、エピガロカテキン（２３％）、エピカテキンガレート（１２％）、エピガロカテキンガレート（４１％）、その他（４％）である。
【００３４】
（１）各群マウスの調整
１３週齢のＳＡＭ−Ｐ１雄性マウス（老化促進モデルマウス）及びＳＡＭ−Ｒ１雄性マウス（通常老化マウス）を個別飼育にて５週間予備飼育した後、トレッドミル走行させ、馴化させた後、限界走行時間を測定した。
具体的には、マウスを停止したトレッドミル内で安静にし、環境に慣れさせた後、トレッドミルを一定速度で回転させ、トレッドミル回転開始時を走行開始の始点とし、ベルト速度（ｍ／ｍｉｎ）を一定間隔で変化させ、トレッドミル上でマウスが走れなくなった時点を走行終了の終点とした。この時間を限界走行時間とし、持久力を評価した。
マウスの限界走行時間の測定におけるベルト速度及び時間は、１０ｍ／ｍｉｎから始め、１０及び１５ｍ／ｍｉｎで各５分間、２０ｍ／ｍｉｎで６０分間、２２ｍ／ｍｉｎで６０分間、２４ｍ／ｍｉｎで６０分間、２６ｍ／ｍｉｎで６０分、以降は２８ｍ／ｍｉｎで行った。
ＳＡＭ−Ｒ１（通常老化マウス）対照群、ＳＡＭ−Ｐ１（老化促進モデルマウス）対照群、ＳＡＭ−Ｐ１カテキン群に群分けし、各系統の限界走行時間に差がないようにした（各群８匹）。
【００３５】
（２）老化促進モデルマウスにおける茶カテキンの効果
表１に示す配合で茶カテキンを添加していない対照飼料及び茶カテキンを添加したカテキン飼料を調製した。
対照飼料をＳＡＭ−Ｒ１対照群及びＳＡＭ−Ｐ１対照群に、カテキン飼料をＳＡＭ−Ｐ１カテキン群に食餌として用い、各群を１０週間飼育した。
尚、各マウス群には１５ｍ／ｍｉｎで３０分間の運動を週に３回負荷した。
【００３６】
【表１】
【００３７】
８週間飼育後に各群の限界走行時間を測定した。この時のマウス限界走行時間を表２に示す。
【００３８】
【表２】
【００３９】
また、９週間飼育後の各群の安静時における酸素消費量（エネルギー消費量）を呼気分析により測定した。分析にはＯｘｙｍａｘシステム（コロンバス社）の８連チャンバーを用いた。マウスをチャンバーに入れて６時間安静にした後、２４時間の平均酸素消費量（１ｍｉｎ当たりのマウス体重１ｋｇにおける酸素消費量ｍＬ（ｍＬ／ｋｇ／ｍｉｎ））を１８分毎に２分間ずつ連続測定した。２４時間の平均酸素消費量（ｍＬ／ｋｇ／ｍｉｎ）を表３に示す。
【００４０】
【表３】
【００４１】
表２の結果から、老化促進モデルマウスであるＳＡＭ−Ｐ１対照群の限界走行時間は通常老化マウスであるＳＡＭ−Ｒ１対照群に対して有意に短く、老化に伴い持久力は低下することがわかる。
一方、カテキン飼料を摂取したＳＡＭ−Ｐ１カテキン群の限界走行時間はＳＡＭ−Ｐ１対照群と比較して有意に長かった。このことから、茶カテキンを摂取すると、老化に伴う持久力低下が抑制されたことがわかる。また疲労しにくいことがわかる。
また、老化促進モデルマウスであるＳＡＭ−Ｐ１対照群の限界走行時間は試験前に比べ、８週後には約２０分低下した。
一方、カテキン飼料を摂取したＳＡＭ−Ｐ１カテキン群の限界走行時間は低下が認められなかった。このことから、茶カテキンを摂取すると、老化に伴う持久力の低下が抑制されることがわかる。
表３の結果から、老化促進モデルマウスであるＳＡＭ−Ｐ１対照群の酸素消費量（エネルギー消費量）は通常老化マウスであるＳＡＭ−Ｒ１対照群に対して有意に低値を示した。このことは、老化により、酸素消費量が減少し、エネルギー代謝が低下することを示している。
一方、カテキン飼料を摂取したマウスの酸素消費量はＳＡＭ−Ｐ１対照群に対して有意に高かった。このことから、茶カテキンは、老化に伴うエネルギー代謝の低下を抑制する作用を有することがわかる。
また、上記のように茶カテキン摂取により走行時間が延びることや酸素消費量が高まることは、疲労が抑えられることを意味している。
【００４２】
試験例２ カテキン類のミトコンドリア機能低下抑制効果
（１）各群マウスの調整
１３週齢のＳＡＭ−Ｐ１雄性マウス（老化促進モデルマウス）及びＳＡＭ−Ｒ１雄性マウス（通常老化マウス）を個別飼育にて５週間予備飼育した後、トレッドミル走行させ、馴化させた後、限界走行時間を測定した。
具体的には、マウスを停止したトレッドミル内で安静にし、環境に慣れさせた後、トレッドミルを一定速度で回転させ、トレッドミル回転開始時を走行開始の始点とし、ベルト速度（ｍ／ｍｉｎ）を一定間隔で変化させ、トレッドミル上でマウスが走れなくなった時点を走行終了の終点とした。この時間を限界走行時間とし、持久力を評価した。
マウスの限界走行時間の測定におけるベルト速度及び時間は、１０ｍ／ｍｉｎから始め、１０及び１５ｍ／ｍｉｎで各５分間、２０ｍ／ｍｉｎで６０分間、２２ｍ／ｍｉｎで６０分間、２４ｍ／ｍｉｎで６０分間、２６ｍ／ｍｉｎで６０分、以降は２８ｍ／ｍｉｎで行った。
ＳＡＭ−Ｒ１（通常老化マウス）対照群、ＳＡＭ−Ｐ１（老化促進モデルマウス）対照群、ＳＡＭ−Ｐ１カテキン群、ＳＡＭ−Ｐ１運動群、ＳＡＭ−Ｐ１カテキン／運動併用群に群分けし、各系統の限界走行時間に差がないようにした（各群８匹）。
【００４３】
（２）老化促進モデルマウスにおける茶カテキンの効果
表４に示す配合で茶カテキンを添加していない対照飼料及び茶カテキンを添加したカテキン飼料を調製した。
対照飼料をＳＡＭ−Ｒ１対照群、ＳＡＭ−Ｐ１対照群及びＳＡＭ−Ｐ１運動群に、カテキン飼料をＳＡＭ−Ｐ１カテキン群、ＳＡＭ−Ｐ１カテキン／運動併用群に食餌として用い、各群を１０週間飼育した。
尚、各マウス群には１５ｍ／ｍｉｎで３０分間の運動を週に３回負荷した。
【００４４】
【表４】
【００４５】
１０週間飼育後に各群のマウスの腓腹筋を採取し、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン）を用いて、ＲＮＡサンプルを得た。各ＲＮＡサンプルを定量し、１反応あたりのＲＮＡ量を５μｇとしてＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ＲＴ−ＰＣＲ（インビトロジェン）を用いて、逆転写反応を行い、ｃＤＮＡを得た。反応条件は４２℃，５０分間，７０℃，１５分間とした。
【００４６】
得られたｃＤＮＡを未知サンプルの場合は４０倍希釈、スタンダード用サンプルの場合には１０倍希釈し、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ（アプライドバイオシステムズ社）により定量的ＰＣＲを行った。３６Ｂ４ｍＲＮＡの発現量を基準として補正し、相対的ｍＲＮＡ発現量として表した。
プライマーとして、ＣＯＸ１はＧｅｎＢａｎｋ: Ｘ５７７８０、ｎｔ８７６−８９７、ｎｔ９５７−９７６を、ＣＯＸ２はＡＦ３７７８０、ｎｔ４８８−５０７、ｎｔ５６７−５８８を、ＣＯＸ３はＮＣ＿００５０８９、ｎｔ９１９６−９２１７、ｎｔ９３０８−９３２７を、ＣＯＸ４はＮＭ＿０５３０９１、ｎｔ２７６−２９５、ｎｔ３９６−４１５を、ｈｅａｔ ｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ７２（ＨＳＰ７２）はＮＭ＿０１０４７９、ｎｔ１８１５−１８３５、ｎｔ１９１６−１９３７を、ＰＧＣ−１αはＮＭ＿００８９０４、ｎｔ６４２−６６１、ｎｔ７５１−７７０を、ＰＧＣ−１βはＮＭ＿１３３２４９、ｎｔ２８６５−２８８５、ｎｔ２９４５−２９６５を用いた。
結果を表５に示した。
【００４７】
【表５】
【００４８】
表５の結果から、老化促進モデルマウスであるＳＡＭ−Ｐ１対照群の腓腹筋におけるＣＯＸ１〜４、ＨＳＰ７２、ＰＧＣ−１α、ＰＧＣ−１βの遺伝子発現は、通常老化マウスであるＳＡＭ−Ｒ１対照群に対して有意に低く、老化に伴い電子伝達系に関与する遺伝子やミトコンドリアの分化・増殖に関与する遺伝子の発現は低下することがわかる。
一方、カテキン飼料と運動を併用したＳＡＭ−Ｐ１カテキン群のＣＯＸ２〜４、ＨＳＰ７２遺伝子発現はＳＡＭ−Ｐ１対照群と比較して有意に高かった。このことから、茶カテキンを摂取すると、老化に伴う電子伝達系やミトコンドリアの分化・増殖に関与する遺伝子の発現の低下が抑制されたことがわかる。
また、上記のように茶カテキン摂取と運動の併用により電子伝達系遺伝子が抑えられることはミトコンドリア機能の機能が維持されていることを意味している。
【００４９】
以上のことから、カテキン類は、老化抑制、具体的には老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリアの機能低下等を抑制する作用を有し、老化抑制剤、ミトコンドリア機能向上剤として有用である。
【００５０】
以下に、本発明の老化抑制剤等の製剤例を示す。
製剤例１ 老化抑制用容器詰飲料
表６に示した配合および条件で、老化抑制用容器詰飲料を調製した。また、本容器詰飲料における茶抽出物（茶カテキン）の組成を表７に示す。本飲料の保存安定性および風味は良好であった。
【００５１】
【表６】
【００５２】
【表７】
【００５３】
製剤例２ 老化抑制用経腸栄養剤（濃厚流動食）
表８に示した配合で、本発明品を常法に従いレトルトに密封後、高圧蒸気滅菌し、調製した。ミネラル類は、Ｎａ、Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｐ、Ｃ１、Ｆｅ等の有機又は無機塩混合物、ビタミン類は、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、Ｃ、ナイアシン、パントテン酸等の混合物を、国民栄養所要量に合致した量用いた。
【００５４】
【表８】
【００５５】
製剤例３ 老化抑制用ゼリー食品
カラギーナンとローカストビーンガムの混合ゲル化剤０．６５％、グレープフルーツの５０％の濃縮果汁５．０％、クエン酸０．０５％、ビタミンＣ０．０５％、茶カテキン（テアビゴ（ＤＳＭニュートリショナル・プロダクツ））０．５４％、を混合し、これに水を加えて１００％に調整し、６５℃で溶解した。更に少量のグレープフルーツフレーバーを添加して８５℃で５分間保持して殺菌処理後、１００ｍｌの容器に分注した。８時間静置して徐冷しながら５℃に冷却して、カテキンを含有するゼリー食品を得た。
【００５６】
製造例４ 老化抑制用ビタミン内服液
タウリン８００ｍｇ、ショ糖２０００ｍｇ、カラメル５０ｍｇ、安息香酸ナトリウム３０ｍｇ、ビタミンＢ１硝酸塩５ｍｇ、ビタミンＢ２ ２０ｍｇ、ビタミンＢ6 ２０ｍｇ、ビタミンＣ ２０００ｍｇ、ビタミンＥ １００ｍｇ、ビタミンＤ3 ２０００ＩＵ、ニコチン酸アミド２０ｍｇ、茶カテキン（ポリフェノン７０Ｓ（三井農林））１００ｍｇを適量の精製水に加えて溶解し、リン酸水溶液でｐＨ３に調節した後、更に精製水を加えて全量を５０ｍｌとした。これを８０℃で３０分滅菌して、カテキンを含有するビタミン内服液を得た。
【００５７】
製剤例５ 老化抑制用チュアブル錠剤
アスコルビン酸１８０ｍｇ、クエン酸５０ｍｇ、アスパルテーム１２ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム２４ｍｇ、結晶セルロース１２０ｍｇ、乳糖２７４ｍｇ、茶カテキン（テアフラン９０Ｓ（伊藤園））５４０ｍｇなる処方で、日本薬局方（製剤総則「錠剤」）に準じて錠剤を製造し、カテキンを含有するチュアブル錠剤を得た。
【００５８】
製剤例６ 老化抑制用錠剤
下記処方に基づいて、常法によりカテキン類を含有する錠剤を調製した。成分配合量（重量％）：茶カテキン（ポリフェノン７０Ｓ（三井農林））２０、リンゴ酸ナトリウム２０、パラチノース２０、アスコルビン酸２０、ビタミンミックス（日本香料薬品社製）５、結晶セルロース５、ショ糖エステル４、二酸化ケイ素１、卵殻カルシウム５。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カテキン類をする有効成分とする老化抑制剤。
【請求項２】
老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下又はミトコンドリア機能低下、を抑制する請求項１記載の老化抑制剤。
【請求項３】
カテキン類を含有する老化抑制用飲食品。
【請求項４】
老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下、を抑制する請求項３記載の飲食品。
【請求項５】
カテキン類の老化抑制剤としての使用。
【請求項６】
老化抑制剤の製造のためのカテキン類の使用。
【請求項７】
カテキン類を有効成分とするミトコンドリア機能向上剤。
【請求項１】
カテキン類をする有効成分とする老化抑制剤。
【請求項２】
老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下又はミトコンドリア機能低下、を抑制する請求項１記載の老化抑制剤。
【請求項３】
カテキン類を含有する老化抑制用飲食品。
【請求項４】
老化に伴って生じる、持久力低下、疲労、エネルギー代謝低下、ミトコンドリア機能低下、を抑制する請求項３記載の飲食品。
【請求項５】
カテキン類の老化抑制剤としての使用。
【請求項６】
老化抑制剤の製造のためのカテキン類の使用。
【請求項７】
カテキン類を有効成分とするミトコンドリア機能向上剤。
【公開番号】特開２００８−６３３１８（Ｐ２００８−６３３１８Ａ）
【公開日】平成２０年３月２１日（２００８．３．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−６３５２１（Ｐ２００７−６３５２１）
【出願日】平成１９年３月１３日（２００７．３．１３）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年３月２１日（２００８．３．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月１３日（２００７．３．１３）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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