イナゴ加水分解物、その製造方法、及びイナゴ加水分解物配合剤
【課題】マウスの性機能を改善でき、マウスの抗酸素不足能力を高める。
【解決手段】イナゴ粉末ＨＣをビーカーに入れ、４０℃の条件で１時間保温する。保温後、ビーカーに活性化した配合酵素を加えて、５０℃まで温度を上昇させる。この時、懸濁液内のＨＣに対する配合酵素の割合は３％である。懸濁液を、ＰＨ＝７となるように調整し、加水分解温度５０℃に維持した状態で４時間撹拌させ、ＨＣに含まれる蛋白質等の構成成分を加水分解する。加水分解後、懸濁液を９０℃で１０分間加熱して配合酵素等を死滅させる。加熱後、懸濁液を遠心濾過して濾液を回収する。一方、残渣を熱水で二回洗浄する。この二回の洗浄液に先程の濾液を混合する。洗浄液と濾液からなる混合液を９０℃で１０分間殺菌し、回転蒸発措置で減圧濃縮させ、水浴温度７０℃で、乾燥するまで水分を蒸発させる。
【解決手段】イナゴ粉末ＨＣをビーカーに入れ、４０℃の条件で１時間保温する。保温後、ビーカーに活性化した配合酵素を加えて、５０℃まで温度を上昇させる。この時、懸濁液内のＨＣに対する配合酵素の割合は３％である。懸濁液を、ＰＨ＝７となるように調整し、加水分解温度５０℃に維持した状態で４時間撹拌させ、ＨＣに含まれる蛋白質等の構成成分を加水分解する。加水分解後、懸濁液を９０℃で１０分間加熱して配合酵素等を死滅させる。加熱後、懸濁液を遠心濾過して濾液を回収する。一方、残渣を熱水で二回洗浄する。この二回の洗浄液に先程の濾液を混合する。洗浄液と濾液からなる混合液を９０℃で１０分間殺菌し、回転蒸発措置で減圧濃縮させ、水浴温度７０℃で、乾燥するまで水分を蒸発させる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イナゴ（Ｈｕａｎｇ Ｃｈｏｎｇ）を加水分解する技術に関し、加水分解によって生成されたイナゴ固有のペプチドを主成分としてなるイナゴ加水分解物、その製造方法、及びイナゴ加水分解物配合剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、動植物に含まれる蛋白質を加水分解する技術として、例えば、特許文献１、２に記載されたものが知られている。特許文献１には、乳清蛋白等から蛋白加水分解物を得るための加水分解技術が記載され、また特許文献２には、藻類から加水分解物を得るための加水分解技術が記載されている。
【０００３】
【特許文献１】特公平７−３２７１８号公報
【特許文献２】特開２００５−２６３７０７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、加水分解の対象となる動植物に関して、これまでイナゴをその対象物とする加水分解技術は存在していなかった。
【０００５】
そこで、本発明は上記課題を鑑み、イナゴを加水分解の対象物とし、加水分解によって生成されたイナゴ固有のペプチドを主成分とするイナゴ加水分解物、その製造方法、及びイナゴ加水分解物配合剤の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するため、請求項１の発明に係るイナゴ加水分解物は、所定の配合重量比からなる配合酵素を加えることによって、イナゴ粉末を加水分解して生成され、疲労回復、抗酸素不足及び性機能改善などの効果があるように構成される。ここで、イナゴとは、バッタ目イナゴ科に属するものであり、例えばコバネイナゴ、ハネナガイナゴ等である。
【０００７】
請求項２の発明に係るイナゴ加水分解物は、配合酵素が、パパインと、中性プロディナーゼと、ポリペプチダーゼとを含んでなり、配合重量比が、パパイン：中性プロディナーゼ：ポリペプチダーゼ＝５：３：２であるように構成される。
【０００８】
請求項３の発明に係るイナゴ加水分解物は、加水分解が、水素イオン濃度指数６．５〜７．０、加水分解温度５０〜５５℃、加水分解時間３〜４時間の条件下で行われるように構成される。
【０００９】
請求項４の発明に係るイナゴ加水分解物の製造方法は、イナゴ粉末に所定の配合重量比からなる配合酵素を加え、配合酵素によってイナゴ粉末を加水分解する加水分解工程を有してなる。
【００１０】
請求項５の発明に係るイナゴ加水分解物配合剤は、少なくとも請求項１〜３のイナゴ加水分解物を配合してなり、顕著な疲労回復作用を備えるように構成される。
【００１１】
請求項６の発明に係るイナゴ加水分解物配合剤は、請求項１〜３のイナゴ加水分解物と、ハチの蛹冷凍乾燥粉末と、ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末とを、所定の配合重量比で配合してなるイナゴ加水分解物配合剤であって、配合重量比が、イナゴ加水分解物：ハチの蛹冷凍乾燥粉末：ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末＝３：５：２、であるように構成される。
【００１２】
請求項７の発明に係るイナゴ加水分解物配合剤は、投与量を０．４ｇ〜４５ｇ／人／日とした場合に、高効持久な効果を発揮するように構成される。
【発明の効果】
【００１３】
請求項１〜４の発明によれば、本イナゴ加水分解物を投与したマウスについて、その性機能を改善すると共に、抗酸素不足能力を高めることが可能となる。
【００１４】
請求項５〜７の発明によれば、顕著な疲労回復作用を発揮できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明に係るイナゴ加水分解物の実施の一形態を説明する。本イナゴ加水分解物は、イナゴに含まれる蛋白質を配合酵素の作用によって加水分解して生成されたペプチドを主成分としてなるものである。以下、本イナゴ加水分解物をイナゴペプチド（Ｈｕａｎｇ Ｃｈｏｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ）と称し、ＨＣＰと記する。
【００１６】
本発明で使用される生イナゴの平均水分含有量は、１００ｇ×０．６６７＝６６．７ｇである。また、生イナゴの平均乾燥重量は、１００ｇ×（１−０．６６７）＝３３．３ｇである。そして、乾燥させたイナゴ粉末におけるタンパク質含有量は、ケルダール法で測定したところ、７０．０％である。
【００１７】
また、本発明で使用される配合酵素は以下のように配合調整される。
先ず、配合する酵素として、パパイン８０万ｕ／ｇ、中性プロディナーゼ２０万ｕ／ｇ、塩基性プロディナーゼ２０万ｕ／ｇ、ポリペプチダーゼ１万ｕ／ｇ、を用意した。尚、これら全部の酵素は、広西南寧芳、博生物工程有限公司方から提供されたものである。
配合酵素の配合割合は、パパイン：中性プロディナーゼ：ポリペプチダーゼ＝５：３：２とした。尚、この配合割合は、配合重量比を示すものである。
また、配合酵素の活性化は、前記の配合割合で調製した配合酵素を１００ｍｇ取り、これに１０ｍｌ１％ＮａＣｌ水溶液を加え、３７℃の活性化温度を維持して１時間の活性化時間で保温することにより行った。
【００１８】
図１は、本発明に係るＨＣＰの製造方法の一実施形態を示し、イナゴ粉末に対する実験用配合酵素による加水分解工程を含むＨＣＰの製造工程説明図である。
【００１９】
図１に示すように、ＨＣＰは以下の手順で製造される。
（１）４ｇイナゴ粉末ＨＣ（基質）を１５０ｍｌビーカーに入れ、４０℃の条件で１時間保温する（前処理工程Ｓ１−１）。
（２）保温後、ビーカーに前述の活性化した配合酵素１２１ｍｇを加えて、５０℃まで温度を上昇させる。この時、ビーカー内の懸濁液の総体積は１５０ｍｌであり、懸濁液内の基質に対する配合酵素の割合は３％である。
（３）懸濁液を、水素イオン濃度指数（以下、ＰＨ）＝７となるように調整し、加水分解温度５０℃に維持した状態で４時間撹拌させ、ＨＣに含まれる蛋白質等の構成成分を加水分解する（加水分解工程Ｓ１−２）。
（４）加水分解後、懸濁液を９０℃で１０分間加熱して配合酵素等を死滅させる。
（５）加熱後、懸濁液を遠心濾過して濾液を回収する。一方、残渣を４０ｍｌ５０℃の熱水で二回洗浄する。この二回の洗浄液に先程の濾液を混合する。
（６）洗浄液と濾液からなる混合液を９０℃で１０分間殺菌し、回転蒸発措置で減圧濃縮させ、水浴温度７０℃で、乾燥するまで水分を蒸発させる（後処理工程Ｓ１−３）。
（７）その結果、１．６８ｇの薄い赤黄色のＨＣＰの結晶を得る。この時、ＨＣＰの収率は１．６８ｇ／（４×０．７ｇ）＝６０％である。また、本ＨＣＰにおいて、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動でペプチドの含有量を測定した結果、含有量は７２％であり、そのペプチドの相対分子量は２０００〜６０００である。
【００２０】
図２は、本発明に係るＨＣＰの製造方法の他の実施形態を示し、イナゴ粉末に対する量産用配合酵素による加水分解工程を含むＨＣＰの製造工程説明図である。
【００２１】
図２に示すように、ＨＣＰは以下の手順で製造される。
（１）４３ｋｇイナゴ粉末（基質）を１０００リットル容量のカバー付きステンレス缶に入れ、６００リットルの水を加えて撹拌し、この懸濁液を４０℃の条件で１時間保温する（前処理工程Ｓ２−１）。
（２）保温後、ステンレス缶に前述の活性化した配合酵素０．９０３ｋｇを加えて、５０℃まで温度を上昇させる。この時、懸濁液には水が補充されて、懸濁液の総体積は９８０リットルとなっており、懸濁液内の基質に対する配合酵素の割合は３％である。
（３）懸濁液を、ＰＨ＝７となるように調整し、加水分解温度５０℃に維持した状態で４時間撹拌させ、ＨＣに含まれる蛋白質等の構成成分を加水分解する（加水分解工程Ｓ２−２）。
（４）加水分解後、懸濁液を９０℃で１０分間加熱して配合酵素等を死滅させる。
（５）加熱後、懸濁液を遠心濾過して濾液を回収する。一方、残渣を４００リットル５０℃の水で二回を洗浄する。この二回の洗浄液に先程の濾液を混合する。
（６）洗浄液と濾液からなる混合液を９０℃で１０分間殺菌する。この時、混合液の比重は、１．００〜１．０５である。この混合液を、入口の温度が１４０℃であり、出口の温度が７０℃である遠心噴霧乾燥機を用いて乾燥させる（後処理工程Ｓ２−３）。
（７）その結果、１５．１２ｋｇの淡い褐色でふわふわとしているＨＣＰの固体を得る。この時、ＨＣＰの収率は１５．１２／３０．１＝５０％である。ここで、「３０．１」は、イナゴ粉末４３ｋｇの７０％（蛋白質含有量）から導出した。また、本ＨＣＰにおいて、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動でペプチドの含有量を測定した結果、含有量は７２％であり、そのペプチドの相対分子量は２０００〜６０００である。また、水分含有量は３％である。そして、細菌検査の結果は陰性である。
【００２２】
次に、ＨＣＰ、及び所定量のＨＣＰを配合してなるＨＣＰ配合剤の各種の活性機能について検証する。
第１のＨＣＰ配合剤（以下、ＨＣＰ１とする）は、７００ｍｇ／錠となるように、ＨＣＰ４２０ｍｇ（６０％）と、配合物として、東北人参抽出エキス２１０ｍｇ（３０％）、及び西洋人参抽出エキス７０ｍｇ（１０％）から構成される。
第２のＨＣＰ配合剤（以下、ＨＣＰ２とする）は、７００ｍｇ／錠となるように、ＨＣＰ４２０ｍｇ（６０％）と、配合物として、東北人参抽出エキス１７５ｍｇ（２５％）、西洋人参抽出エキス７０ｍｇ（１０％）、及び白ハマビシ抽出エキス３５ｍｇ（５％）から構成される。
尚、ＨＣＰは、純イナゴペプチドであり、７２％のペプチドを含有している。
【００２３】
ＨＣＰ、ＨＣＰ１、ＨＣＰ２による各種の活性機能を検証は、以下の動物実験（１）〜（８）によって行った。
先ず、実験組として、何も投与しない対照組、イナゴ粉末（イナゴを乾燥粉末化した状態で含まれるたんぱく質、以下、イナゴ蛋白質）を投与する陽性対照組（ＨＣ組）、ＨＣＰ１を投与するＨＣＰ１組 、ＨＣＰ２を投与するＨＣＰ２組、ＨＣＰを投与するＨＣＰ組の計５組に組み分ける。各組につき１２匹ずつのマウスを割り当てる。ここで、各マウスとして、ＩＣＲマウス３００匹の中から、雌雄各半数ずつ、それぞれの体重が１８〜２２ｇ、平均体重が約２０ｇとなるものを選択する。
各組の投与量は、イナゴ蛋白質またはＨＣＰを８７０ｍｇ／ｋｇ、ＨＣを１２４２．９ｍｇ／ｋｇ、ＨＣＰが皆１７．４ｍｇ／０．３ｍｌ／匹とする。尚、各組の投与量は、以下の臨床推薦量に相当する。(１７．４ｍｇ×５０)／(２０ｇ×５０) ×５５Kｇ（男女平均体重）÷１４００ｍｇ＝３４倍である。よって、臨床推薦使用量は、７００ｍｇ／錠×２錠＝１４００ｍｇとなる。
【００２４】
先ず、ＨＣＰ１ 、ＨＣＰ２ 、ＨＣＰによるマウスの体力性疲労に対する影響を検証するため、以下の実験（１）〜（６）を行った。
（１）水泳実験
先ず一辺が少なくとも３０ｃｍ以上の水面面積と所定深さを備え、水温２５±１℃の温水を所定量加えてなる水泳箱を用意する。最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスのお尻に体重の５％の重量物を背負わせて、この水泳箱で水泳をさせる。水泳開始から頭部の全てが水中に入って水面に浮かびだすことができないときまでの時間をマウスの水泳時間として記録する。
【００２５】
（２）棒のぼり実験
マウスが棒のぼりできるように処理した有機ガラス棒を鉛直方向へ向けて配置する。最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスを有機ガラス棒に置き、マウスの筋肉が緊張状態となるようにする。マウスを置いた時間からマウスの筋肉疲労で有機ガラス棒から落ちる時間を記録する。マウスが三回落ちた時、実験は終了とする。計三回の累計時間をマウスの棒のぼり時間とする。
【００２６】
（３）血中尿素窒素の測定実験
最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスを水温２５±１℃の前述の水泳箱で９０分間水泳させる。６０分間休ませた後に、眼球から血液を採り、血清を取って試薬キットで血中尿素窒素を測定する。
【００２７】
（４）肝グリコーゲンの測定実験
最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスを水温３０±１℃の水泳箱で６０分間水泳させる。マウスを死亡させて肝臓を取り、正確に２００ｍｇ取って４ｍｌのトリクロロ酢酸（以下、ＴＣＡとする）を加え、一試験管ずつ１分間均質化して３０００ｒｐｍで１５分間遠心し、上澄液を取って他の試験管に置く。沈殿物に４ｍｌのＴＣＡを加えて、また１分間均質化して１５分間遠心し、上澄液を取って前記の上澄液と混合し、十分に均質化する。１ｍｌ上澄液を取って，一試験管ずつ４ｍｌ９５％アルコールを加え、二つの液体の間に界面がないまで十分に均質化する。室温の条件に次日まで置き、十分に沈殿した後に３０００ｒ／ｍｉｎで１５分間遠心する。上澄液を空け、試験管を１０分間置き、１ｍｌ蒸留水で振蕩溶解した後に肝グリコーゲンを測定する。
【００２８】
（５）筋糖原の測定実験
最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスを水温３０±１℃の前述の水泳箱で６０分間水泳させる。マウスを死亡させて筋肉を取り、０．９%ＮａＣｌ溶液で洗浄し、濾紙で干させ、正確に１ｇ筋肉を取って３ｍｌ３０％ＫＯＨの試験管にいれ、試験管を沸騰水に置いて２０分間水浴させる。取り出し冷却した後に、５０ｍｌ定容瓶に転入し、水で試験管を数回洗浄し、全て定容瓶に転入し、目盛りまで水を加え、均質化する。沸騰水に置いて１０分間水浴させ、取り出し冷却する。その後、紫外線分光測光法を使用し、６２０ｎｍ波長で光の吸収量を測定して、空白試験管を零点まで調整する。
【００２９】
上記（１）〜（５）の実験結果から、ＨＣＰ、ＨＣＰ１、ＨＣＰ２によるマウスの水泳時間、棒のぼり時間、血中尿素窒素、肝グリコーゲン、筋糖原の含有量に対する影響について考察する。
表１に示すように、参照実験組は対照組より、ＨＣＰ１組の水泳時間を９２％（ｐ＜０．０１）、ＨＣＰ１組の水泳時間を７２％（ｐ＜０．０５）それぞれ長くすることができる。実験組は対照組より、ＨＣ組の棒のぼり時間を１３２％，ＨＣＰ１組の棒のぼり時間を２０３％（ｐ＜０．００１）、ＨＣＰ２組の棒のぼり時間を３２５％（ｐ＜０．００１）、ＨＣＰ組の棒のぼり時間を２９１％（ｐ＜０．０１）長くすることができる。実験組は対照組より、ＨＣＰ組の血中尿素窒素の含有量を１６％（ｐ＜０．０１），ＨＣＰ１組のが１３％（ｐ＜０．０５）低減できる。ＨＣＰ２組の肝グリコーゲン眼湯量は対照組の２．４倍（ｐ＜０．０１）に相当し、ＨＣＰ組の肝グリコーゲン眼湯量は対照組の３．６倍（ｐ＜０．００１）に相当する。
【００３０】
【００３１】
（６）血中乳酸の測定実験
最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスのお尻に４％体重の重量物を背負わせ、水温３０±１℃の前述の水泳箱で１０分間水泳させる。それぞれ水泳前、水泳後０、１５、６０分毎にマウス眼角静脈から血液を採る。５ｍｌ遠心管に０．４8ｍｌの１％ＮａＦ溶液を加え、微量ピペットで正確に２０μｌ血液を取って試験管の底部に入れ、試験管上澄液で微量ピペットを数回洗い、たんぱく質沈殿剤を加え、振蕩均質化し、３０００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心し、上澄液を取り血中乳酸を測定する。
【００３２】
上記（６）の測定結果から、ＨＣＰ、ＨＣＰ１、ＨＣＰ２によるマウスの血中乳酸含有量に対する影響について考察する。
表２に示すように、水泳後０分と１５分のＨＣＰ組は対照組より、血中乳酸含有量がそれぞれ２４％（ｐ＜０．０１）と２４％（ｐ＜０．０５）低減できる。また水泳前の血中乳酸含有量に近づくことがわかる。
【００３３】
【００３４】
次に、ＨＣＰ、ＨＣＰ１ 、ＨＣＰ２による正常雄性マウスの交配に対する影響を検証するため、以下の実験（７）を行った。
（７）交配に対する影響検証実験
実験動物は、ＩＣＲマウス、雄性４8匹、雌性１４４匹、平均体重が約３０ｇのものを使用する。投与量は、生理食塩水を対照組に投与し、ＨＣＰ、ＨＣＰ１ 、ＨＣＰ２は全て１７．４ｍｇ／０．３ｍｌ／匹である。雌雄割合は、３：１である。
実験結果は、表３、表４に示す。
【００３５】
【００３６】
【００３７】
次に、ＨＣ、ＨＣＰ１ 、ＨＣＰ２ 、ＨＣＰによるＩＣＲマウスの抗酸素不足に対する影響を検証するため、以下の実験（８）を行った。
（８）抗酸素不足に対する影響検証実験
実験動物は、壮年期に属する８５ｄａｙｓのＩＣＲマウス６０匹を、一組に１２匹ずつ５組に分けて使用する。この時、雌雄各半、それぞれの体重が２8〜３２ｇであり、平均体重が約３０ｇであるようにする。実験条件は、瓶の中の真空度を０．０７ｍＰａとする。この値は、高度２６３００ｍ相当の真空度に相当する。この高度は、チョモランマの頂上高さの約３倍に相当する。
実験結果は、表５に示す。
【００３８】
【００３９】
実験結果の結論としては、本実験によって、ＨＣＰ、ＨＣＰ１、ＨＣＰ２は、マウスの水泳時間、棒のぼり時間、血中乳酸、血中尿素窒素、肝グリコーゲン、筋糖原の含有量に対して、顕著な効果を奏することが確認できた。これは、マウスの性機能を改善でき、マウスの抗酸素不足能力を高めることを意味している。
【００４０】
次に、ＨＣＰ、及び所定量のＨＣＰを配合してなる他のＨＣＰ配合剤の各種の活性機能について検証する。
このＨＣＰ配合剤（Ｎｅｗ Ｆｕｆａｎｇ Ｈｕａｎｇ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ、以下ＮＦＨＰと略称する）は、ＨＣＰと、ハチの蛹冷凍乾燥粉末と、ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末とを、配合重量比が、ＨＣＰ３０％、ハチの蛹冷凍乾燥粉末５０％、ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末２０％、となるように配合して構成されている。
【００４１】
本ＮＦＨＰを構成する各配合材料は、北京君陽愛瑪科技有限公司から提供されている。また、ＮＦＨＰの人間推薦使用量は、０．１２５ｇ／ｋｇ×６０ｋｇ÷５＝１．５ｇ／日とする。
【００４２】
実験動物として、北京大学実験動物学部から提供された昆明種マウスを、一組ごとに６４匹からなる四組にランダムに分ける。そして、四組の内の実験一組の６４匹にはウェイト水泳実験を行い、実験二組の６４匹には血中尿素窒素の測定実験を行い、実験三組の６４匹には肝グリコーゲンの測定実験を行い、実験四組の６４匹には血中乳酸の測定実験を行なう。
【００４３】
さらに四組の各組を１６匹ずつ、何も投与しない陰性対照組組、及び人間推薦使用量の５倍、１０倍、３０倍のＮＦＨＰを投与する、即ちＮＦＨＰ０．１２５／ｋｇ．ｂｗを投与する低投与量組、ＮＦＨＰ０．２５０／ｋｇ．ｂｗを投与する中投与量組、ＮＦＨＰ０．７５０／ｋｇ．ｂｗを投与する高投与量組の計１６組に組み分ける。
【００４４】
マウスへの投与は、陰性対照組には蒸留水を、他の組には、経口で各投与量のＮＦＨＰを胃に入れ込むことで行う。投与量は、０．２ｍｌ／１０ｇ．ｂｗである。３０日間連続投与した後、各疲労回復作用指標を測定する。
【００４５】
先ず、ＮＦＨＰによるマウスの各疲労回復作用指標を測定するため、以下の実験（９）〜（１２）を行った。
（９）水泳実験
最終回実験物を実験一組のマウスに投与してから３０分後に、そのマウスの尾部に５％体重の鉛を背負わせ、水温２５±１℃の前述の水泳箱で水泳させる。水泳開始から頭部の全てが水中に入って水面に浮かびだすことができないときまでの時間をマウスの水泳時間として記録する。
【００４６】
（１０）血中尿素窒素の測定実験
最終回実験物を実験二組のマウスに投与してから３０分後に、水温３０±１℃の前述の水泳箱で９０分間水泳させる。水泳した後６０分間安静にさせた後に、眼球を取り出し、０．５ｍｌ血液を採取し、血清を分離して血中尿素窒素を測定する。
【００４７】
（１１）肝グリコーゲンの測定実験
最終回実験物を実験三組のマウスに投与してから３０分後に、水温３０±１℃の前述の水泳箱で９０分間水泳させる。頚椎脱臼法によって死亡させ、肝臓を取り出し、生理食塩液で洗浄し、ろ紙で乾燥する。肝臓を約２００ｍｇ（正確に実際重量を記録)を計り取り、４ｍｌ５％のＴＣＡで均質化し、均質化液を遠心管に入れ、３０００ｒｐｍで１５分間遠心し、上澄液を他の試験管に入れる。沈殿物に４ｍｌ５％のＴＣＡを入れ、１分間均質化し、上澄液を取って前記の上澄液と混合し、十分に均質化する。アントローン法で肝臓のグリコーゲンを測定する。
【００４８】
（１２）血中乳酸の測定実験
最終回実験物を実験四組のマウスに投与してから３０分後に、５０μｌ血液を採取し、抗凝血管に入れる。その後、マウスの尾部に４％体重の鉛を背負わせ、水温３０±１℃の前述の水泳箱で１０分間水泳させる。水泳後０分と６０分毎にそれぞれ５０μｌ血液を採取し、抗凝血管に入れ、乳酸測定器で全部血液の乳酸を測定する。
【００４９】
尚、実験データの処理は、累乗差分析ソフトで行なう。また、本実験中において、各項実験に各組の動物数が違うのは、水泳実験により死亡したからである。
【００５０】
上記（９）〜（１２）の実験結果を下記に示す。
先ず、実験一組、実験二組、実験三組、実験四組におけるマウスの体重への影響を表６，７，８に示す。
【００５１】
【００５２】
【００５３】
【００５４】
表６から、各組の初期体重には顕著な差異がなく（Ｐ＞０．０５）、実験組の間の体重が一致していることが分かる。各投与量組は陰性対照組と比べて、実験一組の高投与量組の中期体重（表７）には顕著な差異があり（Ｐ＜０．０５）、それ以外、各組の中期体重と末期体重（表８）には皆顕著な差異がない（Ｐ＞０．０５）。即ち、ＮＦＨＰの投与により、マウスの体重へ顕著な影響がないことを意味している。
【００５５】
次に、ＮＦＨＰの投与によるウェイト水泳時間への影響を表９に示す。
【００５６】
【００５７】
表９から、高、中、低投与量組のウェイト水泳時間は、陰性対照組と比べて皆顕著な差異がある（Ｐ＜０．０５）ことが分かる。すなわち、これは、投与したＮＦＨＰがマウスのウェイト水泳時間に対して延長作用を発揮していることを意味している。
【００５８】
次に、ＮＦＨＰの投与による血中尿素窒素への影響を表１０に示す。
【００５９】
【００６０】
表１０から、低投与量組の血中尿素窒素が陰性対照組と比べて非常に顕著な差異がある（Ｐ＜０．０１）ことが分かる。すなわち、これは、投与したＮＦＨＰがマウスの血中尿素窒素に対して低下作用を発揮していることを意味している。
【００６１】
次に、ＮＦＨＰの投与による肝グリコーゲンへの影響を表１１に示す。
【００６２】
【００６３】
表１１から、中投与量組の肝グリコーゲンが陰性対照組と比べて非常に顕著な差異がある（Ｐ＜０．０１）ことが分かる。すなわち、これは、投与したＮＦＨＰがマウスの肝グリコーゲンを増加させ、あるいは肝グリコーゲンの消耗に対して抑止作用を発揮していることを意味している。
【００６４】
次に、ＮＦＨＰの投与による血中乳酸への影響を表１２、１３に示す。
表１２では、１０分間運動直後にすぐ血液を採取し、その乳酸値と運動前の乳酸値の差値を示す。また表１３では、１０分間運動直後にすぐ血液を採取し、運動後６０分後にもう一回血液を採取し、その乳酸値の変化の差値を示す。
【００６５】
【００６６】
表１２から、低、中、高投与量組の血中乳酸上昇が陰性対照組と比べて顕著な差異がある（Ｐ＜０．０１）ことが分かる。すなわち、これは、投与したＮＦＨＰがマウスの血中乳酸の上昇速度に対して低下作用を発揮していることを意味している。
【００６７】
【００６８】
表１３から、三つの投与量組の血液乳酸の除去速度が陰性対照組と比べて顕著な差異がある（Ｐ＞０．００５）ことが分かる。すなわち、これは、投与したＮＦＨＰがマウスの血中乳酸の除去速度に対して影響がないことを意味している。
【００６９】
次に、上記実験結果について検討する。
（１）上記実験によって、ＮＦＨＰは、すべてのマウスの体重に対して顕著な影響を示さないことを確認した。
（２）上記実験によって、ＮＦＨＰの高、中、低投与量組は、陰性対照組と比べて皆非常に顕著な差異を示すことを確認した（P＜０．０５かつP＜０．０１）。
（３）上記実験によって、ＮＦＨＰは、マウス運動後及び運動中の血中尿素窒素、肝グリコーゲン、血中乳酸の上昇速度に対して、陰性対照組と比べて皆顕著また非常に顕著な差異を示すことを確認した（P＜０．０５かつP＜０．０１）。ただし、ＮＦＨＰがマウスの運動後の血中乳酸の除去速度に対しては、影響を示さないことを確認した。これらの検討から、本ＮＦＨＰは開発価値を持っているものであることがわかった。
【００７０】
また、人体にＮＦＨＰを投与した場合の人体に対する影響を明らかにするため、下記実験（１３）〜（１５）を行った。
【００７１】
実験（１３）
ある大学重量挙げチームの６人は、毎日０．７ｇ×２のＮＦＨＰ錠剤を服用し、運動前１ｈに一錠を服用したところ、１時間〜２時間後に皆全身に火照り感を感じた。１ヶ月後、この6人の重量挙げ成績はある程度上昇した。
実験（１４）
ある企業の男性マラソン選手１０人は、毎日０．７ｇ×２のＮＦＨＰ錠剤を服用した。二ヶ月後、平均成績は服用前の２時間２２分台から２時間１８分５０秒まで上昇した。
実験（１５）
ある高校男子陸上競技百メートルチームの５人は、毎日０．７ｇ×２のＮＦＨＰ錠剤を服用し、毎日午後２時間訓練した。服用前の１００ｍの平均成績は１２秒６０である。二ヶ月後、１００ｍの平均成績は１２秒０７まで向上した。また、ある男子の成績はＮＦＨＰの服用前の１２秒８０から１１秒９１まで向上した。
【００７２】
本実験によって、本ＮＦＨＰは、顕著な疲労回復作用を発揮できることが分かった。
【００７３】
尚、本発明は上記実施形態に限定されるものではなく、以下列挙するように、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で各部の形状並びに構成を適宜に変更して実施することも可能である。
（１）水素イオン濃度指数の値は、特に７が望ましいが、６．５〜７の範囲で適用可能である。
（２）加水分解温度は、特に５０℃が望ましいが、５０〜５５℃の範囲で適用可能である。
（３）加水分解時間は、特に４時間が望ましいが、３〜４時間の範囲で適用可能である。
（４）イナゴ加水分解物配合剤は、イナゴ加水分解物を６０重量パーセントで配合して構成することに限らず、５〜９５重量パーセントで適用可能である。
（５）イナゴ加水分解物配合剤は、少なくともイナゴ加水分解物を配合してなるものであればよく、単独で構成することはもちろん、ハチの蛹冷凍乾燥粉末やロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末以外の他の動植物を用いた抽出物、薬品、食品等を配合して構成しても良い。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】本発明に係るイナゴ加水分解物の一実施形態を示す製造工程説明図である。
【図２】本発明に係るイナゴ加水分解物の他の実施形態を示す製造工程説明図である。
【符号の説明】
【００７５】
Ｓ１−１，Ｓ２−１・・前処理工程、Ｓ１−２，Ｓ２−２・・加水分解工程、Ｓ１−３，Ｓ２−３・・後処理工程、ＨＣ・・イナゴ粉末、ＨＣＰ・・イナゴ加水分解物。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イナゴ（Ｈｕａｎｇ Ｃｈｏｎｇ）を加水分解する技術に関し、加水分解によって生成されたイナゴ固有のペプチドを主成分としてなるイナゴ加水分解物、その製造方法、及びイナゴ加水分解物配合剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、動植物に含まれる蛋白質を加水分解する技術として、例えば、特許文献１、２に記載されたものが知られている。特許文献１には、乳清蛋白等から蛋白加水分解物を得るための加水分解技術が記載され、また特許文献２には、藻類から加水分解物を得るための加水分解技術が記載されている。
【０００３】
【特許文献１】特公平７−３２７１８号公報
【特許文献２】特開２００５−２６３７０７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、加水分解の対象となる動植物に関して、これまでイナゴをその対象物とする加水分解技術は存在していなかった。
【０００５】
そこで、本発明は上記課題を鑑み、イナゴを加水分解の対象物とし、加水分解によって生成されたイナゴ固有のペプチドを主成分とするイナゴ加水分解物、その製造方法、及びイナゴ加水分解物配合剤の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するため、請求項１の発明に係るイナゴ加水分解物は、所定の配合重量比からなる配合酵素を加えることによって、イナゴ粉末を加水分解して生成され、疲労回復、抗酸素不足及び性機能改善などの効果があるように構成される。ここで、イナゴとは、バッタ目イナゴ科に属するものであり、例えばコバネイナゴ、ハネナガイナゴ等である。
【０００７】
請求項２の発明に係るイナゴ加水分解物は、配合酵素が、パパインと、中性プロディナーゼと、ポリペプチダーゼとを含んでなり、配合重量比が、パパイン：中性プロディナーゼ：ポリペプチダーゼ＝５：３：２であるように構成される。
【０００８】
請求項３の発明に係るイナゴ加水分解物は、加水分解が、水素イオン濃度指数６．５〜７．０、加水分解温度５０〜５５℃、加水分解時間３〜４時間の条件下で行われるように構成される。
【０００９】
請求項４の発明に係るイナゴ加水分解物の製造方法は、イナゴ粉末に所定の配合重量比からなる配合酵素を加え、配合酵素によってイナゴ粉末を加水分解する加水分解工程を有してなる。
【００１０】
請求項５の発明に係るイナゴ加水分解物配合剤は、少なくとも請求項１〜３のイナゴ加水分解物を配合してなり、顕著な疲労回復作用を備えるように構成される。
【００１１】
請求項６の発明に係るイナゴ加水分解物配合剤は、請求項１〜３のイナゴ加水分解物と、ハチの蛹冷凍乾燥粉末と、ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末とを、所定の配合重量比で配合してなるイナゴ加水分解物配合剤であって、配合重量比が、イナゴ加水分解物：ハチの蛹冷凍乾燥粉末：ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末＝３：５：２、であるように構成される。
【００１２】
請求項７の発明に係るイナゴ加水分解物配合剤は、投与量を０．４ｇ〜４５ｇ／人／日とした場合に、高効持久な効果を発揮するように構成される。
【発明の効果】
【００１３】
請求項１〜４の発明によれば、本イナゴ加水分解物を投与したマウスについて、その性機能を改善すると共に、抗酸素不足能力を高めることが可能となる。
【００１４】
請求項５〜７の発明によれば、顕著な疲労回復作用を発揮できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
以下、本発明に係るイナゴ加水分解物の実施の一形態を説明する。本イナゴ加水分解物は、イナゴに含まれる蛋白質を配合酵素の作用によって加水分解して生成されたペプチドを主成分としてなるものである。以下、本イナゴ加水分解物をイナゴペプチド（Ｈｕａｎｇ Ｃｈｏｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ）と称し、ＨＣＰと記する。
【００１６】
本発明で使用される生イナゴの平均水分含有量は、１００ｇ×０．６６７＝６６．７ｇである。また、生イナゴの平均乾燥重量は、１００ｇ×（１−０．６６７）＝３３．３ｇである。そして、乾燥させたイナゴ粉末におけるタンパク質含有量は、ケルダール法で測定したところ、７０．０％である。
【００１７】
また、本発明で使用される配合酵素は以下のように配合調整される。
先ず、配合する酵素として、パパイン８０万ｕ／ｇ、中性プロディナーゼ２０万ｕ／ｇ、塩基性プロディナーゼ２０万ｕ／ｇ、ポリペプチダーゼ１万ｕ／ｇ、を用意した。尚、これら全部の酵素は、広西南寧芳、博生物工程有限公司方から提供されたものである。
配合酵素の配合割合は、パパイン：中性プロディナーゼ：ポリペプチダーゼ＝５：３：２とした。尚、この配合割合は、配合重量比を示すものである。
また、配合酵素の活性化は、前記の配合割合で調製した配合酵素を１００ｍｇ取り、これに１０ｍｌ１％ＮａＣｌ水溶液を加え、３７℃の活性化温度を維持して１時間の活性化時間で保温することにより行った。
【００１８】
図１は、本発明に係るＨＣＰの製造方法の一実施形態を示し、イナゴ粉末に対する実験用配合酵素による加水分解工程を含むＨＣＰの製造工程説明図である。
【００１９】
図１に示すように、ＨＣＰは以下の手順で製造される。
（１）４ｇイナゴ粉末ＨＣ（基質）を１５０ｍｌビーカーに入れ、４０℃の条件で１時間保温する（前処理工程Ｓ１−１）。
（２）保温後、ビーカーに前述の活性化した配合酵素１２１ｍｇを加えて、５０℃まで温度を上昇させる。この時、ビーカー内の懸濁液の総体積は１５０ｍｌであり、懸濁液内の基質に対する配合酵素の割合は３％である。
（３）懸濁液を、水素イオン濃度指数（以下、ＰＨ）＝７となるように調整し、加水分解温度５０℃に維持した状態で４時間撹拌させ、ＨＣに含まれる蛋白質等の構成成分を加水分解する（加水分解工程Ｓ１−２）。
（４）加水分解後、懸濁液を９０℃で１０分間加熱して配合酵素等を死滅させる。
（５）加熱後、懸濁液を遠心濾過して濾液を回収する。一方、残渣を４０ｍｌ５０℃の熱水で二回洗浄する。この二回の洗浄液に先程の濾液を混合する。
（６）洗浄液と濾液からなる混合液を９０℃で１０分間殺菌し、回転蒸発措置で減圧濃縮させ、水浴温度７０℃で、乾燥するまで水分を蒸発させる（後処理工程Ｓ１−３）。
（７）その結果、１．６８ｇの薄い赤黄色のＨＣＰの結晶を得る。この時、ＨＣＰの収率は１．６８ｇ／（４×０．７ｇ）＝６０％である。また、本ＨＣＰにおいて、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動でペプチドの含有量を測定した結果、含有量は７２％であり、そのペプチドの相対分子量は２０００〜６０００である。
【００２０】
図２は、本発明に係るＨＣＰの製造方法の他の実施形態を示し、イナゴ粉末に対する量産用配合酵素による加水分解工程を含むＨＣＰの製造工程説明図である。
【００２１】
図２に示すように、ＨＣＰは以下の手順で製造される。
（１）４３ｋｇイナゴ粉末（基質）を１０００リットル容量のカバー付きステンレス缶に入れ、６００リットルの水を加えて撹拌し、この懸濁液を４０℃の条件で１時間保温する（前処理工程Ｓ２−１）。
（２）保温後、ステンレス缶に前述の活性化した配合酵素０．９０３ｋｇを加えて、５０℃まで温度を上昇させる。この時、懸濁液には水が補充されて、懸濁液の総体積は９８０リットルとなっており、懸濁液内の基質に対する配合酵素の割合は３％である。
（３）懸濁液を、ＰＨ＝７となるように調整し、加水分解温度５０℃に維持した状態で４時間撹拌させ、ＨＣに含まれる蛋白質等の構成成分を加水分解する（加水分解工程Ｓ２−２）。
（４）加水分解後、懸濁液を９０℃で１０分間加熱して配合酵素等を死滅させる。
（５）加熱後、懸濁液を遠心濾過して濾液を回収する。一方、残渣を４００リットル５０℃の水で二回を洗浄する。この二回の洗浄液に先程の濾液を混合する。
（６）洗浄液と濾液からなる混合液を９０℃で１０分間殺菌する。この時、混合液の比重は、１．００〜１．０５である。この混合液を、入口の温度が１４０℃であり、出口の温度が７０℃である遠心噴霧乾燥機を用いて乾燥させる（後処理工程Ｓ２−３）。
（７）その結果、１５．１２ｋｇの淡い褐色でふわふわとしているＨＣＰの固体を得る。この時、ＨＣＰの収率は１５．１２／３０．１＝５０％である。ここで、「３０．１」は、イナゴ粉末４３ｋｇの７０％（蛋白質含有量）から導出した。また、本ＨＣＰにおいて、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動でペプチドの含有量を測定した結果、含有量は７２％であり、そのペプチドの相対分子量は２０００〜６０００である。また、水分含有量は３％である。そして、細菌検査の結果は陰性である。
【００２２】
次に、ＨＣＰ、及び所定量のＨＣＰを配合してなるＨＣＰ配合剤の各種の活性機能について検証する。
第１のＨＣＰ配合剤（以下、ＨＣＰ１とする）は、７００ｍｇ／錠となるように、ＨＣＰ４２０ｍｇ（６０％）と、配合物として、東北人参抽出エキス２１０ｍｇ（３０％）、及び西洋人参抽出エキス７０ｍｇ（１０％）から構成される。
第２のＨＣＰ配合剤（以下、ＨＣＰ２とする）は、７００ｍｇ／錠となるように、ＨＣＰ４２０ｍｇ（６０％）と、配合物として、東北人参抽出エキス１７５ｍｇ（２５％）、西洋人参抽出エキス７０ｍｇ（１０％）、及び白ハマビシ抽出エキス３５ｍｇ（５％）から構成される。
尚、ＨＣＰは、純イナゴペプチドであり、７２％のペプチドを含有している。
【００２３】
ＨＣＰ、ＨＣＰ１、ＨＣＰ２による各種の活性機能を検証は、以下の動物実験（１）〜（８）によって行った。
先ず、実験組として、何も投与しない対照組、イナゴ粉末（イナゴを乾燥粉末化した状態で含まれるたんぱく質、以下、イナゴ蛋白質）を投与する陽性対照組（ＨＣ組）、ＨＣＰ１を投与するＨＣＰ１組 、ＨＣＰ２を投与するＨＣＰ２組、ＨＣＰを投与するＨＣＰ組の計５組に組み分ける。各組につき１２匹ずつのマウスを割り当てる。ここで、各マウスとして、ＩＣＲマウス３００匹の中から、雌雄各半数ずつ、それぞれの体重が１８〜２２ｇ、平均体重が約２０ｇとなるものを選択する。
各組の投与量は、イナゴ蛋白質またはＨＣＰを８７０ｍｇ／ｋｇ、ＨＣを１２４２．９ｍｇ／ｋｇ、ＨＣＰが皆１７．４ｍｇ／０．３ｍｌ／匹とする。尚、各組の投与量は、以下の臨床推薦量に相当する。(１７．４ｍｇ×５０)／(２０ｇ×５０) ×５５Kｇ（男女平均体重）÷１４００ｍｇ＝３４倍である。よって、臨床推薦使用量は、７００ｍｇ／錠×２錠＝１４００ｍｇとなる。
【００２４】
先ず、ＨＣＰ１ 、ＨＣＰ２ 、ＨＣＰによるマウスの体力性疲労に対する影響を検証するため、以下の実験（１）〜（６）を行った。
（１）水泳実験
先ず一辺が少なくとも３０ｃｍ以上の水面面積と所定深さを備え、水温２５±１℃の温水を所定量加えてなる水泳箱を用意する。最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスのお尻に体重の５％の重量物を背負わせて、この水泳箱で水泳をさせる。水泳開始から頭部の全てが水中に入って水面に浮かびだすことができないときまでの時間をマウスの水泳時間として記録する。
【００２５】
（２）棒のぼり実験
マウスが棒のぼりできるように処理した有機ガラス棒を鉛直方向へ向けて配置する。最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスを有機ガラス棒に置き、マウスの筋肉が緊張状態となるようにする。マウスを置いた時間からマウスの筋肉疲労で有機ガラス棒から落ちる時間を記録する。マウスが三回落ちた時、実験は終了とする。計三回の累計時間をマウスの棒のぼり時間とする。
【００２６】
（３）血中尿素窒素の測定実験
最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスを水温２５±１℃の前述の水泳箱で９０分間水泳させる。６０分間休ませた後に、眼球から血液を採り、血清を取って試薬キットで血中尿素窒素を測定する。
【００２７】
（４）肝グリコーゲンの測定実験
最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスを水温３０±１℃の水泳箱で６０分間水泳させる。マウスを死亡させて肝臓を取り、正確に２００ｍｇ取って４ｍｌのトリクロロ酢酸（以下、ＴＣＡとする）を加え、一試験管ずつ１分間均質化して３０００ｒｐｍで１５分間遠心し、上澄液を取って他の試験管に置く。沈殿物に４ｍｌのＴＣＡを加えて、また１分間均質化して１５分間遠心し、上澄液を取って前記の上澄液と混合し、十分に均質化する。１ｍｌ上澄液を取って，一試験管ずつ４ｍｌ９５％アルコールを加え、二つの液体の間に界面がないまで十分に均質化する。室温の条件に次日まで置き、十分に沈殿した後に３０００ｒ／ｍｉｎで１５分間遠心する。上澄液を空け、試験管を１０分間置き、１ｍｌ蒸留水で振蕩溶解した後に肝グリコーゲンを測定する。
【００２８】
（５）筋糖原の測定実験
最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスを水温３０±１℃の前述の水泳箱で６０分間水泳させる。マウスを死亡させて筋肉を取り、０．９%ＮａＣｌ溶液で洗浄し、濾紙で干させ、正確に１ｇ筋肉を取って３ｍｌ３０％ＫＯＨの試験管にいれ、試験管を沸騰水に置いて２０分間水浴させる。取り出し冷却した後に、５０ｍｌ定容瓶に転入し、水で試験管を数回洗浄し、全て定容瓶に転入し、目盛りまで水を加え、均質化する。沸騰水に置いて１０分間水浴させ、取り出し冷却する。その後、紫外線分光測光法を使用し、６２０ｎｍ波長で光の吸収量を測定して、空白試験管を零点まで調整する。
【００２９】
上記（１）〜（５）の実験結果から、ＨＣＰ、ＨＣＰ１、ＨＣＰ２によるマウスの水泳時間、棒のぼり時間、血中尿素窒素、肝グリコーゲン、筋糖原の含有量に対する影響について考察する。
表１に示すように、参照実験組は対照組より、ＨＣＰ１組の水泳時間を９２％（ｐ＜０．０１）、ＨＣＰ１組の水泳時間を７２％（ｐ＜０．０５）それぞれ長くすることができる。実験組は対照組より、ＨＣ組の棒のぼり時間を１３２％，ＨＣＰ１組の棒のぼり時間を２０３％（ｐ＜０．００１）、ＨＣＰ２組の棒のぼり時間を３２５％（ｐ＜０．００１）、ＨＣＰ組の棒のぼり時間を２９１％（ｐ＜０．０１）長くすることができる。実験組は対照組より、ＨＣＰ組の血中尿素窒素の含有量を１６％（ｐ＜０．０１），ＨＣＰ１組のが１３％（ｐ＜０．０５）低減できる。ＨＣＰ２組の肝グリコーゲン眼湯量は対照組の２．４倍（ｐ＜０．０１）に相当し、ＨＣＰ組の肝グリコーゲン眼湯量は対照組の３．６倍（ｐ＜０．００１）に相当する。
【００３０】
【００３１】
（６）血中乳酸の測定実験
最終回受験物をマウスに投与してから３０分後に、そのマウスのお尻に４％体重の重量物を背負わせ、水温３０±１℃の前述の水泳箱で１０分間水泳させる。それぞれ水泳前、水泳後０、１５、６０分毎にマウス眼角静脈から血液を採る。５ｍｌ遠心管に０．４8ｍｌの１％ＮａＦ溶液を加え、微量ピペットで正確に２０μｌ血液を取って試験管の底部に入れ、試験管上澄液で微量ピペットを数回洗い、たんぱく質沈殿剤を加え、振蕩均質化し、３０００ｒ／ｍｉｎで１０分間遠心し、上澄液を取り血中乳酸を測定する。
【００３２】
上記（６）の測定結果から、ＨＣＰ、ＨＣＰ１、ＨＣＰ２によるマウスの血中乳酸含有量に対する影響について考察する。
表２に示すように、水泳後０分と１５分のＨＣＰ組は対照組より、血中乳酸含有量がそれぞれ２４％（ｐ＜０．０１）と２４％（ｐ＜０．０５）低減できる。また水泳前の血中乳酸含有量に近づくことがわかる。
【００３３】
【００３４】
次に、ＨＣＰ、ＨＣＰ１ 、ＨＣＰ２による正常雄性マウスの交配に対する影響を検証するため、以下の実験（７）を行った。
（７）交配に対する影響検証実験
実験動物は、ＩＣＲマウス、雄性４8匹、雌性１４４匹、平均体重が約３０ｇのものを使用する。投与量は、生理食塩水を対照組に投与し、ＨＣＰ、ＨＣＰ１ 、ＨＣＰ２は全て１７．４ｍｇ／０．３ｍｌ／匹である。雌雄割合は、３：１である。
実験結果は、表３、表４に示す。
【００３５】
【００３６】
【００３７】
次に、ＨＣ、ＨＣＰ１ 、ＨＣＰ２ 、ＨＣＰによるＩＣＲマウスの抗酸素不足に対する影響を検証するため、以下の実験（８）を行った。
（８）抗酸素不足に対する影響検証実験
実験動物は、壮年期に属する８５ｄａｙｓのＩＣＲマウス６０匹を、一組に１２匹ずつ５組に分けて使用する。この時、雌雄各半、それぞれの体重が２8〜３２ｇであり、平均体重が約３０ｇであるようにする。実験条件は、瓶の中の真空度を０．０７ｍＰａとする。この値は、高度２６３００ｍ相当の真空度に相当する。この高度は、チョモランマの頂上高さの約３倍に相当する。
実験結果は、表５に示す。
【００３８】
【００３９】
実験結果の結論としては、本実験によって、ＨＣＰ、ＨＣＰ１、ＨＣＰ２は、マウスの水泳時間、棒のぼり時間、血中乳酸、血中尿素窒素、肝グリコーゲン、筋糖原の含有量に対して、顕著な効果を奏することが確認できた。これは、マウスの性機能を改善でき、マウスの抗酸素不足能力を高めることを意味している。
【００４０】
次に、ＨＣＰ、及び所定量のＨＣＰを配合してなる他のＨＣＰ配合剤の各種の活性機能について検証する。
このＨＣＰ配合剤（Ｎｅｗ Ｆｕｆａｎｇ Ｈｕａｎｇ Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ、以下ＮＦＨＰと略称する）は、ＨＣＰと、ハチの蛹冷凍乾燥粉末と、ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末とを、配合重量比が、ＨＣＰ３０％、ハチの蛹冷凍乾燥粉末５０％、ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末２０％、となるように配合して構成されている。
【００４１】
本ＮＦＨＰを構成する各配合材料は、北京君陽愛瑪科技有限公司から提供されている。また、ＮＦＨＰの人間推薦使用量は、０．１２５ｇ／ｋｇ×６０ｋｇ÷５＝１．５ｇ／日とする。
【００４２】
実験動物として、北京大学実験動物学部から提供された昆明種マウスを、一組ごとに６４匹からなる四組にランダムに分ける。そして、四組の内の実験一組の６４匹にはウェイト水泳実験を行い、実験二組の６４匹には血中尿素窒素の測定実験を行い、実験三組の６４匹には肝グリコーゲンの測定実験を行い、実験四組の６４匹には血中乳酸の測定実験を行なう。
【００４３】
さらに四組の各組を１６匹ずつ、何も投与しない陰性対照組組、及び人間推薦使用量の５倍、１０倍、３０倍のＮＦＨＰを投与する、即ちＮＦＨＰ０．１２５／ｋｇ．ｂｗを投与する低投与量組、ＮＦＨＰ０．２５０／ｋｇ．ｂｗを投与する中投与量組、ＮＦＨＰ０．７５０／ｋｇ．ｂｗを投与する高投与量組の計１６組に組み分ける。
【００４４】
マウスへの投与は、陰性対照組には蒸留水を、他の組には、経口で各投与量のＮＦＨＰを胃に入れ込むことで行う。投与量は、０．２ｍｌ／１０ｇ．ｂｗである。３０日間連続投与した後、各疲労回復作用指標を測定する。
【００４５】
先ず、ＮＦＨＰによるマウスの各疲労回復作用指標を測定するため、以下の実験（９）〜（１２）を行った。
（９）水泳実験
最終回実験物を実験一組のマウスに投与してから３０分後に、そのマウスの尾部に５％体重の鉛を背負わせ、水温２５±１℃の前述の水泳箱で水泳させる。水泳開始から頭部の全てが水中に入って水面に浮かびだすことができないときまでの時間をマウスの水泳時間として記録する。
【００４６】
（１０）血中尿素窒素の測定実験
最終回実験物を実験二組のマウスに投与してから３０分後に、水温３０±１℃の前述の水泳箱で９０分間水泳させる。水泳した後６０分間安静にさせた後に、眼球を取り出し、０．５ｍｌ血液を採取し、血清を分離して血中尿素窒素を測定する。
【００４７】
（１１）肝グリコーゲンの測定実験
最終回実験物を実験三組のマウスに投与してから３０分後に、水温３０±１℃の前述の水泳箱で９０分間水泳させる。頚椎脱臼法によって死亡させ、肝臓を取り出し、生理食塩液で洗浄し、ろ紙で乾燥する。肝臓を約２００ｍｇ（正確に実際重量を記録)を計り取り、４ｍｌ５％のＴＣＡで均質化し、均質化液を遠心管に入れ、３０００ｒｐｍで１５分間遠心し、上澄液を他の試験管に入れる。沈殿物に４ｍｌ５％のＴＣＡを入れ、１分間均質化し、上澄液を取って前記の上澄液と混合し、十分に均質化する。アントローン法で肝臓のグリコーゲンを測定する。
【００４８】
（１２）血中乳酸の測定実験
最終回実験物を実験四組のマウスに投与してから３０分後に、５０μｌ血液を採取し、抗凝血管に入れる。その後、マウスの尾部に４％体重の鉛を背負わせ、水温３０±１℃の前述の水泳箱で１０分間水泳させる。水泳後０分と６０分毎にそれぞれ５０μｌ血液を採取し、抗凝血管に入れ、乳酸測定器で全部血液の乳酸を測定する。
【００４９】
尚、実験データの処理は、累乗差分析ソフトで行なう。また、本実験中において、各項実験に各組の動物数が違うのは、水泳実験により死亡したからである。
【００５０】
上記（９）〜（１２）の実験結果を下記に示す。
先ず、実験一組、実験二組、実験三組、実験四組におけるマウスの体重への影響を表６，７，８に示す。
【００５１】
【００５２】
【００５３】
【００５４】
表６から、各組の初期体重には顕著な差異がなく（Ｐ＞０．０５）、実験組の間の体重が一致していることが分かる。各投与量組は陰性対照組と比べて、実験一組の高投与量組の中期体重（表７）には顕著な差異があり（Ｐ＜０．０５）、それ以外、各組の中期体重と末期体重（表８）には皆顕著な差異がない（Ｐ＞０．０５）。即ち、ＮＦＨＰの投与により、マウスの体重へ顕著な影響がないことを意味している。
【００５５】
次に、ＮＦＨＰの投与によるウェイト水泳時間への影響を表９に示す。
【００５６】
【００５７】
表９から、高、中、低投与量組のウェイト水泳時間は、陰性対照組と比べて皆顕著な差異がある（Ｐ＜０．０５）ことが分かる。すなわち、これは、投与したＮＦＨＰがマウスのウェイト水泳時間に対して延長作用を発揮していることを意味している。
【００５８】
次に、ＮＦＨＰの投与による血中尿素窒素への影響を表１０に示す。
【００５９】
【００６０】
表１０から、低投与量組の血中尿素窒素が陰性対照組と比べて非常に顕著な差異がある（Ｐ＜０．０１）ことが分かる。すなわち、これは、投与したＮＦＨＰがマウスの血中尿素窒素に対して低下作用を発揮していることを意味している。
【００６１】
次に、ＮＦＨＰの投与による肝グリコーゲンへの影響を表１１に示す。
【００６２】
【００６３】
表１１から、中投与量組の肝グリコーゲンが陰性対照組と比べて非常に顕著な差異がある（Ｐ＜０．０１）ことが分かる。すなわち、これは、投与したＮＦＨＰがマウスの肝グリコーゲンを増加させ、あるいは肝グリコーゲンの消耗に対して抑止作用を発揮していることを意味している。
【００６４】
次に、ＮＦＨＰの投与による血中乳酸への影響を表１２、１３に示す。
表１２では、１０分間運動直後にすぐ血液を採取し、その乳酸値と運動前の乳酸値の差値を示す。また表１３では、１０分間運動直後にすぐ血液を採取し、運動後６０分後にもう一回血液を採取し、その乳酸値の変化の差値を示す。
【００６５】
【００６６】
表１２から、低、中、高投与量組の血中乳酸上昇が陰性対照組と比べて顕著な差異がある（Ｐ＜０．０１）ことが分かる。すなわち、これは、投与したＮＦＨＰがマウスの血中乳酸の上昇速度に対して低下作用を発揮していることを意味している。
【００６７】
【００６８】
表１３から、三つの投与量組の血液乳酸の除去速度が陰性対照組と比べて顕著な差異がある（Ｐ＞０．００５）ことが分かる。すなわち、これは、投与したＮＦＨＰがマウスの血中乳酸の除去速度に対して影響がないことを意味している。
【００６９】
次に、上記実験結果について検討する。
（１）上記実験によって、ＮＦＨＰは、すべてのマウスの体重に対して顕著な影響を示さないことを確認した。
（２）上記実験によって、ＮＦＨＰの高、中、低投与量組は、陰性対照組と比べて皆非常に顕著な差異を示すことを確認した（P＜０．０５かつP＜０．０１）。
（３）上記実験によって、ＮＦＨＰは、マウス運動後及び運動中の血中尿素窒素、肝グリコーゲン、血中乳酸の上昇速度に対して、陰性対照組と比べて皆顕著また非常に顕著な差異を示すことを確認した（P＜０．０５かつP＜０．０１）。ただし、ＮＦＨＰがマウスの運動後の血中乳酸の除去速度に対しては、影響を示さないことを確認した。これらの検討から、本ＮＦＨＰは開発価値を持っているものであることがわかった。
【００７０】
また、人体にＮＦＨＰを投与した場合の人体に対する影響を明らかにするため、下記実験（１３）〜（１５）を行った。
【００７１】
実験（１３）
ある大学重量挙げチームの６人は、毎日０．７ｇ×２のＮＦＨＰ錠剤を服用し、運動前１ｈに一錠を服用したところ、１時間〜２時間後に皆全身に火照り感を感じた。１ヶ月後、この6人の重量挙げ成績はある程度上昇した。
実験（１４）
ある企業の男性マラソン選手１０人は、毎日０．７ｇ×２のＮＦＨＰ錠剤を服用した。二ヶ月後、平均成績は服用前の２時間２２分台から２時間１８分５０秒まで上昇した。
実験（１５）
ある高校男子陸上競技百メートルチームの５人は、毎日０．７ｇ×２のＮＦＨＰ錠剤を服用し、毎日午後２時間訓練した。服用前の１００ｍの平均成績は１２秒６０である。二ヶ月後、１００ｍの平均成績は１２秒０７まで向上した。また、ある男子の成績はＮＦＨＰの服用前の１２秒８０から１１秒９１まで向上した。
【００７２】
本実験によって、本ＮＦＨＰは、顕著な疲労回復作用を発揮できることが分かった。
【００７３】
尚、本発明は上記実施形態に限定されるものではなく、以下列挙するように、本発明の趣旨を逸脱しない範囲で各部の形状並びに構成を適宜に変更して実施することも可能である。
（１）水素イオン濃度指数の値は、特に７が望ましいが、６．５〜７の範囲で適用可能である。
（２）加水分解温度は、特に５０℃が望ましいが、５０〜５５℃の範囲で適用可能である。
（３）加水分解時間は、特に４時間が望ましいが、３〜４時間の範囲で適用可能である。
（４）イナゴ加水分解物配合剤は、イナゴ加水分解物を６０重量パーセントで配合して構成することに限らず、５〜９５重量パーセントで適用可能である。
（５）イナゴ加水分解物配合剤は、少なくともイナゴ加水分解物を配合してなるものであればよく、単独で構成することはもちろん、ハチの蛹冷凍乾燥粉末やロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末以外の他の動植物を用いた抽出物、薬品、食品等を配合して構成しても良い。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１】本発明に係るイナゴ加水分解物の一実施形態を示す製造工程説明図である。
【図２】本発明に係るイナゴ加水分解物の他の実施形態を示す製造工程説明図である。
【符号の説明】
【００７５】
Ｓ１−１，Ｓ２−１・・前処理工程、Ｓ１−２，Ｓ２−２・・加水分解工程、Ｓ１−３，Ｓ２−３・・後処理工程、ＨＣ・・イナゴ粉末、ＨＣＰ・・イナゴ加水分解物。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定の配合重量比からなる配合酵素を加えることによって、イナゴ粉末を加水分解して生成され、
疲労回復、抗酸素不足及び性機能改善などの効果がある、
ことを特徴とするイナゴ加水分解物。
【請求項２】
配合酵素が、
パパインと、中性プロディナーゼと、ポリペプチダーゼとを含んでなり、
配合重量比が、
パパイン：中性プロディナーゼ：ポリペプチダーゼ＝５：３：２
である、
ことを特徴とする請求項１に記載のイナゴ加水分解物。
【請求項３】
加水分解が、
水素イオン濃度指数６．５〜７．０、加水分解温度５０〜５５℃、加水分解時間３〜４時間の条件下で行われる、
ことを特徴とする請求項１または２に記載のイナゴ加水分解物。
【請求項４】
イナゴ粉末に所定の配合重量比からなる配合酵素を加え、配合酵素によってイナゴ粉末を加水分解する加水分解工程を有してなる、
ことを特徴とするイナゴ加水分解物の製造方法。
【請求項５】
少なくとも請求項１〜３のイナゴ加水分解物を配合してなり、顕著な疲労回復作用を備える、
ことを特徴とするイナゴ加水分解物配合剤。
【請求項６】
請求項１〜３のイナゴ加水分解物と、ハチの蛹冷凍乾燥粉末と、ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末とを、所定の配合重量比で配合してなるイナゴ加水分解物配合剤であって、
配合重量比が、
イナゴ加水分解物：ハチの蛹冷凍乾燥粉末：ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末＝３：５：２
である、
ことを特徴とするイナゴ加水分解物配合剤。
【請求項７】
投与量を０．４ｇ〜４５ｇ／人／日とした場合に、高効持久な効果を発揮する、
ことを特徴とする請求項５又は６に記載のイナゴ加水分解物配合剤。
【請求項１】
所定の配合重量比からなる配合酵素を加えることによって、イナゴ粉末を加水分解して生成され、
疲労回復、抗酸素不足及び性機能改善などの効果がある、
ことを特徴とするイナゴ加水分解物。
【請求項２】
配合酵素が、
パパインと、中性プロディナーゼと、ポリペプチダーゼとを含んでなり、
配合重量比が、
パパイン：中性プロディナーゼ：ポリペプチダーゼ＝５：３：２
である、
ことを特徴とする請求項１に記載のイナゴ加水分解物。
【請求項３】
加水分解が、
水素イオン濃度指数６．５〜７．０、加水分解温度５０〜５５℃、加水分解時間３〜４時間の条件下で行われる、
ことを特徴とする請求項１または２に記載のイナゴ加水分解物。
【請求項４】
イナゴ粉末に所定の配合重量比からなる配合酵素を加え、配合酵素によってイナゴ粉末を加水分解する加水分解工程を有してなる、
ことを特徴とするイナゴ加水分解物の製造方法。
【請求項５】
少なくとも請求項１〜３のイナゴ加水分解物を配合してなり、顕著な疲労回復作用を備える、
ことを特徴とするイナゴ加水分解物配合剤。
【請求項６】
請求項１〜３のイナゴ加水分解物と、ハチの蛹冷凍乾燥粉末と、ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末とを、所定の配合重量比で配合してなるイナゴ加水分解物配合剤であって、
配合重量比が、
イナゴ加水分解物：ハチの蛹冷凍乾燥粉末：ロイヤル・ゼリー冷凍乾燥粉末＝３：５：２
である、
ことを特徴とするイナゴ加水分解物配合剤。
【請求項７】
投与量を０．４ｇ〜４５ｇ／人／日とした場合に、高効持久な効果を発揮する、
ことを特徴とする請求項５又は６に記載のイナゴ加水分解物配合剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００６−３４２１５３（Ｐ２００６−３４２１５３Ａ）
【公開日】平成１８年１２月２１日（２００６．１２．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−１２１０５３（Ｐ２００６−１２１０５３）
【出願日】平成１８年４月２５日（２００６．４．２５）
【出願人】（５０４４３５２８７）君陽生物科学株式会社 (2)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年１２月２１日（２００６．１２．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年４月２５日（２００６．４．２５）
【出願人】（５０４４３５２８７）君陽生物科学株式会社 (2)
【Ｆターム（参考）】
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