脂肪酸シンターゼ阻害剤による癌の発生を阻害する方法
脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）阻害剤の投与により、癌の発生を阻害または予防する方法。特に、本発明は、ＦＡＳを発現する前悪性（非浸潤性）病変からの浸潤癌の発生を阻害するか、または遅延させる。さらに、ＦＡＳ阻害剤を含有する組成物、ならびにＦＡＳ阻害剤および組成物を、それを必要とする患者に投与する方法が提供される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）阻害剤の投与により、癌の発生を阻害または予防する方法に関する。特に、本発明は、ＦＡＳを発現する前悪性（非浸潤性）病変からの浸潤癌の発生を阻害するか、または遅延させる。さらに、ＦＡＳ阻害剤を含有する組成物、ならびにＦＡＳ阻害剤および組成物を必要とする患者に投与する方法が提供される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
脂肪酸は、細胞生理学において３つの主要な役割を有する。第１に、それらは生体膜の構成成分である。第２に、脂肪酸誘導体は、ホルモンや細胞内メッセンジャーとしての機能を果たす。第３に、脂肪酸は、中性脂肪としても知られるトリアシルグリセロールとして脂肪組織内に蓄えられうる燃料分子である。
【０００３】
脂肪酸合成経路において、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）、リンゴ酸酵素およびクエン酸リアーゼ（ｃｉｔｒｉｃ ｌｙａｓｅ）の４種の主要な酵素が関与している。この主要な酵素は、ＦＡＳであり、前駆体であるマロニル−ＣｏＡとアセチル−ＣｏＡのＮＡＤＰＨ依存性縮合を触媒することで脂肪酸を生成する。ＮＡＤＰＨは、脂肪酸シンターゼにおける２つのレダクターゼの段階（エノイルレダクターゼおよびβ−ケトアシルレダクターゼ）において必須の電子供与体として有用な還元剤である。残りの３種の酵素（すなわち、ＡＣＣ、リンゴ酸酵素およびクエン酸リアーゼ（ｃｉｔｒｉｃ ｌｙａｓｅ））は、その必要な前駆体を生成する。その他の酵素、たとえば、ＮＡＤＰＨを生成する酵素なども、脂肪酸合成に関与している。
【０００４】
ＦＡＳは、酵素委員会（Ｅ．Ｃ．）Ｎｏ．２．３．１．８５を有し、さらに、脂肪酸シンターゼ、脂肪酸リガーゼ、ならびにその組織名がアシル−ＣｏＡ：マロニル−ＣｏＡ Ｃ−アシルトランスフェラーゼ（脱炭酸化、オキソアシル−およびエノイル−還元およびチオエステル−加水分解）としても知られている。脂肪酸のＦＡＳ触媒合成には、７種の相異なる酵素、すなわちアセチルトランスアシラーゼ、マロニルトランスアシラーゼ、βケトアシルシンテターゼ（縮合酵素）、βケトアシルレダクターゼ、βヒドロキシアシル脱水酵素、エノイルレダクターゼ、およびチオエステラーゼが関与している（Ｗａｋｉｌ，Ｓ．，“Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ，ａ ｐｒｏｆｉｃｉｅｎｔ ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｎｚｙｍｅ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８：４５２３〜４５３０，１９８９）。これらすべての７つの酵素が、ともにＦＡＳを含有する。
【０００５】
脂肪酸合成経路における４種の酵素の内、ＦＡＳ以外の３種の酵素が他の細胞機能に関与する一方で、ＦＡＳは脂肪酸合成経路内に限って作用するので、阻害にとっての好ましい標的である。したがって、他の３種の酵素の内の１種を阻害することで、正常細胞が影響を被る可能性が一層高まる。
【０００６】
ＦＡＳ阻害剤は、ある化合物の精製されたＦＡＳの酵素活性に対する阻害能によって同定可能である。ＦＡＳ活性は、たとえば、マロニルＣｏＡの存在下でのＮＡＤＰＨの酸化測定などの当該技術分野において周知の多くの手段によるアッセイが可能である（Ｄｉｌｓ，Ｒ．およびＣａｒｅｙ，Ｅ．Ｍ．，“Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｆｒｏｍ ｒａｂｂｉｔ ｍａｍｍａｒｙ ｇｌａｎｄ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，３５：７４〜８３，１９７５）。ある化合物がＦＡＳ阻害剤か否かの判定に関する他の情報は、米国特許第５，９８１，５７５号明細書に見出されるであろう（この開示は参照により本願明細書に含まれる）。
【０００７】
ＦＡＳによって実行される７つの酵素段階の内で、縮合酵素（すなわち、β−ケトアシルシンターゼ）によって触媒される段階は、脂肪酸合成を低下または停止させる阻害剤にとっての好ましい候補である。ＦＡＳ複合体の縮合酵素は、構造および機能の観点からよい特性を示す。縮合酵素の活性中心は、たとえば、阻害剤２，３−エポキシ−４−オキソ−７，１０−ドデカジエノイルアミド（以下「セルレニン」）などの抗高脂血試薬の標的である、重要なシステインチオールを含有する。
【０００８】
縮合酵素の好ましい阻害剤は、アルキル化剤、酸化剤、ジスルフィド置換されうる試薬などの広範囲の化合物を含む。上記化合物の阻害活性は、精製されたヒト脂肪酸シンターゼの活性に関する効果を測定するアッセイの際、または［14Ｃ］アセテートの総脂質への取り込みの際に、同化合物の効果を観察することで確認・証明される場合がある（Ｐｉｚｅｒ，Ｅ．Ｓ．，Ｔｈｕｐａｒｉ，Ｊ．，Ｈａｎ，Ｗ．Ｆ．，Ｐｉｎｎ，Ｍ．Ｌ.，Ｃｈｒｅｓｔ，Ｆ．Ｊ．，Ｆｒｅｈｙｗｏｔ，Ｇ．Ｌ．，Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｃ．Ａ．，およびＫｕｈａｊｄａ，Ｆ．Ｐ．，“Ｍａｌｏｎｙｌ−ｃｏｅｎｚｙｍｅ−Ａ ｉｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉａｔｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０：２１３〜２１８，２０００）。セルレニンは、上記阻害剤の１例である。セルレニンは、ＦＡＳ縮合酵素の活性部位において、重要なシステインチオール基に共有結合し、この重要な酵素段階を不活化する（Ｆｕｎａｂａｓｈｉ，Ｈ．，Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，Ａ．，Ｔｏｍｏｄａ，Ｈ．，Ｏｍｕｒａ，Ｓ．，Ｏｋｕｄａ，Ｓ．，およびＩｗａｓａｋｉ，Ｓ．Ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｆ ｃｅｒｕｌｅｎｉｎ ｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０５：７５１〜７５５，１９８９）。
【０００９】
さまざまな他の化合物がＦＡＳを阻害することが判明している。以下に記載する表１では、数種類の既知のＦＡＳ阻害剤をリストアップしている。好ましくは、本発明に記載される阻害剤は、ＦＡＳ阻害に対してＬＤ50よりも低いＩＣ50を示すことで、適切な処理指数、安全なプロファイル、ならびに有効性を示すことになる。より好ましくは、ＬＤ50は、少なくともＩＣ50よりも高くて大規模である。
【００１０】
【表１】
【００１１】
ＦＡＳ阻害剤は、体重減少を誘発し、既住の癌細胞の増殖を阻害する薬剤として開示されている。たとえば、米国特許第５，９８１，５７５号明細書（「‘５７５特許」）は、ＦＡＳ阻害剤（γで置換されたα−メチレン−β−カルボキシ−γ−ブチロラクトン化合物）の１つのクラスの投与によって、体重減少を誘発するための方法を開示している。さらに、同‘５７５特許は、これらの化合物が既住の癌細胞の増殖を阻害するのに有用であることを開示している。米国特許第５，７５９，８３７号明細書（「‘８３７特許」）は、他の種類の形質転換されていない（正常）細胞ではない癌細胞に対して選択的に細胞傷害性を有するある用量でのＦＡＳ阻害剤の投与によって既住の癌を治療するための方法について開示している。しかしながら、‘５７５特許も‘８３７特許も、癌発生以前（すなわち、癌細胞の初期出現以前）における、これらの化合物の投与について開示しておらず、ましてや前癌性病変に関与するいずれの方法についても開示していない。
【００１２】
最近、患者における前癌性状態を検出する数多くの技術が開発されてきており、癌細胞の初期出現以前であっても治療を開始することが可能になっている。このような早期診断により、癌発生リスクを実質的に低減させる予防的治療を開始することが可能になる。早期スクリーニングのための既知の方法として、たとえば、胸、上部気管食道、膵臓、前立腺、結腸などのさまざまな組織タイプにおいて前癌性病変を検出するために、たとえば、光、超音波、またはＸ線誘導による針生検、細針吸引、および脱落細胞診断法の使用が挙げられる。
【００１３】
癌罹患率および癌生存率の統計における改善は、主に、腫瘍サイズが小さい場合や癌が原発部位に限局されている場合における癌の早期検出に基づいている。過去２年における乳癌に対する死亡率の軽減は、部分的には早期発見による可能性がある（Ａｈｍｅｄｉｎ，Ｊ．，Ｔｈｏｍａｓ，Ａ．，Ｍｕｒｒａｙ，Ｔ．，およびＴｈｕｎ，Ｍ．，“Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ２００２”，ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ，５２：２３〜４７，２００２）。しかしながら、多くの癌に対する死亡率は、最近の早期診断における進歩にもかかわらず、それを反映した改善の様相を呈していない。浸潤癌の発生を予防する、もしくは遅延させるであろう前悪性病変の効果的治療からみると、さらに癌の罹患率および死亡率において極めて顕著な改善の可能性が浮上してくる。
【００１４】
本発明は、ＦＡＳ阻害剤の投与によって被験者における前癌性状態を治療する（すなわち、癌発生を阻害する）方法が提供されたことにより、最近、早期診断が進歩したことに敬意を表するものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
発明の概要
本発明は、ＦＡＳ阻害剤の投与によって癌発生を阻害する方法を提供する。本発明の方法は、特にＦＡＳを発現する前悪性病変からの乳癌発生を遅らせたり、予防するのに有用である。また、ＦＡＳ阻害剤を含有する組成物、ならびにＦＡＳ阻害剤および組成物を必要とする患者に投与する方法が提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
したがって、１つの実施形態において、本発明は、ＦＡＳ阻害剤の有効量投与を必要とする被験者への投与に関与する癌発生を阻害する方法について提供する。
【００１７】
別の実施形態では、本発明は、癌発生を阻害する、医薬品として認可された添加物を含有する薬剤組成物およびＦＡＳ阻害剤の癌発生を阻害する有効量を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明は、ＦＡＳ阻害剤の投与によって癌発生を阻害するための方法を提供する。本発明は、特に、ＦＡＳ阻害剤の有効量投与を必要とする被験者への投与に関与する癌発生を阻害する方法を提供する。
【００１９】
さらに、本発明は、癌発生を阻害するのに有用なＦＡＳ阻害剤を含有する組成物を提供する。特に、本発明は、癌発生を阻害する、医薬品として認可された添加物を含有する薬剤組成物およびＦＡＳ阻害剤の癌発生を阻害する有効量を提供する。
【００２０】
本願明細書で用いられるように、用語「阻害する」とは、前癌性細胞において、たとえば、アポトーシス（すなわち、遺伝的に決定される細胞死）を刺激する、誘導する、または引き起こすことなどによって、癌発生を予防する、抑制する、阻止する、遮断する、または遅らせることを意味するものと理解される。
【００２１】
本願明細書で用いられるように、用語「癌発生」とは、癌細胞の初期出現を意味するものとして理解される。ここで「癌細胞」とは、自律的増殖の特性を有し、周囲組織へ浸潤した細胞のことを示している。
【００２２】
本願明細書で用いられるように、用語「投与」とは、たとえば、経口で、直腸から、鼻から、または非経口などで、当該技術分野において共通に用いられる数多くの可能な投与手段のいずれかを意味するものと理解される。ここで非経口投与として、局所性投与と同様に、例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸腔内、膀胱内、髄腔内、皮下が挙げられる。くわえて、「投与」は、当該技術分野で共通に用いられる数多くの薬剤組成物の形態のいずれかを介する投与を含む。
【００２３】
好ましい薬剤組成物として、たとえば、固形剤（たとえば、タブレット、カプセル、粉剤、ピル、または顆粒）または液剤（たとえば、シロップ、エマルジョンまたは懸濁液）などの経口組成物、たとえば座剤などの直腸組成物、たとえば注射または輸液に適する組成物などの非経口組成物が挙げられる。
【００２４】
本願明細書で用いられるように、用語「必要とする被験者」とは、前癌性と診断されている被験者、または遺伝的あるいは他の要因で同疾患を発症する素因を有する可能性がある被験者を含むものと理解される。好ましい様式において、本発明は、たとえば、体重減少などの前癌性状態を治療すること以外で、なんらかの目的でＦＡＳ阻害剤を服用中の被験者の治療を目的とするものではない。
【００２５】
好ましくは、被験者は治療法が研究される種類の癌を発症していない。くわえて、被験者は、１つ以上の前癌性病変を有していてもよい。前癌性病変は、好ましくはＦＡＳ、またはＦＡＳおよびｎｅｕタンパクを発現してもよい。前癌性病変が任意の組織で発生することがあるとはいえ、本発明は、特にＦＡＳを発現する、胸、口腔、肺、胆管、胃、前立腺、またはこれらのいずれかの組み合わせにおける病変を対象とする治療法を提供する。好ましくは、被験者は哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
【００２６】
本願明細書で用いられるように、用語「癌発生を阻害する有効量」とは、癌発生を阻害する所望の結果を得るのに必要なＦＡＳ阻害剤の量を意味するものと理解される。また、その有効量が通常、処方医師によって決められ、同量は、各被験者の年齢、体重および反応、ならびに（被験者が前癌性病変由来の症状を呈する場合の）被験者の症状の重症度と投与される特定化合物の効力によって変化することが理解される。好ましくは、有効量は、週に約６０ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇの範囲にあり、より好ましくは、週に約３０ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇの範囲にあり、最も好ましくは、週に約１５ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇの範囲にある。有効量は、単回もしくは分割で投与してもよい。
【００２７】
本願明細書で用いられるように、用語「ＦＡＳ阻害剤」とは、ＦＡＳ酵素を直接阻害する化合物を意味するものと理解される。直接阻害とは、たとえば、すべての細胞活性における低下などの、化合物が有するなんらかの他の作用の二次的な結果ではなく、阻害剤が酵素上に直接作用することでＦＡＳ活性を低下させることを意味している。ＦＡＳ阻害は、米国特許第５，９８１，５７５号明細書に記載される手段によって判定可能である。
【００２８】
好ましくは、ＦＡＳ阻害剤は、以下の化合物の１種である。つまり、Ｃ７５（すなわち、テトラヒドロ−３−メチレン−２−オキソ−５−ｎ−オクチル−４−フランカルボン酸）；セルレニン（すなわち、２，３−エポキシ−４−オキソ−７，１０−ドデカジエノイルアミド）；１，３−ジブロモプロパノン；エルマン（Ｅｌｌｍａｎ）試薬（５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）、ＤＴＮＢ）；４−（４’−クロロベンジロキシ）ベンジルニコチン酸（ＫＣＤ−２３２）；４−（４’−クロロベンジロキシ）安息香酸（ＭＩＩ）;２（５（４−クロロフェニル）ペンチル）オキシラン−２−カルボキシラート（ＰＯＣＡ）およびそのＣｏＡ誘導体；エトキシギ酸無水物；チオラクトマイシン（ｔｈｉｏｌａｃｔｏｍｙｃｉｎ）；フェニオセルレニン（ｐｈｅｎｙｏｃｅｒｕｌｅｎｉｎ）；メラルソプロール；ヨードアセテート；フェニルアルシネオキシド（ｐｈｅｎｙｌａｒｓｉｎｅｏｘｉｄｅ）；ペントスタム；メリチン；またはメチルマロニルＣｏＡである。１つの好ましいＦＡＳ阻害剤はＣ７５である。他の好ましいＦＡＳ化合物は、米国特許出願第６０／３９４，５８５号明細書に開示されている以下に示す化合物である（この開示は参照により本願明細書に含まれる）。
【化１】
（式中、
Ｒ1＝Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、−ＣＨ2ＯＲ5、−Ｃ（Ｏ）Ｒ5、−ＣＯ（Ｏ）Ｒ5、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｒ5、または−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ5であり、ここで、Ｒ5およびＲ6は、各々独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、場合により１つ以上のハロゲン原子を含有しており；
Ｒ2＝−ＯＨ、−ＯＲ7、−ＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｒ7、−ＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ7、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ7、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ7、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ7Ｒ8であり、ここで、Ｒ7およびＲ8は、各々独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ7およびＲ8は、各々場合によりハロゲン原子を含有することが可能であり；
互いに同一または異なるＲ3およびＲ4は、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである）
【００２９】
好ましいＦＡＳ阻害剤の別の基は、米国特許出願第６０／３９２，８０９号明細書に開示されているものである（この開示は参照により本願明細書に含まれる）。
【化２】
（式中、
Ｒ9＝Ｈ、またはＣ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ11、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ11、−Ｃ（Ｏ）Ｒ11、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＲ11、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ11であり、ここで、Ｒ11は、ＨまたはＣ1−Ｃ10アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり；
Ｒ10＝Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり；
Ｘ＝−ＯＲ12、または−ＮＨＲ12であり、ここで、Ｒ12は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、該Ｒ12基は、場合によりカルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、さらに該Ｒ12基は、場合により１つ以上のハロゲン原子を含有しており；
但し、Ｒ9が＝ＣＨ2の場合にＸは−ＯＨではない。）
【００３０】
本願明細書で用いられるように、用語「添加剤」とは、たとえば、基材、賦形剤、希釈剤、充てん剤、またはこれらの組み合わせなどの、当該技術分野において共通に使用可能な数多くの有望な添加剤の内のいずれかを意味するものと理解される。好ましい添加剤の例は、水、アルコール、ゼラチン、サッカロース、ペクチン、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、動物または植物由来のさまざまな油、グリコール、デンプンおよびデンプン誘導体、シリカ、ラクトース、ラクトース一水和物、セルロースおよびセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、ＰＶＰまたはポビドン、マンニトール、ソルビトール、ゼラチン、糖アルコール、ステアリン酸、アクリル誘導体、アルギン酸、α−オクタデシル−オメガ−ヒドロキシポリ−（オキシエチレン）−５−ソルビン酸−Ｈ2Ｏ、アラビアゴム、香味物質、アスコルビン酸、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸カルシウム、ステアリン酸カルシウム、カルメロース・ナトリウム、セルロース、セルロース誘導体、ジメチコーン、着色剤、ゼラチン、グルコース・シロップ、極めて分散したシリカ、安息香酸カリウム、ラクトース一水和物、マクロゴール（Ｍａｃｒｏｇｏｌ）、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム（軽質）、ステアリン酸マグネシウム、コーンスターチ、膨潤したコーンスターチ、マンニット、マンニトール、食用脂肪酸のモノグリセリドおよびジグリセリド、モンタングリコールワックス、安息香酸ナトリウム、（無水）炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ポリ（ブチルメタクリレート）−ｃｏ−（２−ジメチル・アミノ・エチル・メタクリレート）、ポリビドンＫ２５、ポビドン、精製されたキャスター・オイル、スクロース、スクロース・モノステアレート、セラック、ソルビトール、滑石粉、二酸化チタン、酒石酸、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールまたはマクロゴール、スタビライザー、酸化防止剤、さまざまな天然乳化または合成乳化された分散剤または湿潤剤、着色剤、芳香剤、バッファ、崩壊剤、さらに当該技術分野で既知であり、活性剤の生物的可用性を促進する他の物質である。
【００３１】
驚くべきことに、多くの研究により、前癌性ヒト胸部病変、ならびに他の臓器からの前癌性病変に、ＦＡＳ発現が高度であることが証明されている。以下に示す表２は、癌前駆体病変におけるＦＡＳ発現の有病率および浸潤癌へのその進行速度、あるいは浸潤癌との関連について示している。
【００３２】
前癌性病変の命名は、臓器毎に異なることがあるため、各用語を簡単に定義することが同表の解釈に役立つであろう。胸部では、ｉｎ ｓｉｔｕ癌すなわち管内癌およびｉｎ ｓｉｔｕ小葉癌（列１および２）として定義される２種類の前浸潤性（前癌性）病変がある。ｉｎ ｓｉｔｕ癌なる用語は、前癌性細胞がまだ周囲組織に浸潤していない病変を説明するのに用いられる。これらの病変は、浸潤癌の発生にとっての最高のリスクと関連しており、さらにＦＡＳ免疫反応性の最高の有病率を有する。さらに、癌発生に対して中間的リスクを有する胸部病変も存在する（列３）。これらのいわゆる「非定型の管状または小葉状の肥厚」は、ｉｎ ｓｉｔｕ癌の組織学的な特徴のすべてを示すものではない。これらの胸部病変は、ｉｎ ｓｉｔｕ癌に対して約半分に相当する乳癌の発生リスクを示し、ＦＡＳ陽性の頻度は低めである。
【００３３】
前立腺において、前立腺上皮内新生組織形成（ＰＩＮ）は、腺における他の部位での浸潤癌の存在に関連する病変である。ＰＩＮは、低グレードまたは高グレードとして説明される。低グレードの病変が癌と有意な関連がないとはいえ、高グレードＰＩＮは、約３分の１の場合に、浸潤性前立腺癌とともに発生する（列４）。ＰＩＮの真の自然暦または未治療のＰＩＮについては、未知のままである。一般に、ＦＡＳは高グレードＰＩＮにおいて発現される。
【００３４】
一般に、癌は腺腫の中で、または腺腫と関連して発生することが判明していることから、腺腫は結腸直腸癌に対して共通に認識されている前駆体病変である（列５）。増加するサイズ、絨毛形態学、および（組織学的かつ細胞学的特徴の両方によって定義される）高グレードの異形成の存在は、癌発生に対するリスクの増加と関連している。「異形成」なる用語は、前癌性病変への進行を示す組織内の組織学的かつ細胞学的変化を示すのに用いられる。ある研究では、ＦＡＳは結腸直腸癌の中の至るところに存在した。一方、別のグループは、腺腫において異形成の度合いが増加するにつれてＦＡＳの発現が増加したことを発見した。
【００３５】
肺では、扁平上皮癌は、異型扁平上皮粘膜から発生する。喫煙などの肺への慢性的障害により、まず気道における繊毛腺性粘膜からより耐障害性のある扁平上皮粘膜に変化するに至る。この過程は、化生と呼ばれる。時間がたてば、煙中の発癌物質により、前癌性病変の発生を示す、異形成と呼ばれる組織学的かつ細胞学的変化が誘引される。いったん高グレードの異形成が見られると、浸潤癌の発生に対するリスクが有意になる。ＦＡＳの発現が異型気管支上皮で増加することが見出されている。
【００３６】
胃における癌前駆体病変は腺腫であり、結腸直腸腺腫と類似しているものの同一ではない。結腸では、同病変は癌発生のリスクを抱えており、ＦＡＳは共通して発現される。
【００３７】
口腔内における浸潤癌に対する前駆体は、口の内側を覆う扁平上皮粘膜の異形成であり、肺癌を誘発する気管支扁平上皮の異形成に類似している。さらに、ＦＡＳの発現は、これらの異型病変においても増加する。
【００３８】
一般に、胆管癌は、異型腺性粘膜から発生する。この組織では、気管支におけるように、上皮は腺から扁平上皮にかけて変化しない。それにもかかわらず、ＦＡＳの発現は、胆管異形成において至るところで見られる。
【００３９】
【表２】
【００４０】
６．Ｍｉｌｇｒａｕｍ，Ｌ．Ｚ．，Ｗｉｔｔｅｒｓ，Ｌ．Ａ．，Ｐａｓｔｅｒｎａｃｋ，Ｇ．Ｒ．およびＫｕｈａｊｄａ，Ｆ．Ｐ．，“Ｅｎｚｙｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙ ａｒｅ ｈｉｇｈｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｉｎ ｓｉｔｕ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．”Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，３：２１１５〜２１２０，１９９７。
７．Ｂｅｓｔｉｌｌ，Ｗ．Ｌ．，Ｒｏｓｅｎ，Ｐ．Ｐ．，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐ．Ｈ．およびＲｏｂｂｉｎｓ，Ｇ．Ｆ．，“Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｂｙ ｂｉｏｐｓｙ ａｌｏｎｅ”，ＪＡＭＡ，２３９：１８６３〜１８６７，１９７８。
８．Ｐａｇｅ，Ｄ．Ｌ．，Ｄｕｐｏｎｔ，Ｗ．Ｄ．，Ｒｏｇｅｒｓ，Ｌ．Ｗ．およびＬａｎｄｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．，“Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒｅａｓｔ：ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ａｆｔｅｒ ｂｉｏｐｓｙ ｏｎｌｙ”，Ｃａｎｃｅｒ，５５：２６９８〜２７０８，１９８２。
９．Ｐａｇｅ，Ｄ．Ｌ．およびＪａｐａｚｅ，Ｈ．Ｊ．，Ｔｈｅ Ｂｒｅａｓｔ：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｅｎｉｇｎ ａｎｄ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，ｐ．１６９〜１９２．：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，１９９１。
１０．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｊ．，“Ｌｏｂｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ：ａ ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｉｎ ５２ ｃａｓｅｓ”，Ａｃｔａ Ｐａｔｈｏｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｓｃａｎｄ Ｓｅｃｔ Ａ，８２：５１９〜５３３，１９７４。
１１．Ｒｏｓｅｎ，Ｐ．Ｐ．，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐ．Ｈ．，Ｂｒａｕｎ，Ｄ．Ｗ．Ｊ．，Ａｄａｉｒ，Ｆ．およびＢｒａｕｎ，Ｄ．Ｗ．Ｊ．，“Ｌｏｂｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒｅａｓｔ：ｄｅｔａｉｌｅｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ９９ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｖｅｒａｇｅ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｏｆ ２４ｙｅａｒｓ”，Ａｍ ＪＳｕｒｇ Ｐａｔｈｏｌ，２：２２５〜２５１，１９７８。
１２．Ｐａｇｅ，Ｄ．Ｌ．，Ｋｉｄｄ，Ｔ．Ｅ．Ｊ．，Ｄｕｐｏｎｔ，Ｗ．Ｄ．，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｆ．およびＲｏｇｅｒｓ，Ｌ．Ｗ．“Ｌｏｂｕｌａｒ ｎｅｏｐｌａｓｉａ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒｅａｓｔ：ｈｉｇｈｅｒ ｒｉｓｋ ｆｏｒ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｂｙ ｍｏｒｅ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ”， Ｈｕｍ Ｐａｔｈｏｌ，２２：１２３２〜１２３９，１９９１。
１３．Ｒｏｓｅｎ，Ｐ．，Ｐ．Ｒｏｓｅｎ’ｓ ｂｒｅａｓｔ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．， ２ｎｄ．ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐ．２２９〜２４８，５８１〜６２６．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００１。
１５．Ｂｏｄｉａｎ，Ｃ．Ａ．，Ｐｅｒｚｉｎ，Ｋ．Ｈ．，Ｌａｔｔｅｓ，Ｒ．，Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｐ．およびＡｂｅｒｎａｔｈｙ，Ｔ．Ｇ．，“Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｂｅｎｉｇｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｃａｎｃｅｒ，７１：３８９６〜３９０７，１９９３。
１６．Ｄｕｐｏｎｔ，Ｗ．Ｄ．およびＰａｇｅ，Ｄ．Ｌ．，“Ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｒｉｓｋ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ，ａｇｅ ａｔ ｆｉｒｓｔ ｂｉｒｔｈ，ａｎｄ ｆａｍｉｌｙ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ”，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ，１２２５：７６９〜７７９，１９８７。
１７．Ｃａｒｔｅｒ，Ｃ．Ｌ．，Ｃｏｒｌｅ，Ｄ．Ｋ．，Ｍｉｃｏｚｚｉ，Ｍ．Ｓ．，Ｓｃｈａｔｚｋｉｎ，Ａ．およびＴａｙｌｏｒ，Ｐ．Ｒ．，“Ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ １６，６９２ ｗｏｍｅｎ ｗｉｔｈ ｂｅｎｉｇｎ ｂｒｅａｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ”，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ，１２８：４６７〜４７７，１９８８。
１９．Ｋｒｏｎｚ，Ｊ．Ｄ．，Ａｌｌａｎ，Ｃ．Ｈ．，Ｓｈａｉｋｈ，Ａ．Ａ．およびＥｐｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｉ．，“Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ａ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｈｉｇｈ−ｇｒａｄｅ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ ｏｎ ｎｅｅｄｌｅ ｂｉｏｐｓｙ：ｄａｔａ ｏｎ ｍｅｎ ｗｉｔｈ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｏｎｅ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｂｉｏｐｓｙ”，Ａｍ Ｊ Ｓｕｒｇ Ｐａｔｈｏｌ，２５：１０７９〜１０８５，２００１。
２２．Ａｔｋｉｎ，Ｗ．Ｓ．，Ｍｏｒｓｏｎ，Ｂ．Ｃ．およびＣｕｚｉｃｋ，Ｊ．，“Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ａｆｔｅｒ ｅｘｃｉｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｔｏｓｉｇｍｏｉｄａｄｅｎｏｍａｓ”，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，３２６：６５８〜６６２，１９９２。
２４．Ｓｕｐｒｕｎ，Ｈ．，Ｈｊｅｒｐｅ，Ａ．，Ｎａｓｉｅｌｌ，Ｍ．およびＶｏｇｅｌ，Ｂ．，Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ．Ｐａｒｔ ＩＩ，Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．，ｐ．１３０３〜１３２０，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，１９８０。
２５．Ｃａｒｔｅｒ，Ｄ．およびＰａｔｃｈｅｓｆｓｋｙ，Ａ．Ｓ．肺の腫瘍と腫瘍様領域（Ｔｕｍｏｒｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ−ｌｉｋｅ ｌｅｓｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｌｕｎｇ．），１ｓｔ．ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐ．１２０〜１４７，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，１９９８。
２７．Ｌａｘｅｎ，Ｆ．，“Ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｐｅｒｎｉｃｉｏｕｓ ａｎｅｍｉａ ｉｎ ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｏｆ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｗｉｔｈ ｇａｓｔｒｉｃ ｐｏｌｙｐｓ”，Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，１９：５３５〜５４０，１９８４。
２８．Ｇｏｌｄｍａｎ，Ｈ．消化管の病理学（Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ），２ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐ．５９４．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９９８。
２９．Ｋａｍｉｙａ，Ｔ．，Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ａｓａｋｕｒａ，Ｈ．，Ｍｉｕｒａ，Ｓ．，Ｍｕｎａｋａｔａ，Ｙ．およびＴｓｕｃｈｉｙａ，Ｍ．，“Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｇａｓｔｒｉｃ ａｄｅｎｏｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｇａｓｔｒｉｃ ｐｒｏｔｒｕｄｅｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｃａｎｃｅｒ，５０：２４９６〜２５０３，１９８２。
３１．Ｓｃｈｅｐｍａｎ，Ｋ．Ｐ．，ｖａｎ ｄｅｒ Ｍｅｉｊ，Ｅ．Ｈ．，Ｓｍｅｅｌｅ，Ｌ．Ｅ．およびｖａｎ ｄｅｒ Ｗａａｌ，Ｉ．“Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒａｌ ｌｅｕｋｏｐｌａｋｉａ：Ａ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａ ｈｏｓｐｉｔａｌ−ｂａｓｅｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ １６６ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｏｒａｌ ｌｅｕｋｏｐｌａｋｉａ ｆｒｏｍ Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ”，Ｏｒａｌ Ｏｎｃｏｌ，３４：２７０〜２７５，１９９８。
３２．Ｇｎｅｐｐ，Ｄ．Ｒ．，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ，１ｓｔ．ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐ．１〜１７．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，２０００。
３４．Ｏｗｅｎ，Ｄ．Ａ．およびＫｅｌｌｙ，Ｊ.，Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒ，ｂｉｌｉａｒｙ ｔｒａｃｔ，ａｎｄ ｐａｎｃｒｅａｓ．，ｐ．３３７．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，２００１。
【００４１】
米国特許出願第５，７５９，８３７号明細書では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＦＡＳ阻害がヒト乳癌細胞株においてアポトーシスを誘発することが開示されている。この知見は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＦＡＳ阻害剤であるセルレニンとＣ７５によるＮＴ５癌細胞増殖の阻害を例証する実施例２と図２によって支持されている。また、ｉｎ ｖｉｖｏでのＦＡＳ阻害により、ヒト乳癌およびヒト前立腺癌の異種移植の増殖が低下することも知られている（Ｏｗｅｎ，Ｄ．Ａ．およびＫｅｌｌｙ，Ｊ．，Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒ，ｂｉｌｉａｒｙ ｔｒａｃｔ，ａｎｄ ｐａｎｃｒｅａｓ．，ｐ．３３７．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．ソンダーズ・カンパニー（Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ），２００１； Ｐｉｚｅｒ，Ｅ．，Ｐｆｌｕｇ，Ｂ．，Ｂｏｖａ，Ｇ．，Ｈａｎ，Ｗ．，Ｕｄａｎ，Ｍ．およびＮｅｌｓｏｎ，Ｊ．，“Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ”、Ｐｒｏｓｔａｔｅ，４７：１０２〜１１０、 ２００１）。この知見は、ＦＡＳ阻害剤のＣ７５によるマウスでのＮＴ５腫瘍細胞の同種移植の増殖における低減を例証する実施例３と図３によって支持されている。したがって、ＦＡＳ阻害剤は、既住の癌細胞の増殖を阻害することが可能であることは既知であったが、ＦＡＳ阻害剤による処理が癌発生を阻害する可能性があることは、これまで知られていなかった。
【００４２】
ＦＡＳ阻害剤が癌発生を阻害する可能性を明らかにするために、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスモデルが用いられた。ＦＶＢ／Ｎ株由来のｎｅｕ−Ｎトランスジェニックマウスは、乳房特異性プロモーターのコントロール下で、形質転換していないラットのｎｅｕ ｃＤＮＡを発現する。結果として、マウスは、約１２５日目から自然に乳腺癌を発症し、３００日にかけてほとんどすべてのマウスが腫瘍を保持する（Ｇｕｙ，Ｃ．，Ｗｅｂｓｔｅｒ，Ｍ．，Ｓｃｈａｌｌｅｒ，Ｍ．，Ｐａｒｓｏｎｓ，Ｔ．，Ｃａｒｄｉｆｆ，Ｒ．およびＭｕｌｌｅｒ，Ｗ．，“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｕ ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｍｍａｒｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：１０５７８〜１０５８２，１９９２）。このモデルは、活性化（突然変異）ｎｅｕ遺伝子を有していない。活性化ｎｅｕモデルは、より急速な腫瘍発生の利点を有しているとはいえ（Ｇｕｙ，Ｃ．，Ｃａｒｄｉｆｆ，Ｒ．およびＭｕｌｌｅｒ，Ｗ．，“Ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｎｅｕ ｉｎｄｕｃｅｓ ｒａｐｉｄ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ”， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７１：７６７３〜７６７８，１９９６）、この点突然変異は、ヒト乳癌では同定されていない（Ｌｏｆｔｓ，Ｆ．およびＧｕｌｌｉｃｋ，Ｗ．，“Ｃ−ｅｒｂＢ２ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｓ．，６１：１６１〜１７９，１９９２）。したがって、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスモデルは、ｎｅｕが過剰発現されて突然変異されていないヒト疾患により酷似している。さらに、ｎｅｕは、ヒト腺管内癌の２５％に発現される（ＤＣＩＳ）（Ｇｌｏｃｋｎｅｒ，Ｓ．，Ｌｅｈｍａｎｎ，Ｕ．，Ｗｉｌｋｅ，Ｎ．，Ｋｌｅｅｂｅｒｇｅｒ，Ｗ．，Ｌａｎｇｅｒ，Ｆ．およびＫｒｉｅｐｅ，Ｈ．，“Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｇｒａｄｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｗｉｔｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｔｏ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ”， Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，８１：５６５〜５７１，２００１）。これは、ｎｅｕの過剰発現がヒト発癌における早期イベントであることを証明していることから、ｎｅｕＮモデルをさらに立証している。ＦＡＳ（Ｍｉｌｇｒａｕｍ，Ｌ．Ｚ．，Ｗｉｔｔｅｒｓ，Ｌ．Ａ．，Ｐａｓｔｅｒｎａｃｋ，Ｇ．Ｒ．およびＫｕｈａｊｄａ，Ｆ．Ｐ．，“Ｅｎｚｙｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙ ａｒｅ ｈｉｇｈｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｉｎ ｓｉｔｕ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，３：２１１５〜２１２０，１９９７）とｎｅｕは、共にヒト乳房組織におけるｉｎ ｓｉｔｕ癌において同定され、ＦＡＳ阻害はｎｅｕの過剰発現を伴って乳癌細胞のアポトーシスを誘引するために、ｎｅｕ−Ｎモデルは、ＦＡＳ阻害剤は癌発生を阻害可能であることを示すのに用いられた。
【００４３】
代表的なＦＡＳ阻害剤として、Ｃ７５が用いた。ＦＡＳ阻害剤としてのＣ７５の合成と有効性は、米国特許第５，９８１，５７５号明細書において証明された。
【００４４】
実施例４と図４は、３匹の動物が寿命である約１．５年近くにわたって腫瘍が出現しないままであったことで、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスのＦＡＳ阻害剤Ｃ７５による処理が癌の発生を有意に阻害したことを示している。他のＦＡＳ阻害剤は、Ｃ７５と同様な機序で作用することが予測可能である。
【００４５】
以下に示す実施例は、本発明の方法および組成物をさらに例証するために提供されている。これらの実施例は、単なる例証であって、決して本発明の範囲を限定しようとするものではない。
【実施例】
【００４６】
実施例１
ＮＴ５細胞における、２，３−エポキシ−４−オキソ−７，１０−ドデカジエノイルアミド（すなわち、セルレニン）およびテトラヒドロ−３−メチレン−２−オキソ−５−ｎ−オクチル−４−フランカルボン酸（すなわち、Ｃ７５）による脂肪酸合成阻害
腫瘍発生時におけるＦＡＳ阻害剤であるセルレニンおよびＣ７５が有する脂肪酸合成に対する阻害能が、トランスジェニックマウスの中で発生した腫瘍から樹立されたＮＴ５癌細胞において実証された（図１参照）。５×１０4 ＮＴ５細胞を２４ウェルプレート中に播種した。接着から１晩経た後、５ｍｇ／ｍｌ、４時間、ＤＭＳＯ中で希釈されたセルレニンとＣ７５によって細胞を処理した。その際、対照細胞には、単独で賦形剤を投与した。薬剤処理の残り２時間に、細胞を１μＣｉ［14Ｃ］アセテートで処理した。つぎに、総脂質を抽出し、計数した。その結果を図１に示す。同結果の統計解析（すなわち、両側ｔ−検定）を以下に示す。対照−Ｃ７５ ５μｇ／ｍｌ、ｐ＝０．１１６；対照−Ｃ７５ １０μｇ／ｍｌ、ｐ＝０．０１８；対照−セルレニン５μｇ／ｍｌ、ｐ＝０．００２；対照−セルレニン１０μｇ／ｍｌ、ｐ＝０．００２。
【００４７】
図１は、ＮＴ５癌細胞におけるセルレニンおよびＣ７５による脂肪酸合成の阻害を示す。ＮＴ細胞株は、トランスジェニックマウスで発生した腫瘍から樹立される。（Ｒｅｉｌｌｙ，Ｒ．，Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｍ．，Ｅｒｃｏｌｉｎｉ，Ａ．，Ｍａｃｈｉｅｌｓ，Ｊ．，Ｋａｎｅ，Ｃ．，Ｏｋｏｙｅ，Ｆ．，Ｍｕｌｌｅｒ，Ｗ．，Ｄｉｘｏｎ，Ｋ．およびＪａｆｆｅｅ，Ｅ．，“ＨＥＲ−２／ｎｅｕ Ｉｓ ａ Ｔｕｍｏｒ Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ Ｔａｒｇｅｔ ｉｎ Ｔｏｌｅｒｉｚｅｄ ＨＥＲ−２／ｎｅｕ Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｍｉｃｅ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０：３５６９〜３５７６，２０００ ； Ｒｅｉｌｌｙ，Ｒ．，Ｍａｃｈｉｅｌｓ，Ｊ．，Ｅｍｅｎｓ，Ｌ．，Ｅｒｃｏｌｉｎｉ，Ａ．，Ｏｋｏｙｅ，Ｆ．，Ｌｅｉ，Ｒ．，Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｄ．およびＪａｆｆｅｅ，Ｅ．，“Ｔｈｅ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｔｈ Ｈｕｍｏｒａｌ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ＨＥＲ−２／ｎｅｕ−ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ Ｉｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＥＲ−２／ｎｅｕ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｔｕｍｏｒｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６１：８８０〜８８３，２００１）、ＦＡＳ阻害剤であるＣ７５およびセルレニンの試験のために、ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルを提供している。図に示すように、セルレニンとＣ７５は、共にヒト細胞株による先行試験に匹敵するレベルで、ＮＴ５細胞における脂肪酸合成を阻害する（Ｐｉｚｅｒ，Ｅ．Ｓ．，Ｔｈｕｐａｒｉ，Ｊ．，Ｈａｎ，Ｗ．Ｆ．，Ｐｉｎｎ，Ｍ．Ｌ．，Ｃｈｒｅｓｔ，Ｆ．Ｊ．，Ｆｒｅｈｙｗｏｔ，Ｇ．Ｌ．，Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｃ．Ａ．，およびＫｕｈａｊｄａ，Ｆ．Ｐ．，“Ｍａｌｏｎｙｌ−ｃｏｅｎｚｙｍｅ−Ａ ｉｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉａｔｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０：２１３〜２１８，２０００； Ｐｉｚｅｒ，Ｅ．，Ｐｆｌｕｇ，Ｂ．，Ｂｏｖａ，Ｇ．，Ｈａｎ，Ｗ．，Ｕｄａｎ，Ｍ．，およびＮｅｌｓｏｎ，Ｊ．，“Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ”，Ｐｒｏｓｔａｔｅ，４７：１０２〜１１０，２００１）。さらに、図１は、これらの細胞が脂肪酸合成活性を有することから、これらの阻害剤の標的酵素であるＦＡＳを発現することを証明している。
【００４８】
実施例２
ＦＡＳ阻害剤によるＩｎ ｖｉｔｒｏでのＮＴ５癌細胞増殖の阻害
ＦＡＳ阻害剤のＮＴ５癌細胞増殖に対する阻害能は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで証明された（図２参照）。１×１０4細胞を２４ウェル・プレートに播種した。接着から１晩経た後、５ｍｇ／ｍｌでＤＭＳＯ中で希釈されたＣ７５またはセルレニンで細胞を処理した。その際、対照細胞には単独で賦形剤を投与した。７２時間後、細胞をクリスタルバイオレットで染色し（１０％メタノール中で０．２％）、１％ ＳＤＳに可溶化し、また外径を４９０ｎｍで測定した。両側ｔ−検定:対照−Ｃ７５ ５μｇ／ｍｌ、ｐ＝０．０００３；対照−Ｃ７５ １０μｇ／ｍｌ、ｐ＜０．０００１；対照−セルレニン ５μｇ／ｍｌ、ｐ＜０．０００１；対照−セルレニン １０μｇ／ｍｌ、ｐ＜０．０００１
【００４９】
図２は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＦＡＳ阻害剤によるＮＴ５癌細胞増殖の阻害を示す。図に示すように、ＦＡＳ阻害剤であるセルレニンおよびＣ７５による処理は、（減少した外径４９０ｎｍによって示されるように）癌細胞の増殖を有意に低減した。
【００５０】
実施例３
ＦＡＳ阻害剤によるマウスでのＮＴ５癌細胞同種移植の増殖における低減
ＦＡＳ阻害剤がマウスでのＮＴ５癌細胞同種移植の増殖に対する阻害能を有することが、ＦＶＢ／Ｎマウスを用いて証明された（図３参照）。１４匹の動物に、０．１ｍｌの培養ＮＴ５細胞をまとめて側腹部に投与した。測定可能な腫瘍の出現時、７匹の動物を、６日毎にＣ７５（０．１ｍｌ ＲＰＭＩ中３０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射）で処理し、７匹の動物に賦形剤対照を投与した。図３におけるエラーバーは、その標準誤差を示している。
【００５１】
図３は、ＦＡＳ阻害剤Ｃ７５によるマウスでのＮＴ５癌細胞同種移植の増殖における低下を示している。図に示すように、Ｃ７５での処理により、ＦＶＢ／ＮマウスにおいてＮＴ５腫瘍細胞同種移植の増殖が有意に低減した。
【００５２】
実施例４
ＦＡＳ阻害剤による癌発生の阻害
ＦＡＳ阻害剤が癌発生に対する阻害能を有することが、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスモデルを用いて証明された（図４参照）。この試験では、３０匹のＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスを用いた。１５匹のマウスに、５週齢から３ヶ月の間、週単位でＣ７５を投与し（０．１ｍｌ ＲＰＭＩ中３０ｍｇ／ｋｇ）、１５匹のマウスに単独で賦形剤を投与した。マウスは、毎日観察し、胸部腫瘍の初期出現を記録した。同試験中、対照群マウスの２匹と処理群マウスの６匹が死亡した。データのＬｏｇ−ｒａｎｋ解析によると、Ｃ７５で処理された動物における腫瘍の発生が有意に遅延したことが判明した。５０％の対照マウスに腫瘍が発生したのは約２００日後であったのに対し、Ｃ７５で処理された動物では約３００日後であった。さらに、３匹の処理された動物は、その寿命である１８ヶ月近くの間、腫瘍が発生しないままであった。
【００５３】
実施例５
作用機序の究明
１５匹の８〜１０週齢のｎｅｕ−Ｎトランスジェニックマウスを、Ｃ７５の週に３０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内（ｉｐ）への投与によって処理し、それとともに、１５匹に賦形剤対照を投与した（ＲＰＭＩ）。処理群および対照群から３匹のマウスを、２週目から２週間の間隔を設けた時点（８〜１０週齢時での最初のＣ７５による処理の２週間後）で、二酸化炭素窒息で殺害した。すべての動物は、犠牲になる２時間前に１ｍｇのＢｒｄＵ注射を受けた。肉眼で識別可能であった乳房内リンパ節とともに、鼠径乳腺全部を除去した。さらに、腎臓、肝臓および皮膚サンプルを各動物から採取した。片側からの乳腺、肝臓と、腎臓、肝臓および皮膚サンプルを中性緩衝ホルマリンで固定し、それ以外は全載標本のためにカルノア（Ｃａｒｎｏｙ）固定剤で固定した。さらに、同様の解析を行うために、非トランスジェニックで年齢をマッチングしたＦＶＢ／Ｎ対照マウス由来の乳腺を１０週目（１８〜２０週齢）で除去した。
【００５４】
２４時間、１０％中性緩衝ホルマリン中に固定後、乳腺をパラフィン中に組み込んだ。ヘマトキシリンとエオシンで染色した第１のスライドとともに、各組織画分から６つの４ミクロンのスライドを調製した。残りの染色されない画分は、以下の抗体、すなわちＦＡＳ、ＢｒｄＵおよびｐ２１／Ｗａｆ−１（Ｄａｋｏ、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ、ＣＡ）、ＡｋｔおよびＰｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ（セル・シグナリング・テクノロジーズ・インコーポレーティッド（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ビバリー（Ｂｅｖｅｒｌｙ）、ＭＡ）、およびｎｅｕ（サンタクルーズ バイオテクノロジー・インコーポレーティッド（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）、 サンタクルーズ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、ＣＡ）アポトーシス（アポタグ（ＡｐｏｐＴａｇ） Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｉｎ ｓｉｔｕ Ｏｌｉｇｏ Ｌｉｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、セロロジカル・コーポレーション（Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、テメクラ（Ｔｅｍｅｃｕｌａ）、ＣＡ）とともに、腫瘍発生前病変や周囲の胸部組織の免疫組織化学解析に利用した。染色は、４００倍における管状構造および小葉状構造における５００の総細胞当たりの陽性細胞数を計数することによって評価した。Ｐｒｉｓｍ３ソフトウェア上でｔ−検定を用いて統計解析を実施した。上述のように、カルノア（Ｃａｒｎｏｙ）の固定組織はカルミンレッドで染色し、グラススライド上に全載標本にした。賦形剤対照およびＦＶＢ／Ｎ動物と比較すると、ｎｅｕ−Ｎ動物における乳管構造の数、その厚みおよび新生する上皮構造の数いずれもが、Ｃ７５処理の８〜１０週後に有意に低下した。
【００５５】
図５は、対照（写真Ｃ、ＤおよびＥ）に対し、Ｃ７５で処理したＮ−ｎｅｕトランスジェニックマウス（写真Ａ、ＢおよびＦ）における異常な乳腺の発生を示している。写真Ａは、管の数と口径における有意な低下および上皮構造の数の減少を示すＣ７５で処理された動物の全載標本を示す。この拡大版を写真Ｂに示す。写真Ａおよび写真Ｂの各々は、標準的な数、口径、および管状構造の新生を有する対照標本を示す写真Ｃおよび写真Ｄと比較されうる。これらの変化は、写真Ｅおよび写真Ｆにおける組織切片に反映される。Ａ、Ｃ、ＥおよびＦにおける黒い矢印はリンパ節を意味し、両標本タイプにおける類似の画像撮像領域を示している。
【００５６】
図６および図６に示されるように、対照およびＦＶＢ／Ｎマウスと比較すると、アポトーシス変化が増加し、ＤＮＡ合成が減少し、さらにＦＡＳ、ｎｅｕ、Ａｋｔ、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔおよびｐ２１／Ｗａｆ１の発現がすべて減少した。図８は、Ｃ７５で処理したｎｅｕ−ＮトランスジェニックマウスおよびＦＶＢ／Ｎ対照マウス中の賦形剤対照における、ＦＡＳとｎｅｕ（ヘマトキシリン対比染色）の免疫組織化学染色を示す。賦形剤対照動物では、濃い拡散染色（写真Ａ）によって、導管、脂肪細胞の両方で高レベルのＦＡＳ発現が認められた（図５の写真はすべて２００倍の倍率である）。Ｃ７５で処理された動物は、薄くて部分的な染色とともに胸管と脂肪細胞の両方でＦＡＳ発現が有意に低かった（写真Ｂ）。ＦＶＢ／Ｎ対照動物におけるＦＡＳ発現は稀で弱かった（写真Ｃ）。ｎｅｕからの免疫組織化学染色は、賦形剤対照動物（写真Ｄ）と比較して、Ｃ７５動物（写真Ｅ）では低下した。ＦＶＢ／Ｎ対照動物において、ｎｅｕ発現は部分的で弱かった（写真Ｆ）。
【００５７】
重要なことに、これらの作用は、ｎｅｕを過剰発現する胸部上皮細胞に限局され、皮膚、肝臓または腎臓における他の正常な管状構造に限局されなかった。ＦＶＢ／Ｎ動物において、Ｃ７５で処理した動物と対照との間に、乳腺構造に有意な形態的な差異は生じなかった。このことは図９に認められる。同図は、対照（写真Ａおよび写真Ｃ）に対するＣ７５で処理したＦＶＢ／Ｎ対照マウス（写真Ｂおよび写真Ｄ）において、正常な乳腺の発生を示している。乳腺構造には、なんらの有意な形態的な差異は認められなかった。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図１は、ＮＴ５癌細胞におけるセルレニンおよびテトラヒドロ−３−メチレン−２−オキソ−５−ｎ−オクチル−４−フランカルボン酸（以下「Ｃ７５」）による脂肪酸合成阻害を例証する。
【図２】図２は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＮＴ５癌細胞の成長を、ＦＡＳ阻害剤が阻害可能であることを例証する。
【図３】図３は、マウスにおいてＮＴ５癌細胞同種移植の成長を、ＦＡＳ阻害剤が低減可能であることを例証する。
【図４】図４は、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスモデルにおける癌発生を、ＦＡＳ阻害剤が阻害可能であることを例証する。
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）阻害剤の投与により、癌の発生を阻害または予防する方法に関する。特に、本発明は、ＦＡＳを発現する前悪性（非浸潤性）病変からの浸潤癌の発生を阻害するか、または遅延させる。さらに、ＦＡＳ阻害剤を含有する組成物、ならびにＦＡＳ阻害剤および組成物を必要とする患者に投与する方法が提供される。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
脂肪酸は、細胞生理学において３つの主要な役割を有する。第１に、それらは生体膜の構成成分である。第２に、脂肪酸誘導体は、ホルモンや細胞内メッセンジャーとしての機能を果たす。第３に、脂肪酸は、中性脂肪としても知られるトリアシルグリセロールとして脂肪組織内に蓄えられうる燃料分子である。
【０００３】
脂肪酸合成経路において、脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）、リンゴ酸酵素およびクエン酸リアーゼ（ｃｉｔｒｉｃ ｌｙａｓｅ）の４種の主要な酵素が関与している。この主要な酵素は、ＦＡＳであり、前駆体であるマロニル−ＣｏＡとアセチル−ＣｏＡのＮＡＤＰＨ依存性縮合を触媒することで脂肪酸を生成する。ＮＡＤＰＨは、脂肪酸シンターゼにおける２つのレダクターゼの段階（エノイルレダクターゼおよびβ−ケトアシルレダクターゼ）において必須の電子供与体として有用な還元剤である。残りの３種の酵素（すなわち、ＡＣＣ、リンゴ酸酵素およびクエン酸リアーゼ（ｃｉｔｒｉｃ ｌｙａｓｅ））は、その必要な前駆体を生成する。その他の酵素、たとえば、ＮＡＤＰＨを生成する酵素なども、脂肪酸合成に関与している。
【０００４】
ＦＡＳは、酵素委員会（Ｅ．Ｃ．）Ｎｏ．２．３．１．８５を有し、さらに、脂肪酸シンターゼ、脂肪酸リガーゼ、ならびにその組織名がアシル−ＣｏＡ：マロニル−ＣｏＡ Ｃ−アシルトランスフェラーゼ（脱炭酸化、オキソアシル−およびエノイル−還元およびチオエステル−加水分解）としても知られている。脂肪酸のＦＡＳ触媒合成には、７種の相異なる酵素、すなわちアセチルトランスアシラーゼ、マロニルトランスアシラーゼ、βケトアシルシンテターゼ（縮合酵素）、βケトアシルレダクターゼ、βヒドロキシアシル脱水酵素、エノイルレダクターゼ、およびチオエステラーゼが関与している（Ｗａｋｉｌ，Ｓ．，“Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ，ａ ｐｒｏｆｉｃｉｅｎｔ ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｎｚｙｍｅ”，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８：４５２３〜４５３０，１９８９）。これらすべての７つの酵素が、ともにＦＡＳを含有する。
【０００５】
脂肪酸合成経路における４種の酵素の内、ＦＡＳ以外の３種の酵素が他の細胞機能に関与する一方で、ＦＡＳは脂肪酸合成経路内に限って作用するので、阻害にとっての好ましい標的である。したがって、他の３種の酵素の内の１種を阻害することで、正常細胞が影響を被る可能性が一層高まる。
【０００６】
ＦＡＳ阻害剤は、ある化合物の精製されたＦＡＳの酵素活性に対する阻害能によって同定可能である。ＦＡＳ活性は、たとえば、マロニルＣｏＡの存在下でのＮＡＤＰＨの酸化測定などの当該技術分野において周知の多くの手段によるアッセイが可能である（Ｄｉｌｓ，Ｒ．およびＣａｒｅｙ，Ｅ．Ｍ．，“Ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｆｒｏｍ ｒａｂｂｉｔ ｍａｍｍａｒｙ ｇｌａｎｄ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，３５：７４〜８３，１９７５）。ある化合物がＦＡＳ阻害剤か否かの判定に関する他の情報は、米国特許第５，９８１，５７５号明細書に見出されるであろう（この開示は参照により本願明細書に含まれる）。
【０００７】
ＦＡＳによって実行される７つの酵素段階の内で、縮合酵素（すなわち、β−ケトアシルシンターゼ）によって触媒される段階は、脂肪酸合成を低下または停止させる阻害剤にとっての好ましい候補である。ＦＡＳ複合体の縮合酵素は、構造および機能の観点からよい特性を示す。縮合酵素の活性中心は、たとえば、阻害剤２，３−エポキシ−４−オキソ−７，１０−ドデカジエノイルアミド（以下「セルレニン」）などの抗高脂血試薬の標的である、重要なシステインチオールを含有する。
【０００８】
縮合酵素の好ましい阻害剤は、アルキル化剤、酸化剤、ジスルフィド置換されうる試薬などの広範囲の化合物を含む。上記化合物の阻害活性は、精製されたヒト脂肪酸シンターゼの活性に関する効果を測定するアッセイの際、または［14Ｃ］アセテートの総脂質への取り込みの際に、同化合物の効果を観察することで確認・証明される場合がある（Ｐｉｚｅｒ，Ｅ．Ｓ．，Ｔｈｕｐａｒｉ，Ｊ．，Ｈａｎ，Ｗ．Ｆ．，Ｐｉｎｎ，Ｍ．Ｌ.，Ｃｈｒｅｓｔ，Ｆ．Ｊ．，Ｆｒｅｈｙｗｏｔ，Ｇ．Ｌ．，Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｃ．Ａ．，およびＫｕｈａｊｄａ，Ｆ．Ｐ．，“Ｍａｌｏｎｙｌ−ｃｏｅｎｚｙｍｅ−Ａ ｉｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉａｔｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０：２１３〜２１８，２０００）。セルレニンは、上記阻害剤の１例である。セルレニンは、ＦＡＳ縮合酵素の活性部位において、重要なシステインチオール基に共有結合し、この重要な酵素段階を不活化する（Ｆｕｎａｂａｓｈｉ，Ｈ．，Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，Ａ．，Ｔｏｍｏｄａ，Ｈ．，Ｏｍｕｒａ，Ｓ．，Ｏｋｕｄａ，Ｓ．，およびＩｗａｓａｋｉ，Ｓ．Ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｏｆ ｃｅｒｕｌｅｎｉｎ ｉｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０５：７５１〜７５５，１９８９）。
【０００９】
さまざまな他の化合物がＦＡＳを阻害することが判明している。以下に記載する表１では、数種類の既知のＦＡＳ阻害剤をリストアップしている。好ましくは、本発明に記載される阻害剤は、ＦＡＳ阻害に対してＬＤ50よりも低いＩＣ50を示すことで、適切な処理指数、安全なプロファイル、ならびに有効性を示すことになる。より好ましくは、ＬＤ50は、少なくともＩＣ50よりも高くて大規模である。
【００１０】
【表１】
【００１１】
ＦＡＳ阻害剤は、体重減少を誘発し、既住の癌細胞の増殖を阻害する薬剤として開示されている。たとえば、米国特許第５，９８１，５７５号明細書（「‘５７５特許」）は、ＦＡＳ阻害剤（γで置換されたα−メチレン−β−カルボキシ−γ−ブチロラクトン化合物）の１つのクラスの投与によって、体重減少を誘発するための方法を開示している。さらに、同‘５７５特許は、これらの化合物が既住の癌細胞の増殖を阻害するのに有用であることを開示している。米国特許第５，７５９，８３７号明細書（「‘８３７特許」）は、他の種類の形質転換されていない（正常）細胞ではない癌細胞に対して選択的に細胞傷害性を有するある用量でのＦＡＳ阻害剤の投与によって既住の癌を治療するための方法について開示している。しかしながら、‘５７５特許も‘８３７特許も、癌発生以前（すなわち、癌細胞の初期出現以前）における、これらの化合物の投与について開示しておらず、ましてや前癌性病変に関与するいずれの方法についても開示していない。
【００１２】
最近、患者における前癌性状態を検出する数多くの技術が開発されてきており、癌細胞の初期出現以前であっても治療を開始することが可能になっている。このような早期診断により、癌発生リスクを実質的に低減させる予防的治療を開始することが可能になる。早期スクリーニングのための既知の方法として、たとえば、胸、上部気管食道、膵臓、前立腺、結腸などのさまざまな組織タイプにおいて前癌性病変を検出するために、たとえば、光、超音波、またはＸ線誘導による針生検、細針吸引、および脱落細胞診断法の使用が挙げられる。
【００１３】
癌罹患率および癌生存率の統計における改善は、主に、腫瘍サイズが小さい場合や癌が原発部位に限局されている場合における癌の早期検出に基づいている。過去２年における乳癌に対する死亡率の軽減は、部分的には早期発見による可能性がある（Ａｈｍｅｄｉｎ，Ｊ．，Ｔｈｏｍａｓ，Ａ．，Ｍｕｒｒａｙ，Ｔ．，およびＴｈｕｎ，Ｍ．，“Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ２００２”，ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ，５２：２３〜４７，２００２）。しかしながら、多くの癌に対する死亡率は、最近の早期診断における進歩にもかかわらず、それを反映した改善の様相を呈していない。浸潤癌の発生を予防する、もしくは遅延させるであろう前悪性病変の効果的治療からみると、さらに癌の罹患率および死亡率において極めて顕著な改善の可能性が浮上してくる。
【００１４】
本発明は、ＦＡＳ阻害剤の投与によって被験者における前癌性状態を治療する（すなわち、癌発生を阻害する）方法が提供されたことにより、最近、早期診断が進歩したことに敬意を表するものである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
発明の概要
本発明は、ＦＡＳ阻害剤の投与によって癌発生を阻害する方法を提供する。本発明の方法は、特にＦＡＳを発現する前悪性病変からの乳癌発生を遅らせたり、予防するのに有用である。また、ＦＡＳ阻害剤を含有する組成物、ならびにＦＡＳ阻害剤および組成物を必要とする患者に投与する方法が提供される。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
したがって、１つの実施形態において、本発明は、ＦＡＳ阻害剤の有効量投与を必要とする被験者への投与に関与する癌発生を阻害する方法について提供する。
【００１７】
別の実施形態では、本発明は、癌発生を阻害する、医薬品として認可された添加物を含有する薬剤組成物およびＦＡＳ阻害剤の癌発生を阻害する有効量を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
本発明は、ＦＡＳ阻害剤の投与によって癌発生を阻害するための方法を提供する。本発明は、特に、ＦＡＳ阻害剤の有効量投与を必要とする被験者への投与に関与する癌発生を阻害する方法を提供する。
【００１９】
さらに、本発明は、癌発生を阻害するのに有用なＦＡＳ阻害剤を含有する組成物を提供する。特に、本発明は、癌発生を阻害する、医薬品として認可された添加物を含有する薬剤組成物およびＦＡＳ阻害剤の癌発生を阻害する有効量を提供する。
【００２０】
本願明細書で用いられるように、用語「阻害する」とは、前癌性細胞において、たとえば、アポトーシス（すなわち、遺伝的に決定される細胞死）を刺激する、誘導する、または引き起こすことなどによって、癌発生を予防する、抑制する、阻止する、遮断する、または遅らせることを意味するものと理解される。
【００２１】
本願明細書で用いられるように、用語「癌発生」とは、癌細胞の初期出現を意味するものとして理解される。ここで「癌細胞」とは、自律的増殖の特性を有し、周囲組織へ浸潤した細胞のことを示している。
【００２２】
本願明細書で用いられるように、用語「投与」とは、たとえば、経口で、直腸から、鼻から、または非経口などで、当該技術分野において共通に用いられる数多くの可能な投与手段のいずれかを意味するものと理解される。ここで非経口投与として、局所性投与と同様に、例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、胸腔内、膀胱内、髄腔内、皮下が挙げられる。くわえて、「投与」は、当該技術分野で共通に用いられる数多くの薬剤組成物の形態のいずれかを介する投与を含む。
【００２３】
好ましい薬剤組成物として、たとえば、固形剤（たとえば、タブレット、カプセル、粉剤、ピル、または顆粒）または液剤（たとえば、シロップ、エマルジョンまたは懸濁液）などの経口組成物、たとえば座剤などの直腸組成物、たとえば注射または輸液に適する組成物などの非経口組成物が挙げられる。
【００２４】
本願明細書で用いられるように、用語「必要とする被験者」とは、前癌性と診断されている被験者、または遺伝的あるいは他の要因で同疾患を発症する素因を有する可能性がある被験者を含むものと理解される。好ましい様式において、本発明は、たとえば、体重減少などの前癌性状態を治療すること以外で、なんらかの目的でＦＡＳ阻害剤を服用中の被験者の治療を目的とするものではない。
【００２５】
好ましくは、被験者は治療法が研究される種類の癌を発症していない。くわえて、被験者は、１つ以上の前癌性病変を有していてもよい。前癌性病変は、好ましくはＦＡＳ、またはＦＡＳおよびｎｅｕタンパクを発現してもよい。前癌性病変が任意の組織で発生することがあるとはいえ、本発明は、特にＦＡＳを発現する、胸、口腔、肺、胆管、胃、前立腺、またはこれらのいずれかの組み合わせにおける病変を対象とする治療法を提供する。好ましくは、被験者は哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。
【００２６】
本願明細書で用いられるように、用語「癌発生を阻害する有効量」とは、癌発生を阻害する所望の結果を得るのに必要なＦＡＳ阻害剤の量を意味するものと理解される。また、その有効量が通常、処方医師によって決められ、同量は、各被験者の年齢、体重および反応、ならびに（被験者が前癌性病変由来の症状を呈する場合の）被験者の症状の重症度と投与される特定化合物の効力によって変化することが理解される。好ましくは、有効量は、週に約６０ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇの範囲にあり、より好ましくは、週に約３０ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇの範囲にあり、最も好ましくは、週に約１５ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇの範囲にある。有効量は、単回もしくは分割で投与してもよい。
【００２７】
本願明細書で用いられるように、用語「ＦＡＳ阻害剤」とは、ＦＡＳ酵素を直接阻害する化合物を意味するものと理解される。直接阻害とは、たとえば、すべての細胞活性における低下などの、化合物が有するなんらかの他の作用の二次的な結果ではなく、阻害剤が酵素上に直接作用することでＦＡＳ活性を低下させることを意味している。ＦＡＳ阻害は、米国特許第５，９８１，５７５号明細書に記載される手段によって判定可能である。
【００２８】
好ましくは、ＦＡＳ阻害剤は、以下の化合物の１種である。つまり、Ｃ７５（すなわち、テトラヒドロ−３−メチレン−２−オキソ−５−ｎ−オクチル−４−フランカルボン酸）；セルレニン（すなわち、２，３−エポキシ−４−オキソ−７，１０−ドデカジエノイルアミド）；１，３−ジブロモプロパノン；エルマン（Ｅｌｌｍａｎ）試薬（５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）、ＤＴＮＢ）；４−（４’−クロロベンジロキシ）ベンジルニコチン酸（ＫＣＤ−２３２）；４−（４’−クロロベンジロキシ）安息香酸（ＭＩＩ）;２（５（４−クロロフェニル）ペンチル）オキシラン−２−カルボキシラート（ＰＯＣＡ）およびそのＣｏＡ誘導体；エトキシギ酸無水物；チオラクトマイシン（ｔｈｉｏｌａｃｔｏｍｙｃｉｎ）；フェニオセルレニン（ｐｈｅｎｙｏｃｅｒｕｌｅｎｉｎ）；メラルソプロール；ヨードアセテート；フェニルアルシネオキシド（ｐｈｅｎｙｌａｒｓｉｎｅｏｘｉｄｅ）；ペントスタム；メリチン；またはメチルマロニルＣｏＡである。１つの好ましいＦＡＳ阻害剤はＣ７５である。他の好ましいＦＡＳ化合物は、米国特許出願第６０／３９４，５８５号明細書に開示されている以下に示す化合物である（この開示は参照により本願明細書に含まれる）。
【化１】
（式中、
Ｒ1＝Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、−ＣＨ2ＯＲ5、−Ｃ（Ｏ）Ｒ5、−ＣＯ（Ｏ）Ｒ5、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｒ5、または−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ5であり、ここで、Ｒ5およびＲ6は、各々独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、場合により１つ以上のハロゲン原子を含有しており；
Ｒ2＝−ＯＨ、−ＯＲ7、−ＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｒ7、−ＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ7、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ7、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ7、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ7Ｒ8であり、ここで、Ｒ7およびＲ8は、各々独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、Ｒ7およびＲ8は、各々場合によりハロゲン原子を含有することが可能であり；
互いに同一または異なるＲ3およびＲ4は、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである）
【００２９】
好ましいＦＡＳ阻害剤の別の基は、米国特許出願第６０／３９２，８０９号明細書に開示されているものである（この開示は参照により本願明細書に含まれる）。
【化２】
（式中、
Ｒ9＝Ｈ、またはＣ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ11、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ11、−Ｃ（Ｏ）Ｒ11、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＲ11、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ11であり、ここで、Ｒ11は、ＨまたはＣ1−Ｃ10アルキル、シクロアルキル、またはアルケニルであり；
Ｒ10＝Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり；
Ｘ＝−ＯＲ12、または−ＮＨＲ12であり、ここで、Ｒ12は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、該Ｒ12基は、場合によりカルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、さらに該Ｒ12基は、場合により１つ以上のハロゲン原子を含有しており；
但し、Ｒ9が＝ＣＨ2の場合にＸは−ＯＨではない。）
【００３０】
本願明細書で用いられるように、用語「添加剤」とは、たとえば、基材、賦形剤、希釈剤、充てん剤、またはこれらの組み合わせなどの、当該技術分野において共通に使用可能な数多くの有望な添加剤の内のいずれかを意味するものと理解される。好ましい添加剤の例は、水、アルコール、ゼラチン、サッカロース、ペクチン、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、動物または植物由来のさまざまな油、グリコール、デンプンおよびデンプン誘導体、シリカ、ラクトース、ラクトース一水和物、セルロースおよびセルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、ＰＶＰまたはポビドン、マンニトール、ソルビトール、ゼラチン、糖アルコール、ステアリン酸、アクリル誘導体、アルギン酸、α−オクタデシル−オメガ−ヒドロキシポリ−（オキシエチレン）−５−ソルビン酸−Ｈ2Ｏ、アラビアゴム、香味物質、アスコルビン酸、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸カルシウム、ステアリン酸カルシウム、カルメロース・ナトリウム、セルロース、セルロース誘導体、ジメチコーン、着色剤、ゼラチン、グルコース・シロップ、極めて分散したシリカ、安息香酸カリウム、ラクトース一水和物、マクロゴール（Ｍａｃｒｏｇｏｌ）、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム（軽質）、ステアリン酸マグネシウム、コーンスターチ、膨潤したコーンスターチ、マンニット、マンニトール、食用脂肪酸のモノグリセリドおよびジグリセリド、モンタングリコールワックス、安息香酸ナトリウム、（無水）炭酸ナトリウム、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、ポリ（ブチルメタクリレート）−ｃｏ−（２−ジメチル・アミノ・エチル・メタクリレート）、ポリビドンＫ２５、ポビドン、精製されたキャスター・オイル、スクロース、スクロース・モノステアレート、セラック、ソルビトール、滑石粉、二酸化チタン、酒石酸、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールまたはマクロゴール、スタビライザー、酸化防止剤、さまざまな天然乳化または合成乳化された分散剤または湿潤剤、着色剤、芳香剤、バッファ、崩壊剤、さらに当該技術分野で既知であり、活性剤の生物的可用性を促進する他の物質である。
【００３１】
驚くべきことに、多くの研究により、前癌性ヒト胸部病変、ならびに他の臓器からの前癌性病変に、ＦＡＳ発現が高度であることが証明されている。以下に示す表２は、癌前駆体病変におけるＦＡＳ発現の有病率および浸潤癌へのその進行速度、あるいは浸潤癌との関連について示している。
【００３２】
前癌性病変の命名は、臓器毎に異なることがあるため、各用語を簡単に定義することが同表の解釈に役立つであろう。胸部では、ｉｎ ｓｉｔｕ癌すなわち管内癌およびｉｎ ｓｉｔｕ小葉癌（列１および２）として定義される２種類の前浸潤性（前癌性）病変がある。ｉｎ ｓｉｔｕ癌なる用語は、前癌性細胞がまだ周囲組織に浸潤していない病変を説明するのに用いられる。これらの病変は、浸潤癌の発生にとっての最高のリスクと関連しており、さらにＦＡＳ免疫反応性の最高の有病率を有する。さらに、癌発生に対して中間的リスクを有する胸部病変も存在する（列３）。これらのいわゆる「非定型の管状または小葉状の肥厚」は、ｉｎ ｓｉｔｕ癌の組織学的な特徴のすべてを示すものではない。これらの胸部病変は、ｉｎ ｓｉｔｕ癌に対して約半分に相当する乳癌の発生リスクを示し、ＦＡＳ陽性の頻度は低めである。
【００３３】
前立腺において、前立腺上皮内新生組織形成（ＰＩＮ）は、腺における他の部位での浸潤癌の存在に関連する病変である。ＰＩＮは、低グレードまたは高グレードとして説明される。低グレードの病変が癌と有意な関連がないとはいえ、高グレードＰＩＮは、約３分の１の場合に、浸潤性前立腺癌とともに発生する（列４）。ＰＩＮの真の自然暦または未治療のＰＩＮについては、未知のままである。一般に、ＦＡＳは高グレードＰＩＮにおいて発現される。
【００３４】
一般に、癌は腺腫の中で、または腺腫と関連して発生することが判明していることから、腺腫は結腸直腸癌に対して共通に認識されている前駆体病変である（列５）。増加するサイズ、絨毛形態学、および（組織学的かつ細胞学的特徴の両方によって定義される）高グレードの異形成の存在は、癌発生に対するリスクの増加と関連している。「異形成」なる用語は、前癌性病変への進行を示す組織内の組織学的かつ細胞学的変化を示すのに用いられる。ある研究では、ＦＡＳは結腸直腸癌の中の至るところに存在した。一方、別のグループは、腺腫において異形成の度合いが増加するにつれてＦＡＳの発現が増加したことを発見した。
【００３５】
肺では、扁平上皮癌は、異型扁平上皮粘膜から発生する。喫煙などの肺への慢性的障害により、まず気道における繊毛腺性粘膜からより耐障害性のある扁平上皮粘膜に変化するに至る。この過程は、化生と呼ばれる。時間がたてば、煙中の発癌物質により、前癌性病変の発生を示す、異形成と呼ばれる組織学的かつ細胞学的変化が誘引される。いったん高グレードの異形成が見られると、浸潤癌の発生に対するリスクが有意になる。ＦＡＳの発現が異型気管支上皮で増加することが見出されている。
【００３６】
胃における癌前駆体病変は腺腫であり、結腸直腸腺腫と類似しているものの同一ではない。結腸では、同病変は癌発生のリスクを抱えており、ＦＡＳは共通して発現される。
【００３７】
口腔内における浸潤癌に対する前駆体は、口の内側を覆う扁平上皮粘膜の異形成であり、肺癌を誘発する気管支扁平上皮の異形成に類似している。さらに、ＦＡＳの発現は、これらの異型病変においても増加する。
【００３８】
一般に、胆管癌は、異型腺性粘膜から発生する。この組織では、気管支におけるように、上皮は腺から扁平上皮にかけて変化しない。それにもかかわらず、ＦＡＳの発現は、胆管異形成において至るところで見られる。
【００３９】
【表２】
【００４０】
６．Ｍｉｌｇｒａｕｍ，Ｌ．Ｚ．，Ｗｉｔｔｅｒｓ，Ｌ．Ａ．，Ｐａｓｔｅｒｎａｃｋ，Ｇ．Ｒ．およびＫｕｈａｊｄａ，Ｆ．Ｐ．，“Ｅｎｚｙｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙ ａｒｅ ｈｉｇｈｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｉｎ ｓｉｔｕ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．”Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，３：２１１５〜２１２０，１９９７。
７．Ｂｅｓｔｉｌｌ，Ｗ．Ｌ．，Ｒｏｓｅｎ，Ｐ．Ｐ．，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐ．Ｈ．およびＲｏｂｂｉｎｓ，Ｇ．Ｆ．，“Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｂｙ ｂｉｏｐｓｙ ａｌｏｎｅ”，ＪＡＭＡ，２３９：１８６３〜１８６７，１９７８。
８．Ｐａｇｅ，Ｄ．Ｌ．，Ｄｕｐｏｎｔ，Ｗ．Ｄ．，Ｒｏｇｅｒｓ，Ｌ．Ｗ．およびＬａｎｄｅｎｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．，“Ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒｅａｓｔ：ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ａｆｔｅｒ ｂｉｏｐｓｙ ｏｎｌｙ”，Ｃａｎｃｅｒ，５５：２６９８〜２７０８，１９８２。
９．Ｐａｇｅ，Ｄ．Ｌ．およびＪａｐａｚｅ，Ｈ．Ｊ．，Ｔｈｅ Ｂｒｅａｓｔ：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｅｎｉｇｎ ａｎｄ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，ｐ．１６９〜１９２．：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，１９９１。
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１１．Ｒｏｓｅｎ，Ｐ．Ｐ．，Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｐ．Ｈ．，Ｂｒａｕｎ，Ｄ．Ｗ．Ｊ．，Ａｄａｉｒ，Ｆ．およびＢｒａｕｎ，Ｄ．Ｗ．Ｊ．，“Ｌｏｂｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒｅａｓｔ：ｄｅｔａｉｌｅｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ９９ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｖｅｒａｇｅ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｏｆ ２４ｙｅａｒｓ”，Ａｍ ＪＳｕｒｇ Ｐａｔｈｏｌ，２：２２５〜２５１，１９７８。
１２．Ｐａｇｅ，Ｄ．Ｌ．，Ｋｉｄｄ，Ｔ．Ｅ．Ｊ．，Ｄｕｐｏｎｔ，Ｗ．Ｄ．，Ｓｉｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ｆ．およびＲｏｇｅｒｓ，Ｌ．Ｗ．“Ｌｏｂｕｌａｒ ｎｅｏｐｌａｓｉａ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒｅａｓｔ：ｈｉｇｈｅｒ ｒｉｓｋ ｆｏｒ ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｉｎｖａｓｉｖｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｂｙ ｍｏｒｅ ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ”， Ｈｕｍ Ｐａｔｈｏｌ，２２：１２３２〜１２３９，１９９１。
１３．Ｒｏｓｅｎ，Ｐ．，Ｐ．Ｒｏｓｅｎ’ｓ ｂｒｅａｓｔ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ．， ２ｎｄ．ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐ．２２９〜２４８，５８１〜６２６．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００１。
１５．Ｂｏｄｉａｎ，Ｃ．Ａ．，Ｐｅｒｚｉｎ，Ｋ．Ｈ．，Ｌａｔｔｅｓ，Ｒ．，Ｈｏｆｆｍａｎｎ，Ｐ．およびＡｂｅｒｎａｔｈｙ，Ｔ．Ｇ．，“Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｂｅｎｉｇｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｂｒｅａｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｃａｎｃｅｒ，７１：３８９６〜３９０７，１９９３。
１６．Ｄｕｐｏｎｔ，Ｗ．Ｄ．およびＰａｇｅ，Ｄ．Ｌ．，“Ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｒｉｓｋ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ，ａｇｅ ａｔ ｆｉｒｓｔ ｂｉｒｔｈ，ａｎｄ ｆａｍｉｌｙ ｈｉｓｔｏｒｙ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ”，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ，１２２５：７６９〜７７９，１９８７。
１７．Ｃａｒｔｅｒ，Ｃ．Ｌ．，Ｃｏｒｌｅ，Ｄ．Ｋ．，Ｍｉｃｏｚｚｉ，Ｍ．Ｓ．，Ｓｃｈａｔｚｋｉｎ，Ａ．およびＴａｙｌｏｒ，Ｐ．Ｒ．，“Ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｉｎ １６，６９２ ｗｏｍｅｎ ｗｉｔｈ ｂｅｎｉｇｎ ｂｒｅａｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ”，Ａｍ Ｊ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ，１２８：４６７〜４７７，１９８８。
１９．Ｋｒｏｎｚ，Ｊ．Ｄ．，Ａｌｌａｎ，Ｃ．Ｈ．，Ｓｈａｉｋｈ，Ａ．Ａ．およびＥｐｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｉ．，“Ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ａ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｈｉｇｈ−ｇｒａｄｅ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｉａ ｏｎ ｎｅｅｄｌｅ ｂｉｏｐｓｙ：ｄａｔａ ｏｎ ｍｅｎ ｗｉｔｈ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ｏｎｅ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｂｉｏｐｓｙ”，Ａｍ Ｊ Ｓｕｒｇ Ｐａｔｈｏｌ，２５：１０７９〜１０８５，２００１。
２２．Ａｔｋｉｎ，Ｗ．Ｓ．，Ｍｏｒｓｏｎ，Ｂ．Ｃ．およびＣｕｚｉｃｋ，Ｊ．，“Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ ａｆｔｅｒ ｅｘｃｉｓｉｏｎ ｏｆ ｒｅｃｔｏｓｉｇｍｏｉｄａｄｅｎｏｍａｓ”，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，３２６：６５８〜６６２，１９９２。
２４．Ｓｕｐｒｕｎ，Ｈ．，Ｈｊｅｒｐｅ，Ａ．，Ｎａｓｉｅｌｌ，Ｍ．およびＶｏｇｅｌ，Ｂ．，Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ．Ｐａｒｔ ＩＩ，Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．，ｐ．１３０３〜１３２０，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，１９８０。
２５．Ｃａｒｔｅｒ，Ｄ．およびＰａｔｃｈｅｓｆｓｋｙ，Ａ．Ｓ．肺の腫瘍と腫瘍様領域（Ｔｕｍｏｒｓ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ−ｌｉｋｅ ｌｅｓｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｌｕｎｇ．），１ｓｔ．ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐ．１２０〜１４７，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，１９９８。
２７．Ｌａｘｅｎ，Ｆ．，“Ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｐｅｒｎｉｃｉｏｕｓ ａｎｅｍｉａ ｉｎ ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｏｆ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ｗｉｔｈ ｇａｓｔｒｉｃ ｐｏｌｙｐｓ”，Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，１９：５３５〜５４０，１９８４。
２８．Ｇｏｌｄｍａｎ，Ｈ．消化管の病理学（Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｔｒａｃｔ），２ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐ．５９４．Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，１９９８。
２９．Ｋａｍｉｙａ，Ｔ．，Ｍｏｒｉｓｈｉｔａ，Ｔ．，Ａｓａｋｕｒａ，Ｈ．，Ｍｉｕｒａ，Ｓ．，Ｍｕｎａｋａｔａ，Ｙ．およびＴｓｕｃｈｉｙａ，Ｍ．，“Ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｇａｓｔｒｉｃ ａｄｅｎｏｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｇａｓｔｒｉｃ ｐｒｏｔｒｕｄｅｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｃａｎｃｅｒ，５０：２４９６〜２５０３，１９８２。
３１．Ｓｃｈｅｐｍａｎ，Ｋ．Ｐ．，ｖａｎ ｄｅｒ Ｍｅｉｊ，Ｅ．Ｈ．，Ｓｍｅｅｌｅ，Ｌ．Ｅ．およびｖａｎ ｄｅｒ Ｗａａｌ，Ｉ．“Ｍａｌｉｇｎａｎｔ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒａｌ ｌｅｕｋｏｐｌａｋｉａ：Ａ ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ａ ｈｏｓｐｉｔａｌ−ｂａｓｅｄ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ １６６ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｏｒａｌ ｌｅｕｋｏｐｌａｋｉａ ｆｒｏｍ Ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ”，Ｏｒａｌ Ｏｎｃｏｌ，３４：２７０〜２７５，１９９８。
３２．Ｇｎｅｐｐ，Ｄ．Ｒ．，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｓｕｒｇｉｃａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅａｄ ａｎｄ ｎｅｃｋ，１ｓｔ．ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐ．１〜１７．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，２０００。
３４．Ｏｗｅｎ，Ｄ．Ａ．およびＫｅｌｌｙ，Ｊ.，Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒ，ｂｉｌｉａｒｙ ｔｒａｃｔ，ａｎｄ ｐａｎｃｒｅａｓ．，ｐ．３３７．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ，２００１。
【００４１】
米国特許出願第５，７５９，８３７号明細書では、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＦＡＳ阻害がヒト乳癌細胞株においてアポトーシスを誘発することが開示されている。この知見は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＦＡＳ阻害剤であるセルレニンとＣ７５によるＮＴ５癌細胞増殖の阻害を例証する実施例２と図２によって支持されている。また、ｉｎ ｖｉｖｏでのＦＡＳ阻害により、ヒト乳癌およびヒト前立腺癌の異種移植の増殖が低下することも知られている（Ｏｗｅｎ，Ｄ．Ａ．およびＫｅｌｌｙ，Ｊ．，Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒ，ｂｉｌｉａｒｙ ｔｒａｃｔ，ａｎｄ ｐａｎｃｒｅａｓ．，ｐ．３３７．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．ソンダーズ・カンパニー（Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ），２００１； Ｐｉｚｅｒ，Ｅ．，Ｐｆｌｕｇ，Ｂ．，Ｂｏｖａ，Ｇ．，Ｈａｎ，Ｗ．，Ｕｄａｎ，Ｍ．およびＮｅｌｓｏｎ，Ｊ．，“Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ”、Ｐｒｏｓｔａｔｅ，４７：１０２〜１１０、 ２００１）。この知見は、ＦＡＳ阻害剤のＣ７５によるマウスでのＮＴ５腫瘍細胞の同種移植の増殖における低減を例証する実施例３と図３によって支持されている。したがって、ＦＡＳ阻害剤は、既住の癌細胞の増殖を阻害することが可能であることは既知であったが、ＦＡＳ阻害剤による処理が癌発生を阻害する可能性があることは、これまで知られていなかった。
【００４２】
ＦＡＳ阻害剤が癌発生を阻害する可能性を明らかにするために、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスモデルが用いられた。ＦＶＢ／Ｎ株由来のｎｅｕ−Ｎトランスジェニックマウスは、乳房特異性プロモーターのコントロール下で、形質転換していないラットのｎｅｕ ｃＤＮＡを発現する。結果として、マウスは、約１２５日目から自然に乳腺癌を発症し、３００日にかけてほとんどすべてのマウスが腫瘍を保持する（Ｇｕｙ，Ｃ．，Ｗｅｂｓｔｅｒ，Ｍ．，Ｓｃｈａｌｌｅｒ，Ｍ．，Ｐａｒｓｏｎｓ，Ｔ．，Ｃａｒｄｉｆｆ，Ｒ．およびＭｕｌｌｅｒ，Ｗ．，“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｕ ｐｒｏｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｍｍａｒｙ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：１０５７８〜１０５８２，１９９２）。このモデルは、活性化（突然変異）ｎｅｕ遺伝子を有していない。活性化ｎｅｕモデルは、より急速な腫瘍発生の利点を有しているとはいえ（Ｇｕｙ，Ｃ．，Ｃａｒｄｉｆｆ，Ｒ．およびＭｕｌｌｅｒ，Ｗ．，“Ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｎｅｕ ｉｎｄｕｃｅｓ ｒａｐｉｄ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ”， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７１：７６７３〜７６７８，１９９６）、この点突然変異は、ヒト乳癌では同定されていない（Ｌｏｆｔｓ，Ｆ．およびＧｕｌｌｉｃｋ，Ｗ．，“Ｃ−ｅｒｂＢ２ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｓ．，６１：１６１〜１７９，１９９２）。したがって、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスモデルは、ｎｅｕが過剰発現されて突然変異されていないヒト疾患により酷似している。さらに、ｎｅｕは、ヒト腺管内癌の２５％に発現される（ＤＣＩＳ）（Ｇｌｏｃｋｎｅｒ，Ｓ．，Ｌｅｈｍａｎｎ，Ｕ．，Ｗｉｌｋｅ，Ｎ．，Ｋｌｅｅｂｅｒｇｅｒ，Ｗ．，Ｌａｎｇｅｒ，Ｆ．およびＫｒｉｅｐｅ，Ｈ．，“Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｉｎｔｒａｄｕｃｔａｌ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ｎｕｃｌｅａｒ ｇｒａｄｅ ｂｕｔ ｎｏｔ ｗｉｔｈ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｔｏ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ”， Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，８１：５６５〜５７１，２００１）。これは、ｎｅｕの過剰発現がヒト発癌における早期イベントであることを証明していることから、ｎｅｕＮモデルをさらに立証している。ＦＡＳ（Ｍｉｌｇｒａｕｍ，Ｌ．Ｚ．，Ｗｉｔｔｅｒｓ，Ｌ．Ａ．，Ｐａｓｔｅｒｎａｃｋ，Ｇ．Ｒ．およびＫｕｈａｊｄａ，Ｆ．Ｐ．，“Ｅｎｚｙｍｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐａｔｈｗａｙ ａｒｅ ｈｉｇｈｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｉｎ ｓｉｔｕ ｂｒｅａｓｔ ｃａｒｃｉｎｏｍａ”，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，３：２１１５〜２１２０，１９９７）とｎｅｕは、共にヒト乳房組織におけるｉｎ ｓｉｔｕ癌において同定され、ＦＡＳ阻害はｎｅｕの過剰発現を伴って乳癌細胞のアポトーシスを誘引するために、ｎｅｕ−Ｎモデルは、ＦＡＳ阻害剤は癌発生を阻害可能であることを示すのに用いられた。
【００４３】
代表的なＦＡＳ阻害剤として、Ｃ７５が用いた。ＦＡＳ阻害剤としてのＣ７５の合成と有効性は、米国特許第５，９８１，５７５号明細書において証明された。
【００４４】
実施例４と図４は、３匹の動物が寿命である約１．５年近くにわたって腫瘍が出現しないままであったことで、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスのＦＡＳ阻害剤Ｃ７５による処理が癌の発生を有意に阻害したことを示している。他のＦＡＳ阻害剤は、Ｃ７５と同様な機序で作用することが予測可能である。
【００４５】
以下に示す実施例は、本発明の方法および組成物をさらに例証するために提供されている。これらの実施例は、単なる例証であって、決して本発明の範囲を限定しようとするものではない。
【実施例】
【００４６】
実施例１
ＮＴ５細胞における、２，３−エポキシ−４−オキソ−７，１０−ドデカジエノイルアミド（すなわち、セルレニン）およびテトラヒドロ−３−メチレン−２−オキソ−５−ｎ−オクチル−４−フランカルボン酸（すなわち、Ｃ７５）による脂肪酸合成阻害
腫瘍発生時におけるＦＡＳ阻害剤であるセルレニンおよびＣ７５が有する脂肪酸合成に対する阻害能が、トランスジェニックマウスの中で発生した腫瘍から樹立されたＮＴ５癌細胞において実証された（図１参照）。５×１０4 ＮＴ５細胞を２４ウェルプレート中に播種した。接着から１晩経た後、５ｍｇ／ｍｌ、４時間、ＤＭＳＯ中で希釈されたセルレニンとＣ７５によって細胞を処理した。その際、対照細胞には、単独で賦形剤を投与した。薬剤処理の残り２時間に、細胞を１μＣｉ［14Ｃ］アセテートで処理した。つぎに、総脂質を抽出し、計数した。その結果を図１に示す。同結果の統計解析（すなわち、両側ｔ−検定）を以下に示す。対照−Ｃ７５ ５μｇ／ｍｌ、ｐ＝０．１１６；対照−Ｃ７５ １０μｇ／ｍｌ、ｐ＝０．０１８；対照−セルレニン５μｇ／ｍｌ、ｐ＝０．００２；対照−セルレニン１０μｇ／ｍｌ、ｐ＝０．００２。
【００４７】
図１は、ＮＴ５癌細胞におけるセルレニンおよびＣ７５による脂肪酸合成の阻害を示す。ＮＴ細胞株は、トランスジェニックマウスで発生した腫瘍から樹立される。（Ｒｅｉｌｌｙ，Ｒ．，Ｇｏｔｔｌｉｅｂ，Ｍ．，Ｅｒｃｏｌｉｎｉ，Ａ．，Ｍａｃｈｉｅｌｓ，Ｊ．，Ｋａｎｅ，Ｃ．，Ｏｋｏｙｅ，Ｆ．，Ｍｕｌｌｅｒ，Ｗ．，Ｄｉｘｏｎ，Ｋ．およびＪａｆｆｅｅ，Ｅ．，“ＨＥＲ−２／ｎｅｕ Ｉｓ ａ Ｔｕｍｏｒ Ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ Ｔａｒｇｅｔ ｉｎ Ｔｏｌｅｒｉｚｅｄ ＨＥＲ−２／ｎｅｕ Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｍｉｃｅ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０：３５６９〜３５７６，２０００ ； Ｒｅｉｌｌｙ，Ｒ．，Ｍａｃｈｉｅｌｓ，Ｊ．，Ｅｍｅｎｓ，Ｌ．，Ｅｒｃｏｌｉｎｉ，Ａ．，Ｏｋｏｙｅ，Ｆ．，Ｌｅｉ，Ｒ．，Ｗｅｉｎｔｒａｕｂ，Ｄ．およびＪａｆｆｅｅ，Ｅ．，“Ｔｈｅ Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｏｔｈ Ｈｕｍｏｒａｌ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ＨＥＲ−２／ｎｅｕ−ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ Ｉｓ Ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＨＥＲ−２／ｎｅｕ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｔｕｍｏｒｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６１：８８０〜８８３，２００１）、ＦＡＳ阻害剤であるＣ７５およびセルレニンの試験のために、ｉｎ ｖｉｔｒｏモデルを提供している。図に示すように、セルレニンとＣ７５は、共にヒト細胞株による先行試験に匹敵するレベルで、ＮＴ５細胞における脂肪酸合成を阻害する（Ｐｉｚｅｒ，Ｅ．Ｓ．，Ｔｈｕｐａｒｉ，Ｊ．，Ｈａｎ，Ｗ．Ｆ．，Ｐｉｎｎ，Ｍ．Ｌ．，Ｃｈｒｅｓｔ，Ｆ．Ｊ．，Ｆｒｅｈｙｗｏｔ，Ｇ．Ｌ．，Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｃ．Ａ．，およびＫｕｈａｊｄａ，Ｆ．Ｐ．，“Ｍａｌｏｎｙｌ−ｃｏｅｎｚｙｍｅ−Ａ ｉｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉａｔｏｒ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０：２１３〜２１８，２０００； Ｐｉｚｅｒ，Ｅ．，Ｐｆｌｕｇ，Ｂ．，Ｂｏｖａ，Ｇ．，Ｈａｎ，Ｗ．，Ｕｄａｎ，Ｍ．，およびＮｅｌｓｏｎ，Ｊ．，“Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｉｎ ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ”，Ｐｒｏｓｔａｔｅ，４７：１０２〜１１０，２００１）。さらに、図１は、これらの細胞が脂肪酸合成活性を有することから、これらの阻害剤の標的酵素であるＦＡＳを発現することを証明している。
【００４８】
実施例２
ＦＡＳ阻害剤によるＩｎ ｖｉｔｒｏでのＮＴ５癌細胞増殖の阻害
ＦＡＳ阻害剤のＮＴ５癌細胞増殖に対する阻害能は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで証明された（図２参照）。１×１０4細胞を２４ウェル・プレートに播種した。接着から１晩経た後、５ｍｇ／ｍｌでＤＭＳＯ中で希釈されたＣ７５またはセルレニンで細胞を処理した。その際、対照細胞には単独で賦形剤を投与した。７２時間後、細胞をクリスタルバイオレットで染色し（１０％メタノール中で０．２％）、１％ ＳＤＳに可溶化し、また外径を４９０ｎｍで測定した。両側ｔ−検定:対照−Ｃ７５ ５μｇ／ｍｌ、ｐ＝０．０００３；対照−Ｃ７５ １０μｇ／ｍｌ、ｐ＜０．０００１；対照−セルレニン ５μｇ／ｍｌ、ｐ＜０．０００１；対照−セルレニン １０μｇ／ｍｌ、ｐ＜０．０００１
【００４９】
図２は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＦＡＳ阻害剤によるＮＴ５癌細胞増殖の阻害を示す。図に示すように、ＦＡＳ阻害剤であるセルレニンおよびＣ７５による処理は、（減少した外径４９０ｎｍによって示されるように）癌細胞の増殖を有意に低減した。
【００５０】
実施例３
ＦＡＳ阻害剤によるマウスでのＮＴ５癌細胞同種移植の増殖における低減
ＦＡＳ阻害剤がマウスでのＮＴ５癌細胞同種移植の増殖に対する阻害能を有することが、ＦＶＢ／Ｎマウスを用いて証明された（図３参照）。１４匹の動物に、０．１ｍｌの培養ＮＴ５細胞をまとめて側腹部に投与した。測定可能な腫瘍の出現時、７匹の動物を、６日毎にＣ７５（０．１ｍｌ ＲＰＭＩ中３０ｍｇ／ｋｇで腹腔内注射）で処理し、７匹の動物に賦形剤対照を投与した。図３におけるエラーバーは、その標準誤差を示している。
【００５１】
図３は、ＦＡＳ阻害剤Ｃ７５によるマウスでのＮＴ５癌細胞同種移植の増殖における低下を示している。図に示すように、Ｃ７５での処理により、ＦＶＢ／ＮマウスにおいてＮＴ５腫瘍細胞同種移植の増殖が有意に低減した。
【００５２】
実施例４
ＦＡＳ阻害剤による癌発生の阻害
ＦＡＳ阻害剤が癌発生に対する阻害能を有することが、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスモデルを用いて証明された（図４参照）。この試験では、３０匹のＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスを用いた。１５匹のマウスに、５週齢から３ヶ月の間、週単位でＣ７５を投与し（０．１ｍｌ ＲＰＭＩ中３０ｍｇ／ｋｇ）、１５匹のマウスに単独で賦形剤を投与した。マウスは、毎日観察し、胸部腫瘍の初期出現を記録した。同試験中、対照群マウスの２匹と処理群マウスの６匹が死亡した。データのＬｏｇ−ｒａｎｋ解析によると、Ｃ７５で処理された動物における腫瘍の発生が有意に遅延したことが判明した。５０％の対照マウスに腫瘍が発生したのは約２００日後であったのに対し、Ｃ７５で処理された動物では約３００日後であった。さらに、３匹の処理された動物は、その寿命である１８ヶ月近くの間、腫瘍が発生しないままであった。
【００５３】
実施例５
作用機序の究明
１５匹の８〜１０週齢のｎｅｕ−Ｎトランスジェニックマウスを、Ｃ７５の週に３０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内（ｉｐ）への投与によって処理し、それとともに、１５匹に賦形剤対照を投与した（ＲＰＭＩ）。処理群および対照群から３匹のマウスを、２週目から２週間の間隔を設けた時点（８〜１０週齢時での最初のＣ７５による処理の２週間後）で、二酸化炭素窒息で殺害した。すべての動物は、犠牲になる２時間前に１ｍｇのＢｒｄＵ注射を受けた。肉眼で識別可能であった乳房内リンパ節とともに、鼠径乳腺全部を除去した。さらに、腎臓、肝臓および皮膚サンプルを各動物から採取した。片側からの乳腺、肝臓と、腎臓、肝臓および皮膚サンプルを中性緩衝ホルマリンで固定し、それ以外は全載標本のためにカルノア（Ｃａｒｎｏｙ）固定剤で固定した。さらに、同様の解析を行うために、非トランスジェニックで年齢をマッチングしたＦＶＢ／Ｎ対照マウス由来の乳腺を１０週目（１８〜２０週齢）で除去した。
【００５４】
２４時間、１０％中性緩衝ホルマリン中に固定後、乳腺をパラフィン中に組み込んだ。ヘマトキシリンとエオシンで染色した第１のスライドとともに、各組織画分から６つの４ミクロンのスライドを調製した。残りの染色されない画分は、以下の抗体、すなわちＦＡＳ、ＢｒｄＵおよびｐ２１／Ｗａｆ−１（Ｄａｋｏ、Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ、ＣＡ）、ＡｋｔおよびＰｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ（セル・シグナリング・テクノロジーズ・インコーポレーティッド（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ビバリー（Ｂｅｖｅｒｌｙ）、ＭＡ）、およびｎｅｕ（サンタクルーズ バイオテクノロジー・インコーポレーティッド（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）、 サンタクルーズ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、ＣＡ）アポトーシス（アポタグ（ＡｐｏｐＴａｇ） Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｉｎ ｓｉｔｕ Ｏｌｉｇｏ Ｌｉｇａｔｉｏｎ Ｋｉｔ、セロロジカル・コーポレーション（Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、テメクラ（Ｔｅｍｅｃｕｌａ）、ＣＡ）とともに、腫瘍発生前病変や周囲の胸部組織の免疫組織化学解析に利用した。染色は、４００倍における管状構造および小葉状構造における５００の総細胞当たりの陽性細胞数を計数することによって評価した。Ｐｒｉｓｍ３ソフトウェア上でｔ−検定を用いて統計解析を実施した。上述のように、カルノア（Ｃａｒｎｏｙ）の固定組織はカルミンレッドで染色し、グラススライド上に全載標本にした。賦形剤対照およびＦＶＢ／Ｎ動物と比較すると、ｎｅｕ−Ｎ動物における乳管構造の数、その厚みおよび新生する上皮構造の数いずれもが、Ｃ７５処理の８〜１０週後に有意に低下した。
【００５５】
図５は、対照（写真Ｃ、ＤおよびＥ）に対し、Ｃ７５で処理したＮ−ｎｅｕトランスジェニックマウス（写真Ａ、ＢおよびＦ）における異常な乳腺の発生を示している。写真Ａは、管の数と口径における有意な低下および上皮構造の数の減少を示すＣ７５で処理された動物の全載標本を示す。この拡大版を写真Ｂに示す。写真Ａおよび写真Ｂの各々は、標準的な数、口径、および管状構造の新生を有する対照標本を示す写真Ｃおよび写真Ｄと比較されうる。これらの変化は、写真Ｅおよび写真Ｆにおける組織切片に反映される。Ａ、Ｃ、ＥおよびＦにおける黒い矢印はリンパ節を意味し、両標本タイプにおける類似の画像撮像領域を示している。
【００５６】
図６および図６に示されるように、対照およびＦＶＢ／Ｎマウスと比較すると、アポトーシス変化が増加し、ＤＮＡ合成が減少し、さらにＦＡＳ、ｎｅｕ、Ａｋｔ、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔおよびｐ２１／Ｗａｆ１の発現がすべて減少した。図８は、Ｃ７５で処理したｎｅｕ−ＮトランスジェニックマウスおよびＦＶＢ／Ｎ対照マウス中の賦形剤対照における、ＦＡＳとｎｅｕ（ヘマトキシリン対比染色）の免疫組織化学染色を示す。賦形剤対照動物では、濃い拡散染色（写真Ａ）によって、導管、脂肪細胞の両方で高レベルのＦＡＳ発現が認められた（図５の写真はすべて２００倍の倍率である）。Ｃ７５で処理された動物は、薄くて部分的な染色とともに胸管と脂肪細胞の両方でＦＡＳ発現が有意に低かった（写真Ｂ）。ＦＶＢ／Ｎ対照動物におけるＦＡＳ発現は稀で弱かった（写真Ｃ）。ｎｅｕからの免疫組織化学染色は、賦形剤対照動物（写真Ｄ）と比較して、Ｃ７５動物（写真Ｅ）では低下した。ＦＶＢ／Ｎ対照動物において、ｎｅｕ発現は部分的で弱かった（写真Ｆ）。
【００５７】
重要なことに、これらの作用は、ｎｅｕを過剰発現する胸部上皮細胞に限局され、皮膚、肝臓または腎臓における他の正常な管状構造に限局されなかった。ＦＶＢ／Ｎ動物において、Ｃ７５で処理した動物と対照との間に、乳腺構造に有意な形態的な差異は生じなかった。このことは図９に認められる。同図は、対照（写真Ａおよび写真Ｃ）に対するＣ７５で処理したＦＶＢ／Ｎ対照マウス（写真Ｂおよび写真Ｄ）において、正常な乳腺の発生を示している。乳腺構造には、なんらの有意な形態的な差異は認められなかった。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】図１は、ＮＴ５癌細胞におけるセルレニンおよびテトラヒドロ−３−メチレン−２−オキソ−５−ｎ−オクチル−４−フランカルボン酸（以下「Ｃ７５」）による脂肪酸合成阻害を例証する。
【図２】図２は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＮＴ５癌細胞の成長を、ＦＡＳ阻害剤が阻害可能であることを例証する。
【図３】図３は、マウスにおいてＮＴ５癌細胞同種移植の成長を、ＦＡＳ阻害剤が低減可能であることを例証する。
【図４】図４は、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ乳癌トランスジェニックマウスモデルにおける癌発生を、ＦＡＳ阻害剤が阻害可能であることを例証する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪酸シンターゼ阻害剤の有効量を、癌発生の阻害を必要とする被験者に投与することを含む、癌発生を阻害する方法。
【請求項２】
前記被験者は、哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験者は、ヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記被験者は、前癌性病変を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記前癌性病変は、脂肪酸シンターゼを発現する、請求項５に記載の方法。
【請求項６】
前記前癌性病変は、ｎｅｕタンパクを発現する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記前癌性病変は、脂肪酸シンターゼおよびｎｅｕタンパクを発現する、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記前癌性病変は、胸と、前立腺と、結腸と、肺と、胃と、口と、胆管とからなる群から選択される組織タイプ内に存在する、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記組織タイプは、胸である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記組織タイプは、前立腺である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記組織タイプは、結腸である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記組織タイプは、肺である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記組織タイプは、胃である、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記組織タイプは、口である、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
前記組織タイプは、胆管である、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記有効量は、１日当たり約６０ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇの範囲内にある、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記脂肪酸シンターゼ阻害剤は、前記脂肪酸シンターゼの酵素を直接阻害する化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記脂肪酸シンターゼ阻害剤は、以下の化学式：
【化１】
（式中、
Ｒ1＝Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、−ＣＨ2ＯＲ5、−Ｃ（Ｏ）Ｒ5、−ＣＯ（Ｏ）Ｒ5、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｒ5、または−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ5であり、ここで、Ｒ5およびＲ6は、各々独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキルまたはアルキルアリールであり、場合により１つ以上のハロゲン原子を含有しており；
Ｒ2＝−ＯＨ、−ＯＲ7、−ＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｒ7、−ＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ7、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ7、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ7、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ7Ｒ8であり、ここで、Ｒ7およびＲ8は、各々独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキルまたはアルキルアリールであり、ここで、Ｒ7およびＲ8は、各々場合によりハロゲン原子を含有することが可能であり；
互いに同一または異なるＲ3およびＲ4は、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。）
を有する化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記脂肪酸シンターゼ阻害剤は、以下の化学式：
【化２】
（式中、
Ｒ9＝Ｈ、またはＣ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ11、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ11、−Ｃ（Ｏ）Ｒ11、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＲ11、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ11であり、ここで、Ｒ11は、ＨまたはＣ1−Ｃ10アルキル、シクロアルキルまたはアルケニルであり；
Ｒ10＝Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり；
Ｘ＝−ＯＲ12、または−ＮＨＲ12であり、ここで、Ｒ12は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、前記Ｒ12基は、場合によりカルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、前記Ｒ12基は、場合により１つ以上のハロゲン原子をさらに含有しており；
但し、Ｒ9が＝ＣＨ2の場合、Ｘは−ＯＨではない。）
を有する化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記脂肪酸シンターゼ阻害剤は、テトラヒドロ−３−メチレン−２−オキソ−５−ｎ−オクチル−４−フランカルボン酸である、請求項１に記載の方法。
【請求項１】
脂肪酸シンターゼ阻害剤の有効量を、癌発生の阻害を必要とする被験者に投与することを含む、癌発生を阻害する方法。
【請求項２】
前記被験者は、哺乳動物である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記被験者は、ヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記被験者は、前癌性病変を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記前癌性病変は、脂肪酸シンターゼを発現する、請求項５に記載の方法。
【請求項６】
前記前癌性病変は、ｎｅｕタンパクを発現する、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記前癌性病変は、脂肪酸シンターゼおよびｎｅｕタンパクを発現する、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記前癌性病変は、胸と、前立腺と、結腸と、肺と、胃と、口と、胆管とからなる群から選択される組織タイプ内に存在する、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記組織タイプは、胸である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記組織タイプは、前立腺である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記組織タイプは、結腸である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
前記組織タイプは、肺である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
前記組織タイプは、胃である、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
前記組織タイプは、口である、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
前記組織タイプは、胆管である、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
前記有効量は、１日当たり約６０ｍｇ／ｋｇ〜約７．５ｍｇ／ｋｇの範囲内にある、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記脂肪酸シンターゼ阻害剤は、前記脂肪酸シンターゼの酵素を直接阻害する化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記脂肪酸シンターゼ阻害剤は、以下の化学式：
【化１】
（式中、
Ｒ1＝Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、−ＣＨ2ＯＲ5、−Ｃ（Ｏ）Ｒ5、−ＣＯ（Ｏ）Ｒ5、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｒ5、または−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ5であり、ここで、Ｒ5およびＲ6は、各々独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ10アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキルまたはアルキルアリールであり、場合により１つ以上のハロゲン原子を含有しており；
Ｒ2＝−ＯＨ、−ＯＲ7、−ＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｒ7、−ＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ7、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ7、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ7、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ7Ｒ8であり、ここで、Ｒ7およびＲ8は、各々独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキルまたはアルキルアリールであり、ここで、Ｒ7およびＲ8は、各々場合によりハロゲン原子を含有することが可能であり；
互いに同一または異なるＲ3およびＲ4は、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールである。）
を有する化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記脂肪酸シンターゼ阻害剤は、以下の化学式：
【化２】
（式中、
Ｒ9＝Ｈ、またはＣ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリール、＝ＣＨＲ11、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ11、−Ｃ（Ｏ）Ｒ11、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＲ11、−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ11であり、ここで、Ｒ11は、ＨまたはＣ1−Ｃ10アルキル、シクロアルキルまたはアルケニルであり；
Ｒ10＝Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり；
Ｘ＝−ＯＲ12、または−ＮＨＲ12であり、ここで、Ｒ12は、Ｈ、Ｃ1−Ｃ20アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アリール、アリールアルキル、またはアルキルアリールであり、前記Ｒ12基は、場合によりカルボニル基、カルボキシル基、カルボキシアミド基、アルコール基、またはエーテル基を含有し、前記Ｒ12基は、場合により１つ以上のハロゲン原子をさらに含有しており；
但し、Ｒ9が＝ＣＨ2の場合、Ｘは−ＯＨではない。）
を有する化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記脂肪酸シンターゼ阻害剤は、テトラヒドロ−３−メチレン−２−オキソ−５−ｎ−オクチル−４−フランカルボン酸である、請求項１に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公表番号】特表２００６−５０７３０６（Ｐ２００６−５０７３０６Ａ）
【公表日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５５０３２８（Ｐ２００４−５５０３２８）
【出願日】平成１５年１０月３１日（２００３．１０．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３４６５８
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０４１１８９
【国際公開日】平成１６年５月２１日（２００４．５．２１）
【出願人】（５０５００３２０７）ファスゲン，インク． (2)
【出願人】（５０５００５０１６）ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティ (4)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１０月３１日（２００３．１０．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３４６５８
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０４１１８９
【国際公開日】平成１６年５月２１日（２００４．５．２１）
【出願人】（５０５００３２０７）ファスゲン，インク． (2)
【出願人】（５０５００５０１６）ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティ (4)
【Ｆターム（参考）】
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