ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤
【課題】安全性の高く、かつペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化作用を兼ね備えた活性化剤を提供する。
【解決手段】香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物を有効成分として含有することを特徴とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤。本活性化剤は、インスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満もしくは脂肪肝等の生活習慣病の予防・改善・治療に有用である。
【解決手段】香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物を有効成分として含有することを特徴とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤。本活性化剤は、インスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満もしくは脂肪肝等の生活習慣病の予防・改善・治療に有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）は、脂質や糖の代謝糖に関与する遺伝子群の発現制御を担う核内受容体ファミリーに属する活性化剤依存性転写制御因子である。ＰＰＡＲには、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、ＰＰＡＲγの３種が知られている。ＰＰＡＲαは主に脂肪組織、肝臓、腎臓、骨格筋で発現し、ＰＰＡＲγは主に脂肪組織、免疫細胞、副腎、脾臓、小腸で発現し、一方、ＰＰＡＲδは主な組織特異性が見られず普遍的に発現していることが知られている（非特許文献１）。
【０００３】
これらＰＰＡＲのサブタイプのうち、ＰＰＡＲαは多くの媒体、鎖脂肪酸およびフィブレートによって活性化され、脂肪酸酸化の刺激および血清脂質の仲介作用に関与する。実際に、ＰＰＡＲαアゴニストであるＷＹ１４６４３、クロフィブレート、フェノフィブレート、ベザフィブレートなどのフィブリン酸誘導体は、血漿中トリグリセリドの実質的な低下およびＨＤＬの上昇を生じさせる。このため、ＰＰＡＲα活性化剤は主として高トリグリセリド血症や高脂血症を治療するために使用される。また、ＰＰＡＲα活性化剤は、脂質代謝のみでなく、糖代謝も改善し、血中脂質低下、血糖値の低下、インスリン抵抗性の改善等の効果を示すことが報告されている（非特許文献３、４、５、６、７を参照）。
【０００４】
一方、ＰＰＡＲのサブタイプのうちＰＰＡＲγは脂肪細胞の分化に関わっており、この活性化剤（アゴニスト）は脂肪細胞分化を促進すること、血中グルコースを活発に取り込む脂肪細胞の数を増やして血糖値を下げること、インスリン非感受性の肥大化脂肪細胞の過形成を抑えること、インスリンに対して高い感受性をもった小型脂肪細胞を増加させて血糖値を低下させること、アディポネクチン生成量を上昇させること、血中脂質（とくにトリグリセリド）を低下させること、血管構成細胞の機能を制御することなどが知られている（非特許文献２、３、４、５、６）。
【０００５】
このように、ＰＰＡＲα活性化作用およびＰＰＡＲγ活性化作用は生活習慣病に関連のある疾病、症状を改善・治療する作用を有するが、有効成分がＰＰＡＲα活性化作用およびＰＰＡＲγ活性化作用の両作用を有すれば、インスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝などの生活習慣病を改善・治療するのにより好ましいことであるといえる。
このため、ＰＰＡＲα活性化作用およびＰＰＡＲγ活性化作用の両作用を持つ物質（デュアルアゴニスト）の開発が望まれていた。
【０００６】
【非特許文献１】医学のあゆみ、１９９８年、１８４巻、５１９〜５２３頁
【非特許文献２】ダイアベトロジア、１９９９年、４２巻、１０３３〜１０４９頁
【非特許文献３】日本臨床，２００５年，６３巻，４号，５３９〜５４８頁
【非特許文献４】日本臨床，２００５年，６３巻，４号，５４９〜５５５頁
【非特許文献５】日本臨床，２００５年，６３巻，４号，５５７〜５６４頁
【非特許文献６】日本臨床，２００５年，６３巻，４号，６３１〜６４２頁
【非特許文献７】ダイアベート（Ｄｉａｂｅｔｅｓ），２００１年，５０巻，４１１〜４１７頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は新規なＰＰＡＲ活性化剤、ＰＰＡＲα活性化作用とＰＰＡＲγ活性化作用を兼ね備えた新規な活性化剤を提供することである。また、本発明の他の目的はインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝などの生活習慣病を改善・治療に有用なＰＰＡＲαおよびγ活性化剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、食品として古くから使用されている香醋もしくは黒酢の低級アルカノールによる抽出物が優れたＰＰＡＲα活性化作用とＰＰＡＲγ活性化作用を兼ね備えていることを見出し、さらに研究を重ねて本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、
［１］ 香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物を有効成分として含有することを特徴とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤、
［２］ 有効成分が香醋の低級アルカノール抽出物である前記［１］に記載の活性化剤、
［３］ 有効成分が香醋のエタノール抽出物である前記［１］に記載の活性化剤、
［４］ ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγが介在する疾患または症状を予防または改善するための前記［１］〜［３］のいずれかに記載の活性化剤、
［５］ ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγが介在する疾患または症状がインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満もしくは脂肪肝である前記［４］記載の活性化剤、
［６］ 前記［１］〜［３］のいずれかに記載の活性化剤を含有することを特徴とするインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満もしくは脂肪肝の予防または改善用組成物、
［７］ 医薬組成物である前記［６］に記載の予防または改善用組成物、および
［８］ 健康食品である前記［６］に記載の予防または改善用組成物
に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の活性化剤は、優れたＰＰＡＲα活性化作用とＰＰＡＲγ活性化作用を兼ね備えた活性化剤であり、インスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝等の生活習慣病の予防・改善・治療に用いることができる。特に、本発明の活性化剤は、本来食品として使用されている香醋もしくは黒酢を材料として製造されるものであるため安全性が高いという特徴を有している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤は、香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１２】
本発明に関わる「香醋」は、糯米を原料とし、これに麹を加えてアルコール発酵をさせたのち、もち米などの籾殻を加えて密封したのちに酢酸発酵を行い、十分に発酵した後、そこに水を浸して抽出した液体を取り出し、その抽出液を甕（カメ）にて熟成させたもののことである。かかる香醋としては、中国鎮江市及びその近辺の金壇、▲栗▼水（リーシュイ）の糯米から製造される「鎮江香醋」が好適に挙げられる。「鎮江香醋」は日本恒順株式会社より恒順香醋の商品名で発売されており、かかる市販品を使用することもできる。なお、「鎮江香醋」には半年熟成物や１年以上熟成させたもの（例えば１年熟成、８年熟成など）があるが、１年以上熟成したものが好ましい。
【００１３】
本発明に関わる「黒酢」は、通常の酢と比べて長期間（１年〜３年）熟成させたものを指す。熟成する期間が長くなるにつれ酢が濃い色にかわるため、この特徴的な色（琥珀色）が名前の由来になっている。原料は米、玄米、大麦、黒麹で仕込んだもろみが使われており、原料に応じて米黒酢、玄米黒酢、大麦黒酢、こうじ黒酢などと呼ばれており、市販品を使用することもできる。
【００１４】
香醋や黒酢を抽出するために使用される低級アルカノールとしては、例えば炭素数１〜５程度のアルカノールが挙げられ、具体的にはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等が挙げられる。
【００１５】
抽出物の調製は、たとえば材料である香醋や黒酢に低級アルカノールを加え、低級アルカノールによる分配を行う。この操作回数は特に制限されず、１回でも複数回でもよい。得られる低級アルカノール層を分離し、減圧下に濃縮することにより抽出エキスが得られる。ここで抽出溶媒として使用される低級アルカノールは、必ずしも無水低級アルカノールでなくてもよく、水を若干含んだ低級アルカノールも使用することもできる。たとえば、低級アルカノールがｎ−ブタノールである場合、水飽和ｎ−ブタノールであってもよく、またエタノールの場合は、通常、数％の水を含んでいるので、このような含水エタノールも使用することができる。抽出に用いる低級アルカノールの使用量は、香醋もしくは黒酢１００容量部に対して、１０〜１０００容量部、特に５０〜１５０容量部が好ましい。抽出温度は特に制限されないが、通常５〜６０℃、特に１５〜２５℃が好ましい。なお、エタノールを使用する場合、材料である香醋や黒酢を濃縮し、濃縮物（Ｂｒｉｘ５０〜９０％程度が好ましく、特にＢｒｉｘ５５〜６５％程度がより好ましい。）をエタノールにより抽出し、可溶部と不溶部に分離し、可溶部（エタノール層）を好適に使用することができる。
このようにして得られる低級アルカノール層は、必要により濃縮して抽出エキスとすることができる、また、低級アルカノール層から溶媒をすべて留去して得られる固形物（残渣）、あるいはその固形物を水、エタノールあるいは含水エタノールなどに溶解もしくは懸濁したものも本発明の低級アルカノール抽出物として用いることができる。
【００１６】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤は、上記のようにして得られる低級アルカノール抽出物のみから構成されていてもよく、あるいは前記抽出物に食品または医薬品に許容される他の添加物を添加することもできる。添加物としては食品または医薬品に許容されるものであれば特に限定されず、例えば賦形剤（乳糖、白糖、水飴、デキストリン、コーンスターチ、結晶セルロース等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル等）、崩壊剤（カルボキシメチルセルロースカルシウム、無水リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム等）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、アラビアゴム液等）、溶解補助剤（アラビアゴム、ポリソルベート８０等）、甘味料（砂糖、果糖・ブドウ糖液糖、ハチミツ、アスパルテーム等）、着色料（β−カロテン、食用タール色素、リボフラビン等）、保存料（ソルビン酸、パラオキシ安息香酸メチル、亜硫酸ナトリウム等）、増粘剤（アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム等）、酸化防止剤（ＢＨＴ、ＢＨＡ、アスコルビン酸、トコフェロール等）、香料（ハッカ、ストロベリー香料等）、酸味料（クエン酸、乳酸、ＤＬ−りんご酸等）、調味料（ＤＬ−アラニン、５’−イノシン酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム等）、乳化剤（グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル等）、ｐＨ調整剤（クエン酸、クエン酸三ナトリウム等）、ビタミン類（ビタミンＣ、ビタミンＥ等）、ミネラル類（カルシウム、鉄、マグネシウム、亜鉛、カリウム等）、アミノ酸類等を使用することができる。
【００１７】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤の製法は特に限定されるものではなく、香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物と必要により他の添加物を粉体混合する製法、溶媒中に香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物と必要により他の添加物を溶かし混合溶液とする製法、またその混合溶液を凍結乾燥する製法、噴霧乾燥する製法等、一般的な食品添加物、健康食品、医薬品の製法が適用される。
【００１８】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤は、固形状（例えば錠剤状、粒状、粉状、カプセル状等）、ゾル状、ゲル状および液状のいずれであってもよく、例えばカプセル剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤等の製剤にすることができる。また、飲料やミネラルウォーターに用時添加する易溶性製剤としてもよい。ドリンク剤の場合、必要に応じ、他の薬効成分、ビタミン、ミネラル、ホルモン、栄養成分、香味剤等を混合することにより、嗜好飲料的性格を持たせることも可能である。前記薬効成分、ビタミン、ミネラル、ホルモン、栄養成分または香味剤としては、本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化作用を阻害しなければ特に限定されない。
【００１９】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤は、医薬製剤や健康食品として、あるいは飲食品添加物として使用することができる。
【００２０】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤を医薬製剤として用いる場合、経口投与で用いるのが好ましく、香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物の投与量は、摂取する人の性別、年齢、健康状態等によって異なるので一概には言えないが、たとえば抽出物が抽出液を濃縮して得られる抽出エキスの場合、０．０５ｍｇ／ｋｇ以上を投与すれば十分な効果を得ることができる。したがって、本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤がその効果を十分に発揮するためには、抽出エキスを１回当り、通常１〜２０００ｍｇ程度、好ましくは２〜１０００ｍｇ程度、より好ましくは１００〜２００ｍｇ程度服用することが好ましい。投与回数は１日１回〜３回程度が望ましい。
【００２１】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤を健康食品として使用する場合は、医薬製剤として用いる量と同程度もしくは若干少なめでよい。
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤を飲食品添加物として用いる場合、適用される飲食品としては、清涼飲料、ドロップ、キャンディ、チューインガム、チョコレート、グミ、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン、ゼリー菓子、クッキー、マーガリン、ショートニング、マヨネーズ、ドレッシング等が挙げられる。
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤を飲食品添加物として用いる場合、該活性化剤の飲食品への配合量は、飲食品の種類によっても異なるが、通常、有効成分として、約０．１〜９５重量％、好ましくは約５〜５０重量％である。
【実施例】
【００２２】
以下に実施例を用いて本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２３】
［実施例１］
＜試料調製＞
１）香醋のｎ−ブタノール抽出物の調製
半年、１年または８年熟成の香醋（商品名：恒順香醋；製造元：江蘇恒順集団有限公司）を水酸化ナトリウムで中和し、得られた溶液３ｍｌを１５ｍｌプラスチックチューブにとり、これに水飽和ｎ−ブタノール（ｎ−ＢｕＯＨ）を等量入れ、分配を行った。ｎ−ブタノールによる分配を２回行い、得られたｎ−ブタノール層について減圧下濃縮を行い、抽出エキスを得た。得られた抽出エキスをジメチルスルフォキサイド（ＤＭＳＯ）３ｍｌに溶解し、これを試験溶液とした。
【００２４】
２）黒酢のｎ−ブタノール抽出物の調製
玄米黒酢（商品名：純玄米黒酢；販売元：株式会社ミツカンＨＭ；以下、ミツカン黒酢という）、こうじ黒酢（商品名：コウジ黒酢；販売元：株式会社サンヘルスＳＩＫ；以下、こうじ黒酢という）または玄米黒酢（商品名：玄米黒酢；販売元：まるしげ 上田株式会社；以下、玄米黒酢という）を水酸化ナトリウムで中和し、得られた溶液３ｍｌを１５ｍｌプラスチックチューブにとり、これに水飽和ｎ−ブタノール（ｎ−ＢｕＯＨ）を等量入れ、分配を行った。ｎ−ブタノールによる分配を２回行い、得られたｎ−ブタノール層について減圧下濃縮を行い、抽出エキスを得た。得られた抽出エキスをジメチルスルフォキサイド（ＤＭＳＯ）３ｍｌに溶解し、これを試験溶液とした。
【００２５】
３）コントロール物質の試験溶液の調製
コントロール物質として、ＰＰＡＲα選択的アゴニストであるＷＹ１４６４３を、またＰＰＡＲγアゴニストであるトログリタゾンを用い、水−Ｂ．Ｇ.に溶解してＷＹ１４６４３溶液（５０μＭ）またはトログリタゾン溶液（１０μＭ）とし、これを試験液とした。
【００２６】
＜ＰＰＡＲαおよびγ活性の評価＞
ＰＰＡＲαおよびγ発現プラスミドとして、ＰＰＡＲα（もしくはγ）Ｇａｌ４融合タンパク質発現プラスミドｐＰＰＡＲα（もしくはγ）−Ｇａｌ４を、またＧａｌ４タンパク質結合配列の下流にレポーター遺伝子であるルシフェラーゼ構造遺伝子を連結したプラスミドｐＧａｌ４−Ｌｕｃ、および形質転換効率補正用プラスミドｐＳＥＡＰ−コントロールを用いた。６０ｍｍシャーレにＣＯＳ−１細胞を６×１０５ｃｅｌｌｓまき、翌日０．２５μｇ ｐＰＰＡＲα（もしくはγ）−Ｇａｌ４、１ｍｇ ｐＧａｌ４−Ｌｕｃおよび１μｇ ｐＳＥＡＰ−コントロール ベクターをコトランスフェクトした。１６時間後、トリプシン処理を行うことにより細胞を回収し、９６穴プレートに０．６×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（１２５μｌ／ｗｅｌｌ）づつ細胞をまいた。２時間培養後、試験溶液を培養液に対して１％または０．５％添加し、さらに２４時間培養を行った。培養液２５μｌを別の９６穴プレートに回収し、分泌生アルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ）活性を測定した。また各ｗｅｌｌに１００μｌづつルシフェラーゼ活性測定溶液（６０ｍＭ Ｔｒｉｃｉｎｅ ｐＨ７．８、１６ｍＭ塩基性炭酸マグネシウム、０．４ｍＭ ＥＤＴＡ，１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、０．５ｍＭルシフェリン、１．５ｍＭ ＡＴＰ、０．５ｍＭ ＣｏＡ、０．１ｍＭ β−メルカプトエタノール）を添加し、一定時間暗室にてインキュベートした後、９６穴プレートリーダーにて発光強度を測定した。活性評価に際しては、ルシフェラーゼ活性をＳＥＡＰ活性にて補正した。またＰＰＡＲαおよびγ評価系最適化においては、それぞれコントロール物質としてＷｙ１４６４３（５０μＭ）およびトリグリタゾン（１０μＭ）を用いた。
【００２７】
＜結果＞
１．ＰＰＡＲα活性化作用
試験溶液のＰＰＡＲα活性化作用は下記表１の通りであった（図１参照）。
【表１】
（注）ＰＰＡＲα活性化作用はルシフェラーゼ活性値（発光強度）で表示。
【００２８】
２．ＰＰＡＲγ活性化作用
試験溶液のＰＰＡＲγ活性化作用は下記表２の通りであった（図２参照）。
【表２】
（注）ＰＰＡＲγ活性化作用はルシフェラーゼ活性値（発光強度）で表示。
【００２９】
上記表１および表２並びに図１および図２から、本発明の“香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物”、特に“香醋の低級アルカノール抽出物”は優れたＰＰＡＲα活性化作用およびＰＰＡＲα活性化作用を兼ね備えていることが明らかである。
【産業上の利用可能性】
【００３０】
本発明の組成物は安全性が高く、かつ優れたペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性作用を併せ持つので、高脂血症、インスリン抵抗性（糖尿病）、肥満、高血圧等の生活習慣病の予防・改善・治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は本発明の活性化剤のＰＰＡＲα活性化作用を示す図である。図中、コントロール物質はＷＹ１４６４３であり、縦軸の単位はルシフェラーゼ活性値（発光強度）であり、横軸の半年、１年、８年はそれぞれ半年、１年または８年熟成の香醋から得た抽出エキスであり、ミツカン、こうじ、玄米はそれぞれ玄米黒酢（株式会社ミツカンＨＭ）、こうじ黒酢（販売元：株式会社サンヘルスＳＩＫ）、または玄米黒酢（販売元：まるしげ 上田株式会社）から得た抽出エキスを意味する。
【図２】図１は本発明の活性化剤のＰＰＡＲγ活性化作用を示す図である。図中、コントロール物質はトログリタゾンであり、縦軸の単位、並びに横軸の半年、１年、８年、ミツカン、こうじ、玄米は図１と同一のものを意味する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ）は、脂質や糖の代謝糖に関与する遺伝子群の発現制御を担う核内受容体ファミリーに属する活性化剤依存性転写制御因子である。ＰＰＡＲには、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、ＰＰＡＲγの３種が知られている。ＰＰＡＲαは主に脂肪組織、肝臓、腎臓、骨格筋で発現し、ＰＰＡＲγは主に脂肪組織、免疫細胞、副腎、脾臓、小腸で発現し、一方、ＰＰＡＲδは主な組織特異性が見られず普遍的に発現していることが知られている（非特許文献１）。
【０００３】
これらＰＰＡＲのサブタイプのうち、ＰＰＡＲαは多くの媒体、鎖脂肪酸およびフィブレートによって活性化され、脂肪酸酸化の刺激および血清脂質の仲介作用に関与する。実際に、ＰＰＡＲαアゴニストであるＷＹ１４６４３、クロフィブレート、フェノフィブレート、ベザフィブレートなどのフィブリン酸誘導体は、血漿中トリグリセリドの実質的な低下およびＨＤＬの上昇を生じさせる。このため、ＰＰＡＲα活性化剤は主として高トリグリセリド血症や高脂血症を治療するために使用される。また、ＰＰＡＲα活性化剤は、脂質代謝のみでなく、糖代謝も改善し、血中脂質低下、血糖値の低下、インスリン抵抗性の改善等の効果を示すことが報告されている（非特許文献３、４、５、６、７を参照）。
【０００４】
一方、ＰＰＡＲのサブタイプのうちＰＰＡＲγは脂肪細胞の分化に関わっており、この活性化剤（アゴニスト）は脂肪細胞分化を促進すること、血中グルコースを活発に取り込む脂肪細胞の数を増やして血糖値を下げること、インスリン非感受性の肥大化脂肪細胞の過形成を抑えること、インスリンに対して高い感受性をもった小型脂肪細胞を増加させて血糖値を低下させること、アディポネクチン生成量を上昇させること、血中脂質（とくにトリグリセリド）を低下させること、血管構成細胞の機能を制御することなどが知られている（非特許文献２、３、４、５、６）。
【０００５】
このように、ＰＰＡＲα活性化作用およびＰＰＡＲγ活性化作用は生活習慣病に関連のある疾病、症状を改善・治療する作用を有するが、有効成分がＰＰＡＲα活性化作用およびＰＰＡＲγ活性化作用の両作用を有すれば、インスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝などの生活習慣病を改善・治療するのにより好ましいことであるといえる。
このため、ＰＰＡＲα活性化作用およびＰＰＡＲγ活性化作用の両作用を持つ物質（デュアルアゴニスト）の開発が望まれていた。
【０００６】
【非特許文献１】医学のあゆみ、１９９８年、１８４巻、５１９〜５２３頁
【非特許文献２】ダイアベトロジア、１９９９年、４２巻、１０３３〜１０４９頁
【非特許文献３】日本臨床，２００５年，６３巻，４号，５３９〜５４８頁
【非特許文献４】日本臨床，２００５年，６３巻，４号，５４９〜５５５頁
【非特許文献５】日本臨床，２００５年，６３巻，４号，５５７〜５６４頁
【非特許文献６】日本臨床，２００５年，６３巻，４号，６３１〜６４２頁
【非特許文献７】ダイアベート（Ｄｉａｂｅｔｅｓ），２００１年，５０巻，４１１〜４１７頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は新規なＰＰＡＲ活性化剤、ＰＰＡＲα活性化作用とＰＰＡＲγ活性化作用を兼ね備えた新規な活性化剤を提供することである。また、本発明の他の目的はインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝などの生活習慣病を改善・治療に有用なＰＰＡＲαおよびγ活性化剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、前記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、食品として古くから使用されている香醋もしくは黒酢の低級アルカノールによる抽出物が優れたＰＰＡＲα活性化作用とＰＰＡＲγ活性化作用を兼ね備えていることを見出し、さらに研究を重ねて本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、
［１］ 香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物を有効成分として含有することを特徴とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤、
［２］ 有効成分が香醋の低級アルカノール抽出物である前記［１］に記載の活性化剤、
［３］ 有効成分が香醋のエタノール抽出物である前記［１］に記載の活性化剤、
［４］ ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγが介在する疾患または症状を予防または改善するための前記［１］〜［３］のいずれかに記載の活性化剤、
［５］ ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγが介在する疾患または症状がインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満もしくは脂肪肝である前記［４］記載の活性化剤、
［６］ 前記［１］〜［３］のいずれかに記載の活性化剤を含有することを特徴とするインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満もしくは脂肪肝の予防または改善用組成物、
［７］ 医薬組成物である前記［６］に記載の予防または改善用組成物、および
［８］ 健康食品である前記［６］に記載の予防または改善用組成物
に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の活性化剤は、優れたＰＰＡＲα活性化作用とＰＰＡＲγ活性化作用を兼ね備えた活性化剤であり、インスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満、脂肪肝等の生活習慣病の予防・改善・治療に用いることができる。特に、本発明の活性化剤は、本来食品として使用されている香醋もしくは黒酢を材料として製造されるものであるため安全性が高いという特徴を有している。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤は、香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１２】
本発明に関わる「香醋」は、糯米を原料とし、これに麹を加えてアルコール発酵をさせたのち、もち米などの籾殻を加えて密封したのちに酢酸発酵を行い、十分に発酵した後、そこに水を浸して抽出した液体を取り出し、その抽出液を甕（カメ）にて熟成させたもののことである。かかる香醋としては、中国鎮江市及びその近辺の金壇、▲栗▼水（リーシュイ）の糯米から製造される「鎮江香醋」が好適に挙げられる。「鎮江香醋」は日本恒順株式会社より恒順香醋の商品名で発売されており、かかる市販品を使用することもできる。なお、「鎮江香醋」には半年熟成物や１年以上熟成させたもの（例えば１年熟成、８年熟成など）があるが、１年以上熟成したものが好ましい。
【００１３】
本発明に関わる「黒酢」は、通常の酢と比べて長期間（１年〜３年）熟成させたものを指す。熟成する期間が長くなるにつれ酢が濃い色にかわるため、この特徴的な色（琥珀色）が名前の由来になっている。原料は米、玄米、大麦、黒麹で仕込んだもろみが使われており、原料に応じて米黒酢、玄米黒酢、大麦黒酢、こうじ黒酢などと呼ばれており、市販品を使用することもできる。
【００１４】
香醋や黒酢を抽出するために使用される低級アルカノールとしては、例えば炭素数１〜５程度のアルカノールが挙げられ、具体的にはメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等が挙げられる。
【００１５】
抽出物の調製は、たとえば材料である香醋や黒酢に低級アルカノールを加え、低級アルカノールによる分配を行う。この操作回数は特に制限されず、１回でも複数回でもよい。得られる低級アルカノール層を分離し、減圧下に濃縮することにより抽出エキスが得られる。ここで抽出溶媒として使用される低級アルカノールは、必ずしも無水低級アルカノールでなくてもよく、水を若干含んだ低級アルカノールも使用することもできる。たとえば、低級アルカノールがｎ−ブタノールである場合、水飽和ｎ−ブタノールであってもよく、またエタノールの場合は、通常、数％の水を含んでいるので、このような含水エタノールも使用することができる。抽出に用いる低級アルカノールの使用量は、香醋もしくは黒酢１００容量部に対して、１０〜１０００容量部、特に５０〜１５０容量部が好ましい。抽出温度は特に制限されないが、通常５〜６０℃、特に１５〜２５℃が好ましい。なお、エタノールを使用する場合、材料である香醋や黒酢を濃縮し、濃縮物（Ｂｒｉｘ５０〜９０％程度が好ましく、特にＢｒｉｘ５５〜６５％程度がより好ましい。）をエタノールにより抽出し、可溶部と不溶部に分離し、可溶部（エタノール層）を好適に使用することができる。
このようにして得られる低級アルカノール層は、必要により濃縮して抽出エキスとすることができる、また、低級アルカノール層から溶媒をすべて留去して得られる固形物（残渣）、あるいはその固形物を水、エタノールあるいは含水エタノールなどに溶解もしくは懸濁したものも本発明の低級アルカノール抽出物として用いることができる。
【００１６】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤は、上記のようにして得られる低級アルカノール抽出物のみから構成されていてもよく、あるいは前記抽出物に食品または医薬品に許容される他の添加物を添加することもできる。添加物としては食品または医薬品に許容されるものであれば特に限定されず、例えば賦形剤（乳糖、白糖、水飴、デキストリン、コーンスターチ、結晶セルロース等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル等）、崩壊剤（カルボキシメチルセルロースカルシウム、無水リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム等）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、アラビアゴム液等）、溶解補助剤（アラビアゴム、ポリソルベート８０等）、甘味料（砂糖、果糖・ブドウ糖液糖、ハチミツ、アスパルテーム等）、着色料（β−カロテン、食用タール色素、リボフラビン等）、保存料（ソルビン酸、パラオキシ安息香酸メチル、亜硫酸ナトリウム等）、増粘剤（アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム等）、酸化防止剤（ＢＨＴ、ＢＨＡ、アスコルビン酸、トコフェロール等）、香料（ハッカ、ストロベリー香料等）、酸味料（クエン酸、乳酸、ＤＬ−りんご酸等）、調味料（ＤＬ−アラニン、５’−イノシン酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム等）、乳化剤（グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル等）、ｐＨ調整剤（クエン酸、クエン酸三ナトリウム等）、ビタミン類（ビタミンＣ、ビタミンＥ等）、ミネラル類（カルシウム、鉄、マグネシウム、亜鉛、カリウム等）、アミノ酸類等を使用することができる。
【００１７】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤の製法は特に限定されるものではなく、香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物と必要により他の添加物を粉体混合する製法、溶媒中に香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物と必要により他の添加物を溶かし混合溶液とする製法、またその混合溶液を凍結乾燥する製法、噴霧乾燥する製法等、一般的な食品添加物、健康食品、医薬品の製法が適用される。
【００１８】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤は、固形状（例えば錠剤状、粒状、粉状、カプセル状等）、ゾル状、ゲル状および液状のいずれであってもよく、例えばカプセル剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤、ドリンク剤等の製剤にすることができる。また、飲料やミネラルウォーターに用時添加する易溶性製剤としてもよい。ドリンク剤の場合、必要に応じ、他の薬効成分、ビタミン、ミネラル、ホルモン、栄養成分、香味剤等を混合することにより、嗜好飲料的性格を持たせることも可能である。前記薬効成分、ビタミン、ミネラル、ホルモン、栄養成分または香味剤としては、本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化作用を阻害しなければ特に限定されない。
【００１９】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤は、医薬製剤や健康食品として、あるいは飲食品添加物として使用することができる。
【００２０】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤を医薬製剤として用いる場合、経口投与で用いるのが好ましく、香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物の投与量は、摂取する人の性別、年齢、健康状態等によって異なるので一概には言えないが、たとえば抽出物が抽出液を濃縮して得られる抽出エキスの場合、０．０５ｍｇ／ｋｇ以上を投与すれば十分な効果を得ることができる。したがって、本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤がその効果を十分に発揮するためには、抽出エキスを１回当り、通常１〜２０００ｍｇ程度、好ましくは２〜１０００ｍｇ程度、より好ましくは１００〜２００ｍｇ程度服用することが好ましい。投与回数は１日１回〜３回程度が望ましい。
【００２１】
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤を健康食品として使用する場合は、医薬製剤として用いる量と同程度もしくは若干少なめでよい。
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤を飲食品添加物として用いる場合、適用される飲食品としては、清涼飲料、ドロップ、キャンディ、チューインガム、チョコレート、グミ、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン、ゼリー菓子、クッキー、マーガリン、ショートニング、マヨネーズ、ドレッシング等が挙げられる。
本発明のペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤を飲食品添加物として用いる場合、該活性化剤の飲食品への配合量は、飲食品の種類によっても異なるが、通常、有効成分として、約０．１〜９５重量％、好ましくは約５〜５０重量％である。
【実施例】
【００２２】
以下に実施例を用いて本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２３】
［実施例１］
＜試料調製＞
１）香醋のｎ−ブタノール抽出物の調製
半年、１年または８年熟成の香醋（商品名：恒順香醋；製造元：江蘇恒順集団有限公司）を水酸化ナトリウムで中和し、得られた溶液３ｍｌを１５ｍｌプラスチックチューブにとり、これに水飽和ｎ−ブタノール（ｎ−ＢｕＯＨ）を等量入れ、分配を行った。ｎ−ブタノールによる分配を２回行い、得られたｎ−ブタノール層について減圧下濃縮を行い、抽出エキスを得た。得られた抽出エキスをジメチルスルフォキサイド（ＤＭＳＯ）３ｍｌに溶解し、これを試験溶液とした。
【００２４】
２）黒酢のｎ−ブタノール抽出物の調製
玄米黒酢（商品名：純玄米黒酢；販売元：株式会社ミツカンＨＭ；以下、ミツカン黒酢という）、こうじ黒酢（商品名：コウジ黒酢；販売元：株式会社サンヘルスＳＩＫ；以下、こうじ黒酢という）または玄米黒酢（商品名：玄米黒酢；販売元：まるしげ 上田株式会社；以下、玄米黒酢という）を水酸化ナトリウムで中和し、得られた溶液３ｍｌを１５ｍｌプラスチックチューブにとり、これに水飽和ｎ−ブタノール（ｎ−ＢｕＯＨ）を等量入れ、分配を行った。ｎ−ブタノールによる分配を２回行い、得られたｎ−ブタノール層について減圧下濃縮を行い、抽出エキスを得た。得られた抽出エキスをジメチルスルフォキサイド（ＤＭＳＯ）３ｍｌに溶解し、これを試験溶液とした。
【００２５】
３）コントロール物質の試験溶液の調製
コントロール物質として、ＰＰＡＲα選択的アゴニストであるＷＹ１４６４３を、またＰＰＡＲγアゴニストであるトログリタゾンを用い、水−Ｂ．Ｇ.に溶解してＷＹ１４６４３溶液（５０μＭ）またはトログリタゾン溶液（１０μＭ）とし、これを試験液とした。
【００２６】
＜ＰＰＡＲαおよびγ活性の評価＞
ＰＰＡＲαおよびγ発現プラスミドとして、ＰＰＡＲα（もしくはγ）Ｇａｌ４融合タンパク質発現プラスミドｐＰＰＡＲα（もしくはγ）−Ｇａｌ４を、またＧａｌ４タンパク質結合配列の下流にレポーター遺伝子であるルシフェラーゼ構造遺伝子を連結したプラスミドｐＧａｌ４−Ｌｕｃ、および形質転換効率補正用プラスミドｐＳＥＡＰ−コントロールを用いた。６０ｍｍシャーレにＣＯＳ−１細胞を６×１０５ｃｅｌｌｓまき、翌日０．２５μｇ ｐＰＰＡＲα（もしくはγ）−Ｇａｌ４、１ｍｇ ｐＧａｌ４−Ｌｕｃおよび１μｇ ｐＳＥＡＰ−コントロール ベクターをコトランスフェクトした。１６時間後、トリプシン処理を行うことにより細胞を回収し、９６穴プレートに０．６×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（１２５μｌ／ｗｅｌｌ）づつ細胞をまいた。２時間培養後、試験溶液を培養液に対して１％または０．５％添加し、さらに２４時間培養を行った。培養液２５μｌを別の９６穴プレートに回収し、分泌生アルカリフォスファターゼ（ＳＥＡＰ）活性を測定した。また各ｗｅｌｌに１００μｌづつルシフェラーゼ活性測定溶液（６０ｍＭ Ｔｒｉｃｉｎｅ ｐＨ７．８、１６ｍＭ塩基性炭酸マグネシウム、０．４ｍＭ ＥＤＴＡ，１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、０．５ｍＭルシフェリン、１．５ｍＭ ＡＴＰ、０．５ｍＭ ＣｏＡ、０．１ｍＭ β−メルカプトエタノール）を添加し、一定時間暗室にてインキュベートした後、９６穴プレートリーダーにて発光強度を測定した。活性評価に際しては、ルシフェラーゼ活性をＳＥＡＰ活性にて補正した。またＰＰＡＲαおよびγ評価系最適化においては、それぞれコントロール物質としてＷｙ１４６４３（５０μＭ）およびトリグリタゾン（１０μＭ）を用いた。
【００２７】
＜結果＞
１．ＰＰＡＲα活性化作用
試験溶液のＰＰＡＲα活性化作用は下記表１の通りであった（図１参照）。
【表１】
（注）ＰＰＡＲα活性化作用はルシフェラーゼ活性値（発光強度）で表示。
【００２８】
２．ＰＰＡＲγ活性化作用
試験溶液のＰＰＡＲγ活性化作用は下記表２の通りであった（図２参照）。
【表２】
（注）ＰＰＡＲγ活性化作用はルシフェラーゼ活性値（発光強度）で表示。
【００２９】
上記表１および表２並びに図１および図２から、本発明の“香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物”、特に“香醋の低級アルカノール抽出物”は優れたＰＰＡＲα活性化作用およびＰＰＡＲα活性化作用を兼ね備えていることが明らかである。
【産業上の利用可能性】
【００３０】
本発明の組成物は安全性が高く、かつ優れたペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性作用を併せ持つので、高脂血症、インスリン抵抗性（糖尿病）、肥満、高血圧等の生活習慣病の予防・改善・治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】図１は本発明の活性化剤のＰＰＡＲα活性化作用を示す図である。図中、コントロール物質はＷＹ１４６４３であり、縦軸の単位はルシフェラーゼ活性値（発光強度）であり、横軸の半年、１年、８年はそれぞれ半年、１年または８年熟成の香醋から得た抽出エキスであり、ミツカン、こうじ、玄米はそれぞれ玄米黒酢（株式会社ミツカンＨＭ）、こうじ黒酢（販売元：株式会社サンヘルスＳＩＫ）、または玄米黒酢（販売元：まるしげ 上田株式会社）から得た抽出エキスを意味する。
【図２】図１は本発明の活性化剤のＰＰＡＲγ活性化作用を示す図である。図中、コントロール物質はトログリタゾンであり、縦軸の単位、並びに横軸の半年、１年、８年、ミツカン、こうじ、玄米は図１と同一のものを意味する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物を有効成分として含有することを特徴とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤。
【請求項２】
有効成分が香醋の低級アルカノール抽出物である請求項１に記載の活性化剤。
【請求項３】
有効成分が香醋のエタノール抽出物である請求項１に記載の活性化剤。
【請求項４】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγが介在する疾患または症状を予防または改善するための請求項１〜３のいずれかに記載の活性化剤。
【請求項５】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγが介在する疾患または症状がインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満もしくは脂肪肝である請求項４記載の活性化剤。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれかに記載の活性化剤を含有することを特徴とするインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満もしくは脂肪肝の予防または改善用組成物。
【請求項７】
医薬組成物である請求項６に記載の予防または改善用組成物。
【請求項８】
健康食品である請求項６に記載の予防または改善用組成物。
【請求項１】
香醋または黒酢の低級アルカノール抽出物を有効成分として含有することを特徴とするペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγ活性化剤。
【請求項２】
有効成分が香醋の低級アルカノール抽出物である請求項１に記載の活性化剤。
【請求項３】
有効成分が香醋のエタノール抽出物である請求項１に記載の活性化剤。
【請求項４】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγが介在する疾患または症状を予防または改善するための請求項１〜３のいずれかに記載の活性化剤。
【請求項５】
ペルオキシソーム増殖剤応答性受容体αおよびγが介在する疾患または症状がインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満もしくは脂肪肝である請求項４記載の活性化剤。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれかに記載の活性化剤を含有することを特徴とするインスリン抵抗性、糖尿病、高脂血、高血圧、内臓脂肪型肥満もしくは脂肪肝の予防または改善用組成物。
【請求項７】
医薬組成物である請求項６に記載の予防または改善用組成物。
【請求項８】
健康食品である請求項６に記載の予防または改善用組成物。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００９−２４９３２２（Ｐ２００９−２４９３２２Ａ）
【公開日】平成２１年１０月２９日（２００９．１０．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−９７８７１（Ｐ２００８−９７８７１）
【出願日】平成２０年４月４日（２００８．４．４）
【出願人】（５０７３６１７９０）日本恒順株式会社 (2)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月２９日（２００９．１０．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年４月４日（２００８．４．４）
【出願人】（５０７３６１７９０）日本恒順株式会社 (2)
【Ｆターム（参考）】
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