ｐ２７のプロテアソーム分解の阻害因子である、アルギリン及びその誘導体等の大員環の製造の中間体を製造する改善された方法
本発明は、ｐ２７のプロテアソーム分解の阻害因子である特定の大員環、特にアルギリン及びその誘導体を合成する改善された方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｐ２７のプロテアソーム分解の阻害因子である特定の大員環、特にアルギリン及びその誘導体を合成する改善された方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
サイクリンキナーゼ阻害因子ｐ２７ｋｉｐ１の細胞内レベルの低下は、多くのヒトのがんにおいて頻繁に見られ、患者の予後と直接相関している（非特許文献１）。具体的には、ユビキチン依存性プロテアソーム代謝回転が、多くのヒトのがんにおいてｐ２７発現の低下を引き起こすことが示されている（非特許文献２）。
【０００３】
特許文献１は、薬学的に活性な大員環（「アルギリン」）、及び自己免疫疾患の治療、免疫寛容の誘導又は細菌感染の治療のためのそれぞれの医薬品製剤を開示している。
【０００４】
非特許文献３は、アルギリンと呼ばれる環状ペプチド群の製造、及びそれらの生物学的性質の幾つかを記載している。非特許文献４は、上記環状ペプチドの構造を記載している。アルギリンＡ〜Ｈは、粘液細菌アーキアンギウム・ゲファイラ（Archangiumgephyra）から得ることができる。
【０００５】
同様に、非特許文献５は、アルギリンＢの合成及び抗体形成の阻害因子としてのその機能を記載している。
【０００６】
特許文献２は、被験体におけるがんの治療用の薬物の製造に特許文献１の大員環を使用することを記載している。
【０００７】
特許文献３「ｐ２７のプロテアソーム分解の阻害因子である、アルギリン及びその誘導体等の新規の大員環の製造の中間体を製造する方法、並びに上記大員環の使用（Method for producing intermediates for the production of novelmacrocycles that are inhibitors of the proteasomic degradation of p27, such asargyrin and derivatives thereof, and uses of said macrocycles）」（その全体が参照により本明細書中に援用される）は、ｐ２７のプロテアソーム分解の阻害因子である、アルギリン及びその誘導体等の大員環の製造の中間体、並びに上記大員環を製造する方法及び上記大員環の生物学的活性を記載している。
【０００８】
したがって、アルギリン及び関連大員環は、様々な病態、例えば免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（がん等）の治療用の薬物の更なる開発にとって興味深い候補である。
【０００９】
しかしながら、アルギリン及びその関連誘導体の薬学的可能性を十分に引き出すことは、十分な量の化合物を（例えば微生物から）単離するには相当の努力が必要となるそれらの比較的複雑な化学構造のために困難であり、研究及び治療に容易に利用可能なこのファミリーの有効化合物の数を制限している。アルギリンの立体選択的形態を十分な量及び純度で容易に製造することは特に困難である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】英国特許出願公開第２，３６７，５５３号
【特許文献２】欧州特許第１９６４５６０号
【特許文献３】国際公開第２０１０／００６６８２号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Philipp-Staheli, J., Payne, S.R. and Kemp, C.J. p27(Kip1):regulation and function of a haplo-insufficient tumour suppressor and itsmisregulation in cancer. Exp Cell Res 264, 148-68 (2001)
【非特許文献２】Loda, M. et al. Increased proteasome-dependent degradation of thecyclin dependent kinase inhibitor p27 in aggressive colorectal carcinomas. NatMed 3, 231-4 (1997)
【非特許文献３】Sasse F, Steinmetz H, Schupp T, Petersen F, Memmert K, Hofmann H,Heusser C, Brinkmann V, von Matt P, Hofle G, Reichenbach H. Argyrins,immunosuppressive cyclic peptides from myxobacteria. I. Production, isolation,physico-chemical and biological properties. J Antibiot (Tokyo). 2002Jun;55(6):543-51.
【非特許文献４】Vollbrecht L, Steinmetz H, Hofle G, Oberer, L, Rihs G,Bovermann G, and von Matt P. Argyrins, immunosuppressive cyclic peptides frommyxobacteria. II. Structure elucidation and stereochemistry. JAntibiot (Tokyo). 2002 Aug; 55(8):715-721.
【非特許文献５】Ley SV, Priour A, Heusser C. Total synthesis of the cyclicheptapeptide Argyrin B: a new potent inhibitor of T-cell independent antibodyformation. Org Lett. 2002 Mar 7;4(5):711-4.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、アルギリンファミリーの化合物及びそれぞれの中間体を製造する改善された方法を提供することが本発明の一目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の第１の態様によれば、上記の目的は、任意で保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法であって、触媒として［１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ Ｒｈ（ｃｏｄ）］ＢＦ４を使用する不斉水素化を含む、式２：
【化１】
に従う保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンメチルエステルの合成を含む、任意で保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法によって解決される。本発明の第２の態様によれば、上記の目的は、任意で保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法であって、触媒として［１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ Ｒｈ（ｃｏｄ）］ＢＦ４を使用する不斉水素化を含む、式：
【化２】
に従う保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンメチルエステルの合成を含む、任意で保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法によって更に解決される。
【００１４】
このため、立体選択的な任意で保護されたＤ−４−メトキシトリプトファン又はＬ−４−メトキシトリプトファンを、触媒的不斉水素化を用いて製造する方法が好ましく、この場合、触媒はそれぞれ［Ｒｈ（ｃｏｄ）２］ＢＦ４と、１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ又は１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓとから調製される。鏡像体過剰率がそれぞれ少なくとも９７％ｅｅ及び９８％ｅｅである方法が好ましい。９９％ｅｅ超が最も好ましい。
【００１５】
当初は、４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンは酵素的分割でしか製造することができなかった（Ley, S. V.; Priour, A. Eur. J. Org. Chem. 2002, 3995-4004、非特許文献５）。得ることのできる収率は原理的に（inprinciple）５０％を超えることはない。実際に、１０％〜４０％と低い収率にしか達しなかった。ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００４５２６号は、９０％ｅｅという選択性でしか達成し得ない合成を記載している。今回驚くべきことに、本明細書中に提示されるような水素化触媒を使用することで、不斉水和、したがってメトキシトリプトファン要素の合成及びアルギリンの全合成の両方において顕著な（marked）改善を達成することができることが見出された。
【００１６】
このため、酵素を使用することなく合成を行う、本発明による大員環化合物又は上記のような４−メトキシ−Ｌ−トリプトファン若しくは４−メトキシ−Ｄ−トリプトファンを製造する方法が更に好ましい。
【００１７】
上記合成が固相合成を含む、本発明による大員環化合物を製造する方法が一層好ましい。より好ましくは、上記合成は上述のアミノ酸を伴う直鎖前駆体の固相ペプチド合成を含む。固相合成により閉環後のエキソメチレン（exo-methylene）基の生成が排除される。
【００１８】
本発明による大員環化合物を製造する方法では、上記不斉水素化を１バール〜１００バール、好ましくは１バール〜２０バール、最も好ましくは１バール〜１０バールの圧力下で行うことができる。上記不斉水素化を１５℃〜１００℃の温度で行う、本発明による大員環化合物を製造する方法が好ましい。上記不斉水素化を溶媒としてアルコール、好ましくはメタノールを使用して行う、本発明による大員環化合物を製造する方法も好ましい。有利には、本方法は、トリプトファン要素（複数も可）を非常に高い特定ｅｅ値で提供する。これにより合成終了時の精製が簡単になり、収率（複数も可）が増大する。
【００１９】
本発明の第３の態様によれば、上記の目的は、以下の一般式（Ｉ）：
【化３】
（式中、Ｒ１及びＲ２は独立して水素、非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、Ｒ３は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、非置換であるか若しくはＯＨ若しくはＯＲ（Ｒは水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、アリール又はアセチルから選択される）によって置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、Ｒ４は水素、ハロゲン、非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、Ｒ５は水素又はハロゲンであり、Ｒ６は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、Ｒ７は水素、又は非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、ＸはＣ＝ＣＨ２又はＣＨＲ８（Ｒ８は非置換であるか又は−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである）である）に従う大員環化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法であって、本発明による任意で保護された４−メトキシ−トリプトファンの合成を含む、大員環化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法によって解決される。Ｒ７が水素、又は非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、ＸがＣ＝ＣＨ２又はＣＨＲ７（Ｒ７は非置換であるか又は−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである）である、上記の方法が好ましい。Ｒ１が水素でない場合、ＸがＣＨ２でなくてはならない、上記の方法がより好ましい。
【００２０】
上記大員環化合物が、アルギリンＡ〜Ｆ、Ｂ／Ｆ、並びにＡｌａ α及びＡｌａ β等のアルギリン、並びにそれらの単離立体異性体から選択される、本発明による大員環化合物を製造する方法が更に好ましい。以下の式：
【化４】
上から、アルギリンＢ／Ｆ、アルギリンＡｌａ β、アルギリン（Argyrin）Ａｌａ α
から選択される大員環化合物及びその薬学的に許容可能な塩を製造する、上記の本発明の方法が特に好ましい。
【００２１】
上記化合物の化学修飾の工程を更に含む、本発明による大員環化合物を製造する方法が更に好ましい。この場合、化合物は更に化学修飾に供される、いわゆる「リード構造」として機能し、この化学修飾をその後、１つ又は複数の後続する既知のスクリーニング法において、ｐ２７の量及び／又は生物学的活性を増大させるその有効性についてスクリーニングする。修飾は、新たな側鎖の導入又は官能基の交換、例えばハロゲン（特にＦ、Ｃｌ又はＢｒ）の導入、好ましくは炭素原子数１〜５の低級アルキル基（例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基又はイソペンチル基）、好ましくは炭素原子数２〜５の低級アルケニル基、好ましくは炭素原子数２〜５の低級アルキニル基の導入、又は例えばＮＨ２基、ＮＯ２基、ＯＨ基、ＳＨ基、ＮＨ基、ＣＮ基、アリール基、ヘテロアリール基、ＣＯＨ基若しくはＣＯＯＨ基からなる群から選択される基の導入を含むが、これらに限定されない当該技術分野で既知の様々な方法によって達成することができる。さらに、単一アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド等の更なるペプチド基を分子に付加させてもよい。
【００２２】
本発明の更に別の態様は、医薬組成物を製造する方法であって、本明細書に記載のような本発明による大員環化合物を製造する方法と、上記大員環化合物を薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と混合することとを含む、医薬組成物を製造する方法に関する。例えば任意の従来の経路によって、特に経腸的に、例えば経口的に（例えば錠剤又はカプセルの形態で）、非経口的に（例えば注射用溶液又は注射用懸濁液の形態で）、局所的に（例えばローション、ジェル、軟膏又はクリームの形態で）、又は経鼻形態若しくは坐剤形態で全身投与又は局所投与される医薬組成物を調合するための担体、賦形剤及び戦略は当業者に既知であり、それぞれの文献中に記載されている。
【００２３】
薬剤（例えば化合物）の投与は、薬剤を標的細胞に到達させる任意の方法によって達成することができる。これらの方法としては、例えば注射、堆積（deposition）、注入、坐剤、経口摂取、吸入、局所投与、又は薬剤による標的細胞への接近が得られる任意の他の投与方法が挙げられる。注射は例えば静脈内注射、皮内注射、皮下注射、筋肉注射又は腹腔内注射であり得る。注入は、植え込み型薬物送達システム、例えばミクロスフェア、ヒドロゲル、ポリマーリザーバ、コレステロールマトリクス、ポリマーシステム（例えばマトリクス侵食及び／又は拡散システム）、及び非ポリマーシステム（例えば圧縮ペレット、融合ペレット又は部分融合ペレット）の挿入を含む。坐剤はグリセリン坐剤を含む。経口摂取剤形（doses）は腸溶コーティングすることができる。吸入は、吸入器内のエアロゾルを用いて、薬剤を単独で又は吸収されることのできる担体に付着させて投与することを含む。薬剤は、例えば溶解形態又はコロイド形態で液体中に懸濁させることができる。液体は溶媒、不完全溶媒又は非溶媒であり得る。多くの場合、水又は有機液体を使用することができる。
【００２４】
本発明の更に別の態様は次に、上記の方法に従って製造される医薬組成物に関する。
【００２５】
本発明の別の態様は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（例えば乾癬、又は乳がん、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸がん等のがん）から選択される疾患又は病態の治療のための本発明に従って製造される医薬組成物の使用である。本発明の更に別の態様は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（例えば乾癬、又は乳がん、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸がん等のがん）から選択される疾患又は病態の治療用の薬物の製造のための本発明による化合物の使用である。
【００２６】
合成される種々のアルギリン誘導体の生物学的効果を、特許文献３（参照により本明細書中に援用される）の実施例の項に記載のように試験したところ、本質的に同一であることが見出された。このため、本方法に従って製造される化合物は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（例えば乾癬、又は乳がん、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸がん等のがん）から選択される疾患又は病態の治療において有効である。
【００２７】
活性化合物をより良好な収率及び純度で合成することが可能であることは、使用される投与量をより少なくすることができ、潜在的副作用の減少につながるため、それぞれの医薬組成物の効果も改善すると考えられる。さらに、より直接的な合成は、例えば製造プロセスにおける誤りをより少なくすることができるため、製造されたそれぞれの（respective）薬物の安全性を改善する。
【００２８】
以下の実施例は、本発明を説明するものに過ぎず、本発明の範囲を実施例に記載される本発明の特定の実施形態に限定するものと解釈すべきではない。本発明の目的上、本明細書中に引用される全ての参考文献は、それらの全体が参照により本明細書中に援用される。当業者が提示の戦略に基づいて本発明の他の誘導体を合成するために、以下の合成を容易に修正することができることを理解すべきである。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【００２９】
１． ４−メトキシ−Ｌ−トリプトファン（２）の合成
（２）の合成における基本的な問題を避けるために、新たな効率的かつ経済的な合成方法として、最適化した立体選択的な触媒的水素化を確立した。
【００３０】
触媒の一般的製造：
水素化触媒の製造のために、ＤｕａｎＰｈｏｓ（７０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍｌ）に溶解させ、ＴＨＦ（３ｍｌ）中の［Ｒｈ（ｃｏｄ）２］ＢＦ４（７１ｍｇ、０．１７５ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を３０分間撹拌し、続いてＥｔ２Ｏ（１２．５ｍｌ）を添加した。残渣を濾取し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、残留溶媒を真空下で除去した。
【００３１】
水素化（Ｓ−エナンチオマー（enantiomer））：
１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ及び［Ｒｈ（ｃｏｄ）２］ＢＦ４から製造された触媒（１．６ｍｇ）を、ＭｅＯＨ（３ｍＬ）に溶解させ、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶解させた９６ｍｇの遊離体（educt）１を添加する。反応混合物を１０バールで１日水素化する。溶媒を減圧下で除去した後、カラム濾過（ＭＴＢＥ／ＰＥ、１：１）を用いて触媒を除去する。反応生成物（２）が鏡像体過剰率９８．７％、定量的収率で得られる。
【化５】
【００３２】
触媒反応のリガンド：
【化６】
１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ（（１Ｓ，１’Ｓ，２Ｒ，２’Ｒ）−２，２’−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，３，２’，３’−テトラヒドロ−１Ｈ，１’Ｈ（１，１’）ビイソホスフィンドリル）及び１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ（（１Ｒ，１’Ｒ，２Ｓ，２’Ｓ）−２，２’−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，３，２’，３’−テトラヒドロ−１Ｈ，１’Ｈ−（１，１’）ビイソホスフィンドリル）は、例えばSigma-Aldrich（St. Louis，MO）から市販されている。
【００３３】
第２の（Ｒ−）エナンチオマーの合成：
【化７】
トリプトファンモジュールのＲ−エナンチオマーを、上記の合成プロトコルに従い１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓを用いて製造する。
【００３４】
MW d eq mmol
オレフィン 480.51 1 0.2 96mg
触媒 788.53 0.01 0.0002 1.6mg
MeOH 4ml
【００３５】
収率：定量的 ％ｅｅ：９７．６
【００３６】
エナンチオ選択性及び絶対配置を、Ｃｂｚ脱保護後にモッシャー法により決定した。
【００３７】
モッシャーアミド１１の合成
【化８】
Mosher chloride:モッシャークロリド
パラジウム炭素（Palladium on charcoal）（１００ｍｇ、１０重量％）を、Ｎα−Ｃｂｚ−ＮＩｎｄ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ−ＯＭｅ ８（２０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１ｍｌ）に添加した。反応混合物を水素で３回パージし、室温で１２時間撹拌した。懸濁液をセライト（商標）のプラグを通して濾過し、メタノール（２×３ｍＬ）で洗浄し、濃縮した。このアミンを直接次の工程に使用した。
【００３８】
アミン（５ｍｇ、１４μｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１ｍＬ）に、室温でトリエチルアミン（１６μＬ、１１５μｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３．２ｍｇ、２６μｍｏｌ）、（Ｓ）−モッシャークロリド（１１μＬ、５８μｍｏｌ）を続けて添加した。混合物を室温で３時間撹拌し、酢酸エチル（１０ｍＬ）でクエンチした。混合物を飽和ＮａＨＳＯ４水溶液（５ｍＬ）、１Ｎ ＮａＯＨ（５ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×５ｍＬ）で続けて洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、対応するモッシャーエステル１１（８ｍｇ、１４μｍｏｌ、９６％）を得た。
【００３９】
Ｒｆ＝０．１８（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン １：３）；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．８３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．７９（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０〜７．５３（ｍ，２Ｈ）、７．４３〜７．３６（ｍ，３Ｈ）、７．３３（ｓ，１Ｈ）、７．２５〜７．２１（ｍ，１Ｈ）、６．６７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８〜４．７０（ｍ，１Ｈ）、３．７７（ｓ，３Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、３．４３〜３．３５（ｍ，１Ｈ）、３．２８（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，９．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．９２（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，３Ｈ）、１．６６（ｓ，９Ｈ）。
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１７１．８、１６６．９、１５３．５、１４９．５、１３３．０、１２９．７、１２９．６、１２８．６、１２８．３、１２８．２、１２５．６、１２５．２、１２３．６、１１９．６、１１５．３、１０８．９、１０３．３、８４．０、７７．４、５５．２、５４．９、５２．４、２８．３、２８．０。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ２８Ｈ３１Ｎ２Ｏ７Ｆ３Ｎａについての算出値（［Ｍ＋Ｎａ］＋）：５８７．１９８１、実測値：５８７．１９８２。
【００４０】
Ｃｂｚ保護メトキシトリプトファンの合成
トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を、メトキシトリプトファン（９５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４ｍＬ）に０℃で滴加した。反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。溶液をトルエン（３×５ｍＬ）との同時蒸発によって濃縮し、得られた脱保護トリプトファンを直接次の工程に使用した。
【００４１】
０．５Ｎ ＬｉＯＨ水溶液（０．８ｍＬ、０．４ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／メタノール／水（７ｍＬ：１．３ｍＬ：４ｍＬ）中の脱保護トリプトファンの溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、２時間撹拌した。溶液を０．１Ｎ ＨＣｌ水溶液（１５ｍＬ）とジクロロメタン（１５ｍＬ）との間で分配した。水層をジクロロメタン（２×１５ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（１％から５％のメタノール勾配を有するジクロロメタン）によって精製し、５１ｍｇのＣｂｚ保護メトキシトリプトファン２を白色固体（０．１４ｍｍｏｌ、７０％、２工程）として得た。
【００４２】
Ｒｆ＝０．２７（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン ３：１、１％酢酸を含む）；
【数１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，６０℃）：δ＝１０．７５（ｂｒ，ｓ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４〜７．３４（ｍ，５Ｈ）、６．９〜７．２（ｍ，３Ｈ）、６．４４（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ）、４．９５（ｍ，２Ｈ）、４．３０（ｍ，１Ｈ）、３．８３（ｓ，３Ｈ）、３．３５（ｄｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９５（ｄｄ，Ｊ＝１４．１０Ｈｚ，１Ｈ）。
【００４３】
２． アルギリンの合成（特に固相合成）及び機能分析
特に自動化による迅速かつ効率的なペプチド集合を可能にする固相ペプチド合成技法を含む、上記のようなトリプトファンアミノ酸製造工程を含むアルギリンの合成は、特許文献３（ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００４５２６号。参照により本明細書中に援用される）の実施例の項に記載のように行うことができる。
【００４４】
合成された種々のアルギリン誘導体の生物学的効果を、特許文献３（参照により本明細書中に援用される）の実施例の項に記載のように試験したところ、本質的に同一であることが見出された。このため、本方法に従って製造される化合物は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（例えば乾癬、又は乳がん、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸がん等のがん）から選択される疾患又は病態の治療において有効である。
【００４５】
活性化合物をより良好な収率及び純度で合成することが可能であることは、使用される投与量をより少なくすることができ、潜在的副作用の減少につながるため、それぞれの医薬組成物の効果も改善すると考えられる。さらに、より直接的な合成は、例えば製造プロセスにおける誤りをより少なくすることができるため、製造されたそれぞれの薬物の安全性を改善する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｐ２７のプロテアソーム分解の阻害因子である特定の大員環、特にアルギリン及びその誘導体を合成する改善された方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
サイクリンキナーゼ阻害因子ｐ２７ｋｉｐ１の細胞内レベルの低下は、多くのヒトのがんにおいて頻繁に見られ、患者の予後と直接相関している（非特許文献１）。具体的には、ユビキチン依存性プロテアソーム代謝回転が、多くのヒトのがんにおいてｐ２７発現の低下を引き起こすことが示されている（非特許文献２）。
【０００３】
特許文献１は、薬学的に活性な大員環（「アルギリン」）、及び自己免疫疾患の治療、免疫寛容の誘導又は細菌感染の治療のためのそれぞれの医薬品製剤を開示している。
【０００４】
非特許文献３は、アルギリンと呼ばれる環状ペプチド群の製造、及びそれらの生物学的性質の幾つかを記載している。非特許文献４は、上記環状ペプチドの構造を記載している。アルギリンＡ〜Ｈは、粘液細菌アーキアンギウム・ゲファイラ（Archangiumgephyra）から得ることができる。
【０００５】
同様に、非特許文献５は、アルギリンＢの合成及び抗体形成の阻害因子としてのその機能を記載している。
【０００６】
特許文献２は、被験体におけるがんの治療用の薬物の製造に特許文献１の大員環を使用することを記載している。
【０００７】
特許文献３「ｐ２７のプロテアソーム分解の阻害因子である、アルギリン及びその誘導体等の新規の大員環の製造の中間体を製造する方法、並びに上記大員環の使用（Method for producing intermediates for the production of novelmacrocycles that are inhibitors of the proteasomic degradation of p27, such asargyrin and derivatives thereof, and uses of said macrocycles）」（その全体が参照により本明細書中に援用される）は、ｐ２７のプロテアソーム分解の阻害因子である、アルギリン及びその誘導体等の大員環の製造の中間体、並びに上記大員環を製造する方法及び上記大員環の生物学的活性を記載している。
【０００８】
したがって、アルギリン及び関連大員環は、様々な病態、例えば免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（がん等）の治療用の薬物の更なる開発にとって興味深い候補である。
【０００９】
しかしながら、アルギリン及びその関連誘導体の薬学的可能性を十分に引き出すことは、十分な量の化合物を（例えば微生物から）単離するには相当の努力が必要となるそれらの比較的複雑な化学構造のために困難であり、研究及び治療に容易に利用可能なこのファミリーの有効化合物の数を制限している。アルギリンの立体選択的形態を十分な量及び純度で容易に製造することは特に困難である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】英国特許出願公開第２，３６７，５５３号
【特許文献２】欧州特許第１９６４５６０号
【特許文献３】国際公開第２０１０／００６６８２号
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Philipp-Staheli, J., Payne, S.R. and Kemp, C.J. p27(Kip1):regulation and function of a haplo-insufficient tumour suppressor and itsmisregulation in cancer. Exp Cell Res 264, 148-68 (2001)
【非特許文献２】Loda, M. et al. Increased proteasome-dependent degradation of thecyclin dependent kinase inhibitor p27 in aggressive colorectal carcinomas. NatMed 3, 231-4 (1997)
【非特許文献３】Sasse F, Steinmetz H, Schupp T, Petersen F, Memmert K, Hofmann H,Heusser C, Brinkmann V, von Matt P, Hofle G, Reichenbach H. Argyrins,immunosuppressive cyclic peptides from myxobacteria. I. Production, isolation,physico-chemical and biological properties. J Antibiot (Tokyo). 2002Jun;55(6):543-51.
【非特許文献４】Vollbrecht L, Steinmetz H, Hofle G, Oberer, L, Rihs G,Bovermann G, and von Matt P. Argyrins, immunosuppressive cyclic peptides frommyxobacteria. II. Structure elucidation and stereochemistry. JAntibiot (Tokyo). 2002 Aug; 55(8):715-721.
【非特許文献５】Ley SV, Priour A, Heusser C. Total synthesis of the cyclicheptapeptide Argyrin B: a new potent inhibitor of T-cell independent antibodyformation. Org Lett. 2002 Mar 7;4(5):711-4.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、アルギリンファミリーの化合物及びそれぞれの中間体を製造する改善された方法を提供することが本発明の一目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の第１の態様によれば、上記の目的は、任意で保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法であって、触媒として［１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ Ｒｈ（ｃｏｄ）］ＢＦ４を使用する不斉水素化を含む、式２：
【化１】
に従う保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンメチルエステルの合成を含む、任意で保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法によって解決される。本発明の第２の態様によれば、上記の目的は、任意で保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法であって、触媒として［１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ Ｒｈ（ｃｏｄ）］ＢＦ４を使用する不斉水素化を含む、式：
【化２】
に従う保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンメチルエステルの合成を含む、任意で保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法によって更に解決される。
【００１４】
このため、立体選択的な任意で保護されたＤ−４−メトキシトリプトファン又はＬ−４−メトキシトリプトファンを、触媒的不斉水素化を用いて製造する方法が好ましく、この場合、触媒はそれぞれ［Ｒｈ（ｃｏｄ）２］ＢＦ４と、１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ又は１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓとから調製される。鏡像体過剰率がそれぞれ少なくとも９７％ｅｅ及び９８％ｅｅである方法が好ましい。９９％ｅｅ超が最も好ましい。
【００１５】
当初は、４−メトキシ−Ｌ−トリプトファンは酵素的分割でしか製造することができなかった（Ley, S. V.; Priour, A. Eur. J. Org. Chem. 2002, 3995-4004、非特許文献５）。得ることのできる収率は原理的に（inprinciple）５０％を超えることはない。実際に、１０％〜４０％と低い収率にしか達しなかった。ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００４５２６号は、９０％ｅｅという選択性でしか達成し得ない合成を記載している。今回驚くべきことに、本明細書中に提示されるような水素化触媒を使用することで、不斉水和、したがってメトキシトリプトファン要素の合成及びアルギリンの全合成の両方において顕著な（marked）改善を達成することができることが見出された。
【００１６】
このため、酵素を使用することなく合成を行う、本発明による大員環化合物又は上記のような４−メトキシ−Ｌ−トリプトファン若しくは４−メトキシ−Ｄ−トリプトファンを製造する方法が更に好ましい。
【００１７】
上記合成が固相合成を含む、本発明による大員環化合物を製造する方法が一層好ましい。より好ましくは、上記合成は上述のアミノ酸を伴う直鎖前駆体の固相ペプチド合成を含む。固相合成により閉環後のエキソメチレン（exo-methylene）基の生成が排除される。
【００１８】
本発明による大員環化合物を製造する方法では、上記不斉水素化を１バール〜１００バール、好ましくは１バール〜２０バール、最も好ましくは１バール〜１０バールの圧力下で行うことができる。上記不斉水素化を１５℃〜１００℃の温度で行う、本発明による大員環化合物を製造する方法が好ましい。上記不斉水素化を溶媒としてアルコール、好ましくはメタノールを使用して行う、本発明による大員環化合物を製造する方法も好ましい。有利には、本方法は、トリプトファン要素（複数も可）を非常に高い特定ｅｅ値で提供する。これにより合成終了時の精製が簡単になり、収率（複数も可）が増大する。
【００１９】
本発明の第３の態様によれば、上記の目的は、以下の一般式（Ｉ）：
【化３】
（式中、Ｒ１及びＲ２は独立して水素、非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、Ｒ３は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、非置換であるか若しくはＯＨ若しくはＯＲ（Ｒは水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、アリール又はアセチルから選択される）によって置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、Ｒ４は水素、ハロゲン、非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、Ｒ５は水素又はハロゲンであり、Ｒ６は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、Ｒ７は水素、又は非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、ＸはＣ＝ＣＨ２又はＣＨＲ８（Ｒ８は非置換であるか又は−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである）である）に従う大員環化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法であって、本発明による任意で保護された４−メトキシ−トリプトファンの合成を含む、大員環化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法によって解決される。Ｒ７が水素、又は非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、ＸがＣ＝ＣＨ２又はＣＨＲ７（Ｒ７は非置換であるか又は−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである）である、上記の方法が好ましい。Ｒ１が水素でない場合、ＸがＣＨ２でなくてはならない、上記の方法がより好ましい。
【００２０】
上記大員環化合物が、アルギリンＡ〜Ｆ、Ｂ／Ｆ、並びにＡｌａ α及びＡｌａ β等のアルギリン、並びにそれらの単離立体異性体から選択される、本発明による大員環化合物を製造する方法が更に好ましい。以下の式：
【化４】
上から、アルギリンＢ／Ｆ、アルギリンＡｌａ β、アルギリン（Argyrin）Ａｌａ α
から選択される大員環化合物及びその薬学的に許容可能な塩を製造する、上記の本発明の方法が特に好ましい。
【００２１】
上記化合物の化学修飾の工程を更に含む、本発明による大員環化合物を製造する方法が更に好ましい。この場合、化合物は更に化学修飾に供される、いわゆる「リード構造」として機能し、この化学修飾をその後、１つ又は複数の後続する既知のスクリーニング法において、ｐ２７の量及び／又は生物学的活性を増大させるその有効性についてスクリーニングする。修飾は、新たな側鎖の導入又は官能基の交換、例えばハロゲン（特にＦ、Ｃｌ又はＢｒ）の導入、好ましくは炭素原子数１〜５の低級アルキル基（例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基又はイソペンチル基）、好ましくは炭素原子数２〜５の低級アルケニル基、好ましくは炭素原子数２〜５の低級アルキニル基の導入、又は例えばＮＨ２基、ＮＯ２基、ＯＨ基、ＳＨ基、ＮＨ基、ＣＮ基、アリール基、ヘテロアリール基、ＣＯＨ基若しくはＣＯＯＨ基からなる群から選択される基の導入を含むが、これらに限定されない当該技術分野で既知の様々な方法によって達成することができる。さらに、単一アミノ酸、ジペプチド、トリペプチド等の更なるペプチド基を分子に付加させてもよい。
【００２２】
本発明の更に別の態様は、医薬組成物を製造する方法であって、本明細書に記載のような本発明による大員環化合物を製造する方法と、上記大員環化合物を薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と混合することとを含む、医薬組成物を製造する方法に関する。例えば任意の従来の経路によって、特に経腸的に、例えば経口的に（例えば錠剤又はカプセルの形態で）、非経口的に（例えば注射用溶液又は注射用懸濁液の形態で）、局所的に（例えばローション、ジェル、軟膏又はクリームの形態で）、又は経鼻形態若しくは坐剤形態で全身投与又は局所投与される医薬組成物を調合するための担体、賦形剤及び戦略は当業者に既知であり、それぞれの文献中に記載されている。
【００２３】
薬剤（例えば化合物）の投与は、薬剤を標的細胞に到達させる任意の方法によって達成することができる。これらの方法としては、例えば注射、堆積（deposition）、注入、坐剤、経口摂取、吸入、局所投与、又は薬剤による標的細胞への接近が得られる任意の他の投与方法が挙げられる。注射は例えば静脈内注射、皮内注射、皮下注射、筋肉注射又は腹腔内注射であり得る。注入は、植え込み型薬物送達システム、例えばミクロスフェア、ヒドロゲル、ポリマーリザーバ、コレステロールマトリクス、ポリマーシステム（例えばマトリクス侵食及び／又は拡散システム）、及び非ポリマーシステム（例えば圧縮ペレット、融合ペレット又は部分融合ペレット）の挿入を含む。坐剤はグリセリン坐剤を含む。経口摂取剤形（doses）は腸溶コーティングすることができる。吸入は、吸入器内のエアロゾルを用いて、薬剤を単独で又は吸収されることのできる担体に付着させて投与することを含む。薬剤は、例えば溶解形態又はコロイド形態で液体中に懸濁させることができる。液体は溶媒、不完全溶媒又は非溶媒であり得る。多くの場合、水又は有機液体を使用することができる。
【００２４】
本発明の更に別の態様は次に、上記の方法に従って製造される医薬組成物に関する。
【００２５】
本発明の別の態様は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（例えば乾癬、又は乳がん、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸がん等のがん）から選択される疾患又は病態の治療のための本発明に従って製造される医薬組成物の使用である。本発明の更に別の態様は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（例えば乾癬、又は乳がん、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸がん等のがん）から選択される疾患又は病態の治療用の薬物の製造のための本発明による化合物の使用である。
【００２６】
合成される種々のアルギリン誘導体の生物学的効果を、特許文献３（参照により本明細書中に援用される）の実施例の項に記載のように試験したところ、本質的に同一であることが見出された。このため、本方法に従って製造される化合物は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（例えば乾癬、又は乳がん、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸がん等のがん）から選択される疾患又は病態の治療において有効である。
【００２７】
活性化合物をより良好な収率及び純度で合成することが可能であることは、使用される投与量をより少なくすることができ、潜在的副作用の減少につながるため、それぞれの医薬組成物の効果も改善すると考えられる。さらに、より直接的な合成は、例えば製造プロセスにおける誤りをより少なくすることができるため、製造されたそれぞれの（respective）薬物の安全性を改善する。
【００２８】
以下の実施例は、本発明を説明するものに過ぎず、本発明の範囲を実施例に記載される本発明の特定の実施形態に限定するものと解釈すべきではない。本発明の目的上、本明細書中に引用される全ての参考文献は、それらの全体が参照により本明細書中に援用される。当業者が提示の戦略に基づいて本発明の他の誘導体を合成するために、以下の合成を容易に修正することができることを理解すべきである。
【発明を実施するための形態】
【実施例】
【００２９】
１． ４−メトキシ−Ｌ−トリプトファン（２）の合成
（２）の合成における基本的な問題を避けるために、新たな効率的かつ経済的な合成方法として、最適化した立体選択的な触媒的水素化を確立した。
【００３０】
触媒の一般的製造：
水素化触媒の製造のために、ＤｕａｎＰｈｏｓ（７０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１ｍｌ）に溶解させ、ＴＨＦ（３ｍｌ）中の［Ｒｈ（ｃｏｄ）２］ＢＦ４（７１ｍｇ、０．１７５ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を３０分間撹拌し、続いてＥｔ２Ｏ（１２．５ｍｌ）を添加した。残渣を濾取し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、残留溶媒を真空下で除去した。
【００３１】
水素化（Ｓ−エナンチオマー（enantiomer））：
１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ及び［Ｒｈ（ｃｏｄ）２］ＢＦ４から製造された触媒（１．６ｍｇ）を、ＭｅＯＨ（３ｍＬ）に溶解させ、ＭｅＯＨ（１ｍＬ）に溶解させた９６ｍｇの遊離体（educt）１を添加する。反応混合物を１０バールで１日水素化する。溶媒を減圧下で除去した後、カラム濾過（ＭＴＢＥ／ＰＥ、１：１）を用いて触媒を除去する。反応生成物（２）が鏡像体過剰率９８．７％、定量的収率で得られる。
【化５】
【００３２】
触媒反応のリガンド：
【化６】
１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ（（１Ｓ，１’Ｓ，２Ｒ，２’Ｒ）−２，２’−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，３，２’，３’−テトラヒドロ−１Ｈ，１’Ｈ（１，１’）ビイソホスフィンドリル）及び１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ（（１Ｒ，１’Ｒ，２Ｓ，２’Ｓ）−２，２’−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−２，３，２’，３’−テトラヒドロ−１Ｈ，１’Ｈ−（１，１’）ビイソホスフィンドリル）は、例えばSigma-Aldrich（St. Louis，MO）から市販されている。
【００３３】
第２の（Ｒ−）エナンチオマーの合成：
【化７】
トリプトファンモジュールのＲ−エナンチオマーを、上記の合成プロトコルに従い１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓを用いて製造する。
【００３４】
MW d eq mmol
オレフィン 480.51 1 0.2 96mg
触媒 788.53 0.01 0.0002 1.6mg
MeOH 4ml
【００３５】
収率：定量的 ％ｅｅ：９７．６
【００３６】
エナンチオ選択性及び絶対配置を、Ｃｂｚ脱保護後にモッシャー法により決定した。
【００３７】
モッシャーアミド１１の合成
【化８】
Mosher chloride:モッシャークロリド
パラジウム炭素（Palladium on charcoal）（１００ｍｇ、１０重量％）を、Ｎα−Ｃｂｚ−ＮＩｎｄ−Ｂｏｃ−Ｌ−Ｔｒｐ−ＯＭｅ ８（２０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（１ｍｌ）に添加した。反応混合物を水素で３回パージし、室温で１２時間撹拌した。懸濁液をセライト（商標）のプラグを通して濾過し、メタノール（２×３ｍＬ）で洗浄し、濃縮した。このアミンを直接次の工程に使用した。
【００３８】
アミン（５ｍｇ、１４μｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１ｍＬ）に、室温でトリエチルアミン（１６μＬ、１１５μｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３．２ｍｇ、２６μｍｏｌ）、（Ｓ）−モッシャークロリド（１１μＬ、５８μｍｏｌ）を続けて添加した。混合物を室温で３時間撹拌し、酢酸エチル（１０ｍＬ）でクエンチした。混合物を飽和ＮａＨＳＯ４水溶液（５ｍＬ）、１Ｎ ＮａＯＨ（５ｍＬ）及び飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×５ｍＬ）で続けて洗浄した。有機相をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、対応するモッシャーエステル１１（８ｍｇ、１４μｍｏｌ、９６％）を得た。
【００３９】
Ｒｆ＝０．１８（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン １：３）；
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝７．８３（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．７９（ｄ，８．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．６０〜７．５３（ｍ，２Ｈ）、７．４３〜７．３６（ｍ，３Ｈ）、７．３３（ｓ，１Ｈ）、７．２５〜７．２１（ｍ，１Ｈ）、６．６７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ）、４．７８〜４．７０（ｍ，１Ｈ）、３．７７（ｓ，３Ｈ）、３．７５（ｓ，３Ｈ）、３．４３〜３．３５（ｍ，１Ｈ）、３．２８（ｄｄ，Ｊ＝１４．３，９．９Ｈｚ，１Ｈ）、２．９２（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，３Ｈ）、１．６６（ｓ，９Ｈ）。
１３Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：δ＝１７１．８、１６６．９、１５３．５、１４９．５、１３３．０、１２９．７、１２９．６、１２８．６、１２８．３、１２８．２、１２５．６、１２５．２、１２３．６、１１９．６、１１５．３、１０８．９、１０３．３、８４．０、７７．４、５５．２、５４．９、５２．４、２８．３、２８．０。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ） Ｃ２８Ｈ３１Ｎ２Ｏ７Ｆ３Ｎａについての算出値（［Ｍ＋Ｎａ］＋）：５８７．１９８１、実測値：５８７．１９８２。
【００４０】
Ｃｂｚ保護メトキシトリプトファンの合成
トリフルオロ酢酸（０．５ｍＬ）を、メトキシトリプトファン（９５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（４ｍＬ）に０℃で滴加した。反応混合物を室温で３．５時間撹拌した。溶液をトルエン（３×５ｍＬ）との同時蒸発によって濃縮し、得られた脱保護トリプトファンを直接次の工程に使用した。
【００４１】
０．５Ｎ ＬｉＯＨ水溶液（０．８ｍＬ、０．４ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／メタノール／水（７ｍＬ：１．３ｍＬ：４ｍＬ）中の脱保護トリプトファンの溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、２時間撹拌した。溶液を０．１Ｎ ＨＣｌ水溶液（１５ｍＬ）とジクロロメタン（１５ｍＬ）との間で分配した。水層をジクロロメタン（２×１５ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（１％から５％のメタノール勾配を有するジクロロメタン）によって精製し、５１ｍｇのＣｂｚ保護メトキシトリプトファン２を白色固体（０．１４ｍｍｏｌ、７０％、２工程）として得た。
【００４２】
Ｒｆ＝０．２７（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン ３：１、１％酢酸を含む）；
【数１】
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，［Ｄ６］ＤＭＳＯ，６０℃）：δ＝１０．７５（ｂｒ，ｓ，１Ｈ）、７．４１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）、７．２４〜７．３４（ｍ，５Ｈ）、６．９〜７．２（ｍ，３Ｈ）、６．４４（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ）、４．９５（ｍ，２Ｈ）、４．３０（ｍ，１Ｈ）、３．８３（ｓ，３Ｈ）、３．３５（ｄｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１Ｈ）、２．９５（ｄｄ，Ｊ＝１４．１０Ｈｚ，１Ｈ）。
【００４３】
２． アルギリンの合成（特に固相合成）及び機能分析
特に自動化による迅速かつ効率的なペプチド集合を可能にする固相ペプチド合成技法を含む、上記のようなトリプトファンアミノ酸製造工程を含むアルギリンの合成は、特許文献３（ＰＣＴ／ＥＰ２００９／００４５２６号。参照により本明細書中に援用される）の実施例の項に記載のように行うことができる。
【００４４】
合成された種々のアルギリン誘導体の生物学的効果を、特許文献３（参照により本明細書中に援用される）の実施例の項に記載のように試験したところ、本質的に同一であることが見出された。このため、本方法に従って製造される化合物は、免疫寛容誘導、自己免疫疾患、細菌感染及び増殖性疾患（例えば乾癬、又は乳がん、肝細胞癌、骨髄腫、頸癌、肺癌及び結腸がん等のがん）から選択される疾患又は病態の治療において有効である。
【００４５】
活性化合物をより良好な収率及び純度で合成することが可能であることは、使用される投与量をより少なくすることができ、潜在的副作用の減少につながるため、それぞれの医薬組成物の効果も改善すると考えられる。さらに、より直接的な合成は、例えば製造プロセスにおける誤りをより少なくすることができるため、製造されたそれぞれの薬物の安全性を改善する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
任意で保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法であって、触媒として［１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ Ｒｈ（ｃｏｄ）］ＢＦ４を使用する不斉水素化を含む、式２：
【化１】
に従う保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンメチルエステルの合成を含む、任意で保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法。
【請求項２】
任意で保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法であって、触媒として［１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ Ｒｈ（ｃｏｄ）］ＢＦ４を使用する不斉水素化を含む、式：
【化２】
に従う保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンメチルエステルの合成を含む、任意で保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法。
【請求項３】
触媒がそれぞれ［Ｒｈ（ｃｏｄ）２］ＢＦ４と、１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ又は１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓとから調製される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
定量的収率が少なくとも９７％ｅｅ又は少なくとも９８％ｅｅである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
以下の一般式（Ｉ）：
【化３】
（式中、
Ｒ１及びＲ２は独立して水素、非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、
Ｒ３は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、非置換であるか若しくはＯＨ若しくはＯＲ（Ｒは水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、アリール又はアセチルから選択される）によって置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、
Ｒ４は水素、ハロゲン、非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、
Ｒ５は水素又はハロゲンであり、
Ｒ６は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ７は水素、又は非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、
ＸはＣ＝ＣＨ２又はＣＨＲ８（Ｒ８は非置換であるか又は−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである）である）
に従う大員環化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法であって、請求項１〜３のいずれか一項に記載の任意で保護された４−メトキシ−トリプトファンの合成を含む、大員環化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法。
【請求項６】
前記合成が固相合成を含む、請求項５に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項７】
前記不斉水素化を１バール〜１００バール、又は１バール〜２０バール、又は１バール〜１０バールの圧力下で行う、請求項５又は６に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項８】
前記不斉水素化を１５℃〜１００℃の温度で行う、請求項５〜７のいずれか一項に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項９】
不斉水素化を溶媒としてアルコール又はメタノールを使用して行う、請求項５〜８のいずれか一項に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項１０】
前記大員環化合物が、アルギリンＡ〜Ｆ、Ｂ／Ｆ、並びにＡｌａ−α及びＡｌａ−β等のアルギリン、並びにそれらの単離立体異性体から選択される、請求項５〜９のいずれか一項に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項１１】
合成が固相ペプチド合成を含む、請求項５〜１０のいずれか一項に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項１２】
医薬組成物を製造する方法であって、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の大員環化合物を製造する方法と、前記大員環化合物を薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と混合することとを含む、医薬組成物を製造する方法。
【請求項１】
任意で保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法であって、触媒として［１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ Ｒｈ（ｃｏｄ）］ＢＦ４を使用する不斉水素化を含む、式２：
【化１】
に従う保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンメチルエステルの合成を含む、任意で保護されたＬ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法。
【請求項２】
任意で保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法であって、触媒として［１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ Ｒｈ（ｃｏｄ）］ＢＦ４を使用する不斉水素化を含む、式：
【化２】
に従う保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンメチルエステルの合成を含む、任意で保護されたＤ−４−メトキシトリプトファンを製造する方法。
【請求項３】
触媒がそれぞれ［Ｒｈ（ｃｏｄ）２］ＢＦ４と、１Ｓ，１Ｓ’，２Ｒ，２Ｒ’−ＤｕａｎＰｈｏｓ又は１Ｒ，１Ｒ’，２Ｓ，２Ｓ’−ＤｕａｎＰｈｏｓとから調製される、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
定量的収率が少なくとも９７％ｅｅ又は少なくとも９８％ｅｅである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
以下の一般式（Ｉ）：
【化３】
（式中、
Ｒ１及びＲ２は独立して水素、非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、
Ｒ３は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ、非置換であるか若しくはＯＨ若しくはＯＲ（Ｒは水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、アリール又はアセチルから選択される）によって置換されたＣ１〜Ｃ８アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、
Ｒ４は水素、ハロゲン、非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、
Ｒ５は水素又はハロゲンであり、
Ｒ６は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
Ｒ７は水素、又は非置換であるか若しくはＯＨによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキル、又はＣ１〜Ｃ４アルコキシであり、
ＸはＣ＝ＣＨ２又はＣＨＲ８（Ｒ８は非置換であるか又は−Ｓ−Ｃ１〜Ｃ４アルキルによって置換されたＣ１〜Ｃ４アルキルである）である）
に従う大員環化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法であって、請求項１〜３のいずれか一項に記載の任意で保護された４−メトキシ−トリプトファンの合成を含む、大員環化合物、並びにその立体異性体及び薬学的に許容可能な塩を製造する方法。
【請求項６】
前記合成が固相合成を含む、請求項５に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項７】
前記不斉水素化を１バール〜１００バール、又は１バール〜２０バール、又は１バール〜１０バールの圧力下で行う、請求項５又は６に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項８】
前記不斉水素化を１５℃〜１００℃の温度で行う、請求項５〜７のいずれか一項に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項９】
不斉水素化を溶媒としてアルコール又はメタノールを使用して行う、請求項５〜８のいずれか一項に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項１０】
前記大員環化合物が、アルギリンＡ〜Ｆ、Ｂ／Ｆ、並びにＡｌａ−α及びＡｌａ−β等のアルギリン、並びにそれらの単離立体異性体から選択される、請求項５〜９のいずれか一項に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項１１】
合成が固相ペプチド合成を含む、請求項５〜１０のいずれか一項に記載の大員環化合物を製造する方法。
【請求項１２】
医薬組成物を製造する方法であって、請求項５〜１１のいずれか一項に記載の大員環化合物を製造する方法と、前記大員環化合物を薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と混合することとを含む、医薬組成物を製造する方法。
【公表番号】特表２０１３−５１３６４３（Ｐ２０１３−５１３６４３Ａ）
【公表日】平成２５年４月２２日（２０１３．４．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５４３６７７（Ｐ２０１２−５４３６７７）
【出願日】平成２２年１２月１４日（２０１０．１２．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６９５９４
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０７３１７３
【国際公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【出願人】（５９１０８１３１０）ヘルムホルツ−ツェントルム フュア インフェクツィオンスフォルシュンク ゲーエムベーハー (9)
【出願人】（５０６２１０２６６）
【出願人】（５１２１５４８６２）ゴットフリート ヴィルヘルム ライプニッツ ウニヴェルジテート (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年４月２２日（２０１３．４．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１２月１４日（２０１０．１２．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６９５９４
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０７３１７３
【国際公開日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【出願人】（５９１０８１３１０）ヘルムホルツ−ツェントルム フュア インフェクツィオンスフォルシュンク ゲーエムベーハー (9)
【出願人】（５０６２１０２６６）
【出願人】（５１２１５４８６２）ゴットフリート ヴィルヘルム ライプニッツ ウニヴェルジテート (1)
【Ｆターム（参考）】
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