蛋白質−多糖類複合体を含む脂溶性有効成分の組成物
【課題】 蛋白質−多糖類複合体を含む脂溶性有効成分の組成物を提供する。
【解決手段】 本発明は、１種またはそれ以上の蛋白質、１種またはそれ以上の多糖類、および１種またはそれ以上の脂溶性有効成分を含む組成物と、食品および飲料、動物飼料、ならびに／または化粧料の補強、強化、ならびに／または着色のためのこれらの使用とに関する。
【解決手段】 本発明は、１種またはそれ以上の蛋白質、１種またはそれ以上の多糖類、および１種またはそれ以上の脂溶性有効成分を含む組成物と、食品および飲料、動物飼料、ならびに／または化粧料の補強、強化、ならびに／または着色のためのこれらの使用とに関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、１種またはそれ以上の蛋白質、１種またはそれ以上の多糖類、および１種またはそれ以上の脂溶性有効成分を含む組成物に関する。この組成物は、食品および飲料、動物飼料、ならびに／または化粧料の補強（ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）、強化（ｆｏｒｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、および／または着色に使用することができる。本発明はまた、この種の組成物の調製も対象とする。さらに本発明は、この組成物を飲料の成分と混合することによる飲料の製造方法も対象とする。本発明はまた、この方法によって得ることができる飲料も対象とする。
【０００２】
脂溶性有効成分、例えば、ベータ−カロテンを含む食品、飲料、動物飼料、または化粧料を補強、強化、または着色するための組成物は当該技術分野において周知である。ベータ−カロテンは色が濃く、上述の用途においては非常に綺麗なオレンジ色を呈するため好ましい着色化合物である。通常、最終組成物は飲料等の水性組成物であるから、補強、強化、および／または着色を行うためのさらなる化合物を組成物に添加する際は、生成物から脂肪（油）相が分離しないようにしなければならず、そうならない場合は対応する生成物が許容できないものになる。
【０００３】
したがって、脂溶性有効成分は、最終水性組成物の相分離を防ぐためにデンプンや魚膠等の補助化合物と組み合わせて用いられる場合が多い。ところがこのような補助化合物は、最終製品の色特性および栄養特性に悪影響を及ぼす場合が多い。したがって、組成物の呈味、乳化、エマルジョンの安定性、膜形成性、および／または呈色に関する特性が非常に優れた、改良された補助化合物を含む、脂溶性有効成分の新規な組成物を開発することが望まれている。
【０００４】
蛋白質は、食品の乳化剤として長く使用されてきた（Ｅ・ディキンソン（Ｅ．Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、Ｄ・Ｊ・マクレメンツ（Ｄ．Ｊ．ＭｃＣｌｅｍｅｎｔｓ）、蛋白質の機能性の分子基盤（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）：Ｅ・ディキンソン、Ｄ・Ｊ・マクレメンツ（編）、食品コロイドの発展（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｃｏｌｌｏｉｄｓ）に収録、ブラッキー・アカデミック・アンド・プロフェッショナル（Ｂｌａｃｋｉｅ Ａｃａｄｅｍｉｃ ＆ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ）、英国ロンドン（Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）、１９９５年、ｐｐ．２６〜７９）。しかしながら、等電点、すなわち特定の蛋白質の実効電荷および溶解性が最小になる蛋白質に固有の一定のｐＨまたはその近傍においては、乳化能力が失われてしまうであろう。さらに、高濃度の塩の存在下においては、蛋白質の静電反発力がスクリーニングされるため、エマルジョンの安定性が低下する。ほとんどの蛋白質は等電点がｐＨ７未満にある。食品および飲料のほとんどは酸性であり、したがって、等電点におけるエマルジョンの安定性が劣るため、食品および飲料産業への蛋白質の適用性は限られている。
【０００５】
蛋白質を含む水中油型エマルジョンの安定性は、エマルジョン滴の表面に吸着された乳化剤の電荷密度および構造に大きく依存する。蛋白質の吸着層は、エマルジョンの皮膜を安定化させることによって液滴の合一を防止する。しかし、蛋白質で安定化されたエマルジョンはｐＨやイオン強度等の環境による負荷に非常に敏感である（ラングナファー・ポングサワトナミット（Ｒｕｎｇｎａｐｈａｒ Ｐｏｎｇｓａｗａｔｍａｎｉｔ）、テプクンヤ・ハーンシラワット（Ｔｈｅｐｋｕｎｙａ Ｈａｒｎｓｉｌａｗａｔ）、デビッド・Ｊ・マクレメンツ（Ｄａｖｉｄ Ｊ．ＭｃＣｌｅｍｅｎｔｓ）、Ｃｏｌｌｏｉｄｓ ａｎｄ Ｓｕｒｆａｃｅｓ Ａ：Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ａｓｐｅｃｔｓ、第２８７巻、ｐｐ．５９〜６７、２００６年）。水性系のｐＨが蛋白質の等電点に近づき、かつ／または塩の濃度が高い場合は、蛋白質層の静電反発力が低下し、したがって、蛋白質の析出、エマルジョン滴の合一、およびクリーミングが発生する（エリック・ディキンソン（Ｅｒｉｃ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、Ｓｏｆｔ Ｍａｔｔｅｒ、２００８年、第４巻、ｐｐ．９３２〜９４２）。
【０００６】
乳化剤としての蛋白質は、ｐＨ値が等電点近傍にある場合は、析出が起こるため有効に機能しない（Ｎ・Ｇ・ディフティサ（Ｎ．Ｇ．Ｄｉｆｔｉｓａ）、Ｃ・Ｇ・ビリアデリスブ（Ｃ．Ｇ．Ｂｉｌｉａｄｅｒｉｓｂ）、Ｖ・Ｄ・キオセオグロウ（Ｖ．Ｄ．Ｋｉｏｓｓｅｏｇｌｏｕ）、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第１９巻（２００５年）ｐｐ．１０２５〜１０３１）。
【０００７】
エマルジョンの安定性は、共有結合を介して蛋白質−多糖類複合体を形成することによって改善される場合がある（エリック・ディキンソン、Ｓｏｆｔ Ｍａｔｔｅｒ、２００８年、第４巻、ｐｐ．９３２〜９４２）。蛋白質−多糖類複合体により、特に、蛋白質単独では溶解性が劣る条件下において乳化特性および立体安定性が改善された（エリック・ディキンソン、Ｓｏｆｔ Ｍａｔｔｅｒ、２００８年、第４巻、ｐｐ．９３２〜９４２）。
【０００８】
多糖類と複合化させることにより大豆蛋白質の乳化特性が改善されたことも報告されている（Ｎ・ディフティス（Ｎ．Ｄｉｆｔｉｓ）およびＶ・キオセオグロウ、ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、第８１巻、ｐ．１、２００３年；Ｎ・ディフティスおよびＶ・キオセオグロウ、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第２０巻、ｐ．７８７、２００６年；Ｎ・Ｇ・ディフティス（Ｎ．Ｇ．Ｄｉｆｔｉｓ）ら、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第１９巻、ｐ．１０２５、２００５年；Ｎ・ディフティスおよびＶ・キオセオグロウ、Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第９６巻、ｐ．２２８）。蛋白質−多糖類複合体は、特に、油滴のサイズを小さくしてエマルジョンを安定化させることによって蛋白質の乳化特性を改善することができる。このような複合体は、蛋白質および多糖類のメイラード（Ｍａｉｌｌａｒｄ）型反応または他の反応によって生成させることができる。この複合体は、未反応の蛋白質成分と一緒に界面に吸着されて、油滴の立体安定化力（ｓｔｅｒｉｃ ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒｃｅ）を向上させる。しかし、蛋白質−多糖類複合体の等電点近傍におけるエマルジョン安定性は食品および飲料用途に用いるには不十分なままであり、食品および飲料用途における蛋白質乳化剤にはまだ問題が残っている。
【０００９】
したがって、食品、飲料、動物飼料、化粧料、または医薬組成物を補強、強化、および／または着色するための上述の問題点がない脂溶性有効成分の組成物が依然として求められている。
【００１０】
したがって、本発明の目的は、上に示した所望の特性を有する、例えば、光学的透明性およびエマルジョン安定性に関する特性が非常に優れ、かつ／または色の濃さおよび色の安定性（該当する場合）が改善されている、脂溶性有効成分の組成物を提供することにあった。本発明の目的はまた、脂溶性有効成分の組成物の調製方法を、例えば、異なる乳化技法を用いることによって改善することにもあった。
【００１１】
この目的は、
ａ）１種またはそれ以上の脂溶性有効成分、
ｂ）食品用途に好適な蛋白質の群から選択される１種またはそれ以上の蛋白質、および
ｃ）１種またはそれ以上の多糖類
を含み、蛋白質対多糖類の重量比が、ｂが５以上であるという条件下で、１：ｂのように選択される組成物によって達成された。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、大豆蛋白質、大豆蛋白質／デキストラン混合物（ＷＲ１：９）、大豆蛋白質／デキストラン複合体（ＷＲ１：３およびＷＲ１：９）のゼータ電位を示す。
【００１３】
先行技術の組成物がエマルジョン安定性に劣る主な要因の一つは、蛋白質対多糖類の重量比が低すぎることにあると考えられている。報告されている蛋白質対多糖類の重量比で最も高いものが１：４であった（Ｓ・ミシュラ（Ｓ．Ｍｉｓｈｒａ）ら、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第１５巻、ｐ．９、２００１年；Ｎ・Ｇ・ディフティスら、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第１９巻、ｐ．１０２５、２００５年；Ｎ・ディフティスおよびＶ・キオセオグロウ、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第２０巻、ｐｐ．７８７〜７９２、２００６年；Ｎ・ディフティス、Ｖ・キオセオグロウ、Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第９６巻（２００６年）ｐｐ．２２８〜２３３；Ｍ・アクタル（Ｍ．Ａｋｈｔａｒ）およびＥ・ディキンソン、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第２１巻、ｐ．６０７、２００７年）。驚くべきことに、重量比を１：５以上に増大させることにより、等電点のｐＨにおいても蛋白質が析出せず、高イオン強度下でさえも生成し得る安定なエマルジョンが構築されることが見出された。
【００１４】
本明細書において用いられる「脂溶性有効成分」という用語は、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、およびこれらの誘導体からなる群から選択されるビタミン類；多価不飽和脂肪酸；親油性健康成分；カロテノイド；および風味または香気物質ならびに、これらの混合物を指す。
【００１５】
本発明による好適な多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）は、好ましくは１６〜２４個の炭素原子を有し、特に、１〜６個の二重結合、好ましくは４または５または６個の二重結合を有する一−または多価不飽和カルボン酸である。
【００１６】
不飽和脂肪酸は、ｎ−６系またはｎ−３系のどちらに属するものであってもよい。ｎ−３多価不飽和酸の好ましい例は、エイコサペンタ−５，８，１１，１４，１７−エン酸およびドコサヘキサ−４，７，１０，１３，１６，１９−エン酸であり、ｎ−６多価不飽和酸の好ましい例は、アラキドン酸およびガンマリノレン酸である。
【００１７】
多価不飽和脂肪酸の好ましい誘導体は、これらのエステル、例えば、グリセリド、特にトリグリセリドであり、特に好ましくは、エチルエステルである。ｎ−３およびｎ−６多価不飽和脂肪酸のトリグリセリドが特に好ましい。
【００１８】
トリグリセリドは、３つの同じ不飽和脂肪酸を含むものであってもよいし、または２もしくは３種の異なる不飽和脂肪酸を含むものであってもよい。これらはまた、一部に飽和脂肪酸を含むものであってもよい。
【００１９】
誘導体がトリグリセリドである場合、通常、３種の異なるｎ−３多価不飽和脂肪酸がグリセリンによってエステル化されている。本発明の好ましい一実施形態においては、脂肪酸部分の３０％がｎ−３脂肪酸であり、その２５％が長鎖多価不飽和脂肪酸であるトリグリセリドが使用される。さらなる好ましい実施形態においては、市販のロプファ（ＲＯＰＵＦＡ）（登録商標）‘３０’ｎ−３食用油（スイス国カイザーアウグスト（Ｋａｉｓｅｒａｕｇｓｔ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）のＤＳＭ・ニュートリショナル・プロダクツ・リミテッド（ＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｌｔｄ））が使用される。
【００２０】
本発明の他の好ましい実施形態においては、ＰＵＦＡエステルは、ロプファ（登録商標）’７５’ｎ−３ＥＥである。ロプファ’７５’ｎ−３ＥＥは、ｎ−３脂肪酸エチルエステルを７２％以上含むエチルエステル形態にある精製海産物油（ｍａｒｉｎｅ ｏｉｌ）である。これは混合トコフェロール、パルミチン酸アスコルビル、クエン酸で安定化されており、ローズマリー抽出物を含有するものである。
【００２１】
本発明の他の好ましい実施形態においては、ＰＵＦＡエステルはロプファ（登録商標）’１０’ｎ−６油であり、これは、ＤＬ−アルファ−トコフェロールおよびパルミチン酸アスコルビルで安定化された、ガンマリノレン酸を９％以上含む精製月見草油である。
【００２２】
本発明によれば、多価不飽和脂肪酸のトリグリセリドを含む天然油（１種またはそれ以上の成分）、例えば、海産物油（魚油）および／または植物油だけでなく、発酵させたバイオマスまたは遺伝子組み換え植物から抽出した油も有利に使用することができる。
【００２３】
多価不飽和脂肪酸のトリグリセリドを含む好ましい油は、オリーブ油、ヒマワリ種子油、月見草種子油、ボラージ油、ブドウ種子油、大豆油、落花生油、コムギ胚芽油、カボチャ種子油、クルミ油、ゴマ種子油、ナタネ油（カノーラ）、ブラックカラント種子油、キウイ種子油、特定の真菌由来の油、および魚油である。
【００２４】
多価不飽和脂肪酸の好ましい例は、例えば、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸等である。
【００２５】
本発明による好ましい親油性健康成分は、レスベラトロール；マルバトウキ属植物（ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ）；コエンザイムＱ１０（「ＣｏＱ１０」とも呼ばれる）、コエンザイムＱ９、および／もしくはこれらの還元形態（対応するユビキノール）から選択されるユビキノンおよび／もしくはユビキノール（１種またはそれ以上の成分）；ゲニステイン；ならびに／またはアルファ−リポ酸である。
【００２６】
本発明の特に好ましい脂溶性有効成分は、カロテノイド、特に、ベータ−カロテン、リコペン、ルテイン、ビキシン、アスタキサンチン、アポカロテナール、ベータ−アポ−８’−カロテナール、ベータ−アポ−１２’−カロテナール、カンタキサンチン、クリプトキサンチン、シトラナキサンチン、およびゼアキサンチンである。ベータ−カロテンが最も好ましい。
【００２７】
本発明の好ましい実施形態においては、組成物は、１種またはそれ以上の脂溶性有効成分を、組成物全体の乾物基準で０．１〜７０重量％、さらに好ましくは０．１〜３０重量％、さらに好ましくは０．５〜２０重量％、最も好ましくは０．５〜１５重量％含む。
【００２８】
本発明による好ましい「食品用途に好適な蛋白質」は、植物性蛋白質である。本明細書において用いられる「植物性蛋白質」という用語は、大豆、ルピナス（例えば、シロバナルーピン（Ｌ．ａｌｂｕｓ）、アオバナルーピン（Ｌ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓ）、またはこれらの変種）、エンドウ、および／またはジャガイモ由来の蛋白質を指す。蛋白質は、この植物の果実（例えば、大豆子実等）や種子（調製（ｐｒｅｐａｒｅｄ）または加工種子を含む）等の任意の部位から、または全粒粉もしくは脱脂製品（細断片やフレーク等）から単離したものであってもよい。
【００２９】
大豆蛋白質が特に好ましい。
【００３０】
本明細書において用いられる「多糖類」という用語には、ペクチン、デキストラン、セルロース、セルロース誘導体、マルトデキストリン、デンプン、および／または加工デンプン等の天然および変性多糖類が含まれる。
【００３１】
本明細書において用いられる「変性多糖類」という用語は、親油性部分、例えば、直鎖中に好ましくは炭素原子５〜１８個の鎖長を有する炭化水素部分を含む多糖類に関連する。好ましくは、変性多糖類は、ヒトが摂取可能なものであるべきであり、すなわち、好ましい変性多糖類は、ＧＲＡＳ（一般に安全と認められる）または世界中の様々な規制当局により食品として認可されたものであるべきである。好ましい変性多糖類は、食用加工デンプンである。
【００３２】
本明細書において用いられる「食用加工デンプン」という用語は、周知の化学的方法によりデンプンを疎水性部分で置換することによって作製された加工デンプンに関連する。例えば、アルキルまたはアルケニル炭化水素基で置換された無水コハク酸および／またはグルタル酸等の環状ジカルボン酸無水物でデンプンを処理してもよい。
【００３３】
好ましい加工デンプンは、オクテニルコハク酸デンプンナトリウム（「ＯＳＡデンプン」）である。ＯＳＡデンプンは、デンプン、マルトデキストリン、炭水化物、ガム、コーンシロップ等のさらなる親水コロイドと、場合により、脂肪酸のモノ−およびジグリセリド、脂肪酸のポリグリセロールエステル、レシチン、ソルビタンモノステアレート等の任意の典型的な乳化剤（コエマルゲーター（ｃｏ−ｅｍｕｌｇａｔｏｒ）として）、ならびに植物系繊維または糖とを含んでいてもよい。
【００３４】
ＯＳＡデンプンは、例えば、ナショナル・スターチ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｒｃｈ）からＨｉＣａｐ １００、Ｃａｐｓｕｌ、Ｃａｐｓｕｌ ＨＳ、Ｐｕｒｉｔｙ Ｇｕｍ ２０００、ＵＮＩ−ＰＵＲＥ、ＨＹＬＯＮ ＶＩＩの商品名で；ロケット・フレール（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ Ｆｒｅｒｅｓ）から；ＣｅｒｅＳｔａｒからＣ＊ＥｍＣａｐの商品名で；またはＴａｔｅ ＆ Ｌｙｌｅから市販されている。
【００３５】
蛋白質対多糖の重量比は、ｂが５以上であるという条件下で、１：ｂのように選択することが好ましく、特に、ｂは、好ましくは５〜１５の範囲、より好ましくは８〜１５の範囲、最も好ましくは８〜１０の範囲から選択される。
【００３６】
本発明の特に好ましい実施形態においては、第１ステップとして、本発明による１種またはそれ以上の蛋白質および１種またはそれ以上の多糖類から蛋白質−多糖類複合体が形成される。
【００３７】
したがって、本発明はまた、以下のステップ：
Ｉ）蛋白質を水中に懸濁させるステップと、
ＩＩ）場合により、ステップＩ）の懸濁液から溶解していない蛋白質を除去するステップと、
ＩＩＩ）蛋白質対多糖類の重量比が１：５〜１：１５となるよう多糖類を混合するステップと、
ＩＶ）場合により、ステップＩＩＩ）の混合物を乾燥するステップと、
Ｖ）（乾燥した）混合物を適切な温度で好適な時間加熱することにより複合体を形成するステップと、
ＶＩ）ステップＶ）の複合体を適切な量の水中に分散させるステップと、
ＶＩＩ）１種またはそれ以上の脂溶性有効成分を含む有機相を複合体に添加するステップと、
ＶＩＩＩ）ステップＶＩＩ）の混合物を当業者に周知の従来の乳化法を用いて乳化するステップと、
ＩＸ）場合により、ステップＶＩＩＩ）のエマルジョンを乾燥するステップと
を含む上記組成物の製造方法にも関する（この方法は、本明細書に規定した量の成分を用いて実施してもよい）。
【００３８】
乾燥ステップは、当業者に周知の任意の従来の乾燥方法を用いて実施してもよく、噴霧乾燥および／またはパウダー・キャッチ法（ｐｏｗｄｅｒ ｃａｔｃｈ ｐｒｏｃｅｓｓ）（懸濁液を噴霧して液滴をデンプンもしくはケイ酸カルシウムもしくはケイ酸もしくは炭酸カルシウムまたはこれらの混合物等の吸収材の床に捕捉させた後、乾燥させる）が好ましい。
【００３９】
加熱ステップおよび／または任意的な乾燥ステップは、蛋白質および多糖類のメイラード型反応を誘発させることができる。
【００４０】
ステップＶ）の複合体は、そのままで使用してもよいし、または後で使用するために乾燥してもよい。
【００４１】
よりさらに好ましくは、本発明による組成物は、デキストリンやマルトデキストリン等の１種またはそれ以上のオリゴ糖、特にデキストロース当量（ＤＥ）が５〜６５の範囲にあるもの、およびブドウ糖液糖、特にＤＥが２０〜９５の範囲にあるものをさらに含む。「デキストロース当量」（ＤＥ）という用語は加水分解の程度を意味し、乾燥重量を基準としてＤ−グルコースとして計算される還元糖の量の指標であり、その尺度は、天然デンプンのＤＥがほぼ０であり、グルコースのＤＥが１００であることに基づいている。好ましくは、本発明による組成物にはマルトデキストリンが使用される。
【００４２】
本発明はまた、食品、飲料、動物飼料、および／または化粧料の補強、強化、および／または着色、好ましくは、飲料の補強、強化、および／または着色を行うための上述の組成物の使用も対象とする。
【００４３】
本発明の他の面は、上述の組成物を含む食品、飲料、動物飼料、化粧料である。
【００４４】
本発明の製品形態を着色剤または添加剤成分として使用することができる飲料は、炭酸飲料、例えば、フレーバー付けされた炭酸水、ソフトドリンク（ｓｏｆｔ ｄｒｉｎｋ）、またはミネラル飲料ならびに非炭酸飲料、例えば、フレーバードウォーター、果汁、フルーツパンチ（ｆｒｕｉｔ ｐｕｎｃｈ）、およびこれらの飲料の濃縮形態であってもよい。これらは天然の果汁もしくは野菜汁または人工の風味物質をベースとするものであってもよい。同様に、アルコール飲料および即席粉末飲料も包含される。糖分を含む飲料だけでなく、カロリーゼロおよび人工甘味料を含むダイエット飲料も包含される。
【００４５】
さらに、天然由来または合成の乳製品も、本発明の製品形態を着色剤または添加剤成分として使用することができる食品の範囲に含まれる。この種の製品の典型的な例は、乳飲料、アイスクリーム、チーズ、ヨーグルト等である。豆乳飲料や豆腐製品等の乳代用品も本用途の範囲に包含される。
【００４６】
本発明の製品形態を着色剤としてまたは添加剤成分として含む、砂糖を多く含む食品（ｓｗｅｅｔｓ）、例えば、菓子製品（ｃｏｎｆｅｃｔｉｏｎｅｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔ）、キャンディー、ガム、デザート類（例えば、アイスクリーム、ゼリー、プディング、プディング用ミックス粉（ｉｎｓｔａｎｔ ｐｕｄｄｉｎｇ ｐｏｗｄｅｒ）等）も包含される。
【００４７】
本発明の製品形態を着色剤としてまたは添加剤成分として含むシリアル、スナック、クッキー、パスタ、スープおよびソース、マヨネーズ、サラダドレッシング等も包含される。さらに、乳製品およびシリアルに使用される加工果実（ｆｒｕｉｔ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）も包含される。
【００４８】
本発明の組成物を介して食品に添加される１種またはそれ以上の脂溶性有効成分、好ましいカロテノイド、特にベータ−カロテンの最終濃度は、好ましくは、食品組成物の総重量を基準として０．１〜５０ｐｐｍ、特に１〜３０ｐｐｍ、より好ましくは３〜２０ｐｐｍ、例えば約６ｐｐｍであってもよく、着色または強化される具体的な食品および目的とする着色または強化の程度に依存する。
【００４９】
好ましくは、本発明の食品組成物は、脂溶性有効成分を本発明の組成物の形態で食品に添加することにより得られる。食品または医薬品を着色または強化する場合は、本発明の組成物を水分散性固体製品形態の適用に関しそれ自体周知の方法に従い用いることができる。
【００５０】
一般に、この組成物は、水性原液として、乾燥ミックス粉として、または具体的な用途に応じた他の好適な食品成分とのプレミックスとしてのいずれかで添加してもよい。混合は、最終用途の配合に応じて、例えば、乾燥粉体混合機、低剪断ミキサー、高圧ホモジナイザー、または高剪断ミキサーを用いて実施してもよい。この種の専門的方法が専門家の技能の範囲内であることは容易に理解されるであろう。
【００５１】
以下の実施例により本発明をさらに説明するが、これらに限定することを意図するものではない。
【００５２】
［実施例］
［材料］
大豆蛋白質は、蛋白質含有量が８８％（乾燥基準）であるＪｉｌｉｎ Ｆｕｊｉ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏ．Ｌｔｄ．からの（ソヤサワー（Ｓｏｙａｓｏｕｒ）４０００Ｋ、酸性可溶大豆蛋白質）を用いた。この等電点はｐＨ４．７前後である。
【００５３】
卵白アルブミン（グレードＶ）は、シグマ−アルドリッチ・コーポレーション（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）（ミズーリ州セントルイス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））から得た。
【００５４】
デキストラン（６２ｋＤａ）は、ＧＥヘルスケア（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）（英国バッキンガムシャー（Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）の前アメルシャム・ファルマシア・バイオテック（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ））からの多糖類である。
【００５５】
Ｍａｌｔｒｉｎ ０４０は、グレイン・プロセシング・コーポレーション（Ｇｒａｉｎ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）（アイオワ州マスカティーン（Ｍｕｓｃａｔｉｎｅ，Ｉｏｗａ））から得た。Ｍａｌｔｒｉｎ ０４０は、デキストロース当量が４〜７の多糖類である。
【００５６】
［蛋白質−多糖類複合体の調製］
蛋白質−多糖類複合体は、固相または溶液状態で調製することができる。
【００５７】
［固相法］
蛋白質を適切なｐＨで水中に懸濁させた。溶解しなかった蛋白質を除去した（遠心分離を１００００ｒｐｍで１５分間）。可溶な蛋白質を適切な重量比（ＷＲ）で多糖類と混合し、混合物を（凍結乾燥により）乾燥した。乾燥した混合物を適切な温度および相対湿度（６０℃／７９％）で好適な時間加熱することにより複合体を形成した。
【００５８】
［溶液法］
蛋白質を適切なｐＨ（ｐＨ７または８）で水中に懸濁させた。溶解しなかった蛋白質を除去した（遠心分離を１００００ｒｐｍで１５分間）。可溶な蛋白質を適切な重量比（ＷＲ）で多糖類と混合し、適切な温度で好適な時間加熱することにより複合体を形成した。この複合体は、そのまま使用してもよいし、または後で使用するために乾燥して使用してもよい。
【００５９】
［エマルジョンの調製］
複合体溶液に適切な体積比（ＶＲ）でトウモロコシ油を添加した。ｐＨを調整した後、混合物をホモジナイザー（ＦＪ２００−Ｓ、中国（Ｃｈｉｎａ）のＳｈａｎｇｈａｉ Ｓｐｅｃｉｍｅｎ Ｍｏｄｅｌ Ｃｏ．）を用いて１００００ｒｐｍで１分間室温で予備乳化した後、すぐに超音波処理（Ｓｃｉｅｎｔｚ−ＩＩＤ、中国寧波（Ｎｉｎｇｂｏ，Ｃｈｉｎａ）のＳｃｉｅｎｔｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を用いて出力４５０Ｗで６分間（２．５秒間運転／２秒間停止）室温で乳化した。
【００６０】
［粒度測定］
動的光散乱（ＤＬＳ）測定には毎回希釈直後のエマルジョン試料を使用した。測定は、マルチτデジタル時間相関器（マルバーン（Ｍａｌｖｅｒｎ）ＰＣＳ７１３２）および固体レーザー（コヒーレント・インコーポレーテッド（Ｃｏｈｅｒｅｎｔ Ｉｎｃ．）のコンパス（Ｃｏｍｐａｓｓ）３１５Ｍ−１００、出力約１００ｍＷ、λ＝５３２ｎｍ）を備えたマルバーン・オートサイザー（Ｍａｌｖｅｒｎ Ａｕｔｏｓｉｚｅｒ）４７００（英国ウスターシャー州（Ｗｏｒｃｓ，ＵＫ）のマルバーン・インストゥルメンツ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて実施した。測定は散乱角を９０°に固定して２５℃で実施した。測定された時間相関関数を、相関器を取り付けたＡｕｔｏｍａｔｉｃ Ｐｒｏｇｒａｍで解析した。ＣＯＮＴＩＮモード解析により粒度（ｚ平均流体力学的直径）を得た。２つのバッチの試料について測定を行い、データの平均値を報告した。
【００６１】
［等電点近傍におけるエマルジョンの析出の抑制］
［実施例１］
［蛋白質対多糖類の重量比が１：９の場合の様々なｐＨにおけるエマルジョン安定性］
大豆蛋白質をｐＨ８で水中に分散させ（２２ｍｇ／ｍＬ）、室温で１５分間遠心（１００００ｒｐｍ）した。ｐＨ８．２における不溶な蛋白質の割合は１０％未満であった。上清を、蛋白質対デキストランの重量比が１：９（ＷＲ１：９）となるようにデキストランと混合した。溶液のｐＨを８に調整した後、溶液を凍結乾燥した。乾燥粉末の一部を取り分けて（混合物）他の部分を６０℃、相対湿度７９％で３日間加熱することにより複合体を形成した。
【００６２】
トウモロコシ油（２．５ｍｌ）を混合物または複合体の溶液（１０ｍｌ；１５ｍｇ蛋白質／ｍｌ）に添加した。油対複合体溶液の体積比（ＶＲ）を１：４とした。ホモジナイザーを用いて溶液を１００００ｒｐｍで１分間室温で予備乳化した後、すぐに超音波処理を用いて出力４５０Ｗで６分間（運転２．５秒間／停止２秒間）室温で乳化した。エマルジョンのｐＨを様々な値に調節した後、粒度を測定した。
【００６３】
【表１】
【００６４】
混合物から調製されたエマルジョンは、ｐＨ４、５、および６において蛋白質の析出物が生じたが、複合体から調製されたものには生じなかった。ＷＲ１：９の混合物から調製されたエマルジョンの安定性またはエマルジョンの粒度はｐＨ依存性を示したが、その一方で、複合体からのエマルジョンの安定性およびエマルジョンの粒度は有意なｐＨ依存性を示さなかった。
【００６５】
［実施例２］
［蛋白質対デキストランの重量比が１：１〜１：３の場合の様々なｐＨ値におけるエマルジョン安定性］
重量比１：１、１：２、および１：３の酸性可溶大豆蛋白質およびデキストランから混合物および複合体を調製した。溶液のｐＨを７または８に調整した後、溶液を凍結乾燥した。乾燥粉末の一部を取り分けて（混合物）、それ以外の部分を６０℃、相対湿度７９％で３、９、１２時間加熱することによりＷＲ１：１、１：２、および１：３の複合体をそれぞれ形成した。
【００６６】
トウモロコシ油（３．３３３ｍｌ）を物理的混合物または複合体の溶液（１０ｍｌ；２０ｍｇ蛋白質／ｍｌ）に添加した。油対複合体溶液の体積比（ＶＲ）を１：３とした。混合物および複合体溶液の蛋白質濃度を２０ｍｇ／ｍｌとした。溶液をホモジナイザーを用いて予備乳化した後、すぐに超音波処理を施した。エマルジョンのｐＨを様々な値（ｐＨ３、４、５、６、および７）に調節した後、粒度を測定した。
【００６７】
【表２】
【００６８】
混合物または複合体から調製されたすべてのエマルジョンがｐＨ依存性を示した。複合体（ＷＲ１：１〜ＷＲ１：３）からのエマルジョンは等電点近傍のｐＨにおいて不安定であった。大豆蛋白質（ｐＨ４．７）の等電点に近いｐＨ４および５においては、混合物および複合体からのエマルジョンに析出物が観察された。
【００６９】
［実施例３］
［蛋白質／デキストラン複合体（ＷＲ１：１２）のエマルジョンの様々なｐＨ値における安定性］
重量比が１：１２の蛋白質およびデキストランを一緒に水中に溶解させた。蛋白質の濃度を１５ｍｇ／ｍｌとした。混合物のｐＨを８．３０に調整した後、凍結乾燥した。凍結乾燥した粉末の一部を取り分けて（混合物）、それ以外の部分を６０℃、相対湿度７９％で４日間処理することによって複合体を形成した。
【００７０】
蛋白質濃度が１５ｍｇ／ｍｌに到達するように複合体を水中に溶解させた。蛋白質対デキストランの重量比が１：１２である蛋白質／デキストランの物理的混合物および複合体から、水溶液の体積を１０ｍｌとし、トウモロコシ油を２．５ｍｌとしてエマルジョンを調製した。この溶液をホモジナイザーを用いて予備乳化した後、すぐに超音波処理を施した。
【００７１】
【表３】
【００７２】
混合物または複合体から調製されたエマルジョンはいずれもｐＨ依存性を示した。しかしながら、複合化の効果を依然として観察することができた。混合物の試料と比較すると、複合体の試料は粒度がより小さく、これは、蛋白質の凝集の程度が低いことを示している。大豆蛋白質の場合、１：９の複合体から調製されたエマルジョンが最も安定性が高かった。
【００７３】
［複合体のエマルジョンの高イオン強度に対する耐性］
［実施例４］
［複合体のエマルジョンの安定性に対する様々なイオン強度の影響（乳化前にＮａＣｌを添加）］
混合物をそれぞれ５０時間および７２時間加熱処理することにより複合体試料（ＷＲ１：６およびＷＲ１：９）を調製した。
【００７４】
混合物または複合体溶液を１０ｍｌおよび油（ＷＲ１：６には油３．３ｍｌ、ＷＲ１：９には油２．５ｍｌ）を用いて、ＷＲ１：６および１：９の物理的混合物または複合体から様々なイオン強度（ＮａＣｌを０．０５Ｍ、０．１０Ｍ、および０．２Ｍ）のエマルジョンをｐＨ８．０で調製した。ＷＲ１：６については蛋白質の濃度を２０ｍｇ／ｍｌとし、ＷＲ１：９については１５ｍｇ／ｍｌとした。粒度測定を行うためにｐＨおよびＮａＣｌ濃度の等しい溶液でエマルジョンを希釈した。
【００７５】
【表４】
【００７６】
ＷＲ１：６および１：９の物理的混合物の場合、ＮａＣｌ濃度が０．０５Ｍでは析出物は生じなかった。さらにＮａＣｌを０．１Ｍに上昇させると析出物が生じた。３種の複合体溶液の場合は、ＮａＣｌ濃度が０．０５、０．１０、および０．２０Ｍでも有意な析出は起こらなかった。
【００７７】
［実施例５］
［大豆蛋白質／デキストラン複合体のエマルジョンの安定性に対する様々なイオン強度の影響（乳化後にＮａＣｌを添加）］
混合物をそれぞれ５０時間および７２時間加熱処理することにより複合体の試料（ＷＲ１：６およびＷＲ１：９）を調製した。
【００７８】
混合物または複合体溶液を１０ｍｌおよび油（ＷＲ１：６には油を３．３ｍｌ、ＷＲ１：９には油を２．５ｍｌ）を用いて、ＷＲ１：６および１：９混合物または複合体からエマルジョンをｐＨ８．０で調製した。ＷＲ１：６については蛋白質の濃度を２０ｍｇ／ｍｌとし、ＷＲ１：９については１５ｍｇ／ｍｌとした。ＤＬＳ試料用として、ｐＨ８でエマルジョンを希釈することにより様々なイオン強度（ＮａＣｌ：０Ｍ、０．０５Ｍ、０．１０Ｍ、０．２０Ｍ）にした。
【００７９】
【表５】
【００８０】
物理的混合物から調製された試料ではＮａＣｌが０．０５Ｍという低いイオン強度で析出物が生じた一方で、複合体試料においてはＮａＣｌが０．２０Ｍという高いイオン強度でも有意な析出は観察されなかった。実施例５および６は、複合体（ＷＲ１：９およびＷＲ１：６）から調製されたエマルジョンが塩に対する耐性が高いことを示している。
【００８１】
［実施例６］
［複合体から調製されたエマルジョンのＮａＣｌの存在下における長期安定性］
ＷＲ１：９の複合体溶液を１０ｍｌおよび油を２．５ｍｌを用いてｐＨ８．０でエマルジョンを調製した。複合体溶液中の蛋白質濃度を１５ｍｇ／ｍｌとした。初期および４℃で４ヵ月貯蔵した後のエマルジョン滴の粒度を測定した。
【００８２】
【表６】
【００８３】
４ヵ月後の粒度の変化が小さいことは、複合体のエマルジョンの塩に対する耐性が高いことを示している。
【００８４】
［実施例７］
［卵白アルブミン／デキストラン複合体の調製およびそのエマルジョンの様々なｐＨ値における安定性］
卵白アルブミン（ｏｖａ）およびデキストランを重量比１：１０で一緒に水中に溶解した。ｏｖａ濃度を１５ｍｇ／ｍｌとした。混合物のｐＨを７．２５に調整した後、凍結乾燥した。凍結乾燥した粉末を６０℃、相対湿度７９％で４８時間反応させることにより卵白アルブミン−デキストラン複合体を調製した。ｏｖａ濃度が１５ｍｇ／ｍｌに到達するように複合体を水に溶解した。
【００８５】
蛋白質濃度を１５ｍｇ／ｍｌ、蛋白質対デキストランの重量比を１：１０、水溶液の体積を１０ｍｌ、トウモロコシ油を２．５ｍｌとして、ｏｖａ、ｏｖａ／デキストラン物理的混合物、およびｏｖａ−デキストラン複合体からエマルジョンを調製した。混合物をホモジナイザーを用いて予備乳化した後、すぐに超音波処理を施した。
【００８６】
ｏｖａまたはｏｖａ／デキストラン物理的混合物から調製されたエマルジョンは不安定であり、貯蔵後にクリームおよび漿液（ｓｅｒｕｍ）が生じた。複合体から調製されたエマルジョンは安定であった。エマルジョンを異なるｐＨに調節した後、粒度を測定した。この結果から、ｏｖａ／デキストラン複合体からのエマルジョンはｐＨ変化の影響を受けておらず、したがって、ｏｖａ／デキストラン複合体がエマルジョン調製に好適であることがわかる。
【００８７】
【表７】
【００８８】
［実施例８］
［大豆蛋白質／Ｍａｌｔｒｉｎ複合体の調製およびそのエマルジョンの様々なｐＨ値における安定性］
蛋白質およびＭａｌｔｒｉｎ ０４０を重量比１：９で一緒に水中に溶解した。蛋白質濃度を１５ｍｇ／ｍｌとした。Ｍａｌｔｒｉｎ ０４０はこの濃度では十分に溶解しない。混合物のｐＨを８．３０に調整した後、凍結乾燥した。凍結乾燥した粉末を６０℃、相対湿度７９％で３日間反応させることにより蛋白質−Ｍａｌｔｒｉｎ複合体を調製した。複合体を水中に１日間かけて溶解させた。蛋白質濃度が１５ｍｇ／ｍｌの場合、反応生成物を完全に溶解させることができなかった。
【００８９】
蛋白質濃度を１５ｍｇ／ｍｌとし、蛋白質対Ｍａｌｔｒｉｎの重量比を１：９、水溶液の体積を１０ｍｌ、トウモロコシ油を２．５ｍｌとして、蛋白質／Ｍａｌｔｒｉｎの物理的混合物および蛋白質−Ｍａｌｔｒｉｎ複合体からエマルジョンを調製した。混合物をホモジナイザーを用いて予備乳化した後、すぐに超音波処理を施した。
【００９０】
エマルジョンのｐＨを様々な値に調節した。希釈後に粒度を測定した。
【００９１】
【表８】
【００９２】
図１に、大豆蛋白質、大豆蛋白質／デキストラン混合物（ＷＲ１：９）、大豆蛋白質／デキストラン複合体（ＷＲ１：３およびＷＲ１：９）のゼータ電位を示す。
【００９３】
上述したように調製したエマルジョンのｐＨを様々な値に調節した後、５ｍＭのＮａＣｌを含むｐＨの等しい溶液で希釈して、蛋白質濃度が０．０３７５ｍｇ／ｍＬとなるようにした。ゼータサイザーナノ（Ｚｅｔａ Ｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ）ＺＳ９０（英国ウスターシャー州のマルバーン・インストゥルメント（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ））を用いて試料のゼータ電位を測定した。
【００９４】
【表９】
【００９５】
ゼータ電位は、巨大分子および粒子の表面の実効電荷と直接関係している。ゼータ電位の結果は、混合物から調製されたエマルジョンの構造が複合体から調製されたエマルジョンの構造とは異なることを示している。この結果は、混合物中のデキストランがエマルジョン構造に影響を与えず、したがって、蛋白質が単独である場合と同様に、正電荷と負電荷がほぼ等しく電荷間の引力が最大になるｐＨ４．７付近でエマルジョン粒子が凝集することを示している。複合体のエマルジョンはｐＨおよびイオン強度により影響されにくい。これらは主として表面の多糖類の立体障害によって安定化されているようである。
【００９６】
［実施例９］
大豆蛋白質をｐＨ８で水（２２ｍｇ／ｍＬ）中に分散させ、室温で１５分間遠心（１００００ｒｐｍ）した。ｐＨ８．２における不溶な蛋白質の割合は１０％未満であった。上清を、蛋白質対デキストランの重量比が１：９（ＷＲ１：９）となるようにデキストランと混合した。溶液のｐＨを８．０に調整した後、溶液を凍結乾燥した。乾燥粉末の一部を取り分けて（混合物）、それ以外の部分を６０℃、相対湿度７９％で３日間加熱することにより複合体を形成した。
【００９７】
ビタミンＥ油（２．５ｍｌ）を蛋白質溶液または混合物もしくは複合体溶液（１０ｍｌ；１５ｍｇ蛋白質／ｍｌ）に添加した。油対水溶液の体積比（ＶＲ）を１：４とした。溶液をホモジナイザーを用いて１００００ｒｐｍで１分間室温で予備乳化した後、すぐに超音波処理を用いて出力４５０Ｗで６分間（運転２．５秒間／停止２秒間）室温で乳化した。エマルジョンを様々なｐＨに調節した後、粒度を測定した。
【００９８】
【表１０】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、１種またはそれ以上の蛋白質、１種またはそれ以上の多糖類、および１種またはそれ以上の脂溶性有効成分を含む組成物に関する。この組成物は、食品および飲料、動物飼料、ならびに／または化粧料の補強（ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ）、強化（ｆｏｒｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、および／または着色に使用することができる。本発明はまた、この種の組成物の調製も対象とする。さらに本発明は、この組成物を飲料の成分と混合することによる飲料の製造方法も対象とする。本発明はまた、この方法によって得ることができる飲料も対象とする。
【０００２】
脂溶性有効成分、例えば、ベータ−カロテンを含む食品、飲料、動物飼料、または化粧料を補強、強化、または着色するための組成物は当該技術分野において周知である。ベータ−カロテンは色が濃く、上述の用途においては非常に綺麗なオレンジ色を呈するため好ましい着色化合物である。通常、最終組成物は飲料等の水性組成物であるから、補強、強化、および／または着色を行うためのさらなる化合物を組成物に添加する際は、生成物から脂肪（油）相が分離しないようにしなければならず、そうならない場合は対応する生成物が許容できないものになる。
【０００３】
したがって、脂溶性有効成分は、最終水性組成物の相分離を防ぐためにデンプンや魚膠等の補助化合物と組み合わせて用いられる場合が多い。ところがこのような補助化合物は、最終製品の色特性および栄養特性に悪影響を及ぼす場合が多い。したがって、組成物の呈味、乳化、エマルジョンの安定性、膜形成性、および／または呈色に関する特性が非常に優れた、改良された補助化合物を含む、脂溶性有効成分の新規な組成物を開発することが望まれている。
【０００４】
蛋白質は、食品の乳化剤として長く使用されてきた（Ｅ・ディキンソン（Ｅ．Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、Ｄ・Ｊ・マクレメンツ（Ｄ．Ｊ．ＭｃＣｌｅｍｅｎｔｓ）、蛋白質の機能性の分子基盤（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ）：Ｅ・ディキンソン、Ｄ・Ｊ・マクレメンツ（編）、食品コロイドの発展（Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｃｏｌｌｏｉｄｓ）に収録、ブラッキー・アカデミック・アンド・プロフェッショナル（Ｂｌａｃｋｉｅ Ａｃａｄｅｍｉｃ ＆ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ）、英国ロンドン（Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ）、１９９５年、ｐｐ．２６〜７９）。しかしながら、等電点、すなわち特定の蛋白質の実効電荷および溶解性が最小になる蛋白質に固有の一定のｐＨまたはその近傍においては、乳化能力が失われてしまうであろう。さらに、高濃度の塩の存在下においては、蛋白質の静電反発力がスクリーニングされるため、エマルジョンの安定性が低下する。ほとんどの蛋白質は等電点がｐＨ７未満にある。食品および飲料のほとんどは酸性であり、したがって、等電点におけるエマルジョンの安定性が劣るため、食品および飲料産業への蛋白質の適用性は限られている。
【０００５】
蛋白質を含む水中油型エマルジョンの安定性は、エマルジョン滴の表面に吸着された乳化剤の電荷密度および構造に大きく依存する。蛋白質の吸着層は、エマルジョンの皮膜を安定化させることによって液滴の合一を防止する。しかし、蛋白質で安定化されたエマルジョンはｐＨやイオン強度等の環境による負荷に非常に敏感である（ラングナファー・ポングサワトナミット（Ｒｕｎｇｎａｐｈａｒ Ｐｏｎｇｓａｗａｔｍａｎｉｔ）、テプクンヤ・ハーンシラワット（Ｔｈｅｐｋｕｎｙａ Ｈａｒｎｓｉｌａｗａｔ）、デビッド・Ｊ・マクレメンツ（Ｄａｖｉｄ Ｊ．ＭｃＣｌｅｍｅｎｔｓ）、Ｃｏｌｌｏｉｄｓ ａｎｄ Ｓｕｒｆａｃｅｓ Ａ：Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ａｓｐｅｃｔｓ、第２８７巻、ｐｐ．５９〜６７、２００６年）。水性系のｐＨが蛋白質の等電点に近づき、かつ／または塩の濃度が高い場合は、蛋白質層の静電反発力が低下し、したがって、蛋白質の析出、エマルジョン滴の合一、およびクリーミングが発生する（エリック・ディキンソン（Ｅｒｉｃ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、Ｓｏｆｔ Ｍａｔｔｅｒ、２００８年、第４巻、ｐｐ．９３２〜９４２）。
【０００６】
乳化剤としての蛋白質は、ｐＨ値が等電点近傍にある場合は、析出が起こるため有効に機能しない（Ｎ・Ｇ・ディフティサ（Ｎ．Ｇ．Ｄｉｆｔｉｓａ）、Ｃ・Ｇ・ビリアデリスブ（Ｃ．Ｇ．Ｂｉｌｉａｄｅｒｉｓｂ）、Ｖ・Ｄ・キオセオグロウ（Ｖ．Ｄ．Ｋｉｏｓｓｅｏｇｌｏｕ）、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第１９巻（２００５年）ｐｐ．１０２５〜１０３１）。
【０００７】
エマルジョンの安定性は、共有結合を介して蛋白質−多糖類複合体を形成することによって改善される場合がある（エリック・ディキンソン、Ｓｏｆｔ Ｍａｔｔｅｒ、２００８年、第４巻、ｐｐ．９３２〜９４２）。蛋白質−多糖類複合体により、特に、蛋白質単独では溶解性が劣る条件下において乳化特性および立体安定性が改善された（エリック・ディキンソン、Ｓｏｆｔ Ｍａｔｔｅｒ、２００８年、第４巻、ｐｐ．９３２〜９４２）。
【０００８】
多糖類と複合化させることにより大豆蛋白質の乳化特性が改善されたことも報告されている（Ｎ・ディフティス（Ｎ．Ｄｉｆｔｉｓ）およびＶ・キオセオグロウ、ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ、第８１巻、ｐ．１、２００３年；Ｎ・ディフティスおよびＶ・キオセオグロウ、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第２０巻、ｐ．７８７、２００６年；Ｎ・Ｇ・ディフティス（Ｎ．Ｇ．Ｄｉｆｔｉｓ）ら、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第１９巻、ｐ．１０２５、２００５年；Ｎ・ディフティスおよびＶ・キオセオグロウ、Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第９６巻、ｐ．２２８）。蛋白質−多糖類複合体は、特に、油滴のサイズを小さくしてエマルジョンを安定化させることによって蛋白質の乳化特性を改善することができる。このような複合体は、蛋白質および多糖類のメイラード（Ｍａｉｌｌａｒｄ）型反応または他の反応によって生成させることができる。この複合体は、未反応の蛋白質成分と一緒に界面に吸着されて、油滴の立体安定化力（ｓｔｅｒｉｃ ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒｃｅ）を向上させる。しかし、蛋白質−多糖類複合体の等電点近傍におけるエマルジョン安定性は食品および飲料用途に用いるには不十分なままであり、食品および飲料用途における蛋白質乳化剤にはまだ問題が残っている。
【０００９】
したがって、食品、飲料、動物飼料、化粧料、または医薬組成物を補強、強化、および／または着色するための上述の問題点がない脂溶性有効成分の組成物が依然として求められている。
【００１０】
したがって、本発明の目的は、上に示した所望の特性を有する、例えば、光学的透明性およびエマルジョン安定性に関する特性が非常に優れ、かつ／または色の濃さおよび色の安定性（該当する場合）が改善されている、脂溶性有効成分の組成物を提供することにあった。本発明の目的はまた、脂溶性有効成分の組成物の調製方法を、例えば、異なる乳化技法を用いることによって改善することにもあった。
【００１１】
この目的は、
ａ）１種またはそれ以上の脂溶性有効成分、
ｂ）食品用途に好適な蛋白質の群から選択される１種またはそれ以上の蛋白質、および
ｃ）１種またはそれ以上の多糖類
を含み、蛋白質対多糖類の重量比が、ｂが５以上であるという条件下で、１：ｂのように選択される組成物によって達成された。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、大豆蛋白質、大豆蛋白質／デキストラン混合物（ＷＲ１：９）、大豆蛋白質／デキストラン複合体（ＷＲ１：３およびＷＲ１：９）のゼータ電位を示す。
【００１３】
先行技術の組成物がエマルジョン安定性に劣る主な要因の一つは、蛋白質対多糖類の重量比が低すぎることにあると考えられている。報告されている蛋白質対多糖類の重量比で最も高いものが１：４であった（Ｓ・ミシュラ（Ｓ．Ｍｉｓｈｒａ）ら、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第１５巻、ｐ．９、２００１年；Ｎ・Ｇ・ディフティスら、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第１９巻、ｐ．１０２５、２００５年；Ｎ・ディフティスおよびＶ・キオセオグロウ、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第２０巻、ｐｐ．７８７〜７９２、２００６年；Ｎ・ディフティス、Ｖ・キオセオグロウ、Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第９６巻（２００６年）ｐｐ．２２８〜２３３；Ｍ・アクタル（Ｍ．Ａｋｈｔａｒ）およびＥ・ディキンソン、Ｆｏｏｄ Ｈｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ、第２１巻、ｐ．６０７、２００７年）。驚くべきことに、重量比を１：５以上に増大させることにより、等電点のｐＨにおいても蛋白質が析出せず、高イオン強度下でさえも生成し得る安定なエマルジョンが構築されることが見出された。
【００１４】
本明細書において用いられる「脂溶性有効成分」という用語は、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、およびこれらの誘導体からなる群から選択されるビタミン類；多価不飽和脂肪酸；親油性健康成分；カロテノイド；および風味または香気物質ならびに、これらの混合物を指す。
【００１５】
本発明による好適な多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）は、好ましくは１６〜２４個の炭素原子を有し、特に、１〜６個の二重結合、好ましくは４または５または６個の二重結合を有する一−または多価不飽和カルボン酸である。
【００１６】
不飽和脂肪酸は、ｎ−６系またはｎ−３系のどちらに属するものであってもよい。ｎ−３多価不飽和酸の好ましい例は、エイコサペンタ−５，８，１１，１４，１７−エン酸およびドコサヘキサ−４，７，１０，１３，１６，１９−エン酸であり、ｎ−６多価不飽和酸の好ましい例は、アラキドン酸およびガンマリノレン酸である。
【００１７】
多価不飽和脂肪酸の好ましい誘導体は、これらのエステル、例えば、グリセリド、特にトリグリセリドであり、特に好ましくは、エチルエステルである。ｎ−３およびｎ−６多価不飽和脂肪酸のトリグリセリドが特に好ましい。
【００１８】
トリグリセリドは、３つの同じ不飽和脂肪酸を含むものであってもよいし、または２もしくは３種の異なる不飽和脂肪酸を含むものであってもよい。これらはまた、一部に飽和脂肪酸を含むものであってもよい。
【００１９】
誘導体がトリグリセリドである場合、通常、３種の異なるｎ−３多価不飽和脂肪酸がグリセリンによってエステル化されている。本発明の好ましい一実施形態においては、脂肪酸部分の３０％がｎ−３脂肪酸であり、その２５％が長鎖多価不飽和脂肪酸であるトリグリセリドが使用される。さらなる好ましい実施形態においては、市販のロプファ（ＲＯＰＵＦＡ）（登録商標）‘３０’ｎ−３食用油（スイス国カイザーアウグスト（Ｋａｉｓｅｒａｕｇｓｔ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）のＤＳＭ・ニュートリショナル・プロダクツ・リミテッド（ＤＳＭ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｌｔｄ））が使用される。
【００２０】
本発明の他の好ましい実施形態においては、ＰＵＦＡエステルは、ロプファ（登録商標）’７５’ｎ−３ＥＥである。ロプファ’７５’ｎ−３ＥＥは、ｎ−３脂肪酸エチルエステルを７２％以上含むエチルエステル形態にある精製海産物油（ｍａｒｉｎｅ ｏｉｌ）である。これは混合トコフェロール、パルミチン酸アスコルビル、クエン酸で安定化されており、ローズマリー抽出物を含有するものである。
【００２１】
本発明の他の好ましい実施形態においては、ＰＵＦＡエステルはロプファ（登録商標）’１０’ｎ−６油であり、これは、ＤＬ−アルファ−トコフェロールおよびパルミチン酸アスコルビルで安定化された、ガンマリノレン酸を９％以上含む精製月見草油である。
【００２２】
本発明によれば、多価不飽和脂肪酸のトリグリセリドを含む天然油（１種またはそれ以上の成分）、例えば、海産物油（魚油）および／または植物油だけでなく、発酵させたバイオマスまたは遺伝子組み換え植物から抽出した油も有利に使用することができる。
【００２３】
多価不飽和脂肪酸のトリグリセリドを含む好ましい油は、オリーブ油、ヒマワリ種子油、月見草種子油、ボラージ油、ブドウ種子油、大豆油、落花生油、コムギ胚芽油、カボチャ種子油、クルミ油、ゴマ種子油、ナタネ油（カノーラ）、ブラックカラント種子油、キウイ種子油、特定の真菌由来の油、および魚油である。
【００２４】
多価不飽和脂肪酸の好ましい例は、例えば、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸等である。
【００２５】
本発明による好ましい親油性健康成分は、レスベラトロール；マルバトウキ属植物（ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ）；コエンザイムＱ１０（「ＣｏＱ１０」とも呼ばれる）、コエンザイムＱ９、および／もしくはこれらの還元形態（対応するユビキノール）から選択されるユビキノンおよび／もしくはユビキノール（１種またはそれ以上の成分）；ゲニステイン；ならびに／またはアルファ−リポ酸である。
【００２６】
本発明の特に好ましい脂溶性有効成分は、カロテノイド、特に、ベータ−カロテン、リコペン、ルテイン、ビキシン、アスタキサンチン、アポカロテナール、ベータ−アポ−８’−カロテナール、ベータ−アポ−１２’−カロテナール、カンタキサンチン、クリプトキサンチン、シトラナキサンチン、およびゼアキサンチンである。ベータ−カロテンが最も好ましい。
【００２７】
本発明の好ましい実施形態においては、組成物は、１種またはそれ以上の脂溶性有効成分を、組成物全体の乾物基準で０．１〜７０重量％、さらに好ましくは０．１〜３０重量％、さらに好ましくは０．５〜２０重量％、最も好ましくは０．５〜１５重量％含む。
【００２８】
本発明による好ましい「食品用途に好適な蛋白質」は、植物性蛋白質である。本明細書において用いられる「植物性蛋白質」という用語は、大豆、ルピナス（例えば、シロバナルーピン（Ｌ．ａｌｂｕｓ）、アオバナルーピン（Ｌ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓ）、またはこれらの変種）、エンドウ、および／またはジャガイモ由来の蛋白質を指す。蛋白質は、この植物の果実（例えば、大豆子実等）や種子（調製（ｐｒｅｐａｒｅｄ）または加工種子を含む）等の任意の部位から、または全粒粉もしくは脱脂製品（細断片やフレーク等）から単離したものであってもよい。
【００２９】
大豆蛋白質が特に好ましい。
【００３０】
本明細書において用いられる「多糖類」という用語には、ペクチン、デキストラン、セルロース、セルロース誘導体、マルトデキストリン、デンプン、および／または加工デンプン等の天然および変性多糖類が含まれる。
【００３１】
本明細書において用いられる「変性多糖類」という用語は、親油性部分、例えば、直鎖中に好ましくは炭素原子５〜１８個の鎖長を有する炭化水素部分を含む多糖類に関連する。好ましくは、変性多糖類は、ヒトが摂取可能なものであるべきであり、すなわち、好ましい変性多糖類は、ＧＲＡＳ（一般に安全と認められる）または世界中の様々な規制当局により食品として認可されたものであるべきである。好ましい変性多糖類は、食用加工デンプンである。
【００３２】
本明細書において用いられる「食用加工デンプン」という用語は、周知の化学的方法によりデンプンを疎水性部分で置換することによって作製された加工デンプンに関連する。例えば、アルキルまたはアルケニル炭化水素基で置換された無水コハク酸および／またはグルタル酸等の環状ジカルボン酸無水物でデンプンを処理してもよい。
【００３３】
好ましい加工デンプンは、オクテニルコハク酸デンプンナトリウム（「ＯＳＡデンプン」）である。ＯＳＡデンプンは、デンプン、マルトデキストリン、炭水化物、ガム、コーンシロップ等のさらなる親水コロイドと、場合により、脂肪酸のモノ−およびジグリセリド、脂肪酸のポリグリセロールエステル、レシチン、ソルビタンモノステアレート等の任意の典型的な乳化剤（コエマルゲーター（ｃｏ−ｅｍｕｌｇａｔｏｒ）として）、ならびに植物系繊維または糖とを含んでいてもよい。
【００３４】
ＯＳＡデンプンは、例えば、ナショナル・スターチ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｒｃｈ）からＨｉＣａｐ １００、Ｃａｐｓｕｌ、Ｃａｐｓｕｌ ＨＳ、Ｐｕｒｉｔｙ Ｇｕｍ ２０００、ＵＮＩ−ＰＵＲＥ、ＨＹＬＯＮ ＶＩＩの商品名で；ロケット・フレール（Ｒｏｑｕｅｔｔｅ Ｆｒｅｒｅｓ）から；ＣｅｒｅＳｔａｒからＣ＊ＥｍＣａｐの商品名で；またはＴａｔｅ ＆ Ｌｙｌｅから市販されている。
【００３５】
蛋白質対多糖の重量比は、ｂが５以上であるという条件下で、１：ｂのように選択することが好ましく、特に、ｂは、好ましくは５〜１５の範囲、より好ましくは８〜１５の範囲、最も好ましくは８〜１０の範囲から選択される。
【００３６】
本発明の特に好ましい実施形態においては、第１ステップとして、本発明による１種またはそれ以上の蛋白質および１種またはそれ以上の多糖類から蛋白質−多糖類複合体が形成される。
【００３７】
したがって、本発明はまた、以下のステップ：
Ｉ）蛋白質を水中に懸濁させるステップと、
ＩＩ）場合により、ステップＩ）の懸濁液から溶解していない蛋白質を除去するステップと、
ＩＩＩ）蛋白質対多糖類の重量比が１：５〜１：１５となるよう多糖類を混合するステップと、
ＩＶ）場合により、ステップＩＩＩ）の混合物を乾燥するステップと、
Ｖ）（乾燥した）混合物を適切な温度で好適な時間加熱することにより複合体を形成するステップと、
ＶＩ）ステップＶ）の複合体を適切な量の水中に分散させるステップと、
ＶＩＩ）１種またはそれ以上の脂溶性有効成分を含む有機相を複合体に添加するステップと、
ＶＩＩＩ）ステップＶＩＩ）の混合物を当業者に周知の従来の乳化法を用いて乳化するステップと、
ＩＸ）場合により、ステップＶＩＩＩ）のエマルジョンを乾燥するステップと
を含む上記組成物の製造方法にも関する（この方法は、本明細書に規定した量の成分を用いて実施してもよい）。
【００３８】
乾燥ステップは、当業者に周知の任意の従来の乾燥方法を用いて実施してもよく、噴霧乾燥および／またはパウダー・キャッチ法（ｐｏｗｄｅｒ ｃａｔｃｈ ｐｒｏｃｅｓｓ）（懸濁液を噴霧して液滴をデンプンもしくはケイ酸カルシウムもしくはケイ酸もしくは炭酸カルシウムまたはこれらの混合物等の吸収材の床に捕捉させた後、乾燥させる）が好ましい。
【００３９】
加熱ステップおよび／または任意的な乾燥ステップは、蛋白質および多糖類のメイラード型反応を誘発させることができる。
【００４０】
ステップＶ）の複合体は、そのままで使用してもよいし、または後で使用するために乾燥してもよい。
【００４１】
よりさらに好ましくは、本発明による組成物は、デキストリンやマルトデキストリン等の１種またはそれ以上のオリゴ糖、特にデキストロース当量（ＤＥ）が５〜６５の範囲にあるもの、およびブドウ糖液糖、特にＤＥが２０〜９５の範囲にあるものをさらに含む。「デキストロース当量」（ＤＥ）という用語は加水分解の程度を意味し、乾燥重量を基準としてＤ−グルコースとして計算される還元糖の量の指標であり、その尺度は、天然デンプンのＤＥがほぼ０であり、グルコースのＤＥが１００であることに基づいている。好ましくは、本発明による組成物にはマルトデキストリンが使用される。
【００４２】
本発明はまた、食品、飲料、動物飼料、および／または化粧料の補強、強化、および／または着色、好ましくは、飲料の補強、強化、および／または着色を行うための上述の組成物の使用も対象とする。
【００４３】
本発明の他の面は、上述の組成物を含む食品、飲料、動物飼料、化粧料である。
【００４４】
本発明の製品形態を着色剤または添加剤成分として使用することができる飲料は、炭酸飲料、例えば、フレーバー付けされた炭酸水、ソフトドリンク（ｓｏｆｔ ｄｒｉｎｋ）、またはミネラル飲料ならびに非炭酸飲料、例えば、フレーバードウォーター、果汁、フルーツパンチ（ｆｒｕｉｔ ｐｕｎｃｈ）、およびこれらの飲料の濃縮形態であってもよい。これらは天然の果汁もしくは野菜汁または人工の風味物質をベースとするものであってもよい。同様に、アルコール飲料および即席粉末飲料も包含される。糖分を含む飲料だけでなく、カロリーゼロおよび人工甘味料を含むダイエット飲料も包含される。
【００４５】
さらに、天然由来または合成の乳製品も、本発明の製品形態を着色剤または添加剤成分として使用することができる食品の範囲に含まれる。この種の製品の典型的な例は、乳飲料、アイスクリーム、チーズ、ヨーグルト等である。豆乳飲料や豆腐製品等の乳代用品も本用途の範囲に包含される。
【００４６】
本発明の製品形態を着色剤としてまたは添加剤成分として含む、砂糖を多く含む食品（ｓｗｅｅｔｓ）、例えば、菓子製品（ｃｏｎｆｅｃｔｉｏｎｅｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔ）、キャンディー、ガム、デザート類（例えば、アイスクリーム、ゼリー、プディング、プディング用ミックス粉（ｉｎｓｔａｎｔ ｐｕｄｄｉｎｇ ｐｏｗｄｅｒ）等）も包含される。
【００４７】
本発明の製品形態を着色剤としてまたは添加剤成分として含むシリアル、スナック、クッキー、パスタ、スープおよびソース、マヨネーズ、サラダドレッシング等も包含される。さらに、乳製品およびシリアルに使用される加工果実（ｆｒｕｉｔ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）も包含される。
【００４８】
本発明の組成物を介して食品に添加される１種またはそれ以上の脂溶性有効成分、好ましいカロテノイド、特にベータ−カロテンの最終濃度は、好ましくは、食品組成物の総重量を基準として０．１〜５０ｐｐｍ、特に１〜３０ｐｐｍ、より好ましくは３〜２０ｐｐｍ、例えば約６ｐｐｍであってもよく、着色または強化される具体的な食品および目的とする着色または強化の程度に依存する。
【００４９】
好ましくは、本発明の食品組成物は、脂溶性有効成分を本発明の組成物の形態で食品に添加することにより得られる。食品または医薬品を着色または強化する場合は、本発明の組成物を水分散性固体製品形態の適用に関しそれ自体周知の方法に従い用いることができる。
【００５０】
一般に、この組成物は、水性原液として、乾燥ミックス粉として、または具体的な用途に応じた他の好適な食品成分とのプレミックスとしてのいずれかで添加してもよい。混合は、最終用途の配合に応じて、例えば、乾燥粉体混合機、低剪断ミキサー、高圧ホモジナイザー、または高剪断ミキサーを用いて実施してもよい。この種の専門的方法が専門家の技能の範囲内であることは容易に理解されるであろう。
【００５１】
以下の実施例により本発明をさらに説明するが、これらに限定することを意図するものではない。
【００５２】
［実施例］
［材料］
大豆蛋白質は、蛋白質含有量が８８％（乾燥基準）であるＪｉｌｉｎ Ｆｕｊｉ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏ．Ｌｔｄ．からの（ソヤサワー（Ｓｏｙａｓｏｕｒ）４０００Ｋ、酸性可溶大豆蛋白質）を用いた。この等電点はｐＨ４．７前後である。
【００５３】
卵白アルブミン（グレードＶ）は、シグマ−アルドリッチ・コーポレーション（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）（ミズーリ州セントルイス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ））から得た。
【００５４】
デキストラン（６２ｋＤａ）は、ＧＥヘルスケア（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）（英国バッキンガムシャー（Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）の前アメルシャム・ファルマシア・バイオテック（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ））からの多糖類である。
【００５５】
Ｍａｌｔｒｉｎ ０４０は、グレイン・プロセシング・コーポレーション（Ｇｒａｉｎ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）（アイオワ州マスカティーン（Ｍｕｓｃａｔｉｎｅ，Ｉｏｗａ））から得た。Ｍａｌｔｒｉｎ ０４０は、デキストロース当量が４〜７の多糖類である。
【００５６】
［蛋白質−多糖類複合体の調製］
蛋白質−多糖類複合体は、固相または溶液状態で調製することができる。
【００５７】
［固相法］
蛋白質を適切なｐＨで水中に懸濁させた。溶解しなかった蛋白質を除去した（遠心分離を１００００ｒｐｍで１５分間）。可溶な蛋白質を適切な重量比（ＷＲ）で多糖類と混合し、混合物を（凍結乾燥により）乾燥した。乾燥した混合物を適切な温度および相対湿度（６０℃／７９％）で好適な時間加熱することにより複合体を形成した。
【００５８】
［溶液法］
蛋白質を適切なｐＨ（ｐＨ７または８）で水中に懸濁させた。溶解しなかった蛋白質を除去した（遠心分離を１００００ｒｐｍで１５分間）。可溶な蛋白質を適切な重量比（ＷＲ）で多糖類と混合し、適切な温度で好適な時間加熱することにより複合体を形成した。この複合体は、そのまま使用してもよいし、または後で使用するために乾燥して使用してもよい。
【００５９】
［エマルジョンの調製］
複合体溶液に適切な体積比（ＶＲ）でトウモロコシ油を添加した。ｐＨを調整した後、混合物をホモジナイザー（ＦＪ２００−Ｓ、中国（Ｃｈｉｎａ）のＳｈａｎｇｈａｉ Ｓｐｅｃｉｍｅｎ Ｍｏｄｅｌ Ｃｏ．）を用いて１００００ｒｐｍで１分間室温で予備乳化した後、すぐに超音波処理（Ｓｃｉｅｎｔｚ−ＩＩＤ、中国寧波（Ｎｉｎｇｂｏ，Ｃｈｉｎａ）のＳｃｉｅｎｔｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）を用いて出力４５０Ｗで６分間（２．５秒間運転／２秒間停止）室温で乳化した。
【００６０】
［粒度測定］
動的光散乱（ＤＬＳ）測定には毎回希釈直後のエマルジョン試料を使用した。測定は、マルチτデジタル時間相関器（マルバーン（Ｍａｌｖｅｒｎ）ＰＣＳ７１３２）および固体レーザー（コヒーレント・インコーポレーテッド（Ｃｏｈｅｒｅｎｔ Ｉｎｃ．）のコンパス（Ｃｏｍｐａｓｓ）３１５Ｍ−１００、出力約１００ｍＷ、λ＝５３２ｎｍ）を備えたマルバーン・オートサイザー（Ｍａｌｖｅｒｎ Ａｕｔｏｓｉｚｅｒ）４７００（英国ウスターシャー州（Ｗｏｒｃｓ，ＵＫ）のマルバーン・インストゥルメンツ（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて実施した。測定は散乱角を９０°に固定して２５℃で実施した。測定された時間相関関数を、相関器を取り付けたＡｕｔｏｍａｔｉｃ Ｐｒｏｇｒａｍで解析した。ＣＯＮＴＩＮモード解析により粒度（ｚ平均流体力学的直径）を得た。２つのバッチの試料について測定を行い、データの平均値を報告した。
【００６１】
［等電点近傍におけるエマルジョンの析出の抑制］
［実施例１］
［蛋白質対多糖類の重量比が１：９の場合の様々なｐＨにおけるエマルジョン安定性］
大豆蛋白質をｐＨ８で水中に分散させ（２２ｍｇ／ｍＬ）、室温で１５分間遠心（１００００ｒｐｍ）した。ｐＨ８．２における不溶な蛋白質の割合は１０％未満であった。上清を、蛋白質対デキストランの重量比が１：９（ＷＲ１：９）となるようにデキストランと混合した。溶液のｐＨを８に調整した後、溶液を凍結乾燥した。乾燥粉末の一部を取り分けて（混合物）他の部分を６０℃、相対湿度７９％で３日間加熱することにより複合体を形成した。
【００６２】
トウモロコシ油（２．５ｍｌ）を混合物または複合体の溶液（１０ｍｌ；１５ｍｇ蛋白質／ｍｌ）に添加した。油対複合体溶液の体積比（ＶＲ）を１：４とした。ホモジナイザーを用いて溶液を１００００ｒｐｍで１分間室温で予備乳化した後、すぐに超音波処理を用いて出力４５０Ｗで６分間（運転２．５秒間／停止２秒間）室温で乳化した。エマルジョンのｐＨを様々な値に調節した後、粒度を測定した。
【００６３】
【表１】
【００６４】
混合物から調製されたエマルジョンは、ｐＨ４、５、および６において蛋白質の析出物が生じたが、複合体から調製されたものには生じなかった。ＷＲ１：９の混合物から調製されたエマルジョンの安定性またはエマルジョンの粒度はｐＨ依存性を示したが、その一方で、複合体からのエマルジョンの安定性およびエマルジョンの粒度は有意なｐＨ依存性を示さなかった。
【００６５】
［実施例２］
［蛋白質対デキストランの重量比が１：１〜１：３の場合の様々なｐＨ値におけるエマルジョン安定性］
重量比１：１、１：２、および１：３の酸性可溶大豆蛋白質およびデキストランから混合物および複合体を調製した。溶液のｐＨを７または８に調整した後、溶液を凍結乾燥した。乾燥粉末の一部を取り分けて（混合物）、それ以外の部分を６０℃、相対湿度７９％で３、９、１２時間加熱することによりＷＲ１：１、１：２、および１：３の複合体をそれぞれ形成した。
【００６６】
トウモロコシ油（３．３３３ｍｌ）を物理的混合物または複合体の溶液（１０ｍｌ；２０ｍｇ蛋白質／ｍｌ）に添加した。油対複合体溶液の体積比（ＶＲ）を１：３とした。混合物および複合体溶液の蛋白質濃度を２０ｍｇ／ｍｌとした。溶液をホモジナイザーを用いて予備乳化した後、すぐに超音波処理を施した。エマルジョンのｐＨを様々な値（ｐＨ３、４、５、６、および７）に調節した後、粒度を測定した。
【００６７】
【表２】
【００６８】
混合物または複合体から調製されたすべてのエマルジョンがｐＨ依存性を示した。複合体（ＷＲ１：１〜ＷＲ１：３）からのエマルジョンは等電点近傍のｐＨにおいて不安定であった。大豆蛋白質（ｐＨ４．７）の等電点に近いｐＨ４および５においては、混合物および複合体からのエマルジョンに析出物が観察された。
【００６９】
［実施例３］
［蛋白質／デキストラン複合体（ＷＲ１：１２）のエマルジョンの様々なｐＨ値における安定性］
重量比が１：１２の蛋白質およびデキストランを一緒に水中に溶解させた。蛋白質の濃度を１５ｍｇ／ｍｌとした。混合物のｐＨを８．３０に調整した後、凍結乾燥した。凍結乾燥した粉末の一部を取り分けて（混合物）、それ以外の部分を６０℃、相対湿度７９％で４日間処理することによって複合体を形成した。
【００７０】
蛋白質濃度が１５ｍｇ／ｍｌに到達するように複合体を水中に溶解させた。蛋白質対デキストランの重量比が１：１２である蛋白質／デキストランの物理的混合物および複合体から、水溶液の体積を１０ｍｌとし、トウモロコシ油を２．５ｍｌとしてエマルジョンを調製した。この溶液をホモジナイザーを用いて予備乳化した後、すぐに超音波処理を施した。
【００７１】
【表３】
【００７２】
混合物または複合体から調製されたエマルジョンはいずれもｐＨ依存性を示した。しかしながら、複合化の効果を依然として観察することができた。混合物の試料と比較すると、複合体の試料は粒度がより小さく、これは、蛋白質の凝集の程度が低いことを示している。大豆蛋白質の場合、１：９の複合体から調製されたエマルジョンが最も安定性が高かった。
【００７３】
［複合体のエマルジョンの高イオン強度に対する耐性］
［実施例４］
［複合体のエマルジョンの安定性に対する様々なイオン強度の影響（乳化前にＮａＣｌを添加）］
混合物をそれぞれ５０時間および７２時間加熱処理することにより複合体試料（ＷＲ１：６およびＷＲ１：９）を調製した。
【００７４】
混合物または複合体溶液を１０ｍｌおよび油（ＷＲ１：６には油３．３ｍｌ、ＷＲ１：９には油２．５ｍｌ）を用いて、ＷＲ１：６および１：９の物理的混合物または複合体から様々なイオン強度（ＮａＣｌを０．０５Ｍ、０．１０Ｍ、および０．２Ｍ）のエマルジョンをｐＨ８．０で調製した。ＷＲ１：６については蛋白質の濃度を２０ｍｇ／ｍｌとし、ＷＲ１：９については１５ｍｇ／ｍｌとした。粒度測定を行うためにｐＨおよびＮａＣｌ濃度の等しい溶液でエマルジョンを希釈した。
【００７５】
【表４】
【００７６】
ＷＲ１：６および１：９の物理的混合物の場合、ＮａＣｌ濃度が０．０５Ｍでは析出物は生じなかった。さらにＮａＣｌを０．１Ｍに上昇させると析出物が生じた。３種の複合体溶液の場合は、ＮａＣｌ濃度が０．０５、０．１０、および０．２０Ｍでも有意な析出は起こらなかった。
【００７７】
［実施例５］
［大豆蛋白質／デキストラン複合体のエマルジョンの安定性に対する様々なイオン強度の影響（乳化後にＮａＣｌを添加）］
混合物をそれぞれ５０時間および７２時間加熱処理することにより複合体の試料（ＷＲ１：６およびＷＲ１：９）を調製した。
【００７８】
混合物または複合体溶液を１０ｍｌおよび油（ＷＲ１：６には油を３．３ｍｌ、ＷＲ１：９には油を２．５ｍｌ）を用いて、ＷＲ１：６および１：９混合物または複合体からエマルジョンをｐＨ８．０で調製した。ＷＲ１：６については蛋白質の濃度を２０ｍｇ／ｍｌとし、ＷＲ１：９については１５ｍｇ／ｍｌとした。ＤＬＳ試料用として、ｐＨ８でエマルジョンを希釈することにより様々なイオン強度（ＮａＣｌ：０Ｍ、０．０５Ｍ、０．１０Ｍ、０．２０Ｍ）にした。
【００７９】
【表５】
【００８０】
物理的混合物から調製された試料ではＮａＣｌが０．０５Ｍという低いイオン強度で析出物が生じた一方で、複合体試料においてはＮａＣｌが０．２０Ｍという高いイオン強度でも有意な析出は観察されなかった。実施例５および６は、複合体（ＷＲ１：９およびＷＲ１：６）から調製されたエマルジョンが塩に対する耐性が高いことを示している。
【００８１】
［実施例６］
［複合体から調製されたエマルジョンのＮａＣｌの存在下における長期安定性］
ＷＲ１：９の複合体溶液を１０ｍｌおよび油を２．５ｍｌを用いてｐＨ８．０でエマルジョンを調製した。複合体溶液中の蛋白質濃度を１５ｍｇ／ｍｌとした。初期および４℃で４ヵ月貯蔵した後のエマルジョン滴の粒度を測定した。
【００８２】
【表６】
【００８３】
４ヵ月後の粒度の変化が小さいことは、複合体のエマルジョンの塩に対する耐性が高いことを示している。
【００８４】
［実施例７］
［卵白アルブミン／デキストラン複合体の調製およびそのエマルジョンの様々なｐＨ値における安定性］
卵白アルブミン（ｏｖａ）およびデキストランを重量比１：１０で一緒に水中に溶解した。ｏｖａ濃度を１５ｍｇ／ｍｌとした。混合物のｐＨを７．２５に調整した後、凍結乾燥した。凍結乾燥した粉末を６０℃、相対湿度７９％で４８時間反応させることにより卵白アルブミン−デキストラン複合体を調製した。ｏｖａ濃度が１５ｍｇ／ｍｌに到達するように複合体を水に溶解した。
【００８５】
蛋白質濃度を１５ｍｇ／ｍｌ、蛋白質対デキストランの重量比を１：１０、水溶液の体積を１０ｍｌ、トウモロコシ油を２．５ｍｌとして、ｏｖａ、ｏｖａ／デキストラン物理的混合物、およびｏｖａ−デキストラン複合体からエマルジョンを調製した。混合物をホモジナイザーを用いて予備乳化した後、すぐに超音波処理を施した。
【００８６】
ｏｖａまたはｏｖａ／デキストラン物理的混合物から調製されたエマルジョンは不安定であり、貯蔵後にクリームおよび漿液（ｓｅｒｕｍ）が生じた。複合体から調製されたエマルジョンは安定であった。エマルジョンを異なるｐＨに調節した後、粒度を測定した。この結果から、ｏｖａ／デキストラン複合体からのエマルジョンはｐＨ変化の影響を受けておらず、したがって、ｏｖａ／デキストラン複合体がエマルジョン調製に好適であることがわかる。
【００８７】
【表７】
【００８８】
［実施例８］
［大豆蛋白質／Ｍａｌｔｒｉｎ複合体の調製およびそのエマルジョンの様々なｐＨ値における安定性］
蛋白質およびＭａｌｔｒｉｎ ０４０を重量比１：９で一緒に水中に溶解した。蛋白質濃度を１５ｍｇ／ｍｌとした。Ｍａｌｔｒｉｎ ０４０はこの濃度では十分に溶解しない。混合物のｐＨを８．３０に調整した後、凍結乾燥した。凍結乾燥した粉末を６０℃、相対湿度７９％で３日間反応させることにより蛋白質−Ｍａｌｔｒｉｎ複合体を調製した。複合体を水中に１日間かけて溶解させた。蛋白質濃度が１５ｍｇ／ｍｌの場合、反応生成物を完全に溶解させることができなかった。
【００８９】
蛋白質濃度を１５ｍｇ／ｍｌとし、蛋白質対Ｍａｌｔｒｉｎの重量比を１：９、水溶液の体積を１０ｍｌ、トウモロコシ油を２．５ｍｌとして、蛋白質／Ｍａｌｔｒｉｎの物理的混合物および蛋白質−Ｍａｌｔｒｉｎ複合体からエマルジョンを調製した。混合物をホモジナイザーを用いて予備乳化した後、すぐに超音波処理を施した。
【００９０】
エマルジョンのｐＨを様々な値に調節した。希釈後に粒度を測定した。
【００９１】
【表８】
【００９２】
図１に、大豆蛋白質、大豆蛋白質／デキストラン混合物（ＷＲ１：９）、大豆蛋白質／デキストラン複合体（ＷＲ１：３およびＷＲ１：９）のゼータ電位を示す。
【００９３】
上述したように調製したエマルジョンのｐＨを様々な値に調節した後、５ｍＭのＮａＣｌを含むｐＨの等しい溶液で希釈して、蛋白質濃度が０．０３７５ｍｇ／ｍＬとなるようにした。ゼータサイザーナノ（Ｚｅｔａ Ｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ）ＺＳ９０（英国ウスターシャー州のマルバーン・インストゥルメント（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ））を用いて試料のゼータ電位を測定した。
【００９４】
【表９】
【００９５】
ゼータ電位は、巨大分子および粒子の表面の実効電荷と直接関係している。ゼータ電位の結果は、混合物から調製されたエマルジョンの構造が複合体から調製されたエマルジョンの構造とは異なることを示している。この結果は、混合物中のデキストランがエマルジョン構造に影響を与えず、したがって、蛋白質が単独である場合と同様に、正電荷と負電荷がほぼ等しく電荷間の引力が最大になるｐＨ４．７付近でエマルジョン粒子が凝集することを示している。複合体のエマルジョンはｐＨおよびイオン強度により影響されにくい。これらは主として表面の多糖類の立体障害によって安定化されているようである。
【００９６】
［実施例９］
大豆蛋白質をｐＨ８で水（２２ｍｇ／ｍＬ）中に分散させ、室温で１５分間遠心（１００００ｒｐｍ）した。ｐＨ８．２における不溶な蛋白質の割合は１０％未満であった。上清を、蛋白質対デキストランの重量比が１：９（ＷＲ１：９）となるようにデキストランと混合した。溶液のｐＨを８．０に調整した後、溶液を凍結乾燥した。乾燥粉末の一部を取り分けて（混合物）、それ以外の部分を６０℃、相対湿度７９％で３日間加熱することにより複合体を形成した。
【００９７】
ビタミンＥ油（２．５ｍｌ）を蛋白質溶液または混合物もしくは複合体溶液（１０ｍｌ；１５ｍｇ蛋白質／ｍｌ）に添加した。油対水溶液の体積比（ＶＲ）を１：４とした。溶液をホモジナイザーを用いて１００００ｒｐｍで１分間室温で予備乳化した後、すぐに超音波処理を用いて出力４５０Ｗで６分間（運転２．５秒間／停止２秒間）室温で乳化した。エマルジョンを様々なｐＨに調節した後、粒度を測定した。
【００９８】
【表１０】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）１種またはそれ以上の脂溶性有効成分、
ｂ）食品用途に好適な蛋白質の群から選択される１種またはそれ以上の蛋白質、および
ｃ）１種またはそれ以上の多糖類
を含み、蛋白質対多糖類の重量比が、ｂが５以上であるという条件下で、１：ｂのように選択される、組成物。
【請求項２】
前記脂溶性有効成分（１種またはそれ以上の化合物）が、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、およびこれらの誘導体；多価不飽和脂肪酸；親油性健康成分；カロテノイド；および風味または香気物質ならびにこれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
脂溶性有効成分（１種またはそれ以上の化合物）が、カロテノイド、特に、ベータ−カロテン、リコペン、ルテイン、ビキシン、アスタキサンチン、アポカロテナール、ベータ−アポ−８’−カロテナール、ベータ−アポ−１２’−カロテナール、カンタキサンチン、クリプトキサンチン、シトラナキサンチン、および／またはゼアキサンチンであることを特徴とする、請求項１または２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４】
前記親油性健康成分（１種またはそれ以上の化合物）が、レスベラトロール；マルバトウキ属植物；ユビキノンおよび／またはユビキノール（１種またはそれ以上の化合物）、好ましいコエンザイムＱ１０、コエンザイムＱ９、および／またはこれらの還元形態（対応するユビキノール）；ゲニステイン；ならびにアルファ−リポ酸からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記蛋白質が、大豆蛋白質、ルピナス蛋白質、エンドウ蛋白質、およびジャガイモ蛋白質からなる群から選択される植物性蛋白質（１種またはそれ以上の化合物）であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記植物性蛋白質が、大豆蛋白質であることを特徴とする、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物の製造方法であって、以下のステップ：
Ｉ）前記蛋白質を水中に懸濁させるステップと、
ＩＩ）場合により、ステップＩ）の懸濁液から溶解していない蛋白質を除去するステップと、
ＩＩＩ）蛋白質対多糖類の重量比が１：５〜１：１５となるよう前記多糖類を混合するステップと、
ＩＶ）場合により、ステップＩＩＩ）の混合物を乾燥するステップと、
Ｖ）前記（乾燥した）混合物を適切な温度で好適な時間加熱することにより複合体を形成するステップと、
ＶＩ）ステップＶ）の複合体を適切な量の水中に分散させるステップと、
ＶＩＩ）前記１種またはそれ以上の脂溶性有効成分を含む有機相を前記複合体に添加するステップと、
ＶＩＩＩ）ステップＶＩＩ）の混合物を当業者に周知の従来の乳化法を用いて乳化するステップと、
ＩＸ）場合により、ステップＶＩＩＩ）のエマルジョンを乾燥するステップと
を含む方法。
【請求項８】
蛋白質−多糖類複合体の製造方法であって、以下のステップ：
Ｉ）蛋白質を水中に懸濁させるステップと、
ＩＩ）場合により、ステップＩ）の懸濁液から溶解していない蛋白質を除去するステップと、
ＩＩＩ）蛋白質対多糖類の重量比が１：５〜１：１５となるように多糖類を混合するステップと、
ＩＶ）場合により、ＩＩＩ）の混合物を乾燥するステップと、
Ｖ）前記（乾燥した）混合物を適切な温度で好適な時間加熱することにより複合体を形成するステップと
を含む、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法によって得ることができる蛋白質−多糖類複合体。
【請求項１】
ａ）１種またはそれ以上の脂溶性有効成分、
ｂ）食品用途に好適な蛋白質の群から選択される１種またはそれ以上の蛋白質、および
ｃ）１種またはそれ以上の多糖類
を含み、蛋白質対多糖類の重量比が、ｂが５以上であるという条件下で、１：ｂのように選択される、組成物。
【請求項２】
前記脂溶性有効成分（１種またはそれ以上の化合物）が、ビタミンＡ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、およびこれらの誘導体；多価不飽和脂肪酸；親油性健康成分；カロテノイド；および風味または香気物質ならびにこれらの混合物からなる群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
脂溶性有効成分（１種またはそれ以上の化合物）が、カロテノイド、特に、ベータ−カロテン、リコペン、ルテイン、ビキシン、アスタキサンチン、アポカロテナール、ベータ−アポ−８’−カロテナール、ベータ−アポ−１２’−カロテナール、カンタキサンチン、クリプトキサンチン、シトラナキサンチン、および／またはゼアキサンチンであることを特徴とする、請求項１または２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４】
前記親油性健康成分（１種またはそれ以上の化合物）が、レスベラトロール；マルバトウキ属植物；ユビキノンおよび／またはユビキノール（１種またはそれ以上の化合物）、好ましいコエンザイムＱ１０、コエンザイムＱ９、および／またはこれらの還元形態（対応するユビキノール）；ゲニステイン；ならびにアルファ−リポ酸からなる群から選択されることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
前記蛋白質が、大豆蛋白質、ルピナス蛋白質、エンドウ蛋白質、およびジャガイモ蛋白質からなる群から選択される植物性蛋白質（１種またはそれ以上の化合物）であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記植物性蛋白質が、大豆蛋白質であることを特徴とする、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物の製造方法であって、以下のステップ：
Ｉ）前記蛋白質を水中に懸濁させるステップと、
ＩＩ）場合により、ステップＩ）の懸濁液から溶解していない蛋白質を除去するステップと、
ＩＩＩ）蛋白質対多糖類の重量比が１：５〜１：１５となるよう前記多糖類を混合するステップと、
ＩＶ）場合により、ステップＩＩＩ）の混合物を乾燥するステップと、
Ｖ）前記（乾燥した）混合物を適切な温度で好適な時間加熱することにより複合体を形成するステップと、
ＶＩ）ステップＶ）の複合体を適切な量の水中に分散させるステップと、
ＶＩＩ）前記１種またはそれ以上の脂溶性有効成分を含む有機相を前記複合体に添加するステップと、
ＶＩＩＩ）ステップＶＩＩ）の混合物を当業者に周知の従来の乳化法を用いて乳化するステップと、
ＩＸ）場合により、ステップＶＩＩＩ）のエマルジョンを乾燥するステップと
を含む方法。
【請求項８】
蛋白質−多糖類複合体の製造方法であって、以下のステップ：
Ｉ）蛋白質を水中に懸濁させるステップと、
ＩＩ）場合により、ステップＩ）の懸濁液から溶解していない蛋白質を除去するステップと、
ＩＩＩ）蛋白質対多糖類の重量比が１：５〜１：１５となるように多糖類を混合するステップと、
ＩＶ）場合により、ＩＩＩ）の混合物を乾燥するステップと、
Ｖ）前記（乾燥した）混合物を適切な温度で好適な時間加熱することにより複合体を形成するステップと
を含む、方法。
【請求項９】
請求項８に記載の方法によって得ることができる蛋白質−多糖類複合体。
【図１】
【公開番号】特開２０１０−１９３８９０（Ｐ２０１０−１９３８９０Ａ）
【公開日】平成２２年９月９日（２０１０．９．９）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１０−４１７１７（Ｐ２０１０−４１７１７）
【出願日】平成２２年２月２６日（２０１０．２．２６）
【出願人】（５０３２２０３９２）ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． (873)
【出願人】（５０９０２５６７０）フダン ユニバーシティー (5)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月９日（２０１０．９．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−４１７１７（Ｐ２０１０−４１７１７）
【出願日】平成２２年２月２６日（２０１０．２．２６）
【出願人】（５０３２２０３９２）ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． (873)
【出願人】（５０９０２５６７０）フダン ユニバーシティー (5)
【Ｆターム（参考）】
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