ＬＫＫＴＥＴおよび／またはＬＫＫＴＮＴペプチド組成物ならびに方法
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、または、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、あるいはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤と、眼科的に許容される担体、抗菌有効性の保存剤、眼科的に許容される等張性を有している組成物を提供するための等張化剤、快適性を高める薬剤、組成物のｐＨを所望の眼科的に許容されるｐＨレベルに調整することができる酸性もしくは塩基性ｐＨ調整剤の少なくとも１つ、および所望のｐＨレベルを実質的に維持するための緩衝剤が含まれている組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
関連出願の相互参照
本出願は、２００５年６月１７日に提出された米国仮特許出願番号６０／６９１，２６１、および２００６年２月２８日に提出された米国仮特許出願番号６０／７７６，９４７の権利を請求する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、ＬＫＫＴＥＴおよび／またはＬＫＫＴＮＴ組成物、ならびに方法の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景技術の説明
サイモシンβ４は、最初は、インビトロにおいて内皮細胞の移動と分化の間にアップレギュレートされるタンパク質として同定された。サイモシンβ４は当初は胸腺から単離され、そしてこれは、様々な組織の中で同定された４３アミノ酸の、４．９ｋＤａの至るところに存在しているポリペプチドである。いくつかの役割がこのタンパク質に起因するとされており、これには、内皮細胞の分化および移動、Ｔ細胞の分化、アクチンの隔離、血管新生、および創傷の治癒における役割が含まれる。
【０００４】
多くのＴβ４イソ型が同定されており、これらは、Ｔβ４についての既知のアミノ酸配列に対して、約７０％、または約７５％、または約８０％、またはそれ以上の相同性を有している。このようなイソ型としては、例えば、Ｔβ４ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、および、Ｔβ１５が挙げられる。Ｔβ４と同様に、Ｔβ１０およびＴβ１５イソ型は、アクチンを隔離することが示されている。Ｔβ４、Ｔβ１０、およびＴβ１５、ならびにこれらの他のイソ型は、アクチンの隔離または結合を媒介することに関係していると見られているアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたはＬＫＫＴＮＴを共有している。いかなる特定の理論にも束縛されることは望まないが、本明細書中に記載されるペプチド剤の活性は、そのような薬剤の抗炎症活性に少なくとも一部原因がある可能性がある。Ｔβ４はまた、アクチンの重合を調節することもできる（例えば、β−サイモシンは、遊離のＧ−アクチンを隔離することによってＦ−アクチンを脱重合させると見られている）。アクチンの重合を調節するＴβ４の能力は、ＬＫＫＴＥＴまたはＬＫＫＴＮＴ配列を介してアクチンに結合するかまたはアクチンを隔離するその能力が原因である可能性がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ＬＫＫＴＥＴおよび／またはＬＫＫＴＮＴ組成物、ならびに方法が、当該分野で依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の要旨
組成物には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、または、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、あるいはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤と、眼科的に許容される担体、抗菌有効性の保存剤、眼科的に許容される等張性を有している組成物を提供するための等張化剤、快適性を高める薬剤、組成物のｐＨを所望の眼科的に許容されるｐＨレベルに調整する
ことができる酸性もしくは塩基性ｐＨ調整剤の少なくとも１つ、および所望のｐＨレベルを実質的に維持するための緩衝剤が含まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
発明の詳細な説明
様々な目的のために被験体に投与される多くの組成物には、被験体に対して害を及ぼす可能性がある１つ以上の成分が含まれる。
【０００８】
例えば、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）のような保存剤（これは、多くの眼科用製品および化粧品製品の中に存在している）は、製品が投与されると表面の刺激および／または損傷を引き起こす可能性がある。症状には、赤みおよび不快感が含まれ得る。
【０００９】
ＢＡＫのような４級アンモニウム塩が含まれている点眼薬の常用に伴う眼の表面での刺激およびアポトーシスは顕著であり、そして深刻さを増す問題である。患者は、多くの場合は、赤みや、全体的な眼の不快感のような症状を発症する。本発明のペプチド剤（例えば、サイモシンβ４（Ｔβ４））は、ＢＡＫのような４級アンモニウム塩と眼組織との接触と組み合わせて被験体に投与される場合に、眼組織の損傷もしくは傷害を処置するか、または予防するために利用することができる。
【００１０】
本発明を適用することができる４級アンモニウム塩の例としては、ＢＡＫ、セトリミド、塩化ベンゾキソニウムなどが挙げられる。
【００１１】
１つの実施形態にしたがうと、ペプチド剤は、同じ処方物の一部として（例えば、ＢＡＫまたは他の４級アンモニウム塩が含まれている処方物に対する添加剤として）ＢＡＫのような４級アンモニウム塩と一緒に投与される。ＢＡＫのような４級アンモニウム塩は、多くの眼科用溶液（例えば、緑内障用の点眼薬）において保存剤として一般的に使用されている成分である。
【００１２】
別の実施形態においては、ペプチド剤は、ＢＡＫのような４級アンモニウム塩の投与の前に、および／またはＢＡＫのような４級アンモニウム塩の投与の間に、および／またはＢＡＫのような４級アンモニウム塩の投与後に、投与することができる。
【００１３】
１つの実施形態にしたがうと、本発明は、角膜上皮眼組織の損傷を予防すること（そのような眼組織の細胞のアポトーシスを防ぐことが含まれる）において特に有用である。例えば、本発明は、抗緑内障用の点眼薬、または他の点眼薬についてのアジュバントとして利用することができる。
【００１４】
１つの態様にしたがうと、眼科的に許容される組成物には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、またはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤が含まれる。
【００１５】
別の態様にしたがうと、眼組織を処置する方法には、上記眼組織に、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、またはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤が含まれている眼科的に許容される組成物を局所投与する工程が含まれる。
【００１６】
１つの実施形態においては、本発明により、本明細書中に記載されるペプチド剤が含まれている組成物の有効量を眼組織と接触させることによる処置方法が提供される。直接の投与の例としては、例えば、本明細書中に記載されるペプチド剤が含まれている、溶液剤、ローション剤、膏薬、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、スプレー、懸濁剤、分散剤、ヒドロゲル、軟膏、油剤、または泡剤の直接の塗布による組織の接触が挙げられる。
【００１７】
いかなる特定の理論にも束縛されることは望まないが、サイモシンβ４（Ｔβ４またはＴＢ４）のようなアクチン隔離ペプチド、およびアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているアクチン隔離ペプチドまたはペプチド断片が含まれている他の薬剤は、眼組織が健常であるように促進する。
【００１８】
サイモシンβ４は、最初は、インビトロにおいて内皮細胞の移動と分化の間にアップレギュレートされるタンパク質として同定された。サイモシンβ４は当初は胸腺から単離され、そしてこれは、様々な組織の中で同定された４３アミノ酸の、４．９ｋＤａの至るところに存在しているポリペプチドである。いくつかの役割がこのタンパク質に起因するとされており、これには、内皮細胞の分化および移動、Ｔ細胞の分化、アクチンの隔離、血管新生、および創傷の治癒における役割が含まれる。
【００１９】
１つの実施形態にしたがうと、本発明は、サイモシンβ４、および／またはＴβ４イソ型、類似体または誘導体（ＫＬＫＫＴＥＴ、ＬＫＫＴＥＴＱ、酸化型Ｔβ４、Ｔβ４スルホキシド、Ｔβ４のＮ末端変異体、およびＴβ４のＣ末端変異体が含まれる）に好ましく適用できる。
【００２０】
１つの実施形態にしたがうと、本発明にしたがって使用することができる組成物にはサイモシンβ４（Ｔβ４）、および／またはＴβ４イソ型、類似体、または誘導体（Ｔβ４スルホキシドを含むＴβ４の酸化された形態、Ｔβ４のＮ末端変異体、およびＴβ４のＣ末端変異体が含まれる）、ならびにアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴおよびその保存的変異体が含まれているまたは本質的にそれらから構成されているポリペプチドまたはペプチド断片のようなペプチド剤が含まれる。国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９９／１７２８２（引用により本明細書中に組み入れられる）には、本発明にしたがって有用であり得るＴβ４のイソ型、さらには、本発明とともに利用することができるアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴおよびそれらの保存的変異体が開示されている。国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／００８３３（ＷＯ９９／４９８８３）（引用により本明細書中に組み入れられる）には、本発明にしたがって利用することができる酸化型のサイモシンβ４が開示されている。本発明を、主にＴβ４およびＴβ４イソ型に関して、本明細書中以下に記載するが、以下の記載は、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているかまたは本質的にそれらから構成されているペプチドおよび断片、ならびに／あるいはＴβ４イソ型、類似体、または誘導体（酸化型Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、およびＴβ４のＣ末端変異体が含まれる）にも同様に適用できるように意図されることが理解される。
【００２１】
１つの実施形態にしたがうと、本発明の組成物は、１日に１回、１日おきに、１週間おきに、１ヶ月おきになどで、投与日１日につき１回の投与または複数回の投与（例えば、投与日１日につき２回、３回、４回、またはそれ以上の投与回数）で投与することができる。
【００２２】
多くのＴβ４イソ型が同定されており、これらは、Ｔβ４についての既知のアミノ酸配列に対して、約７０％、または約７５％、または約８０％、またはそれ以上の相同性を有している。このようなイソ型としては、例えば、Ｔβ４ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、およびＴβ１５が挙げられる。Ｔβ４と同様に、Ｔβ１０およびＴβ１５イソ型は、アクチンを隔離することが示されている。Ｔβ４、Ｔβ１０、およびＴβ１５、ならびにこれらの他のイソ型は、アクチンの隔離または結合を媒介することに関係していると見られているアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたはＬＫＫＴＮＴを共有している。Ｔβ４は、抗炎症活性を有しており、また、アクチンの重合を調節することもできる（例えば、β−サイモシンは、遊離のＧ−アクチンを隔離することによっ
てＦ−アクチンを脱重合させると見られている）。Ｔβ４のアクチンの重合を調節する能力は、ＬＫＫＴＥＴまたはＬＫＫＴＮＴ配列を介してアクチンに結合するかまたはアクチンを隔離するその能力が原因である可能性がある。したがって、Ｔβ４と同様に、抗炎症性であり、そして／また、アクチンに結合するかもしくはアクチンを隔離する、またはアクチンの重合を調節する他のタンパク質（アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴを有しているＴβ４イソ型が含まれる）は、本明細書中で示されるように、単独で、またはＴβ４と組み合わせて有効であるようである。
【００２３】
したがって、既知のＴβ４イソ型（例えば、Ｔβ４ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、および、Ｔβ１５）、ならびにまだ同定されていないＴβ４イソ型も、本発明の方法に有用であろうということが具体的に予想される。したがって、そのようなＴβ４イソ型は、被験体において行われる方法が含まれる、本発明の方法において有用である。したがって、本発明によってはさらに、Ｔβ４、ならびにＴβ４イソ型（Ｔβ４ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、および、Ｔβ１５）と、眼科的に許容される担体を含む組成物が提供される。
【００２４】
加えて、坑炎症活性および／またはアクチンを隔離するかもしくはアクチンに結合する能力を有しているか、あるいは、適切なアクチンの隔離、結合、移動、もしくは重合アッセイにおいて明らかであるか、またはアクチンの結合を媒介するアミノ酸配列（例えば、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ）の存在によって同定される、アクチンを移動させることができるかまたはアクチンの重合を調節することができる他の薬剤またはタンパク質も、本発明の方法において同様に使用することができる。このようなタンパク質としては、例えば、ゲルゾリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、デパクチン、ＤｎａｓｅＩ、ビリン、フラグミン、セヴェリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン、およびアキュメンチンを挙げることができる。このような方法には、被験体において行われる方法が含まれるので、本発明によってさらに、本明細書中に示されるように、ゲルゾリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、デパクチン、ＤｎａｓｅＩ、ビリン、フラグミン、セヴェリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン、およびアキュメンチンが含まれている薬学的組成物が提供される。したがって、本発明には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたはＬＫＫＴＮＴ、およびそれらの保存的変異体が含まれているポリペプチドの使用が含まれる。
【００２５】
本明細書中で使用される場合は、用語「保存的変異体」またはその文法上のバリエーションは、別の生物学的に類似している残基による１つのアミノ酸残基の置き換えを示す。保存的なバリエーションの例としては、イソロイシン、バリン、ロイシン、またはメチオニンのような疎水性残基の、別のものでの置き換え、極性残基の別のものでの置き換え（例えば、アルギニンのリジンでの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸での置換、またはグルタミンのアスパラギンでの置換など）が挙げられる。
【００２６】
１つの実施形態にしたがうと、本発明の組成物は点眼用処方物である。
１つの実施形態にしたがうと、本発明で使用される組成物には、本明細書中に記載されるペプチド剤が、１ｍｌあたり約０．００１〜１０００マイクログラム（ｍｃｇ／ｍｌ）、より好ましくは、約０．１〜１００ｍｃｇ／ｍｌ、最も好ましくは、約１〜１０ｍｃｇ／ｍｌの範囲の濃度で含まれる。特に好ましい実施形態においては、ペプチド剤はＴβ４である。
【００２７】
１つの実施形態にしたがうと、本発明は、眼組織の、約０．０００１〜１重量％の範囲、好ましくは約０．００１〜０．１重量％の範囲、より好ましくは約０．００２〜０．０５重量％の範囲の濃度の４級アンモニウム塩（例えば、ＢＡＫ）との接触によって生じる眼組織の損傷もしくは傷害を処置または予防するために有用である。１つの実施形態にお
いては、４級アンモニウム塩は、約０．００５〜０．０２重量％の濃度である。
【００２８】
１つの実施形態にしたがうと、本発明にはまた、眼科的に許容される担体の中に本明細書中に記載されるペプチド剤が含まれている薬学的組成物が含まれる。このような担体としては、例えば、本明細書中に列挙される担体が挙げられる。
【００２９】
１つの実施形態にしたがうと、処置を提供する実際の投与量または試薬、処方物または組成物は、被験体の大きさおよび健康状態を含む多くの要因に依存する。しかし、当業者は、ＰＣＴ／ＵＳ９９／１７２８２（前出）およびその中で引用されている参考文献の中に開示されている臨床的な投与量を決定するための方法および技術を記載している教示を、使用する適切な投与量を決定するために使用することができる。
【００３０】
１つの実施形態にしたがうと、本明細書中に記載されるペプチド剤を使用するまたはペプチド剤が含まれている方法および組成物は、眼科的に許容される非毒性の賦形剤または担体との混合によって、組成物へと処方することができる。
【００３１】
１つの実施形態にしたがうと、活性化合物が含まれている局所用処方物にはまた、眼科の分野の当業者であれば通常の基準を使用して選択することができるような、生理学的に適合性の媒体も含めることができる。媒体は、既知の眼科用の媒体から選択することができ、これには、生理食塩溶液、水、ポリエーテル（例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニル（例えば、ポリビニルアルコールおよびポビドン）、セルロース誘導体（例えば、メチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース）、石油派生物（例えば、鉱油および白色ワセリン）、動物性油脂（例えば、ラノリン）、アクリル酸のポリマー（例えば、カルボキシポリメチレンゲル）、植物性油脂（例えば、ピーナッツ油）、および多糖（例えば、デキストラン）、ならびにグリコサミノグリカン（例えば、ヒアルロン酸ナトリウム）、および塩（例えば、塩化ナトリウムおよび塩化カリウム）が含まれるが、これらに限定はされない。
【００３２】
１つの実施形態にしたがうと、眼科用組成物は、特に、溶液、懸濁液、軟膏、ゲル剤、または泡剤の形態で、眼への局所投与に有利である。
【００３３】
１つの実施形態にしたがうと、当業者に既知の通常の薬学的に許容される賦形剤および添加剤（例えば、以下に記載される種類のもの、具体的には、担体、安定剤、可溶化剤、等張促進剤、緩衝物質、保存剤、増粘剤、錯化剤、および他の賦形剤）が、対応する眼科用組成物に使用される。このような添加剤および賦形剤の例は、米国特許第５，１３４，１２４号および同第４，９０６，６１３号に見ることができる。このような組成物は、それ自体既知の様式で、例えば、有効成分を対応する賦形剤および／または添加剤と混合して、対応する眼科用組成物を形成させることによって調製される。有効成分は、好ましくは、点眼薬の形態で投与され、有効成分は通常は、例えば、担体に溶解させられる。溶液は、適切である場合には、所望のｐＨに調整され、および／または緩衝化させられ、適切である場合には、安定剤、可溶化剤、または等張促進剤が添加される。適切である場合には、保存剤および／または他の賦形剤が、眼科用組成物に添加される。
【００３４】
本発明にしたがって使用される担体は、通常、局所投与または全身投与に適しており、例えば、水、水と水混和性溶媒（例えば、Ｃ１〜Ｃ７アルカノール、植物油、あるいは０．５から５重量％のヒドロキシエチルセルロース、オレイン酸エチル、カルボキシメチルセルロース、ポリビニル−ピロリドン、および眼科用の他の非毒性の水溶性ポリマー、例えば、セルロース誘導体（例えば、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルセルロースのアルカリ金属塩）、アクリレートまた
はメタクリレート（例えば、ポリアクリル酸またはアクリル酸エチルの塩、ポリアクリルアミド）、天然物（例えば、ゼラチン、アルギン酸塩、ペクチン、トラガカント、キラヤゴム、キサンタンゴム、カラギーナン、寒天およびアカシア）、デンプン誘導体（例えば、酢酸デンプンおよびヒドロキシプロピルデンプン）、ならびに他の合成の産物（例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリエチレンオキサイド、好ましくは、架橋されたポリアクリル酸、例えば、中性のカルボポール、またはそのようなポリマーの混合物が含まれている鉱油）の混合物である。好ましい担体は、水、セルロース誘導体、例えば、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルセルロースのアルカリ金属塩、中性のカルボポール、あるいはそれらの混合物である。
【００３５】
１つの実施形態にしたがうと、本発明の眼科用組成物に使用される安定剤は、例えば、チロキサポール、脂肪酸グリセロールポリ−低級アルキレングリコールエステル、脂肪酸ポリ−低級アルキレングリコールエステル、ポリエチレングリコール、グリセロールエーテル、またはこれらの化合物の混合物である。添加される量は、通常、有効成分を可溶化させるために十分な量である。例えば、安定剤の濃度は、有効成分の濃度の０．１から５０００倍である。低級アルキレンは、７個までのＣ原子を有する直鎖または分岐状のアルキレンを意味する。例は、メチレン、エチレン、１，３−プロピレン、１，２−プロピレン、１，５−ペンチレン、２，５−ヘキシレン、または１，７−ヘプチレンである。低級アルキレンは、好ましくは、４個までのＣ原子を有する直鎖または分岐状のアルキレンである。
【００３６】
緩衝物質の例は、酢酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、リン酸塩、プロピオン酸塩、およびＴＲＩＳ（トロメタミン）緩衝剤である。トロメタミンおよびホウ酸緩衝剤が好ましい緩衝剤である。添加される緩衝物質の量は、例えば、生理学的に許容されるｐＨの範囲を確保する、および維持するために必要な量である。ｐＨ範囲は、通常は５から９、好ましくは６から８．２、より好ましくは６．８から８．１までの範囲である。
【００３７】
等張促進物質は、例えば、イオン性化合物であり、例えば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属ハロゲン化物、例えば、ＣａＣｌ２、ＫＢｒ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＮａＢｒ、ＮａＣｌ、またはホウ酸である。非イオン性等張促進物質は、例えば、尿素、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール、またはデキストロースである。例えば、十分な等張促進物質が、約５０から１０００ｍＯｓｍｏｌ、好ましくは１００から４００ｍＯｓｍｏｌ、より好ましくは２００から４００ｍＯｓｍｏｌ、なお一層好ましくは２８０から３５０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を、未使用の眼科用組成物に付与するために添加される。
【００３８】
保存剤の例は、４級アンモニウム塩、例えば、セトリミド、塩化ベンザルコニウム、または塩化ベンゾキソニウム、チオサリチル酸のアルキル−水銀塩、例えば、チメロサール、硝酸フェニル水銀、酢酸フェニル水銀、またはホウ酸フェニル水銀、パラベン、例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン、アルコール、例えば、クロロブタノール、ベンジルアルコール、またはフェニルエタノール、グアニジン誘導体、例えば、クロロヘキシジンまたはポリヘキサメチレンビグアニド、またはソルビン酸である。好ましい保存剤は、セトリミド、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゾキソニウム、およびパラベンである。適切である場合には、十分な量の保存剤が、細菌および真菌によって引き起こされる使用の間の２次的な汚染に対する防御を確実にするために、眼科用組成物に添加される。
【００３９】
１つの実施形態にしたがうと、眼科用組成物には、さらに非毒性の賦形剤、例えば、乳
化剤、湿潤剤または充填剤、例えば、２００、３００、４００、および６００と指定されているポリエチレングリコール、または１０００、１５００、４０００、６０００、および１００００と指定されているカルボワックスが含まれる場合がある。所望される場合に使用することができる他の賦形剤が以下に列挙されるが、これらは、決して可能な賦形剤の範囲を限定するようには意図されない。これらは、特に、錯化剤（例えば、２ナトリウム−ＥＤＴＡまたはＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、アセチルシステイン、システイン、亜硫酸水素ナトリウム、ブチル−ヒドロキシアニソール、ブチル−ヒドロキシ−トルエン、またはα−酢酸トコフェロール）；安定剤（例えば、シクロデキストリン、チオ尿素、チオソルビトール、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウムまたはモノチオグリセロール）；あるいは、他の賦形剤（例えば、ラウリン酸ソルビトールエステル、オレイン酸トリエタノールアミン、またはパルミチン酸エステル）である。好ましい賦形剤は、錯化剤（例えば、２ナトリウム−ＥＤＴＡ）および安定剤（例えば、シクロデキストリン）である。添加される賦形剤の量および種類は、特定の要件にしたがい、そして一般的には、約０．０００１から約９０重量％までの範囲である。シクロデキストリンは、１個のグルコースについて３個の遊離のヒドロキシ基を有している、いくつかのグルコース単位から構成される。使用されるシクロデキストリンの量は、１つの実施形態にしたがうと、好ましくは０．０１〜２０重量％まで、より好ましくは０．１〜１５重量％まで、なお一層好ましくは１〜１０重量％までの範囲であり得る。
【００４０】
１つの実施形態にしたがうと、本発明はまた、眼科用組成物に関し、これには、治療有効量の本明細書中に記載されるペプチド剤、担体、可溶化剤、および別の治療上有効である医薬品（これは、例えば、抗生物質、抗アレルギー薬、麻酔薬、別の消炎剤、コルチコステロイド、眼内圧を下げるために適している薬剤、あるいは別の薬物であり得る）が含まれる。
【００４１】
ｐＨ（水素イオン濃度）
１つの実施形態にしたがうと、本発明の処方物のｐＨは、可能な限り涙液層のｐＨに近づけられるべきである。涙液の生理学的ｐＨは、約７．４±０．２である。したがって、快適性、耐容性、および安全性の観点から、これは、眼科用調製物の最適なｐＨである。
【００４２】
涙液の分泌およびまばたきの刺激によって、ｐＨ値の低下が生じる。まぶたが長時間開かれたままとなると、涙液層は、周辺の空気中のＣＯ２の分圧との平衡によってアルカリ化され、９を超えるｐＨ値に達する。ｐＨの低下および上昇のいずれにも、不都合な結果は伴わない。したがって、本発明の処方物を約７．４のｐＨの周辺になるように処方する際のｐＨ範囲にはある程度の自由度がある。
【００４３】
また、処方物が眼に投与されると、これは、涙の流出を刺激する。涙液は、少量の添加された物質を迅速に稀釈し、緩衝化することができ、このことは、眼が特定の処方物によってもたらされる極めて広いｐＨ範囲を許容できることを示唆している。
【００４４】
結果として、眼科用処方物は、約ｐＨ３．５から１１．５までの範囲であり得る。しかし、眼科用処方物は、これよりいくぶん狭い３．５から９までのｐＨ範囲、好ましくは４．５から８まで、最も好ましくはｐＨ５．５から７．８までのｐＨ範囲を示し得る。最も好ましいｐＨ範囲が、本発明の組成物の可溶性、化学的安定性、および治療活性の観点から有利であり、有用かつ比較的狭い範囲によって角膜の損傷が防がれる。
【００４５】
緩衝システム
１つの実施形態にしたがうと、緩衝システムは、弱酸または弱塩基と、その共役塩から構成される。このシステムの中の成分の緩衝能は、酸または塩基の添加、および温度、圧力、容積、酸化還元電位、体液および涙液の外的な影響に曝された場合にも、ｐＨを原則
として一定に維持できるであろう方法で作用する。緩衝能は、合理的な保存期間（すなわち、保存条件）についての生成物のｐＨの変化（すなわち、ｐＨドリフト）に耐えるに十分に大きくなければならないが、本発明の眼科用処方物の緩衝能は、眼に投与された時に、生成物を生理学的ｐＨに迅速に再調整することができるように十分に低くなければならない。１つの実施形態にしたがうと、眼科用製品の緩衝能は、０．０５から１．０の範囲でなければならない。好ましくは、そして最も好ましい緩衝能は、特定の本発明の組成物について、それぞれ、０．０２から０．２、および０．０１から０．１の範囲である。緩衝能は、以下の式によって決定される：
＊β＝ΔＢ／ΔｐＨ
式中、βは緩衝能であり、ΔＢは１リットルの緩衝溶液のｐＨを変化させるための強酸／塩基のグラム等量であり、ΔｐＨは、強酸／塩基の添加によって引き起こされる変化である。
【００４６】
１つの実施形態にしたがうと、適切な緩衝システムは、以下の酸のナトリウム塩であり得る：酢酸；アスコルビン酸；ホウ酸；炭酸；リン酸；クエン酸；グルコン酸；乳酸；およびプロピオン酸。炭酸またはプロピオン酸のカルシウム塩は、リン酸のカリウム塩がそうであるのと同様に、適切な緩衝システムを形成する。Ｔｒｉｓ緩衝剤（トロメタミン）が、代謝性アシドーシスの修正のためのアルカリ化薬として静脈内で使用され、そしてこれは、本発明で使用される好ましい緩衝剤の１つである。他の好ましい緩衝剤は、酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、およびホウ酸塩である。特定の例においては、タンパク質のアミノ酸残基のプロトンドナーとプロトンアクセプタ基が関与している緩衝システムが、酸−塩基またはアミン−塩基緩衝剤に好ましい場合がある。
【００４７】
使用される緩衝物質の具体的な量は、本発明の組成物の安定性に適しているｐＨ環境を維持するため、および生理学的に許容されるｐＨ範囲を確実にし、維持するために必要な量に応じて様々であり、変化する。
【００４８】
等張化剤
本明細書中に列挙されるもののうち、目的のものは、自然な涙のものとほぼ生理学的に等張性（例えば、０．９％の生理食塩水）となるように本発明の眼科用組成物の等張性を調節するものである。例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、デキストロース、および／またはマンニトールを、本発明のペプチド剤処方物に添加することができる。等張化剤の量は、添加される特定の薬剤に応じて様々である。一般的には、特定の本発明の組成物には、最終的な組成物が眼科的に許容される浸透圧、好ましくは１５０〜４５０ｍＯｓｍ、最も好ましくは２５０〜３５０ｍＯｓｍを有するために十分な量の等張化剤が含まれる。
【００４９】
好ましい等張化剤は、ナトリウム塩およびカリウム塩、具体的には、塩化ナトリウムおよび塩化カリウムである。最も好ましい等張化剤は塩化ナトリウムである。
【００５０】
潤滑剤／鎮痛薬／増粘剤
１つの実施形態にしたがうと、眼を落ち着かせ、表面張力を低下させ、そして別の疎水性角膜上皮表面の湿潤性を改善する（コンタクト）、涙の濃度に近づける複数の化合物が含まれる場合がある。このような化合物はまた、本発明の組成物の粘度を高めることができ、それによって、本発明の処方物はより長い間、眼の中に留まることができ、したがって、ペプチド剤はその治療活性をもっと発揮することができるか、または、所望の標的に達するように吸収される。
【００５１】
特定の本発明の組成物において使用される眼科用処方物に適切な増粘剤、およびそれらの濃度範囲としては、以下が挙げられるが、これらに限定はされない：（ａ）モノマーで
あるポリオール、例えば、チロキサポール（０．１〜１％）、グリセロール（０．２〜１％）、プロピレングリコール（０．２から１％）、エチレングリコール（０．２〜１％）；（ｂ）ポリマーであるポリオール、例えば、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００）（０．２〜１％）；（ｃ）セルロース誘導体（セルロースファミリーのポリマー）、例えば、ヒドロキシエチルセルロース（０．２〜２．５％）、ヒプロメロース（０．２から２．５％）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（０．２〜２．５％）、メチルセルロース（０．２〜２．５％）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（０．２から２．５％）、ヒドロキシプロピルセルロース（０．２〜２．５％）；（ｄ）デキストラン、例えば、デキストラン７０（別のポリマー性鎮痛薬と共に使用される場合は、０．１％）；（ｅ）水溶性タンパク質、例えば、ゼラチン（０．０１％）；（ｆ）ビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコール（０．１〜４％）、ポリビニルピロリドン（０．１〜４％）；（ｇ）他のポリオール、例えば、ポリソルベート８０（０．２〜１％）、ポビドン（０．１〜２％）；（ｈ）カルボマー、例えば、カルボマー９３４Ｐ、カルボマー９４１、カルボマー９４０、およびカルボマー９７４Ｐ、ならびに（ｉ）多糖／グリコサミノグリカン、例えば、ヒアルロナン（ヒアルロン酸／ヒアルロン酸塩）（０．１〜３％）、コンドロイチン硫酸（０．１〜３％）。
【００５２】
２種類以上の増粘剤が、担体（媒体）の粘度を高めるために本発明の組成物に添加される場合がある。本発明のペプチド剤処方物の担体の中の好ましい増粘剤は、カルボキシメチルセルロースである。
【００５３】
粘度
粘度は、応力がかけられた場合に流動する、または形態を変化させるための物質の内部抵抗を記載する。物質（溶液、半粘性ゲル、懸濁液、油性軟膏および軟膏ゲル（粘性ゲル））の粘度は、ポアズ単位で提供される。単位「センチポアズ（「ｃｐ」または複数形は「ｃｐｓ」）は、０．０１ポアズに等しく、そして薬学的用途において最も頻繁に使用される。粘度を高めるために使用される化合物は、１５ｃｐｓ、１００ｃｐｓなどの様々なグレードで利用することができる。グレードの数は、増粘剤の一定の割合の水溶液が得られると生じる粘度を意味する。一般的には、溶液は１％または２％であるが、しかし、これらは、特定の増粘剤を用いる場合には、４％のように高い場合もある。粘度は、２０℃または２５℃で測定される。
【００５４】
眼科用溶液中での適切な粘度は、２５から５０センチポアズ（ｃｐｓ）の間である。所望の粘度を生じるために必要な増粘剤の実際の濃度は、増粘剤のグレードに応じて様々である。例えば、メチルセルロース２５ｃｐｓが使用される場合は、１％の溶液によって２５ｃｐｓの粘度が生じる。メチルセルロース４０００ｃｐｓが使用される場合は、０．２５％の溶液によって所望の粘度が提供される。標準的な参考文献によって、溶液の割合（％）によって生じる粘度と成分のグレードの表が提供されている。
【００５５】
１つの実施形態にしたがうと、本発明の処方物は、＞１から１００，０００センチポアズ（ｃｐｓ）、またはそれ以上の粘度を示す。本発明の軟膏組成物（油性ゲルまたは粘性ゲル）は、１００，０００ｃｐｓよりも高い粘度のグレードを有する場合がある。これは、眼科用軟膏が、意図される使用領域から流れてしまうことを防ぐために、残留する場合には厚みを持たせることが意図されるからである。塗布後、そして経時的に、これらの軟膏がのせられた結膜嚢の中、および眼の表面上の温度によって、これらの軟膏は「溶け」、そして流れはじめる。
【００５６】
様々な本発明の処方物の種類についての好ましい粘度の範囲は以下の表に見られる：
【００５７】
【表１】
【００５８】
還元剤／抗酸化剤／酸素封鎖剤
特定の本発明の組成物は、酸化によって分解される可能性がある。結果として、本発明の組成物の製造、制御、および包装の間に、酸化されやすい本発明の組成物を保護する工程が含まれる場合があり、これは、（１）窒素またはアルゴンのような密度の高い不活性ガスで酸素を置き換えること、（２）酸化作用を最少にするために還元剤を添加すること、（３）デコイ分子の導入による。
【００５９】
０．１％またはそれ以上の濃度までで眼科用処方物において使用することができる一般的な抗酸化（還元）剤は、亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、およびチオ尿素である。亜硫酸塩は、特定のヒトにおいてはアレルギー型の反応を引き起こす可能性があり、結果として、この種類の抗酸化剤を投与される患者には、抗酸化剤が含まれている本発明の組成物で処置される前に、この可能性のある反応について質問しなければならない。本発明の組成物と適合する他の有用な抗酸化剤は、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ／エデト酸２ナトリウム、酢酸、クエン酸、グルタチオン、およびアセチルシステインである。これらの薬剤はまた、安定剤とみなされる場合もある。
【００６０】
デコイ分子または酸素封鎖保護剤が、本発明の処方物に対する酸化作用を最少にするために本発明の処方物に対して安定剤として添加される場合もある。分子デコイは、少なくとも本発明の処方物と同じ程度の、酸化される能力を有していなければならない。メチオニンが含まれている本発明の組成物についての１つのこのようなデコイは、アミノ酸であるメチオニン自体である。アミノ酸であるメチオニンが含まれている本発明の組成物に添加された遊離のメチオニンは、メチオニルスルホキシドに酸化される過程において酸素と競合する。遊離の酸素を消費する薬剤は、本発明の組成物／ペプチド中の他の酸素反応性アミノ酸が酸化されることを防ぐものである。特定の本発明の組成物の目的については、限定はされないが、遊離の酸素を消費する薬剤はメチオニンである。
【００６１】
眼科用軟膏／油性の皮膚軟化剤基剤
眼科用軟膏は、懸濁剤および確実に溶液剤よりも長い間、有効成分を眼と接触させたまま維持する傾向がある。ほとんどの軟膏は、視力をかすませる傾向があり、これは、これらが涙液によっては容易には除去されないとの理由による。したがって、軟膏は、一般的には、日中使用される点眼薬に対して、付加的治療として夜に使用される。
【００６２】
本発明の組成物の油性軟膏基剤は、鉱油、ワセリン、およびラノリンの混合物であり、これらは全て、体温に近い融点を有している。本発明の化合物の場合には、組成物には、鉱油、ワセリン、またはラノリンが含まれ得る。１つの実施形態にしたがうと、好ましい組成物には、ワセリン、鉱油、およびラノリンの混合物が含まれる。最も好ましい組成物は、白色ワセリン、鉱油、およびラノリン（無水物）が含まれている軟膏混合物である。
【００６３】
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、またはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤は、溶解させるために、少量の精製水または０．９％の生理食塩水に
溶解させられる。この水溶液は、無水ラノリンの中に組み込まれ、その後、「液体」ラノリン（１０％まで）が、残りの軟膏／油性皮膚軟化剤基剤成分、鉱油（３０％まで）、および白色ワセリン（６０％まで）と混合される。
【００６４】
眼科用軟膏のチューブは、通常は、約１〜５グラム、好ましくは３．５グラムの少量の軟膏を保持しており、投与の目的のためにインチで、またはその分数で測定される軟膏の細い帯の押し出しを可能にする、狭いゲージのチップが取り付けられている。
【００６５】
保存剤
滅菌性は、全ての眼科用処方物についての絶対要件である。汚染された処方物は、眼の感染を生じる可能性があり、これは、特に緑膿菌の細菌が含まれている場合には、最終的に失明を生じる可能性がある。したがって、本明細書中に記載される眼科用処方物は、滅菌性を確保する、本発明の組成物の溶液剤、ゲル剤、懸濁剤、および軟膏に特有の技術を使用して調製されなければならない。無菌の処方物は、滅菌容器の中に包装されなければならない。ほとんどの局所用の眼科用製品は、通常、多用量形態で包装される。このように、保存剤は、使用の際の残りの滅菌製品の微生物汚染を防ぐために必要である。適切な保存剤としては以下が挙げられる：４級アンモニウム化合物（塩）、例えば、塩化ベンザルコニウム（０．００１から０．０２％）、塩化ベンゼトニウム、塩化セタルコニウム、セトリミド、臭化ベンゾドデシニウム、および塩化ベンゾキソニウム；チオサリチル酸のアルキル−水銀塩、例えば、チメロサール（０．００１から０．００５％）；パラベン、例えば、メチルパラベンおよびプロピルパラベン；キレート化剤、例えば、エデト酸２ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム；他の薬剤、例えば、クロロブタノール、ホウ酸、ソルビン酸、フェニルエタノール（０．２５％）；Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）二酸化塩素；Ｐｏｌｙｑｕａｄ（登録商標）ポリクオタミウム（ｐｏｌｙｑｕａｔｅｍｉｕｍ）−１（０．００１％）；ならびにＡｌｄｏｘ（登録商標）ミリスタミドプロピルジエチルアミン（０．００５％）；または当業者に既知の他の薬剤。
【００６６】
このような保存剤は、通常、細菌、かび、および真菌によって引き起こされる使用の間の２次的な微生物の混入に対する防御を確実にするために、０．００１％から１．０％（ｗ／ｖ）のレベルで使用される。
【００６７】
眼科用処方物での使用について現在承認されている、以下の選択された保存剤の最大濃度が、以下の表に示される：
【００６８】
【表２】
【００６９】
適切な保存剤の選択は、選択された本発明の組成物に応じたその抗菌有効性に基づく。本発明の処方物において使用される好ましい保存剤は、メチルパラベン（０．０８０％〜１％）とプロピルパラベン（０．０１６％〜０．０２４％）の組み合わせ、塩化ベンザル
コニウム（ＢＡＫ）（０．００５％〜０．０２％、この場合、０．０１％ｗ／ｖが最も好ましい）、ＢＡＫとＥＤＴＡ（０．０１〜０．５％）の組み合わせ（これらは一緒に使用されると相乗作用を有する）である。
【００７０】
本発明の単位用量の組成物は無菌であるが、保存されない。大抵の場合、このような組成物には保存剤は含まれていない。結果としては、これらの組成物は再使用することはできず、一旦開封されると、これらは廃棄されなければならない。
【００７１】
増量剤／安定剤
増量剤／安定剤（単数または複数）は、長期間にわたる保存の間、本発明の組成物を含む潤滑剤、皮膚軟化剤、または媒体促進剤の水和状態を維持するために有効である場合がある。これらの物質のポリマー鎖の中に、またはポリマー鎖の間で、これらの鎖の水和状態の還元に好ましい時間の後に会合が起こるようである。これらの会合は、ポリマー鎖の中、およびポリマー鎖の間での水素結合の形態であり得、これは、本発明の眼科用処方物／組成物の粘度および質感の変化として発現し得る。凍結乾燥増量剤（これは、主二糖である）はまた、ストレス防止剤とも考えることができ、これによって、凍結乾燥のサイクルの間、化合物が保護される。水和のこの還元された状態を大きく減速させるかまたは排除する薬剤は、安定剤または水和促進剤の種類であり、０．２から５重量％の濃度のポリオールである。このようなポリオールの代表的なものは、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、スクロース、関連する糖などである。最も好ましい安定剤は、０．２重量％から５重量％までの濃度範囲の含水性マンニトールである。
【００７２】
加えて、５０ｍＭのアミノ酸安定化剤（例えば、アラニン（Ａｌａ）、リジン（Ｌｙｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、およびグルタミン酸（Ｇｌｕ））が、凍結乾燥後の再構成された水溶液からの回収を改善するために、配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている処方されたペプチド剤に取り込まれている。好ましいアミノ酸安定化剤はアルギニンおよびグリシンであるが、最も好ましい５０ｍＭのアミノ酸は、グリシンである。
【００７３】
本発明のペプチドの投与
例示的な局所送達（表面作用効果）
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤は、例えば、以下を処置するための局所効果のために、眼の表面に投与される：
１．化学的熱傷、再発性の角膜びらん、外科手術、角膜再生手順、レーザーを使用したインサイチュ角膜曲率形成術（ＬＡＳＩＫ）の際の上皮創面切除（これらに限定はされない）によって引き起こされる角膜上皮の創傷；
２．４級アンモニウム塩（例えば、ＢＡＫ）などによって引き起こされる角膜上皮の薄化；
３．例えば、結膜炎、眼瞼炎、角膜炎、ブドウ膜炎、強膜炎、網膜炎、視神経炎、および側頭動脈炎を処置するための、眼の炎症（単独、またはコルチコステロイドとの組み合わせ）；
４．微生物感染（単独で、または抗菌剤、抗真菌剤、もしくは抗ウイルス剤と組み合わせて、または、抗菌剤と抗炎症剤の両方と組み合わせて）；
５．ドライアイ症候群（眼球乾燥症）；
６．充血した眼［単独で、または眼を白くするための眼球のうっ血除去剤（結膜炎のアドレナリン作動性血管収縮剤）、例えば、エフェドリン、ナファゾリン、フェニルエピリン、テトラヒドロゾリン、および抗ヒスタミン（例えば、マレイン酸フェニラミン）と組み合わせて］
７．高い眼内圧（ＩＯＰ）および緑内障；ならびに
８．外傷性の損傷もしくは外科手術後の炎症または刺激性の症状、あるいは、様々な眼の刺激性疾患。
【００７４】
局所用の本発明のペプチド剤は、溶液剤、懸濁剤、ゲル剤、および軟膏として処方される。本発明のペプチド剤処方物は直接投与することができ、また、コラーゲンスポンジ、挿入物などによって間接的に投与することもできる。個々の眼科用製品（局所用眼科薬が含まれる）は、眼への微生物の混入を防ぐために、その最終的な容器の中で無菌でなければならない。２回以上使用される多用量の容器の中に包装される場合には、一旦容器が開封されても滅菌性を維持するために、保存剤が処方物に添加される。眼科用処方物には、処方物のｐＨ、緩衝能、粘度、および等張性が注意深く制御されることが必要である。好ましいｐＨ範囲、緩衝剤、粘度、および等張性は、本明細書中に記載されている。
【００７５】
例示的な処方物：点眼薬用の局所用溶液
局所投与される本発明のペプチド処方物には、１ミリリットルにつき、以下に示されるように、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている以下のペプチド剤が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００７６】
好ましい担体／媒体：２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；精製水、ＵＳＰ。
【００７７】
例示的な処方物：点眼薬用の局所用懸濁液
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴが含まれているペプチド剤を含む眼科用懸濁液に関して、粒子は、眼に対する刺激を最少にするために、１０ミクロン未満の大きさでなければならない。固体の溶解していない粒子は結膜に付着する傾向がある場合がある。薬物が吸収されると、これらの粒子は溶解し、吸収された薬物を補充する。この貯留または貯蔵効果によって、溶液と比較して、懸濁液の接触時間および作用期間が長くなる。
【００７８】
局所投与される本発明のペプチド処方物には、１ミリリットルにつき、以下に示されるように、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている以下のペプチド剤が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００７９】
好ましい担体／媒体：ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ＰＬＧＡマイクロスフェアの中へのペプチド−封入；２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；精製水、ＵＳＰ。
【００８０】
例示的な処方物：点眼薬用の局所用ゲル
局所投与される本発明のペプチド処方物には、１ミリリットルにつき、以下に示されるように、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている以下のペプチド剤が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの
範囲の濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００８１】
好ましい担体／媒体：カルボキシメチルセルロースナトリウム（０．５から１％）；第２リン酸ナトリウム；塩化ナトリウム；プロピレングリコール；メチルパラベン；プロピルパラベン；ｐＨを調整するためのＮａＯＨ／ＨＣｌ；精製水、ＵＳＰ。
【００８２】
例示的な処方物：局所用軟膏
局所投与される本発明のペプチド処方物には、１ミリリットルにつき、以下に示されるように、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている以下のペプチド剤が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００８３】
好ましい担体／媒体（１）：カルボキシメチルセルロースナトリウム（２．５％）；第２リン酸ナトリウム；プロピレングリコール；メチルパラベン；プロピルパラベン；塩化ナトリウム；ｐＨを調整するためのＮａＯＨ／ＨＣｌ；精製水。
【００８４】
好ましい担体／媒体（２）：「液体」ラノリン（１０％）；鉱油（３０％）、および白色ワセリン（６０％）。
【００８５】
ステロイド節約効果のための例示的な局所送達
コルチコステロイドは、様々な誘発物質に対する炎症反応を阻害する。
・デキサメタゾン眼科用懸濁液（０．１％）；デキサメタゾン眼科用軟膏（０．０５％）；およびリン酸デキサメタゾンナトリウム眼科用溶液（０．１％）
・フルオロメトロン眼科用軟膏（０．１％）；フルオロメトロン眼科用懸濁液（０．２５〜１％）；および酢酸フルオロメトロン眼科用懸濁液（０．１％）
・エタボン酸ロテプレドノール（０．５％）
・メドリソン眼科用懸濁液（１％）
・酢酸プレドニソロン眼科用懸濁液（０．１２〜１％）およびリン酸プレドニソロンナトリウム眼科用懸濁液（０．１２５〜１％）
・リメキソロン眼科用懸濁液（１％）
しかし、これらの薬剤は眼内圧（ＩＯＰ）を上昇させることがあり、敏感な個体においては、視神経の損傷、視力および視野の障害、ならびに後嚢下白内障の形成を伴う緑内障を誘導する場合がある。白内障の形成は、高用量の長期間にわたる使用に伴って発生しやすい合併症である。いくつかのコルチコステロイド（例えば、酢酸フルオロメトロン、メドリソン、およびロテプレドノール）は、他のコルチコステロイドほどＩＯＰを上昇させない。長期間にわたる使用によってはまた、宿主免疫反応が抑制される場合もあり、したがって、眼組織から解放された真菌およびウイルスによる眼の２次感染の確立を助ける場合がある。局所的なコルチコステロイドは創傷の治癒を遅らせるかまたは遅くすることが知られている。
【００８６】
誘発物質に対する炎症反応を阻害するための、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている本発明のペプチド剤を含む局所投与される点眼薬または軟膏の投与によっては、ステロイドを節約できる可能性がある。
【００８７】
例示的な眼内への薬物の送達−結膜／強膜への点眼
局所的な結膜からの侵入経路は、前眼部への薬物の浸透において重要な役割を担ってい
る。さらに、局所投与された薬物は、結膜から強膜へ近づくことが示されている。強膜を介する輸送または拡散の可能性は、この組織の大きく接近しやすい表面積、その高い程度の水和、低細胞性、および年齢に伴って有意に低下することのない浸透性による。このように、本発明の組成物は、この非侵襲的な投与経路によって前眼部に対する道筋を見い出すことができるものと考えられる。データは、強膜が、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤よりもずっと大きい分子量の化合物（約１５０ｋＤ）をもなお容易に透過させることができることを示唆している。局所投与されたナパフェナックが脈絡膜血管新生および網膜血管新生を、ＶＥＧＦの生産を低下させることによって阻害したこと、およびより大きい分子量のペプチド様インシュリン（５．８ｋＤ）が、局所投与後に網膜および視神経において蓄積し得るという最近の発見は、局所投与された本発明の組成物（これらは全て、＜１５０ｋＤの分子量を有している）が、結膜の浸透によって前眼部に達することができるだけではなく、これらは治療的でもあり得ることを示している。アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたは上記の保存的変異体が含まれているペプチド剤の局所用の溶液剤、懸濁剤、ゲル剤、または軟膏は、局所的な結膜への投与および強膜への投与に適している処方物である。
【００８８】
加えて、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤の本発明の組成物の注射による結膜下への投与は、ブドウ膜炎および眼内炎および緑内障のような、重篤な眼の炎症および眼の感染を処置するために、本発明の組成物に対して敏感な、抗炎症性および抗菌性のレジメンの送達に有用である。
【００８９】
好ましい注射可能な処方物：アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤には、１ｍｌにつき、以下が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌまでの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００９０】
好ましい担体／媒体：２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；注射用水、ＵＳＰ。
【００９１】
例示的な眼内への薬物の送達−角膜を介する点眼
局所投与される薬物は、疎水性の角膜を介して眼内環境に浸透する；しかし、角膜を介する輸送は、最も有効な過程ではない。なぜなら、用量のわずか１０分の１から１０分の３しか眼に浸透せず、ほとんどの薬物は表面の上皮層に留まったままとなると推定されるからである。本発明のペプチド組成物の角膜を通過する受動拡散は、それらの溶解度、分子量、およびイオン化の程度に大きく影響を受ける。正味の負電荷、および比較的大きな分子量を有しているので、局所投与される薬物として処方された本発明のペプチド剤は、無傷の角膜に浸透することは難しいことが明らかであろう。これは、角膜の中の上皮細胞間に存在している孔が、約５００分子量以下の小さな分子の細胞間隙からの浸透しか許容しないという事実によって裏付けられている。しかし、無傷の角膜上皮が浸食によって破壊されているか、または、例えば、上皮細胞間の堅い結合を開く物質もしくは浸透剤に曝されている場合には、本発明の組成物は、より効率よく眼内空間へと角膜を通過することができる。
【００９２】
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたは上記の保存的変異体が含まれているペプチド剤の局所用溶液剤、ゲル剤、あるいは軟膏は、角膜を介する点眼に適している処方物である。
【００９３】
例示的な眼内への薬物の送達−眼周囲への注射
本発明のペプチド剤の眼周囲への注射用処方物は、眼の炎症が局所用の点眼薬だけでは反応しない場合に、および前部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、眼内炎、および視神経炎のような炎症症状の場合に使用される。ペプチド剤は、結膜のすぐ下に、またはテノン嚢の下の空間に注射される。この場合には、より多くの吸収が生じ、結果として、より多くの薬物が所望の部位で利用できる。眼周囲への注射は、局所治療に対して付加的であるが、便利さに欠け、一次治療と考えられるほど十分には容認されない。
【００９４】
好ましい注射可能な処方物：アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤には、１ｍｌにつき、以下が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌまでの濃度のペプチド、より好ましくは、約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、最も好ましくは、約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００９５】
好ましい担体／媒体：２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；注射用水、ＵＳＰ。
【００９６】
例示的な眼内への薬物の送達−硝子体内／眼房水内への投与
角膜を介する、結膜を介する、および強膜を介する輸送の代わりとして、眼内組織への本発明のペプチド剤の送達は、硝子体腔または目房の内腔への注射によって行うことができる。硝子体は、ヒドロゲル（水、ヒアルロン酸、およびコラーゲン）からできており、これが、網膜と水晶体の間の内腔を満たしており、一方、目房水は水様液であり、これが水晶体と虹彩の間の内腔を満たしている。溶液剤として処方された本発明のペプチド剤の硝子体内または眼房水内への注射によって、ペプチド剤に対して眼内組織を迅速に暴露することができる。硝子体から迅速に排除され得る本発明の薬剤を眼内に持続的に存在させるためには、眼内炎、水晶体の損傷、網膜の剥離のリスクが高くなる注射を繰り返し行うことが必要であり、耐用性に欠ける場合がある。この障害を未然に防ぐために、本発明のペプチド剤は、リン脂質膜（すなわち、リポソーム、生分解性マイクロスフェア、ナノ粒子、または生分解性ラクトンをベースとするポリマー（Ｌ−ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、ジオキサノン、環状炭酸エステル、およびそれらの誘導体の重縮合によって作成されたポリエステルが含まれている）の中に封入される。ポリ（乳酸）ＰＬＡおよびポリ（グリコール酸）ＰＧＡとしてもそれぞれ知られている、ポリラクチドおよびポリグリコリド、ならびに特にそれらのコポリマーであるポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ＰＬＧＡは、最も研究されている生分解性ポリマーであり、これはまた、本発明のペプチド剤についての担体としても適用することもできる。加えて、ペプチド−ポリマー結合体（例えば、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤と、合成および天然のポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびデキストラン（シクロデキストランが含まれる））の共有結合体）は、改善された薬物動態プロフィールを可能にし、それによって本発明のペプチドのクリアランスの減少を生じる。
【００９７】
本発明のペプチド剤の硝子体内または眼房水内への投与は、眼の炎症、眼の感染（細菌、真菌、またはウイルス）、および緑内障の眼の処置において、流出経路の細胞中でＦ−アクチン構造を制御することによって、示されている（Ｒｅａｄ ＡＴら、Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ，２００６ Ｊｕｎ：８２（６）：９７４−８５）。
【００９８】
好ましい注射可能な処方物：アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤には、１ｍｌにつき、以下が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００
ｍｇ／ｍｌまでの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００９９】
好ましい担体／媒体（１）：２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；精製水、ＵＳＰ。
【０１００】
好ましい担体／媒体（２）：ＰＬＧＡマイクロスフェアの中へのペプチド封入；２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；注射用水、ＵＳＰ。
【０１０１】
例示的な処方物の投与：
局所用溶液剤および懸濁剤：
１回の投与について１滴、および投与の間に少なくとも５分間が推奨される。眼に液滴を点眼した直後、この経路による薬物のロスの割合を低下させるために、１分または２分間、涙嚢に圧力がかけられる。注射することができる用量：２７〜３０ゲージ針、０．５インチの長さを使用のこと。
【０１０２】
１つの実施形態にしたがう組成物は、凍結乾燥した形態である場合も、また、凍結乾燥させることができる形態である場合もあり、これには、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤が含まれ、組成物にはさらに、少なくとも１つのアミノ酸安定剤が含まれる。組成物には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤と、凍結乾燥増量剤またはアミノ酸安定剤の少なくとも１つが含まれる場合があり、上記組成物は凍結乾燥した形態である。組成物にはさらに、水性媒体中の所望の生理学的に許容されるｐＨレベルに組成物のｐＨを調整することができる酸性または塩基性ｐＨ調節剤の少なくとも１つ、および上記水性媒体中の上記所望のｐＨを実質的に維持するための緩衝剤が含まれる場合もある。アミノ酸安定剤には、アラニン、リジン、グリシン、またはグルタミン酸の少なくとも１つが含まれる場合がある。アミノ酸安定剤には、少なくとも１つの５０ｍＭのアミノ酸安定化剤が含まれる場合がある。アミノ酸安定剤には、５０ｍＭのグリシンが含まれる場合がある。組成物にはさらに、炭水化物、糖アルコール、単糖、二糖、および多糖、ポリオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、スクロース、またはデキストロースの少なくとも１つが含まれている増量剤が含まれる場合がある。ｐＨ調整剤には、ＮａＯＨまたはＨＣｌの少なくとも一方が含まれる場合がある。緩衝剤には、酢酸、アスコルビン酸、ホウ酸、炭酸、リン酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、またはプロピオン酸の少なくとも１つのナトリウム塩、炭酸もしくはプロピオン酸のカルシウム塩、リン酸のカリウム塩、Ｔｒｉｓ緩衝剤、酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、あるいはホウ酸塩緩衝剤の少なくとも１つが含まれる場合がある。緩衝剤はクエン酸ナトリウムであり得る。緩衝剤は、約０．０５〜１．０の緩衝能を有している場合がある。緩衝剤は、約０．０２〜０．２、または約０．０１〜０．１の緩衝能を有している場合がある。所望のｐＨレベルは、約３．５〜１１．５、約３．５〜９、約４．５〜８、または約５．０〜７．８の範囲であり得る。所望のｐＨレベルは約５．５であり得る。ペプチド剤には、アミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、Ｔβ４のＣ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれ得る。組成物にはさらに、水性媒体が含まれる場合があり、この場合、上記ペプチド剤は、約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で、上記水性媒体の中に存在する。組成物にはさらに、少なくとも１種類のステロイドが含まれる場合がある。
【０１０３】
別の実施形態にしたがう組成物は、被験体の皮膚組織への投与のための組成物であり、これには、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、上記組織の中でのＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤が含まれ、この組成物にはさらに、上記被験体の皮膚組織への投与のための４級アンモニウム塩と局所用担体が含まれる。ペプチド剤には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれ得る。４級アンモニウム塩には、塩化ベンザルコニウムが含まれる場合がある。ペプチド剤は、約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し得、上記４級アンモニウム塩は上記組成物中に、約０．００１〜１重量％で存在し得る。組成物は、溶液剤、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、ローション剤、スプレー、懸濁剤、分散剤、膏薬、ヒドロゲル、軟膏、または泡剤処方物の形態であり得る。組成物は、化粧品処方物である場合もある。
【０１０４】
別の実施形態にしたがう薬学的または化粧品の組み合わせには、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤が含まれる。これらの組み合わせにはさらに、４級アンモニウム塩が含まれ、この場合、上記試薬と上記塩は、被験体に別々に投与することも、また、一緒に投与することもできる。ペプチド剤には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれ得る。４級アンモニウム塩は塩化ベンザルコニウムであり得る。これらの組み合わせには、薬学的組成物、眼科用組成物、または化粧品組成物が含まれる場合があり、これらには、上記ペプチド剤が約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの濃度で含まれている。この場合、上記４級アンモニウム塩は、約０．０００１〜１重量％で上記組成物中に存在し得る。これらの組み合わせには、眼科的に許容される担体をさらに含む眼科用組成物が含まれ得る。この組成物には、点眼用組成物が含まれ得る。
【０１０５】
さらなる実施形態にしたがうと、４級アンモニウム塩の被験体への投与によって生じる組織の劣化、傷害、または損傷を処置する、予防する、阻害する、あるいは軽減するための処置方法には、上記被験体に対して上記４級アンモニウム塩を投与する工程、および上記被験体に対して、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、上記組織の中でのＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤を投与する工程が含まれる。上記薬剤は、上記４級アンモニウム塩の投与の前に、上記４級アンモニウム塩の投与と同時に、または上記４級アンモニウム塩の投与の後に、上記被験体に投与することができる。上記薬剤および上記塩は、組成物として一緒に投与することができる。組成物にはさらに、眼科的に許容される担体が含まれる場合がある。組成物には、点眼用組成物が含まれる場合がある。組成物には、化粧品的に許容される担体が含まれる場合がある。組成物は、溶液剤、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、ローション剤、スプレー、懸濁剤、分散剤、膏薬、ヒドロゲル、軟膏、または泡剤処方物の形態であり得る。ペプチド剤には、アミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、Ｔβ４のＣ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれ得る。４級アンモニウム塩には、塩化ベンザルコニウムが含まれ得る。ペプチド剤は、上記組成物の中に、約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で含まれ得、上記４級アンモニウム塩は、約０．０００１〜１重量％の範囲で、上記組成物中に存在し得る。
【０１０６】
さらに別の実施形態にしたがう組成物には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤と、眼
科的に許容される担体、抗菌有効性の保存剤、上記組成物を眼科的に許容される等張性にするための等張化剤、快適性を高める薬剤、所望の眼科的に許容されるｐＨレベルになるように組成物のｐＨを調整することができる酸性または塩基性ｐＨ調整剤の少なくとも１つ、ならびに上記の所望のｐＨレベルを実質的に維持するための緩衝剤が含まれる。組成物にはさらに、抗酸化剤または酸素封鎖剤の少なくとも１つが含まれる場合もある。抗酸化剤または酸素封鎖剤には、亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ／エデト酸２ナトリウム、酢酸、クエン酸、グルタチオン、アセチルシステイン、またはメチオニンの少なくとも１つが含まれ得る。抗酸化剤または酸素封鎖剤は、約０．０００１〜１．０重量％の範囲の濃度で、上記組成物の中に存在し得る。抗菌有効性の保存剤には、４級アンモニウム化合物、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セタルコニウム、セトリミド、臭化ベンゾドデシニウム、塩化ベンゾキソニウム、チオサリチル酸のアルキル−水銀塩、チメロサール、硝酸フェニル水銀、酢酸フェニル水銀、ホウ酸フェニル水銀、パラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、キレート化剤、エデト酸２ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、アルコール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエタノール、グアニジン誘導体、クロロヘキシジン、ポリヘキサメチレンビグアニド、ソルビン酸、ホウ酸、二酸化塩素、ｐｏｌｙｑｕａｔｅｍｉｕｍ、またはミリスタミドプロピルジエチルアミンの少なくとも１つが含まれ得る。保存剤は、上記組成物中に、約０．０００１〜５．０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で存在し得る。組成物にはさらに、少なくとも１つの眼科的に許容される安定剤が含まれる場合もある。安定剤には、ポリオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、スクロース、アミノ酸安定化剤、アラニン（Ａｌａ）、リジン（Ｌｙｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、およびグルタミン酸（Ｇｌｕ）の少なくとも１つが含まれ得る。安定剤は、上記組成物中に、約０．０１〜１０重量％の範囲の濃度で存在し得る。等張化剤には、イオン性化合物、アルカリ金属ハロゲン化物、アルカリ土類金属ハロゲン化物、ＣａＣｌ２、ＫＢｒ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＮａＢｒ、ＮａＣｌ、ホウ酸、非イオン性化合物、尿素、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール、またはデキストロースの少なくとも１つが含まれ得る。組成物は、約５０から１０００ｍＯｓｍｏｌの範囲の浸透圧を有し得る。調整剤には、ＮａＯＨまたはＨＣＬの少なくとも一方が含まれ得る。緩衝剤には、酢酸のナトリウム塩、アスコルビン酸のナトリウム塩、ホウ酸のナトリウム塩、炭酸のナトリウム塩、リン酸のナトリウム塩、クエン酸のナトリウム塩、グルコン酸のナトリウム塩、乳酸のナトリウム塩、プロピオン酸のナトリウム塩、炭酸のカルシウム塩、プロピオン酸のカルシウム塩、リン酸のカリウム塩、Ｔｒｉｓ緩衝剤、酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、またはホウ酸緩衝剤の少なくとも１つが含まれ得る。所望のｐＨレベルは、約３．５〜１１．５の範囲内にあり得る。緩衝剤は、約０．０５〜１．０の緩衝能を有し得る。ペプチド剤には、アミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、Ｔβ４のＣ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれ得る。組成物にはさらに、水性の媒体が含まれる場合があり、この場合は、上記ペプチド剤は、約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で上記水性媒体の中に存在する。組成物は、溶液剤、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、ローション剤、スプレー、懸濁剤、分散剤、膏薬、ヒドロゲル、軟膏、または泡剤処方物の形態であり得る。組成物には、点眼用組成物が含まれる場合がある。ペプチド剤は、リン脂質膜、リポソーム、マイクロスフェア、ナノ粒子、または生分解性ポリマーの少なくとも１つで封入されて上記組成物の中に存在する場合があり、また、ペプチド−ポリマー結合体として上記組成物の中に存在する場合もある。
【０１０７】
実施例
サイモシンβ４（Ｔβ４）は４３アミノ酸の分子であり、眼の創傷の治癒を促進し、眼の炎症を軽減し、そして角膜上皮に対しては抗アポトーシス効果を有している。本実験では、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）に曝された培養されたヒト角膜上皮細胞の生存性に
対するＴβ４の効果を測定した。
【０１０８】
約８０％のコンフルエンスのヒトの角膜上皮細胞を、０％、０．００１％、０．０１％、または０．１％のＢＡＫで１５分間処理した。培養培地中での回収の３時間および２４時間後に、細胞増殖を、比色ＢｒｄＵ取り込みアッセイを使用して測定した。アポトーシスを、比色によるアネキシンをベースとする細胞死のアッセイを使用して測定した。実験は、１ｍｃｇ／ｍｌのＴβ４（いくつかの公開されている実験において有効であることが明らかにされているインビトロでの投与量）の存在下で繰り返した。アポトーシスを防ぐＴｂ４の能力をさらに評価するために、角膜上皮細胞を、５日間の時間の経過にわたって、０．０１％のＢＡＫ±Ｔβ４で処理した。
【０１０９】
使用した全てのＢＡＫ濃度で、３時間および２４時間の回収時間での対照と比較して、角膜上皮細胞の増殖が阻害され、アポトーシスが増加した。３時間および２４時間の時点では、Ｔβ４はＢＡＫの有害な効果を取り消すことはできなかった；細胞増殖はＴｂ４によっては促進されず、アポトーシスは阻害されなかった。しかし、培養物中での時間が長い（２日間から５日間）場合には、Ｔβ４での処理によって、ＢＡＫによって開始される上皮細胞のアポトーシスが有意に阻害された。加えて、Ｔβ４で処理した細胞は、５日間、培地だけの中で培養した細胞と比較して、少ないアポトーシスを示した。
【０１１０】
多くの市販されている眼科用の溶液に使用されている保存剤であるＢＡＫによって、培養物において角膜上皮細胞のアポトーシスが誘導される。このことは、長期にわたる暴露が角膜の健康に有害であることを示唆している。本明細書中で報告した実験は、Ｔβ４がＢＡＫの有害なプロアポトーシス効果を克服できることを示している。ＢＡＫが含まれている多くの点眼薬は通常、長期にわたって使用されるので、Ｔβ４は、この保存剤が含まれている溶液に対する有用な添加剤であることが示された。
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
関連出願の相互参照
本出願は、２００５年６月１７日に提出された米国仮特許出願番号６０／６９１，２６１、および２００６年２月２８日に提出された米国仮特許出願番号６０／７７６，９４７の権利を請求する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、ＬＫＫＴＥＴおよび／またはＬＫＫＴＮＴ組成物、ならびに方法の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
背景技術の説明
サイモシンβ４は、最初は、インビトロにおいて内皮細胞の移動と分化の間にアップレギュレートされるタンパク質として同定された。サイモシンβ４は当初は胸腺から単離され、そしてこれは、様々な組織の中で同定された４３アミノ酸の、４．９ｋＤａの至るところに存在しているポリペプチドである。いくつかの役割がこのタンパク質に起因するとされており、これには、内皮細胞の分化および移動、Ｔ細胞の分化、アクチンの隔離、血管新生、および創傷の治癒における役割が含まれる。
【０００４】
多くのＴβ４イソ型が同定されており、これらは、Ｔβ４についての既知のアミノ酸配列に対して、約７０％、または約７５％、または約８０％、またはそれ以上の相同性を有している。このようなイソ型としては、例えば、Ｔβ４ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、および、Ｔβ１５が挙げられる。Ｔβ４と同様に、Ｔβ１０およびＴβ１５イソ型は、アクチンを隔離することが示されている。Ｔβ４、Ｔβ１０、およびＴβ１５、ならびにこれらの他のイソ型は、アクチンの隔離または結合を媒介することに関係していると見られているアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたはＬＫＫＴＮＴを共有している。いかなる特定の理論にも束縛されることは望まないが、本明細書中に記載されるペプチド剤の活性は、そのような薬剤の抗炎症活性に少なくとも一部原因がある可能性がある。Ｔβ４はまた、アクチンの重合を調節することもできる（例えば、β−サイモシンは、遊離のＧ−アクチンを隔離することによってＦ−アクチンを脱重合させると見られている）。アクチンの重合を調節するＴβ４の能力は、ＬＫＫＴＥＴまたはＬＫＫＴＮＴ配列を介してアクチンに結合するかまたはアクチンを隔離するその能力が原因である可能性がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
ＬＫＫＴＥＴおよび／またはＬＫＫＴＮＴ組成物、ならびに方法が、当該分野で依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
発明の要旨
組成物には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、または、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、あるいはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤と、眼科的に許容される担体、抗菌有効性の保存剤、眼科的に許容される等張性を有している組成物を提供するための等張化剤、快適性を高める薬剤、組成物のｐＨを所望の眼科的に許容されるｐＨレベルに調整する
ことができる酸性もしくは塩基性ｐＨ調整剤の少なくとも１つ、および所望のｐＨレベルを実質的に維持するための緩衝剤が含まれる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
発明の詳細な説明
様々な目的のために被験体に投与される多くの組成物には、被験体に対して害を及ぼす可能性がある１つ以上の成分が含まれる。
【０００８】
例えば、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）のような保存剤（これは、多くの眼科用製品および化粧品製品の中に存在している）は、製品が投与されると表面の刺激および／または損傷を引き起こす可能性がある。症状には、赤みおよび不快感が含まれ得る。
【０００９】
ＢＡＫのような４級アンモニウム塩が含まれている点眼薬の常用に伴う眼の表面での刺激およびアポトーシスは顕著であり、そして深刻さを増す問題である。患者は、多くの場合は、赤みや、全体的な眼の不快感のような症状を発症する。本発明のペプチド剤（例えば、サイモシンβ４（Ｔβ４））は、ＢＡＫのような４級アンモニウム塩と眼組織との接触と組み合わせて被験体に投与される場合に、眼組織の損傷もしくは傷害を処置するか、または予防するために利用することができる。
【００１０】
本発明を適用することができる４級アンモニウム塩の例としては、ＢＡＫ、セトリミド、塩化ベンゾキソニウムなどが挙げられる。
【００１１】
１つの実施形態にしたがうと、ペプチド剤は、同じ処方物の一部として（例えば、ＢＡＫまたは他の４級アンモニウム塩が含まれている処方物に対する添加剤として）ＢＡＫのような４級アンモニウム塩と一緒に投与される。ＢＡＫのような４級アンモニウム塩は、多くの眼科用溶液（例えば、緑内障用の点眼薬）において保存剤として一般的に使用されている成分である。
【００１２】
別の実施形態においては、ペプチド剤は、ＢＡＫのような４級アンモニウム塩の投与の前に、および／またはＢＡＫのような４級アンモニウム塩の投与の間に、および／またはＢＡＫのような４級アンモニウム塩の投与後に、投与することができる。
【００１３】
１つの実施形態にしたがうと、本発明は、角膜上皮眼組織の損傷を予防すること（そのような眼組織の細胞のアポトーシスを防ぐことが含まれる）において特に有用である。例えば、本発明は、抗緑内障用の点眼薬、または他の点眼薬についてのアジュバントとして利用することができる。
【００１４】
１つの態様にしたがうと、眼科的に許容される組成物には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、またはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤が含まれる。
【００１５】
別の態様にしたがうと、眼組織を処置する方法には、上記眼組織に、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、またはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤が含まれている眼科的に許容される組成物を局所投与する工程が含まれる。
【００１６】
１つの実施形態においては、本発明により、本明細書中に記載されるペプチド剤が含まれている組成物の有効量を眼組織と接触させることによる処置方法が提供される。直接の投与の例としては、例えば、本明細書中に記載されるペプチド剤が含まれている、溶液剤、ローション剤、膏薬、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、スプレー、懸濁剤、分散剤、ヒドロゲル、軟膏、油剤、または泡剤の直接の塗布による組織の接触が挙げられる。
【００１７】
いかなる特定の理論にも束縛されることは望まないが、サイモシンβ４（Ｔβ４またはＴＢ４）のようなアクチン隔離ペプチド、およびアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているアクチン隔離ペプチドまたはペプチド断片が含まれている他の薬剤は、眼組織が健常であるように促進する。
【００１８】
サイモシンβ４は、最初は、インビトロにおいて内皮細胞の移動と分化の間にアップレギュレートされるタンパク質として同定された。サイモシンβ４は当初は胸腺から単離され、そしてこれは、様々な組織の中で同定された４３アミノ酸の、４．９ｋＤａの至るところに存在しているポリペプチドである。いくつかの役割がこのタンパク質に起因するとされており、これには、内皮細胞の分化および移動、Ｔ細胞の分化、アクチンの隔離、血管新生、および創傷の治癒における役割が含まれる。
【００１９】
１つの実施形態にしたがうと、本発明は、サイモシンβ４、および／またはＴβ４イソ型、類似体または誘導体（ＫＬＫＫＴＥＴ、ＬＫＫＴＥＴＱ、酸化型Ｔβ４、Ｔβ４スルホキシド、Ｔβ４のＮ末端変異体、およびＴβ４のＣ末端変異体が含まれる）に好ましく適用できる。
【００２０】
１つの実施形態にしたがうと、本発明にしたがって使用することができる組成物にはサイモシンβ４（Ｔβ４）、および／またはＴβ４イソ型、類似体、または誘導体（Ｔβ４スルホキシドを含むＴβ４の酸化された形態、Ｔβ４のＮ末端変異体、およびＴβ４のＣ末端変異体が含まれる）、ならびにアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴおよびその保存的変異体が含まれているまたは本質的にそれらから構成されているポリペプチドまたはペプチド断片のようなペプチド剤が含まれる。国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ９９／１７２８２（引用により本明細書中に組み入れられる）には、本発明にしたがって有用であり得るＴβ４のイソ型、さらには、本発明とともに利用することができるアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴおよびそれらの保存的変異体が開示されている。国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９９／００８３３（ＷＯ９９／４９８８３）（引用により本明細書中に組み入れられる）には、本発明にしたがって利用することができる酸化型のサイモシンβ４が開示されている。本発明を、主にＴβ４およびＴβ４イソ型に関して、本明細書中以下に記載するが、以下の記載は、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているかまたは本質的にそれらから構成されているペプチドおよび断片、ならびに／あるいはＴβ４イソ型、類似体、または誘導体（酸化型Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、およびＴβ４のＣ末端変異体が含まれる）にも同様に適用できるように意図されることが理解される。
【００２１】
１つの実施形態にしたがうと、本発明の組成物は、１日に１回、１日おきに、１週間おきに、１ヶ月おきになどで、投与日１日につき１回の投与または複数回の投与（例えば、投与日１日につき２回、３回、４回、またはそれ以上の投与回数）で投与することができる。
【００２２】
多くのＴβ４イソ型が同定されており、これらは、Ｔβ４についての既知のアミノ酸配列に対して、約７０％、または約７５％、または約８０％、またはそれ以上の相同性を有している。このようなイソ型としては、例えば、Ｔβ４ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、およびＴβ１５が挙げられる。Ｔβ４と同様に、Ｔβ１０およびＴβ１５イソ型は、アクチンを隔離することが示されている。Ｔβ４、Ｔβ１０、およびＴβ１５、ならびにこれらの他のイソ型は、アクチンの隔離または結合を媒介することに関係していると見られているアミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたはＬＫＫＴＮＴを共有している。Ｔβ４は、抗炎症活性を有しており、また、アクチンの重合を調節することもできる（例えば、β−サイモシンは、遊離のＧ−アクチンを隔離することによっ
てＦ−アクチンを脱重合させると見られている）。Ｔβ４のアクチンの重合を調節する能力は、ＬＫＫＴＥＴまたはＬＫＫＴＮＴ配列を介してアクチンに結合するかまたはアクチンを隔離するその能力が原因である可能性がある。したがって、Ｔβ４と同様に、抗炎症性であり、そして／また、アクチンに結合するかもしくはアクチンを隔離する、またはアクチンの重合を調節する他のタンパク質（アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴを有しているＴβ４イソ型が含まれる）は、本明細書中で示されるように、単独で、またはＴβ４と組み合わせて有効であるようである。
【００２３】
したがって、既知のＴβ４イソ型（例えば、Ｔβ４ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、および、Ｔβ１５）、ならびにまだ同定されていないＴβ４イソ型も、本発明の方法に有用であろうということが具体的に予想される。したがって、そのようなＴβ４イソ型は、被験体において行われる方法が含まれる、本発明の方法において有用である。したがって、本発明によってはさらに、Ｔβ４、ならびにＴβ４イソ型（Ｔβ４ａｌａ、Ｔβ９、Ｔβ１０、Ｔβ１１、Ｔβ１２、Ｔβ１３、Ｔβ１４、および、Ｔβ１５）と、眼科的に許容される担体を含む組成物が提供される。
【００２４】
加えて、坑炎症活性および／またはアクチンを隔離するかもしくはアクチンに結合する能力を有しているか、あるいは、適切なアクチンの隔離、結合、移動、もしくは重合アッセイにおいて明らかであるか、またはアクチンの結合を媒介するアミノ酸配列（例えば、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ）の存在によって同定される、アクチンを移動させることができるかまたはアクチンの重合を調節することができる他の薬剤またはタンパク質も、本発明の方法において同様に使用することができる。このようなタンパク質としては、例えば、ゲルゾリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、デパクチン、ＤｎａｓｅＩ、ビリン、フラグミン、セヴェリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン、およびアキュメンチンを挙げることができる。このような方法には、被験体において行われる方法が含まれるので、本発明によってさらに、本明細書中に示されるように、ゲルゾリン、ビタミンＤ結合タンパク質（ＤＢＰ）、プロフィリン、コフィリン、デパクチン、ＤｎａｓｅＩ、ビリン、フラグミン、セヴェリン、キャッピングタンパク質、β−アクチニン、およびアキュメンチンが含まれている薬学的組成物が提供される。したがって、本発明には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴまたはＬＫＫＴＮＴ、およびそれらの保存的変異体が含まれているポリペプチドの使用が含まれる。
【００２５】
本明細書中で使用される場合は、用語「保存的変異体」またはその文法上のバリエーションは、別の生物学的に類似している残基による１つのアミノ酸残基の置き換えを示す。保存的なバリエーションの例としては、イソロイシン、バリン、ロイシン、またはメチオニンのような疎水性残基の、別のものでの置き換え、極性残基の別のものでの置き換え（例えば、アルギニンのリジンでの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸での置換、またはグルタミンのアスパラギンでの置換など）が挙げられる。
【００２６】
１つの実施形態にしたがうと、本発明の組成物は点眼用処方物である。
１つの実施形態にしたがうと、本発明で使用される組成物には、本明細書中に記載されるペプチド剤が、１ｍｌあたり約０．００１〜１０００マイクログラム（ｍｃｇ／ｍｌ）、より好ましくは、約０．１〜１００ｍｃｇ／ｍｌ、最も好ましくは、約１〜１０ｍｃｇ／ｍｌの範囲の濃度で含まれる。特に好ましい実施形態においては、ペプチド剤はＴβ４である。
【００２７】
１つの実施形態にしたがうと、本発明は、眼組織の、約０．０００１〜１重量％の範囲、好ましくは約０．００１〜０．１重量％の範囲、より好ましくは約０．００２〜０．０５重量％の範囲の濃度の４級アンモニウム塩（例えば、ＢＡＫ）との接触によって生じる眼組織の損傷もしくは傷害を処置または予防するために有用である。１つの実施形態にお
いては、４級アンモニウム塩は、約０．００５〜０．０２重量％の濃度である。
【００２８】
１つの実施形態にしたがうと、本発明にはまた、眼科的に許容される担体の中に本明細書中に記載されるペプチド剤が含まれている薬学的組成物が含まれる。このような担体としては、例えば、本明細書中に列挙される担体が挙げられる。
【００２９】
１つの実施形態にしたがうと、処置を提供する実際の投与量または試薬、処方物または組成物は、被験体の大きさおよび健康状態を含む多くの要因に依存する。しかし、当業者は、ＰＣＴ／ＵＳ９９／１７２８２（前出）およびその中で引用されている参考文献の中に開示されている臨床的な投与量を決定するための方法および技術を記載している教示を、使用する適切な投与量を決定するために使用することができる。
【００３０】
１つの実施形態にしたがうと、本明細書中に記載されるペプチド剤を使用するまたはペプチド剤が含まれている方法および組成物は、眼科的に許容される非毒性の賦形剤または担体との混合によって、組成物へと処方することができる。
【００３１】
１つの実施形態にしたがうと、活性化合物が含まれている局所用処方物にはまた、眼科の分野の当業者であれば通常の基準を使用して選択することができるような、生理学的に適合性の媒体も含めることができる。媒体は、既知の眼科用の媒体から選択することができ、これには、生理食塩溶液、水、ポリエーテル（例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニル（例えば、ポリビニルアルコールおよびポビドン）、セルロース誘導体（例えば、メチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース）、石油派生物（例えば、鉱油および白色ワセリン）、動物性油脂（例えば、ラノリン）、アクリル酸のポリマー（例えば、カルボキシポリメチレンゲル）、植物性油脂（例えば、ピーナッツ油）、および多糖（例えば、デキストラン）、ならびにグリコサミノグリカン（例えば、ヒアルロン酸ナトリウム）、および塩（例えば、塩化ナトリウムおよび塩化カリウム）が含まれるが、これらに限定はされない。
【００３２】
１つの実施形態にしたがうと、眼科用組成物は、特に、溶液、懸濁液、軟膏、ゲル剤、または泡剤の形態で、眼への局所投与に有利である。
【００３３】
１つの実施形態にしたがうと、当業者に既知の通常の薬学的に許容される賦形剤および添加剤（例えば、以下に記載される種類のもの、具体的には、担体、安定剤、可溶化剤、等張促進剤、緩衝物質、保存剤、増粘剤、錯化剤、および他の賦形剤）が、対応する眼科用組成物に使用される。このような添加剤および賦形剤の例は、米国特許第５，１３４，１２４号および同第４，９０６，６１３号に見ることができる。このような組成物は、それ自体既知の様式で、例えば、有効成分を対応する賦形剤および／または添加剤と混合して、対応する眼科用組成物を形成させることによって調製される。有効成分は、好ましくは、点眼薬の形態で投与され、有効成分は通常は、例えば、担体に溶解させられる。溶液は、適切である場合には、所望のｐＨに調整され、および／または緩衝化させられ、適切である場合には、安定剤、可溶化剤、または等張促進剤が添加される。適切である場合には、保存剤および／または他の賦形剤が、眼科用組成物に添加される。
【００３４】
本発明にしたがって使用される担体は、通常、局所投与または全身投与に適しており、例えば、水、水と水混和性溶媒（例えば、Ｃ１〜Ｃ７アルカノール、植物油、あるいは０．５から５重量％のヒドロキシエチルセルロース、オレイン酸エチル、カルボキシメチルセルロース、ポリビニル−ピロリドン、および眼科用の他の非毒性の水溶性ポリマー、例えば、セルロース誘導体（例えば、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルセルロースのアルカリ金属塩）、アクリレートまた
はメタクリレート（例えば、ポリアクリル酸またはアクリル酸エチルの塩、ポリアクリルアミド）、天然物（例えば、ゼラチン、アルギン酸塩、ペクチン、トラガカント、キラヤゴム、キサンタンゴム、カラギーナン、寒天およびアカシア）、デンプン誘導体（例えば、酢酸デンプンおよびヒドロキシプロピルデンプン）、ならびに他の合成の産物（例えば、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリエチレンオキサイド、好ましくは、架橋されたポリアクリル酸、例えば、中性のカルボポール、またはそのようなポリマーの混合物が含まれている鉱油）の混合物である。好ましい担体は、水、セルロース誘導体、例えば、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルセルロースのアルカリ金属塩、中性のカルボポール、あるいはそれらの混合物である。
【００３５】
１つの実施形態にしたがうと、本発明の眼科用組成物に使用される安定剤は、例えば、チロキサポール、脂肪酸グリセロールポリ−低級アルキレングリコールエステル、脂肪酸ポリ−低級アルキレングリコールエステル、ポリエチレングリコール、グリセロールエーテル、またはこれらの化合物の混合物である。添加される量は、通常、有効成分を可溶化させるために十分な量である。例えば、安定剤の濃度は、有効成分の濃度の０．１から５０００倍である。低級アルキレンは、７個までのＣ原子を有する直鎖または分岐状のアルキレンを意味する。例は、メチレン、エチレン、１，３−プロピレン、１，２−プロピレン、１，５−ペンチレン、２，５−ヘキシレン、または１，７−ヘプチレンである。低級アルキレンは、好ましくは、４個までのＣ原子を有する直鎖または分岐状のアルキレンである。
【００３６】
緩衝物質の例は、酢酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、炭酸水素塩／炭酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、乳酸塩、リン酸塩、プロピオン酸塩、およびＴＲＩＳ（トロメタミン）緩衝剤である。トロメタミンおよびホウ酸緩衝剤が好ましい緩衝剤である。添加される緩衝物質の量は、例えば、生理学的に許容されるｐＨの範囲を確保する、および維持するために必要な量である。ｐＨ範囲は、通常は５から９、好ましくは６から８．２、より好ましくは６．８から８．１までの範囲である。
【００３７】
等張促進物質は、例えば、イオン性化合物であり、例えば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属ハロゲン化物、例えば、ＣａＣｌ２、ＫＢｒ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＮａＢｒ、ＮａＣｌ、またはホウ酸である。非イオン性等張促進物質は、例えば、尿素、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール、またはデキストロースである。例えば、十分な等張促進物質が、約５０から１０００ｍＯｓｍｏｌ、好ましくは１００から４００ｍＯｓｍｏｌ、より好ましくは２００から４００ｍＯｓｍｏｌ、なお一層好ましくは２８０から３５０ｍＯｓｍｏｌの浸透圧を、未使用の眼科用組成物に付与するために添加される。
【００３８】
保存剤の例は、４級アンモニウム塩、例えば、セトリミド、塩化ベンザルコニウム、または塩化ベンゾキソニウム、チオサリチル酸のアルキル−水銀塩、例えば、チメロサール、硝酸フェニル水銀、酢酸フェニル水銀、またはホウ酸フェニル水銀、パラベン、例えば、メチルパラベンまたはプロピルパラベン、アルコール、例えば、クロロブタノール、ベンジルアルコール、またはフェニルエタノール、グアニジン誘導体、例えば、クロロヘキシジンまたはポリヘキサメチレンビグアニド、またはソルビン酸である。好ましい保存剤は、セトリミド、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゾキソニウム、およびパラベンである。適切である場合には、十分な量の保存剤が、細菌および真菌によって引き起こされる使用の間の２次的な汚染に対する防御を確実にするために、眼科用組成物に添加される。
【００３９】
１つの実施形態にしたがうと、眼科用組成物には、さらに非毒性の賦形剤、例えば、乳
化剤、湿潤剤または充填剤、例えば、２００、３００、４００、および６００と指定されているポリエチレングリコール、または１０００、１５００、４０００、６０００、および１００００と指定されているカルボワックスが含まれる場合がある。所望される場合に使用することができる他の賦形剤が以下に列挙されるが、これらは、決して可能な賦形剤の範囲を限定するようには意図されない。これらは、特に、錯化剤（例えば、２ナトリウム−ＥＤＴＡまたはＥＤＴＡ）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、アセチルシステイン、システイン、亜硫酸水素ナトリウム、ブチル−ヒドロキシアニソール、ブチル−ヒドロキシ−トルエン、またはα−酢酸トコフェロール）；安定剤（例えば、シクロデキストリン、チオ尿素、チオソルビトール、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウムまたはモノチオグリセロール）；あるいは、他の賦形剤（例えば、ラウリン酸ソルビトールエステル、オレイン酸トリエタノールアミン、またはパルミチン酸エステル）である。好ましい賦形剤は、錯化剤（例えば、２ナトリウム−ＥＤＴＡ）および安定剤（例えば、シクロデキストリン）である。添加される賦形剤の量および種類は、特定の要件にしたがい、そして一般的には、約０．０００１から約９０重量％までの範囲である。シクロデキストリンは、１個のグルコースについて３個の遊離のヒドロキシ基を有している、いくつかのグルコース単位から構成される。使用されるシクロデキストリンの量は、１つの実施形態にしたがうと、好ましくは０．０１〜２０重量％まで、より好ましくは０．１〜１５重量％まで、なお一層好ましくは１〜１０重量％までの範囲であり得る。
【００４０】
１つの実施形態にしたがうと、本発明はまた、眼科用組成物に関し、これには、治療有効量の本明細書中に記載されるペプチド剤、担体、可溶化剤、および別の治療上有効である医薬品（これは、例えば、抗生物質、抗アレルギー薬、麻酔薬、別の消炎剤、コルチコステロイド、眼内圧を下げるために適している薬剤、あるいは別の薬物であり得る）が含まれる。
【００４１】
ｐＨ（水素イオン濃度）
１つの実施形態にしたがうと、本発明の処方物のｐＨは、可能な限り涙液層のｐＨに近づけられるべきである。涙液の生理学的ｐＨは、約７．４±０．２である。したがって、快適性、耐容性、および安全性の観点から、これは、眼科用調製物の最適なｐＨである。
【００４２】
涙液の分泌およびまばたきの刺激によって、ｐＨ値の低下が生じる。まぶたが長時間開かれたままとなると、涙液層は、周辺の空気中のＣＯ２の分圧との平衡によってアルカリ化され、９を超えるｐＨ値に達する。ｐＨの低下および上昇のいずれにも、不都合な結果は伴わない。したがって、本発明の処方物を約７．４のｐＨの周辺になるように処方する際のｐＨ範囲にはある程度の自由度がある。
【００４３】
また、処方物が眼に投与されると、これは、涙の流出を刺激する。涙液は、少量の添加された物質を迅速に稀釈し、緩衝化することができ、このことは、眼が特定の処方物によってもたらされる極めて広いｐＨ範囲を許容できることを示唆している。
【００４４】
結果として、眼科用処方物は、約ｐＨ３．５から１１．５までの範囲であり得る。しかし、眼科用処方物は、これよりいくぶん狭い３．５から９までのｐＨ範囲、好ましくは４．５から８まで、最も好ましくはｐＨ５．５から７．８までのｐＨ範囲を示し得る。最も好ましいｐＨ範囲が、本発明の組成物の可溶性、化学的安定性、および治療活性の観点から有利であり、有用かつ比較的狭い範囲によって角膜の損傷が防がれる。
【００４５】
緩衝システム
１つの実施形態にしたがうと、緩衝システムは、弱酸または弱塩基と、その共役塩から構成される。このシステムの中の成分の緩衝能は、酸または塩基の添加、および温度、圧力、容積、酸化還元電位、体液および涙液の外的な影響に曝された場合にも、ｐＨを原則
として一定に維持できるであろう方法で作用する。緩衝能は、合理的な保存期間（すなわち、保存条件）についての生成物のｐＨの変化（すなわち、ｐＨドリフト）に耐えるに十分に大きくなければならないが、本発明の眼科用処方物の緩衝能は、眼に投与された時に、生成物を生理学的ｐＨに迅速に再調整することができるように十分に低くなければならない。１つの実施形態にしたがうと、眼科用製品の緩衝能は、０．０５から１．０の範囲でなければならない。好ましくは、そして最も好ましい緩衝能は、特定の本発明の組成物について、それぞれ、０．０２から０．２、および０．０１から０．１の範囲である。緩衝能は、以下の式によって決定される：
＊β＝ΔＢ／ΔｐＨ
式中、βは緩衝能であり、ΔＢは１リットルの緩衝溶液のｐＨを変化させるための強酸／塩基のグラム等量であり、ΔｐＨは、強酸／塩基の添加によって引き起こされる変化である。
【００４６】
１つの実施形態にしたがうと、適切な緩衝システムは、以下の酸のナトリウム塩であり得る：酢酸；アスコルビン酸；ホウ酸；炭酸；リン酸；クエン酸；グルコン酸；乳酸；およびプロピオン酸。炭酸またはプロピオン酸のカルシウム塩は、リン酸のカリウム塩がそうであるのと同様に、適切な緩衝システムを形成する。Ｔｒｉｓ緩衝剤（トロメタミン）が、代謝性アシドーシスの修正のためのアルカリ化薬として静脈内で使用され、そしてこれは、本発明で使用される好ましい緩衝剤の１つである。他の好ましい緩衝剤は、酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、およびホウ酸塩である。特定の例においては、タンパク質のアミノ酸残基のプロトンドナーとプロトンアクセプタ基が関与している緩衝システムが、酸−塩基またはアミン−塩基緩衝剤に好ましい場合がある。
【００４７】
使用される緩衝物質の具体的な量は、本発明の組成物の安定性に適しているｐＨ環境を維持するため、および生理学的に許容されるｐＨ範囲を確実にし、維持するために必要な量に応じて様々であり、変化する。
【００４８】
等張化剤
本明細書中に列挙されるもののうち、目的のものは、自然な涙のものとほぼ生理学的に等張性（例えば、０．９％の生理食塩水）となるように本発明の眼科用組成物の等張性を調節するものである。例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、デキストロース、および／またはマンニトールを、本発明のペプチド剤処方物に添加することができる。等張化剤の量は、添加される特定の薬剤に応じて様々である。一般的には、特定の本発明の組成物には、最終的な組成物が眼科的に許容される浸透圧、好ましくは１５０〜４５０ｍＯｓｍ、最も好ましくは２５０〜３５０ｍＯｓｍを有するために十分な量の等張化剤が含まれる。
【００４９】
好ましい等張化剤は、ナトリウム塩およびカリウム塩、具体的には、塩化ナトリウムおよび塩化カリウムである。最も好ましい等張化剤は塩化ナトリウムである。
【００５０】
潤滑剤／鎮痛薬／増粘剤
１つの実施形態にしたがうと、眼を落ち着かせ、表面張力を低下させ、そして別の疎水性角膜上皮表面の湿潤性を改善する（コンタクト）、涙の濃度に近づける複数の化合物が含まれる場合がある。このような化合物はまた、本発明の組成物の粘度を高めることができ、それによって、本発明の処方物はより長い間、眼の中に留まることができ、したがって、ペプチド剤はその治療活性をもっと発揮することができるか、または、所望の標的に達するように吸収される。
【００５１】
特定の本発明の組成物において使用される眼科用処方物に適切な増粘剤、およびそれらの濃度範囲としては、以下が挙げられるが、これらに限定はされない：（ａ）モノマーで
あるポリオール、例えば、チロキサポール（０．１〜１％）、グリセロール（０．２〜１％）、プロピレングリコール（０．２から１％）、エチレングリコール（０．２〜１％）；（ｂ）ポリマーであるポリオール、例えば、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００）（０．２〜１％）；（ｃ）セルロース誘導体（セルロースファミリーのポリマー）、例えば、ヒドロキシエチルセルロース（０．２〜２．５％）、ヒプロメロース（０．２から２．５％）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（０．２〜２．５％）、メチルセルロース（０．２〜２．５％）、カルボキシメチルセルロースナトリウム（０．２から２．５％）、ヒドロキシプロピルセルロース（０．２〜２．５％）；（ｄ）デキストラン、例えば、デキストラン７０（別のポリマー性鎮痛薬と共に使用される場合は、０．１％）；（ｅ）水溶性タンパク質、例えば、ゼラチン（０．０１％）；（ｆ）ビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコール（０．１〜４％）、ポリビニルピロリドン（０．１〜４％）；（ｇ）他のポリオール、例えば、ポリソルベート８０（０．２〜１％）、ポビドン（０．１〜２％）；（ｈ）カルボマー、例えば、カルボマー９３４Ｐ、カルボマー９４１、カルボマー９４０、およびカルボマー９７４Ｐ、ならびに（ｉ）多糖／グリコサミノグリカン、例えば、ヒアルロナン（ヒアルロン酸／ヒアルロン酸塩）（０．１〜３％）、コンドロイチン硫酸（０．１〜３％）。
【００５２】
２種類以上の増粘剤が、担体（媒体）の粘度を高めるために本発明の組成物に添加される場合がある。本発明のペプチド剤処方物の担体の中の好ましい増粘剤は、カルボキシメチルセルロースである。
【００５３】
粘度
粘度は、応力がかけられた場合に流動する、または形態を変化させるための物質の内部抵抗を記載する。物質（溶液、半粘性ゲル、懸濁液、油性軟膏および軟膏ゲル（粘性ゲル））の粘度は、ポアズ単位で提供される。単位「センチポアズ（「ｃｐ」または複数形は「ｃｐｓ」）は、０．０１ポアズに等しく、そして薬学的用途において最も頻繁に使用される。粘度を高めるために使用される化合物は、１５ｃｐｓ、１００ｃｐｓなどの様々なグレードで利用することができる。グレードの数は、増粘剤の一定の割合の水溶液が得られると生じる粘度を意味する。一般的には、溶液は１％または２％であるが、しかし、これらは、特定の増粘剤を用いる場合には、４％のように高い場合もある。粘度は、２０℃または２５℃で測定される。
【００５４】
眼科用溶液中での適切な粘度は、２５から５０センチポアズ（ｃｐｓ）の間である。所望の粘度を生じるために必要な増粘剤の実際の濃度は、増粘剤のグレードに応じて様々である。例えば、メチルセルロース２５ｃｐｓが使用される場合は、１％の溶液によって２５ｃｐｓの粘度が生じる。メチルセルロース４０００ｃｐｓが使用される場合は、０．２５％の溶液によって所望の粘度が提供される。標準的な参考文献によって、溶液の割合（％）によって生じる粘度と成分のグレードの表が提供されている。
【００５５】
１つの実施形態にしたがうと、本発明の処方物は、＞１から１００，０００センチポアズ（ｃｐｓ）、またはそれ以上の粘度を示す。本発明の軟膏組成物（油性ゲルまたは粘性ゲル）は、１００，０００ｃｐｓよりも高い粘度のグレードを有する場合がある。これは、眼科用軟膏が、意図される使用領域から流れてしまうことを防ぐために、残留する場合には厚みを持たせることが意図されるからである。塗布後、そして経時的に、これらの軟膏がのせられた結膜嚢の中、および眼の表面上の温度によって、これらの軟膏は「溶け」、そして流れはじめる。
【００５６】
様々な本発明の処方物の種類についての好ましい粘度の範囲は以下の表に見られる：
【００５７】
【表１】
【００５８】
還元剤／抗酸化剤／酸素封鎖剤
特定の本発明の組成物は、酸化によって分解される可能性がある。結果として、本発明の組成物の製造、制御、および包装の間に、酸化されやすい本発明の組成物を保護する工程が含まれる場合があり、これは、（１）窒素またはアルゴンのような密度の高い不活性ガスで酸素を置き換えること、（２）酸化作用を最少にするために還元剤を添加すること、（３）デコイ分子の導入による。
【００５９】
０．１％またはそれ以上の濃度までで眼科用処方物において使用することができる一般的な抗酸化（還元）剤は、亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、およびチオ尿素である。亜硫酸塩は、特定のヒトにおいてはアレルギー型の反応を引き起こす可能性があり、結果として、この種類の抗酸化剤を投与される患者には、抗酸化剤が含まれている本発明の組成物で処置される前に、この可能性のある反応について質問しなければならない。本発明の組成物と適合する他の有用な抗酸化剤は、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ／エデト酸２ナトリウム、酢酸、クエン酸、グルタチオン、およびアセチルシステインである。これらの薬剤はまた、安定剤とみなされる場合もある。
【００６０】
デコイ分子または酸素封鎖保護剤が、本発明の処方物に対する酸化作用を最少にするために本発明の処方物に対して安定剤として添加される場合もある。分子デコイは、少なくとも本発明の処方物と同じ程度の、酸化される能力を有していなければならない。メチオニンが含まれている本発明の組成物についての１つのこのようなデコイは、アミノ酸であるメチオニン自体である。アミノ酸であるメチオニンが含まれている本発明の組成物に添加された遊離のメチオニンは、メチオニルスルホキシドに酸化される過程において酸素と競合する。遊離の酸素を消費する薬剤は、本発明の組成物／ペプチド中の他の酸素反応性アミノ酸が酸化されることを防ぐものである。特定の本発明の組成物の目的については、限定はされないが、遊離の酸素を消費する薬剤はメチオニンである。
【００６１】
眼科用軟膏／油性の皮膚軟化剤基剤
眼科用軟膏は、懸濁剤および確実に溶液剤よりも長い間、有効成分を眼と接触させたまま維持する傾向がある。ほとんどの軟膏は、視力をかすませる傾向があり、これは、これらが涙液によっては容易には除去されないとの理由による。したがって、軟膏は、一般的には、日中使用される点眼薬に対して、付加的治療として夜に使用される。
【００６２】
本発明の組成物の油性軟膏基剤は、鉱油、ワセリン、およびラノリンの混合物であり、これらは全て、体温に近い融点を有している。本発明の化合物の場合には、組成物には、鉱油、ワセリン、またはラノリンが含まれ得る。１つの実施形態にしたがうと、好ましい組成物には、ワセリン、鉱油、およびラノリンの混合物が含まれる。最も好ましい組成物は、白色ワセリン、鉱油、およびラノリン（無水物）が含まれている軟膏混合物である。
【００６３】
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、またはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤は、溶解させるために、少量の精製水または０．９％の生理食塩水に
溶解させられる。この水溶液は、無水ラノリンの中に組み込まれ、その後、「液体」ラノリン（１０％まで）が、残りの軟膏／油性皮膚軟化剤基剤成分、鉱油（３０％まで）、および白色ワセリン（６０％まで）と混合される。
【００６４】
眼科用軟膏のチューブは、通常は、約１〜５グラム、好ましくは３．５グラムの少量の軟膏を保持しており、投与の目的のためにインチで、またはその分数で測定される軟膏の細い帯の押し出しを可能にする、狭いゲージのチップが取り付けられている。
【００６５】
保存剤
滅菌性は、全ての眼科用処方物についての絶対要件である。汚染された処方物は、眼の感染を生じる可能性があり、これは、特に緑膿菌の細菌が含まれている場合には、最終的に失明を生じる可能性がある。したがって、本明細書中に記載される眼科用処方物は、滅菌性を確保する、本発明の組成物の溶液剤、ゲル剤、懸濁剤、および軟膏に特有の技術を使用して調製されなければならない。無菌の処方物は、滅菌容器の中に包装されなければならない。ほとんどの局所用の眼科用製品は、通常、多用量形態で包装される。このように、保存剤は、使用の際の残りの滅菌製品の微生物汚染を防ぐために必要である。適切な保存剤としては以下が挙げられる：４級アンモニウム化合物（塩）、例えば、塩化ベンザルコニウム（０．００１から０．０２％）、塩化ベンゼトニウム、塩化セタルコニウム、セトリミド、臭化ベンゾドデシニウム、および塩化ベンゾキソニウム；チオサリチル酸のアルキル−水銀塩、例えば、チメロサール（０．００１から０．００５％）；パラベン、例えば、メチルパラベンおよびプロピルパラベン；キレート化剤、例えば、エデト酸２ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム；他の薬剤、例えば、クロロブタノール、ホウ酸、ソルビン酸、フェニルエタノール（０．２５％）；Ｐｕｒｉｔｅ（登録商標）二酸化塩素；Ｐｏｌｙｑｕａｄ（登録商標）ポリクオタミウム（ｐｏｌｙｑｕａｔｅｍｉｕｍ）−１（０．００１％）；ならびにＡｌｄｏｘ（登録商標）ミリスタミドプロピルジエチルアミン（０．００５％）；または当業者に既知の他の薬剤。
【００６６】
このような保存剤は、通常、細菌、かび、および真菌によって引き起こされる使用の間の２次的な微生物の混入に対する防御を確実にするために、０．００１％から１．０％（ｗ／ｖ）のレベルで使用される。
【００６７】
眼科用処方物での使用について現在承認されている、以下の選択された保存剤の最大濃度が、以下の表に示される：
【００６８】
【表２】
【００６９】
適切な保存剤の選択は、選択された本発明の組成物に応じたその抗菌有効性に基づく。本発明の処方物において使用される好ましい保存剤は、メチルパラベン（０．０８０％〜１％）とプロピルパラベン（０．０１６％〜０．０２４％）の組み合わせ、塩化ベンザル
コニウム（ＢＡＫ）（０．００５％〜０．０２％、この場合、０．０１％ｗ／ｖが最も好ましい）、ＢＡＫとＥＤＴＡ（０．０１〜０．５％）の組み合わせ（これらは一緒に使用されると相乗作用を有する）である。
【００７０】
本発明の単位用量の組成物は無菌であるが、保存されない。大抵の場合、このような組成物には保存剤は含まれていない。結果としては、これらの組成物は再使用することはできず、一旦開封されると、これらは廃棄されなければならない。
【００７１】
増量剤／安定剤
増量剤／安定剤（単数または複数）は、長期間にわたる保存の間、本発明の組成物を含む潤滑剤、皮膚軟化剤、または媒体促進剤の水和状態を維持するために有効である場合がある。これらの物質のポリマー鎖の中に、またはポリマー鎖の間で、これらの鎖の水和状態の還元に好ましい時間の後に会合が起こるようである。これらの会合は、ポリマー鎖の中、およびポリマー鎖の間での水素結合の形態であり得、これは、本発明の眼科用処方物／組成物の粘度および質感の変化として発現し得る。凍結乾燥増量剤（これは、主二糖である）はまた、ストレス防止剤とも考えることができ、これによって、凍結乾燥のサイクルの間、化合物が保護される。水和のこの還元された状態を大きく減速させるかまたは排除する薬剤は、安定剤または水和促進剤の種類であり、０．２から５重量％の濃度のポリオールである。このようなポリオールの代表的なものは、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、スクロース、関連する糖などである。最も好ましい安定剤は、０．２重量％から５重量％までの濃度範囲の含水性マンニトールである。
【００７２】
加えて、５０ｍＭのアミノ酸安定化剤（例えば、アラニン（Ａｌａ）、リジン（Ｌｙｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、およびグルタミン酸（Ｇｌｕ））が、凍結乾燥後の再構成された水溶液からの回収を改善するために、配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている処方されたペプチド剤に取り込まれている。好ましいアミノ酸安定化剤はアルギニンおよびグリシンであるが、最も好ましい５０ｍＭのアミノ酸は、グリシンである。
【００７３】
本発明のペプチドの投与
例示的な局所送達（表面作用効果）
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤は、例えば、以下を処置するための局所効果のために、眼の表面に投与される：
１．化学的熱傷、再発性の角膜びらん、外科手術、角膜再生手順、レーザーを使用したインサイチュ角膜曲率形成術（ＬＡＳＩＫ）の際の上皮創面切除（これらに限定はされない）によって引き起こされる角膜上皮の創傷；
２．４級アンモニウム塩（例えば、ＢＡＫ）などによって引き起こされる角膜上皮の薄化；
３．例えば、結膜炎、眼瞼炎、角膜炎、ブドウ膜炎、強膜炎、網膜炎、視神経炎、および側頭動脈炎を処置するための、眼の炎症（単独、またはコルチコステロイドとの組み合わせ）；
４．微生物感染（単独で、または抗菌剤、抗真菌剤、もしくは抗ウイルス剤と組み合わせて、または、抗菌剤と抗炎症剤の両方と組み合わせて）；
５．ドライアイ症候群（眼球乾燥症）；
６．充血した眼［単独で、または眼を白くするための眼球のうっ血除去剤（結膜炎のアドレナリン作動性血管収縮剤）、例えば、エフェドリン、ナファゾリン、フェニルエピリン、テトラヒドロゾリン、および抗ヒスタミン（例えば、マレイン酸フェニラミン）と組み合わせて］
７．高い眼内圧（ＩＯＰ）および緑内障；ならびに
８．外傷性の損傷もしくは外科手術後の炎症または刺激性の症状、あるいは、様々な眼の刺激性疾患。
【００７４】
局所用の本発明のペプチド剤は、溶液剤、懸濁剤、ゲル剤、および軟膏として処方される。本発明のペプチド剤処方物は直接投与することができ、また、コラーゲンスポンジ、挿入物などによって間接的に投与することもできる。個々の眼科用製品（局所用眼科薬が含まれる）は、眼への微生物の混入を防ぐために、その最終的な容器の中で無菌でなければならない。２回以上使用される多用量の容器の中に包装される場合には、一旦容器が開封されても滅菌性を維持するために、保存剤が処方物に添加される。眼科用処方物には、処方物のｐＨ、緩衝能、粘度、および等張性が注意深く制御されることが必要である。好ましいｐＨ範囲、緩衝剤、粘度、および等張性は、本明細書中に記載されている。
【００７５】
例示的な処方物：点眼薬用の局所用溶液
局所投与される本発明のペプチド処方物には、１ミリリットルにつき、以下に示されるように、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている以下のペプチド剤が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００７６】
好ましい担体／媒体：２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；精製水、ＵＳＰ。
【００７７】
例示的な処方物：点眼薬用の局所用懸濁液
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴが含まれているペプチド剤を含む眼科用懸濁液に関して、粒子は、眼に対する刺激を最少にするために、１０ミクロン未満の大きさでなければならない。固体の溶解していない粒子は結膜に付着する傾向がある場合がある。薬物が吸収されると、これらの粒子は溶解し、吸収された薬物を補充する。この貯留または貯蔵効果によって、溶液と比較して、懸濁液の接触時間および作用期間が長くなる。
【００７８】
局所投与される本発明のペプチド処方物には、１ミリリットルにつき、以下に示されるように、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている以下のペプチド剤が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００７９】
好ましい担体／媒体：ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ＰＬＧＡマイクロスフェアの中へのペプチド−封入；２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；精製水、ＵＳＰ。
【００８０】
例示的な処方物：点眼薬用の局所用ゲル
局所投与される本発明のペプチド処方物には、１ミリリットルにつき、以下に示されるように、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている以下のペプチド剤が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの
範囲の濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００８１】
好ましい担体／媒体：カルボキシメチルセルロースナトリウム（０．５から１％）；第２リン酸ナトリウム；塩化ナトリウム；プロピレングリコール；メチルパラベン；プロピルパラベン；ｐＨを調整するためのＮａＯＨ／ＨＣｌ；精製水、ＵＳＰ。
【００８２】
例示的な処方物：局所用軟膏
局所投与される本発明のペプチド処方物には、１ミリリットルにつき、以下に示されるように、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている以下のペプチド剤が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００８３】
好ましい担体／媒体（１）：カルボキシメチルセルロースナトリウム（２．５％）；第２リン酸ナトリウム；プロピレングリコール；メチルパラベン；プロピルパラベン；塩化ナトリウム；ｐＨを調整するためのＮａＯＨ／ＨＣｌ；精製水。
【００８４】
好ましい担体／媒体（２）：「液体」ラノリン（１０％）；鉱油（３０％）、および白色ワセリン（６０％）。
【００８５】
ステロイド節約効果のための例示的な局所送達
コルチコステロイドは、様々な誘発物質に対する炎症反応を阻害する。
・デキサメタゾン眼科用懸濁液（０．１％）；デキサメタゾン眼科用軟膏（０．０５％）；およびリン酸デキサメタゾンナトリウム眼科用溶液（０．１％）
・フルオロメトロン眼科用軟膏（０．１％）；フルオロメトロン眼科用懸濁液（０．２５〜１％）；および酢酸フルオロメトロン眼科用懸濁液（０．１％）
・エタボン酸ロテプレドノール（０．５％）
・メドリソン眼科用懸濁液（１％）
・酢酸プレドニソロン眼科用懸濁液（０．１２〜１％）およびリン酸プレドニソロンナトリウム眼科用懸濁液（０．１２５〜１％）
・リメキソロン眼科用懸濁液（１％）
しかし、これらの薬剤は眼内圧（ＩＯＰ）を上昇させることがあり、敏感な個体においては、視神経の損傷、視力および視野の障害、ならびに後嚢下白内障の形成を伴う緑内障を誘導する場合がある。白内障の形成は、高用量の長期間にわたる使用に伴って発生しやすい合併症である。いくつかのコルチコステロイド（例えば、酢酸フルオロメトロン、メドリソン、およびロテプレドノール）は、他のコルチコステロイドほどＩＯＰを上昇させない。長期間にわたる使用によってはまた、宿主免疫反応が抑制される場合もあり、したがって、眼組織から解放された真菌およびウイルスによる眼の２次感染の確立を助ける場合がある。局所的なコルチコステロイドは創傷の治癒を遅らせるかまたは遅くすることが知られている。
【００８６】
誘発物質に対する炎症反応を阻害するための、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれている本発明のペプチド剤を含む局所投与される点眼薬または軟膏の投与によっては、ステロイドを節約できる可能性がある。
【００８７】
例示的な眼内への薬物の送達−結膜／強膜への点眼
局所的な結膜からの侵入経路は、前眼部への薬物の浸透において重要な役割を担ってい
る。さらに、局所投与された薬物は、結膜から強膜へ近づくことが示されている。強膜を介する輸送または拡散の可能性は、この組織の大きく接近しやすい表面積、その高い程度の水和、低細胞性、および年齢に伴って有意に低下することのない浸透性による。このように、本発明の組成物は、この非侵襲的な投与経路によって前眼部に対する道筋を見い出すことができるものと考えられる。データは、強膜が、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤よりもずっと大きい分子量の化合物（約１５０ｋＤ）をもなお容易に透過させることができることを示唆している。局所投与されたナパフェナックが脈絡膜血管新生および網膜血管新生を、ＶＥＧＦの生産を低下させることによって阻害したこと、およびより大きい分子量のペプチド様インシュリン（５．８ｋＤ）が、局所投与後に網膜および視神経において蓄積し得るという最近の発見は、局所投与された本発明の組成物（これらは全て、＜１５０ｋＤの分子量を有している）が、結膜の浸透によって前眼部に達することができるだけではなく、これらは治療的でもあり得ることを示している。アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたは上記の保存的変異体が含まれているペプチド剤の局所用の溶液剤、懸濁剤、ゲル剤、または軟膏は、局所的な結膜への投与および強膜への投与に適している処方物である。
【００８８】
加えて、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤の本発明の組成物の注射による結膜下への投与は、ブドウ膜炎および眼内炎および緑内障のような、重篤な眼の炎症および眼の感染を処置するために、本発明の組成物に対して敏感な、抗炎症性および抗菌性のレジメンの送達に有用である。
【００８９】
好ましい注射可能な処方物：アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤には、１ｍｌにつき、以下が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌまでの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００９０】
好ましい担体／媒体：２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；注射用水、ＵＳＰ。
【００９１】
例示的な眼内への薬物の送達−角膜を介する点眼
局所投与される薬物は、疎水性の角膜を介して眼内環境に浸透する；しかし、角膜を介する輸送は、最も有効な過程ではない。なぜなら、用量のわずか１０分の１から１０分の３しか眼に浸透せず、ほとんどの薬物は表面の上皮層に留まったままとなると推定されるからである。本発明のペプチド組成物の角膜を通過する受動拡散は、それらの溶解度、分子量、およびイオン化の程度に大きく影響を受ける。正味の負電荷、および比較的大きな分子量を有しているので、局所投与される薬物として処方された本発明のペプチド剤は、無傷の角膜に浸透することは難しいことが明らかであろう。これは、角膜の中の上皮細胞間に存在している孔が、約５００分子量以下の小さな分子の細胞間隙からの浸透しか許容しないという事実によって裏付けられている。しかし、無傷の角膜上皮が浸食によって破壊されているか、または、例えば、上皮細胞間の堅い結合を開く物質もしくは浸透剤に曝されている場合には、本発明の組成物は、より効率よく眼内空間へと角膜を通過することができる。
【００９２】
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたは上記の保存的変異体が含まれているペプチド剤の局所用溶液剤、ゲル剤、あるいは軟膏は、角膜を介する点眼に適している処方物である。
【００９３】
例示的な眼内への薬物の送達−眼周囲への注射
本発明のペプチド剤の眼周囲への注射用処方物は、眼の炎症が局所用の点眼薬だけでは反応しない場合に、および前部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、眼内炎、および視神経炎のような炎症症状の場合に使用される。ペプチド剤は、結膜のすぐ下に、またはテノン嚢の下の空間に注射される。この場合には、より多くの吸収が生じ、結果として、より多くの薬物が所望の部位で利用できる。眼周囲への注射は、局所治療に対して付加的であるが、便利さに欠け、一次治療と考えられるほど十分には容認されない。
【００９４】
好ましい注射可能な処方物：アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤には、１ｍｌにつき、以下が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００ｍｇ／ｍｌまでの濃度のペプチド、より好ましくは、約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、最も好ましくは、約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００９５】
好ましい担体／媒体：２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；注射用水、ＵＳＰ。
【００９６】
例示的な眼内への薬物の送達−硝子体内／眼房水内への投与
角膜を介する、結膜を介する、および強膜を介する輸送の代わりとして、眼内組織への本発明のペプチド剤の送達は、硝子体腔または目房の内腔への注射によって行うことができる。硝子体は、ヒドロゲル（水、ヒアルロン酸、およびコラーゲン）からできており、これが、網膜と水晶体の間の内腔を満たしており、一方、目房水は水様液であり、これが水晶体と虹彩の間の内腔を満たしている。溶液剤として処方された本発明のペプチド剤の硝子体内または眼房水内への注射によって、ペプチド剤に対して眼内組織を迅速に暴露することができる。硝子体から迅速に排除され得る本発明の薬剤を眼内に持続的に存在させるためには、眼内炎、水晶体の損傷、網膜の剥離のリスクが高くなる注射を繰り返し行うことが必要であり、耐用性に欠ける場合がある。この障害を未然に防ぐために、本発明のペプチド剤は、リン脂質膜（すなわち、リポソーム、生分解性マイクロスフェア、ナノ粒子、または生分解性ラクトンをベースとするポリマー（Ｌ−ラクチド、グリコリド、カプロラクトン、ジオキサノン、環状炭酸エステル、およびそれらの誘導体の重縮合によって作成されたポリエステルが含まれている）の中に封入される。ポリ（乳酸）ＰＬＡおよびポリ（グリコール酸）ＰＧＡとしてもそれぞれ知られている、ポリラクチドおよびポリグリコリド、ならびに特にそれらのコポリマーであるポリ（ラクチド−コ−グリコリド）ＰＬＧＡは、最も研究されている生分解性ポリマーであり、これはまた、本発明のペプチド剤についての担体としても適用することもできる。加えて、ペプチド−ポリマー結合体（例えば、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤と、合成および天然のポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびデキストラン（シクロデキストランが含まれる））の共有結合体）は、改善された薬物動態プロフィールを可能にし、それによって本発明のペプチドのクリアランスの減少を生じる。
【００９７】
本発明のペプチド剤の硝子体内または眼房水内への投与は、眼の炎症、眼の感染（細菌、真菌、またはウイルス）、および緑内障の眼の処置において、流出経路の細胞中でＦ−アクチン構造を制御することによって、示されている（Ｒｅａｄ ＡＴら、Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ，２００６ Ｊｕｎ：８２（６）：９７４−８５）。
【００９８】
好ましい注射可能な処方物：アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴまたはそれらの保存的変異体が含まれているペプチド剤には、１ｍｌにつき、以下が含まれる：
約０．００１から１，０００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１ｍｇ／ｍｌから６００
ｍｇ／ｍｌまでの濃度のペプチド、より好ましくは約０．１ｍｇ／ｍｌから６０ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド、最も好ましくは約１ｍｇ／ｍｌから６ｍｇ／ｍｌの濃度のペプチド。
【００９９】
好ましい担体／媒体（１）：２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；精製水、ＵＳＰ。
【０１００】
好ましい担体／媒体（２）：ＰＬＧＡマイクロスフェアの中へのペプチド封入；２０ｍＭのクエン酸ナトリウム；５０ｍＭのグリシン；３％のスクロース；ｐＨを調整するためのＮａＯＨもしくはＨＣｌ；注射用水、ＵＳＰ。
【０１０１】
例示的な処方物の投与：
局所用溶液剤および懸濁剤：
１回の投与について１滴、および投与の間に少なくとも５分間が推奨される。眼に液滴を点眼した直後、この経路による薬物のロスの割合を低下させるために、１分または２分間、涙嚢に圧力がかけられる。注射することができる用量：２７〜３０ゲージ針、０．５インチの長さを使用のこと。
【０１０２】
１つの実施形態にしたがう組成物は、凍結乾燥した形態である場合も、また、凍結乾燥させることができる形態である場合もあり、これには、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤が含まれ、組成物にはさらに、少なくとも１つのアミノ酸安定剤が含まれる。組成物には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤と、凍結乾燥増量剤またはアミノ酸安定剤の少なくとも１つが含まれる場合があり、上記組成物は凍結乾燥した形態である。組成物にはさらに、水性媒体中の所望の生理学的に許容されるｐＨレベルに組成物のｐＨを調整することができる酸性または塩基性ｐＨ調節剤の少なくとも１つ、および上記水性媒体中の上記所望のｐＨを実質的に維持するための緩衝剤が含まれる場合もある。アミノ酸安定剤には、アラニン、リジン、グリシン、またはグルタミン酸の少なくとも１つが含まれる場合がある。アミノ酸安定剤には、少なくとも１つの５０ｍＭのアミノ酸安定化剤が含まれる場合がある。アミノ酸安定剤には、５０ｍＭのグリシンが含まれる場合がある。組成物にはさらに、炭水化物、糖アルコール、単糖、二糖、および多糖、ポリオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、スクロース、またはデキストロースの少なくとも１つが含まれている増量剤が含まれる場合がある。ｐＨ調整剤には、ＮａＯＨまたはＨＣｌの少なくとも一方が含まれる場合がある。緩衝剤には、酢酸、アスコルビン酸、ホウ酸、炭酸、リン酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、またはプロピオン酸の少なくとも１つのナトリウム塩、炭酸もしくはプロピオン酸のカルシウム塩、リン酸のカリウム塩、Ｔｒｉｓ緩衝剤、酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩、あるいはホウ酸塩緩衝剤の少なくとも１つが含まれる場合がある。緩衝剤はクエン酸ナトリウムであり得る。緩衝剤は、約０．０５〜１．０の緩衝能を有している場合がある。緩衝剤は、約０．０２〜０．２、または約０．０１〜０．１の緩衝能を有している場合がある。所望のｐＨレベルは、約３．５〜１１．５、約３．５〜９、約４．５〜８、または約５．０〜７．８の範囲であり得る。所望のｐＨレベルは約５．５であり得る。ペプチド剤には、アミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、Ｔβ４のＣ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれ得る。組成物にはさらに、水性媒体が含まれる場合があり、この場合、上記ペプチド剤は、約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で、上記水性媒体の中に存在する。組成物にはさらに、少なくとも１種類のステロイドが含まれる場合がある。
【０１０３】
別の実施形態にしたがう組成物は、被験体の皮膚組織への投与のための組成物であり、これには、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、上記組織の中でのＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤が含まれ、この組成物にはさらに、上記被験体の皮膚組織への投与のための４級アンモニウム塩と局所用担体が含まれる。ペプチド剤には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれ得る。４級アンモニウム塩には、塩化ベンザルコニウムが含まれる場合がある。ペプチド剤は、約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの濃度で存在し得、上記４級アンモニウム塩は上記組成物中に、約０．００１〜１重量％で存在し得る。組成物は、溶液剤、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、ローション剤、スプレー、懸濁剤、分散剤、膏薬、ヒドロゲル、軟膏、または泡剤処方物の形態であり得る。組成物は、化粧品処方物である場合もある。
【０１０４】
別の実施形態にしたがう薬学的または化粧品の組み合わせには、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤が含まれる。これらの組み合わせにはさらに、４級アンモニウム塩が含まれ、この場合、上記試薬と上記塩は、被験体に別々に投与することも、また、一緒に投与することもできる。ペプチド剤には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれ得る。４級アンモニウム塩は塩化ベンザルコニウムであり得る。これらの組み合わせには、薬学的組成物、眼科用組成物、または化粧品組成物が含まれる場合があり、これらには、上記ペプチド剤が約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの濃度で含まれている。この場合、上記４級アンモニウム塩は、約０．０００１〜１重量％で上記組成物中に存在し得る。これらの組み合わせには、眼科的に許容される担体をさらに含む眼科用組成物が含まれ得る。この組成物には、点眼用組成物が含まれ得る。
【０１０５】
さらなる実施形態にしたがうと、４級アンモニウム塩の被験体への投与によって生じる組織の劣化、傷害、または損傷を処置する、予防する、阻害する、あるいは軽減するための処置方法には、上記被験体に対して上記４級アンモニウム塩を投与する工程、および上記被験体に対して、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、上記組織の中でのＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤を投与する工程が含まれる。上記薬剤は、上記４級アンモニウム塩の投与の前に、上記４級アンモニウム塩の投与と同時に、または上記４級アンモニウム塩の投与の後に、上記被験体に投与することができる。上記薬剤および上記塩は、組成物として一緒に投与することができる。組成物にはさらに、眼科的に許容される担体が含まれる場合がある。組成物には、点眼用組成物が含まれる場合がある。組成物には、化粧品的に許容される担体が含まれる場合がある。組成物は、溶液剤、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、ローション剤、スプレー、懸濁剤、分散剤、膏薬、ヒドロゲル、軟膏、または泡剤処方物の形態であり得る。ペプチド剤には、アミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、Ｔβ４のＣ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれ得る。４級アンモニウム塩には、塩化ベンザルコニウムが含まれ得る。ペプチド剤は、上記組成物の中に、約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で含まれ得、上記４級アンモニウム塩は、約０．０００１〜１重量％の範囲で、上記組成物中に存在し得る。
【０１０６】
さらに別の実施形態にしたがう組成物には、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、あるいは、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、またはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤と、眼
科的に許容される担体、抗菌有効性の保存剤、上記組成物を眼科的に許容される等張性にするための等張化剤、快適性を高める薬剤、所望の眼科的に許容されるｐＨレベルになるように組成物のｐＨを調整することができる酸性または塩基性ｐＨ調整剤の少なくとも１つ、ならびに上記の所望のｐＨレベルを実質的に維持するための緩衝剤が含まれる。組成物にはさらに、抗酸化剤または酸素封鎖剤の少なくとも１つが含まれる場合もある。抗酸化剤または酸素封鎖剤には、亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ／エデト酸２ナトリウム、酢酸、クエン酸、グルタチオン、アセチルシステイン、またはメチオニンの少なくとも１つが含まれ得る。抗酸化剤または酸素封鎖剤は、約０．０００１〜１．０重量％の範囲の濃度で、上記組成物の中に存在し得る。抗菌有効性の保存剤には、４級アンモニウム化合物、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セタルコニウム、セトリミド、臭化ベンゾドデシニウム、塩化ベンゾキソニウム、チオサリチル酸のアルキル−水銀塩、チメロサール、硝酸フェニル水銀、酢酸フェニル水銀、ホウ酸フェニル水銀、パラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、キレート化剤、エデト酸２ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、アルコール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエタノール、グアニジン誘導体、クロロヘキシジン、ポリヘキサメチレンビグアニド、ソルビン酸、ホウ酸、二酸化塩素、ｐｏｌｙｑｕａｔｅｍｉｕｍ、またはミリスタミドプロピルジエチルアミンの少なくとも１つが含まれ得る。保存剤は、上記組成物中に、約０．０００１〜５．０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で存在し得る。組成物にはさらに、少なくとも１つの眼科的に許容される安定剤が含まれる場合もある。安定剤には、ポリオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、スクロース、アミノ酸安定化剤、アラニン（Ａｌａ）、リジン（Ｌｙｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、およびグルタミン酸（Ｇｌｕ）の少なくとも１つが含まれ得る。安定剤は、上記組成物中に、約０．０１〜１０重量％の範囲の濃度で存在し得る。等張化剤には、イオン性化合物、アルカリ金属ハロゲン化物、アルカリ土類金属ハロゲン化物、ＣａＣｌ２、ＫＢｒ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＮａＢｒ、ＮａＣｌ、ホウ酸、非イオン性化合物、尿素、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール、またはデキストロースの少なくとも１つが含まれ得る。組成物は、約５０から１０００ｍＯｓｍｏｌの範囲の浸透圧を有し得る。調整剤には、ＮａＯＨまたはＨＣＬの少なくとも一方が含まれ得る。緩衝剤には、酢酸のナトリウム塩、アスコルビン酸のナトリウム塩、ホウ酸のナトリウム塩、炭酸のナトリウム塩、リン酸のナトリウム塩、クエン酸のナトリウム塩、グルコン酸のナトリウム塩、乳酸のナトリウム塩、プロピオン酸のナトリウム塩、炭酸のカルシウム塩、プロピオン酸のカルシウム塩、リン酸のカリウム塩、Ｔｒｉｓ緩衝剤、酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、またはホウ酸緩衝剤の少なくとも１つが含まれ得る。所望のｐＨレベルは、約３．５〜１１．５の範囲内にあり得る。緩衝剤は、約０．０５〜１．０の緩衝能を有し得る。ペプチド剤には、アミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、Ｔβ４のＣ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれ得る。組成物にはさらに、水性の媒体が含まれる場合があり、この場合は、上記ペプチド剤は、約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で上記水性媒体の中に存在する。組成物は、溶液剤、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、ローション剤、スプレー、懸濁剤、分散剤、膏薬、ヒドロゲル、軟膏、または泡剤処方物の形態であり得る。組成物には、点眼用組成物が含まれる場合がある。ペプチド剤は、リン脂質膜、リポソーム、マイクロスフェア、ナノ粒子、または生分解性ポリマーの少なくとも１つで封入されて上記組成物の中に存在する場合があり、また、ペプチド−ポリマー結合体として上記組成物の中に存在する場合もある。
【０１０７】
実施例
サイモシンβ４（Ｔβ４）は４３アミノ酸の分子であり、眼の創傷の治癒を促進し、眼の炎症を軽減し、そして角膜上皮に対しては抗アポトーシス効果を有している。本実験では、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＫ）に曝された培養されたヒト角膜上皮細胞の生存性に
対するＴβ４の効果を測定した。
【０１０８】
約８０％のコンフルエンスのヒトの角膜上皮細胞を、０％、０．００１％、０．０１％、または０．１％のＢＡＫで１５分間処理した。培養培地中での回収の３時間および２４時間後に、細胞増殖を、比色ＢｒｄＵ取り込みアッセイを使用して測定した。アポトーシスを、比色によるアネキシンをベースとする細胞死のアッセイを使用して測定した。実験は、１ｍｃｇ／ｍｌのＴβ４（いくつかの公開されている実験において有効であることが明らかにされているインビトロでの投与量）の存在下で繰り返した。アポトーシスを防ぐＴｂ４の能力をさらに評価するために、角膜上皮細胞を、５日間の時間の経過にわたって、０．０１％のＢＡＫ±Ｔβ４で処理した。
【０１０９】
使用した全てのＢＡＫ濃度で、３時間および２４時間の回収時間での対照と比較して、角膜上皮細胞の増殖が阻害され、アポトーシスが増加した。３時間および２４時間の時点では、Ｔβ４はＢＡＫの有害な効果を取り消すことはできなかった；細胞増殖はＴｂ４によっては促進されず、アポトーシスは阻害されなかった。しかし、培養物中での時間が長い（２日間から５日間）場合には、Ｔβ４での処理によって、ＢＡＫによって開始される上皮細胞のアポトーシスが有意に阻害された。加えて、Ｔβ４で処理した細胞は、５日間、培地だけの中で培養した細胞と比較して、少ないアポトーシスを示した。
【０１１０】
多くの市販されている眼科用の溶液に使用されている保存剤であるＢＡＫによって、培養物において角膜上皮細胞のアポトーシスが誘導される。このことは、長期にわたる暴露が角膜の健康に有害であることを示唆している。本明細書中で報告した実験は、Ｔβ４がＢＡＫの有害なプロアポトーシス効果を克服できることを示している。ＢＡＫが含まれている多くの点眼薬は通常、長期にわたって使用されるので、Ｔβ４は、この保存剤が含まれている溶液に対する有用な添加剤であることが示された。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、または、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、あるいはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤と、眼科的に許容される担体、抗菌有効性の保存剤、眼科的に許容される等張性を有している前記組成物を提供するための等張化剤、快適性を高める薬剤、組成物のｐＨを所望の眼科的に許容されるｐＨレベルに調整することができる酸性もしくは塩基性ｐＨ調整剤の少なくとも１つ、および所望のｐＨレベルを実質的に維持するための緩衝剤が含まれている組成物。
【請求項２】
抗酸化剤または酸素封鎖剤の少なくとも１つがさらに含まれている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記抗酸化剤または酸素封鎖剤に、亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ／エデト酸２ナトリウム、酢酸、クエン酸、グルタチオン、アセチルシステイン、またはメチオニンの少なくとも１つが含まれる、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記抗酸化剤または酸素封鎖剤が、約０．０００１〜１．０重量％の範囲の濃度で前記組成物の中に存在している、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記抗菌有効性の保存剤に、４級アンモニウム化合物、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セタルコニウム、セトリミド、臭化ベンゾドデシニウム、塩化ベンゾキソニウム；チオサリチル酸のアルキル−水銀塩、チメロサール、硝酸フェニル水銀、酢酸フェニル水銀、ホウ酸フェニル水銀、パラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、キレート化剤、エデト酸２ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、アルコール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエタノール、グアニジン誘導体、クロロヘキシジン、ポリヘキサメチレンビグアニド、ソルビン酸、ホウ酸、二酸化塩素、ポリクオタミウム（ｐｏｌｙｑｕａｔｅｍｉｕｍ）、またはミリスタミドプロピルジエチルアミンの少なくとも１つが含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記保存剤が、約０．０００１〜５．０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で前記組成物の中に存在している、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
少なくとも１つの眼科的に許容される安定剤がさらに含まれている、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記安定剤に、ポリオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、スクロース、アミノ酸安定化剤、アラニン（Ａｌａ）、リジン（Ｌｙｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、またはグルタミン酸（Ｇｌｕ）の少なくとも１つが含まれる、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記安定剤が、約０．０１〜１０重量％の範囲の濃度で前記組成物の中に存在している、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記等張化剤に、イオン性化合物、アルカリ金属ハロゲン化物、アルカリ土類金属ハロゲン化物、ＣａＣｌ２、ＫＢｒ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＮａＢｒ、ＮａＣｌ、ホウ酸、非イオン性化合物、尿素、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール、またはデキストロースの少なくとも１つが含まれている、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
約５０から１０００ｍＯｓｍｏｌの範囲の浸透圧を有している、請求項１０に記載の組
成物。
【請求項１２】
前記ｐＨ調整剤に、ＮａＯＨまたはＨＣＬの少なくとも１つが含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記緩衝剤に、酢酸のナトリウム塩、アスコルビン酸のナトリウム塩、ホウ酸のナトリウム塩、炭酸のナトリウム塩、リン酸のナトリウム塩、クエン酸のナトリウム塩、グルコン酸のナトリウム塩、乳酸のナトリウム塩、プロピオン酸のナトリウム塩、炭酸のカルシウム塩、プロピオン酸のカルシウム塩、リン酸のカリウム塩、Ｔｒｉｓ緩衝剤、酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、またはホウ酸緩衝剤の少なくとも１つが含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記所望のｐＨレベルが、約３．５〜１１．５の範囲にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記緩衝剤が約０．０５〜１．０の緩衝能を有している、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ペプチド剤に、アミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、Ｔβ４のＣ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
水性媒体がさらに含まれている組成物であって、前記ペプチド剤が、前記水性媒体中に、約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で存在している、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、溶液剤、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、ローション剤、スプレー、懸濁剤、分散剤、膏薬、ヒドロゲル、軟膏、または泡剤処方物の形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物に点眼用組成物が含まれている、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ペプチド剤が、リン脂質膜、リポソーム、マイクロスフェア、ナノ粒子、または生分解性ポリマーの少なくとも１つで封入されて前記組成物の中に存在しているか、あるいは、ペプチド−ポリマー結合体として前記組成物の中に存在している、請求項１に記載の組成物。
【請求項１】
アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴ、それらの保存的変異体が含まれているペプチド剤、または、ＬＫＫＴＥＴもしくはＬＫＫＴＮＴペプチド、あるいはそれらの保存的変異体の生産を刺激する刺激剤と、眼科的に許容される担体、抗菌有効性の保存剤、眼科的に許容される等張性を有している前記組成物を提供するための等張化剤、快適性を高める薬剤、組成物のｐＨを所望の眼科的に許容されるｐＨレベルに調整することができる酸性もしくは塩基性ｐＨ調整剤の少なくとも１つ、および所望のｐＨレベルを実質的に維持するための緩衝剤が含まれている組成物。
【請求項２】
抗酸化剤または酸素封鎖剤の少なくとも１つがさらに含まれている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記抗酸化剤または酸素封鎖剤に、亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ尿素、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ／エデト酸２ナトリウム、酢酸、クエン酸、グルタチオン、アセチルシステイン、またはメチオニンの少なくとも１つが含まれる、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記抗酸化剤または酸素封鎖剤が、約０．０００１〜１．０重量％の範囲の濃度で前記組成物の中に存在している、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記抗菌有効性の保存剤に、４級アンモニウム化合物、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セタルコニウム、セトリミド、臭化ベンゾドデシニウム、塩化ベンゾキソニウム；チオサリチル酸のアルキル−水銀塩、チメロサール、硝酸フェニル水銀、酢酸フェニル水銀、ホウ酸フェニル水銀、パラベン、メチルパラベン、プロピルパラベン、キレート化剤、エデト酸２ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、アルコール、クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエタノール、グアニジン誘導体、クロロヘキシジン、ポリヘキサメチレンビグアニド、ソルビン酸、ホウ酸、二酸化塩素、ポリクオタミウム（ｐｏｌｙｑｕａｔｅｍｉｕｍ）、またはミリスタミドプロピルジエチルアミンの少なくとも１つが含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記保存剤が、約０．０００１〜５．０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度で前記組成物の中に存在している、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
少なくとも１つの眼科的に許容される安定剤がさらに含まれている、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記安定剤に、ポリオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、スクロース、アミノ酸安定化剤、アラニン（Ａｌａ）、リジン（Ｌｙｓ）、グリシン（Ｇｌｙ）、またはグルタミン酸（Ｇｌｕ）の少なくとも１つが含まれる、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記安定剤が、約０．０１〜１０重量％の範囲の濃度で前記組成物の中に存在している、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記等張化剤に、イオン性化合物、アルカリ金属ハロゲン化物、アルカリ土類金属ハロゲン化物、ＣａＣｌ２、ＫＢｒ、ＫＣｌ、ＬｉＣｌ、ＮａＢｒ、ＮａＣｌ、ホウ酸、非イオン性化合物、尿素、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、プロピレングリコール、またはデキストロースの少なくとも１つが含まれている、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
約５０から１０００ｍＯｓｍｏｌの範囲の浸透圧を有している、請求項１０に記載の組
成物。
【請求項１２】
前記ｐＨ調整剤に、ＮａＯＨまたはＨＣＬの少なくとも１つが含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記緩衝剤に、酢酸のナトリウム塩、アスコルビン酸のナトリウム塩、ホウ酸のナトリウム塩、炭酸のナトリウム塩、リン酸のナトリウム塩、クエン酸のナトリウム塩、グルコン酸のナトリウム塩、乳酸のナトリウム塩、プロピオン酸のナトリウム塩、炭酸のカルシウム塩、プロピオン酸のカルシウム塩、リン酸のカリウム塩、Ｔｒｉｓ緩衝剤、酢酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、またはホウ酸緩衝剤の少なくとも１つが含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記所望のｐＨレベルが、約３．５〜１１．５の範囲にある、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記緩衝剤が約０．０５〜１．０の緩衝能を有している、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記ペプチド剤に、アミノ酸配列ＫＬＫＫＴＥＴ、アミノ酸配列ＬＫＫＴＥＴＱ、Ｔβ４、Ｔβ４のＮ末端変異体、Ｔβ４のＣ末端変異体、またはＴβ４のイソ型が含まれる、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
水性媒体がさらに含まれている組成物であって、前記ペプチド剤が、前記水性媒体中に、約０．００１〜１，０００ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で存在している、請求項１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、溶液剤、ゲル剤、クリーム剤、ペースト剤、ローション剤、スプレー、懸濁剤、分散剤、膏薬、ヒドロゲル、軟膏、または泡剤処方物の形態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物に点眼用組成物が含まれている、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記ペプチド剤が、リン脂質膜、リポソーム、マイクロスフェア、ナノ粒子、または生分解性ポリマーの少なくとも１つで封入されて前記組成物の中に存在しているか、あるいは、ペプチド−ポリマー結合体として前記組成物の中に存在している、請求項１に記載の組成物。
【公表番号】特表２００８−５４３８７９（Ｐ２００８−５４３８７９Ａ）
【公表日】平成２０年１２月４日（２００８．１２．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５１７２０８（Ｐ２００８−５１７２０８）
【出願日】平成１８年６月１９日（２００６．６．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２３７６０
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１３８７０９
【国際公開日】平成１８年１２月２８日（２００６．１２．２８）
【出願人】（５０３３３４７６９）リジェナークス・バイオファーマスーティカルズ・インコーポレイテッド (16)
【出願人】（５０７２３９５９２）フリードリヒ−アレクサンダー−ウニベルジテート・エアランゲン−ニュルンベルク (7)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１２月４日（２００８．１２．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年６月１９日（２００６．６．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２３７６０
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１３８７０９
【国際公開日】平成１８年１２月２８日（２００６．１２．２８）
【出願人】（５０３３３４７６９）リジェナークス・バイオファーマスーティカルズ・インコーポレイテッド (16)
【出願人】（５０７２３９５９２）フリードリヒ−アレクサンダー−ウニベルジテート・エアランゲン−ニュルンベルク (7)
【Ｆターム（参考）】
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