タンパク質
本発明は、糖脂質アシル基転移酵素変異体を製造する方法であって、（ａ）アミノ酸配列モチーフＧＤＳＸ（式中、Ｘは以下のアミノ酸残基Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｍ又はＳの１個又は複数である）を含むことを特徴とする糖脂質アシル基転移酵素である親酵素を選択するステップと、（ｂ）１個又は複数のアミノ酸を改変して糖脂質アシル基転移酵素変異体を製造するステップと、（ｃ）前記糖脂質アシル基転移酵素変異体をガラクト脂質基質並びに場合によりリン脂質基質及び／又は場合によりトリグリセリド基質に対する転移酵素活性場合により加水分解活性について試験するステップと、（ｄ）ガラクト脂質に対して前記親酵素よりも活性が高い酵素変異体を選択するステップと、場合により（ｅ）多量の前記酵素変異体を調製するステップを場合により含む方法に関する。本発明は、さらに、アミノ酸配列モチーフＧＤＳＸ（式中、Ｘは以下のアミノ酸残基Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｍ又はＳの１個又は複数である）を含むことを特徴とする脂質アシル基転移酵素変異体であって、セット２、セット４、セット６又はセット７に規定されるアミノ酸残基の任意の１個又は複数において、親配列と比較して１個又は複数のアミノ酸改変を含む変異体にも関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
糖脂質アシル基転移酵素変異体を製造する方法であって、（ａ）アミノ酸配列モチーフＧＤＳＸ（式中、Ｘは以下のアミノ酸残基Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｍ又はＳの１個又は複数である）を含むことを特徴とする脂質アシル基転移酵素である親酵素を選択するステップと、（ｂ）１個又は複数のアミノ酸を改変して脂質アシル基転移酵素変異体を製造するステップと、（ｃ）前記脂質アシル基転移酵素変異体を、ガラクト脂質基質並びに場合によりリン脂質基質及び／又は場合によりトリグリセリド基質に対する転移酵素活性及び場合により加水分解活性について試験するステップと、（ｄ）ガラクト脂質に対して前記親酵素よりも活性が高い酵素変異体を選択するステップと、場合により（ｅ）多量の前記酵素変異体を調製するステップを含む方法。
【請求項２】
（ｉ）ガラクト脂質基質からの転移酵素活性、及び
（ii）リン脂質基質からの転移酵素活性
について脂質アシル基転移酵素変異体を試験するステップと、
親酵素と比較したときに、ガラクト脂質からの転移酵素活性とリン脂質からの転移酵素活性との比が大きい酵素変異体を選択するステップと
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ガラクト脂質からの転移酵素活性とリン脂質からの転移酵素活性との比が少なくとも３である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
（ａ）ガラクト脂質基質からの転移酵素活性、及び
（ｂ）ガラクト脂質基質に対する加水分解活性
について脂質アシル基転移酵素変異体を試験するステップと、
ガラクト脂質からの転移酵素活性と糖脂質に対するその加水分解活性との比が親酵素よりも大きい酵素変異体を選択するステップと
を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ガラクト脂質に対する転移酵素活性とガラクト脂質に対する加水分解活性との前記大きい比が少なくとも１．５である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
配列番号２とのアラインメントによって特定される以下のアミノ酸残基の１個又は複数が、セット２又はセット４又はセット６又はセット７に規定されるアミノ酸残基の任意の１個又は複数において親配列と比較して改変されている、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
親酵素が、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３又は配列番号４５で示されるアミノ酸配列又はそれらと少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
親酵素が、配列番号２及び／又は配列番号２８で示されるアミノ酸配列を含む酵素である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＧＤＳＸモチーフのＸが好ましくはＬである、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
さらに、以下のステップ、すなわち、構造的相同性マッピング又は配列相同性アラインメントの１つ又は複数を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
構造的相同性マッピングが、以下のステップ、すなわち、
ａ）親配列を図５２の構造モデル（１ＩＶＮ．ＰＤＢ）とアラインメントさせるステップ、
ｂ）活性部位中のグリセリン分子の中心炭素原子上に中心を置く１０Åの球内の１個又は複数のアミノ酸残基を選択するステップ（図５３参照）、及び
ｃ）前記親配列においてステップ（ｂ）によって選択された１個又は複数のアミノ酸を改変するステップ
の１つ又は複数を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
構造的相同性マッピングが、以下のステップ、すなわち、
ａ）親配列を図５２の構造モデル（１ＩＶＮ．ＰＤＢ）とアラインメントさせるステップ、
ｂ）活性部位中のグリセリン分子の中心炭素原子上に中心を置く１０Åの球内の１個又は複数のアミノ酸を選択するステップ（図５３参照）、
ｃ）ステップ（ｂ）によって選択された１個又は複数のアミノ酸残基（特に、活性部位残基及び／又はＧＤＳｘモチーフの一部及び／又はＧＡＮＤＹモチーフの一部）が高度に保存されているかどうかを判断するステップ、及び
ｄ）前記親配列中のステップ（ｃ）によって特定された保存領域を除いて、ステップ（ｂ）によって選択された１個又は複数のアミノ酸を改変するステップ
の１つ又は複数を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
配列相同性アラインメントが、以下のステップ、すなわち、
ｉ）第１の親脂質アシル基転移酵素を選択するステップ、
ii）望ましい活性を有する第２の関連脂質アシル基転移酵素を特定するステップ、
iii）前記第１の親脂質アシル基転移酵素と前記第２の関連脂質アシル基転移酵素とをアラインメントさせるステップ、
iv）前記２つの配列間で異なるアミノ酸残基を特定するステップ、及び
ｖ）前記親脂質アシル基転移酵素中のステップ（iv）によって特定されたアミノ酸残基の１個又は複数を改変するステップ
の１つ又は複数を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
配列相同性アラインメントが、以下のステップ、すなわち、
ｉ）第１の親脂質アシル基転移酵素を選択するステップ、
ii）望ましい活性を有する第２の関連脂質アシル基転移酵素を特定するステップ、
iii）前記第１の親脂質アシル基転移酵素と前記第２の関連脂質アシル基転移酵素とをアラインメントさせるステップ、
iv）前記２つの配列間で異なるアミノ酸残基を特定するステップ、
ｖ）ステップ（iv）によって選択された１個又は複数のアミノ酸残基（特に、活性部位残基及び／又はＧＤＳｘモチーフの一部及び／又はＧＡＮＤＹモチーフの一部）が高度に保存されているかどうかを判断するステップ、及び
vi）前記親配列中のステップ（ｖ）によって特定された保存領域を除いて、ステップ（iv）によって特定されたアミノ酸残基の１個又は複数を改変するステップ
の１つ又は複数を含むことができる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
以下のアミノ酸残基、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｓ３１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０、Ｖ１１２、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｑ ２８９、Ｋ２２、Ｇ４０、Ｙ１７９、Ｍ２０９、Ｌ２１１、Ｋ２２、Ｐ８１、Ｎ８７、Ｙ１１７、Ｎ１８１、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｑ１８２の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
以下のアミノ酸残基、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
以下のアミノ酸残基、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｓ３１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０、Ｖ１１２、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｑ２８９、Ｋ２２、Ｇ４０、Ｙ１７９、Ｍ２０９、Ｌ２１１、Ｋ２２、Ｐ８１、Ｎ８７、Ｙ１１７、Ｎ１８１、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｑ１８２、Ｓ３、Ｋ８２の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
以下のアミノ酸残基、すなわち、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｓ３１０、Ｙ１７９、Ｈ１８０、Ｑ２８９、Ｇ４０、Ｎ８８、Ｎ８７の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
以下のアミノ酸残基、すなわち、Ｙ１７９、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｎ８０、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｎ８７の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
以下のアミノ酸残基、すなわち、Ｙ１７９、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｎ８０、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから特異的に選択される）、Ｎ８７、Ｈ１８０、Ｍ２０９、Ｒ２１１、Ｓ１８Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ又はＹから特異的に選択される）、Ｇ４０、Ｎ８８、Ｎ８７の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
アミノ酸配列モチーフＧＤＳＸ（式中、Ｘは以下のアミノ酸残基Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｍ又はＳの１個又は複数である）を含むことを特徴とする糖脂質アシル基転移酵素変異体であって、ガラクト脂質に対して親酵素よりも高い活性を有し、セット２又はセット４又はセット６又はセット７に規定されるアミノ酸残基の任意の１個又は複数において親配列と比較して１個又は複数のアミノ酸改変を含む変異体。
【請求項２２】
酵素変異体が、セット２又はセット４又はセット６又はセット７に規定されるアミノ酸残基の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を除いて、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３又は配列番号４５で示されるアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項２３】
酵素が、以下のアミノ酸、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｓ３１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０、Ｖ１１２、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｑ２８９、Ｋ２２、Ｇ４０、Ｙ１７９、Ｍ２０９、Ｌ２１１、Ｋ２２、Ｐ８１、Ｎ８７、Ｙ１１７、Ｎ１８１、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｎ８７、Ｑ１８２の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２１又は２２に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２４】
酵素が、以下のアミノ酸残基、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２３に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２５】
酵素が、以下のアミノ酸、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｓ３１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０、Ｖ１１２、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｑ２８９、Ｋ２２、Ｇ４０、Ｙ１７９、Ｍ２０９、Ｌ２１１、Ｋ２２、Ｐ８１、Ｎ８７、Ｙ１１７、Ｎ１８１、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｎ８７、Ｑ１８２、Ｓ３、Ｓ３１０、Ｋ８２、Ｅ３０９の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２１又は２２に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２６】
酵素が、以下のアミノ酸、すなわち、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｓ３１０、Ｙ１７９、Ｈ１８０、Ｑ２８９、Ｇ４０、Ｎ８８、Ｎ８７の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２１又は２２に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２７】
酵素が、以下のアミノ酸、すなわち、Ｙ１７９、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｎ８０、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｎ８７の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２１又は２２に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２８】
酵素が、以下のアミノ酸、すなわち、Ｙ１７９、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｎ８０、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから特異的に選択される）、Ｎ８７、Ｈ１８０、Ｍ２０９、Ｒ２１１、Ｓ１８Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ又はＹから特異的に選択される）、Ｇ４０、Ｎ８８、Ｎ８７の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２１又は２２に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２９】
酵素変異体が、ガラクト脂質に対する活性とリン脂質及び／又はトリグリセリドに対する活性との比が親酵素よりも大きい、請求項２１から２８のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項３０】
酵素変異体が、そのガラクト脂質加水分解活性と比較したガラクト脂質転移酵素活性が親酵素よりも高い、請求項２１から２９のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項３１】
酵素変異体が、セット２又はセット４又はセット６又はセット７に規定されるアミノ酸残基の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を除いて、配列番号２又は配列番号２８で示されるアミノ酸配列を含む酵素である、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項３２】
本発明による脂肪分解酵素変異体又は本発明による方法によって得られる脂肪分解酵素変異体で糖脂質（例えば、ＤＧＤＧ（digalactosyl diglyceride）又はＭＧＤＧ（monogalactosyl diglyceride））を処理して部分加水分解生成物、すなわちリゾ糖脂質を生成することによって、リゾ糖脂質、例えばＤＧＭＧ（digalactosyl monoglyceride）又はＭＧＭＧ（monogalactosyl monoglyceride）を調製するための基質における、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体の使用。
【請求項３３】
前記基質が食料品である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
食料品を調製する方法であって、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体を前記食料品の１個又は複数の成分に添加するステップを含む方法。
【請求項３５】
焼いた生成物を生地から調製する方法であって、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体を前記生地に添加するステップを含む方法。
【請求項３６】
卵又は卵を主成分とする生成物を処理してリゾリン脂質を製造する方法における、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体の使用。
【請求項３７】
植物油又は食用油の酵素精練方法であって、極性脂質（例えば、リン脂質及び／又は糖脂質）の主要な部分を加水分解するために、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体で前記食用油又は植物油を処理するステップを含む方法。
【請求項３８】
食用油のリン脂質含有量を削減する方法における、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体の使用であって、前記リン脂質の主要な部分を加水分解するために前記脂肪分解酵素変異体で前記油を処理するステップと、加水分解されたリン脂質を含む水相を前記油から分離するステップとを含む使用。
【請求項３９】
炭水化物エステル及び／又はタンパク質エステル及び／又はタンパク質サブユニットエステル及び／又はヒドロキシ酸エステルなどの高価な生成物を製造するための極性脂質（好ましくは糖脂質）の生物変換における、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体の使用。
【請求項４０】
請求項２１から３１のいずれか一項に記載の固定化糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる固定化糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項４１】
図及び実施例を参照して本明細書に全般的に記載された糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項４２】
図及び実施例を参照して本明細書に全般的に記載された方法。
【請求項１】
糖脂質アシル基転移酵素変異体を製造する方法であって、（ａ）アミノ酸配列モチーフＧＤＳＸ（式中、Ｘは以下のアミノ酸残基Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｍ又はＳの１個又は複数である）を含むことを特徴とする脂質アシル基転移酵素である親酵素を選択するステップと、（ｂ）１個又は複数のアミノ酸を改変して脂質アシル基転移酵素変異体を製造するステップと、（ｃ）前記脂質アシル基転移酵素変異体を、ガラクト脂質基質並びに場合によりリン脂質基質及び／又は場合によりトリグリセリド基質に対する転移酵素活性及び場合により加水分解活性について試験するステップと、（ｄ）ガラクト脂質に対して前記親酵素よりも活性が高い酵素変異体を選択するステップと、場合により（ｅ）多量の前記酵素変異体を調製するステップを含む方法。
【請求項２】
（ｉ）ガラクト脂質基質からの転移酵素活性、及び
（ii）リン脂質基質からの転移酵素活性
について脂質アシル基転移酵素変異体を試験するステップと、
親酵素と比較したときに、ガラクト脂質からの転移酵素活性とリン脂質からの転移酵素活性との比が大きい酵素変異体を選択するステップと
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ガラクト脂質からの転移酵素活性とリン脂質からの転移酵素活性との比が少なくとも３である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
（ａ）ガラクト脂質基質からの転移酵素活性、及び
（ｂ）ガラクト脂質基質に対する加水分解活性
について脂質アシル基転移酵素変異体を試験するステップと、
ガラクト脂質からの転移酵素活性と糖脂質に対するその加水分解活性との比が親酵素よりも大きい酵素変異体を選択するステップと
を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
ガラクト脂質に対する転移酵素活性とガラクト脂質に対する加水分解活性との前記大きい比が少なくとも１．５である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
配列番号２とのアラインメントによって特定される以下のアミノ酸残基の１個又は複数が、セット２又はセット４又はセット６又はセット７に規定されるアミノ酸残基の任意の１個又は複数において親配列と比較して改変されている、請求項１から５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
親酵素が、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３又は配列番号４５で示されるアミノ酸配列又はそれらと少なくとも７０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
親酵素が、配列番号２及び／又は配列番号２８で示されるアミノ酸配列を含む酵素である、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＧＤＳＸモチーフのＸが好ましくはＬである、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
さらに、以下のステップ、すなわち、構造的相同性マッピング又は配列相同性アラインメントの１つ又は複数を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
構造的相同性マッピングが、以下のステップ、すなわち、
ａ）親配列を図５２の構造モデル（１ＩＶＮ．ＰＤＢ）とアラインメントさせるステップ、
ｂ）活性部位中のグリセリン分子の中心炭素原子上に中心を置く１０Åの球内の１個又は複数のアミノ酸残基を選択するステップ（図５３参照）、及び
ｃ）前記親配列においてステップ（ｂ）によって選択された１個又は複数のアミノ酸を改変するステップ
の１つ又は複数を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
構造的相同性マッピングが、以下のステップ、すなわち、
ａ）親配列を図５２の構造モデル（１ＩＶＮ．ＰＤＢ）とアラインメントさせるステップ、
ｂ）活性部位中のグリセリン分子の中心炭素原子上に中心を置く１０Åの球内の１個又は複数のアミノ酸を選択するステップ（図５３参照）、
ｃ）ステップ（ｂ）によって選択された１個又は複数のアミノ酸残基（特に、活性部位残基及び／又はＧＤＳｘモチーフの一部及び／又はＧＡＮＤＹモチーフの一部）が高度に保存されているかどうかを判断するステップ、及び
ｄ）前記親配列中のステップ（ｃ）によって特定された保存領域を除いて、ステップ（ｂ）によって選択された１個又は複数のアミノ酸を改変するステップ
の１つ又は複数を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
配列相同性アラインメントが、以下のステップ、すなわち、
ｉ）第１の親脂質アシル基転移酵素を選択するステップ、
ii）望ましい活性を有する第２の関連脂質アシル基転移酵素を特定するステップ、
iii）前記第１の親脂質アシル基転移酵素と前記第２の関連脂質アシル基転移酵素とをアラインメントさせるステップ、
iv）前記２つの配列間で異なるアミノ酸残基を特定するステップ、及び
ｖ）前記親脂質アシル基転移酵素中のステップ（iv）によって特定されたアミノ酸残基の１個又は複数を改変するステップ
の１つ又は複数を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
配列相同性アラインメントが、以下のステップ、すなわち、
ｉ）第１の親脂質アシル基転移酵素を選択するステップ、
ii）望ましい活性を有する第２の関連脂質アシル基転移酵素を特定するステップ、
iii）前記第１の親脂質アシル基転移酵素と前記第２の関連脂質アシル基転移酵素とをアラインメントさせるステップ、
iv）前記２つの配列間で異なるアミノ酸残基を特定するステップ、
ｖ）ステップ（iv）によって選択された１個又は複数のアミノ酸残基（特に、活性部位残基及び／又はＧＤＳｘモチーフの一部及び／又はＧＡＮＤＹモチーフの一部）が高度に保存されているかどうかを判断するステップ、及び
vi）前記親配列中のステップ（ｖ）によって特定された保存領域を除いて、ステップ（iv）によって特定されたアミノ酸残基の１個又は複数を改変するステップ
の１つ又は複数を含むことができる、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
以下のアミノ酸残基、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｓ３１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０、Ｖ１１２、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｑ ２８９、Ｋ２２、Ｇ４０、Ｙ１７９、Ｍ２０９、Ｌ２１１、Ｋ２２、Ｐ８１、Ｎ８７、Ｙ１１７、Ｎ１８１、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｑ１８２の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
以下のアミノ酸残基、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
以下のアミノ酸残基、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｓ３１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０、Ｖ１１２、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｑ２８９、Ｋ２２、Ｇ４０、Ｙ１７９、Ｍ２０９、Ｌ２１１、Ｋ２２、Ｐ８１、Ｎ８７、Ｙ１１７、Ｎ１８１、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｑ１８２、Ｓ３、Ｋ８２の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
以下のアミノ酸残基、すなわち、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｓ３１０、Ｙ１７９、Ｈ１８０、Ｑ２８９、Ｇ４０、Ｎ８８、Ｎ８７の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
以下のアミノ酸残基、すなわち、Ｙ１７９、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｎ８０、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｎ８７の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
以下のアミノ酸残基、すなわち、Ｙ１７９、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｎ８０、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから特異的に選択される）、Ｎ８７、Ｈ１８０、Ｍ２０９、Ｒ２１１、Ｓ１８Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ又はＹから特異的に選択される）、Ｇ４０、Ｎ８８、Ｎ８７の１個又は複数を改変するステップを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
アミノ酸配列モチーフＧＤＳＸ（式中、Ｘは以下のアミノ酸残基Ｌ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｆ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｔ、Ｎ、Ｍ又はＳの１個又は複数である）を含むことを特徴とする糖脂質アシル基転移酵素変異体であって、ガラクト脂質に対して親酵素よりも高い活性を有し、セット２又はセット４又はセット６又はセット７に規定されるアミノ酸残基の任意の１個又は複数において親配列と比較して１個又は複数のアミノ酸改変を含む変異体。
【請求項２２】
酵素変異体が、セット２又はセット４又はセット６又はセット７に規定されるアミノ酸残基の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を除いて、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３９、配列番号４１、配列番号４３又は配列番号４５で示されるアミノ酸配列を含む、請求項２１に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項２３】
酵素が、以下のアミノ酸、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｓ３１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０、Ｖ１１２、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｑ２８９、Ｋ２２、Ｇ４０、Ｙ１７９、Ｍ２０９、Ｌ２１１、Ｋ２２、Ｐ８１、Ｎ８７、Ｙ１１７、Ｎ１８１、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｎ８７、Ｑ１８２の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２１又は２２に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２４】
酵素が、以下のアミノ酸残基、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２３に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２５】
酵素が、以下のアミノ酸、すなわち、−３１８、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｓ３１０、Ｅ３０９、Ｈ１８０、Ｎ８０、Ｖ１１２、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｑ２８９、Ｋ２２、Ｇ４０、Ｙ１７９、Ｍ２０９、Ｌ２１１、Ｋ２２、Ｐ８１、Ｎ８７、Ｙ１１７、Ｎ１８１、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｖ２９０、Ｎ８７、Ｑ１８２、Ｓ３、Ｓ３１０、Ｋ８２、Ｅ３０９の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２１又は２２に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２６】
酵素が、以下のアミノ酸、すなわち、Ｙ２３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｓ３１０、Ｙ１７９、Ｈ１８０、Ｑ２８９、Ｇ４０、Ｎ８８、Ｎ８７の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２１又は２２に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２７】
酵素が、以下のアミノ酸、すなわち、Ｙ１７９、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｎ８０、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから選択される）、Ｎ８７の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２１又は２２に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２８】
酵素が、以下のアミノ酸、すなわち、Ｙ１７９、Ｎ２１５、Ｌ２１０、Ｎ８０、Ｙ３０Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ又はＷから特異的に選択される）、Ｎ８７、Ｈ１８０、Ｍ２０９、Ｒ２１１、Ｓ１８Ｘ（ここで、Ｘは、Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｔ、Ｗ又はＹから特異的に選択される）、Ｇ４０、Ｎ８８、Ｎ８７の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を含む、請求項２１又は２２に記載の糖脂質アシル転移酵素変異体。
【請求項２９】
酵素変異体が、ガラクト脂質に対する活性とリン脂質及び／又はトリグリセリドに対する活性との比が親酵素よりも大きい、請求項２１から２８のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項３０】
酵素変異体が、そのガラクト脂質加水分解活性と比較したガラクト脂質転移酵素活性が親酵素よりも高い、請求項２１から２９のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項３１】
酵素変異体が、セット２又はセット４又はセット６又はセット７に規定されるアミノ酸残基の任意の１個又は複数における１個又は複数のアミノ酸改変を除いて、配列番号２又は配列番号２８で示されるアミノ酸配列を含む酵素である、請求項２１から３０のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項３２】
本発明による脂肪分解酵素変異体又は本発明による方法によって得られる脂肪分解酵素変異体で糖脂質（例えば、ＤＧＤＧ（digalactosyl diglyceride）又はＭＧＤＧ（monogalactosyl diglyceride））を処理して部分加水分解生成物、すなわちリゾ糖脂質を生成することによって、リゾ糖脂質、例えばＤＧＭＧ（digalactosyl monoglyceride）又はＭＧＭＧ（monogalactosyl monoglyceride）を調製するための基質における、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体の使用。
【請求項３３】
前記基質が食料品である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
食料品を調製する方法であって、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体を前記食料品の１個又は複数の成分に添加するステップを含む方法。
【請求項３５】
焼いた生成物を生地から調製する方法であって、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体を前記生地に添加するステップを含む方法。
【請求項３６】
卵又は卵を主成分とする生成物を処理してリゾリン脂質を製造する方法における、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体の使用。
【請求項３７】
植物油又は食用油の酵素精練方法であって、極性脂質（例えば、リン脂質及び／又は糖脂質）の主要な部分を加水分解するために、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体で前記食用油又は植物油を処理するステップを含む方法。
【請求項３８】
食用油のリン脂質含有量を削減する方法における、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体の使用であって、前記リン脂質の主要な部分を加水分解するために前記脂肪分解酵素変異体で前記油を処理するステップと、加水分解されたリン脂質を含む水相を前記油から分離するステップとを含む使用。
【請求項３９】
炭水化物エステル及び／又はタンパク質エステル及び／又はタンパク質サブユニットエステル及び／又はヒドロキシ酸エステルなどの高価な生成物を製造するための極性脂質（好ましくは糖脂質）の生物変換における、請求項２１から３１のいずれか一項に記載の糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる糖脂質アシル基転移酵素変異体の使用。
【請求項４０】
請求項２１から３１のいずれか一項に記載の固定化糖脂質アシル基転移酵素変異体又は請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法によって得られる固定化糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項４１】
図及び実施例を参照して本明細書に全般的に記載された糖脂質アシル基転移酵素変異体。
【請求項４２】
図及び実施例を参照して本明細書に全般的に記載された方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７−１】
【図７−２】
【図７−３】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３−１】
【図３３−２】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７−１】
【図５７−２】
【図５８】
【図５９−１】
【図５９−２】
【図６０】
【図６１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７−１】
【図７−２】
【図７−３】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３−１】
【図３３−２】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７−１】
【図５７−２】
【図５８】
【図５９−１】
【図５９−２】
【図６０】
【図６１】
【公表番号】特表２００７−５１６７１７（Ｐ２００７−５１６７１７Ａ）
【公表日】平成１９年６月２８日（２００７．６．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４６４０９（Ｐ２００６−５４６４０９）
【出願日】平成１６年１２月２３日（２００４．１２．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００４／００４３７８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６６３４７
【国際公開日】平成１７年７月２１日（２００５．７．２１）
【出願人】（３９７０６０５８８）ダニスコ エイ／エス (67)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年６月２８日（２００７．６．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１２月２３日（２００４．１２．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００４／００４３７８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６６３４７
【国際公開日】平成１７年７月２１日（２００５．７．２１）
【出願人】（３９７０６０５８８）ダニスコ エイ／エス (67)
【Ｆターム（参考）】
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