コラーゲン産生促進剤、化粧料、コラーゲン産生促進方法
【課題】植物の抽出物を有効成分とするコラーゲン産生促進剤を提供する。
【解決手段】ローマンカモミール（学名：Anthemis nobilis）を水蒸気蒸留法により抽出して得られる精油（エッセンシャルオイル）を有効成分として含有することで、コラーゲン産生促進作用を有するコラーゲン産生促進剤を提供する。また、コラーゲン産生促進剤を使用したコラーゲン産生促進法を提供する。
【解決手段】ローマンカモミール（学名：Anthemis nobilis）を水蒸気蒸留法により抽出して得られる精油（エッセンシャルオイル）を有効成分として含有することで、コラーゲン産生促進作用を有するコラーゲン産生促進剤を提供する。また、コラーゲン産生促進剤を使用したコラーゲン産生促進法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、繊維芽細胞のコラーゲン産生を促進する作用を有する天然由来の物質に関し、特に植物の精油（エッセンシャルオイル）を有効成分とするコラーゲン産生促進剤及び化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の真皮には、皮膚の弾力性を保つ役割を果たすコラーゲンが豊富に含まれている。真皮におけるコラーゲンは真皮の繊維芽細胞によって合成され、コラーゲン合成が活発に行われている皮膚では、弾力性に優れた張りのある肌が維持される。しかし、真皮中のコラーゲンは、紫外線や活性酸素などによって変性したり、加齢により線維芽細胞によって合成される量が減少してしまう。このような理由で真皮中のコラーゲン量が減少すると、真皮の厚みが減少し、皮膚の弾力性が失われていき、結果としてシワやたるみなどの肌の老化現象が引き起こされる。そのため、弾力性に優れた若々しい肌を保つためには、真皮の線維芽細胞によるコラーゲン合成を促進することが有効である。
【０００３】
従来、皮膚のコラーゲン合成を促進する作用を有する物質としては、Ｌ−アスコルビン酸などが知られている。また、天然物としては、シソ科のタイム、スイカズラ科のエルダーおよびカンラン科カンラン属のエレミなどの植物を水蒸気蒸留して得られる精油がコラーゲン合成促進作用を有することが知られている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２３２７４０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のように、弾力性のある肌を維持するためにコラーゲンが重要な役割を果たすことから、コラーゲン産生促進作用を有するさらなる有用な物質が望まれていた。そこで、本願発明は、コラーゲン産生促進作用を有する物質として、天然物である植物を原料とする精油を有効成分とするコラーゲン産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、線維芽細胞のコラーゲン産生を促進させる作用を有する物質を鋭意研究した結果、特定の植物を水蒸気蒸留して得られる精油がコラーゲン産生を促進することに関し優れた効果を奏するものであることを見出した。
【０００７】
すなわち、（１）本願発明に係るコラーゲン産生促進剤は、キク科のローマンカモミール（学名：Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ）を水蒸気蒸留して得られる精油からなることを特徴とする。
【０００８】
（２） （１）のコラーゲン産生促進剤において、前記精油は真皮の線維芽細胞のコラーゲン産生を促進することを特徴とする。
【０００９】
（３） 本願発明に係る化粧料は、（１）又は（２）のコラーゲン産生促進剤を含有することを特徴とする。
【００１０】
（４） 本願発明のコラーゲン産生促進方法は、（１）又は（２）のコラーゲン産生促進剤を使用してコラーゲンの産生を促進させることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本願発明にかかる、ローマンカモミールの精油を有効成分とするコラーゲン産生促進剤及び当該コラーゲン産生促進剤を使用したコラーゲン産生促進方法によれば、皮膚のコラーゲン産生を促進する効果を得ることができる。特に、真皮の線維芽細胞において合成されるＩ型コラーゲンについて、優れた産生促進作用を得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本願発明を詳細に説明する。
【００１３】
本発明に係るコラーゲン産生促進剤として用いる精油の原料には、ローマンカモミール（Ｒｏｍａｎ ｃｈａｍｏｍｉｌｅ）（学名：Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ）を使用する。ローマンカモミールは、キク科の多年草でローマカミツレとも呼ばれる。
【００１４】
そして、本発明に係るコラーゲン産生促進剤に使用するローマンカモミールの精油（エッセンシャルオイル）は、ローマンカモミールを水蒸気蒸留法により抽出して得られる精油を用いるのが好ましい。抽出する抽出部位は特に限定されないが、花の部分を水蒸気蒸留により抽出するのが好ましい。
【００１５】
ここで、精油（エッセンシャルオイル）とは、植物の花、葉、果皮、樹皮、根、種子、樹脂などから抽出した、芳香を有する天然の揮発性の物質であり、水蒸気蒸留法、圧搾法、溶剤抽出法、超臨界流体抽出法などの所定の抽出方法により抽出・分離される。本発明に係るコラーゲン産生促進剤に使用するローマンカモミールの精油は、上記の抽出方法のうち、上述のように水蒸気蒸留法を用いて抽出・分離するのが好ましい。
【００１６】
本発明のローマンカモミールの精油を抽出する水蒸気蒸留法を説明する。まず、原料の植物であるローマンカモミールの花を蒸留器の釜に入れ、水蒸気を下から送り込んで植物にあてると、精油が植物から遊離して気化し、水蒸気と共に蒸留器内を上昇する。それを冷却管に通して冷やすと精油が混入した液体が得られる。そして、精油は水より軽く、水に溶けないために、精油と水が分離するため、上記精油が混入した液体から精油だけ採取することができる。
【００１７】
以上の方法により抽出したローマンカモミールの精油は、通常、肌荒れやかぶれ等を防ぐために、様々な用途に合わせて希釈して用いたり、他の基剤と配合して化粧料などの製剤として利用することが好ましい。ローマンカモミールの精油のコラーゲン促進剤としての利用例としては、例えば、本発明に係るコラーゲン産生促進剤をオリーブオイルやホホバオイルやスイートアーモンドオイルなどの植物性のキャリアオイルで希釈することにより、皮膚に塗布して用いるスキンケア用のオイルとして使用することができる。また、本発明に係るコラーゲン産生促進剤を各種化粧料基剤に配合することで、クリーム、乳液、化粧水、洗顔料、ジェル、パックなど、本発明に係るコラーゲン合成促進剤を成分の一つとする様々な外用の化粧料を得ることができる。もちろん、ローマンカモミールの精油は、肌荒れなどが起こらない範囲で、そのままコラーゲン産生促進剤として皮膚に塗布して使用することも可能である。
【００１８】
なお、本発明に係るコラーゲン産生促進剤をスキンケア用オイルやその他の化粧料の成分として使用する場合の配合量は特に限定されず、コラーゲン産生促進剤のみを配合して構成してもよいが、例えば、精油の成分の配合量が化粧料などの全量に対して、０．００１質量％〜５質量％となる範囲で配合し、好ましくは、０．００１質量％〜１質量％となる範囲で配合する。
【００１９】
以上のような、本発明に係るコラーゲン産生促進剤あるいはコラーゲン産生促進剤を含有する化粧料などの組成物は、ヒトの真皮中の線維芽細胞におけるコラーゲン産生を促進する効果を有しており、弾力性のある肌を維持するために有効である。また、本発明に係るコラーゲン産生促進剤はローマンカモミールの精油を有効成分としているため、精油の芳香によって、アロマテラピー（芳香療法）効果も得ることができる。
【００２０】
このようなコラーゲン産生促進剤を使用したコラーゲン産生促進方法としては、コラーゲン産生促進剤や、上記のようなコラーゲン産生促進剤を含むオイルや化粧料などを、肌に塗布することにより行うことができる。
【実施例１】
【００２１】
以下、実施例を示すとともに、実施例についてコラーゲン産生促進作用の評価を行った試験について説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。なお、コラーゲン産生促進作用を評価する試験では、比較例として、ジャーマンカモミール（学名：Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ）の精油、そして、ローマンカモミール及びジャーマンカモミールの抽出エキスについて、ローマンカモミールの精油と同様の試験を行い、コラーゲン産生促進作用の比較を行った。
【００２２】
１．実施例
ローマンカモミール（学名：Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ）の花を蒸留器の釜に入れ、水蒸気を下から送り込み植物にあてて、精油を気化させた。気化した精油を冷却管に通して冷やし、精油が混入した液体を回収した。回収した液体において、精油は水より軽く、水に溶けないために精油と水が分離しており、分離した精油成分を採取することでローマンカモミールの精油を得た。
【００２３】
２．比較例
（ｉ） ジャーマンカモミールの精油
ジャーマンカモミール（学名：Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ）の花から、上記ローマンカモミールの精油の場合と同様の水蒸気蒸留法によりジャーマンカモミールの精油を得た。
【００２４】
（ｉｉ） ローマンカモミールエキス
ローマンカモミール（Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｌ．（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ））の頭花１００ｇに、エキスの抽出媒体である５０％の１，３−ブチレングリコール水溶液を１Ｌ加えて、ローマンカモミールの頭花を抽出媒体に３昼夜浸漬させた。ローマンカモミールを浸漬した溶液をろ過し、ろ液としてローマンカモミールエキスを約１．０ｋｇ得た。
【００２５】
（ｉｉｉ） ジャーマンカモミールエキス
ジャーマンカモミール（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ Ｌ．（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ））の花を細切し、自然乾燥した。この乾燥品１００ｇに３０ｗ／ｖ％エタノール溶液を１Ｌ加えて３昼夜浸漬した後、花の細片等の残渣と抽出を行った溶液とを圧搾分離し、第１の抽出液を約１．０ｋｇ得た。一方、上記残渣に３０ｗ／ｖ％エタノール溶液を１Ｌ加え、残渣を上記と同様の方法で浸漬、分離した後、溶媒を減圧下で蒸発除去し、軟エキスを０．１〜２．０ｇ得た。先に得られた抽出液にこの軟エキスを加えてよく攪拌した後、静置した。これをろ過し、そのろ液に１，３−ブチレングリコールを２Ｌ加えてよく攪拌した後、静置し、ろ過して、ろ液としてジャーマンカモミールエキスを約２．０ｋｇ得た。
【００２６】
３．線維芽細胞のコラーゲン合成に対する促進作用の評価試験方法
（ｉ） 線維芽細胞の培養
正常ヒト真皮線維芽細胞（クラボウ社製）を９６穴プレートに播種し、５％子牛血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコ変法ＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）を加えて、２×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で培養した。培養開始から２４時間後に、上記培地（ＤＭＥＭ）を、各試料を下記表１に示す濃度でそれぞれ含有する０．５％ ＦＢＳ含有ＤＭＥＭと交換した。試料含有培地で４８時間、培養した後、培地上清を回収して、下記ＥＬＩＳＡ法により培地上清中のＩ型コラーゲン量を測定した。培地除去後にプレート穴に接着して残っている細胞は、０．５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００溶液にて溶解した後、溶液内に含まれるタンパク質の量を定量した。タンパク質の量は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）法でピアス製測定キットを用いて測定した。なお、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を有するアスコルビン酸リン酸マグネシウム塩（ＶＣ−ＰＭｇ）を、陽性コントロール（Ｐ．Ｃ．）として用いた。
【００２７】
（ｉｉ） Ｉ型コラーゲン量の測定
上記培養方法により合成された、培地上清中のＩ型コラーゲンの量は、以下のＥＬＩＳＡ法にて測定した。回収した上記培地と、Ｉ型コラーゲン量を求めるために用いる検量線を作成するための検量線用Ｉ型コラーゲンを、高吸着型ＥＬＩＳＡプレートの別々の穴に入れ、３７℃にて２時間コーティングした後、１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ製）溶液を用いて３７℃にて１時間ブロッキングした。
【００２８】
一次抗体反応は、抗ヒト・コラーゲンＩ型抗体（ウサギ）を０．３％ ＢＳＡ溶液で希釈し、３７℃にて１．５時間反応させた。二次抗体ヒストファインペルオキシダーゼ（ウサギ）（ニチレイ製）を０．３％ ＢＳＡ溶液で希釈し、３７℃にて１．５時間反応させた。
【００２９】
次に０．３ ｍｇ／ｍｌの２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム（２，２'−Ａｚｉｎｏｂｉｓ （３−ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ−６−ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ） ｄｉａｍｍｏｎｉｕｍ ｓａｌｔ）（ＡＢＴＳ）および０．０３％の過酸化水素を含むリン酸−クエン酸バッファー溶液（０．１Ｍ、ｐＨ４．０）を加えて２０分間反応させ、マイクロプレートリーダーにて４０５ ｎｍの吸光度を測定した。
【００３０】
培地中のＩ型コラーゲン量は、上記培養した検量線用Ｉ型コラーゲンを用いて同じプレートで測定した検量線から算出した。そして、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）法で定量した全細胞のタンパク質の量で、上記算出した培地中のＩ型コラーゲン量を除することによって、単位タンパク質の量あたりのＩ型コラーゲン産生量を求めた。
【００３１】
なお、コラーゲン産生促進作用を評価するための基準であるコントロールとして、試料を加えないで上記培養方法により培養した線維芽細胞について、合成されたコラーゲン量を測定した。また、陽性コントロールとして、試料の精油に代えて、２５ μＭのアスコルビン酸リン酸マグネシウム塩を加えたものについてコラーゲン量を測定した。
【００３２】
また、下記表１に示した各試料の濃度は、各試料ごとに細胞毒性が認められない最高濃度を、本試験の最高濃度として設定している。ジャーマンカモミールの精油は、他の試料と同等の濃度では細胞毒性が認められ、コラーゲンの産生促進作用の評価ができないため、細胞毒性の影響が少ない低濃度の範囲で試験をした。
【００３３】
（ｉｉｉ） 結果
以上の試験の結果を表１に示す。なお上記のように、コラーゲン産生量は全細胞のタンパク質の量あたりのＩ型コラーゲン量であり、増加率は、コントロールのコラーゲン量（３５．９４ μｇ／ｍｇタンパク質）に対する培養後の各実施例、比較例において産生されたコラーゲン量の比（％）である。
【００３４】
表１に示すように、実施例、比較例のうち、ローマンカモミール精油の濃度が１０００μｇ／ｍＬである実施例４が、最もコラーゲン産生量が多かった。また、実施例と比較例とを、試料濃度が同一のもの同士で比較した場合についても、ローマンカモミールの精油を使用した実施例のほうが比較例に比べＩ型コラーゲンの産生量が多かった。
【００３５】
また、実施例は、精油ではない抽出物である、ローマンカモミールエキス、ジャーマンカモミールエキスを使用した比較例５〜１２に比べてコラーゲン産生量が多かった。このことから、ローマンカモミール抽出物のうち、特に水蒸気蒸留法により得られた精油がコラーゲン産生促進作用に優れていることが分かる。
【００３６】
以上より、ローマンカモミールの精油は線維芽細胞に対するコラーゲン産生促進作用に優れていることがいえる。
【００３７】
【表１】
【実施例２】
【００３８】
化粧料の実施例として、下記成分を配合し、皮膚に塗布して使用するトリートメントオイルを調製した。なお、ホホバオイルの比重は０．９１〜０．９１８、ローマンカモミールの比重はおよそ０．９０５であり、ローマンカモミールの精油の１滴は、０．０５ｍｌ程度である。
【００３９】
成分 配合量
（１）ホホバオイル ３０ｍｌ
（２）ローマンカモミール精油 １滴〜３滴
【実施例３】
【００４０】
化粧料の実施例として、下記成分を配合し、皮膚に塗布して使用するクリームを調整した。なお、スイートアーモンドオイルの比重は、０．９１〜０．９１８である。
【００４１】
成分 配合量
（１）スイートアーモンドオイル １０ｍｌ
（２）ミツロウ ２ｇ
（３）ローマンカモミール精油 １〜２滴
【技術分野】
【０００１】
本発明は、繊維芽細胞のコラーゲン産生を促進する作用を有する天然由来の物質に関し、特に植物の精油（エッセンシャルオイル）を有効成分とするコラーゲン産生促進剤及び化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚の真皮には、皮膚の弾力性を保つ役割を果たすコラーゲンが豊富に含まれている。真皮におけるコラーゲンは真皮の繊維芽細胞によって合成され、コラーゲン合成が活発に行われている皮膚では、弾力性に優れた張りのある肌が維持される。しかし、真皮中のコラーゲンは、紫外線や活性酸素などによって変性したり、加齢により線維芽細胞によって合成される量が減少してしまう。このような理由で真皮中のコラーゲン量が減少すると、真皮の厚みが減少し、皮膚の弾力性が失われていき、結果としてシワやたるみなどの肌の老化現象が引き起こされる。そのため、弾力性に優れた若々しい肌を保つためには、真皮の線維芽細胞によるコラーゲン合成を促進することが有効である。
【０００３】
従来、皮膚のコラーゲン合成を促進する作用を有する物質としては、Ｌ−アスコルビン酸などが知られている。また、天然物としては、シソ科のタイム、スイカズラ科のエルダーおよびカンラン科カンラン属のエレミなどの植物を水蒸気蒸留して得られる精油がコラーゲン合成促進作用を有することが知られている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００６−２３２７４０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記のように、弾力性のある肌を維持するためにコラーゲンが重要な役割を果たすことから、コラーゲン産生促進作用を有するさらなる有用な物質が望まれていた。そこで、本願発明は、コラーゲン産生促進作用を有する物質として、天然物である植物を原料とする精油を有効成分とするコラーゲン産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、線維芽細胞のコラーゲン産生を促進させる作用を有する物質を鋭意研究した結果、特定の植物を水蒸気蒸留して得られる精油がコラーゲン産生を促進することに関し優れた効果を奏するものであることを見出した。
【０００７】
すなわち、（１）本願発明に係るコラーゲン産生促進剤は、キク科のローマンカモミール（学名：Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ）を水蒸気蒸留して得られる精油からなることを特徴とする。
【０００８】
（２） （１）のコラーゲン産生促進剤において、前記精油は真皮の線維芽細胞のコラーゲン産生を促進することを特徴とする。
【０００９】
（３） 本願発明に係る化粧料は、（１）又は（２）のコラーゲン産生促進剤を含有することを特徴とする。
【００１０】
（４） 本願発明のコラーゲン産生促進方法は、（１）又は（２）のコラーゲン産生促進剤を使用してコラーゲンの産生を促進させることを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本願発明にかかる、ローマンカモミールの精油を有効成分とするコラーゲン産生促進剤及び当該コラーゲン産生促進剤を使用したコラーゲン産生促進方法によれば、皮膚のコラーゲン産生を促進する効果を得ることができる。特に、真皮の線維芽細胞において合成されるＩ型コラーゲンについて、優れた産生促進作用を得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本願発明を詳細に説明する。
【００１３】
本発明に係るコラーゲン産生促進剤として用いる精油の原料には、ローマンカモミール（Ｒｏｍａｎ ｃｈａｍｏｍｉｌｅ）（学名：Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ）を使用する。ローマンカモミールは、キク科の多年草でローマカミツレとも呼ばれる。
【００１４】
そして、本発明に係るコラーゲン産生促進剤に使用するローマンカモミールの精油（エッセンシャルオイル）は、ローマンカモミールを水蒸気蒸留法により抽出して得られる精油を用いるのが好ましい。抽出する抽出部位は特に限定されないが、花の部分を水蒸気蒸留により抽出するのが好ましい。
【００１５】
ここで、精油（エッセンシャルオイル）とは、植物の花、葉、果皮、樹皮、根、種子、樹脂などから抽出した、芳香を有する天然の揮発性の物質であり、水蒸気蒸留法、圧搾法、溶剤抽出法、超臨界流体抽出法などの所定の抽出方法により抽出・分離される。本発明に係るコラーゲン産生促進剤に使用するローマンカモミールの精油は、上記の抽出方法のうち、上述のように水蒸気蒸留法を用いて抽出・分離するのが好ましい。
【００１６】
本発明のローマンカモミールの精油を抽出する水蒸気蒸留法を説明する。まず、原料の植物であるローマンカモミールの花を蒸留器の釜に入れ、水蒸気を下から送り込んで植物にあてると、精油が植物から遊離して気化し、水蒸気と共に蒸留器内を上昇する。それを冷却管に通して冷やすと精油が混入した液体が得られる。そして、精油は水より軽く、水に溶けないために、精油と水が分離するため、上記精油が混入した液体から精油だけ採取することができる。
【００１７】
以上の方法により抽出したローマンカモミールの精油は、通常、肌荒れやかぶれ等を防ぐために、様々な用途に合わせて希釈して用いたり、他の基剤と配合して化粧料などの製剤として利用することが好ましい。ローマンカモミールの精油のコラーゲン促進剤としての利用例としては、例えば、本発明に係るコラーゲン産生促進剤をオリーブオイルやホホバオイルやスイートアーモンドオイルなどの植物性のキャリアオイルで希釈することにより、皮膚に塗布して用いるスキンケア用のオイルとして使用することができる。また、本発明に係るコラーゲン産生促進剤を各種化粧料基剤に配合することで、クリーム、乳液、化粧水、洗顔料、ジェル、パックなど、本発明に係るコラーゲン合成促進剤を成分の一つとする様々な外用の化粧料を得ることができる。もちろん、ローマンカモミールの精油は、肌荒れなどが起こらない範囲で、そのままコラーゲン産生促進剤として皮膚に塗布して使用することも可能である。
【００１８】
なお、本発明に係るコラーゲン産生促進剤をスキンケア用オイルやその他の化粧料の成分として使用する場合の配合量は特に限定されず、コラーゲン産生促進剤のみを配合して構成してもよいが、例えば、精油の成分の配合量が化粧料などの全量に対して、０．００１質量％〜５質量％となる範囲で配合し、好ましくは、０．００１質量％〜１質量％となる範囲で配合する。
【００１９】
以上のような、本発明に係るコラーゲン産生促進剤あるいはコラーゲン産生促進剤を含有する化粧料などの組成物は、ヒトの真皮中の線維芽細胞におけるコラーゲン産生を促進する効果を有しており、弾力性のある肌を維持するために有効である。また、本発明に係るコラーゲン産生促進剤はローマンカモミールの精油を有効成分としているため、精油の芳香によって、アロマテラピー（芳香療法）効果も得ることができる。
【００２０】
このようなコラーゲン産生促進剤を使用したコラーゲン産生促進方法としては、コラーゲン産生促進剤や、上記のようなコラーゲン産生促進剤を含むオイルや化粧料などを、肌に塗布することにより行うことができる。
【実施例１】
【００２１】
以下、実施例を示すとともに、実施例についてコラーゲン産生促進作用の評価を行った試験について説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。なお、コラーゲン産生促進作用を評価する試験では、比較例として、ジャーマンカモミール（学名：Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ）の精油、そして、ローマンカモミール及びジャーマンカモミールの抽出エキスについて、ローマンカモミールの精油と同様の試験を行い、コラーゲン産生促進作用の比較を行った。
【００２２】
１．実施例
ローマンカモミール（学名：Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ）の花を蒸留器の釜に入れ、水蒸気を下から送り込み植物にあてて、精油を気化させた。気化した精油を冷却管に通して冷やし、精油が混入した液体を回収した。回収した液体において、精油は水より軽く、水に溶けないために精油と水が分離しており、分離した精油成分を採取することでローマンカモミールの精油を得た。
【００２３】
２．比較例
（ｉ） ジャーマンカモミールの精油
ジャーマンカモミール（学名：Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ）の花から、上記ローマンカモミールの精油の場合と同様の水蒸気蒸留法によりジャーマンカモミールの精油を得た。
【００２４】
（ｉｉ） ローマンカモミールエキス
ローマンカモミール（Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ Ｌ．（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ））の頭花１００ｇに、エキスの抽出媒体である５０％の１，３−ブチレングリコール水溶液を１Ｌ加えて、ローマンカモミールの頭花を抽出媒体に３昼夜浸漬させた。ローマンカモミールを浸漬した溶液をろ過し、ろ液としてローマンカモミールエキスを約１．０ｋｇ得た。
【００２５】
（ｉｉｉ） ジャーマンカモミールエキス
ジャーマンカモミール（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ ｃｈａｍｏｍｉｌｌａ Ｌ．（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ））の花を細切し、自然乾燥した。この乾燥品１００ｇに３０ｗ／ｖ％エタノール溶液を１Ｌ加えて３昼夜浸漬した後、花の細片等の残渣と抽出を行った溶液とを圧搾分離し、第１の抽出液を約１．０ｋｇ得た。一方、上記残渣に３０ｗ／ｖ％エタノール溶液を１Ｌ加え、残渣を上記と同様の方法で浸漬、分離した後、溶媒を減圧下で蒸発除去し、軟エキスを０．１〜２．０ｇ得た。先に得られた抽出液にこの軟エキスを加えてよく攪拌した後、静置した。これをろ過し、そのろ液に１，３−ブチレングリコールを２Ｌ加えてよく攪拌した後、静置し、ろ過して、ろ液としてジャーマンカモミールエキスを約２．０ｋｇ得た。
【００２６】
３．線維芽細胞のコラーゲン合成に対する促進作用の評価試験方法
（ｉ） 線維芽細胞の培養
正常ヒト真皮線維芽細胞（クラボウ社製）を９６穴プレートに播種し、５％子牛血清（ＦＢＳ）含有ダルベッコ変法ＭＥＭ（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）を加えて、２×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの細胞密度で培養した。培養開始から２４時間後に、上記培地（ＤＭＥＭ）を、各試料を下記表１に示す濃度でそれぞれ含有する０．５％ ＦＢＳ含有ＤＭＥＭと交換した。試料含有培地で４８時間、培養した後、培地上清を回収して、下記ＥＬＩＳＡ法により培地上清中のＩ型コラーゲン量を測定した。培地除去後にプレート穴に接着して残っている細胞は、０．５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００溶液にて溶解した後、溶液内に含まれるタンパク質の量を定量した。タンパク質の量は、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）法でピアス製測定キットを用いて測定した。なお、Ｉ型コラーゲン産生促進作用を有するアスコルビン酸リン酸マグネシウム塩（ＶＣ−ＰＭｇ）を、陽性コントロール（Ｐ．Ｃ．）として用いた。
【００２７】
（ｉｉ） Ｉ型コラーゲン量の測定
上記培養方法により合成された、培地上清中のＩ型コラーゲンの量は、以下のＥＬＩＳＡ法にて測定した。回収した上記培地と、Ｉ型コラーゲン量を求めるために用いる検量線を作成するための検量線用Ｉ型コラーゲンを、高吸着型ＥＬＩＳＡプレートの別々の穴に入れ、３７℃にて２時間コーティングした後、１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ製）溶液を用いて３７℃にて１時間ブロッキングした。
【００２８】
一次抗体反応は、抗ヒト・コラーゲンＩ型抗体（ウサギ）を０．３％ ＢＳＡ溶液で希釈し、３７℃にて１．５時間反応させた。二次抗体ヒストファインペルオキシダーゼ（ウサギ）（ニチレイ製）を０．３％ ＢＳＡ溶液で希釈し、３７℃にて１．５時間反応させた。
【００２９】
次に０．３ ｍｇ／ｍｌの２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム（２，２'−Ａｚｉｎｏｂｉｓ （３−ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ−６−ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ） ｄｉａｍｍｏｎｉｕｍ ｓａｌｔ）（ＡＢＴＳ）および０．０３％の過酸化水素を含むリン酸−クエン酸バッファー溶液（０．１Ｍ、ｐＨ４．０）を加えて２０分間反応させ、マイクロプレートリーダーにて４０５ ｎｍの吸光度を測定した。
【００３０】
培地中のＩ型コラーゲン量は、上記培養した検量線用Ｉ型コラーゲンを用いて同じプレートで測定した検量線から算出した。そして、ビシンコニン酸（ＢＣＡ）法で定量した全細胞のタンパク質の量で、上記算出した培地中のＩ型コラーゲン量を除することによって、単位タンパク質の量あたりのＩ型コラーゲン産生量を求めた。
【００３１】
なお、コラーゲン産生促進作用を評価するための基準であるコントロールとして、試料を加えないで上記培養方法により培養した線維芽細胞について、合成されたコラーゲン量を測定した。また、陽性コントロールとして、試料の精油に代えて、２５ μＭのアスコルビン酸リン酸マグネシウム塩を加えたものについてコラーゲン量を測定した。
【００３２】
また、下記表１に示した各試料の濃度は、各試料ごとに細胞毒性が認められない最高濃度を、本試験の最高濃度として設定している。ジャーマンカモミールの精油は、他の試料と同等の濃度では細胞毒性が認められ、コラーゲンの産生促進作用の評価ができないため、細胞毒性の影響が少ない低濃度の範囲で試験をした。
【００３３】
（ｉｉｉ） 結果
以上の試験の結果を表１に示す。なお上記のように、コラーゲン産生量は全細胞のタンパク質の量あたりのＩ型コラーゲン量であり、増加率は、コントロールのコラーゲン量（３５．９４ μｇ／ｍｇタンパク質）に対する培養後の各実施例、比較例において産生されたコラーゲン量の比（％）である。
【００３４】
表１に示すように、実施例、比較例のうち、ローマンカモミール精油の濃度が１０００μｇ／ｍＬである実施例４が、最もコラーゲン産生量が多かった。また、実施例と比較例とを、試料濃度が同一のもの同士で比較した場合についても、ローマンカモミールの精油を使用した実施例のほうが比較例に比べＩ型コラーゲンの産生量が多かった。
【００３５】
また、実施例は、精油ではない抽出物である、ローマンカモミールエキス、ジャーマンカモミールエキスを使用した比較例５〜１２に比べてコラーゲン産生量が多かった。このことから、ローマンカモミール抽出物のうち、特に水蒸気蒸留法により得られた精油がコラーゲン産生促進作用に優れていることが分かる。
【００３６】
以上より、ローマンカモミールの精油は線維芽細胞に対するコラーゲン産生促進作用に優れていることがいえる。
【００３７】
【表１】
【実施例２】
【００３８】
化粧料の実施例として、下記成分を配合し、皮膚に塗布して使用するトリートメントオイルを調製した。なお、ホホバオイルの比重は０．９１〜０．９１８、ローマンカモミールの比重はおよそ０．９０５であり、ローマンカモミールの精油の１滴は、０．０５ｍｌ程度である。
【００３９】
成分 配合量
（１）ホホバオイル ３０ｍｌ
（２）ローマンカモミール精油 １滴〜３滴
【実施例３】
【００４０】
化粧料の実施例として、下記成分を配合し、皮膚に塗布して使用するクリームを調整した。なお、スイートアーモンドオイルの比重は、０．９１〜０．９１８である。
【００４１】
成分 配合量
（１）スイートアーモンドオイル １０ｍｌ
（２）ミツロウ ２ｇ
（３）ローマンカモミール精油 １〜２滴
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローマンカモミール（学名：Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ）を水蒸気蒸留して得られる精油からなることを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
【請求項２】
前記精油は真皮の線維芽細胞のコラーゲン産生を促進することを特徴とする請求項１に記載のコラーゲン産生促進剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のコラーゲン産生促進剤を含有することを特徴とする化粧料。
【請求項４】
請求項１又は２に記載のコラーゲン産生促進剤を使用してコラーゲンの産生を促進させることを特徴とするコラーゲン産生促進方法。
【請求項１】
ローマンカモミール（学名：Ａｎｔｈｅｍｉｓ ｎｏｂｉｌｉｓ）を水蒸気蒸留して得られる精油からなることを特徴とするコラーゲン産生促進剤。
【請求項２】
前記精油は真皮の線維芽細胞のコラーゲン産生を促進することを特徴とする請求項１に記載のコラーゲン産生促進剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のコラーゲン産生促進剤を含有することを特徴とする化粧料。
【請求項４】
請求項１又は２に記載のコラーゲン産生促進剤を使用してコラーゲンの産生を促進させることを特徴とするコラーゲン産生促進方法。
【公開番号】特開２０１０−１８０１７９（Ｐ２０１０−１８０１７９Ａ）
【公開日】平成２２年８月１９日（２０１０．８．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２６７１５（Ｐ２００９−２６７１５）
【出願日】平成２１年２月６日（２００９．２．６）
【出願人】（５０５１３９６５４）社団法人日本アロマ環境協会 (1)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年８月１９日（２０１０．８．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年２月６日（２００９．２．６）
【出願人】（５０５１３９６５４）社団法人日本アロマ環境協会 (1)
【Ｆターム（参考）】
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