デオキシノジリマイシンおよびＤ−アラビニトールのアナログおよび使用方法
種々の方法により作製される新規なイミノ糖化合物が提供される。ある場合においては、新規なイミノ糖はデオキシノジリマイシンアナログである。例示の作製方法は、アルデヒドとピペリジニル化合物もしくはピロリジニル化合物との縮合反応を含む。このイミノ糖化合物を使用して、グルコシダーゼを阻害し得る。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、Ｎ−アルキル化イミノ糖アナログ、これらの作製、およびこれらの使用に関する。特に、デオキシノジリマイシンおよびＤ−アラビニトールのアナログ、新規作製方法、このようなアナログを含有する組成物、およびこれらの使用が具体化される。
【背景技術】
【０００２】
デオキシノジリマイシン（ＤＮＪ）と、この化合物の特定のＮ−アルキル化修飾物は、強力な小胞体（ＥＲ）α−グルコシダーゼＩおよびＩＩ阻害剤である(T. D. Butters, et al. Molecular Requirements of Imino Sugars for the Selective Control of N-Linked Glycosylation and Glycosphingolipid Biosynthesis,11 Tetrahedron:Asymmetry 113-124(2000))。イミノ糖は、細胞質ゾル中のイミノ糖濃度が細胞外濃度と平衡になるように、原形質膜を急速かつ効率的に横断する(H. R. Mellor, et al., Cellular Effects of Deoxynojirimycin Analogues: Uptake, Retention and Inhibition of Glycosphingolipid Biosynthesis, 381 Biochem. J. 861-866(2004))。
【０００３】
細胞質ゾルにおいては、イミノ糖は、シス−ゴルジの細胞質ゾル側でセラミド特異的グルコシルトランスフェラーゼと直接に相互作用して、糖脂質生合成を阻害する。しかしながら、グルコシダーゼ阻害によるＮ−結合型プロセシングを調節するためには、イミノ糖はＥＲ内腔に侵入しなければならない。ＥＲへの侵入の速度は未知であるが、イミノ糖の濃度は、ＥＲ内腔中では細胞に外因的に供給される濃度よりもずっと低いと仮定される。このことに対する証拠は、ＥＲグルコシダーゼＩの阻害に必要とされる濃度が測定され、精製酵素をインビトロで阻害する濃度の１，０００〜１０，０００倍をしばしば必要とするという実験から得られる(L. A. van den Broek, et al., Synthesis of Oxygen-Substituted N-Alkyl 1-Deoxynojirimycin Derivatives:Aza Sugar α-Glusosidase Inhibitors Showing Antiviral(HIV-I) and Immunosuppressive Activity, 113 Recueil des Travaux Chimiques des Pays-Bas 507-516.(1994))。
【０００４】
ＥＲの内腔に接近した後、ＤＮＪアナログは、α−グルコシダーゼＩおよびＩＩにより仲介されるグルコース残基の除去を阻害し、ハイパーグルコシル化Ｎ−結合型オリゴサッカライドを含有するタンパク質を形成する。このタンパク質は、タンパク質折り畳みの品質管理に関与するシャペロンのカルネキシンおよびカルレティキュリンと相互作用することができなくてもよい(R. G. Spiro, et al., Definition of the Lectin-like Properties of the Molecular Chaperone, Calreticulin, and Demonstration of Its Copurification with Endomannosidase from Rat Liver Golgi, 271 J. Biol. Chem. 11588-11594(1996))。ハイパーグルコシル化グリカンを含むあるタンパク質は、ゴルジ中でエンド−α（ｌ，２）マンノシダーゼによりさらにプロセシングでき、これによってグルコシダーゼ阻害により引き起こされるオリゴサッカライドプロセシングにおける阻止を回避する(K. Fujimoto, K., et al., α-Glucosidase II-deficient Cells Use Endo α-Mannosidase as a Bypass Route for N-linked Oligosaccharide Processing, 266 J. Biol. Chem. 3571-3578(1991); S. E. Moore, et al., Demonstration That Golgi Endo-α-D-mannosidase Provides a Glucosidase-independent Pathway for the Formation of Complex N-Linked Oligosaccharides of Glycoproteins, 265 J. Biol. Chem. 13104-13112(1990))。
【０００５】
誤って折り畳まれたタンパク質のＥＲからの除去と、遊離オリゴサッカライド（ＦＯＳ）の生成は、正常な細胞過程である。カルネキシン依存性もしくはカルレティキュリン依存性の異常に折り畳まれたタンパク質と、ハイパーグルコキシル化された異常に折り畳まれたタンパク質は、Ｓｅｃ６ｌｐチャンネル経由でＥＲから細胞質ゾルの中に最終的に移動され(E.J. Wiertz, et al., Sec6l-mediated Transfer of a Membrane Protein from the Endoplasmic Reticulum to the Proteasome for Destruction, 384 Nature 432-438(1996))、ここでＮ−結合型オリゴサッカライドが細胞質ゾルペプチドのＮ−グリカナーゼ（ＰＮＧａｓｅ）（Ｓｅｃ６ｌｐチャンネルと直接的に相互作用していてもしていなくてもよい）により解放されて、ＦＯＳを生成する(G. Li, et al., Multiple Modes of Interaction of the Deglycosylation Enzyme, Mouse Peptide N-glycanase, with the Proteasome, 102 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 15809-15814(2005); Spiro, R. G., Role of N-linked Polymannose Oligosaccharides in Targeting Glycoproteins for Endoplasmic Reticulum-associated Degradation,61 Cell Mol. Life Sci.1025-1041(2004))。この、ＥＲから細胞質ゾルへの選択的タンパク質輸送、それに続くプロテアゾーム分解の過程は、ＥＲ関連分解（ＥＲＡＤ）として知られている。細胞質中で生成されるＦＯＳは、タンパク質ゾル酵素、例えばエンド−Ｒ−Ｎアセチルグルコサミニダーゼ（ＥｎＧＮａｓｅ）(T. Suzuki, et al., Endo-β-N-acetylglucosaminidase, an Enzyme Involved in Processing of Free Oligosaccharides in the Cytosol,99 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 9691-9696(2002))および細胞質ゾルα-マンノシダーゼ(V. A. Shoup, et al. Purification and Characterization of the α-D-Mannosidase of Rat Liver Cytosol,251 J. Biol. Chem. 3845-3852(1976))により作用され、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ１（Ｍ５Ｎ）種を形成し、これは最終的にリソソームに輸送される。しかしながら、伝えられるところによるとグルコシル化されたＦＯＳは分解のためにリソソームに侵入することができず(A. Saint-Pol, et al., Cytosol-to-lysosome Transport of Free Polymannose-type Oligosaccharides, 274 J. Biol. Chem. 13547-13555(1999))、これらグルコシル化ＦＯＳの最後はまだ決定されない状態に留まる。Ｇｌｃ１Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ１を含む、少ないけれども、検出可能な量の他のＦＯＳがＭ５Ｎに加えて細胞中に存在し、ＥＲＡＤに対する正常なデフォルトの経路を説明する(H. R. Mellor et al., Cellular Effects of Deoxynojirimycin Analogues: Inhibition of N-linked Oligosaccharide Processing and Generation of Free Glucosylated Oligosaccharides, 381 Biochem. J. 867-875(2004))。
【０００６】
Ｎ−結合型オリゴサッカライドのα−グルコシダーゼ仲介の加水分解の速度を決める細胞ベースのＥＲα−グルコシダーゼアッセイの発展は、タンパク質が阻害剤の存在においてＥＲ中で折り畳まれる時、生合成経路におけるオリゴサッカライド中間体の重要な原理を明らかにし、タンパク質の誤った折り畳みに対する効果の予測、すなわちウイルス感染性を阻害するための強力な治療法として提案されてきた戦略に使用可能である(R. A. Dwek, et al., Targeting Glycosylation as a Therapeutic Approach,1 Nat. Rev. Drug Discov.65-75(2002))。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】T. D. Butters, et al.11 Tetrahedron:Asymmetry 113-124(2000)
【非特許文献２】H. R. Mellor, et al., 381 Biochem. J. 861-866(2004)
【非特許文献３】L. A. van den Broek, et al.,113 Recueil des Travaux Chimiques des Pays-Bas 507-516.(1994)
【非特許文献４】R. G. Spiro, et al., 271 J. Biol. Chem. 11588-11594(1996)
【非特許文献５】K. Fujimoto, K., et al., 266 J. Biol. Chem. 3571-3578(1991)
【非特許文献６】S. E. Moore, et al., 265 J. Biol. Chem. 13104-13112(1990)
【非特許文献７】E.J. Wiertz, et al., 384 Nature 432-438(1996)
【非特許文献８】Spiro, R. G., 61 Cell Mol. Life Sci.1025-1041(2004)
【非特許文献９】G. Li, et al., 102 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 15809-15814(2005)
【非特許文献１０】T. Suzuki, et al., 99 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 9691-9696(2002)
【非特許文献１１】V. A. Shoup, et al., 251 J. Biol. Chem. 3845-3852(1976)
【非特許文献１２】A. Saint-Pol, et al., 274 J. Biol. Chem. 13547-13555(1999)
【非特許文献１３】H. R. Mellor et al., 381 Biochem. J. 867-875(2004)
【非特許文献１４】R. A. Dwek, et al., 1 Nat. Rev. Drug Discov.65-75(2002)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一つの態様においては、式Ｉおよび式ＩＩ
【化１】
の新規イミノ糖化合物が提供され、
式中、Ｒは
【化２】
であり；
Ｒ’は
【化３】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、ならびに
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚ’は結合またはＮＨである。
【０００９】
別の態様においては、式ＩＩＩ
【化４】
の化合物を作製するための方法が提供され、この方法は、式ＩＶ
【化５】
の化合物を式Ｖ
【化６】
の化合物と縮合することを含み、
式中、
Ｒ’は
【化７】
であり；
Ｑは存在しないか、もしくはＣＨであり、
但しＱが存在しない場合には、ＯＷ１も存在せず；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨから選択される。
【００１０】
別の態様においては、α−グルコシダーゼを式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩの化合物、これらの塩、またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物により阻害する方法が提供される。
【００１１】
なお別の態様においては、α−グルコシダーゼを式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩの化合物、これらの塩、またはこれらの塩またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物と接触させることにより、オリゴサッカライドからグルコース残基を除去することを阻害する方法が提供される。
【００１２】
別の態様においては、ウイルスに感染した哺乳類細胞を式Ｉの化合物、式ＩＩの化合物、式ＩＩＩの化合物、医薬的に許容し得るこれらの塩またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物と、ウイルスの阻害に有効な量で接触させることを含む、哺乳類に感染するウイルスを阻害する方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、コントロール細胞（ａ）；ＮＡＰ−ＤＮＪ（５０μＭ）で処理された細胞（ｂ）；ＤＮＰ−ＤＮＪ（５０μＭ）で処理された細胞（ｃ）、およびＮＢ−ＤＮＪ（１ｍＭ）で処理された細胞（ｄ）から単離されたＦＯＳに対するＮＰ−ＨＰＬＣの結果を示す。
【図２】ＨＬ６０細胞を種々の濃度のＮＡＰ−ＤＮＪにより２４時間処理した後、遊離オリゴサッカライドを単離し、ＮＰ−ＨＰＬＣにより分離したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
「ＡＡ」はアントラニル酸に対する略号である。
【００１５】
「ＤＮＪ」はデオキシノジリマイシンに対する略号である。
【００１６】
「ＥＲ」は小胞体に対する略号である。
【００１７】
「ＥＲＡＤ」は小胞体関連分解に対する略号である。
【００１８】
「ＦＯＳ」は遊離オリゴサッカライドを指す略号である。
【００１９】
「ＮＡＰ−ＤＮＪ」はＮ−（Ｎ’−{４’アジド−２’−ニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−デオキシノジリマイシンに対する略号である。
【００２０】
「ＮＤＰ−ＤＮＪ」はＮ−（Ｎ’− {２，４−ジニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−デオキシノジリマイシンに対する略号である。
【００２１】
「ＮＰ−ＨＰＬＣ」は順相高性能液体クロマトグラフィに対する略号である。
【００２２】
「Ｔｒｉｓ」はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンに対する略号である。
【００２３】
本明細書中で使用される時、「光親和性標識化」は、生体分子と特異的に結合する光化学的に反応性の種が光励起されて、通常中間体経由で生体分子に標識を共有結合的に結合させる手法を指す。
【００２４】
一般に、「置換された」は、含有される水素原子に対する１つ又はそれ以上の結合が非水素もしくは非炭素原子に対する結合により置き換えられる、下記に定義するような官能基を指す。置換基は、炭素もしくは水素原子に対する１つ又はそれ以上の結合が二重結合または三重結合を含むヘテロ原子に対する１つ又はそれ以上の結合により置き換えられる基も含む。ある実施形態においては、置換基は、１、２、３、４、５もしくは６個の置換基を有する。置換基の例は、限定ではないが、ハロゲン（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩ）；ヒドロキシル；アルコキシ基、アルケノキシ基、アルキンオキシ基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基、ヘテロ環状オキシおよびヘテロ環状アルコキシ基；カルボニル（オキソ）；カルボキシル；エステル；エーテル；ウレタン；オキシム；ヒドロキシルアミン；アルコキシアミン；チオール；スルフィド、例えばアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基およびヘテロ環状アルキルスルフィド基；スルホキシド；スルホン；スルホニル；スルホンアミド；アミン；Ｎ−オキシド；ヒドラジン；ヒドラジド；ヒドラゾン；アジド；アミド；ウレア；アミジン；グアニジン；エナミン；イミド；イソシアネート；イソチオシアネート；シアネート；チオシアネート；イミン；およびニトリルを含む。
【００２５】
置換環基、例えば置換シクロアルキル基、アリール基、ヘテロ環状基およびヘテロアリール基は、水素原子に対する結合が炭素原子に対する結合により置き換えられる環および縮合環系も含む。それゆえ、置換シクロアルキル基、アリール基、ヘテロ環状基およびヘテロアリール基は、下記に定義するようにアルキル基、アルケニル基およびアルキニル基によっても置換され得る。
【００２６】
アルキル基は、ある実施形態においては１から約２０個の炭素原子、他の実施形態においては１から１２個の炭素原子、さらに他の実施形態においては１から８個の炭素原子を有する直鎖および分岐のアルキル基とシクロアルキル基とを含む。直鎖アルキル基の例は、限定ではないが、１から８個の炭素原子を含む基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基およびｎ−オクチル基を含む。分岐アルキル基の例は、限定ではないが、イソプロピル基、イソ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、イソペンチル基および２，２−ジメチルプロピル基を含む。アルキル基は置換もしくは非置換のものであり得る。代表的な置換アルキル基は、上に列挙した基、例えばアミノ基、オキソ基、ヒドロキシ基、シアノ基、カルボキシ基、ニトロ基、チオ基、アルコキシ基、およびＦ基、Ｃｌ基、Ｂｒ基、Ｉ基のいずれかにより１回又はそれ以上置換され得る。
【００２７】
シクロアルキル基は、環状アルキル基、例えば限定ではないが、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基およびシクロオクチル基である。ある実施形態においては、このシクロアルキル基は３から８個の環員を有し、他の実施形態においては、環炭素原子数は３から５、６または７の範囲である。シクロアルキル基は、単環式、二環式、および多環式環系、例えば下記で述べるような架橋シクロアルキル基、および縮合環、例えば、限定ではないが、デカリニルなどを更に含む。シクロアルキル基は置換もしくは非置換のものであり得る。置換シクロアルキル基は、上記に定義したような非水素および非炭素基により１度又はそれ以上置換され得る。しかしながら、置換シクロアルキル基は、上記に定義したような直鎖もしくは分岐鎖アルキル基により置換されている環も含む。代表的な置換シクロアルキル基は、一置換、もしくは二度以上置換されたもの、例えば限定ではないが、上に列挙した基のいずれか、例えば、メチル基、アミノ基、ヒドロキシ基、シアノ基、カルボキシ基、ニトロ基、チオ基、アルコキシ基、およびＦ基、Ｃｌ基、Ｂｒ基、Ｉ基により置換され得る、２，２−、２，３−、２，４−、２，５−もしくは２，６−二置換シクロヘキシル基であり得る。
【００２８】
アルケニル基は、少なくとも１つの二重結合が２個の炭素原子の間に存在するということを除いて、上記に定義したような直鎖および分岐鎖のアルキル基およびシクロアルキル基を含む。このように、アルケニル基は、２から約２０個の炭素原子、通常、２から１２個の炭素、もしくはある実施形態においては２から８個の炭素原子を有する。例えば、限定ではないが、とりわけビニル、ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ３）、ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）＝ＣＨ２、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、ブタジエニル、ペンタジエニルおよびヘキサジエニルが含まれる。アルケニル基は置換もしくは非置換のものであり得る。
【００２９】
アルキニル基は、少なくとも１つの三重結合が２個の炭素原子の間で存在するということを異にした直鎖および分岐鎖アルキル基を含む。このように、アルキニル基は、２から約２０個の炭素原子、通常、２から１２個の炭素、もしくはある実施形態においては２から８個の炭素原子を有する。例えば、限定ではないが、とりわけ−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２Ｃ≡（ＣＨ３）および−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）を含む。アルキニル基は置換もしくは非置換のものであり得る。
【００３０】
アリール基は、ヘテロ原子を含有しない環状芳香族炭化水素である。アリール基は単環、二環、および多環状の環系を含む。このように、アリール基は、限定ではないが、フェニル基、アズレニル基、ヘプタレニル基、ビフェニレニル基、インダセニル基、フルオレニル基、フェナントレニル基、トリフェニレニル基、ピレニル基、ナフタセニル基、クリセニル基、ビフェニル基、アントラセニル基、インデニル基、インダニル基、ペンタレニル基およびナフチル基を含む。ある実施形態においては、アリール基は、６〜１４個の炭素、他の実施形態においては、６〜１２個の、もしくは更には６〜１０個の炭素原子を基の環部分中に含有する。語句「アリール基」は、縮合環、例えば縮合芳香族−脂肪族環系（例えば、インダニル、テトラヒドロナフチルなど）を含有する基を含むが、他の基、例えばアルキル基もしくはハロ基を有する環員の１つに結合したアリール基を含まない。むしろ、基、例えばトリルは置換アリール基と呼ばれる。アリール基は置換もしくは非置換のものであり得る。代表的な置換アリール基は、一置換、もしくは二度以上置換されたものであり得る。例えば、一置換アリール基は、限定ではないが、基、例えば上に列挙した基などにより置換され得る、２−、３−、４−、５−もしくは６−置換のフェニル基もしくはナフチル基を含む。
【００３１】
ヘテロ環状基は、１つ又はそれ以上がヘテロ原子、例えば限定ではないが、Ｎ、ＯおよびＳである、３個又はそれ以上の環員を含有する芳香族（ヘテロアリールとも呼ばれる）および非芳香族の環化合物を含む。ある実施形態においては、このヘテロ環状基は、１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を含有する。ある実施形態においては、ヘテロ環状基は、３から２０個の環員を含み、他のこのような基は３から６、１０、１２または１５個の環員を有する。ヘテロ環状基は、不飽和、部分飽和、および飽和の環系、例えばイミダゾリル基、イミダゾリニル基およびイミダゾリジニル基を包含する。語句「ヘテロ環状基」は、縮合した芳香族基および非芳香族基、例えば、ベンゾトリアゾリル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］−ジオキシニルおよびベンゾ［１，３］ジオキソリルを含む環を含む、縮合環種を含む。この語句はまた、ヘテロ原子を含有する架橋多環状環系、例えば、限定ではないが、キヌクリジルも含む。しかしながら、この語句は、環員の一つに結合した他の基、例えばアルキル、オキソもしくはハロ基を有するヘテロ環状基を含まない。むしろ、これらは「置換ヘテロ環状基」と呼ばれる。ヘテロ環状基は置換もしくは非置換のものであり得る。ヘテロ環状基は、限定ではないが、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ピロリル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、ピラニル、トリアゾリル、テトラゾリル、フラニル、テトラヒドロフラニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ジヒドロベンゾフラニル、インドリル、ジヒドロインドリル、アザインドリル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、アザベンズイミダゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、イミダゾピリジニル、イソキサゾロピリジニル、チアナフタレニル、プリニル、キサンチニル、アデニニル、グアニニル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、キノキサリニル、キナゾリニル、ベンゾトリアゾリル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニルおよびベンゾ［１，３］ジオキソリル基を含む。代表的な置換ヘテロ環状基は、一置換、もしくは二度以上置換されたもの、例えば限定ではないが、アルキル、オキソ、カルボニル、アミノ、アルコキシ、シアノ、および／またはハロを含む上記に定義した種々の基により２−、３−、４−、５−もしくは６−置換または二置換されているピリジニル基またはモルホリニル基であり得る。
【００３２】
アルコキシ基は、水素原子に対する結合が上記に定義したようなアルキル基の炭素原子に対する結合により置き換えられているヒドロキシル基（−ＯＨ）である。線状アルコキシ基の例は、限定ではないがメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシなどを含む。分岐アルコキシの例は、限定ではないがイソプロポキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソペントキシ、イソヘキソキシなどを含む。環状アルコキシの例は、限定ではないがシクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシなどを含む。代表的な置換アルコキシ基は、限定ではないが、アミノ基、オキソ基、アルコキシ基、アルキル基、シアノ基および／またはハロゲン基を含む上記に定義した種々の基により１度又はそれ以上置換され得る。
【００３３】
用語「アリールオキシ」および「アリールアルコキシ」は、それぞれ、酸素原子に結合したアリール基と、アルキルにおいて酸素原子に結合したアラルキル基を指す。例えば、限定ではないがフェノキシ、ナフチルオキシ、およびベンジルオキシが含まれる。代表的な置換アリールオキシ基およびアリールアルコキシ基は、限定ではないが、アミノ基、オキソ基、アルコキシ基、アルキル基、シアノ基および／またはハロゲン基を含む、上記に定義した種々の基により１度以上置換され得る。
【００３４】
用語「カルボキシレート」は、本明細書中で使用される場合に−ＣＯＯＨ基を指す。
【００３５】
用語「カルボン酸エステル」は、本明細書中で使用される場合に−ＣＯＯＲ３０基を指す。Ｒ３０は、本明細書中で定義するように、置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状アルキル基もしくはヘテロ環状基である。
【００３６】
用語「アミド」は、Ｃ−およびＮ−アミド基、すなわち、それぞれ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３１Ｒ３２基、および−ＮＲ３１Ｃ（Ｏ）Ｒ３２基を含む。Ｒ３１およびＲ３２は、独立に、本明細書中で定義するように、水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状アルキル基もしくはヘテロ環状基である。それゆえ、アミド基は、限定ではないが、カルバモイル基（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２）およびホルムアミド基（−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ）を含む。
【００３７】
ウレタン基は、Ｎ−およびＯ−ウレタン基、すなわち、それぞれ−ＮＲ３３Ｃ（Ｏ）ＯＲ３４基および−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３３Ｒ３４基を含む。Ｒ３３およびＲ３４は、独立に、この明細書中で定義するように、水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状アルキル基もしくはヘテロ環状基である。
【００３８】
用語「アミン」は、この明細書中で使用される場合、−ＮＨＲ３５基および−ＮＲ３６Ｒ３７基を指し、式中、Ｒ３５、Ｒ３６およびＲ３７は、この明細書中で定義するように、独立して水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状アルキル基もしくはヘテロ環状基である。非置換アミンはアミノ基と呼ばれ、式−ＮＨ２を有する。
【００３９】
用語「スルホンアミド」は、Ｓ−およびＮ−スルホンアミド基、すなわち、それぞれ−ＳＯ２ＮＲ３８Ｒ３９基および−ＮＲ３８ＳＯ２Ｒ３９基を含む。Ｒ３８およびＲ３９は、本明細書中で定義するように、独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状アルキル基もしくはヘテロ環状基である。それゆえ、スルホンアミド基は、限定ではないがスルファモイル基（−ＳＯ２ＮＨ２）を含む。
【００４０】
用語「チオール」は−ＳＨ基を指し、一方、スルフィドは−ＳＲ４０基を含み、スルホキシドは−Ｓ（Ｏ）Ｒ４１を含み、スルホンは−ＳＯ２Ｒ４２基を含み、ならびにスルホニルは−ＳＯ２ＯＲ４３を含む。Ｒ４０、Ｒ４１、Ｒ４２およびＲ４３は、この明細書中で定義するように、各々独立に置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４１】
用語「ウレア」は−ＮＲ４４−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ４５Ｒ４６基を指す。Ｒ４４基、Ｒ４５基およびＲ４６基は、この明細書中で定義するように、独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４２】
用語「アミジン」は−Ｃ（ＮＲ４７）ＮＲ４８Ｒ４９基および−ＮＲ４７Ｃ（ＮＲ４８）Ｒ４９基を指し、式中、Ｒ４７、Ｒ４８およびＲ４９はこの明細書中で定義するように、各々独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４３】
用語「グアニジン」は−ＮＲ５０Ｃ（ＮＲ５１）ＮＲ５２Ｒ５３基を指し、式中、Ｒ５０、Ｒ５１、Ｒ５２およびＲ５３はこの明細書中で定義するように、各々独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４４】
用語「エナミン」は−Ｃ（Ｒ５４）＝Ｃ（Ｒ５５）ＮＲ５６Ｒ５７基および−ＮＲ５４Ｃ（Ｒ５５）＝Ｃ（Ｒ５６）Ｒ５７基を指し、式中、Ｒ５４、Ｒ５５、Ｒ５６およびＲ５７はこの明細書中で定義するように、各々独立に水素、置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４５】
用語「イミド」は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５８Ｃ（Ｏ）Ｒ５９基を指し、式中、Ｒ５８およびＲ５９がこの明細書中で定義するように、各々独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４６】
用語「イミン」は−ＣＲ６０（ＮＲ６１）基および−Ｎ（ＣＲ６０Ｒ６１）基を指し、式中、Ｒ６０とＲ６１の両方が同時に水素でないという前提で、Ｒ６０およびＲ６１がこの明細書中で定義するように、各々独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４７】
他の用語は、上記の定義により包含される具体的な基の組み合わせを指し得る。次の用語は、限定的であるように意図されていないが、基のある組み合わせの記述に使用され得る。アルカノイルは直鎖もしくは分岐鎖のアルキルカルボニル基を指す。アロイルはアリールカルボニル基を指す。ハロアルキルは、ハロゲンがフッ素、塩素、臭素またはヨウ素から選択される、１つ又はそれ以上のハロゲン置換基を有するアルキルを指す。ハロアルカノイルは、１つ又はそれ以上のハロゲンにより置換されているアルカノイル基を指す。ヒドロキシアルキルは、１つ又はそれ以上のヒドロキシル（ＯＨ）基により置換されているアルキル基を指す。ヒドロキシアルケニルは、１つ又はそれ以上のヒドロキシル基により置換されているアルケニル基を指す。チオアルキルは、１つ又はそれ以上のチオール基により置換されているアルキルを指す。アルコキシアルケニルは、１つ又はそれ以上のアルキルエーテル基により置換されているアルケニル基を指す。アルコキシアルキルは、少なくとも１つのエーテル基を有するアルキルを指す。アルコキシアルコキシアルキルは、アルコキシ基により置換され、したがって２つ又はそれ以上のエーテル基を有するアルコキシアルキル基を指し、オキサアルキルは、一般に、例えばアルコキシアルキル、アルコキシアルコキシアルキル、アルコキシアルコキシアルキルなどの基を指す。ヒドロキシアルキルアルコキシアルキルは、少なくとも１つのヒドロキシアルキル基により置換されているアルコキシアルキル基を指す。ヘテロ環状アルキルは、１つ又はそれ以上の水素原子が置換もしくは非置換のヘテロ環状基により置き換えられているアルキル基を指す。シクロアルキルアルキルは、シクロアルキル基により置換されているアルキル基を指す。個別の基の他の組み合わせは当業者には容易に明白となる。
【００４８】
互変異性体も含まれる。互変異性体の非限定的な例は、ケト／エノール互変異性体、イミノ／アミノ互変異性体、Ｎ−置換イミノ／Ｎ−置換アミノ互変異性体、チオール／チオカルボニル互変異性体、および環−鎖互変異性体、例えばヘテロ原子に対してアルファ位の置換基も含有する５員環および６員環の酸素、窒素、硫黄、または酸素および硫黄含有ヘテロ環である。また、この明細書中で述べられている化合物のエナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびにラセミ体および異性体混合物も特に含まれる。
【００４９】
一つの態様においては、ＤＮＪの新規な化合物が提供される。一つの実施形態においては、式Ｉ
【化８】
の化合物が提供され、
式中、Ｒは
【化９】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、もしくはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、および
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基である。
【００５０】
ある実施形態においては、Ｒ１は１から８個の炭素原子を有する非置換もしくは置換のアルキル基である。他の実施形態においては、ＺはＮＨである。なお他の実施形態においては、Ｘ１およびＸ３はＮＯ２であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお更なる実施形態においては、Ｘ１はＮＯ２であり、Ｘ３はＮ３であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお他の実施形態においては、Ｗ１−４はすべて水素であり、更なる実施形態においては、ＹはＣＨ２である。
【００５１】
ある実施形態においては、式Ｉの化合物は、式ＩＡ
【化１０】
の化合物の構造を有する。
他のこのような実施形態においては、式ＩＡの化合物はＮ−（Ｎ’−（４’−アジド−２’−ニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−デオキシノジリマイシンである。他のこのような実施形態においては、式ＩＡの化合物はＮ−（Ｎ’−（２’，４’−ジニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−デオキシノジリマイシンである。
【００５２】
別の態様においては、式Ｉの化合物の組成物も提供される。このような組成物は医薬的に許容し得るキャリアを含む。
【００５３】
別の態様においては、Ｄ−アラビニトールの新規な化合物が提供される。一つの実施形態においては、式ＩＩ
【化１１】
の化合物が提供され、
式中、Ｒ’は
【化１２】
であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−３は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨから選択される。
【００５４】
ある実施形態においては、Ｒ２は１から８個の炭素原子を有する置換もしくは非置換のアルキル基である。他の実施形態においては、Ｚ’はＮＨである。なお他の実施形態においては、Ｘ１およびＸ３はＮＯ２であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお更なる実施形態においては、Ｘ１はＮＯ２であり、Ｘ３はＮ３であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお更なる実施形態においては、Ｗ１−３はすべて水素である。
【００５５】
ある実施形態においては、式ＩＩの化合物は、式ＩＩＡ
【化１３】
の化合物の構造を有する。
例えば、式ＩＩＡの化合物は、Ｒ２が−（ＣＨ２）６−であり；Ｗ１−３がＨであり；Ｘ１がＮＯ２であり；Ｘ３がＮ３であり；Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５がＨであり；ならびにＺ’がＮＨである化合物と、Ｒ２が−（ＣＨ２）６−であり；Ｗ１−３がＨであり；Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５がＨであり；ならびにＺ’がＮＨである化合物を含む。
【００５６】
別の態様においては、式ＩＩの化合物の組成物も提供される。このような組成物は医薬的に許容し得るキャリアを含む。
【００５７】
別の態様においては、ＤＮＪのアナログ及びＤ−アラビニトールのアナログを作製するための方法が提供される。このように、ある実施形態においては、式ＩＩＩ
【化１４】
の化合物を作製することを含む方法が提供され、この方法は、式ＩＶ
【化１５】
の化合物を、式Ｖ
【化１６】
の化合物と縮合することにより、
式中、Ｒ’は
【化１７】
であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｚ’は結合またはＮＨから選択され；ならびに
Ｑは存在しないか、もしくはＣＨであり、
但し、Ｑが存在しない場合には、ＯＷ１も存在しない。
この方法のある実施形態においては、この縮合は、式ＶＩの化合物を式Ｖの化合物により還元的にアミノ化することによるものである。
【００５８】
他の実施形態においては、式ＩＶの化合物は、式ＶＩ
【化１８】
の化合物をＨＯ−Ｒ２−ＮＨ２により芳香族フッ素置換して、式ＶＩＩ
【化１９】
の化合物を形成し、式ＶＩＩの化合物を酸化して、式ＩＶの化合物を得ることにより作製される。
【００５９】
他の実施形態においては、式ＩＶの化合物は、式ＶＩＩＩ
【化２０】
の化合物（式中、Ｘ’はＣｌまたはＢｒから選択される）を還元することにより作製される。式ＶＩＩＩの化合物は、当業者に公知の方法により市販の前駆体化合物から作製され得る。非限定的な例として、４−フェニル酪酸は、２，４−ジニトロフェニル酪酸に変換され、続いて４−ニトロ基をアミンに還元し、２−ニトロ−４−アジドフェニル酪酸に変換され得る。次に、対応するアルデヒド、すなわち式ＩＶの化合物は、２−ニトロ−４−アジドフェニル酪酸を対応する酸クロリドに変換し、続いて当分野で周知の方法にしたがってアルデヒドに還元することにより作製される。
【００６０】
ある実施形態においては、式ＩＩＩの化合物は、式ＩＩＩＡ
【化２１】
の化合物の構造を有する。
【００６１】
上述のように、ＤＮＪ、Ｄ−アラビニトール、およびこれらのＮ−アルキル化修飾物は強力なα−グルコシダーゼ阻害剤である。このように、他の本発明の別の態様においては、α−グルコシダーゼを式ＩおよびＩＩの化合物により阻害するための方法が提供される。ある実施形態においては、この方法は、α−グルコシダーゼを式Ｉもしくは式ＩＩ
【化２２】
の化合物またはそれらの塩、またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物により阻害することを含み、
式中、Ｒは
【化２３】
であり；
Ｒ’は
【化２４】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、および
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨである。
この方法のある実施形態においては、Ｒ１またはＲ２は１から８個の炭素原子を有する。他の実施形態においては、Ｘ１およびＸ３はＮＯ２であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお他の実施形態においては、Ｘ１はＮＯ２であり、Ｘ３はＮ３であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお更なる実施形態においては、ＹはＣＨ２である。
【００６２】
この方法のある実施形態においては、α−グルコシダーゼはα−グルコシダーゼＩまたはα−グルコシダーゼＩＩから選択される。
【００６３】
他のこのような実施形態においては、この化合物の塩は医薬的に許容し得る塩である。ある実施形態においては、この塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物である。他の実施形態においては、この塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、有機塩基塩または塩基性四級アンモニウム塩などまたはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物から選択される。
【００６４】
他の実施形態においては、式Ｉの化合物は式ＩＡ
【化２５−１】
の化合物の構造を有し、式ＩＩの化合物は式ＩＩＡ
【化２５−２】
の化合物の構造を有する。
【００６５】
ある実施形態においては、α−グルコシダーゼを阻害する方法は、この化合物をα−グルコシダーゼの存在において光分解することを更に含む。ある実施形態においては、α−グルコシダーゼは、標識化された基質の存在下で阻害され得る。例えば、この明細書中で述べられている化合物と、放射性標識、例えば１４Ｃ標識を有するこれらのアナログ(H. R. Mellor et al., Preparation, Biochemical Characterisation and Biological Properties of Radiolabelled N-alkylated Deoxynojirimycins,336 Biochem. J. 225-233(2002))は、細胞中のα−グルコシダーゼに選択的に結合でき、次に照射により活性化されて、α−グルコシダーゼの活性部位においてアミノ酸残基の中に共有結合的に挿入し得る、高反応性種を形成し得る。これは、スキームＩで例示するようにアジド化合物の例において達成でき、この場合、アジド化合物を光活性化してナイトレンを生成し、このナイトレンが次いでアミノ酸と反応してヒドラジド化合物を形成する。電子吸引性基が芳香族環（Ａｒ）上に存在する場合には、アリールナイトレンは、別のアリールナイトレンに対するよりも、求核性物質に対してより反応性である。このように、求核性基（例えばリジン中のε−アミノ基）を有するアミノ酸（ＲＡＡ）を含有するタンパク質を標識化する場合には、競合する分子内反応よりも分子間反応が優先される。
【化２６】
スキームＩ：生体分子中でのアジドからのナイトレンの形成およびアミノ基の共有結合性標識化
【００６６】
本発明の別の態様においては、α−グルコシダーゼを、式Ｉもしくは式ＩＩ
【化２７】
の化合物またはこれらの塩、またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物と接触させることにより、グルコース残基をオリゴサッカライドから除去することを阻害することを含む方法が提供され、
式中、Ｒは
【化２８】
であり；
Ｒ’は
【化２９】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、および
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨである。
【００６７】
ＤＮＪおよびＤ−アラビニトールのＮ−アルキル化修飾物、例えばＮ−ブチル−ＤＮＪは抗ウイルス性剤として使用され得る。このように、本発明の別の態様においては、ウイルスにより感染された哺乳類細胞を式Ｉもしくは式ＩＩ
【化３０】
の化合物または医薬的に許容し得るこれらの塩、またはこれらの任意の２つ以上の混合物と、ウイルスの阻害に有効な量で接触させることを含む、哺乳類に感染するウイルスを阻害するための方法が提供され、
式中、Ｒは
【化３１】
であり；
Ｒ’は
【化３２】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨである。
【００６８】
ある実施形態においては、このウイルスは、ウイルスのフラビ・ウイルス科に属するウイルスである。このウイルスは、限定ではないが、肝炎ウイルス、例えば肝炎Ｂウイルスもしくは肝炎Ｃウイルス、またはウシウイルス性下痢ウイルスから選択され得る。このような実施形態においては、ウイルスの阻害に有効な量は、肝炎ウイルス、肝炎Ｂウイルス、肝炎Ｃウイルスまたはウシ下痢症ウイルスの阻害に有効な量である。別の実施形態においては、式ＩおよびＩＩの化合物は、単独、または当業者に公知のヌクレオチド抗ウイルス性化合物、ヌクレオシド抗ウイルス性化合物、免疫賦活化化合物、免疫調節性化合物もしくはこれらの任意の２つ以上の混合物との組み合わせで接触され得る。ある実施形態においては、この接触は、式ＩもしくはＩＩの化合物を哺乳類に投与することをさらに含む。ある実施形態においては、哺乳類細胞はヒト細胞である。なお他の実施形態においては、この接触は、式ＩもしくはＩＩの化合物をヒトに投与することを含む。
【００６９】
この開示の目的で、ならびに特記しない限り、「単数（”ａ”または”ａｎ”）」は「１つ以上」を意味する。
【００７０】
当業者ならば述べられているすべての範囲がすべての目的ですべての下位範囲を記述することができ、必然的に記述しているということ、ならびにすべてのこのような下位範囲もまた本発明の一部を形成するということを容易に認識する。列挙されているいずれの範囲も、少なくとも同等の２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などに細分化される同一の範囲を十分に記述し、有効とせしめるものとして容易に認識可能である。非限定的な例として、この明細書中で述べられる各範囲は、低位の３分の１、中位の３分の１、および高位の３分の１に容易に細分化可能である。
【００７１】
本明細書中の全ての刊行物、特許出願、登録特許および他の文書は、それら各個別の刊行物、特許出願、登録特許および他の文書が個々に全体で参照として組み込まれることを特定かつ個別に示されているように、この明細書中に参照として組み込まれる。参照により組み込まれている文章中に含まれる定義は、この開示中の定義に矛盾する範囲まで除外される。
【００７２】
本発明は、このように一般的に述べられたが、例示として提供されならびに本発明の限定とは意図されていない、次の実施例を参照することにより更に容易に理解されるであろう。
【実施例】
【００７３】
実施例１
Ｎ−（Ｎ’−（４’アジド−２’−ニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−ＤＮＪ（ＮＡＰ−ＤＮＪ）の合成
４−フルオロ−３−ニトロフェニルアジド（ＦＮＡＰ）中の芳香族フッ素を６−アミノヘキサノールにより直接置換することによって、所望のアルコールを作製し、これをアルデヒドに酸化する。スキームＩＩに示すように、得られたアルデヒドをＤＮＪによる還元的アミノ化にかけて、最終生成物を得る。
【化３３】
スキームＩＩ：（ｉ）トリエチルアミン（２．２当量）、１，４−ジオキサン、室温、２時間、５５％；（ｉｉ）Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ（１．２当量）、ＤＣＭ、室温、２時間、９５％；および（ｉｉｉ）ＤＮＪ、ＮａＣＮＢＨ３（１．５当量）、ＡｃＯＨ、ＭｅＯＨ、室温、１４時間、定量的収率。
【００７４】
１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲと質量分析法を用いて、ＮＡＰ−ＤＮＪのキャラクタリゼーションを行った。ＩＤ（１Ｈおよび１３Ｃ）ＮＭＲからの結果を表１に示し、ＣＯＳＹおよびＮＯＥＳＹの結果を下記に示す。１Ｈ ＮＭＲは任意であり、１３Ｃ ＮＭＲはメタノール（４９．０ｐｐｍ）を参照としたものである。
【表１】
【００７５】
１Ｈ−１ＨＣＯＳＹ実験：Ｃ１Ｈ／Ｈ’−Ｃ２Ｈ−Ｃ３Ｈ−Ｃ４Ｈ−Ｃ５Ｈ−Ｃ６Ｈ／Ｈ’；Ｃ７Ｈ／Ｈ’−Ｃ８Ｈ２−Ｃ９Ｈ２−Ｃ１０Ｈ２−Ｃ１１Ｈ２−Ｃ１２Ｈ２；Ｃ１５Ｈ−Ｃ１７Ｈ−Ｃ１８Ｈ。これにより、この芳香族環は１，２，４−置換であり、Ｃ７は結合しているか、もしくは剛直な環の一部である。
【００７６】
ＮＯＥＳＹ実験（４００ｍｓｅｃ）：Ｃ７Ｈ→Ｃ１Ｈ（１３８）、Ｃ６Ｈ／Ｈ’（３４３）；Ｃ７Ｈ’→Ｃ６Ｈ／Ｈ’（３２５）；Ｃ１２Ｈ２→Ｃ１８Ｈ。環の周りの大きな結合定数は、Ｃ１Ｈ’、Ｃ２Ｈ、Ｃ３Ｈ、Ｃ４Ｈ、およびＣ５Ｈがすべてトランスジ−アキシャルであるということを示唆する。これは、この環がグルコースの立体構造を有すること、すなわち、ＤＮＪであることを示す。Ｃ７Ｈ／Ｈ’からＣ１Ｈ／Ｈ’およびＣ６Ｈ／Ｈ’までのＮＯＥＳは、Ｃ１２が芳香族環に結合し、おそらくＣ１８にオルト位の環位置にあるということを示す。
【００７７】
分光法：［α］Ｄ２２−７．７（ｃ０．０２６，ＭｅＯＨ）；νｍａｘ（Ｇｅ）３３５６（ＮＨ＋ＯＨ）、２９２６、２８５６（ＣＨ）、２１１９（Ｎ３）、１６３３、１５５６（Ｃ＝Ｃ）、１５２１、１３４７（ＮＯ２）ｃｍ−１。
質量分析法：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）：４２５．３３（［Ｍ＋Ｈ］＋，１００％）；ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：実測値４２５．２１５２（［Ｍ＋Ｈ］＋）、計算値４２６．２１４９。
【００７８】
実施例２
Ｎ−（Ｎ’−（２，４−ジニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−ＤＮＪ（ＮＤＰ−ＤＮＪ）の合成
２，４−ジニトロフルオロベンゼン（サンガー試剤）中の芳香族フッ素を６−アミノヘキサノールにより直接置換することによって、所望のアルコールを作製し、これをアルデヒドに酸化する。得られたアルデヒドをＤＮＪによる還元的アミノ化にかけて、最終生成物を得る（スキームＩＩＩ）。
【化３４】
スキームＩＩＩ：（ｉ）トリエチルアミン（１．１当量）、１，４−ジオキサン、室温、１時間、９７％；（ｉｉ）Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ（１．２当量）、ＤＣＭ、室温、２時間、７６％；（ｉｉｉ）ＤＮＪ、ＮａＣＮＢＨ３（１．２当量）、ＡｃＯＨ、ＭｅＯＨ、室温、１６時間、５２％。
【００７９】
ＮＤＰ−ＤＮＪのキャラクタリゼーションを行い、結果を下記に示す。
【００８０】
δＨ（５００．３ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）：１．３３−１．５８（６Ｈ，ｍ，Ｈ−３’ａｂ，Ｈ−４’ａｂ，Ｈ−２’ａｂ）、１．７７（２Ｈ，ａ−ｑｕｉｎ，Ｊ７．４Ｈｚ，Ｈ−５’ａｂ）、２．１１（１Ｈ，ａ−ｄｔ，Ｊ５，４９．５Ｈｚ，Ｊ２．８Ｈｚ，Ｈ−５）、２．１６（１Ｈ，ａ−ｔ，Ｊ１０．８Ｈｚ，Ｈ−１ａ）、２．５４−２．６１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−ｌ’ａ）、２．７９−２．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−ｌ’ｂ）、２．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ｂ，１ａ１１．２Ｈｚ，Ｊ１ｂ，２４．９Ｈｚ，Ｈ−１ｂ）、３．１２（１Ｈ，ａ−ｔ，Ｊ９．１Ｈｚ，Ｈ−３）、３．３３（１Ｈ，ａ−ｔ，Ｊ９．３Ｈｚ，Ｈ−４）、３．４６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ２，ｌａ１０．４Ｈｚ，Ｊ２，３９．２Ｈｚ，Ｊ２，ｌｂ４．９Ｈｚ，Ｈ−２）、３．５０（２Ｈ，ａ−ｔ，Ｊ７．２Ｈｚ，Ｈ−６’）、３．８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．９Ｈｚ，Ｊ６ａ，５２．９Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、３．８６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ６ｂ，６ａ１１．９Ｈｚ，Ｊ６ｂ，５２．７Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ６”，５”９．６Ｈｚ，Ｈ−６”）、８．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ５”，６”９．６Ｈｚ，Ｊ５”，３”２．７Ｈｚ，Ｈ−５”）、９．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ３”，５”２．７Ｈｚ，Ｈ−３”）。
【００８１】
δＣ（１２５．８ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：２５．２（Ｃ−２’）、２７．９（Ｃ−４’）、２８．３（Ｃ−３’）、２９．７（Ｃ−５’）、４４．２（Ｃ−６’）、５３．７（Ｃ−１’）、５７．７（Ｃ−１）、５９．６（Ｃ−６）、６７．５（Ｃ−５）、７０．８（Ｃ−２）、７２．１（Ｃ−４）、８０．６（Ｃ−３）、１１５．８（Ｃ−６”）、１２４．８（Ｃ−３”）、１３１．１（Ｃ−５”）、１３１．５（Ｃ−１”）、１３６．９（Ｃ−２”）、１４９．８（Ｃ−４”）。
【００８２】
分光法：［α］Ｄ２２−７．９（ｃ０．１４，ＭｅＯＨ）；νｍａｘ（Ｇｅ）３３５６（ＯＨ＋ＮＨ）、１５７２、１３３９（ＮＯ２）ｃｍ−１。質量分析法：ｍ／ｚＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：実測値４２９．１９７３、Ｃ１８Ｈ２９Ｎ４Ｏ８［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４２９．１９８５。
【００８３】
実施例３
Ｎ−（アルキルフェニル）−ＤＮＪ誘導体の合成
下記でスキームＩＶに示すように、Ｎ−アルキルフェニル−ＤＮＪ化合物をフェニルカルボン酸から作製することができる。スキームＩＶにおいては、４−フェニル酪酸を２，４−ジニトロフェニル酪酸に変換し、続いて４−ニトロ基をアミンに還元し、２−ニトロ−４−アジドフェニル酪酸に変換する。次に、２−ニトロ−４−アジドフェニル酪酸を対応する酸クロリドに変換し、続いてアルデヒドに還元することにより、このアルデヒドを作製することができる。得られたアルデヒドをＤＮＪによる還元的アミノ化にかけて、最終生成物を得る。別法としては、Ｄ−アラビニトールをＤＮＪの代わりに使用して、対応するＤ−アラビニトール化合物を生成させ得る。
【化３５】
スキームＩＶ：Ｃ−フェニル−ＤＮＪ誘導体の合成
【００８４】
実施例４
公知の方法(H. R. Mellor et al., Cellular Effects of Deoxynojirimycin Analogues: Inhibition of N-linked Oligosaccharide Processing and Generation of Free Glucosylated Oligosaccharides,381 Biochem. J. 867-875(2004))を改変することによるアッセイ方法を用いて、細胞に及ぼすＥＲ−グルコシダーゼ阻害剤の効果を評価した。細胞質ゾル中で分解される誤って折り畳まれたタンパク質を生成するイミノ糖処理の後の遊離オリゴサッカライドの検出は、細胞内ＥＲ侵入およびイミノ糖によるα−グルコシダーゼＩおよびＩＩの糖タンパク質プロセシングの阻害の正確な尺度である。
【００８５】
ＮＢ−ＤＮＪを種々の濃度で含有する新鮮な培地中での生長の前に細胞を高密度（１×１０７細胞／ｍｌ）まで培養した。インキュベーション期間の終わりに高密度を得るように、この細胞を低密度で播種した。細胞培養に続いて、培地を除去し、細胞を遠心分離によりＰＢＳで３回洗浄した。洗浄された細胞を−２０℃で短時間貯蔵し、その後で解凍し、水中でガラスホモジナイズした。ＦＯＳを抽出するための条件を求めて、ＦＯＳの回収を最大とした。本質的に、０．４ｍｌのＡＧ３−Ｘ４（ＯＨ-、１００〜２００メッシュ）上の混合床イオン交換カラム（０．２ｍｌ ＡＧ５ＯＷ−ＸＩ２（Ｈ＋、１００〜２００メッシュ）に通すことにより、このホモジネートを脱塩、脱タンパク質化し、水（５×１ｍｌ）により予備平衡化した。このホモジネートをカラムに添加し、４×１ｍｌの水により洗浄し、溶離液を捕集する。次に、抽出された精製ＦＯＳを真空下で、もしくは凍結乾燥により乾燥する。
【００８６】
当分野で公知の方法(D. C. Neville, et al, Analysis of Fluorescently Labeled Glycosphingolipid-Derived Oligosaccharides Following Ceramide Glycanase Digestion and Anthranilic Acid Labeling,331, Anal. Biochem. 275-282(2004))によりＦＯＳをアントラニル酸で標識した。手短に述べると、アントラニル酸（３０ｍｇ／ｍｌ）をメタノール中の酢酸ナトリウム三水和物（４％、ｗ／ｖ）およびホウ酸（２％、ｗ／ｖ）の溶液に溶解した。この溶液を固体ナトリウムシアノボロヒドリドに添加して、４５ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得た。生成溶液を混合して、最終標識化混合物を得た。乾燥したＦＯＳを３０μｌ水に溶解し、８０μｌの標識化混合物を添加し、その後で８０℃で４５〜６０分間インキュベートした。この反応物を室温まで冷却し、１ｍｌのアセトニトリル／水（９７：３、ｖ／ｖ）を添加し、混合物をボルテックスした。標識化されたオリゴサッカライドをＤｉｓｃｏｖｅｒｙ ＤＰＡ−６Ｓカラムのクロマトグラフィにより精製した。このカラムを２×１ｍｌのアセトニトリルにより予備平衡化した。重力流を用いてこの試料をロードし、カラムを通して滴下した。このカラムを４×１ｍｌのアセトニトリル／水（９９：１、ｖ／ｖ）により、続いて０．５ｍｌのアセトニトリル／水（９７：３、ｖ／ｖ）により洗浄した。標識化されたオリゴサッカライドを２×０．６ｍｌの水により溶離した。
【００８７】
Ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ Ａ（Ｃｏｎ Ａ）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂカラム（１００μｌ充填樹脂）を用いて、ｐＨ７．２の５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液中の標識化されたオリゴサッカライドを精製した。２×１ｍｌの水、続いて水中の１ｍｌの１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＣａＣｌ２、および１ｍＭ ＭｎＣｌ２、および最終的にｐＨ７．２の２×１ｍｌの５０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液によりこのカラムを予備平衡化した。試料を添加し、カラムと３０分間相互作用させ、その後２×１ｍｌのｐＨ７．２の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液により洗浄した。次に、Ｃｏｎ Ａと結合したＦＯＳをｐＨ７．２の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液中の２×１ｍｌの熱（７０℃）０．５Ｍメチル−α−Ｄ−マンノピラノシドにより溶離した。
【００８８】
公知の方法(D. C. Neville, et al)に若干の改変を加えた４．６×２５０ｍｍ ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ−８０カラム（Ａｎａｃｈｅｍ、Ｌｕｔｏｎ、ＵＫ）を用いるＮＰ−ＨＰＬＣにより、ＣｏｎＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅで精製した２−ＡＡ−標識化されたオリゴサッカライドを分離した。このクロマトグラフィ系は、Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２６９５分離モジュールと、３６０ｎｍの励起波長と４２５ｎｍの発光波長に設定されたインラインＷａｔｅｒｓ ４７４蛍光検出器からなるものであった。すべてのクロマトグラフィを３０℃で行った。第１の溶媒の溶媒Ａはアセトニトリルであり、第２の溶媒の溶媒ＢはＭｉｌｌｉ−Ｑ水であった。溶媒Ｃは酢酸によりｐＨ３．８５まで滴定されたＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の１００ｍＭ水酸化アンモニウムから構成され、標準の５Ｎ水酸化アンモニウム溶液（Ｓｉｇｍａ）を用いて作製されたものであった。勾配条件は次の通りであった。時間＝０分（ｔ＝０）、７１．６％ Ａ、８．４％ Ｂ、２０％ Ｃ（０．８ｍｌ／分）；ｔ＝６、７１．６％ Ａ、８．４％ Ｂ、２０％ Ｃ（０．８ｍｌ／分）；ｔ＝４０、５２％ Ａ、２８％ Ｂ、２０％ Ｃ（０．８ｍｌ／分）；ｔ＝４１、２３％ Ａ、５７％ Ｂ、２０％ Ｃ（１ｍｌ／分）；ｔ＝４３、２３％ Ａ、５７％ Ｂ、２０％ Ｃ（１ｍｌ／分）；ｔ＝４４、７１．６％ Ａ、８．４％ Ｂ、２０％ Ｃ（１．２ｍｌ／分）；ｔ＝５９、７１．６％ Ａ、８．４％ Ｂ、２０％ Ｃ（１．２ｍｌ／分）；ｔ＝６０、７１．６％ Ａ、８．４％ Ｂ、２０％ Ｃ（０．８ｍｌ／分）。試料（＜５０μｌ）をＭｉｌｌｉ−Ｑ水／アセトニトリル（３／７、ｖ／ｖ）に注入した。Ｗａｔｅｒｓ Ｅｍｐｏｗｅｒソフトウエアを用いて、データ収集および処理を含めてすべてのクロマトグラフィを制御した。Ｐｅａｋ Ｔｉｍｅソフトウエア（インハウスでの開発品）を用いて、２−ＡＡ−標識化されたグルコースオリゴマーラダー（デキストランの部分加水分解物から抽出された）外部標準との比較にしたがってグルコース単位を定量した。
【００８９】
精製α−グルコシダーゼＩおよびＩＩを公知の方法によりラット肝臓から精製した(G. B. Karlsson, et al., Effects of the Imino Sugar N-Butyldeoxynojirimycin on the N-Glycosylation of Recombinant gp120,268 J. Biol. Chem., 570-576(1993))。グルコシダーゼ阻害剤としてＮＢ−ＤＮＪにより処理された細胞から生じるＦＯＳの単離から基質を作製し、ＨＰＬＣにより精製した。２−ＡＡ−標識化されたＦＯＳを単離し、α−グルコシダーゼＩもしくはＩＩ用の基質として精製した。蛍光標識化された基質Ｇｌｃ１Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ１（Ｇ１Ｍ５Ｎ）、Ｇｌｃ２Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ１（Ｇ２Ｍ５Ｎ）、Ｇｌｃ３Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ１（Ｇ３Ｍ５Ｎ）、およびＧｌｃ３Ｍａｎ９ＧｌｃＮＡｃ１（Ｇ３Ｍ９Ｎ２）を添加して、種々の濃度のイミノ糖の１．５ｍｌ遠心分離管を分離し、真空下で乾燥した。十分なα−グルコシダーゼＩを添加して、３０分の反応時間でＧ３Ｍ５Ｎの２５％加水分解を生じさせた。同様に、α−グルコシダーゼＩＩをＧ２Ｍ５Ｎと共に２時間、Ｇ１Ｍ５Ｎと共に２０分インキュベートした。すべての場合、インキュベーションの時間にわたって基質の線形分解が起こった。３０μｌのアセトニトリルを添加することにより、反応を停止した。酵素処理に続いて、ＨＰＬＣ分析の前にすべての消化液を１０，０００分子量のカットオフフィルタ（１５０μｌの水により事前に洗浄されたもの）から７，０００ｒｐｍで４５分間上述のように遠心分離して、タンパク質を除去し、上記のようにＨＰＬＣにより分析した。
【００９０】
実施例１〜３の結果
α−グルコシダーゼＩおよびＩＩのインビトロ阻害
下記に示すように２−ＡＡにより標識化されたα−グルコシダーゼＩおよびα−グルコシダーゼＩＩ基質に対する阻害剤濃度の範囲を用いて、ＩＣ５０値を生成した。Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（ＮＢ−ＤＮＪ）による阻害を比較で示す。
【化３６】
【００９１】
これらのデータによって、ＮＡＰ−ＤＮＪによる阻害がα−グルコシダーゼＩＩ（ａ）もしくは（ｂ）活性それぞれよりもα−グルコシダーゼＩに対して２０および５０倍良好であったということが明白となる。α−グルコシダーゼＩの阻害はＮＢ−ＤＮＪと比較して４０倍改善した。しかしながら、これらの構造は、細胞によってはＦＯＳとして見られるのみであり、更に生理学的に関連するＥＲに局所化された基質を分析した。
【化３７】
【００９２】
これらのデータによって、生理学的に見出されるものに類似したマンノース構造を持つ基質がグルコシダーゼ阻害に対する明白な区別を示すということが明白となる。ＮＡＰ−ＤＮＪは、グルコシダーゼＩの阻害においてグルコシダーゼＩＩ（ａ）よりも３００倍以上、グルコシダーゼＩＩ（ｂ）よりも５００倍以上強力である。ＮＤＰ−ＤＮＪについて類似の改善も観察された。ＥＲ中のグルコシダーゼにより通常変成されるオリゴサッカライド基質と共に最終のインビトロ実験を行った。
【化３８】
【００９３】
これらのデータによって、阻害剤に対するＩＣ５０値がトリグルコシル化基質のグルコシダーゼＩ仲介の加水分解に対してマンノース構造に依存的ではなく、グルコシダーゼＩＩが依存的であり得るということが明白となる。これは、生理学的に関連する基質を用いて、ＮＡＰ−ＤＮＪがすべてのトリグルコシル化構造の阻害においてＮＢ−ＤＮＪよりも２５〜５０倍良好であり、グルコシダーゼＩの阻害においてグルコシダーゼＩＩ（ａ）および（ｂ）活性よりも３００〜５００倍良好であるということを示し得る。
【００９４】
細胞中でのグルコシダーゼ活性の阻害
ＨＬ６０細胞を種々の濃度のＮＡＰ−ＤＮＪ、ＤＮＰ−ＤＮＪ、およびＮＢ−ＤＮＪ（阻害剤リフェレンスとして）と共に２４時間インキュベートし、遊離オリゴサッカライドを単離し、標識付けし、ならびにＮＰ−ＨＰＬＣ（図１）によりキャラクタリゼーションした。図１は、コントロール細胞（ａ）；ＮＡＰ−ＤＮＪ（５０μＭ）処理細胞（ｂ）；ＤＮＰ−ＤＮＪ（５０μＭ）処理細胞（ｃ）、およびＮＢ−ＤＮＪ（１ｍＭ）処理細胞（ｄ）から単離されたＦＯＳに対するＮＰ−ＨＰＬＣ結果を示す。質量分析法と、精製グルコシダーゼおよびマンノシダーゼを用いて消化することにより構造を特定化した公知の、精製された標準に参照することにより、ピークを割り当てた。
【００９５】
これらのデータによって、細胞中でＮＡＰ−ＤＮＪがグルコシダーゼＩの阻害（グルコシダーゼＩ阻害の生成物、Ｇ３Ｍ５Ｎの評価）においてＮＢ−ＤＮＪよりもかなり強力（２０〜５０倍）であるということが明白となる。グルコシダーゼＩおよびＩＩの相対的な阻害に及ぼすＮＡＰ−ＤＮＪ濃度の影響を図２に示す。図２は、ＨＬ６０細胞を種々の濃度のＮＡＰ−ＤＮＪにより２４時間処理した後、遊離オリゴサッカライドを単離し、ＮＰ−ＨＰＬＣにより分離したグラフである。グルコシダーゼＩ（Ｇ３Ｍ５Ｎ）とグルコシダーゼＩＩ（ｂ）（Ｇ１Ｍ５Ｎ）の阻害に対応するピーク面積を測定し、グルコシダーゼ阻害により影響を受けず、内部マーカーとして使用されるＭ４、遊離オリゴサッカライドの量に対して正規化した。タンパク質の量に対する正規化は同一の結果を与えた。
【００９６】
これらのデータは、グルコシダーゼに対するＮＡＰ−ＤＮＪの相対的な効力を示す。ＮＡＰ−ＤＮＪは、インビトロアッセイを用いるグルコシダーゼＩＩに対する見かけ上の効力が弱いにも拘わらず、細胞中で極めて低濃度（１〜１０μＭ）で酵素を阻害する。グルコシダーゼＩは、ＮＡＰ−ＤＮＪ量の増加により５０〜１００μＭでの最大量まで阻害され、グルコシダーゼＩＩに対する使用可能な基質を低下させ、これは観察される量で減少する（図２）。
【００９７】
一部の実施形態を例示し、説明したが、当分野の通常の技術にしたがえば変更および改変が、特許請求の範囲で定義するような更に幅広い態様において、本発明から逸脱することなく実施可能であるということを理解しなければならない。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的に、Ｎ−アルキル化イミノ糖アナログ、これらの作製、およびこれらの使用に関する。特に、デオキシノジリマイシンおよびＤ−アラビニトールのアナログ、新規作製方法、このようなアナログを含有する組成物、およびこれらの使用が具体化される。
【背景技術】
【０００２】
デオキシノジリマイシン（ＤＮＪ）と、この化合物の特定のＮ−アルキル化修飾物は、強力な小胞体（ＥＲ）α−グルコシダーゼＩおよびＩＩ阻害剤である(T. D. Butters, et al. Molecular Requirements of Imino Sugars for the Selective Control of N-Linked Glycosylation and Glycosphingolipid Biosynthesis,11 Tetrahedron:Asymmetry 113-124(2000))。イミノ糖は、細胞質ゾル中のイミノ糖濃度が細胞外濃度と平衡になるように、原形質膜を急速かつ効率的に横断する(H. R. Mellor, et al., Cellular Effects of Deoxynojirimycin Analogues: Uptake, Retention and Inhibition of Glycosphingolipid Biosynthesis, 381 Biochem. J. 861-866(2004))。
【０００３】
細胞質ゾルにおいては、イミノ糖は、シス−ゴルジの細胞質ゾル側でセラミド特異的グルコシルトランスフェラーゼと直接に相互作用して、糖脂質生合成を阻害する。しかしながら、グルコシダーゼ阻害によるＮ−結合型プロセシングを調節するためには、イミノ糖はＥＲ内腔に侵入しなければならない。ＥＲへの侵入の速度は未知であるが、イミノ糖の濃度は、ＥＲ内腔中では細胞に外因的に供給される濃度よりもずっと低いと仮定される。このことに対する証拠は、ＥＲグルコシダーゼＩの阻害に必要とされる濃度が測定され、精製酵素をインビトロで阻害する濃度の１，０００〜１０，０００倍をしばしば必要とするという実験から得られる(L. A. van den Broek, et al., Synthesis of Oxygen-Substituted N-Alkyl 1-Deoxynojirimycin Derivatives:Aza Sugar α-Glusosidase Inhibitors Showing Antiviral(HIV-I) and Immunosuppressive Activity, 113 Recueil des Travaux Chimiques des Pays-Bas 507-516.(1994))。
【０００４】
ＥＲの内腔に接近した後、ＤＮＪアナログは、α−グルコシダーゼＩおよびＩＩにより仲介されるグルコース残基の除去を阻害し、ハイパーグルコシル化Ｎ−結合型オリゴサッカライドを含有するタンパク質を形成する。このタンパク質は、タンパク質折り畳みの品質管理に関与するシャペロンのカルネキシンおよびカルレティキュリンと相互作用することができなくてもよい(R. G. Spiro, et al., Definition of the Lectin-like Properties of the Molecular Chaperone, Calreticulin, and Demonstration of Its Copurification with Endomannosidase from Rat Liver Golgi, 271 J. Biol. Chem. 11588-11594(1996))。ハイパーグルコシル化グリカンを含むあるタンパク質は、ゴルジ中でエンド−α（ｌ，２）マンノシダーゼによりさらにプロセシングでき、これによってグルコシダーゼ阻害により引き起こされるオリゴサッカライドプロセシングにおける阻止を回避する(K. Fujimoto, K., et al., α-Glucosidase II-deficient Cells Use Endo α-Mannosidase as a Bypass Route for N-linked Oligosaccharide Processing, 266 J. Biol. Chem. 3571-3578(1991); S. E. Moore, et al., Demonstration That Golgi Endo-α-D-mannosidase Provides a Glucosidase-independent Pathway for the Formation of Complex N-Linked Oligosaccharides of Glycoproteins, 265 J. Biol. Chem. 13104-13112(1990))。
【０００５】
誤って折り畳まれたタンパク質のＥＲからの除去と、遊離オリゴサッカライド（ＦＯＳ）の生成は、正常な細胞過程である。カルネキシン依存性もしくはカルレティキュリン依存性の異常に折り畳まれたタンパク質と、ハイパーグルコキシル化された異常に折り畳まれたタンパク質は、Ｓｅｃ６ｌｐチャンネル経由でＥＲから細胞質ゾルの中に最終的に移動され(E.J. Wiertz, et al., Sec6l-mediated Transfer of a Membrane Protein from the Endoplasmic Reticulum to the Proteasome for Destruction, 384 Nature 432-438(1996))、ここでＮ−結合型オリゴサッカライドが細胞質ゾルペプチドのＮ−グリカナーゼ（ＰＮＧａｓｅ）（Ｓｅｃ６ｌｐチャンネルと直接的に相互作用していてもしていなくてもよい）により解放されて、ＦＯＳを生成する(G. Li, et al., Multiple Modes of Interaction of the Deglycosylation Enzyme, Mouse Peptide N-glycanase, with the Proteasome, 102 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 15809-15814(2005); Spiro, R. G., Role of N-linked Polymannose Oligosaccharides in Targeting Glycoproteins for Endoplasmic Reticulum-associated Degradation,61 Cell Mol. Life Sci.1025-1041(2004))。この、ＥＲから細胞質ゾルへの選択的タンパク質輸送、それに続くプロテアゾーム分解の過程は、ＥＲ関連分解（ＥＲＡＤ）として知られている。細胞質中で生成されるＦＯＳは、タンパク質ゾル酵素、例えばエンド−Ｒ−Ｎアセチルグルコサミニダーゼ（ＥｎＧＮａｓｅ）(T. Suzuki, et al., Endo-β-N-acetylglucosaminidase, an Enzyme Involved in Processing of Free Oligosaccharides in the Cytosol,99 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 9691-9696(2002))および細胞質ゾルα-マンノシダーゼ(V. A. Shoup, et al. Purification and Characterization of the α-D-Mannosidase of Rat Liver Cytosol,251 J. Biol. Chem. 3845-3852(1976))により作用され、Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ１（Ｍ５Ｎ）種を形成し、これは最終的にリソソームに輸送される。しかしながら、伝えられるところによるとグルコシル化されたＦＯＳは分解のためにリソソームに侵入することができず(A. Saint-Pol, et al., Cytosol-to-lysosome Transport of Free Polymannose-type Oligosaccharides, 274 J. Biol. Chem. 13547-13555(1999))、これらグルコシル化ＦＯＳの最後はまだ決定されない状態に留まる。Ｇｌｃ１Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ１を含む、少ないけれども、検出可能な量の他のＦＯＳがＭ５Ｎに加えて細胞中に存在し、ＥＲＡＤに対する正常なデフォルトの経路を説明する(H. R. Mellor et al., Cellular Effects of Deoxynojirimycin Analogues: Inhibition of N-linked Oligosaccharide Processing and Generation of Free Glucosylated Oligosaccharides, 381 Biochem. J. 867-875(2004))。
【０００６】
Ｎ−結合型オリゴサッカライドのα−グルコシダーゼ仲介の加水分解の速度を決める細胞ベースのＥＲα−グルコシダーゼアッセイの発展は、タンパク質が阻害剤の存在においてＥＲ中で折り畳まれる時、生合成経路におけるオリゴサッカライド中間体の重要な原理を明らかにし、タンパク質の誤った折り畳みに対する効果の予測、すなわちウイルス感染性を阻害するための強力な治療法として提案されてきた戦略に使用可能である(R. A. Dwek, et al., Targeting Glycosylation as a Therapeutic Approach,1 Nat. Rev. Drug Discov.65-75(2002))。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】T. D. Butters, et al.11 Tetrahedron:Asymmetry 113-124(2000)
【非特許文献２】H. R. Mellor, et al., 381 Biochem. J. 861-866(2004)
【非特許文献３】L. A. van den Broek, et al.,113 Recueil des Travaux Chimiques des Pays-Bas 507-516.(1994)
【非特許文献４】R. G. Spiro, et al., 271 J. Biol. Chem. 11588-11594(1996)
【非特許文献５】K. Fujimoto, K., et al., 266 J. Biol. Chem. 3571-3578(1991)
【非特許文献６】S. E. Moore, et al., 265 J. Biol. Chem. 13104-13112(1990)
【非特許文献７】E.J. Wiertz, et al., 384 Nature 432-438(1996)
【非特許文献８】Spiro, R. G., 61 Cell Mol. Life Sci.1025-1041(2004)
【非特許文献９】G. Li, et al., 102 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 15809-15814(2005)
【非特許文献１０】T. Suzuki, et al., 99 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 9691-9696(2002)
【非特許文献１１】V. A. Shoup, et al., 251 J. Biol. Chem. 3845-3852(1976)
【非特許文献１２】A. Saint-Pol, et al., 274 J. Biol. Chem. 13547-13555(1999)
【非特許文献１３】H. R. Mellor et al., 381 Biochem. J. 867-875(2004)
【非特許文献１４】R. A. Dwek, et al., 1 Nat. Rev. Drug Discov.65-75(2002)
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一つの態様においては、式Ｉおよび式ＩＩ
【化１】
の新規イミノ糖化合物が提供され、
式中、Ｒは
【化２】
であり；
Ｒ’は
【化３】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、ならびに
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚ’は結合またはＮＨである。
【０００９】
別の態様においては、式ＩＩＩ
【化４】
の化合物を作製するための方法が提供され、この方法は、式ＩＶ
【化５】
の化合物を式Ｖ
【化６】
の化合物と縮合することを含み、
式中、
Ｒ’は
【化７】
であり；
Ｑは存在しないか、もしくはＣＨであり、
但しＱが存在しない場合には、ＯＷ１も存在せず；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨから選択される。
【００１０】
別の態様においては、α−グルコシダーゼを式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩの化合物、これらの塩、またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物により阻害する方法が提供される。
【００１１】
なお別の態様においては、α−グルコシダーゼを式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩの化合物、これらの塩、またはこれらの塩またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物と接触させることにより、オリゴサッカライドからグルコース残基を除去することを阻害する方法が提供される。
【００１２】
別の態様においては、ウイルスに感染した哺乳類細胞を式Ｉの化合物、式ＩＩの化合物、式ＩＩＩの化合物、医薬的に許容し得るこれらの塩またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物と、ウイルスの阻害に有効な量で接触させることを含む、哺乳類に感染するウイルスを阻害する方法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、コントロール細胞（ａ）；ＮＡＰ−ＤＮＪ（５０μＭ）で処理された細胞（ｂ）；ＤＮＰ−ＤＮＪ（５０μＭ）で処理された細胞（ｃ）、およびＮＢ−ＤＮＪ（１ｍＭ）で処理された細胞（ｄ）から単離されたＦＯＳに対するＮＰ−ＨＰＬＣの結果を示す。
【図２】ＨＬ６０細胞を種々の濃度のＮＡＰ−ＤＮＪにより２４時間処理した後、遊離オリゴサッカライドを単離し、ＮＰ−ＨＰＬＣにより分離したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
「ＡＡ」はアントラニル酸に対する略号である。
【００１５】
「ＤＮＪ」はデオキシノジリマイシンに対する略号である。
【００１６】
「ＥＲ」は小胞体に対する略号である。
【００１７】
「ＥＲＡＤ」は小胞体関連分解に対する略号である。
【００１８】
「ＦＯＳ」は遊離オリゴサッカライドを指す略号である。
【００１９】
「ＮＡＰ−ＤＮＪ」はＮ−（Ｎ’−{４’アジド−２’−ニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−デオキシノジリマイシンに対する略号である。
【００２０】
「ＮＤＰ−ＤＮＪ」はＮ−（Ｎ’− {２，４−ジニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−デオキシノジリマイシンに対する略号である。
【００２１】
「ＮＰ−ＨＰＬＣ」は順相高性能液体クロマトグラフィに対する略号である。
【００２２】
「Ｔｒｉｓ」はトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンに対する略号である。
【００２３】
本明細書中で使用される時、「光親和性標識化」は、生体分子と特異的に結合する光化学的に反応性の種が光励起されて、通常中間体経由で生体分子に標識を共有結合的に結合させる手法を指す。
【００２４】
一般に、「置換された」は、含有される水素原子に対する１つ又はそれ以上の結合が非水素もしくは非炭素原子に対する結合により置き換えられる、下記に定義するような官能基を指す。置換基は、炭素もしくは水素原子に対する１つ又はそれ以上の結合が二重結合または三重結合を含むヘテロ原子に対する１つ又はそれ以上の結合により置き換えられる基も含む。ある実施形態においては、置換基は、１、２、３、４、５もしくは６個の置換基を有する。置換基の例は、限定ではないが、ハロゲン（すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩ）；ヒドロキシル；アルコキシ基、アルケノキシ基、アルキンオキシ基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基、ヘテロ環状オキシおよびヘテロ環状アルコキシ基；カルボニル（オキソ）；カルボキシル；エステル；エーテル；ウレタン；オキシム；ヒドロキシルアミン；アルコキシアミン；チオール；スルフィド、例えばアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基およびヘテロ環状アルキルスルフィド基；スルホキシド；スルホン；スルホニル；スルホンアミド；アミン；Ｎ−オキシド；ヒドラジン；ヒドラジド；ヒドラゾン；アジド；アミド；ウレア；アミジン；グアニジン；エナミン；イミド；イソシアネート；イソチオシアネート；シアネート；チオシアネート；イミン；およびニトリルを含む。
【００２５】
置換環基、例えば置換シクロアルキル基、アリール基、ヘテロ環状基およびヘテロアリール基は、水素原子に対する結合が炭素原子に対する結合により置き換えられる環および縮合環系も含む。それゆえ、置換シクロアルキル基、アリール基、ヘテロ環状基およびヘテロアリール基は、下記に定義するようにアルキル基、アルケニル基およびアルキニル基によっても置換され得る。
【００２６】
アルキル基は、ある実施形態においては１から約２０個の炭素原子、他の実施形態においては１から１２個の炭素原子、さらに他の実施形態においては１から８個の炭素原子を有する直鎖および分岐のアルキル基とシクロアルキル基とを含む。直鎖アルキル基の例は、限定ではないが、１から８個の炭素原子を含む基、例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−ヘプチル基およびｎ−オクチル基を含む。分岐アルキル基の例は、限定ではないが、イソプロピル基、イソ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、イソペンチル基および２，２−ジメチルプロピル基を含む。アルキル基は置換もしくは非置換のものであり得る。代表的な置換アルキル基は、上に列挙した基、例えばアミノ基、オキソ基、ヒドロキシ基、シアノ基、カルボキシ基、ニトロ基、チオ基、アルコキシ基、およびＦ基、Ｃｌ基、Ｂｒ基、Ｉ基のいずれかにより１回又はそれ以上置換され得る。
【００２７】
シクロアルキル基は、環状アルキル基、例えば限定ではないが、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基、シクロヘプチル基およびシクロオクチル基である。ある実施形態においては、このシクロアルキル基は３から８個の環員を有し、他の実施形態においては、環炭素原子数は３から５、６または７の範囲である。シクロアルキル基は、単環式、二環式、および多環式環系、例えば下記で述べるような架橋シクロアルキル基、および縮合環、例えば、限定ではないが、デカリニルなどを更に含む。シクロアルキル基は置換もしくは非置換のものであり得る。置換シクロアルキル基は、上記に定義したような非水素および非炭素基により１度又はそれ以上置換され得る。しかしながら、置換シクロアルキル基は、上記に定義したような直鎖もしくは分岐鎖アルキル基により置換されている環も含む。代表的な置換シクロアルキル基は、一置換、もしくは二度以上置換されたもの、例えば限定ではないが、上に列挙した基のいずれか、例えば、メチル基、アミノ基、ヒドロキシ基、シアノ基、カルボキシ基、ニトロ基、チオ基、アルコキシ基、およびＦ基、Ｃｌ基、Ｂｒ基、Ｉ基により置換され得る、２，２−、２，３−、２，４−、２，５−もしくは２，６−二置換シクロヘキシル基であり得る。
【００２８】
アルケニル基は、少なくとも１つの二重結合が２個の炭素原子の間に存在するということを除いて、上記に定義したような直鎖および分岐鎖のアルキル基およびシクロアルキル基を含む。このように、アルケニル基は、２から約２０個の炭素原子、通常、２から１２個の炭素、もしくはある実施形態においては２から８個の炭素原子を有する。例えば、限定ではないが、とりわけビニル、ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ３）、ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）２、Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２、Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ（ＣＨ３）、Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）＝ＣＨ２、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、ブタジエニル、ペンタジエニルおよびヘキサジエニルが含まれる。アルケニル基は置換もしくは非置換のものであり得る。
【００２９】
アルキニル基は、少なくとも１つの三重結合が２個の炭素原子の間で存在するということを異にした直鎖および分岐鎖アルキル基を含む。このように、アルキニル基は、２から約２０個の炭素原子、通常、２から１２個の炭素、もしくはある実施形態においては２から８個の炭素原子を有する。例えば、限定ではないが、とりわけ−Ｃ≡ＣＨ、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ３）、−Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）、−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ、−ＣＨ２Ｃ≡（ＣＨ３）および−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ（ＣＨ２ＣＨ３）を含む。アルキニル基は置換もしくは非置換のものであり得る。
【００３０】
アリール基は、ヘテロ原子を含有しない環状芳香族炭化水素である。アリール基は単環、二環、および多環状の環系を含む。このように、アリール基は、限定ではないが、フェニル基、アズレニル基、ヘプタレニル基、ビフェニレニル基、インダセニル基、フルオレニル基、フェナントレニル基、トリフェニレニル基、ピレニル基、ナフタセニル基、クリセニル基、ビフェニル基、アントラセニル基、インデニル基、インダニル基、ペンタレニル基およびナフチル基を含む。ある実施形態においては、アリール基は、６〜１４個の炭素、他の実施形態においては、６〜１２個の、もしくは更には６〜１０個の炭素原子を基の環部分中に含有する。語句「アリール基」は、縮合環、例えば縮合芳香族−脂肪族環系（例えば、インダニル、テトラヒドロナフチルなど）を含有する基を含むが、他の基、例えばアルキル基もしくはハロ基を有する環員の１つに結合したアリール基を含まない。むしろ、基、例えばトリルは置換アリール基と呼ばれる。アリール基は置換もしくは非置換のものであり得る。代表的な置換アリール基は、一置換、もしくは二度以上置換されたものであり得る。例えば、一置換アリール基は、限定ではないが、基、例えば上に列挙した基などにより置換され得る、２−、３−、４−、５−もしくは６−置換のフェニル基もしくはナフチル基を含む。
【００３１】
ヘテロ環状基は、１つ又はそれ以上がヘテロ原子、例えば限定ではないが、Ｎ、ＯおよびＳである、３個又はそれ以上の環員を含有する芳香族（ヘテロアリールとも呼ばれる）および非芳香族の環化合物を含む。ある実施形態においては、このヘテロ環状基は、１、２、３もしくは４個のヘテロ原子を含有する。ある実施形態においては、ヘテロ環状基は、３から２０個の環員を含み、他のこのような基は３から６、１０、１２または１５個の環員を有する。ヘテロ環状基は、不飽和、部分飽和、および飽和の環系、例えばイミダゾリル基、イミダゾリニル基およびイミダゾリジニル基を包含する。語句「ヘテロ環状基」は、縮合した芳香族基および非芳香族基、例えば、ベンゾトリアゾリル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］−ジオキシニルおよびベンゾ［１，３］ジオキソリルを含む環を含む、縮合環種を含む。この語句はまた、ヘテロ原子を含有する架橋多環状環系、例えば、限定ではないが、キヌクリジルも含む。しかしながら、この語句は、環員の一つに結合した他の基、例えばアルキル、オキソもしくはハロ基を有するヘテロ環状基を含まない。むしろ、これらは「置換ヘテロ環状基」と呼ばれる。ヘテロ環状基は置換もしくは非置換のものであり得る。ヘテロ環状基は、限定ではないが、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、ピロリル、ピラゾリル、ピラゾリジニル、テトラヒドロピラニル、チオモルホリニル、ピラニル、トリアゾリル、テトラゾリル、フラニル、テトラヒドロフラニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ジヒドロベンゾフラニル、インドリル、ジヒドロインドリル、アザインドリル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、アザベンズイミダゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、イミダゾピリジニル、イソキサゾロピリジニル、チアナフタレニル、プリニル、キサンチニル、アデニニル、グアニニル、キノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロキノリニル、キノキサリニル、キナゾリニル、ベンゾトリアゾリル、２，３−ジヒドロベンゾ［１，４］ジオキシニルおよびベンゾ［１，３］ジオキソリル基を含む。代表的な置換ヘテロ環状基は、一置換、もしくは二度以上置換されたもの、例えば限定ではないが、アルキル、オキソ、カルボニル、アミノ、アルコキシ、シアノ、および／またはハロを含む上記に定義した種々の基により２−、３−、４−、５−もしくは６−置換または二置換されているピリジニル基またはモルホリニル基であり得る。
【００３２】
アルコキシ基は、水素原子に対する結合が上記に定義したようなアルキル基の炭素原子に対する結合により置き換えられているヒドロキシル基（−ＯＨ）である。線状アルコキシ基の例は、限定ではないがメトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシ、ヘキソキシなどを含む。分岐アルコキシの例は、限定ではないがイソプロポキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、イソペントキシ、イソヘキソキシなどを含む。環状アルコキシの例は、限定ではないがシクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシなどを含む。代表的な置換アルコキシ基は、限定ではないが、アミノ基、オキソ基、アルコキシ基、アルキル基、シアノ基および／またはハロゲン基を含む上記に定義した種々の基により１度又はそれ以上置換され得る。
【００３３】
用語「アリールオキシ」および「アリールアルコキシ」は、それぞれ、酸素原子に結合したアリール基と、アルキルにおいて酸素原子に結合したアラルキル基を指す。例えば、限定ではないがフェノキシ、ナフチルオキシ、およびベンジルオキシが含まれる。代表的な置換アリールオキシ基およびアリールアルコキシ基は、限定ではないが、アミノ基、オキソ基、アルコキシ基、アルキル基、シアノ基および／またはハロゲン基を含む、上記に定義した種々の基により１度以上置換され得る。
【００３４】
用語「カルボキシレート」は、本明細書中で使用される場合に−ＣＯＯＨ基を指す。
【００３５】
用語「カルボン酸エステル」は、本明細書中で使用される場合に−ＣＯＯＲ３０基を指す。Ｒ３０は、本明細書中で定義するように、置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状アルキル基もしくはヘテロ環状基である。
【００３６】
用語「アミド」は、Ｃ−およびＮ−アミド基、すなわち、それぞれ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ３１Ｒ３２基、および−ＮＲ３１Ｃ（Ｏ）Ｒ３２基を含む。Ｒ３１およびＲ３２は、独立に、本明細書中で定義するように、水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状アルキル基もしくはヘテロ環状基である。それゆえ、アミド基は、限定ではないが、カルバモイル基（−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２）およびホルムアミド基（−ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ）を含む。
【００３７】
ウレタン基は、Ｎ−およびＯ−ウレタン基、すなわち、それぞれ−ＮＲ３３Ｃ（Ｏ）ＯＲ３４基および−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３３Ｒ３４基を含む。Ｒ３３およびＲ３４は、独立に、この明細書中で定義するように、水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状アルキル基もしくはヘテロ環状基である。
【００３８】
用語「アミン」は、この明細書中で使用される場合、−ＮＨＲ３５基および−ＮＲ３６Ｒ３７基を指し、式中、Ｒ３５、Ｒ３６およびＲ３７は、この明細書中で定義するように、独立して水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状アルキル基もしくはヘテロ環状基である。非置換アミンはアミノ基と呼ばれ、式−ＮＨ２を有する。
【００３９】
用語「スルホンアミド」は、Ｓ−およびＮ−スルホンアミド基、すなわち、それぞれ−ＳＯ２ＮＲ３８Ｒ３９基および−ＮＲ３８ＳＯ２Ｒ３９基を含む。Ｒ３８およびＲ３９は、本明細書中で定義するように、独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状アルキル基もしくはヘテロ環状基である。それゆえ、スルホンアミド基は、限定ではないがスルファモイル基（−ＳＯ２ＮＨ２）を含む。
【００４０】
用語「チオール」は−ＳＨ基を指し、一方、スルフィドは−ＳＲ４０基を含み、スルホキシドは−Ｓ（Ｏ）Ｒ４１を含み、スルホンは−ＳＯ２Ｒ４２基を含み、ならびにスルホニルは−ＳＯ２ＯＲ４３を含む。Ｒ４０、Ｒ４１、Ｒ４２およびＲ４３は、この明細書中で定義するように、各々独立に置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４１】
用語「ウレア」は−ＮＲ４４−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ４５Ｒ４６基を指す。Ｒ４４基、Ｒ４５基およびＲ４６基は、この明細書中で定義するように、独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４２】
用語「アミジン」は−Ｃ（ＮＲ４７）ＮＲ４８Ｒ４９基および−ＮＲ４７Ｃ（ＮＲ４８）Ｒ４９基を指し、式中、Ｒ４７、Ｒ４８およびＲ４９はこの明細書中で定義するように、各々独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４３】
用語「グアニジン」は−ＮＲ５０Ｃ（ＮＲ５１）ＮＲ５２Ｒ５３基を指し、式中、Ｒ５０、Ｒ５１、Ｒ５２およびＲ５３はこの明細書中で定義するように、各々独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４４】
用語「エナミン」は−Ｃ（Ｒ５４）＝Ｃ（Ｒ５５）ＮＲ５６Ｒ５７基および−ＮＲ５４Ｃ（Ｒ５５）＝Ｃ（Ｒ５６）Ｒ５７基を指し、式中、Ｒ５４、Ｒ５５、Ｒ５６およびＲ５７はこの明細書中で定義するように、各々独立に水素、置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４５】
用語「イミド」は−Ｃ（Ｏ）ＮＲ５８Ｃ（Ｏ）Ｒ５９基を指し、式中、Ｒ５８およびＲ５９がこの明細書中で定義するように、各々独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４６】
用語「イミン」は−ＣＲ６０（ＮＲ６１）基および−Ｎ（ＣＲ６０Ｒ６１）基を指し、式中、Ｒ６０とＲ６１の両方が同時に水素でないという前提で、Ｒ６０およびＲ６１がこの明細書中で定義するように、各々独立に水素、または置換もしくは非置換のアルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、ヘテロ環状基もしくはヘテロ環状アルキル基である。
【００４７】
他の用語は、上記の定義により包含される具体的な基の組み合わせを指し得る。次の用語は、限定的であるように意図されていないが、基のある組み合わせの記述に使用され得る。アルカノイルは直鎖もしくは分岐鎖のアルキルカルボニル基を指す。アロイルはアリールカルボニル基を指す。ハロアルキルは、ハロゲンがフッ素、塩素、臭素またはヨウ素から選択される、１つ又はそれ以上のハロゲン置換基を有するアルキルを指す。ハロアルカノイルは、１つ又はそれ以上のハロゲンにより置換されているアルカノイル基を指す。ヒドロキシアルキルは、１つ又はそれ以上のヒドロキシル（ＯＨ）基により置換されているアルキル基を指す。ヒドロキシアルケニルは、１つ又はそれ以上のヒドロキシル基により置換されているアルケニル基を指す。チオアルキルは、１つ又はそれ以上のチオール基により置換されているアルキルを指す。アルコキシアルケニルは、１つ又はそれ以上のアルキルエーテル基により置換されているアルケニル基を指す。アルコキシアルキルは、少なくとも１つのエーテル基を有するアルキルを指す。アルコキシアルコキシアルキルは、アルコキシ基により置換され、したがって２つ又はそれ以上のエーテル基を有するアルコキシアルキル基を指し、オキサアルキルは、一般に、例えばアルコキシアルキル、アルコキシアルコキシアルキル、アルコキシアルコキシアルキルなどの基を指す。ヒドロキシアルキルアルコキシアルキルは、少なくとも１つのヒドロキシアルキル基により置換されているアルコキシアルキル基を指す。ヘテロ環状アルキルは、１つ又はそれ以上の水素原子が置換もしくは非置換のヘテロ環状基により置き換えられているアルキル基を指す。シクロアルキルアルキルは、シクロアルキル基により置換されているアルキル基を指す。個別の基の他の組み合わせは当業者には容易に明白となる。
【００４８】
互変異性体も含まれる。互変異性体の非限定的な例は、ケト／エノール互変異性体、イミノ／アミノ互変異性体、Ｎ−置換イミノ／Ｎ−置換アミノ互変異性体、チオール／チオカルボニル互変異性体、および環−鎖互変異性体、例えばヘテロ原子に対してアルファ位の置換基も含有する５員環および６員環の酸素、窒素、硫黄、または酸素および硫黄含有ヘテロ環である。また、この明細書中で述べられている化合物のエナンチオマーおよびジアステレオマー、ならびにラセミ体および異性体混合物も特に含まれる。
【００４９】
一つの態様においては、ＤＮＪの新規な化合物が提供される。一つの実施形態においては、式Ｉ
【化８】
の化合物が提供され、
式中、Ｒは
【化９】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、もしくはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、および
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基である。
【００５０】
ある実施形態においては、Ｒ１は１から８個の炭素原子を有する非置換もしくは置換のアルキル基である。他の実施形態においては、ＺはＮＨである。なお他の実施形態においては、Ｘ１およびＸ３はＮＯ２であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお更なる実施形態においては、Ｘ１はＮＯ２であり、Ｘ３はＮ３であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお他の実施形態においては、Ｗ１−４はすべて水素であり、更なる実施形態においては、ＹはＣＨ２である。
【００５１】
ある実施形態においては、式Ｉの化合物は、式ＩＡ
【化１０】
の化合物の構造を有する。
他のこのような実施形態においては、式ＩＡの化合物はＮ−（Ｎ’−（４’−アジド−２’−ニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−デオキシノジリマイシンである。他のこのような実施形態においては、式ＩＡの化合物はＮ−（Ｎ’−（２’，４’−ジニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−デオキシノジリマイシンである。
【００５２】
別の態様においては、式Ｉの化合物の組成物も提供される。このような組成物は医薬的に許容し得るキャリアを含む。
【００５３】
別の態様においては、Ｄ−アラビニトールの新規な化合物が提供される。一つの実施形態においては、式ＩＩ
【化１１】
の化合物が提供され、
式中、Ｒ’は
【化１２】
であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−３は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨから選択される。
【００５４】
ある実施形態においては、Ｒ２は１から８個の炭素原子を有する置換もしくは非置換のアルキル基である。他の実施形態においては、Ｚ’はＮＨである。なお他の実施形態においては、Ｘ１およびＸ３はＮＯ２であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお更なる実施形態においては、Ｘ１はＮＯ２であり、Ｘ３はＮ３であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお更なる実施形態においては、Ｗ１−３はすべて水素である。
【００５５】
ある実施形態においては、式ＩＩの化合物は、式ＩＩＡ
【化１３】
の化合物の構造を有する。
例えば、式ＩＩＡの化合物は、Ｒ２が−（ＣＨ２）６−であり；Ｗ１−３がＨであり；Ｘ１がＮＯ２であり；Ｘ３がＮ３であり；Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５がＨであり；ならびにＺ’がＮＨである化合物と、Ｒ２が−（ＣＨ２）６−であり；Ｗ１−３がＨであり；Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５がＨであり；ならびにＺ’がＮＨである化合物を含む。
【００５６】
別の態様においては、式ＩＩの化合物の組成物も提供される。このような組成物は医薬的に許容し得るキャリアを含む。
【００５７】
別の態様においては、ＤＮＪのアナログ及びＤ−アラビニトールのアナログを作製するための方法が提供される。このように、ある実施形態においては、式ＩＩＩ
【化１４】
の化合物を作製することを含む方法が提供され、この方法は、式ＩＶ
【化１５】
の化合物を、式Ｖ
【化１６】
の化合物と縮合することにより、
式中、Ｒ’は
【化１７】
であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｚ’は結合またはＮＨから選択され；ならびに
Ｑは存在しないか、もしくはＣＨであり、
但し、Ｑが存在しない場合には、ＯＷ１も存在しない。
この方法のある実施形態においては、この縮合は、式ＶＩの化合物を式Ｖの化合物により還元的にアミノ化することによるものである。
【００５８】
他の実施形態においては、式ＩＶの化合物は、式ＶＩ
【化１８】
の化合物をＨＯ−Ｒ２−ＮＨ２により芳香族フッ素置換して、式ＶＩＩ
【化１９】
の化合物を形成し、式ＶＩＩの化合物を酸化して、式ＩＶの化合物を得ることにより作製される。
【００５９】
他の実施形態においては、式ＩＶの化合物は、式ＶＩＩＩ
【化２０】
の化合物（式中、Ｘ’はＣｌまたはＢｒから選択される）を還元することにより作製される。式ＶＩＩＩの化合物は、当業者に公知の方法により市販の前駆体化合物から作製され得る。非限定的な例として、４−フェニル酪酸は、２，４−ジニトロフェニル酪酸に変換され、続いて４−ニトロ基をアミンに還元し、２−ニトロ−４−アジドフェニル酪酸に変換され得る。次に、対応するアルデヒド、すなわち式ＩＶの化合物は、２−ニトロ−４−アジドフェニル酪酸を対応する酸クロリドに変換し、続いて当分野で周知の方法にしたがってアルデヒドに還元することにより作製される。
【００６０】
ある実施形態においては、式ＩＩＩの化合物は、式ＩＩＩＡ
【化２１】
の化合物の構造を有する。
【００６１】
上述のように、ＤＮＪ、Ｄ−アラビニトール、およびこれらのＮ−アルキル化修飾物は強力なα−グルコシダーゼ阻害剤である。このように、他の本発明の別の態様においては、α−グルコシダーゼを式ＩおよびＩＩの化合物により阻害するための方法が提供される。ある実施形態においては、この方法は、α−グルコシダーゼを式Ｉもしくは式ＩＩ
【化２２】
の化合物またはそれらの塩、またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物により阻害することを含み、
式中、Ｒは
【化２３】
であり；
Ｒ’は
【化２４】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、および
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨである。
この方法のある実施形態においては、Ｒ１またはＲ２は１から８個の炭素原子を有する。他の実施形態においては、Ｘ１およびＸ３はＮＯ２であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお他の実施形態においては、Ｘ１はＮＯ２であり、Ｘ３はＮ３であり、Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５はＨである。なお更なる実施形態においては、ＹはＣＨ２である。
【００６２】
この方法のある実施形態においては、α−グルコシダーゼはα−グルコシダーゼＩまたはα−グルコシダーゼＩＩから選択される。
【００６３】
他のこのような実施形態においては、この化合物の塩は医薬的に許容し得る塩である。ある実施形態においては、この塩は、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物である。他の実施形態においては、この塩は、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、有機塩基塩または塩基性四級アンモニウム塩などまたはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物から選択される。
【００６４】
他の実施形態においては、式Ｉの化合物は式ＩＡ
【化２５−１】
の化合物の構造を有し、式ＩＩの化合物は式ＩＩＡ
【化２５−２】
の化合物の構造を有する。
【００６５】
ある実施形態においては、α−グルコシダーゼを阻害する方法は、この化合物をα−グルコシダーゼの存在において光分解することを更に含む。ある実施形態においては、α−グルコシダーゼは、標識化された基質の存在下で阻害され得る。例えば、この明細書中で述べられている化合物と、放射性標識、例えば１４Ｃ標識を有するこれらのアナログ(H. R. Mellor et al., Preparation, Biochemical Characterisation and Biological Properties of Radiolabelled N-alkylated Deoxynojirimycins,336 Biochem. J. 225-233(2002))は、細胞中のα−グルコシダーゼに選択的に結合でき、次に照射により活性化されて、α−グルコシダーゼの活性部位においてアミノ酸残基の中に共有結合的に挿入し得る、高反応性種を形成し得る。これは、スキームＩで例示するようにアジド化合物の例において達成でき、この場合、アジド化合物を光活性化してナイトレンを生成し、このナイトレンが次いでアミノ酸と反応してヒドラジド化合物を形成する。電子吸引性基が芳香族環（Ａｒ）上に存在する場合には、アリールナイトレンは、別のアリールナイトレンに対するよりも、求核性物質に対してより反応性である。このように、求核性基（例えばリジン中のε−アミノ基）を有するアミノ酸（ＲＡＡ）を含有するタンパク質を標識化する場合には、競合する分子内反応よりも分子間反応が優先される。
【化２６】
スキームＩ：生体分子中でのアジドからのナイトレンの形成およびアミノ基の共有結合性標識化
【００６６】
本発明の別の態様においては、α−グルコシダーゼを、式Ｉもしくは式ＩＩ
【化２７】
の化合物またはこれらの塩、またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物と接触させることにより、グルコース残基をオリゴサッカライドから除去することを阻害することを含む方法が提供され、
式中、Ｒは
【化２８】
であり；
Ｒ’は
【化２９】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、および
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨである。
【００６７】
ＤＮＪおよびＤ−アラビニトールのＮ−アルキル化修飾物、例えばＮ−ブチル−ＤＮＪは抗ウイルス性剤として使用され得る。このように、本発明の別の態様においては、ウイルスにより感染された哺乳類細胞を式Ｉもしくは式ＩＩ
【化３０】
の化合物または医薬的に許容し得るこれらの塩、またはこれらの任意の２つ以上の混合物と、ウイルスの阻害に有効な量で接触させることを含む、哺乳類に感染するウイルスを阻害するための方法が提供され、
式中、Ｒは
【化３１】
であり；
Ｒ’は
【化３２】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨである。
【００６８】
ある実施形態においては、このウイルスは、ウイルスのフラビ・ウイルス科に属するウイルスである。このウイルスは、限定ではないが、肝炎ウイルス、例えば肝炎Ｂウイルスもしくは肝炎Ｃウイルス、またはウシウイルス性下痢ウイルスから選択され得る。このような実施形態においては、ウイルスの阻害に有効な量は、肝炎ウイルス、肝炎Ｂウイルス、肝炎Ｃウイルスまたはウシ下痢症ウイルスの阻害に有効な量である。別の実施形態においては、式ＩおよびＩＩの化合物は、単独、または当業者に公知のヌクレオチド抗ウイルス性化合物、ヌクレオシド抗ウイルス性化合物、免疫賦活化化合物、免疫調節性化合物もしくはこれらの任意の２つ以上の混合物との組み合わせで接触され得る。ある実施形態においては、この接触は、式ＩもしくはＩＩの化合物を哺乳類に投与することをさらに含む。ある実施形態においては、哺乳類細胞はヒト細胞である。なお他の実施形態においては、この接触は、式ＩもしくはＩＩの化合物をヒトに投与することを含む。
【００６９】
この開示の目的で、ならびに特記しない限り、「単数（”ａ”または”ａｎ”）」は「１つ以上」を意味する。
【００７０】
当業者ならば述べられているすべての範囲がすべての目的ですべての下位範囲を記述することができ、必然的に記述しているということ、ならびにすべてのこのような下位範囲もまた本発明の一部を形成するということを容易に認識する。列挙されているいずれの範囲も、少なくとも同等の２分の１、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１などに細分化される同一の範囲を十分に記述し、有効とせしめるものとして容易に認識可能である。非限定的な例として、この明細書中で述べられる各範囲は、低位の３分の１、中位の３分の１、および高位の３分の１に容易に細分化可能である。
【００７１】
本明細書中の全ての刊行物、特許出願、登録特許および他の文書は、それら各個別の刊行物、特許出願、登録特許および他の文書が個々に全体で参照として組み込まれることを特定かつ個別に示されているように、この明細書中に参照として組み込まれる。参照により組み込まれている文章中に含まれる定義は、この開示中の定義に矛盾する範囲まで除外される。
【００７２】
本発明は、このように一般的に述べられたが、例示として提供されならびに本発明の限定とは意図されていない、次の実施例を参照することにより更に容易に理解されるであろう。
【実施例】
【００７３】
実施例１
Ｎ−（Ｎ’−（４’アジド−２’−ニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−ＤＮＪ（ＮＡＰ−ＤＮＪ）の合成
４−フルオロ−３−ニトロフェニルアジド（ＦＮＡＰ）中の芳香族フッ素を６−アミノヘキサノールにより直接置換することによって、所望のアルコールを作製し、これをアルデヒドに酸化する。スキームＩＩに示すように、得られたアルデヒドをＤＮＪによる還元的アミノ化にかけて、最終生成物を得る。
【化３３】
スキームＩＩ：（ｉ）トリエチルアミン（２．２当量）、１，４−ジオキサン、室温、２時間、５５％；（ｉｉ）Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ（１．２当量）、ＤＣＭ、室温、２時間、９５％；および（ｉｉｉ）ＤＮＪ、ＮａＣＮＢＨ３（１．５当量）、ＡｃＯＨ、ＭｅＯＨ、室温、１４時間、定量的収率。
【００７４】
１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲと質量分析法を用いて、ＮＡＰ−ＤＮＪのキャラクタリゼーションを行った。ＩＤ（１Ｈおよび１３Ｃ）ＮＭＲからの結果を表１に示し、ＣＯＳＹおよびＮＯＥＳＹの結果を下記に示す。１Ｈ ＮＭＲは任意であり、１３Ｃ ＮＭＲはメタノール（４９．０ｐｐｍ）を参照としたものである。
【表１】
【００７５】
１Ｈ−１ＨＣＯＳＹ実験：Ｃ１Ｈ／Ｈ’−Ｃ２Ｈ−Ｃ３Ｈ−Ｃ４Ｈ−Ｃ５Ｈ−Ｃ６Ｈ／Ｈ’；Ｃ７Ｈ／Ｈ’−Ｃ８Ｈ２−Ｃ９Ｈ２−Ｃ１０Ｈ２−Ｃ１１Ｈ２−Ｃ１２Ｈ２；Ｃ１５Ｈ−Ｃ１７Ｈ−Ｃ１８Ｈ。これにより、この芳香族環は１，２，４−置換であり、Ｃ７は結合しているか、もしくは剛直な環の一部である。
【００７６】
ＮＯＥＳＹ実験（４００ｍｓｅｃ）：Ｃ７Ｈ→Ｃ１Ｈ（１３８）、Ｃ６Ｈ／Ｈ’（３４３）；Ｃ７Ｈ’→Ｃ６Ｈ／Ｈ’（３２５）；Ｃ１２Ｈ２→Ｃ１８Ｈ。環の周りの大きな結合定数は、Ｃ１Ｈ’、Ｃ２Ｈ、Ｃ３Ｈ、Ｃ４Ｈ、およびＣ５Ｈがすべてトランスジ−アキシャルであるということを示唆する。これは、この環がグルコースの立体構造を有すること、すなわち、ＤＮＪであることを示す。Ｃ７Ｈ／Ｈ’からＣ１Ｈ／Ｈ’およびＣ６Ｈ／Ｈ’までのＮＯＥＳは、Ｃ１２が芳香族環に結合し、おそらくＣ１８にオルト位の環位置にあるということを示す。
【００７７】
分光法：［α］Ｄ２２−７．７（ｃ０．０２６，ＭｅＯＨ）；νｍａｘ（Ｇｅ）３３５６（ＮＨ＋ＯＨ）、２９２６、２８５６（ＣＨ）、２１１９（Ｎ３）、１６３３、１５５６（Ｃ＝Ｃ）、１５２１、１３４７（ＮＯ２）ｃｍ−１。
質量分析法：ｍ／ｚ（ＥＳ＋）：４２５．３３（［Ｍ＋Ｈ］＋，１００％）；ＨＲＭＳ（ＥＳ＋）：実測値４２５．２１５２（［Ｍ＋Ｈ］＋）、計算値４２６．２１４９。
【００７８】
実施例２
Ｎ−（Ｎ’−（２，４−ジニトロフェニル）−６−アミノヘキシル）−ＤＮＪ（ＮＤＰ−ＤＮＪ）の合成
２，４−ジニトロフルオロベンゼン（サンガー試剤）中の芳香族フッ素を６−アミノヘキサノールにより直接置換することによって、所望のアルコールを作製し、これをアルデヒドに酸化する。得られたアルデヒドをＤＮＪによる還元的アミノ化にかけて、最終生成物を得る（スキームＩＩＩ）。
【化３４】
スキームＩＩＩ：（ｉ）トリエチルアミン（１．１当量）、１，４−ジオキサン、室温、１時間、９７％；（ｉｉ）Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ（１．２当量）、ＤＣＭ、室温、２時間、７６％；（ｉｉｉ）ＤＮＪ、ＮａＣＮＢＨ３（１．２当量）、ＡｃＯＨ、ＭｅＯＨ、室温、１６時間、５２％。
【００７９】
ＮＤＰ−ＤＮＪのキャラクタリゼーションを行い、結果を下記に示す。
【００８０】
δＨ（５００．３ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）：１．３３−１．５８（６Ｈ，ｍ，Ｈ−３’ａｂ，Ｈ−４’ａｂ，Ｈ−２’ａｂ）、１．７７（２Ｈ，ａ−ｑｕｉｎ，Ｊ７．４Ｈｚ，Ｈ−５’ａｂ）、２．１１（１Ｈ，ａ−ｄｔ，Ｊ５，４９．５Ｈｚ，Ｊ２．８Ｈｚ，Ｈ−５）、２．１６（１Ｈ，ａ−ｔ，Ｊ１０．８Ｈｚ，Ｈ−１ａ）、２．５４−２．６１（１Ｈ，ｍ，Ｈ−ｌ’ａ）、２．７９−２．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−ｌ’ｂ）、２．９８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ｂ，１ａ１１．２Ｈｚ，Ｊ１ｂ，２４．９Ｈｚ，Ｈ−１ｂ）、３．１２（１Ｈ，ａ−ｔ，Ｊ９．１Ｈｚ，Ｈ−３）、３．３３（１Ｈ，ａ−ｔ，Ｊ９．３Ｈｚ，Ｈ−４）、３．４６（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ２，ｌａ１０．４Ｈｚ，Ｊ２，３９．２Ｈｚ，Ｊ２，ｌｂ４．９Ｈｚ，Ｈ−２）、３．５０（２Ｈ，ａ−ｔ，Ｊ７．２Ｈｚ，Ｈ−６’）、３．８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ６ａ，６ｂ１１．９Ｈｚ，Ｊ６ａ，５２．９Ｈｚ，Ｈ−６ａ）、３．８６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ６ｂ，６ａ１１．９Ｈｚ，Ｊ６ｂ，５２．７Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）、７．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ６”，５”９．６Ｈｚ，Ｈ−６”）、８．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ５”，６”９．６Ｈｚ，Ｊ５”，３”２．７Ｈｚ，Ｈ−５”）、９．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ３”，５”２．７Ｈｚ，Ｈ−３”）。
【００８１】
δＣ（１２５．８ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：２５．２（Ｃ−２’）、２７．９（Ｃ−４’）、２８．３（Ｃ−３’）、２９．７（Ｃ−５’）、４４．２（Ｃ−６’）、５３．７（Ｃ−１’）、５７．７（Ｃ−１）、５９．６（Ｃ−６）、６７．５（Ｃ−５）、７０．８（Ｃ−２）、７２．１（Ｃ−４）、８０．６（Ｃ−３）、１１５．８（Ｃ−６”）、１２４．８（Ｃ−３”）、１３１．１（Ｃ−５”）、１３１．５（Ｃ−１”）、１３６．９（Ｃ−２”）、１４９．８（Ｃ−４”）。
【００８２】
分光法：［α］Ｄ２２−７．９（ｃ０．１４，ＭｅＯＨ）；νｍａｘ（Ｇｅ）３３５６（ＯＨ＋ＮＨ）、１５７２、１３３９（ＮＯ２）ｃｍ−１。質量分析法：ｍ／ｚＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）：実測値４２９．１９７３、Ｃ１８Ｈ２９Ｎ４Ｏ８［Ｍ＋Ｈ］＋計算値４２９．１９８５。
【００８３】
実施例３
Ｎ−（アルキルフェニル）−ＤＮＪ誘導体の合成
下記でスキームＩＶに示すように、Ｎ−アルキルフェニル−ＤＮＪ化合物をフェニルカルボン酸から作製することができる。スキームＩＶにおいては、４−フェニル酪酸を２，４−ジニトロフェニル酪酸に変換し、続いて４−ニトロ基をアミンに還元し、２−ニトロ−４−アジドフェニル酪酸に変換する。次に、２−ニトロ−４−アジドフェニル酪酸を対応する酸クロリドに変換し、続いてアルデヒドに還元することにより、このアルデヒドを作製することができる。得られたアルデヒドをＤＮＪによる還元的アミノ化にかけて、最終生成物を得る。別法としては、Ｄ−アラビニトールをＤＮＪの代わりに使用して、対応するＤ−アラビニトール化合物を生成させ得る。
【化３５】
スキームＩＶ：Ｃ−フェニル−ＤＮＪ誘導体の合成
【００８４】
実施例４
公知の方法(H. R. Mellor et al., Cellular Effects of Deoxynojirimycin Analogues: Inhibition of N-linked Oligosaccharide Processing and Generation of Free Glucosylated Oligosaccharides,381 Biochem. J. 867-875(2004))を改変することによるアッセイ方法を用いて、細胞に及ぼすＥＲ−グルコシダーゼ阻害剤の効果を評価した。細胞質ゾル中で分解される誤って折り畳まれたタンパク質を生成するイミノ糖処理の後の遊離オリゴサッカライドの検出は、細胞内ＥＲ侵入およびイミノ糖によるα−グルコシダーゼＩおよびＩＩの糖タンパク質プロセシングの阻害の正確な尺度である。
【００８５】
ＮＢ−ＤＮＪを種々の濃度で含有する新鮮な培地中での生長の前に細胞を高密度（１×１０７細胞／ｍｌ）まで培養した。インキュベーション期間の終わりに高密度を得るように、この細胞を低密度で播種した。細胞培養に続いて、培地を除去し、細胞を遠心分離によりＰＢＳで３回洗浄した。洗浄された細胞を−２０℃で短時間貯蔵し、その後で解凍し、水中でガラスホモジナイズした。ＦＯＳを抽出するための条件を求めて、ＦＯＳの回収を最大とした。本質的に、０．４ｍｌのＡＧ３−Ｘ４（ＯＨ-、１００〜２００メッシュ）上の混合床イオン交換カラム（０．２ｍｌ ＡＧ５ＯＷ−ＸＩ２（Ｈ＋、１００〜２００メッシュ）に通すことにより、このホモジネートを脱塩、脱タンパク質化し、水（５×１ｍｌ）により予備平衡化した。このホモジネートをカラムに添加し、４×１ｍｌの水により洗浄し、溶離液を捕集する。次に、抽出された精製ＦＯＳを真空下で、もしくは凍結乾燥により乾燥する。
【００８６】
当分野で公知の方法(D. C. Neville, et al, Analysis of Fluorescently Labeled Glycosphingolipid-Derived Oligosaccharides Following Ceramide Glycanase Digestion and Anthranilic Acid Labeling,331, Anal. Biochem. 275-282(2004))によりＦＯＳをアントラニル酸で標識した。手短に述べると、アントラニル酸（３０ｍｇ／ｍｌ）をメタノール中の酢酸ナトリウム三水和物（４％、ｗ／ｖ）およびホウ酸（２％、ｗ／ｖ）の溶液に溶解した。この溶液を固体ナトリウムシアノボロヒドリドに添加して、４５ｍｇ／ｍｌの最終濃度を得た。生成溶液を混合して、最終標識化混合物を得た。乾燥したＦＯＳを３０μｌ水に溶解し、８０μｌの標識化混合物を添加し、その後で８０℃で４５〜６０分間インキュベートした。この反応物を室温まで冷却し、１ｍｌのアセトニトリル／水（９７：３、ｖ／ｖ）を添加し、混合物をボルテックスした。標識化されたオリゴサッカライドをＤｉｓｃｏｖｅｒｙ ＤＰＡ−６Ｓカラムのクロマトグラフィにより精製した。このカラムを２×１ｍｌのアセトニトリルにより予備平衡化した。重力流を用いてこの試料をロードし、カラムを通して滴下した。このカラムを４×１ｍｌのアセトニトリル／水（９９：１、ｖ／ｖ）により、続いて０．５ｍｌのアセトニトリル／水（９７：３、ｖ／ｖ）により洗浄した。標識化されたオリゴサッカライドを２×０．６ｍｌの水により溶離した。
【００８７】
Ｃｏｎｃａｎａｖａｌｉｎ Ａ（Ｃｏｎ Ａ）−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂカラム（１００μｌ充填樹脂）を用いて、ｐＨ７．２の５０ｍＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液中の標識化されたオリゴサッカライドを精製した。２×１ｍｌの水、続いて水中の１ｍｌの１ｍＭ ＭｇＣｌ２、１ｍＭ ＣａＣｌ２、および１ｍＭ ＭｎＣｌ２、および最終的にｐＨ７．２の２×１ｍｌの５０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液によりこのカラムを予備平衡化した。試料を添加し、カラムと３０分間相互作用させ、その後２×１ｍｌのｐＨ７．２の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液により洗浄した。次に、Ｃｏｎ Ａと結合したＦＯＳをｐＨ７．２の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ緩衝液中の２×１ｍｌの熱（７０℃）０．５Ｍメチル−α−Ｄ−マンノピラノシドにより溶離した。
【００８８】
公知の方法(D. C. Neville, et al)に若干の改変を加えた４．６×２５０ｍｍ ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ−８０カラム（Ａｎａｃｈｅｍ、Ｌｕｔｏｎ、ＵＫ）を用いるＮＰ−ＨＰＬＣにより、ＣｏｎＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅで精製した２−ＡＡ−標識化されたオリゴサッカライドを分離した。このクロマトグラフィ系は、Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２６９５分離モジュールと、３６０ｎｍの励起波長と４２５ｎｍの発光波長に設定されたインラインＷａｔｅｒｓ ４７４蛍光検出器からなるものであった。すべてのクロマトグラフィを３０℃で行った。第１の溶媒の溶媒Ａはアセトニトリルであり、第２の溶媒の溶媒ＢはＭｉｌｌｉ−Ｑ水であった。溶媒Ｃは酢酸によりｐＨ３．８５まで滴定されたＭｉｌｌｉ−Ｑ水中の１００ｍＭ水酸化アンモニウムから構成され、標準の５Ｎ水酸化アンモニウム溶液（Ｓｉｇｍａ）を用いて作製されたものであった。勾配条件は次の通りであった。時間＝０分（ｔ＝０）、７１．６％ Ａ、８．４％ Ｂ、２０％ Ｃ（０．８ｍｌ／分）；ｔ＝６、７１．６％ Ａ、８．４％ Ｂ、２０％ Ｃ（０．８ｍｌ／分）；ｔ＝４０、５２％ Ａ、２８％ Ｂ、２０％ Ｃ（０．８ｍｌ／分）；ｔ＝４１、２３％ Ａ、５７％ Ｂ、２０％ Ｃ（１ｍｌ／分）；ｔ＝４３、２３％ Ａ、５７％ Ｂ、２０％ Ｃ（１ｍｌ／分）；ｔ＝４４、７１．６％ Ａ、８．４％ Ｂ、２０％ Ｃ（１．２ｍｌ／分）；ｔ＝５９、７１．６％ Ａ、８．４％ Ｂ、２０％ Ｃ（１．２ｍｌ／分）；ｔ＝６０、７１．６％ Ａ、８．４％ Ｂ、２０％ Ｃ（０．８ｍｌ／分）。試料（＜５０μｌ）をＭｉｌｌｉ−Ｑ水／アセトニトリル（３／７、ｖ／ｖ）に注入した。Ｗａｔｅｒｓ Ｅｍｐｏｗｅｒソフトウエアを用いて、データ収集および処理を含めてすべてのクロマトグラフィを制御した。Ｐｅａｋ Ｔｉｍｅソフトウエア（インハウスでの開発品）を用いて、２−ＡＡ−標識化されたグルコースオリゴマーラダー（デキストランの部分加水分解物から抽出された）外部標準との比較にしたがってグルコース単位を定量した。
【００８９】
精製α−グルコシダーゼＩおよびＩＩを公知の方法によりラット肝臓から精製した(G. B. Karlsson, et al., Effects of the Imino Sugar N-Butyldeoxynojirimycin on the N-Glycosylation of Recombinant gp120,268 J. Biol. Chem., 570-576(1993))。グルコシダーゼ阻害剤としてＮＢ−ＤＮＪにより処理された細胞から生じるＦＯＳの単離から基質を作製し、ＨＰＬＣにより精製した。２−ＡＡ−標識化されたＦＯＳを単離し、α−グルコシダーゼＩもしくはＩＩ用の基質として精製した。蛍光標識化された基質Ｇｌｃ１Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ１（Ｇ１Ｍ５Ｎ）、Ｇｌｃ２Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ１（Ｇ２Ｍ５Ｎ）、Ｇｌｃ３Ｍａｎ５ＧｌｃＮＡｃ１（Ｇ３Ｍ５Ｎ）、およびＧｌｃ３Ｍａｎ９ＧｌｃＮＡｃ１（Ｇ３Ｍ９Ｎ２）を添加して、種々の濃度のイミノ糖の１．５ｍｌ遠心分離管を分離し、真空下で乾燥した。十分なα−グルコシダーゼＩを添加して、３０分の反応時間でＧ３Ｍ５Ｎの２５％加水分解を生じさせた。同様に、α−グルコシダーゼＩＩをＧ２Ｍ５Ｎと共に２時間、Ｇ１Ｍ５Ｎと共に２０分インキュベートした。すべての場合、インキュベーションの時間にわたって基質の線形分解が起こった。３０μｌのアセトニトリルを添加することにより、反応を停止した。酵素処理に続いて、ＨＰＬＣ分析の前にすべての消化液を１０，０００分子量のカットオフフィルタ（１５０μｌの水により事前に洗浄されたもの）から７，０００ｒｐｍで４５分間上述のように遠心分離して、タンパク質を除去し、上記のようにＨＰＬＣにより分析した。
【００９０】
実施例１〜３の結果
α−グルコシダーゼＩおよびＩＩのインビトロ阻害
下記に示すように２−ＡＡにより標識化されたα−グルコシダーゼＩおよびα−グルコシダーゼＩＩ基質に対する阻害剤濃度の範囲を用いて、ＩＣ５０値を生成した。Ｎ−ブチル−ＤＮＪ（ＮＢ−ＤＮＪ）による阻害を比較で示す。
【化３６】
【００９１】
これらのデータによって、ＮＡＰ−ＤＮＪによる阻害がα−グルコシダーゼＩＩ（ａ）もしくは（ｂ）活性それぞれよりもα−グルコシダーゼＩに対して２０および５０倍良好であったということが明白となる。α−グルコシダーゼＩの阻害はＮＢ−ＤＮＪと比較して４０倍改善した。しかしながら、これらの構造は、細胞によってはＦＯＳとして見られるのみであり、更に生理学的に関連するＥＲに局所化された基質を分析した。
【化３７】
【００９２】
これらのデータによって、生理学的に見出されるものに類似したマンノース構造を持つ基質がグルコシダーゼ阻害に対する明白な区別を示すということが明白となる。ＮＡＰ−ＤＮＪは、グルコシダーゼＩの阻害においてグルコシダーゼＩＩ（ａ）よりも３００倍以上、グルコシダーゼＩＩ（ｂ）よりも５００倍以上強力である。ＮＤＰ−ＤＮＪについて類似の改善も観察された。ＥＲ中のグルコシダーゼにより通常変成されるオリゴサッカライド基質と共に最終のインビトロ実験を行った。
【化３８】
【００９３】
これらのデータによって、阻害剤に対するＩＣ５０値がトリグルコシル化基質のグルコシダーゼＩ仲介の加水分解に対してマンノース構造に依存的ではなく、グルコシダーゼＩＩが依存的であり得るということが明白となる。これは、生理学的に関連する基質を用いて、ＮＡＰ−ＤＮＪがすべてのトリグルコシル化構造の阻害においてＮＢ−ＤＮＪよりも２５〜５０倍良好であり、グルコシダーゼＩの阻害においてグルコシダーゼＩＩ（ａ）および（ｂ）活性よりも３００〜５００倍良好であるということを示し得る。
【００９４】
細胞中でのグルコシダーゼ活性の阻害
ＨＬ６０細胞を種々の濃度のＮＡＰ−ＤＮＪ、ＤＮＰ−ＤＮＪ、およびＮＢ−ＤＮＪ（阻害剤リフェレンスとして）と共に２４時間インキュベートし、遊離オリゴサッカライドを単離し、標識付けし、ならびにＮＰ−ＨＰＬＣ（図１）によりキャラクタリゼーションした。図１は、コントロール細胞（ａ）；ＮＡＰ−ＤＮＪ（５０μＭ）処理細胞（ｂ）；ＤＮＰ−ＤＮＪ（５０μＭ）処理細胞（ｃ）、およびＮＢ−ＤＮＪ（１ｍＭ）処理細胞（ｄ）から単離されたＦＯＳに対するＮＰ−ＨＰＬＣ結果を示す。質量分析法と、精製グルコシダーゼおよびマンノシダーゼを用いて消化することにより構造を特定化した公知の、精製された標準に参照することにより、ピークを割り当てた。
【００９５】
これらのデータによって、細胞中でＮＡＰ−ＤＮＪがグルコシダーゼＩの阻害（グルコシダーゼＩ阻害の生成物、Ｇ３Ｍ５Ｎの評価）においてＮＢ−ＤＮＪよりもかなり強力（２０〜５０倍）であるということが明白となる。グルコシダーゼＩおよびＩＩの相対的な阻害に及ぼすＮＡＰ−ＤＮＪ濃度の影響を図２に示す。図２は、ＨＬ６０細胞を種々の濃度のＮＡＰ−ＤＮＪにより２４時間処理した後、遊離オリゴサッカライドを単離し、ＮＰ−ＨＰＬＣにより分離したグラフである。グルコシダーゼＩ（Ｇ３Ｍ５Ｎ）とグルコシダーゼＩＩ（ｂ）（Ｇ１Ｍ５Ｎ）の阻害に対応するピーク面積を測定し、グルコシダーゼ阻害により影響を受けず、内部マーカーとして使用されるＭ４、遊離オリゴサッカライドの量に対して正規化した。タンパク質の量に対する正規化は同一の結果を与えた。
【００９６】
これらのデータは、グルコシダーゼに対するＮＡＰ−ＤＮＪの相対的な効力を示す。ＮＡＰ−ＤＮＪは、インビトロアッセイを用いるグルコシダーゼＩＩに対する見かけ上の効力が弱いにも拘わらず、細胞中で極めて低濃度（１〜１０μＭ）で酵素を阻害する。グルコシダーゼＩは、ＮＡＰ−ＤＮＪ量の増加により５０〜１００μＭでの最大量まで阻害され、グルコシダーゼＩＩに対する使用可能な基質を低下させ、これは観察される量で減少する（図２）。
【００９７】
一部の実施形態を例示し、説明したが、当分野の通常の技術にしたがえば変更および改変が、特許請求の範囲で定義するような更に幅広い態様において、本発明から逸脱することなく実施可能であるということを理解しなければならない。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化３９】
の化合物であって、
式中、Ｒは
【化４０】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、および
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基である、
化合物。
【請求項２】
Ｒ１が１から８個の炭素原子を有する非置換もしくは置換のアルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＺがＮＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ１がＮＯ２であり；
Ｘ３がＮ３であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｗ１−４がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ＹがＣＨ２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
式Ｉの化合物が式ＩＡ
【化４１】
の化合物の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１が−（ＣＨ２）５−であり；
Ｗ１−４がＨであり；
Ｘ１がＮＯ２であり；
Ｘ３がＮ３であり；
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨであり；
Ｙが−（ＣＨ２）−であり；ならびに
ＺがＮＨである、
請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が−（ＣＨ２）５−であり；
Ｗ１−４がＨであり；
Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨであり；
Ｙが−（ＣＨ２）−であり；ならびに
ＺがＮＨである、
請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物および医薬的に許容し得るキャリアを含む組成物。
【請求項１２】
式ＩＩ
【化４２】
の化合物であって、
式中、Ｒ’は
【化４３】
であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−３は独立に水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基であり；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨから選択される、
化合物。
【請求項１３】
Ｒ２が１から８個の炭素原子を有する非置換もしくは置換のアルキル基である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｚ’がＮＨである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５がＨである、
請求項１２に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｘ１がＮＯ２であり；
Ｘ３がＮ３であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５がＨである、
請求項１２に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｗ１−３がすべてＨである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１８】
式ＩＩの化合物が式ＩＩＡ
【化４４】
の化合物の構造を有する、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ２が−（ＣＨ２）６−であり；
Ｗ１−３がＨであり；
Ｘ１がＮＯ２であり；
Ｘ３がＮ３であり；
Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５がＨであり；ならびに
Ｚ’がＮＨである、
請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ２が−（ＣＨ２）６−であり；
Ｗ１−３がＨであり；
Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨであり；ならびに
Ｚ’がＮＨである、
請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
請求項１３に記載の化合物および医薬的に許容し得るキャリアを含む組成物。
【請求項２２】
式ＩＩＩ
【化４５】
の化合物を作製することを含む方法であって、式ＩＶ
【化４６】
の化合物を式Ｖ
【化４７】
の化合物と縮合することにより、
式中、
Ｒ’は
【化４８】
であり；
Ｑは存在しないか、もしくはＣＨであり、
但しＱが存在しない場合には、ＯＷ１も存在せず；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は独立に水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基であり；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨから選択される、
方法。
【請求項２３】
縮合が式ＶＩの化合物を式Ｖの化合物により還元的にアミノ化することによる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
式ＩＶの化合物が式ＶＩ
【化４９】
の化合物をＨＯ−Ｒ２−ＮＨ２により芳香族フッ素置換して、式ＶＩＩ
【化５０】
の化合物を形成し、式ＶＩＩの化合物を酸化して、式ＩＶの化合物を得ることにより作製される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
式ＩＩＩの化合物が式ＩＩＩＡ
【化５１】
の化合物の立体構造を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
α−グルコシダーゼを、式Ｉもしくは式ＩＩ
【化５２】
の化合物またはこれらの塩、またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物により阻害することを含む方法であって、
式中、Ｒは
【化５３】
であり；
Ｒ’は
【化５４】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨである、
方法。
【請求項２７】
Ｒ１またはＲ２が１から８個の炭素原子を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨである、
請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
Ｘ１がＮＯ２であり；
Ｘ３がＮ３であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨである、
請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
α−グルコシダーゼがα−グルコシダーゼＩまたはα−グルコシダーゼＩＩである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
化合物の塩が医薬的に許容し得る塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
式Ｉの化合物が式のＩＡ
【化５５−１】
の化合物の立体構造を有し、式ＩＩの化合物が式ＩＩＡ
【化５５−２】
の化合物の立体構造を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
化合物をα−グルコシダーゼの存在下において光分解することを更に含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
α−グルコシダーゼが標識化された基質の存在下において阻害される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３５】
α−グルコシダーゼを式の式Ｉもしくは式ＩＩ
【化５６】
の化合物またはこれらの塩、またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物と接触させることにより、オリゴサッカライドからグルコース残基を除去することを阻害することを含む方法であって、
式中、Ｒは
【化５７】
であり；
Ｒ’は
【化５８】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨである、
方法。
【請求項１】
式Ｉ
【化３９】
の化合物であって、
式中、Ｒは
【化４０】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、および
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基である、
化合物。
【請求項２】
Ｒ１が１から８個の炭素原子を有する非置換もしくは置換のアルキル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＺがＮＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ１がＮＯ２であり；
Ｘ３がＮ３であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨである、
請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｗ１−４がＨである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ＹがＣＨ２である、請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
式Ｉの化合物が式ＩＡ
【化４１】
の化合物の構造を有する、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ１が−（ＣＨ２）５−であり；
Ｗ１−４がＨであり；
Ｘ１がＮＯ２であり；
Ｘ３がＮ３であり；
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨであり；
Ｙが−（ＣＨ２）−であり；ならびに
ＺがＮＨである、
請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が−（ＣＨ２）５−であり；
Ｗ１−４がＨであり；
Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨであり；
Ｙが−（ＣＨ２）−であり；ならびに
ＺがＮＨである、
請求項８に記載の化合物。
【請求項１１】
請求項１に記載の化合物および医薬的に許容し得るキャリアを含む組成物。
【請求項１２】
式ＩＩ
【化４２】
の化合物であって、
式中、Ｒ’は
【化４３】
であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−３は独立に水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基であり；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨから選択される、
化合物。
【請求項１３】
Ｒ２が１から８個の炭素原子を有する非置換もしくは置換のアルキル基である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｚ’がＮＨである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５がＨである、
請求項１２に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｘ１がＮＯ２であり；
Ｘ３がＮ３であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５がＨである、
請求項１２に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｗ１−３がすべてＨである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１８】
式ＩＩの化合物が式ＩＩＡ
【化４４】
の化合物の構造を有する、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ２が−（ＣＨ２）６−であり；
Ｗ１−３がＨであり；
Ｘ１がＮＯ２であり；
Ｘ３がＮ３であり；
Ｘ２、Ｘ４、およびＸ５がＨであり；ならびに
Ｚ’がＮＨである、
請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ２が−（ＣＨ２）６−であり；
Ｗ１−３がＨであり；
Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨであり；ならびに
Ｚ’がＮＨである、
請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
請求項１３に記載の化合物および医薬的に許容し得るキャリアを含む組成物。
【請求項２２】
式ＩＩＩ
【化４５】
の化合物を作製することを含む方法であって、式ＩＶ
【化４６】
の化合物を式Ｖ
【化４７】
の化合物と縮合することにより、
式中、
Ｒ’は
【化４８】
であり；
Ｑは存在しないか、もしくはＣＨであり、
但しＱが存在しない場合には、ＯＷ１も存在せず；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は独立に水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基であり；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨから選択される、
方法。
【請求項２３】
縮合が式ＶＩの化合物を式Ｖの化合物により還元的にアミノ化することによる、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
式ＩＶの化合物が式ＶＩ
【化４９】
の化合物をＨＯ−Ｒ２−ＮＨ２により芳香族フッ素置換して、式ＶＩＩ
【化５０】
の化合物を形成し、式ＶＩＩの化合物を酸化して、式ＩＶの化合物を得ることにより作製される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
式ＩＩＩの化合物が式ＩＩＩＡ
【化５１】
の化合物の立体構造を有する、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
α−グルコシダーゼを、式Ｉもしくは式ＩＩ
【化５２】
の化合物またはこれらの塩、またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物により阻害することを含む方法であって、
式中、Ｒは
【化５３】
であり；
Ｒ’は
【化５４】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨである、
方法。
【請求項２７】
Ｒ１またはＲ２が１から８個の炭素原子を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
Ｘ１およびＸ３がＮＯ２であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨである、
請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
Ｘ１がＮＯ２であり；
Ｘ３がＮ３であり；ならびに
Ｘ２、Ｘ４およびＸ５がＨである、
請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
α−グルコシダーゼがα−グルコシダーゼＩまたはα−グルコシダーゼＩＩである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
化合物の塩が医薬的に許容し得る塩である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
式Ｉの化合物が式のＩＡ
【化５５−１】
の化合物の立体構造を有し、式ＩＩの化合物が式ＩＩＡ
【化５５−２】
の化合物の立体構造を有する、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
化合物をα−グルコシダーゼの存在下において光分解することを更に含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
α−グルコシダーゼが標識化された基質の存在下において阻害される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３５】
α−グルコシダーゼを式の式Ｉもしくは式ＩＩ
【化５６】
の化合物またはこれらの塩、またはこれらの任意の２つ又はそれ以上の混合物と接触させることにより、オリゴサッカライドからグルコース残基を除去することを阻害することを含む方法であって、
式中、Ｒは
【化５７】
であり；
Ｒ’は
【化５８】
であり；
Ｒ１は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｒ２は置換もしくは非置換のアルキル基であり；
Ｗ１−４は水素、置換もしくは非置換のアルキル基、置換もしくは非置換のハロアルキル基、置換もしくは非置換のアルカノイル基、置換もしくは非置換のアロイル基、または置換もしくは非置換のハロアルカノイル基から独立に選択され；
Ｘ１−５はＨ、ＮＯ２、Ｎ３またはＮＨ２から独立に選択され；
Ｙは存在しないか、またはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；
Ｚは結合またはＮＨから選択され；但し
Ｚが結合である場合には、Ｙは存在せず、
ＺがＮＨである場合には、Ｙはカルボニル以外の置換もしくは非置換のＣ１−アルキル基であり；ならびに
Ｚ’は結合またはＮＨである、
方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００９−５３８３３６（Ｐ２００９−５３８３３６Ａ）
【公表日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５１２２６０（Ｐ２００９−５１２２６０）
【出願日】平成１９年５月２２日（２００７．５．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６９４４８
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４０１８４
【国際公開日】平成１９年１２月６日（２００７．１２．６）
【出願人】（５０２２７８７６９）ユナイテッド セラピューティクス コーポレーション (10)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年５月２２日（２００７．５．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６９４４８
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４０１８４
【国際公開日】平成１９年１２月６日（２００７．１２．６）
【出願人】（５０２２７８７６９）ユナイテッド セラピューティクス コーポレーション (10)
【Ｆターム（参考）】
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