ニガウリ抽出物を主成分とする血糖値降下剤、および食品・医薬品組成物
【課題】天然の植物であるニガウリから高い血糖値降下作用を有する抽出物をえる。またそれを含んだ血糖値降下剤を提供する。またこの抽出物を含む食品・医薬組成物を提供する。
【解決手段】乾燥ニガウリのメタノール抽出物の生物活性指標分画により３種類の新規ククルビタン型テルペノイド（１−３）ならびに８種類の既知化合物（４−１１）を単離した。主成分である５，１９エポキシ−３，２５ジヒドロキシククルビタ−６，２３−ジエン（４）及び３，７，２５−トリヒドロキシククルビタ−５，２３−ジエン−１９−アール（５）について、雄ｄｄＹ系マウスにおいて４００ｍｇ／ｋｇで顕著な血糖値低下活性が見られた。
【解決手段】乾燥ニガウリのメタノール抽出物の生物活性指標分画により３種類の新規ククルビタン型テルペノイド（１−３）ならびに８種類の既知化合物（４−１１）を単離した。主成分である５，１９エポキシ−３，２５ジヒドロキシククルビタ−６，２３−ジエン（４）及び３，７，２５−トリヒドロキシククルビタ−５，２３−ジエン−１９−アール（５）について、雄ｄｄＹ系マウスにおいて４００ｍｇ／ｋｇで顕著な血糖値低下活性が見られた。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の抽出物に含まれる化合物、それを主成分とする血糖値降下剤、またそれを含む食品・医薬品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は現代におけるもっとも一般的な慢性疾患の一つであり、心血管疾患の発生の主要因の一つである。糖尿病は、食餌中の糖を消費するという、インスリンの正常な活性が損なわれることによって引き起こされる。糖尿病にはインスリン依存型糖尿病とインスリン非依存型糖尿病とに主に分類され、近年、インスリン非依存型糖尿病の患者数は生活習慣の変化、肥満の増加、及び人口集団の加齢によって急激に増加している。
【０００３】
一般的に糖尿病においては、体内でのインスリン産生能が極めて低下しているか、または作られたとしても、インスリン感受性の低下等によりそのインスリンが有効ではなく、これを原因として血糖値上昇が起き、それに伴う種々の高血糖症状を引き起こす。現在広く行われている治療としては、インシュリン投与以外に、血糖値降下剤の投与によって血糖値をコントロールしている。
【０００４】
一方、アジアを初めとして多くの国々では、薬草由来の天然化合物を病気の治療薬として用いることがある。こうした地域ではこれらの薬を古来より使用する習慣があったり、高価な合成医薬品を購入できないといった事情がある。また、最近では植物化学者の研究対象のひとつはこうした民間薬から新薬発見を試みることである。さらにＷＨＯの研究グループは、伝統的な固有の天然薬を適切かつ合理的に利用すべきであると結論付けている（Ｄａｎｉｅｌａ Ｂａｇｏｚｚｉ、“Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ”、［ｏｎｌｉｎｅ］、平成１５年３月、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ、［平成１７年９月２４日検索］、インターネット＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉａｃｅｎｔｒｅ／ｆａｃｔｓｈｅｅｔｓ／ｆｓ１３４／ｅｎ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ＞）。
【０００５】
ゴーヤあるいはニガウリとして知られる植物（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）、アーユルヴェーダ名：カレラ、以下「ニガウリ」と称す）は、その果実がアジアや一部のアフリカ諸国では糖尿病に効果があることが知られており、こうした天然の治療薬の候補の一つでもある。
ニガウリについては百を超える科学論文がその植物学的及び薬理学的性質について述べている。ニガウリからはククルビタン型トリテルペンアグリコン及び／またはグリコシドなどの種々の成分が単離されている。（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７）。また、これまでにニガウリの苦味成分はＭｏｍｏｒｄｉｃｏｓｉｄｅ Ｋ及びＬ、ならびにｍｏｍｏｒｄｉｃｉｎｅ Ｉ及びＩＩとして報告されている（非特許文献１，非特許文献４等）。しかし、いずれの文献においてもそれぞれの成分に対する具体的な血糖値降下作用についての報告はない。
さらにいくつかの特許公報においても、血糖値降下作用等の薬効を有するニガウリの抽出物を含有する医薬や食品が提供されている。（特許文献１、特許文献２、特許文献３及び特許文献４等）。しかし、そうした血糖値降下作用を有する活性成分については、特許文献３に水可溶性画分の低分子ペプチドがその作用を示すこと、また本出願人による特許文献４にニガウリから水抽出されたアルドノ−１，４−ラクトン類が血糖値上昇抑制剤の有効成分となること、等が開示されている。
【０００６】
【非特許文献１】オカベ等（Ｏｋａｂｅ，Ｈ． ｅｔ ａｌ．），Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ，１９８２年，第３０巻，ｐ．４３３４−４３４０
【非特許文献２】オカベ等（Ｏｋａｂｅ，Ｈ． ｅｔ ａｌ．），Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９８２年，第２３巻，ｐ．７７−８０
【非特許文献３】ミヤハラ等（Ｍｉｙａｈａｒａ ｅｔ ａｌ．），Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１９８１年，第２９巻，ｐ．１５６１−１５６６
【非特許文献４】ヤスダ等（Ｙａｓｕｄａ ｅｔ ａｌ．），Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ，１９８４年，第３２巻，ｐ．２０４４−２０４７
【非特許文献５】ムラカミ等（Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ，２００１年，第４９巻，p. ５４−６３
【非特許文献６】ベーガム等（Ｂｅｇｕｍ ｅｔ ａｌ.），Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９７年，第４４巻，ｐ．１３１３−１３２０
【非特許文献７】ファトープ等（Ｆａｔｏｐｅ ｅｔ ａｌ．），Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，１９９０年，第５３巻，ｐ．１４９１−１４９７
【特許文献１】特開平８−９２１１６号公報
【特許文献２】特開２００１−２７８８０４号公報
【特許文献３】特表２００２−５１６６０８号公報
【特許文献４】特開２００４−２５０３６３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、いずれの文献においても血糖値降下作用を有する原因成分についての解明は不十分であり、またいくつかの文献に開示されている血糖降下作用を有する成分はいずれも水可溶性成分のみについての知見である。
【０００８】
本発明者等は、鋭意研究の結果、ニガウリの特定の抽出物中にある化合物に高い血糖値降下作用を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
従って、本発明の目的は、ニガウリから簡便な操作により容易に利用できる、高い血糖値降下作用を有する抽出物、およびある化合物を含む血糖値降下剤を提供することにある。また本発明の別の目的は、当該抽出物あるいは化合物を含んで成る血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
即ち本発明は、ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物を有効成分として含むことを特徴とする血糖値降下剤を提供することで、上記課題を解決することが出来た。
【００１１】
本発明においては、前記有機溶媒抽出物が、アルコールによる抽出物であることが好ましい。この時、アルコールは、低級アルコールであることが好ましく、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール及びブタノールからなる群から選ばれる少なくとも１種のアルコールであることがさらに好ましい。
【００１２】
また、本発明においては前記有機溶媒抽出物が、これをさらにエーテルまたは酢酸エチル抽出した画分であることが好ましい。
【００１３】
また、本発明は、ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記一般式１にて示される血糖値降下作用を有する化合物を提供するものである。
【００１４】
【化７】
【００１５】
（一般式１において、Ｒ1は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、またはアロピラノシロキシ基を表し、Ｒ2はＸにおいて二重結合を形成するかＲ5と共に環状エーテルを形成し、Ｒ3は水素原子、水酸基、アルキル基、またはアルコキシ基を表し、Ｒ4は水素原子、水酸基、アルキル基、又はアルコキシ基を表し、Ｒ5は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、もしくはホルミル基を表すか、またはＲ2と共に環状エーテルを形成し、ＸはＲ2を含めて二重結合を形成するか、またはＲ2が環状エーテルを形成する場合にはＲ2を含めずに二重結合を形成する炭化水素基を表す。）
【００１６】
また、本発明は下記構造式１にて示される化合物を提供するものである。
【００１７】
【化８】
【００１８】
さらに、本発明は下記構造式２にて示される化合物を提供するものである。
【００１９】
【化９】
【００２０】
さらに、本発明は下記構造式３にて示される化合物を提供するものである。
【００２１】
【化１０】
【００２２】
さらに、本発明は上記したいずれかの化合物であって、ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、血糖値降下作用を有する化合物を提供するものである。
【００２３】
また、本発明はニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記構造式４にて示される血糖値降下作用を有する化合物を提供するものである。
【００２４】
【化１１】
【００２５】
さらに、本発明はニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記構造式５にて示される血糖値降下作用を有する化合物を提供するものである。
【００２６】
【化１２】
【００２７】
また、本発明はニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））をメタノール中で抽出し、当該抽出液をさらにエーテルまたは酢酸エチル抽出して得られる、血糖値降下作用を有することを特徴とするニガウリ抽出物を提供するものである。
【００２８】
さらに、本発明は上記したいずれかの血糖値降下剤、化合物、ニガウリ抽出物を有効成分として含有し、血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【００２９】
本発明により、天然物であるニガウリより簡便な操作により容易に、高血糖値降下作用を有する抽出物を利用することができた。
【００３０】
また、その中でも特定の化合物により、より高い血糖値降下作用を有する血糖値降下剤を提供することができる。
【００３１】
また、上記抽出物や化合物を含む食品・医薬品組成物により、簡便にヒトに投与することが可能となり、服用しやすい糖尿病患者用食品・医薬品組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
以下、本発明を詳細に説明するが、本発明は以下に述べる個々の形態には限定されない。
【００３３】
ニガウリは、学名：モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ（以降、Ｍ． ｃｈａｒａｎｔｉａともいう））、アーユルヴェーダ名：カレラと呼ばれるウリ科の一年草である。インドが原産で熱帯アジア、中国、日本（特に関東以西の沖縄など）で栽培されている。一般には観賞用として栽培されているが、近年、種々の薬効作用から食用として栽培されるようになっている。特に未熟果は苦みが著しく、果実部を油いため、三杯酢、漬物などとして食用に供され、また完熟果は種子を包む果肉が甘く、そのままで食用に供されている。中国では古来果実部を薬用に利用している。
【００３４】
本発明においては、ニガウリの抽出用の原料として用いる部位については特に制限はなく、全草、花、果実、種子、茎等のいずれの部位であってもよいが、なかでも、特に果実部を用いることが好ましい。果実部には、果皮、果汁、果肉、わた、種子などが含まれるが、任意の部位を一部位又は組み合わせて用いることができる。
【００３５】
これらのニガウリ抽出用原料は未処理のままでも使用できるが、抽出効率を上げるためには、切断、粉砕、乾燥などを経た物を使用することが好ましい。例えば、果実部をある程度の大きさに切断あるいは粉砕後、乾燥・未乾燥の状態にて抽出操作に供する、または乾燥後の果実部をある程度の大きさに切断あるいは粉砕後に抽出操作に供する、などによって調整すること好ましい。乾燥方法としては、特に限定されないが、熱風乾燥、真空凍結乾燥、遠赤外線乾燥、マイクロ波加熱乾燥等が挙げられる。
【００３６】
本発明における抽出用の溶媒には有機溶媒が用いられる。その例としては、これには限定されないが、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の低級アルコール類；酢酸エチル等のエステル類；エチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等のグリコール類；ジエチルエーテル等のエーテル類；その他、アセトン、酢酸、ベンゼン、トルエン、石油エーテル、ヘキサン等を挙げることができる。これらの溶媒は、単独あるいは二種以上を組み合わせて用いることが出来る。本発明では、アルコール、エーテル、エステルを用いることが好ましく、さらに好ましくは低級アルコール、エーテル、酢酸エチルである。本発明ではメタノールでまず抽出し、その抽出物からさらにエーテル、酢酸エチルにて再抽出を行うことが、本発明による化合物の含有量が多いために、最も好ましい。
【００３７】
本発明において用いられる抽出方法としては、一般的な方法を採用することができる。例えば、原料としてニガウリの生果実部又は乾燥果実部を、そのまま又は切断・粉砕物として上記溶媒中に、冷却下、常温下又は加温下において、撹拌下又は静置して浸漬することができる。得られた抽出混合物は、必要に応じて濾過又は遠心分離によって固形物を除いた後、そのまま用いるか又は溶媒を濃縮してもしくは乾燥して用いてもよい。抽出時間は特に限定されず、１０分から数十日まで、原料となるニガウリの状態に応じて適宜決定すればよい。
【００３８】
特に本発明における抽出物は、例えば、ニガウリのメタノール抽出物より得られるエーテル画分及び酢酸エチル画分であることが好ましい。
【００３９】
本発明の化合物は、上記抽出物より単離された物であり、下記一般式１にて示される。
【００４０】
【化１３】
【００４１】
上記一般式１において、Ｒ1は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、またはアロピラノシロキシ基を表し、Ｒ2はＸにおいて二重結合を形成するかＲ5と共に環状エーテルを形成し、Ｒ3は水素原子、水酸基、アルキル基、またはアルコキシ基を表し、Ｒ4は水素原子、水酸基、アルキル基、又はアルコキシ基を表し、Ｒ5は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、もしくはホルミル基を表すか、またはＲ2と共に環状エーテルを形成し、ＸはＲ2を含めて二重結合を形成するか、またはＲ2が環状エーテルを形成する場合にはＲ2を含めずに二重結合を形成する炭化水素基を表す。
【００４２】
特に好ましくは、Ｒ1は水酸基、低級アルコキシ基、またはアロピラノシロキシ基を表し、Ｒ3は水素原子、水酸基、または低級アルコキシ基を表し、Ｒ4は水酸基または低級アルコキシ基を表す。
【００４３】
上記一般式１の化合物の中でも好ましくは下記構造式１から５で表される化合物である。
【００４４】
【化１４】
【００４５】
【化１５】
【００４６】
【化１６】
【００４７】
【化１７】
【００４８】
【化１８】
【００４９】
本発明の食品組成物は、特に糖尿病患者用食品に適用することができる。本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物を含有する特定保健用食品等の特別用途食品や栄養機能食品として直接摂取することにより血糖値コントロール治療を簡便に行うことができる。
【００５０】
具体的には、食品組成物として使用する場合には、各種飲食品（牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳、流動食、病者用食品、幼児用粉乳等食品、授乳婦用粉乳等食品、栄養食品等）にニガウリ抽出物及び／又は化合物を添加し、これを摂取してもよい。本有効成分をそのまま使用したり、他の食品ないし食品成分と混合するなど、通常の食品組成物における常法にしたがって使用できる。また、その性状についても、通常用いられる飲食品の状態、例えば、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよい。
【００５１】
その他の成分についても特に限定されないが、本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物を含有する飲食物には、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を主成分として使用することができる。タンパク質としては、例えば全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、α―カゼイン、β―カゼイン、κ−カゼイン、β―ラクトグロブリン、α―ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これら加水分解物；バター、乳性ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種乳由来成分などが挙げられる。糖類、加工澱粉（テキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維などが挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、魚油等、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂；パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレンなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸などが挙げられる。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用することができ、合成品及び／又はこれらを多く含む食品を用いてもよい。
また、本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物を含む食品組成物として食する際の通常の摂取量は、例えば成人１日当たり、ニガウリ抽出物及び／又は化合物として０．１ｍｇ〜２ｇ／ｋｇが好ましく、５０ｍｇ〜１ｇ／ｋｇがより好ましい。
【００５２】
本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物を含む血糖値降下剤や、これを有効成分とする医薬組成物の投与量は、投与経路、ヒトを含む投与対象動物の年齢、体重、症状など、種々の要因を考慮して、適宜設定することができる。本発明はこれに限定されないが、好ましくは、有効成分として０．１ｍｇ〜２ｇ／ｋｇ／ｄａｙが適当である。しかしながら、長期間に亘って治療の目的で摂取する場合には、上記範囲よりも少量であってもよいし、また本有効成分は、天然の植物由来であり安全性について問題がないので、上記範囲よりも多量に使用しても一向にさしつかえない。
また本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物を含む血糖値降下剤や医薬組成物は、経口投与又は非経口投与（筋肉内、皮下、静脈内、坐薬、経皮等）のいずれでも投与できる。
【００５３】
本発明による血糖値降下剤または医薬組成物の投与形態としては、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、溶液、シロップ剤、乳液等による経口投与をあげることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬である本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。
【００５４】
本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物の量は、その目的、用途（食品組成物、予防剤、治療剤等の医薬品組成物）に応じて任意に定めることができ。本発明はこれに限定されないがその含量としては、全体量に対して通常、０．００１〜１００％（ｗ／ｗ）、特に０．１〜１００％が好ましい。
【００５５】
以下、本発明の実施例を挙げて本発明についてさらに詳細に説明を行うが、本発明は、これらの具体的な実施例に限定されない。
【００５６】
以下の実施例において用いられた測定機器、方法は下記の通りである。なお、ＣＤＣｌ3、Ｃ5Ｄ5Ｎはそれぞれクロロホルム、ピリジンの重水素化溶媒を示す。
旋光性：ＤＩＰ１０００偏光計（ＪＡＳＣＯ製、ＭｅＯＨ又はＣＨＣｌ3溶媒）
ＵＶスペクトル：ＵＶ−１６５０ＰＣ装置（島津製作所製、ＭｅＯＨ溶媒）
ＩＲスペクトル：ＦＴ／ＩＲ−５３００分光光度計（ＪＡＳＣＯ製）
1Ｈ及び13Ｃ ＮＭＲスペクトル：Ｕｎｉｔｙ６００ ＮＭＲ分光計（バリアン社製、ＣＤＣｌ3またはＣ5Ｄ5Ｎ（グリコシド）溶媒、1Ｈ：６００ＭＨｚ、13Ｃ：１５０ＭＨｚ、内部基準物質（1Ｈ）テトラメチルシラン，（13Ｃ）Ｃ5Ｄ5Ｎ
質量分析：ＪＭＳ ＡＸ５００分光計（ＥＩ−ＭＳ、ＦＡＢ−ＭＳ、日本電子製）、ＧＣ／ＭＳ（ＨＰ５８９０、ＳＰＢ−１、ヒューレットパーカード社）
結晶構造Ｘ線解析システム：（ｍａＸｕｓ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｎｏｎｉｕｓ， ＤＥＬＦＴ ＆ Ｍａｃ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｊａｐａｎ））
カラムクロマトグラフィー：Ｓｅｐｈａｄｅｘ−ＬＨ２０（１８−１１１μＭ、アマシャム・ファルマシア・バイオテック社製，ＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ，１：１）、シリカゲルＫｉｅｓｅｌｇｅｌ６０（メルク社製、０．０４０−０．０６３ｍｍ）、ＤＩＡＩＯＮカラム（ＨＰ２０ ｌｏｔ ２Ｄ５０３）、三菱化学社製）
分取ＨＰＬＣ：Ｃｏｓｏｍｏｓｉｌ逆相カラム（１０ｘ２５０ｍｍ ５Ｃ１８−ＡＲ，Ｔｙｐｅ Ｗａｔｅｒｓ， Ｍａｎｕｆ． Ｎｏ． Ｈ１４７７２、ナカライテスク社製）、ＪＡＳＣＯ８８０ＰＵポンプ、ＪＡＳＣＯ８７５ＵＶ ＵＶ検出器、及びＥＲＣ７５１２ ＥＲＭＡ ＣＲ ＩＮＣ ＲＩ検出器
分取ＴＬＣ：２０ｘ２０ｃｍ ＲＰ１８Ｆ254S（メルク社製）
【実施例１】
【００５７】
本実施例で用いたニガウリは、インド産の乾燥ニガウリ（Ｍ． ｃｈａｒａｎｔｉａ Ｌ．）を使用した。
【００５８】
（ニガウリの溶媒抽出）
乾燥ニガウリ２０ｋｇを機械的に粉末化し、室温で１ヶ月メタノール（ＭｅＯＨ）で抽出した。この抽出物を減圧濾過し、減圧濃縮した。次いで４１５．８ｇのメタノール抽出物を水（Ｈ2Ｏ）に懸濁し、エーテル（Ｅｔ2Ｏ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、及びｎ−ブタノールで順に抽出して、エーテル抽出物６１ｇ、酢酸エチル抽出物４２ｇ及びｎ−ブタノール抽出物２９８ｇの抽出物をそれぞれ得た。
【００５９】
（ニガウリエーテル抽出物の精製）
上記の操作にて得られたエーテル抽出物の２７ｇをヘキサン／ＥｔＯＡｃ濃度勾配（順次ＥｔＯＡｃ濃度が高くなる）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、２４の分画に分けた（分画液１〜２４）。分画液５はＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラムにかけて３つのサブフラクションを得た（分画液５−１〜５−３）。この分画液５−３をＯＤＳ ＲＰ−１８（Ｃｏｓｏｍｏｓｉｌ逆相カラム）でＨＰＬＣにかけて化合物１０及び１１（５３ｍｇ））を得た。分画液９をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（ＭｅＯＨ：ＣＨ2Ｃｌ2 １：１）で精製して化合物９（３．４ｍｇ）を得た。分画液１３をＥｔＯＡｃ中で結晶化することにより化合物４（１７８ｍｇ）を得た。分画液１７をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０クロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ2Ｃｌ2 １：１）により３つのサブフラクションに分けた（分画液１７−１〜１７−３）。この分画液１７−２をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ：Ｅｔ2Ｏ＝４：３：１）にかけ、化合物５（１７５ｍｇ）を得た。分画液２０はＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０で３つのサブフラクションに分けた（分画液２０−１〜２０−３）。分画液２０−２をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝６：４〜０：１０）で更に精製して化合物６（２５．２ｍｇ）、化合物１（３．２ｍｇ）、化合物５（７６ｍｇ）及び化合物７（２１．３ｍｇ）を得た。
【００６０】
（ニガウリ酢酸エチル抽出物の精製）
前記の操作にて得られた酢酸エチル抽出物の３ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１５：３：１−下層、及びＥｔＯＡｃ）にかけて８つの分画液を得た（分画液１〜８）。シリカゲルカラムクロマトグラフィーとＯＤＳ ＲＰ−１８ （Ｃｏｓｏｍｏｓｉｌ逆相カラム）（ｎ−ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝７：３〜０：１０、及びＭｅＯＨ）の組み合わせにより分画液１から化合物２（９．３ｍｇ）を得、分画液３のＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラム及びＯＤＳ ＲＰ−１８（Ｃｏｓｏｍｏｓｉｌ逆相カラム）（ＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏ＝１３：７）による精製によって化合物３（７．８ｍｇ）を得た。
【００６１】
（ニガウリｎ−ブタノール抽出物の精製）
前記の操作にて得られたｎ−ブタノール抽出物の１５ｇをＤＩＡＩＯＮカラムにかけてＨ2ＯとＭｅＯＨの混合液でＭｅＯＨ量を増やしながら溶出し、さらにアセトンで溶出した（Ｈ2Ｏ，５０％ＭｅＯＨ，ＭｅＯＨ、アセトンの順に溶出）。ＭｅＯＨで溶出した分画１６．２ｇに、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１５：３：１−下層；ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ＝９：１及び４：１）、ＯＤＳ ＲＰ−１８（Ｃｏｓｏｍｏｓｉｌ逆相カラム）（ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ：９：１）及びシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝１７：３）を組み合わせて用いて化合物８（８．４ｍｇ）を得た。
【００６２】
以上のように、実施例１で得られたニガウリのエーテル抽出物、酢酸エチル抽出物、ｎ−ブタノール抽出物からサイズ排除、順相、逆相、イオン交換クロマトグラフィーや再結晶技術等により、１１種類の化合物（１−１１）が得られた。
【００６３】
（得られた化合物の同定）
（１）化合物１
化合物１の高分解能ＥＩ−ＭＳの結果は分子式Ｃ31Ｈ52Ｏ3を支持し、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル、13Ｃ−ＮＭＲスペクトル、ＣＯＳＹ、ＨＭＢＣ、及びＮＯＥＳＹ実験等から、化合物１の構造は、下記構造式１の３β，２５−ジヒドロキシ−７β−メトキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエンであると決定された。
【００６４】
【化１９】
【００６５】
３β，２５−ジヒドロキシ−７β−メトキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエン（１）：
非晶系粉末、［α］20D＝・７３．２（ｃ＝０．８、ＣＨＣｌ3），ＩＲ（ＫＢｒ）：３３３６，１４４９，１０６８ｃｍ-1。
1Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）・：０．７０，０．９２，０．９８，１．０４，１．２１（各ｓ及び３Ｈ，３０，１８，１９，２９及び２８−ＣＨ3），０．８８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ，２１−ＣＨ3），１．３１（６Ｈ，２６及び２７−ＣＨ3），２．１６（ｍ，２２−Ｈ），２．２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５，４．５Ｈｚ，１０−Ｈ），３．３４（ｓ，７−ＯＣＨ3），３．４３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４，１．０Ｈｚ，７−Ｈ），３．５１（ｂｒｓ，３−Ｈ），５．５７（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，２３−Ｈ），５．５９（ｍ，６及び２２−Ｈ）。
13Ｃ−ＮＭＲデータ：図１の表に示す。
ポジティブ型高分解能ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４７２．３９１５ ［Ｍ］+，Ｃ31Ｈ52Ｏ3，計算値４７２．３９０５。
【００６６】
（２）化合物２
化合物２の分子式は高分解能ＥＩ−ＭＳによってＣ32Ｈ54Ｏ3であることが示され、1Ｈ及び13Ｃ−ＮＭＲスペクトル、Ｘ線結晶構造解析などから、化合物２は下記構造式２の３β，２５−ジメトキシ−７β−ヒドロキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエンであると決定された。
【００６７】
【化２０】
【００６８】
３β，２５−ジメトキシ−７β−ヒドロキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエン（２）：
非晶質粉末；［α］17D＝・１５．３（ｃ＝１．５、ＣＨＣｌ3），ＩＲ（ＫＢｒ）：３４５３，２９４３，１４６７，１０３２ｃｍ-1。
1Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）・：０．６９，０．９２，１．０３，１．２０（各ｓ及び３Ｈ，３０，１８，１９及び２８−ＣＨ3），１．２４（ｓ，６Ｈ，２６及び２７−ＣＨ3），０．９８（ｓ，３Ｈ，２９−Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ，２１−ＣＨ3），２．１８（ｍ，２２−Ｈ），２．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５，４．５Ｈｚ，１０−Ｈ），３．１４（ｓ，２５−ＯＣＨ3），３．３４（ｓ，７−ＯＣＨ3），３．４２（ｂｒｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，７−Ｈ），３．５１（ｂｒｓ，３−Ｈ），５．３７（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，２３−Ｈ），５．５０（ｄｄｄ，Ｊ＝１５．８，８．７，５．７Ｈｚ，２４−Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，６−Ｈ）。
13Ｃ−ＮＭＲデータ：図１の表に示す。
ポジティブ型高分解能ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４８６．４０５１ ［Ｍ］+， Ｃ32Ｈ54Ｏ3、計算値４８６．４０７３。
結晶データ：Ｃ32Ｈ53Ｏ3，Ｍｒ＝４８６．７８１，斜方晶，Ｐ２1２1２1，ａ＝７．７２２０（４）Å，ｂ＝１０．０９６０（７）Å，ｃ＝３８．７６２（４）Å，・＝９０．００°，・＝９０．００°，・＝９０．００°，Ｖ＝３０２１．９（４）Å3，Ｍｏ Ｋ・ｒａｄｉａｔｉｏｎ，・＝０．７１０７３，ＤＩＰイメージプレート，Ｆ2でリファイン，フルマトリクス最小二乗リファインメント，Ｒ（ｇｔ）＝０．０７３８，ｗＲ（ｇｔ）＝０．２０８８，Ｓ（ｒｅｆ）＝１．０４３，４３３３反射，３１７パラメータ，Ｈ原子の座標のみリファイン，計算重量シグマ，セルリファインメント：Ｓｃａｌｅｐａｃｋ（ＨＫＬ），データリダクション：ｍａＸｕｓ，構造のリファインに用いたプログラム：ＳＨＥＬＸＬ−９７。
【００６９】
（３）化合物３
化合物３のポジティブ型高分解能ＦＡＢ−ＭＳによって、ｍ／ｚ６７３．８３９１における［Ｍ＋Ｋ］+に基づく準分子イオンピーク（Ｃ36Ｈ58Ｏ9Ｋ）が示された。13Ｃスペクトルでは以前に単離されているモノデスモシディック−３β，２５−ジヒドロキシ−７β−メトキシククルビタ−５（２３Ｅ）−ジエン，１９−アール（５）を示すピークと、アロピラノシル単位を示すピークが見られた。ＧＣ／ＭＳ、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル及び旋光性等のデータから化合物３の構造は３β，７β，２５−トリヒドロキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエン−１９−アール ３β−Ｄ−アロピラノースと決定された（構造式３）。
【００７０】
【化２１】
【００７１】
３β，７β，２５−トリヒドロキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエン−１９−アール，３β−Ｄ−アロピラノース（３）：
［α］20D＝＋１１．３２（ｃ＝０．９、ＭｅＯＨ），ＩＲ（ＫＢｒ）：３３７８，２９４９，１４６４，１０８１ｃｍ-1。
1Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）・：０．８１，０．９１，１．０８，１．２１（各ｓ及び３Ｈ，３０，１８，１９及び２９−ＣＨ3），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ，２１−ＣＨ3），１．２５（ｓ，６Ｈ，２６及び２７−ＣＨ3），１．３１（３Ｈ，２８−ＣＨ3），３．２７（ｄｄ，Ｊ＝７．９，３．２Ｈｚ，１Ｈ，７−Ｈ），３．４４（ｄｄ，Ｊ＝９．４，２．１，１Ｈ，４’−Ｈ），３．６３（ｍ，２Ｈ，６ａ’及び５’−Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝９．２，１Ｈ，６ｂ’−Ｈ），３．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，７−Ｈ），４．０２（ｄ，Ｊ＝６．０，２’−Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１’−Ｈ），５．５７（ｍ，２３−Ｈ），５．８７（ｂｒｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，６−Ｈ），１０．２３（ｓ，１Ｈ，１９−Ｈ）．（３００ＭＨｚ，Ｃ5Ｄ5Ｎ）・：０．７４，０．８４，１．１２，（各ｓ及び３Ｈ，３０，１８及び２９−ＣＨ3），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２１−ＣＨ3），１．５５（ｓ，６Ｈ，２６及び２７−ＣＨ3），１．５９（ｓ，３Ｈ，２８−ＣＨ3），３．８７（ｄｄ，Ｊ＝７．９，３．２Ｈｚ，１Ｈ，７−Ｈ），４．１８（ｄｄ，Ｊ＝９．４，２．１，１Ｈ，４’−Ｈ），４．３５及び４．４９（ｍ，２Ｈ，６ａ’及び５’−Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１’−Ｈ），５．９２（ｂｒｍ，２３及び２４−Ｈ），６．２３（ｂｒｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，６−Ｈ），１０．６０（ｓ，１９−Ｈ）。
13Ｃ−ＮＭＲデータ：図１の表に示す。
ポジティブ型高分解能ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ ６７３．８３９１ ［Ｍ＋Ｋ］+，Ｃ36Ｈ58Ｏ9Ｋ、計算値６７３．８４０５。
【００７２】
（４）化合物４
化合物４の構造は、５，１９エポキシ−３，２５ジヒドロキシククルビタ−６，（２３Ｅ）−ジエンと同定された（13Ｃ−ＮＭＲデータ：図１の表に示す）（構造式４）。この化合物４はｍｏｍｏｒｄｉｃｏｓｉｄｅ Ｉの加水分解によって既に得られているものであるが（Ｍｕｌｈｏｌｌａｎｄ ｅｔ． ａｌ． Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９７年、第４５巻、p.３９１−３９５）、ニガウリ抽出物からは初めて得られた。
【００７３】
【化２２】
【００７４】
（５）化合物５
化合物５の構造はＸ線結晶解析により、３β，７β，２５−トリヒドロキシククルビタ−５，（２３Ｅ）ジエン−１９−アールと同定された（構造式５）。
【００７５】
【化２３】
【００７６】
（６）化合物６〜１１
化合物６〜９は、物理的及び分光学的データを文献に報告されているものと比較することにより、それぞれ５β，１９−エポキシククルビタ−６，（２３Ｅ）−ジエン−３β，１９，２５−トリオール、５β，１９−エポキシ−１９−メトキシククルビタ−６，（２３Ｅ）−ジエン−３β，２５−ジオール、パラメトキシ安息香酸と同定された。
化合物１０及び１１（１：１混合物として単離される）はＣｈａｒａｎｔｉｎの２つのアグリコンであるシトステロール及びスティグマスタジエノールとして同定された。
【実施例２】
【００７７】
（化合物４および化合物５の抗糖尿病活性試験）
次いで、化合物４ならびに５を大量に単離し、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗糖尿病活性について試験を行った。
【００７８】
体重約３０ｇの雄ｄｄＹ系マウスをＳＬＣ（静岡）から購入し、２１±２℃の一定温度下、５５±１５％の湿度、１２時間の明暗周期で実験開始まで１週間飼育した。
【００７９】
アロキサン（シグマ）を４０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与することにより糖尿病を誘発させた。糖尿病誘発後５日後にマウスを１８時間絶食させた。
各試験試料を１％アラビアガム溶液に懸濁した。陽性対照としてグリベンクラミド（シグマ）を２００ｍｇ／ｋｇの用量で使用した。血糖値は試料投与直前、試料投与後２、４及び６時間後にＧｌｕｃｏｍｅｔｅｒＤＥＸ（バイヤー・ヘルスケア、米国）にて経時的に測定した。コントロール群のマウスには、試料の代わりに１％のアラビアガム溶液を投与した。各試料のマウス（グリベンクラミド群：４匹、化合物４群：３匹、化合物５群：３匹）を用いて試験を行った。
各時点の血糖値は、試料投与直前の血糖値に対する相対血糖値（％）として算出した。
【００８０】
得られた結果を図２に示す。各抽出物の静脈内投与（４００ｍｇ／ｋｇ）によりグリベンクラミド（２００ｍｇ／ｋｇ）に比肩する著明な血糖値低下効果が見られた。
【産業上の利用可能性】
【００８１】
本発明により、天然物であるニガウリより簡便な操作により容易に、高血糖値降下作用を有する抽出物を利用することができ、またその中でも特定の化合物により、より高い血糖値降下作用を有する血糖値降下剤を提供することができる。これらの抽出物や化合物を含む食品・医薬品組成物を提供することにより、簡便にヒトに投与することが可能となり、服用しやすい糖尿病患者用食品・医薬品組成物を提供することができ、産業上の利用価値は高いものである。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】化合物１〜４の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータ（１５０ＭＨｚ）を示す表である。各化合物の位置番号に対応するケミカルシフト（ｐｐｍ）を表す。
【図２】アロキサン誘発糖尿病モデルマウスにおける化合物４及び化合物５の効果を示す。縦軸は試料投与直前の血糖値に対する相対血糖値（％）を、横軸は試料投与後の経過時間をしめし、それぞれの記号は、◆：グリベンクラミド ２００ｍｇ／ｋｇ、■：化合物４ ４００ｍｇ／ｋｇ、▲：化合物５ ４００ｍｇ／ｋｇを表す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の抽出物に含まれる化合物、それを主成分とする血糖値降下剤、またそれを含む食品・医薬品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は現代におけるもっとも一般的な慢性疾患の一つであり、心血管疾患の発生の主要因の一つである。糖尿病は、食餌中の糖を消費するという、インスリンの正常な活性が損なわれることによって引き起こされる。糖尿病にはインスリン依存型糖尿病とインスリン非依存型糖尿病とに主に分類され、近年、インスリン非依存型糖尿病の患者数は生活習慣の変化、肥満の増加、及び人口集団の加齢によって急激に増加している。
【０００３】
一般的に糖尿病においては、体内でのインスリン産生能が極めて低下しているか、または作られたとしても、インスリン感受性の低下等によりそのインスリンが有効ではなく、これを原因として血糖値上昇が起き、それに伴う種々の高血糖症状を引き起こす。現在広く行われている治療としては、インシュリン投与以外に、血糖値降下剤の投与によって血糖値をコントロールしている。
【０００４】
一方、アジアを初めとして多くの国々では、薬草由来の天然化合物を病気の治療薬として用いることがある。こうした地域ではこれらの薬を古来より使用する習慣があったり、高価な合成医薬品を購入できないといった事情がある。また、最近では植物化学者の研究対象のひとつはこうした民間薬から新薬発見を試みることである。さらにＷＨＯの研究グループは、伝統的な固有の天然薬を適切かつ合理的に利用すべきであると結論付けている（Ｄａｎｉｅｌａ Ｂａｇｏｚｚｉ、“Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ”、［ｏｎｌｉｎｅ］、平成１５年３月、Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ、［平成１７年９月２４日検索］、インターネット＜ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｈｏ．ｉｎｔ／ｍｅｄｉａｃｅｎｔｒｅ／ｆａｃｔｓｈｅｅｔｓ／ｆｓ１３４／ｅｎ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ＞）。
【０００５】
ゴーヤあるいはニガウリとして知られる植物（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）、アーユルヴェーダ名：カレラ、以下「ニガウリ」と称す）は、その果実がアジアや一部のアフリカ諸国では糖尿病に効果があることが知られており、こうした天然の治療薬の候補の一つでもある。
ニガウリについては百を超える科学論文がその植物学的及び薬理学的性質について述べている。ニガウリからはククルビタン型トリテルペンアグリコン及び／またはグリコシドなどの種々の成分が単離されている。（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７）。また、これまでにニガウリの苦味成分はＭｏｍｏｒｄｉｃｏｓｉｄｅ Ｋ及びＬ、ならびにｍｏｍｏｒｄｉｃｉｎｅ Ｉ及びＩＩとして報告されている（非特許文献１，非特許文献４等）。しかし、いずれの文献においてもそれぞれの成分に対する具体的な血糖値降下作用についての報告はない。
さらにいくつかの特許公報においても、血糖値降下作用等の薬効を有するニガウリの抽出物を含有する医薬や食品が提供されている。（特許文献１、特許文献２、特許文献３及び特許文献４等）。しかし、そうした血糖値降下作用を有する活性成分については、特許文献３に水可溶性画分の低分子ペプチドがその作用を示すこと、また本出願人による特許文献４にニガウリから水抽出されたアルドノ−１，４−ラクトン類が血糖値上昇抑制剤の有効成分となること、等が開示されている。
【０００６】
【非特許文献１】オカベ等（Ｏｋａｂｅ，Ｈ． ｅｔ ａｌ．），Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ，１９８２年，第３０巻，ｐ．４３３４−４３４０
【非特許文献２】オカベ等（Ｏｋａｂｅ，Ｈ． ｅｔ ａｌ．），Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９８２年，第２３巻，ｐ．７７−８０
【非特許文献３】ミヤハラ等（Ｍｉｙａｈａｒａ ｅｔ ａｌ．），Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１９８１年，第２９巻，ｐ．１５６１−１５６６
【非特許文献４】ヤスダ等（Ｙａｓｕｄａ ｅｔ ａｌ．），Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ，１９８４年，第３２巻，ｐ．２０４４−２０４７
【非特許文献５】ムラカミ等（Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ，２００１年，第４９巻，p. ５４−６３
【非特許文献６】ベーガム等（Ｂｅｇｕｍ ｅｔ ａｌ.），Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９７年，第４４巻，ｐ．１３１３−１３２０
【非特許文献７】ファトープ等（Ｆａｔｏｐｅ ｅｔ ａｌ．），Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，１９９０年，第５３巻，ｐ．１４９１−１４９７
【特許文献１】特開平８−９２１１６号公報
【特許文献２】特開２００１−２７８８０４号公報
【特許文献３】特表２００２−５１６６０８号公報
【特許文献４】特開２００４−２５０３６３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかし、いずれの文献においても血糖値降下作用を有する原因成分についての解明は不十分であり、またいくつかの文献に開示されている血糖降下作用を有する成分はいずれも水可溶性成分のみについての知見である。
【０００８】
本発明者等は、鋭意研究の結果、ニガウリの特定の抽出物中にある化合物に高い血糖値降下作用を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
従って、本発明の目的は、ニガウリから簡便な操作により容易に利用できる、高い血糖値降下作用を有する抽出物、およびある化合物を含む血糖値降下剤を提供することにある。また本発明の別の目的は、当該抽出物あるいは化合物を含んで成る血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
即ち本発明は、ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物を有効成分として含むことを特徴とする血糖値降下剤を提供することで、上記課題を解決することが出来た。
【００１１】
本発明においては、前記有機溶媒抽出物が、アルコールによる抽出物であることが好ましい。この時、アルコールは、低級アルコールであることが好ましく、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール及びブタノールからなる群から選ばれる少なくとも１種のアルコールであることがさらに好ましい。
【００１２】
また、本発明においては前記有機溶媒抽出物が、これをさらにエーテルまたは酢酸エチル抽出した画分であることが好ましい。
【００１３】
また、本発明は、ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記一般式１にて示される血糖値降下作用を有する化合物を提供するものである。
【００１４】
【化７】
【００１５】
（一般式１において、Ｒ1は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、またはアロピラノシロキシ基を表し、Ｒ2はＸにおいて二重結合を形成するかＲ5と共に環状エーテルを形成し、Ｒ3は水素原子、水酸基、アルキル基、またはアルコキシ基を表し、Ｒ4は水素原子、水酸基、アルキル基、又はアルコキシ基を表し、Ｒ5は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、もしくはホルミル基を表すか、またはＲ2と共に環状エーテルを形成し、ＸはＲ2を含めて二重結合を形成するか、またはＲ2が環状エーテルを形成する場合にはＲ2を含めずに二重結合を形成する炭化水素基を表す。）
【００１６】
また、本発明は下記構造式１にて示される化合物を提供するものである。
【００１７】
【化８】
【００１８】
さらに、本発明は下記構造式２にて示される化合物を提供するものである。
【００１９】
【化９】
【００２０】
さらに、本発明は下記構造式３にて示される化合物を提供するものである。
【００２１】
【化１０】
【００２２】
さらに、本発明は上記したいずれかの化合物であって、ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、血糖値降下作用を有する化合物を提供するものである。
【００２３】
また、本発明はニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記構造式４にて示される血糖値降下作用を有する化合物を提供するものである。
【００２４】
【化１１】
【００２５】
さらに、本発明はニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記構造式５にて示される血糖値降下作用を有する化合物を提供するものである。
【００２６】
【化１２】
【００２７】
また、本発明はニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））をメタノール中で抽出し、当該抽出液をさらにエーテルまたは酢酸エチル抽出して得られる、血糖値降下作用を有することを特徴とするニガウリ抽出物を提供するものである。
【００２８】
さらに、本発明は上記したいずれかの血糖値降下剤、化合物、ニガウリ抽出物を有効成分として含有し、血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【００２９】
本発明により、天然物であるニガウリより簡便な操作により容易に、高血糖値降下作用を有する抽出物を利用することができた。
【００３０】
また、その中でも特定の化合物により、より高い血糖値降下作用を有する血糖値降下剤を提供することができる。
【００３１】
また、上記抽出物や化合物を含む食品・医薬品組成物により、簡便にヒトに投与することが可能となり、服用しやすい糖尿病患者用食品・医薬品組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
以下、本発明を詳細に説明するが、本発明は以下に述べる個々の形態には限定されない。
【００３３】
ニガウリは、学名：モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ（以降、Ｍ． ｃｈａｒａｎｔｉａともいう））、アーユルヴェーダ名：カレラと呼ばれるウリ科の一年草である。インドが原産で熱帯アジア、中国、日本（特に関東以西の沖縄など）で栽培されている。一般には観賞用として栽培されているが、近年、種々の薬効作用から食用として栽培されるようになっている。特に未熟果は苦みが著しく、果実部を油いため、三杯酢、漬物などとして食用に供され、また完熟果は種子を包む果肉が甘く、そのままで食用に供されている。中国では古来果実部を薬用に利用している。
【００３４】
本発明においては、ニガウリの抽出用の原料として用いる部位については特に制限はなく、全草、花、果実、種子、茎等のいずれの部位であってもよいが、なかでも、特に果実部を用いることが好ましい。果実部には、果皮、果汁、果肉、わた、種子などが含まれるが、任意の部位を一部位又は組み合わせて用いることができる。
【００３５】
これらのニガウリ抽出用原料は未処理のままでも使用できるが、抽出効率を上げるためには、切断、粉砕、乾燥などを経た物を使用することが好ましい。例えば、果実部をある程度の大きさに切断あるいは粉砕後、乾燥・未乾燥の状態にて抽出操作に供する、または乾燥後の果実部をある程度の大きさに切断あるいは粉砕後に抽出操作に供する、などによって調整すること好ましい。乾燥方法としては、特に限定されないが、熱風乾燥、真空凍結乾燥、遠赤外線乾燥、マイクロ波加熱乾燥等が挙げられる。
【００３６】
本発明における抽出用の溶媒には有機溶媒が用いられる。その例としては、これには限定されないが、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等の低級アルコール類；酢酸エチル等のエステル類；エチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等のグリコール類；ジエチルエーテル等のエーテル類；その他、アセトン、酢酸、ベンゼン、トルエン、石油エーテル、ヘキサン等を挙げることができる。これらの溶媒は、単独あるいは二種以上を組み合わせて用いることが出来る。本発明では、アルコール、エーテル、エステルを用いることが好ましく、さらに好ましくは低級アルコール、エーテル、酢酸エチルである。本発明ではメタノールでまず抽出し、その抽出物からさらにエーテル、酢酸エチルにて再抽出を行うことが、本発明による化合物の含有量が多いために、最も好ましい。
【００３７】
本発明において用いられる抽出方法としては、一般的な方法を採用することができる。例えば、原料としてニガウリの生果実部又は乾燥果実部を、そのまま又は切断・粉砕物として上記溶媒中に、冷却下、常温下又は加温下において、撹拌下又は静置して浸漬することができる。得られた抽出混合物は、必要に応じて濾過又は遠心分離によって固形物を除いた後、そのまま用いるか又は溶媒を濃縮してもしくは乾燥して用いてもよい。抽出時間は特に限定されず、１０分から数十日まで、原料となるニガウリの状態に応じて適宜決定すればよい。
【００３８】
特に本発明における抽出物は、例えば、ニガウリのメタノール抽出物より得られるエーテル画分及び酢酸エチル画分であることが好ましい。
【００３９】
本発明の化合物は、上記抽出物より単離された物であり、下記一般式１にて示される。
【００４０】
【化１３】
【００４１】
上記一般式１において、Ｒ1は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、またはアロピラノシロキシ基を表し、Ｒ2はＸにおいて二重結合を形成するかＲ5と共に環状エーテルを形成し、Ｒ3は水素原子、水酸基、アルキル基、またはアルコキシ基を表し、Ｒ4は水素原子、水酸基、アルキル基、又はアルコキシ基を表し、Ｒ5は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、もしくはホルミル基を表すか、またはＲ2と共に環状エーテルを形成し、ＸはＲ2を含めて二重結合を形成するか、またはＲ2が環状エーテルを形成する場合にはＲ2を含めずに二重結合を形成する炭化水素基を表す。
【００４２】
特に好ましくは、Ｒ1は水酸基、低級アルコキシ基、またはアロピラノシロキシ基を表し、Ｒ3は水素原子、水酸基、または低級アルコキシ基を表し、Ｒ4は水酸基または低級アルコキシ基を表す。
【００４３】
上記一般式１の化合物の中でも好ましくは下記構造式１から５で表される化合物である。
【００４４】
【化１４】
【００４５】
【化１５】
【００４６】
【化１６】
【００４７】
【化１７】
【００４８】
【化１８】
【００４９】
本発明の食品組成物は、特に糖尿病患者用食品に適用することができる。本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物を含有する特定保健用食品等の特別用途食品や栄養機能食品として直接摂取することにより血糖値コントロール治療を簡便に行うことができる。
【００５０】
具体的には、食品組成物として使用する場合には、各種飲食品（牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳、流動食、病者用食品、幼児用粉乳等食品、授乳婦用粉乳等食品、栄養食品等）にニガウリ抽出物及び／又は化合物を添加し、これを摂取してもよい。本有効成分をそのまま使用したり、他の食品ないし食品成分と混合するなど、通常の食品組成物における常法にしたがって使用できる。また、その性状についても、通常用いられる飲食品の状態、例えば、固体状（粉末、顆粒状その他）、ペースト状、液状ないし懸濁状のいずれでもよい。
【００５１】
その他の成分についても特に限定されないが、本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物を含有する飲食物には、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を主成分として使用することができる。タンパク質としては、例えば全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、α―カゼイン、β―カゼイン、κ−カゼイン、β―ラクトグロブリン、α―ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これら加水分解物；バター、乳性ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種乳由来成分などが挙げられる。糖類、加工澱粉（テキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維などが挙げられる。脂質としては、例えば、ラード、魚油等、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂；パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂などが挙げられる。ビタミン類としては、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸などが挙げられ、ミネラル類としては、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレンなどが挙げられる。有機酸としては、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸などが挙げられる。これらの成分は、２種以上を組み合わせて使用することができ、合成品及び／又はこれらを多く含む食品を用いてもよい。
また、本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物を含む食品組成物として食する際の通常の摂取量は、例えば成人１日当たり、ニガウリ抽出物及び／又は化合物として０．１ｍｇ〜２ｇ／ｋｇが好ましく、５０ｍｇ〜１ｇ／ｋｇがより好ましい。
【００５２】
本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物を含む血糖値降下剤や、これを有効成分とする医薬組成物の投与量は、投与経路、ヒトを含む投与対象動物の年齢、体重、症状など、種々の要因を考慮して、適宜設定することができる。本発明はこれに限定されないが、好ましくは、有効成分として０．１ｍｇ〜２ｇ／ｋｇ／ｄａｙが適当である。しかしながら、長期間に亘って治療の目的で摂取する場合には、上記範囲よりも少量であってもよいし、また本有効成分は、天然の植物由来であり安全性について問題がないので、上記範囲よりも多量に使用しても一向にさしつかえない。
また本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物を含む血糖値降下剤や医薬組成物は、経口投与又は非経口投与（筋肉内、皮下、静脈内、坐薬、経皮等）のいずれでも投与できる。
【００５３】
本発明による血糖値降下剤または医薬組成物の投与形態としては、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、溶液、シロップ剤、乳液等による経口投与をあげることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬である本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。
【００５４】
本発明のニガウリ抽出物及び／又は化合物の量は、その目的、用途（食品組成物、予防剤、治療剤等の医薬品組成物）に応じて任意に定めることができ。本発明はこれに限定されないがその含量としては、全体量に対して通常、０．００１〜１００％（ｗ／ｗ）、特に０．１〜１００％が好ましい。
【００５５】
以下、本発明の実施例を挙げて本発明についてさらに詳細に説明を行うが、本発明は、これらの具体的な実施例に限定されない。
【００５６】
以下の実施例において用いられた測定機器、方法は下記の通りである。なお、ＣＤＣｌ3、Ｃ5Ｄ5Ｎはそれぞれクロロホルム、ピリジンの重水素化溶媒を示す。
旋光性：ＤＩＰ１０００偏光計（ＪＡＳＣＯ製、ＭｅＯＨ又はＣＨＣｌ3溶媒）
ＵＶスペクトル：ＵＶ−１６５０ＰＣ装置（島津製作所製、ＭｅＯＨ溶媒）
ＩＲスペクトル：ＦＴ／ＩＲ−５３００分光光度計（ＪＡＳＣＯ製）
1Ｈ及び13Ｃ ＮＭＲスペクトル：Ｕｎｉｔｙ６００ ＮＭＲ分光計（バリアン社製、ＣＤＣｌ3またはＣ5Ｄ5Ｎ（グリコシド）溶媒、1Ｈ：６００ＭＨｚ、13Ｃ：１５０ＭＨｚ、内部基準物質（1Ｈ）テトラメチルシラン，（13Ｃ）Ｃ5Ｄ5Ｎ
質量分析：ＪＭＳ ＡＸ５００分光計（ＥＩ−ＭＳ、ＦＡＢ−ＭＳ、日本電子製）、ＧＣ／ＭＳ（ＨＰ５８９０、ＳＰＢ−１、ヒューレットパーカード社）
結晶構造Ｘ線解析システム：（ｍａＸｕｓ（Ｂｒｕｋｅｒ Ｎｏｎｉｕｓ， ＤＥＬＦＴ ＆ Ｍａｃ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｊａｐａｎ））
カラムクロマトグラフィー：Ｓｅｐｈａｄｅｘ−ＬＨ２０（１８−１１１μＭ、アマシャム・ファルマシア・バイオテック社製，ＣＨＣｌ3−ＭｅＯＨ，１：１）、シリカゲルＫｉｅｓｅｌｇｅｌ６０（メルク社製、０．０４０−０．０６３ｍｍ）、ＤＩＡＩＯＮカラム（ＨＰ２０ ｌｏｔ ２Ｄ５０３）、三菱化学社製）
分取ＨＰＬＣ：Ｃｏｓｏｍｏｓｉｌ逆相カラム（１０ｘ２５０ｍｍ ５Ｃ１８−ＡＲ，Ｔｙｐｅ Ｗａｔｅｒｓ， Ｍａｎｕｆ． Ｎｏ． Ｈ１４７７２、ナカライテスク社製）、ＪＡＳＣＯ８８０ＰＵポンプ、ＪＡＳＣＯ８７５ＵＶ ＵＶ検出器、及びＥＲＣ７５１２ ＥＲＭＡ ＣＲ ＩＮＣ ＲＩ検出器
分取ＴＬＣ：２０ｘ２０ｃｍ ＲＰ１８Ｆ254S（メルク社製）
【実施例１】
【００５７】
本実施例で用いたニガウリは、インド産の乾燥ニガウリ（Ｍ． ｃｈａｒａｎｔｉａ Ｌ．）を使用した。
【００５８】
（ニガウリの溶媒抽出）
乾燥ニガウリ２０ｋｇを機械的に粉末化し、室温で１ヶ月メタノール（ＭｅＯＨ）で抽出した。この抽出物を減圧濾過し、減圧濃縮した。次いで４１５．８ｇのメタノール抽出物を水（Ｈ2Ｏ）に懸濁し、エーテル（Ｅｔ2Ｏ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、及びｎ−ブタノールで順に抽出して、エーテル抽出物６１ｇ、酢酸エチル抽出物４２ｇ及びｎ−ブタノール抽出物２９８ｇの抽出物をそれぞれ得た。
【００５９】
（ニガウリエーテル抽出物の精製）
上記の操作にて得られたエーテル抽出物の２７ｇをヘキサン／ＥｔＯＡｃ濃度勾配（順次ＥｔＯＡｃ濃度が高くなる）を用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけ、２４の分画に分けた（分画液１〜２４）。分画液５はＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラムにかけて３つのサブフラクションを得た（分画液５−１〜５−３）。この分画液５−３をＯＤＳ ＲＰ−１８（Ｃｏｓｏｍｏｓｉｌ逆相カラム）でＨＰＬＣにかけて化合物１０及び１１（５３ｍｇ））を得た。分画液９をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０（ＭｅＯＨ：ＣＨ2Ｃｌ2 １：１）で精製して化合物９（３．４ｍｇ）を得た。分画液１３をＥｔＯＡｃ中で結晶化することにより化合物４（１７８ｍｇ）を得た。分画液１７をＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０クロマトグラフィー（ＭｅＯＨ：ＣＨ2Ｃｌ2 １：１）により３つのサブフラクションに分けた（分画液１７−１〜１７−３）。この分画液１７−２をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ：Ｅｔ2Ｏ＝４：３：１）にかけ、化合物５（１７５ｍｇ）を得た。分画液２０はＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０で３つのサブフラクションに分けた（分画液２０−１〜２０−３）。分画液２０−２をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝６：４〜０：１０）で更に精製して化合物６（２５．２ｍｇ）、化合物１（３．２ｍｇ）、化合物５（７６ｍｇ）及び化合物７（２１．３ｍｇ）を得た。
【００６０】
（ニガウリ酢酸エチル抽出物の精製）
前記の操作にて得られた酢酸エチル抽出物の３ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１５：３：１−下層、及びＥｔＯＡｃ）にかけて８つの分画液を得た（分画液１〜８）。シリカゲルカラムクロマトグラフィーとＯＤＳ ＲＰ−１８ （Ｃｏｓｏｍｏｓｉｌ逆相カラム）（ｎ−ヘキサン：ＥｔＯＡｃ＝７：３〜０：１０、及びＭｅＯＨ）の組み合わせにより分画液１から化合物２（９．３ｍｇ）を得、分画液３のＳｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０カラム及びＯＤＳ ＲＰ−１８（Ｃｏｓｏｍｏｓｉｌ逆相カラム）（ＣＨ3ＣＮ：Ｈ2Ｏ＝１３：７）による精製によって化合物３（７．８ｍｇ）を得た。
【００６１】
（ニガウリｎ−ブタノール抽出物の精製）
前記の操作にて得られたｎ−ブタノール抽出物の１５ｇをＤＩＡＩＯＮカラムにかけてＨ2ＯとＭｅＯＨの混合液でＭｅＯＨ量を増やしながら溶出し、さらにアセトンで溶出した（Ｈ2Ｏ，５０％ＭｅＯＨ，ＭｅＯＨ、アセトンの順に溶出）。ＭｅＯＨで溶出した分画１６．２ｇに、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ＝１５：３：１−下層；ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ＝９：１及び４：１）、ＯＤＳ ＲＰ−１８（Ｃｏｓｏｍｏｓｉｌ逆相カラム）（ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏ：９：１）及びシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝１７：３）を組み合わせて用いて化合物８（８．４ｍｇ）を得た。
【００６２】
以上のように、実施例１で得られたニガウリのエーテル抽出物、酢酸エチル抽出物、ｎ−ブタノール抽出物からサイズ排除、順相、逆相、イオン交換クロマトグラフィーや再結晶技術等により、１１種類の化合物（１−１１）が得られた。
【００６３】
（得られた化合物の同定）
（１）化合物１
化合物１の高分解能ＥＩ−ＭＳの結果は分子式Ｃ31Ｈ52Ｏ3を支持し、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル、13Ｃ−ＮＭＲスペクトル、ＣＯＳＹ、ＨＭＢＣ、及びＮＯＥＳＹ実験等から、化合物１の構造は、下記構造式１の３β，２５−ジヒドロキシ−７β−メトキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエンであると決定された。
【００６４】
【化１９】
【００６５】
３β，２５−ジヒドロキシ−７β−メトキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエン（１）：
非晶系粉末、［α］20D＝・７３．２（ｃ＝０．８、ＣＨＣｌ3），ＩＲ（ＫＢｒ）：３３３６，１４４９，１０６８ｃｍ-1。
1Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）・：０．７０，０．９２，０．９８，１．０４，１．２１（各ｓ及び３Ｈ，３０，１８，１９，２９及び２８−ＣＨ3），０．８８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ，２１−ＣＨ3），１．３１（６Ｈ，２６及び２７−ＣＨ3），２．１６（ｍ，２２−Ｈ），２．２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５，４．５Ｈｚ，１０−Ｈ），３．３４（ｓ，７−ＯＣＨ3），３．４３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４，１．０Ｈｚ，７−Ｈ），３．５１（ｂｒｓ，３−Ｈ），５．５７（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，２３−Ｈ），５．５９（ｍ，６及び２２−Ｈ）。
13Ｃ−ＮＭＲデータ：図１の表に示す。
ポジティブ型高分解能ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４７２．３９１５ ［Ｍ］+，Ｃ31Ｈ52Ｏ3，計算値４７２．３９０５。
【００６６】
（２）化合物２
化合物２の分子式は高分解能ＥＩ−ＭＳによってＣ32Ｈ54Ｏ3であることが示され、1Ｈ及び13Ｃ−ＮＭＲスペクトル、Ｘ線結晶構造解析などから、化合物２は下記構造式２の３β，２５−ジメトキシ−７β−ヒドロキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエンであると決定された。
【００６７】
【化２０】
【００６８】
３β，２５−ジメトキシ−７β−ヒドロキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエン（２）：
非晶質粉末；［α］17D＝・１５．３（ｃ＝１．５、ＣＨＣｌ3），ＩＲ（ＫＢｒ）：３４５３，２９４３，１４６７，１０３２ｃｍ-1。
1Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）・：０．６９，０．９２，１．０３，１．２０（各ｓ及び３Ｈ，３０，１８，１９及び２８−ＣＨ3），１．２４（ｓ，６Ｈ，２６及び２７−ＣＨ3），０．９８（ｓ，３Ｈ，２９−Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ，２１−ＣＨ3），２．１８（ｍ，２２−Ｈ），２．２７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．５，４．５Ｈｚ，１０−Ｈ），３．１４（ｓ，２５−ＯＣＨ3），３．３４（ｓ，７−ＯＣＨ3），３．４２（ｂｒｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，７−Ｈ），３．５１（ｂｒｓ，３−Ｈ），５．３７（ｄ，Ｊ＝１５．８Ｈｚ，２３−Ｈ），５．５０（ｄｄｄ，Ｊ＝１５．８，８．７，５．７Ｈｚ，２４−Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，６−Ｈ）。
13Ｃ−ＮＭＲデータ：図１の表に示す。
ポジティブ型高分解能ＥＩ−ＭＳ ｍ／ｚ ４８６．４０５１ ［Ｍ］+， Ｃ32Ｈ54Ｏ3、計算値４８６．４０７３。
結晶データ：Ｃ32Ｈ53Ｏ3，Ｍｒ＝４８６．７８１，斜方晶，Ｐ２1２1２1，ａ＝７．７２２０（４）Å，ｂ＝１０．０９６０（７）Å，ｃ＝３８．７６２（４）Å，・＝９０．００°，・＝９０．００°，・＝９０．００°，Ｖ＝３０２１．９（４）Å3，Ｍｏ Ｋ・ｒａｄｉａｔｉｏｎ，・＝０．７１０７３，ＤＩＰイメージプレート，Ｆ2でリファイン，フルマトリクス最小二乗リファインメント，Ｒ（ｇｔ）＝０．０７３８，ｗＲ（ｇｔ）＝０．２０８８，Ｓ（ｒｅｆ）＝１．０４３，４３３３反射，３１７パラメータ，Ｈ原子の座標のみリファイン，計算重量シグマ，セルリファインメント：Ｓｃａｌｅｐａｃｋ（ＨＫＬ），データリダクション：ｍａＸｕｓ，構造のリファインに用いたプログラム：ＳＨＥＬＸＬ−９７。
【００６９】
（３）化合物３
化合物３のポジティブ型高分解能ＦＡＢ−ＭＳによって、ｍ／ｚ６７３．８３９１における［Ｍ＋Ｋ］+に基づく準分子イオンピーク（Ｃ36Ｈ58Ｏ9Ｋ）が示された。13Ｃスペクトルでは以前に単離されているモノデスモシディック−３β，２５−ジヒドロキシ−７β−メトキシククルビタ−５（２３Ｅ）−ジエン，１９−アール（５）を示すピークと、アロピラノシル単位を示すピークが見られた。ＧＣ／ＭＳ、1Ｈ−ＮＭＲスペクトル及び旋光性等のデータから化合物３の構造は３β，７β，２５−トリヒドロキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエン−１９−アール ３β−Ｄ−アロピラノースと決定された（構造式３）。
【００７０】
【化２１】
【００７１】
３β，７β，２５−トリヒドロキシククルビタ−５，（２３Ｅ）−ジエン−１９−アール，３β−Ｄ−アロピラノース（３）：
［α］20D＝＋１１．３２（ｃ＝０．９、ＭｅＯＨ），ＩＲ（ＫＢｒ）：３３７８，２９４９，１４６４，１０８１ｃｍ-1。
1Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ3ＯＤ）・：０．８１，０．９１，１．０８，１．２１（各ｓ及び３Ｈ，３０，１８，１９及び２９−ＣＨ3），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ，２１−ＣＨ3），１．２５（ｓ，６Ｈ，２６及び２７−ＣＨ3），１．３１（３Ｈ，２８−ＣＨ3），３．２７（ｄｄ，Ｊ＝７．９，３．２Ｈｚ，１Ｈ，７−Ｈ），３．４４（ｄｄ，Ｊ＝９．４，２．１，１Ｈ，４’−Ｈ），３．６３（ｍ，２Ｈ，６ａ’及び５’−Ｈ），３．７９（ｄ，Ｊ＝９．２，１Ｈ，６ｂ’−Ｈ），３．９９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，７−Ｈ），４．０２（ｄ，Ｊ＝６．０，２’−Ｈ），４．６０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１’−Ｈ），５．５７（ｍ，２３−Ｈ），５．８７（ｂｒｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，６−Ｈ），１０．２３（ｓ，１Ｈ，１９−Ｈ）．（３００ＭＨｚ，Ｃ5Ｄ5Ｎ）・：０．７４，０．８４，１．１２，（各ｓ及び３Ｈ，３０，１８及び２９−ＣＨ3），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２１−ＣＨ3），１．５５（ｓ，６Ｈ，２６及び２７−ＣＨ3），１．５９（ｓ，３Ｈ，２８−ＣＨ3），３．８７（ｄｄ，Ｊ＝７．９，３．２Ｈｚ，１Ｈ，７−Ｈ），４．１８（ｄｄ，Ｊ＝９．４，２．１，１Ｈ，４’−Ｈ），４．３５及び４．４９（ｍ，２Ｈ，６ａ’及び５’−Ｈ），５．３４（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１’−Ｈ），５．９２（ｂｒｍ，２３及び２４−Ｈ），６．２３（ｂｒｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，６−Ｈ），１０．６０（ｓ，１９−Ｈ）。
13Ｃ−ＮＭＲデータ：図１の表に示す。
ポジティブ型高分解能ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ ６７３．８３９１ ［Ｍ＋Ｋ］+，Ｃ36Ｈ58Ｏ9Ｋ、計算値６７３．８４０５。
【００７２】
（４）化合物４
化合物４の構造は、５，１９エポキシ−３，２５ジヒドロキシククルビタ−６，（２３Ｅ）−ジエンと同定された（13Ｃ−ＮＭＲデータ：図１の表に示す）（構造式４）。この化合物４はｍｏｍｏｒｄｉｃｏｓｉｄｅ Ｉの加水分解によって既に得られているものであるが（Ｍｕｌｈｏｌｌａｎｄ ｅｔ． ａｌ． Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９９７年、第４５巻、p.３９１−３９５）、ニガウリ抽出物からは初めて得られた。
【００７３】
【化２２】
【００７４】
（５）化合物５
化合物５の構造はＸ線結晶解析により、３β，７β，２５−トリヒドロキシククルビタ−５，（２３Ｅ）ジエン−１９−アールと同定された（構造式５）。
【００７５】
【化２３】
【００７６】
（６）化合物６〜１１
化合物６〜９は、物理的及び分光学的データを文献に報告されているものと比較することにより、それぞれ５β，１９−エポキシククルビタ−６，（２３Ｅ）−ジエン−３β，１９，２５−トリオール、５β，１９−エポキシ−１９−メトキシククルビタ−６，（２３Ｅ）−ジエン−３β，２５−ジオール、パラメトキシ安息香酸と同定された。
化合物１０及び１１（１：１混合物として単離される）はＣｈａｒａｎｔｉｎの２つのアグリコンであるシトステロール及びスティグマスタジエノールとして同定された。
【実施例２】
【００７７】
（化合物４および化合物５の抗糖尿病活性試験）
次いで、化合物４ならびに５を大量に単離し、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗糖尿病活性について試験を行った。
【００７８】
体重約３０ｇの雄ｄｄＹ系マウスをＳＬＣ（静岡）から購入し、２１±２℃の一定温度下、５５±１５％の湿度、１２時間の明暗周期で実験開始まで１週間飼育した。
【００７９】
アロキサン（シグマ）を４０ｍｇ／ｋｇの用量で静脈内投与することにより糖尿病を誘発させた。糖尿病誘発後５日後にマウスを１８時間絶食させた。
各試験試料を１％アラビアガム溶液に懸濁した。陽性対照としてグリベンクラミド（シグマ）を２００ｍｇ／ｋｇの用量で使用した。血糖値は試料投与直前、試料投与後２、４及び６時間後にＧｌｕｃｏｍｅｔｅｒＤＥＸ（バイヤー・ヘルスケア、米国）にて経時的に測定した。コントロール群のマウスには、試料の代わりに１％のアラビアガム溶液を投与した。各試料のマウス（グリベンクラミド群：４匹、化合物４群：３匹、化合物５群：３匹）を用いて試験を行った。
各時点の血糖値は、試料投与直前の血糖値に対する相対血糖値（％）として算出した。
【００８０】
得られた結果を図２に示す。各抽出物の静脈内投与（４００ｍｇ／ｋｇ）によりグリベンクラミド（２００ｍｇ／ｋｇ）に比肩する著明な血糖値低下効果が見られた。
【産業上の利用可能性】
【００８１】
本発明により、天然物であるニガウリより簡便な操作により容易に、高血糖値降下作用を有する抽出物を利用することができ、またその中でも特定の化合物により、より高い血糖値降下作用を有する血糖値降下剤を提供することができる。これらの抽出物や化合物を含む食品・医薬品組成物を提供することにより、簡便にヒトに投与することが可能となり、服用しやすい糖尿病患者用食品・医薬品組成物を提供することができ、産業上の利用価値は高いものである。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】化合物１〜４の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルデータ（１５０ＭＨｚ）を示す表である。各化合物の位置番号に対応するケミカルシフト（ｐｐｍ）を表す。
【図２】アロキサン誘発糖尿病モデルマウスにおける化合物４及び化合物５の効果を示す。縦軸は試料投与直前の血糖値に対する相対血糖値（％）を、横軸は試料投与後の経過時間をしめし、それぞれの記号は、◆：グリベンクラミド ２００ｍｇ／ｋｇ、■：化合物４ ４００ｍｇ／ｋｇ、▲：化合物５ ４００ｍｇ／ｋｇを表す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物を有効成分として含むことを特徴とする血糖値降下剤。
【請求項２】
前記有機溶媒抽出物が、アルコールによる抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の血糖値降下剤。
【請求項３】
前記アルコールが、低級アルコールであることを特徴とする請求項２に記載の血糖値降下剤。
【請求項４】
前記アルコールが、メタノール、エタノール、プロパノール及びブタノールからなる群から選ばれる少なくとも１種のアルコールであることを特徴とする請求項２に記載の血糖値降下剤。
【請求項５】
前記有機溶媒抽出物が、これをさらにエーテル抽出した画分であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の血糖値降下剤。
【請求項６】
前記有機溶媒抽出物が、これをさらに酢酸エチル抽出した画分であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の血糖値降下剤。
【請求項７】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記一般式１にて示される血糖値降下作用を有する化合物。
（一般式１において、Ｒ1は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、またはアロピラノシロキシ基を表し、Ｒ2はＸにおいて二重結合を形成するかＲ5と共に環状エーテルを形成し、Ｒ3は水素原子、水酸基、アルキル基、またはアルコキシ基を表し、Ｒ4は水素原子、水酸基、アルキル基、又はアルコキシ基を表し、Ｒ5は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、もしくはホルミル基を表すか、またはＲ2と共に環状エーテルを形成し、ＸはＲ2を含めて二重結合を形成するか、またはＲ2が環状エーテルを形成する場合にはＲ2を含めずに二重結合を形成する炭化水素基を表す。）
【化１】
【請求項８】
下記構造式１にて示される化合物。
【化２】
【請求項９】
下記構造式２にて示される化合物。
【化３】
【請求項１０】
下記構造式３にて示される化合物。
【化４】
【請求項１１】
請求項７乃至９のいずれかの化合物であって、ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、血糖値降下作用を有する化合物。
【請求項１２】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記構造式４にて示される血糖値降下作用を有する化合物。
【化５】
【請求項１３】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記構造式５にて示される血糖値降下作用を有する化合物。
【化６】
【請求項１４】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））をメタノール中で抽出し、当該抽出液をさらにエーテル抽出して得られる、血糖値降下作用を有することを特徴とするニガウリ抽出物。
【請求項１５】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））をメタノール中で抽出し、当該抽出液をさらに酢酸エチル抽出して得られる、血糖値降下作用を有することを特徴とするニガウリ抽出物。
【請求項１６】
上記請求項１乃至５のいずれかに記載の血糖値降下剤を有効成分として含有し、血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物。
【請求項１７】
上記請求項６乃至１２のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有し、血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物。
【請求項１８】
上記請求項１３に記載のニガウリ抽出物を有効成分として含有し、血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物。
【請求項１９】
上記請求項１４に記載のニガウリ抽出物を有効成分として含有し、血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物。
【請求項１】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物を有効成分として含むことを特徴とする血糖値降下剤。
【請求項２】
前記有機溶媒抽出物が、アルコールによる抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の血糖値降下剤。
【請求項３】
前記アルコールが、低級アルコールであることを特徴とする請求項２に記載の血糖値降下剤。
【請求項４】
前記アルコールが、メタノール、エタノール、プロパノール及びブタノールからなる群から選ばれる少なくとも１種のアルコールであることを特徴とする請求項２に記載の血糖値降下剤。
【請求項５】
前記有機溶媒抽出物が、これをさらにエーテル抽出した画分であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の血糖値降下剤。
【請求項６】
前記有機溶媒抽出物が、これをさらに酢酸エチル抽出した画分であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれかに記載の血糖値降下剤。
【請求項７】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記一般式１にて示される血糖値降下作用を有する化合物。
（一般式１において、Ｒ1は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、またはアロピラノシロキシ基を表し、Ｒ2はＸにおいて二重結合を形成するかＲ5と共に環状エーテルを形成し、Ｒ3は水素原子、水酸基、アルキル基、またはアルコキシ基を表し、Ｒ4は水素原子、水酸基、アルキル基、又はアルコキシ基を表し、Ｒ5は水素原子、水酸基、アルキル基、アルコキシ基、もしくはホルミル基を表すか、またはＲ2と共に環状エーテルを形成し、ＸはＲ2を含めて二重結合を形成するか、またはＲ2が環状エーテルを形成する場合にはＲ2を含めずに二重結合を形成する炭化水素基を表す。）
【化１】
【請求項８】
下記構造式１にて示される化合物。
【化２】
【請求項９】
下記構造式２にて示される化合物。
【化３】
【請求項１０】
下記構造式３にて示される化合物。
【化４】
【請求項１１】
請求項７乃至９のいずれかの化合物であって、ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、血糖値降下作用を有する化合物。
【請求項１２】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記構造式４にて示される血糖値降下作用を有する化合物。
【化５】
【請求項１３】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））の有機溶媒抽出物中に含まれ、下記構造式５にて示される血糖値降下作用を有する化合物。
【化６】
【請求項１４】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））をメタノール中で抽出し、当該抽出液をさらにエーテル抽出して得られる、血糖値降下作用を有することを特徴とするニガウリ抽出物。
【請求項１５】
ニガウリ（学名モモルディカカランティア（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ））をメタノール中で抽出し、当該抽出液をさらに酢酸エチル抽出して得られる、血糖値降下作用を有することを特徴とするニガウリ抽出物。
【請求項１６】
上記請求項１乃至５のいずれかに記載の血糖値降下剤を有効成分として含有し、血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物。
【請求項１７】
上記請求項６乃至１２のいずれかに記載の化合物を有効成分として含有し、血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物。
【請求項１８】
上記請求項１３に記載のニガウリ抽出物を有効成分として含有し、血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物。
【請求項１９】
上記請求項１４に記載のニガウリ抽出物を有効成分として含有し、血糖値降下作用を有する食品・医薬品組成物。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００７−１４５７８２（Ｐ２００７−１４５７８２Ａ）
【公開日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−３４５３１９（Ｐ２００５−３４５３１９）
【出願日】平成１７年１１月３０日（２００５．１１．３０）
【出願人】（０００００６１３８）明治乳業株式会社 (265)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１１月３０日（２００５．１１．３０）
【出願人】（０００００６１３８）明治乳業株式会社 (265)
【Ｆターム（参考）】
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