ビオチン及びビタミンＢ２含有水性液剤組成物
【課題】 ビオチン及びビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物であるにも拘らず、ビタミンＢ２に起因し発生する活性酸素によってビオチンが分解されることを防止し、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性を十分に向上させることを可能とする水性液剤組成物を提供すること。
【解決手段】 ビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物を含有することを特徴とする水性液剤組成物。
【解決手段】 ビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物を含有することを特徴とする水性液剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水性液剤組成物に関し、より詳しくは、ビオチンを含有する医薬品、医薬部外品、食品等の分野に応用される水性液剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビタミンＢ２は、人体に対し細胞の再生や成長を助けたり、蛋白質、炭水化物、脂質の代謝を促進するといった効果を有することが知られている。また、ビオチンは、ビタミンＨとも称される補酵素の１種であって、人体に対し生体内の４種のカルボキシラーゼの必須補酵素として作用することが知られている（非特許文献１参照）。
【０００３】
しかしながら、ビタミンＢ２は紫外線波長領域の光によって励起し、基底状態に戻るときにエネルギーを放出し、この放出エネルギーが水性液剤組成物中の溶存酸素や含酸素化合物の三重項酸素を活性酸素に変化させてしまうことが知られている（非特許文献２及び非特許文献３参照）。
【０００４】
一方、ビオチンは、活性酸素によって酸化分解されることが知られており、特開平７−９７３２２号公報（特許文献１）では、ビオチンを用いた一重項酸素消去剤が開示されている。
【特許文献１】特開平７−９７３２２号公報
【非特許文献１】日本ビタミン学会編「ビタミンハンドブック２ 水溶性ビタミン」、（株）化学同人、ｐ．１１５〜ｐ．１２６、１９８９年発行
【非特許文献２】豊崎俊幸著，Ｎｅｗ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１,ｐ．７０〜ｐ．７６，１９９２年発行
【非特許文献３】ＰＣＪｏｓｈｉ著，Ｉｎｄｉａｎ Jｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，Ｖｏｌ．２６，ｐ１８６〜ｐ．１８９，１９８９年６月発行
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、ビオチン及びビタミンＢ２を配合した水性液剤組成物を調製した場合、ビタミンＢ２の光励起に起因する活性酸素が発生し、かかる活性酸素によってビオチンが分解されてしまうため、水性液剤組成物におけるビオチンの安定性を保持することは極めて困難であった。そのため、ビタミンＢ２とビオチンとを配合した水性液剤組成物において、ビオチンをより安定に存在させることのできる水性液剤組成物が求められている。
【０００６】
本発明は、上記従来技術の有する課題に鑑みてなされたものであり、ビオチン及びビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物であるにも拘らず、ビタミンＢ２に起因し発生する活性酸素によってビオチンが分解されることを防止し、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性を十分に向上させることを可能とする水性液剤組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、トシシ抽出物に優れた活性酸素消去作用があり、かかるトシシ抽出物を含有させることでビオチン及びビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中におけるビオチンの光安定性を非常に効率よく向上させられることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明の水性液剤組成物は、ビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物を含有することを特徴とするものである。
【０００９】
上記本発明の水性液剤組成物としては、ビオチン１質量部に対して、ビタミンＢ２を５〜１６０００質量部及びトシシ抽出物を原生薬に換算して１〜１００００質量部含有することが好ましい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、ビオチン及びビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物であるにも拘らず、ビタミンＢ２に起因し発生する活性酸素によってビオチンが分解されることを防止し、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性を十分に向上させることを可能とする水性液剤組成物を提供することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明をその好適な実施形態に即して詳細に説明する。
【００１２】
本発明の水性液剤組成物は、ビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物を含有することを特徴とするものである。
【００１３】
本発明において用いられるビタミンＢ２（リボフラビン）は、リン酸エステル及び酪酸エステル等のような各種誘導体等として水性液剤組成物に配合することが可能である。
【００１４】
また、本発明に用いられる前記トシシ抽出物としては、トシシの水抽出物、流エキス、軟エキス、乾燥エキス、チンキ等のいずれのものであってもでも良い。このような「トシシ（兎絲子）」の基原は、ヒルガオ科 C.australis R Br.（Convolvulaceae）兎絲 Cuscuta chinensis Lam.（ハマネナシカズラ）の成熟種子を乾燥したものであり、ネナシカズラ C.japonica Choisyも用いられる。なお、前記「トシシ（兎絲子）」は、滋養強壮生薬として知られているものである。
【００１５】
本発明の水性液剤組成物の調製方法としては特に制限されず、所定量のビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物の各成分を混合、溶解することにより調製する方法を挙げることができる。このような水性液剤組成物の調製の際には、必要に応じて、ろ過、滅菌等を行ってもよい。
【００１６】
また、本発明の水性液剤組成物の製造の際において、ビオチンの配合量は水性液剤組成物の使用目的及び用途に応じて適宜選択されるものではあるが、ビオチンの配合（含有）量が０．００００５〜１ｍｇ／ｍＬであることが好ましく、０．０００１〜０．０１ｍｇ／ｍＬであることがより好ましい。ビオチンの配合量が前記下限未満では、ビタミンとしての効果を期待しにくい傾向にあり、他方、前記上限を超えると、溶解が困難となる傾向にある。
【００１７】
他方、ビタミンＢ２の配合（含有）量は、液剤の使用目的及び用途に応じて適宜選択されるものではあるが、０．０００２５ｍｇ／ｍＬ以上であることが好ましく、内服用液剤等ではビタミンとしての効果の観点から、通常０．０１ｍｇ／ｍＬ以上であることがより好ましい。また、ビタミンＢ２の配合（含有）量としては、ビオチン１質量部に対してビタミンＢ２の配合量が５〜１６０００質量部であることが好ましく、５〜２５０質量部であることがより好ましく、更に好ましくは５〜１００質量部である。ビオチン１質量部に対するビタミンＢ２の配合量が前記下限未満では、ビタミンとしての効果を期待しにくい傾向にあり、他方、前記上限を超えても、ビタミンとしての効果は変わらない傾向にある。
【００１８】
さらに、トシシ抽出物の配合（含有）量は原生薬量としては、生薬としての効果の観点から、通常０．０１ｍｇ／ｍＬ以上であることが好ましい。また、トシシ抽出物の配合（含有）量としては、ビオチン１質量部に対して原生薬に換算したトシシ抽出物の配合量が１〜１００００質量部であることが好ましく、２５０〜８０００質量部であることがより好ましい。ビオチン１質量部に対するトシシ抽出物の配合量が前記下限未満では、活性酸素を除去する効果が低くなり、得られる水性液剤組成物におけるビオチンの光安定性が低下する傾向にあり、他方、前記上限を越えても、活性酸素除去の効果は増大しない傾向にある。
【００１９】
また、本発明の水性液剤組成物には、ビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物の他、本発明の効果を損なわない範囲において、通常液剤に配合される成分を適宜配合することができる。このような成分としては、例えば、各種ビタミン（ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ及びそれらの塩、エステル、誘導体等）、アミノ酸（タウリン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−アルギニン、Ｌ−トリプトファン等）、生薬（ジオウ、カンゾウ、ニンジン、芍薬、冬虫夏草、ローヤルゼリー等）、カフェイン、多価アルコール、有機酸、糖アルコール、甘味剤、香料、保存剤が挙げられる。さらに、本発明の水性液剤組成物のｐＨとしては、服用感を向上するとの観点から、ｐＨは２〜５に調整することが好ましい。
【００２０】
このようにして得られる本発明の水性液剤組成物は、内服用液剤、ドリンク剤等として提供される。
【実施例】
【００２１】
以下、予備試験１〜３、実施例１〜２及び比較例１〜４に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２２】
（予備試験１：トシシ抽出物による活性酸素消去効果）
トシシ抽出物０．５ｇ（原生薬として４．５ｇ）と水２５ｍＬとを１０ｍｉｎ振とうした後に３０００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離して上澄液（Ｓｐ）を抽出した。
【００２３】
このようなＳｐを用いてＳｐ添加量の異なる溶液１〜６を調製した。すなわち、２５ｍＭのクエン酸Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ３）１．２５ｍＬ、４４ｍＭの１，３−ジメチル−５−ピラゾロン（ＤＭＰＯ）０．２５ｍＬ、２０ｍＭのＨ２Ｏ２０．２５ｍＬ、０．２ｍＭのＦｅ２＋０．２５ｍＬ及び前記Ｓｐ（ＡｍＬ）と水（（０．７５−Ａ）ｍＬ）との混合物０．７５ｍＬを添加して溶液１〜６（２．７５ｍＬ）を調製した。前記溶液１〜６におけるそれぞれのＳｐ添加量、トシシ抽出物の濃度及びトシシの原生薬としての濃度を表１に示す。なお、前記溶液１〜６において、Ｈ２Ｏ２及びＦｅ２＋は活性酸素の発生源として用いられるものである。
【００２４】
［活性酸素の残存率１］
前記溶液１〜６について、電子スピン共鳴吸収（ＥＳＲ）測定装置（日本電子社製、ＴＥ−１００）を用い、Ｆｅ２＋の添加２分後に掃引を開始し、ＥＳＲシグナル比を測定して活性酸素の残存率を求めた。このようにして測定されたＥＳＲシグナル比及び活性酸素の残存率の結果を表１及び図１に示す。なお、電子スピン共鳴吸収（ＥＳＲ）測定装置は、ＥＳＲ掃引開始３６秒後にＥＳＲシグナルが検出されるように設定した。
【００２５】
【表１】
【００２６】
表１及び図１から明らかなように、トシシ原生薬濃度が高いほど、活性酸素の残存率が低く、トシシ抽出物に活性酸素消去効果があることが確認された。
【００２７】
（予備試験２：トシシ抽出物による活性酸素消去効果）
トシシ抽出物０．３ｇ（原生薬としては２．７ｇ）と水２５ｍＬとを１０ｍｉｎ振とうした後に３０００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離して上澄液（Ｓｐ）を抽出した。
【００２８】
このようにして得られたＳｐを用い、０．１ｍＭのリボフラビン溶液０．５ｍＬ、Ｓｐ０．５ｍＬ及び１，３−ジメチル−５−ピラゾロン（ＤＭＰＯ）４０μＬを配合して溶液７を調製した。
【００２９】
また、トシシ抽出物０．１１ｇ（原生薬としては１．０ｇ）と水２５ｍＬとを１０ｍｉｎ振とうした後に３０００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離して抽出した上澄液（Ｓｐ）を用いた以外は溶液７と同様にして溶液８を調製した。
【００３０】
さらに、Ｓｐを添加する代わりに水を添加した以外は溶液７と同様にして溶液９を調製した。
【００３１】
このようにして調製された各溶液におけるトシシ抽出物の濃度及びトシシの原生薬としての濃度を表２に示す。なお、前記リボフラビン溶液は、２５ｍＭのクエン酸Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ３）を用いて調製した。また、本予備試験において、リボフラビンは活性酸素の発生源として含有されたものであり、光照射によって活性酸素を発生させた。
【００３２】
［活性酸素の残存率２］
電子スピン共鳴吸収（ＥＳＲ）測定装置（日本電子社製、ＴＥ−１００）を用い、前記溶液７〜９をそれぞれＥＳＲ偏平セルにとり、ＥＳＲ磁場にセットした。次に、光源ランプとして太陽光に近いキセノンランプを使用して２００００Ｌｕｘの光を照射し、９秒後にＥＳＲの掃引を開始し、ＥＳＲシグナル比を測定して活性酸素の残存率を求めた。このようにして測定されたＥＳＲシグナル比及び活性酸素の残存率の結果を表２及び図２に示す。なお、電子スピン共鳴吸収（ＥＳＲ）測定装置は、ＥＳＲ掃引開始３６秒後にＥＳＲシグナルが検出されるように設定した。
【００３３】
【表２】
【００３４】
表２及び図２から明らかなように、ビタミンＢ２を含有させた溶液においてもトシシの原生薬濃度が高い溶液ほど、活性酸素の残存率が低くなることが確認された。
【００３５】
（予備試験３：ビタミンＢ２の存在下におけるビオチンの安定性と活性酸素の発生量の測定）
表３に示す配合量で溶液１０及び１１を調製し、以下のようにして溶液中のビオチンの安定性の評価及び活性酸素の発生量を測定した。
【００３６】
【表３】
【００３７】
［ビオチンの残存率］
前記溶液１０及び１１をそれぞれ白色ガラスびんに入れ、光源ランプとして太陽光に近いキセノンランプを使用して２００００Ｌｕｘの光を照射し、３６秒後、１５６秒後及び２７６秒後、すなわち、光照射量２００Ｌｕｘ・ｈｒ、８６７Ｌｕｘ・ｈｒ及び１５３３Ｌｕｘ・ｈｒの時点の各溶液をサンプリングして、ＨＰＬＣ（液体クロマトグラフ）法を用いて溶液１０及び１１に残存するビオチンの量を測定し、ビオチンの残存率を求めた。得られた結果を図３に示す。
【００３８】
なお、従来より製剤中のビオチンの定量については、主にバイオアッセイ法が実施されていたが、バイオアッセイ法ではビオチンの分解物（生体中ではビオチンと同等の活性を有さない）もビオチンと同等の活性を示してしまうため、今回はＨＰＬＣ（液体クロマトグラフ）法でビオチンの真の残存量を測定し、安定性を評価した。
【００３９】
［活性酸素の発生量］
前記溶液１０及び１１をそれぞれＥＳＲ偏平セルにとり、ＥＳＲ磁場にセットした。次に、光源ランプとして太陽光に近いキセノンランプを使用して２００００Ｌｕｘの光を照射し、３６秒後、１５６秒後及び２７６秒後、すなわち、光照射量２００Ｌｕｘ・ｈｒ、８６７Ｌｕｘ・ｈｒ及び１５３３Ｌｕｘ・ｈｒの時点でＥＳＲシグナル比を測定して活性酸素の発生量を求めた。このようにして測定されたＥＳＲシグナル比を図４に示す。
【００４０】
図３のグラフから明らかなように、ビオチンとビタミンＢ２とを含有する溶液１０においては、光照射量に応じてビオチンの残存率が低下することが確認された。また、図４のグラフから明らかなように、ビオチンとビタミンＢ２とを含有する溶液１０においては、光照射によって活性酸素が発生し、光照射量の増加に伴って活性酸素の発生量が増加していることが確認された。
【００４１】
一方、ビタミンＢ２を含有しない溶液１１においては、光照射量にかかわらずビオチンは安定でかつ活性酸素が発生しなかった。
【００４２】
（実施例１）
ビオチン０．５ｍｇ、ビタミンＢ２（４ｍｇ）及びトシシ抽出物３００ｍｇ（原生薬としては２．７ｇ）を２５ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３）１００ｍＬに溶解させた溶液をろ過した後、褐色ガラススクリュー管に充填して内服液剤（水性液剤組成物）Ａを調製した。
【００４３】
（比較例１）
トシシ抽出物を配合しないようにした以外は、実施例１と同様にして内服液剤Ｂを調製した。
【００４４】
（比較例２）
トシシ抽出物及びビタミンＢ２を配合しないようにした以外は、実施例１と同様にして内服液剤Ｃを調製した。
【００４５】
［ビオチンの光安定性１］
実施例１及び比較例１〜２で得られた内服液剤Ａ、Ｂ及びＣについて、ビオチンの光安定性を測定した。すなわち、２５℃の温度条件下において、３０００Ｌｕｘ（Ｄ６５：ＩＳＯ１０９７７に類似の出力を示す白色蛍光ランプを使用）の光を連続照射し、２日目（１４．４万Ｌｕｘ・ｈｒ）及び５日目（３６万Ｌｕｘ・ｈｒ）に各内服液剤のサンプリングを行い、ビオチンの残存量をＨＰＬＣ（液体クロマトグラフ）法で測定した。得られた結果を表４及び図５に示す。
【００４６】
【表４】
【００４７】
表４及び図５に示したように、実施例１で得られた内服液剤Ａにおいては、ビタミンＢ２を含有させているにもかかわらず、ビオチンの残存率が高く、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性が向上していることが確認された。また、実施例１で得られた内服液剤Ａと比較例１で得られた内服液剤Ｂとを比較すると、光照射日数が２日目（１４．４万Ｌｕｘ・ｈｒ）の時点で、内服液剤Ａのビオチンの残存率の方が内服液剤Ｂのビオチンの残存率よりも２．７倍以上高いことが確認された。
【００４８】
（実施例２）
表５に記載の各成分を混合して溶解させた後、ろ過し、滅菌することにより内服液剤１を調製した。
【００４９】
（比較例３）
表５の処方からトシシ抽出物を除いて、トシシ抽出物を配合しないようにした以外は実施例２と同様にして内服液剤２を調製した。
【００５０】
（比較例４）
表５の処方からトシシ抽出物及びビタミンＢ２を除いて、トシシ抽出物及びビタミンＢ２を配合しないようにした以外は実施例２と同様にして内服液剤３を調製した。
【００５１】
【表５】
【００５２】
［ビオチンの光安定性２］
実施例２及び比較例３〜４で得られた内服液剤１〜３を着色ガラス瓶に充填し、ビオチンの光安定性を調べた。具体的には、２５℃下で３０００Ｌｕｘ（Ｄ６５：ＩＳＯ１０９７７に類似の出力を示す白色蛍光ランプを使用）の光を連続照射し、３６万Ｌｕｘ・ｈｒ、６０万Ｌｕｘ・ｈｒ、１２０万Ｌｕｘ・ｈｒの光量を照射した時点でサンプリングを行い、ビオチンの残存量をＨＰＬＣ（液体クロマトグラフ）法で測定し、ビオチンの残存率を求めた。得られた結果を表６及び図６に示す。
【００５３】
【表６】
【００５４】
表６及び図６に示したように、実施例２で得られた内服液剤１においては、ビタミンＢ２が共存しているにもかかわらず、ビオチンの残存率は光量３６万Ｌｕｘ・ｈｒの光の照射で９０％、光量６０万Ｌｕｘ・ｈｒの光の照射で８５％、光量１２０万Ｌｕｘ・ｈｒの光の照射で７５％以上を示し、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中におけるビオチンの光安定性が高いことが確認された。
【００５５】
一方、トシシ抽出物を添加せずにビタミンＢ２とビオチンとを含有させた比較例３で得られた内服液剤２においては、光量３６万Ｌｕｘ・ｈｒの光の照射によってビオチンが完全に分解してしまうことが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
以上説明したように、本発明によれば、ビオチン及びビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物であるにも拘らず、ビタミンＢ２に起因し発生する活性酸素によってビオチンが分解されることを防止し、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性を十分に向上させることを可能とする水性液剤組成物を提供することが可能となる。
【００５７】
したがって、本発明の水性液剤組成物は、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性に優れるため、医薬品、医薬部外品、食品の開発等に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】予備試験例１で得られた溶液１〜６について、Ｆｅ２＋を添加して２分３６秒後の各溶液における活性酸素残存率（％）とトシシの原生薬濃度との関係を示すグラフである。
【図２】予備試験例２で得られた溶液７〜９について、光量２００００Ｌｕｘの光を照射して４５秒後の活性酸素残存率（％）とトシシの原生薬濃度との関係を示すグラフである。
【図３】予備試験例３で得られた溶液１０及び１１について、光照射量（Ｌｕｘ・ｈｒ）とビオチンの残存率（％）との関係を示すグラフである。
【図４】予備試験例３で得られた溶液１０及び１１について、光照射量（Ｌｕｘ・ｈｒ）とＥＳＲシグナル比（活性酸素の発生量）との関係を示すグラフである。
【図５】内服液剤Ａ（実施例１）、内服液剤Ｂ（比較例２）及び内服液剤Ｃ（比較例３）について、光照射量（×１００００Ｌｕｘ・ｈｒ）とビオチン残存率（％）との関係を示すグラフである。
【図６】内服液剤１（実施例２）、内服液剤２（比較例３）及び内服液剤３（比較例４）について、光照射量（×１００００Ｌｕｘ・ｈｒ）とビオチン残存率（％）との関係を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水性液剤組成物に関し、より詳しくは、ビオチンを含有する医薬品、医薬部外品、食品等の分野に応用される水性液剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビタミンＢ２は、人体に対し細胞の再生や成長を助けたり、蛋白質、炭水化物、脂質の代謝を促進するといった効果を有することが知られている。また、ビオチンは、ビタミンＨとも称される補酵素の１種であって、人体に対し生体内の４種のカルボキシラーゼの必須補酵素として作用することが知られている（非特許文献１参照）。
【０００３】
しかしながら、ビタミンＢ２は紫外線波長領域の光によって励起し、基底状態に戻るときにエネルギーを放出し、この放出エネルギーが水性液剤組成物中の溶存酸素や含酸素化合物の三重項酸素を活性酸素に変化させてしまうことが知られている（非特許文献２及び非特許文献３参照）。
【０００４】
一方、ビオチンは、活性酸素によって酸化分解されることが知られており、特開平７−９７３２２号公報（特許文献１）では、ビオチンを用いた一重項酸素消去剤が開示されている。
【特許文献１】特開平７−９７３２２号公報
【非特許文献１】日本ビタミン学会編「ビタミンハンドブック２ 水溶性ビタミン」、（株）化学同人、ｐ．１１５〜ｐ．１２６、１９８９年発行
【非特許文献２】豊崎俊幸著，Ｎｅｗ Ｆｏｏｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１,ｐ．７０〜ｐ．７６，１９９２年発行
【非特許文献３】ＰＣＪｏｓｈｉ著，Ｉｎｄｉａｎ Jｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ，Ｖｏｌ．２６，ｐ１８６〜ｐ．１８９，１９８９年６月発行
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、ビオチン及びビタミンＢ２を配合した水性液剤組成物を調製した場合、ビタミンＢ２の光励起に起因する活性酸素が発生し、かかる活性酸素によってビオチンが分解されてしまうため、水性液剤組成物におけるビオチンの安定性を保持することは極めて困難であった。そのため、ビタミンＢ２とビオチンとを配合した水性液剤組成物において、ビオチンをより安定に存在させることのできる水性液剤組成物が求められている。
【０００６】
本発明は、上記従来技術の有する課題に鑑みてなされたものであり、ビオチン及びビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物であるにも拘らず、ビタミンＢ２に起因し発生する活性酸素によってビオチンが分解されることを防止し、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性を十分に向上させることを可能とする水性液剤組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、上記目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、トシシ抽出物に優れた活性酸素消去作用があり、かかるトシシ抽出物を含有させることでビオチン及びビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中におけるビオチンの光安定性を非常に効率よく向上させられることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明の水性液剤組成物は、ビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物を含有することを特徴とするものである。
【０００９】
上記本発明の水性液剤組成物としては、ビオチン１質量部に対して、ビタミンＢ２を５〜１６０００質量部及びトシシ抽出物を原生薬に換算して１〜１００００質量部含有することが好ましい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、ビオチン及びビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物であるにも拘らず、ビタミンＢ２に起因し発生する活性酸素によってビオチンが分解されることを防止し、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性を十分に向上させることを可能とする水性液剤組成物を提供することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、本発明をその好適な実施形態に即して詳細に説明する。
【００１２】
本発明の水性液剤組成物は、ビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物を含有することを特徴とするものである。
【００１３】
本発明において用いられるビタミンＢ２（リボフラビン）は、リン酸エステル及び酪酸エステル等のような各種誘導体等として水性液剤組成物に配合することが可能である。
【００１４】
また、本発明に用いられる前記トシシ抽出物としては、トシシの水抽出物、流エキス、軟エキス、乾燥エキス、チンキ等のいずれのものであってもでも良い。このような「トシシ（兎絲子）」の基原は、ヒルガオ科 C.australis R Br.（Convolvulaceae）兎絲 Cuscuta chinensis Lam.（ハマネナシカズラ）の成熟種子を乾燥したものであり、ネナシカズラ C.japonica Choisyも用いられる。なお、前記「トシシ（兎絲子）」は、滋養強壮生薬として知られているものである。
【００１５】
本発明の水性液剤組成物の調製方法としては特に制限されず、所定量のビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物の各成分を混合、溶解することにより調製する方法を挙げることができる。このような水性液剤組成物の調製の際には、必要に応じて、ろ過、滅菌等を行ってもよい。
【００１６】
また、本発明の水性液剤組成物の製造の際において、ビオチンの配合量は水性液剤組成物の使用目的及び用途に応じて適宜選択されるものではあるが、ビオチンの配合（含有）量が０．００００５〜１ｍｇ／ｍＬであることが好ましく、０．０００１〜０．０１ｍｇ／ｍＬであることがより好ましい。ビオチンの配合量が前記下限未満では、ビタミンとしての効果を期待しにくい傾向にあり、他方、前記上限を超えると、溶解が困難となる傾向にある。
【００１７】
他方、ビタミンＢ２の配合（含有）量は、液剤の使用目的及び用途に応じて適宜選択されるものではあるが、０．０００２５ｍｇ／ｍＬ以上であることが好ましく、内服用液剤等ではビタミンとしての効果の観点から、通常０．０１ｍｇ／ｍＬ以上であることがより好ましい。また、ビタミンＢ２の配合（含有）量としては、ビオチン１質量部に対してビタミンＢ２の配合量が５〜１６０００質量部であることが好ましく、５〜２５０質量部であることがより好ましく、更に好ましくは５〜１００質量部である。ビオチン１質量部に対するビタミンＢ２の配合量が前記下限未満では、ビタミンとしての効果を期待しにくい傾向にあり、他方、前記上限を超えても、ビタミンとしての効果は変わらない傾向にある。
【００１８】
さらに、トシシ抽出物の配合（含有）量は原生薬量としては、生薬としての効果の観点から、通常０．０１ｍｇ／ｍＬ以上であることが好ましい。また、トシシ抽出物の配合（含有）量としては、ビオチン１質量部に対して原生薬に換算したトシシ抽出物の配合量が１〜１００００質量部であることが好ましく、２５０〜８０００質量部であることがより好ましい。ビオチン１質量部に対するトシシ抽出物の配合量が前記下限未満では、活性酸素を除去する効果が低くなり、得られる水性液剤組成物におけるビオチンの光安定性が低下する傾向にあり、他方、前記上限を越えても、活性酸素除去の効果は増大しない傾向にある。
【００１９】
また、本発明の水性液剤組成物には、ビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物の他、本発明の効果を損なわない範囲において、通常液剤に配合される成分を適宜配合することができる。このような成分としては、例えば、各種ビタミン（ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ及びそれらの塩、エステル、誘導体等）、アミノ酸（タウリン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−アルギニン、Ｌ−トリプトファン等）、生薬（ジオウ、カンゾウ、ニンジン、芍薬、冬虫夏草、ローヤルゼリー等）、カフェイン、多価アルコール、有機酸、糖アルコール、甘味剤、香料、保存剤が挙げられる。さらに、本発明の水性液剤組成物のｐＨとしては、服用感を向上するとの観点から、ｐＨは２〜５に調整することが好ましい。
【００２０】
このようにして得られる本発明の水性液剤組成物は、内服用液剤、ドリンク剤等として提供される。
【実施例】
【００２１】
以下、予備試験１〜３、実施例１〜２及び比較例１〜４に基づいて本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２２】
（予備試験１：トシシ抽出物による活性酸素消去効果）
トシシ抽出物０．５ｇ（原生薬として４．５ｇ）と水２５ｍＬとを１０ｍｉｎ振とうした後に３０００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離して上澄液（Ｓｐ）を抽出した。
【００２３】
このようなＳｐを用いてＳｐ添加量の異なる溶液１〜６を調製した。すなわち、２５ｍＭのクエン酸Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ３）１．２５ｍＬ、４４ｍＭの１，３−ジメチル−５−ピラゾロン（ＤＭＰＯ）０．２５ｍＬ、２０ｍＭのＨ２Ｏ２０．２５ｍＬ、０．２ｍＭのＦｅ２＋０．２５ｍＬ及び前記Ｓｐ（ＡｍＬ）と水（（０．７５−Ａ）ｍＬ）との混合物０．７５ｍＬを添加して溶液１〜６（２．７５ｍＬ）を調製した。前記溶液１〜６におけるそれぞれのＳｐ添加量、トシシ抽出物の濃度及びトシシの原生薬としての濃度を表１に示す。なお、前記溶液１〜６において、Ｈ２Ｏ２及びＦｅ２＋は活性酸素の発生源として用いられるものである。
【００２４】
［活性酸素の残存率１］
前記溶液１〜６について、電子スピン共鳴吸収（ＥＳＲ）測定装置（日本電子社製、ＴＥ−１００）を用い、Ｆｅ２＋の添加２分後に掃引を開始し、ＥＳＲシグナル比を測定して活性酸素の残存率を求めた。このようにして測定されたＥＳＲシグナル比及び活性酸素の残存率の結果を表１及び図１に示す。なお、電子スピン共鳴吸収（ＥＳＲ）測定装置は、ＥＳＲ掃引開始３６秒後にＥＳＲシグナルが検出されるように設定した。
【００２５】
【表１】
【００２６】
表１及び図１から明らかなように、トシシ原生薬濃度が高いほど、活性酸素の残存率が低く、トシシ抽出物に活性酸素消去効果があることが確認された。
【００２７】
（予備試験２：トシシ抽出物による活性酸素消去効果）
トシシ抽出物０．３ｇ（原生薬としては２．７ｇ）と水２５ｍＬとを１０ｍｉｎ振とうした後に３０００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離して上澄液（Ｓｐ）を抽出した。
【００２８】
このようにして得られたＳｐを用い、０．１ｍＭのリボフラビン溶液０．５ｍＬ、Ｓｐ０．５ｍＬ及び１，３−ジメチル−５−ピラゾロン（ＤＭＰＯ）４０μＬを配合して溶液７を調製した。
【００２９】
また、トシシ抽出物０．１１ｇ（原生薬としては１．０ｇ）と水２５ｍＬとを１０ｍｉｎ振とうした後に３０００ｒｐｍの回転数で１０ｍｉｎ遠心分離して抽出した上澄液（Ｓｐ）を用いた以外は溶液７と同様にして溶液８を調製した。
【００３０】
さらに、Ｓｐを添加する代わりに水を添加した以外は溶液７と同様にして溶液９を調製した。
【００３１】
このようにして調製された各溶液におけるトシシ抽出物の濃度及びトシシの原生薬としての濃度を表２に示す。なお、前記リボフラビン溶液は、２５ｍＭのクエン酸Ｂｕｆｆｅｒ（ｐＨ３）を用いて調製した。また、本予備試験において、リボフラビンは活性酸素の発生源として含有されたものであり、光照射によって活性酸素を発生させた。
【００３２】
［活性酸素の残存率２］
電子スピン共鳴吸収（ＥＳＲ）測定装置（日本電子社製、ＴＥ−１００）を用い、前記溶液７〜９をそれぞれＥＳＲ偏平セルにとり、ＥＳＲ磁場にセットした。次に、光源ランプとして太陽光に近いキセノンランプを使用して２００００Ｌｕｘの光を照射し、９秒後にＥＳＲの掃引を開始し、ＥＳＲシグナル比を測定して活性酸素の残存率を求めた。このようにして測定されたＥＳＲシグナル比及び活性酸素の残存率の結果を表２及び図２に示す。なお、電子スピン共鳴吸収（ＥＳＲ）測定装置は、ＥＳＲ掃引開始３６秒後にＥＳＲシグナルが検出されるように設定した。
【００３３】
【表２】
【００３４】
表２及び図２から明らかなように、ビタミンＢ２を含有させた溶液においてもトシシの原生薬濃度が高い溶液ほど、活性酸素の残存率が低くなることが確認された。
【００３５】
（予備試験３：ビタミンＢ２の存在下におけるビオチンの安定性と活性酸素の発生量の測定）
表３に示す配合量で溶液１０及び１１を調製し、以下のようにして溶液中のビオチンの安定性の評価及び活性酸素の発生量を測定した。
【００３６】
【表３】
【００３７】
［ビオチンの残存率］
前記溶液１０及び１１をそれぞれ白色ガラスびんに入れ、光源ランプとして太陽光に近いキセノンランプを使用して２００００Ｌｕｘの光を照射し、３６秒後、１５６秒後及び２７６秒後、すなわち、光照射量２００Ｌｕｘ・ｈｒ、８６７Ｌｕｘ・ｈｒ及び１５３３Ｌｕｘ・ｈｒの時点の各溶液をサンプリングして、ＨＰＬＣ（液体クロマトグラフ）法を用いて溶液１０及び１１に残存するビオチンの量を測定し、ビオチンの残存率を求めた。得られた結果を図３に示す。
【００３８】
なお、従来より製剤中のビオチンの定量については、主にバイオアッセイ法が実施されていたが、バイオアッセイ法ではビオチンの分解物（生体中ではビオチンと同等の活性を有さない）もビオチンと同等の活性を示してしまうため、今回はＨＰＬＣ（液体クロマトグラフ）法でビオチンの真の残存量を測定し、安定性を評価した。
【００３９】
［活性酸素の発生量］
前記溶液１０及び１１をそれぞれＥＳＲ偏平セルにとり、ＥＳＲ磁場にセットした。次に、光源ランプとして太陽光に近いキセノンランプを使用して２００００Ｌｕｘの光を照射し、３６秒後、１５６秒後及び２７６秒後、すなわち、光照射量２００Ｌｕｘ・ｈｒ、８６７Ｌｕｘ・ｈｒ及び１５３３Ｌｕｘ・ｈｒの時点でＥＳＲシグナル比を測定して活性酸素の発生量を求めた。このようにして測定されたＥＳＲシグナル比を図４に示す。
【００４０】
図３のグラフから明らかなように、ビオチンとビタミンＢ２とを含有する溶液１０においては、光照射量に応じてビオチンの残存率が低下することが確認された。また、図４のグラフから明らかなように、ビオチンとビタミンＢ２とを含有する溶液１０においては、光照射によって活性酸素が発生し、光照射量の増加に伴って活性酸素の発生量が増加していることが確認された。
【００４１】
一方、ビタミンＢ２を含有しない溶液１１においては、光照射量にかかわらずビオチンは安定でかつ活性酸素が発生しなかった。
【００４２】
（実施例１）
ビオチン０．５ｍｇ、ビタミンＢ２（４ｍｇ）及びトシシ抽出物３００ｍｇ（原生薬としては２．７ｇ）を２５ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３）１００ｍＬに溶解させた溶液をろ過した後、褐色ガラススクリュー管に充填して内服液剤（水性液剤組成物）Ａを調製した。
【００４３】
（比較例１）
トシシ抽出物を配合しないようにした以外は、実施例１と同様にして内服液剤Ｂを調製した。
【００４４】
（比較例２）
トシシ抽出物及びビタミンＢ２を配合しないようにした以外は、実施例１と同様にして内服液剤Ｃを調製した。
【００４５】
［ビオチンの光安定性１］
実施例１及び比較例１〜２で得られた内服液剤Ａ、Ｂ及びＣについて、ビオチンの光安定性を測定した。すなわち、２５℃の温度条件下において、３０００Ｌｕｘ（Ｄ６５：ＩＳＯ１０９７７に類似の出力を示す白色蛍光ランプを使用）の光を連続照射し、２日目（１４．４万Ｌｕｘ・ｈｒ）及び５日目（３６万Ｌｕｘ・ｈｒ）に各内服液剤のサンプリングを行い、ビオチンの残存量をＨＰＬＣ（液体クロマトグラフ）法で測定した。得られた結果を表４及び図５に示す。
【００４６】
【表４】
【００４７】
表４及び図５に示したように、実施例１で得られた内服液剤Ａにおいては、ビタミンＢ２を含有させているにもかかわらず、ビオチンの残存率が高く、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性が向上していることが確認された。また、実施例１で得られた内服液剤Ａと比較例１で得られた内服液剤Ｂとを比較すると、光照射日数が２日目（１４．４万Ｌｕｘ・ｈｒ）の時点で、内服液剤Ａのビオチンの残存率の方が内服液剤Ｂのビオチンの残存率よりも２．７倍以上高いことが確認された。
【００４８】
（実施例２）
表５に記載の各成分を混合して溶解させた後、ろ過し、滅菌することにより内服液剤１を調製した。
【００４９】
（比較例３）
表５の処方からトシシ抽出物を除いて、トシシ抽出物を配合しないようにした以外は実施例２と同様にして内服液剤２を調製した。
【００５０】
（比較例４）
表５の処方からトシシ抽出物及びビタミンＢ２を除いて、トシシ抽出物及びビタミンＢ２を配合しないようにした以外は実施例２と同様にして内服液剤３を調製した。
【００５１】
【表５】
【００５２】
［ビオチンの光安定性２］
実施例２及び比較例３〜４で得られた内服液剤１〜３を着色ガラス瓶に充填し、ビオチンの光安定性を調べた。具体的には、２５℃下で３０００Ｌｕｘ（Ｄ６５：ＩＳＯ１０９７７に類似の出力を示す白色蛍光ランプを使用）の光を連続照射し、３６万Ｌｕｘ・ｈｒ、６０万Ｌｕｘ・ｈｒ、１２０万Ｌｕｘ・ｈｒの光量を照射した時点でサンプリングを行い、ビオチンの残存量をＨＰＬＣ（液体クロマトグラフ）法で測定し、ビオチンの残存率を求めた。得られた結果を表６及び図６に示す。
【００５３】
【表６】
【００５４】
表６及び図６に示したように、実施例２で得られた内服液剤１においては、ビタミンＢ２が共存しているにもかかわらず、ビオチンの残存率は光量３６万Ｌｕｘ・ｈｒの光の照射で９０％、光量６０万Ｌｕｘ・ｈｒの光の照射で８５％、光量１２０万Ｌｕｘ・ｈｒの光の照射で７５％以上を示し、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中におけるビオチンの光安定性が高いことが確認された。
【００５５】
一方、トシシ抽出物を添加せずにビタミンＢ２とビオチンとを含有させた比較例３で得られた内服液剤２においては、光量３６万Ｌｕｘ・ｈｒの光の照射によってビオチンが完全に分解してしまうことが確認された。
【産業上の利用可能性】
【００５６】
以上説明したように、本発明によれば、ビオチン及びビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物であるにも拘らず、ビタミンＢ２に起因し発生する活性酸素によってビオチンが分解されることを防止し、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性を十分に向上させることを可能とする水性液剤組成物を提供することが可能となる。
【００５７】
したがって、本発明の水性液剤組成物は、ビタミンＢ２を含有する水性液剤組成物中でのビオチンの光安定性に優れるため、医薬品、医薬部外品、食品の開発等に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００５８】
【図１】予備試験例１で得られた溶液１〜６について、Ｆｅ２＋を添加して２分３６秒後の各溶液における活性酸素残存率（％）とトシシの原生薬濃度との関係を示すグラフである。
【図２】予備試験例２で得られた溶液７〜９について、光量２００００Ｌｕｘの光を照射して４５秒後の活性酸素残存率（％）とトシシの原生薬濃度との関係を示すグラフである。
【図３】予備試験例３で得られた溶液１０及び１１について、光照射量（Ｌｕｘ・ｈｒ）とビオチンの残存率（％）との関係を示すグラフである。
【図４】予備試験例３で得られた溶液１０及び１１について、光照射量（Ｌｕｘ・ｈｒ）とＥＳＲシグナル比（活性酸素の発生量）との関係を示すグラフである。
【図５】内服液剤Ａ（実施例１）、内服液剤Ｂ（比較例２）及び内服液剤Ｃ（比較例３）について、光照射量（×１００００Ｌｕｘ・ｈｒ）とビオチン残存率（％）との関係を示すグラフである。
【図６】内服液剤１（実施例２）、内服液剤２（比較例３）及び内服液剤３（比較例４）について、光照射量（×１００００Ｌｕｘ・ｈｒ）とビオチン残存率（％）との関係を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物を含有することを特徴とする水性液剤組成物。
【請求項２】
ビオチン１質量部に対して、ビタミンＢ２を５〜１６０００質量部及びトシシ抽出物を原生薬に換算して１〜１００００質量部含有することを特徴とする請求項１に記載の水性液剤組成物。
【請求項１】
ビオチン、ビタミンＢ２及びトシシ抽出物を含有することを特徴とする水性液剤組成物。
【請求項２】
ビオチン１質量部に対して、ビタミンＢ２を５〜１６０００質量部及びトシシ抽出物を原生薬に換算して１〜１００００質量部含有することを特徴とする請求項１に記載の水性液剤組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公開番号】特開２００６−８９４３０（Ｐ２００６−８９４３０Ａ）
【公開日】平成１８年４月６日（２００６．４．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２７９１６７（Ｐ２００４−２７９１６７）
【出願日】平成１６年９月２７日（２００４．９．２７）
【出願人】（０００００２８１９）大正製薬株式会社 (437)
【復代理人】
【識別番号】１００１０７１９１
【弁理士】
【氏名又は名称】長濱 範明
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年４月６日（２００６．４．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年９月２７日（２００４．９．２７）
【出願人】（０００００２８１９）大正製薬株式会社 (437)
【復代理人】
【識別番号】１００１０７１９１
【弁理士】
【氏名又は名称】長濱 範明
【Ｆターム（参考）】
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