（１）供試化合物が、ＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性を修飾する、例えば促進するかどうかを判定する工程、および（２）ＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性を修飾する、例えば促進する化合物を選択する工程を含む、細胞内のＡＭＰＫ（ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ）またはＡＭＰＫサブファミリーメンバーの活性化またはリン酸化を修飾する、例えば促進する際に使用するための化合物を同定する方法。プロテインキナーゼの活性は、ＡＭＰＫもしくはＡＭＰＫサブファミリーメンバー、またはＡＭＰＫもしくはＡＭＰＫサブファミリーメンバーのＴ−ループ領域を包むペプチドを使用して、試験することができる。ＬＫＢ１は、調製物の中にあってもよいし、ＳＴＲＡＤおよび／またはＭＯ２５との複合体（これは、これらの補助タンパク質非存在下でのＬＫＢ１よりずっと大きなキナーゼ活性を有する）の中にあってもよい。ＬＫＢ１、ＳＴＲＡＤまたはＭＯ２５は組換え体であってもよい。ＡＭＰＫサブファミリーメンバーは、ＡＭＰＫα１、ＡＭＰＫα２、ＮＵＡＫ１、ＮＵＡＫ２、ＢＲＳＫ１、ＢＲＳＫ２、ＳＩＫ、ＱＩＫ、ＱＳＫ、ＭＡＲＫ１、ＭＡＲＫ２、ＭＡＲＫ３、ＭＡＲＫ４またはＭＥＬＫであり得る。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞内のＡＭＰＫ（ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ）またはＡＭＰＫサブファミリーメンバーの活性化またはリン酸化を修飾する、例えば促進する際に使用するための化合物を同定する方法であって、
（１）供試化合物が、ＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性を修飾する、例えば促進するかどうかを判定する工程と、
（２）ＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性を修飾する、例えば促進する化合物を選択する工程とを含む、方法。
【請求項２】
前記ＬＫＢ１が、ＳＴＲＡＤおよび／またはＭＯ２５とともに調製物の中にある、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＬＫＢ１、ＳＴＲＡＤまたはＭＯ２５が、組換え体である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＬＫＢ１、ＳＴＲＤおよび組換えＭＯ２５を含む精製調製物。
【請求項５】
組換えＬＫＢ１を含む、請求項５に記載の調製物。
【請求項６】
組換えＳＴＲＡＤを含む、請求項４または５に記載の調製物。
【請求項７】
ＬＫＢ１、ＳＴＲＡＤ、および過剰発現または組換えＭＯ２５を発現することができる細胞。
【請求項８】
ＭＯ２５をコードする組換え核酸を含む、請求項７に記載の細胞。
【請求項９】
ＬＫＢ１をコードする組換え核酸を含む、請求項７または８に記載の細胞。
【請求項１０】
ＳＴＲＡＤをコードする組換え核酸を含む、請求項７から９のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１１】
ＬＫＢ１、ＳＴＲＡＤおよび過剰発現または組換えＭＯ２５を含む細胞。
【請求項１２】
組換えＬＫＢ１を含む、請求項１１に記載の細胞。
【請求項１３】
組換えＳＴＲＡＤを含む、請求項１１または１２に記載の細胞。
【請求項１４】
請求項７から１０のいずれか一項に記載の細胞である、請求項１１から１３のいずれか一項に記載の細胞。
【請求項１５】
請求項３から６のいずれか一項に記載の調製物を製造するための方法であって、請求項１１から１４のいずれか一項に記載の細胞から前記調製物を精製する工程を含む方法。
【請求項１６】
請求項１５の方法によって取得可能な調製物。
【請求項１７】
ＬＫＢ１：ＳＴＲＡＤ：ＭＯ２５の比率が、１：１：１である、請求項３から６及び１６のいずれか一項に記載の調製物。
【請求項１８】
前記ＬＫＢ１が、請求項３から６もしくは１７のいずれか一項に記載の調製物、または請求項１５の方法によって得られたもしくは取得可能な調製物、または請求項７から１４のいずれか一項に記載の細胞の中にある、請求項１、２または３に記載の方法。
【請求項１９】
調製物が、ＬＫＢ１、ＳＴＲＡＤおよびＭＯ２５を含む複合体を含む、請求項１から６及び１５から１８のいずれか一項に記載の調製物または方法。
【請求項２０】
細胞内ＬＫＢ１活性を修飾するための化合物を同定する方法であって、
（１）供試化合物が、請求項３から６、１６、１７及び１９のいずれか一項に記載の調製物もしくは複合体の、または請求項７から１４のいずれか一項に記載の細胞内の、ＬＫＢ１のプロテインキナーゼ活性を修飾するかどうかを判定する工程と、
（２）前記ＬＫＢ１プロテインキナーゼ活性を修飾する化合物を選択する工程とを含む、方法。
【請求項２１】
前記ＬＫＢ１プロテインキナーゼ活性が、ＡＭＰＫもしくはＡＭＰＫサブファミリーメンバーまたはそれらいずれかの断片を基質として使用して測定される、請求項１または請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
ＬＫＢ１またはＬＫＢ１をコードする組換えポリヌクレオチド、ＳＴＲＡＤまたはＳＴＲＡＤをコードする組換えポリヌクレオチド、およびＭＯ２５またはＭＯ２５をコードする組換えポリヌクレオチドを含む、キット。
【請求項２３】
（１）ＡＭＰＫまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバー、あるいはＡＭＰＫもしくはＡＭＰＫサブファミリーメンバーまたはそれらの断片をコードする組換えポリヌクレオチドと、
（２）請求項２２に記載のキットまたは請求項３から６、１６、１７もしくは１９請求項１９のいずれか一項に記載の調製物もしくは複合体、または請求項７から１４のいずか一項に記載の細胞とを含む、キット。
【請求項２４】
（１）その細胞型がＳＴＲＡＤおよび／またはＭＯ２５を発現するものであるかどうかを判定する工程を含む、ＬＫＢ１を過剰発現させるための細胞型を選択する工程と、
（２）その選択された細胞型においてＬＫＢ１を過剰発現させる工程とを含む、ＬＫＢ１を過剰発現させる方法。
【請求項２５】
（１）請求項２４に記載の方法を用いて細胞内でＬＫＢ１を過剰発現させる工程と、
（２）その細胞からＬＫＢ１を調製する工程とを含む、ＬＫＢ１を調製する方法。
【請求項２６】
ＭＯ２５についての推定結合パートナーを同定する方法であって、（１）供試推定結合パートナーの少なくともＣ末端３アミノ酸のアミノ酸配列を提供する工程と、（２）Ｃ末端アミノ酸配列Ｔｒｐ−Ｇｌｕ／Ａｓｐ−Ｐｈｅを有する推定結合パートナーを選択する工程とを含む、方法。
【請求項２７】
選択された前記推定結合パートナーがＭＯ２５に結合することを判定する工程をさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＰＪＳ（ポイツ−ジェガース症候群）に関連した遺伝子差を同定する方法であって、
（１）ＰＪＳに罹患している少なくとも１人の患者においてＳＴＲＡＤまたはＭＯ２５アイソフォームをコードする遺伝子の配列を調査する工程と、
（２）前記患者での配列とＰＪＳに罹患していない個体からの同等の配列との間の差を同定する工程とを含む、方法。
【請求項２９】
請求項２８に記載の方法によってＰＪＳに関連したものとして同定された遺伝子差を、供試個体が有するかどうかを判定する工程を含む、個体がＰＪＳに罹患しやすいかどうかを判定する方法。
【請求項３０】
メトホルミンまたはフェンホルミンまたはＡＩＣＡリボシドに類似したメカニズムによってＡＭＰＫまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバーを活性化する化合物を同定する方法であって、請求項３から６、１６、１７及び１９のいずれか一項に記載の調製物もしくは複合体または請求項７から１４のいずれか一項に記載の細胞によるＡＭＰＫまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバーの活性化に対する供試化合物の作用を、ＡＭＰＫまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバーの活性化に対するメトフォルミンまたはフェンホルミンまたはＡＩＣＡリボシドの作用と比較し、類似した作用を有する化合物を選択する方法。
【請求項３１】
糖尿病または肥満を治療するための医薬品の製造における、ＡＭＰＫサブファミリーメンバーまたはＡＭＰＫサブファミリーメンバーをコードするポリヌクレオチドの使用。
【請求項３２】
ＡＭＰＫサブファミリーメンバーが、ＡＭＰＫα１またはＡＭＰＫα２ポリペプチドであるか、ＡＭＰＫα１またはＡＭＰＫα２ポリペプチドを含む、請求項１、２１及び３０のうちのいずれか一項に記載の方法、請求項２３に記載のキット、または請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
ＡＭＰＫサブファミリーメンバーが、ＮＵＡＫ１、ＮＵＡＫ２、ＢＲＳＫ１、ＢＲＳＫ２、ＳＩＫ、ＱＩＫ、ＱＳＫ、ＭＡＲＫ１、ＭＡＲＫ２、ＭＡＲＫ３、ＭＡＲＫ４またはＭＥＬＫポリペプチドであるか、ＮＵＡＫ１、ＮＵＡＫ２、ＢＲＳＫ１、ＢＲＳＫ２、ＳＩＫ、ＱＩＫ、ＱＳＫ、ＭＡＲＫ１、ＭＡＲＫ２、ＭＡＲＫ３、ＭＡＲＫ４またはＭＥＬＫポリペプチドを含む、請求項１、２１及び３０のいずれか一項に記載の方法、請求項２３に記載のキット、または請求項３１に記載の使用。
【請求項３４】
アミノ酸配列ＬＳＮＬＹＨＱＧＫＦＬＱＴＦＣＧＳＰＬＹもしくはＦＧＮＦＹＫＳＧＥＰＬＳＴＷＣＧＳＰＰＹもしくはＬＳＮＭＭＳＤＧＥＦＬＲＴＳＣＧＳＰＮＹもしくはＭＡＳＬＱＶＧＤＳＬＬＥＴＳＣＧＳＰＨＹもしくはＦＳＮＥＦＴＶＧＧＫＬＤＴＦＣＧＳＰＰＹもしくはＡＫＰＫＧＮＫＤＹＨＬＱＴＣＣＧＳＬＡＹ；または下線が引かれている残基以外のいずれかの位置で一から四置換されている、および／もしくは下線が引かれている残基で保存的置換されている前記配列；または下線が引かれている残基を含む前記配列の少なくとも１０隣接残基を含む、ＬＫＢ１に対するペプチド基質。
【請求項３５】
アミノ酸配列ＬＳＮＬＹＨＱＧＫＦＬＱＴＦＣＧＳＰＬＹまたはＬＳＮＬＹＨＱＧＫＦＬＱＴＦＣＧＳＰＬＹＲＲＲまたはＳＮＬＹＨＱＧＫＦＬＱＴＦＣＧＳＰＬＹまたはＳＮＬＹＨＱＧＫＦＬＱＴＦＣＧＳＰＬＹＲＲＲまたはＬＳＮＬＹＨＱＧＫＦＬＱＴＦＣＧＳＰＬＹまたはＬＳＮＬＹＨＱＧＫＦＬＱＴＦＣＧＳＰＬＹＲＲＲまたはＦＧＮＦＹＫＳＧＥＰＬＳＴＷＣＧＳＰＰＹまたはＦＧＮＦＹＫＳＧＥＰＬＳＴＷＣＧＳＰＰＹＲＲＲまたはＬＳＮＭＭＳＤＧＥＦＬＲＴＳＣＧＳＰＮＹまたはＬＳＮＭＭＳＤＧＥＦＬＲＴＳＣＧＳＰＮＹＲＲＲまたはＭＡＳＬＱＶＧＤＳＬＬＥＴＳＣＧＳＰＨＹまたはＭＡＳＬＱＶＧＤＳＬＬＥＴＳＣＧＳＰＨＹＲＲＲまたはＦＳＮＥＦＴＶＧＧＫＬＤＴＦＣＧＳＰＰＹまたはＦＳＮＥＦＴＶＧＧＫＬＤＴＦＣＧＳＰＰＹＲＲＲまたはＡＫＰＫＧＮＫＤＹＨＬＱＴＣＣＧＳＬＡＹまたはＡＫＰＫＧＮＫＤＹＨＬＱＴＣＣＧＳＬＡＹＲＲＲのみからなる、ＬＫＢ１に対するペプチド基質。
【請求項３６】
アミノ酸配列ＭＶＡＧＬＴＬＧＫＧＰＥＳＰＤＧＤＶＳ（ヒトＢＲＳＫ１の残基１〜２０）、ＬＳＷＧＡＧＬＫＧＱＫＶＡＴＳＹＥＳＳＬ（ヒトＢＲＳＫ２の残基６５５〜６７４）、ＭＥＧＡＡＡＰＶＡＧＤＲＰＤＬＧＬＧＡＰＧ（ヒトＮＵＡＫ１の残基１〜２１）、ＴＤＣＱＥＶＴＡＴＹＲＱＡＬＲＶＣＳＫＬＴ（ヒトＮＵＡＫ２の残基６５３〜６７３）、ＭＶＭＡＤＧＰＲＨＬＱＲＧＰＶＲＶＧＦＹＤ（ヒトＱＩＫの残基１〜２１）、ＭＶＩＭＳＥＦＳＡＤＰＡＧＱＧＱＧＱＱＫ（ヒトＳＩＫの残基１〜２０）、ＧＤＣＥＭＥＤＬＭＰＣＳＬＧＴＦＶＬＶＱ（ヒトＳＩＫの残基７６５〜７８４）、ＴＤＩＬＬＳＹＫＨＰＥＶＳＦＳＭＥＱＡＧＶ（ヒトＱＳＫの残基１３４９〜１３６９）、ＳＧＴＳＩＡＦＫＮＩＡＳＫＩＡＮＥＬＫＬ（ヒトＭＡＲＫ１の残基７７６〜７９５）、ＭＳＳＲＴＶＬＡＰＧＮＤＲＮＳＤＴＨＧＴ（ヒトＭＡＲＫ４の残基１〜２０）、ＭＫＤＹＤＥＬＬＫＹＹＥＬＨＥＴＩＧＴＧ（ヒトＭＥＬＫの残基１〜２０）、ＣＴＳＰＰＤＳＦＬＤＤＨＨＬＴＲ（ラットＡＭＰＫα１の残基３４４〜３５８）、ＣＤＰＭＫＲＡＴＩＫＤＩＲＥ（ラットＡＭＰＫα１の残基２５２〜２６４）を有するペプチド抗原と反応する抗体。
【請求項３７】
ＡＭＰＫα１のＴｈｒ１７２に対応するＴ−ループトレオニン残基が、アラニン残基にまたはアスパラギン酸もしくはグルタミン酸残基に突然変異されている、突然変異ＡＭＰＫサブファミリーメンバー。
【請求項３８】
ＡＭＰＫサブファミリーメンバーが、ＢＲＳＫ１、ＢＲＳＫ２、ＮＵＡＫ１、ＮＵＡＫ２、ＱＩＫ、ＳＩＫまたはＭＥＬＫである、請求項３７に記載の突然変異ＡＭＰＫサブファミリーメンバー。
【請求項３９】
請求項３７または３８に記載の突然変異ＡＭＰＫサブファミリーメンバーをコードするポリヌクレオチド。

【図１】

【図１ａ】

【図２】

【図２ａ】

【図２ｂ】

【図３】

【図４】

【図４ａ】

【図５】

【図５ａ】

【図６】

【図６ａ】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１５ａ】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２１Ａ】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【公表番号】特表２００７−５３００００（Ｐ２００７−５３００００Ａ）
【公表日】平成１９年１１月１日（２００７．１１．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５２００１１（Ｐ２００６−５２００１１）
【出願日】平成１６年７月１６日（２００４．７．１６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００３０９６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０１０１７４
【国際公開日】平成１７年２月３日（２００５．２．３）
【出願人】（５０１３６７２７７）ユニヴァーシティー　オブ　ダンディー (1)
【Ｆターム（参考）】