ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、方法、使用及び組成物
本発明は、不安、てんかん及び不眠症を含めた睡眠障害を治療又は予防すること、及び鎮静−催眠、麻酔、睡眠及び筋弛緩を誘発することに有用な新規なピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンを提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＡＢＡＡ受容体に対する親和性を有する薬剤、具体的にはピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、より具体的には、Ｎ−｛２−置換−５−［３−置換−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド及びＮ−｛２−置換−５−［３−置換−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを対象とする。
【背景技術】
【０００２】
ＧＡＢＡＡ受容体（γアミノ酪酸Ａ）は、膜イオンチャネルを形成する五量体タンパク質である。ＧＡＢＡＡ受容体は、鎮静、不安、筋緊張、てんかん発作性の活動及び記憶機能の制御に関与している。これらの作用は、ＧＡＢＡＡ受容体の決まったサブユニット、特にα１サブユニット及びα２サブユニットによるものである。
【０００３】
鎮静状態は、α１サブユニットにより調節される。ゾルピデムは、α１受容体に対し高い親和性を有するという特徴があり、その鎮静作用及び催眠作用はこれら受容体によりインビボで媒介される。同様に、ザレプロンの催眠作用もα１受容体で媒介される。
【０００４】
ジアゼパムの不安緩解作用は、α２受容体を発現するニューロン集団におけるＧＡＢＡ作動性伝達の増強により媒介される。これは、α２受容体が、不安の治療に対して極めて特異的な標的であることを示している。
【０００５】
ジアゼパムでの筋弛緩は、α２受容体で主に媒介される。なぜならこれらの受容体は、脊髄において極めて特異的な発現を示すからである。
【０００６】
ジアゼパムの抗痙攣効果は、一部α１受容体によるものである。記憶障害性化合物であるジアゼパムにおいて、順向性健忘症がα１受容体で媒介される。
【０００７】
ＧＡＢＡＡ受容体並びにそのα１−及びα２−サブユニットは、Ｈ．Ｍｏｈｌｅｒら（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、３００、２〜８、２００２）、Ｈ．Ｍｏｈｌｅｒら（Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１、２２〜２５、２００１）、Ｕ．Ｒｕｄｏｌｐｈら（Ｎａｔｕｒｅ、４０１、７９６〜８００、１９９９）、及びＤ．Ｊ．Ｎｕｔｔら（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、１７９、３９０〜３９６、２００１）で広く概説されている。
【０００８】
ジアゼパム及び他の古典的なベンゾジアゼピンは、抗不安薬、催眠薬、抗痙攣剤及び筋弛緩剤として広く使用されている。その副作用は、順向性健忘症、運動活動の低下及びエタノール作用の増強を含む。
【０００９】
このような背景で、本発明の化合物は、睡眠障害、好ましくは不眠症、不安及びてんかんの臨床的応用のためのα１−及びα２−ＧＡＢＡＡ受容体のリガンドである。
【００１０】
不眠症は、大いにまん延している疾患である。人口の１０％が慢性的にそれに冒されており、一過性不眠症を計算に入れると３０％になる。不眠症とは、眠りにつくこと及び眠り続けることが困難であることを言い、疲労感、エネルギー不足、集中力の低下及びいらいらなど、次の日への持ち越される影響を伴う。この病気による社会及び健康への影響は重大で、社会経済に明らかな反動を生じる結果となっている。
【００１１】
不眠症の対応における薬理学的治療は、バルビツレート及び抱水クロラールを第一に含むが、これらの薬物は、多数の既知の有害作用、例えば、過量投与による毒性、代謝誘発、及び依存性及び耐性の増大などを引き起こす。加えてこれらは、何よりもレム睡眠段階の持続時間及び数を減らすことによって睡眠の構造に影響を及ぼす。後にベンゾジアゼピンは、その低毒性のため重要な治療上の進歩をもたらしたが、ベンゾジアゼピンは、依存性、筋弛緩、健忘及び投薬の中断後に起こる不眠症への逆戻りという重大な問題をさらに示した。
【００１２】
知られている最新の治療手法は、非ベンゾジアゼピン睡眠薬、例えばピロロ［３，４−ｂ］ピラジン（ゾピクロン）、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（ゾルピデム）、及び最後にピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン（ザレプロン）などの導入である。後に２種の新しいピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンであるインディプロン及びオシナプロンの開発が開始されたが、後者はむしろ抗不安薬の作用がある。これらすべての化合物は、急速な睡眠の誘発を示し、ベンゾジアゼピンよりも、次の日への影響が少なく、乱用に対する可能性及び不眠症に逆戻りするリスクが低い。これらの化合物が作用する機序は、ベンゾジアゼピン結合部位への結合を介してのＧＡＢＡＡ受容体のアロステリック活性化である（Ｃ．Ｆ．Ｐ．Ｇｅｏｒｇｅ、Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ、３５８、１６２３−１６２６、２００１）。ベンゾジアゼピンは、ＧＡＢＡＡ受容体の結合部位では非特異的リガンドである一方、ゾルピデム及びザレプロンは、α１−サブユニットに対してより大きな選択性を示す。これにもかかわらず、これらの薬物は依然として睡眠の構造に影響を及ぼし、長期治療における依存性を誘発する恐れがある。
【００１３】
関連する様々なピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンが、特許刊行物ＵＳ４１７８４４９、ＵＳ４２８１０００、ＵＳ４５２１４２２（２−ピリジニル［７−（４−ピリジニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル］メタノン、オシナプロン）、ＵＳ４５７６９４３、ＵＳ４６２６５３８（Ｎ−｛３−［３−（シアノピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−エチル−アセトアミド、ザレプロン）、ＵＳ４６５４３４７、ＵＳ６３９９６２１（Ｎ−｛３−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド、インディプロン）、ＷＯ２００５０１４５９６、ＷＯ２００５０１４５９７及びＷＯ２００６１３６５３０において開示されている。
【００１４】
不眠症の対応における新しい活性化合物の研究は、潜在的な健康需要に応えるものである。なぜなら最近導入された睡眠薬でさえ、依然として睡眠の構造に影響を及ぼし、長期の治療における依存性を誘発する恐れがあるからである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
したがって、副作用の危険性がより少ない新しい催眠薬の開発に焦点を合わせることが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
発明者らは、ＧＡＢＡＡに対し、特にそのα１−及びα２−サブユニットに対して活性のある新しいピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンを発見した。したがって本発明の化合物は、ＧＡＢＡＡ受容体α１−及びα２−サブユニットにより媒介されるすべての疾患の治療及び予防に有用である。そのような疾患の非限定的な例は、睡眠障害、好ましくは不眠症、不安及びてんかんである。本発明の化合物が関連する適応症の非限定的な例は、不眠症又は麻酔など、睡眠の誘発、鎮静の誘発又は筋弛緩の誘発が必要とされるすべての疾患又は状態である。
【００１７】
ザレプロンというピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン参照化合物は、本発明の化合物と構造が類似する化合物である。しかし、ザレプロンは、アルデヒドオキシダーゼのために広範な生体内変換を示す（Ｂ．Ｇ．Ｌａｋｅら、「ヒト肝臓によるザレプロンの代謝：アルデヒドオキシダーゼ介入の証拠（Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ｚａｌｅｐｌｏｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｌｉｖｅｒ： ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｌｄｅｈｙｄｅ ｏｘｉｄａｓｅ）」、Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ、２００２年１０月、３２（１０）：８３５〜４７、及びＫ．Ｋａｗａｓｈｉｍａら、「鎮静性−催眠性ザレプロンの肝臓代謝におけるアルデヒドオキシダーゼ依存性の、サルとラット間の顕著な種差（Ａｌｄｅｈｙｄｅ ｏｘｉｄａｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｒｋｅｄ ｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｄａｔｉｖｅ−ｈｙｐｎｏｔｉｃ ｚａｌｅｐｌｏｎ，ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｏｎｋｅｙｓ ａｎｄ ｒａｔｓ）」、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓｐｏｓ．１９９９年３月、２７（３）：４２２〜８）。ザレプロンよりも代謝安定度が良い別のピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンが当分野で知られているが、このインディプロンという化合物は、細胞生存度実験で示されるように、中毒性の影響がより大きいという弱点がある。
【００１８】
生体内変換に対する化合物の感受性は、代謝安定度、すなわち体内での薬物の半減期、及びそれが代謝物を形成するかどうかに関連する。これらは、生体利用度、毒性及び薬物間の相互作用に対する投薬の可能性を評価する上で重要なパラメータであり、言い換えれば、ヒトへの使用の可能性を決定する上で重要なパラメータである。この観点から、最大の代謝安定度を有する化合物は、薬物間の相互作用の可能性を最低限に抑え、投薬間隔をより短くしないで済む。
【００１９】
本発明の化合物は、予想外に少ない生体内変換、すなわち知られている他の関連のピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンよりも高い代謝安定度を示し、これにより薬物動態学プロファイルが改善され、薬理学的効果の維持を容易にし、さらに完全な夜間睡眠の維持に対し明らかに適応している。この特性は、フェニル環の置換、すなわち、置換基Ｒ３及びＲ４に関連している。特に優れているのは、化合物がフェニル環上に電子を除去する置換基を有することである。
【００２０】
加えて実施例で例示する通り、本発明の化合物は、細胞生存度実験で実証されるように、インビボでの鎮静／催眠の治療作用に優れ、中毒性の影響が低いことも示されている。
【００２１】
したがって、本発明は、ＧＡＢＡＡ受容体のリガンドである、式（Ｉ）
【化１】
（式中、Ｒ及びＲ１はアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）を表し、Ｒ２はシアノ、ニトロ及びチオフェン−２−カルボニルからなる群から選択され、Ｒ３は水素及びハロゲンからなる群から選択され、Ｒ４は水素、ハロゲン、アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及びアルコキシ（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群から選択され、Ｒ５は水素及びアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群から選択され、並びにＹは−ＣＯ−及び−ＳＯ２−からなる群から選択される）の化合物、並びに医薬として許容可能なその塩及び水和物に関する。
【００２２】
本発明の別の目的は、不安、てんかん及び不眠症を含めた睡眠障害を治療又は予防し、前記化合物又は医薬として許容可能なその塩若しくは水和物の治療有効量を投与することによって、鎮静−催眠、麻酔、睡眠及び筋弛緩を誘発するための新規な方法を提供することである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
前記の通り、本発明は、式（Ｉ）
【化２】
（式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＹは、上述の通りである）の化合物、並びに医薬として許容可能なその塩及び水和物に関する。
【００２４】
本明細書中で使用する「医薬として許容可能な塩」という用語は、有機酸及び無機酸、例えば臭水素酸、塩酸、リン酸、硝酸、硫酸、酢酸、アジピン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、グルタミン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、シュウ酸、ピバル酸、プロピオン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、コハク酸、酒石酸などから形成されるいかなる塩も包含する。
【００２５】
式（Ｉ）の具体的な化合物は、
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−メチル−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−メトキシ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２，４−ジフルオロ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；及び
Ｎ−｛５−フルオロ−２−メトキシ−３−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
からなる群から選択される。
【００２６】
以下の反応スキームは、本発明の化合物の調製を例示するものである。
【化３】
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＹは上述の通りであり、ＱはＮ（ジアルキル（Ｃ１〜Ｃ６））、アルキルチオ（Ｃ１〜Ｃ６）及びアルコキシ（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群から選択される適切な脱離基である。Ｑは、ジメチルアミノ、メチルチオ又はメトキシからなる群から選択されるのが好ましい。
【００２７】
一般式（ＩＩＩ）のアミノピラゾールと、適切に置換された１−アリール−２−プロペン−１−オン（ＩＩ）の反応は、５０℃〜１３０℃の温度範囲で、氷酢酸、エタノール、メタノール、ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドなどの不活性な極性プロトン溶媒又は極性非プロトン溶媒中で行う。数時間（反応時間）経過後、溶媒を取り除き、得た残留物を炭酸水素ナトリウム水溶液とジクロロメタンとに分割する。有機層を蒸発して乾燥させることによって得た粗原料を以下の方法のうちの１つで精製する：（ａ）溶出剤として酢酸エチル又はジクロロメタン／メタノールを用いたシリカゲルクロマトグラフィー又は（ｂ）適切な溶媒（酢酸エチル、エタノール、メタノールなど）中での結晶化。
【００２８】
Ｑがジメチルアミノの場合の式（ＩＩ）の中間体［中間体（ＶＩ）］は、スキーム２
【化４】
（式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４及びＹは上述の通りである）に示す反応順序に従い得ることができる。
【００２９】
Ｙがスルホニル基の場合の式（ＩＶ）の中間体は、Ｒ．Ｈ．Ｕｌｏｔｈら（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．９、８８〜９６、１９６６）に記載の方法に従い調製する。
【００３０】
式（Ｖ）の中間体をもたらす中間体（ＩＶ）のアルキル化は、有機化学の専門家達に周知の方法に従い、アニオンの形成及びそれに続くアルキルハロゲン化物との反応を介して実施される。
【００３１】
式（Ｖ’）及び（ＶＩ）のエナミノンは、Ｊ．Ｍ．Ｄｏｍａｇａｌａら（Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍ．、２６（４）、１１４７〜５８、１９８９）及びＫ．Ｓａｗａｄａら（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、４９（７）、７９９〜８１３、２００１）に記載されているエナミンの一般的な合成手順に従い、アセトフェノンと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（ＤＭＦＤＭＡ）又はブレデレック試薬（ｔｅｒｔ−ブトキシビス（ジメチルアミノ）メタン）を反応させることによって調製する。
【００３２】
Ｑがジメチルアミノであり、Ｙがスルホニルであり、Ｒ１がメチル（ＶＩＩ）である場合の式（ＩＩ）の中間体は、スキーム３
【化５】
（式中、Ｒ、Ｒ３、及びＲ４は、上の通り定義される）に従い、代わりに調製することができる。
【００３３】
（ＩＶ）から（ＶＩＩ）への変換は、エナミノンの形成、同時に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールのメチル化剤としての特性を使用した結果起こるＮ−メチル−スルホンアミドの形成へとつながる。
【００３４】
Ｑがジメチルアミノであり、Ｒ１がメチル（Ｘ）である場合の式（ＩＩ）の中間体は、スキーム４
【化６】
（式中、Ｒ、Ｒ３、Ｒ４及びＹは、上の通り定義される）に従い調製することもできる。
【００３５】
本方法の利点は、スルホンアミド又はカルボキサミドの形成が、プロセスの最後の状態において生じるという事実に基づく。その結果、多くの系統の生成物の調製において、反応ステップの総数が減少する。さらに、スキームに示すように、（ＶＩＩＩ）から（ＩＸ）への変換は、ワンポットプロセスにおける以下の３つの反応を引き起こす：（ａ）エナミノンの形成、（ｂ）トリフルオロアセトアミドのメチル化、及び（ｃ）Ｎ−メチル化アミンを生成する脱アシル化。（ＩＸ）と、対応するスルホン酸クロライド又はカルボン酸クロライドのその後の反応により、中間体（Ｘ）を得ることになる。
【００３６】
本発明の化合物又はその医薬として許容可能なそれらの塩又は水和物は、ヒト又は非ヒト哺乳動物におけるＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患を治療又は予防するための薬物を調製するために使用することができる。より具体的には、ＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患は、α１−ＧＡＢＡＡ受容体の調節及び／又はα２−ＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患を含む。そのような疾患の非限定的なリストには、不安、てんかん、及び不眠症を含めた睡眠障害などが含まれる。
【００３７】
本発明の別の実施形態は、ヒト又は非ヒト哺乳動物における不安を治療又は予防するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００３８】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物におけるてんかんを治療又は予防するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００３９】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における睡眠障害を治療又は予防するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４０】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における不眠症を治療又は予防するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４１】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における鎮静−催眠を誘発するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４２】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における麻酔を誘発するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４３】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における睡眠及びその持続を誘発するのに必要な時間を調節するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能な塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４４】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における筋弛緩を誘発するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４５】
本発明は、ヒト又は非ヒト哺乳動物におけるＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患を患っているヒト又は非ヒト哺乳動物への治療又は予防の方法であって、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の治療有効量を、医薬として許容可能な希釈剤又は担体と共に、それを必要とする前記ヒト又は前記非ヒト哺乳動物に投与することを含む方法にも関する。より具体的には、ＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患は、α１−ＧＡＢＡＡ受容体の調節及び／又はα２−ＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患を含む。そのような疾患の非限定的なリストは、不安、てんかん、及び不眠症を含めた睡眠障害などが含まれる。
【００４６】
本明細書で使用する場合「哺乳動物」という用語は、哺乳動物の種類のより高度な脊椎動物を指すものとする。「哺乳動物」という用語は、ヒトを含むが、これに限らない。
【００４７】
本発明の別の実施形態は、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩及び水和物を、治療上不活性な担体と組み合わせて含有する医薬組成物を提供することである。
【００４８】
最も適切な経路は、治療する状態の性質及び重症度によって決まることになるが、組成物は経口、直腸及び非経口（皮下、筋肉内、及び静脈内を含めて）からの投与に適切なものが含まれる。本発明の最も好ましい経路は経口の経路である。組成物は単位剤形の形で好都合に提供され、製薬分野で周知の任意の方法で調製し得る。
【００４９】
活性化合物は、従来の薬剤調合の技法に従い医薬担体と組み合わせることができる。担体は、例えば経口又は非経口（静脈注射又は点滴を含む）などの投与に望ましい剤形に応じて、様々な形態を取り得る。経口剤形用の組成物の調製においては、通常の医薬媒体のいずれも使用し得る。通常の医薬媒体には、例えば経口液体製剤（例えば、懸濁液、溶液、乳濁液及びエリキシル剤など）の場合には、水、グリコール類、オイル類、アルコール類、矯味剤、保存剤、着色剤など、エアロゾル、又は経口固体製剤（例えば、粉剤、カプセル剤及び錠剤など）の場合には、デンプン類、糖類、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体が含まれるが、経口液体製剤よりも経口固体製剤が好ましい。
【００５０】
投与しやすさから、錠剤及びカプセル剤が最も有利な経口単位剤形であり、この場合固体医薬担体が使用される。必要に応じて、標準的な水系又は非水系の方法で錠剤をコーティングしてもよい。
【００５１】
使用に適切な投与量の範囲は、１日の全投与量が約０．０１ｍｇ〜約１００．００ｍｇであり、１日１回の投与として、又は必要に応じてこれを分割して投与する。
【００５２】
本発明の化合物は、α１−及びα２−ＧＡＢＡＡ受容体に高い親和性を有する。インビトロの結果は、鎮静−催眠試験で得たインビボの結果と一致する。
【００５３】
本発明の化合物の薬理学的活性は、以下に示すように求めた。
【００５４】
ａ）リガンド結合実験：α１−及びα２−ＧＡＢＡＡ受容体に対する試験化合物の親和性の測定
実験時の体重が２００〜２５０ｇのオスのスプラーグドーリーラットを使用した。その動物を断頭した後、その小脳（α１−ＧＡＢＡＡ受容体を主に含有する組織）及び脊髄（α２−ＧＡＢＡＡ受容体を主に含有する組織）を取り出した。Ｊ．Ｌａｍｅｈら（Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏ−Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、２４、９７９−９９１、２０００）及びＨ．Ｎｏｇｕｃｈｉら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、４３４、２１〜２８、２００２）の方法にわずかな修正を加えた方法に従い膜を調製した。組織を秤量して、５０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）溶液中に、１：４０（ｖ／ｖ）で懸濁させ、脊髄の場合には０．３２Ｍのショ糖溶液中で懸濁し、ホモジナイズし、次いで７℃で１０分間、２００００ｇで遠心した。生成したペレットを同一条件下で再懸濁し、再び遠心した。ペレットは最後に最小容量で再懸濁し、一晩−８０℃で保持した。翌日、最終的にペレットが、小脳の場合には１：１０（ｖ／ｖ）の比で、脊髄の場合には１：５（ｖ／ｖ）の比で再懸濁されるまで、この工程を繰り返した。
【００５５】
リガンドとして放射標識したフルマゼニルを用いた競合試験により親和性を求めた。試験は、９６穴のマイクロタイタープレートを用いて、Ｓ．Ａｒｂｉｌｌａら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１３０、２５７〜２６３、１９８６）及びＹ．Ｗｕら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２７８、１２５〜１３２、１９９５）により記載された方法に従い実施した。本研究の受容体を含む膜と、フルマゼニル（最終濃度を１ｎＭに放射標識）と、濃度を高めた試験化合物（５０ｍＭ［ｐｈ７．４］トリスＨＣｌ緩衝液中の総容量が２３０μＬ）とをインキュベートした。同時に、膜を、放射標識したフルマゼニル（総結合１００％）のみと、放射標識していない濃度を高めたフルマゼニル（非特異結合、放射標識したリガンドの推定％）の存在下とでインキュベートした。放射標識したリガンドを加えることで反応を開始し、続いて４℃で６０分間インキュベートした。インキュベーション期間の終わりに、２００μＬの反応物をマルチスクリーンプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に移し、真空マニフォールドを用いて濾過し、次いで冷たい試験緩衝液で３回洗浄した。マルチスクリーンプレートには、受容体と、受容体に結合している放射標識したリガンドとを含有する膜を保持するＧＦ／Ｂフィルターが備えられていた。洗浄後、プレートは乾くまで放置した。乾燥させた後、シンチレーション液を加え、撹拌下で一晩放置した。次の日、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａシンチレーションカウンターを用いてプレートをカウントした。
【００５６】
結果分析のため、試験化合物の各濃度に対し、特異結合のパーセンテージを以下の通り算出した。
特異結合％＝（Ｘ−Ｎ／Ｔ−Ｎ）×１００
式中、
Ｘ：すべての濃度の化合物に対する、結合したリガンドの量
Ｔ：完全結合、放射標識したリガンドへの最大結合量
Ｎ：非特異結合、使用する受容体に関係なく、非特異的に結合した、放射標識したリガンドの量
【００５７】
各濃度の化合物を３通り試験し、その平均値を使用して、特異結合の実験値（％）対化合物濃度を求めた。親和性のデータは、α１サブユニットに対しては１０−５Ｍ及び１０−７Ｍ濃度で、α２サブユニットに対しては１０−５Ｍの濃度で、阻害（％）として表現される。これらの試験の結果をそれぞれ表１及び２に示す。
【００５８】
表１．ＧＡＢＡＡ受容体のα１サブユニットに対する親和性
【表１】
【００５９】
表２．ＧＡＢＡＡ受容体のα２サブユニットに対する親和性
【表２】
【００６０】
ｂ）予測的鎮静−催眠作用のインビボ測定
マウスにおける予測的鎮静−催眠試験によりこれらの化合物のインビボ効果を評価した（Ｄ．Ｊ．Ｓａｎｇｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３１３、３５〜４２、１９９６及びＧ．Ｇｒｉｅｂｅｌら、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１４６、２０５〜２１３、１９９９）。
【００６１】
試験時の体重が２２〜２６ｇのオスのＣＤ１マウス５〜８匹のグループを使用した。Ｔｗｅｅｎ８０、１滴を含む０．２５％寒天中に懸濁した１０ｍＬ／ｋｇの容量の試験化合物を、単回の等モルの腹腔内投与量で投与した。各経路につき２回の投与を試験した。対照動物には、賦形剤のみを与えた。Ｓｍａｒｔ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐａｎｌａｂ、Ｓ．Ｌ．、Ｓｐａｉｎ）を用いて、各マウスに対し、腹腔内（ｉｐ）投薬後３０分間の間、５分間隔で移動距離をｃｍで記録する。治療した動物対対照動物（最初の５分は切り捨てた）の移動距離の阻害のパーセンテージ及びＥＤ５０数値を算出した。この試験の結果を表３及び４に示す。
【００６２】
表３．マウスにおけるインビボの鎮静−催眠活性の測定
【表３】
【００６３】
表４．マウスの鎮静を誘発するＥＤ５０数値の測定
【表４】
【００６４】
従来技術の他の代表的なピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンと比較して、本発明の調製例１１の化合物は、明らかにより低いＥＤ５０を示した。調製例１１の化合物は、治療効果を誘発するための投与量がより低くて済むので、インビボでより強力なことを意味する。
【００６５】
ｃ）ヒト肝実質細胞のサイトゾル部分における代謝安定度のインビトロ測定
化合物をジメチルスルホキシド中に溶解し、初濃度１０ｍＭを達成した。この保存液を次いで溶媒で希釈し、緩衝して最終アッセイ濃度５μＭを得る。化合物は、１．０ｍｇ／ｍＬの貯蔵ヒトサイトゾル（Ｘｅｎｏｔｅｃｈ ｐｌｃから入手）を３７℃でインキュベートしたものを、単一濃度５μＭで２度繰り返して試験した。代謝は、補助因子の存在下又はその存在なしで評価し、０、６０及び１２０分の時点において、ＬＣ／ＭＳ分析により親化合物の損失として測定した。次いで残された親化合物のパーセンテージを算出した。結果を表５に示す。ジェネリックのＬＣ方法を使用した。
移動相：Ａ＝水中の０．１％ギ酸
Ｂ＝アセトニトリル中の０．１％ギ酸
ＨＰＬＣ欄：Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｃｌｉｐｉｕｓ Ｃ１８ ５μｍ、５０×３ｍｍ
流速：２ｍｌ．分−１
勾配：
【表５】
【００６６】
表５．ヒト肝実質細胞のサイトゾル部分の代謝安定度
【表６】
【００６７】
驚いたことに、ザレプロン及びＷＯ２００５０１４５９６の従来技術の化合物と比較して、調製例６及び１１の化合物は、６０及び１２０分の間のインキュベーション後に、より高いパーセンテージ（１０〜２０％）の親化合物が残っていることを示している。一方ザレプロンでは、残っている親化合物のパーセンテージは、いかなる時点においても低く、６０〜１２０分の生体内変換が高い。
【００６８】
ｄ）ＨｅｐＧ２、ＣＨＯ−Ｋ１及びＨｅＬａ細胞における、細胞毒性の２４時間インビトロ測定
ＨｅｐＧ２（ヒト肝癌細胞）及びＣＨＯ−Ｋ１（チャイニーズハムスター卵巣細胞）の両方をアメリカ培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、ＡＴＣＣ）から入手した。１．８７ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ（登録商標）を含有し、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、０．１ｍＭ非必須アミノ酸、１０００００Ｕ／Ｌペニシリン、１０００００μｇ／Ｌストレプトマイシン及び１０％のＦｏｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍを補充した、アール塩溶液含有の最小必須培地（ＭＥＭ）でＨｅｐＧ２を培養した。１ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ（登録商標）を含有し、１ｍＭ Ｌ−グルタミン、１０００００Ｕ／Ｌペニシリン、１０００００μｇ／Ｌストレプトマイシン及び１０％のＦｏｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍを補充したＨａｍ’ｓ Ｆ−１２培地でＣＨＯ−Ｋ１を維持した。Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙは、代謝活性のある細胞中に存在するデヒドロゲナーゼ酵素により水溶性のホルマザン産物に変わるテトラゾリウム塩（ＭＴＳ）を含有する。ホルマザン産物の量は、培養中の生細胞の数に比例する。
【００６９】
化合物をＤＭＳＯ中に溶解し、初濃度１００ｍＭを達成した。ＤＭＳＯ中の保存液から段階的な希釈液を生成し、５０〜０．２５ｍＭの濃度範囲を達成した。次いで、保存液及び段階的な希釈液をそれぞれの細胞培養培地で１：１００に希釈した。ＣＨＯ−Ｋ１細胞の場合、１０００、５００、２５０、１００、５０、２５、１０、５及び２．５μＭの濃度のものを調製し、ＩＣ５０を評価した一方、ＨｅｐＧ２細胞の場合には、１０００、１００、１０及び１μＭの最終濃度の最後のものをアッセイし、細胞のパーセンテージを算出した。すべての穴のＤＭＳＯの最終濃度は１％ｖ／ｖであった。細胞系は両方とも２４時間の間、試験化合物とインキュベートした。ＭＴＳ染料の添加、さらに１時間のインキュベーションに続き、相対的な細胞生存度を４９０ｎｍで分光光度法で求めた。陽性対照としてタモキシフェンを使用した。
【００７０】
類似プロトコルを使用して、２４時間でＨｅＬａ細胞の細胞毒性を求めた。結果を表６に示す。
【００７１】
表６．ＨｅｐＧ２、ＣＨＯ−Ｋ１及びＨｅＬａ細胞における２４時間での細胞毒性
【表７】
【００７２】
これらの結果によると、ＨｅｐＧ２細胞系においては、調製例１１の化合物に対する細胞生存性がインディプロンより高い（８４．５％対７０％）ので、本発明の調製例１１の化合物は、参照化合物インディプロンよりも毒性が低いことがわかる。アッセイを行った他の２つの細胞系においてもこのような結果が確認された。
【００７３】
（調製例１）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４８ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンと、０．１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、溶出剤として酢酸エチル−ジクロロメタンを用いて、これをクロマトグラフにかけると（シリカゲル）、Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドに相当する固体６１ｍｇ（収率４９％）を得た。
【化７】
【００７４】
（調製例２）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物にジクロロメタン（１５ｍＬ）及び飽和した炭酸水素ナトリウム溶液（１０ｍＬ）を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率８１％）として９５ｍｇのＮ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化８】
【００７５】
（調製例３）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０５４ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンと、０．１２０ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物にジクロロメタン（１５ｍＬ）及び飽和した炭酸水素ナトリウム溶液（１０ｍＬ）を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、溶出剤として酢酸エチル−ジクロロメタンを用いて、これをクロマトグラフにかけると（シリカゲル）、Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドに相当する固体３５ｍｇ（収率２４％）を得た。
【化９】
【００７６】
（調製例４）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４６ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）の５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１２０ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留で取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７７％）として１０８ｍｇのＮ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化１０】
【００７７】
（調製例５）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４３ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンと、０．１ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、溶出剤として酢酸エチル−ジクロロメタンを用いて、これをクロマトグラフにかけると（シリカゲル）、Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドに相当する固体５８ｍｇ（収率４８％）を得た。
【化１１】
【００７８】
（調製例６）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０３６ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）の５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７０％）として８１ｍｇのＮ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを得た。
【化１２】
【００７９】
（調製例７）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１２ｍＬ中の０．０５０ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンと、０．１２４ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を、１．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７７％）として５６ｍｇのＮ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを得た。
【化１３】
【００８０】
（調製例８）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１２ｍＬ中の０．０４２ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）の５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１２４ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を、１．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７０％）として９９ｍｇのＮ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを得た。
【化１４】
【００８１】
（調製例９）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４６ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の５−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７５％）として９２ｍｇのＮ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化１５】
【００８２】
（調製例１０）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１２ｍＬ中で０．０５５ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）の５−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１２０ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、１．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７３％）として１０６ｍｇのＮ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化１６】
【００８３】
（調製例１１）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４１ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）の５−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これにより酢酸エチル存在下で、固体（収率５５％）として６６ｍｇのＮ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを得た。
【化１７】
【００８４】
（調製例１２）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１２ｍＬ中の０．０４８ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）の５−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１２４ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を、１．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率６０．５％）として８９ｍｇのＮ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを得た。
【化１８】
【００８５】
（調製例１３）
Ｎ−｛２−メチル−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中０．０７４ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の（５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−チオフェン−２−イル−メタノンと、０．１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−メチル−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率８８％）として１３２ｍｇのＮ−｛２−メチル−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化１９】
【００８６】
（調製例１４）
Ｎ−｛２−メトキシ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０７０ｇ（０．３６ｍｍｏｌ）の（５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−チオフェン−２−イル−メタノンと、０．１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−メトキシ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留で取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率９２％）として１３５ｍｇのＮ−｛２−メトキシ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化２０】
【００８７】
（調製例１５）
Ｎ−｛２，４−ジフルオロ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．２１７ｇ（１．１２ｍｍｏｌ）の（５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−チオフェン−２−イル−メタノンと、０．３ｇ（１．１２ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２，４−ジフルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率６９％）として３２０ｍｇのＮ−｛２，４−ジフルオロ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化２１】
【００８８】
（調製例１６）
Ｎ−｛５−フルオロ−２−メトキシ−３−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．１８０ｇ（０．９３ｍｍｏｌ）の（５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−チオフェン−２−イル−メタノンと、０．２７５ｇ（０．９３ｍｍｏｌ）のＮ−［３−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−５−フルオロ−２−メトキシ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチル存在下で、固体（収率４０％）として１６０ｍｇのＮ−｛５−フルオロ−２−メトキシ−３−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化２２】
【００８９】
（組成例１）
５ｍｇ錠剤
【表８】
【００９０】
（組成例２）
１０ｍｇカプセル剤
【表９】
【００９１】
（組成例３）
経口ドロップ剤
【表１０】
【００９２】
（組成例４）
２．５ｍｇ錠剤
【表１１】
【００９３】
（組成例５）
５ｍｇカプセル剤
【表１２】
【００９４】
（組成例６）
経口ドロップ剤
【表１３】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＡＢＡＡ受容体に対する親和性を有する薬剤、具体的にはピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン、より具体的には、Ｎ−｛２−置換−５−［３−置換−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド及びＮ−｛２−置換−５−［３−置換−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを対象とする。
【背景技術】
【０００２】
ＧＡＢＡＡ受容体（γアミノ酪酸Ａ）は、膜イオンチャネルを形成する五量体タンパク質である。ＧＡＢＡＡ受容体は、鎮静、不安、筋緊張、てんかん発作性の活動及び記憶機能の制御に関与している。これらの作用は、ＧＡＢＡＡ受容体の決まったサブユニット、特にα１サブユニット及びα２サブユニットによるものである。
【０００３】
鎮静状態は、α１サブユニットにより調節される。ゾルピデムは、α１受容体に対し高い親和性を有するという特徴があり、その鎮静作用及び催眠作用はこれら受容体によりインビボで媒介される。同様に、ザレプロンの催眠作用もα１受容体で媒介される。
【０００４】
ジアゼパムの不安緩解作用は、α２受容体を発現するニューロン集団におけるＧＡＢＡ作動性伝達の増強により媒介される。これは、α２受容体が、不安の治療に対して極めて特異的な標的であることを示している。
【０００５】
ジアゼパムでの筋弛緩は、α２受容体で主に媒介される。なぜならこれらの受容体は、脊髄において極めて特異的な発現を示すからである。
【０００６】
ジアゼパムの抗痙攣効果は、一部α１受容体によるものである。記憶障害性化合物であるジアゼパムにおいて、順向性健忘症がα１受容体で媒介される。
【０００７】
ＧＡＢＡＡ受容体並びにそのα１−及びα２−サブユニットは、Ｈ．Ｍｏｈｌｅｒら（Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．、３００、２〜８、２００２）、Ｈ．Ｍｏｈｌｅｒら（Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１、２２〜２５、２００１）、Ｕ．Ｒｕｄｏｌｐｈら（Ｎａｔｕｒｅ、４０１、７９６〜８００、１９９９）、及びＤ．Ｊ．Ｎｕｔｔら（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、１７９、３９０〜３９６、２００１）で広く概説されている。
【０００８】
ジアゼパム及び他の古典的なベンゾジアゼピンは、抗不安薬、催眠薬、抗痙攣剤及び筋弛緩剤として広く使用されている。その副作用は、順向性健忘症、運動活動の低下及びエタノール作用の増強を含む。
【０００９】
このような背景で、本発明の化合物は、睡眠障害、好ましくは不眠症、不安及びてんかんの臨床的応用のためのα１−及びα２−ＧＡＢＡＡ受容体のリガンドである。
【００１０】
不眠症は、大いにまん延している疾患である。人口の１０％が慢性的にそれに冒されており、一過性不眠症を計算に入れると３０％になる。不眠症とは、眠りにつくこと及び眠り続けることが困難であることを言い、疲労感、エネルギー不足、集中力の低下及びいらいらなど、次の日への持ち越される影響を伴う。この病気による社会及び健康への影響は重大で、社会経済に明らかな反動を生じる結果となっている。
【００１１】
不眠症の対応における薬理学的治療は、バルビツレート及び抱水クロラールを第一に含むが、これらの薬物は、多数の既知の有害作用、例えば、過量投与による毒性、代謝誘発、及び依存性及び耐性の増大などを引き起こす。加えてこれらは、何よりもレム睡眠段階の持続時間及び数を減らすことによって睡眠の構造に影響を及ぼす。後にベンゾジアゼピンは、その低毒性のため重要な治療上の進歩をもたらしたが、ベンゾジアゼピンは、依存性、筋弛緩、健忘及び投薬の中断後に起こる不眠症への逆戻りという重大な問題をさらに示した。
【００１２】
知られている最新の治療手法は、非ベンゾジアゼピン睡眠薬、例えばピロロ［３，４−ｂ］ピラジン（ゾピクロン）、イミダゾ［１，２−ａ］ピリジン（ゾルピデム）、及び最後にピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン（ザレプロン）などの導入である。後に２種の新しいピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンであるインディプロン及びオシナプロンの開発が開始されたが、後者はむしろ抗不安薬の作用がある。これらすべての化合物は、急速な睡眠の誘発を示し、ベンゾジアゼピンよりも、次の日への影響が少なく、乱用に対する可能性及び不眠症に逆戻りするリスクが低い。これらの化合物が作用する機序は、ベンゾジアゼピン結合部位への結合を介してのＧＡＢＡＡ受容体のアロステリック活性化である（Ｃ．Ｆ．Ｐ．Ｇｅｏｒｇｅ、Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ、３５８、１６２３−１６２６、２００１）。ベンゾジアゼピンは、ＧＡＢＡＡ受容体の結合部位では非特異的リガンドである一方、ゾルピデム及びザレプロンは、α１−サブユニットに対してより大きな選択性を示す。これにもかかわらず、これらの薬物は依然として睡眠の構造に影響を及ぼし、長期治療における依存性を誘発する恐れがある。
【００１３】
関連する様々なピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンが、特許刊行物ＵＳ４１７８４４９、ＵＳ４２８１０００、ＵＳ４５２１４２２（２−ピリジニル［７−（４−ピリジニル）ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−３−イル］メタノン、オシナプロン）、ＵＳ４５７６９４３、ＵＳ４６２６５３８（Ｎ−｛３−［３−（シアノピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−エチル−アセトアミド、ザレプロン）、ＵＳ４６５４３４７、ＵＳ６３９９６２１（Ｎ−｛３−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド、インディプロン）、ＷＯ２００５０１４５９６、ＷＯ２００５０１４５９７及びＷＯ２００６１３６５３０において開示されている。
【００１４】
不眠症の対応における新しい活性化合物の研究は、潜在的な健康需要に応えるものである。なぜなら最近導入された睡眠薬でさえ、依然として睡眠の構造に影響を及ぼし、長期の治療における依存性を誘発する恐れがあるからである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
したがって、副作用の危険性がより少ない新しい催眠薬の開発に焦点を合わせることが望ましい。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
発明者らは、ＧＡＢＡＡに対し、特にそのα１−及びα２−サブユニットに対して活性のある新しいピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンを発見した。したがって本発明の化合物は、ＧＡＢＡＡ受容体α１−及びα２−サブユニットにより媒介されるすべての疾患の治療及び予防に有用である。そのような疾患の非限定的な例は、睡眠障害、好ましくは不眠症、不安及びてんかんである。本発明の化合物が関連する適応症の非限定的な例は、不眠症又は麻酔など、睡眠の誘発、鎮静の誘発又は筋弛緩の誘発が必要とされるすべての疾患又は状態である。
【００１７】
ザレプロンというピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン参照化合物は、本発明の化合物と構造が類似する化合物である。しかし、ザレプロンは、アルデヒドオキシダーゼのために広範な生体内変換を示す（Ｂ．Ｇ．Ｌａｋｅら、「ヒト肝臓によるザレプロンの代謝：アルデヒドオキシダーゼ介入の証拠（Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ｚａｌｅｐｌｏｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｌｉｖｅｒ： ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｌｄｅｈｙｄｅ ｏｘｉｄａｓｅ）」、Ｘｅｎｏｂｉｏｔｉｃａ、２００２年１０月、３２（１０）：８３５〜４７、及びＫ．Ｋａｗａｓｈｉｍａら、「鎮静性−催眠性ザレプロンの肝臓代謝におけるアルデヒドオキシダーゼ依存性の、サルとラット間の顕著な種差（Ａｌｄｅｈｙｄｅ ｏｘｉｄａｓｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｒｋｅｄ ｓｐｅｃｉｅｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｈｅｐａｔｉｃ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｄａｔｉｖｅ−ｈｙｐｎｏｔｉｃ ｚａｌｅｐｌｏｎ，ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｏｎｋｅｙｓ ａｎｄ ｒａｔｓ）」、Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ Ｄｉｓｐｏｓ．１９９９年３月、２７（３）：４２２〜８）。ザレプロンよりも代謝安定度が良い別のピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンが当分野で知られているが、このインディプロンという化合物は、細胞生存度実験で示されるように、中毒性の影響がより大きいという弱点がある。
【００１８】
生体内変換に対する化合物の感受性は、代謝安定度、すなわち体内での薬物の半減期、及びそれが代謝物を形成するかどうかに関連する。これらは、生体利用度、毒性及び薬物間の相互作用に対する投薬の可能性を評価する上で重要なパラメータであり、言い換えれば、ヒトへの使用の可能性を決定する上で重要なパラメータである。この観点から、最大の代謝安定度を有する化合物は、薬物間の相互作用の可能性を最低限に抑え、投薬間隔をより短くしないで済む。
【００１９】
本発明の化合物は、予想外に少ない生体内変換、すなわち知られている他の関連のピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンよりも高い代謝安定度を示し、これにより薬物動態学プロファイルが改善され、薬理学的効果の維持を容易にし、さらに完全な夜間睡眠の維持に対し明らかに適応している。この特性は、フェニル環の置換、すなわち、置換基Ｒ３及びＲ４に関連している。特に優れているのは、化合物がフェニル環上に電子を除去する置換基を有することである。
【００２０】
加えて実施例で例示する通り、本発明の化合物は、細胞生存度実験で実証されるように、インビボでの鎮静／催眠の治療作用に優れ、中毒性の影響が低いことも示されている。
【００２１】
したがって、本発明は、ＧＡＢＡＡ受容体のリガンドである、式（Ｉ）
【化１】
（式中、Ｒ及びＲ１はアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）を表し、Ｒ２はシアノ、ニトロ及びチオフェン−２−カルボニルからなる群から選択され、Ｒ３は水素及びハロゲンからなる群から選択され、Ｒ４は水素、ハロゲン、アルキル（Ｃ１〜Ｃ６）及びアルコキシ（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群から選択され、Ｒ５は水素及びアルキル（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群から選択され、並びにＹは−ＣＯ−及び−ＳＯ２−からなる群から選択される）の化合物、並びに医薬として許容可能なその塩及び水和物に関する。
【００２２】
本発明の別の目的は、不安、てんかん及び不眠症を含めた睡眠障害を治療又は予防し、前記化合物又は医薬として許容可能なその塩若しくは水和物の治療有効量を投与することによって、鎮静−催眠、麻酔、睡眠及び筋弛緩を誘発するための新規な方法を提供することである。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
前記の通り、本発明は、式（Ｉ）
【化２】
（式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＹは、上述の通りである）の化合物、並びに医薬として許容可能なその塩及び水和物に関する。
【００２４】
本明細書中で使用する「医薬として許容可能な塩」という用語は、有機酸及び無機酸、例えば臭水素酸、塩酸、リン酸、硝酸、硫酸、酢酸、アジピン酸、アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、グルタミン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸、シュウ酸、ピバル酸、プロピオン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、コハク酸、酒石酸などから形成されるいかなる塩も包含する。
【００２５】
式（Ｉ）の具体的な化合物は、
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
Ｎ−｛２−メチル−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２−メトキシ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
Ｎ−｛２，４−ジフルオロ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；及び
Ｎ−｛５−フルオロ−２−メトキシ−３−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
からなる群から選択される。
【００２６】
以下の反応スキームは、本発明の化合物の調製を例示するものである。
【化３】
Ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＹは上述の通りであり、ＱはＮ（ジアルキル（Ｃ１〜Ｃ６））、アルキルチオ（Ｃ１〜Ｃ６）及びアルコキシ（Ｃ１〜Ｃ６）からなる群から選択される適切な脱離基である。Ｑは、ジメチルアミノ、メチルチオ又はメトキシからなる群から選択されるのが好ましい。
【００２７】
一般式（ＩＩＩ）のアミノピラゾールと、適切に置換された１−アリール−２−プロペン−１−オン（ＩＩ）の反応は、５０℃〜１３０℃の温度範囲で、氷酢酸、エタノール、メタノール、ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシドなどの不活性な極性プロトン溶媒又は極性非プロトン溶媒中で行う。数時間（反応時間）経過後、溶媒を取り除き、得た残留物を炭酸水素ナトリウム水溶液とジクロロメタンとに分割する。有機層を蒸発して乾燥させることによって得た粗原料を以下の方法のうちの１つで精製する：（ａ）溶出剤として酢酸エチル又はジクロロメタン／メタノールを用いたシリカゲルクロマトグラフィー又は（ｂ）適切な溶媒（酢酸エチル、エタノール、メタノールなど）中での結晶化。
【００２８】
Ｑがジメチルアミノの場合の式（ＩＩ）の中間体［中間体（ＶＩ）］は、スキーム２
【化４】
（式中、Ｒ、Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４及びＹは上述の通りである）に示す反応順序に従い得ることができる。
【００２９】
Ｙがスルホニル基の場合の式（ＩＶ）の中間体は、Ｒ．Ｈ．Ｕｌｏｔｈら（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．９、８８〜９６、１９６６）に記載の方法に従い調製する。
【００３０】
式（Ｖ）の中間体をもたらす中間体（ＩＶ）のアルキル化は、有機化学の専門家達に周知の方法に従い、アニオンの形成及びそれに続くアルキルハロゲン化物との反応を介して実施される。
【００３１】
式（Ｖ’）及び（ＶＩ）のエナミノンは、Ｊ．Ｍ．Ｄｏｍａｇａｌａら（Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍ．、２６（４）、１１４７〜５８、１９８９）及びＫ．Ｓａｗａｄａら（Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．、４９（７）、７９９〜８１３、２００１）に記載されているエナミンの一般的な合成手順に従い、アセトフェノンと、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（ＤＭＦＤＭＡ）又はブレデレック試薬（ｔｅｒｔ−ブトキシビス（ジメチルアミノ）メタン）を反応させることによって調製する。
【００３２】
Ｑがジメチルアミノであり、Ｙがスルホニルであり、Ｒ１がメチル（ＶＩＩ）である場合の式（ＩＩ）の中間体は、スキーム３
【化５】
（式中、Ｒ、Ｒ３、及びＲ４は、上の通り定義される）に従い、代わりに調製することができる。
【００３３】
（ＩＶ）から（ＶＩＩ）への変換は、エナミノンの形成、同時に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタールのメチル化剤としての特性を使用した結果起こるＮ−メチル−スルホンアミドの形成へとつながる。
【００３４】
Ｑがジメチルアミノであり、Ｒ１がメチル（Ｘ）である場合の式（ＩＩ）の中間体は、スキーム４
【化６】
（式中、Ｒ、Ｒ３、Ｒ４及びＹは、上の通り定義される）に従い調製することもできる。
【００３５】
本方法の利点は、スルホンアミド又はカルボキサミドの形成が、プロセスの最後の状態において生じるという事実に基づく。その結果、多くの系統の生成物の調製において、反応ステップの総数が減少する。さらに、スキームに示すように、（ＶＩＩＩ）から（ＩＸ）への変換は、ワンポットプロセスにおける以下の３つの反応を引き起こす：（ａ）エナミノンの形成、（ｂ）トリフルオロアセトアミドのメチル化、及び（ｃ）Ｎ−メチル化アミンを生成する脱アシル化。（ＩＸ）と、対応するスルホン酸クロライド又はカルボン酸クロライドのその後の反応により、中間体（Ｘ）を得ることになる。
【００３６】
本発明の化合物又はその医薬として許容可能なそれらの塩又は水和物は、ヒト又は非ヒト哺乳動物におけるＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患を治療又は予防するための薬物を調製するために使用することができる。より具体的には、ＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患は、α１−ＧＡＢＡＡ受容体の調節及び／又はα２−ＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患を含む。そのような疾患の非限定的なリストには、不安、てんかん、及び不眠症を含めた睡眠障害などが含まれる。
【００３７】
本発明の別の実施形態は、ヒト又は非ヒト哺乳動物における不安を治療又は予防するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００３８】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物におけるてんかんを治療又は予防するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００３９】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における睡眠障害を治療又は予防するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４０】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における不眠症を治療又は予防するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４１】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における鎮静−催眠を誘発するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４２】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における麻酔を誘発するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４３】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における睡眠及びその持続を誘発するのに必要な時間を調節するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能な塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４４】
本発明の別の実施形態は、それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における筋弛緩を誘発するための薬物を調製するための、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の使用を提供することである。
【００４５】
本発明は、ヒト又は非ヒト哺乳動物におけるＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患を患っているヒト又は非ヒト哺乳動物への治療又は予防の方法であって、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩又は水和物の治療有効量を、医薬として許容可能な希釈剤又は担体と共に、それを必要とする前記ヒト又は前記非ヒト哺乳動物に投与することを含む方法にも関する。より具体的には、ＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患は、α１−ＧＡＢＡＡ受容体の調節及び／又はα２−ＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患を含む。そのような疾患の非限定的なリストは、不安、てんかん、及び不眠症を含めた睡眠障害などが含まれる。
【００４６】
本明細書で使用する場合「哺乳動物」という用語は、哺乳動物の種類のより高度な脊椎動物を指すものとする。「哺乳動物」という用語は、ヒトを含むが、これに限らない。
【００４７】
本発明の別の実施形態は、本発明の化合物又は医薬として許容可能なその塩及び水和物を、治療上不活性な担体と組み合わせて含有する医薬組成物を提供することである。
【００４８】
最も適切な経路は、治療する状態の性質及び重症度によって決まることになるが、組成物は経口、直腸及び非経口（皮下、筋肉内、及び静脈内を含めて）からの投与に適切なものが含まれる。本発明の最も好ましい経路は経口の経路である。組成物は単位剤形の形で好都合に提供され、製薬分野で周知の任意の方法で調製し得る。
【００４９】
活性化合物は、従来の薬剤調合の技法に従い医薬担体と組み合わせることができる。担体は、例えば経口又は非経口（静脈注射又は点滴を含む）などの投与に望ましい剤形に応じて、様々な形態を取り得る。経口剤形用の組成物の調製においては、通常の医薬媒体のいずれも使用し得る。通常の医薬媒体には、例えば経口液体製剤（例えば、懸濁液、溶液、乳濁液及びエリキシル剤など）の場合には、水、グリコール類、オイル類、アルコール類、矯味剤、保存剤、着色剤など、エアロゾル、又は経口固体製剤（例えば、粉剤、カプセル剤及び錠剤など）の場合には、デンプン類、糖類、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体が含まれるが、経口液体製剤よりも経口固体製剤が好ましい。
【００５０】
投与しやすさから、錠剤及びカプセル剤が最も有利な経口単位剤形であり、この場合固体医薬担体が使用される。必要に応じて、標準的な水系又は非水系の方法で錠剤をコーティングしてもよい。
【００５１】
使用に適切な投与量の範囲は、１日の全投与量が約０．０１ｍｇ〜約１００．００ｍｇであり、１日１回の投与として、又は必要に応じてこれを分割して投与する。
【００５２】
本発明の化合物は、α１−及びα２−ＧＡＢＡＡ受容体に高い親和性を有する。インビトロの結果は、鎮静−催眠試験で得たインビボの結果と一致する。
【００５３】
本発明の化合物の薬理学的活性は、以下に示すように求めた。
【００５４】
ａ）リガンド結合実験：α１−及びα２−ＧＡＢＡＡ受容体に対する試験化合物の親和性の測定
実験時の体重が２００〜２５０ｇのオスのスプラーグドーリーラットを使用した。その動物を断頭した後、その小脳（α１−ＧＡＢＡＡ受容体を主に含有する組織）及び脊髄（α２−ＧＡＢＡＡ受容体を主に含有する組織）を取り出した。Ｊ．Ｌａｍｅｈら（Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏ−Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、２４、９７９−９９１、２０００）及びＨ．Ｎｏｇｕｃｈｉら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．、４３４、２１〜２８、２００２）の方法にわずかな修正を加えた方法に従い膜を調製した。組織を秤量して、５０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ７．４）溶液中に、１：４０（ｖ／ｖ）で懸濁させ、脊髄の場合には０．３２Ｍのショ糖溶液中で懸濁し、ホモジナイズし、次いで７℃で１０分間、２００００ｇで遠心した。生成したペレットを同一条件下で再懸濁し、再び遠心した。ペレットは最後に最小容量で再懸濁し、一晩−８０℃で保持した。翌日、最終的にペレットが、小脳の場合には１：１０（ｖ／ｖ）の比で、脊髄の場合には１：５（ｖ／ｖ）の比で再懸濁されるまで、この工程を繰り返した。
【００５５】
リガンドとして放射標識したフルマゼニルを用いた競合試験により親和性を求めた。試験は、９６穴のマイクロタイタープレートを用いて、Ｓ．Ａｒｂｉｌｌａら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１３０、２５７〜２６３、１９８６）及びＹ．Ｗｕら（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２７８、１２５〜１３２、１９９５）により記載された方法に従い実施した。本研究の受容体を含む膜と、フルマゼニル（最終濃度を１ｎＭに放射標識）と、濃度を高めた試験化合物（５０ｍＭ［ｐｈ７．４］トリスＨＣｌ緩衝液中の総容量が２３０μＬ）とをインキュベートした。同時に、膜を、放射標識したフルマゼニル（総結合１００％）のみと、放射標識していない濃度を高めたフルマゼニル（非特異結合、放射標識したリガンドの推定％）の存在下とでインキュベートした。放射標識したリガンドを加えることで反応を開始し、続いて４℃で６０分間インキュベートした。インキュベーション期間の終わりに、２００μＬの反応物をマルチスクリーンプレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に移し、真空マニフォールドを用いて濾過し、次いで冷たい試験緩衝液で３回洗浄した。マルチスクリーンプレートには、受容体と、受容体に結合している放射標識したリガンドとを含有する膜を保持するＧＦ／Ｂフィルターが備えられていた。洗浄後、プレートは乾くまで放置した。乾燥させた後、シンチレーション液を加え、撹拌下で一晩放置した。次の日、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａシンチレーションカウンターを用いてプレートをカウントした。
【００５６】
結果分析のため、試験化合物の各濃度に対し、特異結合のパーセンテージを以下の通り算出した。
特異結合％＝（Ｘ−Ｎ／Ｔ−Ｎ）×１００
式中、
Ｘ：すべての濃度の化合物に対する、結合したリガンドの量
Ｔ：完全結合、放射標識したリガンドへの最大結合量
Ｎ：非特異結合、使用する受容体に関係なく、非特異的に結合した、放射標識したリガンドの量
【００５７】
各濃度の化合物を３通り試験し、その平均値を使用して、特異結合の実験値（％）対化合物濃度を求めた。親和性のデータは、α１サブユニットに対しては１０−５Ｍ及び１０−７Ｍ濃度で、α２サブユニットに対しては１０−５Ｍの濃度で、阻害（％）として表現される。これらの試験の結果をそれぞれ表１及び２に示す。
【００５８】
表１．ＧＡＢＡＡ受容体のα１サブユニットに対する親和性
【表１】
【００５９】
表２．ＧＡＢＡＡ受容体のα２サブユニットに対する親和性
【表２】
【００６０】
ｂ）予測的鎮静−催眠作用のインビボ測定
マウスにおける予測的鎮静−催眠試験によりこれらの化合物のインビボ効果を評価した（Ｄ．Ｊ．Ｓａｎｇｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３１３、３５〜４２、１９９６及びＧ．Ｇｒｉｅｂｅｌら、Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１４６、２０５〜２１３、１９９９）。
【００６１】
試験時の体重が２２〜２６ｇのオスのＣＤ１マウス５〜８匹のグループを使用した。Ｔｗｅｅｎ８０、１滴を含む０．２５％寒天中に懸濁した１０ｍＬ／ｋｇの容量の試験化合物を、単回の等モルの腹腔内投与量で投与した。各経路につき２回の投与を試験した。対照動物には、賦形剤のみを与えた。Ｓｍａｒｔ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐａｎｌａｂ、Ｓ．Ｌ．、Ｓｐａｉｎ）を用いて、各マウスに対し、腹腔内（ｉｐ）投薬後３０分間の間、５分間隔で移動距離をｃｍで記録する。治療した動物対対照動物（最初の５分は切り捨てた）の移動距離の阻害のパーセンテージ及びＥＤ５０数値を算出した。この試験の結果を表３及び４に示す。
【００６２】
表３．マウスにおけるインビボの鎮静−催眠活性の測定
【表３】
【００６３】
表４．マウスの鎮静を誘発するＥＤ５０数値の測定
【表４】
【００６４】
従来技術の他の代表的なピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジンと比較して、本発明の調製例１１の化合物は、明らかにより低いＥＤ５０を示した。調製例１１の化合物は、治療効果を誘発するための投与量がより低くて済むので、インビボでより強力なことを意味する。
【００６５】
ｃ）ヒト肝実質細胞のサイトゾル部分における代謝安定度のインビトロ測定
化合物をジメチルスルホキシド中に溶解し、初濃度１０ｍＭを達成した。この保存液を次いで溶媒で希釈し、緩衝して最終アッセイ濃度５μＭを得る。化合物は、１．０ｍｇ／ｍＬの貯蔵ヒトサイトゾル（Ｘｅｎｏｔｅｃｈ ｐｌｃから入手）を３７℃でインキュベートしたものを、単一濃度５μＭで２度繰り返して試験した。代謝は、補助因子の存在下又はその存在なしで評価し、０、６０及び１２０分の時点において、ＬＣ／ＭＳ分析により親化合物の損失として測定した。次いで残された親化合物のパーセンテージを算出した。結果を表５に示す。ジェネリックのＬＣ方法を使用した。
移動相：Ａ＝水中の０．１％ギ酸
Ｂ＝アセトニトリル中の０．１％ギ酸
ＨＰＬＣ欄：Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｃｌｉｐｉｕｓ Ｃ１８ ５μｍ、５０×３ｍｍ
流速：２ｍｌ．分−１
勾配：
【表５】
【００６６】
表５．ヒト肝実質細胞のサイトゾル部分の代謝安定度
【表６】
【００６７】
驚いたことに、ザレプロン及びＷＯ２００５０１４５９６の従来技術の化合物と比較して、調製例６及び１１の化合物は、６０及び１２０分の間のインキュベーション後に、より高いパーセンテージ（１０〜２０％）の親化合物が残っていることを示している。一方ザレプロンでは、残っている親化合物のパーセンテージは、いかなる時点においても低く、６０〜１２０分の生体内変換が高い。
【００６８】
ｄ）ＨｅｐＧ２、ＣＨＯ−Ｋ１及びＨｅＬａ細胞における、細胞毒性の２４時間インビトロ測定
ＨｅｐＧ２（ヒト肝癌細胞）及びＣＨＯ−Ｋ１（チャイニーズハムスター卵巣細胞）の両方をアメリカ培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、ＡＴＣＣ）から入手した。１．８７ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ（登録商標）を含有し、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、０．１ｍＭ非必須アミノ酸、１０００００Ｕ／Ｌペニシリン、１０００００μｇ／Ｌストレプトマイシン及び１０％のＦｏｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍを補充した、アール塩溶液含有の最小必須培地（ＭＥＭ）でＨｅｐＧ２を培養した。１ｍＭ Ｇｌｕｔａｍａｘ（登録商標）を含有し、１ｍＭ Ｌ−グルタミン、１０００００Ｕ／Ｌペニシリン、１０００００μｇ／Ｌストレプトマイシン及び１０％のＦｏｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍを補充したＨａｍ’ｓ Ｆ−１２培地でＣＨＯ−Ｋ１を維持した。Ｐｒｏｍｅｇａ ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ９６（登録商標）Ａｑｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙは、代謝活性のある細胞中に存在するデヒドロゲナーゼ酵素により水溶性のホルマザン産物に変わるテトラゾリウム塩（ＭＴＳ）を含有する。ホルマザン産物の量は、培養中の生細胞の数に比例する。
【００６９】
化合物をＤＭＳＯ中に溶解し、初濃度１００ｍＭを達成した。ＤＭＳＯ中の保存液から段階的な希釈液を生成し、５０〜０．２５ｍＭの濃度範囲を達成した。次いで、保存液及び段階的な希釈液をそれぞれの細胞培養培地で１：１００に希釈した。ＣＨＯ−Ｋ１細胞の場合、１０００、５００、２５０、１００、５０、２５、１０、５及び２．５μＭの濃度のものを調製し、ＩＣ５０を評価した一方、ＨｅｐＧ２細胞の場合には、１０００、１００、１０及び１μＭの最終濃度の最後のものをアッセイし、細胞のパーセンテージを算出した。すべての穴のＤＭＳＯの最終濃度は１％ｖ／ｖであった。細胞系は両方とも２４時間の間、試験化合物とインキュベートした。ＭＴＳ染料の添加、さらに１時間のインキュベーションに続き、相対的な細胞生存度を４９０ｎｍで分光光度法で求めた。陽性対照としてタモキシフェンを使用した。
【００７０】
類似プロトコルを使用して、２４時間でＨｅＬａ細胞の細胞毒性を求めた。結果を表６に示す。
【００７１】
表６．ＨｅｐＧ２、ＣＨＯ−Ｋ１及びＨｅＬａ細胞における２４時間での細胞毒性
【表７】
【００７２】
これらの結果によると、ＨｅｐＧ２細胞系においては、調製例１１の化合物に対する細胞生存性がインディプロンより高い（８４．５％対７０％）ので、本発明の調製例１１の化合物は、参照化合物インディプロンよりも毒性が低いことがわかる。アッセイを行った他の２つの細胞系においてもこのような結果が確認された。
【００７３】
（調製例１）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４８ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンと、０．１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、溶出剤として酢酸エチル−ジクロロメタンを用いて、これをクロマトグラフにかけると（シリカゲル）、Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドに相当する固体６１ｍｇ（収率４９％）を得た。
【化７】
【００７４】
（調製例２）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物にジクロロメタン（１５ｍＬ）及び飽和した炭酸水素ナトリウム溶液（１０ｍＬ）を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率８１％）として９５ｍｇのＮ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化８】
【００７５】
（調製例３）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０５４ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンと、０．１２０ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物にジクロロメタン（１５ｍＬ）及び飽和した炭酸水素ナトリウム溶液（１０ｍＬ）を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、溶出剤として酢酸エチル−ジクロロメタンを用いて、これをクロマトグラフにかけると（シリカゲル）、Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドに相当する固体３５ｍｇ（収率２４％）を得た。
【化９】
【００７６】
（調製例４）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４６ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）の５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１２０ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留で取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７７％）として１０８ｍｇのＮ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化１０】
【００７７】
（調製例５）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４３ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンと、０．１ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、溶出剤として酢酸エチル−ジクロロメタンを用いて、これをクロマトグラフにかけると（シリカゲル）、Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドに相当する固体５８ｍｇ（収率４８％）を得た。
【化１１】
【００７８】
（調製例６）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０３６ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）の５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７０％）として８１ｍｇのＮ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを得た。
【化１２】
【００７９】
（調製例７）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１２ｍＬ中の０．０５０ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−２Ｈ−ピラゾール−３−イルアミンと、０．１２４ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を、１．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７７％）として５６ｍｇのＮ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを得た。
【化１３】
【００８０】
（調製例８）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１２ｍＬ中の０．０４２ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）の５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１２４ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を、１．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７０％）として９９ｍｇのＮ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを得た。
【化１４】
【００８１】
（調製例９）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４６ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の５−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７５％）として９２ｍｇのＮ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化１５】
【００８２】
（調製例１０）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１２ｍＬ中で０．０５５ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）の５−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１２０ｇ（０．４３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、１．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率７３％）として１０６ｍｇのＮ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化１６】
【００８３】
（調製例１１）
Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０４１ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）の５−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１ｇ（０．３３ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−フルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これにより酢酸エチル存在下で、固体（収率５５％）として６６ｍｇのＮ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを得た。
【化１７】
【００８４】
（調製例１２）
Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド
氷酢酸１２ｍＬ中の０．０４８ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）の５−アミノ−３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−カルボニトリルと、０．１２４ｇ（０．３９ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−クロロ−フェニル］−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドの混合物を、１．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率６０．５％）として８９ｍｇのＮ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを得た。
【化１８】
【００８５】
（調製例１３）
Ｎ−｛２−メチル−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中０．０７４ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の（５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−チオフェン−２−イル−メタノンと、０．１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−メチル−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率８８％）として１３２ｍｇのＮ−｛２−メチル−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化１９】
【００８６】
（調製例１４）
Ｎ−｛２−メトキシ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．０７０ｇ（０．３６ｍｍｏｌ）の（５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−チオフェン−２−イル−メタノンと、０．１ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２−メトキシ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留で取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率９２％）として１３５ｍｇのＮ−｛２−メトキシ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化２０】
【００８７】
（調製例１５）
Ｎ−｛２，４−ジフルオロ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．２１７ｇ（１．１２ｍｍｏｌ）の（５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−チオフェン−２−イル−メタノンと、０．３ｇ（１．１２ｍｍｏｌ）のＮ−［５−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−２，４−ジフルオロ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥させた。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチルの存在下で、固体（収率６９％）として３２０ｍｇのＮ−｛２，４−ジフルオロ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化２１】
【００８８】
（調製例１６）
Ｎ−｛５−フルオロ−２−メトキシ−３−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド
氷酢酸１０ｍＬ中の０．１８０ｇ（０．９３ｍｍｏｌ）の（５−アミノ−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−チオフェン−２−イル−メタノンと、０．２７５ｇ（０．９３ｍｍｏｌ）のＮ−［３−（３−ジメチルアミノ−アクリロイル）−５−フルオロ−２−メトキシ−フェニル］−Ｎ−メチル−アセトアミドの混合物を、２．５時間還流させ、次いで溶媒を減圧蒸留により取り除いた。生成した残留物に１５ｍＬのジクロロメタン及び１０ｍＬの飽和した炭酸水素ナトリウム溶液を加えた。２層に分離され、水層を１０ｍＬのジクロロメタンで洗浄した。有機層を１０ｍＬの水で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。ジクロロメタン層を蒸発乾固させることにより、オイルを生成し、これから酢酸エチル存在下で、固体（収率４０％）として１６０ｍｇのＮ−｛５−フルオロ−２−メトキシ−３−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミドを得た。
【化２２】
【００８９】
（組成例１）
５ｍｇ錠剤
【表８】
【００９０】
（組成例２）
１０ｍｇカプセル剤
【表９】
【００９１】
（組成例３）
経口ドロップ剤
【表１０】
【００９２】
（組成例４）
２．５ｍｇ錠剤
【表１１】
【００９３】
（組成例５）
５ｍｇカプセル剤
【表１２】
【００９４】
（組成例６）
経口ドロップ剤
【表１３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｂ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｃ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｄ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｅ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｆ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｇ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｈ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｉ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｊ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｋ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｌ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｍ）Ｎ−｛２−メチル−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｎ）Ｎ−｛２−メトキシ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｏ）Ｎ−｛２，４−ジフルオロ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；及び
ｐ）Ｎ−｛５−フルオロ−２−メトキシ−３−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
からなる群から選択される化合物並びに医薬として許容可能なその塩及び水和物。
【請求項２】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物におけるＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患を治療又は予防するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３】
ＧＡＢＡＡ受容体がα１−ＧＡＢＡＡ受容体である、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
ＧＡＢＡＡ受容体がα２−ＧＡＢＡＡ受容体である、請求項２に記載の使用。
【請求項５】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における不安を治療又は予防するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項６】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物におけるてんかんを治療又は予防するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項７】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における睡眠障害を治療又は予防するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項８】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における不眠症を治療又は予防するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項９】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における鎮静−催眠を誘発するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における麻酔を誘発するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における睡眠及びその持続を誘発するのに必要な時間を調節するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における筋弛緩を誘発するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物の治療有効量を、適量の医薬賦形剤又は医薬担体と共に含む医薬組成物。
【請求項１】
ａ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｂ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｃ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｄ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｅ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｆ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｇ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−ニトロ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｈ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｉ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｊ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｋ）Ｎ−｛２−フルオロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｌ）Ｎ−｛２−クロロ−５−［３−シアノ−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド；
ｍ）Ｎ−｛２−メチル−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｎ）Ｎ−｛２−メトキシ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
ｏ）Ｎ−｛２，４−ジフルオロ−５−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；及び
ｐ）Ｎ−｛５−フルオロ−２−メトキシ−３−［３−（チオフェン−２−カルボニル）−ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン−７−イル］−フェニル｝−Ｎ−メチル−アセトアミド；
からなる群から選択される化合物並びに医薬として許容可能なその塩及び水和物。
【請求項２】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物におけるＧＡＢＡＡ受容体の調節に関連する疾患を治療又は予防するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３】
ＧＡＢＡＡ受容体がα１−ＧＡＢＡＡ受容体である、請求項２に記載の使用。
【請求項４】
ＧＡＢＡＡ受容体がα２−ＧＡＢＡＡ受容体である、請求項２に記載の使用。
【請求項５】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における不安を治療又は予防するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項６】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物におけるてんかんを治療又は予防するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項７】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における睡眠障害を治療又は予防するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項８】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における不眠症を治療又は予防するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項９】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における鎮静−催眠を誘発するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における麻酔を誘発するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における睡眠及びその持続を誘発するのに必要な時間を調節するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
それを必要とするヒト又は非ヒト哺乳動物における筋弛緩を誘発するための薬物を調製するための、請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
請求項１に記載の化合物の治療有効量を、適量の医薬賦形剤又は医薬担体と共に含む医薬組成物。
【公表番号】特表２００９−５４５５６８（Ｐ２００９−５４５５６８Ａ）
【公表日】平成２１年１２月２４日（２００９．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５２２２８０（Ｐ２００９−５２２２８０）
【出願日】平成１９年８月２日（２００７．８．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８００６
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０１５２５３
【国際公開日】平成２０年２月７日（２００８．２．７）
【出願人】（５０１１０８４５２）フエルレル インターナショナル，ソシエダッド アノニマ (39)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１２月２４日（２００９．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年８月２日（２００７．８．２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５８００６
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０１５２５３
【国際公開日】平成２０年２月７日（２００８．２．７）
【出願人】（５０１１０８４５２）フエルレル インターナショナル，ソシエダッド アノニマ (39)
【Ｆターム（参考）】
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